JP7248250B2 - 乳酸球菌の増殖促進剤 - Google Patents
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Description
[1]ジカルボン酸および/またはその塩を有効成分として含んでなる、乳酸球菌の増殖促進剤。
[2]ジカルボン酸が炭素数4~6の脂肪族ジカルボン酸である、上記[1]に記載の増殖促進剤。
[3]ジカルボン酸および/またはその塩が、リンゴ酸、α-ケトグルタル酸およびそれらの塩からなる群から選択される1種または2種以上である、上記[1]または[2]に記載の増殖促進剤。
[4]乳酸球菌がラクトコッカス属細菌である、上記[1]~[3]のいずれかに記載の増殖促進剤。
[5]乳酸球菌がラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM5805である、上記[1]~[4]のいずれかに記載の増殖促進剤。
[6]ジカルボン酸および/またはその塩を培地において0.01~8質量%の濃度で使用する、上記[1]~[5]のいずれかに記載の増殖促進剤。
[7]畜肉エキスを実質的に含まない培地に添加する、上記[1]~[6]のいずれかに記載の増殖促進剤。
[8]ジカルボン酸および/またはその塩を含有する、乳酸球菌用培地。
[9]ジカルボン酸および/またはその塩を0.01~8質量%の濃度で含有する、上記[8]に記載の培地。
[10]畜肉エキスを実質的に含まない、上記[8]または[9]に記載の培地。
[11]上記[8]~[10]のいずれかに記載の培地で乳酸球菌を培養する工程を含む、乳酸球菌の培養方法。
[12]乳酸球菌の培地にジカルボン酸および/またはその塩を添加する工程を含む、乳酸球菌の増殖促進方法。
例1では、ジカルボン酸による乳酸球菌に対する増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
乳酸球菌にはラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス JCM5805菌株(Lactococcus lactis subsp. lactis)を用いた。
(i)嫌気的培養
培地はMRS培地(MRS BROTH、CODE:CM0359、Oxoid社、組成は表1に示す、本明細書の例3~6において同じ)を使用した。ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸(富士フィルム和光純薬社)、α-ケトグルタル酸二ナトリウム(本明細書中、「αKG2Na」ということがある)(富士フィルム和光純薬社)およびリンゴ酸(東京化成工業社)を図1に示す濃度(0.01~4.0質量%)で培地にそれぞれ添加し、対照(ジカルボン酸無添加培地)と同じpHになるように水酸化ナトリウムを添加した(pH6.2±0.2)。次に、15mlコニカルチューブ(FALCON)中で、菌体の濃度が調製した培地10mlに対して0.1%(v/v)となるように植菌(播種)し、インキュベーター(東京理化器械
社)において30℃で24時間培養した(静置培養)。
培地はMRS培地を使用した。ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸、α-ケトグルタル酸二ナトリウムおよびリンゴ酸を図2に示す濃度(0.5~2.0質量%)で培地にそれぞれ添加し、対照(ジカルボン酸無添加培地)と同じpHになるように水酸化ナトリウムを添加した(pH6.2±0.2)。次に、菌体の濃度が培地10mlに対して0.1%(v/v)となるように植菌(播種)し、植菌した培地を自動培養探索装置OT-201(オリエンタルインスツルメンツ社、本明細書中「バイオプロッター」ということがある)に供し、30℃で24時間培養した(攪拌強度条件:Medium)。
菌数の測定は吸光度計(Biochrom GeneQuant1300)を用いて培地のOD600(濁度)を測定することにより行った。
測定値は平均値±標準誤差で表した。一元配置分散分析を行った後にTukey検定を行い、対照群に対してp<0.05の場合に有意差ありとした。
結果は、図1および図2に示す通りであった。嫌気的培養では、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、αKG(図1A)およびリンゴ酸(図1C)を添加した培地において、濃度依存的に乳酸球菌の増殖が有意に促進されることが確認された。また、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、αKG2Na(図1B)を添加した培地では、0.1~4質量%の場合に濃度依存的に乳酸球菌の増殖が有意に促進されることが確認され、0.01質量%の場合も乳酸球菌の増殖が促進される傾向にあった。同様に、好気的培養においても、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、αKG(図2A)およびリンゴ酸(図2B)を添加した培地において、濃度依存的に乳酸球菌の増殖が有意に促進されることが確認された。同様に、畜肉エキスを含まない培地にジカルボン酸およびその塩のいずれを添加した場合にも乳酸球菌の増殖が促進されることが確認された。
