RU2415868C1 - Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение - Google Patents
Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2415868C1 RU2415868C1 RU2009133914/04A RU2009133914A RU2415868C1 RU 2415868 C1 RU2415868 C1 RU 2415868C1 RU 2009133914/04 A RU2009133914/04 A RU 2009133914/04A RU 2009133914 A RU2009133914 A RU 2009133914A RU 2415868 C1 RU2415868 C1 RU 2415868C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- leu
- val
- trp
- hemin
- ala
- Prior art date
Links
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical class CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 title claims abstract description 58
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 15
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 title abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 102
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 41
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 37
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 20
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims abstract description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical class CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 claims description 33
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 claims description 29
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 24
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 22
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 15
- NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N chembl557217 Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N 0.000 claims description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 12
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 claims description 8
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 7
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 7
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 3
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 2
- 230000004224 protection Effects 0.000 claims description 2
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims 1
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 claims 1
- SIOVKLKJSOKLIF-HJWRWDBZSA-N trimethylsilyl (1z)-n-trimethylsilylethanimidate Chemical compound C[Si](C)(C)OC(/C)=N\[Si](C)(C)C SIOVKLKJSOKLIF-HJWRWDBZSA-N 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 23
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000000678 effect on lipid Effects 0.000 abstract 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 43
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 38
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 38
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 32
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 21
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 20
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Substances ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 18
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- IUAYMJGZBVDSGL-XNNAEKOYSA-N gramicidin S Chemical compound C([C@@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1)C(C)C)=O)CC(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 IUAYMJGZBVDSGL-XNNAEKOYSA-N 0.000 description 15
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 14
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 12
- 229950009774 gramicidin s Drugs 0.000 description 12
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 12
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 11
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 10
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000002265 electronic spectrum Methods 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 9
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 9
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 8
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate Substances CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 7
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000006994 mh medium Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 6
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 5
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 5
- -1 pharmaceutical Chemical class 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 5
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 5
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- 244000128833 Mimulus luteus Species 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 229960004905 gramicidin Drugs 0.000 description 4
- ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N gramicidina Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 3
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 3
- AOZUYISQWWJMJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.CC(O)=O AOZUYISQWWJMJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N histamine Natural products NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 3
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 2
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010050820 Antimicrobial Cationic Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000014133 Antimicrobial Cationic Peptides Human genes 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 2
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- XKVYZLLWKHGKMT-BEJOYRPXSA-N Gemin D Natural products O([C@@H]([C@@H](O)C=O)[C@@H]1[C@@H](O)COC(=O)c2c(c(O)c(O)c(O)c2)-c2c(O)c(O)c(O)cc2C(=O)O1)C(=O)c1cc(O)c(O)c(O)c1 XKVYZLLWKHGKMT-BEJOYRPXSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000918983 Homo sapiens Neutrophil defensin 1 Proteins 0.000 description 2
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108010084331 Omiganan Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 2
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 2
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- LDCRTTXIJACKKU-ONEGZZNKSA-N dimethyl fumarate Chemical compound COC(=O)\C=C\C(=O)OC LDCRTTXIJACKKU-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 2
- CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N dmso dimethylsulfoxide Chemical compound CS(C)=O.CS(C)=O CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 2
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 229930192479 gemin Natural products 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 102000018474 human neutrophil peptide 1 Human genes 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003255 natamycin Drugs 0.000 description 2
- NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N natamycin Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)/C=C/[C@H]2O[C@@H]2C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 2
- MVPAMLBUDIFYGK-BHDRXCTLSA-N omiganan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H]3CCCN3C(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)=CNC2=C1 MVPAMLBUDIFYGK-BHDRXCTLSA-N 0.000 description 2
- 229950008583 omiganan Drugs 0.000 description 2
- 239000002997 ophthalmic solution Substances 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 2
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- GSXRBRIWJGAPDU-BBVRJQLQSA-N tyrocidine A Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1)=O)CC(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GSXRBRIWJGAPDU-BBVRJQLQSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- FMCAFXHLMUOIGG-JTJHWIPRSA-N (2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-formamido-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxy-2,5-dimethylphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound O=CN[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)CC1=CC(C)=C(O)C=C1C FMCAFXHLMUOIGG-JTJHWIPRSA-N 0.000 description 1
- FMCAFXHLMUOIGG-IWFBPKFRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-formamido-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxy-2,5-dimethylphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound O=CN[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)CC1=CC(C)=C(O)C=C1C FMCAFXHLMUOIGG-IWFBPKFRSA-N 0.000 description 1
- NNRFRJQMBSBXGO-CIUDSAMLSA-N (3s)-3-[[2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNRFRJQMBSBXGO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCUAVDXLFXNGDG-MZFDKZDRSA-N 15207-30-4 Chemical compound Cl.Cl.C([C@@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1)C(C)C)=O)CC(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 KCUAVDXLFXNGDG-MZFDKZDRSA-N 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MLONYBFKXHEPCD-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(N)(CO)CO MLONYBFKXHEPCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)CO KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical compound NCC(O)CO KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 206010001258 Adenoviral infections Diseases 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101710120040 Antifungal peptide Proteins 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010069747 Burkholderia mallei infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 108050004290 Cecropin Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 201000003641 Glanders Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010010369 HIV Protease Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000829980 Homo sapiens Ral guanine nucleotide dissociation stimulator Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010033971 Paratyphoid fever Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 108010035030 Platelet Membrane Glycoprotein IIb Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100023320 Ral guanine nucleotide dissociation stimulator Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 108010076164 Tyrocidine Proteins 0.000 description 1
- 108010021006 Tyrothricin Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000004125 X-ray microanalysis Methods 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXDSLUMUNWTSDB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;chloroform;methanol Chemical compound OC.CC(O)=O.ClC(Cl)Cl VXDSLUMUNWTSDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005475 antiinfective agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 201000007032 bacterial conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000008238 biochemical pathway Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 1
- KNPCNMWJXSOOJU-LURJTMIESA-N bis(2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) (2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanedioate Chemical compound C([C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(=O)OC=1C(=C(F)C(F)=C(F)C=1F)F)CC(=O)OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F KNPCNMWJXSOOJU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 239000008294 cold cream Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- BQAMWLOABQRMAO-INIZCTEOSA-N dibenzyl (2s)-2-aminobutanedioate Chemical compound C([C@H](N)C(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 BQAMWLOABQRMAO-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- NTNZTEQNFHNYBC-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-aminoacetate Chemical compound CCOC(=O)CN NTNZTEQNFHNYBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002332 glycine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000008311 hydrophilic ointment Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N indolicidin Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 238000001698 laser desorption ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001055 magnesium Nutrition 0.000 description 1
- 229940051960 magnesium oxide 50 mg Drugs 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940054534 ophthalmic solution Drugs 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 1
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000012342 propidium iodide staining Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical class C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 229960003281 tyrothricin Drugs 0.000 description 1
- 239000006217 urethral suppository Substances 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- ZWCXYZRRTRDGQE-LUPIJMBPSA-N valyl gramicidin a Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-LUPIJMBPSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- BZPCSFNCKORLQG-NSHDSACASA-N z-arg(no2)-oh Chemical compound [O-][N+](=O)NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 BZPCSFNCKORLQG-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- KRJOFJHOZZPBKI-KSWODRSDSA-N α-defensin-1 Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC2=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N3)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 KRJOFJHOZZPBKI-KSWODRSDSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
- C07F15/02—Iron compounds
- C07F15/025—Iron compounds without a metal-carbon linkage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биоорганической химии, а именно к новым производным гемина общей формулы (I), их фармацевтически приемлемым солям, способу получения, фармацевтическим и дезинфицирующим композициям. Соединения обладают деструктивным действием в отношении липидной мембраны, антимикробными свойствами, в том числе антибактериальными и противогрибковыми, а также одновременно вирулицидными и антимикробными свойствами. 8 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 ил., 11 табл.
Description
Изобретение относится к области биоорганической химии, а именно к новым производным гемина общей формулы I
где
R1=OH,
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или
к способу синтеза этих соединений, композиции, в том числе фармацевтической, дезинфицирующей, антисептической композиции, средству для лечения и биомедицинскому применению новых и известных производных гемина формулы I в качестве антимикробных - антибактериальных и противогрибковых, а также вирулицидных агентов. Как известно, многие опасные заболевания человека вызываются бактериями. К ним относятся заболевания эпидемического характера, такие как холера, брюшной тиф, паратифы, чума, дифтерия, туляремия, бруцеллез, а также туберкулез, заражение крови (сепсис), проказа, сифилис и др. У животных бактерии вызывают сап, сибирскую язву, туберкулез и др. Борьба с болезнетворными бактериями основывается на применении дезинфецирующих и антисептических средств, бактериостатических и бактерицидных агентов. У бактерий быстро развивается резистентность по отношению к существующим антибактериальным средствам, главным образом к антибиотикам, поэтому проблема поиска новых нетоксичных, биосовместимых антибактериальных агентов, применение которых не приводило бы к резистентности, весьма актуальна [J.-Y.Maillard. Bacterial resistance to biocides in the healthcare environment: should it be of genuine concern // Journal of Hospital Infection, 2007, V.65(S2) p.60-72].
В последнее время особое внимание уделяется дизайну новых антимикробных агентов на основе антимикробных пептидов (АМП) [А.Giuliani, G.Pirri, S.F.Nicoletto. Antimicrobial peptides: an overview of a promising class of therapeutics// Central European Journal of Biology, 2007, V.2(1), p.1-33]. Резистентность в отношении АМП у микроорганизмов развивается довольно редко [M.N.Melo, D.Dugourd, M.A.Castanho // Recent Patents Anti-Infect Drug Disc, 2006, V.1(2), p.201-207], по-видимому, вследствие того, что основным механизмом действия АМП является деструкция липидной мембраны бактерий, микроскопических грибов и вирусов [Н.Jenssen, P.H., and R.E.W. Hancock. Peptide Antimicrobial Agents // Clin. Microbiol. Rev., 2006, 19(3): 491-511]. В связи с этим антимикробные пептиды рассматриваются как перспективный класс новых антибиотиков [M.R.Yeaman, N.Y.Yount. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance // Pharmacol. Rev., 2003, 55(1) p.27-55, A.Giuliani, G.Pirri, S.F.Nicoletto. Antimicrobial peptides: an overview of a promising class of therapeutics. // Central European Journal of Biology, 2007, V.2(1) p.1-33]. Антимикробные пептиды эндогенного происхождения являются частью наиболее древней системы защиты организмов от патогенов. Они обнаружены практически у всех живых организмов - от бактерий до человека [M.R.Yeaman, N.Y.Yount. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance // Pharmacol. Rev., 2003, V.55(1) p.27-55]. В процессе эволюции многоклеточные организмы умножали и развивали арсенал АМП, защищающих их от широкого спектра патогенов, в том числе грамположительных и грамотрицательных бактерий [M.R.Yeaman, N.Y.Yount. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance // Pharmacol. Rev., 2003, 55(1):27-55], ДНК и РНК-содержащих вирусов [A.Bastian, and H.Schafer. Human alpha-defensin 1 (HNP-1) inhibits adenoviral infection in vitro// Regul. Pept., 2001, V.101, p.157-161. Home, W.S., С.M.Wiethoff, С.Cui, et al. Antiviral cyclic D,L-alpha-peptidestargeting a general biochemical pathway in virus infections// Bioorg. Med. Chem., 2005, V.13, p.5145-5153], микроскопических грибов [De Lucca, A.J., and T.J.Walsh. Antifungal peptides: novel therapeutic compounds against emerging pathogens // Antimicrob. Agents Chemother., 1999, V.43, p.1-11] и простейших [J.Alberola,, A.Rodriguez, O.Francino, et al. Safety and efficacy of antimicrobial peptides against naturally acquired leishmaniasis // Antimicrob. Agents Chemother., 2004, V.48, p.641-643].
Антимикробные пептиды, как правило, являются амфифильными соединениями с ярко выраженными гидрофильной и гидрофобной частями. За редкими исключениями молекулы АМП содержат несколько остатков лизина и/или аргинина и при физиологических значениях рН несут большой положительный заряд. По структуре АМП можно разделить на две большие группы: циклические пептиды, как правило, содержащие цистеиновый мостик, и линейные пептиды [Н.Jenssen, P.Hamill, R.E.W. Hancock. Peptide Antimicrobial Agents// Clinical Microbiology Reveiws, 2006, Vol.19, No.3, p.491-511].
