KR100768934B1 - 비활성 잠복 전환성장인자 베타의 활성 전환성장인자로의 전환을 유도할 수 있는 활성물질 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 비활성 TGFb-Latent의 활성 TGFb로의 전환을 유도할 수 있는 활성물질에 관한 것이다. 본 발명은 특히 피부, 주로 진피에서 활성 TGFb1의 농도를 증가시키는 조성물의 제조를 위한 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기 용도로부터 유래된 용도들 뿐만 아니라 상기 추출물을 포함하는 화장품 또는 제약 조성물에 관한 것이다.
TGFb1, 콩, 귀리, 난장이 야자(dwarf palm), 상백피(white mulberry), 스프링 레스타로우(spring restharrow), 누에콩(pigeon bean), 잠두(horse bean), 토마토, 생선알(fish roe), 완두콩, 생선, 밀싹, 망고, 대추야자 열매(date), 누에(silk), 키위, 감자, 그레이프프루트(grapefruit), 파파야, 파인애플, 시계풀 열매(passion fruit), 황금(scutellaria), 옥수수, 사과, 키노아(quinoa), 파슬리, 유까(yucca)

Description

비활성 잠복 전환성장인자 베타의 활성 전환성장인자로의 전환을 유도할 수 있는 활성물질{A active principle which is capable of inducing the conversion of inactive TGFb-latent into active TGFb}
도 1은 실시예 31에서 난장이 야자 추출물의 농도에 따른 엘라스틴 유전자의 전사율을 나타낸 것이다.
본 발명은 잠복 전환성장인자 베타 1 (Latent Transforming Growth Factor beta 1: 이하, 'TGFb1-L'이라 함)을 TGFb1-L의 활성화 형태("active" form)인 전환성장인자 베타 1 (Transforming Growth Factor beta 1: 이하, "TGFb1"이라 함)로 전환시키는 천연 추출물 및 그것의 화장품(cosmetics), 피부제약(dermopharmaceuticals) 및 제약(pharmaceuticals)으로서의 용도, 주로 피부, 즉 진피(dermis)에서 TGFb1의 농도를 증가시키는 화장품, 피부제약 및 제약으로서의 용도에 관한 것이다.
성장인자 및 사이토카인 중에서 TGFb1은, 각질형성세포(keratinocytes), 섬유아세포(fibroblasts), 백혈구(leukocytes) 및 혈소판(platelets)을 포함하는 수 많은 세포에 의해 피부에서 분비되며, 세포대사 조절 및 세포외부기질(extracellular matrix)의 리모델링이라는 중요한 특성에 의해 치료를 조절하는 가장 효과적인 조절인자 중 하나이다(Rousselle P et al., Ed. Medias Flash (1998); Melissopoulos A et al., Ed. Medicales Internationales, (1998)).
현재까지 4개의 이성체(isoform)가 TGF-beta 계로 확인되었다. 상기 이성체들은 각각 완전히 별개이며 서로 다른 염색체 위에 존재하는 유전자들로부터 번역된다. TGF-beta 1은 19q13 염색체 위에 위치하는 반면, TGF-beta 2는 1q41 염색체 위에, TGF-beta 3는 14q24 염색체 위에, 그리고 TGF-beta 4는 1q42.1 염색체 위에 위치한다.
TGF-beta 1은 생물학적으로 비활성화된 형태, 이른바 "잠복 형태(latent form)"로 분비되고 저장되며, 그것의 생물학적인 유효성을 획득하기 위해서는 활성화되어야만 한다.
잠복(latent) TGFb1은 세포외부기질에 저장되며, 노화된 대상에서 사용되지 않은 저장고를 의미한다.
In vivo 실험에서, 하기의 다양한 인자들이 상기 잠복 TGFb1의 활성화를 유도할 수 있다:
- 글루코시다제(glucosidases; endoglycosidase-F, neuraminidase, N-glycanase),
- 대식세포에서 분비되는 시알리다제(sialidases)
- 세린 프로테아제(plasmin, cathepsin D 및 stromelysin(MMP3)),
- 세포의 표면 뿐만 아니라 세포외부기질에 결합하는 접착 단백질 트롬보스폰딘-1(thrombospondin-1)은 잠복 TGFb1(latent TGFb1) 활성화의 주요한 생리적 조절인자이다.
활성 TGFb1(active TGFb1)은 피부의 발달 및 항상성의 가장 중요한 다기능성 성장인자로 여겨지며, 주로 세포에서, 섬유아세포의 증식유도, 그것들의 친화력(chemoattraction), 혈관신생(neovascularisation)의 촉진, 섬유아세포(fibroblasts)의 근섬유세포(myofibroblasts)로의 분화, 및 섬유아세포의 성장조절을 가능하게 한다. 또한, 상기 활성 TGFb1(active TGFb1)은 세포외부기질에서, 콜라겐의 합성 증가, 콜라겐 가수분해효소(collagenase)의 감소 및 프로테아제 저해제(protease inhibitor: TIMP)의 합성 증가, 피브로넥틴(fibronectin)의 이성체의 발현 및 피브로넥틴 리셉터의 합성 증가, 엘라스틴의 합성 증가를 가능하게 한다. 그러나, 그것은 또한 프로티오글리칸(proteoglycan) 및 히아루론산(hyaluronic acid)의 합성 증가와 관련되어 있다.
진피에서 활성 TGFb1(active TGFb1)의 농도 감소가 관찰되는 반면, 섬유아세포(fibroblast)는 상기 활성 TGFb1에 의한 촉진에 반응하는 능력을 유지한다.
이러한 노화 동안의 활성 TGFb1(active TGFb1) 농도의 감소는 섬유아세포(fibroblast)의 증식 감소 및 세포외부기질(ECM)의 구성요소의 합성 감소를 유도하며, 상기 ECM의 세포외부 단백질의 소거활성(destructive activity)을 저해한다.
일찍이 활성방법은 물리적 처리(온도), 화학적 처리(산성 pHs) 또는 효소적 활성 중에서 제안되어 왔다.
그러나, 이러한 활성방법은 하기의 문제점을 갖는다:
- 화장품 제제(cosmetic formulation)에 사용하기에는 너무 독하거나 부적당하며,
(예: 높은 온도나 너무 산성의 pH는 화장품을 제제하는데 사용될 수 없음)
- 효소의 사용 또한 화장품에서 유용하지 않음. 그 이유는 효소의 사용이 한편으로는 피부에 알레르기 반응을 유도할 수 있고, 다른 한편으로는 효소의 분자량이 너무 커서 진피를 포함한 피부의 깊은 층, 즉 TGF beta가 비활성 형태로 존재하는 층까지 관통할 수 없기 때문임.
이러한 방법들은 화장품학적으로, 피부질환적으로 또는 약제학적으로 허용되는 천연 활성물질을 제공할 수 없다.
오직 프랑스 특허출원 FR 2,810,323만이 TGFb1의 잠복 형태(latent form)를 활성화시키는 물질에 대해 개시하고 있다. 상기 물질은 트리펩티드 라이신-페닐알라닌-라이신(Lys-Phe-Lys)의 유도체이며, 그것의 염기서열은 트롬보스폰딘-1(thrombospondin-1)에 존재한다. 그러나, 화장품학적으로 활성화하기 위하여, 상기 트리펩티드는 엘라이딘산(elaidic acid)과의 반응에 의해 엘라이딜 체인(elaidyl chain)을 획득함으로써 변형되어야만 한다.
상기 산물은 이러한 화학적 변형때문에 본 발명과 같이 천연적이지 않다.
게다가, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 프로테아제 활성을 갖는 물질 또는 강한 단백질 변성 시약의 사용을 생각할 것이다. 본 발명은 화장품학적으로, 또는 피부질환적으로, 또는 약제학적으로 허용되는 산물을 제조하는데 있어 문 제가 되는 사용을 피한다.
따라서, 본 발명의 주 목적은 피부, 특히 진피에서 활성 TGFb1(active TGFb1)의 농도 감소를 완화시키는 것이다.
