CN117398318B - 一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物及其应用 - Google Patents
一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于护肤品技术领域，公开了一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物及其应用，该含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，包括0.1‑5份山茶籽油、0.001‑0.1份巴西果籽提取物和0.08‑10份酵母菌发酵溶胞产物滤液，本发明还提供了一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物的应用，应用于沐浴油，该沐浴油含有上述的含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，还含有油脂和表面活性剂。本发明通过山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者的复配，产生了协同作用，进一步增强了皮肤的保湿、抗炎和皮肤屏障修护能力。
Description
技术领域
本发明涉及护肤品技术领域，具体涉及一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物、婴童沐浴油及其制备方法。
背景技术
随着时代的发展，人们越来越注重婴幼儿的健康成长，而婴童皮肤的健康是其中一道较为重要的关卡。
婴童皮肤与成人有较大差异，具有以下特点：(1)婴童角质层厚度比成人薄30％，表皮层比成人薄20％～30％，皮肤屏障功能较弱，且免疫功能发育不完全，对环境中的有害物质和过敏物质反应强烈，对病菌的抵抗能力较弱，因此容易引发各种皮肤病菌感染，发生刺激、过敏和炎症；(2)婴童皮肤角质细胞小，脂质总含量低，角质层“砖墙结构”不完善，且皮肤中NMF(天然保湿因子)含量较低，因此保湿锁水能力较差，难以防止组织内的水分、各种营养成分、电解质和其他物质的流失；(3)婴童皮肤较薄，黑色素含量少，无法抵御紫外线的伤害，在日光中暴露时容易被晒伤。
针对以上婴童皮肤的问题，需要研发出一种适用于婴童的护肤组分，以提高婴童的皮肤健康。
D1：中国专利申请202210866438.2公开了一种深度修护精华液，包括如下质量分数的组分：酵母菌发酵溶胞产物滤液8～10份；视黄醇棕榈酸酯8～10份；植物提取物20～30份；乳化剂5～10份；抗氧剂10～15份；保湿剂8.5～16份；防腐剂1.5～3.5份；溶剂45～85份。
上述专利申请基于酵母菌发酵溶胞产物滤液酵母菌发酵溶胞产物滤液和视黄醇棕榈酸酯提供的调理作用外，从各个方面添加与其相适应的其他组分，以保证深度修护精华液的修护稳定性。
上述专利申请中的酵母菌发酵溶胞产物滤液能够有效调节过剩的皮脂，令皮肤油水平衡，不泛油光；抑制酪氨酸酶活性，消除晦暗肤色；还可以保持肌肤的正常弹性，使肌肤变得平顺、细致，抚平脸部滋生的小细纹；富含天然保湿因子，促使角质层能更有效保持水分，给予肌肤深度润泽，防止肌肤干燥；细胞原液还可恢复和改善日晒后的红热现象。
上述专利申请由于是修护精华液，不适用于婴童阶段的皮肤护肤，但是上述专利申请采用的酵母菌发酵溶胞产物滤液是一种较好的护肤原料，可以围绕该组分进行复配，研发出一种适用于婴童的护肤产品。
D2：中国专利201710114073.7公开了一种抗菌组合物及含有山茶籽油的保湿修复组合物，所述抗菌组合物包括如下组分：青蒿提取物、山鸡椒果提取物、广藿香提取物、香茅提取物。所述保湿修复组合物包括如下组分：山茶籽油、神经酰胺、植物甾醇油酸酯、青蒿提取物、山鸡椒果提取物、广藿香提取物、香茅提取物、山茶花提取物和山茶叶提取物。
上述专利的优势在于：通过生理性脂质(神经酰胺、植物甾醇、山茶籽油)的最佳配比，易于和角质细胞连接，使角质屏障具有较好的连续性，加强“砖墙结构”；与常规的保湿机理不同，不添加任何化学吸湿性原料，从纯油保湿角度，任何湿度条件下不会从皮肤内部吸收水分，从根本上解决皮肤屏障修复问题。
同样的，由于上述专利采用了神经酰胺等组分，这些组分是需要谨慎用在婴童身上的，如果没有医生的指导，可能会对婴童的发育造成影响，因此需要针对婴童的皮肤特点进行研发，研发出一种适用于婴童的护肤组合物及产品，从而提高婴童的肌肤保湿、抗炎和皮肤屏障修护能力。
发明内容
本发明的目的之一在于，提供一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，该组合物适用于婴童护肤，以解决现有技术中没有针对婴童的皮肤保湿、抗炎和增强皮肤屏障研发出一种适用于婴童护肤的组合物和产品的技术问题。
本发明另一目的在于，提供一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物的应用，应用与沐浴油，该沐浴油以上述的含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物为核心组分，针对婴童的皮肤特点有效提高婴童的皮肤保湿、抗炎和皮肤屏障修复能力。
同时，本发明还提供了一种沐浴油的制备方法，制备出一种适用于婴童的沐浴油，有效提高婴童的皮肤保湿、抗炎和皮肤屏障修复能力。
