KR100908254B1 - 항알레르기용 조성물 - Google Patents

항알레르기용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR100908254B1
KR100908254B1 KR1020057017035A KR20057017035A KR100908254B1 KR 100908254 B1 KR100908254 B1 KR 100908254B1 KR 1020057017035 A KR1020057017035 A KR 1020057017035A KR 20057017035 A KR20057017035 A KR 20057017035A KR 100908254 B1 KR100908254 B1 KR 100908254B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
lactic acid
acid bacteria
strain
delete delete
antiallergic
Prior art date
Application number
KR1020057017035A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20050109985A (ko
Inventor
사요 이노우에
도시오 후지이
다이스께 후지와라
아끼라 사이끼
미노루 다까하시
고이찌로 야마우찌
마사미 고또우
사또시 니시다
게이지 데우찌
히데유끼 와까바야시
도시히로 고메다
Original Assignee
기린 홀딩스 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 기린 홀딩스 가부시키가이샤 filed Critical 기린 홀딩스 가부시키가이샤
Publication of KR20050109985A publication Critical patent/KR20050109985A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100908254B1 publication Critical patent/KR100908254B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/16—Tea extraction; Tea extracts; Treating tea extract; Making instant tea
    • A23F3/166—Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/34—Tea substitutes, e.g. matè; Extracts or infusions thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F5/00—Coffee; Coffee substitutes; Preparations thereof
    • A23F5/24—Extraction of coffee; Coffee extracts; Making instant coffee
    • A23F5/246—Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/14—Decongestants or antiallergics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum

Abstract

본 발명의 과제는 알레르기의 예방ㆍ치료에 유용한 항알레르기용 조성물, 상기 조성물의 제조 방법 및 식품 및 음료 등으로의 이용을 제공하는 것에 있다. 해결 수단은, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균을 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물을 포함한다. 본 발명은, 본 발명의 항알레르기용 조성물의 유효 성분인, 항알레르기 활성이 높은 유산균의 취득 방법 및 본 발명의 항알레르기용 조성물을 식품 및 음료 등으로 이용하는 것, 또한 제제화하여 경구 투여용 항알레르기제로 이용하는 것을 포함한다.
알레르기, 항알레르기 활성, 항알레르기제, 식품, 음료, 유산균, 인터루킨 12, 인터루킨 4

