KR101819060B1

KR101819060B1 - 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101819060B1
Application number: KR1020170085784A
Authority: KR
Inventors: 엄지나; 민진우; 주광식; 강희철
Original assignee: (주)지에프씨
Priority date: 2017-07-06
Filing date: 2017-07-06
Publication date: 2018-01-16

Abstract

본 발명은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)로 발효된 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명으로부터 제공되는 황련해독탕 발효물은 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량이 2~3배 증대되어, 피부 내 활성 산소를 제거하고 피부세포의 활성을 촉진시켜 콜라겐 생합성을 증진시키며, 멜라닌 생성 억제능이 우수하기 때문에, 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물로 활용 가능하다.

Description

황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic Compositions Containing Fermented Extracts of Hwangryunhaedoktang}

본 발명은 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 피부 노화의 원인은 고령화에 따라 나타나는 자연 노화와 외부환경에 의해 나타나는 내적인 노화로 분류될 수 있다. 자연 노화는 유전자적 요인 등이 관여되어 있어 제어가 어렵기 때문에 자외선，산화，건조 등과 같은 환경적 요인을 제어하기 위해 많은 연구가 진행되고 있다.

피부 노화의 원인 중 자외선(Ultraviolet)은 대표적인 환경적 요인 중 하나로 자외선에 지속적으로 노출된 피부는 염증 유발, 홍반, 색소 침착 등의 피부질환과 피부가 거칠어지고 깊은 주름이 생기며 특히, 비정상적으로 생성량이 증가되는 활성산소종(Reactive oxygen species, ROS)에 의해 피부 노화를 유발하게 된다. 이 활성산소종은 라디칼 종이 포함되어 있으며, 이 라디칼 종은 짝을 이루지 않은 홀 전자를 가지고 있어 에너지가 높고 반응성이 크다. 이러한 불안정한 라디칼종과 이로 인해 생성되는 ROS는 자동 산화 반응을 개시하게 되고 피부 노화의 원인으로 지질, 단백질 및 DNA를 산화하게 된다. 따라서 활성산소종을 제거할 수 있는 항산화제를 사용하면 피부조직을 보호하고 색소 침착을 줄일 수 있으므로 인체에 안전하고 항산화 효과가 뛰어난 천연 항산화제의 연구 개발이 지속적으로 이루어지고 있다.

또한, 피부 노화의 원인 중 환경적 요인은 주로 진피층에 포함된 콜라겐(Collagen) 단백질, 엘라스틴(Elastin) 단백질 등을 파괴하거나 변성을 일으켜 주름을 유발한다. 콜라겐은 세포외기질(Extracellular matrix)에 존재하는 섬유아세포(Fibroblast)에서 전구체인 프로콜라겐(Procollagen)을 거쳐 합성되는데 진피 기질 내에는 콜라겐 타입 I(Collagen type I)이 80% 이상 차지하고 있으며, 이 콜라겐 타입 I은 광노화 피부에서 함량이 감소되고 피부 노화과정에서 관찰되는 가장 중요한 콜라겐 타입이다. 콜라겐의 합성과 분해과정은 피부의 주름과 연관이 있으며 이 과정이 비정상적으로 불균형을 이룰 경우 주름이 증가하여 피부 노화의 원인이 된다. 또한, 자외선은 피부세포(섬유아세포)를 산화시키고 엘라스틴의 생성저하 및 파괴를 일으키는데, 자외선 등 환경적 요인에 의해 피부 내에 엘라스틴 분해효소(Elastase)가 발현되며 이 효소가 피부 내의 정상적인 엘라스틴을 분해하여 피부 탄력 저하를 가져 온다.

한편, 일반적으로 피부 미백과 가장 밀접하게 연관되어 있는 것은 멜라닌으로 알려져 있다. 사람의 피부색은 피부 내부의 멜라닌(Melanin) 농도와 분포에 따라 결정되는데, 유전적인 요인 외에도 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 피부 표피층에 있는 멜라노사이트에서 합성되는데, 멜라노사이트 내 소기관인 멜라노좀(Melanosome)에서 아미노산의 일종인 티로신(Tyrosine)에 티로시나제(Tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(Dopaquinone)으로 바뀐 후 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같은 멜라닌의 합성이 피부 내에서 과도하게 일어나면, 피부 톤을 어둡게 하고, 기미, 주근깨 등을 발생시킨다. 따라서, 피부 내의 티로시나제 활성을 저해하여 멜라닌 색소의 합성을 저해시키면, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 및 유전적인 원인에 기인하여 발생하는 기미, 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선시킬 수 있다.

