JPH0733772A - クロロフィルとバクテリオクロロフィルの誘導体、それらの製造法及びそれら誘導体を含んで成る製剤組成物 - Google Patents

クロロフィルとバクテリオクロロフィルの誘導体、それらの製造法及びそれら誘導体を含んで成る製剤組成物

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JPH0733772A
JPH0733772A JP5226328A JP22632893A JPH0733772A JP H0733772 A JPH0733772 A JP H0733772A JP 5226328 A JP5226328 A JP 5226328A JP 22632893 A JP22632893 A JP 22632893A JP H0733772 A JPH0733772 A JP H0733772A
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 光力学療法における増感剤として有用なクロ
ロフィルとバクテリオクロロフィルの新規な誘導体を提
供する。 【構成】 一般式（Ｉ）で表される化合物、その製造
法、当該化合物を活性成分とする、腫瘍の光力学的療法
のための製剤組成物及び腫瘍の診断を目的とした当該化
合物の使用。 Ｘ−ＣＯ−Ｙ−Ａ−Ｒ （Ｉ） （式中、Ｘ−ＣＯ−はクロロフィル（Ｃｈｌ）又はバク
テリオクロロフィル（Ｂｃｈｌ）のＣ１７−プロピオニ
ル残基を表し；ＹはＯ，Ｓ又はＮＨであり；Ａは共有結
合であるか、又は２〜２０個の炭素原子を有し、所望に
よってヘテロ原子及び／又は炭素環式−若しくは複素環
式−部分で遮断されている、飽和又は不飽和の置換され
又は置換されていない炭化水素鎖であり；そしてＲはア
ミノ酸、ペプチド若しくは蛋白質の残基であるか、又は
それらの誘導体である。）

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野】
【０００１】本発明はクロロフィル（Ｃｈｌ）とバクテ
リオクロロフィル（Ｂｃｈｌ）の新規な誘導体、それら
の製造法、並びに光力学療法及び蛍光検出、監視技術に
おけるそれら誘導体の応用に関する。
【０００２】
【従来の技術】過去２０年間に癌の治療に対する光増感
剤の利用に関心が高まって来た。光力学療法（ＰＤＴ）
として知られるこの技術において、前以て適用された発
色団の現場光増感で１重項状態酸素（ｓｉｎｇｌｅｔ
ｏｘｙｇｅｎ）、酸素ラジカル及び超酸化物即ち過酸化
物が生成され、それらが悪性細胞を中毒する［ドーハー
ティー（Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ）、１９８７年］。この技
術は非毒性薬剤と危険のない光増感化照射とを併用する
もので、一般的に用いられる化学療法又は放射線療法に
比較して選択性が高く、しかも破壊性は同程度である可
能性があり、従って治療を受けている患者の生活の質を
高めることが期待される。
【０００３】ＰＤＴに用いられる光増感剤は１重項状態
酸素の生成に対しては高い量子収率を、また悪性の組織
に対しては高い親和性と選択性を有していることが必要
である。ポルフィリン類は励起３重項状態の生成に対し
て比較的高い量子収率を有し、この状態とポルフィリン
類の１重項基底状態とのエネルギー差はそれらポルフィ
リンをしてその基底状態（３重項）酸素をその１重項状
態に励起する良好なエネルギー供与体となす。ヘマトポ
ルフィリン（ＨＰ）（図１）及びヘマトポルフィリン誘
導体（ＨＰＤ）は腫瘍組織の中に蓄積する傾向があるこ
とがある時期に知られることとなった。しかして、ＨＰ
とＨＰＤ混台物がＰＤＴに対する好ましい化合物となっ
た。
【０００４】光力学療法剤として商業的に用いられてい
るＨＰＤ混合物のフォトフリン（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ）
ＩＩ［カナダ国、ＢＣ、バンクーバー（Ｖａｎｃｏｕｖ
ｅｒ）のクォード ロジック テクノロジーズ社（Ｑｕ
ａｒｄａ Ｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉ
ｎｃ．）］は４００ｎｍ［所謂ソレットバンド（Ｓｏｒ
ｅｔ ｂａｎｄ）］あたりに高い吸光係数値を有する
が、可視域（５００〜６３０ｎｍ；所謂Ｑバンド）の吸
光係数値がそれよりはるかに小さいエーテル結合ＨＰオ
リゴマーを高い割合で含有するものである。残念なが
ら、ＵＶ−可視光の動物組織による著しい減衰のため
に、ＨＰＤによる現場光増感量子収率は非常に低い。従
って、腫瘍の効率的治療には強い照射と大量のＨＰＤが
必要とされる。適用されるＨＰＤの量が増加すると、そ
れにつれてＨＰＤが正常な組織に蓄積する機会とその蓄
積に伴って生ずる非悪性部位を損傷する危険が著しく増
大する。ＨＰＤ関連同族体の更に他の不利点は人体から
の除去が遅いことである。ＨＰＤ治療を受けている患者
は何週間も皮膚の光毒性を受けるのである。
【０００５】動物組織によるＵＶ−ＶＩＳ光の強い減衰
とＨＰＤの悪性部位に対する限られた特異性は６５０ｎ
ｍを越える光を吸収し、悪性部位における保持率が高い
新しい光療法剤を研究し、合成する動機となった［マッ
クロバート（ＭｃＲｏｂｅｒｔ）等、１９８９年］。
【０００６】悪性組織における保持率と同組織に対する
特異性を高めるために、特定の化学的基がポルフィリン
構造のピロール残基に結合された種々のポルフィリン誘
導体について試験が行われた。これら化合物のＨＰＤに
対する吸収の赤色シフトはポルフィリンのπ−電子系に
おける変化によって達成される。
【０００７】このアプローチに続いて、ＰＤＴ剤として
