KR20110073495A

KR20110073495A - 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20110073495A
Application number: KR1020117007886A
Authority: KR
Inventors: 페넬로페 엠. 앤더슨
Original assignee: 액세스 비지니스 그룹 인터내셔날 엘엘씨
Priority date: 2008-10-03
Filing date: 2009-09-22
Publication date: 2011-06-29
Also published as: WO2010039490A2; CN102170853B; TW201018498A; HK1160385A1; CN102170853A; KR101705912B1; WO2010039490A3; US20100086573A1; JP5706326B2; US9445975B2; TWI537009B; JP2012504620A

Abstract

안정한 투명 내지 반투명의 단층 리포솜 현탁액을 제조하고 이용하기 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 현탁액은 약 50 nm 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 균일한 복수의 단층 리포솜 입자를 가지는 리포솜 제제를 포함한다. 입자는 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc의 밀도를 가지고, 리포솜 현탁액의 약 30% 내지 약 75중량%의 양으로 존재하는 외부 상 조성물에 현탁된다. 리포솜 제제는 유용성 조성물 및 수용성 조성물을 포함하는 수성 리포솜 용액으로부터 형성된다. 유용성 조성물은 리포솜 용액의 약 5중량% 내지 약 33중량%의 농도로 존재하고, 수용성 조성물은 리포솜 용액의 약 67중량% 내지 약 95중량%의 농도로 존재한다.

Description

안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 조성물 및 방법 {COMPOSITION AND METHOD FOR PREPARING STABLE UNILAMELLAR LIPOSOMAL SUSPENSION}

본 발명은 일반적으로, 화장용, 치료용, 또는 진단용 적용분야를 위한 충전된 활성제를 가지거나 가지지 않는 안정한, 투명 내지 반투명의 단층 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

리포솜은 일반적으로, 수용성(water-soluble), 친수성 분자를 수성 중심에 포획하고 유용성(oil-soluble), 소수성 분자를 이중층의 소수성 영역에 파묻을 수 있는 인지질 이중층으로 구성된 막을 가지는 폐쇄된 구형 소포(vesicle)이다. 리포솜은 통상적으로 약 25 nm 내지 1000 nm의 작은 입자이고, 달걀 포스파티딜에탄올아민과 같은 혼합 지질 사슬을 가지는 천연 유도된 인지질을 포함하는 다양한 인지질로 구성되거나, DOPE(디올레올릴포스파티딜에탄올아민)와 같은 순수한 성분으로 구성된다. 리포솜은 활성 화합물을 피부의 내재층(intrinsic layer)에 축적하는 담체 메커니즘을 제공하는 것에 의하여 국소 약물 제제에서 널리 사용된다. 이러한 기술 사용의 장점에는 제어 방출, 선택적 수송, 향상된 생이용성 및 안정성, 그리고 증가된 원하는 활성물의 흡수가 포함된다. 게다가, 리포솜은 내부 피부 세포를 둘러싸는 세포외 지질에 대한 화학적 유사성으로 인하여, 피부에 대하여 매우 큰 친화성(affinity) 및 적합성(compatibility)을 가진다. 리포솜의 지질 이중층은 다른 이중층, 예를 들어 세포막과 융합될 수 있고, 이에 따라 리포솜 내용물을 전달할 수 있다.

리포솜의 상업적 개발은 불량한 안정성, 투명도, 및 짧은 저장 기간에 의하여 곤란했다. 리포솜 소포는, 특히 계면활성제, 용매, 반대의(adverse) pH 조건, 상승된 온도, 또는 심지어 물에 장기간 동안 노출될 때 서로 융합하거나 응집하는 경향이 있다.

요약

안정한 투명 내지 반투명의 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 조성물 및 방법이 본 명세서에 기재된다. 본 발명은 리포솜 현탁액이 최대 1년 동안 또는 그 이상 활성제를 포함하거나 포함하지 않고 다양한 상승되거나 저하된 온도에서 안정성을 나타내는 균일한 크기의 입자의 단봉 분포를 유지하도록, 특정한 리포솜 성분의 조합이 외부 상 조성물에 분산될 수 있다는 발견을 전제한다. 구체적으로, 분산된 리포솜 입자 분포의 평균 지름을 감소시키고, 분산된 리포솜 입자와 외부 상 조성물 사이의 밀도 차이를 최소화하며, 외부 상 조성물의 점도를 증가시키고, 소포의 이중층 막에 강성(rigidity)을 부여하여, 리포솜 현탁액의 안정성, 투명도 및 저장 기간이 리포솜 입자의 구조적 무결성 또는 생활성을 희생하지 않고 향상될 수 있다.

한 양태에서, 안정한 단층 리포솜 현탁액은 21℃(백분도)에서 10 sec^-1의 전단율(shear rate)에서 약 2.5 cP(센티푸아즈) 내지 약 40,000 cP의 점도 및 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc의 밀도를 가지는 외부 상 조성물에 현탁된 리포솜 제제를 포함한다. 외부 상 조성물은 리포솜 현탁액의 약 30중량% 내지 약 75중량%의 양으로 존재한다. 리포솜 현탁액은 약 1.30 내지 약 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃의 온도에서 최소한 30 일의 기간 동안, 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안, 또는 두 가지 모두에서 순수한(neat) 형태로 균일한 입자 분포를 가지면서 안정하다. 리포솜 현탁액은 약 50 nm 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 복수의 단층 리포솜 입자를 포함한다. 리포솜 제제는 유용성 조성물과 수용성 조성물을 포함하는 수성 리포솜 용액으로부터 형성된다. 유용성 조성물은 리포솜 용액의 약 5중량% 내지 약 33중량% 농도로 존재하고, 수용성 조성물은 리포솜 용액의 약 67중량% 내지 약 95중량% 농도로 존재한다. 유용성 조성물은 결합제(coupling agent), 적어도 하나의 인지질, 적어도 하나의 강성 강화제(rigidity enhancer), 및 항산화제를 포함한다.

또 다른 구체예에서, 리포솜 제제는 레시틴 제제, 부틸렌 글리콜, 세라마이드 IIIB, β-시토스테롤, 및 토코페롤 중 하나 이상을 포함하는 유용성 조성물을 이용하여 형성된다. 이 구체예에서, 리포솜 현탁액은 리포솜 현탁액의 약 35% 내지 약 75% 농도로 글리세린을 포함한다.

또 다른 양태에서, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 방법은 다음 단계를 포함한다: (a) 결합제, 적어도 하나의 인지질, 강성 강화제, 및 항산화제를 포함하는 유용성 조성물을 제조하는 단계; (b) 수용성 조성물을 제조하는 단계; (c) 수용성 조성물과 유용성 조성물을 조합하여 다층(multilamellar), 다소포(multivesicular) 리포솜 제제를 형성하는 단계; (d) 다층, 다소포 리포솜 제제를 단층 리포솜 제제로 전환하는 단계; 및 (e) 단층 리포솜 제제를 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 약 2.5 cP 내지 약 40,000 cP의 점도 및 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc 범위 내의 밀도를 가지는 외부 상 조성물에 첨가하여 각각 약 50 nm 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 복수의 단층 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 현탁액을 형성하는 단계, 상기 리포솜 현탁액은 1.30 내지 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃에서 최소한 30 일의 기간 동안, 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안, 또는 두 가지 모두에서 순수한 형태로 균일한 입자 분포를 가지면서 안정성을 유지한다.

또 다른 양태에서, 화장품 제형을 제조하기 위한 방법은 본 발명의 리포솜 현탁액을 화장용으로 적절한 매트릭스와 조합하여 크림, 로션, 겔, 세럼, 토닉, 에멀젼, 페이스트, 또는 스프레이 형태의 화장품 제형을 형성하는 것을 포함한다.

본 발명의 리포솜 현탁액은 향상된 안정성 및 생물학적 활성 프로파일을 특징으로 하고, 리포솜이 사용되는 다양한 화장용, 치료용, 또는 진단용 적용분야에서 유용할 수 있다. 게다가, 개시된 리포솜 현탁액의 반투명 특징은 선행 기술에서 사용되는 불투명 제형보다 더욱 심미적으로 유리한 외양을 제공한다.

도 1A는 Zeiss-902 투과 전자 현미경(TEM)을 이용하여 얻은, 표 2의 구체예에 따른 리포솜 현탁액의 30,000X 배율 전자 현미경사진이고; 도 1B 및 1C는 도 1A의 리포솜 현탁액의 180,000X 배율 TEM 현미경사진이다. 대표적인 지질 이중층이 도 1B 및 1C에서 화살표에 의하여 식별된다.
도 2는 도 1A-1C에 나타나는 리포솜 제형에 따른 또 다른 구체예의 19 개월의 저장 기간 후의 입자 크기 분석이다.
도 3은 Nanotrac®　N 150 Submicron 입자 크기 분석기를 사용한 동적 레이저 광 산란에 의한, 표 4의 구체예에 따른 리포솜 현탁액의 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후의 입자 크기 분석이다.
도 4는 표 4의 구체예에 따른 리포솜 현탁액의 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후의 입자 크기 분석이다.
도 5는 표 4의 구체예에 따른 리포솜 제형의 주위 온도 조건에서 19 개월의 저장 기간 후의 입자 크기 분석이다.
도 6은 표 5에 따른 리포솜 현탁액의 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후의 입자 크기 분석이다.
도 7은 표 6에 따른 리포솜 현탁액의 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후의 입자 크기 분석이다.
도 8은 Zeiss-902 전자 현미경을 사용하여 구한 리포솜 크림 제형의 11,430X 배율 TEM 현미경사진이다. 리포솜이 화살표에 의하여 명시된다.
도 9는 Zeiss-902 전자 현미경을 사용하여 구한 리포솜 크림 제형의 30,000X 배율 TEM 현미경사진이다. 리포솜이 화살표에 의하여 명시된다.

명세서와 청구범위의 명확하고 일관된 이해를 돕기 위하여, 다음의 정의가 제공된다.

용어 "리포솜 용액"은 외부 상 조성물에 현탁되기 전의, 농축 수용액 중의 리포솜 입자 또는 소포의 제제를 지칭한다.

용어 "리포솜 제제"는 리포솜 입자 또는 소포의 제제를 지칭한다. 리포솜 제제는 수용액에 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 용액일 수 있거나 (예를 들어, 외부 상 조성물에 현탁하기 전), 리포솜 용액으로부터 제조된 동결건조된 리포솜 입자 또는 소포의 제제일 수 있다.

용어 "리포솜 용액"은 동결건조 또는 외부 상 조성물에 현탁하기 전의, 수용액에 리포솜 입자 또는 소포를 포함하는 리포솜 제제를 지칭한다.

용어 "리포솜 현탁액"은 외부 상 조성물에 현탁된 리포솜 제제를 지칭한다.

용어 "결합제"는 상이한 극성의 혼합 불가능한 상을 가용화하고, 리포솜 제제 또는 리포솜 현탁액의 안정성을 유효하게 하고 보존하기에 적절한 연결 매질(connective medium)을 지칭한다.

용어 "강성 강화제"는 지질 이중층에 파묻힐 때 지방산 사슬의 움직임 또는 유동성을 감소시키는 기능을 하고, 지방산 사슬의 패킹(packing)을 촉진하는 스핑고지질, 세라마이드, 또는 스테롤을 지칭한다.

별도로 명시하지 않으면, 본 명세서에 언급한 모든 비율 및 백분율은 중량 기준이다. 또한, 본 특허 전반에 인용된 모든 참고문헌, 특허 및 공개공보의 내용이 본 명세서에 참고문헌으로 수록된다.

한 양태에서, 본 발명은 약 50 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 복수의 단층 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 제제를 포함하는 안정한 반투명의 단층 리포솜 현탁액을 제공하는데, 여기서 리포솜 제제는 리포솜 현탁액의 약 30중량% 내지 약 75중량%를 차지하는 외부 상 조성물에 현탁된다. 외부 상 조성물은 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 약 2.5 cP 내지 약 40,000 cP의 점도 및 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc의 밀도를 가진다. 리포솜 현탁액은 약 1.30 내지 약 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃의 온도에서 최소한 30 일의 기간 동안, 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안, 또는 두 가지 모두에서 순수한 형태로 안정하다.

리포솜 제제 및 현탁액

리포솜 제제는 수성 리포솜 용액 중의 복수의 리포솜 입자 또는 소포, 또는 리포솜 용액으로부터 기원하는 복수의 동결건조된 리포솜 입자를 포함한다. 리포솜 제제 중의 리포솜 입자 또는 소포는 다층, 다소포 형태일 수 있거나, 실질적으로 단층 형태일 수 있다. 이후 추가로 설명하는 바와 같이 리포솜 제제를 외부 상 조성물에 첨가하여 본 발명에 따른 리포솜 현탁액을 형성한다. 리포솜 제제 중의 리포솜 입자는 유용성 조성물과 수용성 조성물로 이루어진 수성 리포솜 용액으로부터 형성된다.