Description

항알레르기용 조성물 {ANTIALLERGIC COMPOSITION}
본 발명은 알레르기의 예방ㆍ치료에 유용한 항알레르기용 조성물, 특히 항알레르기 활성이 높은 유산균을 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물, 및 상기 유산균의 취득 방법, 또한 상기 항알레르기용 조성물을 식품 및 음료 등으로서 이용하는 것에 관한 것이다.
선진국에서 알레르기는 가장 빈도가 높은 질환 중 하나이다. 알레르기의 발증 기구는 통상적으로 I형부터 IV형의 4 가지로 분류된다. I형 알레르기는 IgE 항체가 관여하는 것으로서, 화분증, 천식, 진홍역, 아나필락시 쇼크 등으로 대표된다. II형 알레르기는 IgG 항체, IgM 항체가 관여하는 것으로서, 보체계를 활성화하는 세포 상해성 반응이며, 태아 적아구증 또는 자가면역성 용혈성 빈혈이 이에 해당한다. III형 알레르기는 항원·항체 복합체에 의해서 발생하는 조직 상해로서, 알룩스 반응이나 혈청병, 사구체 신장염으로 대표되는 반응이다. IV형 알레르기는 T 세포가 관여하는 지연형 알레르기 (지연형 과민증)로서, 투베르쿨린 반응이나 접촉성 피부염으로 대표되는 반응이다. 알레르기 중에서 음식물 알레르기의 발증에는 I형, II형 및 IV형이 관여한다고 알려져 있다. 한편, 환경 알레르기, 즉 화분증, 아토피성 피부염, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 등의 알레르기에는 주로 I형 발증 기구가 관여하는 것으로 알려져 있다.
상기 I형 알레르기는 알레르겐 특이적 IgE의 유도 및 히스타민 또는 로이코트리엔 등과 같은 화학적 매개자의 방출을 특징으로 한다. 면역 응답은 각종 세포에 의한 상호작용에 의한 것으로서, 이에 관여하는 세포의 일종으로는 헬퍼 T 세포 (Th)가 있다. 헬퍼 T 세포는 T 세포아군으로 분류되고, 항원을 인식하여 각종 사이토카인 (헬퍼 인자)를 생산하여 면역 응답 유도를 조절하는 기능이 있다. 헬퍼 T 세포는 사이토카인 생산능에 따라 Th1 세포 및 Th2 세포로 분류된다. B 세포에서 항체의 클래스 스위치가 일어나서 IgE 항체가 생산되도록 하기 위해서는 IL-4, IL-5, IL-13 등의 Th2 사이토카인이 필요하다. 실제로, 알레르기 환자의 림프구에는 Th2 세포가 증가된다는 것이 알려져 있다. 즉, 외부에서 침입한 알레르겐은 수상(樹狀) 세포ㆍ대식세포 등과 같은 항원 제시 세포에 의해서 그의 일부가 MHC 클래스 II 분자에 결합한 상태로 T 세포에 대하여 제시되어 Th2 세포가 활성화ㆍ분화한다. Th2 세포가 방출한 Th2 사이토카인은 B 세포의 클래스 스위치를 유도하여 IgE 항체가 생산되고, IgE 항체는 조직 내의 마스트 세포 또는 혈중 호염기구 표면의 FcㆍR에 결합한다. 알레르겐은 이후의 침입시에 마스트 세포 또는 호염기구 표면에 결합되어 있는 IgE 항체에 의해 인식되어 IgE 항체간에 가교가 형성된다. 이 자극을 계기로 하여 마스트 세포 또는 호염기구의 화학적 매개자가 폭발적으로 유리되면서 다양한 알레르기 증상이 나타나게 되는 것이다.
IgE 또는 화학적 매개자를 통한 알레르기의 예방ㆍ치료에 있어서는, 예를 들 어 히스타민 수용체에 히스타민과 길항적으로 결합함으로써 말초 신경으로부터의 신호 전달을 저해하는 항히스타민제, 화학적 매개자 생산 세포의 활성을 약화시켜서 증상의 경감을 시도하는 항알레르기제, 면역 응답성을 약화시켜서 염증을 경감시키는 스테로이드제, 알레르겐 자체를 정기적으로 주사함으로써 내성을 유도하는 감감작(減感作) 요법 등이 있다. 그러나, 그 어느 것도 부작용이 문제시되어 있고, 효과에 대해서도 결정적인 것이 없다.
최근 IgE를 억제하기 위해서, Th2 사이토카인의 생산을 조절하는 방법에 주목이 집중되고 있다. 결핵균이나 용연(溶連)균, 유산균 등의 어느 종의 세균은 Th1 면역을 증강시킴으로써 Th2 면역을 억제하고, 그 결과로서 IgE를 저하시키는 것이 보고되어 있다 (문헌 [임상 면역, 1999년, 제32권, 454페이지; 인터내쇼날ㆍ아카이브즈ㆍ오브ㆍ알레르기ㆍ앤드ㆍ이뮤놀로지, 1998년, 제115권, 278페이지; 일본 특허 공개 (평)9-2959호 공보]).
그 중에서도 유산균은 안전성의 면에서 식품 등에의 응용이 용이하고, 유용한 소재이다. 그러나, 일률적으로 유산균이라 하더라도 모든 유산균에 Th1 면역을 증강시키는 강력한 효과가 있는 것은 아니고, 유용한 주를 선택하는 것이 필수가 되고 있다. 항알레르기 유산균으로서는, 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus) LGG주가 공지되어 있고, 임부에게 섭취시킴으로써 아이의 아토피성 피부염 발증이 억제되는 것으로 나타났다 (문헌 [란셋트, 2001년, 제357권, 1076페이지]). 유산균을 항알레르기제로서 이용하는 것에 대해서는, 몇몇 일본 특허 공보에도 개시되어 있다. 예를 들면, 일본 특허 공개 (평)9-2959호 공보에는 락토바실 러스 아시도필루스, 락토바실러스 브레비스, 락토바실러스 브리네리 및 락토바실러스 카세이 등의 유산균을 첨가하여 마우스 림프구를 배양하였을 때의 IgE 생산량이 30 ng/㎖ 이하인 것을 항알레르기제로서 이용하는 것에 대하여 개시되어 있고, 일본 특허 공개 (평)10-309178호 공보에는 비피도박테리움ㆍ인판티스, 비피도박테리움ㆍ브레비스, 비피도박테리움ㆍ롱검 및 비피도박테리움ㆍ비피담 등의 비피더스균을 특히 음식물 알레르기를 치료하기 위한 항알레르기제로서 이용하는 것에 대하여 개시되어 있으며, 일본 특허 공개 제 2000-95697호 공보에는 엔테로콕쿠스ㆍ페칼리스, 락토바실러스ㆍ로이테리 등의 유산균을 알레르기성 기관지 천식, 알레르기성 비염 및 아토피성 피부염 등의 I형 알레르기의 억제제로서 이용하는 것에 대하여 개시되어 있다.
한편, 유산균 등이 Th1 면역을 증강시키는 것은 IL-12 또는 IFN-감마 등의 생산을 통해 대식세포 또는 킬러 T 세포, NK 세포의 세포성 면역 활성화를 의미하고, 바이러스나 세균 감염, 암의 발생에 대하여 저항하는 것에 관련되는 것을 알 수 있었다. 구체적으로는 대식세포가 생산하는 IL-12는 미분화 헬퍼 T 세포의 Th1 세포로의 분화, 단핵구ㆍ대식세포ㆍNK 세포의 활성화를 통해서 외적(外敵)ㆍ암에 대한 저항성을 획득시킨다. 따라서, 강력한 IL-12 생산을 유도할 수 있는 유산균주는 면역 부활제로서 사용할 수 있는 것이 시사되었다 ([캔서ㆍ이뮤놀로지ㆍ이뮤노세라피, 2000년, 제49권, 157페이지], 일본 특허 공개 (평)7-228536호 공보, 일본 특허 공개 제2002-80364호 공보).
또한, 유산균이 장관에 살아 있는 상태로 도달하여 여러가지 효과를 발휘하기 위해서는 위산, 담즙산이라는 소화액에 대하여 내성일 필요가 있음이 알려져 있다 (문헌 [학회 출판 센터, 장내 플로라 심포지움 3, 장내 플로라와 프로바이오틱스, p41-55, 미쯔오까 도모다리 저서, 1998년]). 또한, 장관에의 부착성이 높은 유산균은 장관에 머물러 그의 효과를 충분히 발휘하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 유산균을 경구 섭취하는 경우에는 상기 유산균의 기능성 크기 뿐만이 아니라 오히려 유산균이 살아있는 채로 장관에 도착하여 머무르게 하는 것이 바람직하다고 되어 있다.
최근, 아토피성 피부염이나 화분증 등, 알레르기에서 기인한다고 생각되는 체질 변화를 일으킨 사람이 많이 보이고 사회 문제화되고 있다. 그 중에서도 특히 증상이 심각한 환자에 대해서는, 각종 약제를 사용한 치료 행위가 행해지고 있다. 그러나, 대부분의 대상자는 본격 치료를 행하기에까지는 이르지 못하고, 일상 생활을 해가는 데에 있어서 민간 요법 등을 비롯한 대체 요법을 행하여 대체하고 있는 것이 실정이다.
이와 같은 상황을 감안하여, 최근에 와서 식이에 의해 알레르기를 억제하고자 하는 연구가 활발하게 행해지고 있다. 그 결과, 예를 들어 들깨유 또는 어유, 특정 차 폴리페놀 등과 같이 각종 음식품의 성분에 항알레르기 효과가 있음을 발견하고 이것들로 대체하고 있다.
항알레르기 효과가 있는 음식품의 성분으로서, 상술한 바와 같이 특정 유산균에도 동일한 효과가 있음이 알려져 있고, 이 유산균을 이용한 요구르트나 유산균 음료가 항알레르기 효과가 있는 음식물로서 일부 실용화되어 있다. 이러한 종류의 항알레르기용 음식품에 의한 예방 또는 치료에서는, 안전하면서 또한 온건한 조건에서 섭취하는 것이 가능한 대신에 매일 계속 섭취할 필요가 있고, 또한 상기 계속 섭취가능한 양에서 효능이 발휘될 필요가 있다. 그러나, 종래의 것에서는 그러한 항알레르기 활성이 높은 균주를 선택 취득하는 방법이 명확하지 않았기 때문에 유력한 균주가 취득되지 못하였고, 실용상 만족할 수 있는 것이 아니었다. 또한, 종래의 유산균의 사용에 있어서는 요구르트나 유산균 음료에서와 같이 유산균에 의한 발효가 주된 목적이지 항알레르기 작용은 부차적인 것이었으며, 또한 요구르트나 유산균 음료의 경우에는 냉장 유통이 필수여서 오래가지 않는 것이 많아, 취급의 자유도가 적다는 문제도 있어서 손쉽게 매일 계속 섭취하는 것이 가능하면서도 효능이 있는 본격적인 알레르기의 예방 또는 치료용 음식품으로서는 만족할만한 것이 아니었다. 따라서, 현재 이들 요건을 만족시키는 효능이 있는 항알레르기용 조성물이나 그것을 이용한 음식품 등의 개발이 요구되고 있다.
본 발명의 과제는 알레르기의 예방ㆍ치료에 유용한 항알레르기용 조성물, 특히 항알레르기 활성이 높은 유산균을 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물, 및 상기 유산균의 취득 방법, 또한 상기 항알레르기 기능이 있는 식품 및 음료 등을 제공하는 것에 있다. 여기서,「항알레르기 기능이 있다」라는 것은 「알레르기의 예방ㆍ치료에 효과를 발휘하고(하거나), 알레르기 증상을 개선ㆍ완화한다」는 것을 의미한다.
본 발명자는 화분증ㆍ아토피성 피부염, 기관지 천식, 알레르기성 비염 등의 환경 알레르기의 예방ㆍ치료를 목적으로 하여, 그의 유효 성분에 대하여 탐색하는 중에, 우선 그의 안전성 면에서 유산균에 착안하여 예의 탐색한 결과, Th2의 활성화 저해와 Th1 활성화를 양호한 균형으로 행할 수 있는 유산균을 선택함으로써, 항알레르기 활성이 높은 유산균을 얻는 것이 가능한 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균의 취득 방법은, Th1/Th2 균형에 착안한 방법이라는 점을 특징으로 한다. 종래의 방법에서는 IgE를 측정하여 항알레르기 활성을 평가하였지만, IgE가 알레르기에 관계된 것은 의심이 없는 사실이지만, 한편으로는 예를 들어 아토피 환자라 해도 IgE가 높은 사람과 IgE가 낮은 사람이 있다는 것으로도 알 수 있는 것처럼 IgE의 정도로 전부를 설명할 수는 없다는 것도 사실이다. 알레르기의 발증에는 IgE 이외에도 호산구의 증가나 림프구의 국소 침윤을 일으키게 하는 케모카인의 방출 등과 같은 여러 사건들이 종합적으로 관여하는 것을 알 수 있다. 따라서, 본 발명에서는 IgE의 증가, 호산구의 증가 또는 케모카인까지 종합적으로 설명할 수 있는 Th1/Th2 균형에 착안하여, 상기 균형을 지표로 하여 항알레르기성 균주를 평가, 분리하는 방법을 개발함으로써, 항알레르기 활성이 높은 유산균을 얻는 것에 성공하였다.
본 발명의 항알레르기용 조성물은, Th2 활성화의 지표가 되는 인터루킨 4 (IL-4)의 생성량 및 Th1 면역 활성화의 지표가 되는 인터루킨 12 (IL-12)의 생성량이 특정하게 균형을 이루는 유산균을 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물을 포함하고, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균을 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물을 포함한다. 본 발명에 있어서는, 상기 본 발명의 항알레르기 활성을 갖는 유산균으로서 인터루킨 12 생산량이 상기 KW3110주에 대하여 70％ 이상인 유산균; 인터루킨 12 생산량이 70％ 이상이며 또한 인터루킨 4 생산량이 40％ 미만인 유산균을 활성 성분으로 하는 것을 포함할 수 있으며, 또한 본 발명에서 취득된 항알레르기 활성을 갖는 유산균인 KW4110, KW3925, KW3926의 항알레르기 활성과 대비하여 KW4110과 동등하거나 그 이상의 항알레르기 활성을 나타내는 유산균; KW3925와 동등하거나 그 이상의 항알레르기 활성을 나타내는 유산균; KW3926과 동등하거나 그 이상의 항알레르기 활성을 나타내는 유산균을 활성 성분으로 하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명은 상기 본 발명의 항알레르기용 조성물의 유효 성분인 항알레르기 활성이 높은 유산균의 취득 방법을 포함한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 항알레르기용 조성물을 음식품에 이용하는 것과 제제화에 의해 경구 투여용 항알레르기용 제제로 이용하는 것을 포함한다. 본 발명의 항알레르기용 조성물의 유효 성분 중 하나인 락토바실러스 파라카세이 KW3110주는 소화액에 대하여 내성이고 장관에의 부착성이 높은 유산균이며, 항알레르기제로서 경구 투여할 경우에 특히 우수한 효과를 발휘한다.
본 발명에서 항알레르기용 조성물의 유효 성분으로서 사용되는 락토바실러스 파라카세이 KW3110은, 특허 미생물의 기탁을 위한 부다페스트 조약에 기초하여, 국제 기탁 당국인 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터 (일본 이바라끼껭 쯔꾸바시 히가시 1-1-1 쥬오우 다이 6)에 FERM BP-08634로서 기탁되어 있다.
본 발명의 항알레르기용 조성물을 음식품에 이용하는 것에 대해서는, 특히 본 발명의 항알레르기용 조성물의 유효 성분인 항알레르기 활성이 높은 유산균을 차 음료와 같은 음료에 적용하여, 항알레르기 기능이 있는 음료를 제공하는 것을 포함한다. 본 발명의 항알레르기 기능이 있는 음료는 기호성, 보존성이 높은 음료일 수 있고, 매일 계속 섭취하는 것이 가능하면서 상기 계속 섭취하는 것이 가능한 양에서 효능이 발휘되는 항알레르기 기능이 있는 음료로서 제조할 수 있다. 본 발명에 있어서 항알레르기 활성이 높은 유산균은, 이것을 가열 살균과 같은 처리에 의해 살균된 형태로 사용할 수 있고, 예를 들어 본 발명의 유산균을 가열 살균한 후에 첨가하고, 살균 종료된 밀봉 용기 투입 음료로서 제조함으로써, 음료 자체의 향미를 유지하고, 음료 제품으로서 안정하며, 또한 항알레르기 기능이 계속될 수 있는 밀봉 용기 투입 음료로서 제품화하는 것이 가능하다. 또한, 밀봉 용기 투입 음료로서 제조하는 경우에는, 이용하는 유산균의 농도를 조정함으로써, 항알레르기 기능을 유지하면서, 또한 음료 자체의 향미 유지 기능을 증가시키고, 기호성, 보존성이 높은 음료를 제조하는 것이 가능하다. 본 발명에 있어서는 항알레르기 작용 및 제품의 보존, 안정화의 관점에서, 유성분(乳成分)을 포함하지 않는, 즉 예를 들어 과즙 투입 청량 음료 또는 차 음료와 같이 유성분이 비배합된 형태의 각종 유형의 음료로 하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 항알레르기용 조성물을 음식품에 이용하는 경우에는 본 발명에 의해 채취된 항알레르기 활성이 높은 유산균 2종 이상을 함께 사용할 수 있다. 이때, 각각의 음식품이나 유산균에 따라 그의 조합이나 배합량을 조정할 수 있다. 또한, 다른 항알레르기용 조성물과의 배합 또는 병용도 행할 수 있다.
<발명의 개시>
즉, 본 발명은, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 1); 청구항 1에 있어서, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서의 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 75％ 이상인 유산균을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 2); 청구항 1 또는 2에 있어서, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서의 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 40％ 미만인 유산균을 유효 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 3); 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 75％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 40％ 미만인 유산균을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 4); 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 80％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 30％ 미만인 유산균을 유효 성분으로서 포함하는 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 5); 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 기재된 마우스 비장 유래 림프구의 인터루킨 12 및 인터루킨 4 생성량을 나타내는 유산균이 락토바실러스 파라카세이 KW3110주, 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum ) KW4110주, 락토바실러스 파라카세이 KW3925주, 락토바실러스 파라카세이 KW3926주 또는 스트렙토콕쿠스 살리바리우스(Streptococcus salivarius) KW3210인 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 6); 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 기재된 마우스 비장 유래 림프구의 인터루킨 12 및 인터루킨 4 생성량을 나타내고, 또한 소화액에 대하여 내성이고 장관에의 부착성이 높은 유산균인 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 7); 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 알레르기가 화분증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 또는 아토피성 피부염인 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 8); 청구항 8에 있어서, 의약인 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 9); 청구항 8에 있어서, 음식품인 것을 특징으로 하는 항알레르기용 조성물 (청구항 10)을 포함한다.
또한, 본 발명은 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양하며, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균을 분리하는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 활성이 높은 유산균의 취득 방법 (청구항 11); 청구항 11의 방법에 의해 분리한 유산균을 배지를 이용하여 배양하고 증식시키는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 활성이 높은 유산균의 제조 방법 (청구항 12); 청구항 12에 있어서, 배지를 이용하여 배양하고 증식시킨 유산균의 항알레르기 활성을 확인하는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 활성이 높은 유산균의 제조 방법 (청구항 13); 청구항 13에 있어서, 증식시킨 유산균의 항알레르기 활성의 확인이, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁한 배지에 상기 유산균을 첨가하여 배양하고, 인터루킨 12 및 인터루킨 4의 생산량을 측정함으로써 행해지는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 활성이 높은 유산균의 제조 방법 (청구항 14); 청구항 12 내지 14 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성이 높은 유산균의 제조 방법에 의해 제조된 유산균을 의약 또는 음식품에 배합하여 용기에 충전하고 밀봉하는 것을 특징으로 하는, 밀봉 용기 투입 의약품 또는 음식품의 제조 방법 (청구항 15); 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기용 조성물을 알레르기 질환의 예방 및(또는) 치료를 위한 처치에 이용하는 것을 특징으로 하는, 알레르기 질환의 예방 및(또는) 치료 방법 (청구항 16); 청구항 16에 있어서, 알레르기 질환이 화분증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 또는 아토피성 피부염인 것을 특징으로 하는, 알레르기 질환의 예방 및(또는) 치료 방법 (청구항 17); 알레르기 질환의 예방 및(또는) 치료에 있어서, 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 항알레르기용 조성물의 용도 (청구항 18); 청구항 18에 있어서, 알레르기 질환의 예방 및(또는) 치료가 화분증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 또는 아토피성 피부염의 예방 및(또는) 치료인 것을 특징으로 하는, 항알레르기용 조성물의 용도 (청구항 19)를 포함한다.