ＣｈｌとＢｃｈｌの誘導体を使用することに関心が高ま
った［クレーマー（Ｋｒｅｉｍｅｒ）−バーンバウム
（Ｂｉｒｎｂａｕｍ）、１９８９年；スパイク（Ｓｐｉ
ｋｅ）及びボーマー（Ｂｏｍｍｅｒ）１９９１年］。Ｃ
ｈｌ類及びＢｃｈｌ類はそれぞれジ−及びテトラーヒド
ロポルフィリン誘導体であって、それら誘導体はクロロ
フィルａ（Ｃｈｌａ）については図２に、またバクテリ
オクロロフィルａ（Ｂｃｈｌａ）については図３に示さ
れるように、４ピロール及び互いにかつＭｇ原子に結合
した１個のイソ環式環より成る。ただし、ＭはＭｇを表
し、基ＲはＢｃｈｌａにおいてはフィチル又はゲラニル
ゲラニルであり、Ｃｈｌａにおいてはフィチルである。
Ｂｃｈｌａ分子は２個以上のβ−炭素（ピロール環の外
周炭素）が還元されている点でＣｈｌａ分子と異なる。
Ｃｈｌ類とＢｃｈｌ類の多様性はその大環状化合物にお
ける置換基が色々であること、又は１７−プロピオン酸
残基をエステル化しているアルコール残基が色々である
ことの結果である。天然産のＢｃｈｌａにおいては、ア
ルコール残基はフィチル又はゲラニルゲラニルであり、
一方例えばＢｃｈｌｂにおいては、それはゲラニルゲラ
ニルである。クロロフィル及びバクテリオクロロフィル
に由来する酸はそれぞれクロロフィリド（Ｃｈｌｉｄ
ｅ）及びバクテリオクロロフィリド（Ｂｃｈｌｉｄｅ）
と称される。Ｃｈｌａ及びＢｃｈｌａに由来する遊離酸
はそれぞれＣｈｌｉｄｅａ及びＢｃｈｌｉｄｅａと表示
される。中心の金属原子を欠くＣｈｌ及びＢｃｈｌ由来
化合物はそれぞれフェオフィチン（Ｐｈｅｏ）及びバク
テリオフェオフィチン（Ｂｐｈｅｏ）と称される。Ｃｈ
ｌａ及びＢｃｈｌａに由来するフェオフィチンはそれぞ
れＰｈｅｏａ及びＢｐｈｅｏａと表示される。フェオフ
ィチン及びバクテリオフェオフィチンに由来する遊離酸
はそれぞれフェオフォルビド及びバクテリオフェオフォ
ルビドと称される。
【０００８】Ｃｈｌ類及びＢｃｈｌ類は太陽エネルギー
を吸収し、生物学的光合成において電子の移動を開始さ
せる。モノマー形態におけるそれらの最低エネルギー転
移（所謂、Ｑｙ転移）は６７０〜８００ｎｍに見いださ
れるが、それら転移は集合形態では１０００ｎｍまでシ
フトされ得る。これらの転移状態は極めて高い吸光係数
を有する。Ｃｈｌ類及びＢｃｈｌ類の励起１重項状態か
らそれらの最低３重項状態までのシステム間クロッシン
グ（ｉｎｔｅｒ−ｓｙｓｔｅｍ ｃｒｏｓｓｉｎｇ）の
可能性はかなり高く（３０〜５０％）、このことが高収
率の励起酸素分子を保証している。事実、Ｃｈｌ類及び
Ｂｃｈｌ類による酸素の光増感化の重要性はそれらＣｈ
ｌ類及びＢｃｈｌ類が光合成バクテリア及び同植物にお
ける重要な分解過程に係わり、従って光合成有機体が全
て１重項状態酸素又は酸素ラジカルに対して種々の保護
機構を有すると言う事実によって強調される。Ｃｈｌ類
及びＢｃｈｌ類は本来動物によって消費される天然の化
合物であるから、それらの生体内分解はＨＰ又はＨＰＤ
に比較して非常に速い［レウェリン（Ｌｌｅｗｅｌｌｙ
ｎ）等、１９９０年］。このことは患者が長期の照射に
付されることを少なくすると言う重要な利点となる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】しかし、ＰＤＴに天然
のＣｈｌ又はＢｃｈｌ抽出物を使用する場合には幾つか
の問題がある。即ち、第一に、それら抽出物は強度に疎
水性であるのでそれらの悪性部位への送出がむずかし
い。第二に、それらは普通の送出条件下、即ち酸素の存
在下、室温及び普通の光条件下で非常に不安定である。
第三に、それらはそれらを特定的に悪性組織の標的とす
る部分を持たない。これらの制限のために、これら光合
成顔料のＰＤＴにおける増感剤としての可能性は現在の
ところは実現困難である。従って、これらの困難を克服
し、かつＰＤＴにおいて成功裏に使用することができる
Ｃｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体を合成することが極め
て望ましいことである。本発明の目的はそのような誘導
体を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】Ｃｈｌ及びＢｃｈｌの側
鎖基は色々な環境に対するそれら分子の総体的親和性を
決定する。
【００１１】Ｃｈｌ構造又はＢｃｈｌ構造のＣ１７−プ
ロピオン酸側鎖基におけるエステル基を変成することに
よって治療及び診断において光増感剤として使用するた
めの新規なＣｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体を製造する
ことが可能であることが本発明によりここに見いだされ
た。
【００１２】本発明は従って一般式（Ｉ）
【化２】Ｘ−ＣＯ−Ｙ−Ａ−Ｒ （Ｉ）
【００１３】で表される新規なＣｈｌ誘導体及びＢｃｈ
ｌ誘導体に関する。ただし、上記式（Ｉ）において、Ｘ
−ＣＯ−はＣ１７−プロピオニルＣｈｌ又は同Ｂｃｈｌ
を表し；ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ａは共有結合であ
るか、又は２〜２０個の炭素原子を有する、置換され及
び／又は官能基、ヘテロ原子及び／又は炭素環式−若し
くは複素環式−部分で遮断されていてもよい、直鎖又は
分枝鎖の、飽和又は不飽和の炭化水素鎖であり；そして
Ｒはアミノ酸、ペプチド若しくは蛋白質の残基又はそれ
らの誘導体である。
【００１４】ここで、“Ｃｈｌ残基又はＢｃｈｌ残基”
なる用語は共に天然又は合成の誘導体であるＣｈｌ又は
Ｂｃｈｌの任意の誘導体を意味し、これには中心のＭｇ
原子が除かれ又は他の二価の金属、例えばＺｎ、Ｖ、Ｃ
ｕ、Ｃｏ、Ｎｉ又はＳｎで置換された化合物が包含され
