BRPI0617751A2

BRPI0617751A2 - compostos de ligação do domìnio iap bir

Info

Publication number: BRPI0617751A2
Application number: BRPI0617751-4A
Authority: BR
Inventors: Alain Laurent; Kim Hewitt; Stephen Morris; Patrick Bureau; Alain Boudreault; Scott Jarvis; James B Jaquith
Original assignee: Aegera Therapeutics Inc
Priority date: 2005-10-25
Filing date: 2006-10-20
Publication date: 2011-08-02
Also published as: CA2564872C; CA2564872A1; JP2009512719A; RU2008120408A; EP1951698A1; US7795298B2; AU2006308453B9; US20080014207A1; US7547724B2; AU2006308453A1; US20070093429A1; KR20080067357A; US8063095B2; EP1951698A4; IL190936A0; US20070093428A1; RU2418807C2; US7589118B2; US20070219140A1; AU2006308453A8

Abstract

<B>COMPOSTOS DE LIGAçãO DO DOMìNIO IAP BIR<D> A presente revelação está relacionada aos compostos que se ligam aos domínios IAP BIR, mais particularmente os domínios BIR2 e BIR3. Os compostos são representados pela Fórmula 1 (I). Constatou-se que esses compostos são úteis na alteração de respostas apoptóticas nas células que podem levar ao tratamento de distúrbios proliferativos. Sabe-se que as vias apoptóticas têm uma participação crucial no desenvolvimento de câncer, distúrbios autoimunes e doenças neurodegenerativas. é também revelado o processo para a produção dos compostos de Fórmula 1.

Description

COMPOSTOS DE LIGAÇÃO DO DOMÍNIO IAP BIR

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção está relacionada a compostos quese ligam aos domínios IAP BIR e, mais particularmente, aos domínios BIR2 e BIR3, e são úteis para o tratamento dedistúrbios proliferativos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

A apoptose, ou a morte celular programada, tipicamenteocorre no desenvolvimento e manutenção de tecidos saudáveis em organismos multicelulares. As vias apoptóticas sãoconhecidas por terem uma participação fundamental nodesenvolvimento embriológico, na patogênese viral, nocâncer, em distúrbios autoimunes e em doençasneurodegenerativas, bem como em outros eventos. As alterações em uma resposta apoptótica foram implicadas nodesenvolvimento de câncer, doenças autoimunes, por exemplo,lúpus eritematoso sistêmico e esclerose múltipla, e eminfecções virais, incluindo aquelas associadas ao herpesvírus, poxvírus e adenovírus. Caspases, uma classe de cisteína proteases, sãoconhecidas por iniciarem a apoptose após terem sidoativadas. Os inibidores de proteínas de apoptose (IAPs) sãouma família de proteínas que contêm de um a três domíniosde repetição de baculovírus IAP (BIR), especificamente BIRl, BIR2 e BIR3, e também podem conter um domínio dedo dezinco {zinc finger) RING no terminal C. Exemplos de IAPshumanos incluem XIAP, HIAPl (também denominado cIAP2) eHIAP2 (cIAPl) , cada um com três domínios BIR, e um RINGfinger de zinco (RING de dedo de zinco) no terminal carbóxi. NAIP possui três domínios BIR (BIR1, BIR2 e BIR3),mas não tem domínio RING, enquanto Livin e ILP2 possuem umúnico domínio BIR e um domínio RING. O protótipo doinibidor de apoptose ligado ao cromossomo X (XIAP) pode nãoapenas inibir as caspases ativadas por ligação direta àscaspases, mas XIAP também pode remover caspases e o segundoativador mitocondrial de caspases (Smac) através da via doproteossoma mediada por meio da atividade de E3 ligase deum domínio RING finger de zinco. 0 domínio BIR3 de XIAP seliga e inibe caspase-9, que pode ativar a caspase-3. 0domínio BIR2 vinculador de XIAP inibe a atividade decaspases-3 e -7 efetoras. Os domínios BIR também foramassociados às interações de IAPs com o fator associado aofator de necrose tumoral (TRAFs)-I e -2, e a TABl.

De forma geral, os IAPs funcionam como uma 'restrição'à apoptose, e podem contribuir diretamente para aprogressão de tumores e resistência à intervençãofarmacêutica. Curiosamente, resultados demonstram que aresistência à apoptose pode ser diminuída por siRNA e anti-senso dirigidos contra IAPs específicos nas células.Sugerindo, portanto, que a interferência com a atividadedos IAPs talvez se mostre vantajosa na sensibilização dascélulas doentes à apoptose.

Uma série de ligantes endógenos é capaz de interferircom interações IAP-caspase. A estrutura cristalográfica porraios-x de XIAP BIR2 e BIR3 revela uma bolsa e um sulco deligação cruciais na superfície de cada domínio BIR. Foramidentificadas duas proteínas mitocondriais mamíferas,especificamente segundo ativador derivado de mitocôndria decaspases (Smac) e 0mi/Htra2, e quatro proteínas deDrosophila (Reaper, HID, Grim e Sickle) que interferem coma função de IAP por ligação a esses sítios em seurespectivo domínio BIR. Cada um desses inibidores de IAPpossui um tetrapeptídeo amino-terminal curto, AXPY ou AVPI-Iikel seqüência que se ajusta em sua bolsa de ligação erompe interações proteína/proteína como, por exemplo,interações IAP-caspase. Embora a dobra global de domíniosBIR individuais seja geralmente conservada, há alteraçõesnas seqüências de aminoácidos que formam a bolsa e o sulcode ligação. Dessa forma, as afinidades de ligação variamentre cada um dos domínios BIR.

Foram descritos diversos compostos, que supostamentese ligam a XIAP, incluindo Wu e cols., "Chemistry andBiology", Vol. 10, 759-767 (2003); pedido de patente U.S.publicado número US2006/0025347 Al; pedido de patente U.S.publicado número US2005/0197403 Al; pedido de patente U.S.publicado número US2006/0194741 Al. Alguns dos compostosmencionados anteriormente, embora pareçam se dirigir aodomínio BIR3 de XIAP, podem ter biodisponibilidade limitadae, portanto, aplicação terapêutica limitada. Além disso, oscompostos podem não ser seletivos contra outros IAPs e, naverdade, contra outros domínios BIR, por exemplo, BIR2 ;essa ausência de especificidade pode causar efeitoscolaterais inesperados.

Dessa forma, domínios IAP BIR representam um alvoatraente para a descoberta e o desenvolvimento de agentesterapêuticos inéditos, especialmente para o tratamento dedistúrbios proliferativos como, por exemplo, câncer.SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Descobrimos uma série de compostos inéditos que seligam aos IAPs e aumentam a apoptose celular através damodulação de IAP, e que possuem estabilidade ebiodisponibilidade farmaceuticamente aceitáveis. Oscompostos causam uma redução e/ou perda das proteínas IAPem células, antes da ocorrência de a despolarização mitocondrial ocorrer, e evitam a interação de caspase 3,caspase 7 e caspase 9. Portanto, os resultados sugerem queuma pequena molécula é capaz de infra-regular proteínasIAP, antes da morte celular, indicando, dessa forma, que ouso clínico dos compostos pode oferecer vantagens quando administrados em combinação com outros indutores deapoptose.

Especificamente, demonstramos que os compostos seligam ao domínio BIR2 e BIR3 de XIAP mamífero e promovem aapoptose de células cancerosas como agente único ou em combinação com um agente quimioterápico ou com um agonistado receptor de morte celular, por exemplo, TRAIL, ouanticorpos agonistas do receptor TRAIL. Além disso, foidemonstrado que os compostos causam uma redução de IAPscelulares de células que pode ser bloqueada por um inibidor de proteossoma. Vantajosamente, os compostos aqui descritospossuem atividade pró-apoptótica em várias linhagens decélulas cancerosas, tais como câncer de bexiga, de mama,pancreático, de cólon, leucêmico, de pulmão, Iinfoma,mieloma múltiplo e ovariano, e também podem encontrar aplicação em outras linhagens de células cancerosas e emdoenças nas quais as células são resistentes à apoptose.Verificou-se que os compostos matam células cancerosas deforma sinérgica com TRAIL ou com anticorpos agonistas doreceptor TRAIL. Esses resultados sugerem que os compostos da presente invenção demonstrarão atividade anticâncercontra tumores sólidos e tumores que se originam dasmalignidades hematológicas. Além disso, os compostos dapresente invenção também podem encontrar aplicação naprevenção de metástase e invasão de células cancerosas,inflamação, e em outras doenças caracterizadas por célulasque são resistentes à apoptose. Os compostos também podemser úteis no tratamento de doenças autoimunes.

De acordo com uma modalidade da presente invenção, éfornecido um isômero, enantiômero, diastereoisômero ou

tautômero de um composto representado pela Fórmula I:

<formula>formula see original document page 6</formula>

ou um sal deste,em que:

I

η é 0 ou 1;m é 0, 1 ou 2 ;

ρ é 1 ou 2;Y é NH, 0 ou S;

A e A1 são selecionados independentemente de1) -CH2-,2) -CH2CH2-,

3) -C(CH3)2-,

4) -CH(Ci-C6 alquil)- ,

5) -CH (C3-C7 cicloalquil) - ,

6) -C3-C7 cicloalquil-,

7) -CH (Ci-C6 alquil-C3-C7 cicloalquil)-, ou8) -C(O)-;

B e B1 são independentemente C1-C6 alquil;

BG é:

1) -X-L-X1-; OUBG é:

<formula>formula see original document page 7</formula>

X e X1 são selecionados independentemente de

1) 0, NR13, S,

<formula>formula see original document page 7</formula>

L ê selecionado de:

1) -C1-C10 alquil-,

2) -C2-C6 alquenil-,

3) -C2-C4 alquinil-,

4) -C3-C7 cicloalquil-,5) -fenil-,

6) -bifenil-,

7) -heteroaril-,

8) -heterociclil-,

9) -C1-C6 alquil-(C2-C6 alquenil) - C1-C6 alquil-,

10) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil)-C1-C6 alquil,

11) -C1-C6 alquil-(C3-C7 CicloalquiD-C1-C6 alquil,

12) -C1-C6 alquil-fenil-C1-C6 alquil,

13) -C1-C6 alquil-bifBnil-C1-C6 alquil,

14) -C1-C6 alquil-heteroaril-C1-Ce alquil,

15) -C1-C6 alquil-heterociclil-C1-C6 alquil, ou

16) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;

R1, R100, R2 e R200 são selecionados independentementede:

1) H ou

2) C1-C6 alquil opcionalmente substituído com um oumais substituintes R6;

Q e Q1 são cada um independentemente:

1) NR4R5,

2) OR11, ou

3) S(O)mR11; ou

Q e Q1 são cada um independentemente:

<formula>formula see original document page 8</formula>

em que G é um anel de 5, 6 ou 7 membros queopcionalmente incorpora um ou mais heteroátomos escolhidosde S, N ou O, o anel sendo opcionalmente substituído com umou mais substituintes R12;

R4 e R5 são, cada um independentemente:1) H7

2) haloalquil,

3) <—Ci-C6 alquil,

4) <— C2-C6 alquenil,

5) <-C2-C4 alquinil,

6) <-C3-C7 cicloalquil,

7) <— C3-C7 cicloalquenil,

8) <-aril,

9) <—heteroaril,

10 10) <-heterociclil,

11) <-heterobiciclil,

12) <—C (O) -R11,

13) <—C (O) O-R11,

14) <-C( =Y) NR8R9, ou

15) <-S (O)2-R11,

em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;

R0 é:

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) haloalquil,

5) Ci-C6 alquil,

6) C2-C6 alquenil,

7) C2-C4 alquinil,

8) C3-C7 cicloalquil,

9) C3-C7 cicloalquenil,10) aril, 11) heteroaril,

12) heterociclil,

13) heterobiciclil,

14) OR7,

15) S(O)mR7,

16) NR8R9,

17) NR8S (O) 2R11,

18) COR7,

19) C(O)OR7,

20) CONR8R9,

21) S (O) 2NR8R9

22) OC(O)R7,

23) OC(O) Y-R11,

24) SC(O)R7, ou

25) NC(Y)NR8R9,

em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10;R7 é

1) H,

2) haloalquil,

3) C1-C6 alquil,

4) C2-C6 alquenil,

5) C2-C4 alquinil,

6) C3-C7 cicloalquil,

7) C3-C, cicloalquenil,

8) aril,

9) heteroaril,

10) heterociclil,11) heterobiciclil,

12) R8R9NC (=Y) ou

13) Ci-C6 alquil-C2-C4 alquenil ou

14) Ci-C6 alquil-C2-C4 alquinil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;

R8 e R9 são cada um independentemente:

1) H,

2) haloalquil,

3) Ci-C6 alquil,

4) C2-C6 alquenil,

5) C2-C4 alquinil,

6) C3-C7, cicloalquil,

7) C3-C7, cicloalquenil,

8) aril,

9) heteroaril,

10) heterociclil,

11) heterobiciclil,

12) C(O)R117

13) C(O)Y-R11 ou

14) S(O)2-R11,

ou R8 e R9, juntos com o átomo de nitrogênio ao qualestão unidos, formam um anel heterocíclico de cinco, seisou sete membros opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R6;

R10 é 1) halogênio, 2) NO2, 3) CN, 4) B (OR13) (OR14) , 5) C1-C6 alquil, 5) C2-C6 alquenil, 7) C2-C4 alquinil, 8) C3-C7 cicloalquil, 9) C3-C7 cicloalquenil, 10) haloalquil, 11) OR7, 12) NR8R9, 13) SR7, 14) COR7, 15) C(O)OR7, 16) S(O)mR7, 17) CONR8R9, 18) S (0) 2NR8R9, 19) aril, 20) heteroaril, 21) heterociclil ou 22) heterobiciclil, em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquenil são opcionalmente substituídos substituintes R6; R11 é1) haloalquil,

2) C1-C6 alquil,

3) C2-C6 alquenil,

4) C2-C4 alquinil,

5) C3-C7 cicloalquil,

6) C3-C7 cicloalquenil,

7) aril,

8) heteroaril,

9) heterociclil ou

10) heterobiciclil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;.e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;

R12 é

1) haloalquil,

2) C1-C6 alquil,

3) C2-C6 alquenil,

4) C2-C4 alquinil,

5) C3-C7 cicloalquil,

6) C3-C7 cicloalquenil,

7) aril,

8) heteroaril,

9) heterociclil,

10) heterobiciclil,

11) C(O)-R11,

12) C(O)O-R11,

13) C(O)NR8R9,

14) S(O)mR11 ou15) C (=Y) NR8R9,

R13 e R14 são, cada um independentemente:

1) H ou

2) C1-C6 alquil; ou

R13 e R14 são combinados para formar um anelheterocíclico ou um anel heterobiciclil;

ou um pró-fármaco; ou o composto de Fórmula I émarcado com um marcador detectável ou um tag de afinidade.

De acordo com um aspecto alternativo da presente15 invenção, é fornecido um composto, de acordo com Formula 2:

<formula>formula see original document page 14</formula>

em que n, R1, R2, R100 R200, A, A1, Q, Q1, B, B1 e BG sãocomo definidos acima; em que a linha pontilhada representauma linha divisória hipotética para a comparação dossubstituintes associados a M1 e M2.

Em outro aspecto da presente invenção, M1 é igual aM2.

Em outro aspecto da presente invenção, M1 é diferentede M2.

Em um aspecto da presente invenção, é fornecido umcomposto intermediário representado pela Fórmula 2(iii):

<formula>formula see original document page 15</formula>

em que PG2 é um grupo protetor, e R1, R2, B, AeQ são

como aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um

composto intermediário representado pela Fórmula 3 (iii) :

<formula>formula see original document page 15</formula>

em que B, B1, A, A1, Q e Q1 são como aqui definidos.Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido umcomposto intermediário representado pela Fórmula 4(iii):

<formula>formula see original document page 15</formula>

em que PG3 é um grupo protetor, e B, R1, R2, AeQ sãocomo aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, ê fornecido umcomposto intermediário representado pela Fórmula 5(i):

<formula>formula see original document page 16</formula>

em que PG3 são grupos protetores, e B, B1, R1, R100, R2,R200 , A, A1, Q e Q1 são como aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido umcomposto intermediário representado pela Fórmula 6(iii):

<formula>formula see original document page 16</formula>

em que PG3 é um grupo protetor, e R1, R2, B, AeQ são

como aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um

composto intermediário representado pela Fórmula 7(iii):

<formula>formula see original document page 16</formula>

em que PG3 é um grupo protetor, e R1, R2, B, AeQ sãocomo aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido umcomposto intermediário representado pela Fórmula 8(iii):

<formula>formula see original document page 17</formula>

em que B, B1, A, A1, Q e Q1 são como aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido umprocesso para a produção de compostos representados pelaFórmula I, aqui descritos anteriormente, o processocompreendendo:

a) o acoplamento de dois intermediários representadospela Fórmula 2(iii):

<formula>formula see original document page 17</formula>

em um solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 3 (iii) :<formula>formula see original document page 18</formula> em um solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido umprocesso para a produção de compostos representados pelaFórmula I, aqui descritos, o processo compreendendo:

a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 4(iii):

<formula>formula see original document page 18</formula>

e um diácido ativado, por exemplo, um cloreto dediácido ou um diácido ativado com o uso de 2 equivalentesde agentes de acoplamento de peptídeo, em um solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

a) o acoplamento de dois intermediários representadospela Fórmula 4(iii):

<formula>formula see original document page 19</formula>

4(iii)

com trifosgeno, ou um equivalente a trifosgeno, em umsolvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

a) o acoplamento de dois intermediários representadospela Fórmula 4(iii):

<formula>formula see original document page 19</formula>

4 (iii)

com cloreto de oxalila em um solvente; e b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar os

compostos de Fórmula 1.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido umprocesso para a produção de compostos representados pelaFórmula I, aqui descritos, o processo compreendendo: a) o acoplamento um intermediário representado pela

Fórmula 6 (iii):

<formula>formula see original document page 19</formula>e um cloreto de biácido ou um biácido, com o uso de umagente de acoplamento, em um solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 7(iii):

<formula>formula see original document page 20</formula>

e uma diamina, com o uso de um agente de acoplamentoem um solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFormula 8 (iii):

<formula>formula see original document page 20</formula>^^em um solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

a) a hidrogenação de um composto representado por Ig

<formula>formula see original document page 21</formula>

em um solvente,

b) filtração e concentração do solvente para gerar umcomposto de fórmula Iq.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida umacomposição farmacêutica que compreende um composto, comoaqui descrito acima, misturado com um veiculo, diluente ouexcipiente farmaceuticamente aceitável.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida umacomposição farmacêutica adaptada para administração como umagente para o tratamento de um distúrbio proliferativo emum indivíduo, que compreende uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto, como aqui descritoacima.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida umacomposição farmacêutica que compreende um composto deFórmula I em combinação com um ou mais agonistas doreceptor de morte celular, por exemplo, um agonista dereceptor TRAIL.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida umacomposição farmacêutica que compreende um composto defórmula I em combinação com qualquer agente terapêutico queaumente a resposta de um ou mais agonistas do receptor demorte celular, por exemplo, citocinas citotóxicas como, porexemplo, interferons.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo de preparação de uma composição farmacêutica, ométodo compreendendo: a mistura de um composto, como aquidescrito acima, com um veículo, diluente ou excipientefarmaceuticamente aceitável.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo de tratamento de um estado de doença caracterizadopor apoptose insuficiente, o método compreendendo: aadministração a um indivíduo que dela necessita de umaquantidade terapeuticamente eficaz de uma composiçãofarmacêutica, como descrita acima, de modo a tratar oestado de doença.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo de modulação de função de IAP, o métodocompreendendo: o contato de uma célula com um composto dapresente invenção de forma a evitar a ligação de umaproteína de ligação de BIR a um domínio IAP BIR modulando,dessa forma, a função de IAP.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo de tratamento de uma doença proliferativa, o método compreendendo: a administração a um indivíduo que delanecessita de uma quantidade terapeuticamente eficaz dacomposição farmacêutica, como descrita acima, de modo atratar a doença proliferativa.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de tratamento de câncer, o método compreendendo: aadministração a um indivíduo que dela necessita de umaquantidade terapeuticamente eficaz da composiçãofarmacêutica, como descrita acima, de modo a tratar ocâncer.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo de tratamento de câncer, o método compreendendo: aadministração ao indivíduo que dela necessita de umaquantidade terapeuticamente eficaz de uma composiçãofarmacêutica, como descrita acima, em combinação ou

seqüencialmente com um agente selecionado de:

a) um modulador do receptor de estrogênio; b) um modulador do receptor de androgênio; c) um modulador do receptor de retinóide; d) um agente citotóxico; e) um agente antiproliferativo; f) um inibidor da prenil-proteína transferase; g) um inibidor da HMG-CoA redutase; h) um inibidor da HIV protease; i) um inibidor da transcriptase reversa; k) um inibidor da angiogênese;1) um agonista de PPAR-y;

m) um agonista de PPAR-δ;

n) um inibidor de resistência a multifármacosinerente;

o) um agente antiemético;

p) um agente útil no tratamento de anemia;

q) agentes úteis no tratamento de neutropenia;

r) um fármaco de estimulação imunológica;

s) um inibidor de proteossoma;

t) um inibidor de HDAC;

u) um inibidor da atividade quimotripsina-liJte noproteossoma; ou

v) inibidores de E3 ligase;

w) um modulador do sistema imunológico como, por

exemplo, sem limitação, interferon-alfa, Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e radiação ionizante (UVB) que podem reduzir aliberação de citocinas como, por exemplo, interleucinas,TNF, ou induzir a liberação de ligantes do receptor demorte celular como, por exemplo, TRAIL;

x) um modulador de receptores de morte celular TRAIL eagonistas de TRAIL, por exemplo, os anticorpos humanizadosHGS-ETRl e HGS-ETR2;

ou em combinação ou seqüencialmente com radioterapia,de modo a tratar o câncer.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo para o tratamento ou prevenção de um distúrbioproliferativo em um indivíduo, o método compreendendo: aadministração ao indivíduo de uma quantidadeterapeuticamente eficaz da composição descrita acima.

Em outro aspecto da presente invenção, o método aindacompreende a administração ao indivíduo de uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um agente quimioterápico antes,simultaneamente ou após a administração da composição.

Ainda em outro aspecto, o método ainda compreende a

terapeuticamente eficaz de um agonista do receptor de mortecelular antes, simultaneamente ou após a administração dacomposição. 0 agonista do receptor de morte celular é TRAILou o agonista do receptor de morte celular é um anticorpode TRAIL. 0 agonista do receptor de morte celular étipicamente administrado em uma quantidade que produz umefeito sinérgico.

O uso do composto como descrito acima para afabricação de um medicamento para o tratamento ou a15 prevenção de um estado de doença caracterizado por apoptoseinsuficiente.

O uso do composto como descrito acima para afabricação de um medicamento para o tratamento ou aprevenção de um distúrbio proliferativo.

O uso do composto como descrito acima em combinaçãocom um agente para a fabricação de um medicamento para otratamento ou a prevenção de um distúrbio proliferativo, emque o agente é selecionado de:

a) um modulador do receptor de estrogênio;

b) um modulador do receptor de androgênio;

c) um modulador do receptor de retinóide;

d) um agente citotóxico;

e) um agente antiproliferativo;

f) um inibidor da prenil-proteína transferase;

g) um inibidor da HMG-CoA redutase;h) um inibidor da HIV protease;

i) um inibidor da transcriptase reversa;

k) um inibidor da angiogênese;

l) um agonista de PPAR-γ;

m) um agonista de PPAR-δ;

n) um inibidor de resistência a multifármacosinerente ;

o) um agente antiemético;

p) um agente útil no tratamento de anemia;

q) agentes úteis no tratamento de neutropenia;

r) um fármaco de estimulação imunológica;

s) um inibidor de proteossoma;

t) um inibidor de HDAC;

u) um inibidor da atividade quimotripsina-li-ke noproteossoma; ou

v) inibidores de E3 ligase;

w) um modulador do sistema imunológico como, porexemplo, sem limitação, interferon-alfa, Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e radiação ionizante (UVB) que podem induzir aliberação de citocinas, por exemplo, interleucinas, TNF, ouinduzir a liberação de ligantes do receptor de mortecelular como, por exemplo, TRAIL;

x) um modulador de receptores de morte celular TRAIL eagonistas de TRAIL como, por exemplo, os anticorposhumanizados HGS-ETRl e HGS-ETR2;

ou em combinação ou seqüencialmente com radioterapia.

O uso do composto como descrito acima em combinaçãocom um agonista do receptor de morte celular para afabricação de um medicamento o tratamento ou prevenção deum distúrbio proliferativo em um indivíduo.O agonista do receptor de morte celular é TRAIL.

O agonista do receptor de morte celular é um anticorpode TRAIL.

0 agonista do receptor de morte celular é em umaquantidade que produz um efeito sinérgico.

0 distúrbio proliferativo é câncer.

Uma composição farmacêutica que compreende o compostocomo descrito acima, misturado com um veiculo, diluente ouexcipiente farmaceuticamente aceitável, para o tratamentoou a prevenção de um estado de doença caracterizado porapoptose insuficiente.

Uma composição farmacêutica que compreende o compostode qualquer uma das reivindicações 1 a 63 em combinação comqualquer composto que aumente o nível circulante de um oumais agonistas do receptor de morte celular para aprevenção ou o tratamento de um distúrbio proliferativo.