또한, 본 발명은, 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성을 갖는 유산균을 활성 성분으로서 첨가한 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음식품 (청구항 20); 청구항 20에 있어서, 항알레르기 활성을 갖는 유산균을 음식품의 1일 섭취량 당 5×109개 이상이 되도록 함유시킨 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음식품 (청구항 21); 청구항 20 또는 21에 있어서, 알레르기의 원인이 되는 성분을 함유하지 않는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음식품 (청구항 22); 청구항 22에 있어서, 알레르기의 원인이 되는 성분을 함유하지 않는 정제, 과립제, 분말제, 캡슐제 또는 드링크제인 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음식품 (청구항 23); 청구항 20 또는 21에 있어서, 유산균을 살균하여 이용하는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음식품 (청구항 24); 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성을 갖는 유산균을 활성 성분으로서 첨가한 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음료 (청구항 25); 청구항 22에 있어서, 유성분이 비배합된 밀봉 용기 투입 음료인 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음료 (청구항 26); 청구항 25 또는 26에 있어서, 밀봉 용기에 투입된 과즙 함유 청량 음료 또는 차 음료인 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음료 (청구항 27); 청구항 25 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 밀봉 용기 투입 음료에 첨가하는 유산균이 음료 100 g 당 109 내지 1011개의 범위인 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음료 (청구항 28); 청구항 20 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 첨가하는 유산균이 락토바실러스 파라카세이 KW3110 또는 그의 변이주인 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 식품 또는 음료 (청구항 29); 청구항 20 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 건강 식품, 기능성 식품, 특정 보건용 식품 또는 병자용 식품으로서 제조된 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 식품 또는 음료 (청구항 30); 멸균된 식품 또는 음료에 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성이 높은 유산균 또는 상기 유산균을 살균한 것을 실질적으로 무균 상태에서 배합하여 용기에 충전하고 밀봉하는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 밀봉 용기 투입 음식품의 제조 방법 (청구항 31); 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양할 때 생산되는 인터루킨 12 및(또는) 인터루킨 4의 양을 측정하는 것을 특징으로 하는, 유산균의 항알레르기 활성의 측정 방법 (청구항 32); 청구항 32에 있어서, 피검 유산균을 첨가하여 배양할 때 생산되는 인터루킨 12 및(또는) 인터루킨 4의 양을 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 평가하는 것을 특징으로 하는, 유산균의 항알레르기 활성의 측정 방법 (청구항 33); 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성이 높은 유산균에 담체, 부형제 및(또는) 다른 보조제를 첨가하여 제제화한 것을 특징으로 하는 항알레르기제 (청구항 34); 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성이 높은 유산균을 포함하는 의약품 (청구항 35); 유산균을 이용하여 제조되거나 또는 유산균을 함유하는 음료 또는 식품의 일부 또는 전부가 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성이 높은 유산균으로 대체된 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음식품 (청구항 36); 유산균을 이용하여 제조되거나 또는 유산균을 함유하는 음료 또는 식품의 유산균의 일부 또는 전부를 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 항알레르기 활성이 높은 유산균으로 대체하는 것을 특징으로 하는, 항알레르기 기능이 있는 음료 또는 식품의 제조 방법 (청구항 37)을 포함한다.
본 발명은, Th2의 활성화의 지표가 되는 인터루킨 4 (IL-4)의 생성량과 Th1의 면역 활성화의 지표가 되는 인터루킨 12 (IL-12)의 생성량이 특정하게 균형을 이루며 항알레르기 활성이 높은 유산균을 유효 성분으로 하는 항알레르기용 조성물을 포함한다.
(본 발명에 따른 유효 성분인 유산균)
본 발명에 따른 유효 성분인 항알레르기 활성이 높은 유산균은, 난백 알부민 (이하, 「OVA」라 함)으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 OVA 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균이다. 본 발명에 따른 유효 성분으로서 더욱 바람직한 것은, 상기 유산균이 OVA로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 OVA 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서의 인터루킨 12 생산량이 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 75％ 이상인 유산균이다. 본 발명에 따른 유효 성분으로서 더욱 바람직한 것은, 상기 유산균이 OVA로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 OVA 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에, 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 40％ 미만인 것을 특징으로 하는 유산균인 것이다.
본 발명에 있어서 항알레르기 활성이 높은 유산균으로서 가장 바람직한 양태는, 난백 알부민 (이하, 「OVA」라 함)으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 OVA 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양한 경우에 있어서, 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 80％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 30％ 미만인 유산균이다.
본 발명에서 유효 성분으로서 이용하는 항알레르기 활성이 높은 유산균의 취득은, 알레르겐으로 감작시킨 동물 비장 유래 림프구를 상기 알레르겐 함유 배지에 현탁하고 피검 유산균을 첨가하여 배양하고, Th1 유도 사이토카인 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균을 분리하는 항알레르기 활성이 높은 유산균의 취득 방법에 의존한다. 즉, 난백 알부민으로 감작시킨 마우스 비장 유래 림프구를 난백 알부민 함유 배지에 현탁한 것에 공지된 유산균의 균주 또는 새롭게 분리한 유산균 균주를 첨가하여 배양하고, 기본적으로는 인터루킨 12 생산량이 피검 유산균으로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 동등하거나 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용한 경우와 비교하여 60％ 이상이고, 또한 인터루킨 4 생성량이 유산균 무첨가 대조군의 50％ 미만인 유산균을 분리함으로써 취득할 수 있다. 상기와 같이, 본 발명에서 유효 성분으로 이용되는 유산균은, 각종 공지된 유산균 또는 새롭게 분리한 유산균에 대하여 시험관내 항알레르기 활성 평가 실험 방법을 행하면 본 발명의 지표를 기준으로 하여 당업자가 쉽게 선택하여 취득할 수 있으며, 이에 대한 상세한 설명은 실시예 1에 구체적으로 개시한다.
본 발명에서 유효 성분으로서 이용하는 항알레르기 활성이 높은 유산균의 일례인 락토바실러스 파라카세이 KW3110주는 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei) L14주이며, 일본 유업 기술 협회로부터 입수할 수 있다. 또한, 일본 유업 기술 협회는 L14주가 락토바실러스 카세이라고 기재하고 있지만, 본 발명자들이 콸리콘(QUALICON)이 제조한 리보프린터를 이용하여 RFLP(Restriction Flagment Length Polymorphism) 및 AFLP(Amplified Flagment Length Polymorphism)로 해석한 결과에 따르면 상기 주가 락토바실러스 파라카세이라고 판단되었기 때문에, 본 발명에 있어서는 락토바실러스 파라카세이라고 기재하였다. 본 발명에서 항알레르기용 조성물의 유효 성분으로서 사용되는 락토바실러스 파라카세이 KW3110은 상기한 바와 같이 일본 유업 기술 협회에서 입수할 수 있지만, 또한 특허 미생물의 기탁을 위한 부다페스트 조약에 기초하여, 국제 기탁 당국인 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터에 FERM BP-08634로서 기탁되어 있다.
또한, 본 발명에서 항알레르기용 조성물의 유효 성분으로서 사용되는 락토바실러스 플란타룸 KW4110주는 락토바실러스 플란타룸 JCM1149주이고, 락토바실러스 파라카세이 KW3926주는 락토바실러스 파라카세이 JCM8132주이며, JCM (이화학 연구소 미생물 계통 보존 시설)로부터 입수할 수 있고, 또한 락토바실러스 파라카세이 KW3925주는 락토바실러스 파라카세이 NRIC1917주로서 NRIC (동경 농업 대학)으로부터 입수할 수 있다.
본 발명에서 유효 성분으로 이용되는 유산균을 선택할 때에는 항알레르기 작용 이외에도 많은 유산균에서 알려져 있는 정장(整腸) 작용ㆍ콜레스테롤 저하 작용ㆍ혈압 저하 작용 등과 같이 종래 공지된 프로바이오틱스의 기능까지 발휘하는 유산균을 선택할 수도 있다. 또한, 본 발명에 따른 유효 성분인 유산균을 경구 투여하는 경우에는 유산균이 장관에도 머물러 그의 효과를 충분히 발휘하는 것이 보다 효과적이기 때문에, 상기 기준에 따라 선택 취득한 유산균을, 또한 인간 장관 유래 주화 세포 Caco-2에 대한 시험관내 접착성 시험에 사용하여 더 높은 세포 접착능을 갖는 주를 선택함으로써, 유효성이 더욱 높은 유산균을 취득할 수 있다. 본 발명에 따른 유효 성분의 하나인 락토바실러스 파라카세이 KW3110주는, 소화액에 대하여 내성이고 장관에의 부착성이 높은 유산균이며, 항알레르기제로서 경구 투여할 경우에 상기 효과가 특히 우수하다.
본 발명에 따른 유효 성분인 유산균은, M.R.S. (de Man, Rogosa, Sharpe) 배지 등과 같이 당업자에게 알려진 유산균 배양용 배지에서 적절하게 배양 증식시킨 후에 생균으로 이용하거나 또는 살균 처리하여 이용하고, 필요에 따라서는 동결건조 또는 분무건조시켜 분말화함으로써 본 발명에 따른 조성물의 유효 성분으로서 사용할 수 있다. 또한, 공정 관리를 위해서는 필요에 따라 얻어진 유산균 균체의 항알레르기 활성을 측정할 수 있다. 이때, 상기 항알레르기 활성의 측정 방법으로는 알레르겐으로 감작시킨 동물 비장 유래 림프구를 상기 알레르겐 함유 배지에 현탁시키고, 피검 유산균을 첨가하여 배양할 때 생산되는 Th1 유도 사이토카인 및(또는) Th2 유도 사이토카인의 양을 측정하는 유산균의 항알레르기 활성의 측정 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서는, 본 발명의 방법으로 취득한 항알레르기 활성이 높은 유산균을 변이시켜서, 항알레르기 활성 등이 높은 변이주를 제조하여 사용할 수 있다. 균주의 변이 수단으로서는, UV 등의 공지된 변이 수단을 이용하여 행할 수 있는, 예를 들어 항알레르기 활성이 높은 유산균인 KW3110주를 변이 수단으로 변이시켜, 본 명세서에 기재된 유산균의 항알레르기 활성의 평가 방법을 이용하여, 항알레르기 활성이 증가되었거나 또는 다른 특성을 변이시킨 바람직한 특성의 변이주를 취득하여 사용할 수 있다. 또한, KW4110주, KW3210주, KW3925주 및 KW3926주 등을 변이시켜 이용할 수도 있다.
(파생주의 선별)
본 발명에서는 본 발명에서 취득한 유산균주로부터 생성된, 형질이 다른 균주를 파생주로서 선별하여 사용할 수 있다. 상기 균주의 선별 방법은, KW3110을 예로서 설명하면 다음과 같다: KW3110주를 MRS 배지와 같은 배지를 이용하여, 소정 온도에서 소정 균수에 도달할 때까지 정치 배양하고, 배양액을 신선한 MRS 배지로 희석한 후에 상기 균체 현탁액을 염산으로 pH 3.0으로 만든 PBS (다이닛본 세이야꾸사 타블렛을 지정 농도로 용해시킴)에 10％ 분량으로 현탁시켜 37℃에서 3 시간 동안 인큐베이션한다. 산 처리한 균체 현탁액을 PBS로 희석하여 MRS 플레이트 배지에 접종하여 콜로니를 형성시킨다. 형성된 콜로니를 색조 등을 지표로 하여 선별하고, 이러한 색조에 기초하여 선별한 콜로니로부터 1 주를 더 선별하여, MRS 배지에서 48 시간 동안 배양한다. 상기 배양물의 항알레르기 활성을 본 발명의 항알레르기 활성의 측정법 (실시예 2의 방법)으로 측정하여, 각 콜로니의 항알레르기 활성을 판정한다. 상기 방법에 의해, 시험 균주 중에서 항알레르기 활성이 높은 균주를 선별 취득한다. 본 발명의 실시예에서, KW3110주의 파생주로서 분리된 주는 번호 90주라 명명되어, 특허 미생물의 기탁을 위한 부다페스트 조약에 기초하는 국제 기탁 당국인 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터 (일본 이바라끼껭 쯔꾸바시 히가시 1-1-1 쥬오우 다이 6)에 FERM BP-08635로서 기탁되어 있다.
(항체의 제조)
본 발명에 있어서는, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 함유하는 제품의 품질 관리 또는 제조 공정의 관리를 위해서, 상기 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균의 분리, 검출을 행하여 그 유산균의 동정이나 함유량의 검사를 행할 필요가 있다. 상기 유산균의 분리, 검출을 목적으로 항체를 제조하여 사용할 수 있다. 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균에 특이적으로 결합하는 항체의 구체적인 예로는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 등의 면역 특이적 항체 등을 들 수 있고, 이들은 상기 유산균을 항원으로서 이용하여 통상법에 의해 제조할 수 있지만, 그 중에서도 모노클로날 항체가 그의 특이성의 측면에서 더욱 바람직하다. 이러한 모노클로날 항체 및 폴리클로날 항체의 생산 방법은 당업계에 이미 공지된 방법일 수 있다. 예를 들면, 상기 생산 방법은 문헌 ([Koehler, G. and C. Milstein, Nature: 256, 495-497 (1975)] 및 [Davis, B., R. Dulbecco, H. Eisen, H. Ginsberg and W. Wood, Principles of Microbiology and Immunology vol.2, Harper ＆ Row, New York, 1973])을 참조할 수 있다. 즉, 상기 모노클로날 항체는, 예를 들어 본 발명의 유산균을 이용하여 마우스를 면역화시킨 후에 상기 마우스의 비장 세포를 마우스 골수종 세포와 융합시켜 얻어지는 하이브리도마 세포에 의해서 생산할 수 있다. 본 발명의 유산균에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 본 발명의 유산균 검출은, 공지된 항체를 이용하는 면역학적 검출법을 이용하여 실시할 수 있다. 상기 면역학적 측정법의 예로는 RIA법, ELISA법, 형광 항체법 등의 공지된 면역학적 측정법 등을 들 수 있다.
(본 발명에 따른 유효 성분인 유산균의 항알레르기 작용)
알레르기는, 항원 자극에 의해 IgE 항체가 생산되고, IgE 항체의 조직 내의 마스트 세포 또는 혈중 호염기구 표면의 Fc 수용체에 결합하여, 이후의 항원 자극 (알레르겐의 재침입)시에 마스트 세포 또는 호염기구 표면에 결합되어 있는 IgE 항체에 의해 인식되어 IgE 항체간에 가교가 형성되며, 이 자극을 계기로 하여 마스트 세포 또는 호염기구가 화학적 매개자를 폭발적으로 유리함으로써 여러 증상이 나타나게 되는 것이다. 따라서, 알레르기의 치료ㆍ예방을 위해서는 IgE를 억제하는 것이 필요하고, 또한 이러기 위해서는 Th1 면역을 증강시켜 Th2 면역을 억제하는 것이 필요하다.
본 발명에 의한 유산균은, 마우스 림프구를 이용한 시험관내 계에서 Th1 면역의 지표인 인터루킨 12 (IL-12) 생산을 강력하게 유도함과 동시에 Th2 면역의 지표인 인터루킨 4 (IL-4) 생산을 강력하게 억제한다. 따라서, 본 발명에 의한 유산균에는, Th1 면역을 증강시켜 Th2 면역을 억제함으로써 IgE 항체 생산을 억제한다는 작용 기작에 기초하여 알레르기를 치료ㆍ예방하는 효과가 있다.
따라서, 본 발명의 항알레르기용 조성물은 화분증ㆍ아토피성 피부염, 기관지 천식, 알레르기성 비염ㆍ기관지 천식 등의 환경 알레르기에 대하여 특히 효력을 발휘한다. 또한, 본 발명의 유산균은, 상기 항알레르기 작용 이외에도 많은 유산균에서 알려져 있는 정장 작용ㆍ콜레스테롤 저하 작용ㆍ혈압 저하 작용 등과 같이 종래 공지된 프로바이오틱스의 기능까지 함께 구비할 수 있고, 본 발명에 따른 유효 성분인 유산균의 일례인 KW3110주의 경우에는 강력한 항알레르기ㆍ면역 부활 활성 뿐만이 아니라 장관 세포에의 접착성, 위산ㆍ담즙산에 대한 내성 역시 우수한 것이 확인되었고, 또한 상술한 프로바이오틱스 기능의 면에서도 그의 효과를 기대할 수 있다.
(본 발명의 항알레르기용 조성물의 투여)
본 발명의 항알레르기용 조성물은, 본 발명에 따른 유효 성분을 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 결합제, 희석제 등과 혼합함으로써 제제화하면 항알레르기제로서 사용할 수 있다. 본 발명의 항알레르기제는 경구 또는 비경구 투여할 수 있다. 경구제로는 과립제, 산제, 정제 (당의정을 포함함), 환제, 캡슐제, 시럽제, 유화액제, 현탁액제를 들 수 있다. 비경구제로는 주사제 (예를 들어, 피하 주사제, 정맥내 주사제, 근육내 주사제, 복강내 주사제), 점적제, 외용제 (예를 들어, 경비 투여 제제, 경피 제제, 연고제), 좌제 (예를 들어, 직장좌제, 질좌제)를 들 수 있다. 이들 제제는, 해당 분야에서 통상 행해지고 있는 수법에 의해, 약학적으로 허용가능한 부형제, 첨가제와 함께 제제화할 수 있다. 또한, 제제화에 있어서는, 본 발명의 항알레르기 조성물이 그의 기능을 생체내에서 적절한 시간에 효과적으로 발휘할 수 있도록, 즉 용출 개시 시간을 제어하거나, 쓴 맛 차폐제로서의 기능을 부가하거나, 산소 또는 습도에 대한 안정성을 높이거나 하는 형태, 예를 들어 일본 특허 제3349677호에 기재된 효모 세포벽을 주성분으로 한 코팅제로 코팅된 코팅 처리물이나 정법(定法)에 따라서 연캡슐이나 경캡슐로 캡슐화함으로써 얻어진 캡슐제로서 의약 제제나 건강 식품 등의 분야에서 공통적으로 바람직하게 사용할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 첨가제로는 담체, 결합제, 향료, 완충제, 증점제, 착색제, 안정화제, 유화제, 분산제, 현탁화제, 방부제 등을 들 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체의 예로는 탄산마그네슘, 스테아르산마그네슘, 활석, 당, 락토스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트라간트, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 저융점 왁스, 카카오 버터 등이 있다.
제제는 예를 들어 다음과 같이 하여 제조할 수 있다. 즉, 경구제는, 유효 성분으로서, 예를 들어 부형제 (예를 들어, 젖당, 백당, 전분, 만니톨), 붕괴제 (예를 들어, 탄산칼슘, 카르복시메틸셀룰로스칼슘), 결합제 (예를 들어, α화 전분, 아라비아 고무, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필셀룰로스) 또는 활택제 (예를 들어, 활석, 스테아르산마그네슘, 폴리에틸렌글리콜 6000)을 첨가하여 압축 성형하고, 계속해서 필요에 따라서 맛의 차폐, 장용성 또는 지속성의 목적을 위해 당업계에 공지된 방법으로 코팅함으로써 제조할 수 있다. 코팅제의 예로는 에틸셀룰로스, 히드록시메틸셀룰로스, 폴리옥시에틸렌글리콜, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 히드록시프로필메틸셀룰로스 프탈레이트 및 오이드라깃트 (롬사 제조, 독일, 메타아크릴산ㆍ아크릴산 공중합물) 등을 사용할 수 있다.
주사제는, 유효 성분을 분산제 (예를 들어, 트윈(Tween) 80 (아틀라스 파우더사 제조, 미국), HCO 60 (닛코 케미칼즈 제조), 폴리에틸렌글리콜, 카르복시메틸셀룰로스, 알긴산나트륨 등), 보존제 (예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤질 알콜, 클로로부탄올, 페놀), 등장화제 (예를 들어, 염화나트륨, 글리세린, 소르비톨, 포도당, 전화당) 등과 함께 수성 용제 (예를 들어, 증류수, 생리적 식염수, 링겔액 등) 또는 유성 용제 (예를 들어, 올리브유, 들깨유, 면실유, 옥수수유 등의 식물성유, 프로필렌글리콜) 등에 용해, 현탁 또는 유화시켜서 제조할 수 있다. 이때, 필요하다면 용해 보조제 (예를 들어, 살리실산나트륨, 아세트산나트륨), 안정화제 (예를 들어, 인간 혈청 알부민), 무통화제 (예를 들어, 염화벤잘코늄, 염산프로카인) 등의 첨가물을 첨가할 수 있다.
외용제는 유효 성분을 고상, 반고상 또는 액상의 조성물로 함으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 고상의 조성물은, 유효 성분을 그대로 사용하거나 또는 부형제 (예를 들어, 락토스, 만니톨, 전분, 미세결정질 셀룰로스, 백당), 증점제 (예를 들어, 천연 검류, 셀룰로스 유도체, 아크릴산 중합체) 등을 첨가, 혼합하여 분말상으로 함으로써 제조할 수 있다. 상기 액상의 조성물은 주사제의 경우와 거의 동일하게 하여 제조할 수 있다. 반고상의 조성물은 수성 또는 유성의 겔제이거나 또는 연골상의 것일 수 있다. 또한, 이들 조성물은 모두 pH 조절제 (예를 들어, 탄산, 인산, 시트르산, 염산, 수산화나트륨), 방부제 (예를 들어, 파라옥시벤조산 에스테르류, 클로로부탄올, 염화벤잘코늄) 등을 포함할 수도 있다. 좌제는 유효 성분을 유성 또는 수성의 고상, 반고상 또는 액상의 조성물로 함으로써 제조할 수 있다. 상기 조성물에 사용되는 유성 기제로는 고급 지방산의 글리세리드〔예를 들어, 카카오 지방, 위텝졸류 (다이나마이트 노벨사 제조)〕, 중급 지방산〔예를 들어, 미글리올류 (다이나마이트 노벨사 제조)〕 또는 식물성유 (예를 들어, 들깨유, 대두유, 면실유)를 들 수 있다. 수성 기제로는 폴리에틸렌글리콜류, 프로필렌글리콜을 들 수 있다. 또한, 수성 겔 기제로는 천연 검류, 셀룰로스 유도체, 비닐 중합체, 아크릴산 중합체를 들 수 있다.
( 음식품 배합에 의한 이용)
