WO2023074820A1 - ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤 - Google Patents

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WO2023074820A1
WO2023074820A1 PCT/JP2022/040242 JP2022040242W WO2023074820A1 WO 2023074820 A1 WO2023074820 A1 WO 2023074820A1 JP 2022040242 W JP2022040242 W JP 2022040242W WO 2023074820 A1 WO2023074820 A1 WO 2023074820A1
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covid
cov
sars
lactic acid
present
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PCT/JP2022/040242
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洋 石井
哲朗 俣野
健太 城内
木乃実 大塩
大介 藤原
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国立感染症研究所長が代表する日本国
キリンホールディングス株式会社
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    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
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    • C12G3/00—Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02—Preparation of other alcoholic beverages by fermentation

Definitions

  • the present invention relates to SARS-CoV-2 growth inhibitors and COVID-19 prevention agents.
  • Non-Patent Document 1 Due to the global spread of the novel coronavirus (SARS-CoV-2), public interest in therapeutic agents, vaccines, diagnostic agents, etc. for SARS-CoV-2 infectious disease (COVID-19) is increasing. Vaccination has made it possible to avoid aggravation after infection, but it has not completely prevented SARS-CoV-2 infection, and there are cases where even vaccinated people are infected due to the emergence of mutant strains. is acknowledged to a lesser extent. Therefore, there is an urgent need to develop prophylactic drugs against SARS-CoV-2. Currently, 8 drugs including dexamethasone are indicated for SARS-CoV-2 in Japan, and no prophylactic drug has been approved so far (Non-Patent Document 1).
  • the purpose of the present invention is to provide a novel SARS-CoV-2 growth inhibitor and a novel COVID-19 prevention agent.
  • the present inventors have found that the culture supernatant of plasmacytoid dendritic cells (pDC) obtained by culturing with the addition of Lactococcus lactis subspecies lactis, which is a type of lactic acid bacterium, is SARS-CoV-2. It was found to suppress proliferation.
  • the present invention is based on this finding.
  • a SARS-CoV-2 growth inhibitor containing lactic acid bacteria as an active ingredient [2] The growth inhibitor according to [1] above, wherein the lactic acid bacterium can activate plasmacytoid dendritic cells (pDC) and induce at least interferon (IFN) production. [3] The growth inhibitor according to [1] or [2] above, wherein the lactic acid bacterium is Lactococcus lactis subspecies lactis. [4] The growth inhibitor according to any one of [1] to [3] above, wherein the lactic acid bacterium is Lactococcus lactis subspecies lactis JCM 5805.
  • [5] The growth inhibitor according to any one of the above [1] to [4], which is a COVID-19 onset preventive agent.
  • [6] The growth inhibitor according to any one of [1] to [5] above, which is in the form of a food composition.
  • [7] The growth inhibitor according to [6] above, wherein the food composition is a beverage or a supplement.
  • [8] The growth inhibitor according to any one of [1] to [5] above, which is in the form of a pharmaceutical composition.
  • SARS-CoV-2 growth inhibitor COVID-19 onset preventive agent or COVID-19 symptom alleviating agent
  • SARS-CoV-2 growth inhibitor COVID-19 onset preventive agent or COVID-19
  • a lactic acid bacterium or a composition comprising it for use in suppressing SARS-CoV-2 proliferation, preventing the onset of COVID-19, or alleviating symptoms of COVID-19.
  • a method for suppressing SARS-CoV-2 proliferation comprising ingesting or administering an effective amount of lactic acid bacteria or a composition comprising the same to a subject in need thereof, onset of COVID-19 Methods of prevention or alleviation of COVID-19 symptoms.
  • Lactic acid bacteria which are the active ingredients of the present invention, are one of the food ingredients that have been eaten safely together with fermented foods since ancient times. Therefore, the agent of the present invention can be used as a functional food or pharmaceutical that imparts a SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or a COVID-19 onset preventive effect, and is safe for mammals including humans. It is advantageous in that it can In particular, the agent of the present invention is advantageous in that it can be ingested daily as a food, and can easily suppress SARS-CoV-2 growth and prevent the onset of COVID-19.
  • FIG. 1 shows the concentration (pg/ml) of interferon- ⁇ (IFN- ⁇ ) in the culture supernatant when lactic acid bacteria were added to plasmacytoid dendritic cells (pDC) derived from donor 1 or donor 2.
  • Lactic acid bacteria- and lactic acid bacteria + in the figure indicate culture supernatants obtained without addition of lactic acid bacteria to pDC and culture supernatants obtained by adding lactic acid bacteria to pDC, respectively.
  • FIG. 2 shows changes in the amount of SARS-CoV-2 virus RNA when Vero cells (FIG. 2A) or Calu-3 cells (FIG. 2B) were infected with the virus.
  • the vertical axis indicates the amount of SARS-CoV-2 virus RNA in the culture supernatant, and the horizontal axis indicates the number of days after infection.
  • NC and PC in the figure indicate the negative control and positive control, respectively. Each indicates the obtained culture supernatant.
  • the SARS-CoV-2 proliferation inhibitor and the COVID-19 onset preventive agent of the present invention (hereinafter, the two may be collectively referred to as the "agent of the present invention") contain lactic acid bacteria as an active ingredient.
  • Lactic acid bacteria which are the active ingredient of the present invention, can activate plasmacytoid dendritic cells (pDC) and can induce at least interferon (IFN) production.
  • Lactic acid bacteria having the property of inducing IFN- ⁇ production of 50 pg/mL or more, preferably 100 pg/mL or more when added to peripheral blood mononuclear cell-derived plasmacytoid dendritic cell (pDC) culture can be used. can.
  • the lactic acid bacteria of the present invention can induce any of Type I IFN (type I interferon), Type II IFN (type II interferon), and Type III IFN (type III interferon).
  • Type I IFN refers to cytokines that are effective against viral infections, including IFN- ⁇ (1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 13, 14, 16, 17, 21), IFN- ⁇ , etc. is included.
  • Type II IFN contains IFN- ⁇
  • Type III IFN contains IFN- ⁇ .
  • the lactic acid bacterium of the present invention preferably has a Type I IFN production-inducing activity.
  • Type I IFN and Type III IFN When pDC is activated by the lactic acid bacterium of the present invention, cell projections characteristic of activated dendritic cells appear, the production of Type I IFN and Type III IFN is induced, and furthermore, NK cells and Th1 cells produce Production of Type II IFNs such as IFN- ⁇ can also be induced.
  • the IFN that can be induced to be produced by the lactic acid bacterium, which is the active ingredient of the present invention is not particularly limited, but is preferably one or more selected from the group consisting of IFN- ⁇ , IFN- ⁇ and IFN- ⁇ . Two or more selected from the group consisting of ⁇ , IFN- ⁇ and IFN- ⁇ are more preferred, and two or more selected from the group consisting of IFN- ⁇ , IFN- ⁇ and IFN- ⁇ Furthermore, it is more preferable that at least one of the two or more IFNs is IFN- ⁇ , and particularly preferably at least two of the two or more IFNs are IFN- ⁇ and IFN- ⁇ .
  • the lactic acid bacteria which are the active ingredients of the present invention, can activate pDC and induce at least interferon (IFN) production can be determined, for example, by culturing the candidate lactic acid bacteria in the presence of bone marrow cells of mammals such as mice. Alternatively, it may be determined whether the pDCs are activated and induced to produce IFN. For example, the IFN- ⁇ concentration in the culture medium can be measured by ELISA or the like. Suspended in RPMI medium (manufactured by SIGMA) to a concentration of 5 ⁇ 10 5 cells/mL, Flt-3L was added as a pDC-inducing cytokine to the resulting cell suspension at a final concentration of 100 ng/ml.
  • IFN interferon
  • the lactic acid strain was added at 10 ⁇ g/ml, the culture supernatant was collected after 48 hours, and the IFN- ⁇ concentration in the culture supernatant was measured. It can be measured by ELISA using an IFN- ⁇ measurement kit (PBL).
  • Lactic acid bacteria which are the active ingredient of the present invention, are not particularly limited, but include lactic acid bacteria, such as Lactococcus genus, Leuconostoc genus, Pediococcus genus, Examples include lactic acid bacteria belonging to the genus Streptococcus and Enterococcus .