본 발명의 목적은 화장품학적으로, 또는 피부질환적으로, 또는 약제학적으로 허용되며, TGFb1-L을 활성 TGFb1(active TGFb1)으로 전환하는, 천연 활성 물질(natural active principles)을 제공하는데 있어서의 신규한 기술적 문제를 해결하는 것이다.
본 발명자들은 상기 활성 물질이 첫째로 피부 염증 또는 알레르기를 일으킬 수 있는 프로테아제 활성을 갖지 않으며, 둘째로 단백질을 강하게 변성시키는 것으로 알려져 있는 화학물질, 예를 들어 HCl 타입의 강산, 요소, 스레이톨(threitol), 티오글리콜릭산 타입(thioglycolic acid type)의 황성분 함유 환원제(sulphur-containing reducing agents) 등과 같은 화학물질이 아닐 때 화장품학적으로, 또는 피부질환적으로, 또는 약제학적으로 허용가능하다고 판단하고 있다.
본 발명자들은 활성물질이 자연으로부터의 추출물인 경우, 예를 들면 식물계(식물, 녹조류 등), 미네랄계, 및/또는 식물(단백질, 폴라사카라이드 등), 동물의 분비물, 및/또는 동물의 몸체 또는 식물의 분리된 부분으로부터 추출된 일부분들에 속하는 것으로서, 박테리아에 의해 발효된 후 얻어지는 추출물인 경우에 천연물질이라고 생각한다.
본 발명의 다른 목적은 국소적으로 허용되며(topically acceptable), 섬유아 세포(fibroblasts)의 증식을 촉진하는 천연 활성 물질을 제공하는데 있어서의 신규한 기술적 문제를 해결하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 국소적으로 허용되며, 활성 TGFb1의 양을 증가시켜, 결과적으로 세포외부기질(extracellular matrix)의 구성요소의 합성을 증가시키며, 세포외부기질의 세포외부 단백질의 소거활성을 저해하는 천연 활성 물질을 제공하는데 있어서의 신규한 기술적 문제를 해결하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 국소적으로 허용되며 상기 묘사된 메커니즘에 따라 항주름 또는 항노화 효과를 발휘하는 천연 활성 물질을 제공하는데 있어서의 신규한 기술적 문제를 해결하는것이다.
본 발명은 주로 이러한 활성 물질들을 포함하는 화장품, 피부제약 또는 제약 조성물들을 제공한다.
이하, 본 발명의 구성을 설명한다.
본 발명자들은 상기의 다양한 문제점들을 해결하기 위하여, in vitro 상에서 어떤 종류의 활성화가 비활성의 TGFb1-L을 활성화시킬 수 있을 지를 연구하였다. TGFb1은 비활성 형태(TGFb1-L)인 경우에 단백질 LAP(latency associated protein)와 결합되어 있기 때문에, 상기 TGFb1을 활성화시키기 위해서는 상기 TGFb1과 상기 LAP 단백질을 접합시키는 결합을 깨뜨릴 필요가 있다.
본 발명자들은 피부, 주로 진피에서 활성 TGFb1의 농도를 증가시킬 수 있는 천연 활성 물질을 제공하기 위하여, TGFb1-L을 활성화시키는 물질들을 선택할 수 있는 스크리닝 테스트를 개발하였다.
상기 테스트는 콩, 귀리, 난장이 야자(dwarf palm), 상백피(white mulberry), 스프링 레스타로우(spring restharrow), 누에콩(pigeon bean), 잠두(horse bean), 토마토, 생선알(fish roe), 완두콩, 생선, 밀, 망고, 대추야자 열매(date), 누에(silk), 키위, 감자, 그레이프프루트(grapefruit), 파파야, 파인애플, 시계풀 열매(passion fruit), 황금(scutellaria), 옥수수, 사과, 키노아(quinoa), 파슬리, 유까(yucca)의 천연 추출물들이 TGFb1-L을 국소적으로 활성화시킬 수 있음을 입증하였다. 상기 테스트는 주로 화장품학적으로 및/또는 피부질환적으로 허용되는 조건에서 행해진 배양(incubation) 후에 수행된 TGFb1-L 활성화 작용을 포함한다.
이러한 추출물들은 당업자에게 잘 알려진 여러 가지 추출방법 중 하나에 의해 얻을 수 있다.
이러한 천연 추출물들은 TGFb1-L(TGFb1-latent)을 활성 TGFb1(active TGFb1)으로 전환할 수 있기 때문에, 주로 피부, 즉 진피에서 TGFb1의 농도를 증가시키는 화장품 조성물, 및/또는 피부제약 조성물, 및/또는 제약 조성물 등의 제조에 사용된다. 또한 상기 추출물들은 피부, 주로 진피에서 TGFb1의 농도를 증가시킴으로써 발생하는 다양한 특성들을 위해 사용된다.
이하, 본 발명의 구성 및 작용을 상세히 설명한다.
본 발명은 주로 효소적으로 비활성이며, 화장품학적으로, 피부질환적으로, 및/또는 약제학적으로 허용되는 조건하에서 TGFb1과 단백질 LAP(latency associated protein)을 접합시키는 결합을 깨뜨림으로써 TGFb1-L(TGFb1-latent)을 활성 TGFb1(active TGFb1)으로 전환하는 천연 추출물에 관한 것이다.
이러한 식물 추출물은 콩, 귀리, 난장이 야자(dwarf palm), 상백피(white mulberry), 스프링 레스타로우(spring restharrow), 누에콩(pigeon bean), 잠두(horse bean), 토마토, 생선알(fish roe), 완두콩, 생선, 밀, 망고, 대추야자 열매(date), 누에(silk), 키위, 감자, 그레이프프루트(grapefruit), 파파야, 파인애플, 시계풀 열매(passion fruit), 황금(scutellaria), 옥수수, 사과, 키노아(quinoa), 파슬리, 유까(yucca)의 추출물, 및 상기 추출물들의 혼합물 중 어느 하나에서 선택됨이 바람직하다.
상기 본 발명의 화장품학적으로 또는 피부질환적으로 허용되는 활성물질들은 화장품학적으로 또는 피부질환적으로 허용되는 물리화학적 조건하에서 비활성 TGFb1-L의 활성 TGFb1으로의 전환을 유도하며, 오로지 천연물에 해당하는 것으로서 화학적 변형(chemical modification)의 대상이 되지 않는다.
본 발명은 또한 상기한 추출물 중 적어도 하나 이상을 포함하는 화장품 조성물 또는 제약 조성물에 관한 것이다.
상기 추출물 농도는 총 조성물 중량대비 0.01 내지 10%가 바람직하다.
상기 추출물은 국소적인 루트를 통해 허용되는 부형제, 특히 화장품학적으로 또는 피부질환적으로 허용되는 부형제와 함께 혼합하는 것이 바람직하다.