Um método de preparação de uma composiçãofarmacêutica, o método compreendendo: a mistura do compostode qualquer uma das reivindicações 1 a 63 com um veiculo,diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida umasonda, a sonda sendo um composto de Fórmula I acima, ocomposto sendo rotulado com um marcador detectável ou comum tag de afinidade.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido ummétodo de identificação de compostos que se ligam a umdomínio IAP BIR, o ensaio compreendendo:

a) o contato de um domínio IAP BIR com uma sonda paraformar um complexo sonda:domínio BIR, a sonda sendodeslocável por um composto de teste;b) a medida de um sinal da sonda de modo a estabelecerum nível de referência;

c) a incubação do complexo sonda:domínio BIR com ocomposto de teste;

d) a medida do sinal da sonda;

e) a comparação do sinal da etapa d) com o nível dereferência, uma modulação do sinal sendo uma indicação deque o composto de teste se liga ao domínio BIR,

em que a sonda é um composto de Fórmula I rotulado comum marcador detectável ou um rótulo de afinidade.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Aspectos e vantagens adicionais da presente invençãoserão mais bem compreendidos com referência à descrição emassociação com a seguinte Figura, na qual:

A Figura 1 é um gráfico que ilustra uma terapiacombinada anticâncer in vivo, na qual o composto mostrou umefeito antitumoral crescente em combinação com mitomicina-Gcom dose crescente, com 5 mg/kg exibindo efeitosantitumorais superiores comparada com a dose de 1 mg/kg.

0 DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Em muitos cânceres e em outras doenças, uma supra-regulação de IAP induzida por defeitos gênicos ou poragentes quimioterápicos tem sido correlacionada a umaresistência aumentada à apoptose. Curiosamente, nossosresultados mostram que células com diminuição dos níveis deIAPs são mais sensíveis à apoptose induzida por TRAIL.Acredita-se que uma pequena molécula, que irá induzir perdade IAP por células da doença, seria útil como agenteterapêutico. Relatamos aqui compostos que podem se ligar

0 diretamente aos IAPs, causar uma infra-regulação dasproteínas IAP na célula, antes da morte celular, induzirapoptose em células cancerosas, e ter um efeito sinérgicoem combinação com indutores de apoptose. Isso pode oferecervantagens clínicas em termos da seletividade da terapia combase no fenótipo das células cancerosas. Também seriavantajoso o uso dos compostos da presente invenção emterapia combinada com outros agentes em termos das doses deadministração e o tempo de posologia das doses.

Os compostos da presente invenção são úteis comocompostos de ligação ao domínio BIR em IAPs mamíferos, esão representados pela Fórmula I. A seguir, serão descritasem detalhes modalidades, grupos e substituintes doscompostos de acordo com Formula I.n:

Em um subconjunto de compostos de Fórmula 1, η é 1.Qualquer uma e cada definição individual de η aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo (core) , R1, R2, R100, R200, A,A1, Q, Q1, B, B1 e BG aqui apresentada.

A e A1:

Em um subconjunto de compostos de Fórmula 1, A e A1são CH2.

Em um subconjunto alternativo de compostos de Fórmula1, A e A1 são C=O.

Em outro subconjunto alternativo de compostos de

Fórmula 1, A é CH2 e A1 é C=O.

Qualquer uma e cada definição individual de A e A1aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, n, R1, R2, R100 R200, Q, Q1,

B, B1 e BG aqui apresentada.Núcleo:

Portanto, a presente invenção compreende compostos deFórmulas 1a a 1c:

<formula>formula see original document page 30</formula>

em que BG, B, B1, Q, Q1, R1, R100 R2 e R200 são comodefinidos anteriormente e a seguir.

Em um exemplo, a presente invenção compreendecompostos de Fórmula 1a.

Em um exemplo alternativo, a presente invençãocompreende compostos de Fórmula 1b.

Qualquer uma e cada definição individual de Núcleoaqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de A, A1, n, R1, R2, R100, R200, Q, Q1,B, B1, e BG aqui apresentada.

B e B1:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, B e B1 são C1-C4 alquil.

Qualquer uma e cada definição individual de B e B1aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R27 R100, R200,Q, Q1 e BG aqui apresentada.

BG:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, BG é: -X-L-X1-.Portanto, a invenção compreende compostos de Fórmulasld e le:

<formula>formula see original document page 31</formula>

em que L, B, B1, Χ, X1, Q, Q1, R1i R100, R2 e R200 sãocomo aqui definidos.

Em um subconjunto alternativo dos compostosmencionados anteriormente, BG é:

<formula>formula see original document page 31</formula>

Portanto, a invenção alternativamente compreendecompostos de Fórmula 1f ou 1g:

<formula>formula see original document page 31</formula>

em que A, A1, B, B1, Q, Q1, R1, R100, R2 e R200 são comoaqui definidos.

Qualquer uma e cada definição individual de BG aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1i R2, R100 R200iQ, Q1, B e B1 aqui apresentada.X e X1:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, X e X1 são selecionados independentementede:

<formula>formula see original document page 32</formula>

Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, X e X1 são selecionados independentementede:

<formula>formula see original document page 32</formula>

Exemplos típicos de X e X1 incluem tanto X quanto X1<formula>formula see original document page 33</formula>

Qualquer uma e cada definição individual de X e X1aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R2i R100, R2007Q, Q1, B, B1 e BG aqui apresentada.

anteriormente, L é selecionado de:

1) -C1-C10 alquil-,

2) -C2-C4 alquinil-,

3) -fenil-,

4) -bifenil-,

5) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil)-C1-C6 alquil,

6) -C1-C6 alquil-fenil-C1-C6 alquil,

7) -C1-C6 alquil-bifenil-C1-Cg alquil ou

8) -C1-C6 alquil-0-C1-C6 alquil.

Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, L é selecionado de:

1) -C1-C10 alquil-,

2) -fenil-,

3) -bifenil-,

4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,

5) -CH2-fenil-CH2-,

6) -CH2-bifenil -CH2- ou

7) -Cl-C6 alquil-O-Ci-C6 alquil.

Exemplos típicos de L incluem:

<formula>formula see original document page 33</formula><formula>formula see original document page 34</formula>

Qualquer uma e cada definição individual de L aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R2, R100, R200,Q, Q1, B e B1 aqui apresentada.

r:

No aspecto mencionado anteriormente, r é um númerointeiro selecionado dei, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8.

Qualquer uma e cada definição individual de r aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R2, R100, R200 ,Q, Q1, B e B1 aqui apresentada.

Mais explicitamente, a invenção compreende compostosde formulas 1h, 1i, 1j, 1k, 1l e 1m:

<formula>formula see original document page 34</formula><formula>formula see original document page 35</formula>em que Β, B1, X, X1, Q, Q1, R1, R100, R2 e R200 são comoaqui definidos.

R1 e R100:

Em um subconjunto dos compostos mencionados anteriormente, R1 e R100 são C1-C6 alquil.

Em um exemplo, R1 e R100 são ambos CH3.

Qualquer uma e cada definição individual de R1 e R100aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R2, R200, Q, Q1, B,B1 e BG aqui apresentada.

R2 e R200 :

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, tanto R2 quanto R200 são Ci-C6 alquil. Em umexemplo, tanto R2 quanto R200 são CH3. Qualquer uma e cada definição individual de R2 e R200aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R100, Q, Q1, B,B1 e BG aqui apresentada.

Q e Q1:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, Q e Q1 são ambos NR4R5, em que R4 e R5 sãocomo aqui definidos.

Qualquer uma e cada definição individual de Q e Q1aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R100, R2, R200,B, B1 e BG aqui apresentada.

R4 e R5:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente no qual A e A1 são C=O, R4 é H e R5 éselecionado de:1) haloalquil,

2) <-C1-C6 alquil,

3) <—C2-C6 alquenil,

4) <—C2-C4 alquinil,

5) <— C3-C7 cicloalquil,

6) i— C3-C7 cicloalquenil,

7) <-aril,

8) «—heteroaril,

9) <—heterociclil ou

10) <—heterobiciclil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;

em que R6 e R10 são como aqui definidos.

Em outro subconjunto dos compostos acima, R4 é H e R5é selecionado de:

1) <—C3 -C7 cicloalquil,

2) C3-C7 cicloalquenil,

3) «-aril,

4) <—heteroaril,

5) <—heterociclil ou

6) <—heterobiciclil.

Ainda em outro subconjunto dos compostos acima, R4 é He R5 é aril.

<formula>formula see original document page 37</formula>

Em um exemplo, R4 é H e R5 éPortanto, quando A e A1 são C=O, então Q e Q1 sãoambos<formula>formula see original document page 38</formula>

Em um subconjunto alternativo dos compostosmencionados anteriormente no qual A e A1 são CH2, então R4 eR5 são cada um independentemente:

1) H,

2) haloalquil,

3) <-C1-Ce alquil,

4) <—C2-C6 alquenil,

5) <-C2-C4 alquinil,

6) <— C3-C7 cicloalquil,

7) <—C3-C7 cicloalquenil,

8) <—aril,

9) <—heteroaril,

10) <-heterociclil,

11) <-heterobiciclil,

12) <—C (O) -R11,

13) <—C (O) O-R11,

13) <-C (=YjNR8R9 ou

14) <-S(O)2-R11,

em que Y, R6, R8, R9, R16 e R11 são como aqui definidos.Em outro subconjunto dos compostos acima, R4 e R5 sãoselecionados independentemente de:

1) H,

2) C1-C6 alquil,3) <—C (O) -R11,

4) <—C (O) O-R11 ou

5) <-S(O)2-R11,

em que o alquil é substituído com um substituinte R6;

em que R6 e R11 são como aqui definidos.

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente,

R4 é

1) H,

2) <—C (O) -R11,

3) <—C (O) O-R11 ou

4) <—S (O) 2-R11; e

R5 é C1-C6 alquil substituído com um fenil;

em que R11 é como aqui definido.

Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente,

R4 é

1) H,

2) <—C (O) -R11,

3) <—C (O) O-R11 ou

4) <-S (O)2-R11; e

R5 é <formula>formula see original document page 39</formula>

em que R11 é como aqui definido.

Qualquer uma e cada definição individual de R4 e R5aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R100 7 R2, R200,B, B1 e BG aqui apresentada.

R11:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente,

R11 é

1) haloalquil,

2) C1-C6 alquil,

3) C2-C6 alquenil,

4) C2-C4 alquinil,

5) aril,

6) heteroaril,

7) heterociclil ou8) heterobiciclil,

em que o alquil, alquenil, alquinil é opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes R6; e em que o.aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;

em que R6 e R10 são como aqui definidos.

Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R11 é

1) haloalquil,2) C1-C6 alquil,

3) aril,

4) heteroaril ou

5) heterociclil,

em que o alquil é opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6; e em que o aril, heteroaril eheterociclil são substituídos com um substituinte R10;

em que R6 e R10 são como aqui definidos.

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R11 é

1) haloalquil,2) C1-C6 alquil opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6 ou

3) fenil opcionalmente substituído com um substituinte

R10;

em que o R6 e os substituintes R10 são como aqui

definidos.

Qualquer uma e cada definição individual de R11 aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, Al, n, R1, R100, R2, R200,R4, R5, B, B1 e BG como aqui apresentada.R6:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R6 é:

1) halogênio, 2) NO2, 3) CN, 4) aril, 5) heteroaril, 6) heterociclil, 7) heterobiciclil, 8) OR7, 9) SR7 ou 10) NR8R9,

em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10;

em que R7, R8, R9 e R10 são como aqui definidos.Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R6 é: 1) halogênio,2) aril ou

3) NR8R9,

em que o aril é opcionalmente substituído com umsubstituinte R10;

em que R8, R9 e R10 são como aqui definidos.

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R6 é:

1) halogênio,

2) fenil ou

3) NR8R9,

em que o fenil é opcionalmente substituído com umsubstituinte R10;

em que R8 e R9 são como aqui definidos.

Qualquer uma e cada definição individual de R6 aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R100, R2, R200,R4, R5, B, B1 e BG aqui apresentada.

R8 e R9:

Em um subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R8 e R9 são, cada um independentemente:

1) H,

2) haloalquil,

3) C1-C6 alquil,

4) C2-C6 alquenil,

5) C2-C4 alquinil,

6) C3-C7 cicloalquil ou

7) C3-C7 cicloalquenil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;

em que os substituintes R6 são como aqui definidos.Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente, R8 e R9 são, cada um independentemente:

1) H ou

2) C1-C6 alquil,

em que o alquil é opcionalmente substituído com umaril.

Qualquer uma e cada definição individual de R8 e R9aqui apresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R100 R2, R200R4, R5 B, B1 e BG aqui apresentada.

R10:

Em um aspecto dos compostos mencionados anteriormente,R10 é

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) haloalquil,

5) OR7,

6) NR8R9 ou

7) SR7 ;

em que R7, R8, e R9 são como aqui definidos.Em outro aspecto dos compostos mencionadosanteriormente, R10 é

1} halogênio ou

2) OC1-C6 alquil.

Qualquer uma e cada definição individual de R10 aquiapresentada pode ser combinada com qualquer uma e cadadefinição individual de Núcleo, A, A1, n, R1, R100, R2, R200,R4, R5, B B1 e BG aqui apresentada.

Dessa forma, quando A e A1 são CH2, então Q e Q1 sãoselecionados independentemente de:

<formula>formula see original document page 44</formula>

A presente invenção tamJoèm engioJoa um ísômero,enantiômero, diastereoisômero ou tautômero de um compostorepresentado pela Fórmula I:

<formula>formula see original document page 44</formula>

ou um sal deste,em que:r é 1;

m é O, 1 ou 2;é NH, 0 ou S;

A e A1 são selecionados independentemente

1) -CH2- ou

2) -C(O)-;

B e B1 são independentemente Ci-Ce alquil;BG é:

1) -X-L-X1- ou

<formula>formula see original document page 45</formula>

X e x* sao selecionados independentemente

<formula>formula see original document page 45</formula><formula>formula see original document page 46</formula>

L é selecionado de:

1) -C1-C10 alquil-,

2) -C2-C6 alquenil-,

3) -C2-C4 alquinil-,

4) -C3-C7 cicloalquil-,

5) -fenil-,

6) -bifenil-,

7) -heteroaril-,

8) -heterociclil-,

9) -C1-C6 alquil-(C2-C6 alquenil) - Ci-C6 alquil-,

10) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil)-C1-C6 alquil,

II) -C1-C6 alquil-(C3-C7 CicloalquiD-C1-C6 alquil, 12) -C1-C6 alquil -fenil-C1-C6 alquil,

13) -C1-C6 alquil-bifenil-Ci-Ce alquil,

14) -C1-C6 alquil-heteroaril-Ci-Ce alquil,

15) -C1-C6 alquil Iieterociclil-C1-C6 alquil ou

16) -C1-C6 alquil-0-Ci-Ce alquil;

R1, R100 R2 e R200 são selecionados independentemente

de:

1) H ou

2) C1-C6 alquil opcionalmente substituído com um oumais substituintes R6;

Q e Q1 são, cada um independentemente, NR4R5;

R4 e R5 são, cada um independentemente:

1) H,

2) haloalquil,

3) <—C1-C6 alquil,

4) <—C2-C6 alquenil,5) <—C2-C4 alquinil,

6) <—C3-C7 cicloalquil,

7) <— C3-C7 cicloalquenil,

8) <-aril,

9) «—heteroaril,

10) «—heterociclil,

11) «—heterobiciclil,

12) <—C (0) -R11,

13) -(-C(O)O-R11,

14) <-C( =Y) NR8R9 ou

15) <-S (O)2-R11,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes

R10;

R6 é:

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) haloalquil,

5) C1-C6 alquil,

6) C2-C6 alquenil,

7) C2-C4 alquinil,

8) C3-C7 cicloalquil,

9) C3-C7 cicloalquenil,

10) aril,

11) heteroaril,

12) heterociclil,

13) heterobiciclil,14) OR7,15) S(O)m,R7,16) NR8R9,17) NR8S (O) sR11,18) COR7,19) C(O)OR7,20) CONR8R9,21) S (O) 2NR8R922) OC(O)R7,23) OC(O) Y-R11,24) SC(O)R7 OU25) NC(Y)NR8R9,

em que oaril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10;

R7 é:

1) H,

2) haloalquil,

3) C1-C6 alquil,

4) C2-C6 alquenil,

5) C2-C4 alquinil,

6) C3-C7 cicloalquil,

7) C3-C7 cicloalquenil,

8) aril,

9) heteroaril,

10) heterociclil,

11) heterobiciclil,

12) R8R9NCi=Y) ou

13) C1-C6 alquil-C2-C4 alquenil ou

14) C1-C6 alquil-C2-C4 alquinil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes .R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais R10;

R8 e R9 são, cada um independentemente:

1) H,

2) haloalquil,

3) C1-C6 alquil,

4) C2-C6 alquenil,

5) C2-C4 alquinil,

6) C3-C7 cicloalquil,

7) C3-C7 cicloalquenil,

8) aril,

9) heteroaril,

10) heterociclil,

11) heterobiciclil,

12) C(O)R11,

13) C(O)Y-R11 ou

14) S(O)2-R11,

R10 é:

1) halogênio,2) NO2,

3) CN,

4) B (OR13) (OR14) ,

5) Ci-C6 alquil,

6) C2-Cs alquenil,

7) C2-C4 alquinil,

8) C3-C7 cicloalquil,

9) C3-C7 cicloalquenil,

10 haloalquil,

11 OR7,

12 NR8R9,

13 SR7,

14 COR7,

15 C(O)O R7,

16 S(O)mR7,

17 CONR8R9,

18 S (O) 2NR8R9,

19 aril,

20 heteroaril,

21 heterociclil ou

22 heterobiciclil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil ecicloalquenil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R6; e

R11 é:

1) haloalquil,

2) C1-C6 alquil,

3) C2-C6 alquenil,

4) C2-C4 alquinil,

5) C3-C7 cicloalquil,6) C3-C7 cicloalquenil,

7) aril,

8) heteroaril,

9) heterociclil ou

10) heterobiciclil,

Em um subconjunto dos compostos de Fórmula 1,especificamente nos compostos de Fórmula lb,em que

n= 1;

A e A1 são C=O,

B e B1 são independentemente Ci-C4 alquil;

BG é: -X-L-X1 ou

<formula>formula see original document page 51</formula>

X e X1 são selecionados independentemente de:

<formula>formula see original document page 51</formula>

Le seiecionaao de:1) -C1-C10 alquil-,

2) -fenil-,

3) -bifenil-,

4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,

5) -CH2-fenil-CH2-,

6) -CH2-bifenil-CH2-ou

7) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;

Q e Q1 são ambos NR4R5;

R4 é H; e

R5 é selecionado de:

1) <—C3-C7 cicloalquil,

2) <—C3-C7 cicloalquenil,

3) <-aril,

4) <—heteroaril,

5) <—heterociclil ou

6) <—heterobiciclil.

Em outro subconjunto dos compostos descritos acima,A e A1 são C=O,

B e B1 são independentemente C1-C4 alquil;

BG é: -X-L-X1; OU

<formula>formula see original document page 52</formula><formula>formula see original document page 53</formula>

R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q e Q1 são ambos NR4R5;R4 é H; e

<formula>formula see original document page 53</formula>

Em um subconjunto alternativo dos compostos de Fórmulaespecificamente nos compostos de Fórmula la, em que:n= 1;

A e A1 são CH2;

B e B1 são independentemente Ci-C4 alquil;BG é: -X-L-X1; OU

<formula>formula see original document page 53</formula>

X e X1 são selecionados independentemente de:

<formula>formula see original document page 53</formula>

L é selecionado de:

1) -Ci-C10 alquil-,

2) -fenil-,

3) -bifenil-,

4) -CH2- (C2-C4 alquinil)-CH2-,

5) -CH2-fenil-CH2-,

6) -CH2-bifenil 1 -CH2- ou7) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;

R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q e Q1 são ambos NR4R5;R4 é:

1) H,

2) <—C (O) -R11,

3) <-C(O)O-R11 ou

4) <—S (O) 2-R11 e

R5 é C1-C6 alquil substituído com um fenil; em que R11 é como aqui definido;

R11 é:

1) haloalquil,

2) C1-C6 alquil,

3) aril,

4) heteroaril, ou

5) heterociclil,

em que o alquil é opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6; e em que o aril, heteroaril eheterociclil são substituídos com um substituinte R10; em que R6 e R10 são como aqui definidos;

R6 é:

1) halogênio,

2) aril ou

3) NR8R9,

em que o aril é opcionalmente substituído com um

substituinte R10;

em que R8, R9 e R10 são como aqui definidos;R8 e R9 são, cada um independentemente:

1) H,

2) haloalquil,3) Ci-C6 alquil,

4) C2-C6 alquenil,

5) C2-C4 alquinil,

6) C3-C7 cicloalquil ou

7) C3-C, cicloalquenil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;em que os substituintes R6 são como aqui definidos; e

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) haloalquil,

5) OR7,

6) NR8R9 OU

7) SR7 ;

em que R7, R8 e R9 são como aqui definidos.Em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente,n= 1;

A e A1 são CH2;

B e B1 são independentemente Ci-C4 alquil;BG é: -X-L-X1 OU

<formula>formula see original document page 55</formula>

X e X1 são selecionados independentemente de:1) O,

<formula>formula see original document page 55</formula><formula>formula see original document page 56</formula>

L é selecionado de:

1) -Ci-Cio alquil-,

2) -fenil-,

3) -bifenil-,

4) -CH2- (C2-C4 alquinil)-CH2-,

5) -CH2-fenil-CH2-,

6) -CH2-Mfenil-CH2- ou

7) -C1-C6 alquil-0-C1-C6 alquil;

R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q e Q1 são ambos NR4R5;

R4 é:

1) H,

2) <—C (O) -R11,

3) <—C (O) O-R11 ou

4) <-S (O)2-R11; e

R5 é: ^^

em que R é como aqui definido;

R11 é:

1) haloalquil,

2) Ci-C6 alquil opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6 ou

3) fenil opcionalmente substituído com um substituinteR10;

em que o R6 e os substituintes R10 são como aquidefinidos;R6 é:

1) halogênio,

2) fenil ou

3) NR8R9,

em que o fenil é opcionalmente substituído com umsubstituinte R10;

em que R8 e R9 são como aqui definidos;R8 e R9 são, cada um independentemente:

1) H ou

2) C1-C6 alquil,

em que o alquil é opcionalmente substituído com umaril; e

R10 é

1) halogênio ou

2) OCi-C6 alquil.

Ainda em outro subconjunto dos compostos mencionadosanteriormente,n= 1;

A e A1 são CH2;

B e B1 são independentemente C1-C4 alquil;BG é: -X-L-X1 ou

<formula>formula see original document page 57</formula>

X e X1 são selecionados independentemente de:

1) O,

<formula>formula see original document page 57</formula><formula>formula see original document page 58</formula>

L é selecionado de:

1) -C1-C10 alquil-,

2) -fenil-,

3) -bifenil-,

4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,

5) -CH2-fenil-CH2- ,

6) -CH2-bifenil-CH2- ou

7) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;

R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3; e

Q e Q1 são selecionados independentemente de:Em um aspecto da presente invenção, os compostos dapresente invenção também podem ser representados pelaFórmula 2, na qual M1 e M2 representam domínios de ligaçãoBIR independentes.

<formula>formula see original document page 59</formula>

em que n, R1, R2i R100, R200 i A, A1, Q, Q1, B, B1 e BGsão como aqui definidos, e a linha pontilhada representa alinha divisória hipotética para a comparação dossubstituintes associados a M1 e M2.

Em um subconjunto de compostos de Fórmula 2, M1 éigual a M2.

Em um subconjunto alternativo de compostos de Fórmula2, M1 é diferente de M2.Ainda em outro subconjunto, B é igual a B1.

Ainda em outro subconjunto, B é diferente de B1.Aqueles habilitados na técnica reconhecerão que quandoM1 e M2 forem iguais, os substituintes R1, R2, R4, R5, R6,R7, R8, R9, R10, R11, R13, R14, m, p, Y, A, Q e B em M1 terão omesmo significado que substituintes R100, R200, R4, R5, R6,R7, R8, R9, R10, R11, R13, R14, m, p, Y, A1, Q1 e B1,respectivamente, em M2. Quando M1 e M2 forem diferentes,pelo menos um substituinte R1, R2, R100, R200, R4, R5, R6, R7,R8, R9, R10, R11, R13, R14, m, p, Y, A, A1, Q, Q1, B e B1 édiferente em Ml ou M2.Alternativamente, os substituintes em Ml podem serdefinidos como R17 R2, R4, R5i R6, R7, R8, R9, R10i R11, R13,R14, m, ρ, Y, A7 Q e B7 e aqueles em M2 podem ser definidos

como R100, R200 R4007 Ri pl300 pl400 m1, P\ Υ1,

500 π600 T3 700 τ-,800 π900 „1000 T3IlOO, Κ. , Κ, Κ, K ,K / -Κ. ,

Ml e Μ2 forem iguais, os substituintes R17 R27 R47 R57 R67R77 R8, R9, R10, R117 R137 R147 m, p7 Y7 A7 Q e B em Mlpoderão ter o mesmo significado que R100 7 R200 7 R400 7 R500 7R600 7 R700 7 R800 7 R900 7 R1000 7 R1100 7 R1300 7 R1400 7 m1, p\ Y17 A17 Q1e B17 respectivamente, em M2. Quando Ml e M2 foremdiferentes, pelo menos um dos substituintes mencionadosanteriormente será diferente.

Se qualquer variável, por exemplo, R6, R500 7 R107 R1000 esemelhantes, ocorrer mais de uma vez em qualquer estruturaConstituinte7 a definição da variável em cada ocorrênciaserá independente em cada outra ocorrência. Caso umsubstituinte seja ele próprio substituído com um ou maissubstituintes, deve-se entender que aqueles um ou maissubstituintes poderão ser anexados no mesmo átomo decarbono ou em átomos de carbono diferentes. Combinações desubstituintes e variáveis aqui definidos só são permitidascaso produzam compostos quimicamente estáveis.

