JP6691275B1 - FcεRIの発現抑制用組成物及びFcεRIの発現抑制方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞へのFcεRIの発現抑制作用を有する、プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物。
[2]前記組成物は、プラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用を有する、[1]に記載の組成物。
[3]前記ペディオコッカス属乳酸菌は、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)及びペディオコッカス・ペントサセウス(P.pentosaceus)からなる群から選ばれる少なくとも1種のペディオコッカス属乳酸菌である、[1]又は[2]に記載の組成物。
[4]前記組成物は、前記有効成分と同量のラクトバチルス・ペントーサス(Lactobacillus pentosus) K113株を用いるときよりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞へのFcεRIの発現抑制作用を有する、[1]〜[3]のいずれか1項に記載の組成物。
[5]前記組成物は、抗ウイルス用組成物、抗感染症用組成物、抗アレルギー用組成物、抗花粉症用組成物及び抗喘息用組成物からなる群から選ばれる少なくとも1種の抗疾患用組成物である、[1]〜[4]のいずれか1項に記載の組成物。
[6][1]〜[5]のいずれか1項に記載の組成物を含有する飲食品用組成物。
[7]乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程;
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量を測定する工程;及び、
測定された被験溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量が対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程
を含む、プラズマサイトイド樹状細胞を活性化するための乳酸菌のスクリーニング方法。
[8]乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程;
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のインターフェロン−αの産生量及びプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量を測定する工程;及び、
測定された被験溶液におけるインターフェロン−αの産生量が対照溶液におけるインターフェロン−αの産生量よりも大きく、かつ、測定された被験溶液におけるFcεRIの発現量が対照溶液におけるFcεRIの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程
を含む、プラズマサイトイド樹状細胞を活性化するための乳酸菌のスクリーニング方法。
[9]ペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を使用して、プラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現を抑制する方法。
[10]プラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現を抑制するための組成物を製造するためのペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分の使用。
[11]プラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現を抑制するためのペディオコッカス属乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分の使用。
乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程;
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量を測定する工程;及び、
測定された被験溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量が対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程。
乳酸菌の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の成分とプラズマサイトイド樹状細胞とを含む被験溶液をインキュベートし、及び該成分を含まず、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞を含む対照溶液をインキュベートする工程;
インキュベート後の被験溶液及び対照溶液におけるプラズマサイトイド樹状細胞のインターフェロン−αの産生量及びプラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現量を測定する工程;及び、
測定された被験溶液におけるインターフェロン−αの産生量が対照溶液におけるインターフェロン−αの産生量よりも大きく、かつ、測定された被験溶液におけるFcεRIの発現量が対照溶液におけるFcεRIの発現量よりも小さい場合に、前記成分はプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する有効成分であると判定する工程。
乳酸菌が有する高親和性IgE受容体(FcεRI)発現抑制作用を以下のとおりに評価した。
