JP7158884B2 - 炎症抑制用組成物 - Google Patents
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[1]ラクトバチルス・パラカゼイ菌体および/またはその処理物を有効成分として含んでなる、炎症抑制用組成物および炎症抑制剤。
[2]炎症が、自己炎症症候群に起因する炎症である、上記[1]に記載の組成物および用剤。
[3]炎症が、生体内で析出した結晶により誘発される炎症である、上記[1]または[2]に記載の組成物および用剤。
[4]生体内で析出した結晶が尿酸結晶である、上記[3]に記載の組成物および用剤。
[5]炎症が、軟骨組織における炎症である、上記[1]~[4]のいずれかに記載の組成物および用剤。
[6]炎症が、インフラマソームの活性化に起因する炎症である、上記[1]~[5]のいずれかに記載の組成物および用剤。
[7]結晶沈着誘発関節症に罹った対象または結晶沈着誘発関節症の発症リスクがある対象に摂取させるための、上記[1]~[6]のいずれかに記載の組成物および用剤。
[8]ラクトバチルス・パラカゼイ菌体および/またはその処理物を有効成分として含んでなる、インフラマソームの活性化抑制用組成物およびインフラマソームの活性化抑制剤。
[9]食品組成物である、上記[1]~[8]のいずれかに記載の組成物および用剤。
[10]ラクトバチルス・パラカゼイが、KW3110菌株(FERM BP-08634)である、上記[1]~[9]のいずれかに記載の組成物および用剤。
[11]ラクトバチルス・パラカゼイ菌体および/またはその処理物を有効成分として含んでなる、結晶沈着誘発関節症の治療、予防または改善用組成物および結晶沈着誘発関節症の治療、予防または改善剤。
[12]ラクトバチルス・パラカゼイ菌体および/またはその処理物を有効成分として含んでなる、結晶沈着誘発関節症の発症リスクの低減用組成物および結晶沈着誘発関節症の発症リスクの低減剤。
[13]ラクトバチルス・パラカゼイが、KW3110菌株(FERM BP-08634)である、上記[11]または[12]に記載の組成物および用剤。
・痛風が気になる方に
・尿酸値が高めの方に
・関節の痛みが気になる方に
・関節ケアが必要な方に
(1)試験方法
6~8週齢の雌性C57BL/6Jマウス1匹(チャールズリバー社)から骨髄細胞(BM)を回収し、RPMI 1640培地(SIGMA社製)にて骨髄細胞を5×105細胞/mLに調製後、骨髄由来マクロファージ(BMM)を分化させるために最終濃度100ng/mLのマクロファージコロニー刺激因子(R&D社製、本明細書において「M-CSF」ということがある)を添加し、6日間培養した。6日後に骨髄由来マクロファージを回収して洗浄した後、1×106細胞/mLに調製した骨髄由来マクロファージを24wellプレートに1mLずつ播種した。これを6群分で3セット用意した。具体的には、試験群としてラクトバシラス・パラカゼイ・KW3110株(本明細書において、「KW」または「KW乳酸菌」ということがある)を添加する群を「KW群」とし、対照乳酸菌としてラクトバチルス・ラムノーサス・GG株(ATCC53103、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手)(本明細書において、「LGG」または「LGG乳酸菌」ということがある)を添加する群を「LGG群」とし、いずれの乳酸菌も添加しない群を「対照群1~4」とした。KW群およびLGG群には、KW3110株またはLGGの加熱死菌体を最終濃度10μg/mLで添加し24時間培養した。24時間培養後に最終濃度10ng/mLのリポ多糖(InvivoGen社製、本明細書において「LPS」ということがある)を添加し、LPS添加から4時間後に最終濃度2mMのアデノシン三リン酸(Sigma社製、本明細書において「ATP」ということがある)を添加した。なお、対照群1にはLPSおよびATPのいずれも添加せず、対照群2にはATPのみ添加し、対照群3にはLPSのみ添加し、対照群4にはLPSおよびATPを添加した。ATP添加から1時間後に上清を回収した。上清中に含まれるインターロイキン-1β(本明細書において、「IL-1β」ということがある)量は、ELISA法によってMouse IL-1 beta ELISA Ready-SET-Go!(商標名) Kit(eBioscience社製)を用いて測定した。上清中に含まれるインターロイキン-18(本明細書において、「IL-18」ということがある)量はELISA法によって、Mouse IL-18 ELISA KIT(MBL社製)を用いて測定した。なお、LPSとATPの両方をマクロファージに作用させることにより、マクロファージ細胞内においてインフラマソームが活性化され、炎症性サイトカインであるIL-1βおよびIL-18が産生される(Yuan He et al., Trends Biochem Sci. 41(12):1012-1021(2016))。