例2では、例1で用いた培地とは異なる培地を用いてジカルボン酸による乳酸球菌に対する増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
例1(1)アに記載の乳酸球菌を用いた。
(i)嫌気的培養
培地はM17培地(Difco M17 Broth、BD社、組成は表2に示す、本明細書において以下同じ)に20g/Lのグルコースを添加した培地(本明細書中「GM17培地」ということがある)を使用した。ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸およびリンゴ酸を図3に示す濃度(0.5~2質量%)で培地にそれぞれ添加し、対照(ジカルボン酸無添加培地)と同じpHになるように水酸化ナトリウムを添加した(pH6.5±0.2)。次に、15mlコニカルチューブ(FALCON)中で、菌体の濃度が調製した培地10mlに対して0.1%(v/v)となるように植菌(播種)し、インキュベーター(東京理化器械社)において30℃で24時間培養した(静置培養)。
培地はGM17培地を使用した。ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸およびリンゴ酸を図4に示す濃度(0.5~2質量%)で培地にそれぞれ添加し、対照(ジカルボン酸無添加培地)と同じpHになるように水酸化ナトリウムを添加した(pH6.5±0.2)。次に、菌体の濃度が調製した培地10mlに対して0.1%(v/v)となるように植菌(播種)し、植菌した培地を自動培養探索装置OT-201(オリエンタルインスツルメンツ社、本明細書中「バイオプロッター」ということがある)に供し、30℃で24時間培養した(攪拌強度条件:Medium)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
例1(1)エの記載と同様にして行った。
結果は、図3および図4に示す通りであった。嫌気的培養では、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、αKG(図3A)およびリンゴ酸(図3B)を添加した培地において、乳酸球菌の増殖が有意に促進されることが確認された。同様に、好気的培養においても、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、αKG(図4A)およびリンゴ酸(図4B)を添加した培地において、濃度依存的に乳酸球菌の増殖が促進されることが確認された。例1および例2の結果から、培地の種類によらずジカルボン酸により乳酸球菌の増殖が有意に促進されることが確認された。
例3では、α-ケトグルタル酸による各種乳酸球菌に対する増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
菌体には表1に記載の乳酸球菌を用いた。
ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸を2.0質量%の濃度で培地に添加したこと以外は例1(1)イ(i)の記載と同様にして行った(嫌気的培養)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
測定値は平均値±標準誤差で表した。Student-t検定を行い、対照群に対してp<0.05の場合に有意差ありとした。
結果は、図5に示す通りであった。ラクトコッカス・ガルビエアエ、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエ、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスおよびロイコノストック・ラクティスの乳酸球菌は、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、菌株によらずジカルボン酸により増殖が有意に促進されることが確認された。
例4では、α-ケトグルタル酸によるラクトバチルス属の乳酸桿菌の増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
菌体には表2に記載のラクトバチルス属の乳酸桿菌を用いた。
ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸を図6に示す濃度(0.5~2質量%)で培地にそれぞれ添加したこと以外は例1(1)イ(i)の記載と同様にして行った(嫌気的培養)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
例1(1)エの記載と同様にして行った。
結果は、図6に示す通りであった。ラクトバチルス属の乳酸桿菌は、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、ジカルボン酸による増殖促進は認められなかった。
例5では、トリカルボン酸による乳酸球菌に対する増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
例1(1)アに記載の乳酸球菌と同様のものを用いた。
