JP2000500763A

JP2000500763A - 合成の金属置換されたバクテリオクロロフィル誘導体およびその使用

Info

Publication number: JP2000500763A
Application number: JP9519568A
Authority: JP
Inventors: シャーズ，アビグドル; サロモン，ヨラム; シェール，ウーゴ; ハルトヴィッヒ，ゲルハルト; ブランディス，アレグザンダー
Original assignee: イエダリサーチアンドデベロツプメントカンパニーリミテツド
Priority date: 1995-11-24
Filing date: 1996-11-24
Publication date: 2000-01-25
Also published as: PL188811B1; DK0863903T3; EP0863903B1; AU7585796A; RU2193038C2; MX9804143A; ES2288757T3; BR9611452A; NO982348L; AU718961B2; DE69637149T2; HUP9903582A2; IL116126A0; US6333319B1; ATE365741T1; DE69637149D1; CN1085211C; PL326745A1; HU223379B1; HUP9903582A3

Abstract

(57)【要約】式〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ（式中、Ｍは二価のＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎ、三価のＦｅ、ＭｎおよびＣｒ、そして四価のＳｎおよびＰｔから選ばれる金属原子でありそしてＢＣｈｌは脱金属化された天然のまたは合成のバクテリオクロロフィル誘導体の残基を表す）の金属化されたバクテリオクロロフィルが、位置１７³で基ＣＯＯＲ₁（但し、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基である）を担持する対応する〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ誘導体を金属交換反応させそしてさらに場合により、得られた〔Ｍ〕−ＢＣｈｌの１７₃−ＣＯＯＲ₁をエステル交換反応させることにより造られる。本化合物は光力学的（光化学）療法および診断において使用するためのものでありそして細胞および感染因子、例えば生物学的製剤および生体組織の両方におけるバクテリアおよびウィルスを殺滅するためのものである。好ましい化合物はＲ’₁が（ｉ）場合により置換されたヒドロカルビル；（ｉｉ）ヒドロキシ含有アミノ酸またはペプチドまたはそれらの誘導体および（ｉｉｉ）ヒドロキシ含有ペプチドまたは細胞特異性配位子、例えば（ｉ）において規定されたとおりのスペーサーを介してＣＯＯ−基に結合された、ペプチドまたはたんぱく質から選ばれる残基である、式（Ｉ’）の化合物である。

Description

【発明の詳細な説明】合成の金属置換されたバクテリオクロロフィル誘導体およびその使用発明の分野本発明はインビボ光力学的療法（光化学療法：ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃｔｈｅｒａｐｙ）（ＰＤＴ）および診断そしてウィルスおよび微生物のインビトロ光力学的死滅化（光化学的死滅化：ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃｋｉｌｌｉｎｇ）の方法において使用するための金属化バクテリオクロロフィル誘導体（ｍｅｔａｌａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）の新しい製造方法に関しそして或る種の新規な金属置換されたバクテリオクロロフィル誘導体に関する。定義および略語ＢＣｈｌ＝バクテリオクロロフィルａ（ＭがＭｇであり、Ｒ₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルでありそして位置８でのＲ₄がエチルである後記式ＩのＭｇ含有７，８，１７，１８−テトラヒドロポルフィリン）。ＢＣｈｌ誘導体＝後記式Ｉ、II、III、およびＩ’、II’、III’の誘導体を含む、大員環、中心金属原子においてそして（または）周囲において変異（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ）を有するＢＣｈｌの誘導体。ＢＰｈｅ＝バクテリオフェオフィチン（ＢＣｈｌにおいて中心のＭｇが２つのＨ原子に置き換えられているもの）。Ｃｈｌ＝クロロフィル（お互いに共役であり且つＭｇの原子に結合されている４つのピロールと１つの同素環とからなる大員環（ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ）から形成されたＭｇ含有１７，１８−ジヒドロポルフィリン誘導体）。クロロフィルａは、Ｒ₁がフィチルであり、Ｒ₂がＣＯＯＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がビニルであり、そして位置８でのＲ₄がエチルである後記式Ｉを有する。〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ＝中心Ｍｇ原子がこの後で定義されるとおりの金属Ｍで置き換えられたＢＣｈｌ誘導体。ＰＤＴ＝光力学的療法（光化学療法：ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃｔｈｅｒａｐｙ）。Ｐｈｅ＝フェオフィチンａ（Ｃｈｌにおいて中心Ｍｇが２つのＨ原子で置き換えられているもの）発明の背景Ｍｇ含有（バクテリオ）クロロフィル類（（Ｂ）Ｃｈｌ）およびそれらの遊離塩基、（バクテリオ）フェオフィチン類（（Ｂ）Ｐｈｅ）は光合成にとって必須である。それらは反応中心内の光誘導電荷分離を可能にするアンテナまたは酸化還元色素として働く。それらの色素はまた、例えば光力学的（光化学）腫瘍治療において潜在的に有用な光増感剤である。ポルフィリン類は、腫瘍組織に蓄積しそして腫瘍組織を照射した際に、その場で光を吸収して蛍光の位置により腫瘍を検出する手段を与えることが示されて来た。ヘマトポルフィリン誘導体またはＨＰＤとして知られているヘマトポルフィリンの粗製誘導体は、腫瘍の検出と光力学的（光化学）療法治療との両方のために提案されて来た。一層有効であると言われるＨＰＤの１つの形は１０Ｋｄａ以上の凝集体重量を有するＨＰＤの一部分を含みそして米国特許第４，６４９，１５１号の主題である。ＨＰＤまたはその活性成分は皮膚疾患の局所的治療について米国特許第４，７５３，９５８号においてそしてバクテリアおよびウィルスのような感染性生物を含有する生物学的サンプルの滅菌化についてＭａｔｔｈｅｗｓ等，１９８８において記載されて来た。治療および診断におけるポルフィリン医薬類の性能を最適化するために、例えば４つのピロール環に錯体化された中心金属原子がありそして（または）ピロール環の周囲の置換基が変異されておりそして（または）大員環（ｍｃｒｏｃｙｃｌｅ）がＣｈｌ誘導体に二水素化されている（クロリン類）かまたはＢＣｈｌ誘導体に四水素化されている（バクテリオクロリン類）、幾種かのポルフィリン誘導体が提案された。、Ｍｇ以外の金属を有する環式テトラピロールの錯体は、それらの分光的および酸化還元的性質を理解するためにポルフィリンおよび１７，１８−ジヒドロポルフィリン系列において研究された（Ｈｙｎｎｉｎｅｎ，１９９１）。クロロフィル類に比較して有力な利点のあるものの中にはバクテリオクロロフィル類があり、その理由は、それらが即ちクロロフィル誘導体よりかなり長い波長で強い近赤外バンドを示すからである。しかしながら、Ｍｇ以外の中心金属を有するバクテリオクロロフィル類については現在、殆ど情報がない。ＤｏｕｇｈｅｒｔｙへのＰＣＴ国際出願公開第ＷＯ９０／１２５７３号は、望ましくない標的生物学的基質を下記誘導体の有効量で光増感し、次に該基質を損傷するかまたは破壊するために有効な時間、下記誘導体により吸収される波長バンドにおける照射線で該標的基質を照射することからなる、該基質の破壊または損傷を行う方法において使用するための組成物の製造のために、バクテリオクロロフィル−ａまたは−ｂの誘導体あるいは、中心金属原子が欠けているかまたは中心金属原子がＭｇ²⁺、Ｓｎ²⁺およびＺｎ²⁺から選ばれた非常磁性金属であってよくそしてＣ−１７¹³−カルボキシル基が８〜２５Ｃの飽和または不飽和ヒドロカルビル残基でエステル化されている対応するバクテリオクロリンの誘導体を記載している。また、それらの化合物は光力学的（光化学）療法および診断において有用であると述べられている。バクテリオクロロフィル−ａ及び−ｂのＳｎ²⁺ およびＺｎ²⁺錯体が特許請求されているけれども、前記特許出願ＷＯ９０／１２５７３号の明細書中にはこれらの金属誘導体が例示されていないし、それらの製造方法がまったく記載されていないことに注目されるべきである。Ｌｏｓｅｖ等，１９９０は、それぞれ、窒素の流れにおいてベンゼン中のＰｄベンゾニトリルを用いて、あるいはメタノール中のＣｕＣｌ₂の濃溶液を用いて、のＢＰｈｅの直接金属化反応により造られると述べられている〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ及び〔Ｃｕ〕−ＢＣｈｌ錯体を記載している。しかしながらこの刊行物はそれらの金属錯体の製造方法の詳細および特徴付けを記載していない。さらにＬｏｓｅｖに従う〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ錯体の製造は本発明者により繰り返すことが出来なかった。普通に提供される条件下、即ち室温で酸素の存在下そして通常の光条件下ではＢＣｈｌ部分は変化しやすくそして例えばヘマトポルフィリン誘導体（ＰＨＤ）と比較した場合に、トリプレット状態形成について若干低い量子収率を有する。しかしながら、生物学的酸化還元反応の可能な開始、好ましいスペクトル特性およびそれらの容易なインビボ分解性はＰＤＴ療法および診断のためにそしてサンプル中および生体組織中の細胞、ウィルスおよびバクテリアの殺滅のために、他の化合物、例えばポルフィリン類およびクロロフィル類よりも潜在的に優秀なバクテリオクロロフィルを生ずる。バクテリオクロロフィル類の化学的変性はそれらの性質をさらに改良することが予想されるがしかしこれは、そのような変性バクテリオクロロフィル類の適当な製造方法が存在しないことに起因して、非常に限られていた（Ｈｙｎｎｉｎｅｎ，１９９１）。