  • the lactic acid bacterium that is the active ingredient of the present invention is preferably a lactic acid bacterium belonging to the genus Lactococcus or Pediococcus.
  • Lactococcus bacteria examples include, for example, Lactococcus lactis , Lactococcus lactis subsp. lactis , Lactococcus garvieae , Lactococcus lactis subspecies Cremoris ( Lactococcus lactis subsp. cremoris ) , Lactococcus lactis subsp. to Lactococcus lactis subspecies lactis.
  • Lactococcus bacteria include Lactococcus lactis subspecies lactis JCM 5805, Lactococcus lactis subspecies lactis NBRC 12007, Lactococcus lactis subspecies lactis NRIC 1150, Lactococcus ⁇ Lactococcus subspecies lactis JCM 20101, Lactococcus lactis subspecies lactis JCM 7638, Lactococcus lactis subspecies lactis ATCC 11454, Lactococcus garviae NBRC 100934, Lactococcus lactis subspecies cremoris JCM 16167, Lactococcus lactis subspecies cremoris NBRC 100676, Lactococcus lactis subspecies Holdoniae JCM 1180 and Lactococcus lactis subsp.
  • Lactococcus lactis subspecies lactis JCM 5805 is preferable from the viewpoint of being able to induce at least interferon (
  • Leuconostoc bacteria include, for example, Leuconostoc lactis. Specific examples of Leuconostoc bacteria include Leuconostoc lactis NBRC 12455 and the like.
  • Pediococcus bacteria include, for example, Pediococcus acidilactici , Pediococcus pentosaceus , Pediococcus cellicola , Pediococcus claussenii ), Pediococcus damnosus , Pediococcus ethanolidurans, Pediococcus inopinatus , Pediococcus parvulus , Pediococcus sti Lessy ( Pediococcus stilesii ) and the like.
  • Specific examples of Pediococcus bacteria include Pediococcus acidilactici JCM 8797, Pediococcus Damnosus JCM 5886, and the like.
  • Streptococcus bacteria examples include Streptococcus thermophilus.
  • lactic acid bacteria can be obtained from known depository institutions. From chome 1 1), the NBRC strain is from the National Institute of Technology and Evaluation Biological Resources Division (2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture), and the NRIC strain is from the Tokyo University of Agriculture strain
  • the ATCC strain can be obtained from the preservation room (1-1-1 Sakuragaoka, Setagaya-ku, Tokyo), respectively, from the American type culture collection (USA).
  • the lactic acid bacteria used as active ingredients in the present invention include cultures of lactic acid bacteria.
  • a culture is defined as a live cell, a dead cell, a crushed product of a live or dead cell, a lyophilized product of a live or killed cell, a crushed product of the freeze-dried product, a live cell or a dead cell.
  • Killed cells can be obtained, for example, by heat treatment, treatment with drugs such as antibiotics, treatment with chemical substances such as formalin, treatment with ultraviolet rays, and treatment with radiation such as gamma rays.
  • the DNA or RNA of the lactic acid bacterium is also included in the lactic acid bacterium culture. It is believed that the DNA or RNA of the lactic acid bacteria can activate pDC and induce IFN production.
  • the processed material includes, for example, heated cells (dead cells), freeze-dried products thereof, and cultures containing these, and further includes a solution of bacteria disrupted by ultrasonic waves or the like, and an enzyme-treated solution of bacteria.
  • the treated product includes a treated product obtained by removing the cell wall by enzymatic or mechanical means.
  • nucleic acid-containing fractions obtained by lysing bacteria with a surfactant or the like and then precipitating them with ethanol or the like are also included.
  • the bacterial cells may also contain dead cells.
  • the culture of lactic acid bacteria can be performed by a known method using a known medium.
  • a known medium MRS medium, GAM medium and LM17 medium can be used, and inorganic salts, vitamins, amino acids, antibiotics, serum and the like may be added as appropriate. Cultivation may be performed at 25 to 40° C. for several hours to several days.
  • the lactic acid bacteria are collected by centrifugation or filtration. When used as dead bacteria, they may be sterilized and inactivated by an autoclave or the like.
  • the lactic acid bacteria which are the active ingredients of the present invention, are preferably taken orally because it reduces the burden of ingestion for obtaining the SARS-CoV-2 growth inhibitory effect and the COVID-19 onset preventive effect on the living body.
  • Such lactic acid bacteria are highly resistant to gastric juice and intestinal juice, and preferably have strong acid resistance, for example.
  • Lactic acid bacteria are not particularly limited, and both live and dead bacteria can be used. Bacteria are preferred.
  • the lactic acid bacteria which are the active ingredients of the present invention, can activate pDC and at least induce IFN production, and IFN is not directly administered to the living body.
  • Direct administration of IFN to a living body can be oral administration or parenteral administration.
  • IFN when IFN is directly orally administered to a living body, IFN has low resistance to gastric juice and intestinal juice, and is likely to be decomposed and absorbed into the living body as IFN.
  • subcutaneous administration can be used, but it is reported that the intake burden is high and side effects (fever, headache, depression, etc.) may occur.
  • the lactic acid bacteria which are the active ingredients of the present invention, can be taken orally with a reduced administration burden, can reduce the possibility of side effects, and have an inhibitory effect on the growth of SARS-CoV-2 and COVID-19. It can be said that it is superior to direct administration of IFN to the living body in terms of the onset prevention effect.
  • the agent of the present invention can be provided in the form of a composition containing lactic acid bacteria.
  • the agent of the present invention can be provided by mixing lactic acid bacteria with other ingredients (eg, food ingredients, food additives, supplement ingredients, formulation additives).
  • the content of lactic acid bacteria in the composition can be determined based on the mode of provision of the agent and the effective intake amount described later, but the lower limit (or more or more) is, for example, 0.01% by mass, 0 .1% by weight, 1% by weight, 10% by weight or 20% by weight, and the upper limit (or less or less) is, for example, 100% by weight, 90% by weight, 80% by weight, 70% by weight, 60% by weight, % or 50% by mass or less.
  • the content of lactic acid bacteria in the composition can be, for example, 0.01 to 90% by mass or 0.1 to 50% by mass.
  • compositions for suppressing the growth of SARS-CoV-2 a composition for preventing the onset of COVID-19, and a composition for alleviating symptoms of COVID-19, which contain lactic acid bacteria, are provided.
  • the composition of the invention can be carried out according to the description of the agent of the invention.
  • the culture supernatant of plasmacytoid dendritic cells (pDC) obtained by culturing with the addition of Lactococcus lactis subspecies lactis, which is a type of lactic acid bacterium, is SARS- It exerted a growth inhibitory effect against CoV-2. This effect was confirmed in SARS-CoV-2 susceptible cells pretreated with pDC culture supernatant. Therefore, in the present invention, lactic acid bacteria can be used as an active ingredient for suppressing the growth of SARS-CoV-2 and can be used as an active ingredient for preventing the onset of COVID-19.
  • Lactococcus lactis subspecies lactis which is a kind of lactic acid bacteria, can exert an INF- ⁇ production-inducing effect on the body even when orally ingested (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2017-201984). For this reason, oral intake of lactic acid bacteria exerts anti-SARS-CoV-2 effects including induction of INF- ⁇ production in vivo, suppressing the growth of SARS-CoV-2 and preventing the onset of COVID-19. .
  • SARS-CoV-2 exists not only in the originally discovered virus strain, but also in variants thereof (eg, B.1.1.7 strain (alpha strain), B.1.351 strain (beta strain), P. 1 strain (Gamma strain), B.1.617.2 strain (Delta strain), B.1.1.529 strain (Omicron strain)).
  • SARS-CoV-2 is synonymous with severe acute respiratory syndrome coronavirus-2
  • SARS-CoV-2 infection (disease caused by infection with SARS-CoV-2 and symptoms) is called COVID-19.
  • the agent of the present invention can be provided in the form of foods, pharmaceuticals, quasi-drugs, feed (including pet food), additives, etc., and can be implemented according to the following description.
  • the active ingredient of the present invention can be orally ingested by humans and non-human animals, and a typical ingestion form is food (eg, food composition).
