CN107072933B - 包含宽叶蔓豆油的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种包含作为活性成分的宽叶蔓豆油的组合物，特别涉及具有抗氧化、抗老化、抗皱纹、美白、抗炎症、抗痤疮、保湿、特应性缓解、皮肤屏障改进等用途的组合物。
Description
技术领域
本发明涉及包含作为活性成分的宽叶蔓豆油(Glycine gracilis oil)的组合物，具体涉及一种用于抗氧化、抗老化、抗皱、皮肤美白、抗炎症、抗痤疮、皮肤保湿、特应性缓解、皮肤屏障改善等的组合物。
背景技术
由于各种内在和外在因素，人类皮肤经历老化的变化。内在地，调节代谢的各种激素的分泌减少，免疫细胞的功能和活性下降。结果，免疫蛋白和组成蛋白的生物合成降低。外在地，由于臭氧层的破坏和环境污染加重，到达地球表面的紫外光的量增加，从而自由基、活性氧物质等增加。结果，发生各种变化，包括皮肤厚度减少，皱纹增加，皮肤弹性降低等。
随着老化的进行，皮肤经历构成皮肤的物质(例如胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸和糖蛋白)的含量和排列的改变和降低，并且氧化应激由自由基和活性氧物质引起。此外，已知老化或紫外光增加环氧合酶-2(COX-2)的生物合成，其是产生已知在大多数构成皮肤的细胞中引起炎症的促炎细胞因子的酶；基质金属蛋白酶(MMP)的生物合成，其是降解皮肤组织的酶和通过诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生一氧化氮(NO)。也就是说，随着由于细胞活性降低和具有天然内在老化的微炎症导致的底物材料的生物合成降低，以及由于外部因素例如由各种有害环境引起的增加的应激和活性氧物质的增加导致的底物材料降解的加速，会发生包括皮肤的破坏和变薄的许多皮肤老化的症状。
已知由于各种物理化学和环境因素(包括酶反应、还原代谢、化学品、污染物、光化学反应等)产生的活性氧物质通过非选择性和不可逆地破坏细胞组分如脂质、蛋白质、糖、DNA等而引起细胞衰老和包括癌症的各种疾病。此外，包括通过这些活性氧物质的脂质过氧化作用产生的脂质过氧化物的各种过氧化物通过对细胞的氧化损伤诱导功能障碍而引起各种疾病。因此，抗氧化剂，例如可以清除自由基(自由基清除剂)的化合物，或可抑制过氧化物产生的物质被作为预防或治疗由氧化物引起的老化和各种疾病的候选物。
在韩国专利公开No.10-2001-0054290中描述了现有技术。
发明内容
技术问题
一方面，本发明涉及提供一种包含宽叶蔓豆油的组合物，用于各种应用。
技术方案
一方面，本发明提供一种包含作为活性成分的宽叶蔓豆油的组合物。
具体实施例1：一种用于抗氧化的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。
具体实施例2：一种用于抗老化的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。
具体实施例3：根据具体实施例1至3中任一个的组合物，其中，该组合物延缓或改善老化。
具体实施例4：根据具体实施例1至3中任一个的组合物，其中，该组合物抑制或阻止胶原酶的产生或抑制胶原酶的表达。
具体实施例5：根据具体实施例1至3中任一个的组合物，其中，该组合物改善或减轻皱纹。
具体实施例6：一种用于美白皮肤的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。
具体实施例7：根据具体实施例6的组合物，其中，该组合物抑制或阻止黑色素的产生或抑制黑色素的表达。
具体实施例8：用于抗炎症的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。
具体实施例9：根据具体实施例8的组合物，其中，所述炎症为痤疮。
具体实施例10：根据具体实施例8或9的组合物，其中，所述组合物抑制或阻止单核细胞趋化蛋白(MCP)的产生和表达。
具体实施例11：用于皮肤保湿的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。
