KR20200024464A - 복합 해조류 발효 추출물을 함유하는 항산화 및 미백 활성 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 복합 해조류의 발효물을 포함하여 미백 및 보습 효과를 가지는 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 미백용 화장료 조성물은 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함한다.

Description

복합 해조류 발효 추출물을 함유하는 항산화 및 미백 활성 조성물{ANTIOXIDATION AND WHITENING ACTIVE COMPOSITION CONTAINING COMPLEX SEAWEED FERMENTED EXTRACT}

본 발명은 복합 해조류의 발효물을 포함하여 미백 및 보습 효과를 가지는 조성물에 관한 것이다.

피부흑화(melanogenesis)는 멜라닌 색소생성세포(melanocyte)에서 자외선 등의 자극에 대한 방어기작으로 멜라닌 생성활동이 증가되고 이에 따라 만들어진 다량의 멜라닌이 각질형성세포(keratinocyte)로 전이되어 피부표피층에 축척된 결과이다. 멜라닌의 생성목적은 피부보호 일 수 있으나, 멜라닌 생성으로 인한 피부 과색소침착은 기미, 주근깨, 노인성 색소반점 등을 일으킬 수 있고 이에 따라 당사자에게 미용상의 불편과 부정적인 정신적 영향을 초래할 수 있다. 한편, 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화 반응을 거쳐 만들어지는 것으로 알려져 있다.

표피층은 기저층과 유극층에 약 70％, 과립층에는 30∼50％, 각질층에는 15∼30％로 수분을 포함한다. 즉, 표피 내 수분함량은 상부로 갈수로 점차 감소하는 피부 수분 기울기 (skin water gradient)를 나타내며, 이러한 수분 기울기를 통해 피부는 지속적인 삼투압 스트레스를 받게 된다. 또한, 피부는 인체의 최외각층에 존재하기 때문에 대기오염, 건조한 환경, 자외선, 바람, 화학물질등에 만성적으로 노출되어 있어 쉽게 건조해 진다.

최근 소비자들의 자연 지향적, 환경 친화적인 소비 추세에 따라 새로운 화장품 원료 개발의 필요성이 대두되고 있다. 우리나라는 세계 4위의 해조류 생산국이지만, 아직까지는 단일종 해조류의 생리활성을 연구하는데 그칠 뿐 이들의 생리활성을 이용하여 최적의 효과를 나타내는 천연 화장품 원료를 개발하고자 하는 시도는 없었다.

대한민국 등록특허 제10-1413328호

본 발명의 목적은 최적의 미백 및 보습효과를 가지는 복합 해조류의 발효물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 일 관점에서 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 다른 관점에서 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는 보습용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 관점인 조성물은 유효성분으로 복합 해조류 혼합물의 유산균 발효물을 포함하여 멜라닌의 생성과 관련된 것으로 알려진 기작을 제어할 수 있어서 멜라닌 생성을 억제할 수 있으며, 티로시나제의 활성을 억제할 수 있으므로 멜라닌 생성을 근본적으로 억제할 수 있다. 이에 따라 본 발명의 일 관점인 조성물은 피부 미백을 위한 화장료 조성물, 또는 건강식품 조성물로 유용하게 사용할 수 있으며, 과다 멜라닌에 따라 발병하는 흑색종 등의 질병을 예방하거나 치료하는 약학 조성물로 유용하게 사용할 수 있다는 장점이 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물은 상기의 미백 효과에 더불어 피부 수분 함량을 증가시키고 피부결을 개선시킬 수 있는 보습 효과를 가지므로, 피부 보습 개선을 위한 화장료 조성물, 또는 건강식품 조성물로 유용하게 사용할 수 있으며, 건선, 아토피 등의 질병을 예방하거나 치료하는 약학 조성물로도 사용할 수 있다.

아울러 본 발명의 일 관점인 조성물은 천연 유래 성분을 유효성분으로 포함하여 민감한 피부에 사용할 경우에도 트러블이 없고 장기간 사용시에도 부작용이 없으며 세포 독성을 일으키지 않는다는 장점도 가진다.

