PT1778718E - Inibidores de iap - Google Patents

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PT1778718E
PT1778718E PT57683047T PT05768304T PT1778718E PT 1778718 E PT1778718 E PT 1778718E PT 57683047 T PT57683047 T PT 57683047T PT 05768304 T PT05768304 T PT 05768304T PT 1778718 E PT1778718 E PT 1778718E
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amino
aryl
mmol
cycloalkyl
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Frederick Cohen
Kurt Deshayes
Wayne J Fairbrother
Bainian Feng
John Flygare
Lewis J Gazzard
Vickie Hsiao-Wei Tsui
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Genentech Inc
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Description

ΕΡ1778718Β1
DESCRIÇÃO INIBIDORES DE IAP
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos orgânicos úteis para a terapêutica e/ou profilaxia em mamíferos, particularmente a inibidores de proteínas IAP úteis para o tratamento de cancros.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Apoptose ou morte celular programada é mecanismo regulado genética e bioquimicamente que desempenha um papel importante no desenvolvimento e homeostasia de invertebrados, bem como vertebrados. Aberrações de apoptose que geram morte celular prematura foram relacionadas com uma série de disfunções de desenvolvimento. Deficiências de apoptose que resultam na falta de morte celular foram relacionadas com cancro e infeções virais crónicas (Thompson et al., (1995), Science 267, 1456-1462).
Uma das principais moléculas efetoras em apoptose são as caspases (cysteine containing aspartate specific proteases - proteases especificas de aspartato que contêm cisteina). As caspases são proteases fortes, que se dividem após resíduos de ácido aspártico e, uma vez ativadas, digerem proteínas celulares vitais do interior da célula. Como as caspases são proteases muito fortes, o firme controlo desta família de proteínas é necessário para evitar a morte celular prematura. Geralmente, as caspases são sintetizadas na forma de zimógenos em grande parte inativos que necessitam de processamento proteolítico para que sejam ativos. Este processamento proteolítico é apenas uma das formas em que as caspases são reguladas. 0 segundo 1 ΕΡ1778718Β1 mecanismo é por meio de uma família de proteínas que unem e inibem caspases.
Uma família de moléculas que inibem caspases são os Inibidores da Apoptose (IAP) (Deveraux et al., J. Clin. Immunol. (1999), 19: 388-398). Os IAPs foram descobertos originalmente em bacilovírus pela sua capacidade funcional de substituir proteína P35, gene antiapoptótico (Crook et al.r (1993), J. Virology 67, 2168-2174). Os IAPs foram descritos em organismos que variam de Drosophila até seres humanos. Independentemente da sua origem, estruturalmente, os IAPs compreendem de um a três domínios de repetição de IAP de bacilovírus (BIR) e a maior parte deles também processa motivo de dedo RING carboxil-terminal. 0 próprio domínio BIR é domínio de ligação de zinco com cerca de setenta resíduos que compreende quatro hélices alfa e três cordões beta, com resíduos de cisteína e histidina que coordenam o ião de zinco (Hinds et al., (1999), Nat. Struct. Biol. 6, 648-651). É o domínio BIR que se acredita causar o efeito antiapoptótico por meio da inibição das caspases e, desta forma, inibindo a apoptose. IAP ligado a cromossomo X humano (XIAP) , por exemplo, inibe caspase 3, caspase 7 e a ativação mediada por Apaf-l-citocromo C de caspase 9 (Deveraux et al., (1998), EMBO J. 17, 2215-2223).
Caspases 3 e 7 são inibidas pelo domínio BIR2 de XIAP, enquanto o domínio BIR3 de XIAP é responsável pela inibição da atividade de caspase 9. XIAP é expresso de forma onipresente na maior parte dos tecidos de adultos e fetos (Liston et al., Nature, 1996, 379 (6563): 349) e é sobreexpresso numa série de linhagens de células de tumores do quadro de linhagem celular NCI 60 (Fong et al., Genomics, 2000, 70: 113; Tamm et al., Clin. Câncer Res. 2000, 6 (5) : 1796) . Demonstrou-se que a sobreexpressão de XIAP em células tumorosas confere proteção contra uma série de estímulos pró-apoptóticos e promove resistência à quimioterapia (LaCasse et al., Oncogene, 1998, 17 (25) : 2 ΕΡ1778718Β1 3247) . De forma consistente com isso, demonstrou-se forte correlação entre os niveis de proteina XIAP e a sobrevivência para pacientes com leucemia mielógena aguda (Tamm et al., acima) . Demonstrou-se que a regulação negativa da expressão de XIAP por oligonucleótidos sem sentido sensibiliza células de tumores até a morte induzida por ampla variedade de agentes pró-apoptóticos, tanto in vitro quanto in vivo (Sasaki et al., Câncer Res., 2000, 60 (20): 5659; Lin et al., Biochem. J., 2001, 353: 299 (Hu et al., Clin. Câncer Res., 2003, 9 (7): 2826)). Também se demonstrou que péptidos derivados de Smac/DIABLO sensibilizam uma série de linhagens de células de tumores diferentes até a apoptose induzida por uma série de fármacos pró-apoptóticas (Arnt et al., J. Biol. Chem., 2002, 277 (46): 44236; Fulda et al., Nature Med., 2002, 8 (8) : 808; Guo et al., Blood, 2002, 99 (9) : 3419; Vucic et al., J. Biol. Chem., 2002, 277 (14): 12275; Yang et al., Câncer Res., 2003, 63 (4) : 831) .
Melanoma IAP (ML-IAP) é IAP não detetável na maior parte dos tecidos de adultos normais, mas é fortemente regulada para cima em melanoma (Vucic et al., (2000), Current Bio. 10: 1359-1366). A determinação da estrutura de proteina demonstrou homologia significativa dos domínios de dedos ML-IAP BIR e RING para domínios correspondentes presentes em XIAP, C-IAP1 e C-IAP2 humano. O domínio BIR de ML-IAP aparentemente possui as maiores similaridades com BIR2 e BIR3 de XIAP, C-IAP1 e C-IAP2 e aparentemente é responsável pela inibição da apoptose, conforme determinado por meio de análise de exclusão. Além disso, Vucic et al., demonstraram que ML-IAP poderá inibir a apoptose induzida por agente quimioterápico. Agentes tais como adriamicina e butilfenol 4-terciário (4- TBP) foram testados em sistema de cultura celular de melanomas que sobreexpressam ML-IAP e os agentes quimioterapêuticos foram significativamente menos eficazes na morte celular em comparação com controlo 3 ΕΡ1778718Β1 de melanócito normal. 0 mecanismo por meio do qual ML-IAP produz atividade antiapoptótica é em parte por meio da inibição de caspase 3 e 9. ML- IAP não inibiu efetivamente as caspases 1, 2, 6 ou 8.
Como a apoptose é processo estritamente controlado com diversos fatores de interação, a descoberta de que os próprios IAPs são regulados não foi incomum. Na mosca das frutas Drosophila, as proteínas Segadora (rpr), Defeituosa de Involução da Cabeça (hid) e GRIM interagem fisicamente com a família de IAPs de Drosophila e inibem a sua atividade antiapoptótica. No mamífero, as proteínas SMAC/DIABLO agem para bloquear os IAPs e permitir o processamento de apoptose. Demonstrou-se que, durante a apoptose normal, SMAC é processado em forma ativa e liberado da mitocôndria para o citoplasma, onde se une fisicamente a IAPs e evita que o IAP se una a caspase. Esta inibição do IAP permite que a caspase permaneça ativa e, desta forma, proceda com a apoptose. De forma interessante, a homologia de sequências entre os inibidores de IAP demonstra que existe motivo de quatro aminoácidos no terminal N das proteínas ativas processadas. Este tetrapéptido aparentemente une-se a bolso hidrofóbico no domínio BIR e rompe a ligação do domínio BIR a caspases (Chai et al., (2000), Nature 406: 855- 862, Liu et al., (2000), Nature 408: 1004-1008, Wu et al., (2000), Nature 408 : 1008-1012) .
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Num aspeto da presente invenção, são proporcionados inibidores inovadores das proteínas IAP que possuem a Fórmula geral (I): 4 ΕΡ1778718Β1
em que
Xi, X2 e X3 são independentemente 0 ou S; Y é (CHR7) n, 0 ou S; em que n é 1 ou 2 e R7 é H, halogénio, alquilo, arilo, aralquilo, amino, arilamino, alquilamino, aralquilamino, alcoxi, ariloxi ou aralquiloxi; A é um heterociclo de 5 membros que compreende 1 a 4 heteroátomos opcionalmente substituídos com amino, hidroxilo, mercapto, halogénio, carboxilo, amidino, guanidino, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, alcoxicarbonilamino, cicloalquilo, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino ou um heterociclo; em que cada alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo e substituição de heterociclo é opcionalmente substituído com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, haloalquilo, amino, nitro, ciano, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo;
Ri é H ou Ri e R2 juntos formam um anel de 5-8 membros; R2 é alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralquilo, um heterociclo ou heterociclilalquilo; cada um opcionalmente substituído com hidroxilo, mercapto, halogénio, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi ou alquiltio; R3 é H ou alquilo; R4 e R4' são independentemente H, hidroxilo, amino, alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, ou heteroarilalquilo em 5 ΕΡ1778718Β1 que cada alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo e heteroarilalquilo é opcionalmente substituído com halogénio, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino e nitro; R5, e R5' são cada independentemente H ou alquilo; R6, e R6' são cada independentemente H, alquilo, arilo ou aralquilo; e sais e solvatos do mesmo.
Em outro aspeto da presente invenção, são proporcionadas composições que compreendem compostos da fórmula I e um veículo, diluente ou excipiente.
Também se descreve no presente documento um método de indução de apoptose numa célula que compreende a introdução de um composto de fórmula I na mencionada célula.
Também se descreve no presente documento um método de sensibilização de uma célula a um sinal apoptótico que compreende a introdução de um composto de fórmula I na mencionada célula.
Também se descreve no presente documento um método de inibição da ligação de proteína IAP com proteína caspase que compreende o contato da mencionada proteína IAP com um composto de fórmula I. Também se descreve no presente documento um método de tratamento de uma doença ou condição associada à sobreexpressão de uma proteína IAP em mamíferos, que compreende a administração ao mencionado mamífero de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO PREFERIDAS "Alquilo" indica um grupo hidrocarboneto alifático ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado (ou seja, alquenilo, alquinilo), que contém até doze átomos de carbono a não ser que especificado em contrário. Quando utilizado como parte de outro termo, tal como 6 ΕΡ1778718Β1 "alquilamino", a porção alquilo é preferencialmente uma cadeia de hidrocarboneto saturada, mas também inclui cadeias de carbono hidrocarboneto insaturadas tais como "alquenilamino" e "alquinilamino". Exemplos de grupos alquilo preferidos incluem metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, 2- metilbutilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, n- heptilo, 3-heptilo, 2-metil hexilo e similares. As expressões "alquilo de cadeia curta", "alquilo C1-C4" e "alquilo com um a quatro átomos de carbono" são sinónimas e utilizadas de forma intercambiável para indicar metilo, etilo, 1-propilo, isopropilo, ciclopropilo, 1-butilo, sec-butilo ou t-butilo. A não ser que especificado em contrário, grupos alquilo substituídos podem conter um (preferencialmente) , dois, três ou quatro substituintes que podem ser idênticos ou diferentes. Exemplos dos grupos alquilo substituídos acima incluem, mas não se limitam a cianometilo, nitrometilo, hidroximetilo, tritiloximetilo, propioniloximetilo, aminometilo, carboximetilo, carboxietilo, carboxipropilo, alquiloxicarbonilmetilo, aliloxicarbonilaminometilo, carbamoiloximetilo, metoximetilo, etoximetilo, t-butoximetilo, acetoximetilo, clorometilo, bromometilo, iodometilo, trifluorometilo, 6-hidroxi-hexilo, 2,4-dicloro(n-butilo), 2- amino(iso-propilo), 2-carbamoiloxietilo e similares. 0 grupo alquilo pode também ser substituído por um grupo carbociclo. Exemplos incluem grupos ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo e ciclohexilmetilo, bem como os grupos -etilo, -propilo, -butilo, -pentilo, -hexilo etc. correspondentes. Os alquilas substituídos preferidos são metilo substituídos, tais como grupo metilo substituído pelos mesmos substituintes que o grupo "alquilo Cn-Cm substituído". Exemplos do grupo metilo substituído incluem grupos tais como hidroximetilo, hidroximetilo protegido 7 ΕΡ1778718Β1 (tal como tetrahidropiraniloximetilo), acetoximetilo, carbamoiloximetilo, trifluorometilo, clorometilo, carboximetilo, bromometilo e iodometilo. "Amidina" indica o grupo -C(NH)-NHR, em que R é H, alquilo ou aralquilo. Amidina preferida é o grupo -NH-C(NH)-NH2. "Amino" indica aminas primárias (ou seja, -NH2) , secundárias (ou seja, -NRH) e terciárias (ou seja, -NRR). Aminas secundárias e terciárias preferidas são alquilamina, dialquilamina, arilamina, diarilamina, aralquilamina e diaralquilamina. Aminas secundárias e terciárias preferidas específicas são metilamina, etilo mina, propilamina, isopropilamina, fenilamina, benzilamina, dimetilamina, dietilamina, dipropilamina e diisopropilamina. "Grupo protetor amino", da forma utilizada no presente, designa derivado dos grupos comumente utilizados para bloquear ou proteger grupo amino enquanto as reações são conduzidas sobre outros grupos funcionais no composto. Exemplos desses grupos protetores incluem carbamatos, amidas, grupos alquilo e arilo, iminas, bem como tantos derivados de N-heteroátomos quantos puderem ser removidos para regenerar o grupo amina desejado. Os grupos protetores amino preferidos são Boc, Fmoc e Cbz. Exemplos adicionais destes grupos são encontrados em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, segunda edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque NY, 1991, capítulo 7; E. Haslam, Protective Groups in Organic Chemistry, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, Nova Iorque NY, 1973, Capítulo 5, e T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Nova Iorque NY, 1981. A expressão "amino protegido" designa grupo amino substituído por um dos grupos protetores amino acima. "Arilo", quando utilizado isoladamente ou como parte de outro termo, indica um grupo aromático carbocíclico, seja ou não fundido, que contém a quantidade de átomos de 8 ΕΡ1778718Β1 carbono designada ou, caso nenhuma quantidade seja designada, até catorze átomos de carbono. Os grupos arilo preferidos incluem fenilo, naftilo, bifenilo, fenantrenilo, naftacenilo e similares (veja-se, por exemplo, Lang's Handbook of Chemistry (Dean, J. A., ed), 13a ed., Quadro 7-2 (1985)) e, de preferência superior, fenilo. Fenilo substituído ou arilo substituído indica um grupo fenilo ou grupo arilo substituído por um, dois, três, quatro ou cinco, preferencialmente 1-2, 1-3 ou 1-4 substituintes selecionados, a não ser que especificado em contrário, a partir de halogénio (F, Cl, Br, I), hidroxi, hidroxi protegido, ciano, nitro, alquilo (preferencialmente alquilo Ci-C6) , alcoxi (preferencialmente alcoxi Ci-C6) , benziloxi, carboxi, carboxi protegido, carboximetilo, carboximetilo protegido, hidroximetilo, hidroximetilo protegido, aminometilo, aminometilo protegido, trifluorometilo, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heterociclilsulfonilamino, heterociclilo, arilo ou outros grupos especificados. Um ou mais grupos metino (CH) e/ou metileno (CH2) nestes substituintes podem, por sua vez, ser substituídos por um grupo similar como os indicados acima. Exemplos da expressão "fenilo substituído" incluem, mas não se limitam a um grupo mono ou di (halo) fenilo, tal como 2-clorofenilo, 2- bromofenilo, 4-clorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 3-clorofenilo, 3-bromofenilo, 4-bromofenilo, 3,4-dibromofenilo, 3-cloro-4- fluorofenilo, 2-fluorofenilo e similares; grupo mono ou di(hidroxi)fenilo tal como 4-hidroxifenilo, 3-hidroxifenilo, 2,4-di-hidroxifenilo, seus derivados hidroxi protegidos e similares; grupo nitrofenilo, tal como 3 ou 4-nitrofenilo; grupo cianofenilo, tal como 4-cianofenilo; grupo mono ou di(alquil inferior)fenilo, tal como 4-metilfenilo, 2,4-dimetilfenilo, 2-metilfenilo, 4-(iso-propil)fenilo, 4-etilfenilo, 3-(n-propil)fenilo e similares; grupo mono ou 9 ΕΡ1778718Β1 di (alcoxi)fenilo, tal como 3,4-dimetoxifenilo, 3-metoxi-4-benziloxifenilo, 3-metoxi-4-(1 -clorometil)benziloxi-fenilo, 3-etoxifenilo, 4-(isopropoxi)fenilo, 4-(t-butoxi)fenilo, 3-etoxi-4-metoxifenilo e similares; 3 ou 4-trifluorometilfenilo; grupo mono ou dicarboxifenilo ou (carboxi protegido)fenilo tal como 4-carboxifenilo; mono ou di(hidroximetil)fenilo ou (hidroximetil protegido)fenilo tal como 3-(hidroximetil protegido)fenilo ou 3,4-di(hidroximetil)fenilo; mono ou di(aminometil)fenilo ou (aminometil protegido)fenilo tal como 2-(aminometil)fenilo ou 2,4-(aminometil protegido)fenilo; ou mono ou di(N-metilsulfonilamino))fenilo tal como 3-(N- metilsulfonilamino))fenilo. Além disso, a expressão "fenilo substituído" representa grupos fenilo di-substituidos, em que os substituintes são diferentes, tais como 3-metil-4-hidroxifenilo, 3-cloro-4-hidroxifenilo, 2-metoxi-4- bromofenilo, 4-etil-2-hidroxifenilo, 3-hidroxi-4- nitrofenilo, 2-hidroxi-4-clorofenilo e similares, bem como grupos fenilo tri-substituídos em gue os substituintes são diferentes, tais como 3-metoxi-4-benziloxi-6-metil sulfonilamino, 3-metoxi- 4-benziloxi-6-fenil sulfonilamino e grupos fenilo tetra-substituídos, em gue os substituintes são diferentes, tais como 3-metoxi-4-benziloxi-5-metil-6-fenil sulfonilamino. Os grupos fenilo substituídos preferidos incluem os grupos 2- clorofenilo, 2-aminofenilo, 2-bromofenilo, 3-metoxifenilo, 3-etoxifenilo, 4- benziloxifenilo, 4-metoxifenilo, 3-etoxi-4-benziloxifenilo, 3,4-dietoxifenilo, 3- metoxi-4-benziloxifenilo, 3-metoxi-4-(1-clorometil)benziloxifenilo, 3-metoxi-4-(1- clorometil)benziloxi-6-metil sulfonil aminofenilo. Anéis arilo fundidos podem também ser substituídos por quaisquer, preferencialmente um, dois ou três, dos substituintes especificados no presente da mesma maneira que grupos alquilo substituídos. "Carbociclilo", "carbocíclico" e "carbociclo", 10 ΕΡ1778718Β1 isoladamente e quando utilizados como porção em grupo complexo tal como grupo carbocicloalquilo, indicam anel alifático mono, bi ou triciclico que contém de três a catorze átomos de carbono e, preferencialmente, de três a sete átomos de carbono, que podem ser saturados ou insaturados, aromáticos ou não aromáticos. Os grupos carbociclicos saturados preferidos incluem grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclohexilo e, de maior preferência, são ciclopropilo e ciclohexilo, de preferência superior ciclohexilo. Os carbociclos insaturados preferidos são grupos aromáticos, tais como arilo conforme definido anteriormente, em que o de preferência superior é fenilo. As expressões "carbociclilo substituído" e "carbociclo" indicam os grupos substituídos pelos mesmos substituintes do grupo "alquilo substituído". A expressão "grupo protetor de carboxi", da forma utilizada no presente, indica um dos derivados éster do grupo ácido carboxílico comumente utilizados para bloquear ou proteger o grupo ácido carboxílico enquanto as reações são conduzidas sobre outros grupos funcionais no composto. Exemplos desses grupos protetores ácido carboxílico incluem 4-nitrobenzilo, 4- metoxibenzilo, 3,4-dimetoxibenzilo, 2,4-dimetoxíbenzilo, 2,4,6-trimetoxibenzilo, 2,4,6-trimetilbenzilo, pentametilbenzilo, 3,4-metilenodioxibenzilo, benzidrilo, 4,4'-dimetoxibenzidrilo, 2,2',4,4'-tetrametoxibenzidrilo, alquilo tal como t-butilo ou t-amilo, tritilo, 4-metoxitritilo, 4,4'-dimetoxitritilo, 4,4',4"-trimetoxitritilo, 2- fenilprop-2-ilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, fenacilo, 2,2,2-tricloroetilo, beta- (trimetilsilil)etilo, beta-(di(n-butil)metilsilil)etilo, p-toluenossulfoniletilo, 4-nitrobenzilsulfoniletilo, alilo, cinamilo, 1-(trimetilsililmetil)prop-l-en-3-ilo e porções similares. A espécie de grupo protetor carboxi utilizada não é crítica, desde que o ácido carboxílico derivado seja estável para a 11 ΕΡ1778718Β1 condição de reação(ões) subsequente (s) sobre outras posições da molécula e possa ser removido no ponto apropriado, sem romper o restante da molécula. É particularmente importante não submeter uma molécula carboxi-protegida a fortes bases nucleofilicas, tais como hidróxido de litio ou NaOH, ou condições redutoras que empregam hidretos metálicos altamente ativados, tais como LiAlH4 (essas condições brutas de remoção também devem ser evitadas ao remover-se grupos protetores amino e grupos protetores hidroxi, discutidos abaixo) . Os grupos protetores de ácido carboxilico preferidos são os grupos alquilo (tais como metilo, etilo, t-butilo), alilo, benzilo e p-nitrobenzilo. Grupos protetores carboxi similares utilizados na técnica de cefalosporina, penicilina e péptidos também podem ser utilizados para proteger substituintes de grupo carboxi. Exemplos adicionais destes grupos são encontrados em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, segunda edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque NY, 1991, Capitulo 5; E. Haslam, Protective Groups in Organic Chemistry, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, Nova Iorque NY, 1973, Capitulo 5, e T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Nova Iorque NY, 1981, Capitulo 5. A expressão "carboxi protegido" designa grupo carboxi substituído por um dos grupos protetores carboxi acima. "Guanidina" indica o grupo -NH-C(NH)-NHR, em que R é H, alquilo ou aralquilo. Guanidina preferida é o grupo -NH-C(NH)-NH2. "Grupo protetor hidroxi", da forma utilizada no presente, designa derivado do grupo hidroxi comumente utilizado para bloquear ou proteger o grupo hidroxi enquanto as reações são conduzidas sobre outros grupos funcionais no composto. Exemplos desses grupos protetores incluem grupos tetrahidropiraniloxi, benzoilo, acetoxi, carbamoiloxi, benzilo e sililéteres (tais como TBS, TBDPS). 12 ΕΡ1778718Β1
Exemplos adicionais destes grupos são encontrados em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, segunda edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque NY, 1991, capítulos 2-3; E. Haslam, Protective Groups in Organic Chemistry, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, Nova Iorque NY, 1973, Capítulo 5, e T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Nova Iorque NY, 1981. A expressão "hidroxi protegido" designa grupo hidroxi substituído por um dos grupos protetores hidroxi acima.
