CN118119286A

CN118119286A - 用于促进低聚糖的同化的组合物

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Publication number: CN118119286A
Application number: CN202280070592.7A
Authority: CN
Inventors: 希吉尔; 江原达弥; 神村卓也; 津田宗哉
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 2021-10-21
Filing date: 2022-10-21
Publication date: 2024-05-31
Also published as: JP2023062564A

Abstract

提供用于促进例如HMO等低聚糖被肠细菌、尤其是双歧杆菌菌株同化的技术。作为第一方面，提供用于促进低聚糖的同化的含有生育酚的组合物。作为第二方面，提供含有低聚糖和生育酚的营养组合物(不包括母乳)。所述方面中的生育酚包含选自由β‑生育酚、γ‑生育酚和δ‑生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。所述方面中的低聚糖优选为人乳低聚糖。所述方面中δ‑生育酚含量与β‑生育酚含量的质量比(δ/β)优选为5以上，并且γ‑生育酚含量与δ‑生育酚含量的质量比(γ/δ)优选为8.8以下。

Description

用于促进低聚糖的同化的组合物

技术领域

本发明涉及生育酚的新用途并且具体涉及用于促进低聚糖的同化的用途。本发明还涉及含有低聚糖和生育酚的营养组合物。

背景技术

近年来，针对人乳低聚糖(以下也称为HMO)(用于人初乳中包含的多种低聚糖的通用术语)进行了各种研究。经计算，人乳低聚糖以22至24g/L包含于初乳中并且以12至13g/L包含于常乳中，并且人乳低聚糖为母乳中仅次于乳糖和脂质的第三高的固成分。已知人乳低聚糖具有感染保护作用和免疫调节作用等。

认为包括人乳低聚糖的低聚糖被肠道中的各种细菌同化，从而有助于宿主的健康(NPL 1)。特别地，已经提出并且深入研究了应用包括HMO的低聚糖自身和作为低聚糖和其它组分的组合的糖源作为被对人类有益的肠细菌(intestinal bacteria)同化并且使细菌增殖的“益生元(prebiotics)”。

例如，PTL 1公开了HMO被婴儿的肠道中的双歧杆菌菌株选择性地利用并且促进其生长。在肠细菌中，已知双歧杆菌菌株在婴儿和幼儿的肠内微生物群(entericmicrobiota)中是最主要的。双歧杆菌菌株为生活在健康人的小肠下部至大肠中的专性厌氧菌，并且众所周知的是由于肠调节作用和免疫调节作用等而在维持宿主的健康方面起到重要的作用(NPL 2)。

因此，为了增强包括婴儿和幼儿的人类的健康，重要的是开发在肠道中改善例如HMO等低聚糖的容易同化性的组合物，特别是开发容易被双歧杆菌菌株同化并且促进其生长的组合物。

生育酚作为配混在用于婴儿和幼儿的营养组合物中的组分而引起关注，并且已经报道了α-生育酚促进双歧杆菌菌株的生长(PTL 2)。

PTL 3公开了含有2’-岩藻糖基乳糖(其为HMO中的一种)和α-生育酚的组合物并且描述了该组合物具有改善认知、学习和记忆中的至少一者的作用。

在这一点上，α-生育酚以外的生育酚的其它同种型仍在研究中，并且尚未取得充分的探索结果。

现有技术文献

专利文献

PTL 1：WO2012-158517

PTL 2：WO2018-237149

PTL 3：WO2016-086151

非专利文献

NPL 1：L.W.Chia等人,Microorganisms,2020,8(10),1513

NPL 2：T.Urashima等人,Milk Science Vol.56,No.4,2008

发明内容

发明要解决的问题

本发明的问题在于提供用于促进例如HMO等低聚糖被肠细菌、尤其是双歧杆菌菌株同化的技术。

用于解决问题的方案

作为解决该问题的深入研究的结果，本发明人发现α-生育酚以外的生育酚的同种型，即选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种，促进例如人乳低聚糖等低聚糖被肠细菌同化。本发明人还发现，在将例如人乳低聚糖等低聚糖和α-生育酚以外的生育酚的同种型组合时，可以进一步促进双歧杆菌菌株的生长，并由此完成本发明。

即，本发明的第一方面为用于促进低聚糖的同化的包含生育酚的组合物，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。术语“低聚糖的同化”和“低聚糖的利用”在本文中可交换使用。如本文中所使用的“低聚糖的同化”指低聚糖的消耗。低聚糖的消耗可以通过在培养期间随时间推移测定培养基中的低聚糖的水平/量的变化(例如，通过在培养开始时和在随后的时间点(例如，在7小时、10小时或24小时之后)测定水平/量)来容易地确定。术语“低聚糖的同化”可以包括或者为“低聚糖的代谢”。应当理解，这些术语主要分别指被肠细菌、特别是双歧杆菌同化或利用或代谢或消耗。

此外，术语“包含(comprising)”和“含有(containing)”在本文中可交换使用。

关于第一方面的组合物(特别是“营养组合物”)给出的说明和定义经必要修改后适用于第二方面的组合物(特别是“营养组合物”)，并且反之亦然。

在本方面的组合物中，δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)优选为5以上，更优选为10以上。

在本方面的组合物中，γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)优选为8.8以下，更优选为3.9以下。

本方面的组合物的更优选的用途为用于促进具有3个以上且5个以下的糖残基的低聚糖的同化的用途。本方面的组合物的更优选的用途为用于促进人乳低聚糖的同化的用途。在所述用途中同化被促进的人乳低聚糖优选包含选自由乳糖-N-新四糖(也称为LNnT)、2’-岩藻糖基乳糖(也称为2’-FL)、3’-唾液乳糖(也称为3’-SL)、6’-唾液乳糖(也称为6’-SL)、二岩藻糖基乳糖(DFL)和3-岩藻糖基乳糖(3-FL)组成的组中的一种、两种或更多种。

本方面的组合物可以进一步包含人乳低聚糖。在本方面，组合物优选包含乳糖-N-四糖(也称为LNT)，并且优选用于促进含有2’-岩藻糖基乳糖的人乳低聚糖的同化的用途。

本方面的组合物优选为营养组合物，更优选为配方食品，特别优选为配方奶。营养组合物优选为婴儿配方食品(infant formula)、较大婴儿配方食品(follow-up formula)或成长配方食品(growing-up formula)。如本文中所使用的“婴儿配方食品”指旨在供0至6月龄(即，生命的前6个月期间)的婴儿使用的配方食品。如本文中所使用的“较大婴儿配方食品”指旨在供6至12月龄(即，6月龄以上，直至并且包括12月龄)的婴儿使用的配方食品。术语较大婴儿配方食品(follow-up formula)和后续配方食品(follow-on formula)在本文中可交换使用。如本文中所使用的“成长配方食品”指旨在供12至36月龄的儿童(即，36月龄或低于36月龄且大于12月龄的儿童)使用的配方食品。术语“成长配方食品”和“幼儿用配方食品”在本文中可交换使用。

术语“婴儿”意指0至12月龄的儿童(换言之，12月龄或低于12月龄的儿童)。术语“幼儿”意指在12至36月龄之间的儿童(换言之，36月龄或低于36月龄且大于12月龄的儿童)。“幼儿”在本文中也称为“幼童”。

本方面的组合物可以为在使用前添加至含有人乳低聚糖的组合物中的方面。在本方面，含有人乳低聚糖的组合物优选为母乳，特别是人类母乳，例如泵出的母乳。术语“泵出的母乳”和“挤出的母乳”在本文中可交换使用。因此，在本文中设想本发明的组合物(特别是营养组合物)可以用作添加剂或补充剂，其优选可以添加至另一含有人乳低聚糖的组合物如母乳中。由此，可以提高其它组合物(例如母乳)的营养价值。设想其中添加有本发明的组合物的含有人乳低聚糖的组合物例如母乳(即，制备的混合物)由婴儿/儿童摄取或者喂给婴儿/儿童。

根据上文，本发明在一个方面涉及包含生育酚的组合物用于促进低聚糖的同化的用途，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。

本发明在一个方面涉及本文中公开的组合物、具体为营养组合物用于促进双歧杆菌菌株的生长的用途。在“促进低聚糖的同化”或“用于促进双歧杆菌菌株的生长”的该上下文中，组合物可以例如用作优选可以添加至另一含有人乳低聚糖的组合物如母乳中的添加剂或补充剂。

在一个方面，本文中公开的用途或方法特别是在该上下文中为体外用途或离体用途。

在一个方面，本文中公开的用于肠道菌群(gut flora)改善的用途或方法是非治疗性的。

在一个方面，本文中公开的用于肠道菌群改善的方法不是通过疗法来治疗人体或动物体的方法。

在一个方面，本文中公开的用于肠道菌群改善的用途不是通过疗法来治疗人体或动物体的方法。

本发明的第二方面为包含低聚糖和生育酚的营养组合物(不包括母乳)，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。

在本方面的营养组合物中，δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)优选为5以上，更优选为10以上。

在本方面的营养组合物中，γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)优选为8.8以下，更优选为3.9以下。

在本方面的营养组合物中，β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与低聚糖含量的质量比优选为0.001至0.2。

在本方面的营养组合物中，β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量基于整个组合物优选为0.0002至0.1质量％。

在本方面的营养组合物中，整个组合物的低聚糖含量优选为0.05至10质量％。

在本方面的营养组合物中，低聚糖优选具有3个以上且5个以下的糖残基。低聚糖优选为人乳低聚糖，并且更优选包含选自由乳糖-N-新四糖、乳糖-N-四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖组成的组中的一种、两种或更多种。特别地，含有乳糖-N-四糖和2’-岩藻糖基乳糖作为低聚糖的实施方案是优选的。含有低聚果糖和6’-唾液乳糖的实施方案也是优选的。