본 발명의 일 관점인 조성물은 특히 바다 속 생육환경이 상이하여 서로 다른 종류의 색소를 가지는 해조류들을 혼합하고 이들을 발효한 발효물을 유효성분으로 포함하여 피부 미백 및 보습 효과를 극대화시킬 수 있고, 이와 같은 효과는 본 발명의 다른 관점으로 제공한 해조류들 간의 혼합비율에 따라 더욱 증가할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물의 유효성분인 복합 해조류 추출물은 우수한 미백능과 보습능을 나타내므로, 기존에 사용되어 왔던 미백제와 보습제를 자연친화적이고 환경친화적으로 대체할 수 있어서 기능성 화장품의 원료로 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 유효성분인 발효물의 항산화 효과를 확인한 결과로, 도 1의 (a)는 발효 전의 항산화 효과, 도 1의 (b)는 발효 후의 항산화 효과에 관한 그래프이다(빨간색 막대 : 실시예 1, 파란색 막대 : 실시예 2, 초록색 막대 : LA).
도 2는 본 발명의 유효성분인 발효물의 미백 효과를 확인한 결과로, 도 2의 (a)는 발효 전의 미백 효과, 도 1의 (b)는 발효 후의 미백 효과에 관한 그래프이다(빨간색 막대 : 실시예 1, 파란색 막대 : 실시예 2, 초록색 막대 : 알부틴).
도 3a 내지 도 3c는 본 발명의 유효성분인 발효물의 세포 독성을 평가한 결과이다.
도 4는 본 발명의 유효성분인 발효물의 보습 효과를 확인한 결과로, 도 2의 (a)는 발효 전의 미백 효과, 도 1의 (b)는 발효 후의 미백 효과에 관한 그래프이다(빨간색 막대 : 실시예 1, 파란색 막대 : 실시예 2).

본 명세서에서 "미역"은 갈조류 미역과의 한해살이 바닷말을 의미하는 것으로 운다리아 피나티피다(Undaria pinnatifida)일 수 있다.

본 명세서에서 "다시마"는 갈조류 다시마과 바닷말을 의미하는 것으로 참다시마(Laminaria japonica), 오호츠크다시마(학명Laminaria ochotensis) 및 애기다시마(Laminaria religiosa)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 의미한다.

본 명세서에서 "불등풀가사리"는 홍조류 풀가사리과의 바닷말을 의미하는 것으로 글로이오펠티스 푸카타(Gloiopeltis furcata)일 수 있다.

본 명세서에서 "혼합물"은 미역, 다시마, 불등풀가사리를 모두 포함하는 것으로 구체적으로 이들의 열수 추출물일 수 있다. 더 구체적으로 상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여 다시마를 6 내지 10의 중량비로 포함하고, 불등풀가사리를 0.5내지1.5의 중량비로 포함할 수 있다. 상기 중량비에서 본 발명의 일 목적인 피부 미백 및 보습 효과가 극대화될 수 있다. 이와 같은 관점에서 상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여 다시마를 6.5 내지 9.5중량비 또는 7 내지 9 중량비로 포함할 수 있고 더 구체적으로는 8 중량비로 포함할 수 있다. 동일한 관점에서 상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여 불등풀가사리를 0.75 내지 1.25중량비로 포함할 수 있고 더 구체적으로는 미역과 동일한 중량의 불등풀가사리를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 "발효"는 유산균의 번식에 필요한 최소배지에 유산균과 상기 혼합물을 넣어 유기물을 분해시키는 과정을 의미하는 것으로, 발효 과정에서 사용 가능한 상기 유산균은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei)일 수 있고, 상기 유산균 최소배지는 유산균이 잘 배양될 수 있는 것으로 알려져 있는 조성이라면 제한없이 사용 가능하다. 종래 해조류의 발효를 위해 사용하였던 유산균은 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)이었으나, 본 발명자들은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei)로 해조류 혼합물을 발효시키면 피부 미백과 보습능이 극도로 증진되는 것을 발견하였다.

본 명세서에서 "발효물"은 형태 및 성질 등에 제한을 두지 않고 본 명세서 혼합물의 발효과정 도중 또는 발효과정이 완료된 후 얻어지는 생성물을 제한 없이 포함하는 것이다.

본 명세서에서 "유효성분"은 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미하는 것이다.