As expressões "grupo heterocíclico", "heterocíclico", "heterociclilo" ou "heterociclo", isoladamente e quando utilizadas como porção em grupo complexo tal como grupo heterocicloalquilo, são utilizadas de forma intercambiável e designam qualquer anel aromático (heteroarilo) ou não aromático, saturado ou insaturado, mono, bi ou tricíclico, que contém a quantidade de átomos designada, geralmente de cinco a cerca de catorze átomos de anéis, em que os átomos de anéis são carbono e pelo menos um heteroátomo (azoto, enxofre ou oxigénio) e, preferencialmente de um a quatro heteroátomos. Tipicamente, um anel de cinco membros contém de zero a duas ligações duplas e um anel de seis ou sete membros contém de zero a três ligações duplas, os heteroátomos de azoto ou enxofre podem ser opcionalmente oxidados (tais como SO e S02) e qualquer heteroátomo de azoto pode ser opcionalmente quaternizado. Heterociclos não aromáticos preferidos incluem morfolinilo (morfolino), pirrolidinilo, oxiranilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, 2,3-di-hidrofuranilo, 2H-piranilo, tetrahidropiranilo, tiiranilo, tietanilo, tetrahidrotietanilo, aziridinilo, azetidinilo, 1 -metil-2-pirrolilo, piperazinilo e piperidinilo. Grupo "heterocicloalquilo" é grupo carbociclo conforme definido acima, unido covalentemente a um grupo alquilo conforme definido acima. Os heterociclos de cinco membros preferidos que contêm um átomo de oxigénio ou 13 ΕΡ1778718Β1 enxofre e de um a três átomos de azoto incluem tiazolilo, particularmente N-óxido de tiazol-2-ilo e tiazol-2-ilo, tiadiazolilo, particularmente 1,3,4- tiadiazol-5-ilo e 1.2.4- tiadiazol-5-ilo, oxazolilo, preferencialmente oxazol-2-ilo, e oxadiazolilo, tal como 1,3,4-oxadiazol-5-ilo e 1.2.4- oxadiazol-5-ilo. Os heterociclos de anéis com cinco membros preferidos que contêm de dois a quatro átomos de azoto incluem imidazolilo, preferencialmente imidazol-2-ilo; triazolilo, preferencialmente 1,3,4-triazol-5-ilo; 1,2,3-triazol-5-ilo, 1,2,4- triazol-5-ilo e tetrazolilo, preferencialmente 1 H-tetrazol-5-ilo. Heterociclos de cinco membros benzo-fundidos preferidos são benzoxazol-2-ilo, benzotiazol-2- ilo e benzimidazol-2-ilo. Heterociclos de seis membros preferidos contêm de um a três átomos de azoto e, opcionalmente um átomo de enxofre ou oxigénio, tais como piridilo, como pirid-2-ilo, pirid-3-ilo e pirid-4-ilo: pirimidilo, preferencialmente pirimid-2-ilo e pirimid-4-ilo; triazinilo, preferencialmente 1,3,4- triazin-2-ilo e 1.3.5- triazin-4-ilo; piridazinilo, particularmente piridazin-3-ilo, e pirazinilo. Os N-óxidos de piridina e N-óxidos de piridazina e os grupos piridilo, pirimid-2-ilo, pirimid-4-ilo, piridazinilo e 1,3,4-triazin-2-ilo são grupo preferido. Os substituintes para heterociclos opcionalmente substituídos e exemplos adicionais dos sistemas de anéis com cinco e seis membros discutidos acima podem ser encontrados em W. Druckheimer et al., Patente US n° 4.278.793. "Heteroarilo", isoladamente e quando utilizado como porção em grupo complexo tal como grupo heteroaralquilo, indica sistema de anéis aromáticos mono, bi ou tricíclicos que contém a quantidade de átomos designada, em que pelo menos um anel é um anel de cinco, seis ou sete membros que contém de um a quatro heteroátomos selecionados a partir do grupo de azoto, oxigénio e enxofre e, preferencialmente, pelo menos um heteroátomo é azoto (Lang's Handbook of 14 ΕΡ1778718Β1
Chemistry, acima). Incluem-se na definição quaisquer grupos biciclicos, em que qualquer dos anéis heteroarilo acima é fundido a um anel de benzeno. São preferidos heteroarilos em que azoto ou oxigénio é o heteroátomo. Os sistemas de anéis a seguir são exemplos dos grupos heteroarilo (sejam eles substituídos ou não substituídos) indicados pelo termo "heteroarilo": tienilo, furilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, tiatriazolilo, oxatriazolilo, piridilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, tiazinilo, oxazinilo, triazinilo, tiadiazinilo, oxadiazinilo, ditiazinilo, dioxazinilo, oxatiazinilo, tetrazinilo, tiatriazinilo, oxatriazinilo, ditiadiazinilo, imidazolinilo, di-hidropirimidilo, tetrahidropirimidilo, tetrazolo[1,5-b]piridazinilo e purinilo, bem como derivados benzo- fundidos, tais como benzoxazolilo, benzofurilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, benzoimidazolilo e indolilo. Grupo particularmente preferido de "heteroarilo" inclui: 1,3-tiazol-2-ilo, 4-(carboximetil)-5-metil-l,3- tiazol-2-ilo, sal de sódio de 4-(carboximetil)-5-metil-l,3-tiazol-2-ilo, 1,2,4-tiadiazol-5-ilo, 3-metil-l,2,4- tiadiazol- 5-ilo, 1,3,4-triazol-5-ilo, 2-metil-l,3,4-triazol-5-ilo, 2-hidroxi-l,3,4-triazol-5-ilo, sal de sódio de 2-carboxi-4-metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 2-carbóxh4-metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 1,3- oxazol-2-ilo, 1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 2-metil-l,3,4-oxadiazol-5-ilo, 2-(hidroximetil)-1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-tiol-l,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2- (metiltio)-l ,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-amino-l,3,4-tiadiazol-5-ilo, 1 H-tetrazol-5-ilo, 1-metil- 1 H-tetrazol-5-ilo, 1 -(1 (dimetilamino)et-2-il)-1 H-tetrazol-5-ilo, 1 (carboximetil)-1 H- tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(carboximetil)-lH-tetrazol-5-ilo, 1-(ácido metilsulfónico)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(ácido 15 ΕΡ1778718Β1 metilsulfónico)-1 H-tetrazol- 5-ilo, 2-metil-l H-tetrazol- 5- ilo, 1,2,3-triazol-5-ilo, 1-metil-l,2,3-triazol-5-ilo, 2-metil- 1,2,3-triazol-5-ilo, 4-metil-l,2,3-triazol-5-ilo, N-óxido de pirid-2-ilo, 6-metoxi-2-(n- óxido)-piridaz-3-ilo, 6- hidroxipiridaz-3-ilo, 1 -metilpirid-2-ilo, 1 -metilpirid- 4-ilo, 2- hidroxipirimid-4-ilo, 1, 4,5,6-tetrahidro-5,6-dioxo-4-metil-as-triazin-3-ilo, 1,4,5,6-tetrahidro- 4-(formilmetil)-5,6-dioxo-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-astriazin-3-ilo, sal de sódio de 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-as-triazin-3-ilo, sal de sódio de 2,5-di-hidro-5- oxo-6-hidroxi-2-metil-astriazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5- di-hidro-5-oxo-6-metoxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di- hidro-5-oxo-as-triazin-3-ilo, 2,5- di-hidro-5-oxo-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-2,6-dimetil-as- triazin-3-ilo, tetrazolo[1,5-b]piridazin-6-ilo e 8- aminotetrazolo[1,5-b]-piridazin-6-ilo. Grupo alternativo de "heteroarilo" inclui: 4-(carboximetil)-5-metil-l,3-tiazol-2-ilo, sal de sódio de 4-(carboximetil)-5-metil-l,3-tiazol- 2- ilo, 1,3,4-triazol-5-ilo, 2-metil-l,3,4-triazol-5-ilo, 1 H-tetrazol-5-ilo, 1 -metil-1 H-tetrazol-5-ilo, 1 -(1 - (dimetilamino)et-2-il)-1 H-tetrazol-5-ilo, 1- (carboximetil)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(carboximetil)-lH-tetrazol-5-ilo, 1- (ácido metilsulfónico)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(ácido metilsulfónico)-1 H- tetrazol-5-ilo, 1,2,3-triazol-5-ilo, 1.4.5.6- tetrahidro-5,6-dioxo-4-metil-as-triazin-3-ilo, 1.4.5.6- tetrahidro-4-(2-formilmetil)-5,6-dioxo-as-triazin- 3- ilo, sal de sódio de 2,5-di- hidro-5-oxo-6-hidroxi-2- metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-2- metil-as- triazin-3-ilo, tetrazolo[1,5-b]piridazin-6-ilo e 8-aminotetrazolo[1,5-b]piridazin-6-ilo. "Inibidor" indica um composto que reduz ou evita a ligação de proteínas IAP a proteínas de caspase ou que reduz ou evita a inibição de apoptose por proteína IAP. 16 ΕΡ1778718Β1
Alternativamente, "inibidor" indica um composto que evita a interação de ligação de X-IAP com caspases ou a interação de ligação de ML-IAP com SMAC. "Sais farmaceuticamente aceitáveis" incluem sais de adição de base e de ácido. "Sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável" indica os sais que retêm a eficácia biológica e as propriedades das bases livres e que não são biologicamente indesejáveis ou de outra forma, formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido fosfórico e similares, e os ácidos orgânicos podem ser selecionados a partir de classes alifáticas, cicloalifáticas, aromáticas, aralifáticas, heterocíclicas, carboxílicas e sulfónicas de ácidos orgânicos, tais como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido glucónico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido maleico, ácido maloneico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido glutámico, ácido antranílico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido embónico, ácido fenilacético, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p- toluenossulfónico, ácido salicílico e similares. "Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis" incluem os derivados de bases inorgânicas, tais como sais de sódio, potássio, lítio, amónio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e similares. São particularmente preferidos os sais de amónio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. Os sais derivados de bases não tóxicas orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas que incluem aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas de permuta de iões básicos, tais como isopropilamina, trimetilamina, 17 ΕΡ1778718Β1 dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glicosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperizina, piperidina, N-etilpiperidina, resinas de poliamina e similares. Bases não tóxicas orgânicas particularmente preferidas são isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina e cafeína. A presente invenção proporciona compostos inovadores que possuem a Fórmula geral (I):
em que X, Y, A, Ri, R2, R3, R4, R4' r Rs, R5' , R6 e R6' são conforme foram descritos no presente documento.
Xi e X2 são, independentemente entre si, 0 ou S. Em outra forma de realização específica, Xi e X2 são ambos 0. Em outra forma de realização especifica, X2 e X2 são ambos S. Em outra forma de realização preferida, X2 é S enquanto X2 é 0. Em outra forma de realização preferida, X2 é 0 enquanto X2 é S. Y é (CHR7) n, 0 ou S; em que n é 1 ou 2 e R7 é H, halogénio, alquilo, arilo, aralquilo, amino, arilamino, alquilamino, aralquilamino, alcoxi, ariloxi ou aralquiloxi. Numa forma de realização específica, Y é CH2. Numa forma de realização específica, n é 1. Numa forma de realização específica, n é 1 e Y é CHR7 em que R7 é aralquiloxi, tal como benziloxi. Numa forma de realização específica, n é 1 e Y é CHR7, em que R7 é F. Numa forma de realização específica, n é 1 e Y é CHR7, em que R7 é aralquilamino, 18 ΕΡ1778718Β1 tal como benzilamino. Em outra forma de realização específica, Y é O. Em outra forma de realização específica, Y é S. 0 anel "A" é heterociclo de cinco membros que compreende de um a quatro heteroátomos opcionalmente substituídos por amino, hidroxilo, mercapto, halogénio, carboxilo, amidino, guanidino, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, alcoxicarbonilamino, cicloalquilo, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminossulfonilo, alquilaminossulfonilo, alquilsulfonilamino ou heterociclo; em que cada alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo e substituição de heterociclo é opcionalmente substituída com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, haloalquilo, amino, nitro, ciano, cicloalquilo, arilo ou heterociclo. Numa forma de realização, os grupos de anel A heterociclo de cinco membros são opcionalmente substituídos por amino, hidroxilo, mercapto, halogénio, carboxilo, amidino, guanidino, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo ou heterociclo; em que cada substituição de alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo e heterociclo é opcionalmente substituída com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, cicloalquilo, arilo ou heterociclo. Numa forma de realização específica, o anel A é aromático. Numa forma de realização específica, o anel A possui a Fórmula lia ou Ilb:
lia Hb em que Qi é NR8, 0 ou S; Q2, Q3r Q4r Qst Qer Qir e Q8, são independentemente CR9 ou N; em que R9 é H, amino, 19 ΕΡ1778718Β1 hidroxilo, mercapto, halogénio, carboxilo, amidino, guanidino, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo ou um heterociclo; em que cada alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo e substituição de heterociclo é opcionalmente substituído com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo; R8 é H, alquilo, acilo, arilo, cicloalquilo ou um heterociclo; em que cada alquilo, arilo, cicloalquilo e heterociclo é opcionalmente substituído com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo; e Qg é CH ou N. Numa forma de realização específica, o anel A é um grupo de Fórmula (II). Numa forma de realização específica, o anel A é um grupo de Fórmula (II) na qual Q4 é CR9, em que R9 é arilo ou heteroarilo opcionalmente substituído conforme descrito acima. Numa forma de realização específica, o anel A é um grupo de Fórmula (II) na qual Q4 é CRg e R9 é fenilo. Numa forma de realização específica, o anel A é um grupo de Fórmula (II) na qual Q4 é CR9 e Rg é fenilo e Q3 é CH ou CF. Em outra forma de realização, o anel A é um grupo de Fórmula (II) na qual Q4 é CR9 e Rg é piridin-2-ilo. Em outra forma de realização, o anel A é um grupo de Fórmula (II) em que Q4 é CRg, Rg é piridini-2-ilo e Q3 é C-Me.
Em outra forma de realização, o anel A segundo lia ou Ilb é anel pirrol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicioalquiialquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em: 20 ΕΡ1778718Β1
em que R8 é H, alquilo (tal como metilo, etilo ou propilo) ou acilo (tal como acetilo) . Numa forma de realização específica, R8 é H.
Em outra forma de realização, o anel A é furano opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é tiofeno opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é pirazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio 21 ΕΡ1778718Β1 hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que R8 é H, alquilo (tal como metilo, etilo ou propilo) ou acilo (tal como acetilo) . Numa forma de realização específica, R8 é H.
Em outra forma de realização, o anel A é imidazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterocicloalquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que R8 é H, alquilo (tal como metilo, etilo ou propilo) ou acilo (tal como acetilo) . Numa forma de realização específica, R8 é H.