이러한 조성물들에 있어서, 상기 부형제는 예를 들어 방부제, 연화제, 유화 제, 계면활성제, 보습제, 농축제, 컨디셔너, 매티화잉제(matifying agent), 안정제, 항산화제, 질감제(texture agent), 증백제(brightening agent), 필모지닉제(filmogenic agent), 가용화제(solubiliser), 색소, 염료, 향료 및 솔라 필터(solar filter)로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나 이상의 조성물을 함유한다. 이러한 부형제들은 바람직하게는 아미노산 및 그 유도체, 폴리글리세롤, 에스테르, 폴리머 및 셀룰로즈의 유도체, 라놀린 유도체, 인지질, 락토페린, 락토페록시다제, 수크로즈에 기초한 안정제(sucrose-based stabiliser), 비타민 E 및 그 유도체, 천연 및 합성 왁스, 식물성 오일, 트리글리세라이드, 인사포니피어블(insaponifiables), 피토스테롤(phytosterols), 식물성 에스테르, 실리콘 및 그 유도체, 단백질 가수분해물, 호호바 오일 및 그 유도체, 지질/수용해성 에스테르(lipo/hydrosoluble esters), 베타인(betaines), 아미녹사이드(aminoxides), 식물 추출물, 수크로즈의 에스테르, 티타늄 디옥사이드, 글리신 및 파라벤으로 구성되는 그룹, 더 바람직하게는 부틸렌 글리콜, 스티레드-2(steareth-2), 스티레드-21(steareth-21), 글리콜-15, 스티릴 에테르(stearyl ether), 세티릴 알콜(cetearyl alcohol), 페녹시에탄올, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤, 부틸렌 글리콜, 천연 토코페롤, 글리세롤, 소듐 디하이드록시세틸(sodium dihydroxycetyl), 이소프로필 하이드록시세틸 에테르(isopropyl hydroxycetyl ether), 글리콜 스티레이트(glycol stearate), 트리이소노나오인(triisononaoine), 옥틸 코코에이트(octyl cocoate), 폴리아크릴아마이드, 이소파라핀, 루레드-7(laureth-7), 아카보머(acarbomer), 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 비사볼롤 (bisabolol), 디메티콘(dimethicone), 소듐 하이드록사이드(sodium hydroxide), PEG 30-디폴리하이드록시스티레이트(dipolyhydroxysterate), 카프릭/카프릴릭 트리글리세라이드(capric/caprylic triglycerides), 세티릴 옥타노에이트(cetearyl octanoate), 디부틸 아디페이트(dibutyl adipate), 포도씨 오일, 호호바 오일, 마그네슘 설페이트(magnesium sulphate), EDTA, 사이클로메티콘(cyclomethicone), 잔탄검, 시트르산, 소듐 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulphate), 미네랄 왁스 및 오일, 이소스티릴 이소스티레이트(isostearyl isostearate), 프로필렌 글리콜 디페라고네이트(propylene glycol dipelargonate), 프로필렌 글리콜 이소스티레이트(propylene glycol isosterate), PEG 8 비즈왁스(Beeswax), 하이드로지네이트 팜 허트 오일 글리세라이드(hydrogenated palm heart oil glycerides), 하이드로지네이트 팜 오일 글리세라이드(hydrogenated palm oil glycerides), 라놀린 오일, 세사메 오일, 세틸 락테이트(cetyl lactate), 라놀린 알콜, 카스토르 오일(castor oil), 티타늄 디옥사이드,(tatinium dioxide), 락토즈, 수크로즈, 저밀도 폴리에틸렌, 및 등장식염수(isotonic saline solution)으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.
위에서 언급한 조성물들은 바람직하게는 수용성 또는 지용성 용액, 특히 용기 또는 튜브안에 주입한 수용성 크림 또는 젤 또는 지용성 젤, 주로 샤워젤, 샴푸, 밀크, 에멀젼, 마이크로 에멀젼 또는 나노에멀젼, 주로 수중유형(oil-in-water) 또는 유중수형(water-in-oil) 또는 멀티플(multiple) 또는 실리콘-함유 마이크로에멀젼 또는 나노에멀젼, 특히 유리병, 플라스틱병 또는 메저 바틀(measure bottle) 또는 에어로졸, 앰플안에 함유된 로션, 물비누, 피부질환치료용 바 비누(dermatological bar), 연고, 폼(foam), 무수 제품(anhydrous product), 특히 액체, 반죽 또는 고체상태의 무수 제품, 예를 들어 스틱, 주로 립스틱 형태의 제품으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 어느 하나의 형태로 제제화된다.
본 발명은 또한 상기에서 언급한 적어도 어느 하나 이상의 추출물의 피부, 주로 진피에서 활성 TGFb1(active TGFb1)의 농도를 증가시키기 위한 조성물 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기에서 언급한 적어도 어느 하나 이상의 추출물의 섬유아세포의 증식촉진을 위한 조성물 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기에서 언급한 어느 하나 이상의 추출물의 세포외부기질의 구성요소의 합성 증가, 주로 콜라겐의 합성 증가, 및/또는 프로테아제 저해제(protease inhibitors: TIMP)의 합성 증가, 및/또는 프로티오글리칸(proteoglycans) 및/또는 히아루론산의 합성 증가, 및/또는 피브로넥틴의 발현 및/또는 피브로넥틴 리셉터의 합성 증가, 및/또는 엘라스틴의 합성 증가를 위한 조성물의 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기에서 언급한 적어도 어느 하나 이상의 추출물의 세포외부기질의 세포외부 단백질의 소거활성을 저해하기 위한 조성물의 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 상기에서 언급한 적어도 어느 하나 이상의 추출물의 항주름 또는 항노화 효과를 발휘하는 조성물 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 구현예에 따르면, 상기 추출물은 용매 추출법에 의해 제조된다. 이 때, 용매는 극성일수도 아닐 수도 있다. 상기 용매는 바람직하게는 펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 헥산, 페트롤럼 에테르(petroleum ether), 모노클로로메탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 이소프로판올, 프로판올, 에틸 아세테이트, 에탄올, 메탄올, 아세톤, 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 펜틸렌 글리콜, 글리세롤, 물 및 상기 용매들 중 적어도 2개 이상의 혼합물, 특히 하이드로-알콜릭(hydro-alcoholic) 또는 하이드로-글리콜릭(hydro-glycolic) 혼합물로 구성되는 그룹으로부터 선택하는 것이 좋다.
상기 추출물은 정제하는 것이 바람직하다. 상기 추출물들은 주로 수용성 추출(aqueous extraction)에 의해 제조되며, 이 경우 MP 디올(diol) 및 부틸렌 글리콜이 친화력 때문에 사용된다. 콩, 귀리, 완두콩, 밀, 옥수수, 키노아(quinoa) 및 누에콩(pigeon bean) 또는 잠두(horse bean)의 추출물들은 종자로부터 추출되는 반면, 스프링 레스타로우(spring restharrow), 상백피(white mulberry), 유까(yucca), 황금(scutellaria)의 추출물들은 뿌리로부터 추출되며, 마지막으로 토마토, 감자, 망고, 대추야자 열매(date), 키위, 그레이프프루트(grapefruit), 파파야, 파인애플, 시계풀 열매(passion fruit), 사과 및 난장이 야자(dwarf palm)의 추출물들은 열매 또는 말린 씨앗으로부터 추출된다. 누에(silk), 생선알 및 생선은 추출 및 건조된 후 처리된다.
상기 추출물은 부틸렌 글리콜을 포함하는 물, 글리콜, 물과 글리콜의 혼합물 및 특히 부틸렌 글리콜, MP 디올(diol) 및 에탄올로부터 선택되는 용매로 0.01% 내 지 10%(w/w) 사이에서 희석되는 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 하기의 실시예에서 언급하는 자세한 설명에 의하여 당업자에게 분명하게 드러날 것이며, 하기의 실시예는 일례에 불과한 것으로 본 발명의 권리범위를 제한하는 것이 아니다.
하기 실시예들은 본 발명의 필수 구성요소를 이루며, 이를 포함한 본 발명 전체로부터 종래 기술에 대해 신규한 것으로 나타나는 특징 또한 본 발명의 기능 및 보편성에 있어서 본 발명의 필수 구성요소를 이룬다.
따라서 모든 실시예는 일반적인 범위이다.
또한, 모든 실시예에서 다른 특별한 언급이 없는 한 퍼센티지는 무게로, 온도는 섭씨로 표시되며, 압력은 대기압을 나타낸다.
실시예 1: 콩 추출물
콩의 단백질 분획은 그러한 농축(enrichment)을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 콩의 종자로부터 농축한다. 그 후 상기 단백질 분획을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조한다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수(demineralised water) 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 2: 귀리 추출물
귀리(Avena sativa)의 단백질 분획은 그러한 농축(enrichment)을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 귀리의 종자로부터 농축한다. 그 후 상기 단백질 분획을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조한다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수(demineralised water) 550g과 부틸렌 글리콜 400g의 혼합용액에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 3: 난장이 야자열매의 추출물
난장이 야자(Serenoa repens)의 친유성 분획(lipophilic fraction)은 그러한 농축(enrichment)을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 난장이 야자열매로부터 농축된다. 임계탄산(supercritical CO2)에 의한 추출이 바람직하다. 그 결과 얻어진 지질 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 다른 방법에 의해 불용성 분획으로부터 분리한다.