る。本発明によれば、Ｂｃｈｌ誘導体が好ましい。
【００１５】１つの好ましい態様において、ＹはＯであ
り、Ｘ−ＣＯ−はＣｈｌ又はＢｃｈｌの残基であって、
それぞれ図２及び３に示される。
【００１６】炭化水素鎖Ａは５〜２０個の炭素原子を有
するのが好ましい。それは飽和又は不飽和であってもよ
いし、ヘテロ原子、例えばＯ、Ｎ及び／又はＳで遮断さ
れていてもよいし、及び／又はモノ−又はポリ−炭素環
式又は複素環式部分、及び／又は官能基、例えばＯＨ、
ＮＨ２、ＣＯＮＨ２、ＣＯＯＨ等で置換又は遮断されて
いてもよい。例えば、Ａは、例えばモノサッカリド若し
くはオリゴサッカリドの、トリグリセリド若しくは他の
脂質部分の、ポリ炭素環式環、例えばコレステロールの
ようなステロイドの、又は複素環式化合物、例えばウラ
シル及び２，５−ジオキソ−３、６−ジヒドロキシメチ
ルピペラジンの残基であるか又はそのような残基を含ん
でいることができ、そしてウラシルＡは官能基、例えば
エステル、アミド、エーテル等を介してＲに結合されて
いる。
【００１７】基Ｒはアミノ酸又はその誘導体、例えばセ
リン、チロシン及びリシン並びにそれらの誘導体、例え
ばＬ−セリン又はチロシンのメチルエステルから、又は
ペプチド、例えばセリルセリンメチルエステル、メラノ
サイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）から、或いは蛋白質から
誘導されたものであることができる。
【００１８】特に、本発明により予定されているものは
Ｃｈｌ及びＢｃｈｌと色々なアミノ酸との結合（ｃｏｎ
ｊｕｇａｔｉｏｎ）、これらＣｈｌ／Ｂｃｈｌアミノ酸
結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）とホルモン、成長因子若
しくはそれらの誘導体又は腫瘍特異性抗体或いは他の細
胞特異性配位子との更なる結合であり、かくして適当な
部位指向（ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ）光増感剤（Ｓ
ＰＤ）が得られる。本発明で用いられるペプチドホルモ
ンの１例はメラノサイト中の受容体に特定的に結合し、
従って光増感性部分を黒色腫の腫瘍の標的となし得るメ
ラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）（メラノトロピン
類）、例えばα−，β−又はγ−ＭＳＨの１つである。
【００１９】本発明は更に式（Ｉ）で表される化合物の
製造法を含む。
【００２０】本発明はまた式（Ｉ）の化合物を含んで成
る診断及び光力学療法のための組成物、並びに癌患者を
式（Ｉ）の化合物で治療し、続いて局所照射することか
ら成る癌患者の光力学的治療法も包含する。
【００２１】発明の詳細な説明 本発明はＣｈｌ及びＢｃｈｌとアミノ酸、ペプチド及び
ポリペプチドとの結合体を提供するものである。特に重
要なものは、（ａ）Ｃｈｌ及びＢｃｈｌと色々なアミノ
酸及びそれらの誘導体との結合、（ｂ）Ｃｈｌ−及びＢ
ｃｈｌ−アミノ酸結合体とホルモン、例えばα−メラノ
トロピン、又は（ｃ）腫瘍特異性抗体との更なる結合及
び（ｄ）３重項状態の収率を改善する金属によるＣｈｌ
結合体中及びＢｃｈｌ結合体中の中心Ｍｇの置換によっ
て得られる結合体である。
【００２２】１つの好ましい態様において、Ａは共有結
合であり、ＹはＯであり、残基ＲはＣｈｌ又はＢｃｈｌ
のＣ１７−プロピオン酸基にエステル結合を介して直接
結合している。。これらの化合物は次の２つの方法の内
の１つで製造することができる。
【００２３】（１）植物の葉緑体からアセトンで抽出さ
れ、アセトン粉末として貯蔵された酵素であるクロロフ
ィラーゼ（Ｃｈｌａｓｅ）による図４に示される新規な
酵素エステル交換法。このエステル化反応はクロロフィ
ラーゼアセトン粉末を洗浄剤を含有する緩衝溶液中で第
一アルコールＲ−ＯＨ、例えばＬ−セリンメチルエステ
ルと共に３７℃において１時間インキュベートし、得ら
れた懸濁液にＢｃｈｌ誘導体又はＣｈｌ誘導体、例えば
Ｂｃｈｌａ又はＣｈｌａを加え、３７℃において更にイ
ンキュベートすることによって行われる。固体のアセト
ン粉末の除去後、目的のエステルを反応混合物から抽出
し、精製する。
【００２４】（２）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ
ＨＳ）とジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又
はジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）とＤＣＣを用い
てＣｈｌｉｄｅ又はＢｃｈｌｉｄｅのカルボキシル基を
活性化する、Ｃｈｌｉｄｅ誘導体又はＢｃｈｌｉｄｅ誘
導体、例えばＣｈｌｉｄｅａ又はＢｃｈｌｉｄｅａと化
合物Ｒ−ＯＨ、例えばＺ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅとの新規な
触媒縮合法（図５）。それぞれＭｇを含まないＣｈｌｉ
ｄｅａ及びＢｃｈｌｉｄｅａの同族体であるフェオフォ
ルビド及びバクテリオフェオフォルビドをエチレングリ
コールとの縮合に先立って活性化する後者の方法を用い
ることができる［ワシーレフスキー（Ｗａｓｉｅｌｅｓ
ｋｉ）、１９８０年］。
【００２５】セリン又はその誘導体、例えばＬ−セリン
メチルエステル塩酸塩、Ｎ−トリチル−Ｌ−セリンメチ
ルエステル、カルボベンゾキシ−セリル−Ｌ−セリンメ
チルエステルを用いて上記の方法により数種のエステル
を製造した。これらの誘導体はそれら自体本発明の応用
において使用することができるか、又は他の適当な分子