Em outra forma de realização, o anel A é oxazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em: 22 ΕΡ1778718Β1
Em outra forma de realização, o anel A é isoxazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é tiazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é isotiazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou 23 ΕΡ1778718Β1 heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é 1,2,3-triazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que R9 é H, alquilo (tal como metilo, etilo ou propilo) ou acilo (tal como acetilo) . Numa forma de realização específica, R9 é H.
Em outra forma de realização, o anel A é 1,2,4-triazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é oxadiazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, 24 ΕΡ1778718Β1 cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocíclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é tiadiazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocíclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em:
Em outra forma de realização, o anel A é tetrazol opcionalmente substituído por alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocíclo ou heterociclo-alquilo opcionalmente substituído por halogénio hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização, o anel A é substituído por um grupo arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização específica, o anel A é selecionado a partir do grupo que consiste em: 25 ΕΡ1778718Β1
Numa forma de realização específica, o anel A é:
Ph
I
Numa forma de realização específica, o anel A é:
Ph
S-N
Em que Ri é H ou R2 e R2 juntos formam um anel de cinco a oito membros. Numa forma de realização específica, Ri é H. Numa forma de realização específica, Ri e R2 juntos formam um anel de seis membros. Numa forma de realização específica, R2 e R2 juntos formam um anel de sete membros. Em outra forma de realização especifica, R2 e R2 juntos formam um anel de oito membros. Em outra forma de realização específica, Ri e R2 juntos formam um anel de sete membros em que Y é S. Em outra forma de realização específica, Ri é H, enquanto Y é CH2. Em outra forma de realização particularmente preferida, R2 é H, enquanto Y é S. Em outra forma de realização específica, R2 é H, enquanto Y é 0. R2 é alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralquilo, heterociclo ou heterociclilalquilo. Numa forma de realização preferida, R2 é alquilo ou cicloalquilo. Numa forma de realização, cada grupo R2 é opcionalmente substituído por hidroxilo, mercapto, halogénio, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi ou alquiltio; numa forma de realização da presente invenção, R2 é t-butilo, isopropilo, ciclohexilo, ciclopentilo ou fenilo. Numa forma 26 ΕΡ1778718Β1 de realização específica, R2 é ciclohexilo. Em outra forma de realização, R2 é tetrahidropiran-4-ilo. Em outra forma de realização específica, R2 é isopropilo (ou seja, a cadeia lateral de aminoácidos de valina). Em outra forma de realização específica, R2 é t-butilo. Numa forma de realização específica, R2 é orientado de tal forma que o aminoácido, ou análogo de aminoácido, que ele compreende encontra-se na configuração L. R3 é H ou alquilo. Numa forma de realização preferida, R3 é H, metilo, etilo, propilo ou isopropilo. Numa forma de realização particularmente preferida, R3 é H ou metilo. Numa forma de realização de maior preferência, R3 é metilo. Em outra forma de realização específica, R3 é t-butilo. Numa forma de realização preferida, R3 é orientado de tal forma que o aminoácido, ou análogo de aminoácido, que ele compreende, encontra-se na configuração L. R4 e R4' são independentemente H, hidroxilo, amino, alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo ou heteroarilalquilo, em que cada alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo e heteroarilalquilo é opcionalmente substituído por halogénio, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino e nitro. Numa forma de realização específica, R4 e R4' são ambos H. Em outra forma de realização específica, R4 é metilo e R4' é H. Numa forma de realização específica, um dentre R4 e R4' é hidroxilo (OH), enquanto o outro é H. Em outra forma de realização, um dentre R4 e R4' é amino, tal como NH2, NHMe e NHEt, enquanto o outro é H. Numa forma de realização específica, R4' é H e R4 é H, alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo ou heteroarilalquilo. Numa forma de realização específica, R4 é um grupo selecionado a partir do grupo que consiste em: 27 ΕΡ1778718Β1
R5 e R5' são, independentemente entre si, H ou alquilo. Numa forma de realização especifica, R5 e R5' são H ou metilo. Numa forma de realização especifica, R5 é H e R5' é metilo. Em outra forma de realização especifica, R5 é metilo e R5' é H. Em outra forma de realização especifica, 28 ΕΡ1778718Β1 R5 e R5' são ambos metilo. Em outra forma de realização específica, R5 e R5' são ambos H. R6 e R6' são, independentemente entre si, H, alquilo, arilo ou aralquilo. Numa forma de realização específica, R6 é alquilo, tal como metilo. Em outra forma de realização específica, R6 é arilo, tal como fenilo. Em outra forma de realização especifica, R6 é aralquilo, tal como benzilo. Numa forma de realização específica, R6 e R6' são idênticos, tais como ambos alquilo, por exemplo, ambos metilo. Em outra forma de realização especifica, R6 é metilo e R6' é H.
Os compostos de acordo com a presente invenção contêm um ou mais átomos de carbono assimétricos. Consequentemente, os compostos podem existir na forma de diaestereómeros, enantiómeros ou suas misturas. As sínteses dos compostos podem empregar racematos, diaestereómeros ou enantiómeros como materiais de partida ou como intermediários. Os compostos diaestereoméricos podem ser separados por meio de métodos de cristalização ou cromatográficos. De forma similar, misturas enantioméricas podem ser separadas utilizando os mesmos métodos ou outros conhecidos na técnica. Cada um dos átomos de carbono assimétricos pode apresentar-se na configuração R ou S e ambas estas configurações encontram-se dentro do escopo da presente invenção. Preferencialmente, os compostos de acordo com a presente invenção possuem a configuração estereoquímica a seguir da fórmula I':
em que X, Y, A, Ri, R2, R3, R^ R^ , Rs, Rs' , Rõ e Re' sao 29 ΕΡ1778718Β1 conforme foram descritos no presente documento.
Também se descrevem no presente documento pró-fármacos dos compostos descritos acima. Os pró-fármacos apropriados, quando aplicáveis, incluem grupos protetores amino e protetores carboxi conhecidos que são liberados, tais como hidrolisados, para gerar o composto parental sob condições fisiológicas. Classe preferida de pró-fármacos são compostos nos quais um átomo de azoto em grupo amino, amidino, aminoalquilenoamino, iminoalquilenoamino ou guanidino é substituído por um grupo hidroxi (OH), grupo alquilcarbonilo (-CO-R) , alcoxicarbonilo (-CO-OR), grupo aciloxialquila-alcoxicarbonilo (-C0-0-R-0-C0-R) em que R é grupo monovalente ou divalente conforme definido acima ou grupo que possui a Fórmula -C (0)-0-CPlP2-haloalquilo, em que PI e P2 são idênticos ou diferentes e são H, alquilo de cadeia curta, alcoxi inferior, ciano, halo alquilo de cadeia curta ou arilo. Preferencialmente, o átomo de azoto é um dos átomos de azoto do grupo amidino dos compostos de acordo com a presente invenção. Estes compostos de pró-fármacos são preparados por meio de reação dos compostos de acordo com a presente invenção descritos acima com composto acilo ativado para unir um átomo de azoto no composto de acordo com a presente invenção ao carbonilo do composto acilo ativado. Os compostos carbonilo ativados apropriados contêm bom grupo residual unido ao carbono carbonilo e incluem haletos de acilo, acil aminas, sais de acil piridínio, alcóxidos de acilo, particularmente fenóxidos de acilo tais como p-nitrofenoxi acilo, dinitrofenoxi acilo, fluorofenoxi acilo e difluorofenoxi acilo. As reações são geralmente exotérmicas e conduzidas em solventes inertes sob temperaturas reduzidas tais como -78 a cerca de 50 °C. As reações normalmente são também conduzidas na presença de base inorgânica tal como carbonato de potássio ou bicarbonato de sódio, ou base orgânica tal como amina, incluindo piridina, trietilamina etc. Uma forma de 30 ΕΡ1778718Β1 preparação de pró-fármacos é descrita no documento USSN 08/843.369, depositado em 15 de Abril de 1997 (correspondente à publicação PCT WO 98/46576).
Os compostos específicos da fórmula I incluem os seguintes:
31 ΕΡ1778718Β1
32 ΕΡ1778718Β1
33 ΕΡ1778718Β1
34 ΕΡ1778718Β1
35 ΕΡ1778718Β1
-tr 36 ΕΡ1778718Β1
τ— ¢0 ^ 37 ΕΡ1778718Β1
38 ΕΡ1778718Β1
39 ΕΡ1778718Β1
40 ΕΡ1778718Β1
41 ΕΡ1778718Β1
42 ΕΡ1778718Β1
,«á+ 43 ΕΡ1778718Β1
44 ΕΡ1778718Β1
45 ΕΡ1778718Β1
46 ΕΡ1778718Β1
\**N m Ο ο 47 ΕΡ1778718Β1
48 ΕΡ1778718Β1
S2> w*·
£> <H
xs: \ 49 ΕΡ1778718Β1
50 ΕΡ1778718Β1
ΕΡ1778718Β1
52 ΕΡ1778718Β1
53 ΕΡ1778718Β1
54 ΕΡ1778718Β1
55 ΕΡ1778718Β1
56 ΕΡ1778718Β1
57 ΕΡ1778718Β1 U«
Sb» φ 58 ΕΡ1778718Β1
SÍNTESES
Os compostos de acordo com a presente invenção são preparados utilizando métodos sintéticos orgânicos padrão a partir de reagentes e materiais de partida disponíveis comercialmente. Apreciar-se-á que procedimentos sintéticos utilizados na preparação de compostos de acordo com a presente invenção dependerão dos substituintes específicos presentes num composto e que diversas proteção e desproteção pode ser necessária conforme o padrão em síntese orgânica. Em esquema sintético geral, os compostos de acordo com a presente invenção podem ser preparados utilizando métodos típicos de química de péptidos por meio de acoplamento dos análogos de resíduos de aminoácidos com procedimentos de acoplamento de amida típicos. No esquema 1, análogos de resíduos de aminoácidos amino-protegidos são acoplados e desprotegidos sequencialmente para gerar os compostos finais.
Esquema 1
Apreciar-se-á que os análogos de aminoácidos podem ser acoplados em qualquer ordem e podem ser preparados utilizando suporte de fase sólido que é rotineiro na técnica. 0 anel A amino-substituído que serve de intermediário para a preparação de compostos de acordo com a presente invenção está disponível comercialmente ou é preparado a 59 ΕΡ1778718Β1 partir de reagentes disponíveis comercialmente empregando métodos químicos orgânicos padrão. l-Aril-5-aminotetrazóis, tais como fenil-5-aminotetrazol, por exemplo, podem ser preparados de acordo com o Esquema 2 a partir de fenil tioureia disponível comercialmente por meio de reação com azida de sódio e cloreto mercúrico. ΕΡ1778718Β1 Esquema 2
3-Aril-5-amino-l,2,3-triazóis, tais como 3-fenil-3H-[1,2,3]triazol-4- ilamina, podem ser preparados de acordo com os procedimentos descritos em J. Org. Chem., 1981, 46: 856-9 e ilustrados no Esquema 3 abaixo por meio da reação de fenilamina com aminoacetonitrilo.
Esquema 3
De forma similar, 5-amino-l-fenil-lH-[1,2,3]triazol-4-carbonitrilo pode ser preparada por meio da reação de fenilamina com 2-amino- malononitrilo conforme ilustrado no Esquema 4.
Esquema 4
HoN'
3
CN λΝ
5
WC
4-Aril-5-amino-l,2,3-oxadiazóis, furazan-3- ilamina, podem ser preparados de acordo com os procedimentos descritos em Lakhan et al., (Indian Journal of Chemistry, Capítulo B: Organic Chemistry Including Medicinal Chemistry (1987), 26B (7), 690-2) e ilustrados no 60 ΕΡ1778718Β1
Esquema 5 por meio da reaçao de cianeto de benzoilo com hidroxilamina. ΕΡ1778718Β1 Esquema 5
4-Aril-3-amino-l,2,4-triazóis, tais como 4-fenil-4H-[1,2,4]triazol-3- ilamina, podem ser preparados por meio da reação de isotiocianato de fenilo com hidrazinocarboximidamida para gerar 5-amino-4-fenil-4H-[ 1,2,4 ] triazol-3- tiol, no qual o grupo tiol pode ser removido com catalisador níquel Raney conforme ilustrado no Esquema 6. SC Ν'
2 m H ------------
Esquema 6
Ni(R>
y-N N
HbN
4-Aril-5-aminol,2,3-triazóis, tais como 3,5-difenil-3H-[1,2,3]triazol-4- ilamina, de acordo com os procedimentos descritos em J. Org. Chem., 1990, 55: 3351-62 e ilustrados no Esquema 7, por meio da reação de benzenoacetonitrilo com azidobenzeno (ou, alternativamente, trimetilsililazida, TMS-N3).
Esquema 7
4-Aril-3-aminopírazóis, tais como 4-fenil-2H-pirazol-3-ilamina, podem ser preparados de acordo com os procedimentos descritos na Patente EP 269.859 e ilustrados 61 ΕΡ1778718Β1 no Esquema 8, por meio da reação de benzenoacetonitrilo com trietil éster de ácido ortofórmico para gerar 3-oxo-2-fenil-propionitrilo que é reagida com hidrazina.
Esquema 8
Várias hidrazinas e derivados de benzenoacetonitrilo podem ser utilizados para preparar 4-aril-3-aminopirazóis substituídos conforme ilustrado no Esquema 9.
Esquema 9
l-Aril-5-aminopirazóis, tais como 2-fenil-2H-pirazol-3-ilamina, podem ser preparados por meio de reação de fenil hidrazina com 3-oxo- propionitrilo. Várias nitrilos podem ser utilizadas para introduzir substituição na posição 3 do anel de pirazol conforme ilustrado no Esquema 10. 62 ΕΡ1778718Β1 Esquema 10 Ο
X X= H, Me, Et, COzEt, CF3 3-Aril-4-aminoimidazóis, tais como 3-fenil-3H-imidazol-4-ilamina, podem ser preparados por meio da reação de fenilamina com aminoacetonitrilo e trietil éter de ácido ortofórmico, conforme ilustrado no Esquema 11. Substituição na posição 2 do imidazol pode ser introduzida utilizando análogos do trietiléster de ácido ortofórmico conforme segue.
Esquema 11
R-V"' RC(OEt)3 nh2
H
5-Aril-4-aminoimidazóis, tais como 5-fenil-3H-imidazol-4-ilamina, podem ser preparados por meio da reação de formamidina com aminofenilacetonitrilo conforme ilustrado no Esquema 12. Substituição na posição 2 do anel imidazol pode ser introduzida utilizando análogos da formamidina.
Esquema 12
4-Aril-[1,2,3]tiadiazol-5-ilaminaSf tais como 4-feniI-[ 1,2,3]tiadiazol- 5-ilamina, podem ser preparadas por meio do procedimento ilustrado no Esquema 13. 2-Bromo-l-fenil-etanona é reagida com ftalimida de litio e o produto de substituição é reagido com etil éster de 63 ΕΡ1778718Β1 hidrazinocarboxilato. 0 etil éster de hidrazinocarboxilato resultante é ciclizado para formar tiadiazol por meio de reação com cloreto de tionilo seguida por remoção do grupo ftalimida com hidrazina. ΕΡ1778718Β1 Esquema 13
Os compostos de acordo com a presente invenção em que R4 ou R4' são diferentes de H podem ser preparados de acordo com métodos de quimica orgânica padrão, tal como por meio de aminação redutiva na qual um análogo de resíduo de aminoácido inicial, tal como NH2-CH (R3)-C (0)-OH, é reagido com aldeído ou cetona apropriada para gerar os substituintes R4 e R4' desejados. Veja-se o esquema 14. 0 intermediário de aminoácido substituído RVRV resultante pode ser conjugado em seguida com o próximo intermediário de aminoácido ou o restante do composto utilizando procedimentos de acoplamento de péptidos padrão.
Esquema 14
R
O
H
NaCNBH3
1% AcOH DMF
LiOH.H20 THF.Hi
R
Numa forma de realização específica, alanina é reagida com 1-metilindol-2- carboxaldeído e reduzida com cianoboroidreto de sódio dissolvido em 1 % de HOAc/DMF para gerar o resíduo de alanina N-subst ituído que pode ser utilizado na preparação de compostos de acordo com a presente invenção. Veja-se o esquema 15. 64 ΕΡ1778718Β1 Esquema 15
NaCNBH3 1% AcOH \
DMF Ο
\
Alternativamente, o procedimento de aminação redutiva para introduzir substituintes í^/R/ é a etapa final na preparação do composto.
Quando compostos de acordo com a presente invenção incorporam substituintes R4 ou R4' diferentes de H, eles podem também ser preparados por meio da substituição de intermediário ácido apropriado que incorpora um grupo residual com amina desejada. Br-CH (R3) -C(0)-OH, por exemplo, é substituído por uma amina R4-NH2 ou R4-NH-R4' de acordo com o Esquema 16. /
Esquema 16 7 ft1 UOH.HjO ;nh +
Alternativamente, a reação de substituição que introduz substituintes R4 ou R4' pode ser realizada na forma de etapa final na preparação do composto conforme ilustrado no Esquema 17.
Esquema 17
Numa forma de realização específica, ácido 2-bromopropiónico é reagido com as aminas a seguir dissolvidas em DMF e borbulhado até o término da substituição para formar resíduos de alanina N- 65 ΕΡ1778718Β1 substituídas :
Os compostos de acordo com a presente invenção nos quais qualquer um ou mais dentre Xi, X2 e X3 é enxofre, ou seja, o composto incorpora uma tioamida, podem ser preparados de acordo com métodos de química orgânica estabelecidos. Compostos em que X2 é enxofre, por exemplo, podem ser preparados de acordo com o Esquema 18 a partir de análogo de resíduo de aminoácido protegido com Fmoc NH2-CH (R2) — COOH, que é dissolvido em THF e arrefecido a -25 °C, com a adição de DIPEA seguida pela adição de cloroformato de isobutilo. Após dez minutos, a diamina, 4-nitrobenzeno-1,2-diamina, é adicionada e a mistura de reação é agitada continuamente a -25 °C durante 2 horas e em seguida à temperatura ambiente durante a noite. THF é retirado a vácuo e a mistura é submetida em seguida a cromatografia de flash utilizando EtOAc/hexano a 50 % para gerar o produto. O derivado de Fmoc-alanina, pentassulfeto de fósforo e carbonato de sódio são misturados em THF e agitados durante a noite. A solução é concentrada e 66 ΕΡ1778718Β1 cromatografia direta utilizando 80 % de EtOAc/hexano gera a tioalanina ativada. A tioalanina ativada e nitrito de sódio são misturados em seguida em ácido acético e diluídos com H20. O precipitado resultante é filtrado e seco para gerar o produto. A tioalanina é acoplada a análogo de resíduo de aminoácido prolina protegido com OH por meio da dissolução de ambos em DMF. O produto de tioamida pode ser desprotegido em seguida com 20 % de PIP/DMA durante 15 minutos e utilizado para conjugação ao análogo de resíduo de aminoácido R4/R4'-N- CH(R3)-COOH seguido por desproteção com OH e acoplamento a intermediário de anel A amino-substituído. Alternativamente, a tioamida protegida com Fmoc é acoplada em primeiro lugar a um intermediário de anel A amino-substituído seguido por desproteção com Fmoc e acoplamento subsequente ao análogo de resíduo de aminoácido R4/R4'-N- CH(R3)-COOH.