본 발명의 항알레르기용 조성물은, 음식품에 배합하면 항알레르기 기능이 있는 음식품으로서 이용될 수 있다. 본 발명의 항알레르기용 조성물을 음식품에 배합하여 이용하기 위해서는, 그 유효 성분의 유효량을 음식품의 제조 원료 단계 또는 제조된 제품 단계 등에서 첨가, 배합한다. 여기서, 「유효 성분의 유효량」이란, 개개의 음식품에 있어서 통상 먹는 양을 섭취한 경우에 있어서, 유효 성분이 하기와 같은 범위로 섭취되는 함유량을 말한다.
즉, 음식품에 있어서 본 발명에 따른 유효 성분의 유효량의 투여량 또는 섭취량은 수용자, 수용자의 연령 및 체중, 증상, 투여 시간, 제형, 투여 방법, 약제의 조합 등에 따라 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 유효 성분을 의약으로서 경구 투여하는 경우에는 성인 1 인당 0.1 내지 100 mg/kg 체중 (바람직하게는 1 내지 10 mg/kg 체중)의 범위가 되도록 하고, 비경구 투여하는 경우에는 0.01 내지 10 mg/kg 체중 (바람직하게는 0.1 내지 1 mg/kg 체중)의 범위가 되도록 하루에 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 본 발명에 따른 유효 성분과 조합하여 이용되는 다른 작용 기작을 갖는 약제 역시 각각이 임상적으로 이용되는 용량을 기준으로 하여 적절하게 결정할 수 있다.
음식품에 있어서 본 발명에 따른 유효 성분의 유효량의 투여량 또는 섭취량을 유산균의 균수로 표시하면, 1일 당 섭취량이 5×109개 이상인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 1일 당 1×1010개 이상, 더욱 바람직하게는 5×1010개 이상을 섭취하는 것이 바람직하다. 따라서, 음식품의 통상적 1일 섭취량에 따라 각각의 식품에 함유시키는 유산균의 균수가 결정된다. 예를 들어, 식품 (요구르트)로서 섭취하는 경우에는 성인 1인의 1일 섭취량이 50 내지 500 g의 범위, 바람직하게는 60 내지 200 g의 범위가 되도록 본 발명에 따른 유효 성분을 식품에 배합할 수 있다.
본 발명에서는 본 발명의 항알레르기용 조성물의 유효 성분을 그대로 사용하거나 또는 상기와 같은 제제의 형태로 사용하여 음식품에 배합할 수 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 음식품은 본 발명에 따른 유효 성분을 적절한 기재와 배합하고, 이것을 그대로 음식품으로서 제조한 것, 또는 각종 단백질, 당류, 지방, 미량 원소, 비타민류 등을 추가로 배합한 것, 액상, 반액체상 또는 고체상으로 한 것, 또한 일반적인 음식품에 첨가, 배합한 것 등과 같은 다양한 이용 형태를 채용할 수 있다.
종래부터 유산균을 이용한 음식품의 분야에서 유산균을 활용하는 양태 분류는 유제품류, 육류, 빵류, 음료 및 야채류로 크게 구별된다. 유산균을 이용한 이들 음식품의 제조시에, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 상기 음식품에 사용되는 유산균으로서 이용하거나 그의 일부로서 이용하거나 또는 제조된 상기 음식품의 첨가물로서 이용하면, 상기 음식품에 항알레르기 기능을 부여할 수 있다.
본 발명의 다른 실시양태로서, 유효 성분인 유산균을 음식품에 첨가하는 경우에는 유산균 자체를 발효시킬 필요가 없으며, 또한 음식품 자체의 향미 유지를 도모하는 경우에는 유산균을 예를 들어 가열 살균과 같은 처리에 의해 살균하여 이용하는 것이 특히 바람직하다. 또한, 본 발명의 항알레르기 기능이 높은 음식품은, 다른 미생물이나 이물의 혼입을 방지하여 내용물의 품질을 유지하기 위해서 밀봉 용기에 채운 음식품의 형태로 제조되는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 식품으로는 항알레르기 기능을 갖는 건강 식품, 기능성 식품, 특정 보건용 식품 또는 병자용 식품으로서 제조할 수 있다. 또한, 특히 식품의 형태로만 한정되는 것이 아니라 항알레르기 기능을 갖는 음료의 형태일 수도 있다. 본 발명에 따른 유효 성분은 항알레르기 작용을 갖기 때문에, 일상적으로 섭취하는 식품이나 서플리먼트(suppliment)로서 섭취하는 건강 식품이나 기능성 식품 등에 본 발명에 따른 유효 성분을 배합함으로써, 계속적으로 섭취 가능한, 알레르기 발증의 예방 및 치료라는 기능을 함께 갖는 식품으로서 제공할 수 있다. 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을, 예를 들어 차류 또는 드링크제 또는 타블렛과 같이 알레르기를 야기하는 성분을 포함하지 않는 음식품 중에 배합하여 이용함으로써, 알레르기 문제로부터 완전히 차단된 항알레르기 기능이 있는 음식품을 제공할 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서는, 유산균을 이용하여 제조되거나 또는 유산균을 함유하는 음료 또는 식품의 유산균 일부 또는 전부를 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균으로 대체함으로써, 항알레르기 기능이 높은 음료 또는 식품으로 만들 수 있다.
( 음식품 제제 형태로의 이용)
본 발명에 있어서, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 배합한 건강 식품 및 기능성 식품은 여러가지로 예시할 수 있지만, 이들 건강 식품 및 기능성 식품의 제조시에 통상적으로 이용되는 식품 소재, 식품 첨가물에 더하여 부형제, 증량제, 결합제, 붕괴제, 윤활제, 분산제, 보존제, 습윤화제, 용해 보조제, 방부제, 안정화제, 캡슐 기제 등의 보조제를 이용한 음식품 제제 형태로 이용할 수 있다. 상기 보조제의 구체적인 예로서, 젖당, 과당, 포도당, 전분, 젤라틴, 탄산마그네슘, 합성 규산마그네슘, 활석, 스테아르산마그네슘, 탄산칼슘, 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스 또는 그의 염, 아라비아 검, 폴리에틸렌글리콜, 시럽, 바셀린, 글리세린, 에탄올, 프로필렌글리콜, 시트르산, 염화나트륨, 아황산 소다, 인산나트륨, 풀룰란, 카라기난, 덱스트린, 환원 파라티노스, 소르비톨, 크실리톨, 스테비아, 합성 감미료, 시트르산, 아스코르브산, 산미료, 중조, 수크로스 에스테르, 식물 경화 유지, 염화칼륨, 홍화유, 밀랍, 대두 레시틴, 향료 등을 배합할 수 있다. 이러한 건강 식품, 기능성 식품의 제조에 대해서는 의약품 제제의 참고서, 예를 들어 「일본 약방 해설서 (제제 총칙)」 (히로가와 쇼뗀) 등을 참고로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 특히 건강 식품 및 기능성 식품에 적합한 형상으로는 타블렛상, 캡슐상, 과립상, 분말상, 현탁액상, 유화액상의 것을 예시할 수 있고, 특히 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 배합한 건강 식품 및 기능성 식품은, 본 발명이 해결하고자 하는 과제의 측면에서 특정 알레르기와 관련이 있는 원재료는 포함하지 않는 원재료를 조합한 것이 바람직하다.
타블렛상 건강 식품 및 기능성 식품의 제조법을 구체적으로 예시하면, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 배합한 처방물을 일정한 형상으로 압축하여 제조하거나, 또는 물 또는 알콜과 같은 용매로 습윤시킨 반죽물을 일정한 형상으로 만들거나 또는 일정한 형틀에 유입시켜 성형하여 제조하는 방법을 들 수 있다. 캡슐상 건강 식품 및 기능성 식품의 제조법을 구체적으로 예시하면, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 배합한 처방물을 액상, 현탁액상, 풀상, 분말상 또는 과립상 등의 형태로 캡슐에 충전하거나, 또는 캡슐 기제로 피포(被包) 성형 제조하여 경캡슐제 및 연캡슐제 등을 제조하는 방법을 들 수 있다.
(식품에의 배합)
또한, 본 발명에 있어서는, 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 식품에 배합하여 항알레르기 기능을 갖는 식품을 제조할 수 있다. 이러한 음식품의 구체적인 예로는 푸딩, 쿠키, 크래커, 포테이토 칩, 비스킷, 빵, 케이크, 초컬릿, 도너츠, 젤리 등의 양과자, 전병, 양갱, 대복, 모란병, 기타 만두, 카스테라 등의 일본식 과자, 빙과 (엿 등), 츄잉 검 등의 빵ㆍ과자류나, 우동, 소바, 기시멘 등의 국수류나, 어묵, 햄, 어육 소시지 등의 어육 가공 식품이나, 햄, 소시지, 햄버거, 콘 비프 등의 축육 제품이나, 소금, 후추, 된장, 간장, 소스, 드레싱, 마요네즈, 케찹, 감미료, 신미료 등의 조미류나, 아카시야끼, 다꼬야끼, 몬쟈야끼, 오코노미야끼, 야끼소바, 야끼우동 등의 철판 볶음 식품이나, 치즈, 경질 유형의 요구르트 등의 유제품이나, 낫또, 지진 두부, 두부, 곤약, 경단, 절임, 조림, 교자, 슈마이, 고로케, 샌드위치, 피자, 햄버거, 샐러드 등의 각종 부식이나, 각종 분말 (비프, 포크, 치킨 등의 축산물, 새우, 가리비, 바지라기, 다시마 등의 수산물, 야채ㆍ과실류, 식물, 효모, 해초류 등)이나, 유지류ㆍ향료류 (바닐라, 감귤류, 가다랭이 등)를 분말 고형화한 것이나, 분말 음식품 (인스턴트 커피, 인스턴트 홍차, 인스턴트 우유, 인스턴트 스프, 된장국 등) 등의 각종 식품을 들 수 있지만, 이들로 특별히 제한되지 않는다.
특히, 본 발명에 따른 유효 성분을 유제품에 함유시키는 경우에는, 본 발명에 따른 유효 성분을 생균으로서 우유 원료에 첨가하여 균 증식/발효를 행하여, 요구르트 등의 발효 유산균 음식품으로 만들 수도 있다.
(음료에의 배합)
항알레르기 활성이 높은 본 발명의 조성물은 특히 음료의 형태로 이용하여 매일 계속 섭취하는 것이 가능하면서 상기 계속 섭취하는 것이 가능한 양에서 효능이 발휘되는 항알레르기 기능이 있는 음료로서 제공할 수 있다. 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 음료에 배합하는 경우에, 음료 당업계에 공지의 향미를 유지하면서 안정한 물성의 음료를 제조하기 위해서는 유산균을 가열 살균한 형태로 이용하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 항알레르기 활성이 높은 유산균을 음료에 배합하는 경우에 있어서의 유산균 배합량은 적절하게 결정할 수 있지만, 통상적으로는 음료로서 계속 섭취할 수 있는 양에서 유산균의 항알레르기 활성이 충분히 발휘되는 배합량이 채용된다. 음식품에 있어서 본 발명에 따른 유효 성분의 유효량의 투여량 또는 섭취량을 유산균의 균수로 표시하면, 1일 당 섭취량이 5×109개 이상인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 1일 당 1×1010개 이상, 더욱 바람직하게는 5×1010개 이상을 섭취하는 것이 바람직하다. 따라서, 통상 1일 당 섭취되는 음료의 양에 따라서, 상기 지표에 의해 각각의 음료당 함유시키는 유산균의 균수가 결정된다. 예를 들면, 1일 당 100 g의 음료가 섭취된다고 한다면, 음료 100 g 당 109개 이상의 균수를 첨가하는 것이 바람직하다. 한편, 유산균의 첨가에 의해 음료의 향미나 외관을 손상시키지 않는 범위를 고려한다면 1011개 이하인 것이 바람직하다. 또한, 5×1010개 이하인 것이 더욱 바람직하다. 따라서, 항알레르기 기능을 가지면서 안정성이 있고, 기호성, 보존성이 높은 음료의 유산균 농도는 음료 100 g 당 109 내지 1011개 범위의 것이 특히 바람직하다. 또한, 유산균의 균체수와 건조 균체 중량의 관계에 대한 예로서 락토바실러스 파라카세이 KW3110주의 경우에는 균체수 1012개가 건조 균체 중량 1 g에 상당한다.
본 발명에 있어서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균을 배합하는 음료로는 여러가지를 들 수 있지만, 이들 음료의 제조에 있어서는, 통상의 음료의 처방 설계에 이용되는 당류, 향료, 과즙, 식품 첨가물 등을 모두 사용할 수 있다. 음료의 제조에 대해서는 기존의 참고서, 예를 들어 「개정 신판 소프트 드링크스」 (가부시끼가이샤 고린) 등을 참고로 할 수 있다.
본 발명에 있어서 특히 배합에 적합한 음료로는 항알레르기 작용 및 제품의 보존, 안정화의 관점에서 유성분을 포함하지 않는 것, 즉 예를 들어 과즙 함유 청량 음료 또는 차 음료와 같이 유성분이 비배합된 형태의 음료가 특히 바람직하다.
배합되는 음료를 구체적으로 예시하면, 알콜 음료 (위스키, 버본, 스피릿츠, 리큐르, 와인, 과실주, 정종, 중국주, 소주, 맥주, 알콜 도수 1％ 이하의 무알콜 맥주, 발포주, 하이주 등)이나 비알콜 음료 (드링크 유형의 요구르트, 사과, 귤, 포도, 바나나, 배, 매실, 수박 등의 과즙, 토마토, 당근, 샐러리, 오이 등의 야채즙, 청량 음료, 우유, 두유, 커피, 코코아, 홍차, 녹차, 보리차, 현미차, 전차, 옥로차, 엽차, 우롱차, 우콘차, 푸알차, 루이보스티차, 로즈차, 국화차, 민트차, 자스민차 등의 각종 허브차, 스포츠 음료, 미네랄 워터, 영양 드링크 등)의 각종 음료를 들 수 있다.
음료의 카테고리에 따라 예시하면, 녹차, 우롱차, 홍차, 보리차, 블렌드차등의 차계 음료와, 커피, 과즙 함유 음료, 야채 음료, 스포츠 음료, 영양 드링크를 예시할 수 있다.
본 발명에 있어서 항알레르기 기능이 있는 음료를 제품화하는 데 있어서는, 식품 위생법에 정해진 방법에 따라서 적절하게 음료의 살균을 행할 수 있다. 상기 살균 방법으로서 음료의 pH에 따라서 파스퇴르 살균, 핫 팩 살균, UHT 살균, 레토르트 살균 등을 선택하여 사용할 수 있다.
또한, 제품 형태로는 통상적인 음료 제품 형태로 사용되고 있는 밀봉 용기 투입 음료의 형태가 특히 바람직하고, 상기 밀봉 용기로는 캔, 병, PET, 종이 용기 중 임의의 형태일 수 있다. 또한, 용량에 대해서도 특별히 제한은 없지만, 일반적으로는 소비자의 일상적인 음료 섭취량, 배합되는 유산균의 균수 및 1일 필요 균수를 고려하여 적절하게 결정할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이들에 의해서 제한되는 것은 아니다.
실시예 1
(본 발명의 실시예에서 이용한 유산균)
본 발명의 실시예에서 이용한 유산균 및 그의 입수원을 도 1 (번호 1) 및 도 2 (번호 2)에 나타내었다. 본 발명에 있어서는, 모든 균주를 KW로 시작되는 번호로 식별하고 있지만, 이들 시험주는 독자적으로 단리한 것, 시판 유제품으로 사용되고 있는 것, 공적 기관 등으로부터 입수한 것 등이 있기 때문에 편의상 통일된 식별명을 부여한 것이고, 각각의 KW주와 입수 유래와의 관계는 도 1 (번호 1) 및 도 2 (번호 2)와 같다. 또한, 상기 도 1의 「입수원」에 있어서, 「JCM」은 이화학 연구소 미생물 계통 보존 시설을 나타내고, 「IFO」는 전 재단 법인 발효 연구소 (현재는 독립 행정 법인 제품 평가 기술 기반 기구 생물 자원 센터(NBRC))를 나타낸다.
실시예 2
(유산균군의 시험관내 항알레르기 활성 평가)
1. 시료
유산균의 각 균주를 M.R.S. (de Man, Rogosa, Sharpe) 배지 (옥소이드(OXOID))에서 48 시간 동안 배양한 것을 멸균수로 3회 세정하고, 멸균수에 현탁 후 100℃, 30 분 동안 처리하여 살균하였다. 이것을 동결건조하여 PBS에 현탁시켰다. 사용한 유산균에 대하여는 도 1 (번호 1) 및 도 2 (번호 2)를 참조한다.
2. 실험 동물, 사육
7 내지 10주령의 BALB/c 마우스 (찰스리버)에 제0일과 제6일에 난백 알부민 (OVA) 1 mg을 아쥬반트인 Alum 2 mg과 함께 복강내 주사하였다. 제13일에 해부하고, 비장을 단리ㆍ림프구를 제조하였다. 실험은 n = 6으로 행하였다.
3. 비장세포 IL-4, IL-12의 측정
IL-4, IL-12의 측정은 OptEIA ELISA 세트 (벡톤ㆍ디킨슨)를 이용하여 측정하였다.
4. 실험 조건
「2. 실험 동물, 사육」의 방법으로 제조한 비장 림프구를 RPMI1640 (시그마) + 10％ FCS (로슈) + 1 mg OVA 배지로 2.5×106개 세포/㎖가 되도록 현탁하였다. 또한, 시험 유산균을 0.1 또는 1 ㎍/㎖로 첨가하였다. 1 주 후에 배양 상청액을 회수하여, Th1 사이토카인으로서의 IL-12 및 Th2 사이토카인으로서의 IL-4를 각각 측정하였다.
5. 실험 결과
각 유산균에 의해 Th1 사이토카인인 IL-12가 생성된 양을 도 3 및 표 2에 나타내었다. 유산균의 첨가량은 1 ㎍/㎖였다. 균주의 차이에 따라 다양한 생산량 차이가 나타났다. 약 100가지 주 중에서 가장 강력한 Th1 유도능을 나타낸 것은 락토바실러스 파라카세이 KW3110주였다. 데이타는 모두 KW3110주에 의한 IL-12 생산량을 100％라 하였을 때의 비율로 나타내었다. 편의적으로 KW3110주에 대하여 75％ 이상의 생산량을 나타낸 주를 A 평가, 50％ 이상 내지 75％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 B 평가, 25％ 이상 내지 50％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 C 평가, 10％ 이상 내지 25％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 D 평가, 10％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 E 평가로 하였다.
알레르기의 원인인 Th2 사이토카인, IL-4의 각 유산균에 의한 생성량을 도 4 및 표 2에 나타내었다. 유산균의 첨가량은 0.1 ㎍/㎖였다. 균주의 차이에 따라 그에 의한 억제 효과가 다양한 값으로 나타났다. 약 100가지 주 중에서 가장 강력한 Th2 억제능을 나타낸 것은 락토바실러스 파라카세이 KW3110주였다. 데이타는 모두 대조군 (유산균 무첨가)의 IL-4 생산량을 100％라 하였을 때의 비율로 나타내었다. 편의적으로 대조군에 대하여 30％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 A 평가, 30％ 이상 내지 50％ 생산량을 나타낸 주를 B 평가, 50％ 이상 내지 70％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 C 평가, 70％ 이상 내지 100％ 미만의 생산량을 나타낸 주를 D 평가, 100％ 이상의 생산량을 나타낸 주를 E 평가로 하였다. Th1, Th2 각각의 파 라미터에 대하여 A 내지 E 평가를 통합한 「항알레르기 유산균 평가 결과」를 표 1 및 표 2에 나타내었다.
Figure 112005050880437-pct00001
Figure 112005050880437-pct00002
Th1 파라미터가 KW3110주의 60％ 이상이고 Th2 파라미터가 대조군의 50％ 이하인 주를 항알레르기 유산균이라고 할 때, 이에 해당하는 주는 KW3110주, T주, NRIC1917주, JCM8132, JCM1149주의 5가지 주였다. 또한, 강력한 KW3110주의 75％ 이상의 Th1 유도능을 나타낸 주를 면역 부활 유산균이라 할 때, 이에 해당하는 주는 KW3110주, KW4510주, JCM1149주, T주, NRIC1917주, JCM1059주의 6가지 주였다. 또한, 해당 유산균, KW3110주와 동등한 면역 부활 활성을 갖는 유산균, 또는 KW4510주, JCM1149주, NRIC1917주, JCM1059주와 동등하거나 그 이상의 면역 부활 활성을 갖는 유산균을 배합한 면역 부활용 조성물 (의약품, 음식품)을 본 명세서에 기재된 방법으로 제조할 수 있다. 또한, 항알레르기 유산균이라고 알려진 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus) L-92주는 IL-12의 생산량이 KW3110주의 11.7％ 정도였고, IL-4의 억제 활성은 KW3110주가 대조군 (무첨가)의 26.4％인 데 반하여 L-92주는 74.6％였으며, 모든 파라미터가 KW3110주와 같은 강력한 항알레르기 유산균에 비해 압도적으로 뒤떨어지는 것으로 시사되었다 (도 5). 본 발명의 유산균주 및 대조가 되는 유산균주의 항알레르기 활성에 대한 측정 결과를 표 3에 나타내었다.
균주 번호 속 기탁 기관 Th1 Th2
KW3110 락토바실러스 파라카세이 L14 유업 기술 협회 100 26.4
KW4110 락토바실러스 플란타룸 JCM1149 JCM 93.9 36.7
KW3210 스트렙토콕쿠스 살리바리우스 아종 써모필루스 T 고이와이 77.7 49.9
KW3925 락토바실러스 파라카세이 NRIC1917 도꾜 노다이 77.1 45.2
KW3926 락토바실러스 파라카세이 JCM8132 JCM 70.1 30.2
KW4310 락토바실러스 메센테로이데스 JCM6124 JCM 57.4 43.4
KW3119 락토바실러스 카세이 Y A1 유끼지루시 56 27.5
KW3927 락토바실러스 파라카세이 JCM1053 JCM 53.7 45.3
KW4010 락토바실러스 가쎄리 JCM1131 JCM 53.2 36.7
실시예 3
(파생주의 선별)
본 실시예에서는, 본 발명에서 취득한 유산균주 KW3110주로부터 파생된 항알레르기 활성을 갖는 균주를 선별한 예이다. KW3110주를 MRS 배지 중 37℃에서 OD600이 0.8 내지 1.0에 도달할 때까지 정치 배양하였다.
배양액을 신선한 MRS 배지로 OD600 = 0.5가 되도록 희석한 후에 상기 균체 현탁액을 염산으로 pH 3.0으로 만든 PBS (다이닛본 세이야꾸 타블렛을 지정 농도로 용해시킴)에 10％ 분량으로 현탁시키고, 37℃에서 3 시간 동안 배양하였다. 산 처리한 균체 현탁액을 PBS로 희석하고, MRS 플레이트 배지에 접종하여, 37℃에서 콜로니를 형성시켰다. 형성된 콜로니 중에 색조가 엷은 콜로니가 확인되었다. 이것을 선별하여 MRS 배지에서 48 시간 동안 배양하였다. 이 주를 번호 90이라 명명하였다. 실시예 2의 방법에 따라 번호 90주의 항알레르기 활성을 측정하였다. 번호 90주는 야생주와 비교할 때 동일한 정도의 IL-12 생산능을 나타내었다 (도 6). 또한, 도면 중에서 「비활성 (％)」은 KW3110주의 IL-12 생산능을 100이라 하였을 때의 파생주 (번호 90)의 IL-12 생산능으로 나타내었다. 상기 번호 90주는 독립 행정 법인 산업 기술 종합 연구소 특허 생물 기탁 센터에 FERM BP-08635로서 기탁되었다.
실시예 4
(시험관내 항알레르기 활성이 높은 주인 KW3110주의 생체내 평가)
1. 투여 시료
락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 MRS 배지에서 48 시간 동안 배양한 것을 멸균수로 3회 세정하고, 멸균수로 현탁한 후에 100℃에서 30 분 동안 처리하여 살균하였다. 이것을 동결건조시켜, 표준 분말 사료 AIN93 (미국 국립 영양 연구소에 의한 표준 조성)에 마우스 한 마리가 1일 1 mg 섭취하도록 반죽한 혼이(混餌)를 제조하였다.
2. 실험 동물, 사육
8주령의 BALB/c를 이용하였다. 1군 당 6 마리의 BALB/c 마우스를 CE-2 (닛본 구레아) 및 물을 마음껏 섭취시켜 1 주 동안 순화 사육을 행하였다. 제0일의 항원 감작 후에는, 대조군은 정제 원료를 사용하여 제조한 AIN93 분말 사료로 사육하고, KW3110군은 AIN93에 KW3110균이 반죽된 혼이로 사육하는 것으로 전환하였다.
