JP4922559B2 - 水溶性陰イオン性バクテリオクロロフィル誘導体及びそれらの使用 - Google Patents

Description

本発明は、バクテリオクロロフィルの新規水溶性陰イオン性バクテリオクロロフィル誘導体、その製法、ｉｎ−ｖｉｖｏでの光力学療法、腫瘍及び加齢黄斑変性症等の様々な血管障害診断法、及びウイルス及び微生物のｉｎ−ｖｉｖｏ及びｅｘ−ｖｉｖｏでの殺作用方法におけるそれらの使用に関するものである。

定義及び略語
ＡＭＤ：加齢黄斑変性症；
Ｂｃｈｌ：第５同素環、中心のＭｇ原子、１７^３位にフィチル又はゲラニルゲラニル基、１３^２位にＣＯＯＣＨ_３基、１３^２位にＨ原子、２，７，１２，１８位にメチル基、３位にアセチル基、８位にエチル基を有するバクテリオクロロフィルａ−五環系７，８，１７，１８−テトラヒドロポルフィリン；
ＢＰｈｅ：バクテリオフェオフィチン（ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈｅｏｐｈｙｔｉｎ）ａ（中心のＭｇが２個のＨ原子で置換されているＢＣｈｌ）；
ＢＰｈｅｉｄ：バクテリオフェオフォルビド（ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ）ａ（ＢＰｈｅから誘導されたＣ−１７^２−遊離カルボン酸）；
Ｐｄ−ＢＰｈｅｉｄ：Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａ；
ＰＤＴ：光力学療法
Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｉｎ：１７位に−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ基、１３位に−ＣＯＯＨ、２、７、１２、８位にメチル基、３及び８位にエチル基を有する７，８，１７，１８−テトラヒドロポルフィリン。

バクテリオクロロフィル誘導体のＩＵＰＡＣ番号が、この明細書を通して使用されている。この番号を使用すると、天然のバクテリオクロロフィルはＣ−１３^２位及びＣ−１７^２位に２個のカルボン酸エステル基を有しているがそれらは、Ｃ−１３^３位及びＣ−１７^３位においてエステル化されている。

光力学療法（ＰＤＴ）は、毒性のない薬剤と無害の光感作性照射を組み合わせてｉｎ ｓｉｔｕで細胞傷害性の反応性酸素種を発生させる非外科的な腫瘍の治療法である。この技術は、通常使用される腫瘍の化学療法及び放射線療法より選択的である。今日まで、ポルフィリンが、主要な光増感剤として病院で採用されてきた。しかしながら、現行の増感剤は、主として、（１）可視スペクトル域の吸収が相対的に弱いことにより、処理が浅い腫瘍に限定されること、（２）患者の皮膚に増感剤が蓄積及び長期間保持されて、長期（数日乃至数カ月）皮膚毒性をもたらすこと、並びに（３）照射した腫瘍と非腫瘍組織に対するＰＤＴ効果の間の差別化が小さいか又はないことさえあることを含む、それらの適用を限定するいくつかの欠陥がある。現行薬剤の欠点は、それらの腫瘍細胞と皮膚又はその他の正常組織内における保持率のより良い差別化を示す長波長を吸収する第２世代の増感剤に対する広範囲に及ぶ探求を鼓舞した。

治療及び診断におけるポルフィリン薬の性能を最適化するために、いくつかのポルフィリン誘導体が提案されており、例えば、４個のピロール環に対して錯化している中心金属（Ｍｇ以外）、及び／又はピロール環の末端置換基が修飾されている、且つ／又は大きな環が二水素化されたクロロフィル誘導体（クロリン）或いは四水素化されたバクテリオクロロフィル誘導体（バクテリオクロリン）などがある。

有利なスペクトル域（６５０〜８５０ｎｍ）におけるそれらの強い吸収及び処理後のそれらの素早い分解により、クロロフィル及びバクテリオクロロフィル誘導体は、腫瘍のＰＤＴのための卓越した増感剤であり、ポルフィリンと比較してより優れた性質を有することが確認されたが、それらは入手し難くまた取り扱いにくい。

バクテリオクロロフィルは、それらがクロロフィル誘導体より強い近赤外すなわちかなり長波長のところの帯域を示すために、クロロフィルと比較して有利である可能性がある。

天然バクテリオクロロフィル（Ｂｃｈｌ）のスペクトル、光物理及び光化学は、それらを、ＰＤＴで現在使用されている他の増感剤を超える明白な利点を有する最適な光吸収分子にしている。特に、これらの分子は、光が組織に深く侵入する長波長（λ_ｍａｘ＝７６０〜７８０ｎｍ、ε＝（４〜１０）×１０^４Ｍ^−１ｃｍ^−１）のところに非常に高い減衰係数を有している。それらは、また、高い量子収量（中心金属による）で反応性酸素種（ＲＯＳ）を生成する。

通常の送達条件、つまり室温における酸素存在下及び通常の照明条件下では、ＢＣｈｌ分子は不安定であり、三重項状態に対する量子収量は、例えばヘマトポルフィリン誘導体（ＨＰＤ）と比較すると、いくらか低い。しかし、生物学的酸化還元反応の開始、好ましい光学的性質及び生体内での分解性という点で、ＰＤＴ療法及び診断及び検体中或いは生体組織中の細胞、ウイルス及び細菌を殺すためには、他の化合物、例えばポルフィリン及びクロロフィルよりもバクテリオクロロフィルの方が潜在的に優れている。バクテリオクロロフィルの化学的修飾はその性質を改善すると期待されるところであるが、そのような修飾バクテリオクロロフィルを調製する適当な方法がないために非常に限定されている。

Ｂｃｈｌの金属を含まない誘導体の生物学的取り込み及びＰＤＴ効果については、腫瘍細胞区画に対する増感剤の親和性を操作する目的で検討されている。この取り組みに対する基本は、腫瘍細胞中の薬剤の蓄積を増すことができる高度に脂肪親和性の薬剤を使用することができるが、それはまたその送達を困難にもする。加えて、報告された体内分布によれば、その薬剤を投与した後、長期間（少なくとも数日）にわたって非腫瘍組織中に大きな光毒性薬剤濃度が示されている。

出願人の前のイスラエル国特許第１０２６４５号、及び対応するＥＰ ０５８４５５２、ＵＳ ５，７２６，１６９、ＵＳ ５，７２６，１６９、ＵＳ ５，９５５，５８５及びＵＳ ６，１４７，１９５には、異なる取り組みが発明者によって取られている。投与後循環から滲出することがなく、短い血液中の寿命を有する高度に有効な抗血管増感剤について検討された。正常な組織と腫瘍又は新脈管に依存するその他の組織等の病的組織の間の本来の差は、その病的組織の選択的な破壊を比較的可能にすることが期待された。それ故、より極性があり、従って、それらが最初の光力学的な効果を導く血管区画に留まる十分な可能性を有するＢｃｈｌ誘導体を合成することを狙いとした。このために、Ｂｃｈｌ（本明細書のスキーム１に描かれている化合物１）のＣ−１７位のゲラニルゲラニル残基を、増感剤の親水性を高める、アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質等様々な残基によって置き換えた。１つの特定の誘導体、Ｂｃｈｌ−Ｓｅｒ（スキーム１、Ｒがセリルである化合物１）が、水溶性で、細胞培養中で高度に光毒性であることが見出された。腹腔内投与の後に、Ｂｃｈｌ−Ｓｅｒは、マウスの血液及び組織から二指数関数的に比較的短時間（ｔ_１／２がそれぞれ２時間と１６時間）で消失した。静脈注射後の血液循環からのクリアランスは、さらに速かった。選択された処理プロトコール（薬剤注射後数分内に光の適用）のもとで、光毒性は主として腫瘍脈管構造に与えられた（Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ−Ｂｅｌｋｉｎ等、１９９６年；Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ等、２００１年及び１９９７年）。しかしながら、残念なことに、天然のＢｃｈｌと同様、Ｂｃｈｌ−Ｓｅｒ誘導体は、急速な光酸化を受けて、対応する２−デスビニル−２−アセチルクロロフィリドエステル及び他の生成物を形成する。

Ｂｃｈｌ誘導体の安定性を増すために、その後の出願人のＰＣＴ公開ＷＯ ００／３３８３３及びＵＳ ６，５６９，８４６においては、中心のＭｇ原子が、Ｐｄによって置き換えられている。この重原子は、Ｂｃｈｌの大環の酸化電位を著しく増大し、同時に分子の項間交差（ＩＳＣ）の比率を大いに高めてそれの三重項状態にすることが以前に示されている。その金属の置換は、ＷＯ ００／３３８３３に記載されているように、Ｂｐｈｅｉｄ分子中にＰｄ^２＋イオンを直接導入することにより行われた。色素の体内分布及び薬物動態学に基づいて、誘導体のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄが、循環中に留まるのは非常に短時間であって、他の組織への漏出は実質的になく、従って、皮膚の光毒性を避ける環脈を目標とするＰＤＴの良好な候補であるとみなされた。血管への処理効果は、処理した血管の生体内顕微鏡検査及びエバンスブルーによる染色により明らかにされた。最小の薬剤と光の間隔による処理プロトコールを使用して、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄ（Ｔｏｏｋａｄとも云う）が、マウス、ラット及びその他の動物モデルの様々な腫瘍の根絶に効果的であることが見出され、現在、放射線治療が失敗した前立腺癌患者で第Ｉ／ＩＩ相臨床試験に入っているところである（Ｃｈｅｎ等、２００２年；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ等、２００２年；Ｋｏｕｄｉｎｏｖａ等、２００３年）。

本発明のさまざまな化合物を以下の図面の説明の中で太字で且つ下線を引いた数字で示している。それらの完全な識別は、下文の化学物質欄の初めの化合物の一覧表の中に見出すことができる。

Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄの臨床用途は、その水溶液中での低い溶解性のために、高い投与量では副作用を起こしかねないクレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）のような可溶化剤の使用を必要とする。Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄを、その物理化学的性質を保持しながら水溶性にすることは、大いに望まれるところである。別法としては、細胞光毒性であり、同時にＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄそれ自体より水溶性であるＢｃｈｌ誘導体を調製することが望ましい。そのような水溶性は、循環中の薬剤保持をさらに高め、それにより前述の選択性を高めることが期待される。加えて、洗浄剤又はリポソーム等の担体を使用する必要がないことにより副作用を防ぐことができる。

本発明は、バクテリオクロロフィル誘導体であって、１７位に遊離のＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ基又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯ⁻基を有する五環系バクテリオクロロフィル誘導体、並びに中心金属原子を有しておらず、１７位に−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ基、１５位に−ＣＨ_２ＣＯＯＨ基又は−ＣＯＯＨ基、１３位に−ＣＯＯＨ基、２、７、１２、１８位にメチル基、３及び８位にエチル基を有している四環系バクテリオクロロフィル誘導体を除く、少なくとも１つ、好ましくは２つ又は３つの、負荷電基及び／又は生理的ｐＨにおいて負荷電基に変換される酸性基を含有するバクテリオクロロフィル誘導体に関するものである。

本発明による負荷電基としては、非限定的に、カルボキシラート（ＣＯＯ⁻）、チオカルボキシラート（ＣＯＳ⁻）、スルホナート（ＳＯ_３ ⁻）、及びホスホナート（ＰＯ_３ ^２−）が挙げられ、生理的ｐＨにおいて前記帯電した基が生じる酸性基は、それぞれカルボン酸（ＣＯＯＨ）基、チオカルボン酸基（ＣＯＳＨ）、スルホン酸基（ＳＯ_３Ｈ）及びホスホン酸基（ＰＯ_３Ｈ_２）である。