本願と同じ出願人の第０５８４５５２号で公開されたヨーロッパ特許出願は、ＰＤＴ療法および診断において使用するためのアミノ酸、ペプチドおよびたんぱく質とのＣｈｌおよびＢＣｈｌの新しい共役体を記載している。アミノ酸、ペプチドまたはたんぱく質残基はＣｈｌまたはＢＣｈｌ分子のＣ−１７³−カルボキシル基に直接にまたはスペーサーを介して結合される。これらの共役体は、酸に不安定な中心Ｍｇ原子を保持するのに十分に穏やかな方法により造られる。クロロフィルａ−１７³−セリンメチルエステルのＺｎおよびＣｕ錯体が、それにまた記載されているがしかし金属化バクテリオクロロフィルおよびそれらの製造方法はそれには記載されていなかった。ドイツ特許出願第ＤＥ４１２１８７６号は、中心Ｍｇを保持する一方で、同素環での追加の変化を可能にして、それにより色素吸光が８００ｎｍを超えてシフトされる、迅速なアルカリ性エステル交換反応により穏やかな条件下に、位置Ｃ −１３²およびＣ−１７³での変性されたエステルが得られるバクテリオクロロフィル誘導体を記載している。その出願はまた、ＺｎまたはＮｉを有する前記ＢＣｈｌ誘導体の金属錯体を述べているがしかし前記錯体は例示されてなくそしてそれにはそれらの製造方法が記載されていなかった。ＢＣｈｌ類の好ましい光学的および生理学的性質を維持するかまたは改良さえする一方で、それらの光増感化能力を最適にし、ならびにそれらの化学的安定性を改良し、そして生理学的寿命を最適化するために、ＰＤＴにおいて使用するためのＢＣｈｌの新しい金属化錯体を造ることが望ましいだろう。金属交換反応は、大員環（ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ）および周囲の置換基の新しい変性のためにそして特にそれらの輸送、標的化および生物学的寿命を最適化しそして毒性副作用を最小にするために重要である、ＢＣｈｌ類の化学的反応性および安定性における顕著な変化を生ずる。金属交換反応はまた、トリプレット収率および寿命を含む励起した状態の性質における顕著な変化およびより高い励起状態の得易さおよび細胞毒性酸素種（ｓｐｅｃｉｅｓ）の生成を生ずる。ポルフィリン類における中心金属原子の変更のために幾つかの方法が知られている（Ｂｕｃｈｌｅｒ，１９７５参照）。ポルフィリン類は容易に手に入れることが出来そして化学的に安定であるが、なおスペクトル的にそして生理学的に望ましくない。クロロフィル類の直接または間接の金属化反応のための２、３の方法が知られている。ＳｔｒｅｌｌおよびＵｒｕｍｏｗ，１９７７はＮ₂雰囲気下メタノール中で、（メタノールまたはピリジン中で脱金属化Ｃｈｌ誘導体を酢酸カドミウムと反応させることにより得られた）〔Ｃｄ〕−Ｃｈｌ錯体をＣｒ⁺⁺またはＭｎ⁺⁺ のアセテートと金属交換反応させることにより造られた〔Ｃｒ〕−Ｃｈｌおよび〔Ｍｎ〕−Ｃｈｌ錯体を記載している。この金属交換反応方法はクロロフィル誘導体のＣｕ、Ｚｎ、ＣｏおよびＰｂ錯体のためにまた適当であるがしかしＦｅ³⁺ 、ＮｉおよびＭｇのためには適当ではないと述べられている。しかしながらＣｕ、Ｚｎ、ＣｏおよびＰｂ錯体はＰｈｅ中への直接金属化反応により造られることが出来るので、その方法はＣｒおよびＭｎのためにのみ有利であろう。その著者はまた、アセトン中のＰｈｅをジメチルスルホキシド中のＭｇ酢酸塩で直接金属化反応を行うことによる〔Ｍｇ〕−Ｃｈｌ錯体の製造を記載している。現在、Ｍｇ以外の中心金属を有するバクテリオクロロフィル類についての情報が殆ど手に入らない。金属化反応に対するバクテリオクロロフィル類の減少した反応性および副反応に対する増大した反応性に起因してバクテリオクロロフィル類の金属化反応はクロロフィル類の金属化反応より一層困難であることが知られている。バクテリオフェオフィチン中へのＭｇの挿入のための特定の方法が記載された（Ｗａｓｉｅｌｅｗｓｋｙ，１９７７）。本発明者等は、バクテリオクロロフィル誘導体の金属錯体の製造のために、ＳｔｒｅｌｌおよびＵｒｕｍｏｗにより記載されたクロロフィル誘導体のための直接金属化反応および金属交換反応を試みたが、しかしすべての試みは不成功であった。バクテリオフェオフィチン誘導体の直接金属化反応はＣｕおよびＺｎ以外の試みられたすべての金属に関して有効に働かなかったそしてさもなくば、未反応バクテリオフェオフィチンと３ −アセチル−クロロフィルａタイプの金属化酸化生成物との混合物を生じた。発明の概要適当な金属塩および溶媒を用いることにより、ＳｔｒｅｌｌおよびＵｒｕｍｏｗにより刊行されたクロロフィル類の金属化のための金属交換反応の変更により、バクテリオクロロフィル誘導体の金属錯体を得ること出来ることが、今や本発明に従って見い出された。したがって、本発明は式〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ（式中、ＢＣｈｌは位置１７³で基−ＣＯＯＲ₁（但しＲ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基である）を担持する脱金属化天然または合成のバクテリオクロロフィル誘導体の残基を表しそして表し、前記金属ＭはＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎからなる群から選ばれる二価の金属、Ｆｅ、ＭｎおよびＣｒからなる群から選ばれる三価の金属そしてＳｎおよびＰｔを含む群から選ばれる四価の金属からなる群から選ばれる）の合成金属化バクテリオクロロフィル誘導体の新しい製造方法に関し、その方法は：（ｉ）Ａｒ雰囲気中で、ジメチルホルムアミドに溶解された、上に定義されたとおりの基−ＣＯＯＲ₁を位置１７³で担持する適当なバクテリオフェオフィチン誘導体を脱水化Ｃｄアセテートと反応させそして還元性条件下にクロマトグラフィにより反応混合物から〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を回収し；（ｉｉ）Ａｒ雰囲気中で、乾燥アセトン中に溶解されたかくして製造された〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を、金属Ｍの塩化物、アセテートおよびアセチルアセトネートから選ばれた適当な脱水金属Ｍ塩と共に溶解し；そして（ｉｉｉ）反応混合物から所望の金属化〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体を回収することからなる。１つの態様において、本発明の方法は式Ｉ、IIまたはIIIの金属化ＢＣｈｌ誘導体の製造に適用される：（式中、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基であり；Ｒ₂はＨ、ＯＨまたはＣＯＯＲ₅（但し、Ｒ₅はＣ₁〜Ｃ₁₂アルキルまたはＣ₃ 〜Ｃ₁₂シクロアルキルである）であり；Ｒ₃はＨ、ＯＨまたはＣ₁〜Ｃ₁₂アルキルまたはアルコキシであり；Ｒ₄は各々独立して、ビニル、エチル、アセチル、１−ヒドロキシエチルそしてそのエーテルおよびエステルからなる群から選ばれ；そしてを表して、前記金属ＭはＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎからなる群から選ばれる二価の金属、Ｆｅ、ＭｎおよびＣｒからなる群から選ばれる三価の金属そしてＳｎおよびＰｔを含む群から選ばれる四価の金属からなる群から選ばれる）。式Ｉ、IIおよびIIIの上記〔Ｍ〕−ＢＣｈｌから、追加の誘導体が位置１７³でのエステル交換反応により得られることが出来そしてしたがって他の面おいて、本発明は式Ｉ’、II’およびIII’の化合物の製造方法に関し：（式中、Ｒ’₁は、（ｉ）ハロゲン、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂により場合により置換されたＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基であるかあるいはＯ、ＳおよびＮＨから選ばれた１つまたはそれ以上のヘテロ原子によりまたはフェニル環により中断されたそのような残基；（ｉｉ）ヒドロキシルを含有するアミノ酸の残基またはヒドロキシル基を含有するペプチドの残基あるいはエステルおよびＮ−保持された誘導体から選ばれるその誘導体（但し、前記ヒドロキシル化アミノ酸またはその誘導体はヒドロキシル基を介してＣＯＯ−残基に結合されている）；（ｉｉｉ）ハロゲン、オキソ、ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂により場合により置換された前記Ｃ₁〜Ｃ₂₅飽和または不飽和ヒドロカルビル残基あるいはＯ、ＳおよびＮＨから選ばれた１つまたはそれ以上のヘテロ原子によりまたはフェニル環により中断されたそのような残基が、ＯＨ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂から選ばれた末端官能基によりさらに置換されている、（ｉ）において規定されたとおりのスペーサーを介してＣＯＯ−残基に結合されている（ｉｉ）おいて規定されたとおりのペプチドの残基；および（ｉｖ）ＣＯＯ−残基に直接結合されている、あるいはハロゲン、オキソ、ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ又はＮＨ₂により場合により置換されたあるいはＯ、ＳおよびＮＨから選ばれた１つ又はそれ以上のヘテロ原子によりまたはフェニル環により中断されたＣ₁〜Ｃ₂₅飽和又は不飽和ヒドロカルビル残基がＯＨ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂から選ばれた末端官能基によりさらに置換されている、（ｉ）において規定されたとおりのスペーサーを介してＣＯＯ−残基に結合されている、ペプチドおよびたんぱく質から選ばれた細胞特異性配位子の残基；からなる群から選ばれ；Ｒ₂はＨ、ＯＨまたはＣＯＯＲ₅（但し、Ｒ₅はＣ₁〜Ｃ₁₂アルキル又はＣ₃〜Ｃ₁ ₂ シクロアルキルである）であり；Ｒ₃はＨ、ＯＨまたはＣ₁〜Ｃ₁₂アルキルまたはアルコキシであり；Ｒ₄は各々独立して、ビニル、エチル、アセチル、１−ヒドロキシエチルそしてそのエーテルおよびエステルからなる群から選ばれ；そしてを表して、前記金属ＭはＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎからなる群から選ばれる二価の金属、Ｆｅ、ＭｎおよびＣｒからなる群から選ばれる三価の金属そしてＳｎおよびＰｔを含む群から選ばれる四価の金属からなる群から選ばれる）：その方法が（ｉ）Ａｒ雰囲気において、ジメチルホルムアミドに溶解された、位置１７³ で基−ＣＯＯＲ₁（但し、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基である）を担持する式Ｉ、IIまたはIIIのバクテリオクロロフィル誘導体から由来する適当なバクテリオフェオフィチンを、脱水化Ｃｄアセテートと反応させそして還元性条件下にクロマトグラフィにより反応混合物から対応する〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を回収し；（ｉｉ）Ａｒ雰囲気中で、乾燥アセトンに溶解された、かくして生成された〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を、金属Ｍの塩化物、アセテートおよびアセチルアセトネートから選ばれた適当な脱水された金属Ｍ塩と反応させ；そして（ｉｉｉ）反応混合物から回収された生成された金属化〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体を、エステル交換反応条件下に式Ｒ’₁−ＯＨの化合物と反応させて、Ｒ’₁が上に定義されたとおりである式Ｉ’、II’又はIII’の化合物を得ることからなる。