本方面的营养组合物适合于用于促进双歧杆菌菌株的生长，并且双歧杆菌菌株优选为选自由短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌组成的组中的一种、两种或更多种菌株。

本方面的营养组合物优选进一步包含双歧杆菌菌株。

本方面的营养组合物优选为配方食品。

发明的效果

根据本发明，提供可以促进例如HMO等低聚糖被肠细菌同化的组合物。此外，根据本发明，提供可以促进双歧杆菌菌株在肠道中的生长的营养组合物。

组合物可以为作为口服组合物如食品、饮料或药品的方面或者可以作为添加剂等的方面包含在食品、饮料或药品中。通过摄取本发明的组合物，预期获得改善肠内微生物群的效果并且该摄入有助于维持摄取该组合物的人、尤其是婴儿或幼儿的健康。

附图说明

[图1]示出在添加生育酚的情况下，婴儿双歧杆菌M-63的生长的图(n＝6)。示出了16小时培养开始和结束时OD₆₀₀值之差。

[图2]示出在添加生育酚和2’-岩藻糖基乳糖的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌M-63 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。如本文中所使用的术语“细菌细胞的增加程度”指“培养开始和结束时OD₆₀₀值之差”。

[图3]示出在添加生育酚和6’-唾液乳糖的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌M-6316小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图4]示出在添加生育酚和低聚半乳糖的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌M-6316小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图5]示出在添加生育酚的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌MCC204216小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图6]示出在添加生育酚和2’-岩藻糖基乳糖的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌MCC2042 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图7]示出在添加生育酚和6’-唾液乳糖的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌MCC2042 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图8]示出在添加生育酚和低聚半乳糖的情况下，在单独培养婴儿双歧杆菌MCC2042 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图9]示出在添加生育酚的情况下，在单独培养两歧双歧杆菌MCC203016小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图10]示出在添加生育酚和2’-岩藻糖基乳糖的情况下，在单独培养两歧双歧杆菌MCC2030 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图11]示出在添加生育酚和6’-唾液乳糖的情况下，在单独培养两歧双歧杆菌MCC2030 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

[图12]示出在添加生育酚和低聚半乳糖的情况下，在单独培养两歧双歧杆菌MCC2030 16小时之后细菌细胞的增加程度(与OD₆₀₀的初始值之差)的图(n＝6)。

具体实施方式

接下来，详细地说明本发明。然而，在这一点上，本发明不限于以下实施方案，并且可以在本发明的范围内自由地做出改变。

在某些方面，本发明还涉及以下项。

项1：

包含生育酚的组合物用于促进低聚糖的同化的用途，

其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。

项2：

组合物用于受试者中肠道菌群改善的用途，组合物包含生育酚，

项3：

一种用于肠道菌群改善的方法，其中向受试者施用包含生育酚的组合物，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。

项4：

项1或2的用途或者项3的方法，其中受试者为健康受试者。

项5：

一种包含生育酚的组合物，其用于预防或治疗由肠道微生物群功能障碍或紊乱引起的疾病或病况，

项6：

项1、2或4中任一项的用途、或者项3或4的方法、或者项5的用于用途的组合物，其中受试者为婴儿或幼儿。

项7：

项1、2、4或6中任一项的用途、或者项3、4和6中任一项的方法、或者项5或6的用于用途的组合物、或者项5或6的用于用途的组合物，其中组合物用于促进低聚糖的同化。

项8：

项1、2、4、6和7中任一项的用途、或者项3、4、6和7中任一项的方法、或者项5至7中任一项的用于用途的组合物，其中生育酚包含β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚(的全部)。

项9：

项1、2、4和6至8中任一项的用途、或者项3、4、6至8中任一项的方法、或者项5至8中任一项的用于用途的组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为5以上和/或200以下。

项10：

根据项9的用途、或者项9的方法、或者项9的用于用途的组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为10以上和/或200以下。

项11：

项1、2、4和6至10中任一项的用途、或者项3、4、6至10中任一项的方法、或者项5至10中任一项的用于用途的组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为8.8以下和/或0.1以上。

项12：

根据项11的用途、或者项11的方法、或者项11的用于用途的组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为3.9以下和/或0.1以上。

项13：

项1、2、4和6至12中任一项的用途、或者项3、4、6至12中任一项的方法、或者项5至12中任一项的用于用途的组合物，其中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与低聚糖含量的质量比为0.001至0.2。

项14：

项1、2、4和6至13中任一项的用途、或者项3、4、6至13中任一项的方法、或者项5至13中任一项的用于用途的组合物，其中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量基于整个组合物为0.0002至0.1质量％。

项15：

项1、2、4和6至14中任一项的用途、或者项3、4、6至14中任一项的方法、或者项5至14中任一项的用于用途的组合物，其中整个组合物的低聚糖含量为0.05至10质量％。

项16：

项1、2、4和6至15中任一项的用途、或者项3、4、6至15中任一项的方法、或者项5至15中任一项的用于用途的组合物，其中组合物用于促进具有3个以上且5个以下的糖残基的低聚糖的同化。

项17：

项1、2、4和6至16中任一项的用途、或者项3、4、6至16中任一项的方法、或者项5至16中任一项的用于用途的组合物，其中组合物用于促进人乳低聚糖的同化。

项18：

根据项17的用途、或者项17的方法、或者项17的用于用途的组合物，其中人乳低聚糖包含选自由乳糖-N-新四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖组成的组中的一种、两种或更多种，优选地，其中人乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖或6’-唾液乳糖。

项19：

项1、2、4和6至18中任一项的用途、或者项3、4、6至18中任一项的方法、或者项5至18中任一项的用于用途的组合物，其中组合物进一步包含人乳低聚糖，优选地，其中人乳低聚糖包含选自由乳糖-N-新四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖组成的组中的一种、两种或更多种，更优选地，其中人乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖或6’-唾液乳糖。

项20：

根据项19的用途、或者项19的方法、或者项19的用于用途的组合物，其中组合物包含乳糖-N-四糖，任选地，其中所述组合物用于促进含有2’-岩藻糖基乳糖的人乳低聚糖的同化。

项21：

根据项19的用途、或者项19的方法、或者项19的用于用途的组合物，其中组合物包含乳糖-N-四糖和2’-岩藻糖基乳糖。

项22：

根据项19的用途、或者项19的方法、或者项19的用于用途的组合物，其中组合物包含低聚果糖和6’-唾液乳糖。

项23：

项1、2、4和6至22中任一项的用途、或者项3、4、6至22中任一项的方法、或者项5至22中任一项的用于用途的组合物，其中组合物为营养组合物。

项24：

根据项23的用途、或者项23的方法、或者项23的用于用途的组合物，其中组合物为配方奶，优选为婴儿配方奶。

项25：

项1、2、4和6至24中任一项的用途、或者项3、4、6至24中任一项的方法、或者项5至24中任一项的用于用途的组合物，其中在使用前将组合物添加至含有人乳低聚糖的组合物中。

项26：

根据项25的用途、或者项25的方法、或者项25的用于用途的组合物，其中含有人乳低聚糖的组合物为母乳。

项27：

项1、2、4和6至26中任一项的用途、或者项3、4、6至26中任一项的方法、或者项5至26中任一项的用于用途的组合物，其中组合物用于促进低聚糖被双歧杆菌菌株同化，优选地，其中双歧杆菌菌株为选自由短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌组成的组中的一种、两种或更多种菌株，更优选地，其中双歧杆菌菌株为长双歧杆菌婴儿亚种MCC2042、婴儿双歧杆菌M-63或两歧双歧杆菌MCC2030。

项28：

项1、2、4和6至27中任一项的用途、或者项3、4、6至27中任一项的方法、或者项5至27中任一项的用于用途的组合物，其中组合物进一步包含双歧杆菌菌株，优选地，其中双歧杆菌菌株为选自由短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌组成的组中的一种、两种或更多种菌株，更优选地，其中双歧杆菌菌株为长双歧杆菌婴儿亚种MCC2042、婴儿双歧杆菌M-63或两歧双歧杆菌MCC2030。

项29：

一种营养组合物，其包含低聚糖和生育酚，

其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种(条件是不包括母乳)。

项30：

根据项29的营养组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为5以上和/或200以下。

项31：

根据项30的营养组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为10以上和/或200以下。

项32：

根据项29至30中任一项的营养组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为8.8以下和/或0.1以上。

项33：

根据项32的营养组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为3.9以下和/或0.1以上。

项34：

根据项29至32中任一项的营养组合物，其中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与低聚糖含量的质量比为0.001至0.2。

项35：

根据项29至34中任一项的营养组合物，其中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量基于整个组合物为0.0002至0.1质量％。

项36：

根据项29至35中任一项的营养组合物，其中整个组合物的低聚糖含量为0.05至10质量％。

项37：

根据项29至36中任一项的营养组合物，其中低聚糖具有3个以上且5个以下的糖残基。

项38：

根据项29至37中任一项的营养组合物，其中低聚糖包含人乳低聚糖。

项39：

根据项38的营养组合物，其中人乳低聚糖包含选自由乳糖-N-新四糖、乳糖-N-四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖组成的组中的一种、两种或更多种，更优选地，其中人乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖或6’-唾液乳糖。

项40：

根据项37的营养组合物，其中低聚糖包含乳糖-N-四糖和2’-岩藻糖基乳糖。

项41：

根据项37的营养组合物，其中低聚糖包含低聚果糖和6’-唾液乳糖。

项42：

根据项29至41中任一项的营养组合物，其用于促进双歧杆菌菌株的生长。

项43：

根据项42的营养组合物，其中双歧杆菌菌株为选自由短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌组成的组中的一种、两种或更多种菌株，更优选地，其中双歧杆菌菌株为长双歧杆菌婴儿亚种MCC2042、婴儿双歧杆菌M-63或两歧双歧杆菌MCC2030。