(실시예 3a) : 상기 결과물 10g을 부틸렌 글리콜 990g에 용해시킨다. 1시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로 부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
(실시예 3b) : 상기 결과물 100g을 부틸렌 글리콜 900g에 용해시킨다. 1시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
(실시예 3c) : 상기 결과물 300g을 부틸렌 글리콜 700g에 용해시킨다. 1시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 4: 누에(silk) 추출물
누에(Morus alba) 단백질의 단백질 가수분해물을 통상의 효소적 또는 화학적 가수분해방법에 의해 준비한다. 그 결과 얻어진 단백질 분획을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조한다. 상기 결과물 50g을 탈염수(demineralised water) 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 5: 상백피(white mulberry) 추출물
상백피(Morus alba)의 뿌리를 갈아 증류수에 담근 후 통상적인 공업적 공정에 의해 건조한다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수(demineralised water) 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 6: 스프링 레스타로우(spring restharrow) 추출물
스프링 레스타로우(Ononis spinosa)의 뿌리를 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨 다음 분쇄한다. 그 결과 얻어진 분쇄물 50g을 탈염수(demineralised water) 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 7: 누에콩(pigeon bean) 또는 잠두(horse bean)의 추출물
누에콩(pigeon bean) 또는 잠두(horse bean)의 단백질 분핵을 그러한 농축(enrichment)을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 누에콩의 종자 또는 잠두의 종자로부터 각각 농축한다. 상기 단백질 분핵을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조한다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수(demineralised water) 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 8: 토마토 추출물
토마토(Solanum lycopersicum) 열매를 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨 후 분쇄한다. 그 결과 얻어진 분쇄물 10g을 MP 디올(diol)(2-메틸-1,3-프로판디올) 990g에 용해시킨다. 1시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 9: 생선알(fish roe) 추출물
화이트피쉬(whitefish) 알을 통상적인 수단에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수(demineralised water) 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 10: 완두콩의 단백질 추출물
완두콩(Pisum sativum)의 단백질 분획을 그러한 농축(enrichment)을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 완두콩의 종자로부터 농축한다. 상기 산물 200g을 무수 에탄올 700g과 탈염수 300g의 혼합용액 800g에 용해시킨다; 그 결과 얻어진 가용성 추출물을 통상적인 방법에 의해 건조한 후 그 결과물 30g을 탈염수 970g에 분산시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 11: 생선 분말(fish flour) 추출물
생선 분말 현탁액을 일반적으로 사용되는 물리적 또는 화학적 방법에 의해 화이트피쉬(whitefish)[예를 들어, 수염대구(ling), 대구(cod) 또는 해덕(haddock) 등]으로부터 준비한다. 그 결과 얻어진 분획을 통상적인 공업적 방법에 의해 건조한 후, 그로부터 얻어진 산물 50g을 탈염수 950g에 분산시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 12: 밀싹(wheat germ) 추출물
밀의 싹을 밀(Triticum aestivum) 종자로부터 기계적인 방법으로 분리한 후, 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 분말로 만든다. 상기 분말을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨 후, 그로부터 얻어진 산물 30g을 탈염수 970g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 13: 감자 추출물
감자(Solanum tuberosum)의 단백질 분획을 그러한 농축을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의한 전분 추출과정중에 감자로부터 농축한다. 상기 단백질 분획을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 탈염수 900g에 분산시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 14: 황금(scutellaria) 추출물
황금(Scutellaria baicalensis)의 뿌리를 50-60℃에서 에탄올 용액(ethanolic solution)을 이용하여 추출한다. 통상적인 방법에 의해 불용성 물질을 여과한 후, 상기 에탄올 용액을 다시 통상적인 공업적 공정에 의해 농축하고 건조한다. 그 결과물 10g을 탈염수 990g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 15: 옥수수 추출물
옥수수(Zea mays)의 단백질 분획을 그러한 농축을 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 방법에 의해 옥수수 종자로부터 농축한다. 그 결과 얻어진 단백질 분획을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과물 30g을 탈염수 970g에 분산시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 실시한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 16: 생물공학적으로 변형된 망고(biotechnology-modified mango)의 추출물
망고(Mangifera indica)의 조추출물을 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 망고 열매로부터 제조한다. 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 젖산 발효균(lactic ferment; Lactibacillus plantarum)이 첨가된 탈염수 900g에 용해시킨다. 72시간 동안 발효시킨 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과 (ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 17: 생물공학적으로 변형된 대추야자 열매(date)의 추출물
대추야자 열매(Phoenix dactilifera)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 젖산 발효균(Lactobacillus plantarum)이 첨가된 탈염수 900g에 용해시킨다. 72시간 동안 발효시킨 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 18: 생물공학적으로 변형된 키위의 추출물
키위(Actinidia chinensis)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 젖산 발효균(Lactobacillus plantarum)이 첨가된 탈염수 900g에 용해시킨다. 72시간 동안 발효시킨 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 19: 생물공학적으로 변형된 파파야의 추출물
파파야(Carica papaya)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 맥주 효모 발효균(Saccharomyces cerevisiae)이 첨가된 탈염수 900g에 용해시킨다. 72시간 동안 발효시킨 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 20: 생물공학적으로 변형된 사과의 추출물
사과(Malus pumila)의 조추추룰은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 젖산 발효균(Lactobacillus acidophilus)이 첨가된 탈염수 900g에 용해시킨다. 72시간 동안 발효시킨 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 21: 키노아 종자 분말(quinoa seed flour)의 추출물
키노아(Chenopodium quinoa)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 그 종자로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 수행한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 22: 파슬리 뿌리 추출물
파슬리(Petroselinum sativum) 뿌리를 건조한 후 통상의 공업적 공정에 의해 곱게 분쇄한다. 그 결과물 50g을 탈염수 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 수행한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 23: 파인애플 추출물
파인애플(Ananas comosus)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 50g을 탈염수 950g에 용해시킨다. 18시간 동안 기계적 교반을 수행한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 24: 생물공학적으로 변형된 시계풀 열매(passion fruit)의 추출물
시계풀 열매(passion fruit)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 후 상기 조추출물을 통상적인 공업적 공정에 의해 건조시킨다. 그 결과 얻어진 산물 100g을 젖산 발효균(Lactobacillus plantarum)이 첨가된 탈염수 900g에 용해시킨다. 72시간 동안 발효시킨 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 25: 유까(yucca) 추출물
유까(Yucca schidigera)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 식물의 공중 부분(aerial part)으로부터 제조한다. 그로부터 얻어진 결과물 10g을 부틸렌 글리콜 990g에 용해시킨다. 1시간 동안 기계적 교반을 수행한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 26: 그레이프프루트(grapefruit) 추출물
그레이프프루트(Citrus grandis)의 조추출물은 그러한 추출물의 제조를 가능하게 하는 일반적인 물리적 또는 화학적 공정에 의해 상기 열매로부터 제조한다. 그 결과물을 부틸렌 글리콜 및 물의 혼합용액에 용해시킨다. 1시간 동안 기계적 교반을 수행한 후, 불용성 분획을 여과, 원심분리, 한외여과(ultra-filtration) 또는 이러한 분리를 가능하게 하는 다른 방법에 의해 가용성 분획으로부터 분리한다. 상기 가용성 분획을 본 발명에서 사용한다.
실시예 27: 스크리닝 테스트(Screening test)
TGFb1-L을 활성화시킬 수 있는 물질을 밝히기 위한 스크리닝 테스트를 개발하였다. 간단하게 말하면, 활성화된 TGFb1-L의 퍼센티지를 측정하기 위하여, 활성 TGFb1 면역효소적 테스트(immunoenzymatic test)를 통한 정량(determination)을 실시한다. 상기 실험은 인간 재조합 TGFb1을 대상으로 수행되었다. 40㎕의 1N HCl 용액을, 활성화 없이 4℃에서 18시간 동안 배양된 TGFb1-L의 0.1㎍/mL 용액 200㎕에 첨가한다. 상기 샘플을 균질화하여 주위온도(ambient temperature)에서 10분간 배양한 후, 1.2N NaOH/1M HEPES 용액 40㎕를 첨가함으로써 중화한다.
