KR20070121193A

KR20070121193A - 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을함유하는 피부 보호 또는 염증 완화용 조성물

Info

Publication number: KR20070121193A
Application number: KR1020060055945A
Authority: KR
Inventors: 정소영; 최왕근; 서미영; 김진욱; 서민재; 류병희; 박중민; 고의찬
Original assignee: 주식회사 두산
Priority date: 2006-06-21
Filing date: 2006-06-21
Publication date: 2007-12-27

Abstract

본 발명은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 염증 반응 완화용 또는 자외선에 대한 피부 보호용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물은 피부에 도포 시 자외선에 대한 피부 세포 보호 및 염증반응 완화 효과를 나타낸다. 따라서 이러한 청주 순미주 추출물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 조성물은 자외선에 대한 피부 보호 또는 염증 반응 완화용으로 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 건강 기능성 식품 조성물에 유용하게 사용할 수 있다.

청주, 순미주, 청주박, 피부보호, 피부개선, 피부노화, 세라마이드, 자외선 보호, 염증완화.

Description

청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 보호 또는 염증 완화용 조성물 {Composition for protection or anti-inflammation containing one or more among rice wine extract and rice wine lees extract}

도 1은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 제조방법을 도식화한 도면이다.

도 2는 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 피부 장벽 복원 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 3은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 피부의 세라마이드 합성 촉진 효과를 나타낸 그래프이다.

도 4는 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 웨스턴 블랏으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 5는 청주 순미주 농축물의 농도별 콜라겐 합성 촉진 효과를 엘라이자 분석법으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 6은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 자외선 손상에 대한 피부각질세포 보호효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 7은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 항염 또는 염증 완화 효과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 보호 또는 개선용, 피부 장벽 복원용, 피부의 세라마이드 합성 촉진용, 피부 노화 또는 주름의 예방 또는 개선용, 자외선에 대한 피부 보호 또는 자외선에 의한 염증 반응 완화용 조성물에 관한 것이다.

청주는 쌀, 누룩, 물을 원료로 하여 빚어서 걸러낸 맑은 술이며 전통누룩을 이용하여 제조한 청주에는 여러 가지 성분이 함유되어 있다. 목욕제로 사용시 우수한 세정효과, 신진대사 촉진효과, 피로회복의 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

위와 같은 효과에도 불구하고 청주의 보습효과 외에 다양한 피부효능에 대한 구체적 검증 또는 메커니즘 연구가 이루어지지 않아 화장품 소재로서 사용하는 면에 있어서는 아직까지 제한적이다.

앞서 살펴본 바와 같이 청주는 피부 보습 효과를 나타내어 오래 전부터 피부미용을 목적으로 입욕제로 사용되어 왔으며 그 효능이 구전되어 오고 있다. 그러나 과학적인 입증은 미미하여 화장품 소재로서의 폭발적인 관심을 유발하지 못했다. 한편 최근 화장품 시장의 경향이 합성의 소재로부터 탈피하여 천연의 소재를 이용하려는 경향이 증가함에 따라 다양한 피부 미용 효과를 가진 천연 소재 발굴에 관 심이 집중되고 있는 실정이다.

이에, 본 발명자들은 천연의 소재이면서 다양한 피부 효능을 가진 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물의 효능을 검토해 본 결과, 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물이 피부 장벽 복원력을 높이고, 피부의 세포간 지질인 세라마이드의 합성을 증가시키고, 사람 섬유아 세포주에서 콜라겐 합성을 촉진하며, 특히 피부 각질 세포에서 자외선 조사 시 피부 세포 손상 방지 및 염증 반응을 억제함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 청주에 관하여 기존에 알려지지 않은 피부효능에 대해 과학적이고 체계적인 방법으로 입증함으로써 모호하게 알려졌던 청주 미용효과를 구체적으로 하여 화장품 개발에 적극 활용할 수 있도록 하는 기회를 제공하기 위하여, 청주 순미주 농축물 또는 청주박 추출물을 함유하는 피부 장벽 복원용, 피부의 세라마이드 합성 촉진용, 피부 노화 또는 주름의 예방 또는 개선용, 자외선에 대한 피부 보호 또는 자외선에 의한 염증 반응 완화용 조성물을 제공하는 것을 발명의 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 자외선에 대한 피부 보호 또는 염증 반 응 완화용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 장벽 복원용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 세라미아드 합성 촉진용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 노화 또는 주름의 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 상기 조성물 중 어느 하나에 있어서, 상기 청주박 추출물은 물 또는 에탄올 추출물인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의한 상기 조성물 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물, 또는 건강기능성식품 조성물인 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 좀 더 설명한다.