具体实施例12：根据具体实施例11的组合物，其中，所述组合物治疗、预防或改善特应性或银屑病。
具体实施例13：根据具体实施例11或12的组合物，其中，所述组合物增强皮肤屏障。
具体实施例14：根据具体实施例1至13中任一项的组合物，其中，所述组合物包含0.001-10wt％的宽叶蔓豆油。
具体实施例15：根据具体实施例1至14中任一项的组合物，其中，所述组合物为化妆品组合物。
具体实施例16：根据具体实施例1至15中任一项的组合物，其中，所述组合物为用于皮肤外用的组合物。
具体实施例17：根据具体实施例1至16中任一项的组合物，其中，所述组合物为药物组合物。
具体实施例18：根据具体实施例1至17中任一项的组合物，其中，所述组合物为保健食品组合物。
有益效果
根据本发明的典型实施例的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油，其对抗氧化、抗老化、抗皱、皮肤美白、抗炎症、抗痤疮、皮肤保湿、特应性缓解、皮肤屏障改善等有效。这些效果优于已知具有相应效果的市售单独物质的效果，甚至优于其他豆油的效果。此外，根据本发明的典型实施例的组合物，其包含作为活性成分的从天然植物获得的油，可用于化妆品和医用领域，因为它具有很少的副作用，且即使长时间使用也很难产生抗药性。
附图说明
图1展示了宽叶蔓豆油的HPLC分析；
图2展示了大豆油的HPLC分析；
图3展示了宽叶蔓豆提取物的HPLC分析。
具体实施方式
在本发明中，“宽叶蔓豆(Glycine gracilis)”也称为扁豆。本发明的宽叶蔓豆具有不像大豆的椭圆形、扁平和长的形状。如果在暑天(dog days)之前种植，宽叶蔓豆会生长得像葡萄藤那么长。但如果在暑天后种植，则植株矮小且结满豆。宽叶蔓豆的叶子相对窄小，花为蓝色。宽叶蔓豆作为芽苗生长，因为它生长快，头部是椭圆形、小、柔软且美味。
在本发明中，“宽叶蔓豆油”不受限制，只要其通过本领域已知的方法获得即可。具体而言，可以是通过用液压油压机提取宽叶蔓豆来获得的任何油，或者通过经由滤纸过滤所述油而获得的油，但是不限于此。
在一个方面，本发明涉及用于抗氧化的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。在本发明中，“抗氧化”是指延缓、阻止或预防本领域已知的氧化过程而没有限制的效果。
另一方面，本发明涉及用于抗老化的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。在本发明中，“抗老化”指的是延缓、阻止或预防本领域已知的老化过程的效果。具体而言，可以是指有效地抑制胶原酶的表达，从而通过降低皮肤中的胶原蛋白的降解来增强皮肤弹性和减轻皱纹的效果，但不限于此。
根据本发明的一方面，该组合物可以延缓或改善老化。
根据本发明的一方面，所述组合物可以抑制或阻止胶原酶的产生或抑制胶原酶的表达。
根据本发明的一方面，所述组合物可以改善或缓解皱纹。
另一方面，本发明涉及用于皮肤美白的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。该组合物可通过抑制黑色素的产生或抑制参与黑色素产生的基因的表达而提供优异的皮肤美白效果。
另一方面，本发明涉及用于抗炎症的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。在本发明中，“抗炎症”是指任何种类的抑制或阻止炎症的活性。根据本发明的一方面，炎症包括身体(包括皮肤)中的各种类型的炎症。具体地，炎症可以是痤疮，但不限于此。
根据本发明的一方面，该组合物可以抑制单核细胞趋化蛋白(MCP)的产生或抑制或阻止涉及其产生的基因的表达。
另一方面，本发明涉及用于皮肤保湿的组合物，其包含作为活性成分的宽叶蔓豆油。本发明的所述组合物可以改善皮肤屏障功能并诱导皮肤角质形成细胞的分化。因此，它可以有效地用于预防或改善由表皮的不完全分化引起的干皮病、银屑病等。
在该方面，所述组合物可以治疗、预防或改善特应性或银屑病。一方面，组合物还可以增强皮肤屏障。