为实现上述目的，本发明提供了一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，按重量份数计，包括0.1-5份山茶籽油、0.001-0.1份巴西果籽提取物和0.08-10份酵母菌发酵溶胞产物滤液。
优选的，所述山茶籽油为2-5份，所述巴西果籽提取物为0.02-0.04份，所述酵母菌发酵溶胞产物滤液为1.8-10份。
优选的，还包括溶剂A和溶剂B，所述巴西果籽提取物溶于溶剂A中，所述酵母菌发酵溶胞产物滤液溶于溶剂B中，所述溶剂A包括水和甘油，所述溶剂B包括1，2-己二醇、对羟基苯乙酮和乙基己基甘油。
本发明还提供了一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物的应用，应用于沐浴油，该沐浴油含有上述的含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，还含有油脂和表面活性剂。
优选的，上述的沐浴油，按重量份数计，包括如下组分：
山茶籽油0.1-5份
增强皮肤角质屏障组分0.1-3份
保湿组分0.1-10份
表面活性剂8-45份
油脂45-95份
其中，增强皮肤角质屏障组分包括巴西果籽提取物、水和甘油，所述增强皮肤角质屏障组分中巴西果籽提取物的含量为2％；保湿组分包括酵母菌发酵溶胞产物滤液、1，2-己二醇、对羟基苯乙酮和乙基己基甘油，所述保湿组分中酵母菌发酵溶胞产物滤液的含量为98.7％。
优选的，按重量份数计，所述山茶籽油为2-5份，所述增强皮肤角质屏障组分为1-3份，所述保湿组分为2-10份。
进一步的，所述表面活性剂为PEG-20甘油三异硬脂酸酯、PEG-7甘油椰油酸酯、橄榄油PEG-7酯类、月桂醇聚醚硫酸酯MIPA盐、月桂醇聚醚硫酸酯TIPA盐、月桂醇聚醚-3、月桂醇聚醚-4、山梨醇聚醚-30四油酸酯中的至少一种。
进一步的，所述油脂为棕榈酸乙基己酯、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、异壬酸异壬酯、氢化聚异丁烯、矿油、辛酸/癸酸甘油三酯、霍霍巴(SIMMONDSIACHINENSIS)籽油中的至少一种。
同时，本发明还提供了一种上述的沐浴油的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将山茶籽油、表面活性剂、油脂搅拌均匀形成组分A；
步骤2：继续搅拌步骤1得到的组分A，并维持搅拌过程中缓慢加入增强皮肤角质屏障组分和保湿组分，搅拌均匀后得到所述婴童沐浴油。
优选的，所述步骤2中将物料搅拌至物料变为澄清透明即得所述沐浴油。
有益效果
与现有技术相比，本发明至少具备以下优势：
(1)本发明采用的山茶籽油富含生育酚、角鲨烯等天然抗氧化剂，以及山茶苷、茶皂素等活性物质，不饱和脂肪酸含量高达90％，具有清除自由基、有效抗氧化和促进胶原蛋白合成等功效；山茶籽油能够通过抑制下调iNOS、COX-2和TNF-α等促炎因子的含量及活性，从而减少NO、PEG2等炎症介质的生成，起到抗炎舒敏的效果；此外山茶籽油还具有修护皮肤屏障、养护毛发的功效；
(2)本发明采用的巴西果籽提取物通过三重修护增强皮肤屏障：①促进与皮肤脂质代谢相关的重要酶和蛋白质表达，促进磷脂、胆固醇等脂质的合成，增加“砖墙结构”中的“灰浆”；②促进与表皮细胞分化有关的Kazrin蛋白的合成，促进角蛋白细胞分化，增加角质层中的“砖”；③促进肌动蛋白微丝和角蛋白-10的合成，增强细胞骨架，提供更高的细胞硬度；三重修护从而增强角质屏障，有效降低TEWL值，减少皮肤泛红刺激；
(3)本发明采用的酵母菌发酵溶胞产物滤液具有细胞保护和修复效果，能够有效保护细胞免于紫外线辐射引起的损伤；同时含有赖氨酸、丙氨酸、亮氨酸等多种氨基酸，为皮肤提供丰富营养物质的同时，作为天然保湿因子(NMF)的有效成分，能够提高肌肤保湿能力；
(4)本发明通过山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者的复配，产生了协同作用，进一步增强了皮肤的保湿、抗炎和皮肤屏障修护能力；
(5)本发明公开了一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物的应用，应用于沐浴油，针对婴童的皮肤特点进行全方位的护肤，有效提高婴童的皮肤屏障功能、完善婴童的角质层“砖墙结构”提高皮肤保湿锁水能力、舒敏抗炎能力。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步的描述，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求范围所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求范围内。
为了详细说明本发明的技术内容，以下结合实施方式作进一步说明。
以下实施例和对比例中，山茶籽油采用的是广州瑞誉化工科技有限公司供应、BioSpectrum,Inc.生产的Dongbaek(Tsubaki)Oil；巴西果籽提取物采用的是广州瑞誉化工科技有限公司供应、BioSpectrum,Inc.生产的Ethience Protect，该原料含有水、甘油和巴西果籽提取物，其中巴西果籽提取物的含量为2％；酵母菌发酵溶胞产物滤液采用的是广州瑞誉化工科技有限公司供应、江苏瑞霆生物科技有限公司生产的瑞芝润，该原料含有酵母菌发酵溶胞产物滤液、1，2-己二醇、对羟基苯乙酮和乙基己基甘油，其中酵母菌发酵溶胞产物滤液的含量为98.7％。
