EA020802B1 - Антимикробные средства на основе производных гемина - Google Patents
Антимикробные средства на основе производных гемина Download PDFInfo
- Publication number
- EA020802B1 EA020802B1 EA201270405A EA201270405A EA020802B1 EA 020802 B1 EA020802 B1 EA 020802B1 EA 201270405 A EA201270405 A EA 201270405A EA 201270405 A EA201270405 A EA 201270405A EA 020802 B1 EA020802 B1 EA 020802B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- agd
- agdome
- gramicidin
- tgr
- pharmaceutically acceptable
- Prior art date
Links
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical class CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 title claims abstract description 57
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 title claims description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 55
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 30
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 160
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 claims description 53
- 229960004905 gramicidin Drugs 0.000 claims description 51
- ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N gramicidina Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N 0.000 claims description 49
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 24
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical group NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 claims description 21
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 17
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims description 14
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 11
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims 4
- 101150033824 PAA1 gene Proteins 0.000 claims 2
- 101100389815 Caenorhabditis elegans eva-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 28
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 7
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 77
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 55
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 51
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 39
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 28
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 28
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 28
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 18
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 15
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 15
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 15
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 14
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 13
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 13
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 12
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 11
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 description 10
- 238000002265 electronic spectrum Methods 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Substances ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 9
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 7
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- -1 inhalers Substances 0.000 description 7
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000006994 mh medium Substances 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Natural products CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 3
- AOZUYISQWWJMJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.CC(O)=O AOZUYISQWWJMJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 3
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 3
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FMCAFXHLMUOIGG-IWFBPKFRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-formamido-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxy-2,5-dimethylphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound O=CN[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)CC1=CC(C)=C(O)C=C1C FMCAFXHLMUOIGG-IWFBPKFRSA-N 0.000 description 2
- 229940044613 1-propanol Drugs 0.000 description 2
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FCSKOFQQCWLGMV-UHFFFAOYSA-N 5-{5-[2-chloro-4-(4,5-dihydro-1,3-oxazol-2-yl)phenoxy]pentyl}-3-methylisoxazole Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCCCOC1=CC=C(C=2OCCN=2)C=C1Cl FCSKOFQQCWLGMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 2
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- FKSLYSSVKFYJKE-UHFFFAOYSA-N n,n-diethylethanamine;methanol Chemical compound OC.CCN(CC)CC FKSLYSSVKFYJKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 2
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 2
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 2
- FMCAFXHLMUOIGG-JTJHWIPRSA-N (2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-formamido-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxy-2,5-dimethylphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound O=CN[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)CC1=CC(C)=C(O)C=C1C FMCAFXHLMUOIGG-JTJHWIPRSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DAYKWVVEINTEQW-UHFFFAOYSA-N 1-(9h-fluoren-9-ylmethyl)piperidine Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1CN1CCCCC1 DAYKWVVEINTEQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)CO KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical compound NCC(O)CO KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003345 AMP group Chemical group 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100350216 Arabidopsis thaliana PDH2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100412420 Arabidopsis thaliana REM8 gene Proteins 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N Bromocresolgreen Chemical compound CC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C(=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010069747 Burkholderia mallei infection Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 108050004290 Cecropin Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 201000003641 Glanders Diseases 0.000 description 1
- LQSMEVHEYXACJP-DSHASFMGSA-N Gramicidin B Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCCO)C1=CC=CC=C1 LQSMEVHEYXACJP-DSHASFMGSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 108010010369 HIV Protease Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 101150024075 Mapk1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- CJZDNOWIVIAHNB-RJMJUYIDSA-N OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O CJZDNOWIVIAHNB-RJMJUYIDSA-N 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150074417 SSC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 206010067409 Trichophytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXDSLUMUNWTSDB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;chloroform;methanol Chemical compound OC.CC(O)=O.ClC(Cl)Cl VXDSLUMUNWTSDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001420 alkaline earth metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- KNPCNMWJXSOOJU-LURJTMIESA-N bis(2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) (2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanedioate Chemical compound C([C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(=O)OC=1C(=C(F)C(F)=C(F)C=1F)F)CC(=O)OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F KNPCNMWJXSOOJU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000008294 cold cream Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LDCRTTXIJACKKU-ONEGZZNKSA-N dimethyl fumarate Chemical compound COC(=O)\C=C\C(=O)OC LDCRTTXIJACKKU-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N dmso dimethylsulfoxide Chemical compound CS(C)=O.CS(C)=O CETRZFQIITUQQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- 229920006227 ethylene-grafted-maleic anhydride Polymers 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 1
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000008311 hydrophilic ointment Substances 0.000 description 1
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 238000001698 laser desorption ionisation Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 235000001055 magnesium Nutrition 0.000 description 1
- 229940051960 magnesium oxide 50 mg Drugs 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGJSNMGHAVDLRQ-HUUJSLGLSA-N methyl (2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxy-2,3-dimethylphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)OC)CC1=CC=C(O)C(C)=C1C AGJSNMGHAVDLRQ-HUUJSLGLSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229960003255 natamycin Drugs 0.000 description 1
- NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N natamycin Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)/C=C/[C@H]2O[C@@H]2C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 NCXMLFZGDNKEPB-FFPOYIOWSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000006215 rectal suppository Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 239000006217 urethral suppository Substances 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/22—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
- C07F15/02—Iron compounds
- C07F15/025—Iron compounds without a metal-carbon linkage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к новым антимикробным, в том числе антибактериальным и противогрибковым, средствам и композициям на основе производных гемина общей формулы (I), а также к получению новых производных гемина. Преимуществами антибактериальных средств на основе прозводных гемина является их биосовместимость, биодеградируемость, высокая эффективность против резистентных бактерий и широкораспространных и опасных для человека микроскопических грибов, отсутствие токсичности и побочных эффектов.
Description
Изобретение относится к области биоорганической химии и направлено на разработку новых антимикробных средств и композиций на основе производных гемина, а также на получение новых производных гемина.
Уровень техники
Как известно, многие опасные заболевания человека и животных вызываются микроорганизмами, такими как бактерии и микроскопические грибы. Бактерии вызывают такие заболевания эпидемического характера, как холера, брюшной тиф, паратифы, чума, дифтерия, туляремия, бруцеллез, а также туберкулез, заражение крови (сепсис), проказа, сифилис и др. У животных бактерии вызывают сап, сибирскую язву, туберкулез и др. Грибковые заболевания главным образом поражают кожные покровы и слизистые оболочки и представляют собой, в частности, кератомикозы, микроспорию, трихофитию, криптококкоз и т.п.
Борьба с микроорганизмами основывается на применении антимикробных средств, таких как антибактериальные средства (в том числе антибиотики) и противогрибковые средства. Однако многие известные средства обладают рядом недостатков, такими как токсичность, чувствительность к действию протеолитических ферментов, гемолитический эффект, недостаточная широта антимикробного действия. В частности, у бактерий быстро развивается резистентность по отношению к существующим антимикробным средствам, главным образом к антибиотикам. Поэтому проблема поиска новых нетоксичных, биосовместимых антимикробных средств, применение которых не приводило бы к резистентности, весьма актуальна.
Известно, что гемин обладает антимикробной активностью в отношении золотистого стафилококка [Υ. Νίΐ/аи, Н. Ьабаи, 8. Со/ащку, Ζ. МаПк.СкагасЮп/аОоп оГ кспин апОЪас1епа1 аскои оп 81арку1ососси8 аигеи8//РЕМ8 МюгоЪюк Ьек., 1987, ν. 48 (3), р. 401-406]. Однако использование гемина в качестве антибактериального средства затруднено вследствие его не растворимости в воде, гемолитической активности, а также кратковременности антибактериального эффекта.
Ранее предпринимались попытки модификации гемина путем его конъюгации с аминокислотами и пептидами с целью создания биологически активных производных. В результате модификации карбоксильных групп гемина путем получения соответствующих амидов были получены и исследованы соединения общей формулы (I), где К1 и К2, одинаковые или различные, представляют собой -ОН или остаток аминокислоты или пептида, причем К1 и К2 не могут одновременно обозначать -ОН.
Так, для некоторых пептидных производных гемина общей формулы (I), в частности, где один из К1 и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАгдТгрН18АгдЕеиЕу8О1и(ОМе)ОН (соединение V) или -АтдТгрН18АгдЕеиЕу8О1и(ОМе)ОН (соединение VI), установлена нуклеазная (нуклеолитическая) активность, проявляющаяся в способности разрушать плазмидную ДНК [патент КИ № 2250906, 27.04.2005; Желтухина Г.А., Лобанова Т.Н., Небольсин В.Е., Галлямов М.О., Драницына С.М., Костанян И.А.//Биоорган. химия, 2006. т. 32, № 2, с. 198-210].
Отдельные аминокислотные и пептидные производные гемина общей формулы (I), а именно те, у которых один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАтдТгрН18АгдЕеиЕу8О1и(ОМе)ОН (соединение V), или К1=К2 = -АгдОМе (соединение VII), способны ингибировать протеиназу ВИЧ и оказывать, вследствие этого, противовирусное анти-ВИЧ действие [патент КИ № 2238950, 27.10.2004].
Также показано, что некоторые производные гемина общей формулы (I), а именно те, у которых Κι=Κ2 = -8егОМе (соединение VIII), Κι=Κ2 = -βА1аН18 (соединение X), Κι=Κ2 = -АгдОМе (соединение VII), Κι=Κ2 = -β А1аНА (соединение IX, НА - остаток гистамина) или один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАгдТгрН18АгдЕеиЕу8О1и(ОМе)ОН (соединение V) или -АгдТгрН18Аг§ЕеиЕу8О1и(ОМе)ОН (соединение VI), обладают противовирусной активностью [заявка КИ 2007125604, 20.01.2009].
Однако антимикробная, в том числе антибактериальная и противогрибковая, активность указанных выше производных гемина не известна из уровня техники.
С другой стороны, в последнее время много внимания уделялось дизайну новых антимикробных
- 1 020802 агентов на основе антимикробных пептидов (АМП) [А. СшНаш, С. Ριγγι. δ.Ρ. ΝίοοΙοΙΙο. Аикш1сгоЫа1 реркбек: ап оуеМете оГ а ргопФшд ск-ΐδδ оГ Шегареикс8//Сеп1га1 Еигореап 1оита1 оГ Вю1оду, 2007, ν. 2(1), р. 133].
Среди известных антимикробных пептидов можно назвать линейный грамицидин Ό, представляющий собой смесь пептидов формулы (II)
Уа1-О1у-А1а-(Ό-Ьеи)-А1а-Ф-Уа1)-Уа1-(О-Уа1)-Тгр-(ϋ-Ьеи)-X-(ПЬеи) -Тгр- (ϋ-Ьеи) -ТгрННСН2СН2ОН (XI) где X = Тгр, Туг, РЬе [А.Е. Негге11апб О.НеФпап. Е.хрептеп1а1 аиб С1пйса1 δΦ^δ оп СгатЮбш//! С1ш. Φνοδί., 1941, ν.20, 583-591], и циклический грамицидин δ формулы (III) , Ьеи-(О-РЕе)-Рго-Уа1\ч
От От 44 Уа1-Рго-(0-РЬе)-Ьеи/ (III) [С. №щатигФ1 апб δ. РатЬНау. СгапиабФФ: δίΓϊκή^^κΙίνΠγ ге1а1ют1йр//Т Βίοδα., 1985, ν.7, № 3-4, р. 323-329].
Соединение II эффективно против грамположительных бактерий [А.Е. Негге11 апб Ό. НеИтап. Ехрептеп1а1 апб СНтса1 δΦб^еδ оп Сгатю1бш//Т С1ш. Iпνеδΐ., 1941, ν. 20, № 583] и некоторых вирусов, в частности герпеса [υδ Ра1еп1 6001808, 1999]. Соединение III эффективно главным образом против грамположительных бактерий в концентрациях 5-15 мкМ [ЛпдЬо Х1ао, Ветагб ^ίδΦιιιη. апб Ре1ег АрГ. Е1есί^οδίаί^с νе^δиδ δίе^^с ЕГГесп ш РерЦботФисгу: δνιΗΦδίδ апб δесοпба^у δίτ^Φΐΐ Апа1уδ^δ оГ СгатШбш δ Λικι1ο§ικδ \νίΦ (Е)-А1кепе РерИбе Iδοδίе^еδ//I Ат. СЬет. δο^ 2005, 127 (16), рр. 5742-5743]. Соединения II и III используются в медицинской практике только для наружного применения. Недостатками этих антимикробных соединений являются их относительно большая длина и, соответственно, сравнительно высокая стоимость, недостаточная широта антибактериального, противогрибкового и антивирусного действия, а также побочные эффекты, проявляющиеся при применении, в основном это гемолиз эритроцитов и аллергические реакции.
Известен также пептид А^§-С1у-Аδр (IV), который является фрагментом антимикробных пептидов семейства цекропинов, многих микробных белков и фибронектина поверхности клеток млекопитающих [А.1. КзМФ. НапбЬоок оГ Ью1одюа11у асИуе рерί^беδ//Е1δеν^е^, Асабетю ΡϊΌδδ. ФА, 2006, р. 576]. Однако до настоящего времени возможность его применения в качестве средства для лечения инфекционных заболеваний не была изучена.
Основными препятствиями к применению АМП в клинической практике являются их сравнительно высокая стоимость, чувствительность к действию протеолитических ферментов, а также присущий многим АМП гемолитический эффект.
Кроме того, в настоящее время антимикробные пептиды получают в основном твердофазным методом, что делает эти вещества чрезвычайно дорогостоящими, а их применение экономически нецелесообразным. Поэтому является весьма актуальным поиск более коротких аналогов АМП и их производных, в том числе конъюгатов с соединениями других классов.
В связи с тем, что сохраняется потребность в совершенствовании антимикробных средств в отношении снижения их токсичности, уменьшения других побочных эффектов, а также в повышении активности против резистентных штаммов, было предложено использовать в качестве таких средств производные гемина.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к применению производных гемина общей формулы (I)
где Κι и К2 одинаковые или различные при условии, что оба Κι и К2 одновременно не представляют собой -ОН, при этом либо один из К! и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАгдТгрШАгдЕеиЕу^С1и(ОМе)ОН. -А^дТ^рН^δА^д^еи^уδС1и(ОΜе)ОН, А11-С1у-А1а-(О-Ееи)-А1а-(О- 2 020802
Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Ьеи)-Х-(П-Ьеи)-Тгр-(Р-Ьеи)-Тгр-МНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Н5-цикло-(Огп-Ьеи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-О1у-А§р-ОН или -Агд-АгдТгр-Тгр-Агд-РЬе-ОН, либо К! и К2 оба представляют собой -АгдОМе, -8етОМе, -/А1аНА. -βА1аН15. -ИНСН2СН2ОН, -С1уОМе, -ННСН(СН2ОН)СН2ОН, -ННСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АтдОМе)-АтдОМе, -НА или -АгдАгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина /'ΝΗ
-ΗΝ—СН2—СН-,—С )
Ме' представляет собой Ре2+ или Ре3+;
или их изомеров, или смесей изомеров, или их фармацевтически приемлемых солей в качестве антимикробных средств.