一実施形態において、該バクテリオクロロフィル誘導体は、式Ｉ又はＩＩ、

［式中、
Ｍは、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；
Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_４は、それぞれ独立してＹ−Ｒ_５であり；
Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ_５Ｒ_６であり；
Ｒ_３は、−ＣＨ＝ＣＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_３、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ、−ＣＨ＝ＮＲ_７、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＮＲ_７、−ＣＨ_２−ＯＲ_７、−ＣＨ_２−ＳＲ_７、−ＣＨ_２−ＮＲ_７Ｒ’_７、−ＣＨ（ＣＨ_３）−ＯＲ_７、−ＣＨ（ＣＨ_３）−ＳＲ_７、−ＣＨ（ＣＨ_３）−ＮＲ_７Ｒ’_７、−ＣＨ（ＣＨ_３）Ｈａｌ、−ＣＨ_２−Ｈａｌ、−ＣＨ_２−Ｒ_７、−ＣＨ＝ＣＲ_７Ｒ’_７、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＲ_７Ｒ’_７、−ＣＨ＝ＣＲ_７Ｈａｌ、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＲ_７Ｈａｌ、及び−Ｃ≡ＣＲ_７から選択され；
Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７は、それぞれ独立してＨ又は、
（ａ）１つ若しくは複数のヘテロ原子、炭素環若しくは複素環部分を場合により含有しており、且つ／又は、ハロゲン、オキソ、ＯＨ、ＳＨ、ＣＨＯ、ＮＨ_２、ＣＯＮＨ_２、マイナスに帯電している基、及び生理的ｐＨにおいて負荷電基に変換される酸性基からなる群から選択される１つ若しくは複数の官能基により場合により置換されているＣ_１〜Ｃ_２５ヒドロカルビル；
（ｂ）アミノ酸、ペプチド又はタンパク質の残基；並びに
（ｃ）Ｙが、Ｏ又はＳである場合、さらにＲ_８ ^＋であってもよいＲ_５
からなる群から選択され；
ｍは、０又は１であり；
Ｒ_８ ^＋は、Ｈ^＋又は陽イオンであり、
但し、
（ｉ）Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７の少なくとも１つ、好ましくは２つが、マイナスに帯電している基、又は生理的ｐＨにおいて負荷電基に変換される酸性基により置換されている上の（ａ）で定義した炭化水素鎖であるか、又は
（ｉｉ）Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_４の少なくとも１つ、好ましくは２つが、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋若しくはＳ⁻Ｒ_８ ^＋であるか、又は
（ｉｉｉ）Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_４の少なくとも１つが、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋若しくはＳ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７の少なくとも１つが、マイナスに帯電している基、又は生理的ｐＨにおいて負荷電基に変換される酸性基により置換されているか、又は
（ｉｖ）Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_４の少なくとも１つが、ＯＨ、ＳＨ、Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋若しくはＳ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７の少なくとも１つが、アミノ酸、ペプチド又はタンパク質の残基であるか、又は
（ｖ）Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７の少なくとも１つが、マイナスに帯電している基、又は生理的ｐＨにおいて負荷電基に変換される酸性基により置換されている炭化水素鎖であり、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７の少なくとも１つが、アミノ酸、ペプチド又はタンパク質の残基である
という条件であり、
しかし、Ｍが定義通りであり、Ｒ_３が−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_３であり、Ｒ_１がＯＨ又はＯＲ_８ ^＋であり、Ｒ_２が−ＯＣＨ_３である式Ｉの化合物と、Ｍが２Ｈであり、Ｒ_３がＣ（＝Ｏ）ＣＨ_３であり、Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_４がＯＨであり、ｍが０又は１である式ＩＩの化合物とを除く］を有する。

本発明は、さらに、上で定義したバクテリオクロロフィル誘導体を含む光力学療法（ＰＤＴ）特に脈管標的ＰＤＴ、例えば腫瘍若しくは加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）のＰＤＴ、又は細胞若しくは細菌及びウイルスを含む病原菌をｉｎ ｖｉｖｏ若しくはｉｎ ｖｉｔｒｏで殺すため、並びに診断目的のための薬剤組成物に関する。

本発明は、光増感剤を使用する光力学療法を提供し、その改善は、前記光増感剤が本発明のバクテリオクロロフィル誘導体であることに存する。この態様によれば、本発明は、有効量の本発明のバクテリオクロロフィル誘導体を必要としている個体に投与し、その後局所を照射することを含むＰＤＴによる治療方法に関する。

本発明は、さらに光増感剤を使用する腫瘍の診断方法を提供し、その改善は、前記光増感剤が、本発明のバクテリオクロロフィル誘導体であることに存する。この態様によれば、本発明は、腫瘍があることが疑われる個体に、本発明のバクテリオクロロフィル誘導体の有効量を投与し、続いて局所照射して被検部の蛍光発光を測定するステップを含む、より高い蛍光発光が腫瘍部位を示す腫瘍の診断方法に関する。

本発明は、さらにまた、細胞又は細菌及びウイルスを含む病原菌を、光増感剤を使用して殺す方法を提供し、その改善は、前記光増感剤が本発明のバクテリオクロロフィル誘導体であることによる。この態様によれば、本発明は、生物学的製剤、例えば血液を殺菌する方法に関するものであり、それは前記生物学的製剤、例えば血液に有効量の本発明のバクテリオクロロフィル誘導体を加え、続いて照射するステップを含む。

本発明は、広範な態様において、バクテリオクロロフィル誘導体であって、１７位に遊離のＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ基又はＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯ⁻基を有する五環系バクテリオクロロフィル誘導体、並びに中心金属原子を有しておらず、１７位に−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ基、１５位に−ＣＨ_２ＣＯＯＨ基又は−ＣＯＯＨ基、１３位に−ＣＯＯＨ基、２、７、１２、１８位にメチル基、３及び８位にエチル基を有している四環系バクテリオクロロフィル誘導体を除く、少なくとも１つ、好ましくは２つ又は３つの、負荷電基及び／又は生理的ｐＨにおいて負荷電基に変換される酸性基を含有するバクテリオクロロフィル誘導体を提供する。

そのバクテリオクロロフィル誘導体は、中心のＭｇ原子が、削除又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒ等の他の金属原子によって置き換わっている化合物を含んでいるバクテリオクロロフィルの天然若しくは合成誘導体から誘導することができる。好ましい実施形態において、その金属原子は、存在しないか又は、Ｐｄ、Ｃｕ、Ｚｎ若しくはＭｎである。最も好ましい実施形態においては、その中心の金属は、Ｐｄである。

１つの好ましい実施形態において、本発明は、上文で定義した式Ｉ又はＩＩのバクテリオクロロフィル誘導体を提供する。

本発明によれば、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及びＲ’_７に対して定義されている「ヒドロカルビル」とは、１〜２５の炭素原子、好ましくは１から２０、より好ましくは１から６、最も好ましくは２〜３の炭素原子の、任意の、直鎖又は枝分かれ、飽和又は不飽和、非環式又は環式の、芳香族を含むヒドロカルビル基を意味する。そのヒドロカルビルは、好ましくは１〜４の炭素原子のアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、又はアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、フェニル等のアリール又はベンジル等のアラルキル基、或いは１７位における、それは、天然のＣｈｌ及びＢｃｈｌ化合物から誘導された基、例えばゲラニルゲラニル（２，６−ジメチル−２，６−オクタジエニル）又はフィチル（２，６，１０，１４−テトラメチル−ヘキサデセ−１４−エン−１６−イル）である。

Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及び／又はＲ’_７の炭化水素鎖は、Ｏ、Ｓ及び／又はＮＨ等の１つ又は複数のヘテロ原子、及び／又は１つ又は複数の炭素環（例えばフェニル）、又は複素環（例えばピリジル）部分を場合によって含有することができる。１つの実施形態において、そのヒドロカルビル鎖は、４から１０の炭素原子のオリゴオキシエチレングリコール残基、好ましくはペンタオキシエチレングリコールにより代表される、１つ又は複数のＯ原子を含有し、ＯＨ末端基を有する。

Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及び／又はＲ’_７は、また、Ｃｌ、ＣＨＯ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ_２、ＣＯＮＨ_２、ＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＰＯ_３Ｈ_２等の１つ又は複数の官能基或いはＣＯＯ⁻、ＣＯＳ⁻、ＳＯ_３ ⁻、又はＰＯ_３ ^２−等の負荷電基によって置換されているヒドロカルビルであっても良い。１つの好ましい実施形態において、その官能基、ＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＰＯ_３Ｈ_２、ＣＯＯ⁻、ＣＯＳ⁻、ＳＯ_３ ⁻、又はＰＯ_３ ^２−は、末端官能基である。最も好ましい実施形態において、そのヒドロカルビルは、２又は３の炭素原子及びＣＯＯ⁻、ＰＯ_３ ^２−から選択され、或いは最も好ましくはＳＯ_３ ⁻である末端基を有する。

なおさらなる実施形態において、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７又はＲ’_７は、複数のＯＨ及び場合によってはＮＨ_２によって置換されていてもよく、ｍｏｎｏａｃｃｈａｒｉｄｅ、例えばグルコサミンの残基であり得る。

他の実施形態において、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７又はＲ’_７は、アミノ酸、ペプチド又はタンパク質の残基であり得る。１つの好ましい実施形態において、Ｒ_５は、任意の位置の、しかし好ましくは１７^３位の、アミノ酸、ペプチド又はタンパク質の残基である。そのアミノ酸、ペプチド又はタンパク質は、それらが遊離の末端カルボキシル基及び／又は非末端の遊離のカルボキシル基を含有するアミノ酸、例えばアスパラギン酸若しくはグルタミン酸の残基を含有している場合は、負荷電基の発生源であり得る。

１つの実施形態において、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７又はＲ’_７は、セリン、トレオニン及びチロシン等のヒドロキシ基を含有するアミノ酸又はペプチド（オリゴペプチド又はポリペプチド）、又はそれらを含有するペプチド、或いは、前記アミノ酸、又は、アルキルエステル、好ましくはメチルエステル等のエステル、及びＮ−保護基が、例えばｔ−ブチルオキシ、カルボベンゾキシ又はトリチルであるＮ−保護された誘導体から選択される前記アミノ酸又はペプチドの誘導体であり、前記ヒドロキシル化アミノ酸若しくはペプチド又はそれらの誘導体は、そのヒドロキシ基を介してＢＣｈｌ誘導体のＣＯＯ⁻基に結合している。上記アミノ酸誘導体の例は、セリンメチルエステル、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルセリン、Ｎ−トリチル−セリンメチルエステル、チロシンメチルエステル、及びＮ−ｔ−ブトキシ−チロシンメチルエステルであり、上記ペプチドの例は、Ｎ−カルボベンゾキシ−セリルセリンメチルエステルであって、それらはすべて、上記のＥＰ ０５８４５５２に記載されているようにして調製される。

他の実施形態において、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及び／又はＲ’_７は、アミド結合（ＹがＮＨである）を介して−ＣＯ基に連結しているアミノ酸又はペプチド（オリゴ又はポリペプチド）の残基である。

さらなる実施形態において、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７又はＲ’_７は、ペプチド又はタンパク質から選択される細胞特有又は組織特有の配位子の残基であり、それらを例示すれば、非限定的に、例えばメラニン細胞刺激ホルモン（例えば、α−ＭＳＨ）等のホルモンペプチドと、抗体（例えば、免疫グロブリン及び腫瘍特有の抗体）が挙げられる。そのペプチド又はタンパク質は、エステル結合、チオエステル結合又はアミド結合により−ＣＯ基に直接連結しているか、又はＯＨ、ＣＯＯＨ及びＮＨ_２から選択されるＣ_１〜Ｃ_２５ヒドロカルビル基の末端官能基に、エステル結合又はアミド結合を介して連結している。

上記のＥＰ ０５８４５５２に記載されているように、Ｂｃｈｌの種々のアミノ酸との結合、及びそのＢｃｈｌアミノ酸結合体のホルモン、増殖因子若しくはそれらの誘導体、又は腫瘍特有の抗体、又は任意のその他の細胞特有の配位子とのさらなる結合により、適当な特定部位光増感剤が得られる。

１つの実施形態において、本発明による負荷電基、ＣＯＯ⁻、ＣＯＳ⁻、ＳＯ_３ ⁻、又はＰＯ_３ ^２−は、それぞれ、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７及び／又はＲ’_７の置換されたヒドロカルビル鎖の官能基、ＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＳＯ_３Ｈ、ＰＯ_３Ｈ_２に由来する。他の実施形態においては、ＣＯＯＨ、ＣＯＳＨ、ＣＯＯ⁻、及び／又はＣＯＳ⁻基は、それぞれ、ＯＨ又はＳＨ、Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋又はＳ⁻Ｒ_８ ^＋である、Ｒ_１、Ｒ_２、及びＲ_４から、すなわち、カルボキシル基若しくはチオカルボキシル基又はカルボキシラート陰イオン若しくはチオカルボキシラート陰イオンが、１３^１位、１５^１位（ｍ＝０）、１５^２位（ｍ＝１）、及び／又は１７^３位に存在するときに、誘導される。