  • food eg, food composition
  • the active ingredient of the present invention can be provided as it is as food, or it can be provided by incorporating it into food.
  • the food thus provided is a food containing an effective amount of the active ingredient of the present invention.
  • the phrase "contains an effective amount" of the active ingredient of the present invention means that the active ingredient of the present invention is ingested within the range described below when the amount normally consumed in each food is ingested. content.
  • food includes health food, functional food, nutritional supplement, food with health claims (e.g., food for specified health use, food with nutrient function claims, food with function claims), food for special dietary use (e.g., infant food, It is used in the sense of including food for pregnant women, food for sick people) and supplements.
  • health food functional food, nutritional supplement
  • food with health claims e.g., food for specified health use, food with nutrient function claims, food with function claims
  • food for special dietary use e.g., infant food, It is used in the sense of including food for pregnant women, food for sick people
  • the active ingredient of the present invention has the SARS-CoV-2 growth inhibitory effect and the COVID-19 onset preventive effect as described above, it can be provided by being contained in foods that are taken daily.
  • the agent of the present invention can be provided in unit packaging form in which the amount to be ingested per meal is predetermined.
  • the unit packaging form for one meal includes, for example, a form in which a fixed amount is defined by a pack, package, can, bottle, or the like.
  • the intake per meal can be determined according to the daily intake of the active ingredient of the present invention, which will be described later.
  • the food of the present invention may be provided with a package containing instructions on the intake amount, or may be provided with a document or the like describing the instructions.
  • the unit packaging form of the agent of the present invention can contain the active ingredient of the present invention at the daily intake for humans described below, or from 1/2 of the daily intake for humans described below.
  • the active ingredient of the present invention can be included in one-sixth the amount.
  • the agent of the present invention is preferably provided in a unit packaging form per meal (i.e., a unit packaging form per day) in which the intake per meal is the effective daily intake.
  • the form of the "food” is not particularly limited, and may be, for example, a beverage form, a semi-liquid or gel form, a solid form or a powder form.
  • a “supplement” a tablet manufactured by adding excipients, binders, etc. to the active ingredient of the present invention and kneading and then tableting, and adding excipients, binders, etc. to the active ingredient of the present invention Examples include granules produced by granulation, orally disintegrating tablets, and capsules in which the active ingredient of the present invention is encapsulated.
  • Foods provided by the present invention are not particularly limited as long as they contain the active ingredient of the present invention.
  • Non-alcoholic beverages such as non-alcoholic beer-taste beverages
  • Carbohydrate-containing foods and beverages such as rice, noodles, bread and pasta
  • Dairy products such as cream
  • Western confectionery such as cookies, cakes and chocolates
  • Japanese confectionery such as manju and sweet bean jelly
  • whiskey, bourbon, spirits, liqueurs, wine, fruit wine, Japanese sake, Chinese sake, shochu, beer, non-alcoholic beer with an alcohol content of 1% or less, low-malt beer, other miscellaneous liquor, chuhai Alcoholic beverages
  • Tea beverages include fermented tea, semi-fermented tea, and unfermented tea, such as black tea, green tea, barley tea, brown rice tea, sencha, gyokuro tea, roasted tea, oolong tea, turmeric tea, pu-erh tea, and rooibos tea. , rose tea, chrysanthemum tea, ginkgo biloba tea, herbal tea (eg, mint tea, jasmine tea).
  • fruits used in fruit juice-containing beverages and fruit and vegetable juice-containing beverages include apples, mandarin oranges, grapes, bananas, pears, peaches, mangoes, acai, blueberries, and plums.
  • vegetables used in vegetable juice-containing beverages and fruit and vegetable juice-containing beverages include tomatoes, carrots, celery, pumpkins, cucumbers, and watermelons.
  • Oral preparations include granules, powders, tablets (including sugar-coated tablets), pills, capsules, syrups, liquids, jellies, emulsions and suspensions.
  • Parenteral agents include injections suitable for local administration (including intradermal, subcutaneous, intramuscular, and intravenous injections), inhalants (e.g., inhalation aerosols, inhalation powders, and inhalation liquids), and drops.
  • Nasal agents eg, nasal powders, nasal solutions), ointments, creams, gels, suppositories, patches, poultices.
  • compositions can be formulated using a pharmaceutically acceptable carrier by a method commonly practiced in the art.
  • Pharmaceutically acceptable carriers include excipients, binders, diluents, additives, perfumes, buffers, thickeners, colorants, stabilizers, emulsifiers, dispersants, suspending agents, preservatives, etc. is mentioned.
  • the virus binds and adsorbs to the ACE2 receptor (angiotensin converting enzyme 2) on the cell surface, and using this as a foothold, the virus enters the cell, leading to infection.
  • ACE2 receptor angiotensin converting enzyme 2
  • the pharmaceuticals and quasi-drugs of the present invention can be formulated into formulations intended for administration to tissues with high ACE2 receptor expression.
  • Tissues with high ACE2 receptor expression include respiratory organs (e.g., nasal cavity, pharynx, larynx, trachea, bronchi, and lungs). It can be formulated into formulations (eg, inhalants, aerosols, nose drops).
  • respiratory organs e.g., nasal cavity, pharynx, larynx, trachea, bronchi, and lungs. It can be formulated into formulations (eg, inhalants, aerosols, nose drops).
  • the active ingredient of the present invention when the active ingredient of the present invention is provided as food, pharmaceuticals, or quasi-drugs, it can also be used as a COVID-19 symptom-alleviating agent. That is, by taking the active ingredient of the present invention before or after infection with SARS-CoV-2 (preferably early after infection, more preferably within 5 days after infection), the infection (COVID-19) Alleviation of symptoms (in particular, alleviation of aggravation of the infection) is expected.
  • the active ingredient of the present invention When providing the active ingredient of the present invention as an additive, it can be carried out in accordance with the above descriptions regarding foods, pharmaceuticals, quasi-drugs, and feed.
  • the active ingredient of the present invention When the active ingredient of the present invention is provided as a food additive, the active ingredient of the present invention has a SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or a COVID-19 onset preventive effect and can be used as a functional ingredient. .
  • the intake amount of the active ingredient of the present invention can be determined depending on the recipient's sex, age and weight, symptoms, intake time, dosage form, intake route, drugs to be combined, and the like.
  • the daily intake of the active ingredient of the present invention for adults can be specified, for example, by the number of bacteria, and the lower limit (or more or more) is 1 x 10 8 , 1 x 10 9 or 1 x 10 10 and the upper limit (below or less than) can be 1 ⁇ 10 14 , 1 ⁇ 10 13 , and 1 ⁇ 10 12 .
  • These upper and lower limits can be combined arbitrarily, and the intake range is, for example, 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 14 pieces, 1 ⁇ 10 9 to 1 ⁇ 10 13 pieces or 1 ⁇ 10 It can be 10 to 1 ⁇ 10 12 .
  • the number of lactic acid bacteria can be measured by, for example, fluorescence staining, flow cytometry, and culture.
  • the daily intake of the active ingredient of the present invention for adults can also be specified by the dry cell mass, the lower limit (or more or more) can be 1 mg, 10 mg, 25 mg, and the upper limit ( less or less) can be 1000 mg, 500 mg, 100 mg. These upper and lower limits can be combined arbitrarily, and the intake ranges can be, for example, 1 to 1000 mg, 10 to 500 mg, and 25 to 100 mg.
  • the above intake amount of the active ingredient of the present invention and the following intake timing and intake period are applicable when the active ingredient of the present invention is used for both non-therapeutic and therapeutic purposes. can be read as administration.
  • the active ingredient of the present invention can also be ingested by mammals other than humans (e.g., cows, horses, sheep, pigs, dogs, cats, etc.). It can be determined with reference to the description about.
  • the intake period of the active ingredient of the present invention is, for example, one week or more, two weeks or more, at the above daily dose. , 3 weeks or longer, preferably 1 month or longer (4 weeks or longer).
  • the intake interval of the active ingredient of the present invention can be once every three days, once every two days, or once a day, preferably once a day.
  • the active ingredient of the present invention may also be taken before the event or time when SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or COVID-19 onset preventive effect is expected.