본 발명의 청주 "순미주" 농축물에서, "순미주"란 미(쌀), 미누룩, 코지로 만들어지는 청주를 의미한다.

본 발명의 "청주박" 추출물에서, "청주박"은 청주를 거르고 난 찌꺼기로 정의한다.

포유류의 피부는 표피(epidermis) 및 진피(dermis)에 다양한 기능의 세포를 포함하며 해로운 외부환경과 수분 손실에 대해 신체를 보호한다. 피부의 진피는 콜라겐과 기타의 단백질과 소량의 지질을 생성하는 섬유아세포로 구성되어 있다. 표피는 지질을 생성하는 각질 세포를 포함한다. 섬유아세포(fibroblast)에 의해 생성 된 콜라겐은 피부에 신장 강도를 부여하게 되는 반면, 각질세포에 의해 생성된 지질은 생체조직과 외부와의 차단층을 형성하여 피부장벽기능을 수행한다. 피부의 장벽기능은 주로 최상층부인 각질층(stratum corneum)에 있고 특히 세포간 지질은 피부장벽기능에 중요하다. 본 발명은 이러한 피부 본래의 기능을 돕기 위해 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물이 표피 지질 구성 및 콜라겐 합성에 영향을 주는지 확인하였다. 또한 이를 통해 피부 장벽기능이 개선되는 지와 더불어 노화를 방지하는 기능을 대표하는 콜라겐 합성 증가 효과 및 자외선에 대한 세포 보호 효과 및 염증 반응 완화 효과를 나타내는지 확인하였다.

본 발명에 따른 청주 순미주 농축물은, 먼저 청주를 효모(Saccharomyces cerevisiae DSCC 1137)를 사용하여 전통적인 방법으로 제조한 다음 상기 제조된 청주를 감압농축기를 이용하여 농축하여 수득할 수 있다. 상기 청주를 제조하는 과정에서 수득한 술지게미인 청주박을 물 또는 에탄올에 약 5시간 동안 교반하면서 침지시켜 청주박 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명에 의한 상기 조성물은 본 발명에 따른 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~99.9중량％의 양으로 함유하는 것이 바람직하다. 유효한 효과와 안정성 및 제형 안정성을 고려한다면 0.1~40.0중량%의 양으로 함유하는 것이 더 바람직하다.

본 발명에 의한 상기 조성물은 화장료 조성물 또는 약학 조성물일 수 있다.

본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은, 상기한 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.

본 발명에 따른 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 화장료 조성물은, 각 화장료 제형으로 제조하여 그대로 도포하는 것이 바람직하나 통상의 외용의 제제로도 할 수 있다.

본 발명의 상기 화장료 조성물은 상기 기재된 효과를 위한 화장품 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 미용액 등이 있다.

본 발명의 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 조성물이 첨가된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

즉, 본 발명의 화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패취, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제, 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.

각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기의 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의선정하여 배합할 수 있다.

상기한 제제는 상기 기재된 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질 을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

또한, 상기 활성성분(청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상)의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 대략 2000mg/kg/일 범위이다. 더 바람직한 투 여량은 0.5mg/kg/일 내지 2.5mg/kg/일이다. 또는, 1일당 1.0 내지 3.0 ㎖로 이를 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속 지속하는 것이 좋다.

한편, 의도된 투여양식에 따라 약학 조성물은 고체, 반고체 또는 액체 투여 형태일 수 있다. 투여 형태의 예는 정제, 알약, 캡슐, 좌약, 작은 봉지, 과립, 분말, 크림, 로션, 연고, 겔, 패취, 분무제, 반창고, 액체 용액, 현탁액, 분산액, 에멀젼, 시럽 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 활성성분은 리포솜, 미세입자 또는 마이크로 캡슐 등에 캡슐화 될 수 있다.