3. 혈중 IgE, 비장세포 IL-4, IL-12의 측정
IgE, IL-4, IL-12의 측정은 OptEIA ELISA 세트 (벡톤ㆍ디킨슨)를 이용하여 측정하였다.
4. 실험 조건
실험군으로서는 대조군 (AIN93) 및 KW3110주를 AIN93에 1 mg/마우스/일이 되도록 첨가한 군 (KW3110군)을 설정하였다. 대조군과 KW3110군 모두에게 분말 사료 4 g을 물로 반죽한 것을 실험 종료시 (제98일)까지 매일 제공하였다. 음료수는 마음껏 섭취하게 하였다. 난백 알부민 (OVA)에 의한 알레르기 감작은 100 ㎍ OVA를 아쥬반트인 Alum 2 mg과 함께 제0일, 제14일, 제42일, 제70일, 제94일에 합계 5회 복강 주사함으로써 행하였다. 그 사이에, 1 주 마다 안저정맥으로부터 채혈을 행하였다. 실험 종료시에는 전혈 채취 및 비장의 적출을 행하여, 림프구를 제조하였다 (도 7). 비장 림프구는 RPMI1640 (시그마) + 10％ FCS (로슈) + 100 ㎍ OVA 배지에서 37℃, 5％ CO2의 조건으로 1 주 동안 배양하고 배양 상청액을 회수하였다. 혈액 샘플에 대해서는 IgE량을 측정하고, 비장 림프구 배양 상청액 샘플에 대해서는 IL-4, IL-12를 측정하였다.
5. 실험 결과
98일 동안의 실험 기간 동안의 혈중 IgE의 변동을 도 8에 나타내었다. 제48일 때의 혈중 IgE에서 KW3110군은 대조군에 대하여 p<0.05로 유의하게 낮은 혈중 IgE치를 나타내었다. 제48일 및 해부시 제98일에서의 혈중 IgE량을 돗트 블롯으로 도 9에 나타내었다. 제98일에 있어서도 KW3110군은 대조군에 대하여 유의하게 낮은 혈중 IgE를 나타내었다. 대조군, KW3110군의 제98일 해부시의 비장세포 배양에 있어서의 IL-12 생산량을 도 10에 나타내었고, IL-4 생산량을 도 11에 나타내었다. KW3110군은 대조군에 대하여 유의하게 높은 IL-12 생산을 나타내었다. IL-4에 대하여는 유의차가 생기지 않았지만, 대조군에 비하여 낮은 경향을 나타내었다. 이와 같은 결과는 KW3110주 섭취에 의해 체내의 면역 균형이 Th1로 이동하여, 알레르기 상태가 개선된 것을 시사하는 것이다. 또한, 도 12에 나타낸 바와 같이 제30일에 대조군에서는 예외없이 코 주변에서 탈모가 나타났지만, KW3110군에서는 예외없이 탈모가 일어나지 않았다. 이때, 대조군에서는 빈번하게 코를 긁는 행동이 관찰되었다. KW3110군에서 대조군과 동일한 코 주변의 탈모가 관찰되고 코를 긁는 행동이 관찰된 것은 제60일 전후였다. 코를 긁는 행동에 대한 관찰 결과는, KW3110군이 알레르기 증상을 실제로 억제한 것을 시사하는 것이다.
실시예 5
(공지된 항알레르기 유산균인 KW4610주 (락토바실러스 람노수스 LGG주)와의 비교)
1. 투여 시료
KW3110주, KW4610주를 MRS 배지에서 48 시간 동안 배양한 것을 멸균수로 3회 세정하고, 멸균수에 현탁한 후에 100℃, 30 분 동안 처리하여 살균하였다. 이것을 동결건조시켜, 표준 분말 사료 AIN93 (미국 국립 영양 연구소에 의한 표준 조성)에 마우스 한 마리가 1일 1 내지 10 mg 섭취하도록 반죽한 혼이를 제조하였다.
2. 실험 동물, 사육
8주령의 BALB/c를 이용하였다. 1군 당 6 마리의 BALB/c 마우스를 CE-2 (닛본 구레아) 및 물을 마음껏 섭취시켜 1 주 동안 순화 사육을 행하였다. 항원 감작을 실시하기 21일 전부터 KW3110주, KW4610주에게 혼이 또는 AIN93 분말 사료를 섭취시켰다.
3. 혈중 IgE의 측정
IgE의 측정은 OptEIA ELISA 세트 (벡톤ㆍ디킨슨)를 이용하여 측정하였다.
4. 실험 조건
실험군으로서는 대조군 (AIN93), KW3110주 또는 KW4610주를 AIN93에 1 또는 10 mg/마우스/일이 되도록 첨가한 군 (KW3110군, KW4610군)을 설정하였다. 대조군, KW3110군, KW4610군 모두에게 분말 사료 4 g을 물로 반죽한 것을 실험 종료시 (제133일)까지 매일 제공하였다. 음료수는 마음껏 섭취하게 하였다. 난백 알부민 (OVA)에 의한 알레르기 감작은 100 ㎍ OVA를 아쥬반트인 Alum 2 mg과 함께 제0일, 제14일, 제42일, 제70일, 제98일, 제126일에 합계 6회 복강 주사함으로써 행하였다. 그 사이에 1 주 마다 안저정맥으로부터 채혈을 행하였다 (도 13). 혈액 샘플에 대해서는 IgE량을 측정하였다.
5. 실험 결과
시험 기간 중의 혈중 IgE량의 변동을 도 14에 나타내었고, OVA 5차, 6차 투여 후에 개체마다의 혈중 IgE량을 도트로 도 15에 나타내었다. OVA의 항원 감작으로 인하여 혈중 IgE 수준이 모든 군에서 상승하는 것으로 확인되었지만, KW3110군에서는 OVA 5차 투여 후에 대조군에 대하여 유의한 혈중 IgE량 저하가 관찰되었다. 한편, KW4610군에서는 대조군에 대하여 유의한 혈중 IgE량 저하는 관찰되지 않았는데, 이것은 KW3110주의 항알레르기 활성이 더욱 강력함을 시사하는 것이다. 또한, 1 mg 섭취군보다 10 mg 섭취군에서 더욱 강력한 IgE 저감 효과가 있음이 시사되었다.
실시예 6
(유산균의 산 내성 및 담즙산 내성)
유산균이 장관에 살아 있는 상태로 도달하여 프로바이오틱스 효과를 발휘하기 위해서는 위산, 담즙산이라는 소화액에 대하여 내성일 필요가 있다고 알려져 있다. KW3110주가 이러한 조건을 만족시키는 주인지의 여부를 검증하기 위해서, 시험관내 산 내성 및 담즙산 내성을 측정하였다.
1. 방법
산 내성은, 유산균을 대수 증식 후기까지 배양한 후에 PBS (pH 6.5)로 OD600 = 0.5가 되도록 조정한 균체를 염산으로 pH 3.0이 되도록 조정한 MRS 배지에 1/10량으로 첨가하고 이것을 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 개시 후 1 시간, 2 시간, 3 시간에 샘플을 취하여, MRS 한천 배지에서의 생균율을 측정하였다.
2. 실험 결과
담즙산 내성은, MRS 액체 배지에 담즙산 (옥소이드사의 바일 쏠트(Bile Salts))을 최종 농도 2％가 되도록 첨가한 것에 KW3110주 전배양액을 1％ 균으로 이식하고 오리엔탈 인스트루먼츠사의 바이오플롯터(BIOPLOTTER)로 OD630을 측정함으로써 생육 속도를 측정하였다.
모든 실험에서는 대상물로서 락토바실러스 델브뤽키이(Lactobacillus delbrueckii)의 기준주인 KW3317주 (JCM1012주)를 이용하였다. 그 결과, 산 내성 시험 (도 16)에서는 무려 3 시간 동안 약 50％의 KW3110주가 생존하는 것이 시사되었다. 또한, 담즙산 내성 시험 (도 17)에서는 KW3110주가 2％의 담즙산을 포함하는 배지에서도 충분히 생육되는 것으로 나타나서 담즙산에 내성인 것으로 나타났다. 한편, KW3317주는 산, 담즙산 중 그 어느 것에 대해서도 내성도 낮은 것으로 시사되었다.
실시예 7
(유산균의 장관 접착성)
장관에 살아 있는 상태로 도달한 유산균이 프로바이오틱스 효과를 발휘하기 위해서는 상기 균이 장관에 머무를 필요가 있다. 유산균이 장관에 머물러서 그의 효과를 충분히 발휘한다는 지표로서는, 인간 장관 유래 주화 세포 Caco-2에 대한 시험관내 접착성 시험이 자주 이용된다. 따라서, KW3110주의 Caco-2 세포 접착능을 측정하였다.
1. 방법
Caco-2 세포의 배양은, 코코니어(Coconnier) 등의 방법 (문헌 [어플라이드ㆍ앤드ㆍ엔바이로멘탈ㆍ마이크로바이올로지, 1992년, 제58권, 2034페이지])에 준하여 행하였다. 1.2×104개/cm2의 Caco-2 세포를 슬라이드 글라스상에서 약 1 내지 2주 동안 전면생장(post confluent)될 때까지 배양하였다. KW3110주는 MRS 배지에서 37℃로 이틀밤 배양한 것을 집균하여 PBS로 1회 세정한 후에 PBS로 OD600 = 1.0이 되도록 제조한 것을 이용하였다. 제조한 KW3110액 2 ㎖에 Caco-2 세포를 배양한 슬라이드 글라스를 침지시키고 37℃에서 10％ 탄산 가스의 존재하에 1 시간 동안 접촉시킨 후에 슬라이드 글라스를 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지로 3회 세정하였다. 이어서, 슬라이드 글라스를 메탄올로 고정시킨 후에 그람 염색법 (문헌 [메디칼 테크놀러지, 1995, 제23권, 205페이지])으로 KW3110주를 염색하였다. 이것을 검경하여 Caco-2 세포에 부착된 유산균의 수를 세고, 4 시야 당의 평균치를 접착수로서 구하였다. 또한, 기준주인 KW3913주 (JCM8130주) 및 KW3115주 (JCM1134주)를 비롯한 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 카세이 15가지 주에 대해서도 동일한 검토를 행하였다.
2. 실험 결과
각 유산균의 Caco-2 세포에의 접착능 시험의 결과를 표 3에 나타내었다. 오웨핸드(Ouwehand) 등은 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 카세이균이 Caco-2 세포에의 접착 능력이 낮다고 보고하였는데 (문헌 [푸드 마이크로바이올로지ㆍ앤드ㆍ세이프티, 2001년, 제66권, 856페이지]), 이번 실험에서도 KW3110주 이외의 주는 접착 능력이 낮았다. 그러나, KW3110주는 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 카세이균 중에서 현저하고 높은 Caco-2 세포 접착 능력을 나타내고, 우수한 프로바이오틱스 효과를 기대할 수 있는 주임이 시사되었다.
Figure 112005050880437-pct00003
실시예 8
(화분 항원을 이용한 화분증ㆍ기도염증에 있어서 KW3110주에 의한 개선 효과)
1. 실험 방법
(동물종)
BDF1♀ 마우스 4주령 (찰스리버)를 구입
(실험군)
실험 A: 점비에 의한 항원 감작 (화분증 모델)
대조군: 표준 사료 (AIN-76 베이스)를 투여한 군
KW군: KW를 1 mg/마우스 (1 mg KW3110/3 g AIN-76 베이스)로 투여한 군
실험 B: 분무에 의한 항원 감작 (기도염증 모델)
대조군: 표준 사료 (AIN-76 베이스)를 투여한 군
KW군: KW를 1 mg/마우스 (1 mg KW3110/3 g AIN-76 베이스)로 투여한 군
(시약ㆍ기기)
삼나무 화분 추출물 CP (LSL사)
ALUM (시그마사)
초음파식 분무기 XE-U12 (오믈론사)
세포 수집 원심기: 사이토스핀 4 (써모바이오애널라이시스(ThermoBioAnalysis)사)
(평가 방법)
실험 A
BDF-1 마우스를 구입 후 1 주 동안 순화시키고, 안와(眼窩) 채혈로 얻은 혈장에서의 혈중 총 IgE 농도에 따라 군을 분리하였다 (n = 7). 군 분리 후, 실험식을 투여 개시하였다. 또한, 군 분리 후에 제3주부터 CP + ALUM 용액 (CP 10 ㎍ + ALUM 2 mg/마우스)을 주 1회/3 주 동안 복강내 투여하였다. 3차 CP + ALUM 용액 투여 후 제2주부터는 마우스 양쪽 코에 CP 용액 (1 mg/㎖)을 10 ㎕씩 점비하였다. 또한, 미자극 모델 (기준치)로서 생리 식염수를 점비 투여하는 마우스도 설정하였다. 점비는 5 일 동안 실시하고, 점비 후 5 분 동안의 재채기 횟수 (제1일, 제3일, 제5일)과 코 부분을 긁는 횟수 (제3일, 제5일)를 계측하였다.
실험 B
BDF-1 마우스를 구입 후 1 주 동안 순화시키고, 안와 채혈로 얻은 혈장에서의 혈중 총 IgE 농도에 따라 군을 분리하였다 (n = 7). 군 분리 후에는 실험식을 투여 개시하였다. 또한, 군 분리 후에 제3주부터 CP + ALUM 용액 (CP 10 ㎍+ALUM 2 mg/마우스)을 주 1회/3 주 동안 복강내 투여하였다. 3차 CP + ALUM 용액 투여 후 제2주부터는 밀폐 용기 내에서 마우스에게 CP 용액 (40 ㎍/㎖)을 15 분 동안 분무기로 분무하였다. 또한, 미자극 모델 (기준치)로서 생리 식염수를 분무하는 마우스를 설정하였다. 이 분무는 5 일 동안 실시하였다. 또한, CP 복강내 투여시 (제0일), 분무 개시시 (제35일), 해부시 (제40일)에 안와 채혈을 행하여, 혈중 총 IgE 농도를 측정하였다. 제5일에는 마취하에 기관지 폐포 세정액 (BALF)을 회수하여, BALF 중의 세포수 계측, BALF 중의 세포 동정, BALF 중의 사이토카인의 측정을 행하였다. BALF는 마취시킨 마우스의 경부를 절개하고 기도에 캐뉼라를 삽입하여 0.1％ BSA 함유 염수로 0.7 ㎖×3회 (총 2.1 ㎖) 세정하였다. 원심 후 상청액 및 세포를 회수하고 세포수를 계측하였다. 또한, 도말 표본을 제조하여, 라이트ㆍ김자 염색에 의해 세포를 동정하였다.
2. 실험 결과
(실험 A)
점비 후 5 분 동안의 재채기의 횟수에 대하여 물리적 자극의 영향을 고려하기 위해서, 점비 후 제0분 내지 제1분, 제1분 내지 제5분을 총 횟수로 나누어 평가하였다. 그 결과, 생리 식염수 점비시에는 재채기 증상을 거의 나타내지 않는 데 반하여, 대조군은 항원 점비를 반복함에 따라서 재채기 빈도가 증가되었다. 한편, KW군에서는 재채기 증상이 억제되는 경향이 보였다 (도 18a, b, c).
또한, 코 부분을 긁는 행동에 대해서는 점비 후 5 분 동안 연속적으로 긁는 행동을 1 포인트로 하였다 (총 포인트 수). 또한, 경도의 긁기 (연속 1 내지 4회의 긁는 행동)과 중도의 긁기 (연속 5회 이상의 긁는 행동)로 나눈 경우에 대하여도 포인트 평가하였다. 대조군에 비해 KW군에서는 긁는 행동이 억제되었고, 제5일에는 경도의 포인트수에서 유의한 억제가 나타났다 (도 19a, b).
(실험 B)
분무 전 및 해부시에 KW군에서는 대조군에 대하여 혈중 총 IgE 농도 상승이 유의하게 억제되었다 (도 20). BALF 중의 세포 종류는, 통상적인 상태에서는 대식세포를 중심으로 하는 단핵구가 대부분을 차지하였다. 그러나, 항원 자극에 의해 대조군의 BALF 중에는 호산구가 65％ 정도를 차지하여 단핵구 비율이 감소하였다. 한편, KW군에서는 대조군에 비해 호산구의 비율(％) 상승이 억제된 경향을 볼 수 있었다 (도 21a). 또한, 호산구의 수에 있어서도 동일하게 KW군에서는 대조군에 비해 호산구의 국소 침윤이 억제된 경향을 볼 수 있었다 (도 21b).
또한, BALF 상청액 중의 사이토카인을 측정한 결과, 호산구의 증식ㆍ분화를 담당하는 Th2 사이토카인인 IL-5가 KW군에서는 대조군에 비해 낮은 값으로 나타났다 (도 22).
이와 같은 결과로부터, KW3110을 섭취하면 즉시형 알레르기 중에서도 화분증의 임상 증상에 가까운 삼나무 화분 항원에 의한 재채기 행동, 긁는 행동이 억제된다는 가능성이 시사되었다. 또한, KW3110은 IgE 상승을 억제함으로써 항원 노출에 의한 기도염증에 대해서도 폐 국소에서의 IL-5 생산을 억제하고 호산구의 침윤도 억제하는 것을 알 수 있었다. IL-5와 기도염증ㆍ호산구의 관계는 문헌 [J. Allergy Clin. Immunol 88(6) 935-942, 1991]에 서술되어 있고, 이것은 KW3110 투여가 기도염증을 주된 증상으로 하는 알레르기성 천식에 효과적임을 나타낸다.
실시예 9
(아토피성 피부염 모델 마우스에 있어서 KW3110주의 개선 효과)
아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과의 검증에는 피크릴 클로라이드 도포에 의한 아토피성 피부염 모델을 이용하였다. (인용문헌 [응용 약리 59(6) 123-134, 2000])
1. 실험 방법
(동물종)
NC/NgaTndCyj 마우스♂ 5주령 (찰스리버)를 구입
(실험군)
대조군: 표준 사료 (AIN-76 베이스)를 11 주 동안 투여한 군
KW 1 mg-11 wk군: 1 mg KW3110/3 g AIN-76 베이스를 11 주 동안 투여한 군
KW 10 mg-11 wk군: 10 mg KW3110/3 g AIN-76 베이스를 11 주 동안 투여한 군
KW 1 mg-8 wk군: 표준 사료를 3 주 동안 투여한 후에 1 mg KW3110/3 g AIN-76 베이스를 8 주 동안 투여한 군
(시약)
피크릴 클로라이드: PCI (도꾜 가세이 고교)
감작용 용액: 5％ 용액 (에탄올:아세톤 = 4:1)
복부ㆍㆍㆍ100 ㎕, 후지부(後肢部)ㆍㆍㆍ25 ㎕ 양쪽 발
항원투여(challenge)용 용액: 0.8％ 용액 (올리브유)
이개부(耳介部)ㆍㆍㆍ양쪽 면ㆍ양쪽 귀에 10 ㎕씩 (총 40 ㎕), 등 피부ㆍㆍㆍ50 ㎕
(평가 방법)
NC/Nga 마우스를 구입 후 1 주 동안 순화시키고, 안와 채혈로 얻은 혈청에서의 혈중 총 IgE 농도에 따라 군을 분리하였다 (n = 10). 군 분리하여 실험식을 투여 개시한 3 주 후, PC1 감작용 용액을 털을 깎은 복부와 후지부 양측에 도포하고 1 주 후에는 항원투여로서 양쪽 이개부ㆍ양면 및 털을 깎은 등 피부에 항원투여용 용액을 도포하였다. 이 항원투여를 격주로 총 77회 실시하였다. 또한, 항원투여용 용액 용매에 의한 이개 비후(肥厚)가 없는 것을 확인하기 위해서, 올리브유 도포 후 제0시간, 제1시간, 제4시간, 제24시간, 제72시간, 제96시간, 제120시간, 제144시간, 제168시간에 다이얼 시크니스 게이지(Dial thickness Gauge)로 이개 비후를 측정하였다. 또한, 항원투여 제1회, 제3회 후에는 동일하게 제0시간, 제1시간, 제4시간, 제24시간, 제72시간, 제96시간, 제120시간, 제144시간, 제168시간에 다이얼 시크니스 게이지로 이개 비후를 측정하여 부종을 평가하였다. 또한, 감작 후 매주 안와 채혈을 실시하여, 감작 후 주 2회씩 임상 스코어를 평가하였다. 최종 항원투여 제7회부터 1 주 후에 도살하여 혈청 및 이개부 조직을 회수하였다. 혈청에서는 총 IgE 농도를 측정하고, 이개부 조직에서는 헤마톡실린ㆍ에오신 염색, 톨루이딘 블루 염색을 실시하였다.
(임상 스코어)
이개부의 소양증, 발적ㆍ출혈ㆍ미란, 부종, 찰상ㆍ조직 결손, 가피 형성ㆍ 건조의 5 항목, 두피부의 탈모, 발적ㆍ출혈ㆍ미란, 가피 형성ㆍ건조의 3 항목의 8 항목에 대하여 증상 없음 (0점), 가벼운 정도 (1점), 중간 정도 (2점), 심각한 정도 (3점)로 점수화하여 가산한 것을 스코어로서 평가하였다.
(통계)
통계는 분산 분석 및 대조군에 대한 던넷트(Dunnett)의 다중 비교 검정을 행하여, 각각의 항목에서 위험률이 5％ 이하인 것을 유의차 있음이라고 하였다.
2. 실험 결과
대조군에서는 혈중 총 IgE 농도가 PCl 항원투여 제4주 정도부터 대폭 상승해가는 데 대하여, KW3110 섭취군 모두에서는 그의 상승이 억제되어 KW 10 mg-11 wk군과 KW 1 mg-8 wk군에서는 항원투여 제4회부터, KW 1 mg-11 wk군은 항원투여 제6회부터 상승이 유의하게 억제되었다 (도 23).
임상 스코어는, 대장군(大將軍)에서는 이보(耳輔) 및 도피가 상기로부터 병태 악화, 즉 스코어가 상승된 것이 확인되었다. 한편, KW3110 섭취군 모두에서 그의 상승이 억제되어 KW 1 mg-11 wk군, KW 10 mg-11 wk군은 항원투여 제2회부터, KW 1 mg-8 wk군은 항원투여 제3회 직후부터 상승이 유의하게 억제되었다. 이개부만의 임상 스코어, 두피만의 임상 스코어에 대해서도 동일하게 KW3110 섭취군 모두에서 유의차가 나타났다 (도 24, 25, 26). 또한, 두부의 사진에서도 KW 섭취군에서는 이개부의 미란ㆍ조직 결손이 억제된 것을 확인할 수 있었다 (도 27).
PCI 항원투여에 의한 이개 비후에 대하여, 감작 단계에서 실시한 용매 도포로 인한 이개 비후는 볼 수 없었지만, PCI를 항원투여함으로써 이개 비후ㆍ발적ㆍ부종을 확인할 수 있었다. 항원투여 제1회시에 대조군에서 제1시간, 제4시간에는 즉시형 반응이 관여하는 제1 상(相)의 비후, 제48시간에는 지연형 반응에 의한 제2 상의 비후, 또한 제120시간 내지 제144시간에는 즉시형 반응이 관여하는 제3 상의 이개부 비후를 확인할 수 있었다.
한편, KW3110 섭취군은 제1시간, 제4시간에 3군 모두에서 즉시형 반응이 관여하는 유의한 비후 억제가 나타났고, KW 10 mg-11 wk군에서는 또한 제144시간에, KW 1 mg-8 wk군에 대해서는 제24시간, 제144시간에 유의한 비후 억제가 나타났다. 항원투여 제3회시에, 대조군에서는 도포 후에 계속해서 비후가 나타났지만, KW3110 섭취군에서는 전체적인 비후 억제 경향을 볼 수 있었고, KW 1 mg-11 wk군, KW 10 mg-11 wk군에서는 유의한 억제를 확인할 수 있었다 (도 28, 29).
이개부의 병리학적 평가의 결과, 대조군은 진피 및 표피가 비후하여 부종 등의 염증도 나타나는 데 대하여, KW 섭취군 모두에서는 대조군보다 비후가 전체적으로 억제된 것을 확인할 수 있었다 (도 30). 또한, 톨루이딘 블루 염색에 의한 병리 조직 평가에 있어서, 비만 세포수가 KW 섭취군은 대조군에 비해 적은 것을 확인할 수 있었다 (도 31).
이와 같은 결과로부터, KW 섭취에 의해 혈중 총 IgE 농도의 상승 억제, 합텐 자극에 의한 이개 비후의 억제, 임상 수준의 증상 악화 억제가 확인되었다. 따라서, NC/Nga 마우스에 있어서 KW3110 섭취가 합텐 유발 아토피성 피부염에 대하여 증상 개선 효과를 갖는 것으로 나타났다.
실시예 10
(화분증에 대한 KW3110주의 인간에서의 효과)
KW3110주의 인간에서의 효과를 검증하기 위해서, 화분증 지원자에 대하여 하기의 시험을 행하였다.
1. 시험 방법
(시험 시료)
실시예 2에서 Th1, Th2의 2가지 파라미터의 평가가 모두 E 평가였던 락토바실러스 델브뤽키이 B주 또는 락토바실러스 파라카세이 KW3110주로 제조한 요구르트 실험물. 균수는 2×108 cfu/㎖로 포함되어 있다.
(시험 대상)
기업에 근무하는 지원자 화분증 환자 28명. 본 시험은, 헬싱키 선언에 준하여 모든 피험자에게 사전에 시험 내용과 방법에 관하여 충분히 설명하고, 문서에 의한 충분한 고지 후에 동의를 얻어 행하였다.
(시험군)
피험자 28명을 무작위로 2군으로 나누었다. 1군은 대조 요구르트인 락토바실러스 델브뤽키이 B주 요구르트, 다른 1군은 락토바실러스 파라카세이 KW3110주 요구르트를 하루 200 ㎖ (KW3110주 건조 균체 40 mg에 상당함) 섭취하였다. 시험 종료까지 각 군의 결과를 제3자가 정보를 관리하는 2중 맹검 시험으로 행하였다.
(시험 기간)
2003년 1월 20일부터 4월 14일.
(측정 항목)
피험자에 대하여, 제0주 (시험 개시시), 제4주, 제8주, 제12주 (시험 종료시)에 채혈을 행하였다. 혈액은 팔코 바이오시스템즈(주)에서 다음 항목에 대하여 측정을 행하였다: NK 세포 활성, Th1 및 Th2 세포수의 비율 (Th1/Th2 비율), 호산구수, ECP값, 혈중 총 IgE량, 혈중 삼나무 화분 특이적 IgE량.
이들 데이타는 시험 종료 후에 통계 처리하여 데이타화하였다.
또한, 피험자는 채혈시에 표로 나타낸 앙케이트 양식에 5 단계 (3+: 고도, 2+: 중등도, +: 경도, ±: 경미, -: 없음)로 대답하였다. 3+를 4점, 2+를 3점, +를 2점, ±를 1점, -를 0점으로 하고, 이것을 스코어화하여 통계 처리하였다.
Figure 112005050880437-pct00004