  • Examples of events that are expected to have the effect of suppressing SARS-CoV-2 growth or preventing the onset of COVID-19 include actions that may infect SARS-CoV-2 (e.g., participation in events with a high risk of infection,
  • An example of the period when the SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or COVID-19 prevention effect is expected is the SARS-CoV-2 epidemic season.
  • the timing of ingestion before the event where the SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or the COVID-19 onset preventive effect is expected, for example, 1 day or more, 3 days or more, 1 week or more, 2 weeks or more , 3 weeks or more, 1 month or more (4 weeks or more), or 2 months or more (8 weeks or more). Also, although not particularly limited, from the start of ingestion until the event where SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or COVID-19 onset preventive effect is expected, depending on the case, while keeping an ingestion interval It can be taken continuously.
  • the active ingredient of the present invention may also be taken after the event or time when SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or COVID-19 onset preventive effect is expected.
  • the timing of ingestion after the event in which the SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or the COVID-19 onset preventive effect is expected for example, 1 day or more, 3 days or more, 1 week or more, 2 weeks or more is mentioned.
  • ingesting after an event in which the SARS-CoV-2 growth inhibitory effect or COVID-19 onset preventive effect is expected in some cases, continue while keeping intervals between intakes It can also be ingested.
  • SARS-CoV-2 proliferation comprising ingesting or administering to a subject in need thereof an effective amount of lactic acid bacteria or a composition comprising the same.
  • SARS-CoV-2 growth inhibitors COVID- Provided is the use of lactic acid bacteria as an agent for preventing the onset of COVID-19 or for alleviating symptoms of COVID-19, or in a method of inhibiting SARS-CoV-2 proliferation, preventing the onset of COVID-19, or alleviating COVID-19 symptoms.
  • the use of the invention can be carried out according to the description of the agent of the invention and the method of the invention.
  • lactic acid bacteria are provided for use in suppressing SARS-CoV-2 proliferation, preventing the onset of COVID-19, or alleviating COVID-19 symptoms.
  • the above lactic acid bacteria can be used according to the description regarding the agent of the present invention.
  • non-therapeutic means not including an act of surgery, treatment or diagnosis of a human (that is, a medical act on a human), specifically, a doctor or a doctor's instruction means that it does not include methods of performing surgery, therapy or diagnosis on humans.
  • Example 1 Study of inhibitory effect on SARS-CoV-2 proliferation
  • pDC plasmacytoid dendritic cells
  • Method a Isolation of plasmacytoid dendritic cells (pDC) Human peripheral blood mononuclear cells (hPBMC) derived from donor 1 and donor 2 by the magnetic bead method using EasySep Human Plasmacytoid DC Isolation Kit (manufactured by STEMCELL) (manufactured by iQ Bioscience) to isolate plasmacytoid dendritic cells (pDC).
  • pDC plasmacytoid dendritic cells
  • hPBMC Human peripheral blood mononuclear cells derived from donor 1 and donor 2 by the magnetic bead method using EasySep Human Plasmacytoid DC Isolation Kit (manufactured by STEMCELL) (manufactured by iQ Bioscience) to isolate plasmacytoid dendritic cells (pDC).
  • B. pDC culture conditions The culture conditions for the pDCs (7 ⁇ 10 4 cells) isolated in the above a are as follows. RPMI-1640 medium (manufactured by Sigma-Aldrich) containing 10% FCS and 1% penicillin-streptomycin was used as the medium and seeded in a 96-well round-bottom plate (manufactured by CORNING). Then, heat-killed cells of Lactococcus lactis subsp. lactis JCM5805 strain ( Lactococcus lactis subsp.
  • lactis as a lactic acid bacterium were adjusted to a concentration of 1 mg/ml with PBS (manufactured by TAKARA BIO), and the final concentration was was added to the medium at a concentration of 10 ⁇ g/ml (no lactic acid bacteria were added to the control), and cultured at 37° C. for 48 hours in a CO 2 incubator.
  • SARS-CoV-2 RNA quantification Vero cells African green monkey kidney cell line, see Non-Patent Document 2, JCRB1819 VeroE6 / TMPRSS2 (JCRB cell bank) can be used) or Calu in a 96-well flat-bottom plate (manufactured by CORNING) -3 cells (human lung epithelial cell line, see Non-Patent Document 3, HTB-55 TM (ATCC) can be used) were seeded at 1 ⁇ 10 4 cells, and after 6 hours, the pDC culture supernatant of the above b (no addition of lactic acid bacteria (Control)) or with lactic acid bacteria) was added to the medium and pretreated at 37° C. for 18 hours in a CO 2 incubator.
  • Real-time PCR analysis was performed using the QuantiTect Probe RT-PCR Kit (QIAGEN) and gene-specific SARS-CoV-2 primers according to the general reaction composition at 50°C for 30 minutes, 95°C for 15 seconds followed by 45 cycles of reaction were carried out at 95°C for 15 seconds and 60°C for 60 seconds.
  • QIAGEN QuantiTect Probe RT-PCR Kit
  • rIFN- ⁇ human recombinant interferon alpha
  • Vero cells were more pretreated with pDC culture supernatant from donor 1 or donor 2 (with lactobacilli added (lactobacilli+)) than pretreated with rIFN- ⁇ (500 U/ml) (positive control (PC)). It was confirmed that the amount of SARS-CoV-2 virus RNA decreased with treatment (Fig. 2A).

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Abstract

本発明は、新規なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤および新規なＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤の提供を目的とする。本発明によれば、乳酸菌を有効成分とする、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤が提供される。本発明によればまた、乳酸菌を有効成分とする、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤が提供される。本発明の有効成分である乳酸菌は好ましくはラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスである。本発明の剤は好ましくは食品組成物の形態である。

Description

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤 関連出願の参照
　本願は、先行する日本国出願である特願２０２１－１７７３３９（出願日：２０２１年１０月２９日）の優先権の利益を享受するものであり、その開示内容全体は引用することにより本明細書の一部とされる。
　本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤に関する。
　新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の世界的な蔓延により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）に対する治療薬、ワクチン、診断薬等に社会の関心が高まっている。ワクチン接種により感染後の重症化は回避できるようになったが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を完全に防ぐには至っておらず、変異株の出現もありワクチン接種者であっても感染する例が少なからず認められている。このためＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する予防薬の開発が急務となっている。現在、日本でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して適応のある薬剤はデキサメタゾンを含めて８薬剤であり、予防薬はこれまでに承認されていない（非特許文献１）。
COVID-19 に対する薬物治療の考え方 第13版、一般社団法人 日本感染症学会、2022年2月10日 Matsuyama S, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 117:7001-7003, 2020. Kawase M, et al., J. Virol. 86:6537-6545, 2012.