Также изобретение относится к антимикробному, в том числе антибактериальному и/или противогрибковому, средству на основе вышеуказанных соединений формулы (I) и соответствующим фармацевтическим, антисептическим и/или дезинфицирующим композициям, а также способу лечения и/или профилактики заболеваний, вызванных микроорганизмами.
Также изобретение относится к новым производным гемина общей формулы (I)
где Κι и К2 одинаковые или различные, при условии, что оба К! и К2 одновременно не представляют собой -ОН, при этом либо один из К! и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1у-А1а(П-Реи)-А1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Реи)-Х-(П-Реи)-Тгр-(П-Реи)-Тгр-ХНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -У’-цикло-(Ог-Ьеи-О-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Атд-О1у-А8р-ОН или
-Агд-Агд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо К! и К2 оба представляют собой -ННСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ННСН(СН2ОН)СН2ОН, -ННСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АтдОМе)-АтдОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина
Ме' представляет собой Ре2+ или Ре3+;
или их изомерам, или смесям изомеров, или их фармацевтически приемлемым солям, а также к способу синтеза этих соединений.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 изображены графики, отражающие динамику выхода карбоксифлуоресцеина из модельных липосом под действием производных гемина;
на фиг. 2 - зависимости гемолитической активности (оцениваемой по интенсивности выхода гемоглобина из эритроцитов) от концентрации производных гемина.
Подробное описание изобретения
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что соединения приведенной выше формулы (I), представляющие собой конъюгаты гемина с пептидами, аминокислотами или их аналогами, являются перспективными антимикробными средствами.
Преимуществами производных гемина формулы (I) являются их биосовместимость и биодеградируемость, низкая токсичность по отношению к нормальным клеткам человека и отсутствие гемолитического эффекта, а также высокая антибактериальная эффективность, в том числе против резистентных штаммов, в сочетании с противогрибковой активностью.
Без намерения ограничения какой-либо теорией, авторы предполагают, что антимикробное действие соединений формулы (I) может быть частично объяснено их деструктирующим действием по отношению к липидной мембране, которое, как известно, является одним из основных механизмов антимикробного действия. Данное действие продемонстрировано в примере 12 и на фиг. 1.
- 3 020802
Таким образом, были получены и исследованы следующие новые соединения формулы (I).
Соединение (XI): один из К] и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Агд-01уАкр-ОН;
соединение (XII): один из и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1уЛ1а-(П-Теи)-Л1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Теи)-Х-(П-Теи)-Тгр-(П-Теи)-Тгр-ХНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, РЬе или Туг (грамицидин Ό);
соединение (XIII): один из и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -У-цикло(Огп-Ьеи-О-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8);
соединение (XIV): К = К2 = -ХНСН;СН;ОН; соединение (XV): К, = К2 = -О1уОМе; соединение (XVI): К = К2 = -ХНСН(СН;ОН)СН;ОН; соединение (XVII): К = К2 = -ХНСН;СН(ОН)СН;ОН; соединение (XVIII): К = К2 = -О1и(АгдОМе)-АгдОМе; соединение (XIX): К = К2 = -НА;
соединение (XX): один из К и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Агд-АгдТ гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН;
соединение (XXI): = К2 = -Агд-АгдОМе; где НА представляет собой
Кроме новых соединений были исследованы также известные производные гемина общей формулы (I), которые продемонстрировали аналогичные свойства, а именно соединение (V): один из К, и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАтдТгрН15АгдТеиТу5О1и(ОМе)ОН;
соединение (VI): один из и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдТгрН15АгдТеиЬу5О1и(ОМе)ОН;
соединение (VII): К = К2 = -АгдОМе; соединение (VIII): К = К2 = -8егОМе;
соединение (IX): = К2 = -βА1аНА, где НА - остаток гистамина;
соединение (X): К1=К2 = -β А1аН18;
Соединения (V), (VI) раскрыты в патенте КИ № 2250906, 27.04.2005 и статье Желтухина Г.А., Лобанова Т.Н., Небольсин В.Е., Галлямов М.О., Драницына С.М., Костанян И.А.//Биоорган. химия. 2006, т. 32, № 2, с. 198-210, соединение (VII) раскрыто в патенте КИ № 2238950, 27.10.2004, соединения (VIII), (IX), (X) раскрыты в заявке КИ 2007125604, 20.01.2009. Однако антимикробная, в том числе антибактериальная и противогрибковая, активность этих соединений ранее не была исследована.
Таким образом, настоящее изобретение направлено на применение производных гемина общей формулы (I)
где и К2 одинаковые или различные при условии, что оба и К2 одновременно не представляют собой -ОН, при этом либо один из К1 и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАтдТгрН15АгдЕеиЕу5О1и(ОМе)ОН, -АгдТгрН15АгдЕеиЕу5О1и(ОМе)ОН, ^^-0^^^-(0^^)^^-(0Уа1)-Уа1-(^-Уа1)-Т^р-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Т^р-(^-^еи)-Т^р-NНСН2СН2ОН, где X Тгр. или РЬе, или Туг (грамицидин О), -Ц’-циклоЬОгп-Ееи-О-РНе-Рго-’УИр (грамицидин 8), -Атд-01у-Акр-ОН или -Агд-АгдТгр-Тгр-Агд-РЬе-ОН, либо и К2 оба представляют собой -АгдОМе, -8егОМе, -вА1аНА, -вА1аН1к, -№НСН2СН2ОН, -01уОМе, -ХНСН(СН2ОН)СН2ОН, -ХНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АгдОМе)-АгдОМе, -НА или -АгдАгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина
3+.
Меп представляет собой Ре или Ре
- 4 020802 или их изомеров, или смесей изомеров, или их фармацевтически приемлемых солей в качестве антимикробных средств.
Антимикробная активность включает как антибактериальную, так и противогрибковую активность.
Представленные выше соединения формулы (I) проявляют активность против грамположительных бактерий, таких как бактерии рода 81арЬу1ососсик (например, 81арЬу1ососсик аигеик), ВасШик (например, ВасШик киЪИйк), Ейегососсик (например, Еп1егососсик Гаесайк) и Мюгососсик (например, Мюгососсик 1и1еик), в том числе резистентных, т.е. обладающих устойчивостью к действию известных антибактериальных средств. Предпочтительно указанные бактерии относятся к штаммам ВасШик киЪййк ВКМ В-501, 81арЬу1ососсик аигеик 209Р, Ейегососсик Гаесайк ВКМ В-871 или Мюгососсик 1и1еик ВКМ Ас-2230. Еще более предпочтительно указанные соединения проявляют антибактериальную активность против резистентных штаммов 81арЬу1ососсик аигеик № 25923 АТСС, 81арЬу1ососсик аигеик № 100 КС, 81арЬу1ососсик ерШегппШк № 533, Еп1егососсик Гаесайк № 559 или Ейегососсик Гаесшт № 569.
Кроме того, представленные выше соединения формулы (I) проявляют активность против микроскопических грибов Сгур1ососсик (в частности, Сгур1ососсик пеоГогтапк, предпочтительно штамма Сгур1ососсик пеоГогтапк № 3465), а также СапШйа (в частности, СапШйа а1Ъюапк, предпочтительно штамма СапШйа а1Ъюапк № 927).
Соединения формулы (I) могут существовать в виде изомеров, а также в виде смесей изомеров, которые полностью входят в объем заявленного изобретения. Например, при модификации одной из двух карбоксильных групп гемина может образовываться смесь (6)-, (7)-производных.
Все аминокислоты, входящие в состав производных гемина, представляют собой Ь-аминокислоты, если не указано иное.
Соединения формулы (I) могут быть использованы как в виде солей с фармацевтически приемлемыми кислотами, например молочной, винной, лимонной, хлористо-водородной и др., так и в виде солей по карбоксильным группам с ионами щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, кальций, или, например, с фармацевтически приемлемыми основаниями, такими как аммиак, этаноламин.
Указанные выше соединения формулы (I) и/или их соли могут быть использованы в качестве активных ингредиентов в фармацевтических композициях (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах) в смеси с органическим или неорганическим носителем или наполнителем.
Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными, фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, суппозиториев, эмульсий, суспензий, спреев, ингаляторов, капель, мазей и любых других лекарственных форм. В качестве носителей могут быть использованы вода, глюкоза, лактоза, аравийская камедь, желатин, крахмал, триксилит магния, тальк, кукурузный крахмал, мочевина, полиэтиленгликоль и другие носители, пригодные для изготовления твердых, мягких или жидких препаратов. При этом в качестве добавок могут быть использованы стабилизаторы, загустители, красители и отдушки.
Соединение формулы I вводят в композицию в количестве, достаточном для получения антимикробного эффекта.
При изготовлении разовой лекарственной формы количество активного ингредиента, используемого в комбинации с носителем, может варьировать в зависимости от реципиента, подвергающегося лечению, от конкретного способа введения лекарственного средства.
Так, например, при использовании соединений настоящего изобретения в виде растворов для инъекций содержание действующего начала в них составляет 0,001-1 мас.%. В качестве разбавителя вещества могут быть использованы 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор новокаина для инъекций, раствор Рингера, раствор глюкозы. При использовании соединения общей формулы (I) в виде таблеток и суппозиториев количество вещества составляет 1,0-100,0 мг на единичную дозированную форму. Для таблеток и суппозиториев в качестве фармацевтического наполнителя используют любую фармацевтически пригодную основу.
Поскольку соединения общей формулы (I) являются как водорастворимыми, так и липофильными, то они могут применяться в виде водных растворов, спиртовых растворов, мазей, кремов и т.д.
Далее изобретение относится к антимикробному лекарственному средству на основе указанных выше соединений формулы (I), а также к способу лечения заболеваний, вызываемых указанными выше бактериями и/или микроскопическими грибами, включающему введение нуждающемуся в этом пациенту указанного выше соединения формулы (I) или фармацевтической композиции на его основе.
Способ предназначен для лечения пациентов-млекопитающих, в том числе людей. Рекомендуемые дозы соединения формулы (I) составляют 0,01-10 мг/кг.
Поскольку соединения формулы (I) обладают антибактериальной и противогрибковой активностью, они могут также использоваться в качестве или в составе антисептических и/или дезинфицирующих средств. Такие средства могут быть изготовлены, например, в виде растворов с использованием различных растворителей, таких как вода и низшие спирты (например, 1-пропанол или 2-пропанол).
Также объектом изобретения являются новые производные гемина общей формулы (I)
- 5 020802
где Κι и К2 одинаковые или различные при условии, что оба К! и К2 одновременно не представляют собой -ОН, при этом либо один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-С1у-А1а-(И-Ьеи)Л1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Ьеи)-Х-(П-Ьеи)-Тгр-(П-Ьеи)-Тгр-МНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РБе. или Туг (грамицидин И), -Ы5-цикло-(Огп-Ееи-П-РБе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Лтд-С1у-Л8р-ОН или -АгдЛгд-Т гр-Т гр-Лгд-РБе-ОН, либо Κι и К2 оба представляют собой -ЫНСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ЫНСН(СН2ОН)СН2ОН, -ЫНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(ЛгдОМе)-АтдОМе, -НА или -Лгд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина
Меп+ представляет собой Ре2+ или Ре3+;
или их изомеры, или смеси изомеров, или их фармацевтически приемлемые соли.
Еще один аспект изобретения относится к способу получения описанных выше новых соединений формулы (I).
Соединения формулы (I) получают путем взаимодействия активированного по карбоксильной(ым) группе(ам) производного гемина с аминокомпонентом.
В качестве аминокомпонентов используют пептиды, аминокислоты (в основном, α-аминокислоты) или их аналоги, в частности Уа1-С1у-А1а-(П-Ееи)-А1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Ееи)-Х-(П-Беи)-Тгр-(ПЬеи)-Тгр-ЫНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РБе, или Тгр (грамицидин И), цикло-(Огп-Ееи-О-РБе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Лтд-С1у-Л5р-ОН, -ЫН2СН2СН2ОН, -С1уОМе, -ЫН2СН(СН2ОН)СН2ОН, -ЫН2СН2СН(ОН)СН2ОН, -С1и(ЛтдОМе)-ЛтдОМе, гистамин (НА), -Агд-Агд-Тгр-Тгр-Лгд-РБе-ОН и -АгдЛгдОМе.
Предпочтительно аминогруппы аминокомпонентов (например, α-аминогруппы аминокислот) ацилируют бис-Ы-оксисукцинимидным эфиром гемина; или при получении монопроизводных гемина 6(7)моно-Ы-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидным эфиром гемина; или активированным по одной карбоксильной группе производным гемина, причем в качестве активирующего агента используют ди-третбутилпирокарбонат в присутствии пиридина. Реакции проводят в ОМЕ в течение 0,5-2 ч при температуре от -15 до +30°С.
Таким образом, предлагаются новые эффективные антимикробные средства с антибактериальным и противогрибковым действием на основе производных гемина. Их преимуществами являются биосовместимость, биодеградируемость, активность в отношении ресистентных штаммов бактерий, отсутствие токсичности и побочных эффектов. При этом концентрации, в которых заявляемые соединения проявляют токсическое действие в отношении нормальных клеток, выше их МИК (минимальной ингибирующей концентрации) и МБК (минимальной бактерицидной концентрации) на 2-3 порядка. Следовательно, заявляемые соединения с большой вероятностью обладают широким спектром антимикробной активности, что делает их перспективными для применения в качестве лекарственных средств.
Изобретение далее иллюстрируется с помощью примеров, которые не предназначены для ограничения его объема.
Список сокращений
ИСС - Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид,
ИМ8О - диметилсульфоксид,
ИОРС - диолеоилфосфатидилхолин,
СтИ - грамицидин И,
НА - гистамин,
Нет - остаток гемина,
МеОН - метиловый спирт,
МЕ8 - 2-(Ы-морфолино)этансульфокислота,
- 6 020802
МН - среда МиеПег-НШоп,
Оме - метиловый эфир,
ΟΝό - Н-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидный эфир,
О'Ви - трет-бутиловый эфир,
Ζ - карбобензоксигруппа,
ДМСО - диметилсульфоксид,
ДМФА - Ν,Ν'-диметилформамид,
ИК - инфракрасная спектроскопия,
ИР - ингибирование роста,
КФ - карбоксифлуоресцеин,
МБК - минимальная бактерицидная концентрация,
МИК - минимальная ингибирующая концентрация,
МПК - минимальная подавляющая концентрация,
ОФ-ВЭЖХ - обращенно-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография,
Тг18 - трис-(гидроксиметил)аминометан,
ТСХ - хроматография в тонком слое,
ХЛФ - хлороформ,
ЭА - этилацетат.
