CN112543641A - FcεRI的表达抑制用组合物以及FcεRI的表达抑制方法 - Google Patents

FcεRI的表达抑制用组合物以及FcεRI的表达抑制方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112543641A
CN112543641A CN201980052277.XA CN201980052277A CN112543641A CN 112543641 A CN112543641 A CN 112543641A CN 201980052277 A CN201980052277 A CN 201980052277A CN 112543641 A CN112543641 A CN 112543641A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dendritic cells
plasmacytoid dendritic
composition
expression
lactic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980052277.XA
Other languages
English (en)
Inventor
石川友纪
川岛忠臣
足立真树
下条直树
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kikkoman Corp
Chiba University NUC
Original Assignee
Kikkoman Corp
Chiba University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kikkoman Corp, Chiba University NUC filed Critical Kikkoman Corp
Publication of CN112543641A publication Critical patent/CN112543641A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Abstract

本发明的目的在于，提供一种组合物，该组合物具有人类的食用经验或者摄取经验，同时作为有效成分含有表现出抑制pDC的FcεRI的表达的作用的物质。上述目的通过：含有选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分，并且，具有对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用的、浆细胞样树突状细胞激活用组合物等来解决。

Description

FcεRI的表达抑制用组合物以及FcεRI的表达抑制方法
技术领域
本发明涉及FcεRI的表达抑制用组合物以及FcεRI的表达抑制方法。
背景技术
近年来，患有支气管哮喘、过敏性鼻炎、花粉症、特应性皮炎、心理过敏反应、荨麻疹、食物过敏这些被归类到I型过敏的过敏疾病的患者在增多。
在I型过敏中，首先，由于花粉以及霉菌等的过敏原(抗原)侵入到活体内，与该过敏原对应的IgE由B细胞产生。产生的IgE和在肥大细胞(肥胖细胞)以及嗜碱细胞的表面表达的高亲和性IgE受体(FcεRI)结合(致敏)。
在处于这种致敏状态当中，再次侵入到体内的过敏原，和与各自的FcεRI结合的两个以上的IgE结合，经由IgE对两个以上的FcεRI进行交联(交联反应)。此时，肥大细胞以及嗜碱细胞激活并引起脱颗粒，释放出组胺、血清素等化学介体。其结果是，由于血管的扩张以及通透性亢进，白细胞的游走等，出现过敏症状。
另一方面，树突状细胞中，浆细胞样树突状细胞(pDC)在细胞表面具有FcεRI。由于过敏原向体内的侵入，在pDC中可能发生交联反应。和具有树突状形态的髓样树突状细胞(mDC)不同，pDC存在于外周血中，并且表现出与浆细胞相似的性状。当吸收病毒等的外源性异物等而受到刺激时，pDC分化成树突状细胞样。
当pDC对作为外源性异物的病毒作出应答时，大量地产生干扰素-α(IFN-α)这样的I型IFN。由于I型IFN的抗病毒作用，能抑制病毒的增殖或者复制，激活自然免疫。
但是，在pDC细胞表面，在IgE抗体彼此经由过敏原等产生交联反应的情况下，pDC用于感知外源性异物的细胞表面以及细胞膜穿透型的模式识别受体即TLR(Toll likereceptor；Toll样受体)和干扰素调节因子(IRF)的表达被抑制。作为该结果，pDC的IFN-α的产生被抑制(参照后述的非专利文献1，该文献的全部记载在此作为公开被引用)。
因此，期望pDC的抗病毒作用，为了阻碍pDC中的交联反应，可以考虑抑制对IgE抗体显示出高亲和性的FcεRI的表达。例如，在后述的专利文献1～3(这些文献的全部记载在此作为公开被引用)中，记载了对FcεRI基因的转录进行调节的DNA以及以该DNA作为指标对抑制FcεRI基因的表达的物质进行筛选的方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本发明专利第5131688号
专利文献2：国际公开第2004/188929号
专利文献3：国际公开第1999/46393号
非专利文献
非专利文献1：Michelle Ann Gill,J Allergy Clin Immunol,April 2012,Vol.129,Number 4,pp.889-901
发明内容
发明所要解决的课题
根据专利文献1～3，有能够筛选FcεRI基因的表达抑制物质的可能性。但是，在专利文献1～3中，没有记载经过筛选而得到这种物质。实际上，通过专利文献1～3记载的筛选方法，难以得到FcεRI基因的表达抑制物质。
另外，对于可用于人类的、有食用经验或摄取经验的、并具有FcεRI对DC的表达抑制作用的物质知之甚少。
因此，本发明所要解决的课题在于，提供一种组合物，该组合物具有人类的食用经验或者摄取经验，同时作为有效成分含有表现出抑制存在于pDC细胞表面上的FcεRI的表达的作用的物质。
用于解决课题的手段
本发明者们为了解决上述课题而不断进行锐意研究的结果是，发现了乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)以及戊糖片球菌(P.pentosaceus)这样的片球菌属乳酸菌具有对pDC的FcεRI的表达抑制作用。另一方面，发现了促进pDC的IFN-α的产生且不表现出FcεRI的表达抑制作用的乳酸菌的存在。对pDC的FcεRI的表达抑制作用和IFN-α的产生促进作用之间无相关关系这一点是由本发明者们首次发现的非常令人惊讶的事实。
基于该事实，本发明者们成功创作出了一种组合物，其作为有效成分含有片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物等，并且具有对pDC的FcεRI的表达抑制作用。本发明是基于这些知识见解以及成功例最终完成的发明。
因此，根据本发明的一种实施方式，提供以下所示的方式的组合物、方法以及应用。
[1]浆细胞样树突状细胞激活用组合物，含有选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分，并且，具有对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用。
[2]根据[1]所述的组合物，所述组合物具有对浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生促进作用。
[3]根据[1]或[2]所述的组合物，所述片球菌属乳酸菌是选自乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)以及戊糖片球菌(P.pentosaceus)的至少一种片球菌属乳酸菌。
[4]根据[1]～[3]中任一项所述的组合物，所述组合物具有和使用与所述有效成分等量的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)K113株时相比更高的、对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用。