好ましい態様において、〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体は、Ｒ₁がフィチル又はゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＰｄ、Ｃｕ、Ｎｉ、Ｃｏ、ＺｎおよびＭｎである〔Ｍ〕−ＢＣｈｌである。他の好ましい態様において、工程（ｉｉ）において使用される金属Ｍ塩は金属塩化物である。他の別の態様において、工程（ｉ）と（ｉｉ）とは単一の工程に組み合わされることが出来、即ちバクテリオフェオフィチン誘導体は、ジメチルホルムアミドまたはアセトン中で、脱水されたＣｄ塩、例えばＣｄアセテートの触媒量の存在下に過剰の適当な脱水化金属Ｍ塩、例えば金属塩化物と反応させる。他の面において、本発明は、上に定義されたとおりであるがしかしＲ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルであり、Ｒ₁がフィチルまたはエチルであって且つＭがＰｄであるかあるいはＲ₁がフィチルであって且つＭがＣｕである式Ｉの化合物を除いての、式Ｉ’、II’およびIII’の新しい金属化バクテリオクロロフィル誘導体に関する。上に定義されたとおりの式Ｉ’、II’およびIII’の本発明の新しい金属バクテリオクロロフィル誘導体は、ＨＰＤおよび他の光増感剤について当業界に周知であるように治療剤および診断剤としての光増感剤として使用するために、そしてサンプルおよび生体組織における細胞、ウィルスおよびバクテリアを殺滅するために使用される。図面の簡単な説明図１は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓのバクテリアの懸濁液上への〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ− １７³−セリルメチルエステル（〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒ）およびＢＣｈｌ −１７³−セリルメチルエステル（ＢＣｈｌ−Ｓｅｒ）の光毒性を示す。図２は、〔³Ｈ〕チミジン導入による培養におけるＭ２Ｒ黒色腫細胞上への〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒの光毒性を示す。発明の詳細な記載ポルフィリン類およびクロロフィル類とは対照的に、バクテリオクロロフィル類の直接金属化は困難である。本発明の方法は、対応する〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ誘導体の金属交換反応により、光増感剤として使用するために改良された性質を有する金属化バクテリオクロロフィル誘導体を得ることを可能にする。本発明に従えば、アセテート／ジメチルホルムアミド法により容易に手に入れることが出来る〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体は、おだやかな条件下に、優れた収率で他の金属錯体に金属交換されることが出来る。前駆体として〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌを用いる容易な金属交換反応は驚くべきであり、そして恐らくはＭｇ²⁺（ｒ_M＝７２ｐｍ）に比較してＣｄ²⁺のより大きなイオン半径（ｒ_M）（９５ｐｍ）に一部分起因しているように思われる。第２の要因は反応のために用いられる金属の対イオン（クロライド類）と組み合わせての溶媒（アセトン）である。金属交換反応中、ＣｄＣｌ₂および〔Ｍｇ〕−ＢＣｈｌが遊離体（ｅｄｕｃｔｓ）と平衡で形成されそしてアセトン中のＣｄＣｌ₂の非常に低い溶解度は平衡を生成物の側に移行させる。本発明の１つの態様において、Ｒ₁は芳香族を包含する、好ましくは１〜２５個の炭素原子の任意の直鎖または分枝鎖の飽和または不飽和ヒドロカルビル基、例えばアルキル、アルケニル、フェニル、好ましくはＣ₁〜Ｃ₄原子の低級アルキル基、最も好ましくはエチルあるいは天然ＢＣｈｌ化合物から由来する基、例えばゲラニルゲラニル（２，６−ジメチル−２，６−オクタジェニル）またはフィチル（２，６，１０，１４−テトラメチルヘキサデセ−１４−エン−１６−イル）であり；そしてＲ’₁はＲ₁について定義したとおりであるかあるいはＦ、Ｂｒ、ＣｌおよびＩから選ばれたハロゲン原子によりあるいはＯＨ、オキソ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ又はＮＨ₂により置換されたそのような炭化水素鎖あるいはＯ、ＳまたはＮＨにより、好ましくはＯにより中断された場合により置換されたそのようなヒドロカルビル鎖であり、例えばＲ’₁は４〜１０個の炭素原子のオリゴオキシエチレングリコール残基、好ましくはペンタオキシエチレングリコールである。Ｒ’₁が本明細書において定義されたとおりのペプチドまたはたんぱく質のためのスペーサーとして供される場合、それはＯＨ、ＣＯＯＨおよびＮＨ₂から選ばれた末端官能基を有し、その末端官能基を介して、ペプチドまたはたんぱく質はエステルまたはアミド結合により結合されている。他の態様において、Ｒ’₁はヒドロキシ基を含有するアミノ酸残基あるいはヒドロキシ基を含有するペプチドの残基、例えばセリン、スレオニンおよびチロシン、またはこれらを含有するペプチド類、あるいはエステル類、例えばアルキルエステル類およびＮ−保護された誘導体（但し、Ｎ−保護基は、例えばｔｅｒｔ −ブトキシ、カルボベンゾキシまたはトリチルである）から選ばれた前記アミノ酸またはペプチドの誘導体でありそして前記ヒドロキシル化アミノ酸またはペプチドまたはその誘導体はヒドロキシ基を介してＣＯＯ−基に結合されている。そのようなアミノ酸誘導体の例はセリンメチルエステル、Ｎ−トリチル−セリンメチルエステル、チロシンメチルエステルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−チロシンメチルエステルであり、そのようなペプチドの例はＮ−カルボベンゾキシ−セリンメチルエステルであり、これらのすべてはＥＰ０５８４５５２において記載されているとおりにして造られる。最も好ましい態様において〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体は、Ｌ−セリンメチルエステルでエステル化された〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌである。他の態様において、Ｒ’₁はホルモンペプチド、例えばメラニン形成細胞刺激ホルモン（メラノトロピン）および抗体、例えば免疫グロブリン類および腫瘍特異性抗体により例示されるがしかしそれらに限定されない、ペプチド類およびたんぱく質類から選ばれる細胞特異性配位子の残基である。ＭがＺｎまたはＣｕである式Ｉ’の本発明の〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体は、例１〜例４においてこの後から記載されるとおりにして脱金属化ＢＣｈｌ誘導体の直接金属化反応により、また造られることが出来る。バクテリオクロロフィルの金属錯体類の或るものは非常に安定でありそしてしたがって酢酸の使用あるいは塩酸または硫酸のような強鉱酸の使用のような強い条件を包含する、テトラピロール環システムの周囲における追加の変異のために使用されることが出来る。したがって、エステル類、例えば場合により置換されたアルキルまたはアリールのエステル類は例えば位置３¹または１３²でのヒドロキシル基を対応する脂肪族酸または芳香族酸、酸塩化物またはアミノ酸と反応させることにより形成されることが出来そして同じ位置でのエーテル類は対応する脂肪族アルコール又は芳香族アルコールとの反応により得られる。位置３¹でヒドロキシル基を有する化合物、例えば３−ヒドロキシエチル−ＢＣｈｌ誘導体あるいは位置１３²でヒドロキシル基を有する化合物、例えば１３²−ＯＨ−ＢＣｈｌ誘導体は標準の方法により手に入れることが出来る（Ｓｔｒｕｃｋ等，１９９２およびＨｉｎｎｉｎｅｎ，１９９１参照）。また、位置１７³での天然に存在するフィチルおよびゲラニルゲラニルのエステルは、対応するアルコールとの反応により、他のエステルへ、例えばエチルエステルへ、酸触媒作用によりエステル交換されることが出来る。他の置換基はＢＣｈｌａにおける３−アセチルのような天然のＣＯ基、あるいはＣ−１７³でエステル化されたケトアルコールのような化学的に導入されたＣＯ基のウィッティッヒ反応により大員環中に導入されることが出来並びにＣ−１３²でのエーテル結合を形成するためにＯＨ基の酸化性カップリングによりあるいは例えばＣ−３¹、Ｃ−１３¹、Ｃ−１３² でのＯＨ基をカルボン酸と酸触媒作用エステル化反応させることにより大員環に導入されることが出来る。別法において、テトラピロール環システムの周囲における変異は脱金属化の前に、天然のＭｇ−含有ＢＣｈｌ誘導体において行われる。本明細書における式IIおよびIIIのＢＣｈｌ誘導体は、前に記載されたとおりにして式Ｉの対応する天然に存在するＢＣｈｌ誘導体から得られることが出来る（Ｓｔｒｕｃｋ，１９９０）。