Все величины, выраженные в процентах, относятся к процентам по массе, если не указано иначе. Примеры
В работе использовались аминокислоты и их производные Ь-ряда фирмы ВасНет (Германия), Кеапа1 (Венгрия), БОРС (§1дта-А1ДгюЬ), карбоксифлуоресцеин (Р1ика, Германия), МЕ§ (§1дтаА1ДгюЬ), Тг18 (§1дта-А1бг1сЬ), грамицидин Б (§1дта-А1ДгюЬ), грамицидин δ (Красфарма, Россия) хлорид калия ч.д.а. (Химмед, Россия).
Все растворители безводные, за исключением тех, которые использовались для экстракции из водных растворов. Индивидуальность полученных соединений проверяли методом ТСХ на пластинах Ктеке1де1 60 Р254 (Мегск, Германия) в системах хлороформ-метанол 9:1 (1), хлороформ-метанол 8:2 (2), хлороформ-метанол 5:3 (3), хлороформ-метанол-уксусная кислота 5:3:1 (4), метанол-уксусная кислота-вода 4:1:1 (5), бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:1 (6). Хроматограммы проявляли хлор-толидиновым реактивом, нингидрином, по свечению в УФ-свете.
Масс-спектры высокого разрешения получали на время-пролетном масс-спектрометре ЦЦгайех (Вгикег, Германия) методом матриксной лазерно-десорбционной ионизации (ТОР МАЬБ1), в качестве матрицы использовалась 2,5-дигидроксибензойная кислота.
ИК-спектры регистрировали на Фурье-спектрометре Мадпа 750 (№со1е1, США).
Электронные спектры снимали на спектрофотометре 1аксо модель υν/νδ 7800 (Япония).
ОФ-ВЭЖХ проводили на приборе ОШоп 305 (ОЛкоп, Франция).
Препаративную ОФ-ВЭЖХ проводили на колонке Ьипа 10μ, обращенная фаза С5, размеры 250x21,2 мм, (РЬепотепех, США) в следующих условиях: изократическая элюция 0,1% раствором ТРА в воде, скорость потока 4 мл/мин, поглощение регистрировали при длине волны 220 нм (7).
Динамику выхода КФ из липосом контролировали на флуориметре Сагу Есйрке (Хапан США).
Липосомы получали с помощью миниэкструдера Ауапб (АуапЦ Ро1аг ЫрШз, США).
Пример 1. 6,7-бис-(Метиловый эфир Х'-глицил)протогемин (IX) (соединение XV, Κι = Κ2 = -О1уОМе).
К суспензии 0,030 г (0,236 ммоль) Н-О1уОМе-НС1 в 1,5 мл БМР прибавляли 0,033 мл (0,236 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 3 мин. К полученному раствору прибавляли раствор 0,100 г (0,118 ммоль) 6,7-бис^-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 5 мл БМР и перемешивали 2 ч при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (1) и (2). Раствор концентрировали в вакууме до 0,5 мл и прибавляли 6 мл диэтилового эфира. Полученный остаток растворяли в ХЛФ, при этом наблюдалось выпадение белых кристаллов Е13№НС1, от которых избавлялись декантацией раствора. Растворитель удаляли в вакууме. Для введения противоиона С1- остаток растворяли в 15 мл смеси ХЛФ-МеОН (8:2), два раза встряхивали с 7,5 мл 0,5Ν раствора соляной кислоты и промывали водой до нейтральной реакции. Растворитель удаляли в вакууме. Вещество очищали на колонке (20x2 см) с силикагелем Кте8е1де1 60 Р254 (Мегск, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (8:2). Фракцию, содержащую вещество с ΚΤ 0,71 (2), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,063 г (67%), ΚΤ 0,26 (1), 0,71 (2). Электронный спектр, Хтах, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (115,9), 508 (9,38), 640 (3,81). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1737 (СО сл.эф.), 1648 (амид I), 1539 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 758,5.
Пример 2. 6,7-бис-Гистаминил-протогемин (IX) (соединение XIX, Κι = Κ2 = НА).
К раствору 0,026 г (0,236 ммоль) гистамина в 1,5 мл БМР прибавляли раствор 0,100 г (0,118 ммоль) 6,7-бис-^оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 4 мл БМР и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (2) и (3).
- 7 020802
Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона С1 остаток растворяли в 4 мл МеОН и прибавляли 0,093 мл (0,354 ммоль) 3,8Ν НС1/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество очищали на колонке (31x2 см) с силикагелем К1еке1де1 60 Р254 (Мегск, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (5:3). Фракцию, содержащую вещество с Ρί 0,64 (3), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,049 г (51%), Ρί 0,25 (2), 0,64 (3). Электронный спектр, Хтах, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 388 (49,1), 508 (4,18), 640 (1,76). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1644 (амид I), 1543 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 802,3.
Пример 3. 6,7-бис-[бис-(Метиловый эфир И“-Ь-аргинил)-Ь-глутамил]протогемин IX (XVIII, Ρι=Ρ2= -О1и(АтдОМе) -АгдОМе).
1. бис-(Метиловый эфир И“-аргинил)-Ь-глутаминовой кислоты дигидрохлорид.
К суспензии 0,069 г (0,266 ммоль) Н-Ат§ОМебНС1 в 2 мл ИМР прибавляли 0,074 мл (0,531 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 5 мин. К полученному раствору прибавляли 0,077 г (0,133 ммоль) бис-пентафторфенилового эфира Вос-глутаминовой кислоты, полученного ранее, и перемешивали 4 ч при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (5). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Маслообразный осадок отделяли от растворителя декантированием, остатки растворителя удаляли в вакууме. Вещество очищали на колонке (23x1 см) с силикагелем К1еке1де1 60 Р254 (Мегск, Германия), злюировали смесью метанол-уксусная кислота-вода 4:0,5:0,5. Фракцию, содержащую вещество с Ρί 0,67 (5), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,073 г (77%), Ρί 0,67 (5). [α]Β 25 - 8,53° (С 0,38; МеОН). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1735 (СО сл. эф.), 1653 (амид I), 1542, 1558 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 588,31.
К 0,073 г (0,0946 ммоль) бис-(метилового эфира ^-аргинилЕВос-Ь-глутаминовой кислоты (V) приливали 6 мл ~3Ν НС1/МеОН. Полученную суспензию перемешивали 2 ч при комнатной температуре. Контроль процесса осуществляли ТСХ в условиях (6). После достижения полной конверсии в аминосвободный дипептид растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Маслообразный остаток кристаллизовали под безводным диэтиловым эфиром, растворитель отделяли декантацией.
2. 6,7-бис-[(бис-Метиловый эфир Х-Р-аргинил)-Р-глутамил|протогемин IX (XVIII).
К суспензии полученного Н-О1и(Ат§ОМе)2ЭНС1 в 1,5 мл ИМР прибавляли 0,047 мл (0,335 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 2 мин. Наблюдали выпадение осадка Е13№НС1. К полученной суспензии прибавляли раствор 0,047 г (0,0558 ммоль) 6,7-бис-И-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 2 мл ИМР и перемешивали 22 ч при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли ТСХ в условиях (6). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона С1- остаток растворяли в 4 мл МеОН и прибавляли 3,8Ν НС1/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество трижды очищали на колонке (13x1 см) с сефадексом ЬН-20, элюировали МеОН. Фракцию, содержащую вещество с Ρί 0,07 (6), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,030 г (34%). Ρί 0,07 (6), Кфнаокиси алюминия) 0,70 (6). Электронный спектр, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (92,2), 508 (6,31), 636 (2,39). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1737 (СО сл.эф.), 1649 (амид I), 1528 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 1554,97.
Пример 4. 6,7-бис-Л-(2-гидроксиэтил)амид протогемина (IX) (XIV, Ρί = Ρ2 = -ХН-СН2-СН2- ОН).
К раствору 0,050 г (0,0591 ммоль) 6,7-бис-Л-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 3 мл ИМР прибавляли 0,010 мл (0,118 ммоль) аминоэтанола и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (2) и (3). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона С1 остаток растворяли в 3 мл МеОН и прибавляли 3,8Ν НС1/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество очищали на колонке (24x1 см) с силикагелем К1еке1де1 60 Р254 (Мегск, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (5:3). Фракцию, содержащую вещество с Ρί 0,52 (3), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,036 г (82,5%), Ρί 0,35 (2), 0,52 (3). Электронный спектр, Хтах, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (183,0), 508 (5,23), 640 (2,08). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1632 (амид I), 1549 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 702,5.
Пример 5. 6,7-бис-Л-(1,3-дигидроксипропан-2-ил)амид протогемина (IX) (XVI, Ρί = Ρ2 = -НЛСН(СН2ОН)-СН2ОН).
К раствору 0,050 г (0,0591 ммоль) 6,7-бис-И-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 3 мл ИМР прибавляли раствор 0,012 г (0,118 ммоль) 2-амино-1,3-пропандиола в 0,5 мл ИМР и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (4). Раствор концентрировали в вакууме до 0,5 мл и прибавляли 6 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона С1- остаток растворяли в 9 мл смеси ХЛФ-МеОН (8:2), один раз встряхивали с 4 мл 0,06Ν раствора соляной кислоты, насыщенного №С1, и промывали водой до нейтральной реакции. Растворитель удаляли в вакууме. Вещество очищали на колонке (21x2 см) с сефадексом ЬН-20, элюиро- 8 020802 вали МеОН. Фракцию, содержащую вещество с Κί 0,56 (4), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,018 г (36%), Κί 0,56 (4). Электронный спектр, Хтах, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (40,5), 508 (2,68), 640 (1,02). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1629 (амид I), 1550 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 762,0.
Пример 6. 6,7-бис-Ы-(2,3-дигидроксипропил)амид протогемина (IX) (XVII, Κι = Κ2 = -ΗΝ-Η2ΟСН(ОН)-СН2ОН).
К раствору 0,050 г (0,0591 ммоль) 6,7-бис-№оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 3 мл ΌΜΡ прибавляли 0,009 мл (0,118 ммоль) 3-амино-1,2-пропандиола и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (3) и (4). Раствор концентрировали в вакууме до 0,5 мл и прибавляли 6 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона С1- остаток растворяли в 3 мл МеОН и прибавляли 3,8Ν НС1/МеОН до достижения рН 4. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Вещество очищали на колонке (30x2 см) с силикагелем 1<1С5с1дс1 60 Р254 (Мегск, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН:АсОН (5:3:0,5). Фракцию, содержащую вещество с Κί 0,69 (4), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,023 г (46%), Κί 0,33 (3), 0,69 (4). Электронный спектр, Хтах, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 396-400 (24,2), 488 (2,14), 600 (1,40). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1634 (амид I), 1565 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 762,0.
Пример 7. 6(7)-Моно-(^а1-О1у-А1а-П-Теи-А1а-П^а1^а1-П^а1-Тгр-П-Теи-Х-П-Теи-Тгр-О-Теи-ТгрΝΗ-ίΉ2ίΉ2ΟΗ) амид протогемина (IX) (XII, один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой ^11-01)-^13-0^11^13-0^11^11-0^11-^3-0^11^-0^11-^13-0^11-^13^4СН2СН2ОН, где X = Тгр, Туг, РЬе).
К раствору 32 мг (0,017 ммоль) грамицидина О в 0,650 мл сухого ДМФА прибавляли 48 мкл 1Ν НС1 в метаноле. Реакционную смесь перемешивали 72 ч в темноте при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Выход 30 мг (98%). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 1854,0.
К раствору 30 мг (0,016 ммоль) деформилированного грамицидина О в 0,2 мл ДМФА прибавляли 13,2 мг (0,016 ммоль) 6(7)-моно-№окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира гемина и перемешивали 1,5 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме при 30°С. Остаток растворяли в хлороформе. Остаток очищали на колонке (30x2 см) с силикагелем К1е8е1де1 60 Р254 (Мегск, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН 9:1. Выход 23,5 мг (59%). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1634 (амид I), 1565 (амид II). Κί 0,65 (1).
Пример 8. 6(7)-Моно-[цикло-(Огп-Реи-0-РЬе-Рго^а1)2])амид протогемина (IX) (XIII, один из Κι и Κ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -^-[цикло-(Огп-Реи-0-РЬе-Рто^а1)2]).
К раствору 50 мг (0,077 ммоль) гемина в 0,5 мл сухого ДМФА прибавляли 1 мл пиридина и 25,3 мг (0,116 ммоль) ди-трет-бутилпирокарбоната и перемешивали 15 мин при комнатной температуре. Одновременно к суспензии 93,5 мг (0,077 ммоль) дигидрохлорида грамицидина δ в 0,5 мл ДМФА прибавляли 22 мкл (0,154 ммоль) триэтиламина и перемешивали 2 мин.
К полученному смешанному ангидриду гемина прибавляли раствор аминосвободного грамицидина δ и перемешивали 3 ч. Растворитель удаляли в вакууме при температуре 30°С. Остаток растворяли в хлороформе. Остаток очищали на колонке (30x2 см) с силикагелем К1е§е1де1 60 Р254 (Мегск, Германия), элюировали смесью ХЛФ-МеОН 12:1. Выход 20 мг (15%). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 1739,5. Электронный спектр, λ,,,,,,.. нм, хлороформ:метанол (4:1), (ε·10-3): 400 (105), 492 (10,6), 640 (6).
Пример 9. 6(7)-Моно-(Атд-01у-А8р)-протогемин (IX) (XI, один из Κ! и Κ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Атд-01у-А8р-ОН).
К суспензии 20 мг (0,038 ммоль) Атд-О1у-А8р^СН3СООН^СР3СООН в 0,5 мл ДМФА добавляли 5 мкл (0,038 ммоль) триэтиламина и перемешивали 2 мин. Затем добавляли 62 мкл (0,251 ммоль) бис-(ОХтриметилсилил)ацетамида и перемешивали при комнатной температуре 30 мин. В полученную суспензию вносили 32 мг (0,038 ммоль) 6,7-бис-№оксисукцинимидного эфира протогемина IX и реакционную массу перемешивали 6 ч. Затем растворитель удаляли в вакууме, осадок растворяли в метаноле для десилилирования карбоксильных групп трипептида. Целевой продукт перекристаллизовывали из метанола. Выход 20 мг (54%). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 981,3.
Пример 10. №-[6(7)-(протогемин IX)-ил]-А^§А^§Т^рТ^рА^§РЬе-ΟΗ (XX, один из Κ! и Κ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАгдТгрТгрАгдРЬе-ОН).
а) Твердофазный синтез АгдАтдТгрТгрАгдРЬе-ОН (XXI) на 2-хлортритилхлоридном полимере.
Определение степени присоединения стартовой аминокислоты.