유용성 조성물

유용성 조성물은 결합제, 인지질 또는 인지질 혼합물, 강성 강화제, 및 항산화제를 포함한다. 본 발명의 리포솜 현탁액 중의 유용성 조성물은 인지질, 세라마이드, 스핑고지질, 콜레스테롤, 및 트리글리세라이드, 또는 식물에서 유래한 파이토스테롤과 같은 다른 지질을 비롯한 천연 세포막에 보통 존재하는 복수의 지질을 일반적으로 포함할 것이다. 유용성 조성물은 수성 리포솜 용액의 약 5중량% 내지 약 33중량%의 농도로 존재하고, 수용성 조성물은 수성 리포솜 용액의 약 67중량% 내지 약 95중량%의 농도로 존재한다.

결합제

본 발명의 리포솜 현탁액 중의 유용성 조성물은 적어도 하나의 결합제를 포함할 것이다. 결합제는 상이한 극성의 혼합 불가능한 상을 (예를 들어, 일시적으로 또는 preferentially) 가용화하고, 리포솜 제제 또는 리포솜 현탁액의 안정성을 유지하기에 적절한 연결 매질을 포함한다. 결합제는 23℃에서 약 10.5 이상의 유전상수를 특징으로 할 수 있고, 선호적(preferential) 또는 "일시적(transient)" 가용화를 용이하게 하며, 리포솜 안정성을 유효하게 하고 보존하기 위하여 본 발명의 리포솜 제제 또는 현탁액에 첨가된다. 예를 들어, 글리콜과 같은 결합제는, 예를 들어, 소수성 또는 친수성 화합물 각각을 동시에 가용화하기 위하여 사용될 수 있는 탄화수소 및 하이드록실 부분(moiety)을 모두 포함할 수 있다.

결합제는 고온에서 인지질 및 강성 강화제를 포함하는 유상(oil-phase) 성분의 선호적 가용화를 허용하고, 이로 인하여 결합제가 리포솜 용액에서 리포솜 구조물의 형성 동안 이중층 막 성분으로 이동한 다음, 냉각시, 주위 온도 조건하의 친수성 특성으로 인하여 수상(water-phase)으로 되돌아간다. 따라서, 결합제는 고온에서 지질 및 비극성 물질을 포함하는 유용성 성분을 가용화할 수 있고, 더 낮은 주위 온도에서 (이러한 저온 조건에서 지질을 가용화하기에는 불능 또는 감소된 능력) 극성 물질을 포함하는 수용성 성분을 가용화할 수 있는 "일시적 가용화제"로서 특징지어질 수 있다. 따라서, 결합제는 고전단 조건에서 단층 구조물로 효과적으로 진행할 수 있는 대략적인 다층, 다소포 리포솜 구조물의 액화 형태를 제조하는 온도 상 조합을 포함하는 이중층 막 형성을 용이하게 하도록, 온도 의존성인 "변화(changing)" 또는 일시적 작용성을 가진다. 더 낮은 온도는 활성 물질의 생물학적 활성을 손상시키는 것을 피하도록 하고, 예를 들어, 고전단/고압 장비와 관련관 과열의 효과르 감소시킨다.

결합제와 대조적으로, 에탄올과 같은 이중지질막(bilipid membrane)을 용해시킬 수 있는 다른 유용성 가용화제가, 리포솜 안정성을 나쁘게 할 수 있고, 리포솜 용액을 미세유동 장치를 포함하는 고압 장치를 통하여 가공할 때 폭발 위험을 나타낼 수 있다. 더욱이, 약 3%보다 높은 농도에서, 에탄올이 콜로이드 시스템의 밀도 균형을 파괴할 수 있고, 외부 상의 점도를 감소시킬 수 있어 콜로이드 안정성에 부정적인 영향을 미치고 및/또는 겔화제 구조물의 파괴를 초래한다.

출원인들은 뜻밖에도 결합제의 혼입이 유용성 성분의 가용화를 용이하게 할 뿐만 아니라, 유용성 활성물이 포함되는지와는 독립적으로 안정성 강화제로서 작용함을 발견했다. 특히, 출원인들은 결합제가 없는 것 이외에는 조성물과 동일한 리포솜 현탁액이 적절한 안정성을 달성하지 못함을 밝혀냈다. 이러한 것으로서, 출원인들은 본 발명의 리포솜 현탁액에서 결합제의 사용이 당해 분야에 공지된, 안정성에 대하여 결과에 영향을 미치는 변수에 속하지 않는 것으로 생각한다. 적절한 결합제에는 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, PEG-12 디메티콘과 같은 실리콘 글리콜, 또한 유사체, 유도체, 및 이의 혼합이 포함된다. 본 발명에서 사용하기 위한 결합제는 리포솜 현탁액의 약 1중량% 내지 약 10중량%, 더욱 바람직하게는 리포솜 현탁액의 약 3중량% 내지 약 8중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다. 일반적으로, 결합제(들)의 농도는 리포솜 용액 중 인지질의 총 농도와 같거나 이를 초과해야 한다. 10-15%의 결합제 농도의 사용은, 특히 더 높은 인지질 농도(예를 들어, 1.5x)를 이용할 때 약간 더 큰 활성 성분의 가용화를 허용할 수 있다. 그러나, 10% 초과의 결합제 농도는 유상이 외부 연속체(continuum)에 존재하는 상 반전(phase inversion)을 초래할 수 있고, 이에 의하여 리포솜 마이크로캡슐화를 방해하는 것으로 생각된다. 이러한 조건에서, 물이 유중수적(water-in-oil) 에멀젼과 일치하는 방식으로 지질 용액으로부터 반발된다. 이는 현미경으로 시각적으로 관찰될 수 있거나, 하이드로늄 이온 차폐(shielding)로 인하여 정확하게 pH를 측정하기에 불능이므로 추정될 수 있다. 대안으로, 결합제가 인지질 농도를 초과하는 농도에서 사용될 수 있는데, 여기서 유상 성분뿐만 아니라 수용성 조성물 중의 활성물도 마찬가지로 가용화할 필요가 있다.

인지질

본 발명의 리포솜 현탁액 중의 유용성 조성물은 적어도 하나의 인지질 또는 인지질 혼합물을 포함한다. 대표적인 인지질에는 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 포스파티드산, N-아실포스파티딜에탄올아민, 라이소인지질, 및 카르디올리핀을 포함하는, 포화 및/또는 불포화 지방 아실 부분을 포함하는 글리세로인지질; 스핑고미엘린; 플라스말로겐; 이의 수소화되거나, 부분적으로 수소화되거나, 수소화되지 않은 유도체; 이의 유사체; 및 이의 혼합이 포함된다.

라이소인지질은 아실 라디칼이 포스포리파아제 A에 의하여 인지질(예를 들어 라이소레시틴)로부터 분열될 때 수득된다. 1,3-비스포스파티딜 글리세롤과 같은 카르디올리핀은 글리세롤을 통하여 연결된 두 개의 포스파티드산으로 구성된 인지질이다. 스핑고미엘린은 통상적으로 포스포릴콜린과 세라마이드로 구성된 스핑고지질의 한 유형이다. 플라스말로겐은 글리세롤의 제1 탄소 위치가 에테르-연결된 알켄을 가지고, 제2 탄소가 전형적인 에스테르-연결된 지방산을 가지고, 제3 탄소가 일반적으로 콜린 또는 에탄올아민과 같은 인지질 헤드 그룹을 가지는 에테르 지질이다.

대표적인 인지질 혼합물에는 탈오일되거나(deoiled), 분획되거나(fractionated), 분무건조되거나, 아세틸화되거나, 가수분해되거나, 하이드록실화되거나, 수소화되거나, 및/또는 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨로 농후화되거나, 또는 이들의 조합인 미가공(crude) 레시틴을 포함하는 레시틴이 포함된다. 레시틴 및 레시틴 혼합물은 상용화되어 구입 가능하다. 일부 구체예에서, 대두로부터 유도된 포스파티딜콜린-농후화 제제와 같은 레시틴의 천연 공급원(대두/달걀)이 사용될 수 있다.

상용화되어 구입 가능한 대두/달걀 레시틴 제제 및 인지질 농축물에는, American Lecithin Company, Oxford Conn.로부터 구입 가능한 상표명 Phospholipon®　90G, Phospholipon®　90H, Phospholipon®　85G, Phospholipon®　80H, Phospholipon®　80, Phosal®　50 PG, Phosal®　50 SA, Phosal®　53 MCT, 및 Phosal®　75SA으로 판매되는 것; Ludwigshafen Germany 소재의 Lipoid GmbH로부터 구입 가능한 상표명 Lipoid®　S75, Lipoid®　S100, Lipoid®　SPC, 및 Lipoid®　SL80으로 판매되는 것; Degussa Texturant Systems UK Ltd.로부터 구입 가능한 상표명 Epikuron®　125F, Epikuron®　135F, Epikuron®　130P, Epikuron®130G, Epikuron®　100H, Epikuron®　145V, Epikuron®　170, Epikuron®　200 SH, Epikuron®　200, Emulmetik®　950, Emulmetik®　900 및 Emulmetik®　300, Emulfluid®　F30 (Emulfluid, Lipotin Nebr.), Lipotin®　100, Lipotin®　SB, Lipotin®100J, Lipotin®　H, Lipotin®　NA, Lipotin®　AH, 및 Lipopur®로 판매되는 것; Cognis로부터 구입 가능한 상표명 Terradrill®　V 408 및 Terradrill®　V 1075로 판매되는 것; Sternchemie로부터 구입 가능한 상표명 Yellowthin®　100, Yellowthin®　200, Lecistar Sun®　100, and Yellowthin Sun®　200으로 판매되는 것; Barnett Industries로부터 구입 가능한 상표명 Lecinol S-10(수소화 레시틴)으로 판매되는 것; South Plainfield, NJ 소재의 Lucas Meyer Cosmetics로부터 구입 가능한 상표명 Lipo H(20% 포스파티딜콜린으로 구성된 수소화 대두 레시틴)로 판매되는 것; 및 Lambent Technologies, Gurnee, III로부터 구입 가능한 상표명 Lanchem®　PE-130K로 판매되는 것이 포함된다.

본 발명에서 사용하기 위한 인지질은 동결건조 또는 외부 상 조성물에 첨가하기 전 수성 리포솜 용액의 약 1중량% 내지 약 10중량% 범위, 더욱 바람직하게는 리포솜 용액의 약 3중량% 내지 약 8중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다. 게다가, 수성 리포솜 용액은 바람직하게는 약 3:1 대 9:1의 물 대 지질을 포함할 것이다.

한 구체예에서, 유용성 조성물에는 인지질 제제 또는 혼합물의 적어도 60중량% 포스파티딜콜린, 적어도 70중량%, 적어도 80중량%, 적어도 85중량%, 또는 적어도 90중량%을 포함하는 혼합물이 포함된다. 또 다른 구체예에서, 유용성 조성물에는 인지질 혼합물의 약 80중량% 내지 약 95중량%의 농도로 포스파티딜콜린을 포함하는 인지질 혼합물이 포함된다. 추가적으로, 상기 인지질 혼합물은 리포솜 현탁액의 약 1중량% 내지 약 10중량%, 바람직하게는 리포솜 현탁액의 약 3중량% 내지 약 8중량%을 포함할 수 있다. 15% 초과 인지질 농도의 이용은 캡슐화된 리포솜 대신 유중수적 에멀젼을 유발하는 상 반전을 야기할 것으로 생각된다.

강성 강화제

본 발명의 리포솜 현탁액 중의 유용성 조성물에는 적어도 하나의 강성 강화제가 포함될 것이다. 강성 강화제(들)에는 적어도 하나의 스핑고지질, 세라마이드, 스테롤, 또는 이의 조합이 포함되는데, 이들은 지질 이중층에 파묻힐 때 지방산 사슬의 움직임 또는 유동성을 감소시키고, 지질 이중층의 패킹을 촉진하는 기능을 한다. 증가된 강성은 소포의 파열과 누출을 감소시킬 수 있고, 입자 사이의 인력을 억제하도록 막의 제타 전위 또는 전하를 이동시킬 수 있다. 강성 강화제(들)은 리포솜 입자에서 전하 또는 제타 전위 안정화를 돕는 것으로 생각된다.