　本発明は、新規なＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤と、新規なＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤を提供することを目的とする。
　本発明者らは、乳酸菌の一種であるラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスを添加して培養して得られたプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）の培養上清がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖を抑制することを見出した。本発明はこの知見に基づくものである。
　本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］乳酸菌を有効成分とする、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤。
［２］乳酸菌が、プラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化し、かつ、少なくともインターフェロン（ＩＦＮ）産生を誘導し得るものである、上記［１］に記載の増殖抑制剤。
［３］乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスである、上記［１］または［２］に記載の増殖抑制剤。
［４］乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスＪＣＭ ５８０５である、上記［１］～［３］のいずれかに記載の増殖抑制剤。
［５］ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤である、上記［１］～［４］のいずれかに記載の増殖抑制剤。
［６］食品組成物の形態である、上記［１］～［５］のいずれかに記載の増殖抑制剤。
［７］食品組成物が飲料またはサプリメントである、上記［６］に記載の増殖抑制剤。
［８］医薬組成物の形態である、上記［１］～［５］のいずれかに記載の増殖抑制剤。
［９］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤またはＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤の製造のための、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤またはＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤としての、あるいはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制方法、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防方法またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和方法における、乳酸菌の使用。
［１０］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和に用いるための、乳酸菌またはそれを含んでなる組成物。
［１１］有効量の乳酸菌またはそれを含んでなる組成物を、それを必要としている対象に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制方法、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防方法またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和方法。
　本発明の有効成分である乳酸菌は古くから発酵食品などとともに安全に食されてきた食品素材の一つである。したがって、本発明の剤は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果を付与する機能性食品または医薬品として利用できるとともに、ヒトを含む哺乳類に安全な機能性食品または医薬品として利用できる点で有利である。特に、本発明の剤は食品として日常摂取することができ、手軽にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防を図ることができる点で有利である。
図１は、ドナー１またはドナー２由来のプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）に乳酸菌を添加した場合の培養上清中のインターフェロン－α（ＩＦＮ－α）の濃度（ｐｇ／ｍｌ）をそれぞれ示す。図中の乳酸菌－および乳酸菌＋はｐＤＣに対し乳酸菌を添加せずに得られた培養上清およびｐＤＣに対し乳酸菌を添加したことで得られた培養上清であることをそれぞれ示す。 図２は、Ｖｅｒｏ細胞（図２Ａ）またはＣａｌｕ－３細胞（図２Ｂ）にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスを感染させた場合の該ウイルスのＲＮＡ量の変化を示す。縦軸は培養上清中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのＲＮＡ量を示し、横軸は感染後の日数を示す。図中のＮＣおよびＰＣは陰性対照および陽性対照をそれぞれ示し、図中の乳酸菌－および乳酸菌＋はｐＤＣに対し乳酸菌を添加せずに得られた培養上清およびｐＤＣに対し乳酸菌を添加したことで得られた培養上清であることをそれぞれ示す。
発明の具体的説明
　本発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤（以下、２つを併せて「本発明の剤」ということがある）は、乳酸菌を有効成分とするものである。
　本発明の有効成分である乳酸菌は、プラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化し、かつ、少なくともインターフェロン（ＩＦＮ）産生を誘導し得るものを使用することができ、好ましくは１０μｇ／ｍｌでヒト末梢血単核細胞由来のプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）培養に添加した場合に５０ｐｇ／ｍＬ以上、好ましくは１００ｐｇ／ｍｌ以上のＩＦＮ－α産生を誘導する性質を有する乳酸菌を使用することができる。
　本発明の乳酸菌は、Ｔｙｐｅ　Ｉ　ＩＦＮ（Ｉ型インターフェロン）、Ｔｙｐｅ　ＩＩ　ＩＦＮ（ＩＩ型インターフェロン）、Ｔｙｐｅ　ＩＩＩ　ＩＦＮ（ＩＩＩ型インターフェロン）のいずれのＩＦＮをも誘導し得る。Ｔｙｐｅ　Ｉ　ＩＦＮはウイルス感染に有効とされるサイトカインをいい、ＩＦＮ－α（１、２、４、５、６、７、８、１０、１３、１４、１６、１７、２１）、ＩＦＮ－β等が含まれる。Ｔｙｐｅ　ＩＩ　ＩＦＮにはＩＦＮ－γが含まれ、Ｔｙｐｅ　ＩＩＩ　ＩＦＮにはＩＦＮ－λが含まれる。本発明の乳酸菌は、この中でも特にＴｙｐｅ　Ｉ　ＩＦＮの産生誘導活性を有するものが好ましい。本発明の乳酸菌によりｐＤＣが活性化されると、活性化樹状細胞の特徴である細胞突起が出現し、Ｔｙｐｅ　Ｉ　ＩＦＮおよびＴｙｐｅ　ＩＩＩ　ＩＦＮの産生が誘導され、さらに、ＮＫ細胞やＴｈ１細胞からのＩＦＮ－γ等のＴｙｐｅ　ＩＩ　ＩＦＮの産生も誘導され得る。
　本発明の有効成分である乳酸菌が産生を誘導し得るＩＦＮは、特に限定されないが、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λからなる群から選択される一種以上であることが好ましく、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λからなる群から選択される二種以上であることがより好ましく、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－βおよびＩＦＮ－λからなる群から選択される二種以上であって、かつ、二種以上のＩＦＮの内の少なくとも一種がＩＦＮ－αであることがさらに好ましく、二種以上のＩＦＮの内の少なくとも二種がＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－βであることが特に好ましい。
　本発明の有効成分である乳酸菌がｐＤＣを活性化し、少なくともインターフェロン（ＩＦＮ）産生を誘導し得るものであるかどうかは、例えば、候補乳酸菌をマウス等の哺乳類の骨髄細胞の共存下で培養した場合に、ｐＤＣが活性化され、ＩＦＮの産生が誘導されるかどうかを測定すればよい。例えば、ＩＦＮ－α濃度は、培養液中のＩＦＮ－α濃度をＥＬＩＳＡ等により測定すればよく、具体的には、赤血球除去したマウス骨髄細胞を１０％ＦＣＳ、２μＭのβ－メルカプトエタノールを含有するＲＰＭＩ培地（SIGMA社製）に、５×１０５個／ｍＬになるように縣濁し、得られた細胞懸濁液に、ｐＤＣ誘導サイトカインとしてＦｌｔ－３Ｌを終濃度１００ｎｇ／ｍｌで添加し、ＣＯ２インキュベータ内で３７℃、５％ＣＯ２にて培養し、７日後に乳酸菌株を１０μｇ／ｍｌで添加し、４８時間後に培養上清を回収して、培養上清中のＩＦＮ－α濃度をＩＦＮ－α測定キット（ＰＢＬ）を用いてＥＬＩＳＡ法にて測定することができる。
　本発明の有効成分である乳酸菌は、特に限定されるものではないが、乳酸球菌が挙げられ、例えば、ラクトコッカス（Lactococcus）属、ロイコノストック（Leuconostoc）属、ぺディオコッカス（Pediococcus）属、ストレプトコッカス（Streptococcus）属、エンテロコッカス（Enterococcus）属に属する乳酸菌が挙げられる。本発明の有効成分である乳酸菌は、好ましくは、ラクトコッカス属またはペディオコッカス属に属する乳酸菌である。
　ラクトコッカス属細菌としては、例えば、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス（Lactococcus lactis subsp. lactis）、ラクトコッカス・ガルビエアエ（Lactococcus garvieae）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエ（Lactococcus lactis subsp. cremoris）などが挙げられ、ｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともインターフェロン（ＩＦＮ）産生を誘導し得る観点からラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスが好ましい。
　ラクトコッカス属細菌の具体例としては、例えば、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM 5805、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスNBRC 12007、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスNRIC 1150、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM 20101、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM 7638、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスATCC 11454、ラクトコッカス・ガルビエアエNBRC 100934、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスJCM 16167、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリスNBRC 100676、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエJCM 1180およびラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエJCM 11040などが挙げられ、ｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともインターフェロン（ＩＦＮ）産生を誘導し得る観点からラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM 5805が好ましい。