結果は、図1および図2に示される通りであった。
(1)試験方法
ア 群分け
6週齢の雌C57BL/6Jマウス(チャールズリバー社)を1週間馴化飼育した。馴化後のマウスを体重に偏りがないように4群に分け、標準食を摂取させてリン酸緩衝生理食塩水(本明細書において、「PBS」ということがある。)を投与する群を「標準食摂取PBS投与群」(3匹)とし、乳酸菌を摂取させてPBSを投与する群を「乳酸菌食摂取PBS投与群」(3匹)とし、標準食を摂取させて尿酸結晶を投与する群を「標準食摂取尿酸結晶投与群」(10匹)とし、乳酸菌を摂取させて尿酸結晶を投与する群を「乳酸菌食摂取尿酸結晶投与群」(10匹)とし、試験を開始した。試験期間中は、温度25±1℃、湿度60±15%、明暗周期12時間に保たれた室内で1ケージあたり1匹のマウスを飼育した。
試験開始とともに、被験飼料として、標準食摂取PBS投与群および標準食摂取尿酸結晶投与群にはAIN-93G(オリエンタル酵母工業社)を自由摂取させ、乳酸菌食摂取PBS投与群および乳酸菌食摂取尿酸結晶投与群にはKW3110株の加熱死菌体を10mg/日/匹となるように混餌したAIN-93Gを自由摂取させた。被験飼料の摂取期間は2週間とした。
被験飼料の摂取期間終了後、標準食摂取PBS投与群および乳酸菌食摂取PBS投与群にはPBS200μLを腹腔内投与した。また、標準食摂取尿酸結晶投与群および乳酸菌食摂取尿酸結晶投与群にはPBSで500μg/mLに調製した尿酸結晶(InvivoGen社製)200μLを腹腔内投与した。
PBSまたは尿酸結晶投与から6時間後にマウスを安楽死させ、5mLのPBSを腹腔内投与した。投与したPBSは注射器を用いて回収し、これを腹腔洗浄液とした。
腹腔洗浄液に含まれる全細胞数は、セルカウンター(BIORAD社製)を用いて測定した。腹腔洗浄液に含まれる好中球の割合は、FACSCanto II(BD Biosciences社製)を用いて測定し、FlowJo(トミーデジタルバイオロジー社製)を用いて解析した。細胞の染色には、Ly-6G(Gr-1)-APC抗体(BioLegend社製)、CD11b-APC-Cy7抗体(BD Bioscience社製)および7-AAD(BD Biosciences社製)を使用した。Ly-6G陽性、CD11b陽性、かつ、7-AAD陰性細胞を好中球と判断し、腹腔洗浄液の全細胞数と好中球の割合とから、腹腔洗浄液中に含まれる好中球細胞数を算出した。標準食摂取尿酸結晶投与群および乳酸菌食摂取尿酸結晶投与群における好中球細胞数の群間差の検定はt検定により行い、統計学的な有意水準は5%とした。
結果は、図3に示される通りであった。
Claims (5)
- ラクトバチルス・パラカゼイ菌体および/またはその死菌体を有効成分として含んでなる、自己炎症症候群に起因する炎症抑制用組成物であって、前記ラクトバチルス・パラカゼイがKW3110菌株(FERM BP-08634)であり、かつ、前記炎症が生体内で析出した尿酸結晶により誘発される炎症である、組成物。
- ラクトバチルス・パラカゼイ菌体および/またはその死菌体を有効成分として含んでなる、自己炎症症候群に起因する炎症抑制用組成物であって、前記ラクトバチルス・パラカゼイがKW3110菌株(FERM BP-08634)であり、かつ、結晶沈着誘発関節症に罹った対象または結晶沈着誘発関節症の発症リスクがある対象に摂取させるための、組成物。
- 炎症が、軟骨組織における炎症である、請求項1または2に記載の組成物。
- 炎症が、インフラマソームの活性化に起因する炎症である、請求項1~3のいずれか一項に記載の組成物。
- 食品組成物である、請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物。
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Non-Patent Citations (7)
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自己炎症性疾患(autoinflammatory disorders),KOMPAS, 2017年,p.1-4,https://kompas.hosp.keio.ac.jp/sp/contents/000736.html, 検索日:2022年4月18日 |
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