陽イオンＲ_８ ^＋は、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、ＮＨ_４ ^＋、Ｃａ^＋等のアルカリ金属又はアルカリ土類金属に由来する一価又は二価の陽イオン、より好ましくはＫ^＋であり、或いはＲ_８ ^＋は、アミンに由来する陽イオンである。

１つの好ましい実施形態において、本発明のバクテリオクロロフィル誘導体は、式Ｉを有しており、式中：
Ｍは、二価のＰｄを表し、
Ｒ_１は、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２であり、
Ｒ_２は、メトキシであり、
Ｒ_３は、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_３であり、
Ｒ_８ ^＋は、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、ＮＨ_４ ^＋等の一価陽イオンであり、
ｎは、１から１０までの整数、好ましくは２又は３である。

この実施形態によれば、式Ｉの化合物中のＲ_１は、好ましくは、ｎが３であり、Ｒ_８ ^＋がＫ^＋である基−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋である。

他の好ましい実施形態において、本発明のバクテリオクロロフィル誘導体は、式ＩＩを有しており、式中：
Ｍは、２Ｈ、二価Ｐｄ、Ｃｕ、若しくはＺｎ又は三価Ｍｎを表し、
Ｒ_１は、−Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２；又はＹ−Ｒ_５（Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＨである）であり、Ｒ_５は、アミノ酸、ペプチド若しくはタンパク質の残基である。
Ｒ_２は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等のＣ_１〜Ｃ_６アルコキシ、より好ましくはメトキシであり、
Ｒ_３は、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_３、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｓ０_３ ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２；−ＣＨ_２−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋；又は−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２であり、
Ｒ_４は、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋；−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐ０_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２であり、
Ｒ_８ ^＋は、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、ＮＨ_４ ^＋等の一価陽イオン、より好ましくはＫ^＋であり、
ｍは、１であり、ｎが、１から１０までの整数であって、好ましくは２又は３である。

本発明のより好ましい実施形態において、該バクテリオクロロフィル誘導体は、式ＩＩを有しており、ＭがＰｄである。

他のより好ましい実施形態において、本発明は、式ＩＩであって、式中：
Ｍが、二価のＰｄであり、
Ｒ_１が、−Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋、又はＹ−Ｒ_５（Ｙは、Ｏ、Ｓ若しくはＮＨである）であり、Ｒ_５は、タンパク質、より好ましくは免疫グロブリンの残基であるであり、
Ｒ_２が、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等のＣ_１〜Ｃ_６アルコキシであって、好ましくはメトキシであり、
Ｒ_３が、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_３、−ＣＨ＝Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｓ０_３ ⁻Ｒ_８ ^＋；又は−ＣＨ_２−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋であり、
Ｒ_４が、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋；ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋；ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｐ０_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２であり、
Ｒ_８ ^＋が、Ｋ^＋、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、ＮＨ_４ ^＋等の一価陽イオンであって、好ましくはＫ^＋であり、
、ｍが、１であり、ｎが、２又は３、より好ましくは２である
バクテリオクロロフィル誘導体に関する。

１７位にすべて負荷電基（ＳＯ_３ ⁻）を有する本発明のバクテリオクロロフィル誘導体の１例は、下文の化合物の一覧表中で化合物７として示されている式Ｉの化合物により表される。

１３位及び１７位に２つの負荷電基を有する本発明のバクテリオクロロフィル誘導体の例としては、下文の化合物の一覧表中で化合物４、５、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５として示されている式ＩＩの化合物が挙げられる。最も好ましい実施形態において、本発明の化合物は、化合物４である。

３位、１３位及び１７位に３つの負荷電基を有する本発明のバクテリオクロロフィル誘導体の例としては、下文の化合物の一覧表中で化合物９及び１６として示されている式ＩＩの化合物が挙げられる。化合物１３は、１３位に１つの負荷電基と、１７^３位にタンパク質分子の一部としての−ＣＯＯＨ基とを有しており、化合物１５は、１３位に１つのマイナスに帯電した二価の基と、１７^３位に−ＣＯＯ⁻基とを有している。

本発明の化合物は、例えば、本明細書のスキーム１に描かれている方法により調製することができる。Ｒ_５が、アミノ酸、ペプチド又はタンパク質の残基である化合物の調製には、上記のＥＰ ０５８４５５２に記載されている方法、特に触媒縮合法を、アミノスルホン酸であるタウリン及びホモタウリン（ｈｏｍｏｔａｕｒｉｎｅ）との反応に、スキーム１に示されているように使用することができる。

例えば、Ｒ_１が、−Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_２が、−ＯＣＨ_３であり、Ｒ_３がアセチルであり、Ｒ_４が、基−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_８ ^＋が、一価の陽イオンであり、ｍが１であり、ｎが１から１０である式ＩＩの化合物を調製する方法は、（ｉ）Ｒ_１がＯＨである式Ｉの対応するＭ−バクテリオフェオフォルビドを、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈのアミノスルホン酸とＲ_８ ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び（ｉｉ）式ＩＩの所望の化合物を単離するステップを含む。

化合物４を調製するには、その方法は、Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａ（３）を、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_２−ＳＯ_３ＨのタウリンとＫ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び所望の化合物を単離するステップを含む。

化合物５を調製するには、その方法は、バクテリオフェオフォルビドａ（２）を、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_２−ＳＯ_３ＨのタウリンとＫ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び所望の化合物を単離するステップを含む。

Ｃｕ及びＺｎの化合物１０、１１を調製するには、その方法は、化合物５を、それぞれ、酢酸銅又は酢酸亜鉛と反応させることにより中心金属Ｃｕ又はＺｎを直接挿入することを含み、一方Ｍｎ化合物１２の調製には、中心金属Ｍｎの挿入は、最初に化合物５を酢酸カドミウムと反応させ、次いで塩化マンガンと反応させることによる金属交換反応によって行う。

Ｒ_１が、−Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_２が、−ＯＣＨ_３であり、Ｒ_３がアセチルであり、Ｒ_４が、基−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_８ ^＋が、一価の陽イオンであり、ｍが１であり、ｎが１から１０である式ＩＩの化合物を調製する方法は、（ｉ）Ｒ_１がＯＨである式Ｉの対応するＭ−バクテリオフェオフォルビドを、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯＨのアミノカルボン酸とＲ_８ ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び（ｉｉ）式ＩＩの所望の化合物を単離するステップを含む。

例えば、化合物１４を調製するには、その方法は、Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａ（３）を、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_２−ＣＯＯＨのβ−アラニンとＫ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び所望の化合物を単離するステップを含む。

Ｒ_１が、−Ｏ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_２が、−ＯＣＨ_３であり、Ｒ_３がアセチルであり、Ｒ_４が、基−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３ ^２−（Ｒ_８ ^＋）_２であり、Ｒ_８ ^＋が、一価の陽イオンであり、ｍが１であり、ｎが１から１０である式ＩＩの化合物を調製する方法は、（ｉ）Ｒ_１がＯＨである式Ｉの対応するＭ−バクテリオフェオフォルビドを、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３Ｈ_２のアミノホスホン酸とＲ_８バッファー中で反応させるステップ、及び（ｉｉ）式ＩＩの所望の化合物を単離するステップを含む。

例えば、化合物１５を調製するには、その方法は、Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａ（３）を、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_３−ＰＯ_３Ｈ_２の３−アミノ−１−プロパンホスホン酸とＫ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び所望の化合物を単離するステップを含む。

１３位及び１７位にマイナスに帯電した同じ基を有する化合物を調製するには、対応するＭ−バクテリオフェオフォルビドを、過剰の、アミノスルホン酸、アミノカルボン酸又はアミノホスホン酸等の試薬と上記のように反応させ、所望の式ＩＩの１３，１７−二置換誘導体を単離することができ、或いは、本明細書のスキーム１に描かれており、以下に記載されている異なる手段に従うことができる。

例えば、Ｒ_１及びＲ_４が、それぞれ基−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３ ⁻Ｒ_８ ^＋であり、Ｒ_２が、−ＯＣＨ_３であり、Ｒ_３がアセチルであり、Ｒ_８ ^＋が、一価の陽イオンであり、ｍが１であり、ｎが１から１０である式ＩＩの化合物を調製する方法は、（ｉ）Ｒ_１がＯＨである式Ｉの対応するＭ−バクテリオフェオフォルビドを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）とカップリングするステップ、（ｉｉ）得られたＭ−バクテリオフェオフォルビド−１７^３−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドを、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、過剰の式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈのアミノスルホン酸と反応させ、かくして１７位に唯一の負荷電基を有する式Ｉの化合物を得るステップ、（ｉｉｉ）この生成物を、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、過剰の式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈと反応させるステップ、及び（ｉｖ）所望の式ＩＩの化合物を単離するステップを含む。

化合物８の調製には、過剰の式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_３−ＳＯ_３Ｈのホモタウリンとの反応を行う。

該アミノスルホン酸が、アミノカルボン酸又はアミノホスホン酸と置き換えた場合は、対応するカルボキシラート誘導体及びホスホナート誘導体が得られる。

本明細書で時々「色素」の用語でも呼ばれる本発明の化合物は、水溶性であって、界面活性剤が添加されていない水溶液の注射をするのに十分な高い極性を提供する。１つの実施形態で、好ましいスルホン化−Ｐｄ−Ｂｃｈｌ化合物４は、そのうえ、体内分布及び薬物動態を示し、それによって、本発明のこの誘導体及びその他の誘導体は、循環中に、しかも非常に短時間留まるものとみなされる。それ故それらは、脈管を標的とするＰＤＴ用の優れた増感剤である。本明細書に示したマウスにおけるＭ２Ｒ黒色性メラノーマ及びＨＴ−２９ヒト結腸癌異種移植片の処理は、腫瘍脈管構造の色素の選択的効果を示している。スルホン化−Ｐｄ−Ｂｃｈｌ４による推奨されるプロトコールとして、薬剤の短いクリアランス時間が考えられる。それらの腫瘍脈管構造の選択的効果に基づいて、これらの化合物は、腫瘍並びに加齢黄斑変性症及び新血管新生によるその他の組織の異常に使用することができる。

他の態様において、本発明は、本発明のバクテリオクロロフィル誘導体及び薬剤として許容される担体を含む薬剤組成物を提供する。

好ましい実施形態において、その薬剤組成物は、本明細書の式Ｉ又はＩＩのバクテリオクロロフィル誘導体、より好ましくは式ＩＩのスルホン化誘導体、最も好ましくは化合物４を含む。

本発明の陰イオン性バクテリオクロロフィル誘導体は、患者に投与するための最終薬剤組成物に製剤化するか、又は、例えば「レミングトンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」（米国ペンシルベニア州イーストン所在のＭａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．）の最新版にまとめられている当技術分野で周知の技術を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの標的に適用する。その組成物は、全身的に、特に注射により投与することが可能であり、又は局所的に使用することもできる。

本発明の陰イオン性Ｂｃｈｌ化合物は、それぞれの非陰イオン性Ｂｃｈｌと同様の光吸収及び光物理的性質を有しており、そのため、処理組織中に一旦入り込むとそれらは効果的な光力学作用剤となることが期待される。それらは、したがって、ＰＤＴ及びその他の光増感剤応用の技術でよく知られている、例えば、非限定的に、メラノーマ、前立腺癌、脳腫瘍、大腸癌、卵巣癌、乳癌、皮膚癌、肺癌、食道癌及び膀胱癌等のそれぞれの癌の種類並びにその他のホルモン感受性腫瘍治療並びに加齢黄斑変性症の治療のための治療薬及び診断用薬として、並びにサンプル及び生体組織中の、細胞、ウイルス、カビ及び細菌を殺すための光増感剤として有用であり得る。

本発明の新規な水溶性Ｂｃｈｌ誘導体は、例えば、適当な波長の光を用いて、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｅｘ ｖｉｖｏのいずれかで照射することによって、腫瘍細胞又はその他の異常組織を感作して破壊するのに有用である。光活性化のエネルギーは、内在性酸素に転移し、それを一重項酸素に、且つ／又は細胞傷害効果に対して役割を果たすと考えられるスーパーオキシドラジカル及びヒドロキシルラジカル等のその他の反応性酸素種（ＲＯＳ）に転化するものと考えられる。さらに、そのＢｃｈｌの光活性化された形は、蛍光を発し、その蛍光発光は、Ｂｃｈｌ誘導体を投与する腫瘍又はその他の部位の場所を特定するのに役立ち得る。

