CN117919112A - 阴离子亲水聚合物修饰的稳定性提高的补骨脂酚脂质体 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种阴离子亲水聚合物修饰的稳定性提高的补骨脂酚脂质体。具体地，本发明提供了一种稳定性提高的补骨脂酚脂质体，包括：补骨脂酚、枯草菌脂肽钠、2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂。通过在补骨脂酚脂质体中添加枯草菌脂肽钠、2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂，能够提高补骨脂酚脂质体的稳定性。

Description

阴离子亲水聚合物修饰的稳定性提高的补骨脂酚脂质体

技术领域

本发明属于化妆品领域，更具体地，本发明涉及一种阴离子亲水聚合物修饰的稳定性提高的补骨脂酚脂质体。

背景技术

皮肤会随年龄发生有规律地渐进性变化，表现出一些特定的衰老迹象，如皮肤皱纹、松弛和色素沉着，影响人的外观吸引力。从衰老机理出发，开发有效延缓皮肤衰老、改善衰老外观变化的护肤品，一直是关注的热点。目前市面上的抗衰老化妆品中视黄醇类物质在抗衰老、祛痘、美白、抗氧化等方面有显著功效，近年来受到广泛关注。然而，视黄醇类物质不仅存在稳定性问题，还是特异性的瞬时受体电位通道香草素受体1(TRPV1)的激动剂，可引起伤害性感觉神经元兴奋并诱发超敏反应——即产生刺激性【YIN S,LUO J,QIAN A,et al.Retinoids activate the irritant receptor TRPV1 and produce sensoryhypersensitivity[J].Journal of Clinical Investigation,2013,123(9):3941-3951.】。因此，对具有抗衰老功效但无刺激性的视黄醇替代品的需求不断增加。

补骨脂酚是常用中药补骨脂挥发油的主要成分，在挥发油中占到60％以上，是一种异戊二烯基酚萜类化合物，可以作为视黄醇替代品。目前国内外关于补骨脂酚的研究报道日益增多，补骨脂酚具有降糖降血脂、抗炎抗菌、抗氧化保护肝细胞、抑癌、抗抑郁、植物雌激素等多种药理活性，极具开发应用前景。实验研究和临床实验中发现其具有抗氧化、改善皮肤屏障、改善皱纹、减少色素沉着，安全性高。但是补骨脂酚的保存条件比较苛刻，易氧化，并且由于皮肤角质层的存在，补骨脂酚直接作用于皮肤时，其吸收会受到很大的限制，透过率较低，透皮吸收效果较差，从而影响补骨脂酚的应用。

为了促进补骨脂酚的透皮吸收，可以采用脂质体包裹补骨脂酚。脂质体是有一种排列有序的磷脂双分子层组成的单层或多层囊泡，具有类似细胞的结构，生物相容性高。双分子层结构主要由大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂组成，磷脂的亲水性头部形成形成囊泡的内外表面，亲脂性的尾端形成双分子层的疏水区域。脂质体的类生物膜双分子层结构，既可以包埋亲水性物质，也可以包埋亲脂性物质，还能够克服角质屏障，穿过细胞膜发挥作用。脂质体依靠卵磷脂的疏水作用以及氢化后与水分子的氢键作用和其他两性化合物如植物鞘氨醇等分散在水相，形成类人体皮肤角质层的磷脂双分子层结构。然而，脂质体容易受到温度影响，氢键作用减弱，会导致以氢键形式与水分子结合的两亲化合物的亲水亲油平衡值被破坏，使两亲化合物亲油性增加，亲水性减弱，进而影响脂质体稳定性。因此，常规脂质体稳定性差，在贮藏和消化过程中其结构容易受到光照、酸、碱等的破坏，出现颗粒絮凝、粒径变大、药物释放等问题，严重制约了脂质体的应用。

因此，本领域亟需一种稳定性提高的补骨脂酚脂质体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定性提高的补骨脂酚脂质体，包括：补骨脂酚、枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂。通过在补骨脂酚脂质体中添加枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂，能够提高补骨脂酚脂质体的稳定性。

在本发明的第一方面，提供一种稳定性提高的补骨脂酚脂质体，包括：补骨脂酚、枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，

所述补骨脂酚的含量为：0.1～20％；较佳为0.5～15％或1～10％；

所述枯草菌脂肽钠的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；

所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；

所述磷脂的含量为：6±1％；较佳为6±0.5％或6±0.2％。

在一种或多种实施方案中，所述磷脂包括如下的一种或多种：卵磷脂、氢化卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋卵磷脂、羟基化卵磷脂、氢化磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油；更佳地，所述磷脂为卵磷脂或氢化卵磷脂。

在一种或多种实施方案中，所述脂质体还包括如下的一种或多种：神经酰胺、油脂、抗氧化剂、水、助溶剂、甘油。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，