をＣｈｌ又はＢｃｈｌなる大環状化合物に結合する橋と
して役立てることができる。
【００２６】エステルが所望とされ、かつ目的のペプチ
ド又は蛋白質がヒドロキシル含有アミノ酸残基を含んで
いない場合、Ｃｈｌ又はＢｃｈｌのエステル交換反応
で、又は対応する遊離酸（Ｃｈｌｉｄｅ又はＢｃｈｌｉ
ｄｅ）のエステル化反応でまずそのＣｈｌ又はＢｃｈｌ
なる大環状化合物をセリン若しくは他の任意のヒドロキ
シル含有アミノ酸に、又はその誘導体と結合させること
ができ、次いでこのアミノ酸残基を介してその大環状化
合物にペプチド又は蛋白質を結合させる。
【００２７】ＹがＳであり、Ａが共有結合である式
（Ｉ）の結合体はＣｈｌ誘導体又はＢｃｈｌ誘導体とク
ロロフィラーゼ及び化合物Ｒ−ＳＨ、例えばシスティン
又はその誘導体或いはシスティン含有ペプチド若しくは
同蛋白質との酵素エステル交換反応か、又はＤＣＣ及び
ＤＭＡＰの存在下におけるＣｈｌｉｄｅ誘導体又はＢｃ
ｈｌｉｄｅ誘導体と化合物Ｒ−ＳＨとの触媒縮合反応で
得ることができる。
【００２８】ＹがＮＨであり、Ａが共有結合である式
（Ｉ）の結合体はＤＣＣ及びＤＭＡＰの存在下におけ
る、又はＮＨＳ及びＤＣＣによるＣｈｌｉｄｅ誘導体又
はＢｃｈｌｉｄｅ誘導体と化合物Ｒ−ＮＨ２、例えばア
ミン、又はペプチド若しくは蛋白質のアミノ末端基との
触媒縮合反応で得ることができる。
【００２９】Ｃｈｌｉｄｅ誘導体又はＢｃｈｌｉｄｅ誘
導体をヒドロキシル基、メルカプト基及び／又はアミノ
基を含有するアミノ酸部分を含むペプチド又は蛋白質と
反応させる場合、結合がＯ原子若しくはＳ原子又はＮＨ
基を介しているかどうかは必ずしも明確ではないが、そ
のような結合体は全てそれらの構造の同定には無関係に
本発明に包含される。
【００３０】金属置換Ｃｈｌ誘導体及び同Ｂｃｈｌ誘導
体の製造のために、Ｍｇはこの顔料のアミノ酸又は細胞
特異性配位子に対する結合に先立って置換される。Ｃｈ
ｌ及びその誘導体の中心ＭｇのＣｕ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｖ、
Ｃｏ、その他の二価金属による置換は標準的な方法で、
例えば対応するフェオフィチンを無水エタノール中、外
囲温度において目的金属の塩、例えば酢酸Ｚｎ又は酢酸
Ｃｕにより処理することによって行われる［ハンブライ
ト（Ｈａｍｂｒｉｇｈｔ）、１９７５年；ヒンニネン
（Ｈｙｎｎｉｎｅｎ、１９９１年）］。Ｂｃｈｌ及びそ
の誘導体の場合は、中心Ｍｇは氷酢酸中、アルゴン下、
昇温の下での酢酸Ｚｎ又は同Ｃｕによる処理を含む同様
の方法でＺｎ又はＣｕにより置換することができる［フ
ィーダー（Ｆｉｅｄｏｒ）等、１９９３年）］。
【００３１】Ａが定義された通りの炭化水素鎖である場
合、その炭化水素鎖は末端官能基を含有し、その末端官
能基を介してＲ残基に結合されている。例えば、Ａのカ
ルボキシル末端基とアミノ酸のヒドロキシル基との反応
か、又はＡのヒドロキシル末端基とアミノ酸のカルボキ
シル基との反応によりエステル基が形成され；Ａのカル
ボキシル末端基とアミノ酸のアミノ基との反応か、又は
Ａのアミノ末端基とアミノ酸のカルボキシル基との反応
によりアミド基が形成される、等々。
【００３２】これらの新規なエステルはそれぞれのＣｈ
ｌ類及びＢｃｈｌ類と同じ光学的吸収特性と光物理的特
性を有する。従って、これら新規なＣｈｌエステル及び
Ｂｃｈｌエステルは、それが処理済み組織内に存在する
に至ると、効率的な光力学療法剤となると期待される。
【００３３】蛋白質、例えばホルモン、成長因子又はそ
れらの誘導体、及び抗体の、並びに細胞の栄養分、例え
ばチロシンのＣｈｌ部分又はＢｃｈｌ部分に対する結合
は腫瘍及び処理された部位におけるそれらの保持率を高
めることを意味する。赤色シフトが増加すると、自然の
系の遍在を保ちつつより大きな侵入深さが可能となる。
他の金属によるＭｇの置換はＣｈｌ部分又はＢｃｈｌ部
分及び励起３重項状態に対する当該部分のシステム間ク
ロッシングの本来の代謝安定性を最適化することを意味
し、これはまた新しい診断法の可能性を開く。
【００３４】腫瘍特異性抗体は腫瘍即ち処理された部位
に対してＣｈｌ部分及びＢｃｈｌ部分を専ら攻撃目標と
し、一方またホルモン及び細胞の栄養分はトランスフォ
ーメーションを起こさななかった正常な片方によって吸
収されるだろう。しかし、ホルモン又は細胞栄養分に対
する標的として選択された細胞、例えばメラノサイトは
正常条件下では他の細胞内に分散され、また悪性細胞へ
のトランスフォーメーションを起こした場合はそれらが
集まって固体の腫瘍となる。その結果、細胞がより高度
に分散され、腫瘍部位におけるＰＤＴ効果の増幅を保証
するようになっている場合に、悪性組織中の光増感剤の
濃度は正常組織中のその濃度に比較して劇的に高まると
期待される。これは正常組織の損傷閾値より低い光量の
有効使用を可能ならしめ、かくして空間的に十分に画成
された照射の必要が少なくなる。加えて、非常に強い蛍
光を有すると、その部位指向Ｃｈｌ又は同Ｂｃｈｌは腫
瘍部位、その他の標的に蛍光ラベルを付けるのに使用す
ることができる。
【００３５】黒色腫の腫瘍は幾つかの理由、即ち（ａ）
初期段階（非転移性）では、悪性黒色腫、その他の皮膚
腫瘍はＰＤＴに非常に受け入れられ易いこと；（ｂ）こ
れまで、緑色光を使用する光力学療法のみならず、通常
の化学療法及び放射線療法も黒色腫の治療に失敗して来
たこと；（ｃ）しかし、光増感化部分を標的として腫瘍
部位に送り得る幾つかの黒色腫特異性配位子が存在する
こと；及び（ｄ）長い波長の励起可能なＣｈｌ部分及び
Ｂｃｈｌ部分の使用は、メラニンの吸収に起因してスク
リーンされる従来の光増感剤の欠点を克服すると期待さ
れることから本発明の新規なＣｈｌ及びＢｃｈｌ光増感