스핑고지질은 피부의 장벽 기능 유지에 관련된 핵심 상피 지질을 나타낸다. 스핑고신, 스핑가닌, 스핑고미엘린, 및 파이토스핑고신과 같은 스핑고지질은, 일반적으로 중심 그룹 또는 "뼈대(backbone)"로서 긴 스핑고이드 염기를 포함하고, 아미드-연결된 장쇄 지방산 및 헤드 그룹을 포함한다. 상이한 헤드 그룹 (예를 들어 콜린포스페이트, 글루코오스, 갈락토오스, 폴리사카라이드) 및 상이한 지방산과 스핑고이드 염기를 가지는 수백 가지의 공지된 스핑고지질의 클래스가 존재한다. 파이토스핑고신은 피부에서 효소에 의하여 스핑고지질로 전환되는 건강한 각질층에 농축되는 세라마이드 전구물질이다.

세라마이드는 스핑고지질의 일족을 구성하며, 극도로 불용성이고 제형화하기 어렵다. 외부 투여된 세라마이드는 투과성 장벽의 지질 층에 도달하기 위하여 각질층을 투과할 수 있어야 한다. 건조 피부의 원인 중 하나가 세포간 지질 층 내의 세라마이드 양의 감소인 것으로 생각된다. 그러므로 본 발명의 리포솜 현탁액을 이용하여 국소 투여로 이러한 격감된 지질을 성공적으로 대체할 수 있는 것이 바람직하다. 본 발명의 리포솜 현탁액은 세라마이드를 전달하기 위한 유용한 수단을 제공한다.

세라마이드는 천연 발생 세라마이드, 합성 세라마이드, 글리코실세라마이드, 또는 이들로부터의 유도체일 수 있다. 천연 발생 세라마이드는 동물, 식물, 또는 미생물로부터 유도될 수 있다. 피부의 세라마이드는 타입 I, II, III, IV, V, VIa, 및 VIb (또는 1, 2, 3, 4, 5, 6a, 및 6b)로서 분류되는, 크로마토그래피에서 구별되는 6 가지의 분획 또는 일족으로 주로 구성된다. 합성 (또는 혼성) 세라마이드는 세라마이드-유사 스핑고지질이고, 여기서 N-아실기는 천연 발생 세라마이드에서 발견되는 것 이외의 것이다. 세라마이드는 예를 들어, 포화도 및 사슬 길이에 의하여 서로 구별될 수 있다. 세라마이드 유도체에는, 예를 들어, 하나 이상의 포화 또는 불포화 지방산으로써 유도된 것, 또는 인산화 또는 황산화에 의하여 변형된 것이 포함된다.

타입 3 세라마이드는 파이토스핑고신 뼈대를 가지는 상이한 분자의 혼합물을 구성하며, 일반명 N-아실파이토스핑고신을 특징으로 하는데, 여기서 아실기는 포화되고, 14 개 내지 30 개의 탄소의 사슬 길이를 가진다. 한 구체예에서, 세라마이드는 N-올레오일파이토스핑고신(세라마이드 3B)과 같이, 단일포화된 지방산으로써 유도된 세라마이드 또는 파이토스핑고스핀일 수 있다. 추가적인 세라마이드가 Lambers 등의 미국특허 제5,693,677호 및 제6,001,375호에 개시되고, 상기 특허의 명세서는 본 명세서에 참고문헌으로 수록된다.

본 발명에서 사용하기 위한 세라마이드는 리포솜 현탁액의 약 0.01중량% 내지 약 1.00중량%, 더욱 바람직하게는 리포솜 현탁액의 약 0.025중량% 내지 약 0.20중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다.

본 발명에서 사용하기 위한 스테롤은 추가적인 클래스의 강성 강화제를 대표하며, 콜레스테롤, 파이토스테롤, 및 유기산 유도체, 및/또는 이의 염 형태를 포함한다. 파이토스테롤은 스테롤 뼈대를 보유하는 식물 유도된 지질이다. 파이토스테롤은 피부에서 상피 세포의 대사 사이클을 동조시킬 수 있고, 리포솜 또는 다른 막 구조물에서 이중층 막 구조물을 가지는 격벽의 강도를 향상시킬 수 있다.

본 발명은 4-데스메틸스테롤, 4-모노메틸스테롤, 및 4,4-디메틸스테롤를 포함하는, 파이토스테롤 카테고리의 임의의 멤버를 사용할 수 있다. 대표적인 파이토스테롤에는 시토스테롤, β-시토스테롤, 스티그마스테롤, 캄페스테롤, 찰리노스테롤, 클리오나스테롤, 브라시카스테롤, 알파-스피나스테롤, Delta5-아벤나스테롤, 루페놀, 단코스테롤, 데스모스테롤, 및 포리페라스테롤이 포함된다.

스테롤의 비제한적 예에는 추가적으로, 콜레스테롤, 유기산 유도 콜레스테롤, 예컨대 콜레스테롤 헤미석시네이트, 파이토콜레스테롤, 비사볼롤, 스테로이드 호르몬, 예컨대 하이드로코르티손, 또한 스테롤 지방산 에스테르, 예컨대 콜레스테롤 설페이트, 콜레스테롤 부티레이트, 콜레스테롤 이소부티레이트, 콜레스테롤 팔미테이트, 콜레스테롤 스테아레이트, 라노스테롤 아세테이트, 에르고스테롤 팔미테이트, 및 파이토스테롤 n-부티레이트; 그리고 당 에스테르의 스테롤 에스테르, 예컨대 콜레스테롤 글루쿠로나이드, 라노스테롤 글루코로나이드, 7-데하이드로콜레스테롤 글루쿠로나이드, 에르고스테롤 글루쿠로나이드, 및 콜레스테롤 글루코네이트가 포함된다.

본 발명에서 사용하기 위한 스테롤은 리포솜 현탁액의 약 0.01중량% 내지 약 1.00중량%, 더욱 바람직하게는 리포솜 현탁액의 약 0.025중량% 내지 약 0.20중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다.

한 구체예에서, 리포솜 현탁액은 적어도 둘의 강성 강화제를 포함하고, 적어도 하나의 파이토스테롤 그리고 세라마이드 또는 스핑고신을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 리포솜 현탁액은 세라마이드 IIIB 및 β-시토스테롤을 포함한다.

본 발명에서 사용하기 위한 강성 강화제는 리포솜 현탁액의 약 0.02중량% 내지 약 1.00중량%, 더욱 바람직하게는 리포솜 현탁액의 약 0.05중량% 내지 약 0.40중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다.

출원인들은 강성 강화제의 사용과 리포솜 안정성 사이의 관계를 뜻하지 않게 발견했다. 더욱 구체적으로 말하자면, 출원인들은 리포솜의 안정성이 상대적으로 좁은 농도 범위에 걸친 강성 강화제의 혼입에 의존함을 발견했다. 특히, 1.0%를 초과하거나 중량으로 인지질에 대하여 1:4 비율을 초과하는 수준의 강성 강화제의 혼입은 구형 리포솜 소포와 대조적으로, 미세구조의 형태를 층상 시트로 변형시키는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 100-400X 배율 현미경으로 인지질 수준의 25% 초과로 강성 강화제 사용시 층상 시트의 형성을 확인했고, 이는 숙성시, 육안으로 확인 가능한 거대 바늘 구조로 더욱 전환되었다.

항산화제

본 발명에 따르면, 적어도 하나의 항산화제가 리포솜에 파묻힌다. 항산화제는 예를 들어, 리포솜의 인지질 이중층에, 리포솜의 수성 중심에, 또는 두 군데 모두에 파묻힐 수 있다. 항산화제(들)는 리포솜의 수성 중심 또는 리포솜 외부의 반응성 산소 화학종(ROS)에서 초래되는 산화적 손상 또는 분해로부터 리포솜을 보호하는 기능을 할 수 있다. 실제로, 세포에서 항산화제의 한 주요 작용은 ROS의 작용으로 인한 손상을 예방하는 것이다. 반응성 산소 화학종에는 과산화수소(H₂O₂), 초과산화 음이온(O₂ ^-), 및 하이드록실 라디칼(OH^-)과 같은 자유 라디칼이 포함된다. 이러한 분자는 불안정하고 매우 반응성이며, 지질 과산화와 같은 화학석 연쇄 반응에 의하여 세포를 손상시킬 수 있다.

항산화제는 여러 가지 상이한 방식으로 본 발명의 리포솜에 혼입될 수 있다. 한 예에서, 지질 용해성 항산화제가 리포솜의 지질 이중층에 직접 파묻힐 수 있다. 또 다른 예에서, 수용성 항산화제가 리포솜의 수성 중심에 캡슐화될 수 있다. 또 다른 예에서, 지질 용해성 항산화제가 지질 이중층에 파묻힐 수 있고, 수용성 항산화제가 지질 이중층의 수성 중심에 캡슐화된다.

또 다른 예에서, 항산화제는 싱글렛 산소(singlet-oxygen) 포획제(scavenger)일 수 있다. 또 다른 예에서, 항산화제는 수용성이며 싱글렛 산소 포획제이거나, 지질 용해성이며 싱글렛 산소 포획제일 수 있다. 또 다른 예에서, 하나 이상의 항산화제가 본 발명의 리포솜에 파묻힐 수 있다.

토코페롤(즉 비타민 E) 및 아스코르브산(즉 비타민 C)은 본 발명의 리포솜에 파묻힐 수 있는 항산화제의 예이다. 적절한 토코페롤 항산화제에는 토코페롤; 알파 토코페롤, β 토코페롤, 감마 토코페롤, 델타 토코페롤, 엡실론 토코페롤, 제타 토코페롤, 및 에타 토코페롤을 포함하지만 이에 국한되지 않는 토콜의 모노메틸, 디메틸, 또는 트리에틸 유도체; 토코페롤 아세테이트, 토코페릴 석시네이트, 토코페릴 벤조에이트, 토코페릴 프로피오네이트, 토코페릴 소르베이트, 토코페릴 올레이트, 토코페릴 오로테이트, 토코페릴 리놀레이트, 토코페릴 니코티네이트, 및 2-에틸-헥사노에이트 에스테르를 포함하는 토코페롤 에스테르, 및 이의 유도체가 포함된다.

항산화제 기능 이외에도, 아스코르브산(비타민 C) 및 이의 유도체는 콜라겐 합성을 촉진하는 것으로도 공지이다. 본 발명에서 유용한 아스코르브산 유도체는 단독이든 조합이든지 간에 모든 거울상이성질체를 포함한다. 바람직하게는, 아스코르브산이 레보(levo) 형태로 제공된다. 게다가, 아스코르브산 또는 이의 유도체가 수용성 또는 유용성 형태일 수 있다.

비타민 C(아스코르브산) 유도체의 비배타적 예에는, 예를 들어, L-아스코르브산의 알킬 에스테르가 포함되고, 여기서 알킬 부분이 8 내지 20 개의 탄소 원자를 가진다. 에스테르에 대하여 말하자면, 아스코르브산의 지방산 모노-, 디-, 트리- 또는 테트라-에스테르로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 이러한 에스테르에는 아스코르빌 팔미테이트, 아스코르빌 라우리에이트, 아스코르빌 미리스테이트, 아스코르빌 스테아레이트, 아스코르빌 디팔미테이트, 아스코르빌 디라우레이트, 아스코르빌 디미리스테이트, 아스코르빌 디스테아레이트, 아스코르빌 트리팔미테이트, 아스코르빌 트리라우레이트, 아스코르빌 트리미리스테이트, 아스코르빌 트리스테아레이트, 테트라헥실데실 아스코르베이트, 아스코르빌 테트라라우레이트, 아스코르빌 테트라 미리스테이트, 아스코르빌 테트라스테아레이트L, L-아스코르빌 팔미테이트, L-아스코르빌 이소팔미테이트, L-아스코르빌 디팔미테이트, L-아스코르빌 이소스테아레이트, L-아스코르빌 디스테아레이트, L-아스코르빌 디이소스테아레이트, L-아스코르빌 미리스테이트, L-아스코르빌 이소미리스테이트, L-아스코르빌 2-에틸헥사노에이트, L-아스코르빌 디-2-에틸헥사노에이트, L-아스코르빌 올레이트 및 L-아스코르빌 디올레이트, 테트라헥실데실 아스코르베이트; L-아스코르빌-2-포스페이트 및 L-아스코르빌-3-포스페이트와 같은 L-아스코르브산의 포스페이트; L-아스코르빌-2-설페이트 및 L-아스코르빌-3-설페이트와 같은 L-아스코르브산의 설페이트; 칼슘 및 마그네슘과 같은 알칼리 토금속을 포함하는 이들의 염이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.