상기 제형 중 정제, 알약, 과립 등과 같은 고체 조성물은 편의상 코팅될 수 있으며 전형적으로 정맥 내 투여를 위한 조성물은 멸균 등장 수성 완충액 내의 용액이고, 주사 부위의 통증을 완화시키기 위해 국부 마취제를 포함한다.

또한, 원한다면 약제는 습윤제, 유화제, pH 완충제 등과 같은 소량의 무독성 보조 물질을 함유할 수도 있으며, 이러한 보조 물질의 예는 나트륨 아세테이트, 솔비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 및 트리에탄올아민 올리에이트를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

또한, 본 발명의 약학 조성물은 안정제, 항산화제, 결합제, 착색제, 향미제, 방부제 및 농후제와 같은 부형제, 담체 및 희석제를 더 포함할 수도 있다.

또한, 본 발명은 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품 조성물을 제공한다. 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합 제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상의 양은 전체 식품 중량의 0.001 내지 99.9 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.001 내지 0.1 g, 더 바람직하게는 0.05 내지 0.1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

한편, 본 발명의 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상은 그다지 심각한 독성 및 부작용은 없으므로 예방 목적으로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

이하 본 발명은 하기 실시예 및 실험예로 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 청주의 제조

65-70% 도정미로 만든 증미 67g, 코지 32g, 식용수 78g을 혼합한 뒤 효모(Saccharomyces cerevisiae DSCC1137)를 접종, 7일간 배양하여 주모를 제조한다. 이 주모에 3차례의 담금 과정 동안 증미, 코지 그리고 식용수를 추가하여 최종적으로 증미 1179g, 코지 292g, 식용수 1530g이 되도록 한 후 15일 동안 15℃에서 발효시켰다. 발효액을 원심 또는 압착 여과하여 청주 순미주를 제조하였다.

[실시예 2] 청주 순미주 농축물의 제조

상기 실시예 1에서 제조된 순미주 (알코올 18.4%) 2L를 취하여 감압농축기로 5배 농축하여 순미주 농축액을 제조하였으며 이는 알코올을 제거하는 동시에 유효성분의 함량을 높이는 효과가 있다. (도 1 참조).

[실시예 3] 청주박 열수 추출물의 제조

청주박 열수 추출액은 상기 실시예 1의 청주 제조 과정에서 수득한 부산물인 청주박 (고형분 52%) 500g을 물 1L에 넣고 600rpm으로 교반하면서 60℃에서 5시간 동안 침지시킨 뒤 여과하여 얻은 여과액 600ml을 감압농축기로 5배 농축하여 제조하였다.

[실시예 4] 청주박 에탄올 추출물의 제조

청주박 에탄올 추출액은 상기 실시예 1의 청주 제조 과정에서 수득한 부산물인 청주박(고형분 52%) 500g을 70% 에탄올 1L에 넣고 600rpm으로 교반하면서 상온에서 4시간 동안 침지시킨 뒤 여과하여 얻은 여과액 600ml을 감압농축기로 5배 농축하여 제조하였다. (도 1 참조).

[실험예 1] 피부 장벽 복원 효과

본 발명의 상기 실시예 2에서 수득한 청주 순미주 농축물, 실시예 3에서 수득한 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4에서 수득한 청주박 에탄올 추출물의 피부 장벽 복원 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 생후 8-12주령의 무모유도생쥐(샘타코 바이오코리아)의 등 양쪽의 수분증발량을 TEWL장치(TEWLAMETER,TM210, Germany)로 측정 한 후(정상피부 약 10±2g/hm²), 동일한 위치에 스카치 테이프를 붙였다 떼어 붙이는 것을 15-20회 정도 반복하면서 수분증발량이 40-50g/hm²정도에 이를 때까지 반복한다. 그 다음 2% 수용액상의 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물을 첨가하여 30㎕를 각각 손상직후, 6시간 후, 12시간 후, 24시간 후에 도포하고, 다른 한쪽 등에는 아무것도 도포하지 않은 대조구로 하여 시간의 경과에 따라 (손상 전, 손상 직후, 6시간 경과 후, 12시간 경과 후, 24시간 경과 후) 수분증발량을 측정하여 피부장벽의 복원 정도를 확인하였다. 그 결과는 도 2에 나타내었다.