根据本发明的一方面，所述组合物可以包含的宽叶蔓豆油的含量为：0.001wt％或以上、0.002wt％或以上、0.003wt％或以上、0.004wt％或以上、0.005wt％或以上、0.006wt％或以上、0.007wt％或以上、0.008wt％或以上、0.009wt％或以上、0.01wt％或以上、0.02wt％或以上、0.03wt％或以上、0.04wt％或以上、0.05wt％或以上、0.06wt％或以上、0.07wt％或以上、0.08wt％或以上、0.09wt％或以上、或0.1wt％或以上且6wt％或以下、7wt％或以下、8wt％或以下、9wt％或以下、10wt％或以下、35wt％或以下、36wt％或以下、37wt％或以下、38wt％或以下、39wt％或以下、40wt％或以下，例如0.001-10wt％、0.001-10wt％、0.005-9wt％、0.01-8wt％、0.05-7wt％或0.1-6wt％。当宽叶蔓豆油的量小于上述范围时，上述效果可能不明显。并且，当该量大于上述范围时，其它成分的含量可能受影响而效果不明显增加。
根据本发明的一方面，组合物可以是化妆品组合物。
当将根据本发明的化妆品组合物配制为化妆品时，其可以制备成柔肤水、收敛水、滋养乳液、眼霜、滋养霜、按摩霜、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、散粉、精华、粉饼等，但不特别限于此。根据本发明的组合物可以包含通常用于化妆品或皮肤病领域的助剂，例如脂肪、有机溶剂、增溶剂、增稠剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、填充剂、多价螯合剂(sequestrant)、螯合剂、防腐剂、维生素、阻滞剂、润湿剂、精油、染料、颜料、亲水性或亲脂性活化剂、脂质囊泡或通常用于化妆品中的其它成分。助剂以通常用于化妆品或皮肤病领域的量包含。本公开的组合物还可以含有促进皮肤吸收的物质，以便增加改善皮肤的效果。
根据本发明的一方面，组合物可以是用于皮肤外用的组合物。
本发明的所述组合物可以是用于皮肤外用的组合物。更具体地，可以用作用于抗氧化的皮肤外用组合物。它可以通过抑制有机基团DPPH的氧化，提供优越的抗氧化效果。此外，本发明的组合物可以用作用于抗老化的皮肤外用组合物。它通过有效抑制皮肤中胶原酶的表达，表现出优越的提高皮肤弹性及改善皱纹的抗老化效果，从而减少皮肤中胶原蛋白的降解。此外，本发明的组合物可以用作用于皮肤美白的皮肤外用组合物。它可以通过抑制黑色素的产生提供优越的皮肤美白效果。此外，本发明的组合物可以用作用于皮肤保持的皮肤外用组合物。它可以增强皮肤屏障功能，并诱导皮肤角质形成细胞的分化。因此，它可以用于预防和改善由于表皮的不完全分化引起的干皮病、银屑病等。
当将本发明的用于皮肤外用的组合物制成化妆品时，其可以制备成柔肤水、收敛水、滋养乳液、眼霜、滋养霜、按摩霜、清洁霜、清洁泡沫、清洁水、散粉、精华、粉饼等，但不特别限于此。根据本发明的组合物可以包含通常用于化妆品或皮肤病领域的助剂，例如脂肪、有机溶剂、增溶剂、增稠剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂、芳香剂、表面活性剂、水、离子或非离子乳化剂、填充剂、多价螯合剂、螯合剂、防腐剂、维生素、阻滞剂、润湿剂、精油、染料、颜料、亲水性或亲脂性活化剂、脂质囊泡或通常用于化妆品中的其它成分。助剂以通常用于化妆品或皮肤病领域的量包含。本公开的组合物还可以含有促进皮肤吸收的物质，以便增加改善皮肤的效果。
根据本发明的一方面，所述组合物可以是药物组合物。
当本发明的组合物用作药物组合物时，该组合物可以通过添加常用的有机或无机载体制备成用于口服或肠胃外给药的固体、半固体、或液体制剂。
用于口服给药的制剂可以包括片剂、丸剂、颗粒剂、硬/软胶囊、粉剂、细颗粒剂、散剂、乳剂、糖浆剂、丸剂等。并且，用于胃肠外给药的制剂可以包括注射剂、药用滴剂、软膏剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、乳剂、栓剂等。制剂可以根据已知方法利用表面活性剂、赋形剂、着色剂、香料、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂或其它常用的助剂容易地制备。
根据本发明的药物组合物可以口服、直肠、局部、经皮、静脉内、肌内、腹膜内、皮下等给药。