项44：

根据项29至43中任一项的营养组合物，其进一步包含双歧杆菌菌株，优选地，其中双歧杆菌菌株为选自由短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌组成的组中的一种、两种或更多种菌株，更优选地，其中双歧杆菌菌株为长双歧杆菌婴儿亚种MCC2042、婴儿双歧杆菌M-63或两歧双歧杆菌MCC2030。

项45：

根据项29至44中任一项的营养组合物，其为配方食品，优选为婴儿配方食品。

<第一方面：用于促进低聚糖的同化的组合物>

本方面的组合物包含生育酚作为活性成分。

生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。优选地，包含β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的全部三种。此外，本方面的组合物可以进一步包含α-生育酚。

在本方面的组合物中，δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)优选为5以上，更优选为10以上。对δ/β的上限没有特别限制，但是通常为200以下，例如150以下、100以下、90、80、70、60、50、40、30、25或20以下。δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)优选在5至25之间，更优选在10至25之间，并且甚至更优选在10至16之间。

当δ/β在所述范围内时，更容易获得促进低聚糖被肠细菌同化的效果。

在本方面的组合物中，γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)优选为9以下、8.9以下或8.8以下，更优选4(例如，4.0)以下或3.9以下。对γ/δ的下限没有特别限制，但是通常为0.1以上，例如0.5以上、1以上、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2或2.0以上。γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)优选在1至9(或8.9或8.7)之间，更优选在1至4(4.0或3.9)之间，并且甚至更优选在2(2.1)至4(3.9)之间。

当γ/δ在所述范围内时，更容易获得促进低聚糖被肠细菌同化的效果。

下表1示出本文中使用的生育酚模式，基于其确定用于本发明的比：

[表1]

表1

	模式1	模式2	模式3	模式4
					β	1	1	1	1
γ	24.5	33	39	44
					δ	24.5	16	10	5
γ/δ	1	2.1	3.9	8.8
					δ/β	24.5	16	10	5
γ/β	24.5	33	39	44

设想了使用模式1至4，还设想了使用在模式1至4之间、优选在模式1至3之间并且更优选在模式2至3之间的任意范围。

根据上述，组合物中β:γ:δ的(质量)比优选为β:γ:δ＝1:24.5-44:5-24.5，更优选β:γ:δ＝1:25-39:10-24.5，最优选β:γ:δ＝1:33-39:10-16。

对本方面的组合物中基于整个组合物(每固体含量)的β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量没有特别限制。

以使β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与作为同化促进对象的低聚糖的量的质量比成为优选0.001至0.2、更优选0.004至0.2、进一步优选0.01至0.2的方式来调整或应用本方面的组合物中的所述总量。

本方面的组合物可以促进低聚糖被肠细菌直接或间接同化，这是因为β-生育酚、γ-生育酚和/或δ-生育酚作为活性成分起作用。

通常，同化了低聚糖的肠细菌产生各种有益物质，并且本方面的组合物促进其产生，因此可以有助于增强肠细菌的宿主的健康。

此外，通常，肠细菌同化低聚糖用于生长，并且当低聚糖的同化被促进时，作为结果，低聚糖促进了生长的肠细菌在肠中变得占优势。因此，本方面的组合物还可以支持和改善低聚糖作为益生元物质的效果。

例如，当在低聚糖的存在下培养肠细菌之后低聚糖随时间减少时，可以确认低聚糖被同化。更具体地，当一定时间之后的培养体系中的低聚糖的量的残留率小于某一时间点(例如，在培养开始时等)的培养体系中的低聚糖的量时，可以确认低聚糖被同化。

本说明书中的“促进同化”意指在施用本方面的组合物的情况下低聚糖的同化程度大于不施用的情况，换言之，一定时间之后的低聚糖的残留率更小。对残留率的降低程度没有特别限制，但是为如下残留率，所述残留率为在不施用本方面的组合物的情况下的残留率的优选0.9倍以下、更优选0.8倍以下、进一步优选0.7倍以下。可选地，基于培养开始时的值，7小时、10小时或24小时的培养之后的残留率可以优选为70质量％以下，更优选50质量％以下，进一步优选20质量％以下。

此外，“促进同化”可以意指与不施用本方面的组合物的情况相比，当施用本方面的组合物时，低聚糖通过同化而减少的速度增加。对速度的增加程度没有特别限制，但是比在不施用本方面的组合物的情况下的减少速度高优选10％以上，更优选20％以上，进一步优选50％以上。例如，当施用本方面的组合物时，直至基于培养开始时的值的残留率达到特定值所需的时间与不施用的情况下的所述时间相比变得更短时，可以确认减少速度的增加。可选地，当直至基于培养开始时的值的残留率变为20质量％以下所需的培养时间优选为24小时以下、更优选18小时以下、优选12小时以下时，可以确定促进了同化。

当在低聚糖的存在下培养肠细菌之后促进了肠细菌的生长时，也可以确认低聚糖被同化。关于促进肠细菌的生长，请参见下述第二方面中的说明。

在本方面中同化得到促进的低聚糖被肠细菌同化。肠细菌可以为双歧杆菌属(Bifidobacterium)的菌株、肠球菌属(Enterococcus)的菌株、链球菌属(Streptococcus)的菌株、埃希氏菌属(Escherichia)的菌株、葡萄球菌属(Staphylococcus)的菌株、苏黎世杆菌属(Turicibacter)的菌株、梭菌属(Clostridium)的菌株、瘤胃球菌属(Ruminococcus)的菌株、韦荣氏球菌属(Veillonella)的菌株、拟杆菌属(Bacteroides)的菌株、副拟杆菌属(Parabacteroides)的菌株、乳酪杆菌属(Lacticaseibacillus)的菌株、植物乳杆菌属(Lactiplantibacillus)的菌株、黏液乳杆菌属(Limosilactobacillus)的菌株、促生乳杆菌属(Levilactobacillus)的菌株、联合乳杆菌属(Ligilactobacillus)的菌株、广泛乳杆菌属(Latilactobacillus)的菌株或布劳特氏菌属(Blautia)的菌株等。

对在本方面中同化得以促进的低聚糖没有特别限制。这里，低聚糖指其中二糖以上的糖通过糖苷键键合的糖类的低聚物。本方面中的低聚糖具有2个以上、优选2个以上且10个以下、尤其优选3个以上且5个以下的通过糖苷键彼此键合的糖残基。

低聚糖可以具体为棉子糖、乳果糖、麦芽三糖、水苏糖、低聚半乳糖、低聚果糖、蔗果三糖、蔗果四糖、大豆低聚糖、低聚乳果糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、咖啡豆低聚甘露糖、葡萄糖酸、聚葡萄糖或菊粉等。

其中，优选的具有3个以上且5个以下的糖基的低聚糖为麦芽三糖、水苏糖、低聚半乳糖、低聚果糖、蔗果三糖、蔗果四糖和人乳低聚糖等。

作为在本方面中同化得以促进的低聚糖，人乳低聚糖也是尤其优选的。

对人乳低聚糖没有特别限制，只要人乳低聚糖为人乳中通常包含的低聚糖即可，并且可以为岩藻糖基化低聚糖、唾液酸化低聚糖、乙酰化低聚糖或半乳糖基乳糖等。

岩藻糖基化低聚糖可以为2’-岩藻糖基乳糖、乳糖-N-岩藻五糖-I、乳糖-N-岩藻五糖-II或乳糖-N-岩藻五糖-III等。

唾液酸化低聚糖可以为3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳糖二岩藻四糖、二岩藻糖基乳糖-N-四糖、唾液酸乳糖-N-四糖a、唾液酸乳糖-N-四糖b、唾液酸乳糖-N-四糖c或二唾液酸乳糖-N-四糖等。

乙酰化低聚糖可以为乳糖-N-新四糖或乳糖-N-六糖等。

半乳糖基乳糖可以为3’-半乳糖基乳糖、4’-半乳糖基乳糖或6’-半乳糖基乳糖等。

其中，考虑到促进同化的效果，选自乳糖-N-新四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖中的一种、两种或更多种是尤其优选的。

本方面的组合物可以进一步包含人乳低聚糖。

人乳低聚糖可以为上述岩藻糖基化低聚糖、唾液酸化低聚糖或乙酰化低聚糖等，并且考虑到促进同化的效果，更优选为选自乳糖-N-新四糖、乳糖-N-四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖中的一种、两种或更多种。更优选地，人乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖或6’-唾液乳糖(作为仅有的HMO或仅有的低聚糖)。

特别地，本方面的组合物优选包含乳糖-N-四糖以及特定的生育酚，并且在该情况下可以尤其优选应用于促进含有2’-岩藻糖基乳糖的人乳低聚糖的同化的用途，这是因为可以进一步促进2’-岩藻糖基乳糖的同化。即，作为本方面的尤其优选的方面，公开了含有生育酚和乳糖-N-四糖的用于促进人乳低聚糖的同化的组合物，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种，并且其中人乳低聚糖包含2’-岩藻糖基乳糖。在优选的方面，组合物包含如本文中所定义的人乳低聚糖，优选2’-岩藻糖基乳糖或6’-唾液乳糖、和乳糖-N-四糖(作为仅有的低聚糖)。在特别优选的方面，组合物包含2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖(作为仅有的低聚糖)。