所述神经酰胺的含量为：0.01～2％；更佳为0.01～1.5％或0.01～1％；

所述油脂的含量为：3～13％；更佳为4～12％或5～10％；

所述抗氧化剂的含量为：0.1～5％；更佳为0.1～4％、0.1～3％或0.1～2％；

所述水的含量为：5～30％；更佳为8～30％、10～30％或10～20％；

所述助溶剂的含量为：0.3～5％；更佳为0.4～4％、0.5～3％或0.5～2％；

余量为甘油。

在一种或多种实施方案中，所述神经酰胺包括如下的一种或多种：天然神经酰胺、植物神经酰胺、合成神经酰胺、类神经酰胺及衍生物。

在一种或多种实施方案中，所述油脂包括如下的一种或多种：角鲨烷(squalane)、矿物油、辛酸/癸酸甘油三酯(caprylic/capric triglyceride)、植物油；较佳地，所述植物油包括如下的一种或多种：亚麻籽油、霍霍巴油、燕麦仁油、白池花籽油、山茶油、橄榄油、紫苏籽油、牡丹籽油、月见草油、琉璃苣籽油、玫瑰果油、沙棘油、石榴籽油、黑醋栗籽油、小麦胚芽油。

在一种或多种实施方案中，所述抗氧化剂包括如下的一种或多种：维生素C、维生素E醋酸酯、生育酚乙酸酯。

在一种或多种实施方案中，所述助溶剂包括如下的一种或多种：1,2-己二醇、乙二醇、1,3-丁二醇、丙二醇、1,2-戊二醇、山梨糖醇、D-泛醇、二丙二醇、双甘油。

在本发明的第二方面，提供一种本发明所述的脂质体的制备方法，所述方法包括：

步骤1、将补骨脂酚加入油相；

步骤2、将枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、磷脂加入水相；

步骤3、将水相加入油相中，搅拌混合至均匀，得到初步混合液；

步骤4、将初步混合液进行高压均质，得到脂质体；

以及可选的步骤5、冷却步骤4中获得的脂质体，得到高稳定性抗衰老组合物阴离子脂质体。

在一种或多种实施方案中，当所述脂质体包括神经酰胺、油脂、抗氧化剂、水、助溶剂、甘油时，所述神经酰胺、油脂、抗氧化剂与油相中的成分混合；所述助溶剂、甘油与水相中的成分混合。

在一种或多种实施方案中，所述方法还包括如下的一个或多个条件：

步骤1中，混合的温度为60～80℃；

步骤2中，混合的温度为35～70℃；

步骤4中，在800～1600MPa下进行高压均质，例如800、1000、1200、1400、1600MPa；

步骤4中，高压均质的次数为1～5次，更佳为1～2次；

步骤5中，冷却后的温度为30～40℃。

在本发明的第三方面，提供一种组合物，所述组合物包括本发明所述的脂质体，或根据本发明所述的制备方法制备获得的脂质体。

在一种或多种实施方案中，所述组合物为施用于人皮肤的化妆品或个人洗护产品。

在一种或多种实施方案中，所述组合物包括：膏霜、乳液、精华液、水剂、啫喱。

在一种或多种实施方案中，所述膏霜包括：隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜；所述乳液包括：护肤乳、身体乳、精华液；所述水剂包括：化妆水、爽肤水、卸妆水。

在本发明的第四方面，提供有效量的枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂在提高脂质体稳定性上的应用。

在一种或多种实施方案中，所述脂质体为补骨脂酚脂质体。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，所述补骨脂酚的含量为：0.1～20％，较佳为0.5～15％或1～10％。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，所述枯草菌脂肽钠的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述磷脂的含量为：6±1％；较佳为6±0.5％或6±0.2％。

在本发明的第五方面，提供一种提高脂质体稳定性的方法，包括使用有效量的枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂。

在一种或多种实施方案中，所述脂质体为补骨脂酚脂质体。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，所述补骨脂酚的含量为：0.1～20％，较佳为0.5～15％或1～10％。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，所述枯草菌脂肽钠的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述磷脂的含量为：6±1％；较佳为6±0.5％或6±0.2％。

在本发明的第六方面，提供一种包装(如护肤盒/化妆品盒)，其中包括本发明所述的脂质体，或根据本发明所述的制备方法制备获得的脂质体，或本发明所述的组合物。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、枯草菌脂肽钠的结构。

图2、补骨脂酚脂质体1在表4配方中稳定性考察结果。从左至右依次为在-18℃恒温静置1个月、5℃恒温静置3个月、循环(-18℃至0℃至45℃，每个温度保持24小时，4个循环)、45℃恒温静置3个月、50℃恒温静置1个月的稳定性考察结果。

图3、在高压均质技术处理补骨脂酚脂质体1过程中，随着均质压力的增大，脂质体平均粒径和包封率。

图4、随着均质次数的增加，补骨脂酚脂质体1的平均粒径和包封率。

图5、补骨脂酚脂质体1的Zeta电位图。

图6、补骨脂酚脂质体1的粒径分布图。

图7、等含量(1％)补骨脂酚普通精华液和脂质体精华液中的补骨脂酚猪皮驻留量对比。

图8、补骨脂酚脂质体1的稳定性考察结果。从左至右依次为在50℃恒温静置1个月、45℃恒温静置3个月、-18℃恒温静置1个月、5℃恒温静置3个月、循环(-18℃至0℃至45℃，每个温度保持24小时，4个循环)的稳定性考察结果。