　ロイコノストック属細菌としては、例えば、ロイコノストック・ラクティスなどが挙げられる。ロイコノストック属細菌の具体例としては、例えば、ロイコノストック・ラクティスNBRC 12455などが挙げられる。
　ペディオコッカス属細菌としては、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Pediococcus acidilactici）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus）、ペディオコッカス・セリコーラ（Pediococcus cellicola）、ペディオコッカス・クラウッセニー（Pediococcus claussenii）、ペディオコッカス・ダムノサス（Pediococcus damnosus）、ペディオコッカス・エタノーリデュランス（Pediococcus ethanolidurans）、ペディオコッカス・イノピナタス（Pediococcus inopinatus）、ペディオコッカス・パルヴルス（Pediococcus parvulus）、ペディオコッカス・スティレッシー（Pediococcus stilesii）などが挙げられる。ペディオコッカス属細菌の具体例としては、例えば、ペディオコッカス・アシディラクティシJCM 8797、ペディオコッカス・ダムノサスJCM 5886などが挙げられる。
　ストレプトコッカス属細菌としては、例えば、ストレプトコッカス・サーモフィラスなどが挙げられる。
　本発明において、乳酸菌は公知の寄託機関等から入手することができ、例えば上記の乳酸球菌株のうち、JCM菌株は、理化学研究所・バイオリソースセンター・微生物材料開発室（茨城県つくば市高野台３丁目１番地の１）から、NBRC菌株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構生物遺伝資源部門（千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番８号）から、NRIC菌株は、東京農業大学・菌株保存室（東京都世田谷区桜丘１丁目１番１号）から、ATCC菌株は、American type culture collection（米国）から、それぞれ入手することができる。
　本発明において有効成分として用いられる乳酸菌は、乳酸菌の培養物を含む。培養物とは、生菌体、死菌体、生菌体または死菌体の破砕物、生菌体または死菌体の凍結乾燥物、該凍結乾燥物の破砕物、生菌体または死菌体の酵素処理物、培養液、培養液抽出物等を含み、乳酸菌の一部や乳酸菌の処理物も含む。死菌体は、例えば、加熱処理、抗生物質などの薬物による処理、ホルマリンなどの化学物質による処理、紫外線による処理、γ線などの放射線による処理により得ることができる。さらに、上記乳酸菌のＤＮＡまたはＲＮＡも乳酸菌の培養物に含まれる。上記乳酸菌のＤＮＡまたはＲＮＡはｐＤＣを活性化し、ＩＦＮ産生を誘導し得ると考えられる。処理物は、例えば、加熱菌体（死菌体）、その凍結乾燥物、これらを含む培養物を含み、さらに、超音波等による細菌の破砕液、細菌の酵素処理液を含む。また、前記処理物は、細胞壁を酵素若しくは機械的手段により除去した処理物等も含む。さらに、細菌を界面活性剤等によって溶解した後、エタノール等によって沈殿させて得られる核酸含有画分も含まれる。さらに、細菌菌体には死菌体も含まれていてよい。
　乳酸菌の培養は、公知の培地を用いた公知の方法で行うことができる。培地としては、ＭＲＳ培地、ＧＡＭ培地、ＬＭ１７培地を用いることができ、適宜無機塩類、ビタミン、アミノ酸、抗生物質、血清等を添加して用いればよい。培養は、２５～４０℃で数時間～数日行えばよい。
　培養後、乳酸菌菌体を遠心分離やろ過により集菌する。死菌として用いる場合、オートクレーブ等により殺菌不活化して用いてもよい。
　本発明の有効成分である乳酸菌は、生体に対してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖抑制効果およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果を得るための摂取負担が軽減される点から、経口摂取することが好ましい。そのような乳酸菌は、胃液や腸液に対する耐性が高く、例えば、強い酸耐性を有していることが好ましい。乳酸菌については、特に限定されず、生菌および死菌のいずれをも用いることができるが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖抑制効果およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果および製造効率の点から、乳酸菌は死菌であることが好ましい。
　ここで、本発明の有効成分である乳酸菌はｐＤＣを活性化し、かつ、少なくともＩＦＮ産生を誘導し得るものであって、ＩＦＮを生体に直接投与するものではない。ＩＦＮを生体に直接投与する場合には、経口投与および非経口投与があり得る。ここで、ＩＦＮを生体に直接経口投与する場合には、ＩＦＮは胃液や腸液に対する耐性が弱く、分解が引き起こされ、ＩＦＮのまま生体に吸収される可能性は低い。さらに、ＩＦＮを生体に直接非経口投与する場合には、例えば、皮下投与等が有り得るが、摂取負担が高く、副作用（発熱、頭痛、うつ病など）の可能性も報告されている。したがって、本発明の有効成分である乳酸菌は、投与負担が軽減される経口摂取がなされ得る点、副作用の可能性が軽減され得る点、並びに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖抑制効果およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果の点で、ＩＦＮを生体に直接投与する場合より優れているといえる。
　本発明の剤は、乳酸菌を含んでなる組成物の形態で提供することができる。この場合、本発明の剤は、乳酸菌と他の成分（例えば、食品原材料、食品添加物、サプリメントの原材料、製剤添加物）とを混合して提供することができる。組成物中の乳酸菌の含有量は、剤の提供態様や、後述する有効摂取量に基づいて決定することができるが、その下限値（以上または超える）は、例えば、０．０１質量％、０．１質量％、１質量％、１０質量％または２０質量％とすることができ、その上限値（以下または未満）は、例えば、１００質量、９０質量％、８０質量％、７０質量％、６０質量％または５０質量％以下とすることができる。これらの下限値および上限値はそれぞれ任意に組み合わせることができ、乳酸菌の組成物中の含有量は、例えば、０．０１～９０質量％または０．１～５０質量％とすることができる。
　本発明によれば、乳酸菌を含んでなる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖抑制用組成物、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防用組成物およびＣＯＶＩＤ－１９症状緩和用組成物が提供される。本発明の組成物は本発明の剤の記載に従って実施することができる。
　後記実施例に記載されるように、乳酸菌の一種であるラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスを添加して培養して得られたプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）の培養上清はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して増殖抑制効果を発揮した。この効果はｐＤＣ培養上清で前処理されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感受性細胞において確認された。したがって、本発明において乳酸菌は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制のための有効成分として使用することができるとともに、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防のための有効成分として使用することができる。
　乳酸菌の一種であるラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスは経口摂取した場合にも、生体に対してＩＮＦ－α産生誘導作用を発揮し得る（特開２０１７－２０１９８４号公報）。このため乳酸菌の経口摂取は、生体内でＩＮＦ－α産生誘導を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２作用を発揮し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の増殖抑制作用およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防作用を発揮すると考えられる。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、最初に発見されたウイルス株のみならず、その変異株（例えば、Ｂ．１．１．７系統（アルファ株）、Ｂ．１．３５１系統（ベータ株）、Ｐ．１系統（ガンマ株）、Ｂ．１．６１７．２系統（デルタ株）、Ｂ．１．１．５２９系統（オミクロン株））を含む。なお、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（severe acute respiratory syndrome coronavirus-2）と同義であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染により引き起こされる疾患および症状）をＣＯＶＩＤ－１９（新型コロナウイルス感染症）と呼ぶ。
　本発明の剤は、食品、医薬品、医薬部外品、飼料（ペットフード含む）、添加剤等の形態で提供することができ、下記の記載に従って実施することができる。
　本発明の有効成分は、ヒトおよび非ヒト動物に経口摂取させることができ、代表的な摂取形態は食品（例えば、食品組成物）である。本発明の有効成分を食品として提供する場合には、有効成分をそのまま食品として提供するか、あるいはそれを食品に含有させて提供することができる。このようにして提供された食品は本発明の有効成分を有効量含有した食品である。本明細書において、本発明の有効成分を「有効量含有した」とは、個々の食品において通常喫食される量を摂取した場合に後述するような範囲で本発明の有効成分が摂取されるような含有量をいう。また「食品」とは、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能性食品、機能性表示食品）、特別用途食品（例えば、幼児用食品、妊産婦用食品、病者用食品）およびサプリメントを含む意味で用いられる。なお、本発明の有効成分をヒト以外の動物に摂取させる場合には、本発明でいう食品が飼料として使用されることはいうまでもない。
　本発明の有効成分は、上記のようなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果およびＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果を有するため、日常摂取する食品に含有させて提供することができる。この場合、本発明の剤は１食当たりに摂取する量が予め定められた単位包装形態で提供することができる。１食当たりの単位包装形態としては、例えば、パック、包装、缶、ボトル等で一定量を規定する形態が挙げられる。本発明の剤の各種作用をよりよく発揮させるためには、後述する、本発明の有効成分の１日当たりの摂取量に従って１食当たりの摂取量を決定できる。本発明の食品は、摂取量に関する説明事項が包装に表示されるか、あるいは説明事項が記載された文書等と一緒に提供されてもよい。