剤による治療に適している。
【００３６】黒色腫の腫瘍はメラノサイトの発癌トラン
スフォーメーション（ＵＶ−誘発の変異誘発を含む）か
ら発達する。正常なメラノサイトはヒトの正常皮膚細胞
の母集団の数パーセントを占め、通常は各々が３０〜４
０個のケラチノサイトと１個のランゲルハンス細胞とで
包囲されている表皮と真皮との間の底部細胞層に見いだ
される。黒色腫の腫瘍細胞は黒色の不溶性ユーメラニン
類（ポリ−５，６−インドールキノン類）を含有してい
る可能性があるので、ＰＤＴは黒色腫の腫瘍による特に
困難な挑戦に直面する。ここで、不溶性ユーメラニン類
は５４０ｎｍ付近に広い吸収バンドを有し、従って、６
５０ｎｍより短い波長の放射線に対してはいかなる光増
感剤とも競合する。加えて、メラニン分子は形成されて
いる酸素ラジカルを消滅させる可能性があり、それによ
って生体細胞の小器官の中毒が防がれる。従って、一般
に使用されるＨＰＤによるメラニン性黒色腫のＰＤＴは
余り有望ではない。しかし、励起されたＣｈｌ類とＢｃ
ｈｌ類及びそれらの合成誘導体が６５０ｎｍより長い波
長に最大の光学的吸収を有すると、それら化合物はメラ
ニンによって遮られることはないだろう。更に、黒色腫
の腫瘍細胞（即ち、トランスフォーメーションを起こし
たメラノサイト）はメラニンの合成に際して相当量のチ
ロシンを消費し、メラノトロピン類［下垂体のα−，β
−及びγ−メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）］及び
数種の公知の抗体に対して高い親和性を有する。従っ
て、それら腫瘍細胞は、その結合が細胞受容体による配
位子の認識に強い影響を及ぼさない限り、Ｃｈｌ及びＢ
ｃｈｌのチロシン−、メラノコルチン−又は抗体−結合
体に対する良好な標的とることができる。メラノサイト
の濃度は黒色腫の部位において（正常な皮膚組織に比較
して）ほとんど４０倍も増加するから、光力学的効果は
劇的に高まると期待される。
【００３７】本発明はかくして本発明のＣｈｌ誘導体又
はＢｃｈｌ誘導体を含んで成る、脳、卵巣及び胸の腫
瘍、皮膚、肺、食道及び膀胱の癌、その他のホルモン感
受性腫瘍を含めて数タイプの癌の光力学的治療のための
製剤組成物を提供する。
【００３８】１つの態様において、本発明は悪性黒色腫
の光力学的治療に関する。本発明化合物の光力学的効果
は腫瘍及び細胞培養物の中の黒色腫細胞に対してモニタ
ーされる。この目的に使用することができる誘導体の例
はＣｈｌ又はＢｃｈｌとα−メラノトロピンとの結合体
であって、そのα−メラノトロピンはセリン、チロシン
又はリジンの残基を介するか、又はアミノ末端基を介し
てＣｈｌ顔料部分又はＢｃｈｌ顔料部分に結合されてい
る。
【００３９】本発明の製剤組成物はＰＤＴにおいて用い
られる標準的な方法で患者に投与される。投与されるべ
き化合物の量及び投与ルートは患者の腫瘍、疾患の段
階、年令及び健康状態に従って決められるが、ＨＰＤ約
２０〜４０ｍｇ／ｋｇ体重と言うフォトフィリンＩＩの
現在使用されている用量よりははるかに少ない。好まし
い投与ルートは、常用の製剤上許容できるキャリアー及
び添加剤を含む本発明の活性化合物の水溶液の静脈注射
か、又はその水溶液の固体腫瘍への直接注射と、適当な
局所用組成物による皮膚腫瘍の局所的治療である。
【００４０】本発明は更に固体の腫瘍癌に苦しんでいる
患者に本発明によるＣｈｌ誘導体又はＢｃｈｌ誘導体を
含んで成る製剤組成物を投与し、次いで腫瘍部位に６７
０〜７８０ｎｍの強い光源を照射することから成る癌の
光力学的治療法に関する。
【００４１】かくして、本発明のＣｈｌ誘導体及びＢｃ
ｈｌ誘導体について、部位指向光力学療法（ＳＤＰ）に
よる良性又は悪性の細胞又は組織の光破壊に対するもの
のような幾つかの適用例が予想される。本発明による結
合体は腫瘍組織に集まる細胞にトランスフォーメーショ
ン時に結合体のＣｈｌ分子又はＢｃｈｌ分子を運ぶが、
正常組織（例えば、黒色腫中のメラノサイト）の中では
互いによく分離されている。その結果、腫瘍中の光増感
剤の光力学的効果は正常組織におけるその効果よりも数
桁大きい。従って、腫瘍を破壊し得る照明閾値は正常組
織を破壊し得ないレベルまで低下されると期待される。
このような状況下で、その光毒効果は非特異性の照射下
でも腫瘍部位に制限される。この適用は通常の外科には
受け入れられ難い腫瘍にとって特に重要なものである。
【００４２】バイフォトン法（ｂｉｐｈｏｔｏｎｉｃ
ｐｒｏｃｅｓｓ）を用いる光力学療法［ロイポルド（Ｌ
ｅｕｐｏｌｄ）及びフレヤー（Ｆｒｅｙｅｒ）、１９９
２年］が近ＩＲに対する増感化範囲を広げるもう１つの
方法である。Ｃｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体の高いシ
ステム間クロッシング率及びそれらの長い最大吸収波長
はそれら誘導体をしてこのＰＤＴモードの非常に良好な
候補にする。
【００４３】本発明の結合体はまた正常な又は悪性の動
物細胞のみならず、培養中のある種の細胞又は感染性剤
の選択的な光破壊を可能にするＳＤＰにより又はＳＤＰ
によらずに、培養中の微生物の光破壊；特定のポリペプ
チド、例えばホルモン又は他の受容体配位子に対する、
細胞−又は組織−特異性抗体に対する、又は他の配位
子、例えばレクチンに対するＣｈｌ−及びＢｃｈ１−セ
リン結合体の結合によって、選択された細胞に対してポ
ルフィリン部分を標的とすること；実験室用途、診断用
途又は工業用途における分析の目的のための蛍光ラベリ
ング／標識付け；及び実験室用途、診断用途又は工業用
途に対する動物細胞若しくは微生物又は粒子の蛍光ラベ
リングに対しても有用である。それらはそれらの優れた
吸光係数とより高い蛍光収率に起因して、現在用いられ