활성 TGFb1(active TGFb1)의 양은 아래와 같은 ELISA 기술에 의해 측정한다. 이 수치는 방출된 TGFb1(released TGFb1)의 최대량에 해당하며, 산성 pH에서의 이러한 활성화는 화장품학적으로 또는 피부질환적으로 허용될 수 없는 조건에 해당한다.
튜브에서, 테스트 대상인 활성물질 50㎕을 0.1㎍/mL의 TGFb1-L 950㎕에 첨가한다. 상기 샘플을 잘 혼합한 후, 4℃에서 18시간 동안 배양한다. 상기 추출물을 5% 농도가 되도록 물에 첨가하여(5% in water) 스크린 테스트하였다.
활성 TGFb1(active TGFb1)의 정량:
활성 TGFb1은 그 후 인간 활성 TGFb1(human active TGFb1)에 민감하고 특이적인 ELISA 테스트(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)를 이용하여 반응매개(reaction media)에서 정량한다. TGFb1에 결합하는 타입 Ⅱ TGFb1 리셉터(type Ⅱ TGFb1 receptor)를 미리 96-웰 플레이트 위에 고정하였다. 그 다음 표준물질 및 상기 샘플을 상기 웰에 첨가하면, 현존하는 TGFb1은 그것의 고정화된 리셉터에 결합한다. 결합되지 않은 물질들을 여러 번 린스하여 제거한 후, 효소와 짝을 이룬 TGFb1-특이적 폴리클로널 항체를 상기 웰에 첨가한다. 남는 항체를 제거한 후, 상기 효소의 기질을 함유하는 용액을 상기 웰에 첨가한다. 상기 효소에 의해 기질이 변환되면 결과물은 색을 띠게 된다. 상기 효소 반응은 황산용액에 의해 중지시킨다. 상기 색을 띤 결과물의 강도(intensity)는 450nm에서 분광광도법(spectrophotometry)에 의해 측정하며, 시험 샘플에 의해 활성화된 TGFb1의 양에 비례한다.
따라서 표준범위는 측정된 OD 값에 의해 반응매개에서의 활성화된 TGFb1의 pg/mL 농도를 측정할 수 있게 한다.
[TGFb1] = f(OD 샘플 - OD 대조구)
실시예 28: 실시예 1 내지 26에 기재된 추출물을 실시예 27에 따라 스크리닝한 결과:
5% 농도(5% in water)에서 테스트된 가장 우수한 물질들의 리스트는 다음 표 1과 같다.
이름(NAME) LINNEUS NAME 종류(NATURE) 활성화된 TGF
난장이 야자 열매 추출물 (Extract of dwarf palm berries) 세레노아 레펜스 (Serenoa repens) 난장이 야자 열매 3361.1
생선알 추출물(Extract of fish roe) - 생선알 1549.9
콩 추출물(Extract of soya) 글리신 소자 (Glycine soja) 콩 1299.9
누에콩 또는 잠두 추출물(Extract of pigeon bean or horse bean) 비시아 파바 에키나 (Vicia faba equina) 누에콩 또는 잠두 1247.9
토마토 추출물(Extract of tomato) 솔라넘 라이코페르시쿰 (Solanum lycopersicum) 토마토 1169.9
완두콩의 단백질 추출물 (Protein extract of pea) 피섬 사티범 (Pisum Sativum) 완두콩 841.9
생선분말 추출물 (Extract of fish flour) - 생선 738.9
밀싹 추출물 (Extract of wheat germ) 트리티쿰 아에스티범 (Triticum Aestivum) 밀 735.9
망고 추출물/락토바실러스 플란타룸(Extract of mango/lactobacillus plantarum) 만기페라 인디카 (Mangifera indica) 망고 624.9
대추야자 열매 추출물/락토바실러스 플란타룸(Extract of Date/lactobacillus plantarum) 포에닉스 닥틸리페라 (Phoenix dactilifera) 대추야자 열매 568.9
누에 추출물(Extract of Silk) 봄빅스 모리 (Bombyx mori) 누에 563.9
키위 추출물/락토바실러스 카제이 람노서스(Extract of Kiwi/lactobacillus casei rhamnosus) 액티니디아 키넨시스 (Actinidia chinensis) 키위 535.9
감자 추출물(Extract of potato) 솔라넘 투베로섬 (Solanum tuberosum) 감자 498.6
그레이프프루트 추출물 (Extract of grapefruit) 시트러스 파라디시 (Citrus paradisi) 그레이프프루트 (grapefruit) 477.4
파파야 추출물/사카로바이세스 세레비지애(Extract of Papaya/saccaromyces cerevisiae) 리카 파파야 (Carica papaya) 파파야 475.9
파인애플 추출물 아나나스 코모서스 (Ananas comosus) 파인애플 353.9
시계풀 열매/락토바실러스 플란타룸 (Passion fruit/lactobacillus plantarum) 시플로라 에둘리스 (Passiflora edulis) 시계풀 열매(passio fruit) 303.9
귀리 추출물 아베나 사티바 (Avena sativa) 귀리 298.6
황금 추출물(Extract of Ougon) 스큐텔라리아 파이칼렌시스 조르지 (Scutellaria baicalensis georgi) 황금(scutellaria) 297.4
사탕옥수수 추출물 (Extract of sweetcorn) 제아 메이스(Zea mays) 옥수수 296.1
사과/락토바실러스 애시도필러스(Apple/lactobacillus acidophilus) 말루스 푸밀라 (Malus pumila) 사과 237.9
키노아 추출물(Extract of quinoa) 케노포디움 키노아 (Chinopodium quinoa) 키노아(Quinoa) 234.9
스프링 레스타로우 뿌리 추출물(Extract of Spring restharrow root) 오노니스 스피노사 (Ononis spinosa) 스프링 레스타로우 뿌리 (Spring restharrow root) 229.9
파슬리 뿌리 추출물 (Extract of parsley root) 페트로셀리넘 사티범 (Petroselinum sativum) 파슬리 뿌리 184.3
유까 추출물(Extract of Yucca) 유까 쉬디게라 (Yucca schidigera) 유까(Yucca) 171.1
상백피(White mulberry) 모러스 알바 린네 (Morus alba linne) 상백피 뿌리(Mulberry root) 141.1
잠복 TGF(음성 대조구) 0
다음의 실시예에서, 난장이 야자 추출물(extract of dwarf palm)은 실시예 3에서 제조된 것이다.
실시예 29 : 본 발명 생산물의 용량 효과(dose effect): 난장이 야자 추출물
세레노아 레펜스(Serenoa repens) 추출물의 % 활성화된 TGFb1의 평균농도(pg/mL) 표준 편차
0.1 2258.1 9.6
1 1516.3 239.8
3 1174.9 127
5 709.5 17
10 302.6 24.8
실시예 30 : 난장이 야자 추출물의 피브로넥틴(fibronectin) 합성에 대한 영향
피브로넥틴의 합성 연구는 다음의 세 단계를 포함한다: TGFb1-L의 활성화, 활성화된 TGFb1-L의 정상 인간의 단층 진피 섬유아세포(monolayer normal human dermis fibroblast)에서의 배양, 및 상기 배양배지(culture medium)로부터 합성된 피브로넥틴의 정량.
본 실험은 인간의 재조합 TGFb1-L(human recombinant TGFb1-L)을 대상으로 수행하였다. 상기의 TGFb1-L 용액은 8㎍/mL의 농도로 저장한다. TGFb1-L의 활성화를 1㎍/mL에서 테스트하기 위하여, 상기 8㎍/mL의 TGFb1-L을 PBS 1×에서 8번 희석한다. 1㎍/mL의 TGFb1-L 990㎕에 난장이 열매 추출물 10㎕를 첨가한다. 상기 혼합물을 잘 교반한 후, 4℃에서 18시간 동안 배양한다.