본 명세서에서 "미백"은 피부의 미백을 의미하는 것으로 멜라닌 생성을 저해시킴에 따른 결과로 이해될 수 있다. 본 명세서의 "미백"은 구체적으로 멜라닌의 생성에 의한 증상 또는 질환, 예컨대 기미, 주근깨, 흑색종 등의 예방, 치료 및/또는 개선을 의미하는 것일 수 있다. 아울러 본 명세서에서 상기 "미백"은 멜라닌 생성과 관계있는 유전자, 단백질 등을 조절하여 멜라닌 생성을 억제하거나 저해시키는 것을 의미할 수 있다.

아울러 본 명세서에서 "보습"은 피부 수분 함량 증가 또는 피부결 개선을 의미하는 것이다.

본 발명은 일 관점에서 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 미백용 화장료, 약학 및 건강식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 다른 관점에서 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 보습용 화장료, 약학 및 건강식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 다시마는 참다시마(Laminaria japonica), 오호츠크다시마(학명Laminaria ochotensis) 및 애기다시마(Laminaria religiosa)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 발효물은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei)의 발효물일 수 있고, 더 구체적으로 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei, ATCC 15521)의 발효물일 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여 다시마를 6 내지 10의 중량비로 포함하고 불등풀가사리를 0.5 내지 1.5의 중량비로 포함할 수 있거나, 미역의 중량에 대하여 다시마를 6 내지 10의 중량비로 포함할 수 있거나, 또는 미역의 중량에 대하여 불등풀가사리를 0.5 내지 1.5의 중량비로 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여 다시마를 6.5 내지 9.5의 중량비로 포함하고 불등풀가사리를 0.7 내지 1.3의 중량비로 포함할 수 있거나, 미역의 중량에 대하여 다시마를 6.5 내지 9.5의 중량비로 포함할 수 있거나, 또는 미역의 중량에 대하여 불등풀가사리를 0.7 내지 1.3의 중량비로 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여 다시마를 7 내지 9의 중량비로 포함하고 불등풀가사리를 0.9 내지 1.1의 중량비로 포함할 수 있거나, 미역의 중량에 대하여 다시마를 6.5 내지 9.5의 중량비로 포함할 수 있거나, 또는 미역의 중량에 대하여 불등풀가사리를 0.9 내지 1.1의 중량비로 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 혼합물은 미역과 불등풀가사리의 중량에 대하여 다시마를 6 내지 10의 중량비로 포함하거나, 또는 7 내지 9 중량비로 포함할 수 있고, 더 구체적으로 8중량비만큼 포함할 수 있다.

본 발명 조성물의 유효성분인 발효물을 구성하는 혼합물 내 해조류들이 상기와 같은 상대 중량비를 가지는 경우, 각각의 해조류만을 개별적으로 포함하는 경우에 비해 그리고 상기 중량비를 벗어나는 상대 중량비를 가지는 경우에 비해 미백과 보습 효과가 월등히 우수해지는 것을 확인할 수 있었다. 상기와 같은 상대 중량비를 가지는 발효물은 특히 발효 과정을 거치면서 미백능과 보습능이 급격하게 증가하였다. 그러므로 이와 같은 중량비는 미역, 다시마, 불등풀가사리의 미백 및 보습 효과를 증가시키기 위한 발효 과정에 있어서 최적의 것으로 볼 수 있다.

본 발명의 일 관점인 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 유연화장수(스킨로션 및 밀크로션), 영양화장수, 에센스, 영양크림, 마사지크림, 팩, 젤, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일 및 보디 에센스로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 아울러, 상기 화장료 조성물은 연고, 패치 등의 형태로 피부 외용제의 제형으로 사용하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.

본 발명은 다른 관점인 약학 조성물에 있어서, 상기 혼합물의 유산균 발효물을 의약품에 적용할 경우에는, 상기 조성물을 유효성분으로 하여 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.

상기 경구 투여를 위한 제재로서는 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등을 들 수 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명은 또 다른 관점인 건강식품 조성물은 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품을 제공한다. 상기 조성물을 포함하는 침출차, 액상차, 음료, 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.