图9、补骨脂酚脂质体7的稳定性考察结果。从左至右依次为在50℃恒温静置1个月、45℃恒温静置3个月、-18℃恒温静置1个月、5℃恒温静置3个月、循环(-18℃至0℃至45℃，每个温度保持24小时，4个循环)的稳定性考察结果。

图10、补骨脂酚脂质体8的稳定性考察结果。从左至右依次为在50℃恒温静置1个月、45℃恒温静置3个月、-18℃恒温静置1个月、5℃恒温静置3个月、循环(-18℃至0℃至45℃，每个温度保持24小时，4个循环)的稳定性考察结果。

具体实施方式

如本发明所用，所述“补骨脂酚”是中药补骨脂挥发油的主要成分，在挥发油中占到60％以上，是一种异戊二烯基酚萜类化合物。补骨脂酚具有降糖降血脂、抗炎抗菌、抗氧化保护肝细胞、抑癌、抗抑郁、植物雌激素等多种药理活性。本发明中将之作为视黄醇替代品。然而，直接应用或将补骨脂酚制备成脂质体时，均存在稳定性问题。

为了解决补骨脂酚稳定性的问题，本发明通过在补骨脂酚脂质体中添加枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂，能够提高补骨脂酚脂质体的稳定性。因此，本发明提供了一种稳定性提高的补骨脂酚脂质体，包括：补骨脂酚、枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂。在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述补骨脂酚的重量百分比为0.1～20％，例如但不限于0.1～15％、0.5～15％、0.8～12％或1～10％。

如本发明所用，所述“枯草菌脂肽钠”属于一种阴离子亲水聚合物，通常由微生物Bacillus Subtilis发酵技术生产。如图1所示，它是由七个氨基酸所组成的环状肽亲水基，是与β-羟基脂肪酸相连组成的独特的环状肽结构。本发明人发现，在制备补骨脂酚脂质体中枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂相配合，具有更好的稳定性。这可能是因为，枯草菌脂肽钠在水中形成胶束时，分子之间能够形成氢键，从而以极少的分子数开始形成聚合体，使补骨脂酚脂质体表面携带负电荷，通过电荷的排斥力，阻止脂质体间聚集，并且不受温度影响。

应理解，由于枯草菌植肽钠是阴离子亲水聚合物，当脂质体中有一定量枯草菌植肽钠存在，分子间作用力等于负电荷之间的排斥力时，脂质体达到稳定平衡的状态；而当脂质体中有极少量或大量枯草菌植肽钠存在，分子间作用力小于或大于负电荷之间的排斥力时，就无法达到稳定平衡的状态，不利于脂质体的稳定性，可能会导致补骨脂酚的泄露或渗出。在具体的实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述枯草菌脂肽钠的重量百分比为0.5±0.2％，例如但不限于0.5±0.15％、0.5±0.1％、0.5±0.08％、0.5±0.06％或0.5±0.05％。

如本发明所用，所述“2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱”，又称为“2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine”，“MPC”或“聚季铵盐-51”。聚季铵盐-51是一类基于仿细胞膜外层结构设计合成的两性离子化合物，侧链上含有一个亲水性磷酸胆碱(phosphorylcholine，PC)基团。本发明人发现，将其与枯草菌脂肽钠、补骨脂酚和磷脂混合，可获得更优良的热和化学稳定性、更优越的组织相容性，且能有效增加表面润滑度，可以增强皮肤屏障以及具有非常好的保湿能力。在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的重量百分比为：0.5±0.2％，例如但不限于0.5±0.15％、0.5±0.1％、0.5±0.08％、0.5±0.06％或0.5±0.05％。

在一种或多种实施方案中，所述磷脂包括如下的一种或多种：卵磷脂(lecithin)、氢化卵磷脂(hydrogenated lecithin)、大豆卵磷脂(soybean lecithin)、蛋卵磷脂(egglecithin)、羟基化卵磷脂(hydroxylated lecithin)、氢化磷脂酰胆碱(hydrogenatedphosphatidylcholine)、磷脂酰肌醇(phosphatidyl inositol)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine)、磷脂酰甘油(Phosphatidyl glycerol)。

在一种或多种实施方案中，以脂质体的总重量计，所述磷脂的含量为6±1％，例如但不限于6±0.8％、6±0.7％、6±0.5％、6±0.3％、6±0.2％或6±0.1％。

如本发明所用，所述“稳定性”包括但不限于：离心稳定性、储存稳定性、粒径分布。

如本发明所用，所述“离心稳定性”是指经高速离心后检测其稳定性。例如，如果经高速离心处理后的样品不易分层、沉淀或析出，则表明产品稳定性得到较好的提升。通常，所述的高速为大于1000rpm，例如大于2000rpm、2500rpm、3000rpm、4000rpm或更高。