ている蛍光標識、例えばフルオレセインイソチオシアネ
ート（ＦＩＴＣ）又はフィコエリスリンの内の幾つかを
置き換え得る。
【００４４】診断の目的には、本発明のＣｈｌ誘導体及
びＢｃｈｌ誘導体は標準的な方法で、例えば６７Ｇａ、
１１１Ｉｎ、２０１Ｔｌ、９９ｍＴｃにより放射性ラベ
リングすることができ、この放射性診断剤は患者に、好
ましくはｉ．ｖ．注射で投与される。若干の期間の経過
後、癌の位置は標準的な方法で画像にして示すことがで
きる。
【００４５】部位指向増感剤を使用するＰＤＴの期待さ
れる利点は副作用と増感剤の適用用量の劇的な減少であ
る。ＰＤＴに対してこれら提案されたＣｈｌ結合体及び
Ｂｃｈｌ結合体を使用する幾つかの特定の利点は次の通
りである：
【００４６】（１）これらの化合物はヒト／動物組織に
よる光学的吸収／減衰が著しく減少する（モノマー形で
は６６０〜８３０ｎｍ、２量体以上のアグレゲート（ａ
ｇｇｒｅｇａｔｅ）では１０００ｎｍまで）波長で最大
の光学的吸収を有する。光散乱の減少と共に、これはよ
り大きな侵入深さ又は強度がより弱く、値段がより安い
光源の使用を可能にするだろう。
【００４７】（２）可視光及び近−１Ｒにおけるそれら
の吸光係数がＰＤＴに現在使用されているポルフィリン
の吸光係数より約１０倍大きい。
【００４８】（３）中心Ｍｇ原子の他の金属による置換
は、光増感剤の３重項状態の収率がより高いことに起因
して、１重項状態酸素の生成収率を向上させることがで
き、かつそれら化合物を著しく安定化する。
【００４９】（４）それらは標的細胞の認識について高
い特異性を示す。従って、増感剤は細胞の壊死に対して
より低い用量で十分である。加えて、Ｃｈｌ結合体及び
Ｂｃｈｌ結合体は現在使用されている多くの発蛍光団よ
り優れた光化学的性質を示し、従って他の用途において
も実用可能であろう。
【００５０】（５）ある種特定のＣｈｌ誘導体は体から
の清掃率が高いことを示す幾つかの報文がある［スパイ
クス（Ｓｐｉｋｅｓ）及びボーマー（Ｂｏｍｍｅｒ）、
１９９１年］。
【００５１】（６）通常、照射はレーザー源、例えば６
３０ｎｍで放射するように調整されたＡｒ−排気式（Ａ
ｒ−ｐｕｍｐｅｄ）染料レーザー又は６２８ｎｍで放射
する金−蒸気レーザー（パルス式レーザー）を用いて行
われる。この装置は高価であるので、ＰＤＴの適用はよ
り大きな医療センターに限られる。本発明による赤吸収
性又は近−ＩＲ吸収性の光増感剤の使用はキセノンフラ
ッシュランプ、ハロゲンランプ、ダイオードレーザー又
は太陽直射線等のより一般的かつ低コストの手段に道を
開く。
【００５２】（７）放射線ラベル付き又は活性ラベル付
きＣｈｌ誘導体及び同Ｂｃｈｌ誘導体は診断及び治療の
両目的に同時に使用することができる。
【００５３】
【実施例】ここで、本発明を次の非限定実施例によって
説明する。
【００５４】実施例１：クロロフィルａの製造 クロロフィルａをスピルリナ ガルティーリ（Ｓｐｉｒ
ｕｌｌｉｎａ Ｇａｌｔｉｅｒｉ）から次の通り精製し
た。即ち、凍結乾燥細胞（２〜３ｇ）を粉砕して粉末と
なし、アセトン（１０ｍｌ）で３回抽出し、その抽出物
を濾過し、捨てた。褐−緑色の残分をメタノールと共に
粉砕することによって再抽出した。濾過後、淡灰色の固
体を捨て、その抽出物から溶媒を真空下で蒸発させた。
緑色の残分をアセトンに再溶解し、５℃においてジエチ
ルアミノエチルセファローズ［ファーマシア ファイン
ケミカルス社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌｓ）、ＤＥＡＥ−セファローズＣＬ−６
Ｂ］のカラム（直径１．５ｃｍ、長さ６ｃｍ）でクロマ
トグラフにかけて精製した。そのカラムをアセトンで洗
浄して黄色物質（カロテノイド類）をを除去し、次いで
メタノール／アセトン（１：３ｖ／ｖ）で洗浄してＣｈ
ｌａの暗青色溶液を溶離した。クロマトグラフィーによ
る分離に要した総時間は１０〜１２分であった。得られ
たＣｈｌａを残留カロテノイド類、その他の不純物、例
えばフェオフィチン又は塩素についてＴＬＣと分光測光
法でチェックし、そして必要によって再度クロマトグラ
フにかけた。次に、メタノール／アセトンを蒸発させ、
そして固体のＣｈｌａを真空下で完全に乾燥させた。全
ての操作はうす暗い明かりの中又は暗所で行い、そして
分解を最少限に抑えるために可能な限り速やかに終わら
せた。分析等級の溶媒をそれ以上精製することなく使用
した。
【００５５】実施例２：クロロフィラーゼの製造 メリア アゼダラフ Ｌ．チャイナ ツリー（Ｍｅｌｉ
ａ ａｚｅｄａｒａｃｈ Ｌ・Ｃｈｉｎａ ｔｒｅｅ）
の葉の葉緑体からクロロフィラーゼ（Ｃｈｌａｓｅ）ア
セトン粉末を調製した。即ち、新鮮な葉（５０ｇ）をブ
レンダー中で冷アセトン（−２０℃）３５０ｍＬと共に
粉砕した。その均質化物をゲージを通して濾過し、その
瀘液を５℃において１晩放置して葉緑体を沈降させた。
アセトンを濾過により除去し、残った粉末を９５％アセ
トンで数回、そして最後に１００％アセトンで洗浄する
と、クロロフィラーゼアセトン粉末が得られ、これを真
空下で乾燥した。この粉末は−２０℃で少なくとも数カ
月間は貯蔵して置くことができる。
【００５６】実施例３：セリン誘導体の製造 次のセリン誘導体をＣｈｌａ／Ｂｃｈｌａのエステル交
換反応に使用した：
【００５７】（ａ）Ｌ−セリンメチルエステル塩酸塩
（Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ・ＨＣｌ）はシグマ ケミカル社
（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）から購入し
た。
【００５８】（ｂ）カルボベンゾキシセリルセリンメチ