К 0,1 г полимера, содержащего 1,43 ммоль активных групп, предварительно набухшего в 5 мл дихлорэтана, добавляли свежеприготовленный раствор 0,044 г (0,1143 ммоль) Ршос-РЬе-ОН и 0,040 мл (0,286 ммоль) триэтиламина в 2 мл дихлорэтана, перемешивали воздухом в течение 25 мин при 25°С. Реакцию останавливали прибавлением 2 мл смеси метанол-триэтиламин (9:1), перемешивали 1 мин. Пептидилполимер отфильтровывали, промывали дихлорэтаном (2 мин х 3), ОМР (2 мин х 2), изопропанолом (2 мин х 2), ОМР (2 мин х 2), изопропанолом (2 мин х 2), метанолом (2 мин х 1), диэтиловым эфиром (2 мин х 2), сушили на водоструе. Степень замещения смолы определяли спектрофотометрически. К
- 9 020802 мг полученного Ртос-РЬе-полимера добавляли 1 мл 20% раствора пиперидина в ΌΜΡ и перемешивали 20 мин при 25°С. Смолу отфильтровывали, отбирали аликвоту фильтрата и определяли оптическое поглощение раствора образовавшегося Ы-(9-флуоренилметил)пиперидина при 289 нм. Степень замещения смолы вычисляли по формуле с=Аза9хУх№/5800 где с - содержание активных групп в полимере, А289 - оптическая плотность раствора по отношению к контролю, (мг) - масса взятого полимера, 5800 - молярный коэффициент поглощения N-(9флуоренилметил)пиперидина. Содержание Ртос-РЬе в полимере составило 0,3 ммоль/г.
К 0,331 г полимера, содержащего 0,099 ммоль С1, предварительно набухшего в 3,3 мл дихлорэтана, добавляли свежеприготовленный раствор 0,115 г (0,3 ммоль) Ртос-РЬе-ОН и 0,034 мл (0,25 ммоль) триэтиламина в 0,6 мл дихлорэтана, перемешивали в течение 25 мин при 25°С. Реакцию останавливали прибавлением 6 мл смеси метанол-триэтиламин (9:1), перемешивали 1 мин. Пептидилполимер отфильтровывали, промывали дихлорэтаном (2 мин х 3), ΌΜΡ (2 мин х 2), изопропанолом (2 мин х 2), ΌΜΡ (2 мин х 2), изопропанолом (2 мин х 2), метанолом (2 мин х 1), диэтиловым эфиром (2 мин х 2). Объем одной порции промывочного раствора 2 мл. Синтетический цикл включает в себя: 1) 10-минутную активацию присоединяемой Ртос-аминокислоты (3 экв.) с Э1С (3 экв.) и НОВ! (3,6 экв.) в 1 мл ΌΜΡ; 2) деблокирование αаминогрупп обработкой 20% раствором пиперидина в ΌΜΡ (3 мл х 3) в течение 30 мин; 3) промывку пептидилполимера ΌΜΡ (1,5 мл х 8, по 3 мин); 4) дополнительную промывку пептидилполимера раствором НОВ! (3,6 экв.) в 1,5 мл ΌΜΡ в течение 3 мин; 5) конденсацию активированной Ртос-аминокислоты (3 экв.) с пептидилполимером в течение 24 ч; 6) промывку пептидилполимера ΩΜΓ (1,5 мл х 2, по 2 мин); 7) контроль полноты замещения аминогрупп при присоединении очередной Ртос-аминокислоты осуществляли с помощью нингидринового теста, при положительном результате теста проводили повтор стадии конденсации. Двукратно конденсацию осуществляли при присоединении следующих аминокислот: Агд2, Тгр3, Тгр4, Лгу'. Лгу6.
Условия синтеза пептида Н-Аг§Аг§ТгрТгрАг§РЬе-ОН
| № | Аминокислота (АК) | Количество реагентов | Время реакции конденсации, ч | Нингидриновый тест | |
| 1 | Ртос-Агд-ОН* | 0,118 г АК ммоль} | (0,3 | 24 | + |
| 0,048 г НОВЬ | (0,36 | ||||
| ммоль) | |||||
| 0,046 мл Д1С | (0,3 | ||||
| ммоль) | |||||
| Ртос-Агд-ОН* | 0,118 г АК ммоль) | (0,3 | 2 | - | |
| 0,048 Г НОВЬ | (0,36 | ||||
| ммоль) | |||||
| 0,046 мл ϋΙΟ | (0,3 | ||||
| ммоль) | |||||
| 2 | Ртос-Тгр-ОН | 0,127 г АК ммоль) | (0,3 | 24 | + |
| 0,048 Г НОВЬ | (0,36 | ||||
| ммоль) | |||||
| 0,046 мл Ц1С | (0,3 | ||||
| ммоль) | |||||
| Ртос-Тгр-ОН | 0,127 г АК ммоль) | (0,3 | 3 | - | |
| 0,048 г НОВЬ | (0,36 | ||||
| ммоль) | |||||
| 0,046 мл ϋΙΟ | (0,3 | ||||
| ммоль) | |||||
| 3 | Ртос-Тгр-ОН | 0,127 г АК ммоль) | (0,3 | 24 | + |
| 0,048 г НОВЬ | (0,36 | ||||
| ммоль) |
- 10 020802
| Ртос-Тгр-ОН | 0,046 мл ΏΙΟ (0,3 ммоль) 0,127 г АК (0,3 ммоль) 0,048 г НОВЬ {0,36 ммоль) 0,046 мл О1С (0,3 ммоль) | 3 | - | |
| 4 | Ртос-Агд-ОН* Ртос-Агд-ОН* | 0,118 г АК (0,3 ммоль) 0,048 г НОВЬ {0,36 ммоль) 0,046 мл ϋΙΟ (0,3 ммоль) 0,118 г АК (0,3 ммоль) 0,048 Г НОВЬ {0,36 ммоль) 0,046 мл Э1С (0,3 ммоль) | 24 5 | + + |
| Ртос-Агд-ОН* | 0,118 Г АК (0,3 ммоль) 0,048 г НОВЬ (0,36 ммоль) 0,046 мл С1С (0,3 ммоль) | 12 | ||
| 5 | Ртос-Агд-ОН* | 0,118 г АК (0,3 ммоль) 0,048 г НОВЬ (0,36 ммоль) 0, 046 мл ЫС (0,3 ммоль) | 16 | + |
| Ртос-Агд-ОН* | 0,118 Г АК ммоль) | (0,3 | 16 |
| 0,048 г НОВЬ | (0,36 | ||
| ммоль) | |||
| 0,046 мл ϋΐο | (0,3 | ||
| ммоль) |
* Перед реакцией боковую функцию Ртос-Агд-ОН в ΌΜΡ переводили в гидрохлорид добавлением 1 экв. 12Ν водного раствора НС1. Растворители отгоняли в вакууме, сушили над ΝαΟΗ.
После окончания синтеза и деблокирования α-аминогруппы 0,143 г пептидилполимера промывали ΌΜΡ (1 мл х 8, по 2 мин), промывали ΗΟΒΐ (3,6 экв.) в 1 мл ΌΜΡ.
б) №-[6(7)-(протогемин 1Х)-ил]-Аг§Аг§ТгрТгрАг§РЬе-ОН (XX).
К 0,29 г пептидилполимера (XX) с отщепленной Ртос-защитой прибавляли 3 экв. 6(7)-моно-№ окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидного эфира протогемина IX (II) в 4,5 мл ΌΜΡ, перемешивали 5 ч и оставляли на 24 ч при комнатной температуре. Геминпептидилполимер отделяли, промывали ΌΜΡ (2 мл х 7, по 3 мин). Нингидриновый тест отрицательный. Геминпептидилполимер промывали Όί','Μ (2 мл х 2, по 2 мин), сушили в вакууме водоструйного насоса и прибавляли к нему 4,5 мл смеси ΤΡΛ-ΤΡΕ-Όί','Μ (1:1:8), перемешивали в атмосфере азота 3 ч. Полимер отделяли, промывали смесью ΤΡΛ-ΤΡΕ-Όί',’Μ (1:1:8) (1 мл х 4, по 1 мин). Остаток растирали с охлажденным безводным диэтиловым эфиром (10-12кратным избытком по объему), выпавший осадок отфильтровывали, промывали х 2 эфиром, сушили в вакууме. Продукт очищали на колонке (150х20 мм) с сефадексом ЬН-20, элюируя целевое вещество смесью метанол-вода (20:1). Выход 0,027 г (25%). Кг 0,5 (6). Электронный спектр (метанол), 1тах, нм (ε·10-3, М-1 см-1): 393,4. (65,8), 474,8 (8,7), 578,0 (3,61), 607,2 (3,19). Масс-спектр, т/ζ: 1605 [М]+ (вычислено 1603,5).
- 11 020802
Пример 11. 6,7-бис-[(Метиловый эфир М“-Ь-аргинил)-Ь-аргинил]протогемин IX (XXI, К! = К2 = -Агд-АгдОМе).
а) Ν-оксисукцинимидный эфир Ы“,№,№-трибензилоксикарбониларгинина.
К раствору 0,410 г (0,709 ммоль) Ζ3Αγ§ΟΗ в 5 мл ХЛФ (безв.) добавляли 0,0816 г (0,709 ммоль) Νоксисукцинимида в 1 мл ΌΜΡ. Реакционную смесь охлаждали до -10°С и прибавляли по каплям в течение 10 мин 0,146 г (0,709 ммоль) ОСС в 5 мл ХЛФ. Реакционную смесь перемешивали 2 ч при 0°С, затем 5 ч при комнатной температуре и оставляли на 17 ч при 4-5°С. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (11). Выпавший осадок ОСИ отделяли двукратным фильтрованием, растворитель удаляли в вакууме. Остаток кристаллизовали из этилацетата петролейным эфиром. Твердый осадок сушили в вакууме над безводным СаС12. Выход 0,380 г (81%), КГ 0,68 (11). ИК-спектр Фурье, ν, см-1, таблетка КВг: 1742 (СО сл.эф.), 1610 (ΟΟΟΝΗ), 1541 (ΟΟΌΝΗ). 1262 (ароматика). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 673,7. Лит. [106]: Т.пл. 85-86. [α]η 25 -9,7° (С 2; диоксан).
б) Метиловый эфир Хх,№,№-трибензилоксикарбониларгиниларгинина.
К суспензии 0,023 г (0,0890 ммоль) Н-Аг§ОМе-2НС1 в 2 мл ΌΜΡ прибавляли 0,024 мл (0,178 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 5 мин. К полученному раствору прибавляли 0,060 г (0,890 ммоль) Ν-оксисукцинимидного эфира ^,№,№-трибензилоксикарбониларгинина, полученного ранее в смеси 1,5 мл ΌΜΡ, и перемешивали 22 ч при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли методом ТСХ в условиях (2). Растворитель концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 10 мл диэтилового эфира. Маслообразный осадок отделяли от растворителя декантированием, остатки растворителя удаляли в вакууме. Остаток растворяли в 15 мл смеси ХЛФ:МеОН (8:2) и промывали водой. Органический слой удаляли в вакууме. Вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле К1е§е1де1 60 Р254 (Мегск, Германия) (8x3 см), элюировали смесью ХЛФ-МеОН (9:1). Фракции, содержащие вещество с КГ 0,48 (2), собирали. Растворитель удаляли в вакууме. Выход 0,056 г (78%), КТ 0,48 (2). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1727 (СО сл.эф.), 1642 (амид I), 1548 (амид II). Массспектр, т/ζ: [М]+ 748.
в) 6,7-бис-[(Метиловый эфир №-Р-аргинил)-Р-аргинил]протогемин IX.
К 0,054 г (0,0511 ммоль) метилового эфира ^-аргинила-аргинина приливали 8 мл смеси метанолуксусная кислота-вода (6:1:1). К раствору прибавляли палладиевый катализатор и гидрировали при комнатной температуре 1 ч, контролируя ход реакции ТСХ в системе (2). После окончания реакции катализатор отфильтровывали, промывали водой, растворитель удаляли в вакууме при 40°С. К суспензии полученного Н-Аг§Аг§ОМе-3СН3СООН в 2 мл ЭМР прибавляли 0,0216 мл (0,1542 ммоль) Εΐ3Ν и перемешивали при комнатной температуре 2 мин. Наблюдали выпадение осадка Ει3Ν·Η0. К полученной суспензии прибавляли раствор 0,022 г (0,0257 ммоль) 6,7-бис-Л-оксисукцинимидного эфира протогемина IX (I) в 1 мл ЭМР и перемешивали 3,5 ч при комнатной температуре. Контроль за протеканием реакции осуществляли ТСХ в условиях (5). Раствор концентрировали в вакууме до 1 мл и прибавляли 7 мл диэтилового эфира. Для введения противоиона С1- остаток растворяли в 15 мл смеси ХЛФ-МеОН (8:2), два раза встряхивали с 7,5 мл 0,1Ν раствора соляной кислоты и промывали водой до нейтральной реакции. Растворитель удаляли в вакууме. Вещество очищали препаративной ТСХ на силикагеле К1е§е1де1 60 Р254 (Мегск, Германия) (11x14 см), элюировали смесью МеОН:АсОН:Н2О (4:1:1). Выход 0,015 г (40%). КГ 0,1 (5). Электронный спектр, Хтах, нм, ХЛФ:МеОН (8:2), (ε·10-3): 400 (79,2), 478 (5,72), 596 (3,41). ИК-Фурье спектр, ν, см-1, таблетка КВг: 1739 (СО сл.эф.), 1642 (амид I), 1531 (амид II). Масс-спектр, т/ζ: [М]+ 1270,4.
Пример 12. Исследование деструктирующего действия производных гемина общей формулы I в отношении липидных мембран.
Для изучения влияния производных гемина на проницаемость липидной мембраны была использована методика измерения индуцированного этими веществами выхода карбоксифлуоресцеина (КФ) из нагруженных им липосом по методике, описанной в [Υ.Ν. АиГоиеико, Т.В. §1ойоуа, 8.Σ. Коуа1скик, е1 а1. Ьагде ии8е1есйуе роге ίη 1ίρίά ЬПауег тетЬгаие Гогтей Ьу роШАеК скагдей рерППез сойаштд а зедиеисе оГ дгаттайт А//РЕВ8 Ьейегк, 2005, ν. 579, р. 5247-5252]. Для приготовления липосом использовали стоковый раствор ЭОРС в хлороформе с концентрацией 20 мг/мл. Стоковый раствор объемом 200 мкл упаривали в токе азота, добавляли 0,4 мл буферного раствора, содержащего 10 мМ Трис, 10 мМ МЕ§, 100 мМ КС1 100 мМ КФ, встряхивали 2 мин и подвергали трем циклам замораживания-оттаивания, встряхивая смесь после каждого цикла. Полученную смесь мультиламеллярных липосом продавливали через поликарбонатный фильтр с порами диаметром 0,1 мкм, используя миниэкструдер А\'апП (А\'апП Ро1аг Ь1р1Й8, США). Невключившийся в липосомы КФ отделяли гель-хроматографией на сефадексе 0-50. Сефадекс оставляли на ночь в воде для набухания. Колонку объемом 20 мл заполняли набухшим сефадексом, после чего уравновешивали 60 мл буфера, содержащего 10 мМ Тп8, 10 мМ МЕ§, 100 мМ КС1 (буфер А). Объем суспензии липосом, содержащих КФ, составлял 500 мкл (концентрация липида 0,045 мг/мл). Суспензию помещали в кювету, объем доводили до 2 мл буфером А. К полученной суспензии липосом добавляли 10 мкл 10-4 М раствора производного гемина общей формулы I в ДМСО. Динамику выхода КФ контролировали флуориметрически. Флуоресценцию карбоксифлуоресцеина возбуждали при
- 12 020802 длине волны 490 нм, регистрировали при 520 нм (ширина обеих щелей 5 нм). Относительное количество вышедшего из липосом красителя в конкретный момент времени рассчитывали по формуле а = (Гг - Р0)/(Рт - Ро) где Р0 и Р£ являются уровнем флуоресценции до и после добавления пептида соответственно, а Рт - значение флуоресценции после полного разрушения липосом детергентом ТгПоп Х-100, добавленным до конечной концентрации 2,4 мас.%.