Понимание механизмов узнавания и деструкции мембран клеток патогенов антимикробными пептидами является необходимым условием для создания лекарств на их основе. Наиболее важным фактором селективности действия АМП на бактерии, грибы и вирусы при отсутствии их воздействия на эукариотические клетки является различие в составе и строении мембран [Н.Jenssen, P.Hamill, R.E.W. Hancock. Peptide Antimicrobial Agents// Clinical Microbiology Reveiws, 2006, Vol.19, No.3, p.491-511]. Внешняя поверхность эукариотической мембраны состоит из цвиттер-ионных фосфолипидов, в то время как мембраны бактериальных клеток содержат большое количество отрицательно заряженных фосфолипидов как на внутренней, так и на внешней поверхности липидного бислоя. Кислотный характер внешней стороны прокариотической мембраны обуславливает ее взаимодействие преимущественно с положительно заряженными АМП [M.R. Yeaman, N.Y.Yount. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance // Pharmacol. Rev.,2003, Vol.55, p.27-55]. Вторым фактором, обуславливающим селективность АМП, является отсутствие холестерина в мембранах бактериальных клеток. Вследствие этого липидный бислой бактериальных мембран более гибок, и образование пор антимикробными пептидами в нем происходит легче, чем в мембранах эукариотических клеток [Н.Jenssen, P.Hamill, R.E.W. Hancock. Peptide Antimicrobial Agents // Clinical Microbiology Reveiws, 2006, Vol.19, No.3, p.491-511. 3. О.Токе. Antimicrobial Peptides: New Candidates in the Fight Against Bacterial Infections // Biopolymers (Peptide Science), 2005, Vol.80, p.717-735]. При деструкции молекулами АМП мембраны бактерии последняя погибает вследствие утечки ионов и метаболитов, деполяризации мембраны, угнетения клеточного дыхания бактерий и синтеза в них биополимеров [M.R.Yeaman, N.Y.Yount. Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance // Pharmacol. Rev., 2003, Vol.55, p.27-55]. По последним данным, гибель клеток под действием АМП может происходить и по другим причинам, например в результате взаимодействия антимикробных пептидов с внутриклеточными мишенями [J.-P.S.Powers, R.E.W. Hancock. The relationship between peptide structure and antibacterial activity // Peptides, 2003, V.24, p.1681-1691]. По схожим механизмам АМП воздействуют и на мембраны вирусов, приводя к их дезактивации [Н.Jenssen, P.Hamill, R.E.W. Hancock. Peptide Antimicrobial Agents// Clinical Microbiology Reveiws, 2006, Vol.19, No.3, p.491-511. 3].
Основными препятствиями к применению АМП в клинической практике являются их сравнительно высокая стоимость, чувствительность к действию протеолитических ферментов, а также присущий многим АМП гемолитический эффект [A.Giuliani, G.Pirri, S.F.Nicoletto. Antimicrobial peptides: an overview of a promising class of therapeutics. // Central European Journal of Biology, 2007, V.2(1) 1-33]. Например, антимикробные пептиды грамицидин D и грамицидин S вызывают 100% гемолиз в концентрациях 5 мкМ [С.Н.Rammelkamp and L.Weinstein. Toxic Effects of Tyrothricin, Gramicidin, and Tyrocidine // Jour. Infect. Dis., 1942, V.71, №2, p.166-173] и 62,5 мкМ [G.M.Grotenbreg, M.D.Witte, P.A.V. van Hooft, et al. Synthesis and biological evaluation of gramicidin S dimers // Org. Biomol. Chem., 2005, V.3, p.233-238] соответственно. По-видимому, вследствие этого на рынке пока отсутствуют препараты на основе АМП, состоящие исключительно из аминокислот L-ряда. Большинство АМП отсеиваются на ранних стадиях клинических испытаний. И лишь некоторые препараты на основе АМП в настоящее время проходят завершающие этапы клинических испытаний, например, Омиганан (Omiganan) и соединение MX594AN. Действующее начало этих препаратов представляет собой синтетические аналоги антимикробного пептида индолицидина с измененной аминокислотной последовательностью. В ходе фазы III клинических испытаний в качестве препарата, понижающего колонизацию венозных катетеров микроорганизмами, вызывающими заболевания кровеносной системы в разных группах пациентов, омиганан продемонстрировал эффекты, не позволяющие сделать однозначный вывод о возможности его применения в клинической практике [Y.J.Gordon, A.M.McDermott. A Review of Antimicrobial Peptides and Their Therapeutic Potential as Anti-Infective Drugs // Curr Eye Res., 2005, V.30(7), p.505-515]. Соединение MX594AN прошло клинические испытания фазы IIb, и в настоящее время проходит клинические испытания фазы III в качестве средства для лечения угревой сыпи [Обзор по АМП - Гордон]. Кроме того, несколько препаратов на основе АМП находятся на более ранних стадиях клинических испытаний [Y.J. Gordon, A.M. McDermott. A Review of Antimicrobial Peptides and Their Therapeutic Potential as Anti-Infective Drugs // Curr Eye Res., 2005, V.30(7), p.505-515. A.Giuliani, G.Pirri, S.F.Nicoletto. Antimicrobial peptides: an overview of a promising class of therapeutics. // Central European Journal of Biology, 2007, V.2(1) 1-33].
В настоящее время антимикробные пептиды и их аналоги получают в основном твердофазным синтезом, что делает эти вещества чрезвычайно дорогостоящими, а их применение экономически нецелесообразным.
В последнее время все большее внимание уделяется другим стратегиям дизайна модифицированных АМП [D.Knappe, A.Nimptsch, A.Jr. Kolobov, et al. Chemical modifications of short antimicrobial peptides from insects and vertebrates to fight multi-drug resistant bacteria // Adv. Exp. Med. Biol., 2009, V.611, p.395-396], лишенных перечисленных выше недостатков. Основными стратегиями оптимизации структуры АМН с целью получения новых биоцидных агентов являются следующие.
- Синтез циклических аналогов АМП. В ряде случаев [A.Wessolowski, М.Bienert and M.Dathe. Antimicrobial activity of arginine-and tryptophan-rich hexapeptides: the effects of aromatic clusters, D-amino acid substitution and cyclization. J. Pept. Res., 2004, V.64, p.159-169. M.Dathe, H.Nikolenko, J.Klose, et al. Cyclization Increases the Antimicrobial Activity and Selectivity of Arginine- and Tryptophan-Containing Hexapeptides // Biochemistry, 2004, V.43(28), p.9140-9150] циклизация АМП приводит к увеличению антибактериальной активности и повышению устойчивости к протеиназам [A.Rozek, J-P.S.Powers, C.L.Friedrich, et al. Structure-Based Design of an Indolicidin Peptide Analogue with Increased Protease Stability // Biochemistry, 2003, V.42 (48), p.14130-14138], однако при этом может значительно (в 4 раза) возрастать гемолитический эффект [A.Wessolowski, M.Bienert and M.Dathe. Antimicrobial activity of arginine-and tryptophan-rich hexapeptides: the effects of aromatic clusters, D-amino acid substitution and cyclization // J. Pept. Res., 2004, V.64, p.159-169]. Кроме того, циклизация приводит к заметному повышению себестоимости продукта.
- Введение в молекулу АМП атома фтора или трифторметильной группы. Этот подход приводит к снижению МБК (минимальной бактерицидной концентрации) антимикробных пептидов, однако при этом увеличивается время воздействия на микроорганизм, необходимое для проявления бактерицидного действия [D.Gimenez, С.Andreu, M. del Olmo, et al. The introduction of fluorine atoms or trifluoromethyl groups in short cationic peptides enhances their antimicrobial activity // Bioorg. Med. Chem., 2006, V.14, p.6971-6978].
- Иммобилизация АМП на различных полимерных матрицах [М.Bagheri, М.Beyermann, M.Dathe. Immobilization reduces the activity of surface-bound cationic antimicrobial peptides with no influence upon the activity spectrum // Antimicrob Agents Chemother., 2009, V.53(3), p.1132-41]. Этот сравнительно новый подход пока не привел к успешным результатам, т.к. активность иммобилизованных на полимерах пептидов оказалась существенно ниже, чем у свободных АМП. Кроме того, авторами [М.Bagheri, M.Beyermann, M.Dathe. Immobilization reduces the activity of surface-bound cationic antimicrobial peptides with no influence upon the activity spectrun // Antimicrob Agents Chemother., 2009, V.53(3), p.1132-41] не установлено, какое влияние оказывает иммобилизация на гемолитический эффект пептидов.
Таким образом, химическая модификация антимикробных пептидов является перспективным путем получения новых, более эффективных антимикробных агентов без побочных эффектов с антибактериальным, противогрибковым и вирулицидным действием. При этом остается актуальным поиск новых подходов к модификации АМП, позволяющих повысить возможности их практического применения.
Известны антимикробные пептиды - линейный грамицидин D (II),
представляющий собой смесь пептидов формулы:
Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-TrpNHCH2CH2OH, где X=Trp, Tyr, Phe
[W.E.Herrelland D.Heilman. Experimental and Clinical Studies on Gramicidin // J.Clin. Invest., 1941, V.20, 583-591. Annual Reports on NMR Spectroscopy, Volume 60, p 215 London, Academic Press, 2007], циклический грамицидин S (III) [G.Nagamurthi and S.Rambhav. Gramicidin-S: Structure-activity relationship // J.Biosci., 1985, V.7, №3-4, p.323-329], содержащие D-аминокислоты, непротеиногенные аминокислоты (Orn). Соединение II эффективно против грамположительных бактерий [W.E.Herrell and D.Heilman. Experimental and Clinical Studies on Gramicidin // J. Clin. Invest., 1941, V.20, №583] и некоторых вирусов, в частности герпеса [US Patent 6001808, 1999]. Соединение III эффективно главным образом против грамположительных бактерий в концентрациях 5-15 мкМ [Jingbo Xiao, Bernard Weisblum, and Peter Wipf. Electrostatic versus Steric Effects in Peptidomimicry: Synthesis and Secondary Structure Analysis of Gramicidin S Analogues with (E)-Alkene Peptide Isosteres //J. Am. Chem. Soc, 2005, 127 (16), рр 5742-5743]. Соединения II и III используются в медицинской практике только для наружного применения [М.Д.Машковский. Лекарственные средства, 15 изд. Москва, изд-во «Новая волна», 2005, с.822. J.R.Gibson. Trimethoprin-polymyxin В ophthalmic solution in the treatment of presumptive bacterial conjunctivitis-A multicentre trial of its efficacy versus neomycin-polymyxin B-gramicidin and chloramphenicol ophthalmic solutions // J.Antimicrob. Chemother., 1983, V.11, p.217-221]. Недостатками этих антимикробных препаратов являются относительно большая длина этих пептидов и соответственно сравнительно высокая стоимость, недостаточная широта антибактериального, противогрибкового и вирулицидного действия (активность лишь в отношении грамположительных бактерий и вируса герпеса). Но главными их недостатками являются побочные эффекты при применении, в основном гемолиз эритроцитов и аллергические реакции [Heilman, D., and Herrell, W.E.: "Hemolytic Effect of Gramicidin," Proc. Soc. Exper. Biol. and Med., 46: 182 (Jan.) 1941. М.Д.Машковский. Лекарственные средства, 15 изд. Москва, изд-во «Новая волна», 2005, с.822].
Известный пептид в настоящее время исследуется в различных направлениях. В частности, он представляет интерес для создания средств для лечения инфекционных заболеваний [A.J.Kastin. Handbook of biologically active peptides // Elsevier, Academic Press, USA, 2006, p.576]. Пептид IV является фрагментом антимикробных пептидов семейства цекропинов, многих микробных белков и фибронектина поверхности клеток млекопитающих [M.Naito, N.Ohara, S.Matsumoto, T.Yamada. The novel fibronectin binding motif and key residues of micobacteria //J. Biol. Chem., 1998, V.273, p.2905-9].
Известно, что гемин обладает антимикробной активностью, в частности, в отношении золотистого стафилококка. Авторами [Y.Nitzan, H.Ladan, S.Gozansky, Z.Malik. Characterization of hemin antibacterial action on Staphylococcus aureus // FEMS Microbiol. Lett. V.48(3), p.401-406] было показано, что гемин в концентрации 20·10-5 М оказывает сильное, не зависящее от света воздействие на S.aureus, в то время как другие металлопорфирины не проявляли антибактериального эффекта в темноте. Заметное воздействие гемина на инактивацию S.aureus проявилось в немедленной индукции потоков ионов, что было определено рентгеновским микроанализом быстрозамороженных клеток. Авторы [Y.Nitzan, H.Ladan, S.Gozansky, Z.Malik. Characterization of hemin antibacterial action on Staphylococcus aureus // FEMS Microbiol. Lett. V.48(3), p.401-406] полагают, что такое выраженное антибактериальное действие гемина обусловлено тем, что в S.aureus находится множество клеточных мишеней для окислительного воздействия гемина. Однако использование гемина в качестве антибактериального средства затруднено вследствие его нерастворимости в воде, гемолитической активности, а также кратковременности антибактериального эффекта.
Для некоторых пептидных производных гемина общей формулы I, a именно при R1=OH или установлена нуклеазная (нуклеолитическая) активность, проявляющаяся в способности разрушать плазмидную ДНК [Желтухина Г.А., Небольсин В.Е., Лобанова Т.Н // Патент РФ №2250906; Желтухина Г.А., Лобанова Т.Н., Небольсин В.Е., М.О.Галлямов, Драницына С.М., Костанян И.А. // Биоорган, химия. 2006. Т.32, №2, С.198-210]. Отдельные аминокислотные и пептидные производные гемина общей формулы I, а именно при R1=OH, или способны ингибировать протеиназу ВИЧ и оказывать вследствие этого противовирусное анти-ВИЧ действие [Р.П.Евстигнеева, Г.А.Желтухина, Т.В.Зарубина, В.Е.Небольсин, Д.Н.Носик, Н.Н.Носик // Патент РФ №2238950].