[5]根据[1]～[4]中任一项所述的组合物，所述组合物是选自抗病毒用组合物、抗感染症用组合物、抗过敏用组合物、抗花粉症用组合物以及抗哮喘用组合物的至少一种的抗疾病用组合物。
[6]饮食品用组合物，含有[1]～[5]中任一项所述的组合物。
[7]用于激活浆细胞样树突状细胞的乳酸菌的筛选方法，包含：
对包含选自乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种成分，和浆细胞样树突状细胞的被试验溶液进行培养，以及对不含该成分且包含浆细胞样树突状细胞的对照溶液进行培养的工序；
对培养后的被试验溶液以及对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量进行测定的工序；以及
在被测定的被试验溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量比对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量小的情况下，判断所述成分为具有激活浆细胞样树突状细胞的有效成分的工序。
[8]用于激活浆细胞样树突状细胞的乳酸菌的筛选方法，包含：
对包含选自乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种成分，和浆细胞样树突状细胞的被试验溶液进行培养，以及对不含该成分且包含浆细胞样树突状细胞的对照溶液进行培养的工序；
对培养后的被试验溶液以及对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生量以及浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量进行测定的工序；以及
在被测定的被试验溶液中的干扰素-α的产生量比对照溶液中的干扰素-α的产生量大，并且，被测定的被试验溶液中的FcεRI的表达量比对照溶液中的FcεRI的表达量小的情况下，判断所述成分为激活浆细胞样树突状细胞的有效成分的工序。
[9]一种方法，使用选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分，抑制浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达。
[10]选自用于制造用于抑制浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达的组合物的片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分的应用。
[11]选自用于抑制浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达的片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分的应用。
发明效果
本发明的一种实施方式的组合物，具有对pDC的FcεRI的表达抑制作用，进一步地与该作用关联，有望起到抗病毒效果、抗感染症效果、抗过敏效果、抗花粉症效果以及抗哮喘效果等。
本发明的一种实施方式的组合物使用的有效成分，已有作为饮食品的添加剂等的使用实绩。因此，本发明的一种实施方式的组合物，安全性高，作为具有抗病毒效果、抗感染症效果、抗过敏效果、抗花粉症效果以及抗哮喘效果的饮食品、医药品、药妆品、化妆品等有用，有望以口服或者非口服的形式提供。
附图说明
图1是表示如实施例所记载的、戊糖乳杆菌K133株(“K133”)、戊糖片球菌NRIC99株(“NRIC99”)和乳酸片球菌K226株、K531株、JCM8797株以及K15株(“K226”、“K531”、“JCM8797”以及“K15”)的、pDC的FcεRI的表达相对量的测定结果的图。
图2是表示如实施例所记载的、对和TLR7配体、TLR8配体、TLR9配体以及乳酸片球菌K15株(“K15”)一起培养的pDC所产生的FcεRI的mRNA的量(相对量)进行测定的结果的图。此外，“Med”是表示对照(未添加乳酸菌时的测定结果)。
具体实施方式
以下对本发明进行详细说明，但是本发明的技术范围并不只由本项目的事项限定，只要能够实现其目的，本发明可采取各种方式。
本发明的一种实施方式的组合物，至少含有选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种有效成分(以下，有时会只称为“有效成分”)。
本发明的一种实施方式的组合物，由于含有的有效成分，能够具有对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用，或者对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用以及对浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生促进作用。在本说明书中，有时会统称这些作用为“有效作用”。本发明的一种实施方式的组合物，由于具有有效作用，因此代表性地可采取浆细胞样树突状细胞激活用组合物的方式。本发明的另一实施方式是使用有效成分来抑制浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达的方法。
本说明书中的各术语，只要没有特殊的定义，均以本领域技术人员通常使用的含义使用，不应该解释为具有不合理的限定的含义。
例如，“组合物”的术语作为通常使用的含义不特别限定，例如是两种以上的物质组合而成之物，具体地，可列举有效成分和其他物质组合之物，两种以上有效成分组合之物等，更加具体地，可列举一种以上有效成分和一种以上固体载体或者溶剂组合而成的固体组合物以及液性组合物等。
对浆细胞样树突状细胞的“表达抑制作用”的术语是指，选自抑制基因的表达量，降低基因产物(蛋白质)的翻译量以及为阻碍基因产物的产生而激活浆细胞样树突状细胞的至少一种作用。
对浆细胞样树突状细胞的“产生促进作用”的术语是指，选自促进基因的表达量，增大基因产物的翻译量以及为了产生基因产物而激活浆细胞样树突状细胞的至少一种作用。
“浆细胞样树突状细胞激活”的术语的含义是，通过有效成分，使浆细胞样树突状细胞处于呈现有效作用的状态。
“和/或”的术语的含义是，列出的多个关联项目的任意一种，或者两种以上的任意组合或者所有的组合。
FcεRI(高亲和性IgE受体)作为通常已知的含义并不特别限定，例如能够是对浆细胞样树突状细胞以及肥胖细胞的表面的IgE的Fc部具有高亲和性的受体。FcεRI中具有三种亚基即α链、β链和γ链。已知肥大细胞和嗜碱细胞具有αβγ2四聚体结构以及αγ2三聚体结构，而浆细胞样树突状细胞等的树突状细胞、单核细胞、嗜酸细胞等具有αγ2三聚体结构并在细胞表面表达。
当抗原和两种以上的与FcεRI的α链结合的IgE(FcεRI-IgE)结合时，FcεRI成为通过抗原交联的形态。通过这种交联，通过γ链和β链进行细胞内信息传递，浆细胞样树突状细胞和/或肥胖细胞被激活。
干扰素(IFN)-α是I型干扰素的一种，具有抑制病毒的增殖和/或复制的抗病毒作用。另外，IFN-α具有：感染了病毒的细胞的增殖抑制作用，与巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)等的与自然免疫相关的细胞的激活作用，抗肿瘤作用，病毒以外的细胞内寄生生物的发育抑制作用等。IFN-α在临床上作为病毒性肝炎的治疗药而被应用。
浆细胞样树突状细胞(pDC)是存在于外周血中并显示出与浆细胞相似的性状，当吸收外源性异物等而受到刺激时分化成树突状细胞样的细胞。有效成分作用于pDC，带来有效作用。
FcεRI的表达抑制作用的评价方法并不特别限定，例如，能够如后述的实施例所记载的，通过测定pDC表达的FcεRI的表达量等来进行评价。