그 다음 상기 활성화된 TGFb1 용액을 배양배지(culture medium)에서 FBM 세럼(Promocell-Germany) 없이 10번 희석한다. 실험 대조구는 다음과 같이 준비한다: FBM 대조구 및 TGFb1-L 대조구를 포함하는 2개의 음성 대조구; 및 FBM에서 희석된 10ng/mL과 1ng/mL의 활성 TGFb1 대조구(Sigma-France)를 포함하는 2개의 양성 대조구. 각 용액은 6-웰 플레이트내의 컨플루언트 섬유아세포(confluent fibroblasts)의 단층배지(monolayer culture) 위에 2mL/well의 속도로 떨어뜨린다. 상기 배지를 5%의 CO2를 함유하는 대기 중에서 37℃, 48시간 동안 배양한다. 그런 다음 인간 피브로넥틴(human fibronectin)에 민감하고 특이적인 EIA test(Enzyme Immuno Assay)를 이용하여 상기 배양배지에서 피브로넥틴을 정량한다. 상기 피브로넥틴에 결합하는 피브로넥틴 리셉터(fibronectin receptor)를 96-웰 플레이트에 미리 고정한다. 그 후 표준물질 및 샘플들을 상기 웰에 떨어뜨려서 현존하는 피브로넥틴을 상기 고 정화된 리셉터에 결합시킨다. 결합되지 않은 물질들을 여러 번 린스하여 제거한 후, 효소와 짝을 이룬 피브로넥틴-특이적 폴리클로널 항체를 상기 웰에 첨가한다. 남는 항체를 제거한 후, 상기 효소의 기질을 함유하는 용액을 상기 웰에 떨어뜨린다. 상기 효소 반응은 황산용액에 의해 중지시킨다. 상기 색을 띤 결과물의 강도(intensity)는 450nm에서 분광광도법(spectrophotometry)에 의해 측정하며, 합성된 피브로넥틴의 양에 비례한다. 그 결과는 음성 TGFb1-L 대조구에 대한 퍼센티지로 표현한다. 한편 상기 결과를 관찰하면, 상기 TGFb1-L 대조구는 피브로넥틴의 합성을 촉진하는 것으로 생각할 수 있고, 이것은 섬유아세포(fibroblast)가 상기 TGFb1-L을 활성화하는 능력에 의해 설명될 수 있다. 이러한 매개변수(parameter)는 활성물질에 의해 활성화된 TGFb1-L의 존재하에 상기 세포들에 의해 합성된 피브로넥틴의 양과 TGFb1-L의 존재하에 상기 세포들에 의해 합성된 피브로넥틴의 양을 비교함으로써 제거한다.
평균 촉진율(%) 표준편차
난장이 야자 추출물 21.1 10.6
활성 TGFb1 10ng/mL 30.4 6.9
활성 TGFb1 1ng/mL 12.4 8.7
실시예 31 : 난장이 야자 추출물이 엘라스틴을 코딩하는 유전자의 전사(transcription)에 미치는 용량 효과(dose effect)
엘라스틴을 코딩하는 유전자의 전사에 대한 연구는 다음의 세 단계를 포함한다: TGFb1-L의 활성화, 활성화된 TGFb1-L의 정상 인간의 단층 진피 섬유아세포 (monolayer normal human dermis fibroblast)에서의 배양, 및 RT-PCR(Retro Transcriptase-Polymerase Chain Reaction)에 의한 세포 매트(cell mat)로부터 추출한 RNAs(ribonucleic acids)의 정량.
본 실험은 인간의 재조합 TGFb1-L(human recombinant TGFb1-L)을 대상으로 수행하였다. 상기의 TGFb1-L 용액은 8㎍/mL의 농도로 저장한다. TGFb1-L의 활성화를 1㎍/mL에서 테스트하기 위하여, 상기 8㎍/mL의 TGFb1-L을 PBS 1×에서 8번 희석한다. 튜브에서, 1㎍/mL의 TGFb1-L 1mL를 난장이 야자 추출물에 첨가하되, 0.01%, 0.1%, 1% 및 3% 농도에서 테스팅 가능하도록 난장이 야자 추출물의 부피를 조절한다. 상기 혼합물을 4℃에서 18시간 동안 배양한 후, 상기 활성화된 TGFb1 용액을 배양배지(culture medium)에서 FBM 세럼(Promocell-Germany) 없이 희석한다. 실험 대조구는 다음과 같이 준비한다: FBM 대조구 및 TGFb1-L 대조구를 포함하는 2개의 음성 대조구; 및 FBM에서 희석된 1ng/mL의 활성 TGFb1 대조구(Sigma-France)를 포함하는 1개의 양성 대조구. 각 용액은 24-웰 플레이트내의 컨플루언트 섬유아세포(confluent fibroblasts)의 단층배지(monolayer culture) 위에 1mL/well의 속도로 떨어뜨린다. 상기 배지를 5%의 CO2를 함유하는 대기 중에서 37℃, 24시간 동안 배양한다. 그 다음 배양배지를 제거하고, 상기 세포 매트를 린스하여 총 RNAs를 상기 세포로부터 추출한다. 그 추출은 (+)로 대전된 실리카 컬럼 위에 상기 세포들을 용해(lysing)시킴으로써 수행된다. 따라서 (-)로 대전된 RNA만이 상기 컬럼 위에 남게되며, 이를 96-웰 플레이트에 용출시킨다. 추출된 RNAs의 정량 및 순도는 260/280nm에서 분광광도계에 의해 측정한다. 상기 RNA 용액은 최종 농도를 5ng/mL로 맞춘 다음, 96 PCR 플레이트에 10㎕/well 씩 똑같이 나누어 넣는다. 이 때, 표준물질로 엘라스틴과 housekeeping gene인 액틴을 함께 넣는다. 상기의 RT-PCR 정량은 reference gene인 액틴에 비교하여 엘라스틴 유전자의 RNA 증폭을 가능하게 한다. 이러한 정량은 Quantitech Sybergreen RT-PCR kit (Qiagen-France) 및 상기 증폭된 유전자에 대한 특이적 프라이머를 이용하여 행해진다. 상기 프로그램은 역전사효소의 활성화 단계(50℃, 30분); 역전사효소의 변성 및 중합효소의 활성화 단계(95℃, 15분); 그리고 스트랜드 오프닝(opening of strand)(95℃, 15초), 프라이머 결합(60℃, 30초) 및 중합효소의 작용(72℃, 30초)을 포함하는 50 싸이클로 구성된다. 그로부터 얻어진 결과는 도 1에서 보는 바와 같이 0.01의 형광(fluorescence)에서 읽은 싸이클 횟수(cycle number)에 상응한다.
도 1은 난장이 야자 추출물의 농도에 따른 엘라스틴 유전자의 전사(transcription) 퍼센티지를 나타낸 것이다. 상기 도 1에서 가로축은 테스트된 난장이 야자 추출물의 농도(중량 %)를 나타내며, 세로축은 엘라스틴 유전자의 전사의 중량 퍼센티지를 나타낸다.
각 샘플에 대한 비율은 엘라스틴에 대해 읽은 싸이클 횟수와 액틴에 대해 읽은 싸이클 횟수 간에 계산한다.
0.1%의 난장이 야자 추출물은 엘라스틴의 전사를 2배로 증가시키며, 1%의 난장이 야자 추출물은 약 2.8배, 그리고 3%의 난장이 야자 추출물은 약 3.7배 엘라스틴의 전사를 증가시킨다. 따라서 용량 효과(dose effect)는 다음과 같이 정리할 수 있다: 난장이 야자 추출물의 농도가 증가하면 할수록, 엘라스틴 유전자의 전사도 점점 더 유의적으로 증가한다.
실시예 32 : 난장이 야자 추출물의 콜라겐 합성에 대한 영향
본 실험은 TGFb1-L(그것이 활성화된 것이건 그렇지 않건 간에)이 새로 합성된 단백질에서 3H-프롤린의 결합(incorporation)에 대해 미치는 영향을 평가하기 위해 수행되었다. 콜라겐 합성의 연구는 다음의 세 단계를 포함한다: TGFb1-L의 활성화, 활성화된 또는 활성화되지 않은 TGFb1-L의 정상 인간의 단층 진피 섬유아세포(monolayer normal human dermis fibroblast)에서의 배양, 및 프롤린의 결합과 결합된 방사능(radioactivity incorporated)의 분석.