ルエステル（Ｚ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅ）：この新規な誘導
体の合成はニコレーデス（ＮｉＣｏｌａｉｄｅｓ）等が
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１１、７４−７９、１９６８
に記載する方法を用いて行った。即ち、カルボベンゾキ
シセリン（Ｚ−Ｓｅｒ）６．４５ｇ（０．０２７モル）
のＤＭＦ５０ｍＬ中冷（５℃）溶液にｐ−ニトロフェノ
ール３．９ｇ（０．０２８モル）とＤＣＣ５．８ｇ
（０．０２８モル）を加えた。その混合物を５℃に５時
間保ち、そして濾過した。その濾液にセリンメチルエス
テル塩酸塩４．２ｇとＥｔ３Ｎ２．７ｇ（０．０２７モ
ル）とから調製したＤＭＦ５０ｍＬ中の濾過済み溶液を
加えた。この反応混合物を２５℃で１８時間放置し、次
いで蒸発させて少容量となした。その残分をＥｔＯＡｃ
１００ｍＬに吸収させ、得られた溶液をＨ２Ｏ、５％Ｎ
ａ２ＣＯ３溶液及び希ＨＣｌで洗浄し、これを乾燥し、
そして約３０ｍＬになるまで蒸発させた。石油エーテル
を加え、得られた固体を取り出し、ＥｔＯＡｃ−ＭｅＯ
Ｈ−Ｅｔ２Ｏから再結晶化してＺ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅを
得た。ｍｐ１９０〜１９２℃。
【００５９】（ｃ）カルボベンゾキシセリン（Ｚ−Ｓｅ
ｒ）：上記（ｂ）の合成で使用したこの誘導体の合成は
ムーア（Ｍｏｏｒｅ）等がＪＡＣＳ、７６、２８８４−
２８８７、１９５４に記載した方法を用いて行った。即
ち、ＮａＯＨの冷（５℃）溶液（２１２ｍＬ、２Ｎ）に
Ｌ−セリン４４．３ｇ（０．４２モル）を加えてｐＨ
９．８を得た。１０〜１５分間隔でベンジルクロロホル
メートを一部ずつ（４〜５ｇ）を加え、そしてＮａＯＨ
の１Ｎ溶液を用いてｐＨ９．８に調整した。この添加は
ベンジルクロロホルメート８０ｇ（０．４６モル）を加
え終わるまで続けられた。そのｐＨを次に１０℃で０．
５時間維持した。その塩基性溶液をジエチルエーテル１
５０ｍＬで、次いで１００ｍＬで抽出し、そしてその水
溶液にＥｔＯＡｃ１Ｌを加えた。この溶液を濃ＨＣｌ・
３０〜３５ｍＬを加えることによってｐＨ３まで酸性化
し、そしてその水性層をＥｔＯＡｃ２５０ｍＬで、次い
でＥｔＯＡｃ１５０ｍＬで抽出した。このＥｔＯＡｃ溶
液をＭｇＳＯ４上で乾燥し、そしてＺ−Ｓｅｒが沈殿す
るまで真空下で濃縮した。ＥｔＯＡｃから再結晶化する
と純粋な生成物が得られた。ｍｐ１１７−１１９℃、総
収量７９ｇ（７８％）。
【００６０】（ｄ）Ｎ−トリチル−Ｌ−セリンメチルエ
ステル（Ｔｒｉ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ）：この誘導体の合成
はグットマン（Ｇｕｔｔｍａｎｎ）がＨｅｌｖ．Ｃｈｅ
ｍ．、４５、２６２２、１９６２に記載した方法を用い
て行った。即ち、Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ１５．５ｇ（０．
１モル）のクロロホルム１５０ｍＬ中の冷（０℃）溶液
にＥｔ３Ｎ３１ｍＬとトリフェニルメタン２６．７ｇ
（０．１１モル）を加えた。この溶液を０℃に３時間保
ち、次いで水で洗浄し、そしてＮａ２ＳＯ４上で乾燥し
た。その溶媒を真空下で蒸発させ、その固体残分をベン
ゼン−石油エーテル混合物（１：１）中で再結晶化させ
ることによって純粋な生成物２８ｇ（７７％）を得た。
【００６１】実施例４：ＣｈｌａとＬ−セリンメチルエ
ステルとの酵素エステル交換反応によるＬ−セリルメチ
ルエステルクロロフィリドａ（Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−
ＯＭｅ）の製造
【００６２】４．１ Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの
製造 実施例２のクロロフィラーゼアセトン粉末２００ｍｇを
ＴＸ−１００［トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００、
シグマ ケミカル社］０．７％、Ｌ−セリンメチルエス
テル塩酸塩（シグマ社）４００ｍｇ及びアスコルビン酸
［メルク社（Ｍｅｒｃｋ）］，７０ｍｇを含有するｐＨ
７．６の０．５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液６ｍＬに懸濁さ
せた。この懸濁液を５分間均質化し、そして室温で１時
間撹拌した。得られた懸濁液を固体のＣｈｌａ５ｍｇと
共に更に均質化し、そしてＡｒで飽和させた。この混合
物を密封し、そして撹拌しながら完全な暗所で３６℃に
おいて７時間インキュベートした。反応の進行を溶離液
としてｎ−ヘキサン：アセトン（６：４）か又は１−ブ
タノールを用いてシリカゲル（メルク社）によるＴＬＣ
でモニターした。Ｃｈｌａ、Ｃｈｌｉｄｅａ及び標題化
合物Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅに対応する３つのバ
ンドが観察された。
【００６３】４．２ Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの
精製 上記の反応混合物をＮａＣｌ・２ｇ及びアスコルビン酸
ナトリウム（シグマ社）１００ｍｇを含有する水２０ｍ
Ｌに加え、低真空下で濾過した。青−緑色の残分をアセ
トンで洗浄し、再び濾過した。それらの濾液を合わせ、
ＮａＣｌを飽和させ、そして分液漏斗中でジエチルエー
テルと一緒に振盪した。そのエーテル性層を集め、固体
ＮａＣｌ上に約１０時間保持し、次いで乾燥窒素流中で