FcεRI的表达抑制作用的评价方法的一种具体例，可列举包含：共培养来源于各受试者的pDC和本发明的一种实施方式的组合物，然后将培养后回收的细胞或者培养上清液作为被试验试样，使用市售的标记抗FcεRI抗体对细胞表面上的FcεRI进行标记后，用流式细胞术等测定标记强度；和/或使用市售的试剂盒，测定细胞或者培养上清液中的FcεRI的mRNA的量，测定来源于各受试者的pDC的FcεRI的表达量的方法等，但是并不限定于此。共培养的条件并不特别限定，能够列举例如，不抑制FcεRI的表达并且pDC不死亡的条件等，优选地，采用适合pDC的维持或者增殖的培养基、温度、CO2浓度、pH等的培养条件。
FcεRI的表达抑制作用的评价方法中的受试者的人数，考虑到个体间的差异，优选为2名以上，更加优选为3名以上。FcεRI的表达抑制作用，对于根据来源于各受试者的pDC的FcεRI的表达量以对照(未使用本发明的一种实施方式的组合物的体系)为基准而求出的相对值，在受试者间取平均进行评价。例如，测定分别来源于受试者A、受试者B、……受试者X的pDC的FcεRI的表达量即DA、DB、……DX，然后根据DA、DB、……DX以对照为基准求出相对值即RA、RB、……RX，然后根据RA、RB、……RX求出平均相对值ARAB……X来进行评价。
FcεRI的表达抑制作用的程度并不特别限定，例如，和没有使用本发明的一种实施方式的组合物的情况(对照)相比，对pDC的FcεRI的表达量被评价为变小的程度。但是，优选地，FcεRI的表达抑制作用的程度是在来源于各受试者的pDC的FcεRI的表达量的任意一个中，都被评价为比对照小(在上述的例中，1＞RA、1＞RB、……1＞RX)的程度。
如后述的实施例所记载的，由于片球菌属乳酸菌所具有的FcεRI的表达抑制作用，有比戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)K113株所具有的作用大的倾向，因此更加优选地，本发明的一种实施方式的组合物中的FcεRI的表达抑制作用，和使用与有效成分等量的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)K113株时相比，pDC的FcεRI的表达量被评价为变小的程度。该更加优选的实施方式，就上述的例子而言，是使用本发明的一种实施方式的组合物而得到的平均相对值ARAB……X比使用和本发明的一种实施方式的组合物中的有效成分等量的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)K113株而得到的平均相对值ARAB……X小的程度。
在片球菌属乳酸菌为乳酸片球菌的情况下，优选地，FcεRI的表达抑制作用的程度是，和使用与有效成分等量的戊糖片球菌NRIC99株时相比，对pDC的FcεRI的表达量被评价为变小的程度。
FcεRI的表达抑制作用的程度，例如是根据在200μ1中共培养1×107个片球菌属乳酸菌和2.5×104个pDC并在24小时后回收的细胞的FcεRI的表达量求出的平均相对值为0.93以下的程度，优选为0.90以下的程度，更加优选为0.85以下的程度，进一步优选为0.83以下的程度，更进一步优选为0.81以下的程度。另外，虽然下限并不特别限定，但是典型地为0.10以上。
IFN-α的产生促进作用的评价方法并不特别限定，例如，能够如后述的实施例所记载的，通过测定由pDC产生的IFN-α的量和/或pDC表达的IFN-α基因的表达量等来进行评价。
IFN-α的产生促进作用的评价方法的一种具体例，可列举包含：共培养pDC和本发明的一种实施方式的组合物，然后将培养后回收的培养上清液作为试样溶液，使用市售的IFN-α测定试剂盒来测定IFN-α浓度的方法等，但是并不限定于此。共培养的条件并不特别限定，能够列举例如，IFN-α不失活并且pDC不死亡的条件，优选地，采用适合pDC的维持或者增殖的培养基、温度、CO2浓度、pH等的培养条件。
IFN-α的产生促进作用的程度并不特别限定，优选地，和没有使用本发明的一种实施方式的组合物的情况相比，pDC的IFN-α的产生量变大的程度。在片球菌属乳酸菌为乳酸片球菌的情况下，IFN-α的产生促进作用的程度是，和使用与有效成分等量的戊糖片球菌NRIC99株时相比，pDC的IFN-α的产生量变大的程度。
另外，有效作用的程度优选为，例如在200μl中共培养1×107个片球菌属乳酸菌和2.5×104个pDC并在24小时后回收的上清液中的IFN-α的浓度(受试者间的平均值)为10pg/m1以上的程度，更加优选为100pg/m1以上的程度。另外，虽然上限并不特别限定，但是典型地为10000pg/m1以下。
本发明的一种实施方式的组合物，由于具有有效作用，有望起到抗病毒效果、抗感染症效果、抗过敏效果、抗花粉症效果以及抗哮喘效果等，因此可采用抗病毒用组合物、抗感染症用组合物、抗过敏用组合物、抗花粉症用组合物以及抗哮喘用组合物的实施方式。
本发明的一种实施方式的组合物起到的抗病毒效果、抗感染症效果、抗过敏效果、抗花粉症效果以及抗哮喘效果是指，例如，在抗病毒效果的情况下，是指改善、缓和或者治疗本发明的一种实施方式的组合物的摄取个体的现在或者将来的病毒性疾病的症状，或者抑制、延迟或者预防患有病毒性疾病的状态。此外，对于抗哮喘效果，已知的有抗IgE抗体即奥马珠单抗可改善哮喘症状，该机理的一部分被认为是由于FcεRI表达抑制效果带来的。(例如，参照非专利文献1、William W.Busse,et al.,N Engl J Med,March 2011,Vol.17,Number 364,pp.1005-1015、Calman Prussin,et al.,J Allergy Clin Immunol,December2003,Vol.112,Number 6,pp1147-1154；这些文献的所有记载在此作为公开被引用)。
在非专利文献1中，记载了由于过敏原的存在，pDC中的FcεRI发生交联反应，IFN-α的生产量降低。另外，在米歇尔等人的文献(Michelle A.Gill et al.,JImmunol.2010June1；184(11):5999-6006；该文献的所有记载在此作为公开被引用)中，记载了：相比于健康者，哮喘患者在pDC中的FcεRI的表达量大；相比于患有流感的健康者，患有流感的哮喘患者的pDC的IFN-α的生产量少。综合考虑这些记载，认为本发明的一种实施方式的组合物在哮喘患者中发挥了高度的抗病毒效果和抗感染症效果。
本发明的一种实施方式的组合物的有效成分，至少含有选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种。
片球菌属乳酸菌只要是如通常所知的生成革兰氏阳性乳酸的球菌即属于片球菌属的乳酸菌，并不特别限定，可列举例如有食用经验的片球菌属乳酸菌等。
片球菌属乳酸菌的获得方法并不特别限定，例如，片球菌属乳酸菌既可以从腌菜、酒糟、奶制品、酱油酱醪等的发酵食品等的乳酸菌含有物中作为分离株进行分离，也可以是从American Type Culture Collection(ATCC)、东京农业大学(NRIC)、理化学研究所(JCM)、独立行政法人制品评价技术基盘机构生物技术中心(NBRC)、独立行政法人制品评价技术基盘机构特许生物寄存中心(NITE-IPOD)分售的菌株。
作为片球菌属乳酸菌的具体例，可列举：乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、酒窖片球菌(Pediococcus cellicola)、克氏片球菌(Pediococcus clausenii)、有害片球菌(Pediococcus damnosus)、耐乙醇片球菌(Pediococcus ethanolidurans)、意外片球菌(Pediococcus inopinatus)、小片球菌(Pediococcus parvulus)、斯氏片球菌(Pediococcus stilesii)等，但是并不限定于此。作为片球菌属乳酸菌，可以单独使用它们的任意一种，也可以组合使用两种以上。
作为乳酸片球菌以及戊糖片球菌的非限定的例子，可列举：乳酸片球菌K15株、乳酸片球菌K226株、乳酸片球菌K531株、乳酸片球菌NRICO 124株、乳酸片球菌JCM8797株、戊糖片球菌OS株(NITE P-354)、戊糖片球菌NRIC1915株、戊糖片球菌NRIC99株、戊糖片球菌NRIC122株、戊糖片球菌JCM2024株、戊糖片球菌ATCC33314株等。