Показано, что некоторые известные производные гемина общей формулы I, а именно обладают вирулицидной активностью [заявка на изобретение RU 2007125604/04(027891)], однако антибактериальная, антигрибковая активности для них не были известны.
Композиции для предотвращения бактериальных и грибковых инфекций, включающие конъюгаты гемина с аминокислотами, пептидами и пептидомиметиками, неизвестны.
Нами предложено провести конъюгацию двух природных соединений (гемина и антимикробного пептида), обладающих антимикробной активностью с различным механизмом действия с целью повышения эффективности действия, снижения токсичности и приобретения новых полезных свойств, в частности водорастворимости и устойчивости к протеолизу.
Задачей настоящего изобретения является создание новых биосовместимых мембраноактивных конъюгатов гемина с АМП общей формулы I, и их фармацевтически приемлемых солей, обладающих деструктирующим действием по отношению к липидной мембране, эффективных против бактерий, микроскопических грибов и вирусов, при этом нетоксичных, без гемолитической активности и без побочных эффектов; создание на их основе противоинфекционного лекарственного средства, обладающего антибактериальной, противогрибковой и вирулицидной активностью; композиций, в том числе фармацевтических, дезинфецирующих и антисептических, а также способов, позволяющих получать заявленные соединения с достаточными выходами и чистотой.
Еще одной задачей настоящего изобретения является способ синтеза соединения включающий получение входящего в его состав трипептида с более высоким выходом, по более простой и экономически целесообразной методике. Известен [Patent GB 2207922А. Tripeptides with pharmacological properties. В.Brunetti, M.Prada, 1989] способ синтеза пептида IV по схеме [1+2] с использованием дикарбобензокси-аргинина и дибензилового эфира аспарагиновой кислоты. Недостатком метода является применение в качестве исходного реагента указанного производного аргинина. Известно, что в таком производном гуанидиновая группа защищена недостаточно, что может приводить к образованию побочных продуктов в синтезах с его использованием [Дж.Гринштейн, М.Виниц. Химия аминокислот и пептидов // М: Мир, 1966, с.558]. Выход целевого трипептида IV, полученного этим способом, был достаточно низким и составил 21%, считая на исходный реагент.Известен другой способ синтеза этого трипептида в растворе [М.Abo-Ghalia, S.Abd El-Rahman, A.El-Kafrawy, and A.Kalomuch. Optimized conventional synthesis of "RGD" and "RGDS" peptides and their sarcosine mimics as integrin GP IIb/IIIa antagonists // Amino Acids, 2003, V.24, p.405-411] по схеме [2+1] с использованием исходных реагентов H-Gly-OEt, Z-Arg(NO2)-OH и Н-Asp(OBzl)-OBzl. Данный подход позволил повысить суммарный выход целевого пептида до 41%. В то же время, существенным недостатком этого метода является использование производного аргинина, известного неполным блокированием гуанидиновой функции аргинина нитрогруппой. Кроме того, известно, что отщепление гидрогенолизом NG-нитрогруппы не всегда бывает удовлетворительным [Дж.Гринштейн, М.Виниц. Химия аминокислот и пептидов // М: Мир, 1966, с.555]. Предусмотренное в данной схеме синтеза омыление Z-Arg(NO2)-GlyOEt представляет собой нежелательное жесткое воздействие на дипептид, которое может приводить к рацемизации и частичной деструкции пептидной связи. Применение переносного гидрирования в присутствии палладиевой черни по данному способу удлиняет и удорожает стадию конечного деблокирования целевого трипептида IV.
Поставленная задача решается новыми соединениями общей формулы I, где R1=OH,
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или
и/или их фармацевтически приемлемыми солями, обладающими способностью деструктировать липидную мембрану;
- средством, обладающим антибактериальной активностью, в том числе против резистентных бактерий, противогрибковой и вирулицидной активностью, представляющим собой новое соединение общей формулы I;
- средством, обладающим антибактериальной активностью, в том числе против резистентных бактерий, и противогрибковой активностью, представляющим собой известное соединение общей формулы I;
- фармацевтической, дезинфицирующей и антисептической композицией, включающей соединения общей формулы I для профилактики и/или лечения у человека и животных различных заболеваний, вызванных бактериями, в том числе резистентными, микроскопическими грибами или вирусами с использованием их антибактериальных, противогрибковых и вирулицидных свойств и содержащей одно или несколько из соединений общей формулы I в эффективном количестве;
- способами синтеза новых производных гемина общей формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, включающими ацилирование аминогруппы аминокомпонентов бис-N-оксисукцинимидным эфиром гемина, или включающими ацилирование α-аминогруппы пептида 6(7)-моно-N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидным эфиром гемина, или включающими ацилирование аминогруппы пептида активированным по одной карбоксильной группе производным гемина, причем в качестве активирующего агента используют ди-трет-бутилпирокарбонат в присутствии пиридина;
- способом получения конъюгата гемина с Arg-Gly-Asp, включающим синтез трипептида Arg-Gly-Asp. В соответствии с настоящим изобретением, способ синтеза Arg-Gly-Asp в растворе включает получение дипептида Z3Arg-Gly-ОН методом смешанных ангидридов с использованием силилированного производного глицина с последующим присоединением к упомянутому дипептиду H-Asp(OtBu)2 также методом смешанных ангидридов; далее деблокирование защищенного трипептида проводится в 2 стадии - сначала трет-бутильных защит - действием трифторуксусной кислоты, с последующим отщеплением Z-групп гидрогенолизом над 10÷20% палладием на угле. Предложенный способ позволяет повысить выход целевого продукта - трипептида до 57%, упростить процесс, в частности исключить стадию жесткого воздействия - омыления дипептида, уменьшить время гидрогенолиза и сделать процесс более экономически целесообразным в результате замены палладиевой черни на 10÷20% палладий на угле.
Список сокращений
DCC - N,N′-дициклогексилкарбодиимид
DMSO - диметилсульфоксид
DOPC - диолеоилфосфатидилхолин
GrD - грамицидин D
НА - гистамин
Hem - остаток гемина
МеОН - метиловый спирт
MES - 2-(N-морфолино)этансульфокислота
МН - среда Mueller-Hilton
ОМе - метиловый эфир
ONb - N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидный эфир
OtBu - трет-бутиловый эфир
Z - карбобензоксигруппа
ДМСО - диметилсульфоксид
ДМФА-N,N′ - диметилформамид
ИК - инфракрасная спектроскопия
ИР - ингибирование роста
КФ - карбоксифлуоресцеин
МБК - минимальная бактерицидная концентрация
МИК - минимальная ингибирующая концентрация
ОФ-ВЭЖХ - обращенно-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография
Tris - трис-(гидроксиметил)аминометан
ТСХ - хроматография в тонком слое
ХЛФ - хлороформ
ЭА -этилацетат
Следующие примеры иллюстрируют предлагаемое изобретение.
В работе использовались аминокислоты и их производные L-ряда фирмы «Bachem» (Германия), «Reanal» (Венгрия), DOPC (Sigma-Aldrich), карбоксифлуоресцеин (Fluka, Германия), MES (Sigma-Aldrich), Tris (Sigma-Aldrich), грамицидин D (Sigma-Aldrich), грамицидин S (Красфарма, Россия) хлорид калия ч.д.а. (Химмед, Россия)
Все растворители безводные, за исключением тех, которые использовались для экстракции из водных растворов. Индивидуальность полученных соединений проверяли методом ТСХ на пластинах Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия) в системах: хлороформ - метанол 9:1 (1), хлороформ -метанол 8:2 (2), хлороформ - метанол 5:3 (3), хлороформ - метанол - уксусная кислота 5:3:1 (4), метанол - уксусная кислота - вода 4:1:1 (5), бутанол - уксусная кислота - вода 4:1:1 (6). Хроматограммы проявляли хлортолидиновым реактивом, нингидрином, по свечению в УФ-свете.
Масс-спектры высокого разрешения получали на время-пролетном масс-спектрометре «Ultraflex» («Bruker», Германия) методом матриксной лазерно-десорбционной ионизации (TOF MALDI), в качестве матрицы использовалась 2,5-дигидроксибензойная кислота.
ИК-спектры регистрировали на Фурье-спектрометре: «Magna 750» («Nicolet», США).
Электронные спектры снимали на спектрофотометре «Jasco» модель UV/VS 7800 (Япония).
ОФ-ВЭЖХ проводили на приборе Gilson 305 (Gilson, Франция).
Препаративную ОФ-ВЭЖХ проводили на колонке Luna 10 µ, обращенная фаза С5, размеры 250×21.2 мм, (Phenomenex, США) в следующих условиях.
Изократическая элюция 0.1% раствором TFA в воде, скорость потока 4 мл/мин. Поглощение регистрировали при длине волны 220 нм (7).
Динамику выхода КФ из липосом контролировали на флуориметре Сагу Eclipse (Varian, США).
Липосомы получали с помощью мини-экструдера Avanti (Avanti Polar Lipids, США)
Пример 1
6,7-бис-(метиловый эфир Nα-глицил)-протогемина (IX) (XV)
К суспензии 0.030 г (0.236 ммоль) H-GlyOMe·HCl в 1.5 мл DMF прибавляли 0.033 мл (0.236 ммоль) Et3N и перемешивали при комнатной температуре 3 мин. К полученному раствору прибавляли раствор 0.100 г (0.118 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 5 мл DMF и перемешивали 2 часа при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (1) и (2). Раствор концентрировали в вакууме до 0.5 мл и прибавляли 6 мл диэтилового эфира. Полученный остаток растворяли в ХЛФ, при этом наблюдалось выпадение белых кристаллов Et3N·HCl, от которых избавлялись декантацией раствора. Растворитель удаляли в вакууме. Для введения противоиона Cl- остаток растворяли в 15 мл смеси ХЛФ-МеОН (8:2), два раза встряхивали с 7.5 мл 0.5 N раствора соляной кислоты и промывали водой до нейтральной реакции. Растворитель удаляли в вакууме. Вещество очищали на колонке (20×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (8:2). Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.71 (2), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.063 г (67%), Rf 0.26 (1), 0.71 (2). Электронный спектр, λmax, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (115.9), 508 (9.38), 640 (3.81). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1737 (СО сл.эф.), 1648 (амид I), 1539 (амид II). Масс-спектр, m/z: [M]+ 758.5.
Пример 2
6,7-бис-гистаминил протогемин (IX) (XIX)
К раствору 0.026 г (0.236 ммоль) гистамина в 1.5 мл DMF прибавляли раствор 0.100 г (0.118 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 4 мл DMF и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (2) и (3). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона Cl- остаток растворяли в 4 мл МеОН и прибавляли 0.093 мл (0.354 ммоль) 3.8N HCl/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество очищали на колонке (31×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (5:3). Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.64 (3), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.049 г (51%), Rf 0.25 (2), 0.64 (3). Электронный спектр, λmax, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 388 (49.1), 508 (4.18), 640 (1.76). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1644 (амид I), 1543 (амид II). Масс-спектр, m/z: [М]+ 802.3.
Пример 3
6,7-бис-[(бис-метиловый эфир Nα-L-аргинил)-L-глутамил]-протогемина IX (XVIII)
1. Бис-(метиловый эфир Nα-аргинил)-L-глутаминовой кислоты
К суспензии 0.069 г (0.266 ммоль) H-ArgOMe·2 HCl в 2 мл DMF прибавляли 0.074 мл (0.531 ммоль) Et3N и перемешивали при комнатной температуре 5 мин. К полученному раствору прибавляли 0.077 г (0.133 ммоль) бис-пентафторфенилового эфира Вос-глутаминовой кислоты, полученного ранее, и перемешивали 4 часа при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (5). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Маслообразный осадок отделяли от растворителя декантированием, остатки растворителя удаляли в вакууме. Вещество очищали на колонке (23×1 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью метанол - уксусная кислота - вода 4:0.5:0.5. Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.67 (5), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.073 г (77%), Rf 0.67 (5). [α]D 25 - 8.53° (С 0.38; МеОН). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1735 (СО сл.эф.), 1653 (амид I), 1542, 1558 (амид II). Масс-спектр, m/z: [M]+ 588.31.
К 0.073 г (0.0946 ммоль) бис-(метилового эфира Nα-аргинил)-Boc-L-глутаминовой кислоты (V) приливали 6 мл ~ 3 н. HCl/MeOH. Полученную суспензию перемешивали 2 часа при комнатной температуре. Контроль процесса осуществляли ТСХ в условиях (6). После достижения полной конверсии в аминосвободный дипептид растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Маслообразный остаток кристаллизовали под безводным диэтиловым эфиром, растворитель отделяли декантацией.