本発明のバクテリオクロロフィル誘導体で治療することが可能な技術的に知られている適応の例としては、固形腫瘍内の腫瘍組織の破壊及び血管プラークの分解が挙げられる（例えば、米国特許第４５１２７６２号参照）。特に、これらの誘導体は、それらの循環中の滞留が最低限であるため、及びそれらは、皮膚及び筋肉等の非循環組織により吸収されるのが最小限であるため、脈管を標的としたＰＤＴに適する。例えば、これらの化合物は、励起状態で内部血管に限定された反応性酸素種（ＲＯＳ）の発生を可能とし、それにより、腫瘍及び加齢黄斑中に存在するもののような異常血管の選択的感応を引き起こす。さらに、該バクテリオクロロフィル誘導体は、座蒼、水虫、いぼ、乳頭腫、及び乾癬等の局所治療における選択的破壊のため、良性前立腺肥大症の治療のため、及び輸血用血液等の生物生成物の病原菌の破壊による殺菌のために有用である。

本発明の薬剤組成物は、ＰＤＴで使用される標準的な方法によって患者に投与される。必要な固体に投与される本発明の陰イオン性Ｂｃｈｌ誘導体の量及び投与の経路は、ＰＤＴで使用される他のポルフィリンで蓄積された経験によって確立され、活性成分として使用する誘導体の選択、治療する例えば腫瘍の種類等の条件、病気の段階、患者の年齢及び健康状態、並びに医者の判断によって異なるであろうが、フォトフリンＩＩの用量で従来使用される約２０〜４０ｍｇＨＰＤ／ｋｇ体重よりはるかに少ない。投与の好ましい経路は、通常の薬剤として許容される担体及び添加剤を含んでいる活性化合物水溶液の静脈注射又は固形腫瘍への直接注射、並びに適当な局所用組成物による皮膚腫瘍の局所的治療である。

照射光の波長は、バクテリオクロロフィル光増感剤の最大吸収に適合するように好ましくは選択する。任意の化合物に対する適当な波長は、その吸収スペクトルから容易に決定することができる。

ｉｎ ｖｉｖｏでの使用に加えて、本発明の陰イオン性Ｂｃｈｌ誘導体は、有害なウイルス又は有害な細菌等の病原菌を殺すため、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの材料の処理に使用することができる。例えば、将来の輸血のために使用される血液及び血漿は、本発明のＢｃｈｌで処理し、照射して殺菌を実施することができる。

タンパク質（例えばホルモン）、増殖因子又はその誘導体、抗体、標的細胞受容体に特定的に結合するペプチド、及び細胞栄養素（例えば、チロシン）のＢｃｈｌ部分への結合は、それらの腫瘍及び処理部位中の保持を増大することを意味する。レッドシフトの増大は、自然分類系の偏在を保ちながら浸透の深さをより大きくする効果がある。Ｍｇの他の金属による置換は、Ｂｃｈｌの固有の代謝安定性、及びその励起された三重項状態への項間交差を最適化することを意味し、且つまた新規な診断方法の可能性を開くものである。

新内皮細胞に対する高い親和性を有する腫瘍特有の抗体及びペプチドは、Ｂｃｈｌを選択的に標的にして腫瘍又は治療部位に向かわせ、一方、ホルモン及び細胞栄養素は、変形されていない正常の対応物により同様に吸収される。しかしながら、ホルモン及び細胞栄養素に対する標的として選択された細胞（メラニン細胞及び新内皮細胞等）は、標準状態下で他の細胞間に散乱し、悪性細胞に変形した場合は密集して固形腫瘍となる。その結果、脈管及び／又は悪性組織の細胞区画内の光増感剤の濃度は、細胞がより分散している正常組織中の濃度と対比して劇的に増加し、腫瘍部位におけるＰＤＴ効果の増幅を確かなものにすることが期待される。これにより、例えば空間的に明確に限定する照射の必要性が減少して、正常細胞の損傷閾値より低い、光線量の効果的な使用が可能となる。加えて、非常に強い蛍光発光を有することにより、部位指向性のＢｃｈｌを、腫瘍部位（１つ又は複数）又はその他の標的の蛍光発光標識用に使用することができる。

本発明の１つの最も好ましい実施形態において、本発明の増感剤による治療の標的は、推奨される本明細書に記載されているＰＤＴプロトコールに対する正常血管と異常血管の感度に本質的な差異があることから、異常血管、特に固形腫瘍及び加齢黄斑変性症の血管である。

本発明は、さらに、本発明のＢｃｈｌ誘導体の有効量を必要としている個体に投与し、その後局所を照射することを含む光力学治療の方法に関する。

一実施形態において、本発明のそのＰＤＴ法は癌の治療に使用され、固形腫瘍の癌で悩んでいる患者に治療的に有効な量の本発明によるＢｃｈｌ誘導体を投与し、続いて６７０〜７８０ｎｍの強力な光源によりその腫瘍部位を照射することを含む。

本発明のＢｃｈｌ誘導体は、また、あるタイプの培養液中の細胞又は感染性媒介物の選択的な光破壊を可能にする、正常又は悪性の動物細胞並びに培養液中の微生物の光破壊のため；ポルフィリン部分が、ホルモン又はその他の受容体配位子等の特定のポリペプチド、細胞若しくは組織に特有の抗体又はその他の配位子（例えばレクチン）に連結することにより、選択された細胞を標的にすることのため；実験室、診断及び産業上での利用における分析を目的とした分子の蛍光標識／タギングのため；並びに実験室、診断若しくは産業上で利用する動物細胞又は粒子の蛍光標識のためにも有用である。それらは、それらの優れた減衰係数及びより高い蛍光収率によって、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）又はフィコエリトリン等の従来使用されている蛍光タグのいくつかに置き換わることができる。

診断目的のために、本発明のＢｃｈｌ誘導体は、単独で使用することが可能であり、或いは放射性同位元素又はその他の技術的に知られている検知手段と共に標識することができる。例えば、Ｂｃｈｌ誘導体は、標準的なプロトコールにより放射活性物質で（例えば、^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^２０１Ｔｌ、^９９ｍＴｃ）標識することができ、その放射能を持った診断用薬は、患者に、好ましくは静脈注射により投与される。数時間後、癌の位置は、標準的な方法により画像化することができる。

本発明は、生物生成物例えば血液中の、細胞又は細菌、ウイルス、寄生生物及びカビ等の病原菌をｅｘ−ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｖｏでの殺作用のための本発明のＢｃｈｌ誘導体の使用をさらに提供し、それは、感染したサンプルを本発明の化合物で処理し、続いてそのサンプルに照射するステップを含む。

本発明を、これより以下の非限定の実施例により説明する。

（実施例）
便宜上及びより良い理解のために、実施例の項は、２つのサブの項：（Ｉ）水溶性誘導体及び中間体４〜１６の合成を説明する化学品の項と、（ＩＩ）新規なＢｃｈｌ誘導体の生物活性について説明する生物学の項とに分ける。

Ｉ 化学品の項
本明細書の実施例では、本発明の誘導体（４〜５、７〜９、及び１０〜１６）と中間体（１〜３、及び６）は、以下の化合物の一覧表によるそれらそれぞれの太字及び下線を引いたアラビア数字によって示す。対応する式は、明細書の終わりのスキームの中に登場する。

化合物一覧
１．バクテリオクロロフィルａ（Ｂｃｈｌ ａ）
２．バクテリオフェオフォルビドａ（Ｂｐｈｅｉｄ ａ）
３．Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａ（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄ ａ）
４．パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩［実施例１］
５．３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩［実施例２］
６．パラジウムバクテリオフェオフォルビドａ １７^３−（３−スルホ−１−オキシスクシンイミド）エステルナトリウム塩［実施例６］
７．パラジウムバクテリオフェオフォルビドａ １７^３−（３−スルホプロピル）アミドカリウム塩［実施例７］
８．パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１，１７^３−ジ（３−スルホプロピル）アミド二カリウム塩［実施例８］
９．パラジウム３^１−（３−スルホプロピルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１，１７^３−ジ（３−スルホプロピル）アミド三カリウム塩［実施例９］
１０．銅（ＩＩ）３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩［実施例３］
１１．亜鉛３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩［実施例４］
１２．マンガン（ＩＩＩ）３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩［実施例５］
１３．パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミド、１７^３−（Ｎ−イムノグロブリンＧ）アミドカリウム塩］［実施例１０］
１４．パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−カルボキシエチル）アミド二カリウム塩［実施例１１］
１５．パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（３−ホスホプロピル）アミド三カリウム塩［実施例１２］
１６．パラジウム３^１−（３−スルホプロピルアミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１，１７^３−ジ（３−スルホプロピル）アミド三カリウム塩［実施例１３］

材料及び方法
（ｉ）Ｂｃｈｌ ａ（１）は、前述（ＷＯ ００／３３８３３）のようにして、Ｒｈｏｄｏｖｏｌｕｍ Ｓｕｌｆｉｄｏｐｈｉｌｕｍの凍結乾燥した細胞から抽出して精製した。
（ｉｉ）パラジウムバクテリオフェオフォルビド（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄ、２）は、前述（ＷＯ ００／３３８３３）のようにして調製するか、又はＮｅｇｍａ−Ｌｅｒａｄｓ社を介してＳｔｅｂａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｌｔｄ．社（フランス）から入手した。
（ｉｉｉ）３−アミノ−１−プロパンスルホン酸（ホモタウリン）及び３−アミノ−１−プロパンホスホン酸は、Ａｌｄｒｉｃｈ社（米国）から購入し、２−アミノエタンスルホン酸（タウリン）及び３−アミノプロピオン酸（β−アラニン）は、Ｓｉｇｍａ社（米国）から購入し、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ）は、Ｐｉｅｒｃｅ社（米国）から購入し、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）は、Ｆｌｕｋａ社（スイス）から購入した。
（ｉｖ）ＨＰＬＣ用の溶媒を適用するＨＰＬＣを行う場合以外は、分析用の化学品及び溶媒を一般的に使用した。
（ｖ）ＴＬＣ：シリカプレート（キーゼルゲル６０、ドイツのメルク社）、クロロホルム−メタノール（４：１、ｖ／ｖ）。
（ｖｉ）^１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ａｖａｎｃｅ ＤＰＸ２５０の装置（フランスのＢｒｕｋｅｒ社）で記録し、内部標準としての残留溶媒ピークのテトラメチルシランからのｐｐｍ（δ）で表したダウンフィールドシフトを報告した。
（ｖｉｉ）Ｐｄ−誘導体の減衰係数は、Ｐｄ濃度（ＰｄＣｌ_２を標準とする炎光光度法を用いる）を試験溶液の特定の波長における光学密度と相関させることにより測定した。
（ｖｉｉｉ）電気スプレー電離マススペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）は、プラットフォームＬＣＺスペクトロメータ（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社、英国）で記録した。
（ｉｘ）Ｐｄ濃度の測定には、ＥＬＡＮ−６０００の装置（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社、米国コネティカット州）を用いて、誘導結合プラズマ質量分析法（ＩＣＰ−ＭＳ）を行った。
（ｘ）種々錯体の光吸収は、Ｇｅｎｅｓｉｓ−２（Ｍｉｌｔｏｎ Ｒｏｙ社、英国）及びＶ−５７０（ＪＡＳＣＯ社、日本）分光光度計で記録した。
（ｘｉ）ＨＰＬＣは、ＵＶ−９１５ダイオードアレー検知器を装着したＬＣ−９００の装置（ＪＡＳＣＯ社、日本）を用いて実施した。
（化学品実施例）

パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩（化合物４）
９３５ｍｇのＰｂ−Ｂｐｈｅｉｄ（３）を、１Ｌの丸底フラスコ中の１２０ｍｌのＤＭＳＯにアルゴン下で（溶液中に吹き込む）攪拌して溶解した。タウリン（１２８８ｍｇ）を１ＭのＫ_２ＨＰＯ_４バッファー４０ｍｌに溶解し、その溶液のｐＨをＨＣｌで８．２に合わせた。この水溶液をＤＭＳＯ溶液に攪拌しながら加え、アルゴンをその溶液にさらに２０分間吹き込んだ。続いてその反応混合物をほぼ２ミリバールの下、３０℃で３．５時間と、その後さらに２時間、３７℃で完全な乾燥状態まで乾燥させた。その乾燥固体を３００ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、その着色した溶液を脱脂綿により濾過してバッファー塩及び過剰のタウリンを取り除いた。

反応の進行は、ＴＬＣ（未反応のＰｄ−ＢｐｈｅｉｄのＲ_ｆは、０．８〜０．８５であり、反応（アミノリシス）生成物では、０．０８〜０．１である）と、凍結乾燥をしてＭｅＯＨに再溶解した後の反応混合物の光吸収スペクトルを追うこととにより測定した。その吸収スペクトルは、７５６ｎｍ（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄに対応）から７４７ｎｍ（生成物４に対応）へのＱ_ｙ遷移シフトによるのと、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄの５３４ｎｍから５１９ｎｍ（生成物４）へのＱ_ｘシフトとにより特性化した。ＭｅＯＨを蒸発させ、生成物４をＯＤＳ−Ａ２５０×２０Ｓ１０Ｐμｍカラム（ＹＭＣ社、日本）によるＨＰＬＣにより精製した。溶媒Ａ：９５％の０．００５Ｍホスファートバッファ、ｐＨ８．０、及び５％のＭｅＯＨ。溶媒Ｂ：１００％ＭｅＯＨ。その乾燥固体を４２ｍｌの蒸留水に溶解して、各１．５ｍｌの分量で注射した。

溶出プロフィールを表１に記載する。生成物４（下のスキーム１参照）を溶出し、約９〜１１分のところで捕集した。４〜７分後に捕集した主な不純物（約５〜１０％）は、提案された構造７を有する副生成物（１つ又は複数）に対応した。２２〜２５分におけるピーク（約２〜５％）は、多分、主生成物４のイソ型及び未処理のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄ残留物に対応した。

溶媒（水性メタノール）を、減圧下で蒸発させた。次いで、精製した生成物４を約１５０ｍｌのＭｅＯＨに再溶解し、脱脂綿により濾過した。その溶媒を再度蒸発させ、固体色素の４をＡｒ下の暗所に−２０℃で保存した。反応収率：約９０％（重量で、３に対して）。

生成物４の構造を、電気スプレー質量分析により確認した。
（ＥＳＩ−ＭＳ、マイナスモード、図２）、（８７５（Ｍ^――Ｋ−Ｈ）、８５９（Ｍ^――２Ｋ−Ｈ＋Ｎａ）、８３７（Ｍ^――２Ｋ）、８０５（Ｋ２Ｋ−Ｈ−ＯＭｅ）、７１９におけるピーク）及び^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＭｅＯＨ−ｄ_４の図４）。
表４は、主なＮＭＲピークのシフト（ｐｐｍ単位）を提供する。
光吸収（ＵＶ−ＶＩＳ）スペクトル（ＭｅＯＨ）：λ、７４７（１．００）、５１６（０．１３）、３８４（０．４１）、３３０（０．５０）、ε_７４７（ＭｅＯＨ）は、１．２×１０^５ｍｏｌ^−１ｃｍ^−１である。

オクタノール／水の分量比は、４０：６０である。

３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩（化合物５）の調製
１６０ｍｇのタウリンを１ＭのＫ_２ＨＰＯ_４バッファー５ｍｌに溶解し、その溶液のｐＨを８．２に合わせた。この溶液を、１５ｍｌのＤＭＳＯに溶解した１２０ｍｇの化合物２に加え、反応とその後の精製は、前の実施例で記載したものと同様にした。
吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：λ、７５０（１．００）、５１９（０．３０）、３５４（１．１８）ｎｍ。

オクタノール／水の分量比は、６０：４０である。

銅（ＩＩ）３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩（化合物１０）の調製
５０ｍｇの実施例２の化合物５及び３５ｍｇの酢酸銅（ＩＩ）を、４０ｍｌのメタノールに溶解し、アルゴンをその溶液に１０分間吹き込んだ。次いで５００ｍｇのアスコルビン酸パルミトイルを加え、その溶液を３０分間攪拌した。その吸収スペクトルは、７５０ｎｍ（５に対応）から７６８ｎｍ（生成物１０に対応）へのＱ_ｙ遷移シフトによるのと、５の５１９ｎｍから５３７ｎｍ（生成物１０）へのＱ_ｘシフトとにより特性化した。次に反応混合物を蒸発させ、アセトンに再溶解して脱脂綿により濾過し、過剰の酢酸塩を取り除いた。そのアセトンを蒸発させ、生成物を、表２に記載した溶出プロフィールを有する上記の条件におけるＨＰＬＣによりさらに精製した。

溶媒（水性メタノール）を、減圧下で蒸発させた。次いで、精製した生成物１０をメタノールに再溶解し、脱脂綿により濾過した。その溶媒を再度蒸発させ、固体色素の１０をＡｒ下の暗所に−２０℃で保存した。反応収率：約９０％。

吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：λ、７６８（１．００）、５３７（０．２２）、３８７（０．７１）及び３４２（０．７９）ｎｍ。
ＥＳＩ−ＭＳ（−）：７９５（Ｍ^――２Ｋ）。
オクタノール／水の分量比は、４０：６０である。

亜鉛３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩（化合物１１）の調製
化合物５へのＺｎの挿入は、前述（米国特許第５７２６１６９号）のようにして酢酸中の酢酸Ｚｎにより行った。最後の精製は、上の実施例２の化合物５に対するのと同じ条件のＨＰＬＣにより行った。
吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：λ、７６２（１．００）、５５８（０．２６）、３９０（０．６２）及び３５５（０．８４）ｎｍ。
オクタノール／水の分量比は、５０：５０である。

マンガン（ＩＩＩ）３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩（化合物１２）の調製
化合物５へのＭｎの挿入は、前述（ＷＯ ９７／１９０８１、ＵＳ ６，３３３，３１９）のものをある程度修正して酢酸中の酢酸Ｚｎにより行った。そういうわけで、１０ｍｌのＤＭＦ中の５０ｍｇの化合物５を、２２０ｍｇの酢酸カドミウムと共に攪拌し、アルゴン雰囲気下、１１０℃で約１５分間加熱した（Ｃｄ錯体の形成は、Ｑ_ｘ遷移吸収帯をアセトン中で５１９から５８５ｎｍにシフトすることにより監視する）。続いてその反応混合物を冷却して蒸発させた。乾燥した残留物を１５ｍｌのアセトンに再溶解し、塩化マンガン（ＩＩ）と共に攪拌してＭｎ（ＩＩＩ）−生成物１２を形成した。その生成物の形成は、アセトン中でＱ_ｘ遷移吸収帯を５８５から６００ｎｍに、Ｑ_ｙ遷移吸収帯を７６８から８２８にシフトすることにより監視する。そのアセトンを蒸発させ、生成物１２を、下の表３に記載した溶出プロフィールを有する上の実施例２で述べた条件のＨＰＬＣにより（ただし、溶媒系は、Ａが５％のメタノール水溶液、Ｂがメタノールからなる）さらに精製した。

溶媒（水性メタノール）を、減圧下で蒸発させ、固体色素の１２をＡｒ下の暗所に−２０℃で保存した。
吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：λ、８２８（１．００）、５８８（０．３２）、及び３７２（０．８０）ｎｍ。
オクタノール／水の分量比は、５：９５である。

パラジウムバクテリオフェオフォルビドａ１７^３−（３−スルホ−１−オキシスクシンイミド）エステルナトリウム塩（化合物６）の調製
５０ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄ（化合物２）、８０ｍｇのＮ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）及び６５ｍｇの１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）を、７ｍｌのドライのＤＭＳＯ中で、一晩室温で混合した。続いて、その溶媒を減圧下で蒸発させた。その乾燥した残留物をクロロホルム（約５０ｍｌ）に再溶解し、不溶性物質から濾別し、蒸発させた。転化率は、約９５％（ＴＬＣ）であった。その生成物６は、その後、さらなるクロマトグラフィーによる精製はしないで使用した。ＥＳＩ−ＭＳ（−）：８９０（Ｍ^――Ｎａ）。

パラジウムバクテリオフェオフォルビドａ１７^３−（３−スルホプロピル）アミドカリウム塩（化合物７）の調製
１ｍｌのＤＭＳＯ中の１０ｍｇの化合物６を、０．１ＭのＫ−ホスファートバッファ（ｐＨ８．０）１ｍｌ中の２０ｍｇのホモタウリン（３−アミノ−１−プロパン−スルホン酸）と、一晩混合した。続いてその反応混合物を、クロロホルム／水の中で分配した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。乾燥した残留物をクロロホルム−メタノール（１９：１）に再溶解し、シリカによるクロマトグラフカラムにかけた。生成物７を、クロロホルム−メタノール（４：１）の溶出により得た。収率は、約８０〜９０％であった。

パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１，−１７^３ジ（３−スルホプロピル）アミド二カリウム塩（化合物８）
１０ｍｇの化合物６又は７を、３ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、０．５ＭのＫ−ホスファートバッファ（ｐＨ８．２）１ｍｌ中の１００ｍｇのホモタウリンと混合し、室温で一晩インキュベートした。溶媒を、続いて上記のようにして減圧下で抜き、生成物８をＨＰＬＣにより精製した。収率：８３％。
吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：７４７（１．００）、５１６（０．１３）、３８４（０．４１）、３３０（０．５０）、ε_７４７＝１．３×１０^５ｍｏｌ^−１ｃｍ^−１。

パラジウム３^１−（３−スルホプロピルイミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１，−１７^３ジ（３−スルホプロピル）アミド三カリウム塩（化合物９）
化合物９は、８の合成の間に副次的生成物としてＨＰＬＣにより得られた。
吸収スペクトル（ＭｅＯＨ）：７２９（１．００）、５０２（０．１０）、３８０（０．６９）、３２８（０．５７）。

パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド，１７^３（Ｎ−免疫グロブリンＧ）アミドカリウム塩（化合物１３）
１０ｍｇの化合物４を、２０ｍｇのスルホ−ＮＨＳ及び１５ｍｇのＥＤＣと１ｍｌのドライのＤＭＳＯ中で、１時間室温で反応させ、続いてＰＢＳ（２．５ｍｌ）中のウサギ免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）（０．６ｍｇ）を加え、その混合物をさらに一晩室温で培養した。その混合物を蒸発させて乾燥状態とし、続いて１ｍｌのＰＢＳに再溶解し、ＰＢＳで釣り合いをとったＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムに充填した。４〜５ｍｌのＰＢＳにより有色バンドが溶出した。得られた結合体１３中の色素／タンパク質の比率は、それぞれ７５３及び２８０ｎｍにおける光学密度により測定し、色素１３／タンパク質の０．５／１から１／１の間で変化させた。

パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−カルボキシエチル）アミド二カリウム塩（化合物１４）の調製
表題化合物１４の調製及び精製は、実施例２に記載したようにして、化合物２をタウリンの代わりに３−アミノプロピオン酸（β−アラニン）（１５０ｍｇ）と反応させることにより行った。収率：８５％。

パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（３−ホスホプロピル）アミド三カリウム塩（化合物１５）の調製
表題化合物１５の調製及び精製は、実施例２に記載したようにして、化合物２をタウリンの代わりに３−アミノ−１−プロパンホスホン酸（１８０ｍｇ）と反応させることにより行った。収率：６８％。

パラジウム３^１−（３−スルホプロピルアミノ）−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１，−１７^３ジ（３−スルホプロピル）アミド三カリウム塩（化合物１６）
３^１−（３−スルホプロピルイミノ）のイミノ基を還元して対応する３^１−（３−スルホプロピルアミノ）基にするために、化合物９（８ｍｇ）を、水素化シアノホウ素ナトリウム（１５ｍｇ）と５ｍｌのメタノール中で、一晩室温で攪拌して反応させた。続いてその反応混合物を、０．０５ＭのＨＣｌ（５ｍｌ）で処理し、０．０１ＭのＫＯＨで中和して蒸発させた。表題の生成物１６を実施例２に記載したＨＰＬＣ条件を使用して精製した。収率：８０〜９０％。

ＩＩ 生物学の項
材料及び方法
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの検討
（ｉ）細胞培養。Ｍ２Ｒマウスのメラノーマ細胞、Ｈ５Ｖマウスの内皮細胞及びＣ６ラットのグリオーマ細胞を、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（０．０６ｍｇ／ｍｌ）、及びストレプトマイシン（０．１ｍｇ／ｍｌ）を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２（以後「培地」と呼ぶ）中で単層として培養した。細胞は、８％ＣＯ_２の湿った雰囲気中、３７℃で増殖させた。

（ｉｉ）光毒性アッセイ。光力学的有効性を測定するため、細胞を、個々の実験のために指示した時間及び条件で、暗所で漸増濃度の色素と共に予め培養した。結合しなかった増感剤は、細胞を培地で１回洗浄して除去し、そのプレートを室温で底部から照射した（λ＞６５０ｎｍ、１２Ｊ／ｃｍ^２）。光源は、４ｃｍのウォーターフィルターを装着した１００Ｗのハロゲンランプ（Ｏｓｒａｍ社、ドイツ）を用いた。培養物を培養器に入れ、照射後２４時間の細胞生存を、ニュートラルレッド生死判別アッセイにより測定した。３つの種類の対照、（ｉ）光対照：色素なしで照射した細胞、（ｉｉ）暗対照：色素で処理はするが暗所に保った細胞、（ｉｉｉ）処理しないで暗所に保った細胞、の３つを使用した。

ｉｎ ｖｉｖｏでの検討
（ｉｉｉ）腫瘍の移植。Ｍ２Ｒ又はＣ６細胞（２×１０^６）をマウスの背中の皮下に移植し、２〜３週間で腫瘍を処理サイズ（６〜８ｍｍ）まで成長させた。

（ｉｖ）増感剤の調製。本発明の化合物の原液を、使用前に乾燥色素をＰＢＳに直接溶解して注射用として望ましい濃度にすることにより調製した。

（ｖ）体内分布及び薬物動態。本発明の色素４（６ｍｇ／ｋｇ体重）を、ＣＤ１ヌードマウスに尾の血管から注射した。マウスは、指定した時間に屠殺し、指定した臓器又は組織のサンプルを予め計量してあるガラス瓶に入れて計量し、直ちにドライアイスで凍結した。試験のため、各サンプルは、二回蒸留水中で解凍して均質化した（１：１０ｗ／ｖ）。そのホモジェネートのアリコート（０．５ｍｌ）を、エッペンドルフ試験管中で凍結乾燥させた。続いて、０．２ｍｌのＨＮＯ_３（７０％、トレースセレクト、Ｆｌｕｋａ）を各乾燥サンプルに加え、９０℃で１時間培養し、二回蒸留水で１０ｍｌまで希釈した。パラジウム濃度を、ＩＣＰ−ＭＳで測定した。未処理のマウスから採取した同じサンプルで各臓器／組織に対するバックグラウンドを測定し、その値を適宜差し引いた。

（ｖｉ）ＰＤＴプロトコール。Ｍ２Ｒ腫瘍をもつマウスを、麻酔し、色素を尾の血管から静脈注射（ｉ．ｖ．）した。腫瘍を、７５５ｎｍダイオードレーザー（ＣｅｒａｍＯｐｔｅｃ社、ドイツ）により、３０Ｊ／ｃｍ^２（１００ｍＷ／ｃｍ^２）、３９Ｊ／ｃｍ^２（１３０ｍＷ／ｃｍ^２）又は４５Ｊ／ｃｍ^２（１５０ｍＷ／ｃｍ^２）のいずれかの光線量を、直ちに経皮的に５分間照射した。処理後マウスは、籠に返した。暗所対照の群では、マウスは増感剤を静脈注射し、暗所の籠に２４時間おいた。光対照の群では、マウスは、４５Ｊ／ｃｍ^２を照射した。

（ｖｉｉ）脈管閉鎖及び透過性。Ｃ６神経膠腫異種移植片をもつマウスを、色素４（９ｍｇ／ｋｇ）及び光（１００ｍＷ／ｃｍ^２を５分間）で処理した。処理直後にエバンスブルー（ＥＢ、ＰＢＳ中１％）を注射した（０．５ｍｌ、ｉ．ｐ．）。マウスは、処理後３時間及び２４時間後写真を撮った。マウスは、処理の２４時間後犠牲にして、各マウスに対して皮弁を作り、撮影した。続いて腫瘍をその上の皮膚と共に取り除き、−２０℃で１時間凍結し、続いて軸方向薄片を作り、その薄片を撮影した。対照マウスに、処理マウスと同時にエバンスブルーを注射し、すべてのマウスに対して一緒に上記のプロトコールを続けた。

腫瘍細胞培養物に対するスルホン化バクテリオクロロフィル誘導体の細胞光毒性
化合物４及び８の光毒性を、Ｍ２Ｒマウスメラノーマ細胞及びＨ５Ｖマウス内皮細胞で、上の（ｉｉ）に記載したようにして測定した。化合物の濃度を増していった細胞を４時間にわたって予め培養し、洗浄して照射するか又は暗所に保った。

その結果を、Ｈ５Ｖ細胞及びＭＲ２細胞それぞれにおける二スルホン化化合物８に対しては、図１Ａ〜１Ｂに、Ｈ５Ｖ細胞及びＭＲ２細胞それぞれにおけるモノスルホン化化合物４（比較）に対しては、図２Ａ〜２Ｂに示す。図から分かるように、色素４及び８の両方の光毒性は、濃度及び光に依存し、試験範囲において暗所での毒性はない。両色素のＬＤ_５０は、同等（約２μＭ）であり、両細胞系で類似している。

スルホン化色素５及び１１の光毒性を、Ｍ２Ｒマウスメラノーマ細胞で測定した。図３及び４から分かるように、色素５及び１１の光毒性は、濃度及び光依存性であり、両色素のＬＤ_５０は、同等（約５μＭ）である。試験範囲において暗所毒性はない。

化合物４の薬物動態及び体内分布
固形メラノーマ異種移植片のＰＤＴに向けた４の光毒性を試験する前の最初のステップは、上の項目（ｖｉ）で記載したｉｎ ｖｉｖｏでの色素の薬物動態及び体内分布を測定することであった。図５から分かるように、色素４の約９０％が、静脈注射後最初の１０分以内に１．６５分のｔ_０．５を有する（表４）一相性動態パターンで消失した。４の血液からの速い消失は、ごく少ない部分しか（仮にあったとしても）血漿成分に結合していないことを示すものであり、さもなければ、消失はもっと遅かった筈である。

化合物４の体内分布は、マウスの試験した臓器の殆どで、色素濃度が注射直後は高く、血液からのそれらの消失速度と同様に、２０〜３０分以内に殆どバックグラウンド濃度まで低下することを示している（図６）。これらの結果は、脾臓、肺、及び心臓で見られる臓器の脈管構造に捕捉されている血液中の色素濃度を多分表している。さらにその結果は、また、色素の臓器への拡散が無視できることも示している。色素４は、マウスの体から急速に消えてなくなり、注射後３０分以内にそれはすべての組織においてバックグラウンド濃度である。４のマウスの体からの消失速度は、注射後わずか４８時間でバックグラウンド濃度に到達するＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄ（３）（図示はない）よりはるかに速い。

ＣＤ１ヌードマウスのＭ２Ｒメラノーマ異種移植片のスルホン化色素４による光力学処理
上の実施例１５の薬物動態の結果に基づいて、化合物４のための処理プロトコールを、色素の注射直後に５分の照射と設定した。これらの実験（上の項目（ｖｉｉ）参照）では、４のピークの吸収に合致した専用の医用レーザー（ＣｅｒａｍＯｐｔｅｃ社、ドイツ、７５５ｎｍ）を使用した。最適の薬剤／光のプロトコールを決定するために、マウスを６ｍｇ／ｋｇの薬剤投与量で光強度を増大しながら処理した（図７）。カプラーマイヤー生存曲線から分かるように、光強度を増すことによって、マウスの治癒率は、それぞれ、３０Ｊ／ｃｍ^２及び４５Ｊ／ｃｍ^２で、４３％から６０％に改善される。薬剤の投与量を光強度３０Ｊ／ｃｍ^２で９ｍｇ／ｋｇに上げた場合、マウスでの生存率の７０％への有意な増加があった（図７）。６又は９ｍｇ／ｋｇで処理して暗所に保った動物は、暗所毒性は認められなかった。

化合物４による光力学処理の選択的効果
この実験は、上の項目（ｖｉｉ）に記載したようにして行った。図８は、マウスに移植したＣ６異種移植片における血液潅流に対する光力学処理の効果を示している（ａ、ｅ）。ＰＤＴの直後にエバンスブルーを投与して処理した動物は、同じ動物の照射してない領域及び処理してない動物と比較したとき、照射した領域に、水腫及び青色（アルブミンエバンスブルーの漏洩による）によって示される間質へのＥＢの促進された脈管漏洩を示した（ｂ、ｆ）。２４時間後、処理したマウスの中は、腫瘍の周囲がひどく着色した青（水腫、ｃ）であり、一方その腫瘍は、ＰＤＴの直後に起こった脈管閉鎖のために白いまま（ＥＢ色でなない）残っていることを見ることができる。腫瘍の下、並びにその腫瘍の上及び周りの皮膚の下の筋肉組織（処理した領域内は除く）は、青であり、脈管閉鎖が起こらなかったことを示している（ｃ、ｄ）。未処理の動物においては、腫瘍は、他の組織のように着色した青である（ｇ、ｈ）。腫瘍中の新しい血管の選択的囲い込みは、本発明の化合物が、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）におけるような異常脈管構造の選択的治療に使用することができることを示している。

化合物４によるＰＤＴ処理−ＡＭＤ動物モデル
光力学療法（ＰＤＴ）は、脈絡膜から生ずる新たに形成された血管膜（脈絡膜新血管膜形成−ＣＮＶ）の局部的な血管閉塞を引き起こすことを狙って開発された。加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）において、ベルテポルフィンを使用するＰＤＴは、ＣＮＶに続発する視力喪失の危険を減少する。ＰＤＴの作用機構は、内皮細胞を損傷させ内皮下の凝固カスケードを活性化する反応性酸素種の放出を含むものと考えられる。これらの事象は、血管内腔内に血栓の形成をもたらす。

脈絡膜新血管膜形成の治療のため、高度に選択的なパラメータ（レーザー出力密度又はフルエンス、光増感剤投与量、及び光照射の間隔（ＤＬＩ））が開発され、病的血管の正確な焦点合わせ及び標的並びに健康な網膜及び脈絡膜組織に対する最小の二次的損傷効果を可能にした。しかしながら、臨床用途のために現在利用できる唯一の光増感剤（ベルテポルフィン）を使用することで、望ましいＣＮＶ閉塞効果を達成するためには、繰り返しの治療が一般に必要である。それ故、付随的な組織の損傷の危険が高められ、治療の著しい副作用となるかもしれない。

この実験では、本明細書でＷＳＴ１１又は化合物４と称する水溶性光増感剤の光力学処理（ＰＤＴ）の可能性を評価し、その特徴をベルテポルフィンのそれと比較した。

化合物４は、黒紫色の結晶性粉末として単離される純粋で安定なバクテリオクロロフィル誘導体である。それは、９１６の分子量を持ち、水溶液に溶解する。それは、以下の性質：（ａ）４つの主な吸収ピーク（７５０、５３０、３８５、及び３３０ｎｍ）があり、最も強い光の吸収は組織の透過率が最も高い近赤外（７５０ｎｍ）であること、（ｂ）暗所での細胞毒性が非常に低く、したがって、組織の損傷を光線量及び露光の長さにより制御できること、（ｃ）それは、投与後体から速やかに除去され、それ故、周囲の光又は太陽光に晒された場合の皮膚の光増感損傷の可能性が最小であること、（ｄ）反応性酸素種（ＲＯＳ）の発生が、効果的な項間交差（ＩＳＣ）のために高いこと、を特徴とする。

ＷＳＴ１１粉末を、エンドトキシンを含まない滅菌水に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で希釈し、完全に溶解するまで振とうした。この調合物は、４℃で光から保護して２４時間安定である。注射する容量を計算するには、ウサギの体重により調整した。適切な体積の溶液を末端の耳の血管からボーラスとして静脈注射した。

加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）のＰＤＴに対する化合物４の可能性を、ウサギの目のモデルを用いてベルテポルフィン（Ｖｉｓｕｄｙｎｅ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社、スイス）と比較した。色素を投与したウサギ（１３６“Ｆａｕｖｅ ｄｅ Ｂｏｕｒｇｏｇｎｅ”ウサギ、生後１０〜１２週間、２．５〜３ｋｇ、Ｅｌｅｖａｇｅ ｄｅｓ Ｐｉｎｓ、Ｅｐｅｉｇｎｅ−ｓｕｒ−Ｄｅｍｅ、フランス）を使用した。ウサギの目に対する急性及び長期のＰＤＴ効果を、以下のパラメータに対して調べた。１）７５３ｎｍレーザーフルエンス（２５及び５０Ｊ／ｃｍ^２）、化合物４（ＷＳＴ１１とも称する）投与量（２．５及び５ｍｇ／ｋｇ）及び１、５、１０及び１５分の光照射間隔（ＤＬＩ）。２）６８９ｎｍレーザーフルエンス（１０、５０、１００Ｊ／ｃｍ^２）、ベルテポルフィン投与量（３、６及び１２ｍｇ／ｍ^２）及び５分間の一定ＤＬＩ。脈絡膜及び覆っている網膜に対する数々の効果を包含するこれらのＰＤＴパラメータは、閉塞、閾値下閉塞、及び非閉塞血管事象を引き起こすために８３秒間与えられた。処理したウサギの目を診察し、続いて間接的検眼鏡検査、蛍光眼底血管造影（ＦＡ）及び組織構造検査をＰＤＴの後様々な間隔で行った。５０Ｊ／ｃｍ^２のフルエンス、５ｍｇ／ｋｇの薬剤投与量及び１分間のＤＬＩを使用するＷＳＴ１１のＰＤＴは、処理した目の１００％で、覆っているＲＰＥ及び網膜の構造の損傷と関係する全体的な脈絡膜の閉塞を引き起こした（図９Ａ〜９Ｄ）。もっと弱くて非閉塞性のＰＤＴパラメータ（２５Ｊ／ｃｍ^２、５ｍｇ／ｋｇの薬剤投与量及び１０分間のＤＬＩ）は、脈絡毛細管枝閉塞も網膜損傷も引き起こさなかった。１００Ｊ／ｃｍ^２のフルエンスで１２ｍｇ／ｍ^２の薬剤投与量と、５分間のＤＬＩを用いるベルテポルフィンのＰＤＴは、８９％の目の閉塞事象（ＦＡにより観察）と、すべての目における覆っている網膜及びＲＰＥ層の組織学的損傷を引き起こした。３ｍｇ／ｍ^２の薬剤投与量、１０Ｊ／ｃｍ^２のフルエンス及び５分間のＤＬＩを用いるもっと弱くて非閉塞性のベルテポルフィンのＰＤＴパラメータは、ＦＡに対して脈絡毛細管枝閉塞を引き起こさなかった。しかしながら、これらの目で網膜及び脈絡膜組織の明確な構造損傷が組織学的に観察された。ベルテポルフィンと同様に、ＷＳＴ１１のＰＤＴは、処理後最長１週間まで観察される脈絡毛細管枝の一時的な閉塞を引き起こす。ベルテポルフィンとは異なり、血管閉塞を引き起こさないＷＳＴ１１のＰＤＴパラメータは、ＲＰＥ又は網膜の構造損傷の原因とはならない。それ故、血管閉塞を引き起こすその能力にもかかわらず、ＷＳＴ１１のＰＤＴは、脈絡毛細管枝の閉塞を起こさないときはＲＰＥ及び覆っている網膜に対する損傷を引き起こすことはない。これら特徴の利点は、ＷＳＴ１１が、加齢黄斑変性症のＣＮＶのＰＤＴ処理に対する候補に適することを指し示している。

組織学的検討のため、摘出した目を、単対物双眼顕微鏡のもとで解剖した。４ｍｍの生検パンチを使用して、処理した範囲の全体の厚さを切り取った。これらの組織を、グルタルアルデヒド中で凝固させ、カコジル酸緩衝液中で処理し、プラスチックにはめ込んだ。やや薄い切片を、マイクロトームを用いてとり、ヘマトキシリンエオインで対比染色した。これらの切片を、位相差顕微鏡法を用いて分析した。重要な特定部位は、さらにＴＥＭ用に処理した。超ミクロトームを用いて超薄切片を得て酢酸ウラニルで対比染色した。

参考文献
Ｃｈｅｎ Ｑ、Ｈｕａｎｇ Ｚ、Ｌｕｃｋ Ｄ、Ｂｅｃｋｅｒｓ Ｊ、Ｂｒｕｎ ＰＨ、Ｗｉｌｓｏｎ ＢＣ、Ｓｃｈｅｒｚ Ａ、Ｓａｌｏｍｏｎ Ｙ、Ｈｅｔｚｅｌ ＦＷ、（２００２年）前立腺癌の光力学療法のための新規なパラジウムバクテリオフェオフォルビド（ＷＳＴ０９）光増感剤の正常な犬の前立腺における前臨床試験（Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃａｎｉｎｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｌｌａｄｉｕｍｂａｃｔｅｒｉｏｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ（ＷＳＴ０９）ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ ｆｏｒ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒｓ．）Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ、７６（４）：４３８〜４５。

Ｋｏｕｄｉｎｏｖａ ＮＶ、Ｐｉｎｔｈｕｓ ＪＨ、Ｂｒａｎｄｉｓ Ａ、ＢｒｅｎｎｅｒＯ、Ｂｅｎｄｅｌ Ｐ、Ｒａｍｏｎ Ｊ、Ｅｓｈｈａｒ Ｚ、Ｓｃｈｅｒｚ Ａ、Ｓａｌｏｍｏｎ Ｙ、（２００３年）Ｐｄバクテリオフェオフォルビドによる光力学療法（ＴＯＯＫＡＤ）：ヒト前立腺小細胞癌腫異種移植片の成功するｉｎ ｖｉｖｏでの治療（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ Ｐｄ−Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ（ＴＯＯＫＡＤ）：ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １０４（６）：７８２〜９。

Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ−Ｂｅｌｋｉｎ，Ｖ．、Ｃｈｅｎ，Ｌ．、Ｆｉｅｄｏｒ，Ｌ．、Ｔｒｅｇｕｂ，Ｉ．、Ｐａｖｌｏｔｓｋｙ，Ｆ．、Ｂｒｕｍｆｅｌｄ，Ｖ．、Ｓａｌｏｍｏｎ，Ｙ．、Ｓｃｈｅｒｚ，Ａ．（１９９６年）クロロフィル及びバクテリオクロロフィルのセリン結合体：ｉｎ ｖｉｔｒｏでの光細胞毒性及びメラノーマ腫瘍をもつマウスにおける組織分布（Ｓｅｒｉｎｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｆ ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ：Ｐｈｏｔｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｅａｒｉｎｇ ｍｅｌａｎｏｍａ ｔｕｍｏｒｓ．）Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．６４：１７４〜１８１。

Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｓ、Ｇｒｏｓｓ Ｓ、Ｂｒａｎｄｉｓ Ａ、Ｈａｒｍｅｌｉｎ Ａ、Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ−Ｂｅｌｋｉｎ Ｖ、Ｓｃｈｅｒｚ Ａ、Ｓａｌｏｍｏｎ Ｙ、（２００２年）手術と比較して転移の減少及び動物治癒の増加をもたらすＰｄ−バクテリオフェオフォルビドによるラットのＣ６神経膠腫異種移植片の局所光力学療法（ＰＤＴ）（Ｌｏｃａｌ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ（ＰＤＴ）ｏｆ ｒａｔ Ｃ６ ｇｌｉｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｗｉｔｈ Ｐｄ−ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈｅｏｐｈｏｒｂｉｄｅ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｃｕｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｒｇｅｒｙ．）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．９９ （２）：２７９〜８５。

Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ，Ｊ．、Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．、Ｂｌｏｅｍｅｒｓ、ＭＣＷＭ、Ｂｅｎｄｅｌ，Ｐ．、Ｎｅｅｍａｎ，Ｍ．，Ｓｃｈｅｃｈｔｍａｎ，Ｅ．、Ｋｏｈｅｎ，Ｆ．、Ｓｃｈｅｒｚ，Ａ．Ｓａｌｏｍｏｎ，Ｙ．（２００１年）バクテリオクロロフィル−セリンに基づく光力学療法による固形メラノーマ腫瘍の抗血管治療（Ａｎｔｉｖａｓｃｕｌａｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｔｕｍｏｒｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ−ｓｅｒｉｎｅ−ｂａｓｅｄ ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．）Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．７３：２５７〜２６６。

Ｚｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ，Ｊ．、Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ａ．、Ｆｒａｎｚ，Ａ．、ＲｏｓｅｎｂａｃｈＢｅｌｋｉｎ，Ｖ．、Ｋｒｉｔｚｍａｎｎ，Ａ．、Ｐｆｅｆｅｒｍａｎｎ，Ｒ．、Ｓａｌｏｍｏｎ，Ｙ．、Ｓｃｈｅｒｚ，Ａ．（１９９７年）バクテリオクロロフィル−セリン−処理メラノーマ腫瘍における光依存酸素消費：組織挿入酸素マイクロセンサを用いるオンライン測定（Ｌｉｇｈｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｘｙｇｅｎ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ−ｓｅｒｉｎｅ−ｔｒｅａｔｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｔｕｍｏｒｓ：Ｏｎ−ｌｉｎｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａ ｔｉｓｓｕｅ−ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｏｘｙｇｅｎ ｍｉｃｒｏｓｅｎｓｏｒ．）Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．６５：１０１２〜１０１９。