　単位包装形態においてあらかじめ定められた１食当たりの摂取量は、１日当たりの有効摂取量であっても、１日当たりの有効摂取量を２回またはそれ以上（好ましくは２または３回）に分けた摂取量であってもよい。したがって、本発明の剤の単位包装形態には、後述のヒト１日当たりの摂取量で本発明の有効成分を含有させることができ、あるいは、後述のヒト１日当たりの摂取量の２分の１から６分の１の量で本発明の有効成分を含有させることができる。本発明の剤は、摂取の便宜上、１食当たりの摂取量が１日当たりの有効摂取量である、１食当たりの単位包装形態（すなわち、１日当たりの単位包装形態）で提供することが好ましい。
　「食品」の形態は特に限定されるものではなく、例えば、飲料の形態であっても、半液体やゲル状の形態であっても、固形状や粉末状の形態であってもよい。また、「サプリメント」としては、本発明の有効成分に賦形剤、結合剤等を加え練り合わせた後に打錠して製造した錠剤、本発明の有効成分に賦形剤、結合剤等を加えて造粒化して製造した顆粒剤、口腔内崩壊錠、本発明の有効成分をカプセル等に封入したカプセル剤が挙げられる。サプリメントとして提供するときは、上述の１食当たりあるいは１日当たりの単位包装形態とするほか、１週間当たり、２週間当たり、１ヶ月当たり、あるいは２ヵ月当たりの単位包装形態として提供することも好適である。なお、後者の単位包装形態には、例えば、１食当たりまたは１日当たりの摂取量を表示し、摂取者自身がその表示に従って本発明の有効成分を有効量摂取できるようにすることが望ましい。
　本発明で提供される食品は、本発明の有効成分を含有する限り、特に限定されるものではないが、例えば、清涼飲料水、炭酸飲料、果汁入り飲料、野菜汁入り飲料、果汁および野菜汁入り飲料、牛乳等の畜乳、豆乳、乳飲料、ドリンクタイプのヨーグルト、ドリンクタイプやスティックタイプのゼリー、コーヒー、ココア、茶飲料、栄養ドリンク、エナジー飲料、スポーツドリンク、ミネラルウォーター、ニア・ウォーター、ノンアルコールのビールテイスト飲料等の非アルコール飲料；飯類、麺類、パン類およびパスタ類等炭水化物含有飲食品；チーズ類、ハードタイプまたはソフトタイプのヨーグルト、畜乳その他の油脂原料による生クリーム、アイスクリーム等の乳製品；クッキー、ケーキ、チョコレート等の洋菓子類、饅頭や羊羹等の和菓子類、ラムネ等のタブレット菓子（清涼菓子）、キャンディー類、ガム類、グミ類、ゼリーやプリン等の冷菓や氷菓、スナック菓子等の各種菓子類；ウイスキー、バーボン、スピリッツ、リキュール、ワイン、果実酒、日本酒、中国酒、焼酎、ビール、アルコール度数１％以下のノンアルコールビール、発泡酒、その他雑酒、酎ハイ等のアルコール飲料；卵を用いた加工品、魚介類や畜肉（レバー等の臓物を含む）の加工品（珍味を含む）、味噌汁等のスープ類等の加工食品、みそ、しょうゆ、ふりかけ、その他シーズニング調味料等の調味料、濃厚流動食等の流動食等を例示することができる。なお、ミネラルウォーターは、発泡性および非発泡性のミネラルウォーターのいずれもが包含される。
　茶飲料としては、発酵茶、半発酵茶および不発酵茶のいずれもが包含され、例えば、紅茶、緑茶、麦茶、玄米茶、煎茶、玉露茶、ほうじ茶、ウーロン茶、ウコン茶、プーアル茶、ルイボスティー、ローズ茶、キク茶、イチョウ葉茶、ハーブ茶（例えば、ミント茶、ジャスミン茶）が挙げられる。
　果汁入り飲料や果汁および野菜汁入り飲料に用いられる果物としては、例えば、リンゴ、ミカン、ブドウ、バナナ、ナシ、モモ、マンゴー、アサイー、ブルーベリーおよびウメが挙げられる。また、野菜汁入り飲料や果汁および野菜汁入り飲料に用いられる野菜としては、例えば、トマト、ニンジン、セロリ、カボチャ、キュウリおよびスイカが挙げられる。
　本発明の有効成分を医薬品または医薬部外品あるいは医薬組成物として提供する場合には、経口剤または非経口剤に処方して提供することができる。経口剤としては、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、ゼリー剤、乳剤、懸濁剤が挙げられる。非経口剤としては、局所投与に適した注射剤（皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射を含む）、吸入剤（例えば、吸入エアゾール剤、吸入粉末剤、吸入液剤）、点鼻剤（例えば、点鼻粉末剤、点鼻液剤）、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、坐剤、貼付剤、湿布剤が挙げられる。これらの製剤は、当分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。薬学上許容される担体としては、賦形剤、結合剤、希釈剤、添加剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。
　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染のメカニズムに関しては、細胞表面のＡＣＥ２受容体（angiotensin converting enzyme 2）にウイルスが結合して吸着し、これを足掛かりとしてウイルスが細胞内に侵入することで感染に至ることが知られている。このため本発明の有効成分をＡＣＥ受容体高発現組織へ局所投与することで本願発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果およびＣＯＶＩＤ－１９症状緩和効果をより発揮させることができる。したがって、本発明の医薬品および医薬部外品は、ＡＣＥ２受容体高発現組織への投与を目的とした製剤に処方することができる。ＡＣＥ２受容体高発現組織としては呼吸器（例えば、鼻腔、咽頭、喉頭、気管、気管支、肺）が挙げられることから、本発明の医薬品および医薬部外品は、呼吸器への投与を目的とした製剤（例えば、吸入剤、エアゾール、点鼻剤）に処方することができる。
　本発明の有効成分を食品、医薬品または医薬部外品として提供する場合には、ＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤として利用することも可能である。すなわち、本発明の有効成分をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染前または感染後（好ましくは感染後初期、より好ましくは感染後５日以内）に服用することで、該感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の症状が緩和されること（特に該感染症の重症化が緩和されること）が期待される。
　本発明の有効成分を飼料として提供する場合には上記の食品に関する記載に従って実施することができる。
　本発明の有効成分を添加剤として提供する場合には、上記の食品、医薬品、医薬部外品および飼料に関する記載に従って実施することができる。本発明の有効成分を食品添加物として提供する場合には、本発明の有効成分は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果を有する、機能性成分として使用することができる。
　本発明の有効成分の摂取量は、受容者の性別、年齢および体重、症状、摂取時間、剤形、摂取経路並びに組み合わせる薬剤等に依存して決定できる。本発明の有効成分の成人１日当たりの摂取量は、例えば、菌数により特定することができ、その下限値（以上または超える）は１×１０８個、１×１０９個または１×１０１０個とすることができ、その上限値（以下または未満）は１×１０１４個、１×１０１３個、１×１０１２個とすることができる。これらの上限値および下限値はそれぞれ任意に組み合わせることができ、上記摂取量の範囲は、例えば、１×１０８～１×１０１４個、１×１０９～１×１０１３個または１×１０１０～１×１０１２個とすることができる。乳酸菌の菌数は、例えば、蛍光染色法、フローサイトメトリー、培養法により測定することができる。
　本発明の有効成分の成人１日当たりの摂取量はまた、乾燥菌体質量により特定することができ、その下限値（以上または超える）は１ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇとすることができ、その上限値（以下または未満）は１０００ｍｇ、５００ｍｇ、１００ｍｇとすることができる。これらの上限値および下限値はそれぞれ任意に組み合わせることができ、上記摂取量の範囲は、例えば、１～１０００ｍｇ、１０～５００ｍｇ、２５～１００ｍｇとすることができる。
　上記の本発明の有効成分の摂取量および下記摂取タイミングおよび摂取期間は、本発明の有効成分を非治療目的および治療目的のいずれで使用する場合にも適用があり、治療目的の場合には摂取は投与に読み替えることができる。なお、本発明の有効成分は、ヒト以外の哺乳動物（例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ等）に対しても摂取させることができ、摂取量、摂取タイミングおよび摂取期間はヒトに関する記載を参考にして決定することができる。
　本発明の有効成分は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果を期待する期間内は摂取を継続することが好ましい。本発明の有効成分の摂取期間は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果をよりよく発揮させる観点から、例えば、上記１日量での摂取を１週間以上、２週間以上、３週間以上、好ましくは１カ月以上（４週間以上）とすることができる。本発明の有効成分の摂取間隔は、上記１日量での摂取を３日に１回、２日に１回または１日１回とすることができ、好ましくは１日１回である。
　本発明の有効成分はまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事または時期よりも前に摂取を開始してもよい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事の例としては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染する可能性がある行動（例えば、感染リスクが高い行事への参加、流行地域への渡航）が挙げられ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される時期の例としては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の流行期が挙げられる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事よりも前の摂取タイミングとしては、例えば、１日以上前、３日以上前、１週間以上前、２週間以上前、３週間以上前、１ヶ月以上前（４週間以上前）または２ヶ月以上前（８週間以上前）が挙げられる。また、特に限定されるものではないが、摂取を開始してから、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事までは、場合によっては、摂取間隔を置きながら継続して摂取することもできる。本発明の有効成分はまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事または時期よりも後に摂取を開始してもよい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事よりも後の摂取タイミングとしては、例えば、１日以上後、３日以上後、１週間以上後、２週間以上後が挙げられる。また、特に限定されるものではないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事よりも後に摂取するときには、場合によっては、摂取間隔を置きながら継続して摂取することもできる。本発明においては、特に好ましくは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果またはＣＯＶＩＤ－１９発症予防効果が期待される出来事よりも前に本発明の有効成分の摂取を開始し、当該出来事より後まで摂取することもできる。