白池花籽油采用的是广州华图化妆品科技有限公司供应、ElementisSpecialties,Inc.生产的HTMOL MEADOWFOAM SEED OIL，其中白池花籽油的含量为100％；马齿苋提取物采用的是广州瑞誉化工科技有限公司供应、BioSpectrum,Inc.生产的HerbExPortulaca Extract，其中马齿苋提取物的含量是2％；二裂酵母发酵产物溶胞产物采用的是广州优然生物科技有限公司供应、安琪酵母股份有限公司生产的修复因子FL01，其中二裂酵母发酵产物溶胞产物的含量是98.7％；巴西果籽油采用的是上海亘材贸易发展有限公司供应、
西班牙TEXTRON生产的Brazil Nut Oil，巴西坚果油的含量是100％；杏仁提取物采用的是兰州沃特莱斯生物科技有限公司生产的杏仁提取物，其中杏仁提取物含量为10％；澳洲坚果籽油采用的是广州市百好博有限公司供应、Vantage SpecialtyChemicals,Inc.生产的LipovolTMMAC-Ternifolia，其中澳洲坚果籽油的含量是100％。
需要说明的是，本发明的核心组分为山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液，水、甘油、1，2-己二醇、对羟基苯乙酮和乙基己基甘油为相应的溶剂，因此本发明的技术方案可通过其他市售产品实现，而不仅仅限于上述厂家提供的原料。
需要特别说明的是，巴西果籽提取物与巴西坚果油均从巴西坚果原料中提取得到，由于化妆品目录上巴西坚果的水溶性提取物学名为巴西果籽提取物，因此本发明的技术方案巴西坚果的水溶性提取物写为巴西果籽提取物。
按照以下制备方法和表1的配方配置出婴童沐浴油，各物质的用量用重量份数表示；
制备方法：
步骤1：按照表1配方将油溶性原料(山茶籽油、白池花籽油、巴西坚果油、澳洲坚果油)与PEG-20甘油三异硬脂酸酯、PEG-7甘油椰油酸酯、棕榈酸乙基己酯加入搅拌锅中搅拌均匀；
步骤2：保持搅拌，将配方中对应的水溶原料性(巴西果籽提取物、杏仁提取物、瑞芝润、二裂酵母发酵产物溶胞产物、马齿苋提取物)边搅拌边缓慢加入搅拌锅中，搅拌均匀直至澄清透明，得到婴童沐浴油。
表1沐浴油配方表
性能测试
将实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴油进行以下测试；
1、抗炎功效测试
NO含量测定实验
(1)实验原理：
巨噬细胞被LPS或IFN-γ激活后，在NO合成酶的作用下利用L-精氨酸合成NO。合成NO是激活的巨噬细胞的共同特征。LPS激活巨噬细胞释放NO的过程会伴随前列腺素、TNF等物质的合成与释放，从而导致机体抗炎和抗菌一系列免疫连锁反应的发生。LPS诱导RAW264.7是探究炎症机理的经典细胞模型，通过对比空白对照组、阴性对照组与待测样品组给药24h孵育后NO的含量差异，评价待测样品抑制NO的作用。NO含量的检测原理是经典的Griess法：NO在体内或水溶液中极易氧化为NO2 2-离子和NO3 3-离子，NO2 2-离子在碱性条件下和磺胺作用生成重氮化合物(重氮盐)，再与N-1-萘基乙二胺盐酸进行偶联反应(保留氮反应)，生成有颜色的化合物，通过检测波长540nm下的吸光度，计算NO含量。
(2)实验方法：
空白对照组：不加入LPS刺激诱导物和待测样品；
阴性对照组：加入LPS刺激诱导物但不加入待测样品；
实验组：加入LPS刺激诱导物和待测样品。
将RAW264.7细胞以2×105个/ml密度接种于96孔板，100μl/孔，在37℃,5％CO2培养箱中孵育24h。根据设置好的空白对照组、阴性对照组及实验组，在实验组中每孔分别加入待测样品，在37℃,，5％CO2培养箱中孵育2h。除空白对照组外，在阴性对照组和每个实验组中每孔加入LPS刺激诱导物，再于培养箱中继续孵育24h。
取50μL孵育完的细胞培养上清液，再分别加入室温的Griess Reagent I与GriessReagentⅡ各50μL，用酶标仪于540nm处测定吸光度，可得NO积累量。
NO抑制率(％)＝【(阴性对照组NO积累量-空白对照组NO积累量)-(实验组NO积累量-空白对照组NO积累量)】/阴性对照组NO积累量*100％
将实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴油作为待测样品进行抗炎功效测试，结果如表2所示；
表2实施例1-7和对比例1-9的沐浴油抗炎功效数据表
| 组别 | NO抑制率(％) | 统计学分析 |
| 实施例1 | 11.79 | p<0.05 |
| 实施例2 | 31.25 | p<0.05 |
| 实施例3 | 57.75 | p<0.05 |
| 实施例4 | 61.38 | p<0.05 |
| 实施例5 | 67.92 | p<0.05 |
| 实施例6 | 61.50 | p<0.05 |
| 实施例7 | 61.32 | p<0.05 |
| 对比例1 | 15.77 | p<0.05 |
| 对比例2 | 42.18 | p<0.05 |
| 对比例3 | 41.76 | p<0.05 |
| 对比例4 | 36.17 | p<0.05 |
| 对比例5 | 43.98 | p<0.05 |
| 对比例6 | 40.87 | p<0.05 |