항목 자각 증상의 판정 기준
3+: 고도의 증상 증상이 고도로 확인된다. 예를 들어, 콧물이 나오는 횟수나 양도 많고 일도 공부도 집중이 되지 않는다.
2+: 중등도의 증상 증상이 증등도로 확인된다. 예를 들어, 횟수도 많아 괴롭다.
+: 경도의 증상 증상이 경도로 확인된다. 예를 들어, 횟수도 적고 그다지 불편하지 않다.
±: 경미한 증상 증상이 경미하게 확인된다. 예를 들어, 자주 근질근질하지만 참을 수 있다.
-: 증상 없음 거의 또는 전혀 없음. 아무렇지 않다.
2. 실험 결과
도 32에 나타낸 바와 같이, 시험 개시시와 종료시를 비교하였을 때, 대조군인 락토바실러스 델브뤽키이 B주 요구르트군 (대조군)에서는 Th1/Th2 비율이 유의한 저하를 나타내었고, 도 33에 나타낸 바와 같이 ECP값은 유의한 상승을 나타내었다. 한편, 락토바실러스 파라카세이 KW3110주 요구르트군 (KW군)에서는 모든 값에 대해서 시험 전후의 유의한 변화는 확인되지 않았다. 또한, 도 34에 나타낸 바와 같이 자각 증상을 스코어화한 것에 대해서도 목이 근질근질함, 눈이 아픔, 눈꺼풀이 무거운 증상의 항목에서 KW군이 대조군보다 낮은 경향이 확인되었다. 이러한 결과로부터 인간 화분증에 있어서도 KW3110주가 유효한 것으로 나타났다.
이하, 본 발명의 항알레르기 활성을 갖는 유산균을 음료의 제조에 적용한 경우의 실시예에 대하여 기재한다.
실시예 11
(음료 첨가 원료가 되는 유산균 균체의 제조 방법)
제조예 1. 유산균 KW3110주 균체의 제조
유산균의 배양에는, 배양용 배지 (글루코스 1％, 효모 엑기스 S (다케다 기린사) 1％, MgSO4ㆍ7H20 50 ppm, MnSO4ㆍ5H2O 50 ppm)를 사용하였다. 전배양은 유산균 KW3110주를 배양용 배지 10 ㎖에 접종하고, 37℃에서 20 내지 24 시간 동안 정치시켜 행하였다. 본 배양은, 전배양액 0.6 ㎖를 120 ㎖의 배양용 배지에 접종하고, 200 ㎖ 용량의 발효기 (모델 BMJ-25, 에이블사)를 이용하여 28℃에서 배양하였다. 통기량은 0.12 L/분으로 하고 교반 속도는 500 rpm으로 하였다. pH는 25％ NaOH 용액을 이용하여 pH 4.5 이하가 되지 않도록 제어하였다. 배양은 48 시간 동안 행하였다.
배양 종료 후, 8500×g, 10 분 동안의 원심분리에 의해 균체를 집균하였다. 30 ㎖의 멸균 증류수에 현탁시키고, 8500×g, 10 분 동안의 원심분리에 의해 균체를 집균하였다. 이 세정 조작을 3회 반복하여 배지 유래 성분을 제거하였다. 세정 균체를 10 ㎖의 멸균수에 현탁시키고, 오토클레이브에서 100℃, 30 분 동안 처리한 후에 동결건조시켰다. 최종적으로 유산균 건조 균체 50 내지 70 mg이 얻어졌다. 얻어진 유산균 균체의 항알레르기 활성을 확인하였다.
실시예 12
(차계 음료의 제조)
85℃의 열수로 추출한 조룡차, 홍차, 녹차, 엽차, 자스민차의 추출액에 대하여, 차잎 사용률이 0.8 중량％가 되도록 탈이온수를 추가하였다. 이때, 아스코르브산을 0.025 중량％가 되도록 첨가하고, 계속해서 중탄산소다를 이용하여 마시기 쉬운 pH로 조정하였다. 또한, 상기 조합액 100 g에 대하여, 유산균 KW3110주를 균수가 1.5×1010개, 3×1010개가 되도록 첨가한 후, 통상법대로 UHT 살균을 행하여 350 ㎖ 용량의 PET병에 충전하였다.
이들 10개의 실시예 (5종의 차×2 단계 유산균 농도)를 패널리스트에 의한 관능 평가에 사용하였다. 그 결과, 모든 음료의 향미가 만족할 수 있는 정도이며, 충분히 매일 계속해서 마실 수 있다는 높은 평가가 얻어졌다. 단, 3×1010개 첨가한 샘플은 외관상으로 유산균이 침전물로서 눈에 띄기 쉬워서 1.5×1010개인 쪽이 더욱 바람직하다고 평가되었다.
실시예 13
(보리차의 제조)
귀리차 250 g을 열탕 10 kg에서 30 분 동안 끓여내어 여과한 후에 원심분리를 행하였다. 얻어진 추출액에 유산균 KW3110주를 최종 제품 100 g 당 8×1010개, 1.5×1010개, 3×1010개가 되도록 첨가한 후에 아스코르브산과 중탄산소다를 더 첨가하여 맛을 조정하고 나서, 탈이온수를 사용하여 10 kg이 되도록 하였다. 이어서, 통상법대로 UHT 살균하여, 500 ㎖ 용량의 PET병에 무균 충전하였다.
관능 평가 결과, 모두가 만족할 수 있는 향미이고, 충분히 매일 계속해서 마실 수 있다는 높은 평가가 얻어졌다. 단, 3×1010개 첨가한 샘플은 외관상으로 유산균이 침전물로서 눈에 띄기 쉬워서 그 이하인 것이 더욱 바람직하다고 평가되었다.
실시예 14
(과즙 함유 음료의 제조)
혼탁 사과 과즙 900 g과 향료 1 g에 소정량의 유산균 균체를 첨가하고 탈이온수를 더 첨가하여 합계 1 kg이 되도록 한 후에 통상법대로 180 ㎖ 용량의 유리병에 핫 팩 충전을 행하여 사과 과즙 함유 음료를 제조하였다. 또한, 유산균 KW3110주는, 상기 조합액 100 g에 대하여 균수가 2×1010개 또는 4×1010개가 되도록 첨가하였다.
관능 평가 결과, 모든 샘플에서 유산균 배합에 의한 향미의 위화감은 전혀 없고, 외관상으로도 아무런 문제가 없었다.
실시예 15
(스포츠 드링크의 제조)
그래뉴당 4.5 중량％, 시트르산 0.2 중량％, 시트르산나트륨 0.05 중량％, 향료 0.1 중량％를 포함하는 조합액에 유산균 KW3110주를 0.0143 중량％ (제품 100 g 당 1.5×1010개)를 첨가하였다. 또한, 이 액을 90℃까지 가열하여 살균하고, 펫트병에 핫 팩하여 스포츠 드링크 유형의 음료를 제조하였다. 관능 평가 결과, 외관과 향미 모두가 만족할 수 있는 것이었다. 상기 음료 중의 유산균 균체를 원심분리하고 나서 순수한 물로 2회 세정한 후에 동결건조를 행하여 건조 균체를 얻었다. 완성된 제품을 마우스 림프구를 이용한 시험관내 계에서 평가한 결과, 소정의 활성을 유지하고 있었다 (도 35).
실시예 16
(토마토 쥬스의 제조)
토마토 쥬스에 소정량의 유산균 균체를 첨가한 후에 190 g 캔에 충전하여 통상법에 따라 레토르트 살균을 행하였다. 또한, 상기 조합액 100 g에 유산균 KW3110주를 균수가 2.5×1010개 또는 5×1010개가 되도록 첨가하였다.
관능 평가 결과, 모든 샘플에서 유산균 배합에 의한 위화감은 전혀 없고, 외관상으로도 아무런 문제가 없었다.
실시예 17
(커피의 제조)
분쇄한 커피 배전두(焙煎豆) (콜롬비아)를 95℃의 열수로 추출하여 커피 추출액을 얻었다. 이것에 탈이온수를 첨가하여 가용성 고형분 1.4％가 되도록 희석하였다. 상기 조합액 100 g에 유산균 KW3110주를 균수가 2×1010개, 4×1010개가 되도록 첨가한 후에 190 g 캔에 충전하여 통상법대로 레토르트 살균을 행하였다.
관능 평가 결과, 모든 샘플에서 유산균 배합에 의한 위화감은 전혀 없었다. 단, 컵 등에 옮긴 경우에, 4×1010개 첨가한 샘플은 외관상으로 유산균이 침전물로서 눈에 띄기 쉬워서 1.5×1010개인 쪽이 더욱 바람직하다고 평가되었다. 그러나, 캔으로 직접 음용하는 경우에는 문제가 없었다.
이하, 본 발명의 항알레르기 활성을 갖는 유산균을 식품의 제조에 적용한 경우의 실시예에 대하여 기재한다.
실시예 18
(요구르트의 제조)
우유를 포함하는 원재료 (우유, 탈지 분유, 크림, 자당 액당, 안정화제, 향료, 물)를 균일하게 혼합하여 128℃, 15 초의 가열 살균을 행하고, 40℃ 이하까지 냉각시킨 후에 유산균 스타터 KW3110을 첨가하고, 37℃로 유지한 발효 탱크에서 발효를 개시하였다. 유산균 KW3110이 혼합액 중의 젖당을 분해하여 락트산이 생성되어 약 18 시간 후에는 pH 4.6이 되었고, 우유 단백질의 등전점 응집에 의해 겔화가 안정된 시점에서 교반 냉각시켰다. 교반에 의해 페이스트상이 된 요구르트를 종이 용기에 충전, 밀봉하여, 10℃ 이하의 냉장고에서 냉각 보관하였다. 냉각 후에는 관능 검사를 행하여 요구르트로서 적절한 식미와 물성을 갖는 것을 확인하였다. 이때의 요구르트 원재료 배합 비율을 표 7에 나타내었다. 또한, 원재료 중의 지방분, SNF (무지방 우유 고형분)의 비율 및 감미도를 표 8에 나타내었다. 완성된 제품을 마우스 림프구를 이용한 시험관내 계에서 평가한 결과, 소정의 활성을 유지하고 있었다 (도 36).
Figure 112005050880437-pct00005
Figure 112005050880437-pct00006
이하, 본 발명의 항알레르기 활성을 갖는 유산균을 건강 식품 제제의 제조에 적용한 경우의 실시예에 대하여 기재한다.
실시예 19
(타블렛상 건강 식품의 제조)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 67 g에 당류인 환원 파라티노스, 소르비톨, 크실리톨 및 아라비아검을 적절하게 물을 결합제로 하여 가열ㆍ조립하면서 첨가하고, 시트르산, 스테비아, 향료 등으로 맛을 조정하고 타정기에 의한 타블렛상 성형이 쉽도록 분말 유지와 수크로스 에스테르를 첨가한 1000 g의 혼합물로 얻었다. 이어서, 1개 입자 당 1.5 g이 되도록 타정하여, 향미적으로 바람직한 타블렛상의 건강 식품을 제조하였다. 이때, 유산균 KW3110주는 1개 입자 당 5×1010개였다.
실시예 20
(경캡슐상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 g에 덱스트린을 50 g 첨가하여 균등 혼합한 후에 풀룰란, 식물 유지, 카라기난, 염화칼륨을 포함하는 경캡슐 기재에 충전하여 경캡슐로 피포된 1개 캡슐 당 213 mg의 건강 식품을 얻었다. 이때, 유산균 KW3110주는 1개 캡슐 당 5×1010개였다.
실시예 21
(경캡슐상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 g에 덱스트린을 50 g 첨가하여 균등 혼합한 후에 젤라틴과 글리세린을 포함하는 경캡슐 기재에 충전하고, 경캡슐로 피포된 1개 캡슐 당 213 mg의 건강 식품을 얻었다. 이때, 유산균 KW3110주는 1개 캡슐 당 5×1010개였다.
실시예 22
(연캡슐상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 kg을 홍화유 180 kg, 밀랍 20 kg, 대두 레시틴 5 kg의 혼합물과 균등 현탁시킨 후에 카라기난, 전분, 글리세린을 주성분으로 하는 캡슐 기재로 피포하여, 1개 캡슐 당 450 mg인 타원 구상의 연캡슐상으로 성형하였다. 이때, 유산균 KW3110주는 1개 캡슐 당 5×1010개였다.
실시예 23
(연캡슐상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 kg을 홍화유 180 kg, 밀랍 20 kg, 대두 레시틴 5 kg의 혼합물에 균등 현탁시킨 후에 젤라틴과 글리세린을 포함하는 캡슐 기재로 피포하여, 1개 캡슐 당 450 mg인 타원 구상의 연캡슐상으로 성형하였다. 이때, 유산균 KW3110주는 1개 캡슐 당 5×1010개였다.
실시예 24
(과립상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 kg을 스틱 충전기로 1 g/스틱이 되도록 충전하고, 유산균 KW3110주가 1개 스틱 당 5×1011개인 건강 식품을 얻었다.
실시예 25
(과립상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 kg에 덱스트린 900 kg을 첨가하고, 물을 결합제로서 사용하여 유동층 조립기에서 균등 혼합ㆍ가열ㆍ조립을 행하여 조립물 1000 kg을 얻었다. 이어서, 상기 조립물을 스틱 충전기로 1 g/스틱이 되도록 충전하고, 유산균 KW3110주가 1개 스틱 당 5×1010개인 건강 식품을 얻었다. 완성된 제품을 마우스 림프구를 이용한 시험관내 계에서 평가한 결과, 소정의 활성을 유지하고 있었다 (도 37).
실시예 26
(분말상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 kg에 덱스트린 900 kg을 첨가하고, 물을 결합제로서 사용하여 유동층 조립기에서 균등 혼합ㆍ가열ㆍ조립을 행하여 조립물 1000 kg을 얻었다. 이어서, 상기 조립물을 18호 체에 전량 통과될 때까지 분쇄하여, 스틱 충전기로 1 g/스틱이 되도록 충전하고, 유산균 KW3110주가 1개 스틱 당 5×1010개인 분말상 건강 식품을 얻었다.
실시예 27
(현탁액상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 g을 케일 잎 착즙액 10 kg에 첨가하고, 유산균이 액 중에서 분산되기 쉽도록 알긴산나트륨 10 g으로 점도를 조정하여 현탁액상 건강 식품을 얻었다.
실시예 28
(현탁액상 건강 식품)
유산균 KW3110주의 조제 건조 분말 100 g을 포도당 0.7 kg, 증류수 5 kg 및 포도 향료 5 g과 혼합하여 가열 살균한 후에 50 ㎖짜리 밀봉 용기에 무균 충전함으로써 시럽상의 현탁액상 건강 식품을 얻었다. 이것은 소아에게 위화감을 제공하지 않아 호평을 받았다.
도 1은 본 발명의 실시예에서 이용한 유산균 및 그의 입수원을 나타내는 일람 (번호 1)이다.
도 2는 본 발명의 실시예에서 이용한 유산균 및 그의 입수원을 나타내는 일람 (번호 2)이다.
도 3은 본 발명의 실시예에서 각종 유산균에 의해 Th1 사이토카인인 IL-12가 생성된 양을 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명의 실시예에서 각종 유산균에 의해 Th2 사이토카인인 IL-4가 생성된 양을 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 실시예에서 본 발명의 유산균주 (KW3110)와 대조주 (L-92주)를 이용하여 IL-12와 IL-4의 생산량을 시험관내 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 실시예에서 선별한, KW3110주로부터 파생된 균주 번호 90주에 대하여 항알레르기 활성을 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주에 대하여 생체내 항알레르기능을 측정하기 위한 실험 스케줄을 나타낸 도면이다.
도 8은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 생체내 항알레르기능을 측정하기 위한 실험에 있어서 98일 실험 동안의 혈중 IgE 변동을 나타낸 도면이다.
도 9는 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 생체내 항알레르기능을 측정하기 위한 실험에 있어서 제48일 및 제98일 해부시의 혈중 IgE량을 돗트 블롯으로 나타낸 도면이다.
도 10은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 생체내 항알레르기능을 측정하기 위한 실험에 있어서 대조군 및 KW3110군의 제98일 해부시 비장세포를 배양할 때 IL-12가 생산된 양을 나타낸 도면이다.
도 11은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 생체내 항알레르기능을 측정하기 위한 실험에 있어서 대조군 및 KW3110군의 제98일 해부시 비장세포를 배양할 때 IL-4가 생산된 양을 나타낸 도면이다.
도 12는 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 생체내 항알레르기능을 측정하기 위한 실험에 있어서 대조군 및 KW3110군의 코 주변의 탈모를 관찰한 결과를 나타내는 사진이다.
도 13은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주와 항알레르기 유산균으로서 공지된 KW4610주를 비교하여 상기 유산균주의 혼이 사료를 이용한 예방 효과 시험의 실험 스케줄을 나타낸 도면이다.
도 14는 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주와 항알레르기 유산균으로서 공지된 KW4610주를 비교하여 상기 유산균주의 혼이 사료를 이용한 예방 효과 시험의 시험 기간 동안 혈중 IgE량의 변동을 나타낸 도면이다.
도 15는 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주와 항알레르기 유산균으로서 공지된 KW4610주를 비교하여 상기 유산균주의 혼이 사료를 이용한 예방 효과 시험에서 OVA 5차, 6차 투여 후에 개체마다의 혈중 IgE량을 도트로 나타낸 도면이다.
도 16은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 산 내성 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 17은 본 발명의 실시예에서 항알레르기 활성이 높은 본 발명의 유산균주인 KW3110주의 담즙산 내성 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 18, 도 16a, b, c는 본 발명의 실시예에서 화분 항원을 이용한 화분증ㆍ기도염증에 있어서 KW3110주에 의한 개선 효과를 모델 마우스의 재채기 행동에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 19, 도 17a, b, c는 본 발명의 실시예에서 화분 항원을 이용한 화분증ㆍ기도염증에 있어서 KW3110주에 의한 개선 효과를 모델 마우스의 긁는 행동에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 20은 본 발명의 실시예에서 화분 항원을 이용한 화분증ㆍ기도염증에 있어서 KW3110주에 의한 개선 효과를 모델 마우스의 혈중 총 IgE 농도의 상승 억제에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 21은 본 발명의 실시예에서 화분 항원을 이용한 화분증ㆍ기도염증에 있어서 KW3110주에 의한 개선 효과를 모델 마우스의 호산구 상승 억제 (도 19a) 및 호산구의 국소 침윤 억제 (도 19b)에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 22는 본 발명의 실시예에서 화분 항원을 이용한 화분증ㆍ기도염증에 있어서 KW3110주에 의한 개선 효과를 모델 마우스에 있어서의 IL-5 값에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 23은 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 혈중 총 IgE 농도의 상승에 대한 시험 결과로 도면이다.
도 24는 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110 주의 개선 효과를 모델 마우스에 있어서의 총 임상 스코어 측정 결과로 나타낸 도면이다.
도 25는 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스의 임상 스코어 (이개부) 측정 결과로 나타낸 도면이다.
도 26은 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스의 임상 스코어 (두피부) 측정 결과로 나타낸 도면이다.
도 27은 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스 두부의 이개부 미란ㆍ조직 결손의 억제 상황으로 나타낸 사진이다.
도 28은 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스의 이개 비후 (도 26a) 및, 모델 마우스의 항원투여 제1회의 이개 비후의 억제 경향 (도 26b)에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 29는 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스의 3차 항원투여시 이개 비후의 억제 경향에 대한 시험 결과로 나타낸 도면이다.
도 30은 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스의 이개 비후 억제에 대하여 헤마톡실린ㆍ에오신 염색으로 이개부를 병리학적 평가한 결과로 나타낸 사진이다.
도 31은 본 발명의 실시예에서 아토피성 피부염 모델 마우스에 대한 KW3110주의 개선 효과를 모델 마우스의 이개 비후의 억제에 대하여 톨루이딘 블루 염색으로 이개부를 병리학적 평가한 결과로 나타낸 사진이다.
도 32는 본 발명의 실시예에서 화분증에 있어서 KW3110주의 인간에서의 효과를 요구르트를 이용한 시험에서의 Th1/Th2 비율 변화에 대한 측정 결과로 나타낸 도면이다.
도 33은 본 발명의 실시예에서 화분증에 있어서 KW3110주의 인간에서의 효과를 요구르트를 이용한 시험에서의 시험 개시 전과 개시 후의 ECP의 변화에 대한 측정 결과로 나타낸 도면이다.
도 34는 본 발명의 실시예에서 화분증에 대하여의 KW3110주의 인간에서의 효과를 요구르트를 이용한 시험에서의 시험 개시 전과 개시 후의 화분증 자각 증상 변화에 대한 관찰 결과로 나타낸 도면이다.
도 35는 본 발명의 실시예에서 KW3110주를 이용하여 각종 처리 가공을 실시하여 제품화한 경우의 항알레르기 활성의 유지와 관련하여, 청량 음료수로서 제품화한 경우의 IL-12 생산량 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 36은 본 발명의 실시예에서 KW3110주를 이용하여 각종 처리 가공을 실시하여 제품화한 경우의 항알레르기 활성의 유지와 관련하여, 요구르트에 배합하여 제품화한 경우의 IL-12 생산량 시험 결과를 나타낸 도면이다.
도 37은 본 발명의 실시예에서 KW3110주를 이용하여 각종 처리 가공을 실시하여 제품화한 경우의 항알레르기 활성의 유지와 관련하여, 정제화한 경우의 IL-12 및 IL-4 생산량 시험 결과를 나타낸 도면이다.
본 발명에 의해 항알레르기 활성이 높은 유산균을 취득할 수 있고, 상기 유산균을 유효 성분으로 하며 항알레르기 효과가 높은 조성물을 얻을 수 있다. 본 발명의 항알레르기용 조성물은 화분증, 아토피성 피부염, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염 등의 환경 알레르기에 대하여 특히 효력을 발휘한다. 특히, 화분증 데이타나 화분을 항원으로서 이용한 천식 치료 실험 데이타에 나타낸 바와 같이, 화분증, 기관지 천식, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염과 같은 점막 과민증 질환의 예방ㆍ치료에 현저한 효과가 있다. 본 발명의 항알레르기용 조성물의 유효 성분의 일례인 락토바실러스 파라카세이 KW3110의 경우에는 강력한 항알레르기ㆍ면역 부활 활성 뿐만이 아니라 장관 세포에의 접착성, 위산ㆍ담즙산에 대한 내성 역시 우수하고, 상기 유산균 또는 상기 유산균을 이용한 제품을 경구 투여하면 항알레르기 기능과 함께 정장 작용ㆍ콜레스테롤 저하 작용ㆍ혈압 저하 작용 등과 같이 종래 공지된 프로바이오틱스의 기능까지 함께 발휘할 수 있는 약제 또는 음식품으로서의 이용을 기대할 수 있다.
본 발명의 항알레르기 기능이 높은 조성물은, 특히 음료의 형태로 이용하여 매일 계속 섭취하는 것이 가능하면서 상기 계속 섭취하는 것이 가능한 양에서 효능이 발휘되는 항알레르기 기능을 유지할 뿐만이 아니라 기호성, 보존성도 높은 음료를 제공하는 것이 가능하다.