Aqueles habilitados na técnica compreenderão que podemser selecionados padrões de substituição e substituintes emcompostos da presente invenção para fornecer compostos quesejam quimicamente estáveis e que possam ser facilmentesintetizados com o uso da química apresentada nos exemplose de técnicas químicas bem conhecidas na técnica com autilização de materiais de partida facilmente disponíveis. Deve-se entender que muitos substituintes ou gruposaqui descritos possuem equivalentes de grupos funcionais, oque significa que o grupo ou o substituinte pode sersubstituído por outro grupo ou substituinte que tenhapropriedades eletrônicas, de hibridização ou de ligaçãosimilares.

Definições

A menos que especificado de forma diferente, asseguintes definições se aplicam:

As formas no singular "um", "uma", "a" e "o" incluem as referências no plural correspondentes, a menos que ocontexto indique claramente de forma diferente.

Como aqui usado, o termo "que compreende" visa asignificar que a lista de elementos após a expressão "quecompreende" é necessária ou mandatória, mas que outros elementos são opcionais e podem ou não estar presentes.

Como aqui usado, o termo "que consiste em" visa asignificar incluindo e limitado ao que vem após a frase"que consiste em". Dessa forma, a frase "que consiste em"indica que os elementos listados são necessários ou mandatórios, e que nenhum outro elemento pode estarpresente.

Como aqui usado, o termo "alquil" visa a incluirgrupos hidrocarboneto alifáticos saturados de cadeia tantoramificada quanto linear que possuem o número especificado de átomos de carbono, por exemplo, C1-C10, como em C1-C10alquil, e é definido como incluindo grupos que possuem 1,2,3, 4, 5,6, 7, 8, 9 ou 10 carbonos em um arranjo linear ouramificado, e C1-C6, como em C1-C6 alquil, é definido comoincluindo grupos que possuem 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 carbonos em um arranjo linear ou ramificado, e C1-C4, como em C1-C4alquil, é definido como incluindo grupos que possuem 1, 2,3, ou 4 carbonos em um arranjo linear ou ramificado.Exemplos de C1-C6 alquil e Ci-C4 alquil, como definidosacima, incluem, sem limitação, metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, t-butil, i-butil, pentil e hexil.

Como aqui usado, o termo "alquenil" visa a significargrupos hidrocarboneto insaturados de cadeia linear ouramificada que possuem em seu interior o númeroespecificado de átomos de carbono, e nos quais pelo menosdois dos átomos de carbono estão ligados uns aos outros poruma ligação dupla, e que possuem regioquimica E ou Z ecombinações destas. Por exemplo, C2-C6, como em, C2-C6alquenil, é definido como incluindo grupos que possuem 1,2, 3, 4, 5 ou 6 carbonos em um arranjo linear ouramificado, pelo menos dois dos átomos de carbono sendoligados em conjunto por uma ligação dupla. Exemplos de C2-C6 alquenil incluem etenil (vinil), 1-propenil, 2-propenil,1-butenil e semelhantes.

Como aqui usado, o termo "alquinil" visa a significargrupos hidrocarboneto de cadeia linear, insaturados, quepossuem em seu interior o número especificado de átomos decarbono, e nos quais pelo menos dois átomos de carbonoestão ligados em conjunto por uma ligação tripla. Porexemplo, C2-C4, como em, C2-C4 alquinil, é definido comoincluindo grupos que possuem 2, 3 ou 4 átomos de carbono emuma cadeia, pelo menos dois dos átomos de carbono sendoligados em conjunto por uma ligação tripla. Exemplos dessesgrupos alinil incluem etinil, 1-propinil, 2-propinil esemelhantes.

Como aqui usado, o termo "cicloalquil" visa asignificar um grupo hidrocarboneto monocíclico saturadoalifático que possui em seu interior o número especificadode átomos de carbono, por exemplo, C3-C7, como em C3-C7cicloalquil, é definido como incluindo grupos que possuem3, 4, 5, 6 ou 7 carbonos em um arranjo monocíclico.Exemplos de C3-C7 cicloalquil, como definido acima,incluem, sem limitação, ciclopropil, ciclobutil,ciclopentil, ciclohexil e cicloheptil.

Como aqui usado, o termo "cicloalquenil" visa asignificar um grupo hidrocarboneto monocíclico saturadoalifático que possui em seu interior o número especificadode átomos de carbono, por exemplo, C3-C7, como em C3-C7cicloalquenil, é definido como incluindo grupos que possuem3, 4, 5, 6, ou 7 carbonos em um arranjo monocíclico.Exemplos de C3-C7 cicloalquenil, como definidos acima,incluem, sem limitação, ciclopentenil, e ciclohexenil.

Como aqui usado, o termo "halo" ou "halogênio" visa asignificar flúor, cloro, bromo e iodo.

Como aqui usado, o termo "haloalquil" visa asignificar um alquil, como definido acima, em que cadaátomo de hidrogênio pode ser sucessivamente substituído porum átomo de halogênio. Exemplos de grupos haloalquilincluem, sem limitação, CH2F, CHF2 e CF3.

Como aqui usado, o termo "aril", seja isoladamente ouem combinação com outro radical, significa um grupocarbocíclico aromático monocíclico que contém 6 átomos decarbono, que pode ainda ser fundido a um segundo grupocarbocíclico de 5 ou 6 membros que pode ser aromático,saturado ou insaturado. Aril inclui, sem limitação, fenil,indanil, 1-naftil, 2-naftil e tetrahidronaftil. Os arisfundidos podem ser conectados a outro grupo, seja em umaposição adequada no anel cicloalquil ou no anel aromático.

Por exemplo:

As setas desenhadas a partir do sistema em anelindicam que a ligação pode ser anexada a qualquer um dosátomos adequados do anel.

Como aqui usado, o termo "bifenil" visa a significardois grupos fenil ligados em conjunto em qualquer um doslocais disponíveis no anel fenil. O bifenil pode ser ligadode forma covalente a outros grupos em qualquer posiçãodisponível nos anéis fenil. Por exemplo:

Como aqui usado, o termo "heteroaril" visa asignificar um sistema em anel monocíclico ou bicíclico deaté dez átomos, em que pelo menos um anel é aromático, e

contém de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo queconsiste em O, N e S. O substituinte heteroaril pode seranexado por meio de um átomo de carbono do anel ou por umdos heteroátomos. Exemplos de grupos heteroaril incluem,sem limitação, tienil, benzimidazolil, benzo[b]tienil,furil, benzofuranil, piranil, isobenzofuranil, cromenil,xantenil, 2H-pirrolil, pirrolil, imidazolil, pirazolil,piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, indolizinil,isoindolil, 3H-indolil, indolil, indazolil, purinil, 4H-quinolizinil, isoquinolil, quinolil, ftalazinil,naftiridinil, quinoxalinil, quinazolinil, cinolinil,pteridinil, isotiazolil, isocromanil, cromanil, isoxazolil,furazanil, indolinil, isoindolinil, tiazolo[4,5-b]-piridina

<formula>formula see original document page 65</formula>

e derivados fluorosceno, por exemplo:

Como aqui usado, o termo "heterociclo","heterocíclico" ou "heterociclil" visa a significar umsistema em anel não aromático de 5, 6 ou 7 membros,contendo de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo queconsiste em O, N e S. Exemplos de heterociclos incluem, semlimitação, pirrolidinil, tetrahidrofuranil, piperidil,pirrolinil, piperazinil, imidazolidinil, morfolinil,

<formula>formula see original document page 65</formula>

imidazolinil, pirazolidinil, pirazolinil e

Como aqui usado, o termo "heterobiciclo", sejaisoladamente ou em combinação com outro radical, visa asignificar um heterociclo, como definido acima, fundido aoutro ciclo, seja ele um heterociclo, um aril ou qualqueroutro ciclo aqui definido. Exemplos desses heterobiciclosincluem, sem limitação, cumarina, benzo[d][l,3]dioxol, 2,3-diidrobenzo[b] [l,4]dioxina e 3,4-diidro-2H-

benzo[b] [1,4]dioepina.Exemplos de

<formula>formula see original document page 65</formula>em que G é um anel de 5, 6 ou 7 membros queopcionalmente incorpora um ou mais heteroátomosselecionados de S, N ou O e p é 1 ou 2, e é opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes R12, incluem, massem limitação:

<formula>formula see original document page 66</formula>

Como aqui usado, o termo "heteroátomo" visa asignificar O, S ou N.

Como aqui usado, o termo "marcador detectável" visa asignificar um grupo que pode ser ligado a um composto dapresente invenção para produzir uma sonda ou a um domínioIAP BIR, de tal forma que, quando a sonda é associada aodomínio BIR, o marcador permite o reconhecimento direto ouindireto da sonda para que ela possa ser detectada, medidae quantificada.

Como aqui usado, o termo " tagr de afinidade" visa asignificar um ligante ou grupo que é ligado a um compostoda presente invenção ou a um domínio IAP BIR para permitirque outro composto seja extraído de uma solução à qual oligante ou grupo está anexado.

Como aqui usado, o termo "sonda" visa a significar umcomposto de Fórmula I que é marcado com um marcadordetectável ou com um tagr de afinidade, e que é capaz deligação, de forma covalente ou não covalente, a um domínioIAP BIR. Quando, por exemplo, a sonda estiver ligada deforma não covalente, ela poderá ser deslocada por umcomposto de teste. Quando, por exemplo, a sonda estiverligada de forma covalente, ela poderá ser usada para formaraduzidos entrecruzados, os quais podem ser quantificados einibidos por um composto de teste.

Como aqui usado, o termo "opcionalmente substituídocom um ou mais substituintes" ou seu termo equivalente"opcionalmente substituído com pelo menos um substituinte"visa a significar que o evento de circunstâncias descritosubseqüentemente pode ou não ocorrer, e que a descriçãoinclui casos nos quais o evento ou circunstância ocorre ecasos nos quais ele não ocorre. A definição visa asignificar de zero a cinco substituintes.

Caso os próprios substituintes sejam incompatíveis comos métodos sintéticos da presente invenção, o substituintepode ser protegido com um grupo protetor (PG) adequado queseja estável para as condições de reação usadas nessesmétodos. O grupo protetor pode ser removido em um pontoadequado na seqüência de reação do método para fornecer umintermediário desejado ou composto-alvo. Grupos protetoresadequados e métodos para a proteção e desproteção dediferentes substituintes com o uso desses grupos protetoresadequados são bem conhecidos por aqueles habilitados natécnica, exemplos dos quais podem ser encontrados em T.Greene e P. Wuts, "Protecting Groups in Chemical Synthesis"(3a ed.), John Wiley & Sons, NY (1999), que é aquiincorporado por referência em sua totalidade. Exemplos degrupos protetores usados neste pedido incluem, semlimitação, Fmoc, Bn7 Boc, CBz e COCF3. Em alguns casos, umsubstituinte pode ser selecionado especificamente para serreativos sob as condições de reação usadas nos métodos67/261

desta invenção. Sob essas circunstâncias, as condições dereação convertem o substituinte selecionado em outrosubstituinte que seja útil em um composto intermediário nosmétodos desta invenção ou que seja um substituinte desejadoem um composto-alvo.

As abreviações para α-aminoácidos usadas ao longodeste pedido são as seguintes:

<table>table see original document page 68</column></row><table>Como aqui usado, o termo "resíduo", quando se refereaos α-aminoácidos, visa a significar um radical derivadodo α-aminoácido correspondente por eliminação do hidroxildo grupo carbóxi e de um hidrogênio do grupo α-amino. Por5 exemplo, os termos Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser,Leu, Cys, Asn e Tyr representam os resíduos de L-glutamina,L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, L-ácidoaspártico, L-fenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteína,L-asparagina e L-tirosina, respectivamente.

Como aqui usado, o termo "indivíduo" visa a significarseres humanos e mamíferos não humanos como, por exemplo,primatas, gatos, cachorros, suínos, gado, carneiro, cabras,cavalos, coelhos, ratos, camundongo e semelhantes.

Como aqui usado, o termo "pró-fármaco" visa asignificar um composto que pode ser convertido sobcondições fisiológicas ou por solvólise em um compostobiologicamente ativo da presente invenção. Dessa forma, otermo "pró-fármaco" refere-se a um precursor de um compostoda invenção que é farmaceuticamente aceitável. Um pró-fármaco pode ser inativo ou pode exibir atividade limitadaquando administrado a um indivíduo que dele necessite, masé convertido in vivo em um composto ativo da presenteinvenção. Tipicamente, pró-fármacos são transformados invivo para gerar o composto da invenção, por exemplo, porhidrólise no sangue ou em outros órgãos por processamentoenzimático. O composto pró-fármaco freqüentemente oferecevantagens de solubilidade, compatibilidade de tecido ouliberação retardada no indivíduo (veja, Bundgard, H.,"Design of Prodrugs" (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier,Amsterdam)). A definição de pró-fármaco inclui quaisquerveículos ligados de forma covalente que liberam o compostoativo da invenção in vivo quando esse pró-fármaco éadministrado a um indivíduo. Pró-fármacos de um composto dapresente invenção podem ser preparados por modificação degrupos funcionais presentes no composto da invenção, de talforma que as modificações sejam clivadas, tanto pormanipulação rotineira quanto in vivo, em um composto dainvenção original.

Como aqui usado, o termo "veículo, diluente ouexcipiente farmaceuticamente aceitável" visa a significar,sem limitação, qualquer adjuvante, veículo, excipiente,glidante, agente adoçante, diluente, conservante, corante,agente flavorizante, tensoativo, agente umidificante,agente dispersante, agente de suspensão, estabilizante,agente isotônico, solvente, emulsificante ou agente deencapsulação como, por exemplo, lipossomo, ciclodextrinas,sistemas de liberação poliméricos de encapsulação ou matrizde polietilenoglicol, que seja aceitável para uso noindivíduo, preferivelmente seres humanos.

Como aqui usado, o termo "sal f armaceuticamenteaceitável" visa a significar sais de adição tanto ácidaquanto básica.

Como aqui usado, o termo "sal de adição ácidafarmaceuticamente aceitável" visa a significar aqueles saisque retêm a eficácia biológica e as propriedades das baseslivres, que não sejam biologicamente ou de algum outro modoindesejáveis, e que são formados com ácidos inorgânicos,tais como ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácidosulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes, eácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácidotrifluoracético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácidopirúvico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido malônico,ácido succínico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácidometanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico, e semelhantes.

Como aqui usado, o termo "sal de adição básicafarmaceuticamente aceitável" visa a significar aqueles saisque retêm a eficácia biológica e as propriedades dos ácidoslivres, que não sejam biologicamente ou de algum outro modoindesejáveis. Esses sais são preparados pela adição de umabase inorgânica ou de uma base orgânica ao ácido livre.Sais derivados de bases inorgânicas incluem, sem limitação,os sais de sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio,magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio sais esemelhantes. Sais derivados de bases orgânicas incluem, semlimitação, sais de aminas primária, secundárias eterciárias, aminas substituídas, incluindo aminassubstituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas eresinas básicas de troca iônica, por exemplo,isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina,tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina,histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína,etilenodiamina, glicosamina, metilglucamina, teobromina,purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, resinasde poliamina e semelhantes.

Como aqui usado, o termo "ligação ao domínio BIR" visaa significar a ação de um composto da presente invençãosobre um domínio IAP BIR, que bloqueia ou diminui a ligaçãode IAPs às proteínas de ligação de BIR ou que estáenvolvido no deslocamento de proteínas de ligação de BIR deum IAP. Exemplos de proteínas de ligação de BIR incluem,sem limitação, caspases e proteínas de ligação de BIRderivadas de mitocôndrias, tais como, Smac, 0mi/WTR2A esemelhantes.

Como aqui usado, o termo "apoptose insuficiente" visaa significar um estado em que uma doença é causada oucontinua, pois células deletérias ao indivíduo não sofreramapoptose. Isso inclui, sem limitação, células cancerosasque sobrevivem em um indivíduo sem tratamento, célulascancerosas que sobrevivem em um indivíduo durante ou apóstratamento anticâncer, ou células imunológicas cuja açãorseja deletéria ao indivíduo, e inclui neutrófilos,monócitos e células T auto-reativas.

Como aqui usado, o termo "quantidade terapeuticamenteeficaz" visa a significar uma quantidade de um composto deFórmula I que, quando administrada a um indivíduo, é.suficiente para efetuar o tratamento para um estado dedoença associada à apoptose insuficiente. A quantidade docomposto de Fórmula I irá variar dependendo do composto, dacondição e de sua gravidade e da idade do indivíduo a sertratado, mas pode ser determinada rotineiramente poraqueles habilitados na técnica à luz de seus própriosconhecimentos e desta especificação.

Como aqui usado, o termo "que trata" ou "tratamento"visa a significar tratamento de um estado de doençaassociada à apoptose insuficiente, como aqui revelada, emum indivíduo, e inclui: (i) evitar a ocorrência de umadoença ou condição associada à apoptose insuficiente em umindivíduo, em particular, quando esse mamífero estápredisposto à doença ou condição, mas que ainda não foidiagnosticado como a tendo; (ii) a inibição de uma doençaou condição associada à apoptose insuficiente, ou seja, ainterrupção do seu desenvolvimento; ou (iii) o alívio deuma doença ou condição associada â apoptose insuficiente,ou seja, a produção da regressão da condição.

Como aqui usado, o termo "que trata o câncer" visa asignificar a administração de uma composição farmacêuticada presente invenção a um indivíduo que sofre de câncer,preferivelmente um ser humano, para causar um alívio docâncer por morte, inibição do crescimento ou por inibiçãode metástases das células cancerosas.

Como aqui usado, o termo "que evita a doença" visa asignificar, no caso de câncer, a administração pós-cirúrgica, pós-quimioterapia ou pós-radioterapia de umacomposição farmacêutica da presente invenção a um indivíduoque sofreu de câncer, preferivelmente um ser humano, paraevitar o re-crescimento do câncer por morte, inibição docrescimento ou inibição de metástases de quaisquer célulascancerosas restantes. Também está incluída nessa definiçãoa prevenção de condições pró-sobrevida que levam a doençascomo asma, esclerose múltipla, e semelhantes.

Como aqui usado, o termo "efeito sinérgico" visa asignificar que o efeito obtido com a combinação doscompostos da presente invenção e um dos agentesquimioterápicos ou agonistas do receptor de morte celularda invenção é maior do que o efeito obtido com apenas umdos compostos, agentes ou agonistas ou, vantajosamente, oefeito que é obtido com a combinação dos compostos, agentesou agonistas acima é maior do que a adição dos efeitosobtidos com cada um dos compostos, agentes ou agonistasusados separadamente. Essa sinergia permite que sejam dadasdoses menores.

Como aqui usado, o termo "apoptose" ou "morte celular programada" visa a significar o processo regulado de mortecelular no qual uma célula em processo de morte exibe umconjunto de marcos bioquímicos bem caracterizado que incluiblebbing da membrana celular, encolhimento do soma dacélula, condensação de cromatina e laddering de DNA, bem como qualquer morte celular mediada por caspase.

Como aqui usado, o termo "domínio BIR" ou "BIR" é aquiusado de forma intercambiável e visa a significar umdomínio que é caracterizado por diversos resíduos deaminoácidos constantes, que incluem resíduos conservados de cisteínas e um resíduo conservado de histidina, dentro daseqüência Cys- (Xaal)2Cys- (Xaa1)16His- (Xaal)68Cys.

Tipicamente, a seqüência de aminoácidos da seqüência deconsenso é: Xaa1-Xaa1-Xaa1-Arg-Leu-Xaa1-Thr-Phe-Xaa1-Xaa1-Trp-Pro-Xaa2-Xaa 1-Xaa1-Xaa2-Xaa2-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Leu- Ala-Xaa1-Ala-Gly-Phe-Tyr-Tyr-Xaa1-Gly-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Val-Xaa1-Cys-Phe-Xaa1-Cys-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Trp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Asp-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-His-Xaa-I-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Pro-Xaa1-Cys-Xaa1-Phe-Val, em que Xaa1 équalquer aminoácido e Xaa2 é qualquer aminoácido ou está ausente. Preferivelmente, a seqüência é substancialmenteidêntica a uma das seqüências do domínio BIR aquifornecidas para XIAP, HIAPl ou HIAP2.

Os resíduos do domínio BIR são listados abaixo (veja"Genome Biology" (2001) 1-10):

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Como aqui usado, o termo nRING finger de zinco" ou"RZF" visa a significar um domínio que possui a seqüênciade aminoácidos da seqüência de consenso: Glu-Xaal-Xaal-Xaal-Xaal-Xaal-Xaa-1-Xaa2-Xaal-Xaal-Xaal-Cys-Lys-Xaa3-Cys-Met-Xaal-Xaal-Xaal-Xaal-Xaal-Xaa3-X-aal-Phe-Xaal-Pro-Cys-Gly-His-Xaal-Xaal-Xaal-Cys-Xaal-Xaal-Cys-Ala-Xaal-Xaa-I-Xaal-Xaal-Xaal-Cys-Pro-Xaal-Cys, em que Xaal é qualqueraminoácido, Xaa2 é Glu ou Asp e Xaa3 é Val ou Ile.

Como aqui usado, o termo "IAP" visa a significar umpolipeptídeo ou proteína, ou fragmento destes, codificadopor um gene IAP. Exemplos de IAPs incluem, sem limitação,NAIP humano ou de camundongo (Birc 1), HIAP-I (cIAP2, Birc3), HIAP-2 (cIAPl, Birc 2), XIAP (Birc 4), survivina (Birc5), livina (ML-IAP, Birc 7) , ILP-2 (Birc 8) e Apolion/BRUCE(Birc 6) (veja, por exemplo, Patentes U.S. Nos 6.107.041,6.133.437, 6.156.535, 6.541.457, 6.656.704, 6.689.562;Deveraux e Reed, Genes Dev. 13, 239-252, 1999; Kasof eGomes, J. Biol. Chem., 276, 3.238-3.246, 2001; Vucic ecols., Curr. Biol. 10, 1.359-1.366, 2000; Ashab e cols.20 FEBS Lett., 495, 56-60, 2001, cujos conteúdos são aquiincorporados por referência).

Como aqui usado, o termo "gene IAP" visa a significarum gene que codifica um polipeptídeo que possui pelo menosum domínio BIR e que é capaz de modular (inibir ou25 intensificar) apoptose em uma célula ou tecido. O gene IAPé um gene que possui cerca de 50% ou mais de identidade deseqüência de nucleotídeos para pelo menos um NAIP humano oude camundongo (Birc 1), HIAP-1 (cIAP2, Birc 3), HIAP-2(cIAP1, Birc 2), XIAP (Birc 4), survivina (Birc 5), livina(ML-IAP, Birc 7) , ILP-2 (Birc 8) e Apolion/BRUCE (Birc 6) .A região da seqüência sobre a qual a identidade é medida éuma região que codifica pelo menos um domínio BIR e umdomínio RING finger de zinco. Genes IAP de mamíferosincluem seqüências nucleotídicas isoladas de qualquer fontemamífera.

Como aqui usado, o termo "IC50" visa a significar umaquantidade, concentração ou dosagem de um composto dapresente invenção específico que obtém uma inibição de 50%de uma resposta máxima, por exemplo, o deslocamento daligação máxima da sonda fluorescente em um ensaio que medeesta resposta.

Como aqui usado, o termo "EC50" visa a significar umaquantidade, concentração ou dosagem de um composto dapresente invenção específico que obtém uma inibição de 50%da sobrevida celular.

Como aqui usado, o termo "modular" ou "modulação" visaa significar o tratamento, prevenção, supressão,intensificação ou indução de uma função ou condição queutiliza os compostos da presente invenção. Por exemplo, oscompostos da presente invenção podem modular a função de

IAP em um indivíduo aumentando, dessa forma, a apoptose, aoreduzir significativamente, ou essencialmente eliminar, ainteração de proteínas apoptóticas ativadas, por exemplo,caspase-3, 7 e 9, com os domínios BIR de IAPs mamíferos, oupor indução da perda de proteína IAP em uma célula.Como aqui usado, o termo "que aumenta a apoptose" visaa significar o aumento do número de células que sofremapoptose em certa população de células, tanto in vitroquanto in vivo. Exemplos de populações de células incluem,sem limitação, células de câncer de ovário, células decâncer de cólon, células de câncer de mama, células decâncer de pulmão, células de câncer de pâncreas ou célulasT e semelhantes. Será observado que o grau de aumento deapoptose fornecido por um composto intensificador deapoptose da presente invenção em certo ensaio irá variar,mas aqueles habilitados na técnica podem determinar amudança estatística significativa no nível de apoptose queidentifica um composto que aumenta a apoptose entãolimitada por um IAP. Preferivelmente, "aumento de apoptose"significa que o aumento no número de células que passam porapoptose é pelo menos 25%, mais preferivelmente o aumento éde 50% e, principalmente, o aumento é de pelo menos umavez. Preferivelmente, a amostra monitorada é uma amostra decélulas que normalmente passam por apoptose insuficiente(ou seja, células cancerosas). Métodos para a detecção dasalterações no nível de apoptose (ou seja, aumento ouredução) são descritos nos Exemplos, e incluem métodos quequantificam a fragmentação de DNA, métodos que quantificama translocação de fosfatoilserina do lado citoplasmáticopara o lado extracelular da membrana, a determinação daativação das caspases e métodos que quantificam a liberaçãode citocromo Ceo fator inibidor de apoptose no citoplasmapor mitocôndrias.

