KR101920260B1 - 멜라닌 형성 억제제를 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 RP-67580을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 물질 P(Substance P)의 길항제인 RP-67580을 유효성분으로 함유함으로써 우수한 피부 미백 효능을 나타내는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

멜라닌 형성 억제제를 함유하는 피부 외용제 조성물{External composition comprising a melanogenesis inhibitor}

본 발명은 멜라닌 색소의 형성을 억제하는 물질을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 물질 P(Substance P)의 길항제인 RP-67580을 유효성분으로 함유함으로써 우수한 피부 미백 효능을 나타내는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께, 및 카로티노이드, 빌리루빈 등 인체 내외의 색소 함유 유무와 같은 여러 요인들에 의해 결정된다. 특히 멜라노사이트에서 타이로시나제(tyrosinase) 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소가 가장 중요한 요인이다. 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비, 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인이 영향을 미친다. 멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하는 중요한 기능을 하지만 멜라닌이 과잉생산 됨으로써 색소침착 및 피부노화를 촉진하고 피부암 유발에도 주요한 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

기존 피부 미백제는 멜라닌 과다 생성을 억제하는 기작을 통해 미백 효능을 나타내는 것으로서, 주로 자외선 조사 등의 외부적 자극에 따른 멜라닌 합성 억제에 의존하여 알부틴(Arbutin), 코직산(Kojic acid), 비타민 C 등이 사용되어 왔다. 그러나 이러한 미백제는 정신적 스트레스 또는 수면부족, 피로와 같은 내부적 요인으로 인하여 신경전달물질의 분비를 통해 멜라닌 합성이 증가하는 경우에 대해서는 큰 효과를 나타내지 못하는 문제가 있었다.

종래 신경물질의 길항제인 아프레피턴드(Aprepitant)의 아토피, 소양증에 관한 효과에 대하여 보고된 바 있으나, RP-67580의 미백 효과에 대해서는 알려진 바가 없다.

Targeting the Neurokinin Receptor 1 with Aprepitant: A Novel Antipruritic Strategy(Sonja Stander et. al, PLOS one, vol.5, no. 6. pp.10968, 2010)

이에, 본 발명자들은 RP-67580이 자외선 등의 환경적 스트레스, 수면 부족, 피로 및 정신적 스트레스와 같은 내부적 스트레스를 원인으로 하는 멜라닌 생성과 이로 인한 색소 침착을 동시에 저해하며, 매우 우수한 피부 미백 효능을 나타낼 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 RP-67580을 함유하여 외부 및 내부적 원인에 의한 멜라닌 생성을 억제하여 우수한 미백 효능을 나타내는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 RP-67580을 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다. 보다 구체적으로는 RP-67580을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 물질 P(Substance P; SP)로 인해 유발되는 색소 형성을 억제하여, 멜라닌 합성을 저해함으로써 우수한 피부 미백 효능을 나타낸다. 뉴로펩타이드인 물질 P가 관여하는 멜라닌 형성을 억제하기 때문에 피로나 정신적 스트레스와 같은 내부적 스트레스를 요인으로 하는 색소 침착을 저해할 수 있기 때문에, 기존의 외부적 자극에 의한 멜라닌 합성 억제만으로는 달성할 수 없는 우수한 미백 효과를 제공할 수 있다.

도 1은 시험예 1의 각 시료를 처리한 경우의 멜라닌 생성 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 시험예 2의 각 시료를 처리한 경우의 티로시나아제 활성을 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 RP-67580을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 유효성분인 RP-67580은 타키키닌 NK1 수용체의 길항제이며, 물질 P의 길항제로서 작용하고 화합물명은 (3aR,7aR)-옥타히드로-2-[1-이미노-2-(2-메톡시페닐)에틸]-7,7-디페닐-4H-아이소인돌( (3aR,7aR)-Octahydro-2-[1-imino-2-(2-methoxyphenyl)ethyl ]-7,7-diphenyl-4H-isoindol)이며, 하기 화학식 1로 표현되는 화합물이다.

물질 P(substance P)는 11개 아미노산(Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH₂)으로 구성된 포유류의 타키키닌의 하나로서, 최초로, 그리고 가장 많이 연구하가 진행되고 있는 신경펩티드이며, 뇌척수 등 중추신경계뿐만 아니라 장관(腸管)등의 말초에 널리 분포하여 1차 지각 신경에서의 통각의 전달물질로서 알려져 있다. 또 혈압 강하, 평활근의 수축이나 타액분비의 촉진 등 다채로운 생리 작용을 나타내고, 물질 P 수용체(NK₁수용체(Neurokinin 1 receptor))를 매개로 하여 작용을 발휘한다.

본 발명자들은 물질 P가 멜라닌 색소의 형성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 2012년 7월 24일자로 한국생명공학연구원 생명자원센터에 기탁한 세포주인 기탁번호 KCTC 12250BP의 멜라노 블라스트(KaMB)를 이용하였으며, 물질 P에 의하여 상기 멜라노 블라스트가 멜라노사이트로 분화될 때 자극을 받게 되면, 멜라닌의 형성이 더욱 증가하게 됨을 확인하였다.,

본 발명에 따른 유효성분인 RP-67580은 물질 P의 수용체인 타키키닌 NK1 수용체의 길항제로서 물질 P의 작용을 선택적으로 억제하여 물질 P로 인해 유발되는 색소 형성을 억제하여, 멜라닌 합성을 저해하는 작용을 한다.