乳酸菌としては、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici) K15株、K226株、K531株及びJCM8797株;ペディオコッカス・ペントサセウス(P.pentosaceus) NRIC99株;ラクトバチルス・ジョンソニー(Lactobacillus johnsonii) JCM1022株(K1167株);ラクトバチルス・デルブルエッキ(L.delbrueckii) NRIC1688株(K1175株);ラクトバチルス・ペントーサス(L.pentosus) K133株及びNRIC1836株を用いた。
非ウイルス感染健常者である被験者A〜Hの8名の各末梢血50mlより、リンパ球分離液(ナカライテスク社)を用いて低密度勾配遠心法により末梢血単核細胞を分離した。その後、末梢血単核細胞からCD14マイクロビーズ(ミルテニーバイオテク社)及びMACS(ミルテニーバイオテク社)を用いて、CD14陽性細胞を取り除いた。CD14陽性細胞を取り除いた後に、FITC標識CD304抗体(ミルテニーバイオテク社)で標識後、FITCマイクロビーズ(ミルテニーバイオテク社)と反応させ、MACSによりCD304陽性細胞を分離し、この細胞(CD14陰性CD304陽性)をpDCとして用いた。
細胞培養液として10%FBS(Hyclone社)、25mM D−グルコース、25mM HEPES及び1μM ピルビン酸ナトリウムを含有するIMDM培地(GIBCO社)を用いた。96ウェルRound−bottomプレート(BD Falcon社)を用いて、各ウェル内で1×107個の各乳酸菌株と2×104個又は4×104個のpDCとを共培養し、24時間後に細胞及び上清を回収した。乳酸菌を用いずにpDCのみを培養したウェルから回収した上清をコントロールとした。使用したpDCが由来する被験者と使用した乳酸菌株との組み合わせを表1に示す。
共培養後に回収した細胞を用いて、7AAD(BD Pharmingen社)、PE標識抗FcεRIα(Bio Regend社)抗体を用いて、FcεRIαの発現についてフローサイトメトリー(FACS Aria II、ベクトン・ディッキンソン社)を用いて定量した。得られた定量値について、コントロールの値を1として、各乳酸菌株を用いた場合の値を相対値により求めた。
試験した乳酸菌株のうち、ラクトバチルス・ジョンソニー K1167株、ラクトバチルス・デルブルエッキ K1175株及びラクトバチルス・ペントーサス NRIC1836株は、1名以上の被験者に由来するpDCにおいて、コントロールよりも高い値(>1)を示した。特に、ラクトバチルス・ジョンソニー K1167株及びラクトバチルス・デルブルエッキ K1175株については、2名の被験者に由来するpDCにおいて、コントロールよりも高い値を示した。これらの乳酸菌株については、FcεRI発現抑制作用を有さないと判定した。
乳酸菌が有するインターフェロン−α(IFN−α)産生促進作用を以下のとおりに評価した。
例1の乳酸菌とpDCとの共培養後に回収した培養上清を用いて、IFN−αの濃度をHuman IFN−α Matched Antibody Pairs(eBioscience社)を用いて定量した。得られた定量値について、コントロールの値を1として、各乳酸菌株を用いた場合の値を相対値により求めた。
試験した乳酸菌株のうち、ラクトバチルス・ジョンソニー K1167株以外の乳酸菌株については、pDCが由来する被験者及び乳酸菌株に関係無く、pDCに対するIFN−αの産生誘導能を確認することができた。ラクトバチルス・ジョンソニー K1167株については、いずれの被験者に由来するpDCを用いても、IFN−αの産生量が少なく(被験者間の平均で1.8)、コントロールに対して僅かな増加しか認められなかった。
ペディオコッカス・アシディラクティシ K15株が有するFcεRI発現抑制活性とTLRリガンドが有する活性との比較を、以下のとおりに評価した。
被験者Hから採取したpDCについて、各乳酸菌株の代わりに、最終濃度が10μg/mlになるようにTLR7のリガンドであるImiquimod(R837;invivogen社)、TLR8のリガンドであるssRNA40/LyoVec(invivogen社)及びTLR9のリガンドであるODN2216(CpG;invivogen社)を用いた以外は、例1と同様にpDCとの共培養を実施した。K15株又はリガンドを用いずにpDCのみを培養したウェルから回収した上清をコントロールとした。
K15株及び各TLRリガンドのFcεRIのmRNAの相対量を図2に示す。図2が示すとおり、FcεRIのmRNAの相対量から、K15株のFcεRI発現抑制活性は、各TLRリガンドの活性と同程度又はそれよりも強い活性であることがわかった。
Claims (5)
- ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を含有し、かつ、プラズマサイトイド樹状細胞へのFcεRIの発現抑制作用を有する、プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物。
- 前記組成物は、プラズマサイトイド樹状細胞へのインターフェロン−αの産生促進作用を有する、請求項1に記載の組成物。
- 前記組成物は、前記有効成分と同量のラクトバチルス・ペントーサス(Lactobacillus pentosus) K113株を用いるときよりも高い、プラズマサイトイド樹状細胞へのFcεRIの発現抑制作用を有する、請求項1〜2のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物は、抗ウイルス用組成物、抗感染症用組成物、抗アレルギー用組成物、抗花粉症用組成物及び抗喘息用組成物からなる群から選ばれる少なくとも1種の抗疾患用組成物である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)の菌体、菌体成分及び培養物並びにこれらの処理物からなる群から選ばれる少なくとも1種の有効成分を使用して、プラズマサイトイド樹状細胞のFcεRIの発現を抑制する方法。
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