Ｒ’₁がアミノ酸、ペプチドまたはたんぱく質、例えば抗体の残基である本発明の化合物は、本発明の金属交換反応処理の後に、酵素クロロフィラーゼを用いての酵素エステル交換反応により、あるいはＥＰ０５８４５５２に記載されたとおりにジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）または４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いて適当なバクテリオクロロフィリド（ｂａｃｔｅｒｉｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅ）（遊離酸ＢＣｈ−１７³−ＣＯＯＨ）をヒドロキシル化アミノ酸、ペプチドまたはたんぱく質と、触媒作用縮合反応させることにより、あるいは天然のＢＣｈｌのようなＭｇ錯体により耐えられない酸触媒作用反応により造られる。本発明の新しい金属バクテリオクロロフィル誘導体は、ＨＰＤおよび他の光増感剤のために当業界に周知であるように、治療剤および診断剤としての光増感剤として使用するためのそしてサンプルおよび生体組織における細胞類、ウィルス類およびバクテリアを殺滅するためのものである。これらの化合物は、例えば、適当な波長の光を用いての、インビボまたはエクスビボのどちらかにおいての照射による破壊のために、新生物性細胞または他の異常な組織を増感させることにおいて有用である。光活性化のエネルギーは内因性の（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）酸素に移行されて、それを一重項酸素（ｓｉｎｇｌｅｔｏｘｙｇｅｎ）に転換すると信じられ、一重項酸素は細胞毒性作用に応答性であると考えられる。また、バクテリオクロロフィルの光活性化形態は蛍光を発し、その蛍光は金属化バクテリオクロロフィルが投与される腫瘍または他の部位を局所化するのに助けとなることが出来る。本発明の新しい金属バクテリオクロロフィル誘導体を用いて治療されることが出来る当業界に知られている指示の例は充実性腫瘍における腫瘍組織の破壊、血管における血小板の溶解（例えば米国特許第４，５１２，７６２号参照）、座瘡、足部みずむし、いぼ、乳頭腫および乾癬のような局所疾患の治療および感染因子についての（輸血のための血液のような）生物学的製剤の処理を包含する。本発明の金属バクテリオクロロフィル誘導体は、例えばペンシルバニア州イーストンのＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．発行のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ最新版において概要されているような、当業界に周知の技術を用いて、患者に投与するためのあるいはインビドロ標的に適用される最終製薬組成物中に配合される。その組成物は、特に注射により全身的に投与されることが出来、あるいは局所的に用いられることが出来る。診断のために、本金属バクテリオクロロフィル誘導体は単独に用いられてもよくあるいは放射性同位元素または当業界に知られているような他の検出用手段を用いて標識化されてよい。投与されるべき金属バクテリオクロロフィル誘導体の量は、例えばＰＤＴにおいて使用される他のポルフィリン類に関して蓄積された経験に従いそして活性成分として使用される誘導体の選択、治療される疾患、投与の様式、患者の年齢および症状、および医者の判断に依存して変わるだろう。照射用光の波長は、好ましくは本金属バクテリオクロロフィル光増感剤の最大吸光度に合うように選ばれる。任意の本化合物のための適当な波長はその吸収スペクトルから容易に決定されることが出来る。インビボ使用に加えて、本発明の金属バクテリオクロロフィル誘導体は有害なウィルスまたは有害なバクテリアのような感染因子を殺滅させるためにインビトロの材料の処理において使用されることが出来る。例えば、将来の輸血のために用いられるべき血液および血漿は本発明の化合物で処理されそして滅菌を行うために照射される。したがって、さらに本発明は悪性腫瘍の光力学的（光化学）療法および診断ためのそして細胞、バクテリアおよびウィルスの光力学的（光化学）殺滅のための、本明細書における式Ｉ’、II’およびIII’の金属化バクテリオクロロフィル誘導体を含む製薬組成物に関する。これらの目的のために、本組成物は、例えば米国特許第４，６４９，１５１号、同第４，７５３，９５８号、同第５，２５６，８４０号および同第５，２３８，９４０号、ヨーロッパ特許出願第０５８４５５２号およびＰＣＴ出願第ＷＯ９０／１２５７３号（これらのすべては、参照することにより本明細書に組み入れる）において記載されているような従来の方法により造られ且つ投与されるだろう。さて、本発明は以下の非限定的例により例示される。例例および表１において、出発化合物および得られた金属錯体は以下の番号（次の表および表１での肉太字での番号）により同定される。 1a-BPhe 1b-BPhe-13²-OH 2a-[Pd]-BChl 2b-[Pd]-BChl-13²-OH 3a-[Co]-BChl 3b-[Co]-BChl-13²-OH 4a-[Ni]-BChl 4b-[Ni]-BChl-13²-OH 5a-[Cu]-BChl 5b-[Cu]-BChl-13²-OH 6a-[Zn]-BChl 6b-[Zn]-BChl-13²-OH 7a-BChl 7b-BChl-13²-OH 8a-[Cd]-BChl 8b-[Cd]-BChl-13²-OH 9a-[Mn]-BChl 9b-[Mn]-BChl-13²-OH材料および方法（ｉ）ＢＣｈｌの単離：ＳｈｅｒｚおよびＰａｒｓｏｎ，１９８４、Ｓｔｒｕｃｋ等，１９９２またはＳｖｅｃ，１９９１にしたがってＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ（Ｒｂ）ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ又はＲｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｒｕｂｒｕｍのような光合成バクテリアからＢＣｈｌ〔化合物７ａ〕を単離した。ＯｍａｔａおよびＭｕｒａｔａ，１９８３に従って、精製をＤＥＡＥ−セファロース上で行った。（ｉｉ）１３²−ヒドロキシバクテリオクロロフィルａ〔ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ〕の製造：Ｒ₁がフィチルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＯＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルでありそして位置８でのＲ₄がエチルである式Ｉの化合物のＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ〔化合物７ｂ〕は４℃で暗所において５〜７日間７ａの貯蔵（ＳｔｒｕｃｋおよびＳｃｈｅｅｒ，１９９０）により位置Ｃ−１３²でのＢＣｈｌ〔７ａ〕のヒドロキシル化により造られた。別法として、Ｓｃｈａｂｅｒ等，１９８４に従うＬｉＢｒ−法を用いて副生成物が少ない生成物を生じた。各々の場合において、溶離剤としてトルエン／アセトン（９：１（ｖ：ｖ））を用いてプレパレーチブ（２０ｘ２０ｃｍ²）シリカゲルプレート（シリカゲル６０Ｈ、Ｍｅｒｃｋ製）またはカラム上で精製を行った。表題の生成物を含有する緑がかった青色のバンド（Ｒｆ〜０．４）が機械的に分離されそして未反応ＢＣｈｌが、アセトンを用いて抽出された。（ｉｉｉ）ＢＣｈｌ及びＢＣｈｌ−１３²−ＯＨの脱金属化：少量の酢酸を用いて、Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ−Ｂｅｌｋｉｎ，１９８８に従って、ＢＣｈｌ〔７ａ〕の脱金属化反応によりＢＰｈｅ〔化合物１ａ〕を得そしてＢＣｈｌ−１３² −ＯＨ〔７ｂ〕の脱金属化によりＢＰｈｅ−１３²−ＯＨ〔化合物１ｂ〕を得た（色素がちょっと溶解する）。直ちに起こる、脱金属化の後に、Ｎ₂の流れにより酢酸を除去しそして固体生成物としてＢＰｈｅおよびＢＰｈｅ−１３²−ＯＨを回収した。（ｉｖ）クロロフィラーゼ（クラーゼ（ｃｈｌａｓｅ））：ＥＰ０５８４５５２において記載されているとおりにしてタイワンセンダンであるＭｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈＬ．の葉からクラーゼアセトン粉末を造った。（ｖ）細胞培養：以前に記載された（Ｇｅｒｓｔ等，１９８６）とおりにして、８％ＣＯ₂の湿潤雰囲気中で３７℃で、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０％ウシ胎児血清、グルタミンの２ｍＭ、ペニシリンの０．０６ｍｇ／ｍｌおよびストレプトマイシンの０．１ｍｇ／ｍｌを含有するダルベッコの変性イーグル培地／Ｆ１２における単層としてＭ２Ｒマウス黒色腫細胞を培養する。（ｖｉ）細胞光毒性研究：Ｍ２Ｒマウス黒色腫細胞（１ｘ１０⁵細胞／ウェル）を、２４個のウェル（ｗｅｌｌ）を有するミクロプレート中で培養しそして約２ｘ１０⁵細胞／ウェル（約７０〜８０％集密度）に２４時間増殖させる。〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体を培養培地に溶解しそして音波をかけることにより分散させる。ホトサン−３（Ｐｈｏｔｏｓａｎ−３）を希釈して培養培地におけるその最終濃度にする。その培地を血清の存在しない培地と置き換えそして所望の濃度の光増感剤を用いて細胞を暗所でインキュベートする。インキュベーションの２時間後、細胞を５分間室温でプレートの底から照射する。培地を血清含有培地と置き換えそして培養プレートを２４時間インキュベーター中に戻して置く。その細胞培養物中の細胞毒性効率は、（ｉ）細胞形態の顕微鏡検査、（ｉｉ）損傷された細胞の核に選択的に蓄積する生体染色（プロピジニウム沃化物〔ＰＩＤ〕〔２，７−ジアミノ−９−フェニル−１０−（ジエチルアミノプロピル）フェナトリジニウムイォーダイドメチオダイド〕）での処理後の細胞の蛍光顕微鏡検査および（ｉｉｉ）後でさらに記載されるとおりにして〔³Ｈ〕チミジンの導入、により調べられる。対照の実験は（１）暗所に維持された未処理細胞、（２）光に照らされた未処理細胞および（３）薬剤で処理されたがしかし暗所に維持された細胞、を包含する。（ｖｉｉ）光源：照射用光源は１０ｃｍ水フィルターを介してガラス支持体上に焦点が合わされたそして液体フィルター（クロロフィルａ０．Ｄ．＝６６０ｎｍで１０．００）を備えた自家製２５０Ｗハロゲンランプである。光線量はすべての場合において４５ｍＷ／ｃｍ²に調節される。（ｖｉｉｉ）〔³Ｈ〕チミジン導入：ＰＤＴの２４時間後に、３７℃で２時間１μＣｉ／ｍｌの〔³Ｈ〕チミジンを細胞培養物に律動的に送り込む。