염에 대해서 말하자면, 이들은 포스페이트 및 설페이트, 바람직하게는 포스페이트에서 선택될 수 있다. 아스코르브산 포스페이트는 일반적으로 L-아스코르브산 3-포스페이트, L-아스코르브산 2-포스페이트, L-아스코르브산 3-파이로포스페이트 및 비스(L-아스코르브산 3,3-) 포스페이트에서 선택된다. 바람직하게는, 아스코르브산 포스페이트는 마그네슘 또는 소듐 아스코르빌 포스페이트이고; 더욱 바람직하게는, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트이다. 마찬가지로, 아스코르브산 설페이트는 일반적으로 L-아스코르브산 3-설페이트, L-아스코르브산 2-설페이트, L-아스코르브산 3-파이로설페이트 및 비스(L-아스코르브산 3,3-) 설페이트에서 선택된다.

추가적인 항산화제는 테트라헥실데실 아스코르베이트, 부틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 부틸화 하이드록시아니솔, 메틸젠티세이트, L-카르노신, tert-부틸하이드로퀴논(TBHQ), 글루타티온을 포함하고, 이의 유도체, 조합, 및 혼합을 포함한다. 한 예에서, 수용성 L-카르노신은 수성 중심을 통한 산화적 손상으로부터 리포솜을 보호하는 능력을 고려하여, 항산화제로서 사용하기 위하여 리포솜의 수성 중심에 혼입될 수 있다.

본 발명에서 사용하기 위한 항산화제는 리포솜 현탁액의 약 0.01중량% 내지 약 1.00중량%, 더욱 바람직하게는 리포솜 현탁액의 약 0.025중량% 내지 약 0.50중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다.

수용성 조성물

수용성 조성물은 아래에서 더욱 설명하는 충전된 활성 (수용성) 작용제를 포함하거나 포함하지 않고 주로 물로 수성될 것이다. 일반적으로, 수용성 조성물은 리포솜 현탁액의 약 10중량% 내지 약 65중량% 또는 리포솜 제제의 약 67중량% 내지 약 95중량% 범위일 것이다.

외부 상 조성물

리포솜 현탁액 중의 리포솜 입자는 외부 상 조성물이 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc의 밀도 및/또는 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 일반적으로 약 2.5 cP 내지 약 40,000 cP의 점도를 가지게 하기에 충분한 하나 이상의 점도 증강제(promoting agent)를 포함하는 수용액을 포함하는 외부 조성물에 의하여 둘러싸인다. 하나 이상의 점도 증강제는 하나 이상의 증점제, 겔화제, 또는 두 가지 모두를 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 외부 상 조성물은 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 약 800 cP 내지 20,000 cP의 점도를 가진다. 대안으로, 더 높은 겔화제 농도를 이용할 때, 비록 투명도가 감소되기는 하지만, 외부 상 점도가 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 내지 약 60,000 내지 80,000 cP로 상승할 수 있다.

외부 상 조성물은 일반적으로 외부 상 조성물에 분산된 리포솜 입자의 밀도에 일접하게 부합하는 밀도를 포함하고, 리포솜 입자 안정성을 증강시키고 리포솜 입자 움직임, 응결(flocculation), 또는 응집(agglomeration)을 감소시키기에 충분한 양으로 본 발명의 리포솜 현탁액에 혼입된다.

외부 상 조성물에는 증점제, 농밀화제(densification agent), 겔화제, 검, 및 당업자에게 공지인 다른 점도 증강제를 포함하는, 하나 이상의 점도 증강제가 포함된다. 본 발명에서 사용하기 위한 점도 증강제는 점도를 증가시키고 리포솜 제형의 안정성을 강화하기 위하여 경험적으로 선택될 수 있다. 바람직하게는, 이러한 작용제들이 리포솜 현탁액의 반투명 또는 투명 성질을 보존하도록 선택된다. 또한, 조성물이 원하는 대로 점도 또는 밀도에 비교적 큰 영향을 미치도록 선택되는 작용제를 이용하여 조정될 수 있다. 대표적인 점도 증강제에는 글리세린; 하이드록시에틸- 하이드록시프로필-, 하이드록시메틸-, 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스, 및 이의 유도체를 포함하고, 상표명 Natrosol®, Methocel®, 및 Bermocoll®의 다양한 셀룰로오스를 포함하는 셀룰로오스; 경질(light) 비이온성 에멀젼; 및 폴리소르베이트가 포함된다. 대표적인 겔화제 및/또는 증점제에는 잔탄 검을 포함하는 검 매트릭스 물질, 및 Carbopol®　934, 940, 941, 980, 981, 1342, 1382, 2020, 2050을 포함하는 상표명 Carbopol®의 폴리알케닐 폴리에테르 또는 디비닐 글리콜로 가교된 아크릴산의 고분자량 동종- 및 공중합체를 포함하는 아크릴레이트 고분자, 및 상표명 Simulgel®의 다양한 하이드록시에틸 아크릴레이트/아크릴로일디메틸타우레이트 공중합체가 포함된다.

외부 상 조성물은 뉴턴성(Newtonian) 또는 비뉴턴성(non-Newtonian) 흐름 특징을 가질 수 있다. 한 구체예에서, 하나 이상의 점도 증강제는 글리세린과 같은 뉴턴성 흐름 특징을 가지는 수용액을 포함한다. 글리세롤을 포함하는 뉴턴성 유체의 점도는 유체에 부여된 주어진 회전 속도에서 전단율에 독립이다. 뉴턴성 흐름 특징을 포함하는 외부 상 조성물은 약 500 cP 내지 약 10,000 cP의 점도, 또는 약 800 cP 내지 약 2,000 cP의 점도를 가질 수 있다.

또 다른 구체예에서, 하나 이상의 점도 증강제는 고분자 겔화제와 같은 하나 이상의 점도 증강제를 약 0.10% 내지 약 1.0%의 농도로 포함할 수 있고, 이는 비뉴턴성 흐름 특징을 부여한다. 예를 들어 고분자 겔화제 또는 증점제를 포함하는 비뉴턴성 유체는 전단율의 함수로서 감소되는 점도를 나타낸다. 그러나, 글리세린과 같은 뉴턴성 유체와 비교하여, 고분자 겔화제는 낮은 농도에서 비뉴턴성 흐름 특징을 부여할 수 있고, 온도에 의하여 비교적 덜 영향받는 겉보기 점도를 제공할 수 있다.

비뉴턴성 유체의 점도는 전단 및 시간 의존성에 따라 분류될 수 있다. 따라서, 비뉴턴성 유체는 전단박화(shear-thinning) 및 전단후화(shear-thickening)일 수 있다. 또한, 겉보기 점도의 감소는 시간-비의존성(유사소성) 또는 시간-의존성(요변성)일 수 있다. 바람직한 비뉴턴성 구체예에서, 유체는 Carbopol®　고분자의 유사소성 전단박화 특성을 가진다.

10 sec^-1의 비교적 낮은 전단율에서, 비뉴턴성 흐름 특징을 부여하는 겔화제 또는 증점제를 포함하는 외부 상 조성물의 점도가 21℃에서 약 500 cP 내지 약 80,000 cP, 약 800 cP 내지 40,000 cP, 또는 약 2,000 cP 내지 20,000 cP에서 변할 수 있다. 한 구체예에서, Carbopol®　고분자와 같은 겔화제 사용시, 외부 상 조성물의 점도는 21℃에서, 0.1 sec^-1에서 약 284,000 cP, 1 sec^-1에서 약 60,000 cP, 10 sec^-1에서 약 11,200 cP, 및 20 sec^-1에서 약 6,852 cP이다. 또 다른 구체예에서, 잔탄 검과 같은 증점제 사용시, 외부 상 조성물의 점도는 21℃에서, 0.1 sec^-1에서 약 110,000 cP, 1 sec^-1에서 약 18,670 cP, 10 sec^-1에서 약 2,341cP, 및 20 sec^-1에서 약 1,272 cP이다.

점도 측정은 점도의 측정에 관련된 ASTM D1084-88, ASTM D1824-87, D2196-86 및 다른 ASTM 프로토콜에 따라 주어진 회전 속도에서 낮은 전단율에서, 뉴턴성 유체의 점도 또는 비뉴턴성 물질의 겉보기 점도를 측정하기 위한 것으로 당업자에게 공지인, Brookfield Syncho-Lectric Model RVT 점도계, Haake Rotovisco Model RV-12 점도계를 포함하는 적절한 점도계, 또는 다른 적절한 점도계 (또는 TA Instruments AR-1000N과 같은 유변계)를 이용하여 이루어질 수 있다.

리포솜 현탁액 형성에서, 외부 상 조성물이 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 용액에 첨가될 수 있거나, 리포솜 용액으로부터 제조된 동결건조된 리포솜 입자의 제제에 첨가될 수 있다. 이론적인 포획 부피 데이터에 기초하여, 리포솜 현탁액에 대한 리포솜 입자의 중량 퍼센트는 약 0.96중량% 내지 약 54중량% 범위일 수 있다.

리포솜 용액에 첨가될 경우, 외부 상 조성물은 리포솜 현탁액의 약 30중량% 내지 약 75중량%, 리포솜 현탁액의 약 55중량% 내지 약 70중량%, 리포솜 현탁액의 약 65중량% 내지 약 70중량%, 또는 리포솜 현탁액의 약 65중량%의 양으로 존재할 수 있다. 뿐만 아니라, 리포솜 용액 대 외부 상 조성물의 중량비는 약 0.002 내지 약 0.54 범위일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 리포솜 현탁액은 리포솜 용액에 첨가될 때 약 35% 내지 약 75% 글리세린, 더욱 바람직하게는 약 50% 내지 약 65% 글리세린을 포함한다. 중화된 Carbopol®을 포함하는 겔화제(들)이 외부 상에서 사용되는 경우, 겔화제(들)의 수준은 리포솜 현탁액의 대략 1.0%를 초과하지 않아야 하거나, 시각적 투명도(visual clarity)/투명도(transparency)/반투명도가 리포솜 현탁액에서 감소될 수 있다. 일반적으로, 리포솜 제제는 불안정성을 감소시키기 위하여 제조 24 시간 이내에 외부 상 조성물로 희석되어야 한다.

리포솜 현탁액에 대한 굴절률은 약 1.3 내지 약 1.45 범위일 수 있다. 예로서, 외부 상 조성물에 글리세린과 같은 뉴턴성 유체를 포함하는 리포솜 현탁액에 대한 굴절률이 통상적으로 약 1.40 내지 약 1.45 범위일 수 있고, 검 또는 겔화제를 사용하는 비뉴턴성 유체 이용시 통상적으로 약 1.35 내지 약 1.40 범위일 수 있으며, 잔탄 검 혼합물에 대하여 약 1.39 내지 약 1.40, 고분자 Carbopols®을 포함하는 외부 상 조성물에 대하여 약 1.37인 굴절률을 포함한다.

외부 상 조성물은 하나 이상의 보존제, pH 조정제, 및/또는 물을 추가로 포함할 수 있다. 보존제의 비제한적 예에는 페녹시에탄올, 클로르페네신, 메틸이소티아졸린온, 프로필렌 글리콜, 벤질 알코올, 에탄올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 에틸파라벤, 부틸파라벤, 및 이소부틸파라벤이 포함된다. 상업적으로 적절한 보존제 제제에는 상표명 Microcare®　MTC로 판매되는 것(프로필렌 글리콜, 클로르페네신, 및 메틸이소티아졸린온) 및 Phenonip®　XB로 판매되는 것(페녹시에탄올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 에틸파라벤)이 포함된다. 대표적인 pH 조정제에는 L-아르기닌 및 트리에탄올아민이 포함된다.

출원인들은 뜻밖에도 디소듐 EDTA와 같은 킬레이트화제를 포함하는 종래의 보존제가 상기 리포솜 현탁액의 안정성에 부정적인 영향을 미칠 수 있고, 소듐 벤조에이트 및 시트르산, 소르브산, 벤조산을 포함하는 다양한 산, 그리고 이소프로필 메틸페놀이 0.01% 초과의 농도에서 리포솜 소포를 파괴할 수 있음을 발견했다. 이중층/소포 붕괴 현상(및 뒤이은 콜로이드 시스템의 불안정화)이 상기한 바와 같이 시트르산을 리포솜 용액에 첨가할 때 순간적인 시각적 불투명도에 의하여 확인되었다. 더욱이, 출원인들은 안정성에 부정적인 영향을 미치는 유상으로의 분배로 인하여 파라벤 보존제가 이중지질막으로 이동하는 경향이 있음을 발견했다. 게다가, 파라벤이 숙성시 리포솜 입자 크기의 전체 증가를 야기하는 것으로 밝혀졌다. 출원인들은 수상 조성물로부터 L-아르기닌을 제거할 때 본 발명의 리포솜 현탁액의 장기간 안정성이 희생될 수 있음을 추가로 밝혀냈다.