Como aqui usado, o termo "doença proliferativa" ou"distúrbio proliferativo" visa a significar uma doença queé causada ou que resulta em níveis inadequadamente elevadosde divisão celular, níveis inadequadamente baixos deapoptose, ou ambos. Por exemplo, cânceres como linfoma,leucemia, melanoma, câncer de ovário, câncer de mama,câncer pancreático e câncer de pulmão, e distúrbiosautoimunes são todos exemplos de doenças proliferativas.

Como aqui usado, o termo "agonista do receptor damorte" visa a significar um agente capaz de estimular porcontato direto ou indireto a resposta pró-apoptóticamediada pelos receptores de corte celular. Por exemplo, umanticorpo agonista do receptor TRAIL se ligaria ao receptorTRAIL (S) e desencadearia uma resposta apoptótica. Poroutro lado, outro agente, por exemplo, interferon-a,desencadearia a liberação de TRAIL endógeno e/ou supra-regularia os receptores TRAIL de tal forma que a respostapró-apoptótica da célula é amplificada.

Os compostos da presente invenção, ou seus saisfarmaceuticamente aceitáveis, podem conter um ou maiscentros assimétricos, eixos quirais e planos quirais epodem, dessa forma, dar origem a enantiômeros,diastereoisômeros e outras formas estereoisoméricas, epodem ser definidos em termos de estereoquímica absoluta,por exemplo, (R) - ou (S) - ou como (D) - ou (L) - paraaminoácidos. A presente invenção visa aa incluir todos osisômeros possíveis, além de suas formas racêmicas eopticamente puras. Isômeros (+) e (-), (R)- e (S)-, ou (D)-e (L) opticamente ativos podem ser preparados com autilização de sínton quiral ou reagentes quirais, ouresolvidos com o uso de técnicas convencionais como, porexemplo, HPLC de fase reversa. As misturas racêmicas podemser preparadas e, posteriormente, separadas em isômerosópticos individuais, ou esses isômeros ópticos podem serpreparados por síntese quiral. Os enantiômeros podem serresolvidos por métodos conhecidos por aqueles habilitados na técnica, por exemplo, por formação de saisdiastereoisoméricos que podem então ser separados porcristalização, cromatografia gás-líquido ou líquida, reaçãoseletiva de um enantiômero com um reagente específico parao enantiômero. Também será observado por aqueles habilitados na técnica que, quando o enantiômero desejadofor convertido em outra entidade química por uma técnica deseparação, será então necessária uma etapa adicional paraformar a forma enantiomérica desejada. Alternativamente,enantiômeros específicos podem ser sintetizados por síntese assimétrica com o uso de reagentes opticamente ativos,substratos, catalisadores ou solventes, ou por conversão deum enantiômero em outro por transformação assimétrica.

Certos compostos da presente invenção podem existir emforma Zwiteriônica, e a presente invenção inclui formas Zwiteriônicas desses compostos e misturas destas.

Utilidades

Os compostos da presente invenção são úteis comocompostos de ligação ao domínio IAP BIR e, como tal, oscompostos, as composições e o método da presente invenção incluem a aplicação às células ou aos indivíduos que sofremou que possuem uma predisposição ao desenvolvimento de umestado de doença em particular, caracterizada por apoptoseinsuficiente. Dessa forma, os compostos, as composições eos métodos da presente invenção são usados para tratar doenças/distúrbios celulares proliferativos, que incluem,sem limitação, i) câncer, ii) doença autoimune, iii)distúrbios inflamatórios, iv) proliferação induzida apósprocedimentos médicos, incluindo, sem limitação, cirurgia,angioplastia, e semelhantes.

Os compostos da presente invenção também podem serúteis no tratamento de doenças nas quais há um defeito namorte celular programada ou no maquinário apoptótico(TRAIL, FAS, apoptossomo), por exemplo, esclerose múltipla,asma, arteriosclerose, inflamação, autoimunidade, esemelhantes.

0 tratamento envolve a administração a um indivíduoque dele necessita de um composto da presente invenção ou.de um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou de umacomposição farmacêutica que compreende um veículofarmacêutico e uma quantidade terapeuticamente eficaz de umcomposto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamenteaceitável deste.

Em particular, os compostos, as composições e osmétodos da presente invenção são úteis para o tratamento decâncer, incluindo tumores sólidos como carcinomas de pele,de mama, cérebro, do pulmão, do testículo, e semelhantes.Cânceres que podem ser tratados pelos compostos,composições e métodos da invenção incluem, sem limitação,os seguintes:

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Os compostos da presente invenção, ou seus saisfarmaceuticamente aceitáveis ou seus pró-fármacos, podemser administrados na forma pura ou em uma composiçãofarmacêutica adequada, e ela pode ser realizada através dequalquer um dos modos aceitos da prática farmacêuticaGalênica.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas por mistura de um composto da presenteinvenção com um veículo, diluente ou excipiente apropriadofarmaceuticamente aceitável, e podem ser formuladas empreparações nas formas sólida, semi-sólida, líquida ougasosa, por exemplo, como comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, pomadas, soluções, supositórios, injeções,inalantes, géis, microesferas e aerossóis. As vias deadministração típicas dessas composições farmacêuticasincluem, sem limitação, as vias oral, tópica, transdérmica,por inalação, parenteral (injeções subcutâneas, intravenosas, intramuscular, injeção intra-esternal outécnicas de infusão), sublingual, ocular, retal, vaginal eintranasal. As composições farmacêuticas da presenteinvenção são formuladas de forma a permitir que osingredientes ativos nelas contidos estejam biodisponíveis com a administração da composição a um indivíduo. Ascomposições que serão administradas a um indivíduo oupaciente adquirem a forma de uma ou mais unidades dedosagem, em que, por exemplo, um comprimido pode ser umaúnica unidade de dosagem, e um recipiente de um composto da presente invenção na forma de aerossol pode conter diversasunidades de dosagem. Os reais métodos de preparação dessasformas de dosagem são conhecidos, ou ficarão evidentes paraaqueles habilitados nessa técnica; por exemplo, veja"Remington's Pharmaceutical Sciences", 18a Ed., (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). A composição a seradministrada conterá, em qualquer caso, uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto da presenteinvenção, ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste,para tratamento de um estado de doença, como descritoacima.

Uma composição farmacêutica da presente invenção podeestar na forma de um sólido ou um líquido. Em um aspecto,o(s) veículo(s) é particulado e, portanto, as composiçõesestão, por exemplo, na forma de comprimido ou pó. O(s)veículo (s) pode ser líquido, com as composições sendo, porexemplo, um xarope oral, um líquido injetável ou umaerossol, que é útil, por exemplo, para administração porinalação.

Para administração oral, a composição farmacêuticaestá preferivelmente na forma sólida ou líquida, em queformas semi-sólidas, semilíquidas, em suspensão e gel estãoincluídas dentro das formas aqui consideradas como sólidasou líquidas.

Como uma composição sólida para administração oral, acomposição farmacêutica pode ser formulada em um pó,grânulo, comprimido compactado, pílula, cápsula, goma demascar, wafer ou forma semelhante. Essa composição sólidaconterá tipicamente um ou mais diluentes inertes ouveículos comestíveis. Além disso, um ou mais dos seguintespodem estar presentes: aglutinantes, tais comocarboximetilcelulose,etil celulose, celulosemicrocristalina, goma tragacanto ou gelatina; excipientes,tais como amido, lactose ou dextrinas, agentesdesintegrantes, tais como ácido algínico, alginato desódio, Primogel, amido de milho, e semelhantes;lubrificantes, tais como estearato de magnésio ou Sterotex;glidantes, tais como dióxido coloidal de silício; agentesadoçantes, tais como sacarose ou sacarina; um agenteflavorizante como, por exemplo, menta, salicilato de metilaou flavorizante de laranja; e um agente corante.

Quando a composição farmacêutica estiver na forma deuma cápsula, por exemplo, uma cápsula de gelatina, elapoderá conter, além dos materiais do tipo acima, um veículolíquido como, por exemplo, polietileno glicol ou óleo, porexemplo, óleo de soja ou vegetal.

A composição farmacêutica pode estar na forma de umlíquido, por exemplo, um elixir, xarope, solução, emulsãoou suspensão. 0 líquido pode ser para administração oral oupara liberação por injeção, por exemplo. Quando destinada àadministração oral, a composição preferida irá conter, alémdos presentes compostos, um ou mais de: um agente adoçante,conservantes, um agente corante e flavorizante. Em umacomposição destinada a ser administrada por injeção, podeser incluído um ou mais um tensoativo, conservante, agenteumidificante, agente dispersante, agente de suspensão,tampão, estabilizante e agente isotônico.

As composições farmacêuticas líquidas da presenteinvenção, sejam elas soluções, suspensões ou outra formasemelhante, podem incluir um ou mais dos seguintesadjuvantes: diluentes estéreis, tais como água parainjeção, solução salina, preferivelmente soro fisiológico,solução de Ringer, cloreto de sódio isotônico, óleos fixos,por exemplo, mono- ou diglicerídeos sintéticos que podemservir como solvente ou meio de suspensão, polietilenoglicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes;agentes antibacterianos, tais como álcool benziIico oumetil parabeno; antioxidantes, tais como ácido ascórbico oubissulfito de sódio; agentes quelantes, tais como ácidoetilenodiamina tetra-acético; tampões, tais como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para ajuste da tonicidadecomo, por exemplo, cloreto de sódio ou dextrose. Apreparação parenteral pode ser comercializada em ampolas,seringas descartáveis ou frascos feitos de vidro ouplástico de múltiplas doses. Uma composição farmacêutica injetável é preferivelmente estéril.

Uma composição farmacêutica liquida da presenteinvenção usada para administração parenteral ou oral deveconter uma quantidade de um composto da presente invençãode forma que seja obtida uma dosagem adequada. Tipicamente,essa quantidade é pelo menos 0,01% de um composto dapresente invenção na composição. Quando destinada àadministração oral, essa quantidade pode variar para estarentre 0,1 e cerca de 70% do peso da composição. Para usoparenteral, as composições e preparações de acordo com a presente invenção são preparadas de modo que uma unidade dedosagem parenteral contenha entre 0,01 a 1% por peso docomposto da presente invenção.

A composição farmacêutica da presente invenção podeser usada para administração tópica, quando então o veículo pode compreender adequadamente uma base de solução,emulsão, pomada ou gel. A base, por exemplo, podecompreender um ou mais dos seguintes: vaselina, lanolina,polietileno glicóis, cera de abelhas, óleo mineral,diluentes, tais como água e álcool, e emulsificantes e estabilizantes. Agentes espessantes podem estar presentesem uma composição farmacêutica para administração tópica.Se destinada à administração transdérmica, a composiçãopode incluir um emplastro transdérmico ou dispositivo deiontoforese. Formulações tópicas podem conter umaconcentração do composto da presente invenção de cerca de0,1 a cerca de 10% p/v (peso por volume unitário).

A composição farmacêutica da presente invenção podeser usada para administração retal para o tratamento, porexemplo, de câncer de cólon, na forma, por exemplo, de umsupôsitório, que derreterá no reto, liberando o fármaco. Acomposição para administração retal pode conter uma baseoleaginosa como excipiente não irritante adequado. Essasbases incluem, sem limitação, lanolina, manteiga de cacau epolietileno glicol.

A composição farmacêutica da presente invenção podeincluir vários materiais que modificam a forma física deuma unidade de dosagem sólida ou líquida. Por exemplo, acomposição pode incluir materiais que formam umrevestimento em torno dos ingredientes ativos. Os materiaisque formam o revestimento são tipicamente inertes, e podemser selecionados, por exemplo, de açúcar, goma-laca eoutros agentes de revestimento entérico. Alternativamente,os ingredientes ativos podem ser envolvidos em uma cápsulade gelatina.

A composição farmacêutica da presente invenção naforma sólida ou líquida pode incluir um agente que se ligaao composto da presente invenção e, dessa forma, ajuda aliberação do composto. Agentes adequados que podem atuarnessa capacidade incluem, sem limitação, um anticorpomonoclonal ou policlonal, uma proteína ou um lipossomo.A composição farmacêutica da presente invenção podeconsistir em unidades de dosagem que podem seradministradas como um aerossol. 0 termo "aerossol" é usadopara representar vários sistemas que variam daqueles de natureza coloidal a sistemas que consistem em embalagenspressurizadas. A liberação pode ser por um gás liqüefeitoou Comprimido7 ou por um sistema de bomba adequado quelibera os ingredientes ativos. Aerossóis de compostos dapresente invenção podem ser liberados em sistemas de fase única, bifásicos ou trifásicos a fim de liberar o(s)ingrediente(s) ativo(s). A liberação do aerossol inclui osrecipientes, ativadores, válvulas, sub-recipientes, esemelhantes necessários, os quais, juntos, formam um kit.Aqueles habilitados na técnica podem determinar, sem experimentação desnecessária, aerossóis preferidos.

As composições farmacêuticas da presente invençãopodem ser preparadas por metodologia bem conhecida natécnica farmacológica. Por exemplo, uma composiçãofarmacêutica destinada a ser administrada por injeção pode ser preparada por mistura de um composto da presenteinvenção com água destilada, estéril, de modo a formar umasolução. Pode ser adicionado um tensoativo para facilitar aformação de uma solução ou suspensão homogênea. Tensoativossão compostos que interagem de forma não covalente com o composto da presente invenção a fim de facilitar adissolução ou suspensão homogênea do composto no sistema deliberação aquoso.

Os compostos da presente invenção, ou seus saisfarmaceuticamente aceitáveis, são administrados em uma quantidade terapeuticamente eficaz, a qual irá variar,dependendo de diversos fatores, incluindo a atividade docomposto específico empregado; a estabilidade metabólica ea duração da ação do composto; a idade, peso corporal,saúde geral, sexo e dieta do paciente; o modo e o momentode administração; a taxa de excreção; a combinação defármacos; a gravidade do distúrbio ou condição emparticular; e o indivíduo que se submete à terapia.Geralmente, uma dose diária terapeuticamente eficaz podeser de cerca de 0,1 mg a cerca de 40 mg/kg de peso corporalpor dia ou duas vezes ao dia de um composto da presenteinvenção, ou de um sal farmaceuticamente aceitável deste.Terapia combinada

Os compostos da presente invenção, ou saisfarmaceuticamente aceitáveis destes, também podem seradministrados simultaneamente, antes ou após aadministração de um ou mais dos agentes terapêuticosdescritos abaixo. Essa terapia combinada pode incluir aadministração de uma única formulação de dosagemfarmacêutica que contém um composto da presente invenção eum ou mais agentes adicionais citados abaixo, bem como aadministração do composto da presente invenção e cadaagente adicional em sua própria formulação de dosagemfarmacêutica separada. Por exemplo, um composto da presenteinvenção e um agente quimioterápico, por exemplo, taxol(paclitaxel), taxotere, etoposida, cisplatina, vincristina,vinblastina, e semelhantes, podem ser administrados aopaciente em conjunto em uma composição de dosagem única, oucada agente pode ser administrado em formulações de dosagemoral separadas ou por meio de injeção intravenosa. Quandoforem usadas formulações de dosagem separadas, os compostosda presente invenção e um ou mais agentes adicionaispoderão ser administrados essencialmente ao mesmo tempo, ouseja, concomitantemente, ou em momentos separadamenteintercalados, ou seja, seqüencialmente; entende-se que aterapia combinada inclui todos esses regimes. Além disso,esses compostos podem ter uma ação sinérgica com moléculasque podem estimular a via apoptótica do receptor de mortecelular de uma forma direta ou indireta; por exemplo, oscompostos da presente invenção podem ser usados emcombinação com TRAIL solúvel ou com qualquer agente quepossa causar um aumento do nível circulante de TRAIL, porexemplo, interferon-alfa, BCG, ou através radiação.

Dessa forma, a presente invenção também engloba o usodos compostos da presente invenção em combinação comradioterapia ou um ou mais agentes adicionais como, porexemplo, aqueles descritos em WO 03/099211(PCT/US03/15861), que é aqui incorporada por referência.

Exemplos desses agentes adicionais incluem, semlimitação, a) um modulator do receptor de estrogenio,b) um modulator do receptor de androgenio,c) um modulator do receptor de androgenio,d) um agente citotoxico,e) um agente antiproliferativo,f) um inibidor da prenil-proteina transferase,g) um inibidor da HMG-CoA redutase,h) um inibidor da HIV protease,i) um inibidor da transcriptase reversa,k) um inibidor da angiogenese,1) um agnoista de PPAR-y,m) um agonista de PPAR-δ,

n) um inibidor de resistência a multifármacosinerente,

o) um agente antiemético,

p) um agente útil no tratamento de anemia,

q) agentes úteis no tratamento de neutropenia,

r) um fármaco de estimulação imunológica.

s) um inibidor de proteossoma como, por exemplo,Velcade e MG132 (7-Leu-Leu-aldehyde) (veja He e cols. EmOncogene (2004) 23, 2.554-2.558);

t) um inibidor de HDAC, por exemplo, butirato desódio, butirato de fenila, ácidos hidroxâmicos,tetrapeptideo ciclina e semelhantes (veja Rosato e cols.Molecular Câncer Therapeutics 2003, 1.273-1284);

u) um inibidor da atividade quimotripsina-Iike noproteossoma;

v) inibidores de E3 ligase;

w) um modulador do sistema imunológico como, porexemplo, sem limitação, interferon-alfa ou BCG, que possainduzir a liberação de citocinas, por exemplo, asinterleucinas, TNF, ou induzir a liberação de ligantes doreceptor de morte celular como, por exemplo, TRAIL;

x) um modulador de receptores de morte celular TRAIL eagonistas de TRAIL como, por exemplo, os anticorposhumanizados HGS-ETRl e HGS-ETR2; e

Combinações adicionais também podem incluir agentesque reduzem a toxicidade dos agentes mencionadosanteriormente, por exemplo, toxicidade hepática, toxicidadeneuronal, nefrotoxicidade, e semelhantes.

Em um exemplo, a co-administração de um dos compostosde Fórmula I da presente invenção com um agonista doreceptor de morte celular como, por exemplo, TRAIL, porexemplo, uma pequena molécula ou um anticorpo que mimetizaTRAIL, pode produzir um efeito sinérgico vantajoso. Alémdisso, os compostos da presente invenção podem ser usadosem combinação com quaisquer compostos que causam um aumentodos níveis circulantes de TRAIL.

Alcalóides de vinca e compostos relacionados

Alcalóides de vinca que podem ser usados em combinaçãocom os oligômeros de nucleobase da invenção para otratamento de câncer e de outras neoplasias incluemvincristina, vinblastina, vindesina, vinflunina,vinorelbina e anidrovinblastina.

Dolastatinas são oligopeptídeos que primariamenteinterferem com tubulina no domínio de ligação do alcalóidede vinca. Esses compostos também podem ser usados emcombinação com os compostos da invenção para o tratamentode câncer e de outras neoplasias. Dolastatinas incluemdolastatina-10 (NCS 376128), dolastatina-15, ILX651, TZT-1027, simplostatina 1, simplostatina 3 e LU103793(cemadotina).

Criptoficinas (por exemplo, criptoficina 1 ecriptoficina 52 (LY355703)) se ligam à tubulina dentro dodomínio de ligação do alcalóide de vinca e induzeminterrupção de G2/M e apoptose. Qualquer um dessescompostos pode ser usado em combinação com os compostos dainvenção para o tratamento de câncer e de outrasneoplasias.Outros compostos que rompem o microtúbulo que podemser usados em conjunto com os compostos da invenção para otratamento de câncer e de outras neoplasias são descritosnas Patentes U.S. Nos 6.458.765, 6.433.187, 6.323.315,6.258.841, 6.143.721, 6.127.377, 6.103.698, 6.023.626,5.985.837, 5.965.537, 5.955.423, 5.952.298, 5.939.527,5.886.025, 5.831.002, 5.741.892, 5.665.860, 5.654.399,5.635.483, 5.599.902, 5.530.097, 5.521.284, 5.504.191,4.879.278, e 4.816.444, e nas publicações de pedidos depatentes U.S. Nos 2003/0153505 Al, 2003/0083263 Al e2003/0055002 Al, cada um deles aqui incorporado porreferência.

Taxanos e outros compostos estabilizantes de microtúbulos

Taxanos como, por exemplo, paclitaxel, docetaxel, RPR10988IA, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T 101187, BMS-275183, BRT216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 e 1DN5390, podem ser usadosem combinação com os compostos da invenção para otratamento de câncer e de outras neoplasias. Análogos detaxano (por exemplo, BMS-184476, BMS-188797) e não taxanos

funcionalmente relacionados (por exemplo, epotilonas (porexemplo, epotilona A, epotilona B (EP0906), desoxiepotilonaB, e epotilona B lactama (BMS-247550)), eleuterobina,discodermolida, 2-epi-discodermolida, 2-des-

metildiscodermolida, 5-hidroximetildiscodermolida, 19-des-aminocarbonildiscodermolida, 9(13)-ciclodiscodermolida elaulimalida) também podem ser usados nos métodos ecomposições da invenção.

Outros compostos estabilizantes de microtúbulos quepodem ser usados em combinação com os compostos da invençãopara o tratamento de câncer e de outras neoplasias sãodescritos nas Patentes U.S. Nos 6.624.317, 6.610.736,

6.605.599, 6.589.968, 6.583.290, 6.576.658, 6.515.017,

6.531.497, 6.500.858, 6.498.257, 6.495.594, 6.489.314,

6.458.976, 6.441.186, 6.441.025, 6.414.015, 6.387.927,

6.380.395, 6.380.394, 6.362.217, 6.359.140, 6.306.893,

6.302.838, 6.300.355, 6.291.690, 6.291.684, 6.268.381,

6.262.107, 6.262.094, 6.147.234, 6.136.808, 6.127.406,

6.100.411, 6.096.909, 6.025.385, 6.011.056, 5.965.718,

5.955.489, 5.919.815, 5.912.263, 5.840.750, 5.821.263,

5.767.297, 5.728.725, 5.721.268, 5.719.177, 5.714.513,

5.587.489, 5.473.057, 5.407.674, 5.250.722, 5.010.099 e

4.939.168, e nos pedidos U.S. 2003/0186965 A1, 2003/0176710

A1, 2003/0176473 A1, 2003/0144523 A1, 2003/0134883 A1,

2003/0087888 A1, 2003/0060623 A1, 2003/0045711 A1,

2003/0023082 A1, 2002/0198256 A1, 2002/0193361 A1,

2002/0188014 A1, 2002/0165257 A1, 2002/0156110 A1,

2002/0128471 A1, 2002/0045609 A1, 2002/0022651 A1,

2002/0016356 A1, 2002/0002292 A1, cada um deles aquiincorporado por referência.

Outros agentes quimioterápicos que podem seradministrados com um composto da presente invenção sãolistados na Tabela seguinte:

<table>table see original document page 95</column></row><table><table>table see original document page 96</column></row><table><table>table see original document page 97</column></row><table><table>table see original document page 98</column></row><table><table>table see original document page 99</column></row><table><table>table see original document page 100</column></row><table><table>table see original document page 101</column></row><table><table>table see original document page 102</column></row><table><table>table see original document page 103</column></row><table><table>table see original document page 104</column></row><table><table>table see original document page 105</column></row><table>

Combinações adicionais também podem incluir agentesque reduzem a toxicidade dos agentes mencionadosanteriormente como, por exemplo, a toxicidade hepática,toxicidade neuronal, nefrotoxicidade e semelhantes.

Ensaios de rastreamento

Os compostos da presente invenção também podem serusados em um método para rastrear outros compostos que seligam a um domínio IAP BIR. Em termos gerais, para o usodos compostos da invenção em um método de identificação decompostos que se ligam a um domínio IAP BIR, o IAP é ligadoa um suporte, e um composto da invenção é adicionado aoensaio. Alternativamente, o composto da invenção pode serligado ao suporte e o IAP é adicionado.Há diversas formas para se determinar a ligação de umcomposto da presente invenção ao domínio BIR. Em uma forma,o composto da invenção, por exemplo, pode ser marcado demodo fluorescente ou radioativo, e a ligação determinadadiretamente. Por exemplo, isso pode ser feito anexando-se oIAP a um suporte sólido, adicionando-se um composto dainvenção marcado de forma detectável, lavando-se o excessode reagente, e determinando-se se a quantidade do marcadordetectável presente no suporte sólido. Podem ser usadasvárias etapas de bloqueio e lavagem, que são conhecidas poraqueles habilitados na técnica.

Em alguns casos, somente um dos componentes é marcado.Por exemplo, resíduos específicos no domínio BIR podem sermarcados. Alternativamente, mais de um componente pode sermarcado com diferentes marcadores; por exemplo, utilizando-se I125 para o domínio BIR e um marcador fluorescente para asonda.

Os compostos da invenção também podem ser usados comocompetidores para o rastreamento de candidatos a fármaco oucompostos de teste adicionais. Como aqui usados, os termos"candidato a fármaco" ou "compostos de teste" são usados deforma intercambiável e descrevem qualquer molécula, porexemplo, proteína, oligopeptídeo, pequena moléculaorgânica, polissacarídeo, polinucleotídeo, e semelhantes, aser testada quanto à bioatividade. Os compostos podem sercapazes de alterar direta ou indiretamente a atividadebiológica do IAP.

Candidatos a fármaco podem incluir várias classesquímicas, embora tipicamente sejam pequenas moléculasorgânicas que possuem um peso molecular de mais de 100 emenos de cerca de 2.500 Dáltons. Agentes candidatostipicamente incluem grupos funcionais necessários para ainteração estrutural com proteínas, por exemplo, ligação dehidrogênio e ligação lipofilica, e tipicamente incluem pelomenos um grupo amina, carbonil, hidroxil, éter ou carboxil.Os candidatos a fármaco freqüentemente incluem estruturascíclicas de carbono ou heterocíclicas e/ou estruturasaromáticas ou poliaromáticas substituídas com um ou maisgrupos funcionais.