活性成分的给药剂量将根据要治疗的受试者的年龄、性别和体重、待治疗的具体疾病或病理状况、疾病或病理状况的严重性、给药途径和诊断者的判断而变化。基于这些因素确定给药剂量在本领域技术人员的水平内。一般来说，给药剂量为0.001-2000mg/kg/天，更具体地为0.5-1500mg/kg/天。
根据本发明的一方面，所述组合物可以是保健食品组合物。本发明提供各种形式的食品添加剂或功能性食品。该组合物可以制备成发酵乳、奶酪、酸奶、果汁、益生菌、保健食品补充剂和各种类型的其他食品添加剂。
在一个典型实施例中，该组合物可以包含其他成分，这些成分以不会负面影响本发明所需的主要效果的量提供协同效果。例如，它可以包含添加剂如香料、颜料、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、矿物质、乳化剂、合成聚合物等，以改善物理性能。此外，它还可以包含辅助成分，例如水溶性维生素、油溶性维生素、多肽、多糖、海藻提取物等。根据剂型或目的，本领域技术人员可以不困难地选择这些成分。在不会负面影响本发明的目的和效果的范围内可选择添加量。例如，添加量可以是基于组合物的总重量的0.01-5wt％，更优选0.01-3wt％。
根据本发明的组合物可以制备成各种剂型，包括溶液、乳液、粘性混合物、片剂、粉末等，并且可以通过各种方法给药，包括简单饮用、注射、喷雾、挤压等。
一方面，本发明可以提供用于抗氧化的方法，其包括对受试者施用有效量的包含宽叶蔓豆的组合物。例如，该方法可以包括将组合物施用至受试者的皮肤。
另一方面，本发明提供一种用于抗老化的方法，其包括对受试者施用有效量的包含宽叶蔓豆的组合物。例如，该方法可以包括将组合物施用至受试者的皮肤。
用于抗老化的方法可以延缓或改善老化。例如，它可以延缓或改善老化。该方法可以抑制或阻止胶原酶的产生或抑制胶原酶的表达。该方法可以改善或减轻皱纹。
另一方面，本发明可以提供一种用于皮肤美白的方法，其包括对受试者施用有效量的包含宽叶蔓豆的组合物。例如，该方法可以包括将组合物施用至受试者的皮肤。
用于皮肤美白的方法可以表现出皮肤美白效果，并可以抑制或阻止黑色素的产生或抑制黑色素的表达。
另一方面，本发明可以提供一种用于皮肤抗炎症的方法，其包括对受试者施用有效量的包含宽叶蔓豆的组合物。例如，该方法可以包括将组合物施用至受试者的皮肤。
用于皮肤抗炎症的方法可以抑制或阻止单核细胞趋化蛋白(MCP)的产生或表达。炎症包括痤疮。
另一方面，本发明可以提供用于皮肤美白的方法，其包括对受试者施用有效量的包含宽叶蔓豆的组合物。例如，该方法可以包括将组合物施用至受试者的皮肤。该方法可以增强皮肤屏障，并可以治疗、预防或减轻特应性或银屑病。
一方面，本发明可以提供用于受试者的抗氧化的宽叶蔓豆油。例如，可以将宽叶蔓豆油施加至受试者的皮肤。
一方面，本发明可以提供用于受试者的皮肤抗老化的宽叶蔓豆油。例如，可以将宽叶蔓豆油施加至受试者的皮肤。
宽叶蔓豆油可以延缓或改善老化。例如，它可以延缓或改善皮肤老化。宽叶蔓豆油可以抑制或阻止胶原酶的产生或抑制胶原酶的表达。此外，它可以改善或减轻皱纹。
一方面，本发明可以提供用于受试者的皮肤美白的宽叶蔓豆油。例如，可以将宽叶蔓豆油施加至受试者的皮肤。
宽叶蔓豆油可以表现出皮肤美白效果，并且可以抑制或阻止黑色素的产生或抑制黑色素的表达。
一方面，本发明可以提供用于防止、抑制或减轻受试者炎症的宽叶蔓豆油。例如，可以将宽叶蔓豆油施加至受试者的皮肤。
宽叶蔓豆油可以抑制或阻止单核细胞趋化蛋白(MCP)的产生。
一方面，本发明可以提供用于受试者的皮肤保湿的宽叶蔓豆油。例如，可以将宽叶蔓豆油施加至受试者的皮肤。
宽叶蔓豆油可以增强皮肤屏障，并且可以治疗、预防或改善特应性或银屑病。
下面将通过实施例详细描述本发明。但是，以下实施例仅用于说明目的，且本发明的范围不限于实施例。
实施例宽叶蔓豆油的制备
用纯净水洗涤宽叶蔓豆，干燥并细碎研磨。通过用液压油压机提取1kg所得的宽叶蔓豆粉末，然后通过滤纸过滤，获得宽叶蔓豆油。结果，获得155g的宽叶蔓豆油。
对比实施例1大豆油的制备
用纯净水洗涤大豆(Glycine max)，干燥并细碎研磨。通过用液压油压机提取1kg所得的大豆粉末，然后通过滤纸过滤，获得大豆油。结果，获得185g的大豆油。