최근 기술의 발달과 삶의 질 향상으로 미(美)에 대한 욕구와 관심이 증대되면서 과도한 멜라닌 생성을 막는 미백 제품 개발이 필요하게 되었고 이에 따라 미백제 및 미백 화장품 개발에 관한 연구가 활발히 진행 중이다. 예를 들면, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 활성을 저해하는 억제제들, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 A, 비타민 C 및 이들의 유도체 등이 미백 제품에 사용되고 있다. 그러나 이들은 피부에 대한 안전성의 문제, 제형 내에서의 안정성 문제 및 미백 효과의 불충분으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

따라서, 화장품 분야에서는 항산화, 주름 개선 및 미백 효과를 가지는 기능성 화장품에 대한 연구 및 개발이 활발하게 진행되고 있으며, 특히 피부에 독성이나 자극을 주지 않기 위하여 천연 물질을 이용한 연구가 계속되고 있다.

한편, 황련해독탕(黃連解毒湯)은 중국 전통의학에서 기본적으로 사용하는 약재인 황련(黃連), 황금(黃芩), 황백(黃柏), 치자(梔子)로 구성되고, 삼초(상초(上焦), 중초(中焦), 하초(下焦), 즉 사지를 제외한 몸통을 의미함)의 실열(實熱)이 있을 때 효험이 있는 한방유래의 탕약을 의미한다. 열성병(熱性病)으로 염증이 있고 열과 충혈에 의한 정신불안에 출혈이 있으며, 요(尿)가 붉고 심하부(心下部)가 걸려서 저항이 있을 때 처방하고, 또한 하혈, 객혈, 뇌일혈에도 처방하는 것으로 알려져 있다. 최근 연구를 통해 항산화 효과, 항궤양 효과, 이뇨작용, 혈압강하 효과, 항균 효과 등이 보고된 바 있고, 피부와 관련하여 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 지루성 피부염 등에 효과가 있음이 보고된 바 있다.

황백(Phellodendron amurense)은 산초과에 속하는 낙엽성 교목인 황경피 나무 또는 이의 껍질을 말려 제조한 약재를 의미하는 것으로 황경피, 자벽, 소벽, 단환 등의 다른 이름으로도 불린다. 줄기껍질은 연한 회색이나 코르크층이 발달하여 깊이 갈라지며, 코르크층을 벗긴 내피는 노란색이다. 주로 약재로 사용되는 부분은 수피로서 일반적으로 3mm 정도의 두께와 30cm 정도의 길이를 갖는다. 또한 단환이라고 불리는 황벽나무(황백나무)의 뿌리인 황벽근은 명치에 생긴 질병을 치료하는 효능이 있다고 알려져 있다. 특이한 냄새가 있고 점액성이 있으며 침을 황색으로 물들인다. 약효는 황금 또는 황련과 비슷하나 그 약효가 적용되는 부위는 차이가 있다. 알려진 약리작용은 항미생물 작용, 수렴 작용, 피하출혈흡수촉진 작용, 항염증 작용, 건위 작용, 혈압강하 작용, 근수축력증강 작용 등이며, 유행성 뇌막염, 세균성이질, 폐렴, 폐결핵, 간경변, 급성 결막염, 해열, 해독, 설사, 당뇨병, 황달, 비만증, 관절통, 근육통 등에 쓰인다.

황련(Coptis japonica)은 쌍떡잎식물 미나리아재비목 미나리아재비과의 상록 여러해살이풀로 중국이 원산지이나, 생약용으로 한국, 일본, 중국 등지에서 재배되기도 하며 러시아, 북아메리카 등지에 분포하는 등 전세계적으로 여러 종이 존재한다. 한방에서는 11월경에 재식 5 내지 6년 된 황련의 뿌리를 채취하여 햇볕에 말린 것을 황련이라고 하며, 건위, 진정, 소염, 항균 등의 효능이 있어, 소화불량, 위염, 장염, 복통, 구토, 이질, 심계, 번열, 정신불안, 인후종통, 토혈, 코피, 하혈 및 화상 등의 치료에 처방한다. 다른 이름으로는 왕련, 지련, 삼각엽황련, 아미야연, 운남황련, 깽깽이풀, 천황련, 토황련, 선황련, 모황련, 조선황련, 산련풀 등이 있다. 실제 황련이라는 생약명으로 여러 종류의 식물이 사용되고 있으며, 콥티스(Coptis) 속의 종들을 비롯한 플라지오레그마 두비움 맥심(Plagiorhegma dubium Maxim.), 제퍼소니아 두비아 벤트 엣 훅(Jeffersonia dubia Bent. et Hook.) 등의 다양한 식물을 포함한다.