在片球菌属乳酸菌中，从有效作用大、食用经验丰富方面出发，优选乳酸片球菌以及戊糖片球菌；从有效作用更加大方面出发，更加优选乳酸片球菌；乳酸片球菌K15株、乳酸片球菌K226株、乳酸片球菌K531株以及乳酸片球菌JCM8797株则进一步优选。
以下，作为片球菌属乳酸菌，假想使用乳酸片球菌，对本发明的一种实施方式的组合物进行详细说明。但是，在使用乳酸片球菌以外的片球菌属乳酸菌的情况下，将以下的“乳酸片球菌”的记载改为“戊糖片球菌”等其他的片球菌属乳酸菌即可。
分离乳酸片球菌的方法并不特别限定，例如可列举：根据常法，适当地稀释乳酸菌含有物的提取液，使用MRS培养基以及M17培养基等公知的乳酸菌培养用培养基，在大概30℃～40℃下进行培养的方法等。例如，乳酸片球菌K15株、K226株以及K531株，作为乳酸菌含有物分别是从米糠、腌菜以及葡萄酒用葡萄中分离的乳酸菌株，每种的最佳的温度大概是37℃～42℃。
根据本发明者们的调查，乳酸片球菌能够通过在应激条件下进行培养，而含有高浓度的双链RNA。作为双链RNA含量较大的乳酸片球菌，可列举例如：每1×1010cfu菌体含有1500ng以上的双链RNA的乳酸片球菌以及每1×1010cfu菌体中双链RNA相对于核酸的总量的比例为3.5％以上的乳酸片球菌等。另外，虽然上限并不特别限定，但是典型地分别为200000ng以下以及99％以下。
应激条件是指，高盐浓度、高温、低温、贫营养、富营养、低pH、高pH、通气以及它们的组合的、通常培养乳酸菌的条件以外的条件，优选为乳酸菌的倍增时间比在合适的条件下培养的情况下的时间长的条件。
具体地，盐分引起的应激条件下的培养可列举：使用例如包含盐分0.5％(w/v)～30％(w/v)、优选为包含5％(w/v)～15％(w/v)的培养基进行培养等。在盐分浓度为0.5％(w/v)以下或者30％(w/v)以上的培养基中，由于乳酸片球菌的增殖极慢，因此不优选。
高温或者低温引起的应激条件下的培养，可列举：在适合乳酸片球菌的增殖的最佳温度±1℃～30℃、优选最佳温度±5℃～20℃下进行培养，具体地，可列举：如果乳酸片球菌的最佳温度为40℃则在10℃～39℃或者41℃～60℃下进行培养。
通气引起的应激条件下的培养可列举例如：在通过供应空气并进行搅拌等，提高溶解氧浓度等的条件下进行培养等。此时，可以使用氧气代替空气，只要能够提高溶解氧浓度，也可以采用搅拌以外的振荡等的手段。此外，搅拌速度可根据培养槽的大小等适当地设定。
空气的供应量(通气量)并不特别限定，例如是每单位体积大概0.01VVM～10VVM，优选为大概0.1VVM～1VVM。由于在通气量小于0.01VVM时可能没法提高溶解氧气浓度，通气量大于10VVM时由于大量的气泡乳酸菌可能受到物理性的损伤，因此这些情况不优选。
作为培养乳酸片球菌的其他的条件，也可以使用适合乳酸片球菌的增殖的条件。例如，作为使用的培养基，能够采用在乳酸片球菌的培养中通常使用的培养基。作为这种培养基，能够列举例如：MRS培养基以及M17培养基等，但是并不限定于此。另外，培养时间只要是可看到乳酸片球菌的增殖并可得到足够的菌体密度的时间，并不特别限定。
通过在应激条件下进行培养，和没有应激条件下进行培养的情况相比，乳酸片球菌可产生例如更多的双链RNA等的菌体成分。
乳酸片球菌不管是在应激条件下培养的乳酸片球菌，还是通常条件下培养的乳酸片球菌均可。乳酸片球菌可以是例如在应激条件下培养的乳酸片球菌的一种或者两种以上，和在通常条件下培养的乳酸片球菌的一种或者两种以上的组合。
本发明的一种实施方式的组合物中的有效成分可以是乳酸片球菌自身，即：除了乳酸片球菌的菌体以外，还可以是乳酸片球菌的菌体成分，乳酸片球菌的培养物，乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物中的任意一种的处理物。
乳酸片球菌的菌体可列举例如：通过使用离心分离等的一般的公知的固液分离手段从乳酸片球菌的培养物中去除培养基而得到的菌体等。
乳酸片球菌的菌体成分可列举例如：存在于乳酸片球菌的菌体内的、或者在菌体外分泌的提纯或者非提纯的成分，具体地，可列举：单链RNA以及双链RNA，和单链DNA以及双链DNA等。
乳酸片球菌的培养物可列举例如：培养乳酸片球菌而得到的培养液其本身等。
乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物的处理物可列举例如：对乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物实施灭菌处理、干燥处理等一般公知的对乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物进行处理的方法而得到的处理物等。
通过对乳酸片球菌的培养物进行杀菌，使用超滤膜以及离心浓缩机等一般的公知的固液分离手段从培养基中去除培养基以回收菌体，然后用水以及食盐水等的洗涤液对得到的菌体进行洗涤，能够得到乳酸片球菌的菌体。可将如此地得到的菌体保持原样，或者和糊精等的糖的食品原料的混合物，实施干燥处理而得到的干燥粉末等，作为有效成分而使用。干燥处理的方法并不特别限定，可列举例如自然干燥、风干、喷雾干燥、冷冻干燥等。从保存性、制造上的处理的容易性来看，含有本发明的一种实施方式的组合物的有效成分优选地为乳酸片球菌的干燥粉末。
有效成分只要是乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物，并不特别限定，例如：优选为含有核酸的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物，更加优选为含有RNA的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物，更加优选为含有双链RNA的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物。
乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物，能够单独使用它们的任意一种，也能够组合使用两种以上。例如，可以从乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物中，对RNA、优选地对双链RNA进行分离而使用。从乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物中分离RNA的方法并不特别限定，例如作为从乳酸片球菌的菌体中分离双链RNA的方法，可列举日本发明专利第5312322号公报记载的方法等。
获得含有双链RNA的乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的方法并不特别限定，例如可列举包含：通过在通常的MRS培养基中对乳酸片球菌进行植菌，在35℃～45℃下培养24小时～72小时，获得含有双链RNA的乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的方法等。
作为从乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物中分离双链RNA的方法的具体例，可列举例如以下的方法等。即，对含有双链RNA的乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物，实施在90℃～100℃下5分钟～20分钟的加热杀菌处理，得到加热杀菌处理液。接着，对加热杀菌处理液实施离心分离等的固液分离手段，回收固体成分。接着，洗涤固体成分并在缓冲液中悬浮以得到悬浮液。接着，在悬浮液中添加溶菌酶并在35℃～40℃下进行加温以得到溶菌酶处理液。接着，在溶菌酶处理液中添加SDS以及蛋白酶K并在35℃～40℃下进行加温以得到蛋白酶处理液。接着，对蛋白酶处理液实施酚醛/氯仿/异戊醇处理，通过离心分离等的固液分离手段，作为上清液得到粗核酸提取液。粗核酸提取液是含有DNA、单链RNA、双链RNA等的核酸混合物。接着，对粗核酸提取液实施纤维素柱色谱法，能够得到提纯的双链RNA。纤维素柱色谱法以及之后的高度的提纯手段能够根据日本发明专利第5312322号公报的记载进行实施。