그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이 대조구(무처치구)에 비해 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물의 피부 장벽 복원 효과가 높음을 알 수 있었다.

[실험예 2] 고분해능 박층크로마토그래피에 의한 지질 분석

본 발명의 상기 실시예 2에서 수득한 청주 순미주 농축물, 실시예 3에서 수득한 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4에서 수득한 청주박 에탄올 추출물의 표피 지질 증가 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 이때, 피부 내 지질 분석을 위해서 문헌(Bligh and Dyer, 1959, Canad . J. Biochem . Physiol, 37:911-917; Bouwstra et al., 1999, Biochim . et Biophy . Acta, 1419:127-136)에 의해 개발된 방법을 변형하여 사용하였다.

먼저, 상기 실험예 1의 방법에 따라 테이프 탈부착을 반복하면서 수분증발량이 40-50g/hm²정도에 이르도록 피부 손상 유도 한 무모쥐에 각각 비처리구, 무처치구, 각각2% 수용액상의 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물 30㎕를 24시간 동안 처치하였다. 직경 6mm의 생검펀치(biopsy punch)로 조직을 절제하고, 트립신 소화액[Sigma, 0.25% in PBS]으로 표피조직이 박리될 때까지(보통 3-5시간) 37℃ 배양기에서 반응시켰 다. 분리된 표피조직은 지질 추출 용매 (클로르포름:메탄올:정제수=4:2:1.6)로 12시간 이상 진탕 추출하고, 실린더형 여과기[pore size;0.45 μm]로 여과한 후 질소 가스 아래에서 건조시켰다. 고분해능 박층크로마토그래피(MercK, Germany)상에 점적하기 위해 각 시료에 동일하게 클로르포름:메탄올=2:1 용매를 300ul로 용해시키고, LinoMAT5(CAMAG, Germany)를 이용해서 25μl를 점적하였다. 그 다음 문헌(Doering et al., 1999, Journal of Biological Chemistry, 274:11038-11045; Doering et al., 2002. Journal of Lipid Research, 43:1727-1733)에 따라, 표준물질로서 세라마이드, 히드록시 세라마이드 및 비히드록시 세라마이드를 0.1mg/ml로 만들어 20μl를 점적하였다. 점적이 완료된 고분해능 박층크로마토그래피 판은 이동상 (클로르포름:메탄올:정제수=190:9:1)으로서 정지상 끝까지 두 번 전개 시킨 후, 건조하여 용매를 제거하였다. 이에 포스포몰리브덴산을 분무하고, 이를 120℃에서 2분간 소성시키거나, 세라마이드 및 글루코실세라마이드의 경우에는 8%의 인산 중의 10% 황산구리를 분무하여 확인하였다. 그 결과 얻어진 크로마토그램을 도 3에 나타내었다. 도 3에서, 각 분획에 따라, 1: 세라마이드IIIb(C3); 2: 청주박 열수 추출액; 3: 청주박 에탄올 추출액; 4: 청주 순미주 농축액; 5: 무처치구; 6: 비처리구(without tape stripping)이다.

그 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 내부 표준 물질로 사용한 세라마이드IIIb 부분의 띠(band)을 살펴보면, 비처리구에 비해 전반적으로 높은 세라마이드량을 나타내어 세라마이드가 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물의 처리에 의해 증가됨을 알 수 있 었다. 특히 모든 실시예의 시료 처리군에서 무처치구 보다 높은 세라마이드 합성량을 보여주었다.

[실험예 3] 웨스턴 블랏을 이용한 콜라겐 합성 촉진 효과 분석

본 발명의 상기 실시예 2에서 수득한 청주 순미주 농축물, 실시예 3에서 수득한 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4에서 수득한 청주박 에탄올 추출물의 콜라겐 증가 효과를 웨스턴 블랏을 이용하여 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 사람 섬유아 세포(normal human dermal fibroblasts; provided by Prof. Jung-keug Park at Dongguk Univ.)를, 페니실린(100 IU/mL), 스트렙토마이신(100 μg/mL), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 넣고 37℃를 유지하여 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다.