일 실시예에서 상기 조성물은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01~5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01~3 중량% 범위일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예 1] 복합해조류 발효 추출물 제조

건조한 완도산 미역, 다시마, 불등가사리 원물을 준비한다. 미역:다시마:불등가사리 원물을 1:2:1의 상대 중량비로 혼합하고 80℃에서 2시간 동안 3회에 걸쳐 고온 중탕하여 복합해조류 발효 추출물을 얻었다. 복합 추출물을 감압 농축하여 동결건조 한 다음 아래 표 1과 같은 조성비 및 조건으로 배양하였다. 유산균주는 배양기에 적합한 온도와 최적의 유산균주가 생성되는 시간을 확립하여 배양하였다.

구 분	함 량 및 조 건
균주	Lactobasilus sakei (ATCC 15521)
전지분유	1 %
추출물	2.0 %
발효온도	28 ℃
발효시간	72 시간

[실시예 2] 복합해조류 발효 추출물 제조

미역:다시마:불등가사리 원물을 1:8:1의 상대 중량비로 혼합하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 복합해조류 발효 추출물을 제조하였다.

[실험예 1] 복합 해조류 발효물의 항산화능 평가

DPPH 시약(1,1-Dipheny1-1-picrylhydrazyl free radical, Sigma-U.S.A)을 0.2 Mm의 농도로 제조하였다. 상기 실시예 1 및 2에서 제조한 복합 해조류 발효물을 각 500 ㎍/㎖의 농도로 100㎕씩 취하고 DPPH 용액 100㎕와 함께 96well-plate에서 암실 상태로 20분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 리더(Bio Tek-U.S.A)를 사용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디컬 소거능은 아래 계산식을 사용하여 얻었다. 당업계에 알려진 항산화제인 L-아스코르빈산(L-ascobic acid, LA)을 양성대조군으로 사용하였다.

DPPH 라디컬 소거능(%) = (1- A/B) X 100

(A : 각 농도의 복합 해조류 발효물과 DPPH 용액을 반응시킨 경우의 흡광도, B : 무첨가액과 DPPH용액을 반응시킨 경우의 흡광도)

그 결과, 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 모든 실시예에서 발효에 의해 복합 해조류 혼합물의 항산화능이 급격히 상승한 것을 확인하였다. 그 중에서도 실시예 2의 중량비를 가지는 혼합물(파란색 막대그래프)의 항산화능 증가가 급격하였다. 발효 전(도면 1의 (a)) 실시예 2의 항산화능(파란색 막대그래프)은 실시예 1의 중량비를 가지는 혼합물(빨간색 막대그래프)보다 훨씬 낮았지만 발효를 거치면서 항산화능이 급격히 상승하여 발효 후(도면 1의 (b))의 항산화능이 실시예 1과 동등해 졌다. 이와 같은 결과는 양성대조군인 L-아스코르빈산(LA, 초록색 막대그래프)보다도 우수한 것으로, 본 발명의 유효성분인 복합 해조류 발효물이 기존의 항산화제를 대체하면서 더 우수한 항산화능을 가지는 새로운 항산화제로 기능할 수 있음을 보여준다.

[실험예 2] 복합 해조류 발효물의 미백능 평가

0.175M 소듐 포스페이트 버퍼(pH 6.8) 0.5㎖에 L-DOPA를 녹여준 기질 0.2㎖과 상기 실시예 1 및 2에서 얻어진 복합 해조류 발효물을 1000㎍/㎖의 농도로 0.1㎖를 혼합한 후, 티로시나아제(Tyrosinase, Sigma-U.S.A) 0.2㎖을 첨가하여 25℃에서 2분간 반응시켰다. 당업계에 알려진 미백제인 알부틴(Arbutin, Simga-U.S.A)을 양성대조군으로 사용하였다. 반응 완료 후 생성된 생성물의 흡광도를 475nm에서 확인하였다. 티로시나제 억제율은 각각의 실험시료에서 얻어진 흡광도와 시료를 첨가하지 않은 실험군에서의 흡광도 감소율로부터 구하였다.

그 결과, 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 모든 실시예에서 발효에 의해 복합 해조류 혼합물의 항산화능이 급격히 상승한 것을 확인하였다. 그 중에서도 실시예 2의 중량비를 가지는 혼합물(파란색 막대그래프)의 미백능 증가가 급격하였다. 발효 전(도면 2의 (a)) 실시예 2의 미백능 (파란색 막대그래프)은 실시예 1의 중량비를 가지는 혼합물(빨간색 막대그래프)보다 훨씬 낮았지만 발효를 거치면서 미백능이 급격히 상승하여 발효 후(도면 1의 (b))의 미백능은 실시예 1보다 훨씬 높아졌다. 이와 같은 결과는 양성대조군인 L-아스코르빈산(LA, 초록색 막대그래프)보다도 우수한 것으로, 본 발명의 유효성분인 복합 해조류 발효물이 기존의 미백제를 대체하면서 더 우수한 기능을 가지는 새로운 미백제로 기능할 수 있음을 보여준다.