一般的乳酸片球菌由于具有长时间被人类摄取的实绩，安全性很高，因此，本发明的一种实施方式的组合物的实用性高，保持原样或者通过进行加工便可适用于各种用途。
本发明的一种实施方式的组合物，对于其摄取方法并不特别限定，例如可适用于口服或者非口服。作为非口服的适用，可列举皮内、皮下、静脉内、肌肉内的给药等进行的注射以及注入；经皮；从鼻子、喉咽等的黏膜的吸入等，但是并不限定于此。
本发明的一种实施方式的组合物的摄取个体并不特别限定，可列举例如：动物尤其是哺乳类，作为哺乳类可列举人类、犬、猫、牛、马、猪、羊等，这些当中尤其优选为人类。摄取个体虽然可以是健康的个体，但是优选为期望抗疾病效果和/或免疫激活效果的个体。
本发明的一种实施方式的组合物，根据用途可组合并含有有效成分和其他成分。即，本发明的一种实施方式的组合物，除了乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物之外，只要可实现本发明的目的，作为其他成分也可以含有各种成分。
作为其他成分，能够列举例如：动植物性食材如糖质甜料、稳定剂、乳化剂、淀粉、淀粉加工物、淀粉降解物、食盐、食用香料、食用色素、酸味调料、风味原料、营养素、果汁、蛋等，通常的食物加工和/或医药品加工所使用的添加物如赋形剂、填充剂、结合剂、增稠剂、芳油、保存剂、缓冲剂等。其他成分的使用量只要不妨碍本发明的课题的解决并不特别限定，可适当地设定。
本发明的一种实施方式的组合物只要是通常使用的形态，并不特别限定，可采用例如固体状、液状、凝胶状、悬浮状、奶油状、片材状、棍状、粉状、粒状、颗粒状、锭状、棒状、板状、块状、糊状、胶囊状、囊片状等的各种形态。
本发明的一种实施方式的组合物，例如，在为口服用组合物的情况下，作为可将乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物，经由食道以及胃向小肠投递的物质，能够制成肠溶性组合物。肠溶性组合物只要是不溶于胃酸而在小肠中溶解的形态的组合物，并不特别限定，可列举例如：耐酸性微胶囊以及脂质体形态的组合物等。
有效成分的含有量，只要是可确认对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用，或者对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用以及对浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生促进作用的量，并不特别限定，作为口服用组合物，例如相对于组合物整体为0.0001质量％～99质量％，优选为0.001质量％～90质量％，作为非口服用组合物，例如为0.00001质量％～99质量％，优选为0.0001质量％～90质量％。
本发明的一种实施方式的组合物的摄取量并不特别限定，能够配合摄取个体的年龄、体格、症状等的摄取个体的特性；摄取方法；适用部位等适当地设定。作为本发明的一种实施方式的组合物的摄取量，例如以乳酸片球菌的菌体作为有效成分的组合物的摄取量为1mg/体重60kg/日～1000mg/体重60kg/日。摄取次数并不特别限定，例如为一日一次～三次，能够根据摄取量适当地增减次数。
本发明的一种实施方式的组合物，可以单独地采取该组合物，或者采取作为配合有该组合物的饮食品用组合物以及医药品用组合物等的形态。因此，本发明的具体的一种实施方式是含有有效成分的、或者含有本发明的一种实施方式的组合物的饮食品用组合物、医药品用组合物、药妆品用组合物、化妆品用组合物、动物饲料用组合物等。
在本发明的一种实施方式的组合物是饮食品用组合物的情况下，只要摄取后至少可发挥有效作用，则可以采取所有饮食品的形态。可列举例如：饮料如果汁饮料、蔬菜汁、水果蔬菜汁、茶饮料、咖啡饮料、运动饮料、清凉饮料、健康饮料等；奶制品如酸奶以及奶酪等；加工饮食品如汤、面条、布丁、果酱等；点心如口香糖、糖果、片状糖果、软糖、巧克力、饼干、小吃等；冷冻点心如冰淇淋、刨冰、冰棒等；调味料如酱油以及味噌等。
饮食品用组合物的具体的一种实施方式是例如对活体具有一定的功能性的饮食品即功能性饮食品。功能性饮食品除了例如特定保健用饮食品、功能性宣示饮食品、营养功能饮食品、保健功能饮食品、特殊用途饮食品、营养辅助饮食品、健康辅助饮食品、营养补剂、美容饮食品等的所谓的健康饮食品之外，还包含：婴儿用饮食品、孕妇和产妇用饮食品、高龄者用饮食品等的特定者用饮食品。进一步地，功能性饮食品包含基于法典(FAO/WHO食品法典委员会)的食品标准的健康声明(Health claim)所适用的健康饮食品。
饮食品用组合物的包装形态并不特别限定，能够根据适用的形态等适当地选择，可列举以例如：塑料如涂布纸、PET以及PTP等，金属如铝等，玻璃等作为材料的包装、瓶、罐、小包等。
在本发明的一种实施方式的组合物为医药品用组合物的情况下，只要在使用后发挥对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用，优选为对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用以及对浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生促进作用，并表现出相应的所期望的抗疾病效果，可采用所有的医药品的形态。
医药品组合物的剂型并不特别限定，可举出例如：注射剂(肌肉、皮下、皮内)、口服制剂、滴鼻制剂等。例如，医药品用组合物能够制备成用于发挥抗病毒效果的疫苗。在医药品用组合物为疫苗的形态的情况下，也可以是包含多种有效成分的混合鸡尾酒式疫苗。
本发明的一种实施方式的组合物的制造方法并不特别限定，可列举例如：将乳酸片球菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物，任意地和其他成分进行混合，成形成所期望的剂型的方法等。
作为本发明的一种实施方式的组合物的制造方法的具体的实施方式，例如可列举以下的方法等。即，通过在MRS培养基对乳酸片球菌进行植菌，在乳酸片球菌的最佳温度±5℃～20℃下培养12小时～72小时，得到培养物。接着，对该培养物实施在90℃～100℃下5分钟～20分钟的加热杀菌处理，得到加热杀菌处理液。接着，通过对加热杀菌处理液实施超滤膜以及离心浓缩机等一般的公知的固液分离手段，去除培养基并回收菌体。接着，用水以及食盐水等的洗涤液对得到的菌体进行洗涤，能够得到乳酸片球菌的菌体。如此地得到的菌体、使该菌体悬浮在水以及食盐水等的洗涤液的菌体悬浮液、对该菌体实施干燥处理而得到的干燥粉末等，可作为本发明的一种实施方式的组合物的有效成分而使用。干燥处理的方法并不特别限定，可列举例如自然干燥、风干、喷雾干燥、冷冻干燥等。
本发明的一种实施方式的组合物的制造方法，只要可实现本发明的目的，能够在上述工序的前段或者后段、或者工序中，加入各种工序和/或操作。
本发明的另一实施方式是作为本发明的一种实施方式的组合物的有效成分可使用的、用于激活浆细胞样树突状细胞的乳酸菌的筛选方法。本发明的一种实施方式的筛选方法大致分为两种具体的实施方式。
本发明的第一种具体的实施方式的筛选方法是以对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用作为指标的方法，至少包含以下的工序：
对包含选自乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种成分，和浆细胞样树突状细胞的被试验溶液进行培养，以及对不含该成分且包含浆细胞样树突状细胞的对照溶液进行培养的工序；
对培养后的被试验溶液以及对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量进行测定的工序；以及
在被测定的被试验溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量比对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量小的情况下，判断所述成分为具有激活浆细胞样树突状细胞的有效成分的工序。