Esquema 18
N02
P4S10, NaHC03 FmocHN
NaN02, AcOH NOa K20
FmocHN
OzN
THF
67 ΕΡ1778718Β1
UTILIDADE
Os compostos de acordo com a presente invenção inibem a ligação de proteínas IAP a caspases, particularmente a interação de ligação de X- IAP com caspases 3 e 7. Os compostos também inibem a ligação de ML-IAP a proteína Smac. Consequentemente, os compostos de acordo com a presente invenção são úteis para a indução de apoptose em células ou sensibilização de células através de sinais apoptóticos, particularmente células cancerosas. Os compostos de acordo com a presente invenção são úteis para induzir a apoptose em células que sobreexpressam proteínas IAP. Alternativamente, os compostos de acordo com a presente invenção são úteis para a indução de apoptose em células nas quais o processo apoptótico mitocôndrico é rompido, de tal forma que a liberação de Smac de proteínas ML-IAP seja inibida, por exemplo, por meio de regulação para cima de Bcl-2 ou regulação negativa de Bax/Bak. Mais amplamente, os compostos podem ser utilizados para o tratamento de todos os tipos de cancro que deixem de sofrer apoptose. Exemplos destes tipos de cancro incluem neuroblastoma, carcinoma do intestino tal como carcinoma do reto, carcinoma do cólon, carcinoma de polipose adenomatosa familiar e cancro colo-retal não de polipose hereditário, carcinoma do esófago, carcinoma labial, carcinoma da laringe, carcinoma hipofaríngeo, carcinoma da língua, carcinoma das glândulas salivares, carcinoma gástrico, adenocarcinoma, carcinoma da tireoide medular, carcinoma da tireoide papilar, carcinoma renal, carcinoma parenquimal dos rins, carcinoma do ovário, carcinoma cervical, carcinoma de corpo uterino, carcinoma do endométrio, carcinoma do córion, carcinoma pancreático, carcinoma da próstata, carcinoma dos testículos, carcinoma de mama, carcinoma urinário, melanoma, tumores do cérebro tais como glioblastoma, astrocitoma, meningioma, meduloblastoma e 68 ΕΡ1778718Β1 tumores neuroectodérmicos periféricos, linfoma de Hodgkin, linfoma não de Hodgkin, linfoma de Burkitt, leucemia linfática aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), linfoma de leucemia de células T em adultos, carcinoma hepatocelular, carcinoma da vesícula, carcinoma brônquico, carcinoma do pulmão de células pequenas, carcinoma do pulmão não de células pequenas, mieloma múltiplo, basalioma, teratoma, retinoblastoma, melanoma coroideia, seminoma, rabdomio sarcoma, craniofaringeoma, osteossarcoma, condrossarcoma, miossarcoma, lipossarcoma, fibrossarcoma, sarcoma de Ewing e plasmocitoma.
Os compostos de acordo com a presente invenção são úteis para sensibilizar células aos sinais apoptóticos. Consequentemente, os compostos podem ser administrados antes, simultaneamente ou depois da administração da terapêutica de radiação ou quimioterapia citostática ou antineoplástica. Os compostos de quimioterapia citostática apropriados incluem, mas não se limitam a (i) antimetabólitos, tais como citarabina, fludarabina, 5-fluoro-2'-desoxiuiridina, gemcitabina, hidroxiureia ou metotrexato; (ii) agentes fragmentadores de ADN, tais como bleomicina, (iii) agentes reticulantes de ADN, tais como clorambucilo, cisplatina, ciclofosfamida ou mostarda de azoto; (iv) agentes intercalantes, tais como adriamicina (doxorubicina) ou mitoxantrona; (v) inibidores da síntese de proteínas, tais como L-asparaginase, cicloheximida, puromicina ou toxina de difteria; (vi) venenos de topoisomerase I, tais como camptotecina ou topotecano; (vii) venenos de topoisomerase II, tais como etopósido (VP-16) ou tenipósido; (viii) agentes dirigidos a microtúbulos, tais como colcemida, colchicina, paclitaxel, vinblastina ou vincristina; (ix) inibidores da quinase, tais como flavopiridol, estaurosporina, STI571 (CPG 57148B) ou UCN-01 (7-hidroxistaurosporina) ; (x) agentes investigativos 69 ΕΡ1778718Β1 miscelâneos (miscellaneous investigational agents), tais como tioplatina, PS-341, butirato de fenilo, ET-I8-OCH3 ou inibidores de famesil transferase (L-739749, L-744832); polifenóis, tais como quercetina, resveratrol, piceatanol, epigalocatequino gaiato, teaflavinas, flavanóis, procianidinas, ácido betulinico e seus derivados; (xi) hormonas, tais como glicocorticoides ou fenretinida; (xii) antagonistas de hormonas, tais como tamoxifeno, finasterida ou antagonistas de LHRH. Numa forma de realização preferida, os compostos de acordo com a presente invenção são coadministrados com um composto citostático selecionado a partir do grupo que consiste em cisplatina, doxorubicina, taxol, taxotere e mitomicina C. De maior preferência, o composto citostático é doxorubicina.
Outra classe de compostos ativos que podem ser utilizados na presente invenção são aqueles que são capazes de sensibilizar para ou induzir a apoptose por meio de ligação a recetores mortais (death recetors) ("agonistas de recetores mortais"). Esses agonistas de recetores mortais (death recetors) incluem ligantes de recetores mortais (death recetors) tais como fator de necrose tumoral oí (TNF-a), fator de necrose tumoral p (TNF-β, linfotoxina-α), LT-β (linfotoxina-β), TRAIL (Apo2L, ligando DR4), ligando CD95 (Fas, APO-1), ligando TRAMP (DR3, Apo-3) , ligando DR6, bem como fragmentos e derivados de quaisquer dos ditos ligantes. Preferencialmente, o ligando de recetor mortal (death recetors) é TNF-α. De maior preferência, o ligando de recetor mortal (death recetors) é Apo2UTRAIL. Além disso, os agonistas de recetores mortais compreendem anticorpos agonistas para recetores mortais (death recetors), tais como anticorpo anti-CD95, anticorpo anti-TRAIL-Rl (DR4), anticorpo anti-TRAIL- R2 (DR5), anticorpo antÍ-TRAIL-R3, anticorpo antÍ-TRAIL-R4, anticorpo anti-DR6, anticorpo anti-TNF-RI e anticorpo anti-TRAMP (DR3) , bem como fragmentos e derivados de quaisquer dos mencionados 70 ΕΡ1778718Β1 anticorpos .
Para o propósito de sensibilizar células para apoptose, os compostos de acordo com a presente invenção podem também ser utilizados em combinação com terapêutica de radiação. A expressão "terapêutica de radiação" designa o utilização de radiação particulada ou eletromagnética no tratamento de neoplasia. A terapêutica de radiação baseia-se no principio de que radiação de alta dose proporcionada a uma área alvo resultará na morte de células reprodutoras em tecidos normais e tumorosos. 0 regime de dosagem de radiação geralmente é definido em termos de dose absorvida de radiação (rad), tempo e fracionamento, e deve ser cuidadosamente definido pelo oncologista. A quantidade de radiação recebida por um paciente dependerá de várias considerações, mas as duas considerações mais importantes são a localização do tumor com relação a outras estruturas ou órgãos críticos do corpo e a extensão à qual o tumor se difundiu. Exemplos de agentes radioterapêuticos são proporcionados, mas não se limita a terapêutica de radiação e são conhecidos na técnica (Hellman, Principies of Radiation Therapy, Câncer, em Principies I and Practice of Oncology, 24875 (Devita et ai., quarta edição, vol. 1, 1993). Avanços recentes na terapêutica de radiação incluem radiação de feixes externos conformes tridimensionais, terapêutica de radiação modulada por intensidade (IMRT), radiocirurgia estereotática e braquiterapia (terapêutica de radiação intersticial) , esta última colocando a fonte de radiação diretamente no tumor na forma de "sementes" implantadas. Estas modalidades mais novas de tratamento fornecem doses mais altas de radiação ao tumor, o que compensa a sua maior eficácia em comparação com terapêutica de radiação de feixes externos padrão.
Radiação de ionização com radionucletos emissores beta é considerada a mais útil para aplicações radioterapêuticas devido à transferência de energia linear (LET) moderada da 71 ΕΡ1778718Β1 partícula ionizante (eletrão) e sua faixa intermediária (tipicamente vários milímetros de tecido). Raios gama fornecem dosagem em níveis mais baixos ao longo de distâncias muito maiores. Partículas alfa representam o outro extremo; elas fornecem dosagem de LET muito alta, mas possuem faixa extremamente limitada e devem, portanto, estar em contato íntimo com as células do tecido a ser tratado. Além disso, emissores alfa geralmente são metais pesados, o que limita a química possível e apresenta riscos indevidos de vazamento de radionucleótidos da área a ser tratada. Dependendo do tumor a ser tratado, todos os tipos de emissores são concebíveis.
Além disso, também se descrevem no presente documento tipos de radiação não ionizante, tais como radiação ultravioleta (UV), luz visível com alta energia, radiação de micro-ondas (terapêutica de hipertermia), radiação infravermelha (IR) e lasers. Numa forma de realização específica da presente invenção, aplica-se radiação UV.
Também se descrevem no presente documento composições farmacêuticas ou medicamentos que contêm os compostos de acordo com a presente invenção e veículo, diluente ou excipiente terapeuticamente inerte, bem como métodos de utilização dos compostos de acordo com a presente invenção para a preparação dessas composições e medicamentos. Tipicamente, os compostos da fórmula I utilizados nos métodos são formulados por meio de mistura à temperatura ambiente sob o pH apropriado e no grau de pureza desejado, com veículos fisiologicamente aceitáveis, ou seja, veículos que são não tóxicos para pacientes nas dosagens e concentrações utilizadas em forma de administração galénica. 0 pH da formulação depende principalmente da utilização específico e da concentração de composto, mas varia preferencialmente de cerca de 3 a cerca de 8. Formulação em tampão de acetato a pH 5 é forma de realização apropriada. 72 ΕΡ1778718Β1 0 composto inibidor para utilização no presente documento é preferencialmente estéril. 0 composto normalmente será armazenado na forma de composição sólida, embora formulações liofilizadas ou soluções aquosas sejam aceitáveis. A composição será formulada, dosada e administrada de forma consistente com a boa prática médica. Fatores para consideração neste contexto incluem a disfunção especifica sendo tratada, o mamífero específico sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa da disfunção, o local de fornecimento do agente, o método de administração, o cronograma de administração e outros fatores conhecidos dos praticantes da medicina. A "quantidade eficaz" do composto a ser administrada será regida por essas considerações e é a quantidade mínima necessária para inibir a interação de IAP com caspases, induzir a apoptose ou sensibilizar célula maligna a sinal apoptótico. Esta quantidade preferencialmente está abaixo da quantidade que é tóxica para células normais, ou para o mamífero como um todo.
Geralmente, a quantidade farmaceuticamente eficaz inicial do composto de acordo com a presente invenção administrada parentericamente por dose estará no intervalo de cerca de 0,01 a 100 mg/kg, nomeadamente cerca de 0,1 a 20 mg/kg de peso corporal do paciente por dia, com o intervalo inicial típico de composto utilizado sendo de 0,3 a 15 mg/kg/dia. Formas de dosagem unitária oral, tais como pastilhas e cápsulas, contêm preferencialmente cerca de 25 a cerca de 1000 mg do composto de acordo com a presente invenção. O composto de acordo com a presente invenção pode ser administrado por qualquer meio apropriado, que inclui oral, local, transdérmico, parenteral, subcutâneo, intraperitoneal, intrapulmonar, intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As 73 ΕΡ1778718Β1 infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Exemplo de forma de dosagem oral apropriada é pastilha que contém cerca de 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg ou 500 mg do composto de acordo com a presente invenção combinados com cerca de 90-30 mg de lactose anidra, cerca de 5 a 40 mg de croscarmelose de sódio, cerca de 5 a 30 mg de polivinilpirrolidona (PVP) K30 e cerca de 1 a 10 mg de estearato de magnésio. Os ingredientes em pó são misturados entre si em primeiro lugar e misturados em seguida com solução da PVP. A composição resultante pode ser seca, granulada, misturada com o estearato de magnésio e comprimida em forma de pastilhas utilizando equipamento convencional. Formulação de aerossol pode ser preparada dissolvendo-se o composto, tal como 5 a 400 mg, de acordo com a presente invenção em solução tampão apropriada, tal como tampão de fosfato, adicionando-se tonificante, tal como sal como cloreto de sódio, se desejado. A solução é tipicamente filtrada, utilizando, por exemplo, filtro de 0,2 micron, para remover impurezas e contaminantes.
EXEMPLOS A presente invenção será compreendida mais completamente por meio de referência aos exemplos a seguir. As abreviações utilizadas no presente documento são as seguintes: ACN: acetonitrilo;
Chg: ciclohexilglicina; DCM: diclorometano; DIPEA: diisopropiletilamina; DMAP: 4-dimetilaminopiridina; DME: 1,2-dimetoxietano; DMF: dimetilformamida; 74 ΕΡ1778718Β1 DMSO: sulfóxido de dimetilo; EDC: 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; EEDQ: 2-etoxi-l-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina LCMS: espectrometria de massa por cromatografia de líquidos; HATU: hexafluorofosfato de 0-(7-azobenzotriazol—1-il)-1,1,3,3- tetrametilurónio; HOBt: N-hidroxibenzotriazol; HBTU: hexafluorofosfato de 2— (1 H-benzofriazol -il)-1,1,3,34etrametilurônio; HPLC: cromatografia líquida de alto desempenho; NBS: N-bromossuccinamida; TASF: difluorotrimetilsilicato de tris(dimetilamino)sulfónio; TEA: trietilamina; TFA: trifluoroacetato; e THF: tetrahidrofurano.
Exemplo 1 Éster etílico do ácido 6-(1,3-dioxo-l,3-dihidro-isoindol-2-il)-5-oxo-octahidro-tiazolo[3,2-a]azepina-3-carboxílico
A solução agitada de éster t-butílico de N-(difenilmetileno)glicina 1 (3,0 g, 10,1 mmol) e catalisador quiral brometo de 0- alil- -N- (9- antracenilmetil) - cinconídio (613 mg, O 1—1 mmol) em DCM seco (30 ml), adicionou-se hidróxido de césio (17 <3r 101 mmol). A reação foi arrefecida a - 78 °C em banho de acetona em gelo seco e adicionou-se 4-bromo-l-buteno em gotas. Após a adição, a reação foi agitada vigorosamente sob N2 a -48 °C por 48 75 ΕΡ1778718Β1 horas. Adicionou-se etil éter, seguido por H20. A camada orgânica foi separada e lavada por duas vezes com H20, uma vez com salmoura, seca com MgS04 e concentrada. 0 produto foi purificado por meio de cromatograf ia de Si02 sobre gradiente de 0 a 10 % de EtOAc em hexanos para gerar 2 em rendimento de 65 %. ΕΡ1778718Β1
A solução agitada de 2 (1,52 g, 4,3 mmol) em MeOH seco (50 ml), adicionou-se NaOAc (720 mg, 8,6 mmol) e NH20H-HC1 (540 mg, 7,6 mmol). Agitou-se sob N2 à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se DCM e NaOH a 0,1 N. A camada aquosa foi separada e extraída por três vezes com DCM, seca com Na2S04 e as frações de DCM foram combinadas e concentradas. O produto foi purificado por meio de cromatograf ia de Si02, 0- 10 % de MeOH em DCM com 0,05 % TEA para gerar 3 em rendimento de 70 %. (X·
3 v
O TEA, DCM 53%-79% 4 A uma solução de 3 (610 g, 3,3 mmol) em DCM seco (20 ml), adicionou-se trietilamina (550 μΐ, 3,9 mmol) e cloroformato de benzilo (550 μΐ, 3,9 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A solução foi concentrada e purificada por meio de cromatografia de Si02 por gradiente de 0 a 30 % de EtOAc em hexanos para gerar 4 em rendimento de 66 %. 76 ΕΡ1778718Β1
4
1. BHg-THF
Z NaON, HaOg 5
OH A solução agitada de 4 (577 mg, 1,8 mmol) em THF (20 ml) sob N2, adicionou-se BH3·THF. Após uma hora, adicionou-se NaOH a 3 N (300 μΐ, 0,9 mmol) e H2O2 (306 μΐ, 2,7 mmol). A reação foi agitada durante a noite e diluída em seguida com Η20, extraída por duas vezes com etil éter, seca com MgS04 e concentrada. O produto foi purificado por meio de cromatografia de Si02 sobre gradiente de 10 a 45 % de EtOAc em hexanos para gerar 5 em rendimento de 50 %.
5 6 A solução agitada de 5 (71 mg, 0,21 mmol) em MeOH (2 ml) sob 1 atm H2) adicionou-se 10 % hidróxido de paládio sobre carbono (30 mg). A reação terminou após trinta minutos. A reação foi filtrada sobre Celite e concentrada para gerar 6 em rendimento quantitativo.
A 6 (42 mg, 0,21 mmol) em ACN (2 ml), adicionou-se carbetoxiftalimida (50 mg, 0,23 mmol) com DIPEA (40 μΐ, 0,23 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 77 ΕΡ1778718Β1 horas. H20 (1 ml) foi adicionada e agitada durante 10 minutos adicionais. A ACN foi evaporada e adicionou-se DCM e 10 % ácido cítrico. A camada aquosa foi separada e extraída por três vezes com DCM, em que as porções de DCM foram combinadas, secas com Na2S04 e concentradas para gerar 7 em rendimento de 95 %. ΕΡ1778718Β1
Cloreto de oxalilo (561 μΐ, 6,60 mmol) foi dissolvido em DCM (35 ml) , arrefecido a -78 °C e agitado por cinco minutos, seguido por adição de solução de sulfóxido de dimetilo (870 μΐ, 12,3 mmol) em DCM (2,5 ml). Após agitação por cinco minutos, adicionou-se 7 (1,05 g, 3,15 mmol) em diclorometano (20 ml), seguido por trietilamina (2,37 ml, 17,0 mmol). A reação foi lentamente aquecida à temperatura ambiente. Adicionou-se DCM e H20, a camada aquosa foi separada e extraída por duas vezes com DCM. As porções de DCM foram combinadas, filtradas através de Na2S04 e concentradas para gerar 8 em rendimento de 95 %.
'SH
KOAc, EíOH
Cloridrato de etil éster de L-cisteína (643 mg, 3,5 mmol) e acetato de potássio (343 mg, 3,5 mmol) foram dissolvidos em EtOH em agitação (13 ml) e arrefecidos a 0 78 ΕΡ1778718Β1 °C em banho de água com gelo. 0 composto 8 foi dissolvido em EtOH (13 mL) e adicionado. A reação foi agitada a 0 °C por quatro horas e LCMS confirmou a conversão de 8 em dois produtos diaestereoméricos. A reação foi filtrada, evaporada em EtOH, novamente dissolvida em DCM e lavada com salmoura, seca com MgS04 e concentrada para gerar mistura 1:1 de diaestereómeros 9 em rendimento quantitativo.