如本发明所用，所述“粒径分布”是乳状液稳定性的重要指标。乳化是将两相不相溶的液体进行混合，其中一相液体被分切成小液滴，均匀分散于另一相液体中，形成均匀稳定的乳状液。因此，粒径分布向更小区间迁移表明乳状液的稳定性提高。在化妆品学领域中，所述乳状液是指利用乳化现象形成的液体，包括但不限于：膏霜、乳液、水剂、啫喱等。所述乳液包括但不限于：护肤乳、身体乳、精华液等，所述膏霜包括但不限于：隔离霜、防晒霜、护肤霜、面霜、眼霜、手霜等，所述水剂包括但不限于：化妆水、爽肤水、卸妆水等。

如本发明所用，所述“储存稳定性”包括但不限于：高温加速稳定性、低温储存稳定性。本领域技术人员知晓，通过高温加速稳定性实验或低温储存稳定性实验，可以判断样品是否在流变特性上有着较好的稳定性【陈裕炜，郭萌，汪冰洁，马玲，彭先武。低温瞬时高速剪切对化妆品稳定性的影响。日用化学品科学.2020，(1).DOI:10.3969/j.issn.1006-7264.2020.01.011】。

在一种或多种实施方案中，所述补骨脂酚脂质体还包括：神经酰胺、油脂、抗氧化剂、水、助溶剂、甘油。

所述的神经酰胺包括但不限于如下的一种或多种：天然神经酰胺、植物神经酰胺、合成神经酰胺、类神经酰胺及衍生物。在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述神经酰胺的重量百分比为0.01～2％，例如为0.01～1.5％或0.01～1％。

所述油脂的种类不受限制，可以使用与枯草菌脂肽钠具有相容性的油脂，具体可以包括碳氢类油以及硅类油种的1种以上。在一种或多种实施方案中，所述油脂是米糠油或辛酸/癸酸甘油三酯等具有甘油三酯结构、或角鲨烷等具有烷烃结构的油脂中的一种或其混合物。例如，所述油脂包括但不限于：角鲨烷(squalane)、矿物油、辛酸/癸酸甘油三酯(caprylic/capric triglyceride)、植物油。所述植物油包括但不限于：亚麻籽油、霍霍巴油、燕麦仁油、白池花籽油、山茶油、橄榄油、紫苏籽油、牡丹籽油、月见草油、琉璃苣籽油、玫瑰果油、沙棘油、石榴籽油、黑醋栗籽油、小麦胚芽油中的任意一种或多种。在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述油脂的重量百分比为3～13％，例如但不限于4～12％或5～10％。

所述的抗氧化剂包括但不限于：维生素C、维生素E醋酸酯、生育酚乙酸酯，或其两种或两种以上的混合物。在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述抗氧剂的重量百分比为0.1～5％，例如但不限于0.1～4％、0.1～3％或0.1～2％。

所述的助溶剂包括：1,2-己二醇、乙二醇、1,3-丁二醇、丙二醇、1,2-戊二醇、山梨糖醇、D-泛醇、二丙二醇、双甘油，或其两种或两种以上的混合物。在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述助溶剂的重量百分比为0.3～5％，例如但不限于0.4～4％、0.5～3％或0.5～2％。

在一种或多种实施方案中，以本发明提供的脂质体的总重量计，所述水的重量百分比为5～30％，例如但不限于8～30％、10～30％或10～20％。

在一种或多种具体的实施方案中，所述补骨脂酚脂质体包括以下重量份数的原料：补骨脂酚0.1～20％、神经酰胺0.01～2％、油脂3～13％、氢化卵磷脂6±1％、枯草菌脂肽钠0.5±0.2％、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱0.5±0.2％、抗氧化剂0.1～5％、水5～30％、助溶剂0.3～5％，余量为甘油。

在一种或多种实施方案中，在由一些化妆品学上可接受的载体形成的油相中加入另一些化妆品学上可接受的载体形成的水相，乳化后加入本发明提供的补骨脂酚脂质体，得到含有补骨脂酚脂质体的组合物。

“组合物(composition)”是指当施用于一个体(一般指人)时，能够透过皮肤而诱发所亟需求的抗衰老作用的一种组合物。

在本发明的一些实施例中，用于形成水相的化妆品学上可接受的载体包括但不限于：水、甘油、丁二醇、1,2己二醇、卡波姆、EDTA二钠、透明质酸钠、山梨糖醇、甜菜碱中的一种或两种以上。

在本发明的一些实施例中，用于形成油相的化品学上可接受的载体包括但不限于：环五聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇乙基己基酯、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、苯基聚三甲基硅氧烷、HDI/三羟甲基己基内脂交联聚合物、棕榈酸乙基己酯、蜂蜡、牛油果树果脂、异十六烷、矿脂、乳木果油、角鲨烷、卵磷脂中的一种或两种以上。