На фиг. 1 представлена динамика выхода карбоксифлуоресцеина из липосом под действием производных гемина общей формулы I при соотношении липид/производное гемина 10:1 (моль/моль).
Пример 13. Исследование антибактериальной активности соединений общей формулы I.
Для определения антибактериальной активности веществ были использованы штаммы ВасШик киЬОйк ВКМ В-501, §1арйу1ососси8 аигеик 209Р, ЕЩегососсик ГаесаПк ВКМ В-871, Мюгососсик 1Шеик ВКМ Ас-2230 (получены из Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН). Основные параметры, которые характеризуют антибактериальную активность, это минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК). МИК - это наименьшая концентрация исследуемого соединения, полностью ингибирующая размножение бактерий в жидкой среде. МБК - это наименьшая концентрация, вызывающая гибель всех клеток.
МИК оценивали методом ингибирования роста культуры в жидкой среде с серийными разведениями веществ по модифицированной методике [Атк1егбат, Ό. 1996. §иксерНЫ1йу 1ек11пд оГ апПтюгоЫа1к ίη Псцйб теДа. рр. 52-111. Ιη Ьотап, ν., еб. АпЛЬюЛск ίη 1аЬога1огу тебюше, 4Ш еб. ХУППатк апб ХУНкОю ВаШтоге].
Бактерии культивировали и тестирование проводили в жидкой среде МН (среда Мие11ег-Нт1оп: сухой экстракт говяжьего бульона 4 г/л, крахмал 1,5 г/л, гидролизат казеина 17,5 г/л; §1дта-Р1ика каталожный номер 70192) при 37°С, 100% влажности и перемешивании. Для тестирования использовали культуру (с 4 по 7 пересев от разморозки) в экспоненциальной фазе роста.
Все исследуемые соединения кроме грамицидина И поглощают свет на длине волны 595 нм, используемой для оценки роста бактериальной культуры. Поэтому при оценке оптической плотности суспензии бактерий учитывали поправку на поглощение каждого соединения с учетом его концентрации в лунке. Ингибирование роста (ИР) бактерий рассчитывали в процентах через 20 ч инкубации клеток с веществами по оптической плотности (А), измеряемой в каждой лунке на длине волны 595 нм, используя формулу
ΗΡι = [(АкС - Ак0) - (А1ь - Αϊο) 3 ХЮ0/ (Аке - Ак0) (1) где индекс ί обозначает номер лунки, к - контрольная лунка с бактериями, в которую исследуемое соединение не вносится, 0 - измерение проводится сразу же после внесения исследуемого вещества в лунку, ΐ измерение через 20 ч после внесения вещества.
Для определения антибактериальной активности исследуемых соединений использовали следующий экспериментальный протокол. Криопробирку с культурой тестируемого штамма (ВасШик киЬ11Пк ВКМ В-501, §ПрПу1ососсик аигеик 209Р, ЕЩегососсик ГаесаПк ВКМ В-871, Мюгососсик Пйеик ВКМ Ас2230) в среде с 7% ДМСО, хранившуюся в жидком азоте, быстро размораживали, 100 мкл суспензии клеток добавляли к 1,5 мл свежей среды МН. Клетки растили в течение суток при температуре 37°С и перемешивании на орбитальном шейкере со скоростью 150 об/мин. Морфологические признаки штамма и отсутствие контаминации посторонними бактериями проверяли (а) путем посева на агаризованную (15 г/л агара) среду МН по форме и цвету образующихся колоний, (б) под микроскопом (Микмед-2, ЛОМО, Россия) с 40 х объективом по характерным морфологическим признакам клеток. Далее бактерии культивировали в 1 мл жидкой среды МН при температуре 37°С и перемешивании. Клетки пересевали каждые сутки. Начиная с 3-го и заканчивая 6-м пересевом, культуру клеток использовали для постановки тестов.
Для постановки теста 5 мкл бактериальной суспензии в стационарной фазе роста переносили в 1 мл стерильной среды МН и инкубировали до достижения экспоненциальной фазы роста (3-5 ч, 37°С при перемешивании со скоростью 150 об/мин). Чтобы оценить концентрацию микроорганизмов, измеряли оптическую плотность (А) полученной бактериальной культуры на длине волны 595 нм. Считали, что А=0,2, измеренная от 200 мкл суспензии клеток в 96-луночном планшете с учетом поглощения среды, соответствует 4х108 клеток/мл для обоих используемых штаммов. С учетом измерения концентрации клеток суспензию разбавляли средой МН до 5х104-1х105 клеток/мл и переносили в стерильный 96луночный планшет по 100 мкл на лунку. Затем к клеткам вносили исследуемые соединения и делали серийные двукратные разведения этих соединений в лунках планшета. Максимальная концентрация веществ в серии составляла 10-4 М, минимальная - 1,6х10-6 М. Исследование антибактериальной активности выполняли в 2 повторах для каждого соединения, а результат усредняли.
В качестве контролей использовали 100 мкл бактериальной культуры без добавления каких-либо веществ (4 лунки); бактериальную культуру, в которую добавлен 1% ДМСО или вода в объеме, как в лунках с максимальной концентрацией тестируемых соединений (4 лунки); 100 мкл стерильной среды МН без бактерий и без исследуемых веществ для контроля случайной контаминации в планшете (4 лунки).
- 13 020802
Сразу после внесения соединений с помощью планшетного фотометра Униплан (Пикон, Россия) в каждой лунке измеряли Αι0, а в контрольных лунках - Ак0, необходимые для расчета по формуле (1). Планшет инкубировали в течение 20 ч при температуре 37°С и перемешивании со скоростью 150 об/мин. Затем в каждой лунке измеряли Α1ί, а в контрольных лунках - Α1:ι и рассчитывали ингибирование роста бактерий по формуле (1). МИК определяли, как минимальную концентрацию исследуемого соединения, при которой ингибирование роста составляет 100%.
Для определения МБК среду из лунок, где концентрация исследуемого соединения равнялась МИК, МИКх2 и МИКх4, переносили на чашки Петри с агаризованной средой МН (15 г/л агара) и равномерно растирали по площади чашек стерильными шпателями. Чашки инкубировали 2 суток. МБК определяли как наименьшую концентрацию исследуемого соединения, при которой колонии на чашке Петри не вырастают.
Все тесты на антибактериальную активность повторили с перерывом в 2 дня, чтобы оценить изменчивость устойчивости бактериальных клеток к действию исследуемых соединений.
Таблица 1
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении грамположительных бактерий ВасШик 8ΐιόΙί1ί8 ВКМ В-501
| Вещество | МИК, мкМ | МБК, мкМ |
| V | 19+7 | 38 + 13 |
| VI | 38 + 13 | 75+25 |
| VII | 3,1+0,8 | 3,1+0,8 |
| VIII | 6,3+1,6 | 9+4 |
| IX | 50+13 | 100+25 |
| XI | 12,5+4 | 25 + 7 |
| XII | 38 + 13 | 38 + 13 |
| XIV | 1,6+0,4 | 6,3+ 1,6 |
| XV | 12,5+4 | 25 + 7 |
| XVI | >2 0 0 | >200 |
| XVII | >200 | >200 |
| XVIII | 1,6+0,41 | Не достигнута |
| XIX | 100+ 25 | Не достигнута |
| Нет | 13+4 | 50 ± 13 |
| Грамицидин 3 | 2,5 | 5 |
Таблица 2
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении грамположительных бактерий §1арЬу1ососси8 аигеиз 209Р
| Вещество | МИК, мкМ | МБК, мкМ |
| V | 50 | >4002 |
| VII | 50 | 200 |
| VIII | 25 | 200 |
| IX | 100 | 400 |
| XI | 12,5 | Не достигнута |
| XII | 50 | >502 |
| XIV | 1,6 | 3,2 |
| XV | 50 | 50 |
| XVI | >200 | >200 |
| XVII | >200 | >200 |
| XVIII | 6,3 | >502 |
| XIX | 200 | Не достигнута |
| Нет | 100 | 200 |
| Грамицидин 3 | 0,8 | 3,1 |
- 14 020802
Таблица 3
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении грамположительных бактерий Еи!егососсик ГаесаПк ВКМ В-871
| Вещество | МИК, мкМ | МБК, мкМ |
| V | 100 | 400 |
| VII | 50 | 400 |
| VIII | 12,5 | 25 |
| IX | 200 | >4005 |
| XI | 100 | Не достигнута |
| XII | 50 | >50·* |
| XIV | 25 | 100 |
| XV | 100 | Не достигнута |
| XVI | >200 | >200 |
| XVII | >200 | >200 |
| XVIII | 12,5 | >50') |
| XIX | 200 | Не достигнута |
| Нет | 1000 | >1000 |
| Грамицидин 5 | 3,1 | 6,3 |
Таблица 4
Характеристики антибактериальной активности соединений общей формулы I в отношении грамположительных бактерий Мгсгососсик 1и!еик ВКМ Ас-2230
| Вещество | МИК, МКМ | МБК, МКМ |
| V | 3,1 | 6,3 |
| VI | 25 | 25 |
| VII | 1,6 | 6,3 |
| VIII | 6,3 | 12,5 |
1 соединение обладает бактериостатическим эффектом, оно ингибирует размножение бактерий в указанной концентрации, но не убивает их;
2’3 МБК не достигнута. Приведена максимальная использованная концентрация вещества.
Таким образом, соединения VII, VIII и XVIII, подавляют рост грамположительных бактерий 8. аигеик в концентрациях до 50 мкМ (табл. 2).
Бактерии М. 1и!еик высокочувствительны к действию данных соединений. Соединения V, VI, VII, VIII, IX, гемин, ΟγΌ и грамицидин 8 ингибируют рост М. 1и!еик в концентрациях до 30 мкМ. При этом для соединений V, VII, VIII, ΟγΌ и грамицидина 8 (табл. 4) МИК достаточно низка - меньше 10 мкМ. Соединения Н и VI несколько менее активны (МИК = 12,5 и 25 мкМ соответственно). Все исследованные соединения проявили бактерицидную активность в отношении М. 1и1еик, причем МБК не превышает 30
- 15 020802 мкМ.
Энтерококки Е. ГаесаБк в среднем более устойчивы к действию данных соединений, чем микрококки М. 1п1епк и стафилококки 8. Гигеик. Наиболее эффективным соединением в отношении Е. ГаесаБк оказалось соединение XVIII: МИК 12,5 мкМ.
Все исследованные соединения проявляют активность в отношении грамположительных бактерий В. киБББк. Наиболее активными оказались вещества VII и XVIII (МИК меньше 10 мкМ).
Пример 14. Определение специфической активности производных гемина в отношении штаммов резистентных бактерий.
Материалы и методы.
Испытуемые препараты - производные гемина, растворимые в воде (VII, XVIII) и растворимые в ДМСО (VIII, XV, XIV). В качестве препарата сравнения был взят ванкомицин. Каждое вещество испытывалось в трех повторах.
В работе использовались одноразовые стерильные 96-луночные плоскодонные планшеты, чашки Петри, пипетки, наконечники и пробирки (Пан-Эко, Москва).
Питательные среды: бульон Мюллера-Хинтон для работы готовили из сухих сред (Мие11ег Нш1оп Ьго1Б. АсптеЛа. ВаШтоге) и стеризовали автоклавированием при 121°С в течение 15 мин.
Для культивирования 81арБу1ососспк аигеик использовали готовую сухую среду - триптиказосоевый агар (ТпрБсаке 8оу Лдаг, ВВЬ). Для культивирования Ейетососсик ГаесаБк использовали готовую сухую среду - Колумбийский агар (Со1итЫа Лдаг Ваке, ВВЬ). Среды стерилизовали автоклавированием при 121°С в течение 15 мин.
Исследуемые резистентные бактериальные штаммы.
Г рамположительные:
8!арБу1ососсик аигеик № 25923 АТСС (Лтепсап Туре СиБиге СоБесБоп);
8!арБу1ососсик аигеик № 100 КС;
81арБу1ососспк ерИегпиШк № 533;
Етегососспк ГаесаБк № 559;
Етегососспк Гаесшт № 569.
Бактериальный инокулюм был постоянный и составлял 5х 105 КОЕ/мл.
Полученные результаты представлены в таблицах (Мср).
Постановка эксперимента.
Для водорастворимых соединений с 2 по 8 лунки вносили растворитель (вода) по 15 мкл, затем в 1 лунку вносили 30 мкл стокового раствора исследуемого соединения в воде с концентрацией 1 х 103 М и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,007х103 М. Из каждой лунки отбирали по 10 мкл и добавляли по 190 мкл бактериальной культуры (105 КОЕ).
Для растворимых в ДМСО соединений с 2 по 8 лунки вносили растворитель (ДМСО) по 10 мкл, затем в 1 лунку вносили 20 мкл стокового раствора исследуемого соединения в воде с концентрацией 5х103 М и последовательным двукратным разведением доводили его концентрацию до 0,039х103 М. Из каждой лунки отбирали по 2 мкл и добавляли по 198 мкл бактериальной культуры (105 КОЕ).
В качестве контроля включали лунки, не содержащие тестируемых препаратов (контроль роста культуры). Кроме того, ставился контроль чистоты питательных сред и растворителей. Планшеты инкубировали в термостате при 36°С в течение 24 ч.
Оценку роста культур проводили визуально, сравнивая рост микроорганизмов в присутствии изучаемых тест-соединений с ростом культуры без них. За МПК - минимальную подавляющую концентрацию принимали последнее разведение испытуемых препаратов с подавлением роста бактериальной культуры.
Полученные результаты представлены в таблицах.