2. 6,7-бис-[(бис-метиловый эфир Nα-L-аргинил)-L-глутамил]-протогемина IX (XVIII)
К суспензии полученного H-Glu(ArgOMe)2-3 HCl в 1.5 мл DMF прибавляли 0.047 мл (0.335 ммоль) Et3N и перемешивали при комнатной температуре 2 мин. Наблюдали выпадение осадка Et3N·HCl. К полученной суспензии прибавляли раствор 0.047 г (0.0558 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 2 мл DMF и перемешивали 22 часа при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли ТСХ в условиях (6). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона Cl- остаток растворяли в 4 мл МеОН и прибавляли 3.8 N HCl/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество трижды очищали на колонке (13×1 см) с сефадексом LH-20, элюировали МеОН. Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.07 (6), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.030 г (34%). Rf 0.07 (6), Rf(на окиси алюминия) 0.70 (6). Электронный спектр, λmax, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (92.2), 508 (6.31), 636 (2.39). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1737 (СО сл.эф.), 1649 (амид I), 1528 (амид II). Масс-спектр, m/z: [M]+ 1554.97.
Пример 4
6,7-бис-N-(2-гидроксиэтил)амид-протогемина (IX) (XIV)
К раствору 0.050 г (0.0591 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 3 мл DMF прибавляли 0.010 мл (0.118 ммоль) аминоэтанола и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (2) и (3). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона Cl- остаток растворяли в 3 мл МеОН и прибавляли 3.8 N HCl/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество очищали на колонке (24×1 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (5:3). Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.52 (3), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.036 г (82.5%), Rf 0.35 (2), 0.52 (3). Электронный спектр, λmax, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (183.0), 508 (5.23), 640 (2.08). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1632 (амид I), 1549 (амид II). Масс-спектр, m/z: [M]+ 702.5.
Пример 5
6,7-бис-N-(1,3-дигидроксипропан-2-ил)амид протогемина (IX) (XVI)
К раствору 0.050 г (0.0591 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 3 мл DMF прибавляли раствор 0.012 г (0.118 ммоль) 2-амино-1,3-пропандиола в 0.5 мл DMF и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (4). Раствор концентрировали в вакууме до 0.5 мл и прибавляли 6 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона Cl- остаток растворяли в 9 мл смеси ХЛФ-МеОН (8:2), один раз встряхивали с 4 мл 0.06 N раствора соляной кислоты, насыщенного NaCl, и промывали водой до нейтральной реакции. Растворитель удаляли в вакууме. Вещество очищали на колонке (21×2 см) с сефадексом LH-20, элюировали МеОН. Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.56 (4), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.018 г (36%), Rf 0.56 (4). Электронный спектр, λmax, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (40.5), 508 (2.68), 640 (1.02). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1629 (амид I), 1550 (амид II). Масс-спектр, m/z: [M]+ 762.0.
Пример 6
6,7-бис-N-(2,3-дигидроксипропил)амид протогемин (IX) (XVII)
К раствору 0.050 г (0.0591 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 3 мл DMF прибавляли 0.009 мл (0.118 ммоль) 3-амино-1,2-пропандиола и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (3) и (4). Раствор концентрировали в вакууме до 0.5 мл и прибавляли 6 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона Cl- остаток растворяли в 3 мл МеОН и прибавляли 3.8 N HCl/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество очищали на колонке (30×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН:АсОН (5:3:0.5). Фракцию, содержащую вещество с Rf 0.69 (4), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0.023 г (46%), Rf 0.33 (3), 0.69 (4). Электронный спектр, λmax, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 396-400 (24.2), 488 (2.14), 600 (1.40). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1634 (амид I), 1565 (амид II). Масс-спектр, m/z: [M]+ 762.0.
Пример 7
6(7)-Монометиловый эфир протогемина (IX) (XX)
К раствору 50 мг (0.077 ммоль) гемина в 0.5 мл ДМФА прибавляли 100 мкл пиридина и 17 мг (0.077 ммоль) ди-трет-бутилпирокарбоната и перемешивали 30 мин. К полученному смешанному ангидриду добавляли 2,5 мкл (0.077 ммоль) безводного метанола и перемешивали 6 часов. Растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Остаток растворяли в хлороформе. Вещество очищали флэш-хроматографией на колонке (10×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН 9:1. Выход 36 мг (65%). Электронный спектр, λmax, нм, хлороформ, (ε·10-3): 387 (130), 511 (2.6) 540 (2.4), 640 (0.11). Масс-спектр, m/z: [M]+ 666.0.
Пример 8
6,7-Диметиловый эфир протогемина (IX) (XXI)
К раствору 50 мг (0.077 ммоль) гемина в 0.5 мл ДМФА прибавляли 100 мкл пиридина и 92 мг (0.420 ммоль) ди-трет-бутилпирокарбоната и перемешивали 30 мин. К полученному смешанному ангидриду добавляли 10 мкл (0.308 ммоль) безводного метанола и перемешивали 6 часов. Растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Остаток растворяли в хлороформе. Вещество очищали флэш-хроматографией на колонке (10×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН 9:1. Выход 31 мг (60%). Электронный спектр, λmax, нм, хлороформ, (ε·10-3): 387 (125), 538 (1.74), 640 (0.74). Масс-спектр, m/z: [M]+ 680.0.
Пример 9
6(7)-моно-(-Val-Gly-Ala-D-Leu-Ala-D-Val-Val-D-Val-Trp-D-Leu-X-D-Leu-Trp-D-Leu-Trp-NH-CH2CH2OH)амид протогемина (IX) (XII),
где Х=Trp, Tyr, Phe
К раствору 32 мг (0.017 ммоль) грамицидина D в 0.650 мл сухого ДМФА прибавляли 48 мкл 1 н. HCl в метаноле. Реакционную смесь перемешивали 72 ч в темноте при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Выход 30 мг (98%). Масс-спектр, m/z: [M]+ 1854.0
К раствору 30 мг (0.016 ммоль) деформилированного грамицидина D в 0.2 мл ДМФА прибавляли 13.2 мг (0.016 ммоль) 6(7)-моно-N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира гемина и перемешивали 1,5 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Остаток растворяли в хлороформе. Остаток очищали на колонке (30×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН 9:1. Выход 23.5 мг (59%). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка KBr: 1634 (амид I), 1565 (амид II). Rf 0.65 (1)
Пример 10
6(7)-моно-[цикло-(Orn-Leu-D-Phe-Pro-Val)2])амид протогемин (IX) (XIII)
К раствору 50 мг (0.077 ммоль) гемина в 0.5 мл сухого ДМФА прибавляли 1 мл пиридина и 25,3 мг (0.116 ммоль) ди-трет-бутилпирокарбоната и перемешивали 15 мин при комнатной температуре. Одновременно к суспензии 93.5 мг (0.077 ммоль) дигидрохлорида грамицидина S в 0.5 мл ДМФА прибавляли 22 мкл (0,154 ммоль) триэтиламина и перемешивали 2 мин.
К полученному смешанному ангидриду гемина прибавляли раствор аминосвободного грамицидина S и перемешивали 3 ч. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Остаток растворяли в хлороформе. Остаток очищали на колонке (30×2 см) с силикагелем Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН 12:1. Выход 20 мг (15%). Масс-спектр, m/z: [М]+ 1739.5. Электронный спектр, λmax, нм, хлороформ:метанол (4:1), (ε·10-3): 400 (105), 492 (10,6), 640 (6).
Пример 11
Arg-Gly-AspCH3COOHCF3COOH (IV)
а) синтез трикарбобензокси-аргинин-глицина
Смесь 0.043 г (0.573 ммоль) глицина, 0.4 мл (1.6 ммоль) бис-(O,N-триметилсилил)ацетамида и 1 мл сухого хлористого метилена интенсивно перемешивали в плотно закрытой колбе при 40°С до полного растворения глицина. Одновременно к раствору 300 мг (0.52 ммоль) Z-Arg(Z)2-OH и 80 мкл (0.6 ммоль) триэтиламина в 2 мл сухого хлористого метилена, охлажденному до -15°С, прибавляли 55 мкл (0.57 ммоль) этилхлорформиата и смесь перемешивали при указанной температуре 15 минут.
К полученному смешанному ангидриду прибавляли бис-(триметилсилил)глицина, и реакционную массу размешивали при -15°С 1.5 ч. Затем растворитель удаляли в вакууме, осадок растворяли в метаноле. При этом карбоксильная группа дипептида деблокируется. Органический растворитель удаляли в вакууме. Выход 224 мг (68%). Rf 0.25 (1).
б) синтез трикарбобензокси-аргинин-глицицил-ди-третбутилового-аспарагиновой кислоты
К раствору 200 мг (0.32 ммоль) карбобензокси-аргинин-глицина в 1 мл сухого хлороформа прибавляли при -10°С 45 мкл (0.32 ммоль) триэтиламина и 30 мкл (0.32 ммоль) этилхлорформиата. Через 15 мин в реакционную массу вносили 90 мг (0.32 ммоль) гидрохлорида Asp(OtBu)2 в 1 мл DMF, содержащего 45 мкл (0.32 ммоль) триэтиламина. Смесь перемешивали 2 часа. Осадок солей удаляли фильтрованием, растворитель отгоняли в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органическую фазу сушили сульфатом натрия, этилацетат отделяли и отгоняли досуха на роторном испарителе, продукт растирали с петролейным эфиром до образования аморфной массы. После кристаллизации из смеси этилацетат-петролейный эфир выход продукта 270 мг (98%). Rf 0.8 (5).
в) деблокирование боковых функций трипептида Arg-Gly-Asp
1) Отщепление трет-бутильных защитных групп остатка аспарагиновой кислоты
К 200 мг (0.23 ммоль) пептида приливали 2 мл смеси TFA:H2O (95:5). Раствор перемешивали 4 часа. Продукт высаживали 10-кратным избытком охлажденного диэтилового эфира, отфильтровывали и промывали дважды эфиром. Выход 169 мг (98%). Rf 0.8 (6).
2) Отщепление Z-защитных групп от остатка аргинина
К 150 мг (0.2 ммоль) N-карбобензокси-Arg-Gly-Asp приливали 0.08 мл смеси метанол-уксусная кислота-вода (6:1:1). К раствору прибавляли палладиевый катализатор 20% Pd/C и гидрировали 1 ч при комнатной температуре, контролируя ход реакции ТСХ в системе (6). После окончания реакции катализатор отфильтровывали, промывали водой, растворитель из маточников удаляли в вакууме при 40°С. Выход 60 мг (87%), Rf 0.4 (6), Масс-спектр, m/z: [M]+ 347.0. ВЭЖХ, время удерживания 1,83 мин в условиях (7).
Пример 12
6(7)-моно-(Arg-Gly-Asp)-протогемин (IX) (XI)
К суспензии 20 мг (0.038 ммоль) Arg-Gly-AspCH3COOH·CF3COOH в 0.5 мл ДМФА добавляли 5 мкл (0.038 ммоль) триэтиламина и перемешивали 2 мин. Затем добавляли 62 мкл (0,251 ммоль) бис-(O,N-триметилсилил)ацетамида и перемешивали при комнатной температуре 30 мин. В полученную суспензию вносили 32 мг (0.038 ммоль) 6,7-бис-N-оксисукцинимидного эфира протогемина IX и реакционную массу перемешивали 6 часов. Затем растворитель удаляли в вакууме, осадок растворяли в метаноле для десилилирования карбоксильных групп трипептида. Целевой продукт перекристаллизовывали из метанола. Выход 20 мг (54%). Масс-спектр, m/z: [M]+ 981,3.
Пример 13
Исследование деструктурирующего действия производных гемина общей формулы I в отношении липидных мембран.
Для изучения влияния производных гемина на проницаемость липидной мембраны нами была использована методика измерения индуцированного этими веществами выхода карбоксифлуоресцеина (КФ) из нагруженных им липосом по методике, описанной в [Y.N.Antonenko, T.B.Stoilova, S.I.Kovalchuk, et al. Large unselective pore in lipid bilayer membrane formed by positively charged peptides containing a sequence of gramicidin A // FEBS Letters, 2005, V.579, p.5247-5252]. Для приготовления липосом использовали стоковый раствор DOPC в хлороформе с концентрацией 20 мг/мл. Стоковый раствор объемом 200 мкл упаривали в токе азота, добавляли 0.4 мл буферного раствора, содержащего 10 мМ Трис, 10 мМ MES, 100 мМ KCl 100 мМ КФ, встряхивали 2 мин и подвергали трем циклам замораживания-оттаивания, встряхивая смесь после каждого цикла. Полученную смесь мультиламеллярных липосом продавливали через поликарбонатный фильтр с порами диаметром 0.1 мкм, используя мини-экструдер Avanti (Avanti Polar Lipids, США). Невключившийся в липосомы КФ отделяли гель-хроматографией на сефадексе G-50. Сефадекс оставляли на ночь в воде для набухания. Колонку объемом 20 мл заполняли набухшим сефадексом, после чего уравновешивали 60 мл буфера, содержащего 10 мМ Tris, 10 мМ MES, 100 мМ KCl (буфер А). Объем суспензии липосом, содержащих КФ, составлял 500 мкл (концентрация липида 0.045 мг/мл). Суспензию помещали в кювету, объем доводили до 2 мл буфером А. К полученной суспензии липосом добавляли 10 мкл 10-4 М раствора производного гемина общей формулы I в ДМСО. Динамику выхода КФ контролировали флуориметрически. Флуоресценцию карбоксифлуоресцеина возбуждали при длине волны 490 нм, регистрировали при 520 нм (ширина обеих щелей 5 нм). Относительное количество вышедшего из липосом красителя в конкретный момент времени рассчитывали по формуле:
α=(Ff-F0)/(Fm-F0),
где F0 и Ff являются уровнем флуоресценции до и после добавления пептида соответственно, a Fm - значение флуоресценции после полного разрушения липосом детергентом Triton Х-100, добавленным до конечной концентрации 2.4% (по массе).