바람직하게는, 본 발명의 리포솜 현탁액에 사용하기 위한 보존제에는 EDTA, 소듐 벤조에이트, 시트르산, 소르브산, 벤조산, 및 이소프로필 메틸페놀이 없다. 바람직한 구체에에서, 리포솜 현탁액에는 추가적으로 파라벤이 없다. 본 발명의 리포솜 현탁액에서 사용하기 위한 바람직한 보존제에는 페녹시에탄올 단독, 메틸이소티아졸린온 단독, 클로르페네신 단독, 메틸이소티아졸린온과 병용하는 클로르페네신, 또는 메틸이소티아졸린온 및 페녹시에탄올과 병용하는 클로르페네신이 포함된다.

보존제는 리포솜 현탁액의 약 0.01중량% 내지 약 5.00중량%, 약 0.01중량% 내지 약 2.00중량%, 또는 약 0.01중량% 내지 약 0.30중량%의 양으로 존재할 수 있다. L-아르기닌 또는 트리에탄올아민은 약 0.001중량% 내지 약 0.10%, 바람직하게는 약 0.001중량% 내지 약 0.010%의 양으로 존재할 수 있다.

활성제

본 발명의 리포솜 현탁액은 본 발명의 리포솜 입자에 파묻힌 하나 이상의 활성제(active agent)(또는 "활성물(actives)")를 추가로 포함할 수 있다. 활성제는 화장용, 치료용, 또는 진단용 적용분야를 위한 것으로 당해 분야에 공지인 임의의 활성제를 포함할 수 있다. 활성물은 자연에서 소수성(즉, 유용성) 또는 친수성(즉, 수용성)일 수 있다. 수용성 활성물은 "수동 충전(passive loading)"을 통하여 리포솜 제조 동안 파묻힐 수 있다. 이는 건조 지질의 수화에 사용되는 버퍼에 친수성 활성물을 사전 용해시켜 달성될 수 있다. 그러므로 임의의 파묻히지 않은 분자가 블랭크 버퍼에 대하여 투석하거나, SephadexTM 겔 컬럼을 통하여 분산물을 통과시켜 제거될 수 있다. 대부분의 화장품 및 개인관리용품에 있어서, 파묻히지 않은 분자의 제거는 이러한 과정과 관련하여 비용이 높고 화장품 분자가 통상적으로 사용되는 수준에서는 비독성이므로, 중요하게 고려되지 않는다.

리포솜의 중심 내에 포획된 친수성 활성물과 대조적으로, 소수성 화합물은 통상적으로 지질 이중층의 소수성 영역에 포획된다. 이러한 유형의 포획은 분배(partitioning)의 형태를 포함하고, 여기서 소수성 화합물은 지질과 함께 적절한 가용화제(들)에 용해된다. 예를 들어, 화합물이 부틸렌 글리콜, 에톡시글리콜, 에탄올, 메탄올, 클로로포름, 톨루엔, 에테르, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 200 및 폴리에틸렌 글리콜 300을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜, 또는 중간 사슬 트리글리세라이드에 용해성일 경우, 지질과 함께 용매에 용해될 수 있다. 에탄올 및 메탄올과 같은 다른 용매가 지질 및 유용성 활성물의 가용화에 사용될 수 있기는 하지만, 이들은 외부 상 조성물을 첨가하기 전에 추출에 의하여 제거되어야 한다. 출원인들은, 예를 들어, 3% 초과 농도의 에탄올, 메탄올, 클로로포름, 톨루엔, 또는 에테르와 같은 용매가 젤라틴의 파괴, 밀도 균형의 붕괴, 또는 외부 상의 점도 감소를 초래할 수 있고, 이에 의하여 리포솜 현탁액의 안정성이 감소될 수 있음을 발견했다.

예로서, 다양한 피부 보습제, 장벽 강화제, 필수 지방산, 및 비타민이 본 발명의 리포솜에 파묻히거나 이와 결합될 수 있다. 이러한 요소들은 수분을 유지하고, 피부에 대한 손상을 예방하고 역전시켜 피부의 장벽 기능을 추가로 보조하도록 돕는다. 대표적인 피부 보습제에는 글리세린, 소듐 하이알루로네이트, 판테놀, 및 아미노산이 포함된다.

장벽 강화제는 다양한 피부 지질을 포함하는데, 이는 건강한 피부 장벽 기능을 보조하고 유지하도록 돕는다. 피부 장벽 기능은 피부의 수분 불투과성 장벽, 즉 더욱 구체적으로는, 각질층에 의하여 특징지어진다. 각질층의 세포간 공간에 있는 지질 층 구조물의 수분 보유 기능이 각질층의 수분 보유 특성을 담당하는 것으로 간주된다.

장벽 기능의 유지에 기여하는 대표적인 피부 지질에는 인지질, 스핑고지질, 콜레스테롤, 및 파이토스테롤을 포함하는 상기 리포솜 중의 유상 조성물에 포함된 상기 지질이 포함되고, 이는 피부의 장벽 기능을 유지하고 강화하는 것에 관련된 핵심적인 각질층 지질을 공급하기 위하여 사용될 수 있다.

추가적인 장벽 강화제에는 가수분해된 대두 단백질 및 대두 단백질 추출물이 포함된다. 대두 단백질 추출물은 효소(즉 엘레스타아제)의 활성을 억제하는 것으로 공지인데, 상기 효소는 진피의 엘라스틴 섬유를 파괴하고, 일반적으로 UV 선, 건조 및 환경적인 스트레스에 반응하여 피부에 방출된다. 가수분해된 대두 단백질 추출물을 사용한 피부의 치료는 피부를 탄력있고, 견고하고(firm), 매끈하고, 부드럽고, 습윤하게 유지하도록 돕는다. 가수분해된 대두 단백질은 콜라겐 및 엘라스틴의 생산을 촉진하고 피부에 견고함과 탄력을 제공하는 것으로 공지이다.

추가적인 장벽 강화제 성분에는 필수 지방산 및 비타민이 포함된다. 본 발명의 조성물에 유용한 이러한 필수 지방산의 비제한적 예에는 리놀레산, 리놀렌산, 올레산, 코룸빈산(columbinic acid), 아라키드산, 아라키돈산, 리그노세르산, 네르본산, 에이코사펜타엔산, 팔미트산, 스테아르산, 및 이의 혼합이 포함된다. 상기한 것과 같은 당업자에게 공지인 다른 필수 지방산이 또한 본 조성물에서 유용한 것으로 고려된다.

필수 지방산은 다양한 공급원으로부터 유도될 수 있다. 예를 들어, 필수 지방산은 소수성 식물성 추출물에서 유도된 하나 이상의 오일로부터 리포솜 현탁액에 제공될 수 있다. 이 점에 있어서 유용한 대표적인 오일에는 아마씨 오일, 대마씨 오일, 목화씨 오일, 호박씨 오일, 옥수수 오일, 카놀라 오일, 린시드 오일, 로즈마리 오일, 대두 오일, 맥아 오일, 올리브 오일, 포도씨 오일, 씨벅턴씨 오일, 보리지 오일, 마카다미아넛(macadamia integrifolia)씨 오일, 달맞이꽃 오일, 메도우폼씨 오일, 페릴라 오시모이데스씨 오일, 블랙커런트씨 오일, 밤 오일, 야자 오일, 파파야씨 오일, 감초 뿌리, 옥수수 오일, 포도씨 오일, 키위씨 오일, 로건베리씨 오일, 패션프룻씨 오일, 수박씨 오일, 로즈힙씨 오일, 홍화 오일, 해바라기 오일, 해바라기씨 오일, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 호호바 오일, 참깨씨 오일, 양귀비씨 오일, 채소 오일, 이의 혼합, 및 이의 수소화 유도체를 포함하지만 이들에 국한되지 않는 다양한 채소 또는 식물 오일이 포함된다.

대안으로, 또는 추가하여, 본 발명의 리포솜이 하나 이상의 식물 추출물, 식물 성분, DNA 복구 효소, 및/또는 메틸잔틴으로 충전될 수 있다. 대표적인 추출물은 로즈마리(Rosemary), 센텔라(Centella), 에치나세아(Echinacea), 알피니아(Alpinia), 월귤나무(Bearberry), 아세롤라 체리 발효물(Acerola Cherry Fermentate)을 포함하는 다양한 식물 공급원으로부터, 또는 상기 명시한 오일에 해당하는 식물로부터 유도될 수 있다. 식물 추출물, 식물 성분 및 식물 유도 오일의 추가적인 예가 미국 특허 공개공보 제2006/0257509호 및 제2007/0003536호에 기재되는데, 상기 공개공보의 명세서는 본 명세서에 참고문헌으로 명백하게 수록된다.

본 발명에서 사용하기 위한 오일 또는 추출물은 리포솜 현탁액의 약 0.0001중량% 내지 1중량%, 더욱 바람직하게는 약 0.0003중량% 내지 약 0.003중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다.

대표적인 DNA 복구 효소에는 박테리오파지 T4 피리미딘 이합체-특이성 엔도뉴클레이즈, 마이크로코쿠스 루테우스 N-글리코실레이즈/AP 라이에이즈, 사카로미케스 세레비시아이 N-글루코실레이즈/어퓨리닉-어피리미디닉 라이에이즈, 쉬조사카로미케스 폼베 UV 손상 엔도뉴클레이즈(UVDE), 클로렐라 바이러스 분리 PBCV-1 피리미딘 이합체-특이성 글리코실레이즈, 및 아나시스티스 니둘란스 포토라이에이즈가 포함된다. 추가적인 DNA 복구 효소가 미국특허 공개공보 제2006/0257509호에 기재되고, 상기 특허의 명세서는 명백하게 본 명세서에 참고문헌으로 수록된다. DNA 복구 효소는 리포솜 현탁액의 약 0.01중량% 내지 약 10중량%, 더욱 바람직하게는 약 0.1중량% 내지 약 3중량% 범위의 집합적 양으로 존재할 수 있다.

대표적인 비타민에는 상기 항산화제, 또한, 예컨대 비타민 A, 유리산 또는 이의 유도체 및 이의 전구체를 포함, 레티노이드를 포함, 예컨대 레티놀, 레티날, 및 레티닐 에스테르, 예컨대 레티닐 아세테이트, 레티닐 부티레이트, 레티닐 프로피오네이트, 레티닐 옥타노에이트, 레티닐 라우레이트, 레티닐 팔미테이트, 레티닐 올레이트, 및 레티닐 리놀레이트; 및 카로테노이드; B1: 티아민, B2: 리보플라빈, B6: 피리독신, 판테놀, 및 판토텐산을 포함하는 B-복합체 비타민; 비타민 B12 및 이의 조합; 비타민 D, 비오틴, 비타민 K, 이의 수용성 유도체 등과 같은 친유성 비타민이 포함된다.

카페인과 같은 메틸잔틴의 국소 투여는, 자외선 또는 태양 복사에 대한 피부의 노출에 의하여 초래되는 DNA 손상의 유해한 효과를 감소시키는 것으로 생각된다. 특히, 자외선에 조사된 후의 생쥐 피부에 카페인을 국소 투여하는 것은, 비악성 및 악성 피부 종양의 숫자를 감소시키고 (Lu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99(19): 12455-60, 2002), 광손상을 낮추며, DNA-손상된 각질세포의 제거를 촉진하는 것으로 나타났다 (Koo et al., Br. J. Dermatol., 156(5):957-64, 2007). 게다가, 카페인과 같은 메틸잔틴이 아마도 단독으로 또는 자외선 또는 태양 복사와 같은 태닝 자극제와 조합으로, 사이클릭-AMP 포스포디에스터레이즈를 억제하고 멜라닌세포의 멜라닌의 생성을 강화시키는 능력에 의하여 멜라닌생성에 관련된 생화학적 경로의 활성을 조절하는 "선리스(sunless)" 태닝제(tanning agent)로서 작용하는 것으로 생각된다.

본 발명에서 사용하기 위한 대표적인 메틸잔틴에는 카페인 (1,3,7-트리메틸잔틴), 테오필린 (1,3-디메틸잔틴), 아미노필린, 테오브로민 (3,7-디메틸잔틴), 파라잔틴, 이소부틸메틸 잔틴, 부틸메틸잔틴, 또는 이의 유사체, 유도체, 및 조합이 포함된다. 특정 구체예에서, 카페인과 같은 메틸잔틴이 약 0.01중량% 내지 약 0.30%의 중량 농도로 존재할 것이다.

본 발명의 리포솜 현탁액에 포함될 수 있는 다른 첨가제는 당업자에게 자명할 것이고 본 발명의 범위에 포함된다.