本发明的第二种具体的实施方式的筛选方法是以对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用以及浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生促进作用作为指标的方法，至少包含以下的工序：
对包含选自乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种成分，和浆细胞样树突状细胞的被试验溶液进行培养，以及对不含该成分且包含浆细胞样树突状细胞的对照溶液进行培养的工序；
对培养后的被试验溶液以及对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生量以及浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量进行测定的工序；以及
在被测定的被试验溶液中的干扰素-α的产生量比对照溶液中的干扰素-α的产生量大，并且，被测定的被试验溶液中的FcεRI的表达量比对照溶液中的FcεRI的表达量小的情况下，判断所述成分为激活浆细胞样树突状细胞的有效成分的工序。
本发明的一种实施方式的筛选方法中的被试验物质和浆细胞样树突状细胞的共培养、浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量以及浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生量的测定等，能够参照上述的记载来实施。
本发明的一种实施方式的筛选方法，只要可实现本发明的目的，能够在上述工序的前段或者后段、或者工序中，加入各种工序和/或操作。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但是本发明并非限定于这些实施例，只要可解决本发明的课题，本发明能够采取各种实施方式。
实施例
[例1.乳酸菌的FcεRI的表达抑制试验]
如以下所示地对乳酸菌所具有的高亲和性IgE受体(FcεRI)表达抑制作用进行评价。
1-1.乳酸菌悬浮液的制备
作为乳酸菌，使用了：乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)K15株、K226株、K531株以及JCM8797株；戊糖片球菌(P.pentosaceus)NRIC99株；约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)JCM1022株(K1167株)；德氏乳杆菌(L.delbrueckii)NRIC1688株(K1175株)；戊糖乳杆菌(L.pentosus)K133株以及NRIC1836株。
此外，“NRIC”的菌株表示从东京农业大学、“JCM”的菌株表示从理化学研究所分售的菌株。另外，作为乳酸菌含有物，K15株、K226株、K531株以及K133株从米糠、腌菜、葡萄酒用葡萄以及米糠中分离。
各乳酸菌株以1×107个/ml在MRS培养基中进行接种并制备乳酸菌原液。通过对该乳酸菌原液在26℃～30℃下24小时～36小时静置培养之后，在95℃下进行10分钟的煮沸杀菌处理，制备培养杀菌处理液。将对培养杀菌处理液进行离心分离而得到的菌体在生理食盐水进行洗涤后，在生理食盐水中悬浮，制备乳酸菌悬浮液。
1-2.浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid DC；pDC)的分离
使用淋巴细胞分离液(Nacalai Tesque公司)，通过低密度梯度离心法，从非病毒感染健康者的八名受试者A～H各自的外周血50ml分离外周血单核细胞。之后，使用CD14磁珠(美天旎公司)以及MACS(美天旎公司)，从外周血单核细胞去除CD14阳性细胞。在去除CD14阳性细胞之后，用FITC标记CD304抗体(美天旎公司)进行标记后，使其和FITC磁珠(美天旎公司)反应，通过MACS分离CD304阳性细胞，将该细胞(CD14阴性CD304阳性)作为pDC来使用。
1-3.乳酸菌和pDC的共培养
使用含有10％FBS(Hyclone公司)、25mM D-葡萄糖、25mM HEPES和1μM丙酮酸钠的IMDM培养基(GIBCO公司)作为细胞培养液。使用96孔Round-bottom板(BD Falcon公司)，在各孔内共培养1×107个的各乳酸菌株和2×104个或者4×104个pDC，在24小时后回收细胞以及上清液。将从不使用乳酸菌而仅培养pDC的孔中回收的上清液作为对照。表1表示使用的pDC所来源的受试者和使用的乳酸菌株的组合。
[表1]
序号 乳酸菌株 受试者
1 L.johnsonii K1167 C，D，E，F，G
2 L.delbrueckii K1175 B，D，F，G
3 L.pentosus NR/C1836 F，G
4 L.pentosus K133 F，G
5 P.pentosaceus NR/C99 B，D，F，G，H
6 P.acidilactici K226 F，G
7 P.acidilactici K531 F，G
8 P.acidilactici JCM8797 A，B，C，D，E，F，G，H
9 P.acidilactici K15 A，B，C，D，H
1-4.FcεRI表达抑制活性的测定
使用在共培养后回收的细胞，使用7AAD(BD Pharmingen公司)、PE标记抗FcεRIα(Bio Regend公司)抗体，使用流式细胞术(FACS AriaII、Becton Dickinson公司)对FcεRIα的表达进行定量。对于得到的定量值，以对照的值作为1，通过相对值求出使用了各乳酸菌株的情况下的值。
1-5.评价
在试验的乳酸菌株当中，约氏乳杆菌K1167株、德氏乳杆菌K1175株以及戊糖乳杆菌NRIC1836株显示出在来源于一名以上的受试者的pDC中，比对照高的值(＞1)。特别地，对于约氏乳杆菌K1167株以及德氏乳杆菌K1175株，显示出在来源于两名的受试者的pDC中，比对照高的值。对于这些乳酸菌株，判断为不具有FcεRI表达抑制作用。
对于其余的乳酸菌株，图1显示了根据从每个受试者选取的pDC的FcεRI表达量(相对值)，对每个乳酸菌株求出受试者之间的平均值的结果。如图1所示，对于戊糖乳杆菌，乳酸片球菌以及戊糖片球菌的pDC的FcεRI表达量低至0.9以下。特别地，在任意的菌株中，乳酸片球菌的pDC的FcεRI表达量都变低。
根据以上的结果，确认了片球菌属乳酸菌具有对pDC的FcεRI的表达抑制作用，尤其是乳酸片球菌具有显著优异的、对pDC的FcεRI的表达抑制作用。
[例2.乳酸菌的干扰素-α产生促进试验]
如以下所述地评价乳酸菌所具有的干扰素-α(IFN-α)产生促进作用。
2-1.IFN-α产生促进活性的测定
使用在例1的乳酸菌和pDC的共培养后回收的培养上清液，使用人IFN-α配对抗体对(eBioscience公司)对IFN-α的浓度进行定量。对于得到的定量值，以对照的值作为1，通过相对值求出使用了各乳酸菌株的情况下的值。
2-2.评价
在试验的乳酸菌株当中，对于约氏乳杆菌K1167株以外的乳酸菌株，确认了pDC所来源的受试者以及乳酸菌株没有关系，对pDC的IFN-α的产生诱导能力。对于约氏乳杆菌K1167株，不管使用来源于哪个受试者的pDC，IFN-α的产生量都很少(受试者之间的平均为1.8)，且相对于对照仅看到轻微的增加。
另一方面，试验的乳酸菌株中对pDC的IFN-α的产生诱导能力最大的菌株是德氏乳杆菌K1175株。当结合表示德氏乳杆菌K1175株不具有FcεRI的表达抑制作用的例1的结果进行考虑时，可知对pDC的IFN-α的产生促进作用和FcεRI表达抑制作用并不一定是相关关系。
根据以上结果，乳酸片球菌以及戊糖片球菌这些片球菌属乳酸菌具有对pDC的FcεRI的表达抑制作用，进一步地，具有IFN-α的产生促进作用是本发明者们首次发现的非常令人惊讶的现象。
[例3.和与FcεRI的表达抑制作用相关的TLR配体的比较试验]