本方面的组合物中包含的人乳低聚糖可以为纯化的人乳低聚糖或混合物，只要不损害本方面的效果即可。

本方面的组合物可以进一步包含除了人乳低聚糖以外的低聚糖。低聚糖可以为上述那些中的任意者，并且，特别地，还优选一起包含低聚果糖与特定的生育酚。在该情况下，由于可以进一步促进6’-唾液乳糖的同化，因此组合物可以尤其优选应用于促进含有6’-唾液乳糖的人乳低聚糖的同化的用途。即，作为本方面的尤其优选的方面，公开了含有生育酚和低聚果糖的用于促进人乳低聚糖的同化的组合物，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种，并且其中人乳低聚糖包含6’-唾液乳糖。

当本方面的组合物中包含低聚糖(包括人乳低聚糖)时，其总量基于整个组合物(每固体含量)优选为0.05至10质量％，更优选0.1至10质量％，进一步优选0.2至10质量％。

此外，当本方面的组合物中包含低聚糖(包括人乳低聚糖)时，β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与低聚糖含量的质量比优选为0.001至0.2，更优选0.004至0.2，进一步优选0.01至0.2。

本方面可以改述为选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚在制造用于促进低聚糖的同化的组合物中的用途。

本方面也可以改述为选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚在促进低聚糖的同化中的用途。

本方面也可以改述为选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚，其用于促进低聚糖的同化。

本方面也可以改述为用于促进低聚糖的同化的方法，所述方法包括向受试者施用选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚。在该方法中，优选在施用生育酚的同时或之前或之后向受试者施用低聚糖。

这里，对受试者没有特别限制，只要受试者为动物即可，但是受试者通常为人类。在这一点上，“向受试者施用”可以与“使受试者摄取”同义。摄入可以是自愿的(自由摄入)或强制的(强制摄入)。即，施用步骤可以具体为例如在用于供给至受试者的食品、饮料或饲料中配混选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚并且从而使受试者自由地摄取食品、饮料或饲料的步骤。

<第二方面：营养组合物>

如上所述，在第一方面的组合物中，β-生育酚、γ-生育酚和/或δ-生育酚作为活性成分起作用，并且组合物促进低聚糖被肠细菌同化并且促进肠细菌的生长。因此，当一起包含低聚糖时，第一方面的组合物适合作为营养组合物。

即，作为第二方面，本说明书提供含有低聚糖和生育酚的营养组合物。然而，在这一点上，本方面的营养组合物中不包括母乳本身。

本方面的营养组合物包含低聚糖和生育酚。

本方面中对生育酚的种类的说明与第一方面中给出的说明一致。

本方面中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)和γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)的优选范围与第一方面中给出的各说明一致。

在所述范围内，更容易获得促进双歧杆菌菌株的生长的效果。

在本方面的营养组合物中，β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量基于整个组合物优选为0.0002至0.1质量％，更优选0.001至0.04质量％，进一步优选0.002至0.04质量％，更优选约0.03质量％，特别优选0.028质量％。

当总量在所述范围内时，更容易获得促进双歧杆菌菌株的生长的效果。

本方面中对低聚糖(包括人乳低聚糖)的种类的说明与第一方面中对被同化的低聚糖和组合物中可以包含的低聚糖的说明一致，并且可以使用其中任意一种、两种或更多种。然而，在这一点上，还将乳糖-N-四糖添加至作为人乳低聚糖列出的乙酰化低聚糖的优选实例中。

作为本方面的组合物包含的低聚糖，尤其优选包含乳糖-N-四糖和2’-岩藻糖基乳糖的组合。在该情况下，由于乳糖-N-四糖与生育酚一起促进2’-岩藻糖基乳糖被双歧杆菌菌株同化，因此更容易获得促进该菌株的生长的效果。

此外，作为本方面的组合物包含的低聚糖，还尤其优选包含低聚果糖和6’-唾液乳糖的组合。在该情况下，由于低聚果糖与生育酚一起促进6’-唾液乳糖被双歧杆菌菌株同化，因此更容易获得促进该菌株的生长的效果。

本方面中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与低聚糖含量的质量比的优选范围与第一方面中对包含低聚糖的情况的说明一致。

在本方面的营养组合物中，总低聚糖含量的优选范围与第一方面中对包含低聚糖的情况的说明一致。

本方面的营养组合物可以促进肠细菌、尤其是双歧杆菌菌株(双歧杆菌)的生长。更具体地，通常，低聚糖被双歧杆菌菌株同化并且促进其生长，并且由于β-生育酚、γ-生育酚和/或δ-生育酚进一步提高生长促进效果，因此营养组合物可以为优异的益生元物质。

对生长被本方面的营养组合物促进的双歧杆菌菌株没有特别限制，但是其实例包括长双歧杆菌(重新分类为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longumsubsp.longum))、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌(重新分类为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis))、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)、罗伊氏双歧杆菌(Bifidobacterium reuteri)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、假小链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)、和长双歧杆菌猪亚种(Bifidobacterium longum subsp.suis)等。其中，长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和两歧双歧杆菌为在婴儿期和幼儿期对肠内微生物群的健康尤其重要的四种(所谓的“婴儿型双歧杆菌”)，并且优选促进其生长。

本说明书中菌株的“生长”包括菌株的计数的增加，并且“促进生长”意指当施用本方面的营养组合物时，增加的程度与不施用的情况下的程度相比更大。即，与不施用本方面的营养组合物的情况下的细菌计数相比，在体内或体外施用本方面的营养组合物的情况下，获得使例如双歧杆菌菌株等肠细菌的细菌计数增加的效果。对细菌计数的增加程度没有特别限制，但是意指细菌计数变为在不施用本方面的营养组合物的情况下菌株的细菌计数的优选1.1倍以上、更优选1.5倍以上、进一步优选3倍以上。

细菌计数的增加可以通过如下来确认：直接测量细菌计数，或者例如通过测定菌株的培养基的浊度(例如，在600nm处的吸光度(OD600))或者通过测定培养基或已摄取菌株的组合物的例如人类等动物的胃肠内容物中的例如乙酸等短链脂肪酸的量而获得的值的增加、或测得的培养基的pH值的降低等。

“生长”还包括肠内微生物群中菌株的比例的增加，并且“促进生长”意指当施用本方面的营养组合物时增加的程度与不施用的情况下的程度相比更大。即，包括增加已摄取本方面的营养组合物的例如人类等动物的胃肠道中双歧杆菌菌株的比例。这里，“比例”可以改述为对从肠内微生物群检测到的整个菌群的“占有率”。关于“比例的增加”，只要肠内微生物群中双歧杆菌菌株的比例增加即可，肠内微生物群中另一菌株的比例可能同时增加或减少。

对比例的增加程度没有特别限制，但是意指该比例比在不施用本方面的营养组合物的情况下菌株的比例高优选2％以上、更优选5％以上、进一步优选20％以上。

“促进生长”也可以为肠内微生物群中菌株计数的增加速度或菌株比例的增加速度的增加。对这样的速度的增加程度没有特别限制，但是意指该速度比在不施用本方面的营养组合物的情况下菌株的该速度高优选10％以上、更优选20％以上、进一步优选50％以上。

例如，当施用本方面的营养组合物时直至细菌计数或比例达到特定值所需的时间与不施用的情况下的该时间相比更短时，可以确认速度的增加。

如上所述，由于本方面的营养组合物可以促进双歧杆菌菌株的生长，因此组合物优选包含双歧杆菌菌株以及低聚糖、和选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚。

这里，营养组合物中包含的双歧杆菌菌株可以为长双歧杆菌(长双歧杆菌长亚种)、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌(长双歧杆菌婴儿亚种)、两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、假长双歧杆菌、罗伊氏双歧杆菌、链状双歧杆菌、假小链双歧杆菌、乳双歧杆菌或长双歧杆菌猪亚种等，并且没有特别限制。其中，优选包含在婴儿和幼儿中尤其重要的长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和两歧双歧杆菌。

作为长双歧杆菌，可以使用长双歧杆菌NITE BP-02621(别名：BB536或长双歧杆菌长亚种ATCC BAA-999)。长双歧杆菌BB536根据布达佩斯条约于2018年1月26日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITE BP-02621。其相同的菌株长双歧杆菌长亚种ATCC BAA-999(编号：ATCC BAA-999)可以从美国典型培养物保藏中心(ATCC：10801University Boulevard，Manassas，VA 20110，United States of America)作为ATCC BAA-999获得(例如，参见JP-A-2012-223134等)。

此外，作为长双歧杆菌，可以使用可从ATCC获得的长双歧杆菌长亚种ATCC 15707。

短双歧杆菌可以为短双歧杆菌M-16V。短双歧杆菌M-16V根据布达佩斯条约于2018年1月26日向国家技术评估学会，NITE专利微生物保藏中心(NPMD)(292-0818日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8，122号室)进行国际保藏，保藏编号为NITE BP-02622。例如，还可以使用可以作为市售品获得的由Morinaga Milk Industry Co.,Ltd.制造的“短双歧杆菌M-16V”。

短双歧杆菌还可以为短双歧杆菌MCC1274。短双歧杆菌MCC1274根据布达佩斯条约于2009年8月25日向日本产业技术综合研究所，国际专利生物保藏中心(现在的国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心(IPOD)(292-0818日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8，120号室))进行国际保藏，保藏编号为FERM BP-11175。

婴儿双歧杆菌可以为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp.infantis)MCC2042。长双歧杆菌婴儿亚种MCC2042根据布达佩斯条约于2019年11月20日向NPMD进行的国际保藏，保藏编号为NITE BP-03068。

婴儿双歧杆菌还可以为婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)M-63。婴儿双歧杆菌M-63根据布达佩斯条约于2018年1月26日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITEBP-02623。