- 16 020802
Определение МИК производных гемина в отношении Гр+ штаммов (χ 10-5 М)
| Производные гемина | ЕС.аигеив 25923 | 51.аигеив 100 КС | 8к. ертйепп 533 | ЕпЬ. (аесаПг 559 | Еп1.£аес1ит 569 |
| II | 1,0 | >1,0 | >1,0 | 0,42 | 0,33 |
| VII | 2,5. | 5,0 | 2,5 | 2,5 | >5,0 |
| VIII | 0,260 | 0,625 | 0,521 | 0,312 | >5,0 . |
| XIV | 0,521 | >5,0 | 0,521 | 0,625 | >5,0 |
| XV | 2,5 | >5,0 | 2,5. | >5,0. | >5,0 |
| XVII г | 0,078 | 0,156 | 0,078 | 0,073 | 0,625 |
| XXI | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | >5,0 |
| Нет | >1,0 | >1,0 | >1,0 | >1,0 | >1,0 |
Таблица 5
Таблица 6
Определение МИК ванкомицина в отношении Гр+ и Гр- штаммов (мкг/мл)
| Бактериальные штаммы | Ванкомицин |
| ЗСарЬу1ососсиз аигеиз В' 25923 АТСС | 1,0 |
| 3£арку1ососсиз аигеиз Я’ 100 КС | 1,0 |
| ЗСар1гу1ососсиз ерлдегтасИз № 533 | 1,0 |
| Епкегососсиз {аесаПв № 559 | 1, о |
| ЕпЬегососсиз £аес1ит № 569 | >32,0 |
Таким образом, производные гемина общей формулы I активны в разной степени в отношении Гр+ штаммов резистентных бактерий.
Пример 15. Методика определения гемолитической активности соединений общей формулы I.
Для исследования гемолитической активности использовали свежую капиллярную кровь человека. Эффективность гемолиза определяли по выходу гемоглобина из эритроцитов в среде КРМК1640 (без фенолового красного, с добавлением 10% фетальной телячьей сывотки и 20 мМ Ь-глутамина) при начальной плотности эритроцитов (1,0±0,1)х107 клеток/мл через 3 ч инкубации с агентом (37°С, 5% СО2, 100% влажность, перемешивание на орбитальном шейкере).
В качестве характеристики гемолитической активности использовали долю гемоглобина, вышедшего из эритроцитов во внешнюю среду. Эритроциты, тени и промежуточные формы, содержащие не вышедший гемоглобин, отделяли центрифугированием. Гемоглобин определяли по поглощению супернатанта на длине волны 414 нм (вблизи максимума полосы Соре гема).
Поскольку все исследуемые соединения кроме СгЭ поглощают свет на данной длине волны, при расчете доли вышедшего гемоглобина учитывали поправку на поглощение каждого соединения с учетом его концентрации. Выход гемоглобина (ВГ) рассчитывали в процентах по оптической плотности (А) на длине волны 414 нм, используя формулу
ВГ = [ (Ае1 “ - Ато) ] Х100/ (Ае2 - Аео) (2) где индекс е обозначает супернатант образца с эритроцитами, ί - добавленную концентрацию соединения, о - супернатант образца без добавления исследуемых соединений, т - раствор без эритроцитов, 1 супернатант образца с 100% лизированными эритроцитами. Доля вышедшего гемоглобина равна доле лизированных эритроцитов при условии, что лизис происходит полностью, то есть при лизисе из эритроцита выходит весь содержащийся в нем гемоглобин.
Исследование гемолитической активности выполняли в 2 повторах для каждого соединения, а результат усредняли.
Для определения гемолитической активности соединений использовали следующий экспериментальный протокол. Кровь (100 мкл) отбирали из пальца здорового донора в пробирку, содержащую 0,9 мл среды КРМК1640 (без фенолового красного) и гепарин (10 ед/мл). Клетки осаждали центрифугированием в течение 5 мин при 200хд и переносили в 10 мл среды КРМЫ640 (без фенолового красного, с добавлением 10% фетальной телячьей сывотки и 20 мМ Ь-глутамина, далее - полная среда). Плотность эритроцитов в суспензии определяли подсчетом в камере Горяева с помощью микроскопа Микмед-2 (ЛОМО, Россия) и разбавляли полной средой до (2±0,2)х 107 клеток/мл.
- 17 020802
Методом последовательных разведений с шагом в 2 раза готовили серии растворов соединений в полной среде (максимальная концентрация 200 мкМ, минимальная - 1,6 мкМ, объем 75 мкл). К приготовленным растворам быстро добавляли 75 мкл суспензии эритроцитов с плотностью (2±0,2)х107 клеток/мл.
Для отрицательных контролей к 75 мкл суспензии эритроцитов с плотностью (2±0,2)х 107 клеток/мл добавляли: а) 75 мкл полной среды (4 образца); б) 60 мкл полной среды и 15 мкл воды (4 образца) или в) 73,5 мкл полной среды и 1,5 мкл ДМСО (4 образца). Для определения 100%-ного выхода гемоглобина (положительный контроль, 4 образца) эритроциты из 75 мкл суспензии осаждали центрифугированием (5 мин при 200хд), осадок ресуспендировли в деионизированной воде (50 мкл), после полного лизиса объем пробы доводили полной средой до 150 мкл.
Все образцы (кроме положительного контроля) инкубировали в течение 3 ч при температуре 37°С, 5% СО2, 100% влажности и перемешивании со скоростью 150 об/мин. Затем все образцы центрифугировали в течение 5 мин при 2700хд. В лунки 96-луночного планшета переносили по 130 мкл супернатанта из каждого образца. После чего с помощью фотометрического анализатора Униплан (Пикон, Россия) измеряли оптическую плотность в лунках планшета на длине волны 414 нм. Выход гемоглобина рассчитывали по формуле (2). На фиг. 2 представлена гемолитическая активность производных гемина и соединений сравнения - грамицидина 8, грамицидина Ό и гемина. Данные представлены в виде среднего по 2 повторам ± стандартное отклонение.
Соединение XII не проявляет гемолитическую активность вплоть до 100 мкМ. Вещества V, VI, VIII, IX, XVIII имеют низкую гемолитическую активность (фиг. 2), причем эффективность гемолиза всех синтезированных соединений значительно ниже, чем у гемина, и весьма низка даже при максимальной концентрации соединений (100 мкМ).
Пример 16. Исследование цитотоксической активности соединений общей формулы (I) в отношении лейкоцитов человека.
Суммарную фракцию лейкоцитов выделяли из крови человека методом свободной седиментации, для чего использовали свежеотобранную венозную кровь здорового донора.
Кровь (10 мл) с добавкой 10 ед./мл гепарина выдерживали в течение 2,5 ч при температуре 15-18°С в темноте. Отбирали светлый верхний слой жидкости (4 мл) над столбом оседающих эритроцитов, трижды отмывали сбалансированным солевым раствором Хенкса и ресуспендировали в среде КРМЫ640 (с добавлением 8% эмбриональной бычьей сыворотки, 2 мМ Ь-глутамина и 10 мМ НЕРЕ8, далее - полная среда).
Концентрацию лейкоцитов и эритроцитов в суспензии определяли подсчетом в камере Горяева, после чего суспензию доводили полной средой до концентрации лейкоцитов (1,0±0,1)х106 клеток/мл. При этом концентрация эритроцитов в используемой для измерений суспензии клеток крови не превышала 30% от концентрации лейкоцитов.
Для определения цитотоксичности исследуемых соединений для лейкоцитов человека суспензию клеток переносили в лунки стерильных 96-луночных планшетов, методом последовательных разведений с шагом в 2 раза вносили исследуемые вещества (диапазон тестируемых концентраций: 3,2-100 мкМ для соединений ΟγΌ и грамицидина 8 8-500 мкМ для соединения XIII; 8-1000 мкМ для соединений V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XIV, XV, XIX и Нет) и аккуратно перемешивали. Эксперимент выполняли в двух параллельных повторах.
В качестве контролей использовали клетки, к которым добавляли эквивалентное количество растворителя, в котором были приготовлены исследуемые вещества: воду для соединений VII и X; водный раствор ДМСО для соединения V, VI, VIII, IX; ДМСО для ΟγΌ, грамицидин 8, Нет, XI, XIII, XIV, XV, XIX. Дополнительный контроль - суспензия лейкоцитов без всяких добавок.
Клетки инкубировали с исследуемыми соединениями 3 ч (37°С, 5% СО2, 100% влажность). Гибель лейкоцитов оценивали при помощи флуоресцентной микроскопии. Для выявления мертвых и живых клеток использовали окрашивание йодистым пропидием (проникает только в ядра мертвых клеток) и Ноесйк! 33342 (окрашивает все ядра). Клетки инкубировали в планшетах 15 мин одновременно с йодистым пропидием и Ноесйк! 33342 (37°С, 5% СО2), а затем планшеты помещали под микроскоп для анализа.
Долю погибших клеток определяли по флуоресцентным изображениям клеток в синей (НоесНк! 33342) и красной (йодистый пропидий) областях спектра, полученным при помощи флуоресцентного микроскопа Ахю ОЪкегуег (2екк, Германия) с 10х объективом (Р1ап-№ойиаг 10х/0,3). Использовали следующие наборы флуоресцентных фильтров. Для йодистого пропидия: полосовой фильтр на возбуждение 530-585 нм; барьерное дихроичное зеркало 600 нм, длинноволновый барьерный анализирующий фильтр 615 нм. Для Ноесйк! 33342: полосовой фильтр на возбуждение 359-372 нм; барьерное дихроичное зеркало 395 нм, длинноволновый барьерный анализирующий фильтр 397 нм.
С помощью цифровой фотокамеры регистрировали три типа изображений клеток: а) в проходящем белом свете; б) флуоресцентное изображение в синей области спектра с ультрафиолетовым возбуждением; в) флуоресцентное изображение в красной области спектра с возбуждением зеленым светом. Фотографировали не менее 4 полей зрения на лунку в разных ее областях. Результат анализа усредняли по
- 18 020802
1000-1500 клеток для каждой концентрации исследуемых соединений.
Таблица 7
Цитотоксическая активность соединений общей формулы (I) в отношении лейкоцитов человека
| Вещество | Гибель лейкоцитов в присутствии вещества в концентрации 1 мМ |
| Нет | 40±2 |
| V | 5,8+0,3 |
| VI | 10,5±0,5 |
| VII | 8,0±0,8 |
| VIII | 6,1±0,3 |
| IX | 3,1+0,3 |
| X | 4,9±0,3 |
| XI | 8,6±0,4 |
| XIII | 14±2 |
| XIV | 17,5±0,7 |
| XV | 13±1 |
| XIX | 13±1 |
| Фоновые значения гибели лейкоцитов | |
| без добавок | 4,5±0,7 |
| при добавлении воды | 4,2±0,7 |
| при добавлении 10% ДМСО | 4,9±0,4 |
при добавлении 100% ДМСО
8,1±0,7
Соединения V, VII, VIII, IX и X в концентрации до 1 мМ не вызывают гибель лейкоцитов из крови человека. При этом небольшой токсический эффект растворов грамицидина δ, XI, в ДМСО полностью обусловлен токсическим действием растворителя (ДМСО). Для соединений VI, XIII, XIV, XV и XIX обнаружен слабый токсический эффект, который проявляется при концентрациях, близких к 1 мМ, для соединений XIV, XV и XIX, при концентрациях больше 125 мкМ для соединений VI и XIII. Соединение сравнения - гемин обладает существенно более высокой токсичностью в отношении лейкоцитов по сравнению с заявляемыми соединениями (40% против 3-17%, табл. 7).
Полученные результаты свидетельствуют о перспективности заявляемых веществ для создания на их основе нетоксичных, биосовместимых антимикробных агентов, в том числе для профилактики и лечения заболеваний, вызванных различными грамположительными бактериями, в том числе резистентными.
Пример 17. Исследование противогрибковой активности соединений общей формулы (I).
Объектом воздействия являлись клетки музейного штамма Сгур'ососсик пеоГогтапк № 3465, а также клетки музейного штамма СапЛИа а1Ысапк № 927, выращенных на глюкозо-пептон-дрожжевой среде при 32°С в течение 1 суток. В качестве соединения сравнения использовались антимикотики пимафуцин, амфотерицин, флуконазол.
Эксперимент проводили в круглодонных 96-луночных планшетах фирмы Ленмедполимер в двух повторностях. В первый столбец (0) вносили 10 мкл стокового раствора водорастворимых препаратов с концентрацией 10-2-10-3 моль/л, во второй также 10 мкл плюс 10 мкл растворителя, соответствующего данному соединению, суспендировали и переносили 10 мкл в следующую ячейку, и т.д. до 8 ячейки ряда. Стоковые растворы водонерастворимых соединений общей формулы I (V, VIII, XII, XIII, XIV, гемин) готовили в ДМСО, разбавляли ДМСО и средой. Концентрация ДМСО в реакционной ячейке составляла < 5%.
Затем в каждую ячейку вносили 190 мкл суспензии клеток культуры Сг. пеоГогтапк в синтетической питательной среде (конечная концентрация клеток примерно 103 КОЕ/мл), содержащей рНиндикатор бромкрезоловый синий (рН среды 5,5, цвет индикатора - голубой). При понижении рН до 4,5 цвет индикатора в среде изменяется на желтый, что является признаком роста клеток гриба. Синтетическая среда состояла из следующих компонентов: соли, аминокислоты, микроэлементы, витамины, антибиотик и глюкоза (всего 30 компонентов) |Уагго\у Ό. Ме(НоЛк Гог (Не 1ко1айоп, тшп1епапсе апЛ Цепййсайоп оГ уеакН/Лп: ТНе УеакК А Тахопотю δΐиЛу. 1998. Е1кеу1ег. ЕЛ. Ьу Кийктап С.Р, Ре11 ТУ., р.77-100]. После внесения суспензии клеток Сг. пеоГогтапк планшет в течение 1 ч инкубировали при 32°С с пере- 19 020802 мешиванием, затем переносили в стационарный термостат и инкубировали 2 и 5 суток при 27°С. После внесения суспензии клеток С. а1Ысап5 планшеты инкубировали в течение 1 ч при 32°С с перемешиванием, затем переносили в стационарный термостат и инкубировали 1 и 4 суток при 27°С.
Результаты приведены в табл. 8 и 9.
Таблица 8
Рост культуры Сгур1ососси8 иеоГогтаи8 в присутствии соединений общей формулы I
| Препараты | Рост тест-культуры при разных разведениях препаратов на 2 сутки | ||||||||
| 0 | : 2 | : 4 | : 8 | 16 | 32 | 64 | 128 | ||
| 5,00*10 5М | |||||||||
| 1 | Грамицидин 5 | - | - | - | - | - | + | + | + |
| 2 | Нет | + | + | ± | ± | ± | ± | + | + |
| 3 | V | ± | ± | + | ± | ί | ± | + | |
| 4 | VII | - | + | + | + | -1- | + | 4- |
(±) - слабый рост, индикатор желтый, но осадок выросших клеток в виде размытого пятна; (+) - сильный рост, индикатор желтый, осадок клеток в виде плотного компактного пятна; * на 2 сутки голубой цвет до 6 ячейки, но с небольшим осадком на дне; на 5 сутки желтый;
** концентрация препаратов в 0 ячейке составляет 5,00 х 10-4 М.
Таблица 9
Рост культуры Саийгйа а1Ысаи8 в присутствии соединений общей формулы I
- 20 020802
| XX | ± | + | + | + | + | + | + |
| Контроль | + | + | + | + | + | + | + |
| Пимафуции | - | - | - | - | - | + | + |
Контрольные посевы из ячеек, проведенные через 1-4 сутки воздействия соединениями общей формулы I, показали практически фунгицидный эффект соединения XVIII в концентрации около 5х 10-5 М.