对比实施例2宽叶蔓豆提取物的制备
用纯净水洗涤宽叶蔓豆，干燥并细碎研磨。将100g的所得宽叶蔓豆粉末添加至1L70％的乙醇水溶液中，通过在装备有冷凝器的提取器中煮沸12小时来提取，然后通过300目滤布进行过滤。将得到的滤液在4-15℃下老化7天，然后通过Whatman滤纸No.2过滤。使用装备有冷凝器的蒸馏装置在减压下浓缩所得滤液，在50℃减压浓缩，然后干燥，得到宽叶蔓豆提取物(干重15.18g)。
测试实施例1成分比较
将实施例中制备的宽叶蔓豆油，对比实施例1制备的大豆油和对比实施例2制备的宽叶蔓豆提取物的成分进行分析。通过将每种油或提取物溶于20％的氯甲烷和70％的乙醇，来制备成10,000ppm的溶液，并通过HPLC(Waters，型号2695,2996PDA检测器)分析成分。使用Kanto Chemical的Mightysil RP-18GP 250-4.6(5μm)柱作为固定相。用于在实施例中制备的宽叶蔓豆油的流动相和在对比实施例1中制备的大豆油的流动相如表1所示，并且对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物的流动相如表2所示。
表1
| 时间 | A:甲醇 | B:乙腈 |
| 等强度 | 20％ | 80％ |
表2
从图1-3中可以看出，(图1：实施例中制备的宽叶蔓豆油，图2：对比实施例1中制备的大豆油；图3：对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物)，宽叶蔓豆油是本发明的活性成分，显示出与大豆油和宽叶蔓豆提取物的峰位置和强度的明显差异。
测试实施例2抗氧化效果的评价
使用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)方法研究实施例中制备的宽叶蔓豆油的抗氧化效果。DPPH法通过基于由DPPH还原引起的吸光度变化来测量和比较抑制DPPH氧化的效果来评价抗氧化效果。测定实施例中制备的宽叶蔓豆油与对照组相比由于DPPH氧化的抑制导致的吸光度的降低，并记录与对照组相比吸光度降低至50％或以下的浓度。
作为阳性对照，使用合成抗氧化剂水溶性维生素E(Trolox)，对比实施例1中制备的大豆油和对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物。通过将190μL的100μM DPPH溶液(在乙醇中)与10μL实施例中制备的宽叶蔓豆油和阳性对照混合来制备反应溶液。在37℃孵育30分钟后，在540nm测量吸光度。
分析结果示于表3中，其中IC50表示由于添加的样品吸光度降低50％时的样品浓度。
表3
| 物质 | IC<sub>50</sub>(ppm) |
| 宽叶蔓豆油 | 62 |
| 水溶性维生素E | 57 |
| 大豆油 | 350 |
| 宽叶蔓豆提取物 | 71 |
从表3可以看出，本发明的宽叶蔓豆油显示出类似于作为市售抗氧化剂的水溶性维生素E(Trolox)的抗氧化效果。该效果明显优于大豆油的效果。
测试实施例3胶原酶表达抑制效果的比较
将实施例中制备的宽叶蔓豆油的胶原酶产生抑制效果与作为阳性对照的生育酚、EGCG、对比实施例1中制备的大豆油和对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物的效果进行比较。已知生育酚和EGCG通过再生表皮细胞来防止皮肤老化。
将人成纤维细胞加入含有补充有2.5wt％胎牛血清的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)的96孔微量滴定板中，每孔5,000个细胞，培养至约90％融合。然后，在无血清DMEM中培养24小时，并用100μL/mL的宽叶蔓豆油，10-4M生育酚，10-4M EGCG，100μL/mL的大豆油和100μL/mL的宽叶蔓豆提取物处理24小时之后，收获细胞培养物。