本发明还提供了一种补骨脂酚脂质体的制备方法，包括：

步骤1、将补骨脂酚加入油相；

步骤2、将枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、磷脂加入水相；

步骤3、将水相加入油相中，搅拌混合至均匀，得到初步混合液；

步骤4、将初步混合液进行高压均质，得到脂质体；

以及可选的步骤5、冷却步骤4中获得的脂质体，得到高稳定性抗衰老组合物阴离子脂质体。

在一种或多种实施方案中，当所述脂质体包括神经酰胺、油脂、抗氧化剂、水、助溶剂、甘油时，所述神经酰胺、油脂、抗氧化剂与油相中的成分混合；所述助溶剂、甘油与水相中的成分混合。

在一种或多种实施方案中，步骤1中，混合的温度为60～80℃。

在一种或多种实施方案中，步骤2中，混合的温度为35～70℃。

在一种或多种实施方案中，步骤5中，冷却后的温度为30～40℃。

在一种或多种实施方案中，步骤4中，在800～1600MPa下进行高压均质，例如800、1000、1200、1400、1600MPa。

在一种或多种实施方案中，步骤4中，所述高压均质循环1～5次，例如1～2次。

本发明通过在制备的过程中将补骨脂酚包裹在脂质体中，可以实现对补骨脂酚的稳定高效包裹。由于在补骨脂酚脂质体中添加枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂，所得脂质体的稳定性更好。同时，补骨脂酚脂质体直接作用于皮肤时，透过率大大提高，透皮吸收效果较好。

本发明还提供了一种组合物，其包含本发明所述的补骨脂酚脂质体或者本发明所述的方法制备得到的补骨脂酚脂质体。

所述组合物可以是施用于人皮肤的化妆品或个人洗护产品，包括但不限于，膏霜、乳液、精华液、水剂、啫喱等。所述膏霜包括但不限于：隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜；所述乳液包括但不限于：护肤乳、身体乳、精华液；所述水剂包括但不限于：化妆水、爽肤水、卸妆水。

以组合物的总重量计，其中含有0.1～20％的补骨脂酚，例如但不限于0.5～15％、1～10％。

本发明提供的组合物可用于身体的各处皮肤。在一种实施方式中，可用于保护皮肤的抗衰老。

虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。本发明所述的数值范围，均包括端点值。例如1～10％，包括了1％和10％的端点值。

除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解与惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。

为使本领域技术人员可了解本发明的特点及效果，以下谨就说明书及权利要求书中提及的术语及用语进行一般性的说明及定义。除非另有指明，否则文中使用的所有技术及科学上的字词，均为本领域技术人员对于本发明所了解的通常意义，当有冲突情形时，应以本说明书的定义为准。

本文描述和公开的理论或机制，无论是对或错，均不应以任何方式限制本发明的范围，即本发明内容可以在不为任何特定的理论或机制所限制的情况下实施。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，只要这些特征的组合不存在矛盾，所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的有益效果在于：本发明制备的补骨脂酚纳米脂质体包含枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂，其可以帮助提高纳米脂质体的稳定性以及在生物体内的缓释性和生物稳定性，提高了脂质体在表皮细胞发挥作用的时间，从而使得更多的活性物可以人体细胞，同时2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱优异的保湿性能使得皮肤细胞处于良好的保湿环境中。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量(克)。

实施例1、补骨脂酚脂质体制备

根据表1制备补骨脂酚脂质体，包括如下步骤：

步骤1，按比例称取补骨脂酚、神经酰胺、角鲨烷、生育酚乙酸酯于60～80℃下搅拌融解，得油相；

步骤2、称取甘油、1,2-戊二醇、枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、氢化卵磷脂加入水中，于35～70℃下搅拌溶解，得水相；

步骤3、将有水相加入油相中，1000～2000rpm的转速下搅拌混合至均匀，得到初步混合液。

步骤4、将初步混合液通过高压均质机(安拓思AH-NANO)在800～1600MPa下均质循环1～2次，得到50～300nm的多层纳米脂质体。由于该多层纳米脂质体的磷脂层负载补骨脂酚以及神经酰胺，因而，纳米脂质体排列致密且非常稳定。

步骤5、将上述脂质体冷却到30～40℃，得到稳定的补骨脂酚脂质体。

表1补骨脂酚纳米脂质体

注：神经酰胺NP：合成神经酰胺。

实施例2、补骨脂酚脂质体稳定性考察以及包封率测试

为了确定是否制备得到均一稳定的脂质体，将制备成功的脂质体1～9的样品在3000rpm条件下离心30min，或4000rpm条件下离心10、20、30或40min，观察样品的外观变化。

从表2可以看出，补骨脂酚脂质体1～3的离心稳定性较好。

表2补骨脂酚纳米脂质体在不同离心条件下的变化

注：—表示没有进行实验。

进一步，以脂质体1～3、7、8为例，分别在50℃恒温放置1个月、45℃恒温放置3个月、-18℃恒温放置1个月、5℃恒温放置3个月、以及循环条件(即-18℃至0℃至45℃，每个温度保持24小时，4个循环)下，考察制备成功的脂质体的稳定性。