Кроме того, соединение XII оказалось эффективным против одного из возбудителей крипотоккоза Сгур!ососси8 1шпйсо1и5 с МПК 12,5 мкМ.
Таким образом, соединения общей формулы I проявляют фунгистатический и/или фунгицидный эффекты, величина которых зависит от строения и проявляется в интервале концентраций от 10-4 до 10-6 М.
Пример 18. Примеры лекарственных форм.
А. Желатиновые капсулы.
Состав вводимого в капсулу порошка:
Соединение, соответствующее общей 1-50 мг формуле (I)
Оксид магния 50 мг
Крахмал 100-200 мг
Указанные выше ингредиенты смешивают и смесь вводят в твердые желатиновые капсулы в количестве 151-285 мг.
Б. Таблетированная форма.
Таблетированную форму получают, используя приведенные ниже ингредиенты:
Соединение, соответствующее общей формуле (I)
Крахмал картофельный Поливинилпирролидон Магния стеарат
1-50 мг
100 мг мг мг
Лактоза 48-82 мг
Аэросил 5 мг
Компоненты смешивают и прессуют для образования таблеток весом 200 мг каждая. В. Аэрозольная форма.
Состав аэрозольной смеси, рассчитанной на 10 приемов:
Соединение, соответствующее общей 10-100 мг формуле (1> Магния сульфата Лактоза
150 МГ
110-140 мг
Соединение смешивают с наполнителями и помещают в специальное устройство для распыления.
Г. Суппозитории.
В качестве суппозиторной основы могут быть использованы основы, не растворимые в воде - масло какао;
основы, растворимые в воде или смешиваемые с водой - желатино-глицериновые или полиэтиленоксидные;
комбинированные основы - мыльно-глицериновые.
Пример состава суппозитория.
Соединение, соответствующее общей формуле (I) - 1-50 мг,
Масло какао - количество, необходимое для получения суппозитория.
При необходимости возможно изготовление ректальных, вагинальных и уретральных суппозиториев с соответствующими наполнителями.
Д. Мази.
В качестве мазевой основы могут быть использованы углеводородные мазевые основы - вазелин белый и желтый (УазеПпит а1Ьит, Vа8е1^ηит Йауит), вазелиновое масло (О1еит Vа8е1^п^), мазь белая и жидкая (Ип^иейит а1Ьит, ипдиеп!ит йауит), а в качестве добавок для придания более плотной консистенции - твердый парафин и воск;
- 21 020802 абсорбтивные мазевые основы - гидрофильный вазелин ^аке^ит ЬубгорЬуНсит), ланолин (Ьапо1шит), кольдкрем (ШдиеШит 1етепк);
мазевые основы, смываемые водой - гидрофильная мазь (ипдиеШит ЬубгорЬу1ит); водорастворимые мазевые основы - полиэтиленгликолевая мазь (Ипдиеп1ит О1усоНк Ро1уаеГЬу1ет), бентонитовые основы и другие.
Пример состава мази.
Соединение соответствующее общей 0,01 г формуле (I) Вазелин
0,1 г г
Мази изготавливают по соответствующей технологии.
Е. Раствор для инъекций.
В качестве растворителя при приготовлении раствора для инъекций могут быть использованы 0,9% раствор натрия хлорида, дистиллированная вода, раствор новокаина. Форма выпуска - ампулы, флаконы, шприц-тюбики.
Состав раствора для инъекций:
Соединение, соответствующее общей формуле (I)
Вода дистиллированная
1-50 мг
1-2 мл
Возможно изготовление различных лекарственных форм для инъекций - стерильных растворов, стерильных порошков и таблеток.
Примеры композиций для дезинфицирующих и антисептических средств.
0,001А. Соединение, соответствующее общей формуле (I)
1- пропанол
2- пропанол вода дистиллированная
1%
30-40%
10-70%
10-60%
Б. Соединение, соответствующее общей 0,001формуле I 1%
Четвертичное аммониевое основание (или их
2-10% смесь)
Вода дистиллированная до 100%
В. Соединение, соответствующее общей 0,001формуле I 1%
Диметилсульфоксид (ΌΜ8Ο) 1-20% или полиэтиленгликоль (РЕС) М.М. 200-12000 1-20% вода дистиллированная до 100%
Г. Соединение, соответствующее общей 0,001формуле I 1%
Смесь спиртов, ОМЗО, РЕС, ПАВ в различных
1-80% сочетаниях и соотношениях вода дистиллированная до 100%
Д. Соединения, соответствующие общей формуле I вода дистиллированная
0,0011% до 100%
Таким образом, производные гемина общей формулы (I) обладают антибактериальной и противогрибковой активностью, в том числе в отношении патогенного для человека 8. аигеик и его резистентных
- 22 020802 штаммов. Кроме того, практически все заявленные производные гемина в различной степени обладают способностью увеличивать проницаемость модельных липидных мембран, что, как известно из литературных данных, представляет собой важную часть механизма антимикробного (антибактериального, противогрибкового,) действия антимикробных агентов.
Эффективность соединений, соответствующих общей формуле I, подтверждает их пригодность для промышленного применения в составе дезинфицирующих, антисептических и терапевтических средств с противогрибковым и антибактериальным действием.
Claims (57)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение соединения общей формулы (I) где К! и К2 одинаковые или различные, при этом либо один из К! и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -АгдАгдТгрШАгдЕеиЕу^С1и(ОМе)ОН. -А^дТ^рН^δА^д^еи^уδС1и(ОМе)ОН, Аа1-С1у-А1а-(О-Ееи)-А1а-(ЭVа1)-Vа1-(^-Vа1)-Т^р-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Т^р-(^-^еи)-Т^р-NНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -^-цикло-(От-Ееи-П-РЬе-РгоАа1)2 (грамицидин δ), -А^д-С1у-Аδр-ОН или -Агд-АгдТгр-Тгр-Агд-РЬе-ОН, либо К! и К2 оба представляют собой -АгдОМе, ФегОМе. -вА1аНА, -βА1аН^δ, -NНСН2СН2ОН, -С1уОМе, -NНСН(СН2ОН)СН2ОН, -NНСН2СН(ОН)СН2ОН, -С1и(АгдОМе)-АгдОМе, -НА или -АгдАгдОМе, где НА представляет собой остаток гистаминаМе' представляет собой Ре2+ или Ре3+;или его изомеров, или смесей изомеров, или их фармацевтически приемлемых солей в качестве антимикробного средства.
- 2. Применение по п.1, где антимикробное средство представляет собой антибактериальное средство.
- 3. Применение по п.2, где указанное антибактериальное средство проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода δίарЬу1οсοссиδ, ВасШш, ЕФегососсш и/или Мюгососсш.
- 4. Применение по п.3, где бактерии выбирают из видов δίарЬу1οсοссиδ аигеш, ЕФегососсш ГаесаФ и Мюгососсш 1иТеи8.
- 5. Применение по п.3, где бактерии относятся к штамму δίарЬу1οсοссиδ аигеш 209Р, ЕФегососсш ГаесаФ ВКМ В-871, Мюгососсш 1иФи8 ВКМ Ас-2230, δίарЬу1οсοссиδ аигеш № 25923 АТСС, δίарЬу1οсοсαΐδ аигеш № 100 КС, δίарЬу1οсοссиδ ер^бе^т^б^δ № 533, Ейегососсш ГаесаФ № 559 или Ейегососсш Гаесшт № 569.
- 6. Применение по п.1, где антимикробное средство представляет собой противогрибковое средство.
- 7. Применение по п.6, где указанное противогрибковое средство проявляет активность в отношении микроскопических грибов рода Сапб1ба и/или СпрЮсосст.
- 8. Применение по п.7, где микроскопические грибы представляют собой С’гурЮсосст пеоГогтат или Сапб1ба а1Ысат.
- 9. Применение по п.6, где микроскопические грибы относятся к штамму Сапб1ба а1Ысап8 № 927 или СгурЮсосст пеоГогтат № 3465.
- 10. Применение по любому из пп.1-9, где в соединениях общей формулы (I) либо один из К! и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой Аа1-С1у-А1а-(П-Ьеи)А1а-(ПАа1)Аа1-(ПАа1)-Тгр-(П-Ееи)-Х-(П-Ееи)-Тгр-(П-Ееи)-Тгр-ШСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -^-цикло-(От-Ееи-П-РЬе-РгоАа1)2 (грамицидин δ), -А^д-С1у-Аδр-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо К! и К2 оба представляют собой -NНСН2СН2ОН, -С1уОМе, -NНСН(СН2ОН)СН2ОН,- 23 020802-МНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(Аг§ОМе)-Аг§ОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина
- 11. Антимикробное средство, представляющее собой производное гемина общей формулы (I) где Ρ1 и Ρ2 одинаковые или различные, при этом либо один из Ρί и Ρ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой ^а1-О1у-А1а-(Б-Ьеи)А1а-(^-Vа1)-Vа1-(^-Vа1)-Τ^ρ-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Τ^ρ-(^-^еи)-Τ^ρ-NНСН2СН2ОН, где X Тгр. или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Н5-цикло-(Огп-Теи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-О1у-Акр-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо Ρί и Ρ2 оба представляют собой -(/ДЫНЕ -ХНСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ХНСН(СН2ОН)СН2ОН, -МНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АгдОМе)-АгдОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистаминаМеп+ представляет собой Ре2' или Ре3+;или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемую соль.
- 12. Антимикробное средство по п.11, которое представляет собой антибактериальное средство.
- 13. Антимикробное средство по п.12, которое проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода 8!арЬу1ососсик, ВасШик, Ейегососсик и/или Мюгососсик.
- 14. Антимикробное средство по п.13, где бактерии выбирают из видов 8!арЬу1ососсик аигеик, Еп(егососсик ГаесаПк и Мюгососсик 1и(еик.
- 15. Антимикробное средство по п.13, где бактерии относятся к штамму 81арЬу1ососсик аигеик 209Р, ЕШегососсик П1есаПк ВКМ В-871, Мюгососсик 1и(еик ВКМ Ас-2230, 81арЬу1ососсик аигеик № 25923 АТСС, 8!арЬу1ососсик аигеик № 100 КС, 81арЬу1ососсик ерШегппШк № 533, ЕШегососсик ШесаПк № 559 или Еп(егососсик Шестт № 569.
- 16. Антимикробное средство по п.11, которое представляет собой противогрибковое средство.
- 17. Антимикробное средство по п.16, которое проявляет активность в отношении микроскопических грибов рода СапШба и/или СпрЮсоссик.
- 18. Антимикробное средство по п.17, где микроскопические грибы представляют собой СгурЮсоссик пео&гтапк или СапШба а1Ысапк.
- 19. Антимикробное средство по п.17, где микроскопические грибы относятся к штамму СапШба а1Ысапк № 927 или СгурЮсоссик пео&гтапк № 3465.
- 20. Антимикробное средство по любому из пп.11-19, где в соединениях общей формулы (I) либо один из Ρί и Ρ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой ^а1-О1у-А1а-(Б-Ьеи)А1а-(^-Vа1)-Vа1-(^-Vа1)-Т^р-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Т^р-(^-^еи)-Т^р-NНСН2СН2ОН, где X Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Н5-цикло-(Огп-Ьеи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-С1у-Акр-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо Ρί и Ρ2 оба представляют собой -МНСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ХНСН(СН2ОН)СН2ОН, -МНСН2СН(ОН)СН2ОН, -С1и(АгдОМе)-АгдОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина — ΗΝ—СН2—СН2
- 21. Фармацевтическая композиция, обладающая антимикробной активностью, включающая в качестве активного ингредиента соединение формулы (I)- 24 020802 где К1 и К2 одинаковые или различные, при этом либо один из К1 и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1у-А1а-(Э-Ьеи)А1а-(^-Уа1)-Уа1-(^-Уа1)-Т^р-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Т^р-(^-^еи)-Т^р-NНСН2СН2ОН, где X Ίηλ или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -^-цикло-(Оги-Ьеи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-О1у-Акр-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо Κι и К2 оба представляют собой -β А1аН1к- -N40^^^^ -О1уОМе, -NНСН(СН2ОН)СН2ОН, -NНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АгдОМе) -АгдОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистаминаМеи+ представляет собой Ре2+ или Ре3+;или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемую соль в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем.
- 22. Фармацевтическая композиция по п.21, которая представляет собой антибактериальное средство.
- 23. Фармацевтическая композиция по п.22, которая проявляет активность в отношении грамположительных бактерий рода 8!арЬу1ососсик, ВасШик, Ейегососсик и/или Мюгососсик.
- 24. Фармацевтическая композиция по п.23, где бактерии выбирают из видов 8!арЬу1ососсик аигеик, Ешегососсик ГаесаПк и Мюгососсик 1Шеик.
- 25. Фармацевтическая композиция по п.23, где бактерии относятся к штамму 8!арЬу1ососсик аигеик 209Р, Ейегососсик ГаесаПк ВКМ В-871, Мюгососсик 1Шеик ВКМ Ас-2230, 8!арЬу1ососсик аигеик № 25923 АТСС, 8!арЬу1ососсик аигеик № 100 КС, 8!арЬу1ососсик ерШегтФк № 533, Ешегососсик ГаесаПк № 559 или ЕШегососсик Гаесшш № 569.
- 26. Фармацевтическая композиция по п.21, которая представляет собой противогрибковое средство.
- 27. Фармацевтическая композиция по п.26, которая проявляет активность в отношении микроскопических грибов рода СаиШба и/или СпрЮсоссик.
- 28. Фармацевтическая композиция по п.27, где микроскопические грибы представляют собой СгурЮсоссик иеоГогтаик или СаиШба а1Ъюаик.
- 29. Фармацевтическая композиция по п.27, где микроскопические грибы относятся к штамму Саиб1ба аЫсаик № 927 или СгурЮсоссик иеоГогтаик № 3465.
- 30. Фармацевтическая композиция по любому из пп.21-29, где в соединениях общей формулы (I) либо один из К1 и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1у-А1а-(О-Ьеи)А1а-(^-Уа1)-Уа1-(^-Уа1)-Т^р-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Т^р-(^-^еи)-Т^р-NНСН2СН2ОН, где X 'Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Nδ-цикло-(О^и-^еи-^-РЬе-Р^ο-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-О1у-Акр-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо К! и К2 оба представляют собой ^СН2СН2ОН, -О1уОМе (XV), ^СН(СН2ОН)СН2ОН, -NНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АгдОМе)-АгдОМе (XVIII), -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина
- 31. Способ лечения и/или профилактики заболеваний, вызванных бактериями или микроскопическими грибами, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту средства по любому из пп.11-20 или фармацевтической композиции по любому из пп.21-30.