본 실험은 10ng/mL, 100ng/mL, 및 1000ng/mL 농도의 인간의 재조합 TGFb1-L(human recombinant TGFb1-L)을 대상으로 수행하였다. 튜브에서, 난장이 야자 추출물 10㎕를 각 TGFb1-L 용액 990㎕에 첨가한다. 이를 잘 혼합한 후, 상기 샘플을 4℃에서 18시간 동안 배양한다. 그 다음 활성화된 TGFb1-L 용액을 1% FCS (foetal calf serum)가 들어있는 DMEM 배양배지(Invitrogen-France)에서 1/10th로 희석한다. 실험 대조구는 다음과 같이 준비한다: DMEM 대조구 및 TGFb1-L 대조구를 포함하는 2개의 음성 대조구, 및 20㎍/mL의 비타민 C와 DMEM에서 희석된 10ng/mL의 활성 TGFb1(Sigma-France)를 포함하는 2개의 양성 대조구. 각 용액은 96-웰 플레이트에서 컨플루언트 정상 인간의 진피 섬유아세포(confluent normal human dermis fibroblasts)의 단층배지(monolayer culture)와 접촉되도록 위치시킨다. 상기 배지를 5%의 CO2를 함유하는 대기 중에서 37℃, 72시간 동안 배양한다. 마지막 24시간 동안의 배양은 42Ci/mmol의 라벨 3H-프롤린(label 3H-proline)(Amersham Bioscience-France)의 존재하에 수행한다.
결합된 방사능(radioactivity incorporated)의 분석은 필터에서 수집된 TCA(trichloracetic acid)를 이용한 침전, TCA 및 70°에탄올을 이용한 상기 여과액의 헹굼, 및 액체 신티레이션(liquid scintillation)에서의 계측(counting) 과정으로 행해진다.
난장이 야자 추출물은 침전된 단백질 분획에서 TGFb1-L의 효과를 증가시켰다. 이러한 효과는 특히 100ng/mL 및 1000ng/mL의 TGFb1-L의 경우에 현저하다.
TGFb1-L의 농도(ng/mL) TGFb1-L에 대한 촉진율(%) 표준편차
활성 TGF 10ng/mL - 35.3 9.2
난장이 야자 추출물 1% 100 68.3 14.8
1000 36.5 6.7
실시예 33 : 난장이 야자 추출물은 경피 투여(transcutaneous penetration) 후에도 여전히 TGFb1-L을 활성화함.
상기 경피 투여(transcutaneous penetration)의 연구는 다음의 세 단계를 포함한다: 난장이 야자 추출물의 경피 투여, 상기 투여물에 의한 TGFb1-L의 활성화, 및 활성화된 TGFb1-L의 정량.
경피 투과(transcutaneous permeation) 실험은 프란즈 셀(Franz cell)의 공여부분(donor compartment)과 수여부분(receiver compartment) 사이에 랫트의 피부 생체조직(rat skin biopsy)을 삽입하는 것으로 구성된다. 난장이 야자 추출물의 1g을 상기 랫트의 피부, 즉 PBS 버퍼를 함유하는 수여자(receiver) 부분에 적용시킨다. 대조구 세포는 활성물질없이 준비하였다. 상기 활성물질의 경피 투여 결과는, 상기 난장이 야자 추출물을 함유하는 투과물이 회복되는 시간인 24시간 경과 후에 평가한다. 그 다음 상기 투과물의 TGFb1-L의 활성화 능력을 평가한다. 이를 위하여, 1N HCl 용액 40㎕를 활성물질 없이 4℃에서 18시간 동안 배양된 0.1㎍/mL의 TGFb1-L 용액 200㎕에 첨가한다. 상기 샘플을 균질화하여 주위온도(ambient temperature)에서 10분간 배양한 후, 1.2N NaOH/1M HEPES 용액 40㎕를 첨가함으로써 중화한다.
활성 TGFb1의 양은 상기한 ELISA 기술에 의해 측정한다. 이 수치는 방출된 TGFb1(released TGFb1)의 최대량에 해당하며, 산성 pH에서의 이러한 활성화는 화장품학적으로 또는 피부질환적으로 허용될 수 없는 조건에 해당한다.
튜브에서, 상기 투과물 100㎕를 0.1㎍/mL의 TGFb1-L 900㎕에 첨가한다. 잘 혼합한 후, 그 결과물을 4℃에서 18시간 동안 배양한다. 그 다음 상기 활성 TGFb1을 인간 활성 TGFb1에 민감하고 특이적인 ELISA 테스트(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)를 이용하여 반응매개(reaction media)에서 정량한다. TGFb1에 결합하는 타입 Ⅱ TGFb1 리셉터(type Ⅱ TGFb1 receptor)를 미리 96-웰 플레이트 위에 고정하였다. 그 다음 표준물질 및 상기 샘플을 상기 웰에 첨가하면, 현존 하는 TGFb1은 그것의 고정화된 리셉터에 결합한다. 결합되지 않은 물질들을 여러 번 린스하여 제거한 후, 효소와 짝을 이룬 TGFb1-특이적 폴리클로널 항체를 상기 웰에 첨가한다. 남는 항체를 제거한 후, 상기 효소의 기질을 함유하는 용액을 상기 웰에 첨가한다. 상기 효소에 의해 기질이 변환되면 결과물은 색을 띠게 된다. 상기 효소 반응은 황산용액에 의해 중지시킨다. 상기 색을 띤 결과물의 강도(intensity)는 450nm에서 분광광도법(spectrophotometry)에 의해 측정하며, 시험 샘플에 의해 활성화된 TGFb1의 양에 비례한다.
따라서 표준범위는 측정된 OD 값에 의해 반응매개에서의 활성화된 TGFb1의 pg/mL 농도를 측정할 수 있게 한다.