使用胶原酶测量系统(Amersham Pharmacia，USA)测量细胞培养物中的胶原酶的产生。首先，将收获的细胞培养物加入到具有均匀施加有原胶原酶抗体的96孔板中，并在恒温浴中孵育3小时。3小时后，向96孔板中加入生色团缀合的第二胶原蛋白抗体后，孵育15分钟。15分钟后，加入诱导显色的物质，在室温下诱导显色15分钟。当加入1M硫酸以阻止反应(显色)时，反应溶液显示黄色。黄色的强度根据反应的进行程度而变化。
使用分光光度计在405nm处测量呈现黄色的96孔板的吸光度，并使用等式1计算胶原酶合成的程度。将未经该组合物处理而获得的细胞培养物用作对照组。也就是说，相对于未处理组的胶原酶的表达水平100，计算用测试物质处理的组中胶原酶的表达水平，结果示于表4中。
等式1
胶原酶表达水平(％)＝用测试物质处理的组的吸光度/对照组的吸光度×100
表4
| 物质 | 胶原酶的表达水平(％) |
| 未处理组 | 100 |
| 生育酚 | 81 |
| EGCG | 59 |
| 宽叶蔓豆油 | 64 |
| 大豆油 | 87 |
| 宽叶蔓豆提取物 | 71 |
较低的胶原酶表达水平意味着较高的胶原酶表达抑制作用，这会由于皮肤中胶原蛋白的降解减少而减少皱纹。
从表4可以看出，作为本发明的活性成分的宽叶蔓豆油在体外有效抑制胶原酶表达。其抑制胶原酶表达的能力甚至比已知作为抗氧化剂的生育酚的能力更好。具体地，与大豆油相比，作为本发明的活性成分的宽叶蔓豆油表现出更高的胶原酶表达抑制效果。因此，可以看出，根据本发明的宽叶蔓豆油可以通过有效地抑制胶原酶表达来减少皮肤中胶原蛋白的降解，因此显示出优异的抗老化和抗皱纹效果。
测试实施例4皮肤美白效果的评价
将实施例中制备的宽叶蔓豆油的黑色素生成抑制效果与作为阳性对照的氢醌、对比实施例1中制备的大豆油和对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物的效果进行比较。
将来自C57BL/6小鼠的黑素细胞(Mel-Ab细胞)(Dooley，TP等人，Skin Pharmacol，7，pp.188-200)在补充有10％胎牛血清，100nM 12-O-十四酰基佛波-13-乙酸盐和1nM霍乱毒素的DMEM中，在37℃和5％CO2的条件下培养。用0.25％胰蛋白酶-EDTA分离培养的Mel-Ab细胞，并在24孔板中以105个细胞/孔的浓度培养。在培养期间，从第2天开始连续3天加入每种测试物质。氢醌、大豆油、宽叶蔓豆提取物和实施例的宽叶蔓豆油的浓度为10ppm。除去培养基后，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞并用1N氢氧化钠溶解。在测量400nm处的吸光度之后，根据等式2计算黑色素生成抑制率。结果示于表5(Dooley's法)中。
等式2
黑色素生成抑制率(％)＝100-(用测试物质处理的组的吸光度/对照组的吸光度×100)
表5
| 物质 | 黑色素生成抑制率(％) |
| 未处理组 | 0 |
| 氢醌 | 57.5 |
| 宽叶蔓豆油 | 46.3 |
| 大豆油 | 83.9 |
| 宽叶蔓豆提取物 | 53.9 |
如表5所示，与抑制为皮肤美白物质的氢醌相比，作为本发明的活性成分的宽叶蔓豆油表现出更好的黑色素生成抑制率。具体地，与大豆油和宽叶蔓豆提取物相比，它表现出比更好的黑色素生成抑制率。因此，可以看出，根据本发明的宽叶蔓豆油通过有效抑制皮肤中的黑色素产生而显示出优异的皮肤美白效果。
测试实施例5抗炎症效果的评价
在测试前一天，将正常人皮肤角质形成细胞(NHEK，Lonza)以5×104个细胞/孔加入96孔板中，并在5％CO2孵化器中在37℃下培养24小时。24小时后，用PBS洗涤细胞两次，并用无血清角质形成细胞基底培养基(KBM)替换细胞培养基。
然后，用氢化可的松、作为阳性对照的对比实施例1中制备的大豆油和对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物、以及实施例中制备的宽叶蔓豆油以表4中的浓度分别培养细胞30分钟，然后每孔用10μM视黄酸处理。已知视黄酸作为皮肤刺激物促进炎症细胞因子MCP(单核细胞趋化蛋白-1)的分泌。在5％CO2孵化器中在37℃培养24小时后，进行MCP-1ELISA。结果示于表6。对于ELISA，使用由BD Science提供的方法。
表6