对乳酸片球菌K15株具有的FcεRI表达抑制活性和TLR配体具有的活性的比较，如以下所述地进行评价。
3-1.TLR配体具有的FcεRI表达抑制作用的测定
对于从受试者H选取的pDC，除了使用TLR7的配体即咪喹莫特(R837；invivogen公司)、TLR8的配体即ssRNA40/LyoVec(invivogen公司)以及TLR9的配体即ODN2216(CpG；invivogen公司)以使最终浓度为10μg/ml来代替各乳酸菌株之外，和例1相同地实施和pDC的共培养。将从不使用K15株或者配体而仅培养pDC的孔中回收的上清液作为对照。
使用共培养后回收的细胞，通过NucleoSpin RNAXS(MACHEREY-NAGEL公司)提取RNA，使用PrimeScript RT Reagent Kit(宝生物公司)以及TB Green Premix Ex Taq II(宝生物公司)并通过定量PCR法，对FcεRIα、β-actin的mRNA表达量进行测定。各引物从宝生物公司购买。FcεRIα的mRNA表达量使用β-actin的测定值进行标准化，将对照(Med)的值作为1，通过相对值求出使用了K15株或者配体的情况下的值。
3-2.评价
图2表示K15株以及各TLR配体的FcεRI的mRNA的相对量。如图2所示，根据FcεRI的mRNA的相对量，可知K15株的FcεRI表达抑制活性和各TLR配体的活性同等程度或者活性比其强。
产业上的可利用性
本发明的一种实施方式的组合物，包含可在口服以及非口服的任一方式中应用的有效成分，通过对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用，对于期待抗病毒活性、抗感染症活性、抗过敏活性、抗花粉症活性和抗哮喘活性的摄取个体有用，可作为有助于这样的摄取个体的健康以及福利的饮食品、医药品、药妆品、化妆品等利用。
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年8月9日申请的日本特愿2018-150152号的优先权，其记载在此作为公开被引用。

Claims (9)

1.浆细胞样树突状细胞激活用组合物，含有选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分，并且，具有对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用。
2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物具有对浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生促进作用。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，所述片球菌属乳酸菌是选自乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)以及戊糖片球菌(P.pentosaceus)的至少一种片球菌属乳酸菌。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，所述组合物具有和使用与所述有效成分等量的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)K113株时相比更高的、对浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达抑制作用。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，所述组合物是选自抗病毒用组合物、抗感染症用组合物、抗过敏用组合物、抗花粉症用组合物以及抗哮喘用组合物的至少一种的抗疾病用组合物。
6.饮食品用组合物，含有权利要求1～5中任一项所述的组合物。
7.用于激活浆细胞样树突状细胞的乳酸菌的筛选方法，包含：
对包含选自乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种成分，和浆细胞样树突状细胞的被试验溶液进行培养，以及对不含该成分且包含浆细胞样树突状细胞的对照溶液进行培养的工序；
对培养后的被试验溶液以及对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量进行测定的工序；以及
在被测定的被试验溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量比对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量小的情况下，判断所述成分为具有激活浆细胞样树突状细胞的有效成分的工序。
8.用于激活浆细胞样树突状细胞的乳酸菌的筛选方法，包含：
对包含选自乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种成分，和浆细胞样树突状细胞的被试验溶液进行培养，以及对不含该成分且包含浆细胞样树突状细胞的对照溶液进行培养的工序；
对培养后的被试验溶液以及对照溶液中的浆细胞样树突状细胞的干扰素-α的产生量以及浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达量进行测定的工序；以及
在被测定的被试验溶液中的干扰素-α的产生量比对照溶液中的干扰素-α的产生量大，并且，被测定的被试验溶液中的FcεRI的表达量比对照溶液中的FcεRI的表达量小的情况下，判断所述成分为激活浆细胞样树突状细胞的有效成分的工序。
9.一种方法，使用选自片球菌属乳酸菌的菌体、菌体成分以及培养物和它们的处理物的至少一种的有效成分，抑制浆细胞样树突状细胞的FcεRI的表达。
CN201980052277.XA 2018-08-09 2019-08-08 FcεRI的表达抑制用组合物以及FcεRI的表达抑制方法 Pending CN112543641A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018-150152 2018-08-09
JP2018150152 2018-08-09
PCT/JP2019/031341 WO2020032166A1 (ja) 2018-08-09 2019-08-08 ＦｃεＲＩの発現抑制用組成物及びＦｃεＲＩの発現抑制方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112543641A true CN112543641A (zh) 2021-03-23

Family

ID=69414782

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980052277.XA Pending CN112543641A (zh) 2018-08-09 2019-08-08 FcεRI的表达抑制用组合物以及FcεRI的表达抑制方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20210301250A1 (zh)
EP (1) EP3815701A4 (zh)
JP (1) JP6691275B1 (zh)
CN (1) CN112543641A (zh)
WO (1) WO2020032166A1 (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012091081A1 (ja) * 2010-12-28 2012-07-05 キリンホールディングス株式会社 乳酸菌を含むインターフェロン産生誘導剤
JP2016086711A (ja) * 2014-10-31 2016-05-23 キリン株式会社 微生物又はｄｎａの免疫賦活活性を予測する方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5131688B2 (zh) 1973-08-16 1976-09-08