Os diaestereómeros foram novamente dissolvidos em 1:1 TFA: DCM (10 ml) e agitados durante uma hora à temperatura ambiente. LCMS exibiu conversão completa em 10. A reação foi concentrada para gerar 10 em rendimento de 95 % para os dois diaestereómeros.
A solução agitada de 10 (675 mg, 1,67 mmol) em THF (20 ml), adicionou-se EEDQ (619 mg, 2,50 mmol). Agitou-se à temperatura ambiente por dois dias. O THF foi removido sob pressão reduzida e o produto foi novamente dissolvido em EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HC1 a 0,5 N, 0,5 % NaHC03, H20, salmoura. A solução de EtOAc foi seca com MgS04 e concentrada. O produto foi purificado por meio de HPLC de fase reversa 10 - 70 % de ACN em H20 para gerar dois diaestereómeros 11, rendimento de 20 % para o 79 ΕΡ1778718Β1 diaestereómero 1 e rendimento de 18 % para o diaestereómero 2 .
Exemplo 2 (2-Fenil-2H-pirazol-3-il)-amida do ácido 1 — [ 2 — ciclohexil-2-(2-metilamino-propionilamino)-acetil]-pirrolidina-2-carboxílico
Uma solução de Boc-MeAla-Chg-Pro-OH (47,0 mg, 0,107 mmol) e piridina (26 μΐ, 0,32 mmol) em diclorometano anidro (300 μΐ) foi arrefecida a 0 °C e adicionou-se solução de cloreto de oxalilo em diclorometano (54 μΐ, 2,0 M, 0,11 mmol) em gotas durante 10 minutos. A mistura foi agitada a 0 °C durante 15 minutos, depois à temperatura ambiente por 45 minutos e adicionou-se solução de 5- amino-1- fenilpirazol (15,9 mg, 0,100 mmol; TCI America catálogo n° A0174) e adicionou-se piridina (15,5 μΐ, 0,191 mmol) em diclorometano (0,5 ml). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas, diluida com diclorometano até 20 ml e lavada com 0,2 N hidróxido de sódio aquoso (20 ml) . A fase orgânica foi seca (MgSCh) e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica gel, acetato de etilo a 60 % em hexanos, depois 100 % acetato de etilo) para gerar óleo amarelo: m/z 581 (M+H+) . O óleo foi tratado com ácido trifluoroacético a 5 % em diclorometano (2 ml) e, após dezoito horas, o solvente foi removido a vácuo. O óleo resultante (29,3 mg, rendimento de 57 % por duas etapas) foi adicionalmente purificado por meio de HPLC de fase reversa para gerar o produto (sal de TFA, 9,6 mg, rendimento de 15 %) : m/z 481 (M+H+) , 503 (M+Na+) .
Exemplo 3 4-Fenil-[1,2,3]tiadiazol-5-ilamina 80 ΕΡ1778718Β1
Br
DMF
2-Bromoacetofenona foi dissolvida em DMF (três volumes) e adicionou-se ftalimida de potássio (1 eq). A reação, inicialmente suavemente exotérmica, foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A DMF foi removida a vácuo e a reação foi diluida com DCM (cerca de três volumes), seguido por NaOH a 0,1 N (cerca de três volumes; 1:1 aq/org), agitada vigorosamente e extraída em seguida. A camada orgânica, que contém algum material sólido, foi concentrada a vácuo e o sólido resultante foi diluido em suspensão aquosa de dietil éter e recolhido por meio de filtragem de sucção para gerar (a) na forma de sólido cristalino branco em rendimento de cerca de 95 %.
O composto (a), carbazato de etilo (1,5 eq) , e TsOH-H, O (0,1 eq) foram combinados em tolueno (cinco volumes) e aquecidos até refluxo utilizando sifão Dean-Stark para remover a água. A solução adquiriu coloração vermelha escura e completou-se por TLC em cerca de 2 h. Cerca de metade do tolueno foi removida por meio de destilação, a solução foi arrefecida à temperatura ambiente e concentrada a vácuo. O sólido resultante foi colocado em suspensão aquosa em EtOH (volume mínimo necessário para agitação), aquecido até refluxo durante 30 minutos e arrefecido em seguida sobre gelo para facilitar a precipitação dos dois isómeros. O sólido foi recolhido por meio de filtragem de 81 ΕΡ1778718Β1 sucção, lavado com EtOH frio e seco a vácuo para gerar os dois isómeros de composto (b) na forma de sólido esbranquiçado em rendimento de cerca de 90 %. ΕΡ1778718Β1 HN OEt Λ,
A cloreto de tionilo arrefecido em gelo (4 eq, cerca de 0,85 vol) , adicionou-se porção a porção (a fim de controlar o exoterma) a mistura de isómeros de (b). O banho de gelo foi removido e a reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante a noite. Cloreto de tionilo foi removido a vácuo, adicionou-se DCM (1 vol) e a reação foi agitada com 0,1 M NaOH (1 vol; 1:1 aq/org). A suspensão foi extraída e os orgânicos foram concentrados a vácuo, transformados em suspensão aquosa em EtOAc em refluxo (volume mínimo necessário para fácil agitação) durante 30 minutos, arrefecidos à temperatura ambiente, recolhidos por meio de filtragem de sucção e lavados com mínimo de EtOAc frio para gerar (c) na forma de sólido cristalino esbranquiçado em rendimento de cerca de 80 %.
NH,
Adicionou-se solução de hidrato de hidrazina (2,4 eq) em EtOH (1 vol) em gotas a solução em refluxo de (c) em EtOH (8 vol). Formou-se precipitado quase imediatamente e a reação completou-se por meio de TLC em cerca de três horas. A solução foi arrefecida à temperatura ambiente e o subproduto de divisão de ftalimida foi filtrado e lavado com DCM. O filtrado de EtOH/DCM foi concentrado a vácuo até 82 ΕΡ1778718Β1 observar-se a formação de cristais. Esta suspensão foi agitada durante a noite e a mistura cristalina/sólida foi recolhida por meio de filtragem de sucção e lavada com EtOH frio até a remoção de impurezas coloridas, gerando tiadiazol amina (d) em rendimento de cerca de 75 % na forma de sólido cristalino esbranquiçado.
Exemplo 4 (4-Fenil-[1,2,3]tiadiazol-5-il)-amida do ácido 1-[2-ciclohexil-2-(2-metilamino-propionilamino)-acetil]-pirrolidina-2-carboxílico
2) 4M HCl/dioxano MeCN (e)
Boc-L-Pro (2 eq) , HOBt (1,9 eq) , EDC-HC1 (1,9 eq) e DIPEA (5 eq) foram dissolvidos em DMF (10-15 vol). A este, adicionou-se em seguida a tiadiazol amina (d). A reação, a principio suavemente exotérmica, foi aquecida a 75 °C e agitada durante a noite, arrefecida à temperatura ambiente e a DMF foi parcialmente removida a vácuo. Diluição com EtOAc (10 a 15 vol) foi seguida por lavagem com 1 M HC1 (2x) , NaHCCh (lx) e salmoura (lx) (1:1 aq/org) . A camada orgânica foi concentrada a vácuo e o sólido resultante foi transformado em suspensão aquosa em MeCN em refluxo (volume minimo necessário para fácil agitação) durante 30 minutos e arrefecido em seguida à temperatura ambiente. Filtragem por sucção gerou produto de conjugação protegido por Boc na forma de sólido cristalino esbranquiçado em rendimento de cerca de 77 %. O produto protegido com Boc foi suspenso em solução de 4 M HCl/dioxano (4-5 eq. ácido) e MeCN (1 vol. eq. à solução de dioxano) e agitado à temperatura ambiente até que LCMS indicasse desproteção completa, cerca de uma hora. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e o sólido resultante foi vigorosamente transformado em 83 ΕΡ1778718Β1 suspensão aquosa em MeCN em refluxo (volume mínimo necessário para fácil agitação), arrefecido à temperatura ambiente e o sólido recolhido por meio de filtragem de sucção e lavado com MeCN frio até a remoção da coloração residual do aglomerado para gerar o sal de HC1 (e) na forma de sólido esbranquiçado em rendimento aproximadamente quantitativo.
2>4M HCl/dioxano MeCN 0 sal de HC1 (e) foi dissolvido em DMF (10 a 15 vol) e DIPEA (5 eq). A este, adicionou-se Boc-L-Chg (1,5 eq), HOBt (1,4 eq) e EDC-HC1 (1,4 eq) . O acoplamento completou-se após cerca de duas horas por meio de LCMS. A reação foi diluída com EtOAc (15 vol) e lavada com 1M HC1 (2x), NaHCCh (lx) e salmoura (lx) (1:1 aq/org) . O extrato orgânico foi seco sobre sulfato de sódio e concentrado a vácuo. O sólido resultante é transformado em suspensão aquosa em EtOH/hexano (20:80) (volume mínimo necessário para fácil agitação) e filtrado para gerar produto conjugado protegido por Boc na forma de sólido branco fofo em rendimento de cerca de 80 %. O produto protegido com Boc foi dissolvido em solução de 4 M HCl/dioxano (4-5 eq. ácido) e MeCN (0,25 vol. eq. à solução de dioxano) e agitado à temperatura ambiente até que LCMS indicasse desproteção completa, cerca de uma hora. A reação foi concentrada até secar com tolueno (2x) (o mesmo volume da solução de desproteção) para gerar o sal de HC1 (f) na forma de sólido cristalino branco em rendimento aproximadamente quantitativo. 84 ΕΡ1778718Β1 ΕΡ1778718Β1
( Ο soom^A^ —1 m
HOBt, EDCHQ D1PEA, DMF
2)4M HCI/dioxano MeCN 0 sal de HC1 (f) foi dissolvido em DMF (10 a 15 vol) e DIPEA (5 eq) . A este, adicionou-se Boc-L-N-metil Ala (1,5 eq) , HOBt (1,4 eq) e EDC-HC1 (1,4 eq) . O acoplamento completou-se após cerca de uma hora por meio de LCMS. A reação foi diluída com EtOAc (15 vol) e lavada com 1M HC1 (2x) , NaHC03 (lx) e salmoura (lx) (1:1 aq/org) . O extrato orgânico foi seco sobre sulfato de sódio e concentrado a vácuo para gerar o produto conjugado protegido por Boc na forma de sólido espumante bege em rendimento de cerca de 85 %. O conjugado protegido com Boc foi dissolvido em solução de 4 M HCI/dioxano (4-5 eq. ácido) e MeCN (0,25 eq. vol. à solução de dioxano) e agitado à temperatura ambiente até que LCMS indicasse desproteção completa, cerca de uma hora. A reação foi concentrada até secar com tolueno (2x) (mesmo volume da solução de desproteção) e o sólido resultante foi transformado em suspensão aquosa em solução de MTBE/EtOAc (70:30) (volume mínimo necessário para fácil agitação), filtrada e recolhida para gerar (g) bruto na forma de sólido em livre fluxo esbranquiçado. O sal de HC1 bruto (g) foi suspenso em MeOH (4 vol. mínimo) e dissolvido com agitação a 65 °C. Acetato de isopropilo quente (6-8 vol.) é adicionado em duas parcelas, mantendo a temperatura em cerca de 60 °C, e a solução foi mantida em arrefecimento com agitação. A cristalização teve lugar rapidamente, a suspensão foi agitada à temperatura ambiente por várias horas, agitada em seguida a 0 °C durante uma hora antes que o sólido fosse recolhido por meio de filtragem de sucção, lavado com MeOH/iPrOAc (1:4, 2 vol.) e seco para gerar o produto final na forma de sólido cristalino branco/esbranquiçado em rendimento de cerca de 80 % a 85 ΕΡ1778718Β1 partir de (f).
Exemplo 5 Ácido 2-[terc-butoxicarbonil-(lH-pirrol-2-ilmetil)-amino]-propiónico o o
DMF
Boc
Boc
Alanina etil éster (5 g, 32,5 mmol), pirrol-2-carboxaldeído (3,1 g, 32,5 mmol), cianoboroidreto de sódio (2,04 g, 32,5 mmol) e AcOH (1 %) foram misturados em DMF e agitados durante a noite. A reação foi arrefecida com H20 e DMF foi evaporado. A mistura foi diluida com EtOAc, lavada por NaOH a 0,1 N, seca e concentrada para gerar o produto, 2,5 g. O éster resultante (2,5 g, 12,8 mmol), dicarbonato de di-terc-butilo (3,06 g, 14 mmol), foi misturado em THF, H20 com NaHC03 e agitado durante a noite. THF foi evaporado, a mistura foi diluida com EtOAc e lavada por 1 N NaOH, NH4C1 saturado e salmoura. Depois de secar, a mistura foi concentrada para gerar o éster protegido com Boc, 3,3 g. O éster protegido com Boc (1,67 g, 5,6 mol), monoidrato hidróxido de lítio (284 mg, 6,77 mmol), foi misturado em THF e H20 a 0 °C. THF foi retirado a vácuo, a solução foi acidificada por H2S04 diluído e extraída por EtOAc por duas vezes. As camadas orgânicas foram combinadas, secas e evaporadas.
Exemplo 6 tetrahidropiranilglicina
Tetrahidropiranilglicina foi adquirida da NovaBiochem ou sintetizada de acordo com a literatura: Ghosh, A. K.; Thompson, W. J.; Holloway, Μ. K.; McKee, S. P.; Duong, T. T.; Lee, Η. Y.; Munson, P. M.; Smith, A. M.; Wai, J. M; Darke, P. L; Zugay, J. A.; Emini, E. A.; Schleife, W. A.; Huff, J. R.; Anderson, P. S. J. Med Chem., 1993, 36, 2300- 86 ΕΡ1778718Β1 2310.
Exemplo 7 piperidinilglicina
Piperidinilglicina foi sintetizada de acordo com a literatura: Shieh, W-C.; Xue, S.; Reel, N.; Wu, R.; Fitt, J.; Repic, O. Tetrahedron: Asymmetry, 2001, 12, 2421-2425. Exemplo 8 4,4-difluorociclohexilglicina 4,4-Difluorociclohexilglicina foi fabricada de acordo com os procedimentos descritos no documento US 2003/0216325.
Exemplo 9 Ácido Boc (S)-2-amino-2-(4- hidroxiciclohexil)acético
Seguindo o procedimento de Sheih (Tetrahedron: Asymmetry, 2001, 12, 2421-2425), solução de cetona a (8,4 g) e EtOAc (30 ml) foi adicionada a uma solução de metil éster de ΛΤ-Cbz-fosfonoglicina b, TMG (4,5 ml) e EtOAc (30 ml) . A solução foi mantida à temperatura ambiente por 48 horas, lavada em seguida com HC1 a 1 N (3 x 50 ml) , salmoura ( 1 x 50 ml) , seca (Na2S04) , filtrada e concentrada. 0 resíduo foi adsorvido sobre Celite, purificado por meio de cromatografia e purificado adicionalmente em seguida por meio de recristalização a partir de EtOAc/hexanos para gerar 5,2 g de produto c.
Seguindo o procedimento de Sheih (Tetrahedron: 87 ΕΡ1778718Β1
Asymmetry, 2001, 12, 2421-2425), solução de eneamida c (5,0 g) , (S, S)-Me-BPE-Rh (I) (1,5 g, Strem Chemicals, Newburyport MA) e MeOH (100 ml) foi agitada vigorosamente sob 70 psi de H2 por 48 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O residuo foi absorvido em EtOAc e filtrado por meio de Si02 com mais EtOAc. O solvente foi removido sob pressão reduzida para gerar 4,0 g de produto d na forma de sólido incolor.
Mistura de Cbz-carbamato d, (4,0 g) Boc20, (2,9 g) 20 % Pd(OH)2-C (1,0 g) e MeOH (30 ml) foi mantida sob atmosfera de H2 durante 6 horas. A mistura foi filtrada através de Celite com MeOH. O solvente foi removido sob pressão reduzida para gerar 4,5 g de resíduo e, que foi conduzido diretamente.
O residuo e acima foi dissolvido em H20 (10 ml) , AcOH (30 ml), THF (5 ml) e ácido dicloroacético (3 ml) e mantido à temperatura ambiente durante a noite. Adicionou-se água (5 ml) e a solução foi mantida até completar-se a hidrólise, conforme monitorizado por meio de HPLC-MS. Na2C03 sólido foi adicionado cuidadosamente até cessar a evolução do gás, a mistura foi diluída com NaHC03 aquoso e extraída com 10 % de EtOAc/DCM. As fases orgânicas combinadas foram lavadas por uma vez com salmoura, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas. O resíduo foi 88 ΕΡ1778718Β1 purificado por meio de cromatografia para gerar 2,9 g de produto f. ΕΡ1778718Β1
OH
Uma mistura de cetona f (1,5 g) e MeOH (50 ml) foi tratada com NaBH4 (290 mg) a 0 °C durante 20 minutos. A mistura foi acidificada até pH de cerca de 1 com ácido cítrico aquoso a 10 % e o MeOH foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água e extraído com 20 % de EtOAc/DCM. As fases orgânicas combinadas foram lavadas por uma vez com salmoura, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia para gerar 1,17 g de produto g e 0,23 g de produto h.