培地にジカルボン酸の代わりにトリカルボン酸としてクエン酸(富士フィルム和光純薬社)を図7に示す濃度(0.25~1質量%)で培地にそれぞれ添加したこと以外は例1(1)イ(i)の記載と同様にして行った(嫌気的培養)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
例1(1)エの記載と同様にして行った。
結果は、図7に示す通りであった。乳酸球菌は、対照(クエン酸無添加培地)に対して、クエン酸により増殖が有意に促進することが確認されたが、増殖促進の効果の程度はジカルボン酸の方が大きかった。
例6では、ジカルボン酸によるペディオコッカス属の乳酸球菌に対する増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
菌体には表5に記載のペディオコッカス属の乳酸球菌を用いた。
ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸(図8A(0.1~4質量%)および図8C(1~4質量%)に示す濃度)およびリンゴ酸(図8B(0.1~2質量%)および図8D(1~2質量%)に示す濃度)で培地にそれぞれ添加したこと以外は例1(1)イ(i)の記載と同様にして行った(嫌気的培養)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
例1(1)エの記載と同様にして行った。
結果は、図8に示す通りであった。ペディオコッカス属の乳酸球菌は、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、αKG(図8AおよびC)およびリンゴ酸(図8BおよびD)を添加した培地において、濃度依存的に有意に増殖が促進されることが確認された。
例7では、畜肉エキスを含まない培地において、ジカルボン酸による乳酸球菌に対する増殖促進効果について検討した。
ア 菌体
菌体には表6に記載の乳酸球菌を用いた。
培地は表7に示す組成にて調整したMRS培地を使用した(リン酸を添加してpH6.2に調整した)。ジカルボン酸としてα-ケトグルタル酸を2.0質量%の濃度で培地に添加し、対照(ジカルボン酸無添加培地)と同じpHになるように水酸化ナトリウムを添加した(pH6.2±0.2)。次に、15mlコニカルチューブ(FALCON)中で、菌体の濃度が調製した培地10mlに対して0.1%(v/v)となるように植菌(播種)し、インキュベーター(東京理化器械社)において30℃で24時間培養した(静置培養)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
例1(1)エの記載と同様にして行った。
結果は、図9に示す通りであった。畜肉エキスを含まない培地においても、ジカルボン酸の添加によりラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス、ラクトコッカス・ガルビエアエ、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホールドニアエおよびロイコノストック・ラクティスの乳酸球菌は、対照(ジカルボン酸無添加培地)に対して、増殖が有意に促進されることが確認された。
例8では、培地中の畜肉エキスが乳酸球菌の増殖に与える影響について検討した。
ア 菌体
菌体には表8に記載の乳酸球菌を用いた。
畜肉エキスを含まない培地は、表7に示す組成にて調整したMRS培地を使用した(初期pHが7.0程度であったためリン酸を添加してpH6.2に調整した)。畜肉エキスを含む培地は、表9に示す組成にて調製したMRS培地を使用した(リン酸を添加してpH6.2に調整した)。次に、15mlコニカルチューブ(FALCON)中で、菌体の濃度が調製した培地10mlに対して0.1%(v/v)となるように植菌(播種)し、インキュベーター(東京理化器械社)において30℃で24時間培養した(静置培養)。
例1(1)ウの記載と同様にして行った。
例1(1)エの記載と同様にして行った。
結果は、図10に示す通りであった。畜肉エキスの有無のみが異なる培地を用いて乳酸球菌の増殖に与える影響を検討した結果、乳酸球菌の増殖は、畜肉エキスを含まない培地よりも畜肉エキスを含む培地の方が有意に高いことが確認された。また、例7と例8の結果から、畜肉エキスを含まない培地にジカルボン酸を添加した培地の方が、畜肉エキスを含む培地(ジカルボン酸の添加なし)よりもOD600値が高く、ジカルボン酸による乳酸球菌に対する増殖促進効果が高いことが確認された(図9および10)。
Claims (6)
- 炭素数4~6の脂肪族ジカルボン酸および/またはその塩を有効成分として含んでなる、乳酸球菌の増殖促進剤であって、前記乳酸球菌がラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・ガルビエアエ、ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ダムノサスおよびロイコノストック・ラクティスからなる群から選択される1種または2種以上の乳酸球菌であり、前記脂肪族ジカルボン酸がα-ケトグルタル酸であり、かつ、醤油または脱脂乳を含まない培地に添加して使用するための、増殖促進剤。