На фиг.1 представлена динамика выхода карбоксифлуоресцеина из липосом под действием производных гемина общей формулы I при соотношении липид/производное гемина 10:1 (моль/моль).
Пример 14
Исследование антибактериальной активности соединений общей формулы I
Для определения антибактериальной активности веществ были использованы штаммы Escherichia coli КМ МГУ С-600 (получен из коллекции кафедры микробиологии биологического факультета МГУ им.М.В.Ломоносова), Bacillus subtilis ВКМ В-501 (получен из Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН). Основные параметры, которые характеризуют антибактериальную активность, - это минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК). МИК- это наименьшая концентрация исследуемого соединения, полностью ингибирующая размножение бактерий в жидкой среде. МБК - это наименьшая концентрация, вызывающая гибель всех клеток.
МИК оценивали методом ингибирования роста культуры в жидкой среде с серийными разведениями веществ по модифицированной методике [Amsterdam, D. 1996. Susceptibility testing of antimicrobials in liquid media, pp.52-111. In Loman, V., ed. Antibiotics in laboratory medicine, 4 th ed. Williams and Wilkins, Baltimore].
Бактерии культивировали и тестирование проводили в жидкой среде МН (среда Mueller-Hinton: сухой экстракт говяжьего бульона 4 г/л, крахмал 1,5 г/л, гидролизат казеина 17,5 г/л; Sigma-Fluka каталожный номер 70192) при 37°С, 100% влажности и перемешивании. Для тестирования использовали культуру (с 4 по 7 пересев от разморозки) в экспоненциальной фазе роста.
Все исследуемые соединения кроме грамицидина D поглощают свет на длине волны 595 нм, используемой для оценки роста бактериальной культуры. Поэтому при оценке оптической плотности суспензии бактерий учитывали поправку на поглощение каждого соединения с учетом его концентрации в лунке. Ингибирование роста (ИР) бактерий рассчитывали в процентах через 20 часов инкубации клеток с веществами по оптической плотности (А), измеряемой в каждой лунке на длине волны 595 нм, используя формулу:
где индекс i обозначает номер лунки, к - контрольная лунка с бактериями, в которую исследуемое соединение не вносится, 0 - измерение проводится сразу же после внесения исследуемого вещества в лунку, t - измерение через 20 часов после внесения вещества.
Для определения антибактериальной активности исследуемых соединений использовали следующий экспериментальный протокол. Криопробирку с культурой тестируемого штамма (Escherichia coli КМ МГУ С600, Bacillus subtilis BKM B-501) в среде с 7% ДМСО, хранившуюся в жидком азоте, быстро размораживали, 100 мкл суспензии клеток добавляли к 1,5 мл свежей среды МН. Клетки растили в течение суток при температуре 37°С и перемешивании на орбитальном шейкере со скоростью 150 об/мин. Морфологические признаки штамма и отсутствие контаминации посторонними бактериями проверяли (а) путем посева на агаризованную (15 г/л агара) среду МН по форме и цвету образующихся колоний, (б) под микроскопом (Микмед-2, ЛОМО, Россия) с 40× объективом по характерным морфологическим признакам клеток. Далее бактерии культивировали в 1 мл жидкой среды МН при температуре 37°С и перемешивании. Клетки пересевали каждые сутки. Начиная с 3-его и заканчивая 6-м пересевом, культуру клеток использовали для постановки тестов.
Для постановки теста 5 мкл бактериальной суспензии в стационарной фазе роста переносили в 1 мл стерильной среды МН и инкубировали до достижения экспоненциальной фазы роста (3-5 ч, 37°С при перемешивании со скоростью 150 об/мин). Чтобы оценить концентрацию микроорганизмов, измеряли оптическую плотность (А) полученной бактериальной культуры на длине волны 595 нм. Считали, что А=0,2, измеренная от 200 мкл суспензии клеток в 96-луночном планшете с учетом поглощения среды, соответствует 4×108 клеток/мл для обоих используемых штаммов. С учетом измерения концентрации клеток суспензию разбавляли средой МН до 5×104-1×105 клеток/мл и переносили стерильный 96-луночный планшет по 100 мкл на лунку. Затем к клеткам вносили исследуемые соединения и делали серийные двукратные разведения этих соединений в лунках планшета. Максимальная концентрация веществ в серии составляла 10-4М, минимальная - 1,6×10-6 М. Исследование антибактериальной активности выполняли в 2 повторах для каждого соединения, а результат усредняли.
В качестве контролей использовали 100 мкл бактериальной культуры без добавления каких-либо веществ (4 лунки); бактериальную культуру, в которую добавлен 1% ДМСО или вода в объеме, как в лунках с максимальной концентрацией тестируемых соединений (4 лунки); 100 мкл стерильной среды МН без бактерий и без исследуемых веществ для контроля случайной контаминации в планшете (4 лунки).
Сразу после внесения соединений с помощью планшетного фотометра "Униплан" (Пикон, Россия) в каждой лунке измеряли Ai0, а в контрольных лунках - Ак0 необходимые для расчета по формуле (1). Планшет инкубировали в течение 20 ч при температуре 37°С и перемешивании со скоростью 150 об/мин. Затем в каждой лунке измеряли Ait, а в контрольных лунках - Aкt и рассчитывали ингибирование роста бактерий по формуле (1). МИК определяли как минимальную концентрацию исследуемого соединения, при которой ингибирование роста составляет 100%.
Для определения МБК среду из лунок, где концентрация исследуемого соединения равнялась МИК, МИКХ2 и МИКХ4, переносили на чашки Петри с агаризованной средой МН (15 г/л агара) и равномерно растирали по площади чашек стерильными шпателями. Чашки инкубировали 2 суток. МБК определяли как наименьшую концентрацию исследуемого соединения, при которой колонии на чашке Петри не вырастают.
Все тесты на антибактериальную активность повторили с перерывом в 2 дня, чтобы оценить изменчивость устойчивости бактериальных клеток к действию исследуемых соединений.
Таким образом, соединения VII, XVIII и VIII подавляют рост грамположительных бактерий S.aureus в концентрациях до 50 мкМ (табл.2).
Бактерии М.luteus высокочувствительны к действию данных соединений. Соединения VII, VIII, гемин, GrD, VI, V, IX и грамицидин S ингибируют рост М.luteus в концентрациях до 30 мкМ. При этом для соединений VII, VIII, GrD, V, IX и грамицидин S (табл.4) МИК достаточно низка - меньше 10 мкМ. Соединения Н и VI несколько менее активны (МИК=12,5 и 25 мкМ соответственно). Все исследованные соединения проявили бактерицидную активность в отношении М. luteus, причем МБК не превышает 30 мкМ.
Энтерококки Е.faecalis в среднем более устойчивы к действию данных соединений, чем микрококки М.luteus и стафилококки S.fureus. Наиболее эффективным соединением в отношении Е.faecalis оказалось соединение XVIII: МИК=12,5 мкМ.
Все исследованные соединения проявляют активность в отношении грамположительных бактерий В. subtilis. Наиболее активными оказались вещества VII, и XVIII (МИК меньше 10 мкМ).
Пример 15.
Определение специфической активности производных гемина в отношении штаммов резистентных бактерий.
Материалы и методы
Испытуемые препараты производные гемина, растворимые в воде (VII, XVIII) и растворимые в ДМСО (VIII, XV, XIV). В качестве препарата сравнения был взят ванкомицин. Каждое вещество испытывалось в трех повторах.
В работе использовались одноразовые стерильные 96-луночные плоскодонные планшеты, чашки Петри, пипетки, наконечники и пробирки (Пан-Эко, Москва).
Питательные среды: бульон Мюллера-Хинтон для работы готовили из сухих сред (Mueller Hinton broth, Acumedia, Baltimore) и стеризовали автоклавированием при 121°С в течение 15 минут.
Для культивирования Staphylococcus aureus использовали готовую сухую среду - Триптиказо-соевый агар (Tripticase Soy Agar, BBL). Для культивирования Enterococcus faecalis использовали готовую сухую среду - Колумбийский агар (Columbia Agar Base, BBL). Среды стерилизовали автоклавированием при 121°С в течение 15 минут.
Исследуемые резистентные бактериальные штаммы
Грамположительные:
Staphylococcus aureus № 25923 АТСС (American Type Culture Collection);
Staphylococcus aureus № 100 КС;
Staphylococcus epidermidis № 533;
Enterococcus faecalis № 559;
Enterococcus faecium № 569.
Бактериальный инокулюм был постоянный и составлял 5×105 КОЕ/мл.
Полученные результаты представлены в таблицах (Мср).
Постановка эксперимента.
Для водорастворимых соединений с 2 по 8 лунки вносили растворитель (вода) по 15 мкл, затем в 1 лунку вносили 30 мкл стокового раствора исследуемого соединения в воде с концентрацией 1×103 М и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,007×103 М. Из каждой лунки отбирали по 10 мкл и добавляли по 190 мкл бактериальной культуры (105 КОЕ).
Для растворимых в ДМСО соединений с 2 по 8 лунки вносили растворитель (ДМСО) по 10 мкл, затем в 1 лунку вносили 20 мкл стокового раствора исследуемого соединения в воде с концентрацией 5×103 М и послдовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,039×103 М. Из каждой лунки отбирали по 2 мкл и добавляли по 198 мкл бактериальной культуры (105 КОЕ).
В качестве контроля включали лунки, не содержащие тестируемых препаратов (контроль роста культуры). Кроме того, ставился контроль чистоты питательных сред и растворителей. Планшеты инкубировали в термостате при 36°С в течение 24 часов.
Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая рост микроорганизмов в присутствии изучаемых тест-соединений с ростом культуры без них. За МПК - минимальную подавляющую концентрацию принимали последнее разведение испытуемых препаратов с подавлением роста бактериальной культуры.
Получнные результаты представлены в таблицах.
Таблица №5 | |||||
Определение МИК производных гемина в отношении Гр+ штаммов (×Ю5 М) | |||||
Производные гемина | St.aureus 25923 |
St.aureus 100 КС |
St.epiderm 533 |
Ent.faecalis 559 |
Ent.faecium 569 |
II | 1,0 | >1,0 | >1,0 | 0,42 | 0,33 |
VIII | 0,260 | 0,625 | 0,521 | 0,312 | >5,0 |
XVIII | 0,078 | 0,156 | 0,078 | 0,078 | 0,625 |
XIV | 0,521 | >5,0 | 0,521 | 0,625 | >5,0 |
VII | 2,5 | 5,0 | 2,5 | 2,5 | >5,0 |
XV | 2,5 | >5,0 | 2,5 | >5,0 | >5,0 |
XXIII | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | >5,0 |
Таблица №6 | |
Определение МИК ванкомицина в отношении Гр+ и Гр- штаммов (м кг/мл) | |
Бактериальные штаммы | Ванкомицин |
Staphylococcus aureus №25923 АТСС | 1,0 |
Staphylococcus aureus №100 КС | 1,0 |
Staphylococcus epidermidis №533 | 1,0 |
Enterococcus faecalis №559 | 1,0 |
Enterococcus faecium №569 | >32,0 |
Таким образом, производные гемина общей формулы I активны (в разной степени в отношении Гр+штаммов резистентных бактерий.
Пример 16
Методика определения гемолитической активности соединений общей формулы I
Для исследования гемолитической активности использовали свежую капиллярную кровь человека. Эффективность гемолиза определяли по выходу гемоглобина из эритроцитов в среде RPMI-1640 (без фенолового красного, с добавлением 10% фетальной телячьей сывотки и 20 мМ L-глутамина) при начальной плотности эритроцитов (1,0±0,1)×107 клеток/мл через 3 часа инкубации с агентом (37°С, 5% СО2, 100% влажность, перемешивание на орбитальном шейкере).
В качестве характеристики гемолитической активности использовали долю гемоглобина, вышедшего из эритроцитов во внешнюю среду. Эритроциты, тени и промежуточные формы, содержащие не вышедший гемоглобин, отделяли центрифугированием. Гемоглобин определяли по поглощению супернатанта на длине волны 414 нм (вблизи максимума полосы Соре гема).
Поскольку все исследуемые соединения кроме GrD поглощают свет на данной длине волны, при расчете доли вышедшего гемоглобина учитывали поправку на поглощение каждого соединения с учетом его концентрации. Выход гемоглобина (ВГ) рассчитывали в процентах по оптической плотности (А) на длине волны 414 нм, используя формулу:
где индекс е обозначает супернатант образца с эритроцитами, i - добавленную концентрацию соединения, о - супернатант образца без добавления исследуемых соединений, m - раствор без эритроцитов, t - супернатант образца со 100% лизированными эритроцитами. Доля вышедшего гемоглобина равна доле лизированных эритроцитов при условии, что лизис происходит полностью, то есть при лизисе из эритроцита выходит весь содержащийся в нем гемоглобин.