作为婴儿双歧杆菌，还可以使用可以从ATCC获得的长双歧杆菌婴儿亚种ATCC15697。

两歧双歧杆菌可以为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)MCC2030。两歧双歧杆菌MCC2030根据布达佩斯条约于2019年11月8日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITEBP-03058。

两歧双歧杆菌可以为两歧双歧杆菌MCC1092。两歧双歧杆菌MCC1092根据布达佩斯条约于2017年2月21日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITE BP-02429。

两歧双歧杆菌还可以为两歧双歧杆菌MCC1319。两歧双歧杆菌MCC1319根据布达佩斯条约于2017年2月21日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITE BP-02431。

两歧双歧杆菌还可以为两歧双歧杆菌MCC1868。两歧双歧杆菌MCC1868根据布达佩斯条约于2017年2月21日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITE BP-02432。

两歧双歧杆菌还可以为两歧双歧杆菌MCC1870。两歧双歧杆菌MCC1870根据布达佩斯条约于2017年2月21日向NPMD进行国际保藏，保藏编号为NITE BP-02433。

长双歧杆菌婴儿亚种MCC2042、婴儿双歧杆菌M-63和两歧双歧杆菌MCC2030在本文中是优选的。

由以上例示的细菌名称指定的菌株不限于以它们自身的细菌名称在特定机构保藏或登记的菌株(为了便于说明，以下也称为“保藏菌株”)，而是包括其实质上等同的菌株(也称为“衍生菌株”或“诱变菌株”)。即，菌株不限于以它们自身的保藏编号保藏至保藏机构的菌株，而是包括其实质上等同的菌株。菌株的“保藏菌株的实质上等同的菌株”为与保藏菌株属于同一种的菌株，其中16SrRNA基因的碱基序列与保藏菌株的16SrRNA基因的碱基序列具有优选99.86％以上、更优选99.93％以上、进一步优选100％的同一性，并且其优选具有与保藏菌株相同的细菌学特性。菌株的保藏菌株的实质上等同的菌株可以为例如衍生自作为亲本菌株的保藏菌株的菌株。衍生菌株包括从保藏菌株培育的菌株和由保藏菌株自然产生的菌株。培育方法包括借助基因工程技术的修饰和借助诱变(mutagenesis)的修饰。诱变包括X射线照射、紫外线照射和用例如N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍、甲磺酸乙酯和甲磺酸甲酯等诱变剂处理。由保藏菌株自然产生的菌株为在使用期间由保藏菌株自然产生的菌株。此类菌株为在保藏菌株的培养(例如，传代培养)期间自然产生的突变体。衍生菌株可以构建有一种修饰或者构建有两种以上的修饰。

作为本方面的营养组合物中包含的双歧杆菌菌株的细菌细胞，可以使用市售品，并且可以使用适当地生产和获得的双歧杆菌菌株的细菌细胞。

此外，本方面的营养组合物中包含的双歧杆菌菌株的细菌细胞可以通过培养上述双歧杆菌菌株中的任意者来容易地获得。对培养方法没有特别限制，只要双歧杆菌菌株可以生长即可。作为培养方法，例如，通常用于培养双歧杆菌菌株的方法可以直接使用或者进行适当的修改。培养温度可以为例如25至50℃并且优选为35至42℃。培养可以优选在厌氧条件下进行，并且可以例如在使例如二氧化碳气体等厌氧气体流过的同时进行。培养也可以在微需氧条件下进行，例如静置液体培养。可以进行培养例如直至双歧杆菌菌株生长至所需程度或培养持续5至24小时。

对用于培养的培养基没有特别限制，只要双歧杆菌菌株可以生长即可。作为培养基，例如，通常用于培养双歧杆菌菌株的培养基可以直接使用或者进行适当的修改。即，作为碳源，取决于同化特性，例如，可以使用糖类如半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、纤维二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、淀粉、淀粉水解物和糖蜜(molasses)。作为氮源，例如，可以使用氨以及铵盐和硝酸盐如硫酸铵、氯化铵和硝酸铵。此外，作为无机盐，例如，可以使用氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰和硫酸亚铁等。此外，还可以使用有机组分如蛋白胨、大豆粉、脱脂大豆饼、肉提取物和酵母提取物以及抗氧化剂如抗坏血酸、其衍生物、其盐、α-硫辛酸、其衍生物和其盐。通常用于培养双歧杆菌菌株的培养基的具体实例包括强化梭菌培养基、MRS培养基(de Man、Rogosa和Sharpe培养基)、mMRS培养基(改良MRS培养基)、TOSP培养基(TOS丙酸盐培养基)和TOSP Mup培养基(TOS丙酸盐莫匹罗星培养基(TOS propionate mupirocin medium))。

作为本方面的营养组合物中可以包含的双歧杆菌菌株，可以使用其细菌细胞或含有其细菌细胞的部分而没有特别限制。即，作为双歧杆菌菌株，例如，可以直接使用通过培养获得的培养物。可选地，可以使用稀释或浓缩的培养物，或者也可以使用从培养物收集的细菌细胞。在培养后可以进行例如加热和冷冻干燥等各种额外的操作，只要不损害肠内微生物群改善效果即可。额外的操作优选为细菌细胞的存活率高的操作。即，具体地，本方面的营养组合物中可以包含的双歧杆菌菌株可以为双歧杆菌菌株的培养物、从培养物收集的细菌细胞或其处理产物，并且处理产物可以为稀释产物、浓缩产物或干燥产物等。细菌细胞通常优选以含有活细菌细胞的形式使用。例如，细菌细胞可以由活细菌细胞构成、或者可以为活细菌细胞和死细菌细胞的混合物。

在本方面的营养组合物中，组合物中包含的双歧杆菌菌株至少包含活菌株，并且活双歧杆菌菌株以优选1×10⁴至1×10¹³cfu/g或1×10⁴至1×10¹³cfu/mL、更优选1×10⁵至1×10¹²cfu/g或1×10⁵至1×10¹²cfu/mL、进一步优选1×10⁶至1×10¹¹cfu/g或1×10⁶至1×10¹¹cfu/mL的总量包含在组合物中。

此外，在本方面的营养组合物中，相对于组合物中包含的1g低聚糖，组合物中包含的双歧杆菌菌株的总活细菌计数优选为1×10⁸至1×10¹¹cfu，更优选1×10⁸至1×10¹⁰cfu，进一步优选1×10⁸至3×10⁹cfu。

只要包含活菌株，也可以包含死菌株。

这里，cfu指菌落形成单位。在本说明书中，例如，可以使用通过在38℃下在含有10质量％还原脱脂奶粉的固体培养基上培养菌株而获得的值。

所述范围通常可以为用于作为营养组合物分配的量或用于口服摄入的量的范围。

如上所述，本方面的营养组合物可以促进双歧杆菌菌株例如婴儿型双歧杆菌的生长，并且因此可以优选应用于促进双歧杆菌菌株的生长的用途。

这里，作为生长目标的双歧杆菌菌株不限于本方面的营养组合物中包含的双歧杆菌菌株，并且还包括已口服摄取营养组合物的例如人类等动物的胃肠道中的双歧杆菌菌株。

因此，本方面的营养组合物可以用于改善肠内微生物群。这里，“改善微生物群”包括增加肠内微生物群中双歧杆菌菌株、尤其是婴儿型双歧杆菌的细菌计数或其比例。此外，“改善微生物群”可以包括增加肠内微生物群中其它有益细菌的比例和降低肠内微生物群中有害细菌的比例，只要肠内微生物群中双歧杆菌菌株的比例增加即可。其它有益细菌可以为乳酸菌等。有害细菌可以为产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、沙门氏菌(Salmonella)菌株、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或致病性大肠杆菌(pathogenic Escherichia coli)等。

“比例”可以改述为对从肠内微生物群检测到的整个菌群的“占有率”。

本方面的营养组合物可以用于肠道菌群有待改善的受试者。术语“肠道菌群(gutflora)”、“肠道微生物群(gut microbiota)”和“肠道微生物组(gut microbiome)”在本文中可交换使用。“肠道菌群”指生活在动物(具体为人类)的消化道中的微生物，包括细菌、古细菌、真菌和病毒。“肠道菌群”包括肠内细菌，具体为有益的(非致病性)肠内细菌。本上下文中的受试者优选为健康受试者，例如但不限于婴儿、幼儿、儿童、青少年或成人。

根据上述，本发明在一个方面涉及组合物用于受试者中肠道菌群改善的用途。

在一个方面，本发明涉及用于肠道菌群改善的方法，其中向受试者施用包含生育酚的组合物，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。在本文中设想生育酚为活性剂。在其它方面，生育酚和低聚糖(具体为HMO)为活性剂。在进一步的方面，生育酚、低聚糖(具体为HMO)和双歧杆菌为活性剂。

术语“肠道菌群改善”可以指维持或改善健康的肠道(intestinal tract)或者维持或改善肠道健康(gut health)或肠健康(intestinal health)。

因此，术语“肠道菌群改善”可以包括或指以下中的一种或更多种：“为了有效利用益生元”、“为了有助于对婴儿的健康有帮助的低聚糖的功能”、“为了婴儿和幼儿的肠道状况的健康”、“希望增加双歧杆菌的人”、“为了增加对婴儿的健康有帮助的双歧杆菌”、“改善肠内微生物群(enteric microbiota)”、“改善肠微生物群(intestinal microbiota)”、为了“促进低聚糖的同化”、和为了“促进双歧杆菌菌株例如婴儿型双歧杆菌的生长”等。

本方面的营养组合物可以用于患有可以通过改善肠道微生物群来预防或改善的疾病或病理状况的受试者、或者用于患有由肠道微生物群的恶化引起的疾病或病理状况的受试者。“改善”可以意指疾病或病况的治疗性治疗，如改善疾病的症状。