피부 관리 또는 화장용 제품에서, 본 발명의 리포솜 현탁액이 화장용으로 적절한 매트릭스에 혼입되어 국소 투여를 위한 크림, 로션, 겔, 세럼, 토닉, 에멀젼, 페이스트, 또는 스프레이 형태의 화장품 제형을 형성할 수 있다.

리포솜을 제조하기 위한 방법

또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 안정한, 투명 내지 반투명의, 단층 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 안정한, 투명 내지 반투명의, 단층 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 방법은 다음 단계를 포함한다: (a) 결합제, 적어도 하나의 인지질, 강성 강화제, 및 항산화제를 포함하는 유용성 조성물을 제공하는 단계; (b) 수용성 조성물을 제조하는 단계; (c) 수용성 조성물을 유용성 조성물과 조합하여 다층, 다소포 리포솜 제제(preparation)를 형성하는 단계; (d) 다층, 다소포 리포솜 제제를 단층 리포솜 제제로 전환하는 단계; 및 (e) 단층 리포솜 제제를 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc의 범위 내의 밀도를 가지는 외부 상 조성물에 첨가하는 단계. 상기 방법은 통상적으로 약 50 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 균일한 복수의 단층 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 현탁액을 생성할 것이고, 여기서 리포솜 현탁액은 1.30 내지 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃에서 최소한 30 일의 기간 동안, 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안, 또는 더 오랫동안 호박색 유리병, 무색 유리병, 또는 불투명 플라스틱 용기 안에서 순수한 형태로 안정성을 유지한다.

한 구체예에서, 유용성 조성물은 적어도 하나의 결합제, 적어도 하나의 인지질, 적어도 하나의 강성 강화제, 및/또는 적어도 하나의 항산화제를 연달아 첨가하여 배치(batch) 조성물을 형성하여 제조될 수 있다. 배치 조성물은 교반되고 성분을 용해시키기에 충분한 온도(예를 들어, 190-210℉)까지 가열될 수 있다. 냉각시, 유용성 활성물을 포함하는 하나 이상의 온도-민감성 유용성 성분이 첨가될 수 있다. 이후 배치 조성물은 수용성 조성물과의 상 조합을 위하여 약 75-85℉의 온도에서 냉각되고 유지될 수 있다 (그리고 교반될 수 있다). 수용성 조성물과 유용성 조성물은 (수용성 및/또는 유용성 활성물을 포함하거나 포함하지 않고) 교반기에서 (예를 들어, 10-15 분 동안 50 rpm으로) 혼합될 수 있다. 다층, 다소포 리포솜 입자 조성물이 형성된 다음, 적절한 전환 공정, 예컨대 고압 미세유동화, 압출, 고속 전단, 분쇄, 초음파처리, 선택적 마이크로채널 여과 또는 균질화를 이용하여 단층 리포솜 입자 조성물로 전환될 수 있다. 외부 상 조성물은 상기한 바와 같이 함께 하나 이상 연달아 혼합하고, 교반하에 내용물을 용해시키고, 외부 상 조성물의 내용물을 리포솜 제제에 첨가하여 제조될 수 있다.

특정 활성 성분의 생물학적 활성이 유용성 배치 조성물에서 약 200℉의 온도를 거친 후 손상될 수 있으므로, 예를 들어, 식물성 물질(예컨대 병풀(Centella asiatica) 추출물)을 포함하는 특정 활성 성분이 더욱 저하된 온도 조건에서 수용성 조성물에 가용화될 수 있거나, 추가 냉각시 유용성 배치 조성물에 첨가될 수 있다 (그리고 가용화).

다층, 다소포 리포솜 제제를 단층 리포솜 제제로 전환하기 위하여 다양한 방법이 사용될 수 있다. 이러한 방법에는 고압 미세유동화, 압출, 고속 전단, 분쇄, 초음파처리, 선택적 마이크로채널 여과, 및 균질화가 포함된다.

미세유동화는 특히 벌크량으로 리포솜 제제를 생산하는 능력의 관점에서, 단층 리포솜 제제를 제조하기 위한 바람직한 방법을 제공한다. 미세유동화는 미세유동화기에 슬러리-유사 농축 지질/물 분산물을 도입하는 것을 포함하는데, 미세유동화기는 매우 고압(10,000 내지 20,000 psi)에서 지름이 1-5 ㎛인 마이크로채널을 통하여 분산물을 펌핑한다. 마이크로채널은 방울 크기 감소 및 에너지 투입을 향상시키기 위하여 갈라지고 서로 충도한다. 매우 높은 속도로 이동하는 유체가 한정된 두 마이크로 채널을 통하여 강제로 두 스트림으로 갈라진다. 마이크로유체 챔버의 소형 오리피스를 통하여 유체의 유입시 빠른 압력 차이(pressure differential)를 통하여 대규모 공동화(cavitation)를 겪는다. 유사한 압력 차이가 종래의 균질화를 통하여 달성된다. 이후 두 스트림이 매우 빠른 속도에서 직각으로 서로 충돌된다. 높은 압력 차이 및 빠른 속도에 의하여 전달된 막대한 에너지가 지질이 리포솜으로 자체-회합(self-assemble)하도록 한다. 마지막에 수집된 유체는 균질하게 보이는 분산물, 그리고 단봉의 균일한 입자 크기 분포가 달성될 때까지 미세유동화기를 한 번 내지 네 번 재통과할 수 있다. 본 발명에 따른 리포솜 제제의 제조를 위한 적절한 미세유동 장치에는 Micofluidics Models M110Y 및 M210EH(Microfluidics Corp., Newton, MA)가 포함된다.

대안으로, 본 발명의 단층 리포솜이 또한 물에서 인지질을 초음파처리하여 생성될 수 있다. 낮은 전단율은 양파와 같이 많은 층을 가지는 다층 리포솜을 생성한다. 계속되는 고전단 초음파처리는 더 작은 단층 리포솜을 형성하는 경향이 있다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 화장품 제형을 제조하기 위한 방법을 포함하고, 여기서 본 발명의 리포솜 현탁액은 화장용으로 적절한 매트릭스와 조합되어 크림, 로션, 겔, 세럼, 토닉, 에멀젼, 페이스트, 또는 스프레이의 형태의 화장품 제형을 형성한다.

투과 전자 현미경(TEM)은 리포솜의 크기, 무결성, 및 안정성을 규명하기 위한 수단을 제공한다. 통상적으로 사용되는 샘플 제조 방법은 플라스틱으로 코팅된 그리드에 1:5로 희석된 리포솜 현탁액의 방울을 도포하는 것, 포스포텅스텐산 또는 암모늄 몰리브데이트로 재료를 음성 염색하는 것, 이에 의하여 음성 염색에 파묻힌 리포솜의 단층을 생성하는 것을 포함한다.

더욱 구체적으로는 샘플이 TEM 분석을 위하여 다음과 같이 제조될 수 있다: 1% 아가로오스 수용액(w/v)을 플라스틱 페트리 접시에 붓고, 10 분 동안 실온에서 공기 건조한다. 폼바(Formvar) 또는 콜로디온(collodion) 코팅된 그리드는 글로우 방전에 의하여 친수성으로 만들어지고, 그리드가 Whatman 1번 여과지에 놓인다. 한 방울의 샘플 현탁액이 각 그리드에 놓인다. 대부분의 액체가 여과지에 의하여 그리드의 주변에 흡수될 때, 아가로오스로의 염 및 액체 확산을 촉진하기 위하여 그리드가 30 분 내지 1 시간 동안 아가로오스 플레이트에 옮겨진다.

염색되지 않은 그리드는 ESI와 함께 Zeiss-902를 이용하여 보이고 사진 촬영된다. 전형적으로, 리포솜은 현저한 뭉침의 증거가 없이 불연속의 둥근 구조로 보일 것이다.

리포솜 입자 크기 및 안정성은, 호박색 유리병, 무색 유리병, 또는 불투명 플라스틱 용기에 저장하기 전 또는 1-12 개월 동안 저장한 후, 또는 그 이후에, 예를 들어, 수용액 또는 크림 제형에서의 리포솜의 크기와 구조를 평가하여 평가될 수 있다. 리포솜 입자 크기 및 안정성은 적절한 레이저 광 산란 (예를 들어, Nanotrac®　또는 Microtrac®), 다중 광 산란, 동적 안정성 분석기 (Turbiscan®　TLab Expert), 및/또는 투과 전자 현미경 장치 및 당업자에게 공지인 방법을 이용하여 평가될 수 있다.

한 양태에서, 레이저 광 산란이 입자 크기 정량에 사용될 수 있다. 예를 들어, Nanotrac®는 "제어된 기준(controlled reference)" 동적 광 산란 접근법을 이용하는데, 이는 사파이어 필터 창을 통하여 희석된 샘플 분산매(dispersion media)에 빛을 비추는 780 nm 파장 레이저 다이오드를 사용한다. 광검출기에 의하여 받아들여진 (이동된 진동수의 산란된 패턴의) 레이저 광이 사파이어 창을 통하여 광 분배기에 되돌아가 비친다. 산란된 빛의 이동된 진동수는 "제어된 기준"의 조합을 나타내는데, 이는 (공지의 비이동 진동수의) 사파이어 필터에 의하여 반사된 빛이고, 현탁된 샘플 입자의 속도의 영향과 함께 브라운 운동을 겪는다. 레이저는 "도플러 효과"에 따라 이동된 진동수인데, 이는 관심 입자의 분포의 운동 속도에 비례한다. 이후 검출기 출력 신호가 증폭되고, 필터링되고, 디지털화되고, 수학적으로 분석되어 입자 크기 분포를 정량한다.

안정한 리포솜 시스템은 저하되거나 상승된 온도를 거칠 때 노화시 입자의 균일한 단봉 분포를 나타낸다. 입자가 유착하거나 응결하여 포획된 내용물의 파열 및 전체 미세구조/콜로이드 시스템의 전체 규모(full-scale) 크리밍(creaming) 또는 침전을 유발할 때 이봉 또는 삼봉 분포가 발생한다. 본 발명에 따른 리포솜 현탁액은 약 4℃ 내지 약 50℃에서 최소한 30 일, 최소한 약 2 개월, 최소한 약 3 개월, 최소한 약 6 개월, 최소한 약 19 개월의 기간 동안, 또는 더 오래 호박색 유리병, 무색 유리병, 또는 불투명 플라스틱 용기 안에서 순수한 형태로 안정성을 유지할 수 있다. 하기 도 5에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 리포솜 제형은 약 157 nm의 평균 입자 크기 및 약 54 nm 내지 약 521 nm의 크기 범위를 특징으로 하는 단봉 입자 크기 분포에 반영되는 바와 같이, 주위 실내 온도 조건에서 최소한 19 개월 동안 안정성 및 단봉 입자 분포를 유지하는 것으로 밝혀졌다.

터비스캔 가속 동적 안정성 분석기(Turbiscan Accelerated Kinetic Stability Analyzer)가 콜로이드 시스템의 불안정성의 조기 예측을 위한 추적 가능한 정량 방법을 제공할 수 있다. 터비스캔 분석기는 다중 광 산란을 이용하여, 투명으로부터 불투명에 걸친 외관의 콜로이드 시스템에 대한 샘플 깊이의 함수로서 투과되고 후방산란된 빛의 수준을 검출한다. 터비스캔 기구는 샘플로 채워진 소형 (1cm x 8cm) 원통형 유리 셀의 깊이에 걸쳐 빛의 광자를 비추는 근적외선 레이저 다이오드로 구성된다. 빛의 광자는 산란된 패턴으로 샘플로부터 나오고 (I), 이는 (투명도에 대한) 투과 검출기 및 (불투명도에 대한) 후방산란 검출기에 의하여 동시에 검출된다. 후방산란된 빛 대 투과된 빛의 비율은 사용자 정의 시간 간격에 따라 "핑거프린트(fingerprint)" 스캔으로서 수집된다. 중첩된 데이터 스캔의 동역학적 결과가 관심을 가지는 현탁액, 에멀젼 또는 폼(foam)의 균질도를 나타낸다.

본 발명에서 용어 "안정성"에 대해서, "후방산란 동역학적 결과"가 사용자에 의하여 정의된 시간 간격의 함수로서 후방산란된 빛의 상대적 변화로서 정의될 수 있다. 생성물에 대한 후방산란된 빛의 각 스캔은 레이저에 의하여 스캐닝된 각 시간 간격과 교환된다. 이러한 후방산란된 빛의 변화는 시스템 내 입자의 이동에 관련된다. 안정한 리포솜 현탁액에서, 후방산란된 빛의 레이저 스캔이 후방산란된 빛의 초기 스캔에 대하여 약간 변할 것이다. 본 발명에 대해서, 2.0% 미만의 후방산란 동역학 결과는 선택된 온도 상태 및 사용자 정의 시간 간격하에 안정한 리포솜 용액 또는 현탁액을 나타낸다. 본 발명의 리포솜 시스템에 있어서, 후방산란 동역학 결과는 16 시간에 걸쳐 25℃ 내지 50℃의 온도에 노출될 때 대략 0.2 내지 1.0%였다. 불안정성의 초기 징후가 콜로이드 시스템에 대하여 4 - 8 시간 정도로 짧은 기간 후 검출될 수 있다.