Candidatos a fármacos podem ser obtidos de diversasfontes, incluindo bibliotecas de compostos sintéticos ounaturais. Por exemplo, são disponíveis vários meios para a,síntese aleatória e direta de uma ampla gama de compostos ebiomoléculas orgânicas, incluindo a expressão deoligonucleotídeos randomizados. Alternativamente,bibliotecas de compostos naturais na forma de extratosbacterianos, fúngicos, de plantas e animais são disponíveisou facilmente produzidas. Adicionalmente, bibliotecas ecompostos naturais ou produzidos sinteticamente sãofacilmente modificados através de meios químicos, físicos ebioquímicos convencionais.

Ensaios competitivos de rastreamento podem ser feitospela combinação de um domínio IAP BIR e uma sonda, paraformar um complexo sonda:domínio BIR em uma primeiraamostra, seguida pela adição de um composto de teste de umasegunda amostra. A ligação do teste é determinada, e umamudança ou diferença na ligação entre as duas amostrasindica a presença de um composto de teste capaz de se ligarao domínio BIR e potencialmente modular a atividade de IAP.

Em um caso, a ligação do composto de teste édeterminada através do uso de ensaios de ligaçãocompetitiva. Nessa modalidade, a sonda é marcada com umrótulo de afinidade como, por exemplo, biotina. Sob certascircunstâncias, pode haver ligação competitiva entre ocomposto de teste e a sonda, com a sonda deslocando oagente-candidato.

Em um caso, o composto de teste pode ser marcado. Ocomposto de teste, ou um composto da presente invenção, ouambos, é adicionado primeiro ao domínio IAP BIR por umperíodo suficiente para permitir a formação da ligação paraformar um complexo.

A formação do complexo sonda:domínio BIR tipicamenterequer incubações entre 4°C e 40°C, por entre 10 minutos acerca de 1 hora para permitir um rastreamento de altorendimento. Qualquer excesso de reagentes é geralmenteremovido ou lavado. 0 composto de teste é então adicionado,e a presença ou ausência do componente marcado é seguida,para indicar a ligação ao domínio BIR.

Em um caso, a sonda é adicionada primeiro, seguidapelo composto de teste. O deslocamento da sonda é umaindicação de que o composto de teste está se ligando aodomínio BIR e, dessa forma, é capaz de se ligar a ele, epotencialmente modular a atividade de IAP. Qualquer um doscomponentes pode ser marcado. Por exemplo, a presença desonda na solução de lavagem indica deslocamento pelocomposto de teste. Alternativamente, caso o composto deteste seja marcado, a presença da sonda no suporte indicadeslocamento.

Em um caso, o composto de teste pode ser adicionadoprimeiro, com incubação e lavagem, seguido pela sonda. Aausência de ligação pela sonda pode indicar que o compostode teste está ligado ao domínio BIR com uma afinidade maiselevada. Dessa forma, a detecção da sonda no suporte,associada a uma ausência de ligação do composto de teste,pode indicar que o composto de teste é capaz de se ligar aodomínio BIR.

A modulação é testada por rastreamento da habilidadede um composto de teste para modular a atividade de IAP, einclui a combinação de um composto de teste com um domínioIAP BIR, como descrito acima, e a determinação de umaalteração na atividade biológica do IAP. Portanto, nessecaso, o composto de teste deve tanto se ligar ao domínioBIR (embora isso possa não ser necessário), quanto alterarsua atividade biológica, como aqui definido.

Controles positivos e controles negativos podem serusados nos ensaios. Todas as amostras de controle e deteste são processadas várias vezes para se obter resultadosestatisticamente significativos. Após a incubação, todas asamostras são lavadas para a remoção de material ligado deforma não específica, e a quantidade de sonda ligada édeterminada. Por exemplo, quando foi empregado um marcadorradioativo, as amostras podem ser acopladas em um contadorde cintilação para determinar a quantidade de compostoligado.

Tipicamente, os sinais que são detectados no ensaiopodem incluir fluorescência, transferência de energia deressonância, fluorescência resolvida por tempo,radioatividade, polarização de fluorescência, ressonânciade plasma ou quimioluminescência e semelhantes, dependendoda natureza do marcador. Marcadores detectáveis úteis narealização de ensaios de rastreamento nesta invençãoincluem um marcador fluorescente como, por exemplo,Fluoresceina, verde do Oregon, dansil, rodamina, tetrametilrodamina, vermelho texas, Eu3+'" Um marcador

quimioluminescente, por exemplo, luciferase; marcadorescolorimétricos; marcadores enzimáticos; ou radioisótopos,tais como trítio, I125 e semelhantes.

Marcadores de afinidade que podem ser úteis narealização dos ensaios de rastreamento da presente invençãoincluem biotina, poli-histidina e semelhantes.

SÍNTESE E METODOLOGIA

Métodos gerais para a síntese dos compostos dapresente invenção serão mostrados abaixo, e são reveladossimplesmente com finalidade ilustrativa, e não devem serinterpretados como limitantes dos processos para a produçãodos compostos por quaisquer outros métodos. Aqueleshabilitados na técnica observarão facilmente que estãodisponíveis vários métodos para a preparação dos compostosda presente invenção. Diversos compostos intermediáriosaqui revelados podem ser sintetizados com o uso dos métodossintéticos revelados no pedido depositado de patente U.S.número de série 11/434.166, depositado em 17 de maio de2006, cujo conteúdo integral é aqui incorporado porreferência.

O Esquema 1 ilustra a síntese de um intermediáriosintético típico representado por l(i). Exemplos de l(i)representam derivados de prolina como, por exemplo, l(ii),e derivados de 2-(aminometil)pirrolidina representados porintermediários l(iii-viii). Derivados de prolina de l(i)podem ser preparados pelo tratamento de Boc-Pro-OH comagentes de acoplamento de peptídeo típicos e uma amina,para gerar o intermediário l(ii) . O intermediário de 2-(aminometil)pirrolidina l(iii) é preparado pela condensaçãode uma amida com N-Boc-prolinal. A amina resultante podeser acilada com um cloreto ácido, anidreto ou ácidocarboxílico adequadamente ativado, por exemplo, ésteres desuccinamidil, ésteres de HOBt e semelhantes, para gerarintermediários como l(iv-vi). Os intermediários l(iv) e1 (v) apresentam grupos protetores, que podem ainda serposteriormente removidos e funcionalizados na síntese. Asulfonilação com um cloreto de sulfonila fornece l(vii).Aminoácidos adequadamente ativados, protegidos em suacadeia lateral, podem ser acoplados ao intermediário l(iii)com o uso de agentes de acoplamento de peptídeopadronizados, para gerar o intermediário l(viii); o PG podeser removido posteriormente na síntese.

de ser exemplificado pelo seguinte:

<formula>formula see original document page 111</formula>Esquema 1

Procedimento geral para a reparação de derivados de bis-alquinil de Fórmula Ig.

0 Esquema 2 ilustra um procedimento geral para apreparação de compostos bis-alquinil em ponte de fórmulaIg. PG1-Thr-OH é desprotonado com NaH e tratado com brometode propargila, para gerar o intermediário Thr 2(i) . Aativação do ácido carboxilico de 2(i) com agentes-padrão deacoplamento de peptídeo e o tratamento com o intermediáriol(i) fornece o intermediário de amida 2(ii). 0 acoplamentopeptídico de PG2(R1)N(R2)(H)CCO2H com 2 (ii) é efetuado porativação do ácido carboxilico de PG2(R1)N(R2)(H)CCO2H comagentes-padrão de acoplamento de peptídeo, seguido pelaadição de 2(ii), para gerar a amida totalmente protegida2(iii). A porção bis-alquinil em ponte é preparada porhomo-acoplamento, nas porções alquino de 2(iii) com o usode um catalisador de Cu apropriado, e subseqüentedesproteção de PG2, para gerar compostos de fórmula Ig.

<formula>formula see original document page 112</formula><formula>formula see original document page 113</formula>

Esquema 2

Procedimento geral para a reparação de compostos de FórmulaIh.

O Esquema 3 ilustra um procedimento geral para areparação de compostos derivados de di(bromometil)benzenode Fórmula I. PG1-Ser-OH é desprotonado com NaH e tratadocom 1,4-di(bromometil)benzeno, para gerar o intermediárioSer 3(i) . A ativação do ácido carboxilico de 3 (i) comagentes-padrão de acoplamento de peptídeo e o tratamentocom o intermediário l(i) fornecem o intermediário 3 (ii),que é desprotegido em PG1, para fornecer o intermediário deamida 3 (iii) . 0 acoplamento peptidico de

PG2(R1)N(R2)(H)CCO2H com 3(iii) é efetuado por ativação doácido carboxilico de PG2(R1)N(R2)(H)CCO2H com agentes-padrãode acoplamento de peptídeo, seguido pela adição de 3(iii),para gerar a amida totalmente protegida, que pode ainda serdesprotegida em PG2, para gerar compostos de fórmula Ih.

<formula>formula see original document page 113</formula><formula>formula see original document page 114</formula>

Esquema 3

Procedimento geral para a reparação de amidas simétricas defórmula I-j e I-k

0 Esquema 4 apresenta um procedimento geral para areparação de amidas simétricas de Fórmula I-f e I-g. Aativação do ácido carboxilico de PG1-Orn(PG2)-OH comagentes-padrão de acoplamento de peptídeo e o tratamentocom o intermediário l(i), seguido por desproteção de PG1,fornecem o intermediário de amida 4(i). O acoplamentopeptídico de PG3(R1)N(R2)(H)CCO2H com 4 (i) é efetuado porativação do ácido carboxilico de PG3(R1)NiR2) (H)CCO2H comagentes-padrão de acoplamento de peptídeo, seguido pelaadição de 4(i), para gerar a amida totalmente protegida4(ii). A remoção seletiva de PG2 fornece o intermediário deamina 4(iii). 0 tratamento de 4(iii) com 0,5 equivalente deum alquil ativado ou diácido aromático, seguido pordesproteção de PG37 fornece compostos de fórmula I-j e I-k,respectivamente.<formula>formula see original document page 115</formula>

Esquema 4

Procedimento geral para a reparação de compostos de fórmula

I-I

0 Esquema 5 ilustra um procedimento geral para areparação de uréias simétricas de fórmula geral 1-1. 0intermediário 4 (iii) é tratado com 0,5 equivalente detrifosgeno, ou um equivalente a trifosgeno, para gerar umintermediário uréia protegido 5(i).fornece compostos de Fórmula geral I-I

<formula>formula see original document page 116</formula>Esquema 5

Procedimento geral para a reparação de ésteres simétricos

0 Esquema 6 ilustra a preparação de ésteres simétricosde fórmula geral 1-m e I-n. Um derivado de aminoácido queexibe uma porção hidróxi em sua cadeia lateral, porexemplo, PG1-Ser(PG2)-OH, é ativado com reagentes-padrão deacoplamento de peptídeo, e tratado com l(i), e a amidaresultante é desprotegida em PG1, para fornecer ointermediário amina 6(i). A ativação do ácido carboxílicode PG3(R3)N(H)(R2)CCO2H com o uso de agentes-padrão deacoplamento de peptídeo e o tratamento do aminoácidoativado resultante com 6 (i) fornecem 6(ii). A desproteçãoseletiva de PG2 fornece o álcool intermediário 6 (iii) . 0tratamento de 6 (iii) com 0,5 equivalente de um ácidodicarboxílico ativado e a desproteção de PG3 fornecemcompostos de fórmula geral I-m e I-n.

<formula>formula see original document page 117</formula>

Esquema 6

Procedimento geral para a reparação de amidas simétricas defórmula I-o

0 Esquema 7 ilustra a preparação de amidas simétricasde fórmula geral 1-o. Um derivado de aminoácido que exibe aácido carboxílico em sua cadeia lateral, por exemplo, PG1-Glu(PG2)-OHf é ativado com reagentes-padrão de acoplamentode peptídeo e tratado com l(i), e a amida resultante édesprotegida em PG1, para fornecer o intermediário amina7(ii) . A ativação do ácido carboxílico dePG3(R3)N(R2)(H)CCO2H usando agentes-padrão de acoplamento depeptídeo, seguido por tratamento com 7(i) fornece 7(ii). Adesproteção seletiva de PG2 fornece o carboxílicointermediário ácido 7(iii). A ativação do ácido carboxílicocom agentes-padrão de acoplamento de peptídeo e otratamento com 0,5 equivalente de uma diamina fornecem ointermediário 7(iv). A desproteção de PG3 fornece compostosde fórmula geral I-o.

<formula>formula see original document page 118</formula><formula>formula see original document page 119</formula>

Esquema 7

Procedimento geral para a reparação de compostos de Fórmulali.

O Esquema 8 ilustra um procedimento geral para areparação de compostos de Fórmula li. PG1-Ser-OH édesprotonado com NaH e tratado com 2,21-bis(bromometil)-1,1'-bifenil para gerar o intermediário Ser 8 (i) . Aativação do ácido carboxílico de 8(i) com agentes-padrão deacoplamento de peptídeo e o tratamento com o intermediáriol(i) fornecem o intermediário 8(ii), que é desprotegido emPGl para gerar o intermediário de amida 8(iii) . 0acoplamento peptídico de PG2(R1)N(R2)(H)CCO2H com 3 (iii) éefetuado por ativação do ácido carboxílico dePG2(R1)N(R2)CHCO2H com agentes-padrão de acoplamento depeptídeo, seguido pela adição de 3 (ii), para gerar a amidatotalmente protegida, que pode ainda ser desprotegida em

PG para gerar compostos de fórmula Ii.

<formula>formula see original document page 119</formula><formula>formula see original document page 120</formula>

Esquema 8

Procedimento geral para a reparação de compostos de fórmula

0 Esquema 9 ilustra um procedimento geral para areparação de glioxalamidas de fórmula geral Ip. Ointermediário 4 (iii) é tratado com 0,5 equivalente decloreto de oxalila, ou um equivalente a cloreto de oxalila,para gerar um intermediário uréia protegido 9(i). A remoçãode PG3 fornece compostos de fórmula geral Ip.<formula>formula see original document page 121</formula>

Esquema 9

Procedimento geral para a reparação de compostos de fórmula

iq

A redução das ligações triplas de Compostos de fórmulageral Ig fornece compostos da fórmula geral Iq. Porexemplo, a hidrogenação de compostos de fórmula geral Igcom gás H2 na presença de um sistema catalisador como, porexemplo, Pd/C, fornece compostos de fórmula geral Ip.

<formula>formula see original document page 121</formula>Os Esquemas acima são aplicáveis a compostos dapresente invenção tanto simétricos quanto assimétricos. Ossubstituintes B, B1, A1i A, Q, Q1i R1, R100, R2, R200, R4, R5,R11, r e semelhantes são como aqui definidos.EXEMPLOS

As abreviações a seguir são usadas ao longo daespecificação:

<table>table see original document page 122</column></row><table>Pd/C: paládio sobre carbono;

TEA:

trietilamina; e

THF:

tetrahidrofurano.

1. Síntese de intermediário l-4bPrimeira etapa:

<formula>formula see original document page 123</formula>

A uma solução de N-(terc-butoxicarbonil)-L-prolina I-I(6,0 g, 30,1 mmol) em cloreto de metileno, foi adicionadafenetilamina (3,8 ml, 3 0,1 mmol). Após agitação por 1 horaem temperatura ambiente, cianoborohidreto de sódio (12,8 g,6 0,2 mmol) foi adicionado, e a mistura de reação foiagitada em temperatura ambiente de um dia para o outro.NaHCO3 aquoso e acetato de etila foram adicionados, acamada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secasobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece I-2a como um óleoincolor. MS (m/z) M + 1 = 305.

Etapa (b)

A uma solução de I-2a (6,0 g, 19,7 mmol) em cloreto demetileno, foram adicionados seqüencialmente trietilamina(5,5 ml, 39,5 mmol), 4-dimetilamino piridina (catalítica) eanidreto trifluoracético (4,2 ml, 29,6 mmol), e a misturade reação foi agitada por 3 horas em temperatura ambiente.NaHCO3 aquoso e acetato de etila foram adicionados, acamada orgânica foi separada, lavada com salmoura, secasobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece I-2b como um óleoincolor.Etapa (c)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (20 ml) foiadicionada a I-2b (7,4 g, 18,5 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A cristalização por éter fornece I-2ccomo um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 301.Segunda etapa

a)

<formula>formula see original document page 124</formula>

Etapa (a)

A uma solução de I-2d (7,2 g, 21,3 mmol) em DMF, foramadicionados seqüencialmente DIPEA (19,0 ml, 106 mmol), HOBt(4,24 g, 27,7 mmol) e HBTU (10,5 g, 27,7 mmol). Apósagitação por 5 minutos, l-2c (7,1 g, 27,7 mmol) foiadicionado, e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece o composto I-3a como umsólido branco.Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (15 ml) foiadicionada a I-3a (10,7 g, 18,0 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A cristalização por éter fornece I-3bcomo um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 440.Terceira etapa

<formula>formula see original document page 125</formula>

Etapa (a)

A uma solução de I-3b (8,9 g, 18,7 mmol) em DMF, foramadicionados seqüencialmente DIPEA (16,7 ml, 93,6 mmol),HOBt (3,7 g, 24,3 mmol), HBTU (9,2 g, 24,3 mmol). Apósagitação por 5 minutos, BOC-NMeAlaOH (4,9 g, 24,3 mmol) foiadicionado, e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece I-4a como um sólidobranco.

Etapa (b)

A uma solução de I-4a (8,7 g, 13,4 mmol) em THFresfriado até 0°C, foi adicionado LiOH 2 N (20 ml) , e areação foi agitada de um dia para o outro em temperaturaambiente. 0 PH foi ajustado até 6 com ácido cítrico 10%, eacetato de etila foi adicionado, a camada orgânica foiseparada, lavada com salmoura seca sobre MgSO4 econcentrada in vácuo. A purificação por cromatografiainstantânea fornece I-4b como um sólido branco. MS (m/z) M+ 1 = 625.

A uma suspensão de NaH (4,56 g, 114,04 mmol) em DMFseca (100 ml) resfriada até 0°C, foi adicionada em porçõesN-Boc-L-treonina (10,00 g, 45,62 mmol). Após agitação por10 minutos, brometo de propargila (10 ml) foi adicionadalentamente, e a reação foi agitada por 1 hora a 0°C. Água(500 ml) e acetato de etila (100 ml) foram adicionados, acamada orgânica foi separada, a camada aquosa foiacidifiçada até pH=5 com ácido cítrico 10%, e extraída duasvezes com acetato de etila. Os extratos orgânicoscombinados foram lavados com salmoura, secos sobre MgSO4 econcentrados in vácuo. A purificação por cromatografiainstantânea fornece l-2d como um óleo incolor.

2. Síntese do Composto 4

Primeira etapa

Etapa (a)

A uma solução de I-4b (600 mg, 1,1 mmol) em THF, foramadicionados seqüencialmente DIPEA (24 0 μΐ, 2,3 mmol) ecloreto de benzenossulfonila (160 μΐ, 2,2 mmol). A reaçãofoi agitada por 1 hora em temperatura ambiente. Água e

Síntese de

<formula>formula see original document page 126</formula>acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10% e salmoura, secasobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 2-1 como um sólidobranco.

Segunda etapa

<formula>formula see original document page 127</formula>

Etapa (a)

A uma solução de 2-1 (4 00 mg, 0,6 mmol) em acetonaseca, foram adicionados seqüencialmentetetrametiletilenodiamina (180 μΐ, 1,2 mmol) e cloreto decobre (I) (118 mg, 1,2 mmol) . A reação foi agitada de umdia para o outro em temperatura ambiente, e o solvente foiremovido in vácuo. Água e acetato de etila foramadicionados, a camada orgânica foi separada, lavada comácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca sobreMgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 2-Ia como um sólidobranco.Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em dioxano (3 ml) foiadicionada a 2-Ia (54 2 mg, 0,47 mmol) a 0°C. A solução foiagitada por 2 horas e depois concentrada in vácuo. Acristalização por éter fornece composto 4*2HC1 como umsólido branco. MS (m/z) M + 1 = 1.136.

3. Síntese do Composto 2

<formula>formula see original document page 128</formula>

Primeira etapa

A uma solução de I-4b (900 mg, 1,7 mmol) em DMF, foramadicionados seqüencialmente DIPEA (1,5 ml, 8,5 mmol), HBTU(841 mg, 2,2 mmol) e HOBt (340 mg, 2,2 mmol) . Após agitaçãopor 5 minutos, Boc-D-Tyr(Me)-OH (655 mg, 2,2 mmol) foiadicionado, e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 3-1 como um sólidobranco.

Segunda etapa

<formula>formula see original document page 128</formula>Etapa (a)

A uma solução de 3-1 (225 mg, 0,3 mmol) em acetonaseca, foram adicionados seqüencialmentetetrametiletilenodiamina (85 μΐ, 0,5 mmol) e cloreto decobre (I) (54 mg, 0,5 mmol), e a reação foi agitada de umdia para o outro em temperatura ambiente, e o solvente foiremovido in vácuo. Água e acetato de etila foramadicionados, a camada orgânica foi separada, lavada comácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca sobreMgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 3-Ia como um sólidobranco.Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (2 ml) foiadicionada a 3-la (150 mg, 0,1 mmol) a 0°C, e a solução foiagitada por 2 horas e depois concentrada in vácuo. Acristalização por éter dietílico gerou o composto 2*2HC1como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 1.210.

4. Síntese do Composto 11Primeira etapa

<formula>formula see original document page 129</formula>

A uma suspensão de NaH (1,46 g, 36,5 mmol) em DMFresfriado até 0°C, foi adicionado BOC-Ser-OH 4-1 (3,0 g,14,6 mmol) e, após agitação por 15 minutos, α, α1-Dibromo-p-xileno (2,3 g, 8,7 mmol) foi adicionado. A reação foientão agitada por 1 hora a O0C e por 15 minutos emtemperatura ambiente. Foi adicionada água, e o PH foiacidifiçado até pH 5 com HCl 1 N. Foi acrescentado acetatode etila, e a camada orgânica foi separada, lavada comsalmoura, seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. Apurificação por cromatografia instantânea fornece 4-Ia comoum sólido branco.

<formula>formula see original document page 130</formula>

Etapa (a)

A uma solução de 4-Ia (1,6 g, 3,1 mmol) em DMF, foramadicionados seqüencialmente DIPEA (1,3 ml, 7,5 mmol), HOBt(1,2 g, 7,8 mmol) e HBTU (2,9 g, 7,8 mmol). Após agitaçãopor 5 minutos, l-2c (1,7 g, 5,7 mmol) foi adicionado, e amistura de reação foi agitada de um dia para o outro emtemperatura ambiente. Água e acetato de etila foramadicionados, a camada orgânica foi separada, lavada comácido citrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca sobreMgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 4-Ib como um sólidobranco.Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (5 ml) foiadicionada a 4-Ib (1,4 g, 1,3 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A cristalização por éter fornece 4-Iccomo um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 877.

Terceira etapa<formula>formula see original document page 131</formula>

Etapa (a)

Composto 11: Xi=H

A uma solução de 4-Ic (550 mg, 0,6 mmol) em DMF, foramadicionados seqüencialmente DIPEA (550 μl, 3,1 mmol), HBTU(611 mg, 1,6 mmol) e HOBt (246 mg, 1,6 mmol). Após agitaçãopor 5 minutos, BOC-NMe-AlaOH (327 mg, 1,6 mmol) foiadicionado, e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 4-Id como um sólidobranco.Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (5 ml) foiadicionada a 4-Id (520 mg, 0,4 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A cristalização por éter fornececomposto 11*2HC1 como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 =1. 048.

5. Síntese do Composto 18Primeira etapa

<formula>formula see original document page 131</formula>Etapa (a)

A uma solução de Boc-Glu(OBn)-OH (5,55 g, 16,4 mmol)em DMF, foram adicionados seqüencialmente DIPEA (12,5 ml,71,8 mmol), HOBt (3,86 g, 28,6 mmol) e HBTU (5,43 g, 14,3mmol). Após agitação por 5 minutos, I-2c (3,04 g, 9,0 mmol)foi adicionado, e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 5-Ia como um sólidobranco.

Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (20 ml) foiadicionada a 5-Ia (5,2 g, 8,4 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A cristalização por éter fornece 5-Ibcomo um sólido branco.

Segunda etapa

Etapa (a)

A uma solução de Boc-NMe-Ala-OH (2,1 g, 10,4 mmol) emDMF, foram adicionados seqüencialmente DIPEA (10,5 ml, 60,3 mmol), HBTU (3,0 g, 9,3 mmol) e HOBt (2,0 g, 15,3 mmol).

<formula>formula see original document page 132</formula>Após agitação por 5 minutos, 5-Ib (4,7 g, 8,4 mmol) foiadicionado, e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 5-Ic como um sólidobranco.

Etapa (b)

Uma suspensão de 5-lc (1,9 g, 2,8 mmol) e Pd/C 10%(196 mg) foi agitada por 3 horas sob atmosfera dehidrogênio. A reação foi filtrada através de celite, e ofiltrado concentrado in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 5-Id como um sólidobranco.

Terceira etapa

<formula>formula see original document page 133</formula>

Composto 18.2HC1; R=H

Etapa (a)

A uma solução de 5-ld (101 mg, 0,16 mmol) em DMF,foram adicionados seqüencialmente DIPEA (200 μΐ, 1,1 mmol),HBTU (56 mg, 0,14 mmol) e HOBt (24 mg, 0,18 mmol). Apósagitação por 5 minutos, foi adicionada etilenodiamina (3,7mg, 0,06 mmol), e a mistura de reação foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia instantânea fornece 5-Ie como um sólido branco.

Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (5 ml) foiadicionada a 5-le (75 mg, 0,06 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A cristalização por éter gerou ocomposto 18-HCl como um sólido branco. MS (m/z) (M + 2) /2= 527,3.

6. Síntese do Composto 15

Primeira etapa

<formula>formula see original document page 134</formula>

Etapa (a)

Boc-L-prolina (9,36 g, 43,5 mmol), HOBt (8,0 g, 52,2mmol), EDC (10 g, 52,2 mmol) e DIPEA (30 ml, 174 mmol)foram dissolvidos em diclorometano seco (200 ml) sob N2, eagitados por 10 minutos em temperatura ambiente. 1,2,3,4-R-Tetrahidronaftilamina (6,72 g, 45,6 mmol) foi entãoadicionada, e a solução foi deixada em agitação por 24horas em temperatura ambiente. O conteúdo foi entãoadicionado a um funil separador juntamente com EtOAc elavado com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) esalmoura. A camada orgânica foi coletada, seca econcentrada sob pressão reduzida para gerar 6-la.Etapa (b)

O produto da etapa (a) foi tratado com CH2Cl2 50%/TFA(50 ml) por 1 hora em temperatura ambiente. Os voláteisforam removidos in vácuo para gerar 6-Ib como o sal de TFA.MS (m/z) M + 1 = 245.Segunda etapa

<formula>formula see original document page 135</formula>

Etapa (a)

Z-Orn(Boc)OH (2,63 g, 7,2 mmol) , HOBt (1,19 g, 7,8mmol) , HBTU (2,96 g, 7,8 mmol) e DIPEA (4,6 ml, 26 mmol)foram dissolvidos em DMF seca (12 ml) sob N2, e agitadospor 10 minutos em temperatura ambiente. O intermediário 6-Ib (3,0 g, 6,5 mmol) foi então adicionado, e a solução foideixada em agitação por 24 horas em temperatura ambiente. Oconteúdo foi então adicionado a um funil separadorjuntamente com EtOAc e lavado com ácido cítrico 10% (2x) ,NaHCO3 saturado (2x) e salmoura. A camada orgânica foicoletada, seca e concentrada sob pressão reduzida paragerar 6-lc.

Etapa (b)

O produto da etapa (a) foi tratado com 10 ml de CH2Cl250%/TFA por 1 hora em temperatura ambiente para gerar 6-Idcomo seu sal de TFA. MS (m/z) M + 1 = 493.Terceira etapa

<formula>formula see original document page 136</formula>

Etapa (a)

O intermediário 6-Id (200 mg, 0,33 mmol) , DMAP (5 mg,catalíçico) e DIPEA (230 μΐ, 1,32 mmol) foram dissolvidosem diclorometano seco (5 ml) sob N2, e cloreto detereftaloila (30 mg, 0,15 mmol) foi então acrescentado, e asolução foi agitada por 24 horas em temperatura ambiente. Oconteúdo foi então adicionado a um funil separadorjuntamente com EtOAc e lavado com ácido cítrico 10% (2x) ,NaHCO3 saturado (2x) e salmoura. A camada orgânica foicoletada, seca e concentrada sob pressão reduzida paragerar o produto 6-Ie como um óleo amarelo.Etapa (b)

6-le (160 mg, 0,19 mmol) e Pd/C 10% (H2O 50%, 100 mg)foram misturados em conjunto em MeOH (10 ml) sob N2; o N2 éentão removido com H2, e a mistura foi agitada por 24 horasem temperatura ambiente. A mistura é filtrada em celite,lavada com MeOH. 0 filtrado foi coletado, seco econcentrado sob pressão reduzida para gerar o produto 6-lf.MS (m/z) M + 1 = 847.Quarta Etapa<formula>formula see original document page 137</formula>

Boc-N-Me-Ala-OH (74 mg, 0,37 mmol) , HOBt (59 mg, 0,38mmol), HBTU (144 mg, 0,38 mmol) e DIPEA (140 μΐ, 0,8 mmol)foram dissolvidos em DMF seca (5 ml) sob N2, e agitados por10 minutos em temperatura ambiente. 6-If (13 5 mg, 0,16mmol) foi então adicionado, e a solução foi deixada emagitação por 24 horas em temperatura ambiente. 0 conteúdofoi então adicionado a um funil separador juntamente comETOAc e lavado com ácido citricô 10% (2x), NaHCO3 saturado(2x) e salmoura. A camada orgânica foi coletada, seca econcentrada sob pressão reduzida para gerar 6-lg.

Etapa (b)

0 intermediário 6-lg foi subseqüentemente tratado comHCl 4 N em 1,4-dioxano por 1 hora em temperatura ambiente.A trituração com éter dietílico gerou o sal de bis-HCl docomposto 15. MS (m/z) M + 1 = 1.017.7. Síntese do Composto 14

<formula>formula see original document page 138</formula>

Composto 14

<formula>formula see original document page 138</formula>

Etapa (a)

A uma solução de 7-Ia (206 mg, 0,3 5 mmol) emdiclorometano (5 ml) , foram adicionados seqüencialmenteDIPEA (100 μl, 0,57 mmol) e cloreto de tereftaloila (31,3mg, 0,15 mmol), e a reação foi agitada por 12 horas emtemperatura ambiente. Água e acetato de etila foramadicionados, a camada orgânica foi separada, lavada comácido cltrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca sobreMgSO4 e concentrada sob pressão reduzida. A purificação porcromatografia instantânea gerou 7-Ib como um sólido branco.

Etapa (b)

Uma solução de HCl 4 N em 1,4-dioxano (1 ml) foiadicionada a 7-lb (16 mg, 0,01 mmol) em temperaturaambiente, e a solução foi agitada por 2 horas e depoisconcentrada in vácuo. A trituração com éter dietílico gerouo composto 14*2HC1 como um sólido branco, MS (m/z) (M + 2)/ 2 = 546,5.

8. Síntese do Composto 23

Etapa (a)

<formula>formula see original document page 139</formula>

0 intermediário l-2d (250 mg, 0,78 mmol) , HOBt (12010 mg, 0,78 mmol), HBTU (300 mg, 0,78 mmol) e DIPEA (525 μΐ, 3mmol) foram dissolvidos em DMF seca (5 ml) sob N2, eagitados por 10 minutos em temperatura ambiente. 0intermediário 6-Ib (215 mg, 0,6 mmol) foi adicionado, e asolução foi deixada em agitação por 24 horas em temperaturaambiente. 0 conteúdo foi adicionado a um funil separadorjuntamente com EtOAc, e lavado com ácido cítrico 10% (2x) ,salmoura (2x) e NaHCO3 saturado (2x) . A camada orgânica foicoletada, seca e concentrada sob pressão reduzida. 0produto foi purificado por cromatografia instantânea(hexanos/EtOAc) , e subseqüentemente tratado com HCl 4 N em1,4-dioxano; os voláteis foram removidos, e a trituraçãocom éter dietílico fornece 8-la como o sal de HCl. MS (m/z)M + 1 = 384,3.

Etapa (b)

<formula>formula see original document page 139</formula>

Boc-Me-Ala-OH (130 mg, 0,63 mmol), HOBt (100 mg, 0,63mmol), HBTU (240 mg, 0,63 mmol) e DIPEA (420 μΐ, 2,4 mmol)foram dissolvidos em DMF seca (5 ml) sob N2, e agitados por10 minutos em temperatura ambiente. 8-Ib (200 mg, 0,48mmol) foi então adicionado, e a solução foi deixada emagitação por 24 horas em temperatura ambiente. 0 conteúdofoi então adicionado a um funil separador juntamente comEtOAc e lavado com ácido cítricô 10% (2x), salmoura (2x) eNaHCO3 saturado (2x). A camada orgânica foi coletada, secae concentrada sob pressão reduzida. 0 produto 8-Ib foipurificado por cromatografia instantânea (hexanos/EtOAc).MS (m/z) M + 1 = 569,4.

Etapa (c)

<formula>formula see original document page 140</formula>

0 intermediário 8-lb (70 mg, 0,123 mmol), CuCl (20 mg,0,185 mmol) e tetrametiletilenodiamina (274, 0,185 mmol)foram dissolvidos em acetona seca (3 ml) , e agitados emtemperatura ambiente sob uma atmosfera de O2 por 72 horas.EtOAc foi adicionado, e a mistura foi transferida para umfunil separador. A mistura foi lavada com ácido cítrico 10%(2x), salmoura (2x) e NaHCO3 saturado (2x). A camadaorgânica foi coletada, seca e concentrada sob pressãoreduzida. 0 produto foi purificado por cromatografiainstantânea (hexanos/THF). 0 produto resultante foi agitadocom HCl 4 N em 1,4-dioxano por 2 horas. Os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida, e o resíduo triturado cométer dietílico, para gerar o composto 23 como seu são debis-HCl. MS (m/z) M + 1 = 935,1.

9. Síntese do Composto 25

<formula>formula see original document page 141</formula>

A uma solução de 23*2HC1 (100 mg, 0,1 mmol) em MeOHanidro (10 ml) e agitada sob N2, foi adicionado Pd/C 10%(500 mg). A mistura de reação foi depurada com hidrogênio eagitada por 16 horas sob pressão atmosférica de hidrogênio.

A mistura foi então filtrada através de celite, e ofiltrado foi concentrado in vácuo para gerar o composto25*2HC1 como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 94 3,6.

10. Síntese do Composto 41

<formula>formula see original document page 141</formula>Etapa (a)

A uma solução de 10-a (4,90 g, 6,15 mmol) em MeOHanidro (120 ml) e agitada sob N2, foi adicionado Pd/C 10%(500 mg). A mistura de reação foi depurada com H2 e agitadapor 3 horas, e depois filtrada através de celite. 0filtrado foi concentrado in vácuo para gerar ointermediário 10-b como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 =662,4 .Etapa (b)

Uma solução de 10-b (200 mg, 0,3 0 mmol) emdiclorometano, resfriada até 0°C, foram adicionadosseqüencialmente Et3N (84 μΐ, 0,60 mmol) e cloreto deoxalila (13 μΐ, 0,15 mmol) . A reação foi então agitada por4 horas em temperatura ambiente. NaHCO3 aquoso e acetato deetila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com salmoura, seca sobre MgSO4 anidro, filtrada econcentrada in vácuo. A purificação por cromatografia emsllica gel eluindo com um gradiente dehexano/tetrahidrofurano gerou o composto 10-c esperado comoum sólido branco.

Etapa (c)

HCl 4 N em 1,4-dioxano (3 ml) foi adicionado a 10-c(95 mg, 0,07 mmol), e a solução foi agitada por 2 horas emtemperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sobpressão reduzida e o resíduo foi triturado com éterdietílico para gerar o composto 41 como seu sal de bis-HCl.MS (m/z) (M + 2) / 2 = 589,4.

Foram preparados compostos da presente invençãorepresentativos por modificação simples dos procedimentosacima, e esses são ilustrados na Tabela 1:TABELA 1

<table>table see original document page 143</column></row><table><table>table see original document page 144</column></row><table><table>table see original document page 145</column></row><table><table>table see original document page 146</column></row><table><table>table see original document page 147</column></row><table><table>table see original document page 148</column></row><table><table>table see original document page 149</column></row><table><table>table see original document page 150</column></row><table><table>table see original document page 151</column></row><table><table>table see original document page 152</column></row><table><table>table see original document page 153</column></row><table><table>table see original document page 154</column></row><table><table>table see original document page 155</column></row><table>

Compostos da presente invenção representativos que

podem ser preparados por modificação simples dosprocedimentos acima são ilustrados nas Tabelas 2 a 11:TABELA 2

Ml-BG-M2

Fórmula IA

<formula>formula see original document page 156</formula>

<table>table see original document page 156</column></row><table><table>table see original document page 157</column></row><table><table>table see original document page 158</column></row><table><table>table see original document page 159</column></row><table><table>table see original document page 160</column></row><table><table>table see original document page 161</column></row><table><table>table see original document page 162</column></row><table><table>table see original document page 163</column></row><table><table>table see original document page 164</column></row><table><table>table see original document page 165</column></row><table><table>table see original document page 166</column></row><table><table>table see original document page 167</column></row><table><table>table see original document page 168</column></row><table><table>table see original document page 169</column></row><table><table>table see original document page 170</column></row><table><table>table see original document page 171</column></row><table><table>table see original document page 172</column></row><table><table>table see original document page 173</column></row><table><table>table see original document page 174</column></row><table><table>table see original document page 175</column></row><table><table>table see original document page 176</column></row><table><table>table see original document page 177</column></row><table>TABELA III

<formula>formula see original document page 178</formula>

Observação: Em Ml e M2, a estereoquímica no carbonoconector é (S).

<table>table see original document page 178</column></row><table><table>table see original document page 179</column></row><table><table>table see original document page 180</column></row><table><table>table see original document page 181</column></row><table><table>table see original document page 182</column></row><table><table>table see original document page 183</column></row><table><formula>formula see original document page 184</formula><table>table see original document page 185</column></row><table><table>table see original document page 186</column></row><table><table>table see original document page 187</column></row><table><table>table see original document page 188</column></row><table><table>table see original document page 189</column></row><table><table>table see original document page 190</column></row><table><table>table see original document page 191</column></row><table><table>table see original document page 192</column></row><table><table>table see original document page 193</column></row><table><table>table see original document page 194</column></row><table><table>table see original document page 195</column></row><table><table>table see original document page 196</column></row><table><table>table see original document page 197</column></row><table><table>table see original document page 198</column></row><table><table>table see original document page 199</column></row><table><table>table see original document page 200</column></row><table>TABELA 4

<formula>formula see original document page 201</formula>

Fórmula IB

BG é

B e B1 são C1-C6 alquil

Observação: Em Ml e M2, a estereoquímica no carbonoconector é (S).

<table>table see original document page 201</column></row><table><table>table see original document page 202</column></row><table><table>table see original document page 203</column></row><table><table>table see original document page 204</column></row><table><table>table see original document page 205</column></row><table><table>table see original document page 206</column></row><table><table>table see original document page 207</column></row><table><table>table see original document page 208</column></row><table><table>table see original document page 209</column></row><table><table>table see original document page 210</column></row><table><table>table see original document page 211</column></row><table><table>table see original document page 212</column></row><table><table>table see original document page 213</column></row><table><table>table see original document page 214</column></row><table><table>table see original document page 215</column></row><table><table>table see original document page 216</column></row><table><table>table see original document page 217</column></row><table><table>table see original document page 218</column></row><table><table>table see original document page 219</column></row><table><table>table see original document page 220</column></row><table><table>table see original document page 221</column></row><table><table>table see original document page 222</column></row><table><table>table see original document page 223</column></row><table>TABELA 5

M1-BG-M2

Fórmula IA

<formula>formula see original document page 224</formula>

Observação: Na Tabela seguinte, R4 é H ou qualquersubstituinte não acil.

<table>table see original document page 224</column></row><table><table>table see original document page 225</column></row><table><table>table see original document page 226</column></row><table><table>table see original document page 227</column></row><table><table>table see original document page 228</column></row><table>TABELA 6

M1-B-BG-B1-m2

<formula>formula see original document page 229</formula>

B e B1 são C1-C6 alquil

Observação: Em Ml e M2, a estereoquímica no carbonoconector é (S).

Observação: Na Tabela R4 a seguir, é H ou qualquersubstituinte não acil.

<table>table see original document page 229</column></row><table><table>table see original document page 230</column></row><table><table>table see original document page 231</column></row><table><table>table see original document page 232</column></row><table><table>table see original document page 233</column></row><table>TABELA 7

Fórmula IB

<formula>formula see original document page 234</formula>

B e B1 são C1-C6 alquil

<table>table see original document page 234</column></row><table><table>table see original document page 235</column></row><table><table>table see original document page 236</column></row><table><table>table see original document page 237</column></row><table><table>table see original document page 238</column></row><table>TABELA 8

<formula>formula see original document page 239</formula>

<table>table see original document page 239</column></row><table><table>table see original document page 240</column></row><table><table>table see original document page 241</column></row><table>

TABELA 9

<formula>formula see original document page 241</formula>

em que R1, R100, R2, R200, Β, B1, n, BG, A, A1 são comoaqui definidos;

Q e Q1 são definidos independentemente como NR4R5, emque R5 é como aqui definido, e R4 é escolhido entre osseguintes:

<table>table see original document page 241</column></row><table><formula>formula see original document page 242</formula><formula>formula see original document page 243</formula>

em que R1, R100, R2, R200, Β, B1, η, BG, Α, A1 são comoaqui definidos;

Q e Q1 são definidos independentemente como OR11, e R11é escolhido entre os seguintes:<table>table see original document page 244</column></row><table><table>table see original document page 245</column></row><table>em que R1, R100, R2, R200, Β, B1i η, m, BG, A, A1 sãocomo aqui definidos;

Q e Q1 são definidos independentemente como S(O)mR11, e

R11 é escolhido entre os seguintes:

<formula>formula see original document page 246</formula><formula>formula see original document page 247</formula>

Ensaios

11. Construções moleculares para expressão

GST-XIAP BIR3RING: seqüência de aminoácidoscodificadora de XIAP 246-497 clonada em PGEX2T1 por meio deBamHl e AVAI. O plasmídeo foi transformado em E. coli DH5apara uso na expressão e purificação de proteínas.

GST-HIAP2 (cIAP-1) BIR 3: seqüência codificadora deHIAP2 dos aminoácidos 251-363 clonada em PGex4T3 por meiode BamHl e Xhol. O plasmídeo foi transformado em E. coliDH5a para uso na expressão e purificação de proteínas.

GST-HIAP1(cIAP-2) BIR 3: seqüência codificadora deHIAPl dos aminoácidos 236-349, clonada em PGex4T3 por meiode BamHl e Xhol. O plasmídeo foi transformado em E. coliDH5a para uso na expressão e purificação de proteínas.

GST- linker (Iigante) BIR 2 BIR3Ring: seqüênciacodificadora de XIAP dos aminoácidos 93-497 clonada emPGex4Tl por meio de BamHl e Xhol. Os aminoácidos 93-4 97foram amplificados a partir do XIAP de comprimento total empGex4t3, com o uso dos iniciadores:TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC e GCTGCATGTGTGTCAGAGG, com autilização de condições padronizadas de PCR. O fragmento dePCR foi clonado TA em pCR-2.1 (invitrogen) . 0 vinculadorBIR 2 BIR 3Ring foi subclonado em pGex4Tl por digestão deBamHl/Xhol. O plasmídeo foi transformado em E. coli DH5apara uso na expressão e purificação de proteínas.

XIAP humano de comprimento total, plasmídeo Aegeranúmero 23. A seqüência de aminoácidos codificadora de XIAP1-497 clonada em vetor de fusão GST, PGEX4T1 por meio dossítios de restrição BamHl e Xho I (uma doação de BobKorneluk e Peter Liston). O plasmídeo foi transformado emE. coli DH5a para uso na purificação de proteínas.

GST-XIAP linker BIR 2: seqüência codificadora de XIAPlinker BIR 2 dos aminoácidos 93-497 clonada em pGex4T3 pormeio de BamHI e Xhol. O plasmídeo foi transformado em E.coli DH5a para uso na expressão e purificação deproteínas.

12. Síntese de sonda fluorescente para ensaio FPUma sonda peptídica fluorescente, Fmoc-Ala-Val-Pro-Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH, foi preparada com ouso de química Fmoc padronizada em resina de cloreto de 2-clorotritila (Int. J. Pept. Prot. Res. 38: 555-561, 1991).A clivagem da resina foi realizada com o uso de ácidoacético 20% em diclorometano (DCM), o que deixou a cadeialateral ainda bloqueada. O ácido carboxílico protegido doterminal C foi acoplado a 41 -(aminometil)fluoresceína(Molecular Probes, A-1351; Eugene, Oreg.) com o uso deexcesso de diisopropilcarbodiimida (DIC) emdimetilformamida (DMF) em temperatura ambiente, e foipurificado por cromatografia em sílica gel (metanol 10% emDCM). O grupo protetor Fmoc do terminal N foi removido como uso de piperidina (20%) em DMF, e purificado porcromatograf ia em sílica gel (metanol 20% em DCM, HOAc0,5%). Finalmente, os grupos protetores t-butil da cadeialateral foram removidos com o uso de ácido trifluoracético95% contendo água 2,5% e triisopropil silano 2,5%. Opeptídeo obtido exibia um pico único por HPLC (>95% puro).

13. Expressão e purificação de proteínas recombinantesA. Expressão de proteínas recombinantesProteínas marcadas com glutationa S-transferase (GST)foram expressas em Escherichia coli cepas DH5-alfa. Para aexpressão de XIAP de comprimento total, domíniosindividuais ou combinações de XIAP-BIR, cIAP-1, cIAP-2, ebactérias transformadas Livin foram cultivadas de um diapara o outro a 37°C em meio Caldo Luria (LB) suplementadocom 50 μg/ml de ampicilina. A cultura de um dia para ooutro foi então diluída 25 vezes em meio LB frescosuplementado com ampicilina, e as bactérias sedesenvolveram até A60O = 0,6, e a seguir induzidas com 1 mMde isopropil-D-l-tiogalactopiranosida por 3 horas. Medianteindução, as células foram centrifugadas a 5.000 RPM por 10minutos, e o meio foi removido. Cada pélete obtido de umacultura de 1 litro recebeu 10 ml de tampão de Iise (50 mMde Tris-HCl, 200 mM de NaCl, 1 mM de DTT, 1 mM de PMSF, 2mg/ml de lisozima, 100 pg/ml) , e foi incubado a 40C comagitação suave. Após 2 0 minutos de incubação, a suspensãode células foi colocada a -80°C de um dia para o outro ouaté necessária.

B. Purificação de proteínas recombinantes

Para purificação de proteínas recombinantes, o lisadode células induzido por IPTG foi descongelado eturbilhonado, e a seguir rompido por congelamento rápido emnitrogênio líquido duas vezes com turbilhonamento após cadadescongelamento. As células foram ainda rompidas porpassagem do extrato quatro vezes com um dispositivo derompimento Bio-Neb Cell (Glas-col) ajustado a 689,47 kPacom gás de nitrogênio. O extrato foi clarificado porcentrifugação a 40°C a 15.000 RPM em um rotor SS-34 Beckmanpor 30 minutos. O sobrenadante resultante foi entãomisturado com 2 ml de glóbulos de glutationa-Sef arose(Pharmacia) por cultura de células de 500 ml (por 1.000 mlde cultura para XIAP de comprimento total) por 1 hora a4°C. A seguir, os glóbulos foram lavados 3 vezes com 1Xsolução salina tamponada com Tris (TBS) para removerproteínas não ligadas. As proteínas retidas foram eluídascom 2 lavagens de 2 ml de 50 mM TRIS pH 8,0 contendo 10 mMde glutationa reduzida. As proteínas eluídas foram reunidasem pool e precipitadas com 604 g/litro de sulfato deamônio, e o pélete resultante re-suspenso em um tampãoadequado. Como avaliado por SDS-PAGE, as proteínaspurificadas eram >90% puras. A concentração de proteína dasproteínas purificadas foi determinada pelo método deBradford.

As proteínas com His-tagr foram expressas na cepa de E.Coli em células AD4 94 de E. coli com o uso de umaconstrução pet28ACPP32. A fração de proteína solúvel foipreparada como descrito acima. Para purificação deproteínas, o sobrenadante foi purificado por cromatografiapor afinidade com o uso de Sefarose quelante (Pharmacia)carregada com NiSO4 de acordo com as instruções dofabricante. A pureza da proteína eluída era >90% pura, comodeterminado por SDS-PAGE. A concentração de proteína dasproteínas purificadas foi determinada pelo ensaio deBradford.

Ensaio de ligação

14. Ensaio de competição baseado em fluorescência-polarização

Para todos os ensaios, a fluorescência e afluorescência-polarização foram avaliadas com o uso de uminstrumento Tecan Polarion, com o filtro de excitaçãoajustado em 485 nm, e o filtro de emissão em 535 nm. Paracada ensaio, a concentração da proteína-alvo foiinicialmente estabelecida por titulação da proteínaselecionada a fim de produzir um sinal de dose-respostalinear quando incubada isoladamente na presença da sondafluorescente. Com o estabelecimento dessas condições, apotência (IC50) e a seletividade dos compostos, medidas napresença de uma quantidade fixa definida de proteina-alvo esonda fluorescente e uma diluição serial de 10 pontos doscompostos selecionados. Para cada curva de IC50, os ensaiosforam executados da seguinte forma: 25 μΐ/poço de compostodiluído em 50 mM de tampão MÊS, pH 6,5, foram adicionadosem uma placa de 96 poços negra, e depois 25 μΐ/poço dealbumina bovina sérica (BSA) a 0,5 mg/ml em 50 mM de MES pH6,5. Inicialmente, foi avaliada a autof luorescência paracada composto pela realização de uma leitura da solução decomposto/BSA isoladamente. A seguir, 25 μΐ da sonda defluoresceína diluídos em 50 mM de MES contendo 0,05 mg/mlde BSA foram adicionados, e foi feita uma leitura paradetectar a extinção do sinal de fluoresceína. Finalmente,25 μl/poço da proteína-alvo ou da proteína de controle(GST-BIRs) , diluídos na concentração apropriada em 50 mM deMES contendo 0,05 mg/ml de BSA foram adicionados, e apolarização de fluorescência avaliada.

15. Determinação da IC50 e de constantes inibidoras

Para cada ensaio, as unidades relativas depolarização-fluorescência foram tabuladas contra asconcentrações finais de composto, e a IC50 foi calculadacom o uso do programa de computador wGrad pad prism" e/oudo programa de computador Cambridge. Os valores de ki foramderivados dos valores de IC50 calculados, como descritoacima e de acordo com a equação descrita em Nikolovska-Coleska, Z. (2004) Anal. Biochem. 332, 261-273.