| 对比例7 | 46.67 | p<0.05 |
| 对比例8 | 38.44 | p<0.05 |
| 对比例9 | 42.53 | p<0.05 |
根据表2结果可知：
由实验数据可知，与阴性对照组相比，实施例1～7所制备的组合物均能明显抑制LPS诱导的NO的生成，且随着组合物含量增加，对NO的抑制率明显提升。
其中实施例4、实施例6和实施例7的NO抑制率接近，说明山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液组合物配比相同的情况下，表面活性剂和油脂的用量对NO抑制率没有明显影响。
上述结果说明实施例1～7所制备的组合物均具有一定抗炎作用，其中实施例3～实施例7抗炎效果都比较好，超过50％，而乳化剂和基础油脂对抗炎效果没有明显影响，实施例5抗炎效果最好，但是相比于实施例4的NO抑制率增幅明显开始降低，说明山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液组合物的复配用量超过一定的范围后其协同抗炎功效达到了峰值，采用再多的用量不会带来显著的抗炎效果，反而增加了生产成本，实施例4是本发明基于抗炎功效和生产成本平衡的较为优选的技术方案。
同时根据实施例3和实施例4的对比发现，在本发明的婴童沐浴油配方里，在一定的用量范围内，酵母菌发酵溶胞产物滤液的增加对沐浴油抗炎功效的提升明显，说明在本发明的技术方案中，酵母菌发酵溶胞产物滤液是一个较为重要的组分，它在一定范围内的用量影响着山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液的协同作用。
根据实施例3和对比例1、对比例2、对比例3的数据对比可知，去掉山茶籽油后对比例1的NO抑制率明显降低，这是由于山茶籽油在本发明的技术方案中起到的抗炎功效较为明显，山茶籽油中富含生育酚、角鲨烯等天然抗氧化剂，以及山茶苷、茶皂素等具有抑菌抗炎功效的活性物质，能够通过调节NF-κB免疫通路，抑制下调iNOS、COX-2和TNF-α等促炎因子的含量及活性，从而减少NO、PEG2等炎症介质的生成，起到抗炎舒敏的效果；而去掉巴西果籽提取物或者酵母菌发酵溶胞产物滤液后，婴童沐浴油的抗炎效果也有明显的降低，基于对比例2和对比例3都增加了0.5份的山茶籽油，按照对比例1的结果，理论上对比例2和对比例3的抗炎效果应该比实施例3有明显的提升，但是实际上实施例3的抗炎效果更为明显，原因在于，本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液复配产生了协同作用，能够显著提高抗炎功效。
根据实施例3和对比例4、对比例5、对比例6的数据对比可知，本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液复配的技术方案具有协同增效的皮肤抗炎效果，采用其他功效类似的原料来替代复配虽然也含有较好的抗炎功效，但是失去了本发明三种组分的复配协同作用，其抗炎功效显著降低；在同等的配比下，本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者搭配能够达到的抗炎效果更为突出。
根据实施例3和对比例7的数据对比可知，同样采用来自巴西坚果作为来源，巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配带来的抗炎功效明显高于巴西坚果油与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液的复配，说明巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液产生了显著的协同效果；其原因可能是巴西果籽提取物是水溶性提取物，其成分与巴西坚果油并不相同，因此其与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配的效果协同是巴西坚果油不能带来的。
而根据实施例3和对比例7、对比例8的数据对比可知，采用同样是水溶性的坚果类提取物杏仁提取物并不能有效提高沐浴油的NO抑制率，说明本发明的技术方案带来的协同增效的抗炎功效并不是单纯采用水溶性坚果类提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配带来的，是巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配产生的协同效果。
同样的，根据实施例3和对比例9的数据对比可知，采用澳洲坚果油与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配其发挥的抗炎功效明显弱于巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配，因此说明巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配具有协同作用，进一步提高沐浴油的抗炎功效。
2、UV光细胞保护测试
斑马鱼尾鳍皱缩抑制率法
(1)实验原理
人体皮肤出现皱纹、老化的重要原因之一是皮肤结构中胶原蛋白、弹性蛋白的减少。斑马鱼皮肤结构与人体皮肤结构相似，以过量紫外线照射时，可导致皮肤中的胶原蛋白、弹性蛋白减少，表现为尾鳍皮肤皱缩。添加待测样品后，通过测量紫外线照射后幼鱼尾鳍面积的变化，计算尾鳍皱缩抑制率，可以分析待测样品对斑马鱼尾鳍变形的保护程度，从而评价其UV光细胞保护功效。