- 32. Способ по п.31, в котором заболевание вызвано бактериями.
- 33. Способ по п.32, в котором бактерии являются грамположительными бактериями рода 81арПу1ососсик, ВасШик, Етегососсик или Мюгососсик.
- 34. Способ по п.33, где бактерии выбирают из видов 8!арЬу1ососсик аигеик, Ешегососсик ГаесаПк и- 25 020802М1сгососси8 1и1еи8.
- 35. Способ по п.33, где бактерии относятся к штамму §1арЬу1ососси8 аигеи8 209Р, Еп1егососси8 ГаесаЙ8 ВКМ В-871, Мкгососсик 1и1еи8 ВКМ Ас-2230, §1арЬу1ососси8 аигеик № 25923 АТСС, §1арЬу1ососси8 аигеик № 100 КС, §1арЬу1ососси8 еркегтк18 № 533, Еп!егососси8 ГаесаШ № 559 или Еп!егососси8 Гаесшт № 569.
- 36. Способ по п.31, в котором заболевание вызвано микроскопическими грибами.
- 37. Способ по п.36, где микроскопические грибы относятся к роду СапШйа или Спр1ососси8.
- 38. Способ по п.37, где микроскопические грибы представляют собой Сгур!ососси8 пеоГогтап8 или СапШйа а1Ысап8.
- 39. Способ по п.37, где микроскопические грибы относятся к штамму СапШйа а1Ысап8 № 927 или Сгур!ососси8 пеоГогтап8 № 3465.
- 40. Способ по любому из пп.31-39, где в соединениях общей формулы (I) либо один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1у-А1а-(О-Ьеи)А1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Ееи)-Х-(П-Ееи)-Тгр-(П-Ееи)-Тгр-МНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Х5-цикло-(Огп-Ееи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-О1у-А8р-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо Κι и К2 оба представляют собой -ИНСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ИНСН(СН2ОН)СН2ОН, -ИНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АгдОМе)-АгдОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина — ΗΝ—СНг—СН21Ν
- 41. Антисептическая и/или дезинфицирующая композиция, содержащая соединение общей формулы (I) где К| и К2 одинаковые или различные, при этом либо один из Κ1 и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1у-А1а-(О-Ьеи)А1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Ееи)-Х-(П-Ееи)-Тгр-(П-Ееи)-Тгр-МНСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Х5-цикло-(Огп-Ееи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин δ), -Агд-О1у-А8р-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо Κι и К2 оба представляют собой -β А1аН18. -ИНСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ИНСН(СН2ОН)СН2ОН, -ИНСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АгдОМе)-АгдОМе, -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистаминаМеп+ представляет собой Ре2+ или Ре3+;или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемую соль.
- 42. Антисептическая и/или дезинфицирующая композиция по п.41, содержащая соединение общей формулы (I), охарактеризованное в п.10.
- 43. Производное гемина общей формулы (I)- 26 020802 где Κι и Κ2 одинаковые или различные, при условии, что оба Κι и К2 одновременно не представляют собой -ОН, при этом либо один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-О1у-А1а-(Б-Ьеи)Л1а-(П-Уа1)-Уа1-(П-Уа1)-Тгр-(П-Ьеи)-Х-(П-Ьеи)-Тгр-(П-Ьеи)-Тгр-ННСН2СН2ОН, где Х=Тгр, или РЬе, или Туг (грамицидин Ό), -Н5-цикло-(Огп-Ьеи-П-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), -Агд-О1у-А8р-ОН или -АгдАгд-Т гр-Т гр-Агд-РЬе-ОН, либо К| и К2 оба представляют собой -ННСН2СН2ОН, -О1уОМе, -ННСН(СН2ОН)СН2ОН, -ННСН2СН(ОН)СН2ОН, -О1и(АтдОМе)-АгдОМе (ХУШ), -НА или -Агд-АгдОМе, где НА представляет собой остаток гистамина /''''ΝΗ — ΗΝ—СН2—СН2—IМеп+ представляет собой Ре2+ или Ре3+, или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемая соль.
- 44. Соединение по п.43, где один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Атд-О1у-А8р-ОН, или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемая соль.
- 45. Соединение по п.43, где один из Κι и К2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Уа1-01у-Л1а-(^-^еи)-А1а-(^-Уа1)-Уа1-(^-Уа1)-Т^р-(^-^еи)-X-(^-^еи)-Т^р-(^-^еи)-Т^р-NНСН2СН20Н, где Х=Тгр, РЬе или Туг (грамицидин Ό), или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемая соль.
- 46. Соединение по п.43, где один из Κ1 и Κ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Х5-цикло-(Огп-Ьеи-О-РЬе-Рго-Уа1)2 (грамицидин 8), или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемая соль.
- 47. Соединение по п.43, где Κ1 = Κ2 = -ННСН2СН2ОН, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 48. Соединение по п.43, где Κ1 = Κ2 = -О1уОМе, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 49. Соединение по п.43, где Κ1 = Κ2 = -ННСН(СН2ОН)СН2ОН, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 50. Соединение по п.43, где Κ! = Κ2 = -ННСН2СН(ОН)СН2ОН, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 51. Соединение по п.43, где, Κ! = Κ2 = -О^АтдОМеЦАтдОМе, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 52. Соединение по п.43, где Κ1 = Κ2 = -НА, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 53. Соединение по п.43, где один из Κ1 и Κ2 представляет собой -ОН, а другой представляет собой -Агд-Агд-Тгр-Тгр-Агд-РЬе-ОН. или его изомер, или смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемая соль.
- 54. Соединение по п.43, где Κ1 = Κ2 = -Агд-АгдОМе, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 55. Способ получения соединения общей формулы (I) по любому из пп.43-54, включающий взаимодействие активированного по карбоксильной(ым) группе(ам) производного гемина с аминокомпонентом.
- 56. Способ по п.55, где в качестве активированного производного гемина используют 6,7-бис-Иоксисукцинимидный эфир гемина или 6(7)-моно-Ы-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимидный эфир гемина, а в качестве растворителя используют Ν,Ν-диметилформамид.
- 57. Способ по п.55, где для активирования по одной из карбоксильных групп гемина используют дитрет-бутилпирокарбонат, причем процесс проводят в Ν,Ν-диметилформамиде в присутствии пиридина.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009133914/04A RU2415868C1 (ru) | 2009-09-10 | 2009-09-10 | Производные гемина, обладающие антимикробной активностью, или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармкомпозиция и применение |
| PCT/RU2010/000488 WO2011031187A1 (ru) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Антимикробные средства на основе производных гемина |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201270405A1 EA201270405A1 (ru) | 2012-08-30 |
| EA020802B1 true EA020802B1 (ru) | 2015-01-30 |
Family
ID=43732659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201270405A EA020802B1 (ru) | 2009-09-10 | 2010-09-08 | Антимикробные средства на основе производных гемина |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8906897B2 (ru) |
| EP (1) | EP2476701B8 (ru) |
| CN (1) | CN102906110B (ru) |
| DK (1) | DK2476701T3 (ru) |
| EA (1) | EA020802B1 (ru) |
| ES (1) | ES2527432T3 (ru) |
| HK (1) | HK1179278A1 (ru) |
| IN (1) | IN2012DN02980A (ru) |
| PL (1) | PL2476701T3 (ru) |
| RU (1) | RU2415868C1 (ru) |
| UA (1) | UA108480C2 (ru) |
| WO (1) | WO2011031187A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475498C1 (ru) | 2011-11-17 | 2013-02-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью |
| CN102967649B (zh) * | 2012-05-24 | 2015-03-04 | 新疆科丽生物技术有限公司 | 电感耦合等离子体质谱在氯高铁血红素药物检测中的应用 |
| ES2864829T3 (es) * | 2016-09-15 | 2021-10-14 | Nano4Imaging Gmbh | Conjugados de tetrapirrol como agentes de contraste IRM |
| RU2678985C2 (ru) | 2017-02-06 | 2019-02-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная фирма ВЕРТА" | Биоцидный пептид и препарат на его основе |
| RU2656595C1 (ru) * | 2018-03-16 | 2018-06-06 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Циклическое производное гемина с антимикробными свойствами и способ его синтеза |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2193038C2 (ru) * | 1995-11-24 | 2002-11-20 | Йеда Рисерч Энд Дивелопмент Ко., Лтд. | Способ получения металлсодержащих производных бактериохлорофилла, новые металлированные производные бактериохлорофилла, фармацевтическая композиция |
| RU2238950C2 (ru) * | 2002-04-25 | 2004-10-27 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Производные гемина и их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, применение и фармацевтическая композиция |
| RU2280649C1 (ru) * | 2004-11-26 | 2006-07-27 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Геминпептиды, их фармацевтически приемлемые соли, фармкомпозиция и применение в качестве противоопухолевых агентов |
| RU2296131C2 (ru) * | 2004-11-26 | 2007-03-27 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Геминпептид, его фармацевтически приемлемые соли и применение в качестве противовирусного и вирулецидного агента |
| RU2007125604A (ru) * | 2007-07-09 | 2009-01-20 | ООО "Фарминтерпрайсез" (RU) | Производные гемина или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, композиция и применение |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0601183A4 (en) * | 1991-08-02 | 1996-12-04 | Meiji Milk Prod Co Ltd | ANTI-HIV MEDICINE. |
| US6001808A (en) | 1996-08-19 | 1999-12-14 | Metatron, Inc. | Method of treating herpes virus infections with spermostatic gramicidin |
| RU2250906C2 (ru) | 2003-07-10 | 2005-04-27 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Способы получения геминпептидов и их применение в качестве нуклеолитических агентов |
-
2009
- 2009-09-10 RU RU2009133914/04A patent/RU2415868C1/ru active
-
2010
- 2010-08-09 UA UAA201204487A patent/UA108480C2/ru unknown
- 2010-09-08 EA EA201270405A patent/EA020802B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-09-08 CN CN201080048604.3A patent/CN102906110B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-09-08 ES ES10815682.9T patent/ES2527432T3/es active Active
- 2010-09-08 PL PL10815682T patent/PL2476701T3/pl unknown
- 2010-09-08 EP EP10815682.9A patent/EP2476701B8/en active Active
- 2010-09-08 US US13/395,149 patent/US8906897B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-09-08 DK DK10815682.9T patent/DK2476701T3/en active
- 2010-09-08 IN IN2980DEN2012 patent/IN2012DN02980A/en unknown
- 2010-09-08 WO PCT/RU2010/000488 patent/WO2011031187A1/ru active Application Filing
-
2013
- 2013-06-11 HK HK13106895.8A patent/HK1179278A1/zh not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2193038C2 (ru) * | 1995-11-24 | 2002-11-20 | Йеда Рисерч Энд Дивелопмент Ко., Лтд. | Способ получения металлсодержащих производных бактериохлорофилла, новые металлированные производные бактериохлорофилла, фармацевтическая композиция |
| RU2238950C2 (ru) * | 2002-04-25 | 2004-10-27 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Производные гемина и их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, применение и фармацевтическая композиция |
| RU2280649C1 (ru) * | 2004-11-26 | 2006-07-27 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Геминпептиды, их фармацевтически приемлемые соли, фармкомпозиция и применение в качестве противоопухолевых агентов |
| RU2296131C2 (ru) * | 2004-11-26 | 2007-03-27 | ООО "Фарминтерпрайсез" | Геминпептид, его фармацевтически приемлемые соли и применение в качестве противовирусного и вирулецидного агента |
| RU2007125604A (ru) * | 2007-07-09 | 2009-01-20 | ООО "Фарминтерпрайсез" (RU) | Производные гемина или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, композиция и применение |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2476701A1 (en) | 2012-07-18 |
| US20120264724A1 (en) | 2012-10-18 |
| IN2012DN02980A (ru) | 2015-07-31 |
| EA201270405A1 (ru) | 2012-08-30 |
| US8906897B2 (en) | 2014-12-09 |
| DK2476701T3 (en) | 2014-11-17 |
| EP2476701A4 (en) | 2013-01-16 |
| PL2476701T3 (pl) | 2015-03-31 |
| CN102906110B (zh) | 2016-04-13 |
| WO2011031187A1 (ru) | 2011-03-17 |
| CN102906110A (zh) | 2013-01-30 |
| RU2415868C1 (ru) | 2011-04-10 |
| EP2476701B8 (en) | 2014-09-24 |
| UA108480C2 (en) | 2015-05-12 |
| HK1179278A1 (zh) | 2013-09-27 |
| ES2527432T3 (es) | 2015-01-23 |
| EP2476701B1 (en) | 2014-08-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE102009007381A1 (de) | Antibiotische Peptide | |
| CN111819187B (zh) | 多肽化合物及其制备方法与应用 | |
| AU2013276480A1 (en) | N-substituted second generation derivatives of antifungal antibiotic Amphotericin B and methds of their preparation and application | |
| US7745390B2 (en) | Antimicrobial peptides | |
| EA020802B1 (ru) | Антимикробные средства на основе производных гемина | |
| WO2015161820A1 (zh) | 两亲性合成抗菌肽、其药物组合物及其用途 | |
| US20130225481A1 (en) | Antimicrobial peptides | |
| KR20130078561A (ko) | 라이신 및 트립토판 잔기가 ４번 반복된 신규한 항균 및 항진균 펩타이드 및 이의 용도 | |
| CN104114547A (zh) | 呫吨酮化合物的衍生物 | |
| US7262163B2 (en) | Short amphipathic peptides with activity against bacteria and intracellular pathogens | |
| CN110950932A (zh) | 一种修饰肽的制备及其应用 | |
| KR100438416B1 (ko) | Ｃａ－ｍａ 펩타이드의 아미노산 중 하나 또는 그 이상을치환하여 ＋ 전극과 소수성 영역이 증가된 신규한펩타이드 및 그를 포함하는 약학적 조성물 | |
| RU2475498C1 (ru) | Новые производные гемина с антибактериальной и противовирусной активностью | |
| US11014891B2 (en) | Reduction-triggered antibacterial sideromycins | |
| WO2023066980A1 (de) | 4-aminophenylphosphorylcholin-verbindungen zur blockade von c-reaktivem protein | |
| RU2656595C1 (ru) | Циклическое производное гемина с антимикробными свойствами и способ его синтеза | |
| CN112457375B (zh) | 多肽化合物及其制备方法与应用 | |
| JPH03501742A (ja) | 抗バクテリア・抗マラリア性ペプタイド | |
| CN113698460B (zh) | 一种大肠杆菌lipid A结合基元PCK及其制备方法与应用 | |
| Trenchs Garcia | Synthesis and study of antibiotic peptides | |
| WO2020065595A1 (es) | Lipopeptidos cortos con actividad antimicrobiana contra bacterias gram negativas y gram positivas | |
| CN117624304A (zh) | 具有广谱抗菌活性的抗菌糖脂肽glip的制备及应用 | |
| EP0777644A1 (en) | D-b-lysylmethanediamine derivatives with bacteria, aids virus and tumor cell growth inhibiting activity and preparation thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AZ KG MD TJ TM |