16. Ensaio de "desrepressão" de Caspase-3 XIAP decomprimento total, linker BIR2 ou Linker-BIR2-BIR3-RINGA fim de determinar a atividade relativa do compostoselecionado contra XIAP-Bir2, preparamos um ensaio in vitrono qual caspase-3 era inibida por proteínas de fusão GST deXIAP linker-bir2, XIAP Linker Bir2-Bir3-RING ou XIAP decomprimento total. Caspase 3 (0,125 μΐ) e 12,25-34,25 nM(concentração final) de proteína de fusão GST-XIAP (GST-Bir2, GST-Bir2Bir3RING ou XIAP de comprimento total) foramco-incubados com diluições seriais de composto (200 μΜ-5pM) . A atividade de caspase 3 foi medida por revestimentode 25 μl de uma solução de 0,4 mM de DEVD AMC. 0 volumefinal da reação foi de 100 μΐ. Todas as diluições foramrealizadas em tampão de caspase (50 mM de Hepes pH 7,4, 100mM de NaCl, sacarose 10%, 1 mM de EDTA, 10 mM de DTT, CHAPS0,1% (Stennicke, H.R. e Salvesen, G.S. (1997). "Biochemicalcharacteristics of caspase-3, -6, -7, and -8". J. Biol.Chem. 272, 2.5719-2.5723)).

A AMC fluorescente liberada pela hidrólise de caspase-3 do substrato foi medida em um espectrofotômetro TECAN auma excitação de 360 nm e uma emissão de 444 nm, após 15minutos de incubação em temperatura ambiente. Os valores deIC50 foram calculados em um modelo de competição de um oudois sítios, com o uso do programa GraphPad ν 4.0, usandoos valores de fluorescência após 15 minutos de incubaçãotabulados contra a concentração log10 de composto.

Verificou-se que os compostos que foram testados noensaio de apoptossomo e no ensaio de inibição linker-BIR2->Bir3/caspase-3 possuem as IC50S ilustradas na Tabela12.

TABELA 12

Atividade in vitro de compostos selecionados contra IAPs.<table>table see original document page 254</column></row><table>

nd= não determinado;

Legenda: ensaio FP: A < 5 nM; B < 100 nM; C > 100 nM;Legenda: ensaio de apoptossomo: A < 0,1 μΜ; B < 0,5 μΜ; C >1 μΜ

Os resultados demonstram que os compostos selecionadospodem inibir a atividade de bloqueio de caspase de XIAP emum ensaio de apoptossomo (expresso em concentração eficazpara se obter 50% de ativação) e registram uma Ki para seligar a vários IAP's. Essa Ki foi calculada pelodeslocamento de uma sonda fluorescente capaz de se ligar aodomínio bir3 de vários IAPs com o uso de um ensaio depolarização fluorescente.

Ensaio sem células17. Ensaio de desrepressão de caspase com o uso de extratoscelulares (apoptossomo)

Cem μg de estrato de células 293 SlOO e 0,25 μΜ - 2 μΜde proteína de fusão GST-XIAP (XIAP-Bir3RING, XIAP-LinkerBir2Bir3RING ou XIAP de comprimento total) foram co-incubados com diluições seriais de composto (40 μΜ - 5 pM) .As caspases presentes nos extratos foram ativadas pelaadição de 1 mM de dATP, 0,1 mM de ALLN, 133 μ9 de CitocromoC (concentrações finais) , e incubação a 37°C por 25minutos. Todas as reações e diluições usaram tampão S100(50 mM de Pipes pH 7,0, 50 mM de KCli 0,5 mM de EGTA pH8,0, 2 mM de MgCl2, suplementado com diluições 1/1.000 de 2mg/ml Citocalisina B, 2 mg/ml de Quimostatina, Leupeptina,Pepstatina, Antipaína, 0,1 M de PMSF, 1 M de DTT) . O volumefinal da reação foi de 30 μΐ. A atividade de caspase-3 foimedida por revestimento de 3 0 μυ de uma solução de 0,4 mMde DEVD-AMC. A clivagem de AMC liberada foi medida em umespectrofotômetro TECAN com excitação de 360 nm e emissãode 444 nm, em um ciclo cinético de 1 hora com leiturasfeitas a cada 5 minutos. A atividade de caspase foicalculada como V0 de fluorescência de AMC/seg. Adesrepressão de Caspase por nossos compostos foi comparadacom extrato totalmente ativado e extrato ativado reprimidopela presença de proteína de fusão XIAP.

18. Cultura de células e ensaios de morte celular

A. Cultura de células

Células cancerosas MDA-MD-231 (mama) e SKOV-3(ovarianas) foram cultivadas em meio RPMI164 0 suplementadocom FBS 10% e 100 unidades/ml de Penicilina e Etapatomicina.Β. Ensaios

Foram feitos ensaios de viabilidade em diversascélulas, incluindo células MDA-MB-231, SKOV-3, H460, PC3,HCT-116, e SW480. As células foram semeadas em placas de 96poços em uma densidade respectiva de 5.000 e 2.000 célulaspor poço, e incubadas a 37°C na presença de CO2 5% por 24horas. Compostos selecionados foram diluídos no meio emvárias concentrações, variando de 0,01 μΜ até 100 μΜ. Oscompostos diluídos foram adicionados às células MDA-MB-231.Para as células MDA-MB-231 SK0V3, H460, PC3, HCT-116 eSW480, os compostos foram adicionados tanto isoladamentequanto na presença de 1-3 ng/ml de TRAIL. Após 72 horas, aviabilidade celular foi avaliada por ensaios baseados emMTT. As IC50S de compostos selecionados contra linhagens decélulas MDA e SK0V3 são apresentada na Tabela 13:

TABELA 13

IC50S de compostos selecionados contra linhagens decélulas MDA e SK0V3

<table>table see original document page 256</column></row><table><table>table see original document page 257</column></row><table><table>table see original document page 258</column></row><table>

Os compostos exemplificados na Tabela 1 foramtestados, e verificou-se que possuem ICsoS nas seguintesfaixas: A < 100 nM; B < 1.000 nM; C > 1.000 nM.19. Ensaio de apoptose: medida da atividade de caspase-3por células cultivadas.

Um dia antes do tratamento, 10.000 células por poçoforam plaqueadas em uma placa branca de cultura de tecidode 96 poços tratada com 100 μΐ de meio. No dia dotratamento com o composto, os compostos foram diluídos commeio de cultura de células até uma concentração de estoquede trabalho de 2X, e 100 μΐ de composto diluído foramadicionados a cada poço, e a placa foi incubada por 5 horasa 370C na presença de CO2 5%. Após a incubação, a placa foilavada duas vezes com 200 μΐ de tampão de solução salinatamponada com TRIS gelado (TBS). As células foram lisadascom 50 μl tampão de ensaio de caspase (20 mM de Tris-HCl pH7,4, NP 0,1%-40, Chaps 0,1%, 1 mM de DTT, 0,1 mM de EDTA,0,1 mM de PMSF, 2 mg/ml de Quimostatina, Leupeptina,Pepstatina, Antipaína), e depois incubadas a 40C comagitação por 30 minutos. Foram adicionados 45 μΐ de tampãode ensaio de caspase e 5 μΐ de Ac-DEVD-AMC a 1 mg/ml a cadapoço; a placa foi agitada e incubada por 16 horas a 37°C. Aquantidade de AMC liberada foi medida em umespectrofotômetro TECAN com os filtros de excitação e deemissão ajustados em 3 60 nm e 444 nm. A percentagem deatividade de caspase-3 foi expressa em comparação com osinal obtido com as células não tratadas.20. Bioquímica celular:

A. Detecção de XIAP e PARP/Caspase-3/Caspase-9

A detecção de XIAP e PARP expressos pelas células foifeita por western blotting. As células foram plaqueadas a300.000 células/poço em poços de 60 mm (uma placa de 6poços). No dia seguinte, as células foram tratadas com ocomposto selecionado na concentração indicada. Vinte equatro horas mais tarde, as células foram submetidas àtripsina e peletizadas por centrifugação a 1.800 rpm a 4°C.0 pélete resultante foi enxaguado duas vezes com TBSgelado. O pélete lavado final de células foi lisado com 250μΐ de tampão de Iise (NP-40, glicerol, 1% de um coquetel deinibidores de protease (Sigma)), colocado a 4°C por 25minutos, com agitação suave. 0 extrato de células foicentrifugado a 4°C por 10 minutos a 10.000 rpm. Tanto osobrenadante quanto o pélete foram guardados para análisepor western blotting, como descrito abaixo. Dosobrenadante, o teor de proteínas foi avaliado, e cerca de50 μg de proteína foram fracionados em um SDS-PAGE 10%. Ospéletes foram lavados com o tampão de Iise e re-suspensosem 50 μl de tampão Lamelli IX, lavados e f racionados emSDS-PAGE. Após eletroforese, cada gel foi eletro-transferido em uma membrana de nitrocelulose a 0, 6A por 2horas. Os sítios inespecíficos da membrana foram bloqueadospor 1 hora com leite desnatado 5% em TBST (TBS contendoTween-20 0,1% (v/v)) em temperatura ambiente. Paraimunodetecção de proteínas, as membranas foram incubadas deum dia para o outro com anticorpos primário desenvolvidoscontra clone 4 8 de XIAP (obtido de Becton-Dickison) ou PARP(obtido de Cell Signal), ou anticorpos primários decaspase-3 ou caspase-9 foram incubados a 4°C com agitaçãonas seguintes diluições:

<table>table see original document page 260</column></row><table>

Após incubação de um dia para o outro, as membranasreceberam três lavagens de 15 minutos em TBST, e depoisforam incubadas por 1 hora em temperatura ambiente napresença de um anticorpo secundário acoplado a HRP-enzima(Chemicon), e diluídas a 1/5.000. Após incubação, cadamembrana foi lavada três vezes com TBST, e as bandasimunorreativas foram detectadas por adição de um substratoluminescente (ECL kit Amersham) e captura de sinal em umfilme de raios-x por vários tempos de exposição. Oscompostos ativos demonstraram que induzem a clivagem dePARP e XIAP, bem com o trans locam XIAP em um compartimentoinsolúvel.

21. Modelo de fibra ocaO modelo in vivo de fibra oca foi usado parademonstrar in vivo a eficácia de compostos selecionadoscontra linhagens celulares selecionadas como terapia deagente único ou em combinação com agentes citotóxicosselecionados. No Io dia, foram cultivadas linhagenscelulares selecionadas, e a fibra preenchida em umadensidade celular de cerca de 40.000 células/fibra. No diada operação (4o dia), três fibras são implantadas no espaçosubcutâneo em camundongo macho CD-I Nu/Nu de 28 - 35 g. No5' dia, o camundongo começa a receber injeção diária porvia intravenosa ou subcutânea de veiculo de controle ouveículo contendo o composto selecionado na concentraçãoapropriada e/ou injeção de agente citotóxico por viaintraperitoneal. Após 7 dias de tratamentos nãoconsecutivos, os animais são sacrificados, cada fibra êremovida, e a viabilidade metabólica das células restantesé determinada pelo ensaio MTT. A eficácia do composto édefinida como a diferença entre os valores de MTT obtidosna fibra contendo célula retirada do animal tratado comveículo e do animal tratado com o composto isoladamente oucomposto administrado em combinação com agente citotóxico.

22. Terapia anticâncer combinada in vivo

Fêmeas de camundongos nude receberam 2X10 HCT-116 porvia subdérmica no flanco direito. No 26° dia, quando ostumores tinham -90 mm, os animais foram divididos em gruposcom o uso de um design equilibrado com base no tamanho dotumor. Nesse momento foi iniciado o tratamento commitomicina-C e Composto 23. Mitomicina-C foi administradapor via intraperitoneal a 1 mg/kg, de segunda à sexta-feirapor duas semanas. O Composto 23 foi administrado por viaintravenosa a 1 ou 5 mg/kg cinco vezes por semana peladuração do experimento. As medidas dos tumores foram feitasduas vezes por semana. Como ilustrado na Figura 1, ocomposto 23 mostrou um efeito antitumoral crescente emcombinação com mitomicina-C com doses crescentes, com adose de 5 mg/kg mostrando efeitos antitumorais superiorescomparada com a dose de 1 mg/kg.

23. Estudos de farmacocinética

Compostos selecionados foram dissolvidos em sorofisiológico normal ou em veiculo apropriado, eadministrados em várias doses com o uso de diferentes viasde administração, incluindo bolo intravenoso, infusãointravenosa, oral e injeção subcutânea.

Toda a literatura, patentes e pedidos publicados depatentes aqui citados são aqui incorporados por referência.

A partir do exposto anteriormente, será observado que,embora tenham sido aqui descritas modalidades específicasda invenção para fins de ilustração, várias modificaçõespodem ser feitas, sem se afastar do espírito e escopo dainvenção. Conseqüentemente, a invenção só é limitada pelasreivindicações em anexo.

Claims

1. Isômero, enantiômero, diastereoisômero ou tautômerode um composto caracterizado por ser representado pelaFórmula I:<formula>formula see original document page 263</formula>ou um sal deste,em que:η é O ou 1;m é O, 1 OU 2;ρ é 1 ou 2;Y é NH, O ou S;A e A1 são selecionados independentemente de:-1) -CH2-,-2) -CH2CH2-,-3) -C(CH3)2-,-4) -CH (C1-C6 alquil) - ,-5) -CH (C3-C7 cicloalquil) - ,-6) -C3-C7 cicloalquil-,-7) -CH (C1-C6 alquil-C3-C7 cicloalquil)-, ou-8) -C(O)-;B e B1 são independentemente Ci-C6 alquil;BG é:( BG)<formula>formula see original document page 264</formula>X e X1 são selecionados independentemente de 1) O, NR13, S,<formula>formula see original document page 264</formula><formula>formula see original document page 265</formula>L é selecionado de:-1) -Ci-C10 alquil-,-2) -C2-C6 alquenil-,-3) -C2-C4 alquinil-,-4) -C3-C7 cicloalquil-,-5) -fenil-,-6) -bifenil-,-7) -heteroaril-,-8) -heterociclil-,-9) -C1-C6 alquil-(C2-C6 alquenil) -Ci-C6 alquil-,-10) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil)-Ci-C6 alquil,-11) -Ci-C6 alquil- (C3-C7 cicloalquil)-Ci-C6 alquil,-12) -C1-C6 alquil -fenil-Ci-C6 alquil,-13) -Ci-C6 alquil-bifenil-Ci-C6 alquil,-14) -C1-C6 alquil-heteroaril-Ci-C6 alquil,-15) -C1-C6 alquil Iieterociclil-C1-C6 alquil, ou-16) -Ci-C6 alquil-O-Ci-C6 alquil; R1, R100, R2 e R200 são selecionados independentementede:-1) H ou-2) Ci-C6 alquil opcionalmente substituído com um oumais substituintes R6;-25 Q e Q1 são, cada um independentemente:-1) NR4R5,-2) OR11, ou-3) S(O)mRli; ouQ e Q1 são, cada um independentemente:<formula>formula see original document page 266</formula>em que G é um anel de 5, 6 ou 7 membros queopcionalmente incorpora um ou mais heteroátomos escolhidosde S, N ou O, o anel sendo opcionalmente substituído com umou mais substituintes R12;R4 e R5 são, cada um independentemente:-1) H,-2) haloalquil,-3) <-C1-C6 alquil,-4) <-C2-C6 alquenil,-5) <-C2-C4 alquinil,-6) <—C3-C7 cicloalquil,-7) <—C3-C7 cicloalquenil,-8) <—aril,-9) <—heteroaril,-10) <-heterociclil,-11) <—heterobiciclil,-12) <—C (O) -R11,-13) <—C (O) O-R11,-14) <-C( =Y) NR8R9, ou-15) <—S(O)2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;Re é:-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) haloalquil,-5) C1-C6 alquil,-6) C2-C6 alquenil,-7) C2-C4 alquinil,-8) C3-C7 cicloalquil,-9) C3-C7 cicloalquenil,-10) aril,-11) heteroaril,-12) heterociclil,-13) heterobiciclil,-14) OR7,-15) S(O)mR7a7-16) NR8R9,-17) NR8S(O)2R11,-18) COR7,-19) C(O)OR7,-20) CONR8R9,-21) S(O)2NR8R97-22) OC(O)R7,-23) OC(O)Y-R11,-24) SC(O)R7 ou-25) NC(Y)NR8R97em que o aril, heteroaril, heterociclheterobiciclil são opcionalmente substituídos commais substituintes RR7 é:-1) H,- 2) haloalquil,- 3) C1-C6 alquil,- 4) C2-C6 alquenil,- 5) C2-C4 alquinil,- 6) C3-C7 cicloalquil,- 7) C3-C7 cicloalquenil,- 8) aril,- 9) heteroaril,- 10) heterociclil,- 11) heterobiciclil,- 12) R8R9NC (=Y) ou- 13) C1-C6 alquil-C2-C4 alquenil, ou- 14) C1-C6 alquil-C2-C4 alquinil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR8 e R9 são, cada um independentemente:- 1) H,- 2) haloalquil,- 3) C1-C6 alquil,- 4) C2-C6 alquenil,- 5) C2-C4 alquinil,- 6) C3-C7 cicloalquil,- 7) C3-C7 cicloalquenil,- 8) aril,- 9) heteroaril,- 10) heterociclil,- 11) heterobiciclil,-12) C(O)R11,-13) C(O)Y-R11 ou-14) S(O)2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;ou R8 e R9, juntos com o átomo de nitrogênio ao qualestão unidos, formam um anel heterocíclico de cinco, seisou sete membros opcionalmente substituído com um ou maissubstituintes R6;R10 é:-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) B (OR13) (OR14),-5) C1-C6 alquil,-6) C2-C6 alquenil,-7) C2-C4 alquinil,-8) C3-C7 cicloalquil,-9) C3-C7 cicloalquenil,-10) haloalquil,-11) OR7,-12) NR8R9,-13) SR7,-14) COR7,-15) C(O)O R7,-16) S(O)mR7,-17) CONR8R9,-18) S(O)2NR8R9i-19) aril,-20) heteroaril,-21) heterociclil ou-22) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, ecicloalquenil é opcionalmente substituído com um ou maissubstituintes R6;R11 é:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil,-3) C2-C6 alquenil,-4) C2-C4 alquinil,-5) C3-C7 cicloalquil,-6) C3-C7 cicloalquenil,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil ou-10) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR16;R12 é:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil,-3) C2-C6 alquenil,-4) C2-C4 alquinil,-5) C3-C7 cicloalquil,-6) C3-C7 cicloalquenil,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil,-10) heterobiciclil,-11) C(O)-R11,-12) C(O)O-R11,-13) C(O)NR8R9,-14) S(O)m R11 ou-15) C (=Y) NR8R9,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;R13 e R14 são, cada um independentemente:-1) H ou-2) Ci-C6 alquil; ouR13 e R14 são combinados para formar um anelheterocíclico ou um anel heterobiciclil;ou um pró-fármaco; ou o composto de Fórmula I émarcado com um marcador detectável ou um tag de afinidade.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ser um sal.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ser um sal farmaceuticamente aceitável.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que η é 1.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que A e A1 são CH2.

6. Composto, de acordo com a reivindicaçãocaracterizado pelo fato de que A e A1 são C=O.

7. Composto, de acordo com a reivindicaçãocaracterizado por ter a Fórmula la:<formula>formula see original document page 272</formula>em que BG, B, B1, Q, Q1, R1, R100 7 R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula Ib:<formula>formula see original document page 272</formula>em que BG, B, B1, Q, Q1, R1, R100, R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que B e B1 são Ci-C4 alquil.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que BG é: -X-L-X1-.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que BG é:<formula>formula see original document page 273</formula>

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que BG é:<formula>formula see original document page 273</formula>

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula If:<formula>formula see original document page 273</formula>em que A, A1, B, B', Q, Q1, R1, R100, R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula Ig:<formula>formula see original document page 274</formula>em que A, A1, B, B1, Q, Q1, R1, R100, R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

15. Composto 7 de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que X e X1 são selecionadosindependentemente de:-1) O, NH,-2) <formula>formula see original document page 274</formula>-3) <formula>formula see original document page 274</formula>-4) <formula>formula see original document page 274</formula>-5) <formula>formula see original document page 274</formula><formula>formula see original document page 275</formula>

16. Composto, de acordo com a reivindicação 15,caracterizado pelo fato de que X e X1 são selecionadosindependentemente de:<formula>formula see original document page 275</formula>

17. Composto, de acordo com a reivindicação 16,caracterizado pelo fato de que X e X1 são O,<formula>formula see original document page 275</formula>

18. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que L é selecionado de:-1.) -C1-C10 alquil-,-2.) -C2-C4 alquinil-,-3.) -fenil-,-4.) -bifenil-,- 5) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil)-C1-C6 alquil,- 6) -C1-C6 alquil-fenil-C1-C6 alquil,- 7) -C1-C6 alquil-bifenil-C1-C6 alquil ou- 8) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 18,caracterizado pelo fato de que L é selecionado de:- 1) -C1-C10 alquil-,- 2) -fenil-,- 3) -bifenil-,- 4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,- 5) -CH2-fenil-CH2-,- 6) -CH2-bifeni1-CH2- ou- 7) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 19,caracterizado pelo fato de que L é:<formula>formula see original document page 276</formula>

21. Composto, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que r é um número inteiro de 1,- 2, 3, 4, 5, 6, 7 OU 8.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula Ih:<formula>formula see original document page 277</formula>em que B, B1i X, X1, Q, Q1, R1, R100iR2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

23. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula li:<formula>formula see original document page 277</formula>em que B, B1, X, X17 Q; Q1, R1, R100, R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

24. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula 1j:<formula>formula see original document page 277</formula>em que Β, B1, X, X1, Q, Q1, R1, R100 R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

25. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula Ik:<formula>formula see original document page 278</formula>em que B, B1, X, X1, Q, Q17 R1, R100, R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

26. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula 11:<formula>formula see original document page 278</formula>em que B, B1, X, X1, Q, Q1, R1, R100 7 R2 e R200 são comodefinidos na reivindicação 1.

27. Composto7 de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a Fórmula Im:<formula>formula see original document page 279</formula>em que B, B1, X, X1, Q, Q1, R1, R100, R2 e R200 sao comodefinidos na reivindicação 1.

28. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que R1 e R100 são Cx-C6 alquil.

29. Composto, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que R1 e R100 são CH3.

30. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que tanto R2 quanto R200 são Ci-C6alquil.

31. Composto, de acordo com a reivindicação 30,caracterizado pelo fato de que tanto R2 quanto R200 são CH3.

32. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que Q e Q1 são NR4R5, em que R4 eR5 são como definidos na reivindicação 1.

33. Composto, de acordo com a reivindicação 32,caracterizado pelo fato de que A e A1 são C=O, R4 é H e:R5 é selecionado de:-1) haloalquil,-2) ^C1-C6 alquil,-3) C2-C6 alquenil,-4) <—C2-C4 alquinil,-5) <—C3-C7 cicloalquil,-6) <— C3-C7 cicloalquenil,-7) «-aril,-8) <—heteroaril,-9) <-heterociclil ou-10) «-heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;em que R6 e R10 são como definidos na reivindicação 1.

34. Composto, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que R4 é H e R5 é selecionadode:-1) <—C3-C7 cicloalquil,-2) <—C3-C7 cicloalquenil,-3) <—aril,-4) <—heteroaril,-5) «-heterociclil ou-6) <—heterobiciclil.

35. Composto, de acordo com a reivindicação 34,caracterizado pelo fato de que R4 é H e R5 é aril.

36. Composto, de acordo com a reivindicação 35,caracterizado pelo fato de que R4 é H e^^

37. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que A e A1 são C=O, eQ e Q1 são

38. Composto, de acordo com a reivindicação 32,caracterizado pelo fato de que A e A1 são CH2, e R4 e R5são, cada um independentemente: -1) H, -2) haloalquil, -3) <—C1-C6 alquil, -4) C2-C6 alquenil, -5) C2-C4 alquinil, -6) «-C3-C7 cicloalquil, -7) C3-C7 cicloalquenil, -8) <—aril, -9) <—heteroaril, -10) <—heterociclil, -11) <—heterobiciclil, -12) <-C(0) -R11, -13) <—C (0) O-R11,- 14) <-C( =Y) NR8R9 ou- 15) (O)2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;em que Y, R6, R8, R9, R10 e R11 são como definidos nareivindicação 1.

39. Composto de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que R4 e R5 são selecionadosindependentemente de:-1) H,-2) Ci-C6 alquil,-3) <—C (O) -R11,-4) <—C(O) O-R11 ou-5) <—S(O)2-R11,em que o alquil é substituído com um substituinte R6;em que R6 e R11 são como definidos na reivindicação 1.

40. Composto, de acordo com a reivindicação 39,caracterizado pelo fato de que R4 é:-1) H,-2) <—C (O) -R11,-3) C (O) O-R11, ou-4) -(-S(O)2-R11; eR5 é C1-C6 alquil substituído com um fenil;em que R11 é como definido na reivindicação 1.

41. Composto, de acordo com a reivindicação 40,caracterizado pelo fato de que R4 é:-1) H,-2) <-C(0) -R111-3) <—C (O) O-R11, ou-4) <-S (O)2-R11; eem que R11 é como definido na reivindicação 1.

42. Composto, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que R11 é:-1) haloalquil,C1-C6 alquil,C2-C6 alquenil,C2-C4 alquinil,aril,heteroaril,heterociclil ouheterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil é opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes R6; e em que oaril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;em que R6 e R10 são como definidos na reivindicação 1.