배양된 섬유아세포를 6-웰 플레이트(well plate)에 각 웰 당 3 x 10⁵ 개로분주한 다음 세포배양조건에서 24시간 배양하였다. 배양 완료 후 배지를 제거한 다음 실시예 2의 청주 순미주 농축물 0.05, 0.1, 0.2%, 실시예 3의 청주박 열수 추출물 0.2%, 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물 0.2%, 및 비타민C(양성 대조군) 20μM을 포함한 혈청프리(serum-free) 배지(DMEM)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 각 처리군의 배양액을 수거하여 단백질 전기영동을 위한 샘플로 사용하였다. 단백질 전기영동을 위해 수거한 배지와 샘플 버퍼를 1:2로 하여 약 30μl 의 전기영동 시료를 준비하였다. 준비한 시료는 가열(boiling) 방법으로 변형 (denaturation)시킨 후 8% SDS-PAGE에서 단백질 전기영동 하였다. 이 후 PVDF 막(membrane)으로 옮겨진 단백질은 항-프로콜라겐 타입1 항체(anti-procollagen type1 antibody; provided by Prof. Jin-ho Chung at Seoul national Univ.)를 1차 항체로 사용하여 엑스레이 필름에서 가시화 되었다.

그 결과 도 4에 나타낸 바와 같이, 무처리구에서 매우 희미한 콜라겐 밴드를 확인하였으나, 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물의 경우 무처리구와 비교시 콜라겐 합성이 증가됨을 알 수 있었다. 특히, 실시예 2의 청주 순미주 농축물의 경우 농도 의존적인 경향으로 콜라겐 합성을 상당한 수준으로 증가 시킴을 보여주었다. 이러한 수준은 비타민C와도 비교할 만한 정도였음을 확인하였다.

[실험예 4] 엘라이자 분석법을 이용한 콜라겐 합성 촉진 효과 분석

본 발명의 상기 실시예 2에서 수득한 청주 순미주 농축물의 콜라겐 생합성량을 엘라이자법을 이용하여 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 상기 실험예 3의 웨스턴 블랏을 이용한 콜라겐 분석과 동일한 방법으로 배지를 수거하였다. 즉, 사람 섬유아세포(normal human dermal fibroblasts; provided by Prof. Jung-geug Park at Dongguk Univ.)를 6-웰 플레이트에 각 웰 당 3 x 10⁵ 개로 분주한 다음 세포배양조건에서 24시간 동안 배양하였다. 배양완료 후 배지를 제거한 다음 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물 0.05, 0.1, 0.2% 및 비타민C(양성대조군) 5, 10, 20μM를 포함한 혈청프리(serum-free) 배지(DMEM)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 그 다음 각 처리군의 배양액을 수거하여 프로콜라겐의 양을 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent assay; procollagen type I C-peptide EIA kit, Takara)법으로 측정하여 도 5에 나타내었다.

그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 실시예 2의 청주 순미주 농축물 0.2% 로 처리한 세포에서 가장 높은 콜라겐 합성량을 보였으며 이는 무처리구에 비해 2배에 달하는 것이었다.

[실험예 5] 자외선 손상에 대한 피부각질세포 보호 효과

본 발명의 상기 실시예 2에서 수득한 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수추출물, 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물의 자외선 손상에 대한 피부각질세포 보호 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 사람 피부 각질세포주(HaCaT cell line; Originated in Dr. Norbert Fusenig's laboratory)를 3X10⁵ 세포/디쉬(cells/dish)의 농도로 35mm² 세포 배양 플레이트(cell culture plate)에 접종(seeding)한 후 하룻밤 배양하였다. 다음날 배지를 제거하고 1X인산완충용액(Phosphate-buffered saline; PBS)으로 세척(wash) 한 후 700μl동량의 1XPBS를 각 디쉬에 첨가한 후, 25mJ/cm² 의 UVB를 조사한 다음 PBS를 제거한 다음, 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물 0.2%, 실시예 3의 청주박 열수 추출물0.2%, 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물0.2%, 및 WY-14643 (Sigma, USA)(양성 대조군) 200μM를 각각 첨가한 DMEM배지를 첨가하여 24시간 37^oC 에서 배양하였다. 그 다음날 배지를 수거하여 MTT 분석법으로 세포 생존률을 측정, 비교하여 도 6에 나타내었다.