次に培養物を燐酸塩緩衝化食塩水で２回洗浄し、４℃で３０分間７．５％冷トリクロロ酢酸で処理しそしてエタノールで２回洗浄する。水酸化ナトリウム（１Ｎ、３００μｌ／ウェル）を加えそしてプレートを３７℃で１０分間維持した。１００μ ｌのサンプルをシンチレーション小瓶に移し、１００μｌの１ＮのＨＣｌで中和しそしてＣｈｅｎ等，１９８８に従って４ｍｌ（２０：８（ｖ／ｖ））キシレンシンチレータールマックス（ｌｕｍａｘ）混合物中で液体シンチレーション計数により放射能を計数した。例１：直接金属化による〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌおよび〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨの製造アセテート／酢酸法またはアセテート／ジメチルホルムアミド法により、ＢＰｈｅ〔１ａ〕の直接金属化により〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ〔化合物６ａ〕をつくりそしてＢＰｈｅ−１３²−ＯＨ〔１ｂ〕の直接金属化により〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ− １３²−ＯＨ〔化合物６ｂ〕を造った。１ａ：アセテート／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）法１１０℃で６０（７５）分間１０００倍過剰の無水Ｚｎ（ＯＡｃ）₂とともにＤＭＦ中でＢＰｈｅおよびＢＰｈｅ−１３²−ＯＨ（１ａ、１ｂ）それぞれ（〜７０μＭ）を還流させることにより〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌおよび〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ（６ａ、６ｂ）それぞれを造った（１６３℃での還流は反応時間を５分に減少させる）。反応は分光的に従いそして完了するまで行われた。生成物の単離およず精製はこの後でのＣｄ錯体８ａ、８ｂについてと同様に行われた（収率〜８０％）。１ｂ：アセテート／酢酸法１００℃で１２０（３０）分間２５０倍過剰の無水Ｚｎ（ＯＡｃ）₂及び５０ｍＭのアスコルビン酸ナトリウムと共に氷酢酸中で１ａ、１ｂまたは７ａ、７ｂ（〜７０μＭ）を還流することにより〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌおよび〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ（６ａ、６ｂ）を造った。次にＮ₂の流れ中において酢酸を蒸発させ、ジエチルエーテルでＺｎ錯体を抽出しそしてＢａｋｅｒｂｏｎｄシリカＮＰ（粒子寸法１０μｍ；細胞直径１５０）を詰めたプレパレーチブＭｏｄＣｏｌＨＰＬＣカラム（２５０ｘ２５．４ｍｍ）上で精製した。約１７分の維持時間で２−プロパノール（５％）、メタノール（５％）及びｎ−ヘキサン（９０％（ｖ／ｖ）（１０ｍｌ／分）でアイソクラチック的に（ｉｓｏｃｒａｔｉｃａｌｌｙ）、化合物６ａを溶離した。〜７５％収率の精製された化合物を有した。ＨＰＬＣについてと同じ溶媒混合物を用いて、シリカゲル上でカラムクロマトグラフィにより、化合物６ｂを精製して、９０〜９５％の収率を得た。例２：直接金属化による〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ−３−ビニルおよび〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ− ３−ビニル−１３²−ＯＨの製造上記例１ａにおけるとおりのアセテート／ＤＭＦ法による金属化は、反応条件を少し変化させる場合にＢＰｈｅの他の誘導体にまで拡大させることが出来る。例えば、１２０℃で〜４０分以内で同一の条件下、Ｚｎ（ＯＡｃ）₂を用いての３−ビニル−ＢＰｈｅまたは３−ビニル−１３²−ヒドロキシ−ＢＰｈｅの金属化が進行する。例３：直接金属化による〔Ｚｎ〕−ＢＣｈｌ−１３²−デカルボメトキシの製造１３²−デカルボメトキシ−ＢＰｈｅ（または１３²−デカルボメトキシ−ＢＣｈｌ）のＺｎ錯体は例１ｂにおいて上に記載されたと同じ条件下に得られる。反応時間は１００℃で３０分であり；単離および精製は６ｂと同一である。例４：直接金属化による〔Ｃｕ〕−ＢＣｈｌ、〔Ｃｕ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨおよび〔Ｃｕ〕−ＢＣｈｌ−１３²−デカルボメトキシの製造１００℃で１５分間２５０倍過剰の無水Ｃｕ₂Ｏおよびアスコルビン酸ナトリウム（５０ｍＭ）と共に、氷酢酸中で１ａまたは７ａ（〜７０μＭ）を還流することにより〔Ｃｕ〕−ＢＣｈｌ（５ａ）を造った。氷酢酸中の１ｂまたは７ｂ（〜７０μＭ）を２５０倍過剰の無水Ｃｕ₂Ｏおよびアスコルビン酸ナトリウムの５０ｍＭと混合することにより〔Ｃｕ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ（５ｂ）を周囲の温度で形成した。５ｂについて記載されたと同一の条件で１３²−デカルボメトキシ−ＢＰｈｅの（または１３²−デカルボメトキシ−ＢＣｈｌの）Ｃｕ誘導体を得た。Ｃｕ₂Ｏを用いているにもかかわらず、残留酸素の存在または不均等化に起因して全ての場合においてＣｕ錯体が形成された。単離および精製は、氷酢酸法により造られたＺｎ錯体について上記例１ｂについて記載されたとおりにして行われ、それぞれ〜７５％（５ａ）、〜９０％（５ｂ）および〜９０％（１３²−デカルボメトキシ−ＢＣｈｌのＣｕ誘導体）の収支率で得られた。例５：ＢＰｈｅの直接金属化による〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌの製造１３０℃で４０分間３００倍過剰の無水Ｃｄ（ＯＡｃ）₂と共にジメチルホルムアミド中の約７０μＭのＢＰｈｅを還流することにより〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌを造った。反応は分光的に従いそして完了するまで行われた。ジエチルエーテル（ＤＥ）とＮａＨＣＯ₃−飽和水との間に分配することにより単離された粗製生成物は溶離剤としてトルエン／アセトン／トリエチルアミン（８８／１０／２（ｖ／ｖ／ｖ））を用いて（それらと混合された１．５％のアスコルビン酸ナトリウムの）還元性条件下シリカゲル上で精製されることが出来る。反応および仕上げ（ｗｏｒｋ−ｕｐ）は厳格なＡｒ保護下に行われる。青色バンド（Ｒｆ〜０．７）の純粋な〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌが機械的に分離されそして粗製生成物について上に記載されたとおりにしてジエチルエーテル／水で抽出される。その純粋な生成物が、後で記載される全ての金属交換反応方法において用いられた。そのスペクトル的性質（化合物８ａ）が表１に提供される。例６：〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌおよび〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨの金属交換反応によるＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、ＣｄおよびＭｎの〔Ｍ〕−ＢＣｈｌおよび〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ錯体の製造〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ誘導体（２ａ）の製造のために、位置Ｃ−７及びＣ−８での制御されない酸化を防止するための厳格なＡｒ保護下に、例５からの〔Ｃｄ〕 −ＢＣｈｌ（８ａ）を乾燥アセトン中に溶解した（Ａ７７０＝５ｃｍ^-1、〜５０ μＭ）。約１５分後にＰｄＣｌ₂（Ｍｅｒｃｋ，ｐ．ａ．）を加え（〜３０ｍｇ／１００ｍｌ溶液）そして反応混合物を４０分間還流させた。反応は分光的に従うことが出来る（Ｑｘバンドは生成物形成の際に〜５９０ｎｍから〜５３０ｎｍにシフトする）。〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌについて例５において記載されるとおりにしてジエチルエーテル／水を用いての抽出により本質的に純粋な生成物を単離した。必要に応じて、追加の精製は〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌについて記載されたとおりにしてシリカゲルプレート上で行われる。ＣＰｄ〕−ＢＣｈｌ（２ａ）のスペクトル的性質を表１において特徴づける。同様な方法で〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨの金属交換反応により〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨ（２ｂ）を造ったそして〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌおよび〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ−１３²−ＯＨそれぞれを対応する金属塩化物と反応させることにより、ＢＣｈｌのＣｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎの金属錯体（化合物３ａ、４ａ、５ａ、６ａ、９ａ）およびＢＣｈｌ−１３²−ＯＨのＣｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎの金属錯体（化合物３ｂ、４ｂ、５ｂ、６ｂ、９ｂ）を造った。無水金属塩化物は、１０倍モル過剰（Ｃｕ：５ａ、５ｂ；Ｚｎ：６ａ、６ｂ）で、１００倍モル過剰（Ｃｏ：３ａ、３ｂ）であるいはＰｄのように飽和（Ｎｉ：４ａ、４ｂ；Ｍｎ：９ａ、９ｂ）まで加えられた。Ｐｄ及びＮｉ（約３０〜４０分還流）以外は反応は２５℃で実際的に即時に起こりそして分光的に従った。残留酸素の存在に起因して少量のＣ７−Ｃ８酸化生成物（λ_max〜６８０ｎｍ）が形成されそして（飽和）アスコルビン酸ナトリウムの添加により抑えられることが出来る。生成物の単離および精製は上記例５における〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌについてのとおりにして行われた。生成物は表１に示されるとおりに、吸収、蛍光、¹Ｈ−ＮＭＲおよびＦＡＢ−ＭＳにより特徴づけられた。