43. Composto, de acordo com a reivindicação 42,caracterizado pelo fato de que R11 é:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil,-3) aril,-4) heteroaril ou-5) heterociclil,em que o alquil é opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6; e em que o aril, heteroaril eheterociclil são substituídos com um substituinte R10;em que R6 e R10 são como definidos na reivindicação 1.

44. Composto, de acordo com a reivindicação 43,caracterizado pelo fato de que R11 é:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6 ou-3) fenil opcionalmente substituído com um substituinteR10;em que os substituintes R6 e R10 são como definidos nareivindicação 1.

45. Composto, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que R6 é:-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) aril,-5) heteroaril,-6) heterociclil,-7) heterobiciclil,-8) OR7,-9) SR7 ou-10) NR8R9,em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R16;em que R7, R8, R9 e R10 são como definidos nareivindicação 1.

46. Composto, de acordo com a reivindicação 45,caracterizado pelo fato de que R6 é:-1) halogênio,-2) aril, ou-3) NR8R97em que o aril é opcionalmente substituído com umsubstituinte R10;em que R8, R9 e R10 são como definidos na reivindicação 1.

47. Composto, de acordo com a reivindicação 46,caracterizado pelo fato de que R6 é:- 1) halogênio,- 2) fenil ou- 3) NR8R91em que o fenil é opcionalmente substituído com umsubstituinte R16;em que R8 e R9 são como definidos na reivindicação 1.

48. Composto, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que R8 e R9 são, cada umindependentemente:- 1) H,- 2) haloalquil,- 3) C1-C6 alquil,- 4) C2-C6 alquenil,- 5) C2-C4 alquinil,- 6) C3-C7 cicloalquil ou- 7) C3-C7 cicloalquenil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;em que os substituintes R6 são como definidos nareivindicação 1.

49. Composto, de acordo com a reivindicação 48,caracterizado pelo fato de que R8 e R9 são, cada umindependentemente:- 1) H ou- 2) C1-C6 alquil,em que o alquil é opcionalmente substituído com umaril.

50. Composto, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que R10 é:-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) haloalquil,-5) OR7,-6) NR8R9, ou-7) SR7 ;em que R7, R8, e R9 são como definidos na reivindicação 1.

51. Composto, de acordo com a reivindicação 50,caracterizado pelo fato de que R10 é:-1) halogênio, ou-2) OC1-C6 alquil.

52. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que quando A e A1 forem CH2, Q eQ1 serão selecionados independentemente de:<formula>formula see original document page 286</formula><formula>formula see original document page 287</formula>

53. Isômero, enantiômero, diastereoisômero outautômero de um composto caracterizado por ser representadopela Fórmula I:<formula>formula see original document page 287</formula>ou um sal deste,em que:n é 1;m é 0, 1 ou 2;Y é NH, O OU S;A e A1 são selecionados independentemente de-1) -CH2- ou-2) -C(O) - ;B e B1 são independentemente C1-C6 alquil;BG é:-1) -X-L-X1- ouBG é:<formula>formula see original document page 288</formula>X e X1 são selecionados independentemente de1) O, NH, S,<formula>formula see original document page 288</formula>L é selecionado de:-1) -Ci-Cio alquil-,-2) -C2-C6 alquenil-,-3) -C2-C4 alquinil-,-4) -C3-C7 cicloalquil-,--5) -fenil-,-6) -bifenil-,-7) -heteroaril-,-8) -heterociclil-,-9) -C1-C6 alquil-(C2-C6 alquenil) - C1-C6 alquil-,-10) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil) -C1-C6 alquil,-11) -C1-C6 alquil-(C3-C7 cicloalquil)-C1-C6 alquil,-12) -C1-C6 alquil-fenil-C1-C6 alquil,-13) -C1-C6 alquil-bifenil-C1-Ce alquil,-14) -C1-C6 alquil-heteroaril-C1-C6 alquil,-15) -C1-C6 alquil heterociclil-C1-C6 alquil ou-16) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;R1, R100, R2 e R200 são selecionados independentementede:-1) H ou-2) C1-C6 alquil opcionalmente substituído com um oumais substituintes R6;Q e Q1 são, cada um independentemente: NR4R5;R4 e R5 são, cada um independentemente:-1) H,-2) haloalquil,-3) <-C1-C6 alquil,-4) <—C2-C6 alquenil,-5) <—C2-C4 alquinil,-6) <—C3-C7 cicloalquil,-7) <-C3-C7 cicloalquenil,-8.) <—aril,-9.) <—heteroaril,-10.) <—heterociclil,-11.) <—heterobiciclil,-12.) <—C (O) -R11,-13.) <—C (O) O-R11,-14.) <-C( =Y) NR8R9, ou-15.) <—S (O) 2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR10;R6 é:-1.) halogênio,-2.) NO2,-3.) CN,-4.) haloalquil,-5.) C1-C6 alquil,-6.) C2-C6 alquenil,-7.) C2-C4 alquinil,-8.) C3-C7 cicloalquil,-9.) C3-C7 cicloalquenil,-10.) aril,-11.) heteroaril,-12.) heterociclil,-13.) heterobiciclil,-14.) OR7,-15.) S(O)mR7,-16.) NR8R9,-17) NR8S(O)2R11,-18) COR7,-19) C(O)OR7i-20) CONR8R9,-21) S(O)2NR8R9i-22) OC(O)R7,-23) OC(O)Y-R11,-24) SC(O)R7 ou-25) NC(Y)NR8R9,em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10;R7 é:-1) H,-2) haloalquil,-3) Ci-C6 alquil,-4) C2-C6 alquenil,-5) C2-C4 alquinil,-6) C3-C7 cicloalquil,-7) C3-C7 cicloalquenil,-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) R8R9NC (=Y) OU-13) C1-C6 alquil-C2-C4 alquenil, ou-14) C1-C6 alquil-C2-C4 alquinil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil4) B(OR13)(OR14)f5) C1-C6 alquil,6) C2-C6 alquenil,7) C2-C4 alquinil,8) C3-C7 cicloalquil,9) C3-C7 cicloalquenil,10) haloalquil,11) OR7,12) NR8R9,13) SR7,14) COR' ,15) C(O)O R7,16) S(O)mR7,17) CONR8R9,18) S (0) 2NR8R9,19) aril,20) heteroaril,21) heterociclil ou22) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, ecicloalquenil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R6; eR11 é:1) haloalquil,2) C1-C6 alquil,3) C2-C6 alquenil,4) C2-C4 alquinil,5) C3-C7 cicloalquil,6) C3-C7 cicloalquenil,7) aril,8) heteroaril,9) heterociclil ou10) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesR16;ou um pró-fármaco; ou o composto de Fórmula I émarcado com um marcador detectável ou um tag de afinidade.

54. Composto, de acordo com a reivindicação 53,caracterizado pelo fato de que:η = 1;A e A1 são C=O,B e B1 são independentemente Ci-C4 alquil;BG é -X-L-X1; OU<formula>formula see original document page 293</formula>X e X1 são selecionados independentemente de:<formula>formula see original document page 293</formula>L é selecionado de:-1) -Ci-Cio alquil-,-2) -fenil-,-3) -bifenil-,-4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,-5) -CH2-feniI-CH2-,-6) -CH2-bifeniI-CH2- ou-7) -Ci-Cs alquil-O-Ci-C6 alquil;R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q Q1 são NR4R5;R4 é H; eR5 é selecionado de:-1) <—C3 -C7 cicloalquil,-2) C3-C7 cicloalquenil,-3) <—aril,-4) <—heteroaril,-5) <—-heterociclil ou-6) <—heterobiciclil.

55. Composto, de acordo com a reivindicação 54,caracterizado pelo fato de que:A e A1 são C=O,B e B1 são independentemente C1-C4 alquil;BG é -X-L-X1; ouBG é <formula>formula see original document page 294</formula>X e X1 são O, <formula>formula see original document page 294</formula>L é<formula>formula see original document page 295</formula>

56. Composto, de acordo com a reivindicação 53,caracterizado pelo fato de que:n= 1;A e A1 são CH2;B e B1 são independentemente C1-C4 alquil;BG é -X-L-X1; ou<formula>formula see original document page 295</formula>BG é -H H ou oX e X1 são selecionados independentemente de:<formula>formula see original document page 295</formula><formula>formula see original document page 296</formula>-4) L é selecionado de:-1) -Ci-Cio alquil-,-2) -fenil-,-3) -bifenil-,-4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,-5) -CH2-fenil-CH2- ,-6) -CH2-bifeniI-CH2- ou-7) -C1-C6 alquil-0-Ci-C6 alquil;R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q e Q1 são NR4R5;R4 é:-1) H,-2) <-C(0)-R1:l,-3) <-C (O) O-R11, OU-4) ^S(O)2-R11; eR5 é Ci-C6 alquil substituído com um fenil;em que R11 é como aqui definido;R11 é:-1) haloalquil,-2) Ci-C6 alquil,-3) aril,-4) heteroaril ou-5) heterociclil,em que o alquil é opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6; e em que o aril, heteroaril eheterociclil são substituídos com um substituinte R10;em que R6 e R10 são como aqui definidos;R6 é:1) halogênio,2) aril ou3) NR8R9,em que o aril é opcionalmente substituído com umsubstituinte R10;em que R8, R9 e R10 são como aqui definidos;R8 e R9 são, cada um independentemente:1) H,10 2) haloalquil,3) C1-C6 alquil,4) C2-C6 alquenil,5) C2-C4 alquinil,6) C3-C7 cicloalquil ou7) C3-C7 cicloalquenil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;em que os substituintes R6 são como aqui definidos; eR10 é:1) halogênio,2) NO2,3) CN,4) haloalquil,5) OR7i6) NR8R9, ou7) SR7 ;em que R7, R8, e R9 são como aqui definidos.

57. Composto, de acordo com a reivindicação 56,caracterizado pelo fato de que:n= 1;A e A1 são CH2;B e B1 são independentemente C1-C4 alquil;BG é: -X-L-X1; ou<formula>formula see original document page 298</formula>X e X1 são selecionados independentemente de:-1) 0,-2) <formula>formula see original document page 298</formula>-3) <formula>formula see original document page 298</formula>-4) <formula>formula see original document page 298</formula>L é selecionado de:-1) -Ci-Cio alquil-,-2) -fenil-,-3) -bifenil-,-4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,-5) -CH2-fenil-CH2- ,-6) -CH2-bifenil-CH2- ou-7) -Cx-C6 alquil-O-Ci-Cê alquil;R1, R100, R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q e Q1 são NR4R5;R4 é:-1) H,-2) <—C (O) -R11,-3) <—C (O) O-R11 ou-4) <—S (O) 2-R11; eR5 é<formula>formula see original document page 299</formula>em que R11 é como aqui definido;R11 é:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil opcionalmente substituído com um oudois substituintes R6 ou-3) fenil opcionalmente substituído com um substituinte R10;em que o R6 e os substituintes R10 são como aquidefinidos;R6 é:-1) halogênio,-2) fenil ou-3) NR8R9,em que o fenil é opcionalmente substituído com umsubstituinte R10;em que R8 e R9 são como aqui definidos;R8 e R9 são, cada um independentemente:1) H ou2) C1-C6 alquil,em que o alquil é opcionalmente substituído com umaril; eR10 é:-1) halogênio ou-2) OC1-C6 alquil.

58. Composto, de acordo com a reivindicação 57,caracterizado pelo fato de que:η= 1;A e A1 são CH2;B e B1 são independentemente C1-C4 alquil;BG é: -X-L-X1; OU<formula>formula see original document page 300</formula>BG é H fi ou O<formula>formula see original document page 300</formula>X e X1 são selecionados independentemente de<formula>formula see original document page 300</formula>L é selecionado de:1) -C1-C10 alquil-,2) -fenil-,3) -bifenil-,4) -CH2-(C2-C4 alquinil)-CH2-,5) -CH2-fenil-CH2-,6) -CH2-bifenil-CH2- ou7) -Ci-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;R1, R100 7 R2 e R200 são, cada um independentemente, CH3;Q e Q1 são selecionados independentemente de:<formula>formula see original document page 301</formula>

59. Composto caracterizado por ser representado pelaFórmula 2:<formula>formula see original document page 301</formula>em que n, R1, R2, R100, R200, A, A1, Q, Q1, B, B1 e BGsão como definidos na reivindicação 1; eem que a linha pontilhada representa uma linhadivisória hipotética para a comparação dos substituintesassociados a Ml e M2.

60. Composto, de acordo com a reivindicação 59,caracterizado pelo fato de que Ml é igual a M2.

61. Composto, de acordo com a reivindicação 59,caracterizado pelo fato de que Ml é diferente de M2.

62. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ser selecionado do grupo que consiste em:<table>table see original document page 302</column></row><table><table>table see original document page 303</column></row><table><table>table see original document page 304</column></row><table><table>table see original document page 305</column></row><table><table>table see original document page 306</column></row><table><table>table see original document page 307</column></row><table><table>table see original document page 308</column></row><table><table>table see original document page 309</column></row><table><table>table see original document page 310</column></row><table><table>table see original document page 311</column></row><table><table>table see original document page 312</column></row><table><table>table see original document page 313</column></row><table><table>table see original document page 314</column></row><table><table>table see original document page 315</column></row><table><table>table see original document page 316</column></row><table><table>table see original document page 317</column></row><table><table>table see original document page 318</column></row><table>

63. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 2(iii):<formula>formula see original document page 319</formula>em que PG2 é um grupo protetor, e R1, R2, B, AeQ sãocomo definidos na reivindicação 1.

64. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 3 (iii) :<formula>formula see original document page 319</formula>em que B, B1, A, A1i Q e Q1 são como definidos nareivindicação 1.

65. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 4(iii):<formula>formula see original document page 319</formula>em que PG3 é ura grupo protetor, e B, R1, R2, AeQ sãocomo definidos na reivindicação 1.

66. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 5(i):<formula>formula see original document page 320</formula>em que PG3 são grupos protetores, e B, B1, R1, R100 R2,R200 , A, A1, Q e Q1 são como definidos na reivindicação 1.

67. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 6(iii):<formula>formula see original document page 320</formula> em que PG3 é um grupo protetor, e R1, R2, B, AeQ sãocomo definidos na reivindicação 1.

68. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 7 (iii):<formula>formula see original document page 320</formula>em que PG3 é um grupo protetor, e R1i R2, B, AeQ sãocomo definidos na reivindicação 1.

69. Composto intermediário caracterizado por serrepresentado pela Fórmula 8(iii):<formula>formula see original document page 321</formula>em que B, B1i A, A1, Q e Q1 são como definidos nareivindicação 1.

70. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de dois intermediários representadospela Fórmula 2(iii):<formula>formula see original document page 321</formula>em um solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

71. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 3(iii) :<formula>formula see original document page 322</formula>em um solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

72. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 4 (iii) :<formula>formula see original document page 322</formula>e um diácido ativado, por exemplo, um cloreto dediácido ou um diácido ativado com o uso de 2 equivalentesde agentes de acoplamento de peptídeo, era um solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

73. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de dois intermediários representadospela Fórmula 4(iii) :<formula>formula see original document page 323</formula>com trifosgeno, ou um equivalente a trifosgeno, em umsolvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

74. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de dois intermediários representadospela Fórmula 4(iii):<formula>formula see original document page 323</formula>com cloreto de oxalila em um solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

75. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 6(iii):<formula>formula see original document page 324</formula>e um cloreto bis-ácido ou a bis-ácido, com o uso de umagente de acoplamento, em um solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

76. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 7(iii) :<formula>formula see original document page 324</formula>e uma diamina com o uso de um agente de acoplamento emum solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

77. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) o acoplamento de um intermediário representado pelaFórmula 8 (iii) :<formula>formula see original document page 325</formula>em um solvente; eb) a remoção dos grupos protetores a fim de formar oscompostos de Fórmula 1.

78. Processo para a produção de compostosrepresentados pela Fórmula I da reivindicação 1, o processocaracterizado por compreender:a) a hidrogenação de um composto representado pela Fórmula Ig:<formula>formula see original document page 325</formula>em um solvente,b) filtração e concentração do solvente para gerar uracomposto de fórmula Iq.

79. Método de modulação de função de IAP, o métodocaracterizado por compreender: o contato de uma célula comum composto de acordo com a reivindicação 1, de forma aevitar a ligação de a proteína de ligação de BIR a umdomínio IAP BIR modulando, dessa forma, a função de IAP.

80. Uso de um composto representado pela Fórmula I:<formula>formula see original document page 326</formula>ou um sal deste, caracterizado por ser para afabricação de um medicamento para o tratamento ou aprevenção de um estado de doença que se caracteriza porapoptose insuficiente,em que:η é 0 ou 1;m é 0, 1 ou 2,-ρ é 1 ou 2 ;Y é NH, 0 ou S;A e A1 são selecionados independentemente de:-1) -CH2-,-2) -CH2CH2-,-3) -C(CH3)2 -,-4) -CH (C1-C6 alquil) - ,-5) -CH(C3-C7 cicloalquil)-,-6) -C3-C7 cicloalquil-,-7) -CH (C1-C6 alquil-C3-C7 cicloalquil) - ou-8) -C(O)-;B e B1 são independentemente Cx-C6 alquil;BG é:<formula>formula see original document page 327</formula>X e X1 são selecionados independentemente de<formula>formula see original document page 327</formula>L é selecionado de:-1) -C1-C10 alquil-,-2) -C2-C6 alquenil-,-3) -C2-C4 alquinil-,-4) -C3-C7 cicloalquil-,-5) -fenil-,-6) -bifenil-,-7) -heteroaril-,-8) -heterociclil-,-9) -C1-C6 alquil-(C2-C6 alquenil)- C1-C6 alquil-,-10) -C1-C6 alquil-(C2-C4 alquinil)-C1-C6 alquil,-11) -C1-C6 alquil-(C3-C7 cicloalquil)-C1-C6 alquil,-12) -C1-C6 alquil-fenil-C1-Ce alquil,-13) -C1-C6 alquil-bifenil-C1-C6 alquil,-14) -C1-C6 alquil-heteroaril-C1-C6 alquil,-15) -C1-C6 alquil heterociclil-C1-C6 alquil ou-16) -C1-C6 alquil-O-C1-C6 alquil;R1, R100 R2 e R200 são selecionados independentementede:-1) H ou-2) Ci-C6 alquil opcionalmente substituído com um oumais substituintes R6;Q e Q1 são, cada um independentemente:-1) NR4R5,-2) OR11 ou-3) S(O)mR11; OUQ e Q1 são, cada um independentemente:em que G é um anel de 5, 6 ou 7 membros queopcionalmente incorpora um ou mais heteroátomos escolhidosde S, N ou 0, o anel sendo opcionalmente substituído com umou mais substituintes R12;R4 e R5 são, cada um independentemente:1) H,2) haloalquil,3) ^C1-C6 alquil,4) <-C2-C6 alquenil,5) <-C2-C4 alquinil,6) <— C3-C7 cicloalquil,7) <— C3-C7 cicloalquenil,8) <-aril,9) <— heteroaril,10) <-heterociclil,11) heterobiciclil,12) <—C (O) -R11,13) <-C(0) O-R11,14) <-C( =Y) NR8R9 ou15) S (O) 2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R1R6 é:1) halogênio,2) NO2,3) CN,4) haloalquil,-5) C1-C6 alquil,-6) C2-C6 alquenil,-7) C2-C4 alquinil,-8) C3-C7 cicloalquil,-9) C3-C7 cicloalquenil,-10) aril, -11) heteroaril,-12) heterobiciclil,-13) heterobiciclil,-14) OR7,-15) S(O)R,R7,-16) NR8S(O)2R11,-17) NR8S(O)2R11,-18) COR7,-19) C(O)OR7,-20) CONR8R9-21) S(O)2NR8R9-22) OC(O)R7,-23) OC(O)Y-R11,-24) SC(O)R7 ou-25) NC(Y)NR8R9,em que o aril, heteroril, heterociclil eheterobiciclil sao opcionalmente substituidos com um oumais substituintes R10;R7 e:-1) H,-2) haloalquil,-3)C1-c6 alquil,-4)C2-c6 alquenil,-5) C2-C4 alquinil,-6) C3-C7 cicloalquil,-7) C3-C7 cicloalquenil,-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) R8R9NCi=Y) ou-13) C1-C6 alquil-C2-C4 alquenil ou-14) C1-C6 alquil-C2-C4 alquinil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10;R8 e R9 são, cada um independentemente:-1) H,-2) haloalquil,-3) Ci-C6 alquil,-4) C2-C6 alquenil,-5) C2-C4 alquinil,-6) C3-C7 cicloalquil,-7) C3-C7 cicloalquenil,-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) C(O)R11,-13) C(O)Y-R11 ou-14) S(O)2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10; ou R8 e R9i juntos com o átomo de nitrogênio ao qualestão unidos, formam um anel heterocíclico de cinco, seisou sete membros opcionalmente substituído com um ou maissubstituintes R6; R10 é: -1) halogênio, -2) NO2, -3) CN, -4) B (OR13) (OR14) , -5) Ci-C6 alquil, -6) C2-Ce alquenil, -7) C2-C4 alquinil, -8) C3-C7 cicloalquil, -9) C3-C7 cicloalquenil, -10) haloalquil, -11) OR7, -12) NR8R9, -13) SR7, -14) COR7, -15) C(O)O R7, -16) S(O)mR7, -17) CONR8R9, -18) S (0) 2NR8R9, -19) aril, -20) heteroaril, -21) heterociclil oui-22) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, ecicloalquenil é opcionalmente substituído com um ou maissubstituintes R6;R11 é:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil,-3) C2-C6 alquenil,-4) C2-C4 alquinil,-5) C3-C7 cicloalquil,-6) C3-C7 cicloalquenil,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil ou-10) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais R10 substituintes;R12 e:-1) haloalquil,-2) C1-C6 alquil,-3) C2-C6 alquenil,-4) C2-C4 alquinil,-5) C3-C7 cicloalquil,-6) C3-C7 cicloalquenil,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil,10) heterobiciclil,11) C(O)-R11,12) C(O)O-R11,13) C(O)NR8R9,14) S(O)m R11 ou15) C (=YJNR8R9iem que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6;e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um oumais substituintes R10;R13 e R14 são, cada um independentemente:1) H ou2) C1-C6 alquil; ouR13 e R14 são combinados para formar um anelheterocíclico ou um anel heterobiciclil.

81. Uso do composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizado por ser na fabricação de ummedicamento para o tratamento ou a prevenção de um estadode doença que se caracteriza por apoptose insuficiente.

82. Uso, de acordo com as reivindicações 80 ou 81,caracterizado pelo fato de que o estado de doença é câncer.

83. Uso do composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizado por ser na fabricação de ummedicamento para o tratamento ou a prevenção de umdistúrbio proliferativo.

84. Uso do composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 62, caracterizado por ser em combinação com um agentepara a fabricação de um medicamento para o tratamento ou aprevenção de um distúrbio proliferativo, em que o agente éselecionado de:a) um modulador do receptor de estrogenio,b) um modulador do receptor de androgenio,c) um modulador do receptor de retinoide,d) um agente citotoxico,e) um agente antiproliferativof) um inihibidor da prenil-proteina transferase,g) um inihibidor da HMG- CoA redutase,h) um inihibidor da HIV protease,i) um inihibidor da transcriptase reversa, k) um inihibidor da angiogenese,1) um agonista de PPAR-ym) um Agonista de PPAR-8n) um inihibidor de resistencia multifarmacos inerente,o) um agente antiemeticop) um agente util no tratamento de anemia,q) agentes uteis no tratamento de neutropenia,r) um farmaco de estimulacao imunologica,s) um inihibidor de proteossoma,t) um inihibidor de HDAC,u) um inihibidor da atividade quimotripsina-like no proteossoma, ouproteossoma, ouv) inibidores de E3 ligase;w) um modulador do sistema imunológico como, porexemplo, sem limitação, interferon-alfa, Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e radiação ionizante (UVB) que podem induzir aliberação de citocinas, por exemplo, as interleucinas, TNF,ou induzir a liberação de ligantes do receptor de mortecelular como, por exemplo, TRAIL;x) um modulador de receptores de morte celular TRAIL eagonistas de TRAIL como, por exemplo, os anticorposhumanizados HGS-ETRl e HGS-ETR2;ou em combinação ou seqüencialmente com radioterapia.

85. Uso do composto de qualquer uma das reivindicações-1 a 62 caracterizado por ser em combinação com um agonistado receptor de morte celular para a fabricação de ummedicamento para tratamento ou prevenção de um distúrbioproliferativo em um indivíduo.

86. Uso, de acordo com a reivindicação 85,caracterizado pelo fato de que o agonista do receptor demorte celular é TRAIL.

87. Uso, de acordo com a reivindicação 85,caracterizado pelo fato de que o agonista do receptor demorte celular é um anticorpo de TRAIL.

88. Uso, de acordo com a reivindicação 85,caracterizado pelo fato de que o agonista do receptor demorte celular está em uma quantidade que produz um efeitosinérgico.

89. Uso, de acordo com as reivindicações 84 ou 85,caracterizado pelo fato de que o distúrbio proliferativo écâncer.

90. Composição farmacêutica caracterizada porcompreender o composto de qualquer uma das reivindicações 1a 62, misturado com um veículo, diluente ou excipientefarmaceuticamente aceitável, para o tratamento ou aprevenção de um estado de doença caracterizado por apoptoseinsuficiente.

91. Composição farmacêutica caracterizada porcompreender o composto de qualquer uma das reivindicações 1a 62 em combinação com qualquer composto que aumente onível circulante de um ou mais agonistas do receptor demorte celular para a prevenção ou o tratamento de umdistúrbio proliferativo.

92. Método de preparação de uma composiçãofarmacêutica, o método caracterizado por compreender:a mistura do composto de qualquer uma dasreivindicações 1 a 62, com um veículo, diluente ouexcipiente a farmaceuticamente aceitável.