　本発明の別の面によれば、有効量の乳酸菌またはそれを含んでなる組成物を、それを必要としている対象に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制方法、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防方法またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和方法が提供される。本発明の方法は、本発明の剤に関する記載に従って実施することができる。
　本発明のさらに別の面によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤またはＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤の製造のための、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤またはＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤としての、あるいはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制方法、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防方法またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和方法における、乳酸菌の使用が提供される。本発明の使用は、本発明の剤および本発明の方法に関する記載に従って実施することができる。
　本発明のさらにまた別の面によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和に用いるための、乳酸菌が提供される。上記の乳酸菌は、本発明の剤に関する記載に従って実施することができる。
　本発明の方法および本発明の使用はヒトを含む哺乳動物における使用であってもよく、治療的使用と非治療的使用のいずれもが意図される。本明細書において、「非治療的」とはヒトを手術、治療または診断する行為（すなわち、ヒトに対する医療行為）を含まないことを意味し、具体的には、医師または医師の指示を受けた者がヒトに対して手術、治療または診断を行う方法を含まないことを意味する。
　以下の例に基づき本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
例１：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果の検討
　例１では、乳酸菌を添加したプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）の培養上清によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制効果について検討した。
（１）方法
ア　プラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）の分離
　ＥａｓｙＳｅｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ　ＤＣ　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ社製）を用いた磁気ビーズ法によりドナー１およびドナー２由来のヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）（ｉＱ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）からプラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）を分離した。
イ　ｐＤＣの培養条件
　上記アで分離したｐＤＣ（７×１０４細胞）の培養条件は次の通りである。培地には１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を使用し、９６ウェル丸底プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に播種した。そして、乳酸菌としてラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス　JCM5805菌株（Lactococcus lactis subsp. lactis）の加熱死菌体を１ｍｇ／ｍｌの濃度となるようにＰＢＳ（ＴＡＫＡＲＡ　ＢＩＯ社製）で調整し、終濃度が１０μｇ／ｍｌとなるように培地に添加し（対照には乳酸菌は添加せず）、ＣＯ２インキュベータで３７℃、４８時間にて培養した。
ウ　インターフェロン－αの測定
　上記イのｐＤＣを培養した培養上清中のインターフェロン－α（ＩＦＮ－α）濃度をＨｕｍａｎ　ＩＦＮ－α　ＥＬＩＳＡ　Ｋｉｔ（ＰＢＬ　ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ社製）を用いて測定した。
エ　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＮＡの定量
　９６ウェル平底プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）にＶｅｒｏ細胞（アフリカミドリザル腎細胞株、非特許文献２参照、ＪＣＲＢ１８１９　ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２（ＪＣＲＢ細胞バンク）を利用可能）またはＣａｌｕ－３細胞（ヒト肺上皮細胞株、非特許文献３参照、ＨＴＢ－５５ＴＭ（ＡＴＣＣ）を利用可能）を１×１０４個播種し、６時間後に上記イのｐＤＣ培養上清（乳酸菌添加なし（対照））または乳酸菌添加あり）を培地に添加し、ＣＯ２インキュベータで３７℃、１８時間前処理をした。前処理した細胞をＰＢＳで洗浄し、１×１０２ＴＣＩＤ５０（Ｖｅｒｏ、ＭＯＩ＝０．０１）または１×１０４ＴＣＩＤ５０（Ｃａｌｕ－３、ＭＯＩ＝１）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ｗｋ－５２１株（国立感染症研究所）、非特許文献２参照）を感染させた。１時間後に細胞をＰＢＳで洗浄し、感染後１～３日における培養上清中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのＲＮＡをＱＩＡａｍｐ　Ｖｉｒａｌ　ＲＮＡ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いて抽出した。そして、抽出したＲＮＡをリアルタイムＰＣＲ法により定量した。リアルタイムＰＣＲ解析は、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ　Ｐｒｏｂｅ　ＲＴ－ＰＣＲ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）および遺伝子特異的ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２プライマーを用い、一般的な反応組成に従って、５０℃で３０分間、９５℃で１５秒間、続いて９５℃で１５秒間、６０℃で６０秒間を４５サイクル反応させた。ポジティブコントロールとして、ヒトリコンビナントインターフェロンアルファ（ｒＩＦＮ－α）５００Ｕ／ｍｌ（２ｎｇ／ｍｌ相当）を含む培地で同様に前処理をした細胞を用いた。
（２）結果
　結果は図１および２に示す通りであった。図１では、ドナー１およびドナー２由来のｐＤＣのいずれにおいても、乳酸菌添加なし（乳酸菌－）（対照）に対して、乳酸菌添加あり（乳酸菌＋）の方が培養上清中のインターフェロン－α（ＩＦＮ－α）の濃度が増加することが確認された。図２では、乳酸菌を添加せずに得られたｐＤＣ培養上清（乳酸菌－）で前処理をしたＶｅｒｏ細胞（図２Ａ）およびＣａｌｕ－３細胞（図２Ｂ）では、いずれもメディウムのみを添加した場合（陰性対照（ＮＣ））と同等のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのＲＮＡ量であった。一方、乳酸菌を添加して得られたｐＤＣ培養上清（乳酸菌＋）で前処理をしたＶｅｒｏ細胞およびＣａｌｕ－３細胞では、陰性対照群および乳酸菌非添加群と比較してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのＲＮＡ量が顕著に減少することが確認された。特にＶｅｒｏ細胞では、ｒＩＦＮ－α（５００Ｕ／ｍｌ）で前処理した場合（陽性対照（ＰＣ））よりも、ドナー１またはドナー２由来のｐＤＣ培養上清（乳酸菌添加あり（乳酸菌＋））で前処理した方がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスのＲＮＡ量が減少することが確認された（図２Ａ）。

Claims (11)

  1. 　乳酸菌を有効成分とする、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤。
  2. 　乳酸菌が、プラズマサイトイド樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化し、かつ、少なくともインターフェロン（ＩＦＮ）産生を誘導し得るものである、請求項１に記載の増殖抑制剤。
  3. 　乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスである、請求項１または２に記載の増殖抑制剤。
  4. 　乳酸菌が、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスＪＣＭ ５８０５である、請求項１または２に記載の増殖抑制剤。
  5. 　ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤である、請求項１または２に記載の増殖抑制剤。
  6. 　食品組成物の形態である、請求項１または２に記載の増殖抑制剤。
  7. 　食品組成物が飲料またはサプリメントである、請求項６に記載の増殖抑制剤。
  8. 　医薬組成物の形態である、請求項１または２に記載の増殖抑制剤。
  9. 　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤またはＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤の製造のための、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防剤またはＣＯＶＩＤ－１９症状緩和剤としての、あるいはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制方法、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防方法またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和方法における、乳酸菌の使用。
  10. 　ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和に用いるための、乳酸菌またはそれを含んでなる組成物。
  11. 　有効量の乳酸菌またはそれを含んでなる組成物を、それを必要としている対象に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制方法、ＣＯＶＩＤ－１９発症予防方法またはＣＯＶＩＤ－１９症状の緩和方法。
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