(2)实验方法
试验体系：野生型AB品系斑马鱼。
斑马鱼鱼龄：受精后2天(2dpf)。
每组实验样本量：15尾(N＝10)。
1.随机选取生长发育基本一致的斑马鱼于6孔板中，每孔15尾。
2.设置样品组、正常对照组和模型对照组，对样品组给予经过稀释至对斑马鱼安全的浓度的样品，每孔容量为3mL。
3.在紫外线下进行3次照射，建立光损伤模型，每次照射时间为15min，每次照射间隔30min。正常对照组不做任何处理。
4.置于28.5℃,条件下避光孵育24h。
5.每个实验组随机选取10尾斑马鱼置于体视显微镜下拍照，用高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼尾鳍面积(S),根据公式计算样品的尾鳍皱缩抑制率，判断其是否具有抗光老化功效。
尾鳍皱缩抑制率(％)＝(S样品组-S模型对照组)/(S正常对照组-S模型对照组)×100％
将实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴油按照上述实验方法进行UV光细胞保护测试，结果如表3所示；
表3实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴油UV光细胞保护测试结果
| 组别 | 尾鳍皱缩抑制率(％) | 统计学分析 |
| 实施例1 | 28.63 | p<0.001 |
| 实施例2 | 45.49 | p<0.001 |
| 实施例3 | 62.95 | p<0.001 |
| 实施例4 | 75.68 | p<0.001 |
| 实施例5 | 83.06 | p<0.001 |
| 实施例6 | 60.35 | p<0.001 |
| 实施例7 | 61.21 | p<0.001 |
| 对比例1 | 54.68 | p<0.001 |
| 对比例2 | 53.89 | p<0.001 |
| 对比例3 | 42.26 | p<0.001 |
| 对比例4 | 56.61 | p<0.001 |
| 对比例5 | 58.21 | p<0.001 |
| 对比例6 | 55.42 | p<0.001 |
| 对比例7 | 60.13 | p<0.001 |
| 对比例8 | 57.37 | p<0.001 |
| 对比例9 | 56.85 | p<0.001 |
根据表3结果可知：
由实验数据可知，实施例1～7所制备的组合物均能够明显降低UV光照射对斑马鱼尾鳍造成的损伤，且随着组合物中酵母菌发酵溶胞产物滤液含量的增加，斑马鱼尾鳍皱缩抑制率显著提高，说明随着酵母菌发酵溶胞产物滤液含量增加，对UV光辐射的保护效果越好，其中实施例4和实施例5的斑马鱼尾鳍皱缩抑制率高达80％以上，效果最好。
根据实施例3和对比例1-3的数据对比可知，在缺少山茶籽油或者巴西果籽提取物的情况下，即使增加了其他组分的分量，也会导致婴童沐浴油的细胞保护功效降低，说明本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配有一定的协同提升防晒伤的功效，但是由对比例3的数据可知，在本发明的婴童沐浴油中起到防晒伤的作用主要是酵母菌发酵溶胞产物滤液，其原因在于，酵母菌发酵溶胞产物滤液富含各种糖类、氨基酸等营养物质，这些营养物质同时也是人体中天然保湿因子(NMF)的有效成分，能够提高肌肤保湿能力的同时具有修护皮肤屏障、保护和提高细胞活力的功效；在缺少酵母菌发酵溶胞产物滤液的情况下，沐浴油的细胞保护功效显著下降，证明本发明山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配在细胞保护这块产生的协同作用并不显著。
根据实施例3和对比例4-9的结果可知，本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配能够提供较好的皮肤细胞保护功效。
3、保湿/皮肤屏障修护测试
皮肤角质层水分含量测试和经皮失水TEWL值测试
(1)实验原理
采用电容法测定人体皮肤角质层的水分含量是基于水和其他物质的介电常数差异显著，按照皮肤角质层水分含量的不同，测得的皮肤的电容值不同，其参数可代表皮肤水分含量。
经皮水分散失(Trans Epidermal Water Loss,TEWL)又称透皮失水，是反映角质层屏障功能的常用指标。基于菲克扩散定律，在规定的温湿度条件下，通过测量单位时间、单位横截面积，近表皮(近1cm以内)上不同点的水蒸气分压梯度，得到经表皮水分流失TEWL(Transepidermal Water Loss)值。在测试条件下，得到的TEWL值越高，代表单位时间、单位横截面积的经表皮水分流失越多；TEW L值越低，代表单位时间、单位横截面积的经表皮水分流失量越少。当人体皮肤屏障功能比较薄弱，或皮肤屏障受到破坏时，皮肤水分蒸发会加快，TEWL值增大，皮肤更容易干燥和受到外界刺激，从而引发炎症过敏等症状。
(2)实验方法
实验纳入18-45岁的健康受试者(乳酸刺痛评分总分≥3)，每组实验30人，受试者左、右前臂曲侧随机分为样品涂抹侧和对照侧，每侧均包含3个测试区域，确保样品涂抹侧和对照侧在统计学上达到平衡，测量皮肤角质层水分含量K0和经皮失水初始值TEWL 0，使用的仪器为德国CK多功能皮肤测试仪CK-MPA10，探头为Corneometer CM825(水份测试探头)和Tewameter TM300(水分流失测试探头TEWL)。