ＵＶ／可視光線吸収スペクトルをＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬａｍｄａ２分光光度計上で記録し、蛍光発光強度を、４５０Ｗキセノンランプを備えたＳｐｅｘＦｌｕｏｒｏｌｏｇ２２１上で記録しそして光電子増倍管の感度および励起エネルギーに正規化した。蛍光測定について最大光学濃度は＜０．１ｃｍ^-1でありそして励起は１ａ、１ｂ〜９ａ、９ｂのＱｘ−吸収バンド内であった。円偏光二色スペクトル（ＣＤ）をＤｉｃｒｏｇｒａｐｈＣＤ６（ＪｏｂｉｎＹｖｏｎ）上に記録した。ＦＡＢ−ＭＳはＣＨ７ａ／ＳＳ質量分光器（ＶａｒｉａｎＭＡＴ）上に記録されるかあるいは、液体表面イオン化がｍ−ヒドロキシ−ベンジルアルコールのマトリックスで行われるＣｓ−ガンを有するＦｉｎｉｇａｎＭＡＴ９０００上に記録された。¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルは３６０ＭＨｚ−ＢｒｕｋｅｒモデルＡＭ３６０上で記録された。標準溶媒はピリジン−ｄ₅であり、化学シフトは内部標準としてのテトラメチルシランに対してｐｐｍでのものである。吸光係数は中心金属のＩＣＰ／ＩＣＰＭＳ−原子吸収スペクトル（ＡＡＳ）により決定された；燃焼の前に、定量化された光学濃度を有する１ａ、１ｂ〜９ａ、９ｂのサンプル中の溶媒を最初に石英ガラス管中で蒸発させそして次にサンプルを濃硝酸で処理して金属の完全な放出を可能にした。ａ：１３²−ＯＨ色素（１ｂ〜９ｂ）の吸収スペクトルおよび蛍光スペクトルは〜５ｎｍだけのＱｘ吸収（５３０〜６００ｎｍの範囲）の体系的青色シフト以外はそれぞれ１３²−Ｈ親化合物の吸収スペクトルおよび蛍光スペクトルに対して重ね合わせることが出来た。質量スペクトルは１６質量単位だけ、より高い値に常にシフトした。全ての波長は〔ｎｍ〕でのものである。ｂ：ＤＥ（上方ライン）およびピリジン（下方ライン：イタリック）における２９８Ｋでの（ＡＡＳによる）吸収および吸光係数。ｃ：２９８Ｋ（７７Ｋ）でのＤＥ／石油エーテル／イソプロパノール（５：５：２（ｖ／ｖ／ｖ））中の蛍光。ｄ：Ｂｕｃｈｌｅｒ，１９７５からの６折（ｓｉｘｆｏｌｄ）配位についての電気陰性度（χ_M）および有効イオン半径（１０^-14ｍにおけるｒ_M）（角カッコ中のデータは４折配位についての半径を使用する）。ｅ：ピリジン−ｄ₅中の¹Ｈ−ＮＭＲ；（＋）：シャープシグナル；（−）：常磁性中心金属に起因する伸長ライン広がり。ｆ：蛍光剤でない（Ｓｐｅｘｆｌｕｏｒｏｌｏｇ２２１）。ｈ：Ｃ²Ｈ₃ＣＮにおけるシャープな¹Ｈ−ＮＭＲシグナル。例７：１７³−エチルエステルへの〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌおよび周囲変異されたＢＣｈｌ類のエステル交換Ｐｄ−バクテリオフェオフォルビドａエチルエステルの製造のために、〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌをクロロホルム中に溶解し（１ｍｇ／ｍｌ）そして５％Ｈ₂ＳＯ₄（ｖ／ｖ）を含有する同一容量のエタノールを加えた。混合物を９０分間Ａｒ雰囲気中で還流させた。次に、２．５時間Ａｒ下に還流させることによりエタノール／クロロホルム（１：１／ｖ：ｖ）中硫酸の５０ｍｌ中で〔Ｐｄ〕−ＢＰｈｅ（１００ｍｇ）をエステル交換した。次に反応混合物をエーテルで希釈し、１０％重炭酸ナトリウム水溶液で数回洗浄した。次に、有機相を乾燥させそして蒸発させた。トルエン中の８％アセトンで溶離させる、シリカゲル上の窒素下のプレパレーチブＴＬＣにより、得られたゆっくり移動する２つのバンドが表題化合物である（Ｒ_f＝０．７５）。いずれかにおける可視光線：λ_max〔相対強度）３２９（０．４５）；３８５ (0.39);527(0.13);755(0.1).¹H-NMR[ppm]:9.25,8.80,8.70(each s,1H,5-.10-,20 -H);4.55(q,1H,18-H);4.45(d,1H,17-H);4.10(q,2H,8-CH₂CH₃);3.85(s.3H,13²-CO₂ CH₃);3.7(d,1H,7-H);3.6(q,3H,17³-CH₂CH₃);3.50,3.32(each s.3H,2-,12-CH₃); 3.30(m,1H,8-H);3.06(s,3H,3-COCH₃);3.04(d,3H,7-CH₃);2.65(2H,17¹-H₂);2.45( 2H,17²-H₂);1.75(d,3H,18-CH₃);1.65(t,3H,8CH₂CH₃);1.38(t,3H,17³-CH₂CH₃);0. 10and-1,90(s,2H,2NH). Ｐｄ−Ｃ₃₇Ｈ₄₀Ｎ₄Ｏ₆についてのＦＡＢ−ＭＳ：計算値：７４２．３８（Ｍ＋１）；実測値：７４２．２（Ｍ＋１）。ＢＣｈｌ誘導体のＮｉ、Ｃｕ、Ｚｎのような他の酸安定な金属錯体のエチルエステルおよび他のエステルは同様な方法で造られることが出来る。例８：〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−１７³−セリルメチルエステル、〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−１７³−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒ）の製造Ｌ−セリンメチルエステル塩酸塩（Ｓｉｇｍａ製）を用いての、上記例６において造られた〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌの酵素エステル交換反応はＥＰ０５８４５５２おいて記載とおりにしてクロロフィラーゼアセトン粉末を用いて行われ、Ｒ’₁ がセリンヒドロキシ基を介してＣＯＯ−基に結合されているセリルメチルエステル残基である本明細書の式Ｉ’の化合物であって本明細書において〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒとして示される表題の化合物を生成した。同じ酵素エステル交換反応方法により、本発明に従う他の金属錯体〔Ｍ〕−ＢＣｈｌの１７³−セリルメチルエステル、ならびに他のセリン誘導体、例えばＮ −トリチル−Ｌ−セリンメチルエステルおよびＮ−カルボベンゾキシセリンメチルエステルとの、またはＥＰ０５８４５５２に記載されているようなチロシン誘導体、例えばＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルチロシンメチルエステルとの、〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ−１７²−エステルが造られることが出来る。例９：〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒのインビトロ光毒性９ａ．バクテリアおよびウィルス光毒性アッセイは３つの別々の工程、即ち増感剤を用いてのバクテリア溶液のインキュベーション、光照射そして光毒性の評価からなる。燐酸塩緩衝化食塩水（ＰＢＳ）中の新しいＳ．ａｕｒｅｕｓの懸濁液（〜１ｘ１０⁷バクテリア／２００μｌ）を、暗所で１時間、増感剤〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ −ＳｅｒまたはＢＣｈｌ−Ｓｅｒの一定の濃度を用いてインキュベートしそして次に、遠心分離により色素が存在しなくなるまで洗浄しそしてＰＢＳ中に再懸濁させた。洗浄されたバクテリア懸濁液は液体フィルター（クロロフィルａＯ．Ｄ．＝６６０ｎｍで１０．００）を用いて標的水準で１０００ルックス／ｃｍ² の垂直発光を有する自家製キセノンランプを光源として用いて５分間、光照射された。光力学的損傷（光化学損傷）はバクテリア生存の測定により評価された：照射されたバクテリア懸濁液（３０μｌ）のサンプルは振り混ぜながら、３７℃ で２時間、（子牛の）脳心臓浸出物（ＢＨＩ）液体バクテリア培養培地の３ｍｌ中で培養された。バクテリア濃度は、λ＝６６０ｎｍでの濁り度により測定された。各々の実験は、（ａ）１つの実験グループ（完全な処理に付されたバクテリア）および３つの対照グループ：即ち（ｂ）増感剤なしで照射されたバクテリア、（ｃ）増感剤で処理された非照射バクテリア、および（ｄ）非処理バクテリア（１００％の生存）。図１に示されるように、〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒの光毒性効果は増感剤濃度に関して投与量依存性であり（ＬＤ₅₀〜０．６μＭ）そして暗所においては毒性は与えられなかった。同じ条件下に比較として試験されたＢＣｈｓｌ−Ｓｅｒで同様な結果が得られ、僅かなしかし無意味に低いＬＤ₅₀を有した。そのアッセイは懸濁液においてのそして感染細胞においての両方においてＢ．Ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍａｃｎｅｓを用いてそしてＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｘＶｉｒｕｓ１（ＨＳＶ−１）を用いて繰り返されそして光毒性の同様な結果が得られた（図示せず）。９ｂ．黒色腫細胞この前の方の材料および方法の第（ｉｖ）項〜第（ｖｉｉｉ）項に記載されたとおりにしてアッセイを行った。Ｍ２Ｒ細胞の単層を１時間、〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒの示された濃度でインキュベートしそして上に記載されたとおりにして光力学的処理（光化学処理）に付した。光細胞毒性は〔³Ｈ〕チミジン導入により評価されそして処理された細胞および適当な対照のパーセント生存率は図２に記載される。非処理細胞の生存率は１００％としてみなされた。光毒性効果は、〔Ｐｄ〕−ＢＣｈｌ−Ｓｅｒ濃度に関して投与量依存性であり、０．０５μＭのおおよそのＬＤ₅₀を有することを図２において見ることが出来る。暗所対照においては光毒性効果は見られなかった。文献 1.Buchler,J.W.,1975,“Static coordination chemistry of metalloporphyrins ",in Porphyrins and Metalloporphyrins,Smith,K.M.,ed.,pp 157-232.Elsevier ,New York. 2.Chen,L.,Y.Mory,A.Zilberstein and M.Revel,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,v ol.85,pp.8037-41. 