OH
H^j BocHhT "C02H
Mistura de éster g (1,17 g) , Li0H-H20 (160 mg), THF (3 ml) e água (4,5 ml) foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi diluída com salmoura e exaustivamente extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas por uma vez com salmoura, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas para gerar o ácido i (525 mg). 89 ΕΡ1778718Β1 Exemplo 10 composto 2 9
Mistura de amina a (1,56 mmol), ácido 2-bromopropiónico (0,72 g, 4,68 mmol), BOP (2,1 g, 4,68 mmol) e DIPEA (1,6 ml, 9,36 mmol) em 10 ml de DMF foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Análise de LCMS indicou o término da reação. 100 ml de EtOAc foram adicionados à reação e a camada orgânica foi lavada com NaHC03 saturado seguido por salmoura, seca sobre Na2S04 e concentrada até secar. O material bruto foi purificado por meio de cromatografia, utilizando 50 % de EtOAc/hexano para obter o composto b. O composto b (0,832 g, 1,5 mmol) foi tratado com etanolamina (200 μΐ, 2,73 mmol) em 3 ml de DMF e agitado durante a noite para término. A mistura de reação foi purificada por meio de HPLC de fase reversa para obter dois diaestereómeros c (53 mg) e d (composto 29) (150 mg). 90 ΕΡ1778718Β1 Exemplo 11 N-Boc-N-ciclopropilmetil-L-alanina H.N-1 ν' +
NaCNBHj
THF/l%AcOH MeOH di-t-Boc dicarbonato NaHCOa thf.h2o
rV °\ LíOH, H20 thf,h2o
BOC rV Boc
Cloridrato de éster metílico de L-alanina a (5 g, 35,8 mmol) e ciclopropanocarboxaldeído b (2,67 ml, 35,8 mmol) foram suspensos em 50 ml de THF com 1 % AcOH. A adição de 5 ml de CH3OH fez com que a solução opaca tornasse-se transparente. Adicionou-se NaCNBH4 (2,25 g, 35,8 mmol) e a mistura de reação foi agitada durante a noite. A reação foi arrefecida por meio da adição de 1 N NaOH aquoso, extraída por EtOAc duas vezes, as camadas orgânicas foram secas sobre Na2S04 e concentradas até secar. O material bruto foi purificado por meio de cromatografia, utilizando 30 % de EtOAc/hexano (manchado por ninhidrina) para obter o composto c (1 g, 18 %). O composto c (1 g, 6,37 mmol) e di-t-bocdicarbonato (2,1 g, 9,55 mmol) foram diluídos em THF (20 ml) e H20 (20 ml), e adicionou-se NaHCCh (1,3 g, 15,9 mmol). A mistura de reação foi agitada durante a noite até 0 término. THF foi removido sob pressão reduzida e a camada aquosa foi extraída por EtOAc três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas por 1 N NaOH, NH4CI saturado seguido por salmoura e concentradas até secar. O composto protegido por Boc d (1,39 g, 5,40 mmol) foi agitado com Li0H.H20 (1,14 g, 27 mmol) em THF (20 ml) e H20 (20 ml) durante a noite à temperatura ambiente. THF foi extraído, a camada aquosa foi ajustada até pH = 4 por meio da adição de ácido cítrico a 10 % e extraída por EtOAc três vezes. As camadas orgânicas 91 ΕΡ1778718Β1 combinadas foram lavadas por salmoura e concentradas. 0 produto bruto foi purificado por meio de coluna C-18 de fase reversa eluida por 0 % a 50 % acetonitrilo/tbO para gerar o composto e puro na forma de sólido branco (794 mg). Exemplo 12 procedimento de acoplamento de fluoreto ácido
Uma solução de Boc-MeAla-Chg-Pro-OH (2,3 mmol) e piridina (6,9 pmol) em diclorometano anidro (23 ml) foi arrefecida a 0 °C e adicionou-se fluoreto cianúrico (2,3 mmol) em gotas durante 30 segundos. A mistura foi agitada a 0 °C durante 15 minutos, à temperatura ambiente durante 5 horas e, em seguida, arrefecida com água. A mistura foi extraida por três vezes com diclorometano (total de 100 ml) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre sulfato de sódio anidro. Filtragem e concentração a vácuo geraram o fluoreto ácido de péptido na forma de óleo incolor transparente, utilizado diretamente sem purificação adicional.
Solução do fluoreto ácido bruto (0,50 mmol) e piridina (1,5 mmol) em diclorometano (2,5 ml) foi adicionada à amina sólida (0,50 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente ou a 50 °C (recipiente fechado). A mistura foi vertida em bicarbonato de sódio aquoso e extraida por três vezes com diclorometano (total de 100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas a vácuo. A amida de péptido bruta foi utilizada diretamente sem purificação adicional. 92 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 13 l-fenil-lH-pirazol-5-amina
ΕΡ1778718Β1 HoN
l-Fenil-lH-pirazol-5-amina está disponível comercialmente por meio da TCI America (catálogo n° A0174). Exemplo 14 3-metil-l-fenil-l H-pirazol-5-amina
3-Metil-l-fenil-lH-pirazol-5-amina está disponível comercialmente por meio da TCI America (catálogo n° A1311). Exemplo 15 5-feniltiazol-2,4-diamina
5-Feniltiazol-2,4-diamina está disponível comercialmente por meio da Acros Organics (catálogo n° 11234-0010) .
Exemplo 16 5-(trifluorometil)-4-feniltiofen-3-amina
5-(Trifluorometil)-4-feniltiofen-3-amina está disponível comercialmente por meio da Acros Organics (catálogo n° SEW03133DA).
Exemplo 17 4-fenil-lH-pirazol-3-amina
K
H 4-Fenil-l H-pirazol-3-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em E. L. Anderson et al., J. Med. Chem., 1964, 7,259-268. 93 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 18 5-metil-4-fenil-lH-pirazol-3-amina
H;
H 5-Metil-4-fenil-lH-pirazol-3-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em E. L. Anderson et al., J. Med. Chem.f 1964, 7, 259-268.
Exemplo 19 3-fenil-3H-l,2,3-triazol-4-amina
3-Fenil-3H-l,2,3-triazol-4-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em K. M. Baines, T. W. Rourke, K. Vaughan; J. Org. Chem., 1981, 46, 856-859. Exemplo 20 4-fenilisoxazol-5-amina h2n n 4-Fenilisoxazol-5-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em H. Peeters, W. Vogt; documento EP 43024.
Exemplo 21 3-fenil-lH-pirazol-4-amina
3-Fenil-l H-pirazol-4-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em C. Chen, K. Wilcoxen, J. R. McCarthy; Tetrahedron Lett, 1988, 39, 8229-8232.
Exemplo 22 1-metil-3-fenil-lH-pirazol-4-amina
94 ΕΡ1778718Β1 1-Metil-3-fenil-lH-pirazol-4-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em C. Chen, K. Wilcoxen, J. R. McCarthy; Tetrahedron Lett., 1988, 39, 8229-8232.
Exemplo 23 1-metil-5-fenil-lH-pirazol-4-amina
1-Metil-5-fenil-lH-pirazol-4-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em C. Chen, K. Wilcoxen, J. R. McCarthy; Tetrahedron Lett., 1988, 39, 8229-8232. Exemplo 24 3-metil-4-fenilisoxazol-5-amina
3-Metil-4-fenilisoxazol-5-amina foi acordo com os procedimentos descritos em Vogt; documento EP 43024. Exemplo 25 l-fenil-lH-tetrazol-5-amina preparada H. Peeters, de W.
1-Fenil-l H-tetrazol-3-amina foi preparada de com os procedimentos descritos em R. A. Batey, Powell; Org. Lett., 2000, 2, 3237-3240). Exemplo 26 4-fenil-l,2,5-oxadiazol-3-amina acordo D. A.
HoN
4-Fenil-l,2,5-oxadiazol-3-amina acordo com os procedimentos descritos foi preparada em R. Lakhan, O. de P. 95 ΕΡ1778718Β1
Singh; Ind. J. Chem., 1987, 26B, 690-692. Exemplo 27 l-amino-5-fenil-lH-tetrazol ΕΡ1778718Β1
l-Amino-5-fenil-lH-tetrazol foi preparado de acordo com os procedimentos descritos em T. L. Gilchrist, G. E. Gymer, C. W. Rees; J. Chem. Soc., Perkin Trans; 1, 1975, 1747-1750 .
Exemplo 28 4-amino-3-fenil-4H-l,2,4-triazol
4-amino-3-fenil-4H-l,2,4-triazol foi preparado de acordo com os procedimentos descritos em A. A. Ikizler, N. Yildirim; J. Heterocyclic Chem., 1998, 35, 377-380.
Exemplo 29 3-feniltiofen-2-amina
H; 3-Feniltiofen-2-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em Y. Yoshikawa et ai.; documento EP 737682 (documento US 5747518).
Exemplo 30 2-feniltiofen-3-amina
2-Feniltiofen-3-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em Y. Yoshikawa et ai.; documento EP 737682 (documento US 5747518).
Exemplo 31 4-feniltiofen-3-amina h2n r | 96 3 ΕΡ1778718Β1 ΕΡ1778718Β1 de acordo com os D. Cagniant, P. 443-445. 4-Feniltiofen-3-amina foi preparada procedimentos descritos em G. Kirsch, Cagniant; J. Heterocyclic Chem., 1982,19, Exemplo 32 5-amino-4-feniltiazol-2-tiol h2n
HS 5-Amino-4-feniltiazol-2-tiol foi preparado de acordo com os procedimentos descritos em A. H. Cook, I. Heilbron, A. L. Levy; J. Chem. Soc.r 1947, 1598-1609.
Exemplo 33 2-(metiltio)-4-feniltiazol-5-amina
MeS H; 2-(Metiltio)-4-feniltíazol-5-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em A. H. Cook, I. Heilbron, A. L. Levy; J. Chem. Soc., 1947, 1598-1609. Exemplo 34 5-amino-2-(metilsulfinil)-4-feniltiazol
A 5-amino-2-(metilsulfanil)-4-feniltiazol (305 mg, 1,37 mmol) em ácido acético (3,0 ml), adicionou-se peróxido de hidrogénio aquoso (660 μΐ, 30 % em peso, 6,9 mmol) em gotas à temperatura ambiente. Após quatro horas, a mistura foi repartida entre diclorometano (60 ml) e água (60 ml). A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-(metilsulfinil)-4-feniltiazol puro (285 mg, 87 %). 97 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 35 5-amino-2-(metilsulfonil)-4-feniltiazol
A 5-amino-2-(metilsulfanil)-4-feniltiazol (302 mg, 1,36 mmol) em diclorometano (5,0 ml), adicionou-se porção a porção ácido 3-cloroperbenzóico (638 mg, 77 % em peso, 2,9 mmol) com arrefecimento a 0 °C. A mistura foi diluída com diclorometano (3,0 ml) e, após cinco minutos, mantida em aguecimento à temperatura ambiente. Após três horas, agregou-se porção a porção guantidade adicional de ácido 3-cloroperbenzóico (305 mg, 77 % em peso, 1,4 mmol) . Após vinte horas, a mistura foi tratada com tiossulfato de sódio (2 ml, 1,0 M) , vertida em bicarbonato de sódio aquoso saturado e extraída por três vezes em diclorometano (total de 100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo para gerar espuma castanho escura. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-(metilsulfonil)- 4-feniltiazol puro (90 mg, 26 %).
Exemplo 36 5-amino-2-(aminosulfonil)-4-feniltiazol e 5-amino-4-feniltiazol
5-Amino-2-mercapto-4-feniltiazol (1,01 g, 4,83 mmol) e anidrido ftálico (716 mg, 4,84 mmol) em ácido acético (20 ml) foram aquecidos a 100 °C durante 64 horas e mantidos em arrefecimento. A mistura foi diluída em água fria (150 ml) e o precipitado foi recolhido por meio de filtragem, lavado com água (50 ml) e seco sob alto vácuo (1,46 g, 90 %) . A 98 ΕΡ1778718Β1 de ftalimida é contaminada com pequena quantidade dissulfeto, mas utilizada sem purificação adicional.
2-Mercapto-4-fenil-5-ftalimido-tiazol (203 mg, 600 pmol) em ácido acético (4,5 ml) e água (0,5 ml) a 0 °C foi tratado com N-clorossuccinimida (243 mg, 1,82 mmol) numa parcela. A mistura foi agitada a 0 °C durante 10 minutos, mantida em aquecimento à temperatura ambiente durante uma hora e repartida em seguida entre diclorometano (50 ml) e água (50 ml) . A fase aquosa foi extraída por mais duas vezes com diclorometano (2 x 25 ml) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre sulfato de sódio. Filtragem e concentração a vácuo geraram mistura (231 mg) de 2- (clorossulfonil)-4-fenil-5-ftalimido-tiazol (componente principal) com 4-fenil-5- ftalimido-tiazol (cerca de 2:1), utilizada sem purificação.
A mistura bruta de cloreto de sulfonilo com 4-fenil-5-ftalimido-t iazol (231 mg) em diclorometano (10 ml) foi tratada com amónia em metanol (900 μΐ, 2,0 M) em gotas à temperatura ambiente. Após dez minutos, a mistura foi concentrada a vácuo. O resíduo foi suspenso em etanol (10 ml), tratado com hidrazina etanólica (660 μΐ, 1,0 M, 660 μιτιοί) e aquecido até refluxo. Após uma hora e meia, adicionou-se porção adicional de hidrazina etanólica (660 μΐ, 1,0 M, 660 μιτιοί) e o refluxo prosseguiu por quinze horas. A mistura arrefecida foi filtrada e concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5- amino-2-(aminossulfonil)-4- 99 ΕΡ1778718Β1 feniltiazol puro (56 mg, 36 % para três etapas) e 5- amino-4-feniltiazol (17 mg, 16 % para três etapas).
Exemplo 37 5-amino-2-(terc-butilsulfanil)-4-feniltiazol
A uma suspensão de 5-amino-2-mercapto-4-feniltiazol (210 mg, 1,01 mmol) em água (1,0 ml) e terc-butanol (82 mg, 1,1 mmol), adicionou-se ácido sulfúrico concentrado (3,0 ml) com arrefecimento até cerca de 20 °C. Após uma hora e meia à temperatura ambiente, adicionou-se uma porção adicional de terc-butanol em água (300 μΐ, 1,0 M, 300 μπιοί) . Após uma hora e meia, a mistura foi vertida em bicarbonato de sódio aquoso em excesso e extraída por três vezes com diclorometano (total de 120 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5- amino-2-(terc-butilsulfanil)-4- feniltiazol (220 mg, 82 %).
Exemplo 38 5-amino-2-(terc-butilsulfinil)-4-feniltiazol
A 5-amino-2-(terc-butilsulfanil)-4-feniltiazol (102 mg, 385 pmol) em ácido acético (5,0 ml), adicionou-se peróxido de hidrogénio aquoso (218 μΐ, 30 % em peso, 1,9 mmol) em gotas à temperatura ambiente. Após cinco horas, a mistura foi repartida entre diclorometano (50 ml) e água (50 ml). A fase aquosa foi separada e extraída com diclorometano (20 ml) . As fases orgânicas combinadas foram 100 ΕΡ1778718Β1 lavadas com bicarbonato de sódio aquoso saturado, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para gerar 5-amino-2-(terc-butilsulfinil)-4-feniltiazol essencialmente puro (110 mg, quant.).
Uma suspensão de 5-amino-2-mercapto-4-feniltíazol (503 mg, 2,41 mmol) em ácido acético (5,0 ml) foi tratada com hexano-2,5-diona (290 μΐ, 2,47 mmol) à temperatura ambiente por catorze horas e, em seguida, aquecida até refluxo durante 3 horas. A mistura tornou-se homogénea sob refluxo e, mediante arrefecimento, depositou precipitado que foi recuperado por meio de filtragem, lavado com ácido acético (3 x 1,0 ml) e seco a vácuo para gerar o pirrolidino-tiazol puro (624 mg, 90 %) na forma de sólido microcristalino amarelo brilhante.
Uma solução do mercapto-tiazol (201 mg, 701 μπιοί) e carbonato de potássio (291 mg, 2,11 mmol) em DMF (2,0 ml) foi saturada com iodeto de trif luorometilo por meio de borbulhamento por cinco minutos e o recipiente foi vedado e aquecido a 50 °C durante 30 minutos. A mistura arrefecida foi novamente saturada com iodeto de trifluorometilo e aquecida a 100 °C durante uma hora e meia. A mistura foi saturada mais uma vez com iodeto de trifluorometilo, retornou para 100 °C (total de 24 horas) e mantida em arrefecimento. A mistura foi vertida em água e extraida por 101 ΕΡ1778718Β1 três vezes em acetato de etilo (total de 100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou o (trifluorometilsulfanil)-tiazol puro (72 mg, 29 %) na forma de filme cristalino incolor. ΕΡ1778718Β1
Uma suspensão do tiazol (72 mg) e cloridrato de hidroxilamina (71 mg, 1,0 mmol) em etanol (5,0 ml) foi aquecida até refluxo por 17 horas, diluída com ácido acético (3 ml) , mantida em refluxo durante 2 horas adicionais e concentrada até cerca de 3 ml. A mistura arrefecida foi tratada com hidroxilamina aquosa (1,0 ml, 50 % em peso) e retornou para refluxo por 42 horas. A mistura foi tratada com água (50 ml) e bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 ml) e extraída por três vezes em diclorometano (total de 100 ml) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Cromatografia de flash sobre silica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-4-fenil-2- (trifluorometilsulfanil)tiazol puro (12,5 mg, 22
Exemplo 40 5-amino-4-fenil-2-(trifluorometil)tiazol
g, 13,3 mmol) em metanol trifluoroacetato de etilo α-Aminofenilacetamida (2,00 (50 ml) a 0 °C foi tratada com 102 ΕΡ1778718Β1 (3,2 ml, 27 mmol) durante 30 minutos e mantida em aquecimento à temperatura ambiente por dezoito horas. A mistura foi concentrada a vácuo, tornada homogénea com metanol e foi novamente concentrada para gerar a trifluoroacetamida pura (3,27 g, quant.).
ΕΡ1778718Β1 O
A trifluoroacetamida (881 mg, 3,58 mmol) e reagente de Lawesson (1,45 g, 3,59 mmol) foram tratadas junto com piridina anidra (7,2 mi) e a mistura foi aquecida até 100 °C por vinte horas. A mistura arrefecida foi vertida em bicarbonato de sódio aquoso saturado e extraída por três vezes em clorofórmio (total de 120 ml) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água contendo um décimo em volume de bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura e secas sobre sulfato de sódio. Filtragem e concentração a vácuo gerou óleo castanho avermelhado (829 mg). O bruto foi tratado com hidróxido de sódio aquoso (25 ml, 1, 0 N) durante 15 minutos e extraído por três vezes em diclorometano (total de 100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com hidróxido de sódio aquoso (25 ml, 1,0 N) e salmoura, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5- amino-4-fenil-2-(trifluorometil)tiazol puro (65 mg, 7,5 %). Exemplo 41 3-amino-4-fenil-l,2,5-tiadiazol
A uma solução de monocloreto de enxofre (24,0 g, 178 mmol) em DMF (30 ml) a 0 °C, adicionou-se cloridrato de a- 103 ΕΡ1778718Β1 aminofenilacetonitrilo (10,0 g, 59,3 mmol) porção a porção durante 20 minutos. Após quarenta minutos, a mistura foi mantida em aquecimento à temperatura ambiente durante 20 minutos, diluida com DMF (20 ml) e agitada por vinte horas adicionais antes do despejamento em água com gelo. A mistura foi extraída com éter (200 ml), filtrada e extraída por mais duas vezes com éter (2 x 50 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo para gerar 3- cloro-4-fenil-l,2,5-tiadiazol na forma de óleo laranja móvel (10,1 g, 87 %). Destilação a passos curtos deste óleo (9,35 g) sob pressão reduzida gerou óleo incolor transparente (7,75 g, 83 %) que se cristalizou em repouso.
H 3-Cloro-4-fenil-1,2,5-tiadiazol (3,19 g, 16,2 mmol) em THF (32 ml) a 0 °C foi tratado em gotas com solução de bis(trimetilsilil)amida de lítio em THF (17,0 ml, 1,0 M, 17,0 mmol) . Após dez minutos, a mistura foi mantida em aquecimento à temperatura ambiente durante uma hora e meia, tratada com ácido clorídrico a 1 N e extraída por três vezes em éter (total de 300 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (50 ml) e trietilamina (0,5 ml) foi aquecida até refluxo por quinze horas e novamente concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 3- amino-4-fenil-l,2,5-tiadiazol (1,96 g, 68 %) na forma de sólido incolor. 104 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 42 5-amino-2-metil-4-feniltiazol
nh2 .hci
Cr" A uma suspensão de cloridrato de a-aminofenilacetonitrilo (3,37 g, 20,0 mmol) e enxofre em pó (641 mg, 20,0 mmol) em etanol (20 ml) a 0 °C, adicionou-se trietilamina (4,18 ml, 30,0 mmol) e, em seguida, acetaldeído (2,3 ml, 41 mmol). O recipiente foi vedado e aquecido a 60-70 °C durante uma hora. A mistura arrefecida foi filtrada e concentrada a vácuo e o resíduo foi tratado com etanol (20 ml) e ácido clorídrico (20 ml, 1 N) por quinze horas. A mistura foi tratada com carbonato de sódio aquoso e extraída por três vezes em acetato de etilo (total de 300 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo para gerar um óleo castanho escuro. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-metil-4-feniltiazol (1,31 g, 34 %) , que se cristalizou a partir de tolueno.