[실험예 3] 복합 해조류 발효물의 세포 독성 유무 확인

세포 독성을 확인하기 위하여 Raw264.7세포(한국 세포주 은행), B16/F10세포(한국 세포주 은행)와 Hacat 세포(한국 세포주 은행)를 사용하였다. 페니실린/스트렙토마이신 (penicillin/streptomycin, GIBCO) 1%와 소 태아 혈청(fetal bovine serum, GIBCO) 10%가 함유된 DMEM(Lonza) 배지에서 각각의 세포에 실험예 2에서 얻어진 각각의 복합 해조류 발효물 시료를 농도별로(1000, 500, 100, 50 10 ㎍/㎖) 처리하고 37°C, 5% CO₂항온기에서 배양시켰다. 그 후 각각의 배양세포에서 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 어세이를 이용하여 세포 독성 여부를 확인하고 이를 도 3a 내지 도 3c에 각각 나타내었다. MTT는 담황색의 기질로 살아있는 세포의 미토콘드리아 내 효소와 반응하여 포르마잔(Formazan)을 형성하는데, 이 포르마잔을 DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 녹여 570nm의 흡광도를 측정하면 세포 생존율을 측정할 수 있다.

그 결과 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 복합 해조류 발효물은 세포 독성을 나타내지 않았다. 특히 Raw264.7세포(도 3a)의 경우에는 발효 전보다 발효 후의 세포 생존율이 더 높아진 것을 보면, 본 발명의 유효성분인 복합 해조류 발효물이 세포를 보호하는 능력도 가지고 있음을 알 수 있다.

[실험예 4] 복합 해조류 발효물의 보습능 평가

HaCat 세포(한국세포주은행)를 6well-plate에 2x10⁵cells/㎖로 씨딩 하였다. 24시간 후 무혈청 DMEM(Lonza DMEM with 4.5g/L Glucose&L-Glutamine 500ml, U.S.A)으로 2번 세척해준 후에 상기 실시예 1 및 2에서 얻어진 각각의 복합 해조류 발효물 시료를 100 ㎍/㎖ 농도로 0.1㎖씩 처리해 주었다. 새롭게 생성된 히알루론산은 키트(Kit(Aviva systems biology-C.A)를 이용해 정량 하였다.

그 결과, 도 4에서 볼 수 있는 바와 같이, 모든 실시예에서 발효에 의해 복합 해조류 혼합물의 보습능이 상승한 것을 확인하였다. 그 중에서도 실시예 2의 중량비를 가지는 혼합물(파란색 막대그래프)의 보습능 증가가 급격하였다. 발효 전(도면 2의 (a)) 실시예 2의 보습능 (파란색 막대그래프)은 실시예 1의 중량비를 가지는 혼합물(빨간색 막대그래프)보다 훨씬 낮았지만 발효를 거치면서 보습능이 급격히 상승하여 발효 후(도면 1의 (b)) 실시예 1과 거의 비슷해 진 것을 볼 수 있다.

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형 예를 설명하나, 이는 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제제예 1] 연질캅셀제

실시예 2의 복합 해조류 발효물150 mg, 팜유 2 mg, 팜경화유 8 mg, 황납 4 mg 및 레시틴 6 mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1 캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.

[제제예 2] 정제

실시예 2의 복합 해조류 발효물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.

[제제예 3] 과립제

실시예 2의 복합 해조류 발효물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1 g으로 하였다.

[제제예 4] 드링크제

실시예 2의 복합 해조류 발효물 150 mg, 포도당 10 g, 홍삼추출물 50 mg, 구연산 2 g 및 정제수 187.8 g을 혼합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 용량은 200 ml로 하였다.

[제제예 5] 건강 식품의 제조

실시예 2의 복합 해조류 발효물........................ 1000 ㎎

비타민 혼합물

비타민 A 아세테이트.......................70 ㎍

비타민 E ............................................ 1.0 ㎎

비타민 B1........................................... 0.13 ㎎

비타민 B2 .......................................... 0.15 ㎎

비타민 B6........................................... 0.5 ㎎

비타민 B12......................................... 0.2 ㎍

비타민 C............................................ 10 ㎎

비오틴.............................................. 10 ㎍

니코틴산아미드.................................. 1.7 ㎎

엽산................................................ 50 ㎍

판토텐산 칼슘.................................... 0.5 ㎎

무기질 혼합물

황산제1철.......................................... 1.75 ㎎

산화아연............................................. 0.82 ㎎

탄산마그네슘...................................... 25.3 ㎎

제1인산칼륨.......................................... 15 ㎎

제2인산칼슘.......................................... 55 ㎎

구연산칼륨............................................ 90 ㎎

탄산칼슘.............................................. 100 ㎎

염화마그네슘..................................... 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

[제제예 6] 건강 음료의 제조

실시예 2의 복합 해조류 발효물............................ 1000 ㎎

구연산..................................................... 1000 ㎎

올리고당..................................................... 100 g

매실농축액..................................................... 2 g

타우린............................................................ 1 g

정제수를 가하여 전체......................... 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비율을 임의로 변형 실시하여도 무방하다. 본 발명이 속한 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

[제형예 1] 로션

배합성분	중량%
실시예 2의 복합 해조류 발효물	3.00
L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
수용성 콜라겐 (1% 수용액)	1.00
시트르산나트륨	0.10
시트르산	0.05
백굴채 엑기스	0.20
1,3-부틸렌글리콜	3.00
정제수	to 100

[제형예 2] 크림

배합성분	중량%
실시예 2의 복합 해조류 발효물	1.00
폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트	2.00
자기유화형 모노스테아르산글리세린	5.00
세틸알코올	4.00
스쿠알렌	6.00
트리2-에틸헥산글리세릴	6.00
스핑고당지질	1.00
1,3-부틸렌글리콜	7.00
정제수	to 100

[제형예 3] 팩

배합성분	중량%
실시예 2의 복합 해조류 발효물	5.00
폴리비닐알코올	13.00
L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
라우로일히드록시프롤린	1.00
수용성 콜라겐 (1% 수용액)	2.00
1,3-부틸렌글리콜	3.00
에탄올	5.00
정제수	to 100

[제형예 4] 미용액

배합성분	중량%
실시예 2의 복합 해조류 발효물	2.00
히드록시에틸렌셀룰로오스 (2% 수용액)	12.00
크산탄검 (2% 수용액)	2.00
1,3-부틸렌글리콜	6.00
진한 글리세린	4.00
히알루론산나트륨 (1% 수용액)	5.00
정제수	to 100

[제형예 5] 연고

배합 성분	함량(중량%)
실시예 2의 복합 해조류 발효물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
세테아릴 알코올	1.0
밀납	4.0
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 6] 연고

배합 성분	함량(중량%)
실시예 2의 복합 해조류 발효물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
세테아릴 알코올	1.0
밀납	4.0
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

1. 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 미백용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 다시마는 참다시마(Laminaria japonica), 오호츠크다시마(학명Laminaria ochotensis) 및 애기다시마(Laminaria religiosa)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 미백용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 발효물은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei) 발효물인, 미백용 화장료 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여
   다시마를 6내지10의 중량비로 포함하고,
   불등풀가사리를 0.5내지1.5의 중량비로 포함하는, 미백용 화장료 조성물.
5. 미역, 다시마 및 불등풀가사리 혼합물의 발효물을 유효성분으로 포함하는, 보습용 화장료 조성물.
6. 제5항에 있어서,
   상기 다시마는 참다시마(Laminaria japonica), 오호츠크다시마(학명Laminaria ochotensis) 및 애기다시마(Laminaria religiosa)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 보습용 화장료 조성물.
7. 제5항에 있어서,
   상기 발효물은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei) 발효물인, 보습용 화장료 조성물.
8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 혼합물은 미역의 중량에 대하여
   다시마를 6내지10의 중량비로 포함하고,
   불등풀가사리를 0.5내지1.5의 중량비로 포함하는, 보습용 화장료 조성물.

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