根据上述，本发明在一个方面涉及如本文中公开的包含生育酚的组合物，其用于预防或治疗由肠道微生物群功能障碍或紊乱引起的疾病或病况，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。本发明在一个方面涉及如本文中公开的包含生育酚的组合物，其用于预防或治疗肠道微生物群功能障碍或紊乱，其中生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。

肠道微生物群功能障碍或紊乱可以涉及肠道健康的功能障碍或紊乱或者肠菌群的功能障碍。这转而可以导致/造成以下进一步公开的疾病或病况。在这个意义上，组合物可以用于肠调节。

例如，营养组合物尤其是在具有受到抑制/降低的免疫应答/免疫系统的受试者(例如患有或曾患有感染(例如，感冒、流感、病毒和/或细菌感染)的受试者)中可以用于改善/促进免疫系统。营养组合物还可以用于降低超免疫(例如，用于治疗或预防过敏)。在这个意义上，组合物可以用于免疫调节。

例如，营养组合物可以用于肠调节、免疫调节、抗过敏用途、保护免受细菌或病毒感染、减少氧化应激、预防或改善腹泻、预防或改善便秘、炎症性肠病、或预防结肠癌等。如本文中所使用的保护主要意指预防，但是还可以包括治疗性治疗，例如，症状的改善。

本方面可以改述为低聚糖和选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚在制造用于促进双歧杆菌菌株的生长的组合物中的用途。

本方面还可以改述为低聚糖和选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚在促进双歧杆菌菌株的生长中的用途。

本方面还可以改述为低聚糖和选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚，其用于促进双歧杆菌菌株的生长。

本方面还可以改述为用于促进双歧杆菌菌株的生长的方法，所述包括向受试者施用低聚糖和选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚。

这里，对受试者没有特别限制，只要受试者为动物即可，但是受试者通常为人类。在这一点上，“向受试者施用”可以与“使受试者摄取”同义。摄入可以是自愿的(自由摄入)或强制的(强制摄入)。即，施用步骤可以具体为例如在用于供给至受试者的食品、饮料或饲料中配混低聚糖和选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种生育酚并且从而使受试者自由地摄取食品、饮料或饲料的步骤。

对本发明的组合物(包括第一方面和第二方面，下同)的摄入(施用)时机没有特别限制，并且可以根据施用对象的病况适当地选择。

本发明的组合物的摄入(施用)剂量是基于摄入(施用)对象的年龄、性别、病况和其它状况等适当地选择的。

无论摄入(施用)的量或时间如何，药物可以每天施用一次或者以多个分开的部分施用。

本发明的组合物自身可以为食品、饮料或药品等的形式、或者可以为作为添加剂包含在食品、饮料或药品等中的形式。

本发明的组合物的摄入(施用)途径可以为口服途径或肠胃外途径，但是通常为口服途径。肠胃外摄入(施用)可以为直肠施用等。

本发明的组合物优选为作为食品或饮料的方面。

对食品或饮料的形式和性质没有特别限制，只要不损害本发明的效果即可，并且食品或饮料可以通过使用通常用于食品或饮料的物质的一般方法来生产。

在使用前添加至食品、饮料或药品中的方面(即，所谓的添加剂)也包括在本发明的组合物中。第一方面的组合物的本方面的实例为添加至含有例如人乳低聚糖等低聚糖的组合物中的添加剂。含有人乳低聚糖的组合物可以优选为泵出的母乳或配方食品等。预期添加本发明的组合物之后的乳品由新生儿或婴儿摄取。

这里，“添加”可以具有“混合”的含义。此外，可以包括将本发明的组合物添加至食品、饮料或药品中和将食品、饮料或药品添加至本发明的组合物中二者。

食品或饮料通常口服摄取，但是不限于此，并且食品或饮料可以例如经鼻摄取或者通过胃瘘或肠瘘摄取。例如，预期作为下述本发明的组合物的配方食品或其中已添加有本发明的组合物的母乳由新生儿或婴儿通过鼻饲管等摄取。

关于例如液体、糊剂、凝胶固体或粉末等形式，对食品或饮料没有限制。其实例包括以下实例：压片糖果；小麦制品，例如面包、通心粉、意大利面、面条、蛋糕混合粉、煎炸面粉和面包屑；即食食品，例如方便面、杯面、蒸煮袋装预制食品、预制罐装食品、微波炉食品、即食汤·炖品、即食味增汤·日式清汤、罐装汤、冷冻干燥食品和其它即食食品；加工农产品，例如罐装农产品、罐装水果、果酱·柑橘酱(jams·marmalades)、腌菜、熟制豆类、干制农产品和谷类(加工谷物)；加工水产品，例如罐装水产品、鱼火腿·香肠、水产酱制品、水产美食和佃煮(Tsukudani)(在甜酱油中熬浓的食品)；加工畜产品，例如罐装畜产品·酱和畜火腿·香肠；乳·乳制品，例如加工乳、乳饮料、酸奶、乳酸菌饮料、奶酪、冰淇淋、奶油和其它乳制品；油脂(oils and fats)，例如黄油、人造黄油和植物油；基本调味品，例如酱油、豆瓣酱、调味酱、加工番茄调味品、味醂(调味用甜酒)和醋；复合风味增强剂·食品，例如烹饪混合物(cooking mixes)、咖喱酱、调味酱、调味品、面汤、香味料和其它复合风味增强剂；冷冻食品，例如冷冻食材、半熟冷冻食品和熟冷冻食品；糕点糖果，例如焦糖、糖果、口香糖、巧克力、曲奇饼、饼干、蛋糕、馅饼、零食、薄脆饼干、日式糕点糖果、米糕、豆糕、甜点、果冻和其它糕点糖果；嗜好饮料(luxury beverage)，例如碳酸饮料、天然汁、果汁、含果汁的软饮料、果肉饮料、含果粒的果汁、植物饮料、豆奶、豆奶饮料、咖啡饮料、茶饮料、饮料粉、浓缩饮料、运动饮料、营养饮料、酒和其它嗜好饮料，其它市售食品如婴儿食品、拌饭素(Furikake)(干日式调味料)和用于茶泡饭(Chazuke)(用热茶煮熟的米饭)的调味料等；营养组合物，例如配方食品(包括奶粉和液态奶等)、液体食品和补充剂；和功能性食品(用于规定健康用途的食品和具有营养功能声称的食品)；等。

其中，第一方面优选为营养组合物，并且第二方面为营养组合物(然而，母乳不包括在营养组合物中)。应当理解，如“条件是不包括母乳”或“母乳不包括在营养组合物中”的特征为可以省略的任选特征。

在本发明中，“营养组合物”作为食品或饮料的方面没有特别限制，但是优选为配方奶、液体食品或补充剂等，更优选配方食品。摄入对象可以为婴儿、幼儿、儿童或成人，但是优选为婴儿或幼儿。

本方面的组合物优选为营养组合物，更优选配方食品，特别优选配方奶。营养组合物优选为婴儿配方食品、较大婴儿配方食品或成长配方食品。如本文中所使用的“婴儿配方食品”指旨在供0至6月龄(即，生命的前6个月期间)的婴儿使用的配方食品。如本文中所使用的“较大婴儿配方食品”指旨在供6至12月龄(即，6月龄以上，直至并且包括12月龄)的婴儿使用的配方食品。术语较大婴儿配方食品(follow-up formula)和后续配方食品(follow-on formula)在本文中可交换使用。如本文中所使用的“成长配方食品”指旨在供12至36月龄的儿童(即，36月龄或低于36月龄且大于12月龄的儿童)使用的配方食品。术语“成长配方食品”和“幼儿(young child)/幼儿们(young children)用配方食品”在本文中可交换使用。

术语“婴儿”意指0至12月龄的儿童(换言之，12月龄或低于12月龄的儿童)。术语“幼儿”意指12至36月龄之间的儿童(换言之，36月龄或低于36月龄且大于12月龄的儿童)。“幼儿”在本文中也称为“幼童”。

配方食品包括粉末配方食品和液体配方食品。配方奶包括配方奶粉和液体配方奶。

配方奶粉由关于乳及乳制品的成分规格等相关省令(Ministerial OrdinanceConcerning Compositional Standards,etc.for Milk and Milk Products)定义为“通过加工作为原料的生乳、牛乳、合格牛乳或由其生产的食品或者使用此类物质作为主要原料、添加婴儿和幼儿所必需的营养素并且加工成粉末而获得的那些”。

液体配方奶由所述省令定义为“通过加工作为原料的生乳、牛乳、合格牛乳或由其生产的食品或者使用此类物质作为主要原料、添加婴儿和幼儿所必需的营养素并且加工成液体而获得的那些”。

配方奶还包括包含营养素组分例如蛋白质、油脂、碳水化合物、矿物质和维生素并且加工成粉末或液体的那些。

配方奶进一步包括由健康促进法(Health Promotion Act)规定的用于特殊膳食用途的食品中的“粉末婴儿配方食品”、“液体婴儿配方食品”和“孕妇、产妇和哺乳期母亲用配方奶粉”，并且还包括作为幼儿用粉末婴儿配方食品、成人用营养粉和老年人用营养粉等的方面。

当本发明的组合物为补充剂的形式时，可以将组合物配制为例如散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂等固体制剂、或例如溶液剂、糖浆剂、混悬剂和乳剂等液体制剂等。可以根据下述对组分、载体和用于配制药品的方法的说明来配制。