Исследование гемолитической активности выполняли в 2 гюзторах для каждого соединения, а результат усредняли.
Для определения гемолитической активности соединений использовали следующий экспериментальный протокол. Кровь (100 мкл) отбирали из пальца здорового донора в пробирку, содержащую 0,9 мл среды RPMI-1640 (без фенолового красного) и гепарин (10 ед/мл). Клетки осаждали центрифугированием в течение 5 мин при 200×g и переносили в 10 мл среды RPMI-1640 (без фенолового красного, с добавлением 10% фетальной телячьей сывотки и 20 мМ L-глутамина, далее - полная среда). Плотность эритроцитов в суспензии определяли подсчетом в камере Горяева с помощью микроскопа "Микмед-2" (ЛОМО, Россия) и разбавляли полной средой до (2±0,2)×107 клеток/мл.
Методом последовательных разведений с шагом в 2 раза готовили серии растворов соединений в полной среде (максимальная концентрация 200 мкМ, минимальная - 1,6 мкМ, объем 75 мкл). К приготовленным растворам быстро добавляли 75 мкл суспензии эритроцитов с плотностью (2±0,2)×107 клеток/мл.
Для отрицательных контролей к 75 мкл суспензии эритроцитов с плотностью (2±0,2)×107 клеток/мл добавляли: а) 75 мкл полной среды (4 образца); б) 60 мкл полной среды и 15 мкл воды (4 образца); или в) 73,5 мкл полной среды и 1,5 мкл ДМСО (4 образца). Для определения 100%-го выхода гемоглобина (положительный контроль, 4 образца) эритроциты из 75 мкл суспензии осадждали центрифугированием (5 мин при 200×g), осадок ресуспендировли в деионизированной воде (50 мкл), после полного лизиса объем пробы доводили полной средой до 150 мкл.
Все образцы (кроме положительного контроля) инкубировали в течение 3 ч при температуре 37°С, 5% СО2, 100% влажности и перемешивании со скоростью 150 об/мин. Затем все образцы центрифугировали в течение 5 мин при 2700×g. В лунки 96-луночного планшета переносили по 130 мкл супернатанта из каждого образца. После чего с помощью фотометрического анализатора "Униплан" (Пикон, Россия) измеряли оптическую плотность в лунках планшета на длине волны 414 нм. Выход гемоглобина рассчитывали по формуле (2). На фиг.2 представлена гемолитическая активность производных гемина и соединений сравнения - грамицидина S, грамицидина D и гемина. Данные представлены в виде среднего по 2-м повторам ± стандартное отклонение.
Соединение XII не проявляет гемолитическую активность вплоть до 100 мкМ. Вещества V, VI, VIII, IX, XVIII имеют низкую гемолитическую активность (Рис.2), причем эффективность гемолиза всех синтезированных соединений значительно ниже, чем у гемина, и весьма низка даже при максимальной концентрации соединений (100 мкМ).
Пример 17
Исследование цитотоксической активности соединений общей формулы I в отношении лейкоцитов человека
Суммарную фракцию лейкоцитов выделяли из крови человека методом свободной седиментации, для чего использовали свежеотобранную венозную кровь здорового донора.
Кровь (10 мл) с добавкой 10 ед./мл гепарина выдерживали в течение 2,5 ч при температуре 15-18°С в темноте. Отбирали светлый верхний слой жидкости (4 мл) над столбом оседающих эритроцитов, трижды отмывали сбалансированным солевым раствором Хенкса и ресуспендировали в среде RPMI-1640 (с добавлением 8% эмбриональной бычьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина и 10 мМ HEPES, далее - полная среда).
Концентрацию лейкоцитов и эритроцитов в суспензии определяли подсчетом в камере Горяева, после чего суспензию доводили полной средой до концентрации лейкоцитов (1,0±0,1)×106 клеток/мл. При этом концентрация эритроцитов в используемой для измерений суспензии клеток крови не превышала 30% от концентрации лейкоцитов.
Для определения цитотоксичности исследуемых соединений для лейкоцитов человека суспензию клеток переносили в лунки стерильных 96-луночных планшетов, методом последовательных разведений с шагом в 2 раза вносили исследуемые вещества (диапазон тестируемых концентраций: 3,2-100 мкМ для соединений GrD и грамицидина S 8-500 мкМ для соединения XIII; 8-1000 мкМ для соединений VII, V, VI, VIII, IX, Н, X, XIX, XV, XI, XIV, XX и XXI) и аккуратно перемешивали. Эксперимент выполняли в двух параллельных повторах.
В качестве контролей использовали клетки, к которым добавляли эквивалентное количество растворителя, в котором были приготовлены исследуемые вещества: воду для соединений VII, и X; водный раствор ДМСО для соединения VIII, V, VI, IX; ДМСО для GrD, грамицидин S, XIII, Н, XIX, XV, XI, XIV, XX и XXI. Дополнительный контроль - суспензия лейкоцитов без всяких добавок.
Клетки инкубировали с исследуемыми соединениями 3 ч (37°С, 5% СО2, 100% влажность). Гибель лейкоцитов оценивали при помощи флуоресцентной микроскопии. Для выявления мертвых и живых клеток использовали окрашивание йодистым пропидием (проникает только в ядра мертвых клеток) и Hoechst 33342 (окрашивает все ядра). Клетки инкубировали в планшетах 15 мин одновременно с йодистым пропидием и Hoechst 33342 (37°С, 5% СО2), а затем планшеты помещали под микроскоп для анализа.
Долю погибших клеток определяли по флуоресцентным изображениям клеток в синей (Hoechst 33342) и красной (йодистый пропидий) областях спектра, полученным при помощи флуоресцентного микроскопа Axio Observer (Zeiss, Германия) с 10× объективом ("Plan-Neofluar" 10×/0.3). Использовали следующие наборы флуоресцентных фильтров. Для йодистого пропидия: полосовой фильтр на возбуждение 530-585 нм; барьерное дихроичное зеркало 600 нм, длинноволновый барьерный анализирующий фильтр 615 нм. Для Hoechst 33342: полосовой фильтр на возбуждение 359-372 нм; барьерное дихроичное зеркало 395 нм, длинноволновый барьерный анализирующий фильтр 397 нм.
С помощью цифровой фотокамеры регистрировали три типа изображений клеток: а) в проходящем белом свете; б) флуоресцентное изображение в синей области спектра с ультрафиолетовым возбуждением; в) флуоресцентное изображение в красной области спектра с возбуждением зеленым светом. Фотографировали не менее 4 полей зрения на лунку в разных ее областях. Результат анализа усредняли по 1000-1500 клеток для каждой концентрации исследуемых соединений.
Таблица 7. | |
Цитотоксическая активность соединений общей формулы I в отношении лейкоцитов человека | |
Вещество | Гибель лейкоцитов в присутствии вещества в концентрации 1 мМ |
VII | 8,0±0,8 |
VIII | 6,1±0,3 |
V | 5,8±0,3 |
VI | 10,5±0,5 |
IX | 3,1±0,3 |
H | 40±2 |
X | 4,9±0,3 |
XIII | 14±2 |
XIX | 13±1 |
XV | 13±1 |
XI | 8,6±0,4 |
XIV | 17,5±0,7 |
XX | 9,3±0,8 |
XXI | 5,3±0,5 |
Фоновые значения гибели лейкоцитов | |
без добавок | 4,5±0,7 |
при добавлении воды | 4,2±0,7 |
при добавлении 10% ДМСО | 4,9±0,4 |
при добавлении 100% ДМСО | 8,1±0,7 |
Соединения 20b(VII) X, VIII, IX и V в концентрации до 1 мМ не вызывают гибель лейкоцитов из крови человека. При этом небольшой токсический эффект растворов грамицидина S, XI, XX и XXI в ДМСО полностью обусловлен токсическим действием растворителя (ДМСО). Для соединений VI, XIII, XIX, XV и XIV обнаружен слабый токсический эффект, который проявляется при концентрациях, близких к 1 мМ, для соединений XIX, XV и XIV, при концентрациях больше 125 мкМ для соединений XIII и VI. Соединение сравнения - гемин обладает существенно более высокой токсичностью в отношении лейкоцитов по сравнению с заявляемыми соединениями (40% против 17÷3%, табл.6).
Полученные результаты свидетельствуют о перспективности заявляемых веществ для создания на их основе нетоксичных, биосовместимых антимикробных агентов, в том числе для профилактики и лечения заболеваний, вызванных различными микроорганизмами.
Пример 1
Методика изучения вирулицидного действия препаратов в культуре клеток на интактные вирусные частицы.
Вируссодержащую жидкость с титром 4,0 lg для вируса гриппа и 5,0 lg для вируса герпеса инкубировали при комнатной температуре в присутствии и в отсутствии препаратов. Экспозицию с препаратами вируса гриппа проводили в течение часа, вируса герпеса 30 и 60 минут.
Вирусодержащий материал инкубировали в присутствии препарата в исследуемой концентрации и определяли величину снижения инфекционного титра вируса по сравнению с контролем - вирусом, инкубируемым в тех же условиях, но без препарата.
Инфекционный титр вирусов определяли путем заражения культур клеток.
Перед инфицированием клетки дважды промывали средой без сыворотки для снижения неспецифической реакции. Инфицирование проводили 10-кратными разведениями проб вирусов с препаратами и без них на соотвествующей среде с добавлением трипсина (ТРСК treated,Sigma) в случае исследования вируса гриппа. Адсорбцию вирусов проводили в течение 40-60 минут при 37°С. Несорбировавшийся вирус удаляли 3-кратной промывкой средой без сыворотки. Контроли вирусов и клеток культивировали в соотвествующей клеткам среде. Далее планшеты инкубировали в термостате в течение 48-72 часов при 37°С.
Учет результатов проводили по определению гемагглютинирующей активности вируса гриппа в надосадочной жидкости в реакции гемагглютинации с человеческими эритроцитами 0 (1) группы.
Инфекционный титр вируса герпеса ВПГ-1 определяли в реакции иммуноферментного анализа, используя коммерческие тест-системы и ПНР фирмы «Амплисенс».
Таким образом, заявляемые соединения проявляют не только антибактериальную, но и заметную вирулицидную активность в отношении вирусов гриппа и герпеса, что повышает их потенциальную практическую ценность как противоинфекционных агентов.
Пример 19
Исследование противогрибковой активности соединений общей формулы I.
Объектом воздействия являлись клетки музейного штамма Cryptococcus neoformans № 3465, а также клетки музейного штамма Candida albicans №927, выращенных на глюкозо-пептон-дрожжевой среде при 32°С в течение 1 суток. В качестве соединения-сравнения использовались антимикотики пимафуцин, амфотерицин, флуконазол.
Эксперимент проводили в круглодонных 96-луночных планшетах фирмы "Ленмедполимер» в двух повторностях. В первый столбец (0) вносили 10 мкл стокового раствора водорастворимых препаратов с концентрацией 10-2÷10-3 моль/л, во второй также 10 мкл плюс 10 мкл растворителя, соответствующего данному соединению, суспендировали и переносили 10 мкл в следующую ячейку и т.д. до 8 ячейки ряда. Стоковые растворы водонерастворимых соединений общей формулы 1 (V, VIII, XII, XIII, XIV, гемин) готовили в ДМСО, разбавляли ДМСО и средой. Концентрация ДМСО в реакционной ячейке составляла ≤ 5%.
Затем в каждую ячейку вносили 190 мкл суспензии клеток культуры Cr. neoformans в синтетической питательной среде (конечная концентрация клеток примерно 103 КОЕ/мл), содержащей рН-индикатор бромкрезоловый синий (рН среды 5,5, цвет индикатора - голубой). При понижении рН до 4.5 цвет индикатора в среде изменяется на желтый, что является признаком роста клеток гриба. Синтетическая среда состояла из следующих компонентов: соли, аминокислоты, микроэлементы, витамины, антибиотик и глюкоза (всего 30 компонентов) [Yarrow D. Methods for the isolation, maintenance and identification of yeasts // In: The Yeasts, A Taxonomic Study. - 1998. - Elsevier. - Ed. by Kurtsman C.P, Fell J.W. - P.77-100]. После внесения суспензии клеток Cr. neoformans планшет в течение 1 часа инкубировали при 32°С с перемешиванием, затем переносили в стационарный термостат и инкубировали 2 и 5 суток при 27°С. После внесения суспензии клеток С. albicans планшеты инкубировали в течение 1 часа при 32°С с перемешиванием, затем переносили в стационарный термостат и инкубировали 1 и 4 суток при 27°С. Результаты приведены в таблицах 10 и 11.