Claims (51)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 활성 성분으로서 살아 있는 유산균 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei) KW3110주를 포함하는 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물.
  39. 삭제
  40. 제38항에 있어서, 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물이 유산균 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용하여 발효된 유제품 원료인 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물.
  41. 제38항에 있어서, 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물이 요구르트인 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물.
  42. 제38항에 있어서, 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물 중의 유산균 락토바실러스 파라카세이 KW3110주의 수가 1일 음식품 섭취량 당 5×109개 이상인 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물.
  43. 삭제
  44. 유산균을 이용하여 제조된 음료 또는 식품, 또는 유산균을 포함하는 음료 또는 식품 중의 유산균의 일부 또는 전부를 유산균 락토바실러스 파라카세이 KW3110주로 대체하는 것을 특징으로 하는, 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물의 제조 방법.
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
  48. 제44항에 있어서, 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물이 유산균 락토바실러스 파라카세이 KW3110주를 이용하여 발효된 유제품 원료인 것을 특징으로 하는, 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물의 제조 방법.
  49. 제48항에 있어서, 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물이 요구르트인 것을 특징으로 하는, 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물의 제조 방법.
  50. 제44항에 있어서, 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물 중의 유산균 락토바실러스 파라카세이 KW3110주의 수가 1일 섭취량 당 5×109개 이상인 것을 특징으로 하는, 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 프로바이오틱스 음료 또는 식품 조성물의 제조 방법.
  51. 삭제
KR1020057017035A 2003-03-13 2004-02-27 항알레르기용 조성물 KR100908254B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2003-00068943 2003-03-13
JP2003068943 2003-03-13
JPJP-P-2003-00354277 2003-10-14
JP2003354277 2003-10-14
PCT/JP2004/002456 WO2004096246A1 (ja) 2003-03-13 2004-02-27 抗アレルギー用組成物