食品或饮料的一个方面可以为饲料。饲料可以为宠物食品、牲畜饲料或鱼类养殖饲料等。

对饲料的形式没有特别限制，并且饲料可以包含例如以下物质：谷物，例如玉米、小麦、大麦、黑麦和蜀黍；植物油饼，例如大豆油饼、菜籽油饼、椰子油饼和亚麻籽油饼；麸，例如燕麦麸、麦麸、米麸、脱脂米麸；食品制造商的副产品，例如玉米蛋白粉(corn glutenmeal)和玉米酱粉(corn jam meal)；动物饲料，例如鱼粉、脱脂奶粉、乳清、黄色油脂(yellow grease)和牛酯(tallow)；酵母，例如圆酵母(torula yeast)和啤酒酵母；矿物质饲料，例如磷酸三钙和碳酸钙；油或脂肪；单氨基酸；或糖类等。

当本发明的组合物为作为食品或饮料(包括饲料)的方面时，组合物可以作为标注用于促进低聚糖被肠细菌同化或用于使双歧杆菌菌株在肠道中生长的食品或饮料来提供·销售。

“标注”行为包括所有用于告知消费者用途的行为，并且所有可以提醒·引起猜测用途的表述均为本发明的“标注”行为，而无论标注的目的、标注的内容、要标注的对象和介质等如何。

“标签”优选具有使消费者直接地认识到用途的表述。具体实例包括转运在与食品或饮料相关的产品或产品的包装上记载了用途的物品、递送此类物品、展示此类用于转运或递送的物品或者进口此类物品的行为，展示或分发其上具有对用途的记载的产品的广告、价格清单或商业文件或者通过电磁方法(互联网等)提供含有此类具有对用途的记载的内容的信息的行为，以及其它行为。

标签的内容优选为经管理部门等批准的标签(例如，经基于管理部门规定的制度批准并且以基于该批准的形式提供的标签等)。优选在包装、容器、目录、小册子、例如POP等销售网站的广告材料或其它文件等上标注此类内容。

“标签”还包括保健食品、功能性食品、肠内营养品、用于特殊膳食用途的食品、具有保健声称的食品、用于规定保健用途的食品、具有营养功能声称的食品、具有功能声称的食品和准药品(quasi-drug)等的标签。特别地，标签为经日本消费者厅(Consumer AffairsAgency)批准的标签，例如由针对用于规定保健用途的食品、具有营养功能声称的食品或具有功能声称的食品的制度或者由类似的制度等批准的标签。具体实例包括用于规定保健用途的食品的标签、用于规定保健用途的合格食品的标签、表明对身体的结构或功能的影响的标签、具有降低疾病风险的标签、和具有有科学依据的功能的标签等。更具体地，典型实例包括由健康促进法下特殊膳食用途标签许可相关内阁府令(Cabinet Office Ordinanceon Labeling Permission for Special Dietary Uses)(2009年8月31日的内阁府令No.57)提供的用于规定保健用途的食品的标签(尤其是具有保健用途的标签)和类似的标签。

标签为例如具有“为了有效利用益生元”、“为了有助于对婴儿的健康有帮助的低聚糖的功能”、“为了婴儿和幼儿的肠道状况的健康”、“希望增加双歧杆菌的人”、“为了增加对婴儿健康有帮助的双歧杆菌”、“改善肠内微生物群”和“改善肠微生物群”等的标签。

当本发明的组合物为药品的形式时，其施用途径可以为口服途径或肠胃外途径，但是优选为口服途径。肠胃外摄入(施用)可以为直肠施用等。

关于药品的形式，可以根据施用方法将组合物适当地配制为期望的剂型。例如，在口服施用的情况下，可以将组合物配制为例如散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂等固体制剂、或者例如溶液剂、糖浆剂、混悬剂和乳剂等液体制剂等。在肠胃外施用的情况下，可以将组合物配制为栓剂、软膏剂或注射剂等。

对于制剂，可以使用通常用于制剂的组分，例如赋形剂、pH调节剂、着色剂和矫味剂。还可以组合使用其它药用组分或者已知的或将在未来发现的益生元物质等。作为已知的益生元，菊粉、葡萄糖酸和聚葡萄糖等优选作为包含在本发明的组合物中的那些。

此外，可以根据剂型通过适当的已知方法进行配制。还可以通过适当地配混用于配制的载体来进行配制。

赋形剂的实例包括：糖衍生物，例如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和山梨醇；淀粉衍生物，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物，例如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素和羧甲基纤维素钙；阿拉伯胶；葡聚糖；普鲁兰多糖；硅酸盐衍生物，例如轻质硅酸酐、合成硅酸铝和硅酸铝镁；磷酸盐衍生物，例如磷酸钙；碳酸盐衍生物，例如碳酸钙；和硫酸盐衍生物，例如硫酸钙；等。

除了赋形剂以外，粘合剂的实例包括明胶、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇等。

除了赋形剂以外，崩解剂的实例包括例如交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠和交联聚乙烯吡咯烷酮等化学改性淀粉或纤维素衍生物。

润滑剂的实例包括：滑石；硬脂酸；硬脂酸金属盐，例如硬脂酸钙和硬脂酸镁；胶体二氧化硅；蜡，例如Veegum和鲸蜡；硼酸；二醇；羧酸，例如富马酸和己二酸；钠羧酸盐，例如苯甲酸钠；硫酸盐，例如硫酸钠；亮氨酸；月桂基硫酸盐，例如月桂基硫酸钠和月桂基硫酸镁；硅酸，例如硅酸酐和硅酸水合物；和淀粉衍生物；等。

稳定剂的实例包括：对羟基苯甲酸酯，例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯；醇类，例如氯丁醇、苯甲醇和苯乙醇；苯扎氯铵；乙酸酐；和山梨酸；等。

调味剂的实例包括甜味剂、酸味剂和芳香剂等。

在这一点上，在用于口服施用的液体制剂的情况下使用的载体包括例如水等溶剂。

对摄取本发明的药品的时机没有特别限制，并且实例包括餐前、餐后、餐间和睡前等。

如本文中所使用的，术语“包含”、“包括”、“具有”或其语法变体应视为规定所述特征、整数、步骤或组分，但是不排除添加其一个或更多个其它特征、整数、步骤、组分或组。术语“包含”/“包括”/“具有”涵盖术语“由......组成”和“实质上由......组成”。因此，每当在本文中使用术语“包含”/“包括”/“具有”时，它们可以由“实质上由......组成”或者优选地由“由......组成”替代。术语“包含”和“含有”在本文中可交换使用。

术语“包含”/“包括”/“具有”意味着可以存在任何其它组分(或者类似地，特征、整数和步骤等)。

术语“由......组成”意指不可以存在其它组分(或者类似地，特征、整数和步骤等)。

术语“实质上由......组成”或其语法变体在用于本文中时应视为规定所述特征、整数、步骤或组分，但是不排除添加其一个或更多个其它特征、整数、步骤、组分或组，但是前提是其其它特征、整数、步骤、组分或组不会实质地改变请求保护的产品、组合物、装置或方法等的基本特征和新颖特征。

因此，术语“实质上由......组成”意指可以存在特定的其它组分(或者类似地，特征、整数和步骤等)，即，不会实质地影响产品、组合物、装置或方法的本质特征的那些。换言之，除了强制性组分(或者类似地，特征、整数和步骤等)以外，术语"实质上由......组成"(在本文中可以与术语"实质上包含"交换使用)允许产品、组合物、装置或方法中存在其它组分，条件是产品、组合物、装置或方法的本质特征不会被其它组分的存在实质地影响。如本文中所使用的，“一个/种(a)”或“一个/种(an)”可以意指一个/种或更多个/种。

实施例

以下使用实施例具体地进一步解释本发明，但是本发明不限于实施例。

<试验例1>通过粪便培养评价人乳低聚糖的同化促进作用

(1)样品的预处理

从两名健康婴儿获得粪便样品(粪便A来自1.5月龄的婴儿，粪便B来自7月龄的婴儿)。排便后立即采集样品并且立即移至10℃以下在厌氧条件下。将收集的粪便在排便的8小时内用10倍量的生理盐水稀释并且在-80℃下保存直至使用。

(2)粪便培养

为了模拟大肠的环境，通过以下过程进行培养实验。使用Bio Jr.8100mL×8培养设备(由Biott Corporation制造的BJR-25NA1S-8M)，并且根据装置的说明书进行操作。作为培养基，使用100mL的具有表2中示出的组成的YCFA培养基。将除了生育酚和低聚糖以外的培养基组分溶解于纯化水中并且在高压釜中灭菌。将分别溶解于二甲基亚砜(DMSO，FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)和纯化水中、然后用过滤器灭菌的生育酚和低聚糖添加至高压釜处理后的培养基中。培养温度为37℃，并且在培养期间通过向培养容器中吹入过滤灭菌的CO₂来维持厌氧条件。在将pH调节至7.0后，添加用生理盐水稀释的100μL(以粪便计为10mg)的粪便样品(粪便B)，并且开始厌氧培养。为了模拟婴儿的大肠中的pH，在培养期间，当pH变得低于5.5时，通过用1M Na₂CO₃中和来控制pH。开始培养后7、10和24小时收集培养基并且以8000rpm在4℃下离心3min，并且收集上清液和沉淀物。

[表2]

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[表3]

[表4]

[表5]

[表6]

[表7]

(3)培养上清液中低聚糖量的分析

将等量的乙腈添加至用4倍量的水稀释的收集的上清液中，并且将混合物离心(21500g，15分钟，4℃)，通过过滤器过滤，然后用50％乙腈稀释100倍，并且通过LC-MS进行低聚糖分析。