투여 방식

본 발명의 리포솜 현탁액은 일반적으로 국소 투여를 위하여 설계된다. 일반적으로, 본 발명의 조성물은 적어도 일일 기준으로 투여된다. 본 발명의 조성물의 투여는 임의의 적절한 기간 동안 지속될 수 있다. 미용적 향상 정도 및 유지, 개선, 복구 또는 회복의 정도가 사용되는 조성물의 총 양과 빈도에 따라 직접 변할 것임이 이해될 것이다.

유용한 투약 형태는 당업자가 잘 이해할 방법 및 기술에 의하여 제조될 수 있고, 적절한 투약 형태 제조에서 추가적인 성분의 사용을 포함할 수 있다. 한 예에서, 본 발명의 리포솜 현탁액은 적어도 하루에 한 번 국소적으로 투여된다. 또 다른 예에서, 리포솜 현탁액은 하루에 두 번 투여된다. 또 다른 예에서, 제형은 하루에 세 번 내지 다섯 번 투여될 수 있다. 일반적으로, 하루에 투여될 수 있는 제형의 양에 제한이 없다.

본 발명은 또한 본 발명의 리포솜 현탁액을 국소적으로 도포하여 피부를 치료하는 방법을 포함한다. 사용에서, 소량의 조성물, 예를 들어 1 내지 100 ml가 적절한 용기 또는 도포기로부터 피부의 노출 부위에 도포될 수 있고, 필요할 경우, 그 다음에 손 또는 손가락 또는 적절한 기구를 이용하여 조성물을 펴바르고 및/또는 피부에 문지른다.

한 구체예에서, 본 발명은 노화의 징후를 예방, 저지, 역전, 개량, 경감, 감소 또는 개선하는 방법을 제공하고, 여기서 본 발명의 조성물이 피부 노화 징후를 예방, 저지, 역전, 개량, 경감, 감소 또는 개산하기에 충분한 미용적으로 유효량으로 피부에 국소 도포된다. 대표적인 노화의 징후에는 안면 주름(facial line), 미세 주름(fine line), 주름(wrinkle), 눈가 주름(crow's feet), 다크 아이 서클(dark eye circle), 잡티(blemishe), 검버섯(age spot), 튼살 자국(stretch marks), 약화된 피부 장벽 회복 특성, 또는 이의 조합이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 피부의 심미적 외양을 개선하는 방법을 제공하고, 여기서 본 발명의 조성물이 피부의 심미적 외양을 개선하기에 충분한 미용적으로 유효량으로 피부에 국소 도포된다. 개선은 피부 두께, 탄성(elasticity), 탄력성(resiliency), 보습(moisturization), 색조(tone), 결(texture), 광채(radiance), 광택(luster), 밝기(brightness), 투명도(clarity), 윤곽(contour), 균일성(uniformity), 견고함(firmness), 팽팽함(tautness), 유연성(suppleness), 부드러움(softness), 민감성(sensitivity), 모공 크기(pore size), 수분 손실 감소, 또는 이의 조합에 관련될 수 있다.

개선은 또한 건선, 습진, 지루(seborrhea), 피부염, 일광화상, 에스트로겐 불균형, 과색소침착, 저색소침착, 변색, 황변(yellowing), 주근깨, 피부 위축, 피부 질환(skin breakout), 피부 취약성, 건조, 균열, 늘어짐, 박화(thinning), 과형성(hyperplasia), 섬유증, 확대된 모공, 셀룰라이트 형성, 멍듬, 여드름 형성, 세포 자멸, 세포 분화, 세포 탈분화, 종양 유발 또는 종양 진행의 예방, 바이러스 감염, 곰팡이 감염, 박테리아 감염, 거미정맥(spider veins, telangectasia), 다모증, 딸기코, 가려움증, 굳은살, 사마귀, 티눈, 또는 이의 조합으로 이루어진 군을 야기하거나 이로부터 유발되어 영향받는 나쁜 피부 상태를 개선하는 것에 관련될 수 있다.

노화의 징후 또는 나쁜 피부 상태는 자유 라디칼 손상, 환경적 동인, 오염물질, 식이, 자연 노화, 조기 노화, 호르몬성 노화, 광노화, 또는 이의 조합으로부터 초래될 수 있다. 따라서, 개선된 노화 방지 특징 또는 나쁜 피부 상태에 대하여 선택된 본 조성물 및 방법이 메탈로프로테이네이즈, 콜라게네이즈, 엘라스테이즈, 하이알루로니데이즈, 및 프로테이즈를 포함하지만 이에 국한되지 않는, 노화, 손상, 자유 라디칼의 형성, 또는 피부 요소의 파괴를 가속하거나 촉진하는 효소 또는 매개체를 억제하는 활성 성분의 국소 도포를 이용할 수 있다. 활성 성분은 항산화 활성, 자유 라디칼 포획 또는 항염증 활성을 가질 수 있고, 및/또는 콜라겐, 엘라스틴, 파이브로넥틴, 하이알루론산, 글리코사미노글리칸(GAG), 또는 다른 세포외 기질 요소 또는 NF-kB 신호 전달 경로의 조절 효소 또는 매개체의 파괴를 억제할 수 있다. 활성제는 또한 이러한 경로와 관련된 매개체 및 조절인자, 또는 이의 조합을 포함하는, 노화에 관련된 다른 신호 전달 경로를 억제할 수 있다.

피부의 심미적 또는 미용적 외양 개선 이외에도, 본 발명의 국소 조성물이 피부의 일반적 건강, 생명력 및 외양을 향상시키기 위하여 국소적으로 도포될 수 있다. 예를 들어, 본 조성물이 미세순환, 피부 세포 간의 소통, 필수 영양소 또는 피부 구성요소의 보충을 개선하기 위하여, 또는 피부 세포의 대사, 분열, 증식, 교체(turnover) 및/또는 탈락(exfoliation)을 개선하기 위하여 피부에 도포될 수 있다.

탈락은 알파 - 또는 베타 하이드록시 산 또는 다른 탈락제(exfoliant), 또는 이의 조합을 사용하거나 사용하지 않고 피부에 국소 도포하여 수행될 수 있다. 본 발명의 조성물에서 탈락제를 사용할 경우, 충분한 항자극제 또는 항염증제가 이러한 중화제의 부재에서 탈락제와 관련된 잠재적 자극을 중화하기 위하여 도입된다.

앞에서 설명한 상세한 설명이 제한하기 보다는 예시적인 것으로서 간주되는 것으로 의도된다. 본 발명은 다음 실험적 연구 및 실시예에 의하여 더욱 설명되고, 이는 제한하는 것으로 파악되어서는 안된다. 또한, 표 3-6의 리포솜 현탁액이 대표적인 제형이며, 이의 조성 성분 및 양이 상기 교시에 따라 변할 수 있다.

실시예 1

리포솜 현탁액의 제조.

본 발명에 따른 리포솜 현탁액을 제조하기 위한 대표적인 방법에서, 스크레이프월(scrapewall) 터빈 탱크 Phospholipon®　85에, 세라마이드 IIIB, β-시토스테롤, 및 부틸렌 글리콜을 연달아 첨가하여 유용성 조성물을 제조했다. 40 rpm의 스크레이프월 교반이 개시되었고, 배치 조성물을 성분들을 용해시키기에 충분한 온도 (190-210℉)로 가열했다. 조성물을 냉각하고, 배치 온도가 170℉로 떨어졌을 때 토코페롤을 첨가했다. 이후 수용성 조성물과의 상 조합을 위하여 배치 조성물을 75-85℉까지 냉각하고 이 온도를 유지했다. 스크레이프월을 50 rpm로 교반하는 동안, 8-10 Ib/min의 속도의 공기 동력화(powered) 기어 펌프를 사용하여 물을 유용성 조성물에 천천히 첨가했다. 수용성 및 유용성 성분을 터빈 교반기를 사용하여 50 rpm에서 10-15 분 동안 혼합했다. 이후 결과의 다층, 다소포 리포솜 입자 조성물이 80-100 psi 공급 압력을 이용하여 12,000-15,000 psi의 미세유동화기(Microfluidics MHOY 및 M210EH)에서 1-4 통과를 거쳐 단층 리포솜 입자 조성물을 형성했다. 외부 상 조성물은 스크레이프월 터빈 탱크 글리세린, 메틸파라벤, 아르기닌, 및 물을 서로 연달아 혼합하고, 내용물을 145-155℉에서 약 20 min 동안 교반하며 (30 rpm의 스크레이프월; 300-350 rpm의 터빈) 용해하여 제조되었다. 140℉로 냉각하자 마자, 추가적인 보존제를 외부 상 조성물에 첨가했다. 이후, 추가 냉각시, 미세유동화 단층 입자 조성물을 외부 상 조성물에 혼합하고 15 min 동안 75-90℉에서 혼합했다.

60% 글리세린을 포함하는 결과의 리포솜 현탁액은 1.4의 굴절률을 가졌고, 4℃ 내지 60℃의 온도에서 최소한 6 개월 동안 안정했다. 제형은 투과 전자 현미경(TEM) 분석에 의하여 추가로 평가되었는데 (도 1A-1C), 상기 분석으로 구조적으로 완전한 단층 리포솜의 생성이 확증되었다 (도 1B, 1C).

표 1은 Nanotrac®　N 150 Submicron 입자 크기 분석기(Microtrac Inc., Montgomeryville, PA)를 이용한 동적 레이저 광 산란에 의하여 가변적인 온도 저장 조건(40℉, 주위, 및 120℉)하에 제조 후 다양한 시간 간격(초기, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 및 6 개월)으로 미세유동화기(microfluidizer)를 2 또는 3 회 통과한 후 도 1A-1C에 따른 리포솜 제형의 입자 크기 분석을 나타낸다. 나열한 25 가지의 조건 각각은 테스트된 각 조건에 대하여 3 스캔(히스토그램)에 기초한 75 가지의 상이한 테스트에 대한 입자 크기 계산을 포함한다. 표 1에 나타나는 바와 같이, 리포솜 현탁액을 포함하는 화장품 제형은 주위 온도 조건에서 6 개월 저장한 다음에 56 nm 내지 333 nm의 입자 크기 범위, 및 약 140 nm의 중앙값 입가 크기를 특징으로 했다.

도 2는 주위 온도 조건에서 19 개월의 저장 기간 후 실시예 1에 따른 리포솜 현탁액의 단봉 입자 크기 분포를 나타낸다. 도 2는 약 157 nm의 평균 입자 크기 및 약 54 내지 약 521 nm의 크기 범위를 나타낸다.

실시예 2

표 2는 실시예 1에 기재한 공정에 따라 제조된 리포솜 현탁액을 나타낸다.

성분	양 (퍼센트)
유용성 조성물
인지질(들)	1.0-10.0
세라마이드(들)	0.01-1.0
파이토스테롤(들)	0.01-1.0
결합제(들)	1.0-10.0
항산화제(들)	0.01-1.0
수용성 조성물
물	5.0-60.0
외부 상 조성물
점도 증강제(들)	35.0-70.0
보존제(들)	0.0-5.0

실시예 3

표 3은 실시예 1에 기재한 공정에 따라 형성된 리포솜 현탁액을 나타낸다.