그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이 무처치구에 비교해서 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물에서 각각 56, 32, 24% 이상의 높은 세포 생존률을 보였다. 특히, 실시예 2의 청주 순미주 농축물이 경우 세포 생존률이 양성 대조군인 WY-14643과 거의 유사하였다.

[실험예 6] 피부각질세포에서 자외선 조사로 유발된 염증반응 감소 효과

본 발명의 상기 실시예 2에서 수득한 청주 순미주 농축물, 실시예 3에서 수득한 청주박 열수 추출물, 및 실시예 4에서 수득한 청주박 에탄올 추출물의 피부각질세포에서 자외선 조사로 유발된 염증반응 감소 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

이때, 상기 실시예 5에서 설명한 바와 같은 방식으로 세포를 준비하고 시료를 처리한다. 먼저, 상기 실험예 3의 웨스턴 블랏을 이용한 콜라겐 분석과 동일한 방법으로 배지를 수거하였다 즉, 피부각질 세포주(HaCaT)를 3 x 10⁵ 세포/디쉬 (cells/dish) 농도로 35mm² 세포배양접시(cell culture dish)에 접종 후 하룻밤 배양한다. 다음날 배지를 제거하고 1X인산완충용액(Phosphate-buffered saline; PBS)으로 세척(wash)한 후 700μl동량의 1XPBS를 각 디쉬에 첨가한 후, UVB (25mJ/cm²)를 조사한 다음 PBS를 제거한 다음, 상기 실시예 2의 청주 순미주 농축물 0.2%, 실시예 3의 청주박 열수 추출물 0.2%, 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물 0.2%, 및 WY-14643 (양성 대조군) 200μM를 각각 첨가한 DMEM배지를 첨가하여 24시간동안 37^oC에서 배양하였다. 그 다음날 배지를 수거하여 염증 사이토카인(cytokines)으로 알려진 TNF-α의 양을 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent assay)법으로 측정하여 도 7에 나타내었다.

그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이 자외선 조사로 증가된 염증 사이토카인 TNF-α의 양이 실시예 2의 청주 순미주 농축물, 실시예 3의 청주박 열수 추출물, 실시예 4의 청주박 에탄올 추출물을 처리한 경우 모두 감소하였으며, 특히 실시예 2의 청주 순미주 농축물 및 실시예 3의 청주박 열수 추출물에서 20-30% 염증반응을 감소시키는 것으로 확인되었다.

하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아니라 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 비누 제조

실시예 2의 청주 순미주 농축물...................20.00 (%)

유지.......................................................적당량

수산화나트륨................................................적당량

염화나트륨..................................................적당량

향료........................................................소 량

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비에 의해 비누를 제조하였다.

제제예 2. 로션 제조

실시예 3의 청주박 열수 추출물.................30.00 (%)

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염.................1.00

수용성 콜라겐 (1 % 수용액)........................1.00

시트르산나트륨....................................0.10

시트르산...........................................0.05

감초 엑기스........................................0.20

1,3-부틸렌글리콜....................................3.00

유지.................................................2.00

세린.................................................1.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)에 의해 로션을 제조하였다.

제제예 3. 크림 제조

실시예 4의 청주박 에탄올 추출물..........................10.00(%)

폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트.........................2.00

자기유화형모노스테아르산글리세린...........................5.00

세틸알코올.................................................4.00

스쿠알렌...................................................6.00

트리2-에틸헥산산글리세릴...................................6.00

스핑고당지질...............................................1.00

1.3-부틸렌글리콜............................................7.00

비타민 C....................................................1.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 크림을 제조하였다.

제제예 4. 팩 제조

실시예 2의 청주 순미주 농축물...........................50.00(%)

폴리비닐알코올.........................................13.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염........................1.00

라우로일히드록시프롤린.................................1.00

수용성 콜라겐 (1 % 수용액).............................2.00

1,3-부틸렌글리콜.......................................3.00

에탄올..................................................5.00

세린....................................................1.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 팩을 제조하였다.