对于UHPLC分离，使用Vanquish Flex UHPLC(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，U.S.A.)系统和ACQUITY UPLC糖蛋白BEH酰胺柱(1.7μm，2.1mm×150mm，Waters，Milford，MA，USA)。梯度洗脱液为A缓冲液(10mmol/L甲酸铵，0.1％甲酸)和B缓冲液(0.1％甲酸/乙腈)，并且流量为0.35ml/min。将柱温设定在35℃。13.5min的梯度洗脱包括经7.5min的75％至60％和经1min的60％至20％的B缓冲液洗脱，在20％保持1min，然后经0.1min的20％至75％洗脱并且最终在75％保持4.4min。使用加热电喷雾离子源Orbitrap质谱Q Exactive Focus(Thermo Fisher Scientific)以平行反应监测(PRM)模式进行质量分析。使用TraceFinder软件(Thermo Fisher Scientific)进行数据分析。

(4)结果

培养上清液中低聚糖的残留率在表3中示出，其中培养前的值为100％。

虽然2’-岩藻糖基乳糖在7小时的培养后残留在上清液中而未被同化(比较例1)，但是当添加三种生育酚即β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚时，残留率降低至约70％(实施例1-1)。此外，当除了三种生育酚以外还添加乳糖-N-四糖(LNT)时，10小时的培养后的残留率降低至在不添加LNT的情况下的值的约20％(实施例1-2)。

虽然在低聚果糖的存在下，6’-唾液乳糖即使在24小时的培养后也残留在上清液中而未被同化(比较例2)，但是当添加三种生育酚即β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚时，残留率降低至约20％(实施例2)。

虽然7小时的培养后低聚半乳糖的残留率为70％(比较例3)，但是在以不同的比例添加三种生育酚即β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的各情况下，低聚半乳糖的残留率降低至约50％(实施例3-1至3-4)。

由该结果，显示三种生育酚即β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚促进例如人乳低聚糖等低聚糖的同化。

[表8]

表3-1：2′-FL残留率(质量％)

[表9]

表3-2：2′-FL残留率(质量％)

[表10]

表3-3：6′-SL残留率(质量％)

[表11]

表3-4：低聚半乳糖残留率(质量％)

<试验例2>通过细菌菌株的单一培养来评价双歧杆菌菌株生长促进作用(1)单一培养

将婴儿双歧杆菌M-63、婴儿双歧杆菌MCC2042或两歧双歧杆菌MCC2030在MRS培养基中在37℃下培养16小时，并且产生预培养液。

将表4中示出的组分(除了半胱氨酸、生育酚和低聚糖)溶解于纯化水中以产生2x浓度的培养基，并且在将pH调节至6.5后，将培养基在高压釜中在121℃下灭菌15分钟。然后，添加过滤灭菌的半胱氨酸。将生育酚和低聚糖分别溶解于二甲基亚砜(FUJIFILM WakoPure Chemical)和纯化水中，用过滤器灭菌并且添加至培养基中，然后用灭菌纯化水调节浓度以达到表4中示出的最终浓度。将制备的培养基各自以200μL的体积添加至96孔板中(每组n＝6)，随后，将婴儿双歧杆菌M-63、婴儿双歧杆菌MCC2042和两歧双歧杆菌MCC2030的预培养液各自以1％的培养基体积在厌氧条件下无菌地添加。在厌氧室(Baker Ruskinn)中在37℃下进行培养16小时，并且测量浊度(OD₆₀₀)。

[表12]

[表13]

[表14]

[表15]

(2)结果

培养开始时和16小时的培养后之间的浊度差(ΔOD₆₀₀)作为双歧杆菌菌株的生长程度在图1至12中示出。对于所有细菌菌株，与含有低聚糖但不含有生育酚的情况相比，当组合包含三种生育酚和低聚糖时，进一步促进双歧杆菌菌株的生长。在含有三种生育酚但不含有低聚糖的情况下，未观察到双歧杆菌菌株的生长。

GOS实验显示比α-生育酚更高的效果，尤其是在模式2和3中。就使用2'FL和6'SL的实验而言，由于HMO的稀有性，没有与α-生育酚的比较数据。然而，可合理预期与α-生育酚相比，使用2'FL和6'SL的实验的结果会等于或大于使用GOS的实验的结果。这是因为人类母乳中包含GOS以及2'FL和6'SL。尤其是，很可能会认为模式2和3的混合比显示比α-生育酚更高的效果，这是因为这些比显示比α-生育酚稳定更高的效果，而与双歧杆菌菌株种类的差异无关。

<试验例3>通过粪便培养评价双歧杆菌菌株生长促进作用

(1)样品

使用上述试验例1中制备的粪便A和粪便B作为粪便样品。

(2)粪便培养

为了模拟大肠的环境，通过以下过程来进行培养实验。使用Bio Jr.8 100mL×8培养设备(由Biott Corporation制造的BJR-25NA1S-8M)，并且根据装置的说明书进行操作。作为培养基，使用100mL的具有上表2中示出的组合物的YCFA培养基。将除了生育酚和低聚糖以外的培养基组分溶解于纯化水中并且在高压釜中灭菌，并且将分别溶解于二甲基亚砜(DMSO，FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)和纯化水中、然后用过滤器灭菌的生育酚和低聚糖添加至高压釜处理后的混合物中。培养温度为37℃，并且在培养期间通过向培养容器中吹入过滤灭菌的CO₂来维持厌氧条件。在将pH调节至7.0后，添加用生理盐水稀释的100μL(以粪便计为10mg)的粪便样品，并且开始厌氧培养。为了模拟婴儿的大肠中的pH，在培养期间，当pH变得低于5.5时，通过用1M Na₂CO₃中和来控制pH。开始培养后7小时收集培养基并且以8000rpm在4℃下离心3min，并且收集上清液和沉淀物。

(3)DNA提取和细菌计数的测定

使用GENE PREP STAR PI-480自动分离系统(Kurabo Industries Ltd.Japan)，从(2)中收集的沉淀物提取DNA。使用提取的DNA作为模板并且使用SEQ ID NO:1(ctcctggaaacgggtgg)和SEQ ID NO:2(ggtgttcttcccgatatctaca)的引物，用Applied Biosystems 7500Fast&7500实时PCR系统(由Thermo Fisher制造)进行定量PCR，并且测定双歧杆菌菌株的细菌计数。PCR条件为在95℃下变性5秒、随后在55℃下退火20秒和在72℃下延伸30秒的40个循环。

(4)结果

通过定量PCR测定的7小时的培养后双歧杆菌菌株的细菌计数在表5中示出。细菌计数为相对值，其中将不添加生育酚的组的细菌计数视为1。

当与生育酚组合使用用于培养时，2’-岩藻糖基乳糖、6’-唾液乳糖和低聚半乳糖中的每一者进一步促进双歧杆菌菌株的生长。

[表16]

表5-1

[表17]

表5-2

[表18]

表5-3

[表19]

表5-4

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Claims

1.一种用于促进低聚糖的同化的包含生育酚的组合物，

其中所述生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为5以上。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为10以上。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为8.8以下。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为3.9以下。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其用于促进具有3个以上且5个以下的糖残基的低聚糖的同化。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其用于促进人乳低聚糖的同化。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述人乳低聚糖包含选自由乳糖-N-新四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖组成的组中的一种、两种或更多种。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其进一步包含人乳低聚糖。

10.根据权利要求9所述的组合物，其包含乳糖-N-四糖并且其用于促进含有2’-岩藻糖基乳糖的人乳低聚糖的同化。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其为营养组合物。

12.根据权利要求11所述的组合物，其为配方奶。

13.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其在使用前添加至含有人乳低聚糖的组合物中。

14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述含有人乳低聚糖的组合物为母乳。

15.一种包含低聚糖和生育酚的营养组合物，

其中所述生育酚包含选自由β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚组成的组中的一种、两种或更多种(条件是不包括母乳)。

16.根据权利要求15所述的营养组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为5以上。

17.根据权利要求16所述的营养组合物，其中δ-生育酚含量与β-生育酚含量的质量比(δ/β)为10以上。

18.根据权利要求15至17中任一项所述的营养组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为8.8以下。

19.根据权利要求18所述的营养组合物，其中γ-生育酚含量与δ-生育酚含量的质量比(γ/δ)为3.9以下。

20.根据权利要求15至19中任一项所述的营养组合物，其中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量与低聚糖含量的质量比为0.001至0.2。

21.根据权利要求15至20中任一项所述的营养组合物，其中β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的总量基于整个组合物为0.0002至0.1质量％。

22.根据权利要求15至21中任一项所述的营养组合物，其中整个组合物的低聚糖含量为0.05至10质量％。

23.根据权利要求15至22中任一项所述的营养组合物，其中所述低聚糖具有3个以上且5个以下的糖残基。

24.根据权利要求15至23中任一项所述的营养组合物，其中所述低聚糖包含人乳低聚糖。

25.根据权利要求24所述的营养组合物，其中所述人乳低聚糖包含选自由乳糖-N-新四糖、乳糖-N-四糖、2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液乳糖、6’-唾液乳糖、二岩藻糖基乳糖和3-岩藻糖基乳糖组成的组中的一种、两种或更多种。

26.根据权利要求23所述的营养组合物，其中所述低聚糖包含乳糖-N-四糖和2’-岩藻糖基乳糖。

27.根据权利要求23所述的营养组合物，其中所述低聚糖包含低聚果糖和6’-唾液乳糖。

28.根据权利要求15至27中任一项所述的营养组合物，其用于促进双歧杆菌菌株的生长。

29.根据权利要求28所述的营养组合物，其中所述双歧杆菌菌株为选自由短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌组成的组中的一种、两种或更多种菌株。

30.根据权利要求15至29中任一项所述的营养组合物，其进一步包含双歧杆菌菌株。

31.根据权利要求15至30中任一项所述的营养组合物，其为配方食品。