황금(Scutellaria baicalensis)은 꿀풀과에 속하는 다년생초로 중국이 원산지이나 우리나라 전국 각지의 산기슭에서 자라며 약초로도 재배하고 있다. 황금은 겉 표면을 벗겨내면 노란색이 황금과 같다고 하여 붙여진 이름이다. 특히 뿌리를 황금이라 하여 약용으로 사용한다. 황금의 성미는 차갑고 쓰며 독이 없고 해열, 이뇨, 지사, 이담 및 소염 작용이 있다. 쓴 맛은 심장과 폐에 들어가 장위를 보하고 차가움은 간장과 폐에 들어가 습열을 없앤다. 또한 지혈, 안태의 효능이 있고, 번갈, 폐열해수, 황달, 자궁출혈, 목적종통, 태동불안을 치료하며, 불면증, 위장염, 대/소장염, 간염, 방광염, 요도염, 천식 등에 쓰는 것으로 알려져 있다. 향수수초, 금, 토금채, 황금다근, 황금다, 속썩은풀, 황금초 등의 속명을 갖는다.

치자(Gardenia florida)는 상록관목인 꼭두서니과에 속하는 치자나무의 열매 또는 이를 건조시킨 것을 말한다. 치자나무는 우리나라 중부이남, 중국, 대만, 일본 등 더운 지방의 깊은 산중에 자생한다. 열매는 3.5cm 정도 길이로 9월에 황홍색으로 익으며, 약용으로뿐만 아니라 염료로도 사용된다. 약리적으로 당뇨병, 고혈압, 불면증, 황달, 소변장애, 안구충혈, 결막염, 토혈, 자궁출혈, 혈뇨, 타박상 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 또한 관절 타박상을 치료하고 해독효과를 갖는다. 치자 단독으로 또는 다른 약재와 함께 물에 달여 마시거나, 치자를 분말화하여 물 등에 개어 환부에 붙이기도 한다.

황련해독탕에 사용되는 천연약재 중 황백과 황련에 다량 함유되어 있는 베르베린(Berberine)과 팔마틴(Palmatine)은 대표적인 지표 성분으로, 이에 대한 연구는 여러 차례 이루어진 바 있다. 베르베린(Berberine)은 항염증, 항균, 항암, 항산화, 멜라닌 생성 억제능 등 다양한 효과가 알려져 있으며, 팔마틴(Palmatine)은 모노아민 산화 효소(Monoamine oxidase) 저해, 고혈당증(Hyperglycemic) 저해 등이 보고된 바 있다.

황련해독탕을 이용하는 기술로는, 국내의 경우 대한민국 등록특허공보 제10-1466317호「황련해독탕 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 암전이 억제용 조성물」, 대한민국 등록특허공보 제10-1402926호「황련해독탕의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품」, 대한민국 등록특허공보 제10-1584185호「황련해독탕 약침의 제조 방법 및 상기 방법으로 제조된 황련해독탕 약침」등이 개시되어 있다.

이에, 본 발명자들은 인삼에서 분리한 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)로 발효된 황련해독탕 발효물이 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량을 2~3배 증대시켜, 우수한 항산화, 주름개선 및 미백 효과를 부여할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

대한민국 등록특허공보 제10-1466317호 대한민국 등록특허공보 제10-1402926호 대한민국 등록특허공보 제10-1584185호

본 발명의 목적은 균주로 발효된 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공하는 데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)로 발효된 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 황련해독탕은 황련(Coptis japonica), 황백(Phellodendron amurense), 황금(Scutellaria baicalensis) 및 치자(Gardenia florida)를 혼합한 복합 추출물인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 황련(Coptis japonica), 황백(Phellodendron amurense), 황금(Scutellaria baicalensis) 및 치자(Gardenia florida)의 비율은 1:0.1~2:0.1~2:0.1~2 중량비인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 황련해독탕 발효물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 50 중량% 포함되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 황련해독탕 발효물은 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량이 2~3배 증대된 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공한다.

본 발명으로부터 제공되는 황련해독탕 발효물은 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량이 2~3배 증대되어, 피부 내 활성 산소를 제거하고 피부세포의 활성을 촉진시켜 콜라겐 생합성을 증진시키며, 멜라닌 생성 억제능이 우수하기 때문에, 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물로 활용 가능하다.

도 1은 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 지표성분인 베르베린(Berberine) 및 팔마틴(Palmatine)을 HPLC 분석한 결과이다.
도 2는 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 세포독성 평가를 나타낸 그래프이다.
도 3은 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 DPPH 라디칼 소거 활성 평가를 나타낸 그래프이다.
도 4는 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 Procollagen mRNA 발현량을 나타낸 그래프이다.
도 5는 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 멜라닌 생성량 평가를 나타낸 그래프이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)(이하 'GFC 160704'로 약칭함)로 발효된 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 황련해독탕은 황련(Coptis japonica), 황백(Phellodendron amurense), 황금(Scutellaria baicalensis) 및 치자(Gardenia florida)를 혼합한 복합 추출물을 의미한다.