Exemplo 43 5-amino-2-metil-4-feniltiazol
Uma suspensão de cloridrato de a- aminofenilacetonitrilo (1,69 g, 10.0 mmol), enxofre em pó (321 mg, 10,0 mmol) e 4-piridinocarboxaldeído (1,91 ml, 20,0 mmol) em etanol (10 ml) foi tratada com trietilamina (2,09 ml, 15,0 mmol) e a mistura foi agitada a 50 °C por oitenta minutos. A mistura arrefecida foi diluída com etanol (5 ml) e tratada com hidroxilamina aquosa (700 μΐ, 105 ΕΡ1778718Β1 50 % em peso, 11 mmol) à temperatura ambiente por quinze horas e diluída com diclorometano (50 ml) . Adicionou-se bicarbonato de sódio aquoso saturado e a fase aquosa separada foi extraída duas vezes mais com diclorometano (total de 100 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo para gerar espuma oleosa castanho escura (3,23 g) . Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-(4-piridil)-4-feniltiazol (1,41 g, 56 %) .
Exemplo 44 2,4-difeniltiazol-5-amina
2,4-Difeniltiazol-5-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em K. Gewald, H. Schonfelder, U. Hain; J. Prakt. Chem., 1974, 361, 299-303.
Exemplo 45 4-fenil-2-(piridin-2-il)tiazol-5-amina
4-Fenil-2-(piridin-2-il)tiazol-5-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em K. Gewald, H. Schonfelder, U. Hain; J. Prakt. Chem., 1974, 361, 299-303 Exemplo 46 4-fenil-2-(piridin-3-il)tiazol-5-amina
4-Fenil-2-(piridin-3-il)tiazol-5-amina foi preparada de acordo com os procedimentos descritos em K. Gewald, H. 106 ΕΡ1778718Β1
Schonfelder, U. Hain; J. Prakt. Chem., 1974, 361, 299-303. Exemplo 47 5-amino-2-(Fmoc-amino)-4-feniltiazol
NH2 .HCt CT*
Uma suspensão de cloridrato de a- aminofenilacetonitrilo (3,19 g, 18,9 mmol) e isotiocianato de Fmoc (5,31 g, 18,9 mmol) em DCM foi tratada com etildiisopropilamina (3,62 ml, 20,8 mmol) a 0 °C durante uma hora e, em seguida, à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi vertida em bicarbonato de sódio aguoso saturado e extraída por três vezes em acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-(Fmoc-amino)-4- feniltiazol (3,75 mg, 48 %).
Exemplo 48 N-(5-amino-4-feniltiazol-2-il)acetamida s.
AcHN N-(5-Amino-4-feniltiazol-2-il)acetamida foi preparada de acordo com procedimentos similares aos descritos no Exemplo 47.
Exemplo 49 N- (5-amino-4-feniltiazol-2-il)benzamida
N—(5—Amino—4—feniltiazol—2—il)benzamida foi preparada de acordo com procedimentos similares aos descritos no 107 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 47.
Exemplo 50 5-amino-4-feniltiazol-2-ilcarbamato de etilo
5-Amino-4-feniltiazol-2-ilcarbamato de etilo foi preparado de acordo com procedimentos similares aos descritos no Exemplo 47.
Exemplo 51 N- (5-amino-4-(2-clorofenil)tiazol-2-il)acetamida
AcHN N-(5-Amino-4-(2-clorofenil)tiazol-2-il)acetamida foi preparada de acordo com procedimentos similares aos descritos no Exemplo 47.
Exemplo 52 5-amino-4-(2-clorofenil)tiazol-2-ilcarbamato de (9H-fluoren-9-il)metilo
FmocHN 5-Amino-4-(2-clorofenil)tiazol-2-ilcarbamato de (9H-fluoren-9- il)metilo foi preparado de acordo com procedimentos similares aos descritos no Exemplo 47. 108 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 53 5-amino-2-(1-imidazolil)-4-feniltiazol ΕΡ1778718Β1 Uma
CN nh2 .hci
suspensão de cloridrato de a- aminofenilacetonitrilo (5,01 g, 29,7 mmol) e tiocarbonil dumidazol (5,30 g, 29,7 mmol) em DCM (100 ml) foi tratada com etildiisopropilamina (5,69 ml, 32,7 mmol) a 0 °C durante 15 minutos e, em seguida, à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi vertida em bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 ml) e água (150 ml) e extraída por três vezes em diclorometano (total de 300 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo para gerar um óleo castanho escuro (8,18 g) . Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-(1-imidazolil)-4-feniltiazol (2,47 g, 34 %) .
Exemplo 54 amida do péptido MeAla-Chg-Pro de 2,5-diamino-4-feniltiazol
FítocHN 5-Amino-2-(Fmoc-amino)-4-feniltiazol (250 mg, 605 pmol) foi tratado com o fluoreto ácido (730 ymol; derivado de Boc-MeAla-Chg-Pro-OH conforme descrito anteriormente) e piridina (147 μΐ, 1,82 mmol) em diclorometano (2,0 ml) à temperatura ambiente por seis dias. A mistura foi vertida em bicarbonato de sódio aquoso saturado e extraída por três vezes em diclorometano (total de 100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas 109 ΕΡ1778718Β1 sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo para gerar a amida de péptido bruta na forma de óleo amarelo (525 mg), utilizado em seguida sem purificação. ΕΡ1778718Β1
A amida de péptido bruta em DMF (9,0 ml) foi tratada com piperidina (1,0 ml) à temperatura ambiente durante 20 minutos e concentrada em seguida a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou a amida de péptido 2,5-diamino-4-feniltiazol (228 mg, 61 % para duas etapas).
A amida de péptido bruta diclorometano (2,0 ml) foi tratada com ácido trifluoroacético (2,0 ml) à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi concentrada a vácuo, homogeneizada com diclorometano e novamente concentrada. O resíduo foi purificado por meio de HPLC de fase reversa preparativa (acetonitrilo/água) para gerar o sal de ácido trifluoroacético de amida de péptido desprotegido (42 mg, 73 %) na forma de sólido amorfo branco. 110 ΕΡ1778718Β1 Exemplo 55 amida do péptido MeAla-Chg-Pro de 2,5-diamino-4-(3-clorofenil)tiazol
Amida de péptido MeAla-Chg-Pro de 2,5-diamino-4-(3-clorofenil)tiazol foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 55.
Exemplo 56 amida de MeAla-Chg-Pro de 5-amino-2-(pivaloilamino)-4-feniltiazol
o 0 Boc-péptido amino-tiazol (48 mg, 78 μιτιοί) e etildiisopropilamina (140 μΐ, 0,80 mmol) em diclorometano (2,0 ml) foram tratados com cloreto de pivaloilo (50 μΐ, 0,40 mmol) à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, com bicarbonato de sódio aquoso saturado e extraído por três vezes em diclorometano (total de 60 ml) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo. O óleo bruto foi tratado com ácido trifluoroacético (5,0 ml) em diclorometano (5,0 ml) à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi concentrada a vácuo, homogeneizada com diclorometano e novamente concentrada. O resíduo foi dissolvido em ácido acético aquoso (50 %) para purificação por meio de HPLC de fase reversa preparativa (acetonitrilo/água) para gerar o sal de ácido trifluoroacético de amida de péptido puro (38 mg, 68 % para duas etapas) na forma de sólido amorfo branco. 111 ΕΡ1778718Β1 Exemplo 57 amida de MeAla-Chg-Pro de 5-amino-2-(pivaloilamino)-4-feniltiazol
scywe 0 Boc-péptido amino-tiazol (38 mg, 62 pmol) e etildusopropilamina (107 μΐ, 0,61 mmol) em diclorometano (2,0 ml) foram tratados com cloreto de metanossulfonilo (24 μΐ, 0,31 mmol) à temperatura ambiente durante 20 minutos e, em seguida, com bicarbonato de sódio aquoso saturado e extraído por três vezes em diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo. O óleo bruto foi tratado com ácido trif luoroacético (4 ml) em diclorometano (4 ml) à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi concentrada a vácuo, homogeneizada com diclorometano e novamente concentrada. O resíduo foi dissolvido em ácido acético aquoso (50 %) para purificação por meio de HPLC de fase reversa preparativa (acetonitrilo/água) para gerar o sal de ácido trifluoroacético de amida de péptido puro (11 mg, 23 % para duas etapas) na forma de sólido amorfo branco.
Exemplo 57 2-(acetilamino)-4-amino-5-feniltiazol
Br
AcHN α-Bromofenilacetonitrilo (1,08 g, 5,48 mmol) em etanol (10 ml) foi tratada com N-acetiltioureia (649 mg, 5,49 mmol) à temperatura ambiente por quatro horas e aquecida em seguida até refluxo durante 3 horas e meia. A mistura arrefecida foi concentrada a vácuo e repartida em seguida 112 ΕΡ1778718Β1 entre diclorometano e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 2-(acetilamino)-4-amino-5-feniltiazol (295 mg, 23 %) .
Exemplo 58 2,5-difeniltiazol-4-amina
2,5-Difeniltiazol-4-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 57.
Exemplo 59 5-fenil-2-(pirazin-2-il)tiazol-4-amina
5-Fenil-2-(pirazin-2-il)tiazol-4-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 57. Exemplo 60 5-amino-l-(3'-nitrofenil)pirazol
Cloridrato de 3-nitrofenil-hidrazina (7,03 g, 36,3 mmol), diisopropiletilamina (9,5 ml, 54,5 mmol) e etanol (60 ml) foram agitados sob azoto à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se etoximetilenomalononitrilo (4,52 g, 36,3 mmol), após o quê a reação foi mantida em refluxo durante uma hora. A reação foi arrefecida à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida até a queda do precipitado. O sólido foi filtrado para gerar 6,54 g do produto ciclizado (rendimento de 78 113
ΕΡ1778718Β1 NC
N02
N02 5-Amino-l-(3'-nitrofenil)-4-cianopirazol (559 mg, 2,44 mmol) e ácido fosfórico (86 %, 6 ml) sofreram refluxo a 170 °C por quinze horas. A reação foi arrefecida à temperatura ambiente e neutralizada com hidróxido de amónio. Os orgânicos foram extraídos por três vezes com dietil éter (total de 40 ml), lavados com salmoura e secos sobre sulfato de magnésio. A remoção de solvente gerou 5-amino-l-(3' -nitrofenil)-pirazol na forma de pó amarelo (398 mg, rendimento de 80 %).
Exemplo 61 1-(2-fluorofenil)-lH-pirazol-5-amina
1-(2-Fluorofenil)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60. Exemplo 62 1-(3-clorofenil)-lH-pirazol-5-amina
1-(3-Clorofenil)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60. Exemplo 63 1- (3 — fluorofenil)-lH-pirazol-5-amina
1-(3-fluorofenil)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60. 114 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 64 1-(3-bromofenil)-lH-pirazol-5-amina
HoN 1-(3-Bromofenil)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60. Exemplo 65 1-(3-triclorometilfenil)-lH-pirazol-5-amina n η*ν
C 1-(3-Triclorometilfenil)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60.
Exemplo 66 1-(piridin-2-il)-lH-pirazol-5-amina
jQ 1-(Piridin-2-il)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60. Exemplo 67 1-(3-metoxifenil)-lH-pirazol-5-amina
/tf \^N
H,N
'OMe 1-(3-metoxifenil)-lH-pirazol-5-amina foi isolada após a decianação de 5-amino-4-ciano-l-(3'-metoxifenil) pirazol no Exemplo 60.
Exemplo 67 1-(3-hidroxifenil)-lH-pirazol-5-amina
HoN 1-(3-Hidroxifenil)-lH-pirazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 60. 115 ΕΡ1778718Β1 Exemplo 68 4-amino-5-fenil-l,2,3-tiadiazol
Ç02Et NH co2h Ácido fenilpirúvico (25 g, 149 mmol) e carbazato de etilo (16 g, 149 mmol) foram mantidos em refluxo em benzeno (225 ml) durante 2 horas e a mistura foi concentrada a vácuo. 0 bruto foi dissolvido em diclorometano guente mínimo para gerar a hidrazona na forma de precipitado amarelo mediante arrefecimento à temperatura ambiente, isolado por meio de filtração (30,4 g, 81 %) e utilizado sem purificação adicional. COgEt
C02Et .NH 0O2Me
Diazometano foi gerado por meio da adição de solução de Diazald (JV-met il-iV-nitroso-p-toluenossulf onamida; 18,6 g, 86,9 mmol) em dietil éter (180 ml) a uma solução de hidróxido de potássio (18,2 g, 325 mmol) em água (37 ml) e 2-(2-etoxietoxi) -etanol (37 ml) a 65 °C, em gotas por 45 minutos. A destilação produziu desta forma solução etérea de diazometano que foi adicionada diretamente a solução agitada da hidrazona (10,9 g, 43,5 mmol) em metanol (150 ml) a 0 °C. O sistema foi enxaguado com dietil éter em excesso até que o destilado se tornasse transparente, a mistura foi tratada com ácido acético (1 ml) e concentrada a vácuo. O óleo resultante foi repartido entre acetato de etilo (200 ml) e bicarbonato de sódio (200 ml) e a fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio. Filtragem e concentração a vácuo gerou o metil éster na forma de sólido amarelo (10,2 g, 89 %) . 116 ΕΡ1778718Β1
C02Et NH COgMe
K
N 0 hidrazona-metil éster (10,2 g, 38,6 mmol) foi tratado com cloreto de tionilo (25 ml, 343 mmol) à temperatura ambiente durante 24 horas e a mistura foi concentrada a vácuo. Cristalização a partir de hexanos gerou o tiadiazol-metil éster (4,81 g, 56 %).
O tiadiazol-metil éster (2,79 g, 12,7 mmol) foi tratado com hidrato de hidrazina (1,09 ml, 93,9 mmol) em metanol (50 ml) à temperatura ambiente durante 24 horas e o precipitado branco resultante foi recuperado por meio de filtragem. Recristalização a partir de isopropanol gerou a tiadiazol-hidrazida (3,99 g, 83 %).
N A tiadiazol-hidrazida (3,99 g, 18,1 mmol) em água (40 ml) e ácido clorídrico concentrado (1,8 ml, 21,9 mmol) foram tratados em gotas com uma solução de nitrito de sódio (1,52 g, 21,3 mmol) em água (15 ml) a 0 °C durante 2 horas. O precipitado resultante foi recuperado por meio de filtragem para gerar o tiadiazol-azida ácida na forma de sólido esbranquiçado (3,95 g, 94 %) .
117 ΕΡ1778718Β1
De acordo com os procedimentos descritos em K. Masuda et al.; Chem. Pharm. Buli., 1981, 29, 1743-1747, a tiadiazol-azida ácida (3,95 g, 17,1 mmol) encontrava-se em refluxo em etanol (40 ml) por 45 minutos e a mistura foi concentrada a vácuo. Cristalização a partir de benzeno gerou o carbamato de etilo (3,37 g, 74 %) .
O carbamato de etilo (399 mg, 1,60 mmol) e brometo de hidrogénio em ácido acético (3 ml, 30 % em peso) foram aquecidos em recipiente vedado a 80 °C por dezoito horas. A mistura arrefecida foi repartida entre acetato de etilo (15 ml) e água (15 ml) e a camada orgânica concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 4-amino-5-fenil-l,2,3-tiadiazol (136 mg, 49 %).
Exemplo 69 4-amino-5-fenilisoxazol
mmol) e cloreto de tionilo (1,71 ml, 23,6 mmol) foram aquecidos sob refluxo durante 3 horas e a mistura concentrada a vácuo para gerar o cloreto ácido que foi utilizado sem purificação.
O cloreto ácido bruto em acetona (7 ml) foi tratado com uma solução de azida de sódio (165 mg, 2, 62 mmol) em água (2 ml) a 0 °C durante uma hora e meia, mantido em aquecimento à temperatura ambiente e concentrado a vácuo. 0 118 ΕΡ1778718Β1 sólido branco resultante foi lavado com água, seco a vácuo e utilizado sem purificação.
N3OC I Me°2C'NH A azida ácida (409 mg, 1,91 mmol) foi aquecida sob refluxo em metanol durante 6 horas e a mistura concentrada a vácuo para gerar o carbamato de metilo na forma de sólido branco, utilizado sem purificação.
MeOgC-^jH com ácido bromidrico (13 ml, 48 % em peso, 115 mmol) , homogeneizado com ácido acético (2 ml) , aquecido a 65 °C por 48 horas e mantido em arrefecimento. A mistura foi neutralizada com hidróxido de sódio aquoso e extraída com acetato de etilo (2 x 125 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo para gerar 4-amino-5-fenilisoxazol na forma de sólido branco (193 mg, 70 %) .
Exemplo 70 Síntese de 5-alquil-2-amino-3-feniltiofenos
nrcN
Cianeto de benzilo (2,33 ml, 20 mmol) foi tratado com base de Verkade (2,8,9-trimetil-2,5,8,9-tetraaza-l-fosfabiciclo[3.3.3]undecano; 441 mg, 2,0 mmol) e 3,3-dimetilbutiraldeído (2,64 ml, 200 mmol) em metanol (4 ml) e a mistura aquecida em recipiente vedado a 45 °C durante 16 horas. A mistura arrefecida foi concentrada a vácuo para gerar a nitrilo insaturada na forma de óleo incolor, utilizado sem purificação. 119 ΕΡ1778718Β1
A nitrilo (10,0 mmol), carbonato de potássio (2,34 g, 23,4 mmol) e enxofre em pó (330 mg, 10,3 mmol) em etanol (2 ml) foram aquecidos em recipiente vedado a 160 °C durante 24 horas. A mistura arrefecida foi diluida com água, extraída por duas vezes em dietil éter e os orgânicos combinados concentrados a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 5-amino-2-terc-butil-4-feniltiazol (75 %).