从表3和图8-10可以看出，脂质体1～3的稳定性良好，脂质体7、8的高温稳定性较差。

表3补骨脂酚脂质体在不同温度条件下的变化

实验条件	50℃1个月	45℃3个月	-18℃1个月	5℃3个月	循环4次
						脂质体1	无变化	无变化	无变化	无变化	无变化
脂质体2	无变化	无变化	无变化	无变化	无变化
						脂质体3	无变化	无变化	无变化	无变化	无变化
脂质体7	分层	无变化	无变化	无变化	无变化
						脂质体8	分层	无变化	无变化	无变化	无变化

配方中脂质体的稳定性考察

以脂质体1为例，将制备获得的补骨脂酚脂质体，添加至表4的配方中，具体如下：将A相搅拌混合均匀，加热至70-80℃；将B相加热至70-80℃混合均匀；将B相及C相搅拌下加入A相中，70-80℃混合均匀；加入D相，搅拌混合均匀；冷却至40-50℃，加入E相，搅拌混合均匀，冷却至常温，获得面霜。

分别在-18℃恒温静置1个月，循环条件(-18℃至0℃至45℃，每个温度保持24小时，4个循环)，50℃恒温静置1个月，5℃恒温静置3个月或45℃恒温静置3个月。每周定期恢复至室温，观察面霜的性状，颜色及气味，考察配方中补骨脂酚脂质体的稳定性。

表4

注：表中的百分比为重量百分比，重量单位是g。

图2的结果显示，脂质体1的稳定性良好。

包封率的测定

以补骨脂酚脂质体1为例，测定其包封率。

补骨脂酚-正己烷溶液标准曲线的绘制：精确称取1000mg的补骨脂酚溶于正己烷，在100mL容量瓶中定容得到10mg/mL的标准溶液，配制一系列不同质量浓度的补骨脂酚-正己烷溶液(0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL)，以正己烷为空白，在一定波长处测定吸光度，以补骨脂酚的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

使用高压均质机(安拓思AH-NANO)，根据仪器参数设定进行均质化，分别在0、800、1000、1200、1400、1600MPa的高压均质压力条件下，或分别高压均质循环1、2、3、4、5次，对补骨脂酚脂质体的包封率进行测定。取1mL脂质体于离心管中，加入4mL正己烷，涡旋混合2min后机械振荡，并在3500r/min下离心10min，取上清液测定吸光度。根据补骨脂酚-正己烷溶液标准曲线计算游离补骨脂酚的质量，实验重复3次取平均值。通过下式计算包封率：

包封率/％＝100×(mt-mf)/mt

式中：mf为未被包封进脂质体中的游离补骨脂酚的质量/g；mt为制备脂质体时加入的补骨脂酚质量/g。

补骨脂酚脂质体1的包封率结果如图3和图4所示。

如图3所示，在高压均质技术处理脂质体过程中，随着均质压力的增大，脂质体平均粒径逐渐减小，相比未经该技术处理的脂质体，其包封率明显增加。但在1200MPa均质压力下，脂质体的微囊发生破裂，补骨脂酚发生泄漏，包封率降低。当高压均质压力为1000MPa时，脂质体的平均粒径约为95nm，包封率为92％，较为理想，故选择高压微射流均质压力1000MPa进行后续实验。

如图4所示，随着均质次数的增加，脂质体的平均粒径逐渐减小，包封率逐渐增大，但脂质体囊泡易因均质次数的增加或时间的延长而导致温度升高，体系内容易出现重新聚集现象导致补骨脂酚包封率降低，故选择均质处理次数2次进行后续实验。

实施例3、补骨脂酚纳米脂质体粒径测试

如图3和图4所示，本发明制备得到的补骨脂酚脂质体1的粒径小于300nm，平均粒径为95nm。进一步，以补骨脂酚脂质体1为例，通过马尔文分析仪(Mastersizer 3000)，使用仪器推荐的方法，进行脂质体的粒径分析，其Zeta电位图和粒径分布图如图5和图6所示。粒径如表5所示。

从表5的平均粒径、Zeta电位的数据可以得出，使用本发明方法制备得到的补骨脂酚纳米脂质体1的粒径小且均匀，而且因为Zeta电位较大，因此稳定性更好。

表5脂质体样品的平均粒径、Zeta电位

补骨脂酚脂质体	平均粒径/nm	Zeta电位/mV
			脂质体1	95	-35

实施例4、补骨脂酚脂质体精华液的制备

以脂质体1为例，将制备获得的补骨脂酚脂质体，添加至表6的配方中，具体如下：将A相搅拌混合均匀，将B相及C相在搅拌下加入A相中，混合均匀；获得补骨脂酚脂质体精华液。

表6

注：表中的百分比为重量百分比，重量单位是g。

实施例5、补骨脂酚脂质体精华液的透皮性能

为了考察本发明的补骨脂酚脂质体精华液与普通补骨脂酚精华液的透皮性能，本实验选用巴马香猪皮肤(上海医药工业研究院提供)作为经皮渗透动物模型，利用Franz扩散池(RYJ-12B药物透皮扩散试验仪，上海黄海药检仪器有限公司)对含补骨脂酚纳米脂质体精华液及补骨脂酚普通精华液的透皮情况进行了研究。