Таблица 10. | |||||||||
Рост культуры Cryptococcus neoformans в присутствии соединений общей формулы I | |||||||||
Препараты | Рост тест-культуры при разных разведениях препаратов на 2 сутки | ||||||||
0 | :2 | :4 | :8 | :16 | :32 | :64 | :128 | ||
5.00·10-5 М | |||||||||
1 | XVIII | - | - | - | - | + | + | + | + |
2 | Грамицидин S | - | - | - | - | - | + | + | + |
3 | VIII | ± | ± | ± | + | + | + | + | + |
4 | V | ± | ± | ± | ± | ± | ± | ± | + |
5 | Гемин* | ± | ± | ± | ± | ± | ± | + | + |
6 | VII | - | ± | + | + | + | + | + | + |
7 | Контр. | + | + | + | + | + | + | + | + |
8 | Амфотерицин | -** | - | - | - | - | - | - | - |
9 | Флуконазол | ±** | ± | ± | + | + | + | + | + |
(-) - отсутствие роста, индикатор голубой; | |||||||||
(±) - слабый рост, индикатор желтый, но осадок выросших клеток в виде размытого пятна; | |||||||||
(+) - сильный рост, индикатор желтый, осадок клеток в виде плотного компактного пятна; | |||||||||
* на 2 сутки голубой цвет до 6 ячейки, но с небольшим осадком на дне; на 5 сутки желтый; | |||||||||
** концентрация препаратов в 0 ячейке составляет 5.00*10-4 М. |
Таблица 11. | |||||||
Рост культуры Candida albicans в присутствии соединений общей формулы I | |||||||
Препараты | Рост тест-культуры при разных разведениях препаратов | ||||||
0 | :2 | :4 | :8 | :16 | :32 | :64 | |
1·10-4 М | |||||||
XIII | ± | ± | + | + | + | + | + |
XII | ± | ± | ± | + | + | + | + |
V | - | - | ± | ± | ± | ± | ± |
Гемин | ± | + | + | + | + | + | + |
VIII | ± | ± | ± | + | + | + | + |
VII | - | - | + | + | + | + | |
XVIII | - | - | - | ± | ± | ± | ± |
Грамицидин S | - | - | - | - | + | + | + |
XV | ± | + | + | + | + | + | + |
VII | ± | ± | + | + | + | + | + |
XIV | ± | + | + | + | + | + | + |
XXII | ± | ± | ± | ± | ± | ±= | ± |
Контроль | + | + | + | + | + | + | + |
Пимафуцин | - | - | - | - | - | + | + |
Контрольные посевы из ячеек, проведенные через 1-4 сутки воздействия соединениями общей формулы I, показали практически фунгицидный эффект соединения XVIII в концентрации около 5·10-5 М.
Таким образом, соединения общей формулы 1 проявляют фунгистатический и/или фунгицидный эффекты, величина которых зависит от строения и проявляется в интервале концентраций от 10-4 до 10-6 М.
Пример 20
Композиции настоящего изобретения могут быть использованы в виде дезинфицирующих, антисептических и фармацевтических препаратов (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах), содержащих предлагаемые в настоящем изобретении соединения в качестве активных ингредиентов в смеси с органическим или неорганическим носителем или наполнителем, приемлемым для внутримышечного, внутривенного, интраназального, перорального, сублингвального, ингаляционного и интраректального введения. Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными, фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, суппозиториев, эмульсий, суспензий, спреев, ингаляторов, капель, мазей и любых других лекарственных форм. В качестве носителей могут быть использованы вода, глюкоза, лактоза, аравийская камедь, желатин, крахмал, триксилит магния, тальк, кукурузный крахмал, мочевина, полиэтиленгликоль и другие носители, пригодные для изготовления твердых, мягких или жидких препаратов. При этом в качестве добавок могут быть использованы стабилизаторы, загустители, красители и отдушки.
Активное действующее соединение общей формулы I вводят в композицию в количестве, достаточном для получения нужного вирулицидного эффекта.
При изготовлении разовой лекарственной формы количество активного ингредиента, используемого в комбинации с носителем, может варьировать в зависимости от реципиента, подвергающегося лечению, от конкретного способа введения лекарственного средства.
Так, например, при использовании соединений настоящего изобретения в виде растворов для инъекций содержание действующего начала в них составляет 0.001-1%. В качестве разбавителя вещества могут быть использованы 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор новокаина для инъекций, раствор Рингера, раствор глюкозы. При использовании соединения общей формулы (I) в виде таблеток и суппозиториев количество вещества составляет 1,0-100,0 мг на единичную дозированную форму. Для таблеток и суппозиториев в качестве фармацевтического наполнителя используют любую фармацевтически пригодную основу.
Примеры лекарственных форм
A. Желатиновые капсулы
Состав вводимого в капсулу порошка:
соединение, соответствующее общей формуле (I) - 1-50 мг,
оксид магния - 50 мг,
крахмал - 100-200 мг.
Указанные выше ингредиенты смешивают и смесь вводят в твердые желатиновые капсулы в количестве 151-285 мг.
Б. Таблетированная форма
Таблетированную форму получают, используя приведенные ниже ингредиенты, мг:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) | 1-50 |
Крахмал картофельный | 100 |
Поливинилпирролидон | 10 |
Магния стеарат | 2 |
Лактоза | 48-82 |
Аэросил | 5 |
Компоненты смешивают и прессуют для образования таблеток весом 200 мг каждая.
B. Аэрозольная форма
Состав аэрозольной смеси, рассчитанной на 10 приемов, мг:
Соединение, соответствующее | |
общей | |
формуле (I) | 10-100 |
Магния сульфата | 150 |
Лактоза | 110-140 |
Соединение смешивают с наполнителями и помещают в специальное устройство для распыления.
Г. Суппозитории
В качестве суппозиторной основы могут быть использованы:
основы, нерастворимые в воде - масло какао;
основы, растворимые в воде или смешиваемые с водой - желатино-глицериновые или полиэтиленоксидные;
комбинированные основы - мыльно-глицериновые.
Пример состава суппозитория:
Соединение, соответствующее общей формуле (I), - 1-50 мг,
Масло какао - количество, необходимое для получения суппозитория.
При необходимости возможно изготовление ректальных, вагинальных и уретральных суппозиториев с соответствующими наполнителями.
Д. Мази
В качестве мазевой основы могут быть использованы:
углеводородные мазевые основы - вазелин белый и желтый (Vaselinum album, Vaselinum flavum), вазелиновое масло (Oleum Vaselini), мазь белая и жидкая (Unguentum album, Unguentum flavum), а в качестве добавок для придания более плотной консистенции твердый парафин и воск;
абсорбтивные мазевые основы - гидрофильный вазелин (Vaselinum hydrophylicum), ланолин (Lanolinum), кольдкрем (Unguentum leniens);
мазевые основы, смываемые водой - гидрофильная мазь (Unguentum hydrophylum); водорастворимые мазевые основы - полиэтиленгликолевая мазь (Unguentum Glycolis Polyaethyleni), бентонитовые основы и другие.
Пример состава мази, г:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) | 0,01 - 0,1 |
Вазелин | 10 |
Мази изготавливают по соответствующей технологии.
Е. Раствор для инъекций
В качестве растворителя при приготовлении раствора для инъекций могут быть использованы 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор новокаина. Форма выпуска - ампулы, флаконы, шприц-тюбики.
Состав раствора для инъекций:
Соединение, соответствующее общей формуле (I) | 1-50 мг |
Вода дистиллированная | 1-2 мл |
Возможно изготовление различных лекарственных форм для инъекций - стерильных растворов, стерильных порошков и таблеток.
Примеры композиций для дезинфицирующих и антисептических средств.
Г. Соединение, соответствующее общей формуле I | 0,001-1% |
1-пропанол | 30-40% |
2-пропанол | 10-70% |
вода дистиллированная | 10-60% |
D. Поверхностно-активное соединение (ПАВ) катионного, анионного или амфотерного типа
Соединения, соответствующие общей формуле I | 0,001-1% |
Четвертичное аммониевое основание (или их смесь) | 2-10% |
Вода дистиллированная | до 100% |
E. Соединения, соответствующие общей формуле I | 0,001-1% |
Диметилсульфоксид (DMSO) | 1-20% |
или полиэтиленгликоль (PEG) M.M. 200-12000 | 1-20% |
вода дистиллированная | до 100% |
Ж. Соединения, соответствующие общей формуле I | 0,001-1% |
Смесь спиртов, DMSO, PEG, ПАВ в различных | |
сочетаниях и соотношениях | 1-80% |
вода дистиллированная | до 100% |
И. Соединения, соответствующие общей формуле | 0,001-1% |
вода дистиллированная | до 100% |
Таким образом, заявленные производные гемина общей формулы I обладают антибактериальной и противогрибковой активностью, в том числе в отношении патогенного для человека S. aureus; соединения общей формулы I по п.1 - вирулицидной активностью в низких дозах и способны инактивировать вирусы различного строения, в том числе гриппа и герпеса. Кроме того, практически все заявленные производные гемина в различной степени обладают способностью увеличивать проницаемость модельных липидных мембран, что, как известно из литературных данных, представляет собой важную часть механизма антимикробного (антибактериального, противогрибкового, вирулицидного) действия антимикробных агентов. Эффективность отдельных представителей соединений, соответствующих общей формуле I, подтверждает их пригодность для индустриального применения в составе дезинфицирующих, антисептических и терапевтических средств с противогрибковым, антибактериальным и вирулицидным действием.
Claims (15)
1. Производные гемина или их фармацевтически приемлемые соли, представляющие собой соединения общей формулы I:
,
где R1 представляет собой ОН и
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
, -Arg-Gly-Asp-OH, или
, , ,
, ,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+.
,
где R1 представляет собой ОН и
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
, -Arg-Gly-Asp-OH, или
, , ,
, ,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+.
2. Производные гемина общей формулы I по п.1, обладающие деструктирующим действием в отношении липидной мембраны.
3. Производные гемина общей формулы I по п.1, обладающие антибактериальными и противогрибковыми свойствами.
4. Производные гемина общей формулы I по п.1, обладающие одновременно вирулицидными и антимикробными свойствами.
5. Способ получения производных гемина или их фармацевтически приемлемых солей общей формулы I:
где R1 представляет собой ОН и
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
, -Arg-Gly-Asp-OH,
или
, , ,
, ,
Y- представляет собой Cl-; Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+; заключающийся в том, что активированное по карбоксильной/ым группе/ам производное гемина вводят во взаимодействие с аминокомпонентом, процесс ведут в органическом растворителе при перемешивании.
где R1 представляет собой ОН и
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
, -Arg-Gly-Asp-OH,
или
, , ,
, ,
Y- представляет собой Cl-; Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+; заключающийся в том, что активированное по карбоксильной/ым группе/ам производное гемина вводят во взаимодействие с аминокомпонентом, процесс ведут в органическом растворителе при перемешивании.
6. Способ по п.5, где в качестве активированного производного гемина использован 6,7-бис-N-оксисукцинимидный эфир гемина или 6(7)-моно-N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидный эфир гемина, в качестве растворителя использован N,N-диметилформамид.
7. Способ по п.5, где для активирования по одной из карбоксильных групп гемина используют ди-трет-бутилпирокарбонат, процесс ведут в N,N-диметилформамиде в присутствии пиридина.
8. Способ по п.5, где в качестве аминокомпонента используют трипептид H-Arg-Gly-AspOH в силилированной форме, в качестве активированного по карбоксильным группам гемина используют 6,7-бис-N-оксисукцинимидный эфир; полученный при этом конъюгат обрабатывают водным метанолом для снятия силильных групп.
9. Способ по п.8, где трипептид H-Arg-Gly-Asp-OH в силилированной форме получают исходя из глицина, который силилируют N,O-бис-(триметилсилил)-ацетамидом в хлористом метилене при кипячении, образующийся при этом бистриметилсилилглицин ацилируют трикарбобензоксиаргинином методом смешанных ангидридов, удаляют триметилсилильную защиту карбоксильной группы дипептида и α бутиловым эфиром аспарагиновой кислоты методом смешанных ангидридов; обработкой полученного производного трипептида 90-100% трифторуксусной кислотой отщепляют трет-бутильные группы, и затем удаляют карбобензокси-группы гидрированием полученного продукта над 10-20% палладием на активированном угле; трипептид силилируют действием N,О-бис-(триметисилил)ацетамида в хлористом метелене.
10. Фармацевтическая композиция, обладающая антимикробной активностью, содержащая эффективное количество производного гемина или его фармацевтически приемлемой соли общей формулы I:
где R1=OH, R2=-ArgArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH,
ArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH;
R1=ОН,
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
R1=OH, , -Arg-Gly-Asp-OH,
или
, , ,
, ,
или R1=R2=-ArgOMe, -SerOMe, -βAlaHA,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и фармацевтически приемлемый носитель.
где R1=OH, R2=-ArgArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH,
ArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH;
R1=ОН,
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
R1=OH, , -Arg-Gly-Asp-OH,
или
, , ,
, ,
или R1=R2=-ArgOMe, -SerOMe, -βAlaHA,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и фармацевтически приемлемый носитель.
11. Фармацевтическая композиция, обладающая вирулицидными, антибактериальными и противогрибковыми свойствами, содержащая эффективное количество производного гемина или его фармацевтически приемлемой соли общей формулы I:
где R1=R2=-GlyOMe, -Glu(ArgOMe)ArgOMe;
R1=OH,R2=-=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где X=Trp, Phe, Tyr (грамицидин D),
R1=OH,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и фармацевтически приемлемый носитель.