상기 황련해독탕을 제조하기 위해 사용되는 황련, 황백, 황금 및 치자는 품종, 부위가 특별히 한정되지 않는다. 황련, 황백, 황금 및 치자의 비율은 고형물 기준으로 1:0.1~2:0.1~2:0.1~2 중량비로 포함하는 것이, 추출 효율을 높일 수 있으며, GFC 160704 균주로 인한 발효과정을 통해 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량을 2~3배 증대시킬 수 있다는 측면에서 바람직하다.

본 발명에 따른 황련해독탕은 본 발명이 속한 분야에 공지된 다양한 추출방법을 통해 얻어질 수 있고, 구체적으로는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합 용매를 추출용매로 하여 하기의 추출방법으로 사용하여 제조될 수 있다.

상기 추출용매는 예를 들면, 물, 에탄올, 프로판올, 메탄올, n-부탄올, 아세톤, 1,3-부틸렌글라이콜, 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 콩기름 및 참기름 중 1종 이상의 용매를 포함할 수 있다. 상기 용매는 추출용매로 이용되며, 이러한 추출용매를 사용할 경우 추출되는 유효성분의 함량이 증가되어 항산화, 주름 개선 및 미백 효과를 더욱 향상시킬 수 있다.

구체적으로, 추출용매의 함량은 황련해독탕 조성물 고형분 중량의 1배 내지 50배, 1.5배 내지 30배, 보다 구체적으로 5배 내지 20배 또는 5배 내지 15배일 수 일 수 있다.

상기 황련해독탕의 추출 방법은 특별히 제한되지 않으나, 예를 들면, 황련, 황백, 황금 및 치자를 혼합한 다음 추출용매를 가한 후, 중탕 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출, 냉침 추출 및 페르콜레이션(percolation) 추출방법 중에서 1종 이상을 포함하는 방법으로 추출액을 제조하는 것을 포함할 수 있다.

상기 추출하는 단계에서 추출 횟수는 구체적으로 1회 내지 5회 반복될 수 있다. 이러한 경우, 유효성분의 추출 효율이 더욱 향상될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 추출하는 단계는 환류 냉각기가 달린 추출기에 황련해독탕 조성물 및 추출용매를 투입한 후, 50℃ 내지 100℃에서 4 내지 20시간 동안 가열 환류냉각 추출하는 것일 수 있다.

다른 구체예에서, 상기 추출하는 단계는 황련해독탕 조성물에 추출용매를 투입한 후, 5℃ 내지 37℃에서 1 내지 15일간 침적시켜 냉침 추출하는 것일 수 있다.

또 다른 구체예에서, 상기 추출하는 단계는 황련해독탕 조성물에 추출용매를 투입한 후, 1 내지 200 시간 동안 페르콜레이션할 수 있다.

또 다른 구체예에서, 상기 추출하는 단계는 황련해독탕 조성물에 추출용매를 투입한 후, 50℃ 내지 100℃에서 0.5시간 내지 72시간 동안 중탕 추출할 수 있다.

상기 황련해독탕은 추출액, 상기 추출액을 건조시킨 분말, 상기 추출액을 농축여과한 농축물 등 다양한 형태로 가공되어 이용될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 황련해독탕 발효물은 GFC 160704 균주를 황련해독탕에 접종하고, 배양하여 수득된 발효물인 것을 특징으로 한다.

이때, 상기 GFC 160704 균주를 황련해독탕에 접종한 후, 25 ~ 40℃에서 2 ~ 7일 동안 배양하는 것이 바람직하다. 만일, 배양 온도 및 시간이 상기 범위를 벗어날 경우에는 발효균주의 배양조건이 맞지 않아 균주 증식이 되지 않기 때문에 바람직하지 않다. 또한, 황련해독탕 발효물에 포함되는 베르베린(Berberine) 성분이 증대되지 않을 뿐만 아니라, 충분한 항산화, 주름 개선 및 미백 효과를 나타나지 않는 문제점이 있을 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기와 같은 방법으로부터 발효된 황련해독탕 발효물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 50 중량% 포함될 수 있고, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%를 포함될 수 있다. 상기 황련해독탕 발효물이 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 중량% 미만일 경우에는 항산화, 주름개선 및 미백 효과를 충분히 얻을 수 없기 때문에 피부 화장료로서의 기능이 떨어지고, 50 중량%를 초과하는 경우에는 그 이상을 함유하지 않아도 충분한 효능을 나타낼 수 있기 때문에 비경제적이다.

상기 황련해독탕 발효물은 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량이 2~3배 증대된 것을 특징으로 한다. 즉, 황련해독탕에 함유되어 있는 베르베린(Berberine) 성분이 GFC 160704 균주로 인한 발효과정을 통해 발효 전 대비 함량이 증가하여 항산화, 주름 개선 및 미백, 항염증, 항균 등 단순히 피부 미용 뿐만 아니라, 근본적인 피부 건강 개선을 구현할 수 있는 효과가 있다.

전술된 바와 같이, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)로 발효된 황련해독탕 발효물은 항산화, 주름개선 및 미백 효과가 우수하며, 세포독성이 없고, 인체에 무해하며, 피부자극이 적은 화장료 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명의 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기와 같은 방법으로부터 수득된 화장료 조성물은 피부 내 활성 산소를 제거하고 콜라겐 생합성을 증진시키며, 멜라닌 생성 억제 활성을 나타내어 우수한 항산화, 주름 개선 및 미백용 화장품을 제공할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 황련해독탕 발효물 제조

황련, 황백, 황금 및 치자는 제천한방약초에서 완전 건조된 국내산을 구매하여 사용하였다. 건조된 황련 37.5g, 황백 37.5g, 황금 37.5g 및 치자 37.5g을 혼합하여 황련해독탕 원료를 준비하였다. 상기 황련해독탕 원료 총 150g에 70% 에탄올을 1,500mL을 첨가하여 80℃에서 2시간 동안 추출하였다. 추출물은 여과지 Whatman No.2로 2회 반복하여 여과시킨 다음, Rotatory vacuum evaporator(400 series, Eyela, Tokyo, Japan)로 감압농축하여 농축액 상태로 제조하였다. 이 농축액을 10%로 함유하는 배지를 제조하여 121℃, 1.5 기압에서 15분 동안 가압멸균하고 상온까지 냉각시켜 황련해독탕을 제조하였다. 황련해독탕(발효 전)의 일부는 동결건조하여 시료를 얻어 발효 전후 성분 및 효능 변화를 위해 비교구로 사용하였다.

상기 제조된 황련해독탕에 인삼에서 분리한 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)를 MRS broth(BD Difco, USA)서 계대 배양한 뒤 1%(v/v)로 접종하였다. 접종 후 37℃의 Incubator에서 48시간 동안 배양하여 황련해독탕을 발효하였으며, Syringe filter 0.2μm로 여과 과정을 거쳐 제균하여 최종 황련해독탕 발효물을 제조하였다. 일부는 동결건조하여 시료를 얻어 발효 전후 성분 및 효능 변화를 위해 사용하였다.

<실시예 2> 황련해독탕 발효물 성분 분석

실시예 1에서 제조된 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 지표 성분인 베르베린(Berberine) 및 팔마틴(Palmatine)은 Sigma(USA)에서 구입하였으며, HPLC를 이용하여 정량 및 정성 분석하였다.

HPLC 분석을 위하여 Pump, Auto sampler, Column compatrment, Photo diode array detector로 구성된 YL9100 HPLC system(Younglin, Korea)을 사용하였으며 데이터 수집 및 처리를 위해 YL-clarity을 사용하였다. 분석에 사용한 컬럼은 Kinetex 5μm C18 column(250 X 4.6 mm, Korea)이며 컬럼 온도는 40℃를 유지하였다. 이동상은 0.34% Potassium dihydrogen phosphate와 0.17% SDS가 포함된 물 : 아세토니트릴(1:1)을 사용하였으며 유속은 1.0mL/min의 조건으로 유지하였다. UV 검출기의 파장은 345nm에서 확인하였으며 주입량은 10μL로 설정하였다. 지표 성분인 베르베린(Berberine) 및 팔마틴(Palmatine)은 무게를 정확하게 측정한 후 메탄올(Methanol)에 녹여 표준 용액으로 조제하였다. 두 지표 성분은 동시 분석법으로 수행하였고 각 Standard의 체류시간(tR)을 확인한 결과, 베르베린(Berberine)은 7.65min, 팔마틴(Palmatine)은 7.13 min으로 관찰되었다. 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 함량 비교를 위해 x축을 표준용액의 농도로 y축을 Peak 면적으로 하여 검량선(Calibration curve)을 작성하였다. 그 결과, 하기 표 1에 나타난 바와 같이, 베르베린(Berberine) 및 팔마틴(Palmatine) 모두 검량선의 상관관계가 0.984 이상으로 정량분석에 알맞은 직선을 나타내었다.

Compounds	Linear range (μg/mL)	Regression equation (y = ax + b)^a	R² values (n = 3)
베르베린 (Berberine)	1.953-62.5	y = 70.021x + 381.22	0.989
팔마틴 (Palmatine)	1.953-62.5	y = 67.548x + 294.87	0.985

^aY: peak area, x: concentration (μg/mL)

상기 두 지표 성분인 베르베린(Berberine) 및 팔마틴(Palmatine)의 Peak 면적을 검량선에 대입하여 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)의 성분 함량을 계산하였다.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 황련해독탕(발효 전)은 베르베린(Berberine)이 3.55μg/mL, 팔마틴(Palmatine)이 40.43μg/mL으로 팔마틴(Palmatine)이 베르베린(Berberine)보다 비교적 높은 함량을 나타내었다.

반면, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 베르베린(Berberine) 함량이 10.97μg/mL으로 발효 과정을 거치면서 황련해독탕(발효 전)보다 약 7.42μg/mL이 증가되었으며, 이는 발효 전 대비 약 3배에 달하는 함량이 증가된 것을 확인하였다. 황련해독탕 발효물(발효 후)의 팔마틴(Palmatine) 함량의 경우 34.89μg/mL으로 베르베린(Berberine)과 달리 발효 과정을 거치면서 발효 전보다 약 5.54μg/mL 감소하여 약 13.7%가 감소한 경향을 나타내었다.

이와 같은 결과로 황련해독탕 발효물(발효 후)은 황련해독탕(발효 전)보다 베르베린(Berberine)이 증가하고 팔마틴(Palmatine)이 감소하는 것을 확인하였다. 이는, 인삼에서 분리한 유산균인 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)가 베르베린(Berberine) 성분의 함량을 증가시킨 것임을 확인하였다.

<실시예 3> 세포독성 시험 : WST(Water-soluble tetrazolium salt) assay

실시예 1로부터 제조된 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)을 이용하여 세포에 대한 자극성을 갖는지 확인하기 위해 RAW 264.7 cell 및 HFF cell을 대상으로 세포독성 실험을 진행하였다.

마우스의 대식세포주인 RAW 264.7 cell 및 사람의 섬유아세포(Human foreskin fibroblast)인 HFF cell은 한국세포주은행(KCLB, Korea)에서 분양 받았으며, 각각의 세포배양을 위해 10% FBS와 1% Penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지를 사용하였다. 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

RAW 264.7 cell은 DMEM 배지를 이용하여 5X10⁴ cells/mL로 조절한 후 24-well tissue culture plate에 접종하고 5% CO₂ Incubator에서 24시간 동안 전 배양하였다. 세포에 1μg/mL의 LPS(Sigma, USA)를 처리하고 24시간 뒤에 시료(황련해독탕 및 황련해독탕 발효 추출물)를 농도별(0, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100μg/mL)로 처리하여 24시간 배양하였다. 시료 처리 후 Ez-Cytox 시약(Biomax, Korea)이 든 배지로 교체하여 2시간 동안 반응시킨 다음, Multi-plate reader를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

HFF cell은 DMEM배지를 이용하여 3X10⁴ cells/mL로 96-well tissue culture plate에 접종하고 5% CO₂ incubator에서 24시간 전 배양하였으며, 세포에 FBS를 무첨가한 DMEM과 일정 농도의 시료를 섞어 well 당 100μL씩 처리하여 48시간 배양하였다. 시료 처리 후 WST 시약이 든 배지로 교체하여 2시간 동안 반응시켰으며, multi-plate reader(Paradigm, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정값은 3회 반복 실험의 평균값으로 나타내었다.

세포 생존율은 시료를 처리하지 않은 처리군(무처리군)과 비교하여 아래의 수학식 1을 이용하여 계산하였다.

[수학식 1]

세포 생존율 (%) = (시료 처리군의 흡광도 / 무처리군의 흡광도) X 100

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 마우스 대식세포인 RAW 264.7 cell에 대한 세포생존율의 경우, 황련해독탕(발효 전)은 최고 처리농도 100μg/mL에서 99.47%의 세포생존율을 나타냄으로써 세포 생존에 대한 독성을 나타내지 않음을 확인하였고, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 최고 처리농도 100μg/mL에서 101.62%의 세포생존율을 나타냄으로써 세포 생존에 대한 독성을 나타내지 않음을 확인하였다.

또한, 사람의 섬유아세포인 HFF cell에 대한 세포생존율의 경우, 황련해독탕(발효 전)은 최고 처리농도 100μg/mL에서 101.22%의 세포생존율을 나타냄으로써 세포 생존에 대한 독성을 나타내지 않음을 확인하였고, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 최고 처리농도 100μg/mL에서 119.64%의 세포생존율을 나타냄으로써 세포생존율이 오히려 증대하는 것을 확인하였다. 이는 황련해독탕 발효물(발효 후)이 100μg/mL의 농도까지 세포 독성이 없으며 발효 과정을 거쳐 세포 생장을 증대시킬 수 있는 특정 물질이 생성 또는 증가되었을 가능성이 있을 것으로 확인되었다.

<실시예 4> 항산화 시험 : DPPH radical 소거 활성

실시예 1로부터 제조된 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)을 이용하여 항산화 효능 테스트를 진행하였다.

DPPH 라디칼 소거능은 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)를 사용하여 라디칼에 대한 시료(황련해독탕 및 황련해독탕 발효물)의 전자공여능(Electron donating ability, EDA)을 측정하였다. 시료의 전자공여능 측정을 위해 농도별(0, 1.563, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100μg/mL)로 희석한 시료 5μL에 0.4mM DPPH 용액 450μL를 넣고 30분 동안 4℃의 암실에서 반응시킨 후 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 이를 시료 용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율을 백분율(%)로 표시하여 DPPH 라디칼 소거능으로 나타내었으며, 대조군으로는 Ascorbic acid를 사용하여 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)와 비교하였다. 소거능 활성은 아래의 수학식 2를 이용하여 계산하였다.

[수학식 2]

DPPH radical scavenging activity (%) ＝ (1 － B/A) X 100

A: DPPH radical scavenging activity without sample

B: DPPH radical scavenging activity with sample

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 황련해독탕(발효 전)은 6.25μg/mL에서부터 DPPH 라디칼 소거능이 관찰되기 시작했고 최고 처리농도 100μg/mL에서 33.26%의 소거활성을 나타내었다. 반면, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 최저 처리농도 1.563μg/mL에서 4.07%의 소거활성을 나타내어 가장 낮은 농도에서부터 DPPH 라디칼 소거능이 관찰되었으며, 최고 처리농도 100μg/mL에서 67.85%의 소거활성을 나타내었다. 즉, 100μg/mL의 같은 농도에서 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)을 비교하였을 때, 황련해독탕 발효물(발효 후)이 황련해독탕(발효 전) 보다 약 2배 이상의 DPPH 라디칼소거 활성이 증가하였다. 결과적으로, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 대조군으로 사용한 Ascorbic acid가 1.73μg/mL의 농도에서 50%의 소거활성을 나타낸 것에 비해 낮은 활성 효과를 나타냈지만 황련해독탕(발효 전) 대비 항산화 활성이 우수함을 확인하였다.

이러한 결과는 인삼에서 분리한 유산균인 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)의 발효 과정을 거쳐 항산화 효능을 갖는 것으로 보고된 바 있는 베르베린(Berberine)의 함량이 HPLC 분석 결과에 따라 약 3배 가량 증대된 영향도 있을 것으로 사료되며, 이외에도 효능 물질의 생물 전환이 요인이 될 수 있을 것으로 판단되었다.

<실시예 5> 주름 개선 효능 시험 : Procollagen mRNA 발현량 측정

실시예 1로부터 제조된 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)을 이용하여 Procollagen mRNA 발현량을 측정하였다.

사람의 섬유아세포(Human foreskin fibroblast)인 HFF cell은 한국세포주은행(KCLB, Korea)에서 분양 받았다. HFF cell을 10% FBS와 1% penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지를 이용하여 100 ㎜ 세포배양접시에 1.5X10⁴ cells/well로 세포를 분주해 배양하여 부착 및 안정화시킨 후, 배지를 제거해 PBS로 2회 세척하고 농도별(0, 25, 50, 100μg/mL)로 준비한 시료(황련해독탕 및 황련해독탕 발효물)를 처리하여 48시간 배양하였다. Total RNA는 TRI reagent(Sigma, USA)을 이용하여 제조사의 방법으로 추출하였다. 추출된 Total RNA는 Multi-plate reader(Paradigm, USA)를 이용해 정량하여, 1㎍의 RNA를 이용하였고, cDNA 합성 및 RT-PCR은 BIO-RAD real-time system(C1000, USA)을 이용하여 수행하였다. PCR 조건은 95℃ 3분, 58℃ 30초, 72℃ 30초씩 40cycles의 조건으로 수행하였다. RT-PCR에 사용된 Primer는 하기 표 2와 같고, 대조군으로는 TGF-β를 사용하였다.

Name	Primer	Expected Size (bp)
β-actin	서열번호 1: 5'-CATGAAGTGTGACGTGGACA-3' (Forward)	76
	서열번호 2: 5'-CAGGGCAGTGATCTCCTTCT-3' (Reverse)
COL1A1 (procollagen)	서열번호 3: 5'-GACCTCAAGATGTGCCACTC-3' (Forward)	107
	서열번호 4: 5'-CCAGTCTCCATGTTGCAGAA-3' (Reverse)

그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후) 모두 Procollagen의 mRNA 발현량이 증가하였다. 황련해독탕(발효 전)은 농도의존적으로 Procollagen의 mRNA 발현량이 증가하였고, 최고 처리농도 100μg/mL에서 Control 대비 1.85배 증가하였다. 반면, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 농도 의존적으로 Procollagen의 mRNA 발현량이 증가하였고, 최고 처리농도 100μg/mL에서 Control 대비 2.23배 증가하였다. 즉, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 황련해독탕(발효 전) 대비 Procollagen의 mRNA 발현량이 더 높은 것을 확인하였다.