给每名受试者分发样品，按要求每天使用一次样品，连续使用14天后，测量皮肤角质层水分含量K14和经皮失水TEWL 14。
分别计算样品涂抹侧和对照侧TEWL平均值的变化率，统计分析连续使用样品14天后涂抹区域和对照区域皮肤角质层水分含量变化率K(％)和经皮失水变化率TEWL(％)，从而判断样品对于保湿和修护皮肤屏障的功能的功效。
皮肤角质层水分含量K值变化率(％)＝(K14-K0)/K0*100％
TEWL值变化率(％)＝(TEWL14-TEWL0)/TEWL0*100％
如测试数据为正态分布则采用检验方法进行统评分析；如测试数据为非正态分布，则采用秩和检验方法进行统计分析；统计方法均采用双尾检验，检验水准a＝0.05。
将实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴有按照上述实验方法进行皮肤角质层水分含量测试和经皮失水TEWL值测试，结果如表4和表5所示；
表4实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴皮肤皮肤角质层水分含量测试结果
表5实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴皮肤TEWL值测试结果
根据表4和表5结果可知：
由实验数据可知，实施例1～7所制备的组合物在使用14天后，皮肤角质层含水量明显提高，经皮失水TEWL值明显降低，说明在使用本发明的婴童沐浴油14天后，能够有效增加皮肤角质层水分含量，显著降低敏感肌皮肤表面的水分流失速率，增强皮肤屏障功能和皮肤保湿锁水的能力，其中K值变化率主要体现皮肤的保湿能力，TEWL值变化率主要体现皮肤的保湿和屏障功能；这是由于所选组合物中，山茶籽油作为润肤剂本身具备滋润皮肤的功能，同时能够一定程度地促进胶原蛋白合成和抑制胶原酶MMP-1活化，而巴西果籽提取物能够通过促进磷脂、胆固醇等脂质的合成、促进角蛋白细胞分化、促进肌动蛋白微丝和角蛋白-10的合成，三重修护强化皮肤的“砖墙结构”，有效增强敏感肌或受损肌的皮肤屏障功能，从而更好地抵御外界环境对皮肤造成的刺激，而酵母菌发酵溶胞产物滤液中含有多种氨基酸、糖类等成分，这些天然保湿因子(NMF)可以进一步增强皮肤保湿锁水的能力，尤其是针对于皮肤屏障功能薄弱、皮肤中NMF含量较少的婴童，在此基础上，三种成分从内到外协同调节皮肤的屏障功能和皮肤保湿锁水能力，使得本发明的婴童沐浴油增强皮肤屏障功能和皮肤保湿锁水的能力显著。
根据实施例3和对比例1-3的数据对比可知，缺少本发明技术方案中的山茶籽油、巴西果籽提取物、酵母菌发酵溶胞产物滤液其中任一种成分都会使得本发明的保湿锁水能力大打折扣，说明本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物、酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配可产生协同保湿锁水的作用，有效增强皮肤屏障，提高角质层含水量，降低TEWL值。
根据实施例3和对比例1、对比例4的数据对比可知，添加与山茶籽油功效相似的白池花籽油来与巴西果籽提取物、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配虽然相比于巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液两者复配其保湿锁水效果有提升，但是其效果提升并不显著，且对比例1和对比例4的TEWL值变化率差异不大，说明白池花籽油与巴西果籽提取物、酵母菌发酵溶胞产物滤液产生协同保湿和增强皮肤屏障功能作用并不明显，甚至可能没有产生协同作用而只是单纯发挥各个组分自身的功效，侧面说明本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物、酵母菌发酵溶胞产物滤液能够拥有显著的协同增效保湿锁水、增强皮肤屏障功能的效果。
根据实施例3和对比例3、对比例6的数据对比例可知，添加与酵母菌发酵溶胞产物滤液功效相似的二裂酵母发酵产物溶胞产物虽然相比山茶籽油和巴西果籽提取物两者复配其保湿锁水效果有提升，但是其效果提升并不显著，说明二裂酵母发酵产物溶胞产物与山茶籽油、巴西果籽提取物产生协同保湿和增强皮肤屏障功能作用并不明显，甚至可能没有产生协同作用而只是单纯发挥各个组分自身的功效，侧面说明本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物、酵母菌发酵溶胞产物滤液能够拥有显著的协同增效保湿锁水、增强皮肤屏障功能效果。
根据实施例3和对比例2、对比例5的数据对比可知，采用马齿苋提取物来替代巴西果籽提取物并不能有效提高皮肤保湿锁水能力，并且马齿苋提取物明显不能与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液产生协同保湿锁水作用；而根据对比例3和对比例5的TEWL值变化率可知，马齿苋提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配也没有大幅增强皮肤的屏障功能，可能仅仅是马齿苋提取物、山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液各自发挥自身在皮肤屏障功能方面的作用。
根据实施例3和对比例7的数据对比可知，采用油溶性的巴西坚果提取物巴西坚果油并不能与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液产生协同保湿锁水作用和增强皮肤屏障功能，只有在采用水溶性的巴西坚果提取物巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配时，才能产生的协同保湿锁水作用和协同增强皮肤屏障功能的作用，从而显著提高沐浴油的皮肤保湿锁水效果和增强皮肤屏障功能效果。
根据实施例3和对比例8、对比例9的数据对比可知，在采用其他坚果类提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配时，无论是采用水溶性的杏仁提取物还是油溶性的澳洲坚果油都不能有效提高皮肤保湿锁水能力和增强皮肤的屏障功能，因此可以得出本发明采用巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配能够产生协同保湿锁水作用和协同增强皮肤屏障功能的作用。
4、舒缓/屏障修护效果测试
VISIA测试红区面积变化率
(1)实验原理
VISIA-CR皮肤分析仪是美国Canfield公司所研发的一款通过对人体面部进行全方位拍摄，运用先进的光学成像和软件科技进行图像分析，精确得出人体皮肤的各项参数的仪器。它通过1200万像素的相机，与四种光源照射，可以精确地反映出人体皮肤如斑点、毛孔、皱纹、卟啉、色斑、光老化的情况，以及皮肤饱满度、皮下血管和色素性病变等状态，广泛应用于化妆品功效评价。
(2)实验方法
实验纳入18～45岁均经乳酸刺痛试验测试为敏感肌的健康受试者(乳酸刺痛评分总分≥3)，每组实验30人，左、右脸随机分为样品涂抹侧和对照侧，确保样品涂抹侧和对照侧在统计学上达到平衡，对受试者采集拍摄使用样品前面部红区图像，在每侧的脸颊上选取大小、位置相同的一块区域作为测试目标区域S总面积，通过软件图像分析得到目标区域使用样品前红区面积S0。
受试者根据要求每天在相应部位使用一次样品及对照样，连续使用样品14天后，对受试者拍摄面部图像并通过图像软件分析得到连续使用样品14后同一区域的红区面积占比(％)S14。
分别计算样品涂抹侧和对照侧红区面积的变化率，统计分析连续使用样品14天后涂抹区域和对照区域脸部红区的变化，从而判断样品舒缓抗炎、修护皮肤屏障的作用功效。
红区面积变化率(％)＝(S0-S14)/S总面积×100％
如测试数据为正态分布则采用检验方法进行统评分析；如测试数据为非正态分布，则采用秩和检验方法进行统计分析；统计方法均采用双尾检验，检验水准a＝0.05。
将实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴油按照上述实验方法进行舒缓/屏障修护效果测试，结果如表6所示；
表6实施例1-7和对比例1-9制得的沐浴油舒缓/屏障修护效果测试结果
| 组别 | 红区面积变化率(％) | 统计学分析 |
| 实施例1 | 6.59 | p<0.05 |
| 实施例2 | 18.56 | p<0.05 |
| 实施例3 | 31.93 | p<0.05 |
| 实施例4 | 33.65 | p<0.05 |
| 实施例5 | 39.85 | p<0.05 |
| 实施例6 | 32.86 | p<0.05 |
| 实施例7 | 33.98 | p<0.05 |
| 对比例1 | 21.36 | p<0.05 |
| 对比例2 | 19.28 | p<0.05 |
| 对比例3 | 23.79 | p<0.05 |
| 对比例4 | 19.81 | p<0.05 |
| 对比例5 | 17.69 | p<0.05 |
| 对比例6 | 21.32 | p<0.05 |
| 对比例7 | 23.76 | p<0.05 |
| 对比例8 | 20.49 | p<0.05 |
| 对比例9 | 19.68 | p<0.05 |
根据表6结果可知：
由实验数据可知，实施例1～7所制备的组合物在使用14天后，能够有效降低面部红区面积，且随组合物含量增加，红区面积变化率越大，其中实施例3～实施例7的红区面积变化率超过30％；这是由于实施例1～实施例7所制备的组合物山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液，一方面通过调节免疫作用通路中的相关炎症因子和介质抑制了炎症和过敏的发生，另一方面通过促进表皮相关蛋白合成强化皮肤“砖墙结构”从而增强皮肤屏障功能，使得皮肤对环境中的有害刺激物的防护抵御能力增强，不容易因环境变化而发生泛红过敏，说明了山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液搭配的组合物具有协同提升抗炎舒缓、增强皮肤角质屏障功能的功效。
根据实施例3和对比例1-3的数据对比可知，本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配制备得到的婴童沐浴油能够显著提高受试者皮肤的红区面积变化率，而对比例1-3采用两两组合的方式虽然能够提高受试者皮肤的红区面积变化率，但是其提升幅度相比于实施例3有明显的降低，说明本发明在山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配时产生了协同作用，能够有效提高皮肤抗炎舒缓功效和增强皮肤角质屏障功能。
根据实施例3和和对比例4-6的结果表明，本发明采用山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液复配得到的组合物具有协同增效的提升皮肤抗炎舒缓功效和增强皮肤角质屏障的功效。
根据对比例1-3和对比例4-6的结果表明，采用白池花籽油来替换山茶籽油、马齿苋提取物来替换巴西果籽提取物、二裂酵母发酵产物溶胞产物来替换酵母菌发酵溶胞产物滤液的技术方案不仅没有产生协同提升皮肤抗炎舒缓功效和增强皮肤角质屏障的功效，其效果还不如巴西果籽提取物与酵母菌发酵溶胞产物滤液、山茶籽油与酵母菌发酵溶胞产物滤液、山茶籽油与巴西果籽提取物的两两组合，其原因可能在于，对比例4、对比例5、对比例6的组分配伍不合理，从而导致功效下降。
根据实施例3和对比例7的结果对比可知，本发明采用水溶性的巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配得到的组合物具有协同增效的提升皮肤抗炎舒缓功效和增强皮肤角质屏障的功效；而采用油溶性的巴西坚果油，虽然来源同样来自于巴西坚果，但是其与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配并不能产生协同提升皮肤抗炎舒缓和增强皮肤角质屏障的作用。
根据实施例3和对比例8、对比例9的结果对比可知，在采用其他坚果类提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液复配时，无论是采用水溶性的杏仁提取物还是油溶性的澳洲坚果油都不能有效提高皮肤抗炎舒缓功效和增强皮肤角质屏障的功效，因此可以得出本发明采用巴西果籽提取物与山茶籽油、酵母菌发酵溶胞产物滤液三者复配能够产生协同提升皮肤抗炎舒缓能力的作用和增强皮肤角质屏障的作用。
5、安全性测试
皮肤封闭型斑贴试验
参照《2015化妆品安全技术规范》，选择年龄为10-60周岁的30名符合标准的健康受试者。
将上述所有的实施例制备的组合物和对照组(组去离子水)进行人体安全性班贴测试，选用面积不超过50mm2、深度约1mm的合格斑试器材，将受试物放入斑试器小室内，用量0.020mL。
将加有受试物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。
分别于去除受试物斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h按下表标准观察皮肤反应，并记录观察结果。
表7皮肤封闭型斑贴实验皮肤反应分级标准
将实施例1-7制得的沐浴油按照上述测试方法进行安全性测试，结果如表8所示；
表8实施例1-7制得的沐浴油安全性测试结果
| 样品编号 | 30min | 24h | 48h | 总结果 |
| 实施例1 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
| 实施例2 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
| 实施例3 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
| 实施例4 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
| 实施例5 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
| 实施例6 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
| 实施例7 | 0 | 0 | 0 | 30人均无阳性反应 |
由表8可知，实施例1-7制备的组合物和对照组的斑贴试验结果均为阴性，表明本发明中通过山茶籽油、巴西果籽提取物和酵母菌发酵溶胞产物滤液制成的具有舒缓抗炎、修护皮肤屏障功效的组合物温和无刺激。
本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合选择的实施方式。所附的权利要求不应受说明本发明的实施方式所限制。在权利要求中所用的一些数值范围包括在其之内的子范围，这些范围中的变化也应为所附的权利要求覆盖。
Claims (3)
1.一种含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，其特征在于，按重量份数计，包括0.1-5份山茶籽油、0.001-0.1份巴西果籽提取物和0.08-10份酵母菌发酵溶胞产物滤液。
2.根据权利要求1所述的含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，其特征在于，所述山茶籽油为2-5份，所述巴西果籽提取物为0.02-0.04份，所述酵母菌发酵溶胞产物滤液为1.8-10份。
3.根据权利要求1或2所述的含有酵母菌发酵溶胞产物滤液的组合物，其特征在于，还包括溶剂A和溶剂B，所述巴西果籽提取物溶于溶剂A中，所述酵母菌发酵溶胞产物滤液溶于溶剂B中，所述溶剂A包括水和甘油，所述溶剂B包括1，2-己二醇、对羟基苯乙酮和乙基己基甘油。
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