使用实施例1、4的方法制备获得补骨脂酚脂质体精华液(含补骨脂酚1％)。根据表7的配方，制备获得含1％补骨脂酚的对照普通精华液：将A相搅拌混合均匀，将B相及C相在搅拌下加入A相中，混合均匀；获得含1％补骨脂酚的对照普通精华液。

表7

注：表中的百分比为重量百分比，重量单位是g。

实验前将猪皮剪成2.5cm×2.5cm大小后置于Franz扩散池的接收池与供给池间，接收液为生理盐水溶液，在供给池中加入0.02g样品，将组装好的Franz扩散池放入RYJ-12B药物透皮扩散试验仪(上海黄海药检仪器有限公司)中，角质层面朝供给池放置，透皮时间为12h【於学良,张根元.咪喹莫特乳膏的体外透皮吸收研究[J].中国药房,2015,26(1):65-67.】。透皮实验结束后，取下皮肤，用无水乙醇冲洗3次，再用蒸馏水冲洗3次，将皮肤表面残留样品洗净，剪碎皮肤，置于2mL的组织提取管中，加入1mL 90％乙腈，超声60min，取上清液，0.22μm有机滤膜过滤后，HPLC测定(HPLC仪：Agilent Technologies Inc，安捷伦科技有限公司)皮肤中补骨脂酚含量，计算补骨脂酚皮肤驻留量。结果见图7。

如图7所示，本发明补骨脂酚脂质体精华液的皮肤驻留量显著高于普通的补骨脂酚精华液。

实施例6、补骨脂酚脂质体的肤感测试

对实施例1制备所得的补骨脂酚脂质体1进行感官评价。感官评价方法如下：选取专业感官评价测试者10名进入专业的测试房间，用规定洁面产品对前手臂进行清洁，擦干，静坐10min。在此时间内，用卡纸在两前手臂的内侧坐上标记，固定好4个5cm×5cm的区域，每个手臂内侧各固定2个。待10min后，取50微升测试样品置于标记的区域内，让测试者在规定的区域内用食指打圈10次铺展产品，然后用食指和无名指在规定区域内轻拍直至产品吸收。产品测试结束后，让测试者对产品的铺展性、油份感、水份感、贴肤性、粘腻感、吸收速度、保湿感、柔软感和残留感这9个属性进行评分，评分方法采用10分制(0分表示测试产品没有该属性，10分表示测试产品该属性极强)。

从表7可以得出结论：本发明制备得到的脂质体清爽，柔软，油腻感低，贴肤性好。

表7高稳定性的补骨脂酚纳米脂质体的肤感测试结果

评价员	铺展性	油份感	水份感	贴肤性	粘腻感	吸收速度	保湿感	柔软感	残留感
										1	10	3	4	9	3	7	8	9	5
2	9	4	4	9	4	8	9	10	6
										3	7	4	3	10	3	8	7	8	4
4	7	4	4	8	3	8	9	9	4
										5	8	5	5	7	4	9	7	8	5
6	10	4	5	8	5	8	6	7	5
										7	9	4	4	8	4	9	8	8	3
8	8	3	5	8	6	7	8	10	4
										9	9	3	3	9	4	8	7	7	5
10	8	4	5	10	6	7	9	9	3
										11	9	3	5	8	3	7	7	7	5
12	7	3	4	7	4	9	8	9	5
										13	10	4	3	8	2	7	8	9	3
14	8	3	3	9	3	8	9	7	3
										15	7	4	3	7	4	8	7	8	4
16	8	4	3	8	4	9	7	8	4
										17	9	2	3	9	3	8	9	9	3
18	8	3	4	9	5	8	9	9	3
										19	9	2	3	9	3	8	8	7	5
20	9	4	3	9	5	7	8	9	4

实施例7、补骨脂酚脂质体安全性测试

一、材料和方法

1.受试物：补骨脂酚脂质体1。

2.阴性对照：空白对照(去离子水)。

3.受试者：有效人数共31人，男8人，女23人，年龄21至55岁，平均年龄31.29±7.20岁符合受试者志愿入选标准。

4.斑试方法：选用合格的斑试器材(北京百亿怡达科技开发有限公司，产品批号20221001,生产日期2022年10月)，按照封闭性斑贴试验方法，将受试物约0.020g～0.025g(固体)或0.020mL～0.025mL(液体)置于斑试器内，外用低致敏胶带贴敷于受试者背部，24小时后去除受试物，分别于去除后0.5、24、48小时观察皮肤反应，按现行有效的技术规范(2015《化妆品安全技术规范》)中皮肤反应分级标准记录其结果。

结果如表8所示。

表8化妆品人体皮肤斑贴试验结果汇总

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人体皮肤斑贴试验结果显示，31人中：受试物均为0级反应。

三、试验结论

脂质体斑贴测试结果显示，31人中0例出现反应。说明本发明的补骨脂酚脂质体引起皮肤不良反应的概率极低，安全性良好。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。同时，在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。

Claims (10)