| 物质 | MCP-1分泌(pg/mL) |
| 未处理组(阴性对照) | 527.3 |
| 视黄酸(10μM) | 804.5 |
| 氢化可的松(100nM)+视黄酸(10μM) | 448.3 |
| 大豆油(100ppm)+视黄酸(10μM) | 795.3 |
| 宽叶蔓豆提取物(100ppm)+视黄酸(10μM) | 683.5 |
| 宽叶蔓豆油(100ppm)+视黄酸(10μM) | 535.8 |
从表6可以看出，作为本发明的活性成分的宽叶蔓豆油显着降低了由视黄酸增加的MCP-1的分泌。该结果与可市售的作为抗炎物质的氢化可的松的结果相当，并且显着优于宽叶蔓豆提取物和大豆油。因此，可以看出，作为本发明的活性成分的宽叶蔓豆油具有优异的抗炎症效果。
测试实施例6皮肤保湿效果的评价
通过测量吸光度来研究实施例制备的宽叶蔓豆油的皮肤屏障功能和皮肤保湿效果。
将原代培养的人角质形成细胞置于培养烧瓶中并使其粘附于烧瓶底部。然后，分别添加50mg/mL和100mg/mL的对比实施例1中制备的大豆油，添加50mg/mL和100mg/mL的对比实施例2中制备的宽叶蔓豆提取物，和添加50mg/mL和100mg/mL的实施例中制备的宽叶蔓豆油之后，细胞培养5天，直到细胞达到约80-90％的融合。收获细胞并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤。加入1mL含有2％十二烷基硫酸钠(SDS)和20mM二硫苏糖醇(DTT)的10mM Tris-HCl缓冲液(pH7.4)后，将细胞超声处理3分钟，然后煮沸10分钟。在1200rpm离心30分钟后，将分离的沉淀重悬于1mL PBS中，并在340nm测量吸光度。
另外，对超声处理后的溶液的一部分进行取样，测定其蛋白质含量，作为细胞分化评价的参考。用低浓度钙(0.03mM)处理的组和用高浓度钙(1.2mM)处理的组分别用作阴性对照组和阳性对照组。将测试物质添加到低浓度钙中进行的试验结果示于表7。
表7
从表7可以看出，当通过测量在角质形成细胞分化期间产生的角化包膜(CE)的量来比较促进细胞分化的效果时，根据本发明的宽叶蔓豆油促进角质形成细胞的分化。具体地，促进角质形成细胞的分化的效果显着高于宽叶蔓豆提取物或大豆油的效果。因此，可以看出，根据本发明的宽叶蔓豆油可以增强皮肤屏障功能并增强皮肤保湿。
测试实施例7皮肤刺激的评价
通过15个对皮肤刺激过敏(例如刺痛、潮红等)的小组，测试作为已知的皮肤美白物质的曲酸和在本发明中用作活性成分的宽叶蔓豆油的相对刺激性。
要求小组随机在两侧脸颊上施用0.5mL的曲酸(购自YM Chemical)或实施例中制备的宽叶蔓豆油，并以0.1点间隔在0和3.0点之间评分。结果示于表8。
表8
| 曲酸 | 宽叶蔓豆油 | |
| 刺痛感 | 0.81 | 0.19 |
| 潮红 | 0.43 | 0.17 |
| 平均值 | 0.62 | 0.18 |
<评分标准>
0-0.4：无刺激。
0.5-1.0：轻微刺激。
1.1-2.0：中度刺激。
2.1-3.0：严重刺激。
从表8可以看出，曲酸表现出明显的皮肤刺激，例如刺痛感和潮红。相比之下，作为本发明的活性成分的宽叶蔓豆油大大降低了皮肤刺激。
本发明的组合物可以制备成如下所述的各种剂型，但不限于此。
制备实施例1片剂
通过将100mg的宽叶蔓豆油，100mg的葡萄糖，50mg的红参提取物，96mg的淀粉和4mg的硬脂酸镁混合，然后加入40mg的30％乙醇制备的颗粒在60℃下干燥并利用制片机制备成片剂。
制备实施例2颗粒
通过将100mg的宽叶蔓豆油，100mg葡萄糖，50mg红参提取物和600mg淀粉混合，然后加入100mg 30％乙醇制备的颗粒在60℃下干燥并填充在袋中。最终重量为1g。
制备实施例4饮剂
将100mg的宽叶蔓豆油，10mg葡萄糖，50mg红参提取物，2g柠檬酸和187.8g纯净水混合并装入瓶中。最终体积为200mL。
制备实施例5保健食品
表9
尽管上述维生素和矿物质混合物的组合物作为对保健食品相对足够的具体实例给出，但它也可根据需要改变。在混合上述成分并制备成颗粒后，根据常用的方法制备保健食品。
制备实施例6保健饮料
表10
| 成分 | 含量 |