성분	양 (퍼센트)
유용성 조성물
레시틴	4.000
세라마이드 IIIB	0.150
β-시토스테롤	0.100
부틸렌 글리콜	4.000
토코페롤	0.010
수용성 조성물
물	27.000
외부 상 조성물
글리세린	60.483
아르기닌	0.007
물	2.000
보존제(들)	2.250

실시예 4

표 4는 아래 나타낸 바와 같이 몇 가지의 성분 변화와 함께 실시예 1에 기재한 일반적인 공정에 의하여 형성된 리포솜 현탁액을 나타낸다. 도 3 및 4는 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후, 상이한 보존제 조합의 표 4에 따른 두 리포솜 현탁액의 단봉 입자 크기 분포를 나타낸다. 도 3의 리포솜 용액은 미세유동화기에 4 회 통과되었고; 도 4의 리포솜 용액은 미세유동화기에 2 회 통과되었다. 도 3은 페녹시에탄올, 프로필렌 글리콜, 클로르페네신, 및 메틸이소티아졸린온을 사용하는 파라벤이 없는 현탁액에 대하여 약 87 nm의 평균 입자 크기 및 약 38 내지 약 187 nm의 크기 범위를 나타낸다. 도 4는 메틸파라벤, 프로필파라벤, 및 에틸파라벤을 포함하는 다양한 파라벤과 함께 페녹시에탄올을 사용하는 현탁액에 대하여 약 247 nm의 평균 입자 크기 및 약 141 nm 내지 약 518 nm의 크기 범위를 나타낸다. 도 5는 주위 실내 온도 조건에서 최소한 19 개월 동안 표 4에 따른 리포솜 현탁액의 단봉 입자 크기 분포의 유지를 나타낸다. 특히, 도 5는 약 157 nm의 평균 입자 크기 및 약 54 nm 내지 약 521 nm의 크기 범위를 특징으로 하는 단봉 입자 크기 분포를 나타낸다.

성분	양 (퍼센트)
유용성 조성물
레시틴	4.000
세라마이드 IIIB	0.150
β-시토스테롤	0.100
부틸렌 글리콜	4.000
토코페롤	0.010
메도우폼씨 오일	0.150
대두 오일	0.200
달맞이꽃 오일	0.050
들깨씨 오일	0.050
Omega Plus® (해바라기씨 오일, 옥수수 오일, 참깨씨 오일, 마카마디아씨 오일, 올리브 오일)	0.050
토코페릴 아세테이트	0.050
수용성 조성물
물	27.000
외부 상 조성물
글리세린	58.458
아르기닌	0.007
물	2.000
보존제(들)	3.250-3.700

실시예 5

표 5는 아래 나타낸 바와 같이 몇 가지의 성분 변화와 함께 실시예 1에 기재한 일반적인 공정에 의하여 형성된 리포솜 현탁액을 나타낸다. 도 6은 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후 표 5 현탁액의 단봉 입자 크기 분포를 나타내는데, 여기서 리포솜 용액이 미세유동화기에 2 회 통과되었다.

성분	양 (퍼센트)
유용성 조성물
레시틴	4.000
세라마이드 IIIB	0.150
β-시토스테롤	0.100
부틸렌 글리콜	4.000
토코페롤	0.010
메도우폼씨 오일	0.150
대두 오일	0.200
달맞이꽃 오일	0.050
들깨씨 오일	0.050
Omega Plus® (해바라기씨 오일, 옥수수 오일, 참깨씨 오일, 마카마디아씨 오일, 올리브 오일)	0.050
토코페릴 아세테이트	0.050
테트라헥실데실 아스코르베이트	0.025
수용성 조성물
부틸렌 글리콜	4.000
병풀 추출물	0.100
카페인	0.100
물	22.800
외부 상 조성물
글리세린	60.158
아르기닌	0.007
물	2.000
보존제(들)	2.000

실시예 6

표 6은 아래 나타낸 바와 같이 몇 가지의 성분 변화와 함께 실시예 1에 기재한 일반적인 공정에 의하여 형성된 리포솜 현탁액을 나타낸다. 도 7은 주위 온도 조건에서 2.5 개월의 저장 기간 후 표 6 현탁액의 단봉 입자 크기 분포를 나타낸다.

성분	양 (퍼센트)
유용성 조성물
레시틴	3.000
β-시토스테롤	0.100
부틸렌 글리콜	3.000
테트라헥실데실 아스코르베이트	0.100
토코페릴 아세테이트	0.200
수용성 조성물
물	27.000
아세롤라 체리 발표물	0.100
월귤나무 추출물	6.690
외부 상 조성물
글리세린	37.500
잔탄 검	0.800
물	26.950
보존제(들)	1.000

실시예 7

리포솜 크림 제형

도 8은 11,430X 배율의 리포솜 크림 제형의 TEM 현미경사진이다. 도 9는 Zeiss-902 전자 현미경을 이용하여 구한 30,000X 배율의 리포솜 크림 제형의 TEM 현미경사진이다. 리포솜은 화살표에 의하여 식별된다. 리포솜은 화살표에 의하여 식별된다. 도 8 및 9에서, 리포솜 현탁액은 탈이온수에 1:5로 희석되었고, 균질해질 때까지 혼합되었다.

Claims

다음을 포함하는 안정한 단층 리포솜 현탁액:
외부 상 조성물에 현탁된 리포솜 제제(preparation), 상기 리포솜 제제는 약 50 nm 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 복수의 단층 리포솜 입자를 포함하고, 상기 리포솜 제제는 유용성 조성물과 수용성 조성물로 구성된 수성 리포솜 용액으로부터 형성되고, 상기 유용성 조성물은 리포솜 용액의 약 5중량% 내지 약 33중량% 농도이고, 상기 수용성 조성물은 리포솜 용액의 약 67중량% 내지 약 95중량% 농도임,
상기 유용성 조성물은 결합제(coupling agent), 적어도 하나의 인지질, 적어도 하나의 강성 강화제(rigidity enhancer), 및 항산화제를 포함하고;
상기 외부 상 조성물은 리포솜 현탁액의 약 30중랑% 내지 약 75중랑%의 농도이고, 상기 외부 상 조성물은 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 약 2.5 cP 내지 약 40,000 cP의 점도 및 약 0.95 g/cc 내지 약 1.25 g/cc의 밀도를 포함하고;
상기 리포솜 현탁액은 약 1.30 내지 약 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃의 온도에서 최소한 30 일의 기간 동안 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안 순수한(neat) 형태로 안정성을 유지함.
청구항 1에 있어서, 상기 결합제는 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 및 폴리에틸렌 글리콜, 및 이의 혼합으로 이루어진 군에서 선택되는 리포솜 현탁액.
청구항 1에 있어서, 상기 결합제는 부틸렌 글리콜인 리포솜 현탁액.
청구항 2에 있어서, 상기 적어도 하나의 강성 강화제는 스핑고지질, 파이토스테롤, 콜레스테롤, 및 이의 혼합으로 이루어진 군에서 선택되는 리포솜 현탁액.
청구항 4에 있어서, 적어도 둘의 강성 강화제를 포함하고, 적어도 하나의 파이토스테롤 및 세라마이드, 스핑고신, 및 파이토스핑고신으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 멤버를 포함하는 리포솜 현탁액.
청구항 4에 있어서, 상기 적어도 하나의 인지질은 가변적인 지방 아실 부분(moiety) 또는 스핑고미엘린을 가지는 글리세로인지질을 포함하는 리포솜 현탁액.
청구항 1 내지 6에 있어서, 상기 적어도 하나의 인지질은 인지질 제제의 약 80중량% 내지 약 95중량%의 농도로 포스파티딜콜린을 포함하는 인지질 제제를 포함하는 리포솜 현탁액.
청구항 1 내지 6에 있어서, 상기 유용성 조성물은 부틸렌 글리콜, 세라마이드 IIIB, β-시토스테롤, 및 토코페롤을 포함하는 리포솜 현탁액.
청구항 1 내지 6에 있어서, 상기 항산화제는 토코페롤, 토코페롤의 유도체, 알파 토코페롤, 토코페릴 아세테이트, 토코페롤 석시네이트, 아스코르브산, 아스코르브산의 유도체, 테트라헥실데실 아스코르베이트, 부틸화 하이드록실 톨루엔, 부틸화 하이드록시아니솔, 및 이의 혼합으로 이루어진 군에서 선택되는 리포솜 현탁액.
청구항 1 내지 6에 있어서, 상기 리포솜 현탁액은 리포솜 현탁액의 약 35% 내지 약 75% 농도로 글리세린을 포함하는 리포솜 현탁액.
청구항 10에 있어서, 상기 유용성 조성물은 레시틴 제제, 부틸렌 글리콜, 세라마이드 IIIB, 및 β-시토스테롤을 포함하고;
상기 리포솜 현탁액은 약 1.30 내지 약 1.45의 굴절률을 가지는 리포솜 현탁액.
다음 단계를 포함하는, 청구항 1에 따르는 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법:
a. 결합제, 적어도 하나의 인지질, 강성 강화제, 및 항산화제를 포함하는 유용성 조성물을 제조하는 단계;
b. 수용성 조성물을 제조하는 단계;
c. 수용성 조성물과 유용성 조성물을 조합하여 다층(multilamellar), 다소포(multivesicular) 리포솜 제제를 형성하는 단계;
d. 다층, 다소포 리포솜 제제를 단층 리포솜 제제로 전환하는 단계; 및
e. 단층 리포솜 제제를 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서 약 2.5 cP 내지 약 40,000 cP의 점도 및 약 1.05 g/cc 내지 약 1.25 g/cc 범위 내의 밀도를 가지는 외부 상 조성물에 첨가하여 약 50 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 복수의 단층 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 현탁액을 형성하는 단계;
상기 리포솜 현탁액은 1.30 내지 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃의 온도에서 최소한 30 일의 기간 동안, 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안 순수한 형태로 안정성을 유지함.
청구항 12에 있어서, 상기 결합제는 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 및 폴리에틸렌 글리콜, 및 이의 혼합으로 이루어진 군에서 선택되는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12에 있어서, 상기 결합제는 부틸렌 글리콜인, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 13에 있어서, 상기 강성 강화제는 스핑고지질, 파이토스테롤, 콜레스테롤, 및 이의 혼합으로 이루어진 군에서 선택되는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 15에 있어서, 적어도 둘의 강성 강화제를 포함하고, 적어도 하나의 파이토스테롤 및 세라마이드, 스핑고신, 및 파이토스핑고신으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 멤버를 포함하는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 인지질은 가변적인 지방 아실 부분 또는 스핑고지질을 가지는 글리세로인지질을 포함하는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 적어도 하나의 인지질은 인지질 제제의 약 80중량% 내지 약 95중량%의 농도로 포스파티딜콜린을 포함하는 인지질 제제를 포함하는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 유용성 조성물은 부틸렌 글리콜, 세라마이드 IIIB, β-시토스테롤, 및 토코페롤을 포함하는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 항산화제는 토코페롤, 토코페롤의 유도체, 토코페롤의 유도체, 알파 토코페롤, 토코페릴 아세테이트, 토코페릴 석시네이트, 아스코르브산, 아스코르브산의 유도체, 테트라헥실데실 아스코르베이트, 부틸화 하이드록실 톨루엔, 부틸화 하이드록시아니솔, 및 이의 혼합으로 이루어진 군에서 선택되는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 리포솜 용액 대 상기 외부 상 조성물의 중량 비율은 약 0.002 내지 약 0.54인, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 리포솜 현탁액은 리포솜 현탁액의 약 35% 내지 약 75% 농도로 글리세린을 포함하는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 전환하는 단계는 고압 미세유동화, 압출, 고속 전단, 분쇄, 초음파처리, 선택적 마이크로채널 여과 또는 균질화를 포함하는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
청구항 12 내지 16에 있어서, 상기 단층 리포솜 제제는 외부 상 조성물에 현탁하기 전에 동결건조되는, 안정한 단층 리포솜 현탁액을 제조하는 방법.
다음 단계를 포함하는, 청구항 1에 따르는 리포솜 현탁액을 포함하는 화장품 제형을 제조하는 방법:
a. 결합제, 적어도 하나의 인지질, 강성 강화제, 및 항산화제를 포함하는 유용성 조성물을 제조하는 단계;
b. 수용성 조성물을 제조하는 단계;
c. 수용성 조성물을 유용성 조성물과 조합하여 다층, 다소포 리포솜 제제를 형성하는 단계;
d. 다층, 다소포 리포솜 제제를 단층 리포솜 제제로 전환하는 단계; 및
e. 단층 리포솜 제제를 to 21℃에서 10 sec^-1의 전단율에서　 약 2.5 cP 내지 약 40,000 cP의 점도 및 약 1.05 g/cc 내지 약 1.25 g/cc 범위 내의 밀도를 가지는 외부 상 조성물에 첨가하여 약 50 내지 약 290 nm의 평균 입자 크기를 가지는 복수의 단층 리포솜 입자를 포함하는 리포솜 현탁액을 형성하는 단계;
상기 리포솜 현탁액은 1.30 내지 1.45의 굴절률을 가지고, 약 4℃ 내지 약 50℃의 온도에서 최소한 30 일의 기간 동안, 또는 21℃에서 최소한 180 일의 기간 동안 순수한 형태로 안정성을 유지함;
f. 리포솜 현탁액을 화장용으로 적절한 매트릭스와 조합하여 크림, 로션, 겔, 세럼, 토닉, 에멀젼, 페이스트, 또는 스프레이 형태의 화장품 제형을 형성하는 단계.