1.一种稳定性提高的补骨脂酚脂质体，包括：补骨脂酚、枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂。

2.如权利要求1所述的脂质体，其特征在于，以脂质体的总重量计，

所述补骨脂酚的含量为：0.1～20％；较佳为0.5～15％或1～10％；

所述枯草菌脂肽钠的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；

所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；

所述磷脂的含量为：6±1％；较佳为6±0.5％或6±0.2％。

3.如权利要求1或2所述的脂质体，其特征在于，所述磷脂包括如下的一种或多种：卵磷脂、氢化卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋卵磷脂、羟基化卵磷脂、氢化磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油；较佳地，所述磷脂为卵磷脂或氢化卵磷脂。

4.如权利要求1-3任一项所述的脂质体，其特征在于，所述脂质体还包括如下的一种或多种：神经酰胺、油脂、抗氧化剂、水、助溶剂、甘油；

较佳地，以脂质体的总重量计，

所述神经酰胺的含量为：0.01～2％；更佳为0.01～1.5％或0.01～1％；

所述油脂的含量为：3～13％；更佳为4～12％或5～10％；

所述抗氧化剂的含量为：0.1～5％；更佳为0.1～4％、0.1～3％或0.1～2％；

所述水的含量为：5～30％；更佳为8～30％、10～30％或10～20％；

所述助溶剂的含量为：0.3～5％；更佳为0.4～4％、0.5～3％或0.5～2％；

余量为甘油。

5.如权利要求4所述的脂质体，其特征在于，

所述神经酰胺包括如下的一种或多种：天然神经酰胺、植物神经酰胺、合成神经酰胺、类神经酰胺及衍生物；

所述油脂包括如下的一种或多种：角鲨烷、矿物油、辛酸/癸酸甘油三酯、植物油；较佳地，所述植物油包括如下的一种或多种：亚麻籽油、霍霍巴油、燕麦仁油、白池花籽油、山茶油、橄榄油、紫苏籽油、牡丹籽油、月见草油、琉璃苣籽油、玫瑰果油、沙棘油、石榴籽油、黑醋栗籽油、小麦胚芽油；

所述抗氧化剂包括如下的一种或多种：维生素C、维生素E醋酸酯、生育酚乙酸酯；

所述助溶剂包括如下的一种或多种：1，2-己二醇、乙二醇、1，3-丁二醇、丙二醇、1，2-戊二醇、山梨糖醇、D-泛醇、二丙二醇、双甘油。

6.一种权利要求1-5任一项所述的脂质体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1、将补骨脂酚加入油相；

步骤2、将枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、磷脂加入水相；

步骤3、将水相加入油相中，搅拌混合至均匀，得到初步混合液；

步骤4、将初步混合液进行高压均质，得到脂质体；

以及可选的步骤5、冷却步骤4中获得的脂质体，得到高稳定性抗衰老组合物阴离子脂质体；

较佳地，所述脂质体如权利要求4或5所述时，所述神经酰胺、油脂、抗氧化剂与油相中的成分混合；所述助溶剂、甘油与水相中的成分混合；

更佳地，所述方法还包括如下的一个或多个条件：

步骤1中，混合的温度为60～80℃；

步骤2中，混合的温度为35～70℃；

步骤4中，在800～1600MPa下进行高压均质；

步骤4中，高压均质的次数为1～5次，更佳为1～2次；

步骤5中，冷却后的温度为30～40℃。

7.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1-5任一项所述的脂质体，或如权利要求6所述的制备方法获得的脂质体；

较佳地，所述组合物为施用于人皮肤的化妆品或个人洗护产品；

更佳地，所述组合物包括：膏霜、乳液、精华液、水剂、睹喱；

更更佳地，所述膏霜包括：隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜；所述乳液包括：护肤乳、身体乳、精华液；所述水剂包括：化妆水、爽肤水、卸妆水。

8.有效量的枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂在提高脂质体稳定性上的应用；

较佳地，所述脂质体为补骨脂酚脂质体；更佳地，以脂质体的总重量计，所述补骨脂酚的含量为：0.1～20％，较佳为0.5～15％或1～10％；和/或，

较佳地，以脂质体的总重量计，所述枯草菌脂肽钠的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述磷脂的含量为：6±1％；较佳为6±0.5％或6±0.2％。

9.一种提高脂质体稳定性的方法，其特征在于，包括使用有效量的枯草菌脂肽钠、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和磷脂；

较佳地，所述脂质体为补骨脂酚脂质体；更佳地，以脂质体的总重量计，所述补骨脂酚的含量为：0.1～20％，较佳为0.5～15％或1～10％；和/或，

较佳地，以脂质体的总重量计，所述枯草菌脂肽钠的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的含量为：0.5±0.2％；较佳为0.5±0.1％或0.5±0.05％；所述磷脂的含量为：6±1％；较佳为6±0.5％或6±0.2％。

10.一种包装，其中包括如权利要求1-5任一项所述的脂质体，或如权利要求6所述的制备方法获得的脂质体，或如权利要求7所述的组合物。