| 宽叶蔓豆油 | 1000mg |
| 柠檬酸 | 1000mg |
| 寡糖 | 100g |
| 梅精 | 2g |
| 牛磺酸 | 1g |
| 纯净水 | 余量 |
| 总体积 | 900mL |
如表10所述，将上述成分混合，加入纯化水使总体积为900mL。在85℃下搅拌加热约1小时后，将所得溶液过滤并填充在灭菌的2-L容器中。在密封和灭菌后，将溶液储存在冰箱中直至用于制备本发明的保健饮料组合物。
剂型实施例1乳液
表11
| 成分 | 含量(wt％) |
| 宽叶蔓豆油 | 3.00 |
| L-抗坏血酸-2-磷酸镁盐 | 1.00 |
| 水溶性胶原蛋白(1％水溶液) | 1.00 |
| 柠檬酸纳 | 0.10 |
| 柠檬酸 | 0.05 |
| 白屈菜提取物 | 0.20 |
| 1,3-丁二醇 | 3.00 |
| 纯净水 | 至100 |
剂型实施例2霜
表12
| 成分 | 含量(wt％) |
| 宽叶蔓豆油 | 1.00 |
| 聚乙二醇单硬脂酸酯 | 2.00 |
| 自乳化甘油单硬脂酸酯 | 5.00 |
| 十六烷醇 | 4.00 |
| 角鲨烷 | 6.00 |
| 甘油三-2-乙基己酸酯 | 6.00 |
| 鞘脂糖 | 1.00 |
| 1,3-丁二醇 | 7.00 |
| 纯净水 | 至100 |
剂型实施例3粉饼
表13
| 成分 | 含量(wt％) |
| 宽叶蔓豆油 | 5.00 |
| 聚乙烯醇 | 13.00 |
| L-抗坏血酸2-磷酸镁盐 | 1.00 |
| 月桂酰羟脯氨酸 | 1.00 |
| 水溶性胶原蛋白(1％水溶液) | 2.00 |
| 1,3-丁二醇 | 3.00 |
| 乙醇 | 5.00 |
| 纯净水 | 至100 |
剂型实施例4美容液
表14
| 成分 | 含量(wt％) |
| 宽叶蔓豆油 | 2.00 |
| 羟乙基纤维素(2％水溶液) | 12.00 |
| 黄原胶(2％水溶液) | 2.00 |
| 1,3-丁二醇 | 6.00 |
| 厚甘油 | 4.00 |
| 透明质酸钠(1％水溶液) | 5.00 |
| 纯净水 | To 100 |
剂型实施例5软膏
表15
| 成分 | 含量(wt％) |
| 宽叶蔓豆油 | 0.1 |
| 甘油 | 8.0 |
| 丁二醇 | 4.0 |
| 液体石蜡 | 15.0 |
| β-葡聚糖 | 7.0 |
| 卡波姆 | 0.1 |
| 辛酸/癸酸甘油三酯 | 3.0 |
| 角鲨烷 | 1.0 |
| 十六/十八烷基葡糖苷 | 1.5 |
| 硬脂酸脱水山梨醇酯 | 0.4 |
| 十六烷醇 | 1.0 |
| 蜂蜡 | 4.0 |
| 防腐，色素和香味 | 适量 |
| 纯净水 | 余量 |
尽管已经示出和描述了示例性实施例，但是本领域技术人员将理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的精神和范围的情况下，可以对其进行形式和细节上的各种改变。
Claims (7)
1.宽叶蔓豆(Glycine gracilis)油在制备用于皮肤美白的组合物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物抑制或阻止黑色素的产生，或者抑制黑色素的表达。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物包含0.001-10wt％的宽叶蔓豆油。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。
5.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物为用于皮肤外用的组合物。
6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物为药物组合物。
7.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述组合物为保健食品组合物。
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