제제예 5. 미용액 제조

실시예 3의 청주박 열수 추출물......................20.00(%)

히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액)...............12.00

크산탄검(2 % 수용액)...............................2.00

1,3-부틸렌글리콜...................................6.00

진한 글리세린......................................4.00

히알루론산나트륨 (1 % 수용액)......................5.00

유지...............................................2.00

세린...............................................1.00

비타민 C...........................................1.00

정제수로 전량을 100으로 하였으며, 상기의 배합비(%)로 미용액을 제조하였다.

제제예 6. 산제의 제조

실시예 4의 청주박 에탄올 추출물...............................100 mg

유당...........................................................100 mg

탈크...........................................................10 mg

유지............................................................5 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 7. 정제의 제조

실시예 2의 청주 순미주 농축물..............................50 mg

옥수수전분.................................................100 mg

유당.......................................................100 mg

스테아린산 마그네슘.........................................2 mg

비타민 C....................................................50 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 8. 캅셀제의 제조

실시예 3의 청주박 열수 추출물. ...............50 mg

옥수수전분...............................................100 mg

유당......................................................100 mg

스테아린산 마그네슘....................... ............2 mg

비타민 C...................................................50 mg

세린.......................................................50 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전 하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 9. 주사제의 제조

실시예 4의 청주박 에탄올 추출물..........................50 mg

주사용 멸균 증류수........................................적량

pH 조절제.................................................적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 10. 액제의 제조

실시예 2의 청주 순미주 농축물.............................100 mg

이성화당...................................................10 g

만니톨.....................................................5 g

비타민 C...................................................50 mg

세린........................................................50 mg

유지........................................................적량

정제수.......................................................적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한 다.

제제예 11. 건강 식품의 제조

실시예 3의 청주박 열수 추출물…........................1000 ㎎

비타민 혼합물

비타민 A 아세테이트............................70 ㎍

비타민 E ......................................1.0 ㎎

비타민 B₁.......................................0.13 ㎎

비타민 B₂.............................. ........0.15 ㎎

비타민 B₆........................................0.5 ㎎

비타민 B₁₂........................................0.2 ㎍

비타민 C.........................................10 ㎎

비오틴..........................................10 ㎍

니코틴산아미드....................................1.7 ㎎

엽산..............................................50 ㎍

판토텐산 칼슘......................................0.5 ㎎

무기질 혼합물

황산제1철..........................................1.75 ㎎

산화아연............................................0.82 ㎎

탄산마그네슘.....................................25.3 ㎎

제1인산칼륨.........................................15 ㎎

제2인산칼슘.........................................55 ㎎

구연산칼륨...........................................90 ㎎

탄산칼슘.............................................100 ㎎

염화마그네슘.....................................24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 12. 건강 음료의 제조

실시예 4의 청주박 에탄올 추출물.................................1000 ㎎

구연산..........................................................1000 ㎎

올리고당.........................................................100 g

매실농축액.........................................................2 g

타우린..............................................................1 g

정제수를 가하여 전체....................................900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물은 자외선에 대한 피부 세포 보호 및 염증반응 완화 효과를 나타낸다. 따라서 이러한 청주 순미주 추출물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 자외선에 대한 피부 보호 또는 염증 반응 완화용으로 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 건강 기능성 식품 조성물에 유용하게 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 의한 상기 청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물을 피부에 도포 시 경표피 수분 손실량을 줄어들게 하여 피부 장벽 복원력을 높이고 세포간 지질인 세라마이드 합성을 증진시키며, 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 노화 및 주름을 방지 또는 개선하는 효과도 얻을 수 있다.

Claims

청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 염증 반응 완화용 조성물.
청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 자외선에 대한 피부 보호용 조성물.
청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 장벽 복원용 조성물.
청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 세라마이드 합성 촉진용 조성물.
청주 순미주 농축물 및 청주박 추출물 중 어느 하나 이상을 함유하는 피부 노화 또는 주름의 예방 또는 개선용 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 청주박 추출물은 열수 또는 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물, 또는 건강기능성식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.