[TGFb1] = f(OD 샘플 - OD 대조구)
활성화된 TGFb1-L의 평균농도(pg/mL) 표준편차
대조구 세포의 투과 164.4 -
난장이 야자 추출물로 처리된 세포의 투과 1013.8 211
실시예 34 : 본 발명 산물의 수중유형 에멀젼 타입(oil-in-water emulsion type)의 화장품 또는 제약 제제로의 이용
제제 34a:
(A) 물 qsp 100
부틸렌 글리콜 2
글리세린 3
소듐 디하이드록시세틸-
포스페이트 이소프로필
하이드록시세틸 에테르 2
(B) 글리콜 스티레이트 SE 14
트리이소노나오인 5
옥틸 코코에이트 6
(C) 부틸렌 글리콜 2
메틸파라벤
에틸파라벤, 프로필파라벤,
pH 5.5로 조정
(D) 본 발명의 산물 0.01-10%
제제 34b:
(A) 물 qsp 100
부틸렌 글리콜 2
글리세린 3
폴리아크릴아마이드, 이소파라핀, 2.8
라우레드-7
(B) 부틸렌 글리콜 2
메틸파라벤
에틸파라벤, 프로필파라벤;
페녹시에탄올, 2
메틸파라벤,
프로필파라벤, 부틸파라벤,
에틸파라벤
부틸렌 글리콜 0.5
(D) 본 발명의 산물 0.01-10%
제제 34c:
(A) 물 qsp 100
카보머 0.50
프로필렌 글리콜 3
글리세롤 5
(B) 옥틸 코코에이트 5
비사볼롤 0.30
디메티콘 0.30
(C) 소듐 하이드록사이드 1.60
(D) 페녹시에탄올, 0.50
메틸파라벤,
프로필파라벤, 부틸파라벤,
에틸파라벤
(E) 향료(perfume) 0.30
(F) 본 발명의 산물 0.01-10%
실시예 35 : 본 발명 산물의 유중수형 타입(water-in-oil type) 제제로의 이용
(A) PEG 30 디폴리하이드록시스티레이트 3
카프릭 트리글리세라이드 3
세티릴 옥타노에이트 4
디부틸 아디페이트 3
포도씨 오일 1.5
호호바 오일 1.5
페녹시에탄올, 0.5
메틸파라벤,
프로필파라벤, 부틸파라벤,
에틸파라벤
(B) 물 qsp 100
글리세린 3
부틸렌 글리콜 3
마그네슘 설페이트 0.5
EDTA 0.05
(C) 사이클로메티콘 1
디메티콘 1
(D) 향료(perfume) 0.3
(E) 본 발명의 산물 0.01-10%
실시예 36 : 본 발명 산물의 샴푸 또는 샤워젤 타입 제제로의 이용
(A) 물 qsp 100
잔탄 검 0.8
(B) 부틸렌 글리콜, 0.5
메틸파라벤,
에틸파라벤, 프로필파라벤,
페녹시에탄올, 0.5
메틸파라벤,
프로필파라벤, 부틸파라벤,
에틸파라벤
(C) 시트르산 0.8
(D) 소듐 라우레드 설페이트 40.0
(E) 본 발명의 산물 0.01-10%
실시예 37 : 본 발명 산물의 립스틱 타입의 제제 및 다른 무수 제품(anhydrous products)으로의 이용
(A) 미네랄 왁스 17.0
이소스티릴 이소스티레이트 31.5
프로필렌 글리콜 디펠라고네이트 2.6
프로필렌 글리콜 이소스티레이트 1.7
PEG 8 비즈왁스 3.0
하이드로지네이티드 팜 카넬 오일 3.4
글리세라이드,
하이드로지네이티드 팜 글리세라이드
라놀린 오일 3.4
세사메 오일 1.7
세틸 락테이트 1.7
미네랄 오일, 라놀린 알콜 3.0
(B) 카스토르 오일 qsp 100
티타늄 디옥사이드 3.9
CI 15850:1 0.616
CI 45410:1 0.256
CI 19140:1 0.048
CI 77491 2.048
(C) 본 발명의 산물 0.01-5%
실시예 38 : 본 발명 산물의 수용성 젤 제제(aqueous gels formulation: eyeliners, slimmers, etc.)로의 이용
(A) 물 qsp 100
카보머 0.5
부틸렌 글리콜 15
페녹시에탄올, 메틸 파라벤, 0.5
프로필파라벤, 부틸파라벤,
에틸파라벤
(B) 본 발명의 산물 0.01-10%
실시예 39 : 본 발명의 목적물을 함유하는 조제물의 화장품 적합여부 평가
독성 테스트는 0.5% 잔탄 젤(xanthan gel)에 실시예 2에 따라 얻어진 화합물을 10% 농도로 혼합한 후, 토끼에서의 눈자극 평가(ocular evaluation), 쥐에서의 1회 경구투여에 의한 이상 독성의 발생 연구, 그리고 기니피그(guinea pig)에서의 감작성(sensitizing power) 연구에 의해 수행되었다.
토끼에서 피부의 1차 자극 평가
상기에서 제조한 조제물들을 희석하지 않은 채 "the acute irritant/corrosive effect on the skin" 연구와 관련하여 OECD에 의해 권장되는 방법에 따라 3마리 토끼의 피부에 0.5 mL씩 적용하였다.
상기 산물들은 JORF(Official Journal of the French Republic)의 21/02/82에서 발행된 Decision 1/2/1982에서 정한 기준에 따라 분류된다.
상기 테스트 결과, 본 발명의 상기 조제물들은 희석하지 않고 사용하더라도 지침 91/326 EEC의 관점에서 피부에 비자극적인 것으로 판단되었다.
토끼에서의 눈자극 평가
상기에서 제조한 조제물을, "the acute irritant/corrosive effect on the eyes" 연구와 관련하여 1987년 2월 24일자로 공개된 OECD NO. 405의 지침에 의해 권장되는 방법에 따라, 3마리 토끼의 눈에 그 자체로(희석하지 않고) 0.1 mL의 속도로 1회 떨어뜨렸다.
상기 테스트 결과, 상기 조제물들은 희석하지 않고 사용하더라도 지침 91/326 EEC의 관점에서 눈에 비자극적인 것으로 판단되었다.
쥐에서의 1회 경구투여에 의한 이상독성 여부의 발생실험
상기에서 제조한 조제물들을 1987년 2월 24일자로 공개된 OECD NO. 401의 지침에서 권장되는 프로토콜에 따라 5마리의 수컷 쥐와 5마리의 암컷 쥐에게 2g/kg(체중)의 양으로 1회 경구투여하였으며, 화장품에 적용시켰다.
LD0 및 LD50을 측정한 결과, 그 값이 2,000mg/kg 이상으로 관찰되었다. 따라서, 상기의 실험 조제물들은 섭취하더라도 전혀 위험하지 않은 것으로 분류되었다.
기니피그(guinea pig)에서의 피부 감작성 측정
상기에서 제조한 조제물들을 이용하여 OECD의 NO. 406의 지침라인과 일치하는 Magnusson 및 Kligmann의 프로토콜에 따라 감작성 시험(maximization test)을 실시하였다.
그 결과, 상기 조제물들은 피부와의 접촉에 대해 비민감성을 갖는 것으로 분류되었다.
이상 발명의 구성을 통해 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명은 주로 효소적으로 비활성이며, 화장품학적으로, 피부질환적으로, 및/또는 약제학적으로 허용되는 조건하에서 TGFb1과 단백질 LAP(latency associated protein)을 접합시키는 결합을 깨뜨림으로써 TGFb1-L(TGFb1-latent)을 활성 TGFb1(TGFb1)으로 전환하는 천연 추출물을 새로이 밝히고, 상기 천연 활성물질을 포함함으로써 피부, 주로 진피에서 활성 TGFb1의 농도를 증가시키는 조성물, 섬유아세포의 증식을 촉진시키는 조성물, 세포외부기질(extracellular matrix)의 구성요소의 합성을 증가시키며, 세포외부기질의 세포외부 단백질의 소거활성을 저해하는 조성물, 항주름 또는 항노화 효과를 발휘하는 조성물 등을 제공하는 효과가 있으므로 화장품 및 의약 산업상 매우 유용하다.

Claims (12)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 난장이 야자 열매(Serenoa repens)의 부틸렌 글리콜 추출물;
    그레이프프루트(grapefruit)(Citrus paradisi)의 부틸렌 글리콜/물 혼합물 추출물;
    수염대구(ling), 대구(cod) 또는 해덕(haddock)으로부터 선택된 화이트피쉬(whitefish) 알(roe) 또는 분말(flour), 누에콩 또는 잠두(pigeon bean or horse bean)(Vicia fava equina) 단백질, 옥수수 단백질(Zea mays), 밀의 싹(Triticum aestivum), 또는 키노아(quinoa) 종자 분말(Chenopodium quinoa)의 탈이온수 추출물;
    완두콩 단백질(Pisum sativum)의 에탄올/탈이온수 혼합물 추출물; 및
    젖산 발효균이 첨가된 망고 열매(Mangifera indica), 대추야자 열매(date)(Phoenix dactilifera), 키위 열매(Actinidia chinensis) 또는 시계풀 열매(passion fruit)(Passiflora edulis)의 탈이온수 추출물
    로 구성된 군으로부터 선택되는 천연 추출물 또는 이들의 혼합물을 1 종 이상 포함하여 단백질 LAP(latency associated protein)에 TGFb1를 연결시키는 결합을 깨뜨림으로써 잠복 TGFb1-L을 활성 TGFb1 으로 전환시키는 것을 특징으로 하는 항주름 또는 항노화용 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 천연 추출물이 난장이 야자 열매 부틸렌 글리콜 추출물의 친유성 분획물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제5항에 기재된 천연추출물 1종 이상과 화장품학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 항주름 또는 항노화용 화장품 조성물.
  10. 제5항에 기재된 천연추출물 1종 이상과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 항주름 또는 항노화용 국소성 제약 조성물(topical pharmaceutical composition).
  11. 난장이 야자 열매 부틸렌 글리콜 추출물의 친유성 분획물과 화장품학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 항주름 또는 항노화용 화장품 조성물.
  12. 난장이 야자 열매 부틸렌 글리콜 추출물의 친유성 분획물과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 항주름 또는 항노화용 국소성 제약 조성물(topical pharmaceutical composition).
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