где R1=R2=-GlyOMe, -Glu(ArgOMe)ArgOMe;
R1=OH,R2=-=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где X=Trp, Phe, Tyr (грамицидин D),
R1=OH,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и фармацевтически приемлемый носитель.
12. Дезинфицирующая и/или антисептическая композиция, обладающая антибактериальной и противогрибковой активностью, содержащая эффективное количество производного гемина или его фармацевтически приемлемой соли общей формулы I:
где R1=OH, R2=-ArgArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH,
ArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH;
R1=OH и
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
или
R1=OH, , -Arg-Gly-Asp-OH,
, , ,
, ,
или R1=R2=-ArgOMe, -SerOMe, -βAlaHA,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и приемлемый носитель.
где R1=OH, R2=-ArgArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH,
ArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH;
R1=OH и
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
или
R1=OH, , -Arg-Gly-Asp-OH,
, , ,
, ,
или R1=R2=-ArgOMe, -SerOMe, -βAlaHA,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и приемлемый носитель.
13. Дезинфицирующая, антисептическая композиция, обладающая вирулицидным, антибактериальным и противогрибковым действием, содержащая эффективное количество производного гемина или его фармацевтически приемлемой соли общей формулы I:
где R1=R2=-OMe, -βAlaHis, -GlyOMe, -Glu(ArgOMe)ArgOMe;
R1=OH, R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-TrpNHCH2CH2OH, где X=Trp, Phe, Tyr (грамицидин D),
R1=OH,
Y- представляет собой Cl-;
Меn+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и приемлемый носитель.
где R1=R2=-OMe, -βAlaHis, -GlyOMe, -Glu(ArgOMe)ArgOMe;
R1=OH, R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-TrpNHCH2CH2OH, где X=Trp, Phe, Tyr (грамицидин D),
R1=OH,
Y- представляет собой Cl-;
Меn+ представляет собой Fe2+ или Fe3+;
и приемлемый носитель.
14. Средство, обладающее антибактериальной, вирулицидной и противогрибковой активностью, представляющее собой соединение общей формулы I:
где
R1=OH, R2=-ArgArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH,
ArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH;
R1=OH,
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
R1=OH, , -Arg-Gly-Asp-OH,
или
, , ,
, ,
или R1=R2=-ArgOMe, -SerOMe, -βAlaHA,
Y- представляет собой Cl-;
Меn+ представляет собой Fe2+ или Fe3+
или его фармацевтически приемлемые соли.
где
R1=OH, R2=-ArgArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH,
ArgTrpHisArgLeuLysGlu(OMe)OH;
R1=OH,
R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-Trp-NHCH2CH2OH, где Х=Trp, или Phe, или Tyr (грамицидин D),
R1=OH, , -Arg-Gly-Asp-OH,
или
, , ,
, ,
или R1=R2=-ArgOMe, -SerOMe, -βAlaHA,
Y- представляет собой Cl-;
Меn+ представляет собой Fe2+ или Fe3+
или его фармацевтически приемлемые соли.
15. Средство, обладающее вирулицидной, противогрибковой и антибактериальной активностью, в том числе против резистентных бактерий, представляющее собой соединение общей формулы I:
где R1=R2=-OMe, -GlyOMe, -Glu(ArgOMe)ArgOMe;
R1=OH, R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-TrpNHCH2CH2OH, где X=Trp, Phe, Tyr (грамицидин D),
R1=OH,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+
или его фармацевтически приемлемые соли.
где R1=R2=-OMe, -GlyOMe, -Glu(ArgOMe)ArgOMe;
R1=OH, R2=-Val-Gly-Ala-(D-Leu)-Ala-(D-Val)-Val-(D-Val)-Trp-(D-Leu)-X-(D-Leu)-Trp-(D-Leu)-TrpNHCH2CH2OH, где X=Trp, Phe, Tyr (грамицидин D),
R1=OH,
Y- представляет собой Cl-;
Men+ представляет собой Fe2+ или Fe3+
или его фармацевтически приемлемые соли.
Priority Applications (12)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009133914/04A RU2415868C1 (ru) | 2009-09-10 | 2009-09-10 | Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение |
UAA201204487A UA108480C2 (en) | 2009-09-10 | 2010-08-09 | Antimicrobials based on hemin derivatives |
ES10815682.9T ES2527432T3 (es) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Agentes antimicrobianos a base de derivados de hemina |
CN201080048604.3A CN102906110B (zh) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | 基于氯高铁血红素衍生物的抗微生物剂 |
EA201270405A EA020802B1 (ru) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Антимикробные средства на основе производных гемина |
IN2980DEN2012 IN2012DN02980A (ru) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | |
PCT/RU2010/000488 WO2011031187A1 (ru) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Антимикробные средства на основе производных гемина |
EP10815682.9A EP2476701B8 (en) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Antimicrobial agents based on hemin derivatives |
PL10815682T PL2476701T3 (pl) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Środki przeciwdrobnoustrojowe na bazie pochodnych heminy |
US13/395,149 US8906897B2 (en) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Antimicrobial agents based on hemin derivatives |
DK10815682.9T DK2476701T3 (en) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Antimicrobial agents on the basis of heminderivater |
HK13106895.8A HK1179278A1 (zh) | 2009-09-10 | 2013-06-11 | 基於氯高鐵血紅素衍生物的抗微生物劑 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009133914/04A RU2415868C1 (ru) | 2009-09-10 | 2009-09-10 | Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2415868C1 true RU2415868C1 (ru) | 2011-04-10 |
Family
ID=43732659
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009133914/04A RU2415868C1 (ru) | 2009-09-10 | 2009-09-10 | Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8906897B2 (ru) |
EP (1) | EP2476701B8 (ru) |
CN (1) | CN102906110B (ru) |
DK (1) | DK2476701T3 (ru) |
EA (1) | EA020802B1 (ru) |
ES (1) | ES2527432T3 (ru) |
HK (1) | HK1179278A1 (ru) |
IN (1) | IN2012DN02980A (ru) |
PL (1) | PL2476701T3 (ru) |
RU (1) | RU2415868C1 (ru) |
UA (1) | UA108480C2 (ru) |
WO (1) | WO2011031187A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013073998A2 (ru) | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью |
WO2018143840A1 (ru) | 2017-02-06 | 2018-08-09 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ВЕРТА" | Биоцидный пептид и препарат на его основе |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102967649B (zh) * | 2012-05-24 | 2015-03-04 | 新疆科丽生物技术有限公司 | 电感耦合等离子体质谱在氯高铁血红素药物检测中的应用 |
EP3295962B1 (en) * | 2016-09-15 | 2021-01-27 | Nano4Imaging GmbH | Tetrapyrrole conjugates as mri contrast agents |
RU2656595C1 (ru) * | 2018-03-16 | 2018-06-06 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Циклическое производное гемина с антимикробными свойствами и способ его синтеза |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU663106B2 (en) * | 1991-08-02 | 1995-09-28 | Meiji Milk Products Co., Ltd. | Porphyrin-based anti-HIV drug |
IL116126A0 (en) | 1995-11-24 | 1996-01-31 | Yeda Res & Dev | Process for the preparation of bacteriochlorophyllis some novel compounds of this type and pharmaceutical compositions comprising them |
US6001808A (en) | 1996-08-19 | 1999-12-14 | Metatron, Inc. | Method of treating herpes virus infections with spermostatic gramicidin |
RU2238950C2 (ru) | 2002-04-25 | 2004-10-27 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Производные гемина и их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, применение и фармацевтическая композиция |
RU2250906C2 (ru) | 2003-07-10 | 2005-04-27 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Способы получения геминпептидов и их применение в качестве нуклеолитических агентов |
RU2296131C2 (ru) | 2004-11-26 | 2007-03-27 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Геминпептид, его фармацевтически приемлемые соли и применение в качестве противовирусного и вирулецидного агента |
RU2280649C1 (ru) | 2004-11-26 | 2006-07-27 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Геминпептиды, их фармацевтически приемлемые соли, фармкомпозиция и применение в качестве противоопухолевых агентов |
RU2404191C2 (ru) | 2007-07-09 | 2010-11-20 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Производные гемина или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, композиция и применение |
-
2009
- 2009-09-10 RU RU2009133914/04A patent/RU2415868C1/ru active
-
2010
- 2010-08-09 UA UAA201204487A patent/UA108480C2/ru unknown
- 2010-09-08 EP EP10815682.9A patent/EP2476701B8/en active Active
- 2010-09-08 US US13/395,149 patent/US8906897B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-09-08 WO PCT/RU2010/000488 patent/WO2011031187A1/ru active Application Filing
- 2010-09-08 IN IN2980DEN2012 patent/IN2012DN02980A/en unknown
- 2010-09-08 CN CN201080048604.3A patent/CN102906110B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-09-08 DK DK10815682.9T patent/DK2476701T3/en active
- 2010-09-08 ES ES10815682.9T patent/ES2527432T3/es active Active
- 2010-09-08 EA EA201270405A patent/EA020802B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-09-08 PL PL10815682T patent/PL2476701T3/pl unknown
-
2013
- 2013-06-11 HK HK13106895.8A patent/HK1179278A1/zh not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Г.А.Желтухина и др. «Синтез и структурно-функциональные исследования искусственных нуклеаз на основе конъюгатов гемина с пептидными фрагментами фактора дифференцировки клеток HLDF», Биоорганическая химия, 2006, 32(2), с.198-210. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013073998A2 (ru) | 2011-11-17 | 2013-05-23 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью |
WO2018143840A1 (ru) | 2017-02-06 | 2018-08-09 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ВЕРТА" | Биоцидный пептид и препарат на его основе |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1179278A1 (zh) | 2013-09-27 |
CN102906110B (zh) | 2016-04-13 |
PL2476701T3 (pl) | 2015-03-31 |
EA201270405A1 (ru) | 2012-08-30 |
DK2476701T3 (en) | 2014-11-17 |
IN2012DN02980A (ru) | 2015-07-31 |
US20120264724A1 (en) | 2012-10-18 |
US8906897B2 (en) | 2014-12-09 |
CN102906110A (zh) | 2013-01-30 |
UA108480C2 (en) | 2015-05-12 |
ES2527432T3 (es) | 2015-01-23 |
EP2476701B8 (en) | 2014-09-24 |
EP2476701B1 (en) | 2014-08-13 |
EA020802B1 (ru) | 2015-01-30 |
EP2476701A1 (en) | 2012-07-18 |
WO2011031187A1 (ru) | 2011-03-17 |
EP2476701A4 (en) | 2013-01-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2001237616B2 (en) | Antimicrobial compounds and formulations | |
JP2010534066A (ja) | 抗菌性ペプチド | |
RU2415868C1 (ru) | Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение | |
DE102009007381A1 (de) | Antibiotische Peptide | |
CN111819187B (zh) | 多肽化合物及其制备方法与应用 | |
KR101345333B1 (ko) | 라이신 및 트립토판 잔기가 4번 반복된 신규한 항균 및 항진균 펩타이드 및 이의 용도 | |
EP1831245A1 (en) | Antimicrobial peptides with reduced hemolysis and methods of their use | |
KR100438416B1 (ko) | Ca-ma 펩타이드의 아미노산 중 하나 또는 그 이상을치환하여 + 전극과 소수성 영역이 증가된 신규한펩타이드 및 그를 포함하는 약학적 조성물 | |
CN115028685B (zh) | 一种阳离子双环抗菌肽及其应用 | |
RU2475498C1 (ru) | Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью | |
US20040072990A1 (en) | Antimicrobial peptides with reduced hemolysis and methods of their use | |
CN112625106B (zh) | 一种抗菌多肽化合物、合成方法及其应用 | |
CN112791191B (zh) | 一种新型高效抵抗蛋白酶水解抗多药耐药菌的抗菌肽辛酸偶联物及其应用 | |
JP4621426B2 (ja) | 新しい尿素オリゴマー、その調製方法、およびそれを含有する薬学的組成物 | |
JP2005247721A (ja) | 低下された溶血反応を有する抗菌性ペプチド及びその使用方法 | |
US20150376236A1 (en) | Peptidomimetics possessing photo-controlled biological activity | |
CN112457375B (zh) | 多肽化合物及其制备方法与应用 | |
KR20050072337A (ko) | 개구린 5로부터 합성 및 제조된 항생 펩타이드 유도체 | |
KR100980300B1 (ko) | 라이신 펩토이드 잔기를 포함하는 새로운 박테리아선택성을 갖는 피시딘 유도체 항생 펩타이드 및 그 용도 | |
Personne et al. | Submonomer Synthesis of Inverse Polyamidoamine (i‐PAMAM) Dendrimer Antibacterials | |
박희주 | Antimicrobial activity and mechanism of antimicrobial peptide Hylin a1 and its analog peptides against multidrug resistant bacteria | |
RU2306148C1 (ru) | Пептиды латарцины, проявляющие антимикробную активность | |
Accardo et al. | Gd (III)-complex derivatives of aromatic oligopeptides as novel supramolecular MRI contrast agents | |
WO2020065595A1 (es) | Lipopeptidos cortos con actividad antimicrobiana contra bacterias gram negativas y gram positivas | |
CN116003453A (zh) | 一种基于双1,4-消除反应的可逆环化肽及其应用 |