- 前記培地がMRS培地、M17培地またはLB培地である、請求項1に記載の増殖促進剤。
- ラクトコッカス・ラクティスがラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティスJCM5805である、請求項1または2に記載の増殖促進剤。
- ジカルボン酸および/またはその塩を培地において0.01~8質量%の濃度で使用する、請求項1~3のいずれか一項に記載の増殖促進剤。
- 畜肉エキスの含有量が0.8質量%未満である培地に添加する、請求項1~4のいずれか一項に記載の増殖促進剤。
- 乳酸球菌の培地(但し、醤油または脱脂乳を含む培地を除く)に炭素数4~6の脂肪族ジカルボン酸および/またはその塩を添加する工程を含み、前記乳酸球菌がラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・ガルビエアエ、ペディオコッカス・アシディラクティシ、ペディオコッカス・ダムノサスおよびロイコノストック・ラクティスからなる群から選択される1種または2種以上の乳酸球菌であり、前記脂肪族ジカルボン酸がα-ケトグルタル酸である、乳酸球菌の増殖促進方法。
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Citations (5)
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JP2019156793A (ja) | 2018-03-15 | 2019-09-19 | キリン株式会社 | 皮膚状態改善用組成物 |
JP2019201590A (ja) | 2018-05-23 | 2019-11-28 | キッコーマン株式会社 | 免疫賦活用組成物及びサイトカイン産生促進用組成物 |
JP2020039308A (ja) | 2018-09-12 | 2020-03-19 | キリンホールディングス株式会社 | 労働パフォーマンスの向上用組成物 |
CN111685305A (zh) | 2020-07-10 | 2020-09-22 | 山东食圣酿造食品有限公司 | 一种高耐盐性乳酸菌发酵生产酱油的方法 |
WO2021132418A1 (ja) | 2019-12-27 | 2021-07-01 | 株式会社明治 | 乳酸菌の発酵促進剤 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5823075B2 (ja) * | 1980-12-19 | 1983-05-12 | ヒゲタ醤油株式会社 | 醤油乳酸菌増殖用培地 |
JPS60105489A (ja) * | 1983-11-11 | 1985-06-10 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 乳酸菌スタ−タ−用培地の製造法 |
US4766076A (en) * | 1984-06-19 | 1988-08-23 | The State Of Oregon Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University | Method and buffered bulk starter media for propagation of useful bacteria |
-
2021
- 2021-06-18 JP JP2021101500A patent/JP7248250B2/ja active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019156793A (ja) | 2018-03-15 | 2019-09-19 | キリン株式会社 | 皮膚状態改善用組成物 |
JP2019201590A (ja) | 2018-05-23 | 2019-11-28 | キッコーマン株式会社 | 免疫賦活用組成物及びサイトカイン産生促進用組成物 |
JP2020039308A (ja) | 2018-09-12 | 2020-03-19 | キリンホールディングス株式会社 | 労働パフォーマンスの向上用組成物 |
WO2021132418A1 (ja) | 2019-12-27 | 2021-07-01 | 株式会社明治 | 乳酸菌の発酵促進剤 |
CN111685305A (zh) | 2020-07-10 | 2020-09-22 | 山东食圣酿造食品有限公司 | 一种高耐盐性乳酸菌发酵生产酱油的方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Loubiere P, et al.,Electrogenic malate uptake and improved growth energetics of the malolactic bacterium Leuconostoc oenos grown on glucose-malate mixtures.,J Bacteriol.,174(16),1992年08月,pp.5302-8 |
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