スルホン化化合物８のＨ５Ｖマウス内皮細胞（図１Ａ）及びＭ２Ｒマウスメラノーマ細胞（図１Ｂ）に対する光毒性を示すグラフである。細胞は、８の濃度を増しながら４時間培養し、洗浄して照射する（白グラフ）か、又は無照射に保った（無照射対照、黒グラフ）。得点は、３組の平均±標準である。 スルホン化化合物８のＨ５Ｖマウス内皮細胞（図１Ａ）及びＭ２Ｒマウスメラノーマ細胞（図１Ｂ）に対する光毒性を示すグラフである。細胞は、８の濃度を増しながら４時間培養し、洗浄して照射する（白グラフ）か、又は無照射に保った（無照射対照、黒グラフ）。得点は、３組の平均±標準である。 スルホン化化合物４のＨ５Ｖマウス内皮細胞（図２Ａ）及びＭ２Ｒマウスメラノーマ細胞（図２Ｂ）に対する光毒性を示すグラフである。細胞は、４の濃度を増しながら４時間培養し、洗浄して照射する（白グラフ）か又は無照射に保った（無照射対照、黒グラフ）。得点は、３組の平均±標準である。 スルホン化化合物４のＨ５Ｖマウス内皮細胞（図２Ａ）及びＭ２Ｒマウスメラノーマ細胞（図２Ｂ）に対する光毒性を示すグラフである。細胞は、４の濃度を増しながら４時間培養し、洗浄して照射する（白グラフ）か又は無照射に保った（無照射対照、黒グラフ）。得点は、３組の平均±標準である。 スルホン化化合物５のＭ２Ｒマウスメラノーマ細胞に対する光毒性を示すグラフである。細胞は、５の濃度を増しながら４時間培養し、洗浄して照射する（丸）か又は無照射に保った（無照射対照、菱形）。得点は、３組の平均である。 スルホン化化合物１１のＭ２Ｒマウスメラノーマ細胞に対する光毒性を示すグラフである。細胞は、１１の濃度を増しながら４時間培養し、洗浄して照射する（丸）か又は無照射に保った（無照射対照、菱形）。得点は、３組の平均である。 ＣＤ１ヌードマウス血液中の化合物４の薬物動態を示すグラフである。化合物４の注射（６ｍｇ／ｋｇ）後、同じマウスから指定時間ごとに血液サンプルを集め、Ｐｄを測定した。各時間の得点は、３匹のマウスの平均±標準を表す。 ＣＤ１ヌードマウス中の化合物４の体内分布を示すグラフである。化合物４の注射（６ｍｇ／ｋｇ）後マウスを異なる時間毎に屠殺し、指定の臓器毎にＰｄ含量を測定した。各時間の得点は、３匹のマウスの平均±標準を表す。 化合物４によるメラノーマ異種移植片のＰＤＴを示すグラフである。Ｍ２Ｒメラノーマ異種移植片を持つマウスに化合物４を静脈注射し（６ｍｇ／ｋｇ^−１）、光度３０Ｊ／ｃｍ^２（ｎ＝１４、黒４角）、３９Ｊ／ｃｍ^２（ｎ＝８、黒菱形）又は４５Ｊ／ｃｍ^２（ｎ＝１０、黒三角）で５分間照射した。化合物４を９ｍｇ／ｋｇ^−１注射したマウスは、３０Ｊ／ｃｍ^２（ｎ＝１０、黒丸）で５分間照射した。対照群：未処理（ｎ＝４、白四角）、化合物４を６ｍｇ／ｋｇ^−１受けた無照射対照（ｎ＝４、白丸）又は９ｍｇ／ｋｇ^−１受けた無照射対照（ｎ＝５、白三角）、照射対照（ｎ＝６、白菱形、４５Ｊ／ｃｍ^２）。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ラットＣ６神経膠腫異種移植片を持ち、化合物４で処置したマウスにおけるＰＤＴの選択的効果を示す写真である。（ａ〜ｄ）ＰＤＴ処理した動物、（ｅ〜ｈ）未処理の動物。（ａ）処理前、（ｂ）ＰＤＴ及びエバンスブルー（ＥＢ）注射後３時間、（ｃ）ＰＤＴ後２４時間の処理部位の皮弁、（ｄ）ＰＤＴ後２４時間の処理した腫瘍の軸方向薄片、（ｅ）ＥＢ注射前、（ｆ）ＥＢ注射後３時間、（ｇ）ＥＢ注射後２４時間の皮弁、（ｈ）ＥＢ注射後２４時間の未処理腫瘍の軸方向薄片。Ｔ−腫瘍、Ｓ−皮膚、Ｍ−筋肉、Ｅ−水腫。 ウサギの目のモデルにおける化合物４による密封ＰＤＴ（フルエンス５０Ｊ／ｃｍ^２、投与量５ｍｇ／Ｋｇ、１分のＤＬＩ）後２時間の病巣中心の準薄片及びＴＥＭを示す写真である。比較的よく温存されているＲＰＥ細胞を持つ脈絡膜血管及び網膜の鬱血及び拡張が観察される（９Ａ及び９Ｂ）。ＴＥＭは、脈絡毛細管内腔（９Ｄの白矢）内の赤血球の溶血反応及びばらばらになった単球（白の矢印）を示している。ブルック膜（Ｂｍ）は、よく識別される網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）を、原型を保ってかくまっている。脈絡毛細管内皮細胞のいくつかは、著しく改変されて、凝縮されたクロマチンを示している（９Ｃの白星）。略語：ＯＮＬ：細胞核外層（ｏｕｔｅｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｌａｙｅｒ）、ＲＯＳ：桿体外節（ｒｏｄ ｏｕｔｅｒ ｓｅｇｍｅｎｔｓ）、ＣＣ：脈絡毛細管（Ｃｈｏｒｉｏｃａｐｐｉｌａｒｉｅｓ）、ｅ：脈絡毛細管内皮細胞（ｃｈｏｒｉｏｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）。 ウサギの目のモデルにおける化合物４による密封ＰＤＴ（フルエンス５０Ｊ／ｃｍ^２、投与量５ｍｇ／Ｋｇ、１分のＤＬＩ）後２時間の病巣中心の準薄片及びＴＥＭを示す写真である。比較的よく温存されているＲＰＥ細胞を持つ脈絡膜血管及び網膜の鬱血及び拡張が観察される（９Ａ及び９Ｂ）。ＴＥＭは、脈絡毛細管内腔（９Ｄの白矢）内の赤血球の溶血反応及びばらばらになった単球（白の矢印）を示している。ブルック膜（Ｂｍ）は、よく識別される網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）を、原型を保ってかくまっている。脈絡毛細管内皮細胞のいくつかは、著しく改変されて、凝縮されたクロマチンを示している（９Ｃの白星）。略語：ＯＮＬ：細胞核外層（ｏｕｔｅｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｌａｙｅｒ）、ＲＯＳ：桿体外節（ｒｏｄ ｏｕｔｅｒ ｓｅｇｍｅｎｔｓ）、ＣＣ：脈絡毛細管（Ｃｈｏｒｉｏｃａｐｐｉｌａｒｉｅｓ）、ｅ：脈絡毛細管内皮細胞（ｃｈｏｒｉｏｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）。 ウサギの目のモデルにおける化合物４による密封ＰＤＴ（フルエンス５０Ｊ／ｃｍ^２、投与量５ｍｇ／Ｋｇ、１分のＤＬＩ）後２時間の病巣中心の準薄片及びＴＥＭを示す写真である。比較的よく温存されているＲＰＥ細胞を持つ脈絡膜血管及び網膜の鬱血及び拡張が観察される（９Ａ及び９Ｂ）。ＴＥＭは、脈絡毛細管内腔（９Ｄの白矢）内の赤血球の溶血反応及びばらばらになった単球（白の矢印）を示している。ブルック膜（Ｂｍ）は、よく識別される網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）を、原型を保ってかくまっている。脈絡毛細管内皮細胞のいくつかは、著しく改変されて、凝縮されたクロマチンを示している（９Ｃの白星）。略語：ＯＮＬ：細胞核外層（ｏｕｔｅｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｌａｙｅｒ）、ＲＯＳ：桿体外節（ｒｏｄ ｏｕｔｅｒ ｓｅｇｍｅｎｔｓ）、ＣＣ：脈絡毛細管（Ｃｈｏｒｉｏｃａｐｐｉｌａｒｉｅｓ）、ｅ：脈絡毛細管内皮細胞（ｃｈｏｒｉｏｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）。 ウサギの目のモデルにおける化合物４による密封ＰＤＴ（フルエンス５０Ｊ／ｃｍ^２、投与量５ｍｇ／Ｋｇ、１分のＤＬＩ）後２時間の病巣中心の準薄片及びＴＥＭを示す写真である。比較的よく温存されているＲＰＥ細胞を持つ脈絡膜血管及び網膜の鬱血及び拡張が観察される（９Ａ及び９Ｂ）。ＴＥＭは、脈絡毛細管内腔（９Ｄの白矢）内の赤血球の溶血反応及びばらばらになった単球（白の矢印）を示している。ブルック膜（Ｂｍ）は、よく識別される網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）を、原型を保ってかくまっている。脈絡毛細管内皮細胞のいくつかは、著しく改変されて、凝縮されたクロマチンを示している（９Ｃの白星）。略語：ＯＮＬ：細胞核外層（ｏｕｔｅｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｌａｙｅｒ）、ＲＯＳ：桿体外節（ｒｏｄ ｏｕｔｅｒ ｓｅｇｍｅｎｔｓ）、ＣＣ：脈絡毛細管（Ｃｈｏｒｉｏｃａｐｐｉｌａｒｉｅｓ）、ｅ：脈絡毛細管内皮細胞（ｃｈｏｒｉｏｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）。

Claims (24)

1. パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン １３^１−（２−スルホエチル）アミドの、一価アルカリ金属陽イオンもしくはアルカリ土類金属陽イオン、ＮＨ_４ ^＋イオン、もしくはアミン由来の陽イオンとの薬理学的に許容できる塩。
2. 前記陽イオンがＫ^＋、Ｎａ^＋、又はＬｉ^＋から選択される、請求項１の塩。
3. パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩である請求項１に記載の塩。
4. 請求項１から３までのいずれか一項に記載の塩及び薬剤として許容される担体を含む薬剤組成物。
5. 光力学療法用の請求項４に記載の薬剤組成物。
6. 脈管標的光力学療法用の請求項５に記載の薬剤組成物。
7. 転移性腫瘍を含む腫瘍の光力学療法用の請求項５又は６に記載の薬剤組成物。
8. メラノーマ、大腸癌、乳癌、肺癌、脳腫瘍、卵巣癌、皮膚癌、食道癌、膀胱癌又は前立腺癌から選択される腫瘍の光力学療法用の請求項７に記載の薬剤組成物。
9. 加齢黄斑変性症の光力学療法用の請求項５又は６に記載の薬剤組成物。
10. 光力学療法を介した、血管閉塞による加齢黄斑変性症の治療用の請求項９に記載の薬剤組成物。
11. 良性前立腺肥大症の光力学療法用の請求項５又は６に記載の薬剤組成物。
12. 腫瘍診断用の請求項４に記載の薬剤組成物。
13. 請求項４−１１のいずれか一項に記載の、全身投与用の薬剤組成物。
14. 請求項４−１１のいずれか一項に記載の、静脈内投与用の薬剤組成物。
15. 前記光力学療法が腫瘍に局所的に光を照射することを含み、ここで照射光の波長が、前記化合物の最大吸収波長域内にある、請求項７又は８に記載の薬剤組成物。
16. 前記最大吸収波長域が６７０−７８０ｎｍである、請求項１５に記載の薬剤組成物。
17. 前記塩が、パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩である請求項４−１６のいずれか一項に記載の薬剤組成物。
18. Ｍが、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；Ｒ_８ ^＋が一価陽イオンであり；ｎが１から１０までの整数である；以下の式の塩を調製する方法であって、
    

    

    （ｉ）以下の式
    

    

    のＭ−バクテリオフェオフォルビドを、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈのアミノスルホン酸とＲ_８ ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び
    （ｉｉ）所望の塩を単離するステップ
    を含む方法。
19. パラジウム３^１−オキソ−１５−メトキシカルボニルメチル−ロドバクテリオクロリン１３^１−（２−スルホエチル）アミド二カリウム塩を調製するための、（ｉ）Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａを、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_２−ＳＯ_３ＨのタウリンとＫ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び（ｉｉ）表題の塩を単離するステップを含む請求項１８に記載の方法。
20. Ｍが、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；Ｒ_８ ^＋が一価陽イオンであり；ｎが１から１０までの整数である；以下の式の塩を調製する方法であって、
    

    

    （ｉ）以下の式
    

    

    のＭ−バクテリオフェオフォルビドを、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３Ｈ_２のアミノホスホン酸とＲ_８ ^＋バッファー中で反応させるステップ、及び
    （ｉｉ）所望の塩を単離するステップ
    を含む方法。
21. Ｍが、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；Ｒ_８ ^＋が一価陽イオンであり；ｎが１から１０までの整数である；以下の式の塩を調製する方法であって、
    

    

    （ｉ）以下の式Ｉ
    

    

    のＭ−バクテリオフェオフォルビドを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）とカップリングするステップ、
    （ｉｉ）得られたＭ−バクテリオフェオフォルビド−１７^３−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステルを、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈのアミノスルホン酸と反応させ、かくして以下の式で表される、１７位に唯一の負荷電基を有する式Ｉの化合物
    

    

    を得るステップ、
    （ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の生成物を、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、過剰のＨ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈと反応させるステップ、及び
    （ｉｖ）所望の塩を単離するステップ
    を含む方法。
22. Ｍが、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；Ｒ_８ ^＋が一価陽イオンであり；ｎが１から１０までの整数である；以下の式の塩を調製する方法であって、
    

    

    （ｉ）以下の式Ｉ
    

    

    のＭ−バクテリオフェオフォルビドを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）とカップリングするステップ、
    （ｉｉ）得られたＭ−バクテリオフェオフォルビド−１７^３−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステルを、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３Ｈ_２のアミノホスホン酸と反応させ、かくして以下の式で表される、１７位に唯一の負荷電基を有する式Ｉの化合物
    

    

    を得るステップ、
    （ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の生成物を、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、過剰の式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３Ｈ_２と反応させるステップ、及び（ｉｖ）所望の塩を単離するステップ
    を含む方法。
23. Ｍが、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；Ｒ_８ ^＋が一価陽イオンであり；ｎが１から１０までの整数である；以下の式の塩を調製する方法であって、
    

    

    （ｉ）以下の式Ｉ
    

    

    のＭ−バクテリオフェオフォルビドを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）とカップリングするステップ、
    （ｉｉ）得られたＭ−バクテリオフェオフォルビド−１７^３−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステルを、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、過剰の式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＳＯ_３Ｈのアミノスルホン酸と反応させ、及び
    （ｉｉｉ）所望の塩を単離するステップ
    を含む方法。
24. Ｍが、２Ｈ又は二価のＰｄ、Ｐｔ、Ｃｏ、Ｓｎ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ及びＭｎ、並びに三価のＦｅ、Ｍｎ及びＣｒから選択される金属原子を表し；Ｒ_８ ^＋が一価陽イオンであり；ｎが１から１０までの整数である；以下の式の塩を調製する方法であって、
    

    

    （ｉ）以下の式Ｉ
    

    

    のＭ−バクテリオフェオフォルビドを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）とカップリングするステップ、
    （ｉｉ）得られたＭ−バクテリオフェオフォルビド−１７^３−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステルを、Ｒ_８ ^＋バッファー中で、過剰の式Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＰＯ_３Ｈ_２のアミノホスホン酸と反応させ、及び
    （ｉｉｉ）所望の塩を単離するステップ
    を含む方法。

Images