3.DeJordy,J.O.,P.Bendel,A.Horowitz,Y.Salomon and H.Degani,1992,J.Magn.re son.Imag.,vol.2,pp.695-700. 4.Gerst,J.E.,J.Sole,J.P.Mather and Y.Salomon,1986,Mol.Cell.Endocrinol.,v ol.46.pp.137-47. 5.Hynninen P.H.,in: Scheer,1991,pp 145-209. 6.Losev et al.,1990,Opt.Spektrosk.,vol.69,pp.97-101. 7.Matthews.J.L.et al.,1988.Transfusion,pp.81-83. 8.Omata,T.and N.Murata,1983,“Preparation of Chlorophyll a,Chlorｏphyll b and Bacteriochlorophyll a by column chromatography with DEAE-Sepharose Cl-6B and Sepharose Cl-6B",Plant Cell Physiol.,vol.24,pp.1093-1100. 9.Rosenbach-Belkin,V.,1988,“The primary reactants in bacterial photosyn thesis modelling by in vitro preparation”,Ph.D.Thesis,Weizmann Institut e of Science,Israel. 10.Schaber,P.M.,J.E.Hunt,R.Fries and J.J.Katz,1984,.J.Chromatogr.316.25- 41. 11.SCheer,H.,ed.,1991,Chlorophylls,CRC Press,Boca Raton,Florida. 12.Scherz,A.and W.W.Parson.1984,Biochim.Biophys.Acta,vol.766,pp.653-55. 13.Strell,M.and Urumow,T.,1977,Liebigs Ann.Chem.,pp.970-974. 14.Struck,A.,1990,“Chemisch modifizierte Bakteriochlorophylle und-phaeo phytine inden Bindungsstellen B_A.Bund H_A.Bvon photosynthetischen Reakti onszentren aus Rhodobacter sphaeroides R26: Pigmentsynthese,Pigmentausta usch und Spektroskopie".Ph.D.Thesis.University of Munich,Germany. 15.Struck,A.et al.,1992,Bacteriochlorophylls modified at position C-3: L ong-range intramolecular interaction with position C-13.2,Biochim.Biophy s.Acta,1101:321-328. 16.Struck,A.and Scheer,H.,1990,“Modified reaction centers from Rhodobac tersphaeroides R26.1.Exchange of monomeric bacteriochlorophyll with 13^-- hydroxy-bacteriochlorophyll",FEBS Lett.261,pp.385-388 17.Svec,W.A.,1991,“The distribution and extraction of the Chlorophylls ”.in:Scheer.1991,pp.89-102. 18.Wasielewsky,M.R.,1977,“A mild method for the introduction of Magnesi um into bacteriopheophytin-a”,Tetrahedron Letters,pp.1373-76.

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月２０日（１９９７．１０．２０）【補正内容】（ｉ）Ａｒ雰囲気において、ジメチルホルムアミドに溶解された、位置１７³ で基−ＣＯＯＲ₁（但し、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基である）を担持する式Ｉ、IIまたはIIIのバクテリオクロロフィル誘導体から由来する適当なバクテリオフェオフィチンを、脱水化Ｃｄアセテートと反応させそして還元性条件下にクロマトグラフィにより反応混合物から対応する〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を回収し；（ｉｉ）Ａｒ雰囲気において、乾燥アセトンに溶解された、かくして生成された〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を、金属の塩化物、アセテートおよびアセチルアセトネートから選ばれた適当な脱水された金属Ｍ塩と反応させ；そして（ｉｉｉ）反応混合物から回収された生成された金属化〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体を、エステル交換反応条件下に式Ｒ’₁−ＯＨの化合物と反応させてＲ’₁が上に定義されたとおりである式Ｉ’、II’またはIII’の化合物を得る；ことからなる、上記方法。４．〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体は、ＭがＰｄ、Ｃｕ、Ｎｉ、Ｃｏ、Ｚｎ又はＭｎでありそしてＢＣｈｌが請求項２における式Ｉのバクテリオクロロフィルａ誘導体（但し、Ｒ₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨまたはＯＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルでありそして位置８でのＲ₄がエチルである）の残基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。５．工程（ｉｉ）おいて使用された金属Ｍ塩が金属塩化物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。６．工程（ｉ）と（ｉｉ）とが１つの単一工程に組み合わされそしてジメチルホルムアミドまたはアセトン中で脱水されたＣｄアセテートの触媒量の存在下にバクテリオフェオフィチン誘導体が過剰の適当な脱水された金属Ｍ塩と反応される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。７．請求項３において定義されたとおりであるが、しかしＲ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルであり、Ｒ’₁がフィチルまたはエチルであってそしてＭがＰｄであるかあるいはＲ’₁がメチルまたはフィチルであってそしてＭがＣｕである式Ｉ’の化合物を除いての、式Ｉ’、II’またはIII’の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。８．Ｒ’₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＣｏ、Ｎｉ、Ｚｎ、ＣｄまたはＭｎである式Ｉ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。９．Ｒ’₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＯＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、ＣｄまたはＭｎである式Ｉ ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/04 Ａ６１Ｋ 31/00 ６３１Ｃ 31/12 ６３１Ｈ 35/00 ６３５Ａ６１Ｋ 31/409 31/40 ６１０Ｃ０７Ｄ 491/22 Ｃ０７Ｄ 491/22 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者シェール，ウーゴドイツ連邦共和国デイ―87662 ブロンホファー，オルトスシュトラーセ 17 (72)発明者ハルトヴィッヒ，ゲルハルトドイツ連邦共和国デイ―81667 ミュンヘン，ヴォルフガンクシュトラーセ 23 (72)発明者ブランディス，アレグザンダーイスラエル国 76352 レホボト，ベーリイストリート 11／３

Claims

【特許請求の範囲】１．式〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ（式中、ＢＣｈｌは位置１７³で基−ＣＯＯＲ₁（但し、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基である）を担持する脱金属化天然または合成のバクテリオクロロフィル誘導体の残基を表し、そして表して、前記金属ＭはＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎからなる群から選ばれる二価の金属、Ｆｅ、ＭｎおよびＣｒからなる群から選ばれる三価の金属そしてＳｎおよびＰｔを含む群から選ばれる四価の金属からなる群から選ばれる）の合成金属化バクテリオクロロフィル誘導体の製造方法において、（ｉ）Ａｒ雰囲気において、ジメチルホルムアミドに溶解された、上に定義されたとおりの基−ＣＯＯＲ₁を位置１７³で担持する適当なバクテリオフェオフィチン誘導体を、脱水化Ｃｄアセテートと反応させそして還元性条件下クロマトグラフィにより反応混合物から〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を回収し；（ｉｉ）Ａｒ雰囲気において、乾燥アセトンに溶解されたかくして製造された〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を、金属Ｍの塩化物、アセテートおよびアセチルアセトネートから選ばれた適当な脱水金属Ｍ塩と反応させ；そして（ｉｉｉ）反応混合物から所望の金属化〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体を回収する；ことからなる上記合成金属化バクテリオクロロフィル誘導体の製造方法。