특히, 황련해독탕 발효물(발효 후)은 대조군으로 사용된 TGF-β보다도 높은 Procollagen의 mRNA 발현량의 증가를 나타내었다. 이러한 결과는 인삼에서 분리한 유산균인 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)의 발효 과정을 거쳐 Procollagen의 발현량을 증가시키는 효과가 보고된 바 있는 베르베린(Berberine)의 함량이 증가하여 발효 전 대비 효능이 증가한 것으로 판단되었다.

<실시예 6> 미백 효능 시험 : 멜라닌 생성량 측정

실시예 1로부터 제조된 황련해독탕(발효 전) 및 황련해독탕 발효물(발효 후)을 이용하여 피부의 미백과 관련이 있는 멜라닌 생성에 미치는 효과를 확인하기 위해 멜라닌 생성량을 측정하였다.

마우스 흑색종 세포인 B16F10 cell은 한국세포주은행(KCLB, Korea)에서 분양 받았으며, 각각의 세포배양을 위해 10% FBS와 1% penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지를 사용하였다. 세포는 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

마우스 흑색종 세포인 B16F10 cell에 60mm 세포배양접시에 1X10⁴ cells/well로 세포를 분주해 24시간 배양하여 부착 및 안정화시킨 후, 농도별(0, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100μg/mL)로 희석한 시료(황련해독탕 및 황련해독탕 발효물)와 α-MSH(Sigma, USA)를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, PBS로 2회 세척하고 trypsin-EDTA를 처리하여 세포를 수확한 뒤 원심분리기로 세포를 모아 상층액을 제거하였다. 세포는 10% Dimethyl sulfoxide(DMSO)가 첨가된 1N NaOH 용액을 처리하여 65℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 생성된 멜라닌 양을 410 nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다. 시료액 대신 PBS를 사용한 Blank의 흡광도를 기준으로 멜라닌 생성 억제율을 산출하였고, 대조군으로는 Arbutin를 사용하여 황련해독탕 발효 전후 시료와 비교하였다.

멜라닌 생성량을 확인하기 위하여 아래의 수학식 3를 이용하여 계산하였다.

[수학식 3]

멜라닌 생성량(%)=(각 시료의 흡광도/대조군의 흡광도)X100

시료	IC₅₀(μg/mL)
황련해독탕(발효 전)	N/D
황련해독탕 발효물(발효 후)	9.82 ± 0.3
Arbutin	47.19 ± 0.5

그 결과, 표 3 및 도 5에 나타난 바와 같이 황련해독탕(발효 전)은 최고 처리 농도 100μg/mL에서 51.86%의 멜라닌 생성량을 나타내어, 멜라닌 생성 억제 효과가 48.14%인 것을 확인하였다. 반면, 황련해독탕 발효물(발효 후)의 경우 최저 처리 농도 3.125μg/mL에서부터 농도의존적으로 멜라닌 생성량의 감소를 나타내었고 최고 처리 농도 100μg/mL에서 10.44%의 멜라닌 생성량을 나타내어, 멜라닌 생성 억제 효과가 89.56%인 것을 확인하였다.

또한, 황련해독탕(발효 전)은 100μg/mL 이상의 농도에서 IC₅₀ 값을 나타낸 반면 황련해독탕 발효물(발효 후)은 9.83μg/mL의 농도에서 IC₅₀ 값을 나타내어 멜라닌 생성 억제 활성이 최소 10배 이상 증가한 것으로 확인되었다. 특히, 대조군으로 사용된 Arbutin보다도 황련해독탕 발효물(발효 후)이 멜라닌 억제 효과가 뛰어난 것을 확인하였다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> GFC Co., Ltd. <120> Cosmetic Compositions Containing Fermented Extracts of Hwangryunhaedoktang <130> P17078 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B actin Forward <400> 1 catgaagtgt gacgtggaca 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B actin Reverse <400> 2 cagggcagtg atctccttct 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1 procollagen Forward <400> 3 gacctcaaga tgtgccactc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1 procollagen Reverse <400> 4 ccagtctcca tgttgcagaa 20

Claims

류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) GFC 160704 균주(수탁번호: KCTC18474P)로 발효된 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하되,
상기 황련해독탕 발효물은 발효 전 황련해독탕 대비 베르베린(Berberine) 함량이 2~3배 증대된 것을 특징으로 하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 황련해독탕은 황련(Coptis japonica), 황백(Phellodendron amurense), 황금(Scutellaria baicalensis) 및 치자(Gardenia florida)를 혼합한 복합 추출물인 것을 특징으로 하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제2항에 있어서, 상기 황련(Coptis japonica), 황백(Phellodendron amurense), 황금(Scutellaria baicalensis) 및 치자(Gardenia florida)의 비율은 1:0.1~2:0.1~2:0.1~2 중량비인 것을 특징으로 하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 황련해독탕 발효물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 50 중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 항산화, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물.
제1항, 제2항, 제3항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 화장료 조성물을 포함하는 화장품.