WO1999046393A1 (fr) 1998-03-13 1999-09-16 Asahi Breweries, Ltd. Adn contenant une zone d'activation de la transcription genique
WO2004108929A1 (ja) 2003-06-04 2004-12-16 Nihon University School Juridical Person 高親和性IgE受容体β鎖発現調節
JP5144028B2 (ja) * 2006-05-12 2013-02-13 ユニチカ株式会社 乳酸菌の免疫調整作用を相乗的に高める組成物
JP5144186B2 (ja) * 2007-09-14 2013-02-13 株式会社日清製粉グループ本社 抗アレルギー剤
JP6590330B2 (ja) * 2013-11-11 2019-10-16 キッコーマン株式会社 経口免疫寛容増強物質のスクリーニング方法および経口免疫寛容増強組成物
WO2015182735A1 (ja) * 2014-05-30 2015-12-03 キリン株式会社 乳酸菌免疫賦活作用増強組成物及び乳酸菌免疫賦活作用増強方法
KR101635997B1 (ko) * 2014-07-11 2016-07-07 한국식품연구원 페디오코쿠스 에시디락티시(Pediococcus acidilactici)를 유효성분으로 포함하는 Ｔｈ1-매개 면역 질환 또는 Ｔｈ2-매개 면역 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
JP6818405B2 (ja) * 2015-11-10 2021-01-20 キリンホールディングス株式会社 乳酸菌の免疫賦活作用を増強する方法
JP6942982B2 (ja) 2017-03-14 2021-09-29 富士フイルムビジネスイノベーション株式会社 画像形成装置

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012091081A1 (ja) * 2010-12-28 2012-07-05 キリンホールディングス株式会社 乳酸菌を含むインターフェロン産生誘導剤
JP2016086711A (ja) * 2014-10-31 2016-05-23 キリン株式会社 微生物又はｄｎａの免疫賦活活性を予測する方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GILL M.A.等: "Counterregulation between the FcεRI Pathway and Antiviral Responses in Human Plasmacytoid Dendritic Cells", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》, vol. 184, pages 16 - 19 *
SCHROEDER J.T.等: "TLR9-and FcεRI-Mediated Responses Oppose One Another in Plasmacytoid Dendritic Cell by Down-Regulating Receptor Expression", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》, vol. 175, pages 5729 *
TADAOMI KAWASHIMA等: "The molecular mechanism for activating IgA production by Pediococcus acidilactici K15 and the clinical impact in a randomized trial.", 《SCIENTIFIC REPORTS.》, vol. 8, no. 1, 22 March 2018 (2018-03-22), pages 5065 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3815701A1 (en) 2021-05-05
JPWO2020032166A1 (ja) 2020-08-20
US20210301250A1 (en) 2021-09-30
EP3815701A4 (en) 2022-03-16
JP6691275B1 (ja) 2020-04-28
WO2020032166A1 (ja) 2020-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100908254B1 (ko) 항알레르기용 조성물
KR101614262B1 (ko) 신규 유산균, 그리고 신규 유산균을 함유하는 의약, 음식품 및 사료
EP2223697B1 (en) Lactic acid bacterium-containing preparation
EP3141254B1 (en) Lactobacillus rhamnosus rht-3201 conjugated to polysaccharide polymer binder, and use thereof for prevention or treatment of atopic diseases
CN111935995A (zh) 营养组合物以及使用了该营养组合物的饮食品组合物和配方奶粉
JP2008245569A (ja) 高抗アレルギー活性を有する乳酸菌組成物及び該乳酸菌の製造方法
TW201840328A (zh) 肽聚醣辨識蛋白質產生促進用組成物
JP6796299B2 (ja) 免疫賦活用組成物及びサイトカイン産生促進用組成物
JP7358001B2 (ja) 乳酸菌、インターロイキン－２２産生誘導剤、皮膚バリア機能増強剤
KR102146706B1 (ko) 비피도박테리움 애니멀리스 서브스페시스 락티스 HY8002와 비피도박테리움 아돌레센티스 HY8502의 유산균 조합을 이용한 진세노사이드 Rd가 강화된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 알레르기성 비염을 개선하기 위한 조성물
JP6691275B1 (ja) ＦｃεＲＩの発現抑制用組成物及びＦｃεＲＩの発現抑制方法
EP4091673A1 (en) Anti-aging composition
JP7475155B2 (ja) 持久力向上用組成物
CN115702001A (zh) 用于抑制或改善抑郁的组合物
JP6704990B2 (ja) インターフェロンλ産生促進用組成物及びその製造方法
JP6016326B2 (ja) 乳酸菌のスクリーニング方法
EP4166149A1 (en) Mitochondrial function-improving composition
WO2023074820A1 (ja) ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２増殖抑制剤
KR100854816B1 (ko) 항알레르기용 조성물
JP2024075260A (ja) 免疫調整用組成物
JP2024049199A (ja) プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物
JP2024031727A (ja) プラズマサイトイド樹状細胞活性化用組成物
WO2022253828A2 (en) Bacterial strains for use in preventing, treating and/or reducing symptoms associated with a rhinovirus-induced cold infection
CN118119286A (zh) 用于促进低聚糖的同化的组合物
JP2023021731A (ja) 免疫賦活用組成物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination