KR101921086B1 - 수소수 및 카무카무 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행촉진 및 피부톤 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 수소수 및 카무카무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행촉진 및 피부톤 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

Description

수소수 및 카무카무 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행촉진 및 피부톤 개선용 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION FOR BLOOD CIRCULATION AND IMPROVING SKIN TONE COMPRISING HYDROGEN WATER AND CAMUCAMU EXTRACT}

본 발명은 수소수 및 카무카무 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부환경과 접촉하여 외부 자극에 대한 신체를 보호하는 가장 기초적인 방어기관이며, 외적인 아름다움을 표현하는 중요한 기관이다. 외적인 아름다움이 젊음과 건강을 상징하는 판단의 기준일 뿐 아니라 자신감을 표출하여 업무능력에 영향을 주는 경쟁력으로 자리잡고 있기 때문에, 현대사회에서 피부를 관리하는 경향이 증가하고 있다.

그러나 나이가 들어감에 따라 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되고, 외적으로는 오존층 파괴와 같은 환경오염으로 인한 자외선, 자유 라디칼 및 활성산소의 증가로 인하여 발생하는 물리적, 화학적 자극 및 스트레스로 인한 피부의 정상기능이 약화되고 노화가 촉진되며 혈색이 나빠지고 피부톤도 어두워지게 된다.

이러한 현상을 방지하고 혈색이 좋고 피부톤이 밝은 피부를 유지하기 위해서, 기존에 알려진 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질들을 화장품에 부가하여 사용함으로써 혈액 순환을 촉진하여 피부 혈행을 개선시킴으로써 혈색을 좋게 하고 피부톤을 개선시키기 위한 노력이 있어 왔다.

화장품 업계는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 다수의 제품을 개발하고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 점차 증가하고 있다.

그러나, 통상의 방법으로 수득된 천연 유래의 추출물을 함유하는 화장료 제품은 피부 미백 효과 등 기능성이 충분히 구현되지 아니하며, 피부 개선 활성이 지속적으로 유지되지 않는 문제가 있었다. 따라서, 우수한 기능성과 함께 생체 안정성 및 피부 개선 효과가 우수한 천연물 유래 화장료 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황이다.

한편, 수소수는 최근 수소가 유해독성활성산소인 하이드록시라디칼을 제거하여 암과 같은 각종 난치성질병을 개선하는데 큰 효과를 보이는 것으로 알려져 주목을 받고 있다. 수소는 가장 가벼운 기체이지만, 우리 몸의 63%(원자량기준)를 차지할 정도로 우리 몸을 이루고 있는 기본적인 물질이며 세포에서 에너지를 만드는데 핵심적 역할을 하는 원소이다. 이런 수소가 암, 당뇨, 아토피 등 각종 질병의 주범인 독성활성산소 하이드록시라디칼을 유일하게 인체에 전혀 해가 없는 물로 변환시켜 배출하는 작용을 한다. 이러한 수소수는 활성산소 제거에 효과가 있다는 점에서 음용수 등의 개발이 이루어지고 있으나, 화장료 분야에는 아직 수소수를 이용한 상품의 활성화가 이루어지지 않고 있다.

따라서 우수한 기능성과 함께 생체 안정성 및 피부 개선 효과가 우수한 천연물 유래 화장품 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황에서, 본 발명자들은 민감한 피부에도 안심하고 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 기능성이 우수한 천연 화장료 제품을 개발하고자 하였다.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 생체 안전성이 우수할 뿐만 아니라 혈행촉진 및 피부톤 개선 효과가 탁월하며 피부 개선 활성이 지속적으로 유지되는 천연 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 수소수 및 카무카무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

일 실시예에 있어서, 상기 수소수는 수돗물, 지하수, 용천수 및 용암해수로 이루어진 군에서 하나 이상 선택된 원수로 제조할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 브라질넛 추출물, 무 추출물 및 피스타치오 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 콜리플라워 추출물 및 마 추출물로 구성된 제1복합 추출물을 더 포함할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 해바라기씨 추출물, 마카다미아 추출물 및 호두 추출물로 구성된 제2복합 추출물을 더 포함할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 혈행촉진 및 피부톤 개선용일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물이 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형화될 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 천연 원료의 유효성분들이 상호 작용하여 사용자의 피부 건강에 유익할 뿐만 아니라 혈행촉진 및 피부톤 개선 효과가 있다.

특히, 수소수에 포함된 수소가 활성산소를 물로 전환하여 수분 공급으로 인한 보습 효과뿐 아니라 항산화 작용으로 인해 노화방지 효과가 현저히 개선될 수 있다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 수소수 및 카무카무 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

상기 화장료 조성물은 천연 유래의 추출물을 유효성분으로 포함하여 피부 개선 효과 및 생체 안전성이 우수할 뿐만 아니라 피부 자극이 최소화될 수 있다.

특히, 상기 수소수와 상기 카무카무 추출물은 피부에 동시에 작용하므로 수소의 항산화 작용으로 인해 혈행촉진 및 수분 공급으로 보습 효과가 있으며, 카무카무에 고농축으로 함유된 비타민 C로 인해 수소수와 상호작용 함으로써 노화방지 뿐아니라 멜라닌 생성 억제로 인한 피부톤 개선 효과가 현저히 증대될 수 있다.

상기 “유효 성분으로 포함하는”은 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 주름개선효능과 관련된 콜라겐 합성, 탄력 개선 또는 피부 미백, 피부 자극 완화, 피부 진정 효과 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.

상기 “수소수”는 각종 질병과 노화의 원인으로 지목되는 활성산소와 결합해 이를 체외로 배출시키는 역할을 하는 고농도의 수소가 용존되어 있는 기능성 물이다. 일본에서는 수소수가 전체 먹는 물 시장의 10%를 차지하고 있으며 약 250억엔 규모의 수소수 시장을 형성하고 있다. 일본에서 시판되고 있는 대표 수소수 제품으로는 Suisso, Kiyorabi, Izumio, Motoiri, Itoen 등이 있으며 음료회사 이토엔과 로토제약이 수소수 음료시장을 주도하고 있다.

상기 수소수는 기존의 수소가 물에 녹아 용존하는 물로써, 용존하는 수소에 의해 마이너스 산화환원전위(Oxidation-Reduction Potential; ORP)를 갖기 때문에 환원력이 강하다. 수소수에 용존하는 수소는 항산화력이 매우 크면서도 분자의 크기가 매우 작기 때문에, 피부세포를 쉽게 뚫고 들어갈 수 있으며, 세포 내의 활성 산소 중 특히 하이드록실 라디칼(Hydroxyl Radicals, ·OH^-)만을 선택적으로 제거할 수 있다. 피부 내로 흡수된 수소분자는 하이드록실 라디칼과 선택적으로 반응함으로써 활성산소를 제거함과 동시에 인체에 무해한 물을 생성한다.

따라서, 화장료 조성물에 포함된 수소수는 피부의 기미 및 주름을 개선하고, 멜라닌 생성을 억제하기 때문에 피부톤을 개선할 수 있으며, 피부에 수분을 공급할 수 있다.

상기 수소수는 수돗물, 지하수, 용천수 및 용암해수로 이루어진 군에서 하나 이상 선택된 원수로 제조할 수 있다.

상기 수소수는 스틱식, 수소가스 주입식, 전기분해식, 이온 교환식 및 특수 필터식으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 방법으로 제조할 수 있다. 상기 스틱식은 상기 원수 속에 마그네슘 합금으로 된 스틱을 일정시간 담그면 마그네슘이 용해되면서 수소가 발생하여 수소가 물에 용존하는 방법이다. 상기 수소가스 주입식은 상기 원수를 정수처리를 한 후 수소가스를 고압으로 충진을 하는 방법이다. 상기 전기분해식은 상기 원수를 전기분해하여 물속에 수소를 발생하는 방법이다. 상기 이온 교환식은 특수 필터로 물속에 존재하는 수소 및 산소 이온의 전기적 차이를 이용하여 수소와 산소를 분리하는 방식이다. 상기 특수 필터식은 수소 가스 주입식에서 변형된 것으로 2중의 특수 필터를 사용하여 물과 수소가스를 별도로 상존시키며, 시간의 경과에 따라서 수소가 물속에 들어가게 하는 2중 압력 방식이다.

상기 “카무카무(Myrciaria dubia)”는 아마존의 열대 우림 지역에서 자생하는 페루산 허브 중의 하나로 자두과에 속하며 식물의 높이는 3-8m이며, 직경 1-3cm 정도의 크기를 가지고 있다. 카무카무는 녹색의 열매로 성숙되면 적색을 거쳐 자색으로 변하고, 안토시아닌류의 물질을 다량 함유하고 있기 때문에 다양한 생리활성을 띠고 있으며 항암 작용에 대해서 주로 연구되고 있다.

상기 카무카무는 천연 비타민의 함량이 가장 많으며(100g 당 약 3000g), 다량의 폴리페놀(100g당 1400mg)을 함유하고 있다. 상기 폴리페놀은 활성 산소를 해독하여 체내의 염증수치를 낮추고 항암작용 및 심장질환의 위험도를 낮추는 역할을 한다. 카무카무에 다량으로 함유된 비타민 C는 피부 미용에 좋으며 피부 탄력을 유지하는 콜라겐 생성을 촉진하고, 피부 세포의 신진 대사를 돕는다. 또한, 기미의 원인인 멜라닌 생성을 억제하여 피부 미백효과가 있으며, 면역 체계를 강화하여 천식, 감기, 두통, 우울증 등 각종 질환을 완화하는 효과가 있다.

또한, 상기 카무카무는 칼륨을 비롯하여 비타민 B1, B2, 나이아신, 구연산, 히알루론산, 칼슘, 인, 칼륨 등 각종 미네랄 등 건강에 유효한 성분들을 많이 함유하고 있다. 히알루론산은 체내 수분을 유지하여 피부가 건조해지는 것을 방지하고, 구연산은 체내의 스트레스와 운동으로 축척 되는 젖산을 줄여주며, 항산화 작용으로 인해 진통 효과가 있다.

상기 화장료 조성물은 브라질넛 추출물, 무 추출물 및 피스타치오 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 더 포함할 수 있다.

상기 “브라질넛(Bertholletia excelsa)”는 오예과에 해당하는 나무의 씨앗으로 단단한 겉껍질 속에 백색 과육의 씨앗은 지방이 66%, 단백질이 14%를 차지하며, 초콜릿, 쿠키, 아이스크림 등에 사용된다. 원산지는 남아메리카 중에서도 브라질, 베네수엘라, 콜롬비아 동부 등이고, 아마존강, 네그루강, 타파조스강, 오리노코강 주변에서도 볼 수 있다. 브라질넛을 감싸고 있는 단단한 겉껍질을 벗겨내면 갈색의 얇은 속껍질이 있으며, 속껍질 안에는 노란빛을 띠는 흰색의 씨앗이 있다. 씨앗의 식감은 지방에서 나온 기름기로 부드러우며 약간의 단맛이 있다. 브라질넛에는 식이섬유가 풍부하여 변비 예방에 좋고, 비타민 B, C가 들어 있어 시력 회복, 피부 개선, 면역력 강화, 염증 완화에도 도움이 된다. 또한, 쎌레늄이 다량 함유되어 있어 전립선 암 예방, 생식기능 개선, 노화 방지 효과가 있다.

상기 “무(Raphanus sativus)”는 십자화과의 먹을 수 있는 뿌리 채소로 김치, 깍두기, 무말랭이, 단무지 등 그 이용이 매우 다양하다. 상기 무는 배추, 고추와 함께 3대 채소로 큰 원주형 뿌리의 윗부분은 줄기지만, 그 경계가 뚜렷하지 않다. 뿌리 잎은 1회 깃꼴겹 잎이며 어긋난다. 털이 있고 최종갈래조각이 가장 크다. 꽃 줄기는 길이 1m 정도 자란 다음 가지를 치며, 그 밑에서 총상꽃차례가 발달한다. 무새싹은 비타민이 풍부하고 전분을 소화시키는 아밀라제 작용을 한다. 상기 무의 약리 작용으로는 포도상구균 등의 항균작용, 피부 항진균작용, 혈압강하 작용, 항염작용 등이 있다.

상기 “피스타치오(Pistachia vera)”는 옻나무과에 속하며 원산지는 중앙아시아, 서앙시아, 터키, 이탈리아 등이다. 상기 피스타치오는 달걀 모양과 비슷한 타원형이고 붉은 빛을 띤 노란색이며, 과자, 아이스크림의 재료로 사용된다. 피스타치오에 함유된 지방의 90%는 불포화지방산이며, 칼륨, 철 비타민 B1, 및 각종 미네랄을 다량 함유하고 있다. 피스타치오에 함유된 천연 토코페롤은 피부 보습 효과가 있으며 뇌의 신경 세포 성장을 촉진하므로 치매 예방과 두뇌 발달에 효과적이다.

상기 화장료 조성물은 콜리플라워 추출물 및 마 추출물로 구성된 제1복합 추출물을 더 포함할 수 있다.

상기 “콜리플라워(Brassica oleracea var . botrytis)”는 브라시카 올레라케아 종에 속하며 화채, 채화, 화권심채라고도 한다. 콜리플라워의 원산지는 유럽 지중해 연안으로 제철은 가을부터 다음해 이른 봄까지이다. 비타민류가 풍부하고 특히 비타민 C는 콜리플라워 100g을 먹으면 하루에 필요한 양을 섭취할 수 있으며, 비타민 B1, B2 및 식이섬유도 양배추나 배추의 함량보다 많다. 상기 콜리플라워는 대표적인 항암식품으로 위암에 좋은데 함유된 인돌 성분이 발암물질을 무독화시키는 효능이 있다. 비타민과 미네랄 성분도 풍부하여 성인병 및 노화방지에 탁월하다.

상기 “마(Dioscorea polystachya)”는 마목 마과에 속하는 덩굴성 여러해살이 풀이며 원산지는 동북 아시아이다. 얌과 가까운 식물로, 산우, 서여, 산약이라고도 불리우는 식용 및 약용으로 사용되는 덩굴줄기이다. 상기 마는 자주빛이 돌며 잎은 삼각형 비슷하고 잎자루와 잎맥도 자주빛이 돈다. 상기 마에는 노화를 방지하는 생리활성 물질과 소화기능을 촉진시키는 전분, 아밀로스, 콜린, 사포닌, 미네랄 등이 풍부하게 함유되어 있다. 또한, 마에는 뮤신 성분이 풍부하게 함유되어 있어 보습 기능 및 항산화 효능이 있다.

상기 화장료 조성물은 해바라기씨 추출물, 마카다미아 추출물 및 호두 추출물로 구성된 제2복합 추출물을 더 포함할 수 있다.

상기 “해바라기씨(Helianthus annus)”는 아메리카가 원산이며 1년생 초본으로 높이는 2m 안팎이고 전체적으로 굳은 털이 있고 잎은 대형이고 여름과 가을에 노란색의 큰 꽃이 이삭이 가지 끝에 핀다. 씨에는 기름이 약 40%, 단백질이 20%, 탄수화물이 25% 정도 들어있고 기타 유기산(레몬산, 포도주산, 클로로겐산), 키나산, 카페산, 베타-카로티노이드 등이 함유되어 있다. 기름의 조성은 리놀산과 올레인산이 각각 34∼57% 정도이고 스테아린산과 팔미틴산이 각각 4∼5%, 미리스틴산과 아라킨산, 리놀레인산은 0.5% 이하이다. 용도는 식용, 관상용, 공업용, 약용에 쓰이고 민간에서는 씨를 식용하거나 기름을 짜내어 보익, 류마티스, 구풍, 해열 등에 민간요법으로 사용한다. 또한, 해바라기 씨에는 칼슘, 철분, 아연, 마그네슘과 같은 미네랄이 풍부하게 함유되어 있어 피로 해소, 골다공증 및 골연화증 예방, 빈혈 완화에도 도움을 준다. 상기 해바라기씨에 함유된 리놀레산(linoleic acid), 올레산(oleic acid)과 같은 불포화지방산은 혈중 콜레스테롤 수치를 감소시킬 수 있다.

상기 “마카다미아(Macadamia)”는 오스트레일리아 원산이며 높이 10~18m이다. 잎은 어긋나고 긴 타원형 또는 바소꼴로 짙은 녹색이며 윤기가 나고 가장자리에 톱니가 있다. 꽃은 분홍색이며 총상꽃차례를 이룬다. 열매는 둥글고 지름 25mm 정도이며 원형 외과피로 덮여 있고 내과피는 아주 단단하며 내과피를 제거하면 엷은 황색의 과육이 1~2개 나온다. 종자에 향기가 있고 식용유지가 들어 있다. 나무의 재질이 좋아 가구재로도 유용하지만, 과수로서의 가치가 높아 재목은 그다지 이용되지 않고 열매를 주로 이용한다. 열매는 담백한 단맛과 입에 당기는 맛으로 볶음스낵, 고급과자, 초콜릿의 재료로 또 얇게 저며서 아이스크림, 케이크 등 이용 범위가 넓다.

상기 “호두”는 가래나무과의 낙엽교목인 호두나무(Juglans sinensis)의 열매로써, 거의 원형이고 핵과(核果)이다. 호두의 단백질의 함량은 육류보다 많으며 불포화지방산을 다량 함유하고 혈청 콜레스테롤의 저하작용이 있는 필수지방산이 많아 콜레스테롤이 혈관에 불필요하게 부착하는 것을 예방해 준다. 상기 호두는 다량의 무기질 및 비타민B1로 인해, 노화 방지와 강장 효과가 있으며 신장기능을 강화하고 기억력을 증강하며 신경쇠약 치료에도 이용된다. 일반적으로 호두의 지질성분 등을 이용하여 각질층의 피부 수분 함량을 증대시킬 수 있으며, 풍부한 지질로 인해 피부 건조를 방지하고 피부를 윤택하게 해준다.

상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분으로 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다. 상기 추출물은 상기 나노클로롭시스 오세아니카를 건조 후 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득할 수 있다.

상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 석유에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 트리클로로메탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 1,3-부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있고, 구체적으로 60 내지 80% 농도(v/v)의 에탄올에 의해 추출될 수 있다.

상기 원료에 포함된 유효성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다

물과 에탄올은 극성이 상이하고 각 극성에 따라 추출되는 유효성분이 달라질 수 있으므로 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있도록 상기 에탄올의 농도를 적절히 제어할 수 있다. 이 때, 상기 에탄올의 농도가 60% 미만이면 피부 개선 효과를 나타내는 유효성분이 충분하게 추출되지 않을 수 있고, 80% 초과이면 적정한 수율이 구현되지 않을 수 있다.

상기 추출물은 추출 원료를 물로 수세한 후 건조 및 분쇄하여, 원료 중량의 8 내지 12배에 달하는 부피의 용매로 약 1 내지 24시간 동안 환류 순환 추출, 가압 추출, 초음파 추출 등 통상적인 방법으로 추출 및 여과하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 감압 증류 또는 동결 건조 등과 같은 추가적인 공정에 의해 분말 상태로 수득할 수 있다.

상기 추출물은 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물을 포함할 수 있다.

상기 추출물의 혼합 비율의 편차가 큰 경우 각 추출물의 유효성분에서 유래한 피부 개선 효과가 적절하게 구현되지 않을 수 있으므로, 작업 환경 및 최종 산물의 품질을 고려하여 혼합비율을 적절하게 제어할 수 있다. 상기 추출물은 상기 중량 범위에서 유효성분에서 유래한 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 혈행촉진 및 피부톤 개선용일 수 있다.

상기 "혈행촉진"은 피부 근처에 있는 모세혈관을 자극하여, 혈액이 모세혈관을 타고 순탄하게 흐르는 것을 의미한다. 즉, 피부 근처의 모세관의 혈액이 순탄하게 흐름으로써, 피부에 축적된 노폐물이 제거되고, 영양분 및 면역 체계가 강화되어 피부 트러블이 개선되고, 피부 결이 개선되는 효과를 수반할 수 있다.

상기 “피부톤 개선”은 피부의 색을 밝고 피부 결을 부드럽게 해주는 것을 의미하며, 상기 혈행촉진으로 인해 더욱 상승될 수 있다. 상기 피부톤은 멜라닌 색소에 영향을 받기 때문에 상기 피부톤 개선 효과는 피부 미백 효과가 동반될 수 있다. 상기 피부 미백 효과는 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미한다.

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다

상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

제조예 1 : 수소수의 제조

본 실시예는 수돗물, 지하수, 용천수 및 용암해수를 채수하여 보급되는 전기분해식 수소수 제조기로 제조하였다. 상기 수소수 제조기는 수소가 방출되지 않는 아루미늄 제질이며, 음극부와 양극부로 나누어져 음극부에서 수소가 생성된다.

수돗물, 지하수, 용천수 및 용암해수를 원수로 하여 수소수 제조기로 수소수를 제조하였고, 용존수소측정기(ENH-1000)을 이용하여 각각의 용존 수소 함량을 측정하였다.

원수	용존 수소 함량 ( ppb )
수돗물	1,023
지하수	1,122
용천수	1,489
용암해수	1,602

상기 표 1에 따르면, 수돗물, 지하수, 용천수 및 용암해수를 원수로 제조된 수소수 중에서 용암해수를 원수로 제조된 수소수의 용존 수소 함량이 가장 높았으며, 본 발명의 실시예에서는 상기 용암해수를 원수로 제조된 수소수를 사용하였다.

제조예 2 : 천연 추출물의 제조

카무카무, 브라질넛, 무 및 피스타치오를 수세한 후 상온에서 완전히 건조시키고 분쇄하여 분쇄물을 각각 100g씩 수득하였다.

콜리플라워 및 마를 수세한 후 상온에서 완전히 건조시키고 분쇄하여 분쇄물을 각각 100g씩 수득하여 혼합하고, 제1복합 추출물의 원료로 하였다.

해바라기씨, 마카다미아 및 호두를 수세한 후 상온에서 완전히 건조시키고 분쇄하여 분쇄물을 각각 100g씩 수득하여 혼합하고, 제2복합 추출물의 원료로 하였다.

각 분쇄물 및 원료에 대해 각각 10배 부피의 에탄올 수용액(70% w/w)를 용매로 하여 50℃의 온도에서 12시간 동안 침적 추출하였다.

상기 추출물을 250메쉬 및 0.5㎛ 필터로 여과한 후 잔여 원료에 대해 동일한 방법으로 3회 반복 추출하였으며, 30℃에서 감압 농축하고, 동결 건조하여 천연 추출물의 고형분을 수득하였다.

실시예 및 비교예

수득한 추출물 및 발효 추출물의 혈행 촉진 및 피부 개선 효과를 검증하고자 하기 표 2과 같이 시료를 혼합하여 실시예 및 비교예를 설정하였다.

이 때, 수소수의 원수를 달리하여 원수에 따른 수소수의 피부개선 효과를 비교하였다.

[함량(중량부)]

구분	실시예										비교예
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	1	2	3	4	5	6
정제수	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	70	-	-	-	-	-
수소수 (용암해수)	70	70	70	70	70	70	70	-	-	-	-	70	70	70	70	70
수소수 (지하수)	-	-	-	-	-	-	-	70	-	-	-	-	-	-	-	-
수소수 (용천수)	-	-	-	-	-	-	-	-	70	-	-	-	-	-	-	-
수소수 (수돗물)	-	-	-	-	-	-	-	-	-	70	-	-	-	-	-	-
카무카무 추출물	30	15	15	15	7.5	6	5	30	30	30	30	-	-	-	-	-
브라질넛 추출물	-	15	-	-	7.5	6	5	-	-	-	-	30	-	-	-	-
무 추출물	-	-	15	-	7.5	6	5	-	-	-	-	-	30	-	-	-
피스타치오 추출물	-	-	-	15	7.5	6	5	-	-	-	-	-	-	30	-	-
제1복합 추출물	-	-	-	-	-	6	5	-	-	-	-	-	-	-	30	-
제2복합 추출물	-	-	-	-	-	-	5	-	-	-	-	-	-	-	-	30

실험예 1 : 피부 안전성 시험

실시예 및 비교예의 시료에 대한 피부 안전성을 검증하기 위해, 섬유아세포(HDF), 멜라닌형성세포(B16F10), 각질세포(HaCaT)에 대한 MTT assay 실험을 수행하였다.

실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 0, 1, 5, 10, 20, 50 및 100μg/mL의 농도별로 각각 현탁한 후, 세포 생존율을 측정하였다.

세포 독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide} 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 모스만(Mosmann)의 방법을 변형하여 수행하였다.

섬유아세포(HDF), 멜라닌형성세포(B16F10), 및 각질세포(HaCaT)를 각각 96-웰 플레이트에 1×10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5 % CO₂에서 48시간 동안 배양하였다.

배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 48시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS(Phosphate buffered saline)로 반복 세척하였다.

MTT를 5mg/mL 로 PBS에 녹여 50L 첨가하고 37℃, 5%의 CO₂에서 48시간 동안 배양하였다. DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 한 웰(well) 당 100L 넣고, 10분 동안 교반한 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

측정 결과, 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 확인되지 않았다. 상기 결과는 상기 시료가 인체에 무해할 뿐만 아니라 인체 안전성이 우수함을 시사한다.

실험예 2 : 피부 혈행 촉진 효과

실시예 및 비교예에서 수득된 시료를 포함하는 화장료 조성물의 피부 혈행 촉진 효과를 평가하였다. 상기 각 시료를 동일한 조성의 크림으로 제형화하였으며, 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 6의 시료만을 달리하였다.

여성 10명에 대하여 제형화한 실시예 및 비교예의 크림을 적용하고 혈행 촉진 정도를 평가하고 평균값을 구하였다(표 3). 도렉스(DOREX)사의 컴퓨터 적외선 체열감지기(Digital Infrared Thermographic Imaging; DITI)를 이용하여 0분, 5분, 10분 간격으로 체열을 측정하였으며, 시험 장소는 20±2℃의 온도, 40∼60%의 습도를 유지시켰다.

[피부 체열 온도]

구분	0 분	5 분	10 분
실시예 1	25℃	24.3℃	25.3℃
실시예 2	25℃	24.3℃	25.4℃
실시예 3	25℃	24.1℃	25.5℃
실시예 4	25℃	24.2℃	25.3℃
실시예 5	25℃	24.4℃	25.5℃
실시예 6	25℃	24.1℃	25.9℃
실시예 7	25℃	24.4℃	26.1℃
실시예 8	25℃	24.3℃	25.1℃
실시예 9	25℃	24.1℃	24.9℃
실시예 10	25℃	24.2℃	25.2℃
비교예 1	25℃	24.3℃	24.4℃
비교예 2	25℃	24.3℃	24.6℃
비교예 3	25℃	24.1℃	24.3℃
비교예 4	25℃	24.2℃	24.5℃
비교예 5	25℃	24.4℃	24.4℃
비교예 6	25℃	24.2℃	24.4℃

표 3을 참조하면, 실시예 1 내지 7의 시료를 도포한 피부는 체열이 약간씩 상승하였으며, 이는 도포한 시료에 의해 혈행이 촉진되었음을 시사한다.

특히, 실시예 1 및 비교예 1을 비교하면, 수소수가 첨가됨으로써 혈행 촉진 효과가 더욱 개선되었으며, 수소수에 의해 효과가 현저히 증대되었다.

실험예 3 : 피부 혈행 촉진에 의한 피부색 개선 효과 평가

실시예 및 비교예에서 수득된 시료를 포함하는 화장료 조성물의 피부색 개선 효과를 평가하였다. 실시예 및 비교예의 시료를 동일한 조성의 크림으로 제형화하였으며, 실시예 1 내지 10, 비교예 1 내지 6의 시료만을 달리하였다.

20 내지 60세 여성 중 선정된 160명에 대하여 제형화한 실시예 및 비교예의 크림을 적용하고 피부색 개선 정도를 평가하였다.

여성 160명에 대하여, 10명씩 16개의 조로 나누고 상기 제형화한 크림을 온도 24 내지 26℃, 습도 75% 조건에서 매일 2회씩 12주간 안면에 전체에 도포시켰으며, 전문가의 육안 평가를 통해 피부색 개선효과를 평가하였다(표 4).

구분	현저히 개선 (명)	약간의 개선 (명)	개선 없음 (명)
실시예 1	5	3	2
실시예 2	7	2	1
실시예 3	7	2	1
실시예 4	6	3	1
실시예 5	7	2	1
실시예 6	8	1	1
실시예 7	9	1	-
실시예 8	4	4	2
실시예 9	3	5	2
실시예 10	4	3	3
비교예 1	1	1	8
비교예 2	2	1	7
비교예 3	2	2	6
비교예 4	2	1	7
비교예 5	3	1	6
비교예 6	2	1	7

표 4를 참고하면, 1 내지 10의 시료는 비교예 1 내지 6의 시료와 비교하여 피부색 개선 효과가 현저히 우수한 것으로 평가되었다.

특히, 실시예 1 및 비교예 1을 비교하면, 수소수가 첨가됨으로써 피부색 개선 효과는 현저히 증대되었다.

실험예 4 : 멜라닌 생성량 평가

멜라민 함량 분석(melanin contents assay)를 통해 실시예 및 비교예의 시료에 의한 멜라닌형성(melanogenesis) 저해능을 평가하였다(Eisinger M et al, 1982; Siegrist W and Eberle AN, 1986). 실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 50mg/L 농도로 각각 현탁한 후 멜라닌 생성량을 평가하였다.

60 mm culture dish에 B16F10 세포를 1.5x10⁵ cells/well의 농도로 접종한 후 24시간 동안 배양하였다. 멜라닌 형성을 촉진하는 호르몬인 α-MSH(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)와 실시예 및 비교예의 시료를 50mg/L 농도로 배지에 투입하였다(Virador VM et al, 1999).

48시간 경과 후, 세포를 수확하여 PBS로 1회 세척한 후, 1N NaOH lysis buffer 120μL를 넣고 95℃에서 10분간 가열하여 세포를 용해하였다. microplate reader를 이용하여 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였으며, 대조군으로 100μg/mL 농도의 알부틴(arbutin)을 사용하였다.

하기 수학식에 따라 멜라닌 생성 억제율을 산출하였으며, 평과 결과는 하기 표 5와 같다.

[수학식]

멜라닌 생성 억제율(%) = 100 x (1 - (각 시험물질의 흡광도 / 대조군의 흡광도))

구분	멜라닌 생성 억제율(%)
실시예 1	27.6
실시예 2	32.2
실시예 3	31.7
실시예 4	30.3
실시예 5	34.7
실시예 6	36.5
실시예 7	39.3
실시예 8	24.6
실시예 9	25.9
실시예 10	23.6
비교예 1	10.6
비교예 2	13.5
비교예 3	14.2
비교예 4	15.2
비교예 5	16.5
비교예 6	17.6
양성대조군	36.4

실시예 1 내지 10의 시료는 멜라닌의 생성을 효과적으로 억제하였으며, 미백 효과가 널리 알려진 알부틴과 비교하여 멜라닌 생성을 동등하거나 더욱 높은 수준으로 저해하였다.

특히, 실시예 1 및 비교예 1을 비교하면, 수소수가 첨가됨으로써 멜라닌 생성 억제 효과는 더욱 개선되었으며, 미백 효과가 현저히 증대되었다.

또한, 용암해수를 원수로 하는 수소수(실시예 1)는 지하수, 용천수, 수돗물을 원수로 한 실시예 8 내지 10과 비교하여 멜라닌 생성 억제 효과가 상대적으로 우수하였으며, 제1복합 추출물 및 제2 복합 추출물의 첨가에 의해 멜라닌 생성 억제 효과는 더욱 개선되었다.

실험예 5 : 자유라디칼 소거 활성 평가

실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 현탁(농도 10%)하여 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)을 평가하였다.

DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 540nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다.

대조군으로서 디부틸히드록시톨루엔(BHT, Dibutyl hydroxy toluene)을 이용하여 자유라디칼 소거 활성을 명확히 비교하였다. 디부틸히드록시톨루엔은 무색의 결정, 또는 백색의 결정성 분말로 항산화 효과가 우수하여 식용유지, 유지성 식품의 산화방지제로 널리 사용되고 있다.

실험의 정확도를 위하여 동일한 실험을 3회 반복하였으며, 결과는 하기 표 6과 같다.

[% of control]

구분	DPPH radical scavenging activity(%)
실시예 1	121.3
실시예 2	125.6
실시예 3	126.7
실시예 4	128.2
실시예 5	132.8
실시예 6	135.2
실시예 7	138.4
실시예 8	118.5
실시예 9	117.3
실시예 10	116.7
비교예 1	109.6
비교예 2	112.5
비교예 3	111.5
비교예 4	106.7
비교예 5	108.2
비교예 6	112.1
양성대조군	133.4

표 6을 참조하면, 실시예 1 내지 10의 자유라디칼 소거활성은 비교예 1 내지 6과 비교하여 현저히 우수하였다.

자유라디칼 소거활성이 높을수록 항산화 효과가 뛰어난 것으로 평가할 수 있으며, 특히, 수소수 및 카무카무 추출물에 브라질넛 추출물, 무 추출물, 피스타치오 추출물, 제1복합 추출물 및 제2복합 추출물을 적용한 실시예 2 내지 7의 시료는 실시예 1과 비교하여 항산화 효과가 더욱 우수하였다.

또한, 용암해수를 원수로 하는 수소수(실시예 1)는 지하수, 용천수, 수돗물을 원수로 한 실시예 8 내지 10과 비교하여 항산화 효과가 상대적으로 우수하였다.

실험예 6 : 피부 보습 효과 시험

실시예 및 비교의 시료를 정제수에 현탁하여 50mg/L 농도로 희석하고 피부 보습 효과를 평가하였다.

인간각질형성세포주(Keratinocytes)에서 피부보습에 관여하는 HAS2 유전자 및 AQP3 유전자의 발현정도를 mRNA 수준에서 측정하였다.

인간 각질세포(HaCaT)를 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), 10% Fatal bovine serum(FBS), 1% Antibiotic-Antimycotic과 함께 100mm/60.1cm culture dish에서 37℃, 5% CO₂의 조건으로 배양하였다.

각질세포를 1.0x10⁶ 세포/mL농도로 96 웰 플레이트에 분주하여, 24시간 동안 배양하였다. DMEM free 배지로 교환 후 소정의 농도로 희석한 실시예 및 비교예의 시료를 처리하고 24시간 동안 배양하였다.

세포를 회수하여 냉각된 인산완충용약(PBS)로 세척하고 트리졸 시약[TRIzol™reagent, 라이프 테크놀로지스, 인크(Life Technologies, Inc.)] 1ml를 첨가하고 총 RNA를 추출하였다.

유전자 발현 변화는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에서 증폭되는 DNA 산물에 형광물질을 결합하고 형광물질을 지속적으로 검출하는 qRT-PCR(quantitative real time PCR)로 측정하였다.

HAS2 및 AQP3 유전자 발현의 변화를 정량하고자 SYBR green Ⅰ(Invitrogen)을 통해 PCR 산물이 발산하는 형광값을 측정하였다. PCR tube에 0.2μM 프라이머, 50mM KCl, 20mM Tris/HCl pH 8.4, 0.8mM dNTP, 0.5U Extaq DNA polymerase, 3mM MgCl₂, 1×SYBR green을 혼합하여 반응액을 제조하였다.

Linegene K(BioER, China)를 이용하여 94℃에서 3분 동안 예비적 변성(primary denaturation) 시킨 후 변성(denaturation), 어닐링(annealing), 중합(polymerization)을 94℃에서 30초, 58℃에서 30초, 72℃에서 30초로 총 40 cycle을 수행하였고, 매 cycle 이 종료된 후 형광강도를 측정하였다.

PCR 결과는 각 결과별 melting curve로 검증하였다. 각 유전자의 threshold cycle(Ct)값을 β-actin의 Ct값으로 표준화한 후, Ct값의 변화량을 비교하여 분석하였다.

Ct값은 PCR 산물에 의해 발생하는 형광의 양(증폭된 PCR 산물의 수)이 기본 값 이상의 일정한 기준 값에 도달했을 때의 cycle 수로서 Ct값을 통하여 유전자 발현량을 확인할 수 있다. 실험에 사용한 프라이머 서열은 하기 표 7과 같다.

Gene	정방향 프라이머	역방향 프라이머
HAS-2	5'-TTTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG-3'	5'-ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAAGGG-3'
AQP3	5′- ACCCTCATCCTGGTGATGTTTG-3′	5′- TCTGCTCCTTGTGCTTCACAT-3′

HAS2 및 AQP3 mRNA 발현량 측정 결과는 하기 표 8과 같다. mRNA 발현량은 상기 추출물의 처리에 따라 중가하였으며, HAS2 및 AQP3 발현 촉진능이 높을수록 피부 보습 효과가 우수한 것으로 평가할 수 있다.

[% of control]

구분	HAS2 발현량	AQP3 발현량
실시예 1	122.4	134.0
실시예 2	128.3	138.6
실시예 3	126.2	137.2
실시예 4	130.3	138.4
실시예 5	134.8	142.8
실시예 6	137.6	144.7
실시예 7	141.2	149.6
실시예 8	119.4	130.4
실시예 9	117.5	130.9
실시예 10	118.7	127.9
비교예 1	108.3	112.6
비교예 2	112.2	117.1
비교예 3	113.9	117.9
비교예 4	112.5	120.4
비교예 5	114.2	115.8
비교예 6	113.7	117.1

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

1. 수소수, 카무카무 추출물 및 브라질넛 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행촉진 및 피부톤 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 수소수는 수돗물, 지하수, 용천수 및 용암해수로 이루어진 군에서 하나 이상 선택된 원수로 제조한 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   무 추출물 및 피스타치오 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 더 포함하는 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   콜리플라워 추출물 및 마 추출물로 구성된 제1복합 추출물을 더 포함하는 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   해바라기씨 추출물, 마카다미아 추출물 및 호두 추출물로 구성된 제2복합 추출물을 더 포함하는 화장료 조성물.
6. 삭제
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물이 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 제형화된 화장료 조성물.