２．該〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体が下記式Ｉ、IIまたはIIIの化合物から選ばれる、請求項１に記載の方法：（式中、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基であり；Ｒ₂はＨ、ＯＨまたはＣＯＯＲ₅（但し、Ｒ₅はＣ₁〜Ｃ₁₂アルキルまたはＣ₃ 〜Ｃ₁₂シクロアルキルである）であり；Ｒ₃はＨ、ＯＨまたはＣ₁〜Ｃ₁₂アルキルまたはアルコキシであり；Ｒ₄は各々独立して、ビニル、エチル、アセチル、１−ヒドロキシエチルそしてそのエーテルおよびエステルからなる群から選ばれ；そしてを表して、前記金属ＭはＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎからなる群から選ばれる二価の金属、Ｆｅ、ＭｎおよびＣｒからなる群から選ばれる三価の金属そしてＳｎおよびＰｔを含む群から選ばれる四価の金属からなる群から選ばれる）。３．式Ｉ、II又はIIIの得られた〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体がさらに、位置１７³ でのエステル交換反応に付されて式Ｉ’、II’またはIII’ （式中、Ｒ’₁は、（ｉ）ハロゲン、ＯＨ、オキソ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂により場合により置換されたＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基であるかあるいはＯ、ＳおよびＮＨから選ばれた１つまたはそれ以上のヘテロ原子によりまたはフェニル環により中断されたそのような残基；（ｉｉ）ヒドロキシ基を含有するアミノ酸の残基またはヒドロキシ基を含有するペプチドの残基あるいはエステル誘導体またはＮ−保護された誘導体から選ばれるその誘導体（但し、前記ヒドロキシル化アミノ酸またはその誘導体はヒドロキシ基を介してＣＯＯ−残基に結合されている）；（ｉｉｉ）ハロゲン、ＯＨ、オキソ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂により場合により置換された前記Ｃ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基あるいはＯ、ＳおよびＮＨから選ばれた１つまたはそれ以上のヘテロ原子によりまたはフェニル環により中断されたそのような残基がＯＨ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂から選ばれた末端官能基によりさらに置換されている、（ｉ）において規定されたとおりのスペーサーを介してＣＯＯ−残基に結合されている（ｉｉ）において規定されたとおりのペプチドの残基；および（ｉｖ）ＣＯＯ−残基に直接結合されているか、あるいはハロゲン、ＯＨ、オキソ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂により場合により置換されたあるいはＯ、ＳおよびＮＨから選ばれた１つまたはそれ以上のヘテロ原子によりまたはフェニル環により中断された前記Ｃ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基がＯＨ、ＣＯＯＨまたはＮＨ₂から選ばれた末端官能基によりさらに置換されている（ｉ）おいて規定されたとおりのスペーサーを介してＣＯＯ−残基に結合されている、ペプチドおよびたんぱく質から選ばれた細胞特異性配位子の残基；からなる群から選ばれ；Ｒ₂はＨ、ＯＨまたはＣＯＯＲ₅（但し、Ｒ₅はＣ₁〜Ｃ₁₂アルキル又はＣ₃〜Ｃ₁ ₂ シクロアルキルである）であり；Ｒ₃はＨ、ＯＨまたはＣ₁〜Ｃ₁₂アルキルまたはアルコキシであり；Ｒ₄は各々独立して、ビニル、エチル、アセチル、１−ヒドロキシエチルそしてそのエーテルおよびエステルからなる群から選ばれ；そしてを表して、前記金属ＭはＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、ＺｎおよびＭｎからなる群から選ばれる二価の金属、Ｆｅ、ＭｎおよびＣｒからなる群から選ばれる三価の金属そしてＳｎおよびＰｔを含む群から選ばれる四価の金属からなる群から選ばれる）の〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体をかくして製造する、請求項２に記載の方法において、その方法が（ｉ）Ａｒ雰囲気において、ジメチルホルムアミドに溶解された、位置１７³ で基−ＣＯＯＲ₁（但し、Ｒ₁はＣ₁〜Ｃ₂₅ヒドロカルビル残基である）を担持する式Ｉ、IIまたはIIIのバクテリオクロロフィル誘導体から由来する適当なバクテリオフェオフィチンを、脱水化Ｃｄアセテートと反応させそして還元性条件下にクロマトグラフィにより反応混合物から対応する〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を回収し；（ｉｉ）Ａｒ雰囲気において、乾燥アセトンに溶解された、かくして生成された〔Ｃｄ〕−ＢＣｈｌ錯体を、金属の塩化物、アセテートおよびアセチルアセトネートから選ばれた適当な脱水された金属Ｍ塩と反応させ；そして（ｉｉｉ）反応混合物から回収された生成された金属化〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体を、エステル交換反応条件下に式Ｒ’₁−ＯＨの化合物と反応させてＲ’₁が上に定義されたとおりである式Ｉ’、II’またはIII’の化合物を得る；ことからなる、上記方法。４．〔Ｍ〕−ＢＣｈｌ誘導体は、ＭがＰｄ、Ｃｕ、Ｎｉ、Ｃｏ、Ｚｎ又はＭｎでありそしてＢＣｈｌが請求項２における式Ｉのバクテリオクロロフィルａ誘導体（但し、Ｒ₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨまたはＯＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルでありそして位置８でのＲ₄がエチルである）の残基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。５．工程（ｉｉ）おいて使用された金属Ｍ塩が金属塩化物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。６．工程（ｉ）と（ｉｉ）とが１つの単一工程に組み合わされそしてジメチルホルムアミドまたはアセトン中で脱水されたＣｄアセテートの触媒量の存在下にバクテリオフェオフィチン誘導体が過剰の適当な脱水された金属Ｍ塩と反応される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。７．請求項３において定義されたとおりであるが、しかしＲ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルであり、Ｒ’₁がフィチルまたはエチルであってそしてＭがＰｄであるかあるいはＲ’₁がフィチルであってそしてＭがＣｕである式Ｉ’の化合物を除いての、式Ｉ’、II’またはIII’の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。８．Ｒ’₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＣｏ、Ｎｉ、Ｚｎ、ＣｄまたはＭｎである式Ｉ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。９．Ｒ’₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＯＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＰｄ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、ＣｄまたはＭｎである式Ｉ ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。 10．Ｒ’₁がフィチルまたはゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨまたはＯＨであり、位置３でのＲ₄がビニルであり、位置８でのＲ₄ がエチルでありそしてＭがＺｎまたはＣｕである、式Ｉ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。 11．Ｒ’₁がフィチル又はゲラニルゲラニルであり、Ｒ₂がＨであり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＺｎまたはＣｕである、式Ｉ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。 12．Ｒ’₁がエチルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭが、Ｎｉ、ＺｎまたはＣｕである、式Ｉ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。 13．Ｒ’₁がセリルメチルエステルであり、Ｒ₂がＣＯＯＣＨ₃であり、Ｒ₃がＨであり、位置３でのＲ₄がアセチルであり、位置８でのＲ₄がエチルでありそしてＭがＰｄである、式Ｉ’の請求項７に記載の金属化バクテリオクロロフィル誘導体。 14．請求項７において定義されたとおりの式Ｉ’、II’またはIII’の金属化バクテリオクロロフィルおよび製薬的に許容出来る担体を含む製薬組成物。 15．金属化バクテリオクロロフィルが請求項１３に記載された化合物である、請求項１４に記載の製薬組成物。 16．光力学的療法（光化学療法）において使用するための製薬組成物の製造のための、請求項７において定義されたとおりの式Ｉ’、II’またはIII’の金属化バクテリオクロロフィルの使用。 17．腫瘍の診断のための製薬組成物の製造のための、請求項７に定義されたとおりの式Ｉ’、II’またはIII’の金属化バクテリオクロロフィルの使用。 18．細胞またはバクテリアおよびウィルスを含む感染因子を殺滅するための製薬組成物を製造するための、請求項７に定義されたとおりの式Ｉ’、II’または III’の金属化バクテリオクロロフィルの使用。 19．製薬組成物が生物学的製剤中の感染因子を殺滅するためのものである、請求項１７に記載の使用。