JP2019201590A - 免疫賦活用組成物及びサイトカイン産生促進用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞による自然免疫及び獲得免疫を活性化する作用を有する、免疫賦活用組成物。
[2]前記組成物は、ウイルス感染に対する免疫賦活用組成物である、[1]に記載の組成物。
[3]ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン−α及びインターロイキン−12の産生促進作用を有する、サイトカイン産生促進用組成物。
[4]前記組成物は、前記有効成分と同量のラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis) JCM5805株を用いる場合よりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン−α及びインターロイキン−12の産生促進作用を有する、[3]に記載の組成物。
[5]前記ペディオコッカス属乳酸菌は、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)及びペディオコッカス・ペントサセウス(P.pentosaceus)からなる群から選ばれるペディオコッカス属乳酸菌である、[1]〜[4]のいずれか1項に記載の組成物。
[6]前記ペディオコッカス属乳酸菌は、ペディオコッカス・アシディラクティシである、[1]〜[4]のいずれか1項に記載の組成物。
[7]前記組成物は、前記有効成分と同量のペディオコッカス・ペントサセウス NRIC99株を用いる場合よりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン−α及びインターロイキン−12の産生促進作用を有する、[6]に記載の組成物。
[8]前記組成物が、腸溶の組成物である、[1]〜[7]のいずれか1項に記載の組成物。
[9][1]〜[8]のいずれか1項に記載の組成物を含有する飲食品用組成物。
ペディオコッカス属乳酸菌が有するインターロイキン−12(IL−12)産生促進作用を以下のとおりに評価した。
乳酸菌としては、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici) K15株及びJCM8797株;ペディオコッカス・ペントサセウス(P.pentosaceus) NRIC99株及びNRIC122株;及びラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis)JCM5805株を用いた。
非ウイルス感染健常者である被験者A〜Dの4名の各末梢血50mlより、リンパ球分離液(ナカライテスク社)を用いて低密度勾配遠心法により末梢血単核細胞を分離した。その後、末梢血単核細胞からCD14マイクロビーズ(ミルテニーバイオテク社)及びMACS(ミルテニーバイオテク社)を用いて、CD14陽性細胞を取り除いた。CD14陽性細胞を取り除いた後に、FITC標識CD304抗体(ミルテニーバイオテク社)で標識後、FITCマイクロビーズ(ミルテニーバイオテク社)と反応させ、MACSによりCD304陽性細胞を分離し、この細胞(CD14陰性CD304陽性)をpDCとして用いた。
細胞培養液として10%FBS(Hyclone社)、25mM D−グルコース、25mM HEPES及び1μM ピルビン酸ナトリウムを含有するIMDM培地(GIBCO社)を用いた。96ウェルRound−bottomプレート(BD Falcon社)を用いて、1×107個の各乳酸菌株と2.5又は5×104個のpDCとを共培養し、24時間後に細胞及び上清を回収した。
回収した培養上清を用いて、IL−12の濃度をHuman IL−12p70 ELISA Set(eBioscience社)を用いて測定した。
被験者A〜Dから採取したpDCのIL−12産生促進活性の測定結果をそれぞれ図1A〜図1Dに示す。
ペディオコッカス属乳酸菌が有するインターフェロン−α(IFN−α)産生促進作用を以下のとおりに評価した。
例1の乳酸菌とpDCとの共培養後に回収した培養上清を用いて、IFN−αの濃度をHuman IFN−a Matched Antibody Pairs(eBioscience社)を用いて測定した。
被験者A〜Dから採取したpDCのIFN−α産生促進活性の測定結果をそれぞれ図2A〜図2Dに示す。
3−1.pDCの共刺激分子マーカーの測定
例1の乳酸菌とpDCとの共培養後に回収した被験者A由来のpDCを用いて、7AAD(BD Pharmingen社)、BV605標識CD80(Biolegend社)及びAPC標識CD86(Biolegend社)を用いて、pDCによるCD80及びCD86の発現についてFACSAria IIを用いて調べた。
図3A及び図3Bが示すとおり、ペディオコッカス・アシディラクティシを供した場合は、pDCにおける共刺激分子CD80/CD86の発現が高くなることが確認された。これにより、ペディオコッカス・アシディラクティシは、pDCの抗原提示を通じて、及び/又はpDCの共刺激分子からの相互刺激によって、pDCが産生するIL−12やIFN−αといったサイトカインのさらなる産生を促進する可能性があることが示された。
4−1.被験者の選択基準
幼稚園に通う3〜6歳の健康な幼児を被験者とした。ただし、過去に乳酸菌製剤若しくは大豆製品に対してアレルギーの既往がある者、先天性心疾患若しくは重症の気道疾患を有している者又は早産(在胎37週未満で出生)若しくは低出生体重児(2500g未満で出生)の幼児は除外した。
被験者のうち、乾燥K15株 9.1mgを賦形剤であるデキストリンと混合して得られた被験試料 1gを4ヵ月間(16週間)経口投与により摂取した群をK15群(87名)とした。また、デキストリン 1gを同様に経口投与により摂取した群をプラセボ群(85名)とした。
被験者は、健康観察日誌に、毎日2回(朝・夕)及び発熱時(37.5℃以上を発熱と定義した)の体温(腋窩温)を記録し、さらに感冒症状の有無、被験試料の摂取、乳酸菌を含む食品の摂取、副作用、医師への受診、インフルエンザワクチン接種日、インフルエンザ抗原検査の結果、抗インフルエンザ薬の投与日数などを記録した。その結果、K15群及びプラセボ群の間には被験者背景に偏りがなく、均等に割付が実施されていたことがわかった。
K15群及びプラセボ群のインフルエンザウイルスの罹患率(=インフルエンザウイルスに罹患した被験者の数/被験者の数)の結果を図4Aに示す。図4Aに示すとおり、K15群は、プラセボ群に比べて、インフルエンザ罹患率が低かった。
Claims (9)
- ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞による自然免疫及び獲得免疫を活性化する作用を有する、免疫賦活用組成物。
- 前記組成物は、ウイルス感染に対する免疫賦活用組成物である、請求項1に記載の組成物。
- ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン−α及びインターロイキン−12の産生促進作用を有する、サイトカイン産生促進用組成物。
- 前記組成物は、前記有効成分と同量のラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus lactis) JCM5805株を用いる場合よりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン−α及びインターロイキン−12の産生促進作用を有する、請求項3に記載の組成物。
- 前記ペディオコッカス属乳酸菌は、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)及びペディオコッカス・ペントサセウス(P.pentosaceus)からなる群から選ばれるペディオコッカス属乳酸菌である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ペディオコッカス属乳酸菌は、ペディオコッカス・アシディラクティシである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、前記有効成分と同量のペディオコッカス・ペントサセウス NRIC99株を用いる場合よりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞によるインターフェロン−α及びインターロイキン−12の産生促進作用を有する、請求項6に記載の組成物。
- 前記組成物が、腸溶の組成物である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の組成物を含有する飲食品用組成物。
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