Exemplo 71 5-metil-3-feniltiofen-2-amina
utilizando 5-Metil-3-feniltiofen-2-amina foi preparada os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 70. Exemplo 72 5-isopropil-3-feniltiofen-2-amina
HaN
5-isopropil-3-feniltiofen-2-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 70. Exemplo 73 2-amino-5-cloro-3-feniltiofeno
2-Amino-3-fenil-tiofeno (12,0 mmol) em THF (7 mmol) foi tratado com dicarbonato de di-terc-butilo (2,97 g, 13,3 mmol) e diisopropiletilamina (3,15 ml, 18,1 mmol) à temperatura ambiente por sessenta horas e a mistura foi 120 ΕΡ1778718Β1 concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 2-(JV-Boc-amino) -3-fenil-tiofeno (1,98 g, 59 %). ΕΡ1778718Β1
A 2-(JV-Boc-amino) -3-fenil-tiofeno (89 mg, 0,32 mmol) em diclorometano (4 ml) a 0 °C, adicionou-se lentamente AZ-clorossuccinimida (48 mg, 0,36 mmol) e manteve-se a mistura em aquecimento à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi diluída com diclorometano, lavada com água e a fase orgânica foi concentrada a vácuo. Cromatografia de flash sobre silica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 2-(JV-Boc-amino) -5-cloro-3- fenil-tiofeno (66 mg, 66 %) .
2-(H-Boc-amino)-5-cloro-3-fenil-tiofeno (66 mg, 0,21 mmol) foi tratado com ácido trif luoroacét ico (1 ml) em diclorometano (3 ml) à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com DMF (1 ml) e os materiais mais voláteis foram removidos sob pressão reduzida. A solução em DMF resultante de 2-amino-5-cloro-3-feniltiofeno foi utilizada na etapa de acoplamento subsequente sem purificação adicional.
Exemplo 74 l-Metil-4-(metilamino)-3-fenilpirazol
A 1-metil-4-amino-3-fenilpirazol (572 mg, 3,30 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (799 mg, 3, 66 mmol) em THF 121 ΕΡ1778718Β1 (10 ml) e água (3 ml) , adicionou-se bicarbonato de sódio aquoso saturado em gotas (3 ml, 1,2 M, 3,6 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por sete horas, vertida em seguida em ácido cítrico aquoso (0,5 M) e extraída por três vezes em éter (total de 100 ml) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio aquoso e salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo para gerar o carbamato bruto na forma de óleo castanho (920 mg), utilizado em seguida sem purificação.
Uma suspensão de hidreto de sódio em óleo mineral (327 mg, 60 % em peso, 8,18 mmol) foi lavada com THF (2x5 ml) e suspensa em THF (3,0 ml) a 0 °C. A este, adicionou-se em gotas o pirazol (744 mg, 2,72 mmol) em THF (5,0 ml) e, após quinze minutos, iodeto de metilo (187 μΐ, 3,00 mmol).
Após trinta minutos adicionais a 0 °C, a mistura foi mantida em aquecimento à temperatura ambiente por dezoito horas e tratada em seguida com cloreto de amónio aquoso saturado e água suficiente para dissolver os sólidos. A mistura foi extraída por três vezes em éter (total de 120 ml) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo para gerar carbamato de N-metilo bruto na forma de óleo âmbar (750 mg, 96 %), utilizado sem purificação.
O carbamato de N-metilo bruto em DCM (1,0 ml) foi tratado com ácido trifluoroacético (1,0 ml) à temperatura ambiente por quarenta minutos. A mistura foi concentrada a vácuo, homogeneizada com diclorometano e novamente 122 ΕΡ1778718Β1 concentrada para gerar o l-metil-4-(metilamino)-3-fenilpirazol essencialmente puro (150 mg, quant.) na forma de óleo castanho.
Exemplo 75 N-metil-4-fenil-1,2,3-tiadiazol-5-amina
N-metil-4-fenil-l,2,3-tiadiazol-5-amina foi preparada utilizando os mesmos procedimentos descritos no Exemplo 74. Exemplo 76 l-terc-Butil-4-amino-3-fenilpirazol e 1-terc-butil-4-amino-5-fenilpirazol
Uma solução de 2-bromoacetofenona (30,0 g, 151 mmol) em DMF (120 ml) foi tratada com ftalimida de potássio (30,8 g, 166 mmol) porção a porção à temperatura ambiente e aquecida em seguida a 40 °C durante 3 horas e meia. A mistura arrefecida foi vertida em água (600 ml) e extraída com clorofórmio (300 ml, depois 100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com hidróxido de sódio (200 ml, 0,2 N) , água (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml), secas sobre sulfato de magnésio e concentradas a vácuo. O sólido creme resultante foi suspenso em éter (100 ml), recuperado por meio de filtragem, lavado com éter (100 ml) e seco a vácuo para gerar 2- ftalimido-acetofenona pura na forma de sólido branco (34,3 g, 86 %). o O nm©2 NPhth
De acordo com os procedimentos descritos em C. Chen, K. Wilcoxen, J. R. McCarthy; Tetrahedron Lett., 1988, 39, 8229-8232, uma suspensão de 2-ftalimidoacetofenona (13,3 g, 123 ΕΡ1778718Β1 50,0 mmol) em dimetilformamida dimetil acetal (26,7 ml, 200 mmol) foi aquecida sob refluxo durante 28 horas e concentrada a vácuo. O óleo âmbar resultante foi cristalizado a partir de isopropanol (100 ml) e lavado com isopropanol (2x5 ml) para gerar 3- (dimetilamino)-1-fenil-2-ftalimido-2-propen-l-ona na forma de agulhas amarelas (13,7 g, 85 %) .
Uma mistura de 3-(dimetilamino)-l-fenil-2-ftalimido-2-propen-1- ona (3,00 g, 9,38 mmol) e hidrazino cloridrato de terc-butilo (1,29 g, 10,3 mmol) em etanol (94 ml) e água (9,4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 64 horas e aquecida em seguida até refluxo durante 24 horas. A mistura arrefecida foi tratada com hidrazina (590 μΐ, 18,8 mmol) e retornou para refluxo durante 75 minutos. Mediante arrefecimento e repouso à temperatura ambiente, formou-se precipitado. A mistura foi filtrada, o sólido lavado com mistura de etanol (5 ml) e água (0,5 ml) e o filtrado foi concentrado a vácuo. O residuo foi repartido entre éter (250 ml) e bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 ml) diluído com água (100 ml) e a fase aquosa foi extraída duas vezes mais com éter (2 x 50 ml) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio e concentradas a vácuo para gerar um sólido claro (1,92 g). Cromatografia de flash sobre sílica gel (acetato de etilo/hexanos) gerou 1-terc- butil-4-amino-3-fenilpirazol (1,52 g, 75 % para duas etapas) e 1-terc-butil-4- amino-5-fenilpirazol (114 mg, 6 % para duas etapas). 124 ΕΡ1778718Β1
Exemplo 77 1-(2,2,2-trifluoroetil)-3-fenil-lH-pirazol-4- amina e 1-(2,2,2-trifluoroetil)-5-fenil-lH-pirazol-4-amina
1-(2,2,2-trifluoroetil)-3-fenil-l H-pirazol-4-amina e 1-(2,2,2-trifluoroetil)-5- fenil-1 H- pirazol-4-amina foram preparados de forma similar a partir de 2,2,2-trifluoretil hidrazina de acordo com os procedimentos descritos no Exemplo 76.
Exemplo 78 testes de inibição de IAP
Nas experiências a seguir, utilizou-se um domínio BIR quimérico denominado MLXBIR3SG, no qual onze dentre 110 resíduos correspondem aos encontrados em XIAP-BIR3, enquanto os restantes correspondem a ML- IAP-BIR. Demonstrou-se que a proteína quimérica MLXBIR3SG se liga a e inibe a caspase 9 significativamente melhor que qualquer dos domínios BIR nativos, mas uniu péptidos com base em Smac e Smac maduro com afinidades similares às de ML-IAP-BIR nativo. A inibição aprimorada de caspase 9 do domínio BIR quimérico MLXBIR3SG correlacionou-se com o aumento da inibição da apoptose induzida por doxorubicina quando transfectada em células MCF7.
Sequência MLXBIR3SG: MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLETEEEEEEGAGATLSRGPAFPGMGSEELR LASFYDWPLTAEVPPELLAAAGFFHTGHQDKVRCFFCYGGLQSWKRGDDPW TEHAKWFPGCQFLLRSKGQEYINNIHLTHSL (SEQ ID N° 1)
Teste de Ligação de Péptidos TR-FRET
Foram realizadas experiências de competição de Transferência de Energia por Ressonância de Fluorescência Resolvida no Tempo no Leitor Contador Multimarcado Wallac Victor2 (Perkin Elmer Life e Analytical Sciences, Inc.) de 125 ΕΡ1778718Β1 acordo com os procedimentos de Kolb et al.r (Journal of Biomolecular Screening, 1996, 1 (4) : 203) . Coquetel de reagentes contendo 300 nM de MLXBIR3SG his-marcado; 200 nM de péptido SMAC biotinilado (AVPI); 5 pg/ml de aloficocianina anti-his (XL665) (CISBio International); e 200 ng/ml de estreptavidin-európio (Perkin Elmer) foram preparados em tampão de reagente (50 mM de Tris (pH 7,2), 120 mM de NaCl, 0,1 % globulinas bovinas, 5 mM de DTT e 0,05 % de octilglicósido) (alternativamente, este coquetel pode ser fabricado utilizando anti-His marcado com európio (Perkin Elmer) e estreptavidina-aloficocianina (Perkin Elmer) sob concentrações de 6,5 nM e 25 nM, respetivamente). O coquetel de reagente foi incubado à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a incubação, o coquetel foi adicionado a diluições em série 1:3 de composto antagonista (concentração inicial de 50 μΜ) em placas FIA pretas com 384 cavidades (Greiner Bio-One, Inc.). Após incubação por noventa minutos à temperatura ambiente, a fluorescência foi lida com filtros para excitação de európio (340 nm) e para os comprimentos de onda de emissão de európio (615 nm) e alof icocianina (665 nm) . Os dados de antagonistas foram calculados na forma de razão entre o sinal de emissão de aloficocianina a 665 nm e o da emissão de európio a 615 nm (estas razões foram multiplicadas por fator de 10.000 para facilidade de manipulação de dados). Os valores resultantes foram plotados em função da concentração de antagonista e enquadrados em equação de quatro parâmetros utilizando software Kaleidograph (Synergy Software, Reading PA) . As indicações da potência do antagonista foram determinadas a partir dos valores IC50. Concluiu-se que os compostos de acordo com a presente invenção possuem atividade inibidora de IAP que foi demonstrada neste teste. 126 ΕΡ1778718Β1
Teste de Ligação de Péptidos de Polarização por Fluorescência
Foram realizadas experiências de polarização em Analisador HT 96- 384 (Molecular Devices Corp.) de acordo com o procedimento de Keating, S. M., Marsters, J., Beresini, M., Ladner, C., Zioncheck, K., Clark, K., Arellano, F. e Bodary, S. (2000) em Proceedings of SPIE: In Vitro Diagnostic Instrumentation (Cohn, G. E., Ed.), págs. 128-137, Bellingham WA. Amostras para medições da afinidade de polarização de fluorescência foram preparadas por meio da adição de diluições em série 1:2 a partir de concentração final de 5 μΜ de MLXBIR3SG em tampão de polarização (50 mM de Tris (pH 7,2), 120 mM de NaCl, 1 % globulinas bovinas, 5 mM de DTT e 0,05 % de octilglicósido) a AVPdi-Phe-NFfe conjugado a 5- carboxifluorescema (AVP-diPhe-FAM) em concentração final de 5 nM.
OH
As reações foram lidas após tempo de incubação de dez minutos à temperatura ambiente com filtros de corte padrão para a fluoresceina fluoroforo (Àex = 485 nm; Àem = 530 nm) em placas HE96 pretas de 96 cavidades (Molecular Devices Corp.). Os valores de fluorescência foram plotados em função da concentração de proteina e os IC50s foram obtidos por meio de enquadramento dos dados em equação de quatro parâmetros utilizando software Kaleidograph (Synergy Software, Reading PA) . Experiências de competição foram realizadas por meio da adição do MLXBIR3SG a 30 nM a 127 ΕΡ1778718Β1 cavidades que contêm 5 nM da sonda AVP- diPhe-FAM, bem como diluições em série 1:3 de compostos antagonistas a partir de concentração de 300 μΜ no tampão de polarização. As amostras foram lidas após incubação durante 10 minutos. Os valores de polarização de fluorescência foram plotados em função da concentração de antagonista e os valores IC50 foram obtidos por meio de enquadramento dos dados em equação de quatro parâmetros utilizando software Kaleidograph (Synergy Software, Reading PA) . As constantes de inibição (Κ±) para os antagonistas foram determinadas a partir dos valores IC50. Concluiu-se que os compostos de acordo com a presente invenção possuem atividade inibidora de IAP que foi demonstrada neste teste. 128 ΕΡ1778718Β1
REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO
Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para a conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento de Patente Europeia. Embora tenha sido tomado muito cuidado na compilação das referências, não se poderão excluir erros e omissões e o IEP não assume qualquer responsabilidade neste sentido.
Documentos de Patente citados na descrição • US 4278793 A, W. Druckheimer [0021] • US SN08843369 A [0053] • WO 9846576 A [0053] • EP 269859 A [0063] • US 20030216325 A [0113] • EP 43024 A, H. Peeters, W. Vogt [0144] [0152] • EP 737682 A, Y. Yoshikawa [0162] [0164] • US 5747518 A [0162] [0164]
Documentos de não patente citados na descrição • THOMPSON et al. Science, 1995, vol. 267, 1456-1462 [0002] • DEVERAUX et al. J Clin Immunol, 1999, vol. 19, 388-398 [0004] • CROOK et al. J Virology, 1993, vol. 67, 2168-2174 [0004] • HINDS et al. Nat. Struct. Biol, 1999, vol. 6, 648-651 [0004] • DEVERAUX et al. EMBO J.r 1998, vol. 17, 2215-2223 [0004] • LISTON et al. Nature, 1996, vol. 379 (6563), 349 [0004] • FONG et al. Genomics, 2000, vol. 70, 113 [0004] • TAMM et al. Clin. Câncer Res., 2000, vol. 6 (5), 1796 129 [0004] ΕΡ1778718Β1 • LAÇASSE et al. Oncogene, 1998, vol. 17 (25), 3247 [0004] • SASAKI et al. Câncer Res., 2000, vol. 60 (20), 5659 [0004] • LIN et al. Biochem J., 2001, vol. 353, 299 [0004] • HU et al. Clin. Câncer Res., 2003, vol. 9 (7), 2826 [0004] • ARNT et al. J. Biol. Chem., 2002, vol. 277 (46), 44236 [0004] • FULDA et al. Nature Med., 2002, vol. 8 (8), 808 [0004] • GUO et al. Blood, 2002, vol. 99 (9), 3419 [0004] • VUCIC et al. J. Biol. Chem., 2002, vol. 277 (14), 12275 [0004] • YANG et al. Câncer Res., 2003, vol. 63 (4), 831 [0004] • VUCIC et al. Current Bio, 2000, vol. 10, 1359-1366 [0005] • CHAI et al. Nature, 2000, vol. 406, 855-862 [0006] • LIU et al. Nature, vol. 408, 1004-1008 [0006] • WU et al. Nature, 2000, vol. 408, 1008-1012 [0006] • T. W. GREENE ; P. G. M. WUTS. Protective Groups in
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Lisboa, 20 de Novembro de 2014 132

Claims (19)

  1. ΕΡ1778718Β1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto selecionado a partir de compostos de fórmula I e sais e solvatos do mesmo:
    em que: Xi, X2 e X3 são independentemente 0 ou S; Y é (CHR7) n, 0 ou S; em que n é 1 ou 2 e R7 é H, halogénio, alquilo, arilo, aralquilo, amino, arilamino, alquilamino, aralquilamino, alcoxi, ariloxi ou aralquiloxi; A é um heterociclo de 5 membros que compreende 1 a 4 heteroátomos opcionalmente substituídos com amino, hidroxilo, mercapto, halogénio, carboxilo, amidino, guanidino, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, alcoxicarbonilamino, cicloalquilo, alquiltio, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, aminosulfonilo, alquilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino ou um heterociclo; em que cada alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo e substituição de heterociclo é opcionalmente substituído com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, haloalquilo, amino, nitro, ciano, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo; Ri é H ou Ri e R2 juntos formam um anel de 5-8 membros; R2 é alquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, aralquilo, um heterociclo ou heterociclilalquilo; cada um opcionalmente substituído com hidroxilo, mercapto, halogénio, amino, carboxilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi 1 ΕΡ1778718Β1 ou alquiltio; R3 é H ou alquilo; R4 e R4' são independentemente H, hidroxilo, amino, alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, ou heteroarilalquilo, em que cada alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo e heteroarilalquilo é opcionalmente substituído com halogénio, hidroxilo, mercapto, carboxilo, alquilo, alcoxi, amino e nitro; R5, e R5, são cada independentemente H ou alquilo; R6, e R6' são cada independentemente H, alquilo, arilo ou aralquilo.
  2. 2. Um composto de acordo com a reivindicação anel A tem a fórmula lia ou Ilb: s >Y __0 u hl5 VQs % A Q f lia Ilb em que o em que: Qi é NRg, 0 ou S; Q2, Q3, Q4, Q5, Qe, Qi, e Qs são independentemente CR9 ou N; em que: R9 é H, amino, hidroxilo, mercapto, halogénio, carboxilo, amidino, guanidino, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo ou um heterociclo; em que cada alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, acilo, aciloxi, acilamino, cicloalquilo e substituição de heterociclo é opcionalmente substituído com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, amino, nitro, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo; r8 é H, alquilo, acilo, arilo, cicloalquilo ou um heterociclo; em que cada alquilo, arilo, cicloalquilo e heterociclo é opcionalmente substituído com hidroxilo, halogénio, mercapto, carboxilo, alquilo, haloalquilo, 2 ΕΡ1778718Β1 amino, nitro, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo; e Q9 é CH ou N.
  3. 3 ΕΡ1778718Β1
    em que R8 é H, alquilo ou acilo.
    3. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que o anel A é selecionado a partir de:
  4. 4. Um composto de acordo com a reivindicação 3, em que R8 é H.
  5. 5. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que Ri é H.
  6. 6. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que R2 é alquilo ou cicloalquilo.
  7. 7. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que R2 é isopropilo, t-butilo, ou ciclohexilo. 4 ΕΡ1778718Β1
  8. 8. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que Ri e ! R2 juntos formam um anel de 5-8 membros.
  9. 9. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que R3 é metilo.
  10. 10. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que R4 é H ou metilo, e R4' é H.
  11. 11. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, em que R5 e Rs' são independentemente H ou metilo.
  12. 12. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que Rõ e Re' são independentemente H ou metilo.
  13. 13. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que cada de Xi, X2 e X3 são 0.
  14. 14. Um composto de acordo com a reivindicação 2, em que: Ri é H; R2 é isopropilo, t-butilo, ou ciclohexilo; R3 é metilo; R4 é H ou metilo, e R4' é H, R5 e R5' são H ou metilo; e X2, X2 e X3 sao 0.
  15. 15. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, para utilização num método de tratamento do corpo humano ou animal por terapêutica.
  16. 16. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, para utilização num método de 5 ΕΡ1778718Β1 tratamento de uma doença ou condição associada à sobreexpressão de um IAP num mamífero.
  17. 17. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, para utilização num método de tratamento de um cancro.
  18. 18. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14 no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição associada à sobreexpressão de um IAP num mamífero.
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