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077004335A Division KR100854816B1 (ko) 2003-03-13 2004-02-27 항알레르기용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20050109985A KR20050109985A (ko) 2005-11-22
KR100908254B1 true KR100908254B1 (ko) 2009-07-20

Family

ID=33421654

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020057017035A KR100908254B1 (ko) 2003-03-13 2004-02-27 항알레르기용 조성물

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20060088513A1 (ko)
EP (2) EP1759597B1 (ko)
JP (3) JP2005139160A (ko)
KR (1) KR100908254B1 (ko)
CN (1) CN1767839B (ko)
AT (1) ATE421256T1 (ko)
AU (1) AU2004233658B2 (ko)
CA (1) CA2518947A1 (ko)
DE (1) DE602004019255D1 (ko)
ES (1) ES2320920T3 (ko)
HK (1) HK1090289A1 (ko)
TW (1) TWI324068B (ko)
WO (1) WO2004096246A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101504373B1 (ko) 2009-12-23 2015-03-19 리톤 엔터프라이즈, 인크. 면역 조절제로서 락토바실루스 파라카세이 균주 ｌｔ１２

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7767203B2 (en) 1998-08-07 2010-08-03 Ganeden Biotech, Inc. Methods for the dietary management of irritable bowel syndrome and carbohydrate malabsorption
US6461607B1 (en) 1998-08-24 2002-10-08 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof
US20060088513A1 (en) * 2003-03-13 2006-04-27 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Antiallergic composition
WO2006028164A1 (ja) * 2004-09-10 2006-03-16 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 乳酸菌抗アレルギー活性の高温処理に対する安定化方法、安定化組成物、及び飲食品。
TW200637908A (en) * 2005-01-04 2006-11-01 Calpis Co Ltd Method for preparation of lactic acid bacterium having anti-allergic activity
CN101171019B (zh) 2005-03-03 2012-05-23 株式会社明治 免疫功能调节剂
JP2006273783A (ja) * 2005-03-30 2006-10-12 Musashino Seiyaku Kk 掻痒の予防及び／又は治療用組成物
JP2007084533A (ja) * 2005-08-24 2007-04-05 Prima Meat Packers Ltd 免疫応答調節組成物及び該組成物を有効成分とする食品
JP4891255B2 (ja) * 2005-10-31 2012-03-07 サントリーホールディングス株式会社 ワイン発酵もろみ由来の免疫調節作用を有する乳酸菌
ES2381211T3 (es) * 2006-02-15 2012-05-24 Nestec S.A. Uso del Bifidobacterium longum para prevenir y tratar inflamaciones
US20070275150A1 (en) * 2006-05-26 2007-11-29 Ciell Michael P Nutritional composition and method of making the same
CN101454439B (zh) * 2006-05-31 2011-01-26 明治乳业株式会社 免疫调节活性高的乳酸菌的培养法
WO2008023663A1 (fr) 2006-08-21 2008-02-28 Sapporo Breweries Limited Souche bactérienne possédant une activité anti-allergique, et boisson, aliment et agent anti-allergique comprenant une cellule de la souche bactérienne
US20100055083A1 (en) * 2006-10-18 2010-03-04 Ray Edward Kowalski Encapsulation of heat and moisture sensitive substances
EP1972208A1 (en) * 2007-03-16 2008-09-24 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha Composition for improving intestinal microflora
CA2682763A1 (en) * 2007-03-27 2008-10-02 The Procter & Gamble Company Methods and kits for administering probiotics
JP2008245569A (ja) * 2007-03-30 2008-10-16 Kirin Holdings Co Ltd 高抗アレルギー活性を有する乳酸菌組成物及び該乳酸菌の製造方法
JP2010531840A (ja) * 2007-06-27 2010-09-30 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ アトピー性皮膚炎の治療のためのラクトバチルス・ヘルベティカス菌組成物
ES2745817T3 (es) 2007-08-29 2020-03-03 Ganeden Biotech Inc Productos de panadería
JP2009057346A (ja) * 2007-09-03 2009-03-19 Kirin Holdings Co Ltd 免疫バランス調節用組成物
JP2009082126A (ja) * 2007-09-14 2009-04-23 Kikkoman Corp 新規な乳酸菌、それを用いた乳酸発酵物及び乳酸発酵物含有飲食品
SI2638807T1 (sl) * 2007-10-16 2021-08-31 Ganeden Biotech, Inc. Sestave pijač
JP2009112214A (ja) * 2007-11-02 2009-05-28 Kirin Holdings Co Ltd 乳酸菌含有抗アレルギー用飲料
EP2223697B1 (en) 2007-11-19 2016-04-06 Kaneka Corporation Lactic acid bacterium-containing preparation
CN101503662B (zh) * 2008-02-05 2011-04-20 光晟生物科技股份有限公司 用于抗过敏症状的微生物株、其组合物和以此微生物株刺激细胞产生干扰素-γ的方法
ES2407150T3 (es) * 2008-04-25 2013-06-11 Kameda Seika Co., Ltd. Bacteria ácido láctica novedosa con actividad anti-alérgica, agente anti-alérgico, alimento y composición farmacéutica que comprenden, cada uno de ellos, la bacteria ácido láctica, y proceso para la producción del agente anti-alérgico
US8043645B2 (en) 2008-07-09 2011-10-25 Starbucks Corporation Method of making beverages with enhanced flavors and aromas
FR2938437B1 (fr) * 2008-11-19 2020-03-27 Société des Produits Nestlé S.A. Utilisation cosmetique de microorganisme pour le traitement des peaux grasses
US9622502B2 (en) 2008-10-16 2017-04-18 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic Bacillus pasta compositions
KR101075557B1 (ko) * 2008-12-03 2011-10-20 씨제이제일제당 (주) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
AU2010242955B2 (en) 2009-04-29 2016-02-04 Ganeden Biotech, Inc. Inactivated bacterial cell formulation
KR101255050B1 (ko) * 2009-07-14 2013-04-16 씨제이제일제당 (주) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
KR101486999B1 (ko) * 2009-07-22 2015-01-28 씨제이제일제당 주식회사 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
KR101178217B1 (ko) 2009-10-28 2012-09-07 씨제이제일제당 (주) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
EP2332557A1 (en) 2009-12-08 2011-06-15 Campina Nederland Holding B.V. Probiotic lactic acid bacteria
KR101127268B1 (ko) 2009-12-16 2012-03-29 박치호 알레르기성 비염 개선용 건강식품 조성물
TWI418356B (zh) * 2009-12-23 2013-12-11 Lytone Enterprise Inc 可作為免疫調節劑之副乾酪乳酸桿菌ｌｔ１２
WO2011111734A1 (ja) 2010-03-10 2011-09-15 株式会社カネカ 乳酸菌含有製剤
JP4942831B2 (ja) 2010-03-19 2012-05-30 株式会社キティー 抗アレルギー用組成物
JP5592682B2 (ja) * 2010-03-26 2014-09-17 株式会社明治 少容量に充填したプロバイオティクス含有組成物
CN103179975B (zh) 2010-08-31 2015-07-15 国立大学法人新潟大学 肠道免疫调节剂
JP6020981B2 (ja) * 2010-10-15 2016-11-02 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 カテコールアミン認識性を指標に選抜した微生物とカテコールアミン含有組成物
US11235008B2 (en) 2011-03-31 2022-02-01 Ganeden Biotech, Inc. Probiotic sports nutrition compositions
JP5801084B2 (ja) * 2011-03-31 2015-10-28 森永乳業株式会社 乳酸菌含有飲食品を加熱殺菌する方法、及び加熱処理における乳酸菌の免疫賦活活性の低下を抑制する方法
JP6124275B2 (ja) * 2011-03-31 2017-05-10 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 グアイアコール認識性を指標に選抜した微生物と微生物増殖促進活性を有するグアイアコール含有組成物
WO2012133827A1 (ja) * 2011-03-31 2012-10-04 森永乳業株式会社 新規乳酸菌、並びに新規乳酸菌を含有する医薬、飲食品、及び飼料
JP6230050B2 (ja) * 2013-10-09 2017-11-15 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 消化管粘膜付着性を有する乳酸菌
US9587284B2 (en) * 2014-02-21 2017-03-07 Asian Probiotics and Prebiotics Ltd. Lactic acid bacterium having immunomodulatory and anti-allergic effects and pharmaceutical composition containing the same
JP6486612B2 (ja) * 2014-05-27 2019-03-20 株式会社山田養蜂場本社 抗アレルギー作用を有する乳酸菌及びその用途
MA41020A (fr) 2014-11-25 2017-10-03 Evelo Biosciences Inc Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome
ES2942850T3 (es) 2015-06-01 2023-06-07 Saisei Pharma Co Ltd Producto lácteo tratado con enzimas, procedimiento para producirlo, composición y producto
CN106262931A (zh) * 2016-08-04 2017-01-04 吉林省农业科学院 植物乳杆菌在制备抗过敏产品中的应用
US11389494B2 (en) 2016-09-09 2022-07-19 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha Composition for suppressing or improving eye fatigue
JP6815139B2 (ja) * 2016-09-09 2021-01-20 キリンホールディングス株式会社 乳酸菌を有効成分とする加齢による網膜細胞死を抑制するための組成物
JP6942030B2 (ja) * 2017-11-02 2021-09-29 株式会社ヤクルト本社 抗アレルギー剤感受性判定マーカー
JP7117853B2 (ja) * 2018-01-17 2022-08-15 アサヒ飲料株式会社 容器詰めコーヒー飲料及び容器詰めコーヒー飲料の味質改善方法
TWI727293B (zh) * 2018-04-25 2021-05-11 日商曾根農場股份有限公司 第iv型過敏用組成物
TWI746955B (zh) * 2018-04-25 2021-11-21 日商曾根農場股份有限公司 第i型過敏用組成物
US20230080134A1 (en) * 2020-01-16 2023-03-16 National University Of Singapore A coffee-based beverage

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001037865A1 (en) * 1999-11-19 2001-05-31 Probiall Pty Limited Compositions and methods for treatment of allergic disorders

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH092959A (ja) * 1995-06-16 1997-01-07 Yakult Honsha Co Ltd ＩｇＥ抗体産生抑制剤および抗アレルギー剤
JP4064480B2 (ja) * 1996-10-11 2008-03-19 ハウスウェルネスフーズ株式会社 ＩｇＧ抗体産生抑制剤
JPH10309178A (ja) * 1997-05-09 1998-11-24 Wakamoto Pharmaceut Co Ltd ビフィズス菌を有効成分とする抗アレルギー剤および醗酵食品
SE510813C2 (sv) * 1997-12-08 1999-06-28 Arla Ekonomisk Foerening Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen
JP4064515B2 (ja) * 1998-02-13 2008-03-19 ハウスウェルネスフーズ株式会社 Ｉｌ−１２産生誘導組成物
EP1082964A1 (en) * 1998-06-05 2001-03-14 Wakamoto Pharmaceutical Co., Ltd. Lactic acid bacterium-containing compositions, drugs and foods
EP1034788A1 (en) * 1999-03-11 2000-09-13 Société des Produits Nestlé S.A. Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea
EP1034787A1 (en) * 1999-03-11 2000-09-13 Société des Produits Nestlé S.A. Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria
JP4603116B2 (ja) * 1999-12-02 2010-12-22 わかもと製薬株式会社 乳酸菌含有組成物、医薬及び食品
WO2001097821A1 (en) * 2000-06-19 2001-12-27 Mucoprotec Pty Ltd Immunotherapy or treating bacterial or viral infection at mucosal surfaces with probiotics, and compositions therefor.
SE0003100D0 (sv) * 2000-09-01 2000-09-01 Probi Ab New strains
AU2058702A (en) * 2000-10-06 2002-04-15 Nestle Sa Use of probiotic lactic acid bacteria for balancing the skin's immune system
KR100356672B1 (ko) * 2001-12-27 2002-10-19 주식회사 바이로박트 신규한 락토바실러스 속 미생물 및 그 용도
EP1364586A1 (en) * 2002-05-24 2003-11-26 Nestec S.A. Probiotics and oral tolerance
JP4308481B2 (ja) * 2002-06-18 2009-08-05 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 抗アレルギー剤
TWI277651B (en) * 2002-09-02 2007-04-01 Genmont Biotech Inc New use of some lactobacillus strains in treating allergy
JP4034632B2 (ja) * 2002-10-01 2008-01-16 ハウスウェルネスフーズ株式会社 乳酸菌含有炊飯用組成物
JP2004267292A (ja) * 2003-03-05 2004-09-30 Sekisui Life-Tec Co Ltd ボトル状容器の水切り用具
US20060088513A1 (en) * 2003-03-13 2006-04-27 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Antiallergic composition

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001037865A1 (en) * 1999-11-19 2001-05-31 Probiall Pty Limited Compositions and methods for treatment of allergic disorders

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
일본농예화학회 연차대회강연발표집 제74면 강연번호 제2A20p12호*

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101504373B1 (ko) 2009-12-23 2015-03-19 리톤 엔터프라이즈, 인크. 면역 조절제로서 락토바실루스 파라카세이 균주 ｌｔ１２

Also Published As

Publication number Publication date
CN1767839A (zh) 2006-05-03
CN1767839B (zh) 2012-08-22
KR20050109985A (ko) 2005-11-22
JP2005139160A (ja) 2005-06-02
JP3585487B1 (ja) 2004-11-04
EP1634600A4 (en) 2007-03-14
US20060088513A1 (en) 2006-04-27
TWI324068B (en) 2010-05-01
EP1634600A1 (en) 2006-03-15
CA2518947A1 (en) 2004-11-11
TW200500074A (en) 2005-01-01
HK1090289A1 (en) 2006-12-22
EP1759597A2 (en) 2007-03-07
EP1759597B1 (en) 2009-01-21
EP1759597A3 (en) 2007-03-28
ES2320920T3 (es) 2009-05-29
WO2004096246A1 (ja) 2004-11-11
ATE421256T1 (de) 2009-02-15
AU2004233658A1 (en) 2004-11-11
AU2004233658B2 (en) 2009-10-29
DE602004019255D1 (de) 2009-03-12
JPWO2004096246A1 (ja) 2006-07-13
JP2005137357A (ja) 2005-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100908254B1 (ko) 항알레르기용 조성물
JP5718917B2 (ja) 新規なラクトバチルス・プランタラム及びこれを含む組成物
CN102791849B (zh) 含乳酸菌制剂
US20100143303A1 (en) Composition comprising lactic acid bacterium having high anti-allergic activity, and method for production of the lactic acid bacterium
JP7280069B2 (ja) 機能性消化管障害予防又は改善用組成物、並びに、該機能性消化管障害予防又は改善用組成物を用いた医薬品組成物及び飲食品組成物
JP2009142266A (ja) 新規乳酸菌
JP6261688B2 (ja) Ｑｏｌ改善又は持続剤
CN115702001A (zh) 用于抑制或改善抑郁的组合物
KR100854816B1 (ko) 항알레르기용 조성물
WO2022196488A1 (ja) Ｑｏｌを改善するための組成物
JP2009114112A (ja) 抗骨粗鬆症剤
JP2009102276A (ja) 抗糖尿病剤
JP7206623B2 (ja) 糖代謝異常の予防および改善用組成物
KR102143615B1 (ko) 신규한 카자츠타니아 투리센시스 cau y1706 및 이를 이용한 조성물
KR20180123259A (ko) 락토바실러스 플란타럼으로부터 유래된 당단백질 l67을 포함하는 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
JP7158884B2 (ja) 炎症抑制用組成物
KR20210074038A (ko) 케피어 유래 유산균의 세포표면단백질을 함유하는 항염증 또는 면역증강용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
A107 Divisional application of patent
E90F Notification of reason for final refusal
E601 Decision to refuse application
E801 Decision on dismissal of amendment
J201 Request for trial against refusal decision
J301 Trial decision

Free format text: TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20080325

Effective date: 20090421

S901 Examination by remand of revocation
GRNO Decision to grant (after opposition)
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130628

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140701

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150703

Year of fee payment: 7

LAPS Lapse due to unpaid annual fee