상기 RP-67580은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~70 중량%로 함유할 수 있다. 상기 함유량이 0.0001중량% 미만인 경우 미백효능이 미미하고, 70중량%를 초과하는 경우 예상치 못한 생리적 부작용이 발생할 가능성을 배제할 수 없다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 물질 P에 의해 유발되는 색소형성을 저해하여 우수한 미백 효능을 나타낸다.

본 발명에 따른 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

또한 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

또한, 본 발명의 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

이하, 시험예 및 제형예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 시험예 및 제형예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.

[참고예 1] 세포 배양 및 시료 처리

본 출원인이 보유중인 멜라노 블라스트(KaMB, 기탁번호 KCTC 12250BP) 세포주를 PMA(포볼-미리스테이트 아세테이트, Phorbol-myristate acetate)가 없는 HMGS-2(인간 멜라노사이트 성장 보충물-2, Human Melanocyte Growth Supplement-2)(Gibco BRL, NY, USA)를 첨가한 M-254 배지(Gibco BRL, NY, USA)에서 2일 간격으로 배지를 교환하며 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.

그 다음, 배양된 멜라노 블라스트를 멜라노사이트로 분화시키기 위하여 6웰 플레이트에 PMA(Phorbol-myristate acetate)가 함유된 HMGS(Human Melanocyte Growth Supplement)(Gibco BRL, NY, USA)가 첨가된 M-254 배지(Gibco BRL, NY, USA)를 넣고, 하기 표 1에 따른 시료 비교예 1~2, 실시예 1~3을 처리한 후, 상기 배양된 세포를 각 웰에서 계대하여 5% CO₂ 배양기에서 36시간 배양하였다.

비교예 1은 아무것도 처리하지 않은 군이며, 비교예 2는 물질 P만을 처리한 군이다. 실시예 1~3에 사용한 RP-67580은 Tocris bioscience(bristol, UK)에서 구입하여 사용하였다.

	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3
물질P	-	1nM	1nM	1nM	1nM
RP-67580	-	-	0.1 μM	1 μM	5 μM

상기와 같이 배양한 세포에 있어서 향후 실험 및 분석을 위하여, 다음과 같이 실행하였다.

6웰 플레이트에서 시료와 함께 배양된 멜라노 블라스트로부터 분화된 멜라노사이트에 Accutase 용액(Millipore, CA, USA) 400㎕를 넣고 1분간 교반을 실시한 후, PMA가 첨가된 M-254 배지 600㎕를 추가하여 총 1㎖의 세포 함유 배지를 수거하였다. 이후 12,000rpm에서 15분간 원심분리 후 상등액을 버리고 침전물에 MCL 용해 버퍼(Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) 20㎕를 넣고 잘 섞은 다음, 다시 12,000rpm에서 15분간 원심분리 후 상등액과 세포 침전물을 따로 분리하였다.

[시험예 1] 단백질량 측정

상기 참고예 1에서 분리된 상등액을 1㎕를 96웰 플레이트에 넣고 증류수를 넣어 최종 용량 25㎕로 만들었다. 이후 BCA Protein Assay Kit (Thermo scientific, IL, USA)를 이용하여 562nm에서 단백질 양을 정량하였다. 정량한 단백질 양은 아래 표 2에 나타내었다.

(㎍/㎕)	단백질 양(평균)
비교예 1	4.0380269
비교예 2	4.1321536
실시예 1	4.2419209
실시예 2	3.8525218
실시예 3	3.2850798

[시험예 2] 멜라닌 생성 평가

상기 참고예 1에서 분리된 세포 침전물에 1N NaOH (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) 70㎕를 넣고 55℃에서 15분간 용해시킨 후, 96웰 플레이트에 30㎕씩 2개로 분주하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 정량한 단백질 양을 이용하여 하기 수학식 1에 따라 멜라닌의 양을 산출하여 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1의 결과에서, 비교예 1에 비해 물질 P를 처리한 경우 멜라닌 양이 증가한 것을 확인할 수 있으며, 본 발명에 따른 실시예 1~3을 처리한 경우 멜라닌 생성이 매우 감소한 것을 알 수 있어, 본 발명에 따른 RP-67580이 현저하게 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를 나타냄을 알 수 있다.

[시험예 3] 티로시나아제 활성 평가

상기 시험예 1에서 정량된 단백질 양을 근거로 상기 참고예 1에서 분리된 각시료군의 세포 상등액 중 20㎍의 단백질을 96웰 플레이트에 넣고 PBS(Phosphate Buffered Saline, without CaCl & MgCl, Welgene, Korea)로 최종 용량 100㎕를 만들었다. 이후 2㎎/㎖의 농도로 PBS에 녹인 L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) solution 100㎕를 추가로 넣고 37℃에서 배양하면서, 10분 간격으로 475nm에서 흡광도를 총 1시간(6회)을 측정하고, 그 중 반응성이 가장 좋은 20분째(2회째) 흡광도를 결과로 적용하였다. 이때 최종값은 비교예 1의 값을 100이라 할 때의 각 실험군의 흡광도를 %로 나타내어 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2의 결과에서, 본 발명에 따른 RP-67580을 처리한 실시예 1~3의 경우 티로시나아제 활성이 현저하게 감소한 것을 알 수 있어, 미백 효과가 현저하게 뛰어난 것을 알 수 있다.

한국생명공학연구원 KCTC12250BP 20120724

Claims (4)

1. 하기 화학식 1로 표현되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부 외용제 조성물.
   [화학식 1]
   

   
2. 제1항에 있어서,
   상기 화합물은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~70중량%로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 화합물은 물질 P(Substance P)를 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 화합물은 멜라닌 합성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.

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