蒸発させ、そして得られた顔料の青−緑色残分を真空下
で乾燥した。この残分をアセトンに溶解し、そしてアセ
トンで平衡にせしめられた５℃のＣＭ−セファローズＣ
Ｌ−６Ｂカラムに供した。このカラムをフェオフィチン
類の褐色バンドが現れ、カラム頂部に青−緑色バンドと
して残るＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ結合体のバンド
から分離されるまでアセトンで洗浄した。そのフェオフ
ォルビドを溶離するのに５％メタノール／アセトン及び
８％メタノール／アセトンをそれぞれ使用した。次に、
Ｃｈｌｉｄｅａを溶離し、最後にＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ
−ＯＭｅ結合体を２５％メタノール／アセトンで溶離し
た。この最後の青−緑色画分を集め、分別に１−ブタノ
ールを使用してシリカゲルによるＴＬＣで純度のチェッ
クを行い、乾固するまでＮ２をフラッシュし、次いで真
空下で乾燥し、そして貯蔵のためにＡｒ下、暗所で−２
０℃において密封した。収率７５％。
【００６４】４．３ Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ結
合体の構造 Ｃｈｌａ、Ｃｈｌｉｄｅａ及びＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−
ＯＭｅ結合体の光学的吸収スペクトルとＦＴＩＲスペク
トルをそれぞれ図６及び８に示す。各化合物（反応混合
物内）はシリカゲルＴＬＣ上に個別スポットとして分離
した。出発Ｃｈｌｉｄｅａに比較してＣｈｌａ−Ｌ−Ｓ
ｅｒ−ＯＭｅ結合体（ＩＶ）のＣＤ３ＯＤ中の１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル（化学シフトは表１に示す）はセリン部
分のメチル基に相当する３．５７ｐｐｍ及びエステル結
合の再発現を示している５．３１−５．３７ｐｐｍに新
しい信号を有している。化合物は全て完全な大環状化合
物のパターンを示しているが、Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−
ＯＭｅ結合体（ＩＶ）及びＣｈｌｉｄｅａにはフィチル
のバンドがない。
【００６５】図８に示される通り、Ｃｈｌａ（ａ）とＣ
ｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ結合体（ｃ）とのＦＴＩＲ
スペクトル（１７２８ｃｍ−１にエステルバンドを有す
る）は似ているが、Ｃｈｌｉｄｅａ（ｂ）とは相当に異
なる。
【００６６】実施例５：ＣｈｌａとＺ−Ｓｅｒ２−ＯＭ
ｅ及びＴｒｉ−Ｓｅｒ−ＯＭｅとの酵素エステル交換反
応 Ｃｈｌａとセリン誘導体であるＺ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅ及
びＴｒｉ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ［上記実施例３の化合物
（ｂ）及び（ｄ）］とのエステル交換反応を上記実施例
４におけるようにして行った。ＴＬＣは、Ｃｈｌａ−セ
リン誘導体の結合体は収率３５％であることを、また加
水分解精製物は存在しないことを示す。
【００６７】実施例６：ＢｃｈｌａとＬ−セリンメチル
エステルとの酵素エステル交換反応によるＬ−セリルメ
チルエステルバクテリオクロロフィリドａ（Ｂｃｈｌａ
−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ）の製造 ＢｃｈｌａとＬ−セリンメチルエステルとのエステル交
換反応を実施例４に記載されるようにして行い、Ｂｃｈ
ｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅを製造した。収率３５％。こ
の結合体の純度をＴＬＣでチェックした。Ｂｃｈｌａと
Ｂｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ結合体の光学的吸収ス
ペクトルとＦＴＩＲスペクトルをそれぞれ図６及び９に
示す。（化学シフトは表１に示す（化合物ＶＩＩ）。）
【００６８】
【表１】
【００６９】★Ｂｃｈｌｉｄｅａのカルボキシル基とＺ
−Ｓｅｒ２−ＯＭｅとの間の図５による“エステル結
合”
【００７０】Ｉ Ｚ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅ − カ
ルボベゾキシセリル−セリンメチルエステル ＩＩ Ｌ−セリン − Ｌ−セリンメチルエステル ＩＩＩ Ｎ−ｔＢＯＣ−Ｔｙｒ−ＯＭｅ − Ｎ−ｔ
ｅｒｔ−ブトキシカルボニルチロシンメチルエステル ＩＶ Ｌ−セリルメチルエステルクロロフィリドａ Ｖ カルボベゾキシセリル−セリルメチルエステ
ルクロロフィリドａ ＶＩＩＩ カルボベゾキシセリル−セリルメチルエステ
ルバクテリオクロロフィリドａ ＩＸ Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルチロシル
メチルエステルバクテリオクロロフィリドａ
【００７１】実施例７：ＣｈｌｉｄｅａとＺ−Ｓｅｒ２
−ＯＭｅとの触媒エステル化反応によるカルボベゾキシ
セリルセリルメチルエステルクロロフィリドａの製造 乾燥Ｃｈｌｉｄｅａ（３ｍｇ）、ＤＣＣ（５．１ｍ
ｇ）、ＤＭＡＰ（１．２ｍｇ）及びＺ−Ｓｅｒ２−ＯＭ
ｅ（５倍過剰）を乾燥ジクロロメタン１ｍＬに溶解し、
Ａｒ下で密封し、そして室温、暗所で３６時間撹拌し
た。標題化合物（Ｖ）を分取シリカゲルＴＬＣプレート
で単離し、次いでＤＥＡＥ−セファローズカラムで精製
した。最終生成物のＮＭＲスペクトルを表１に示す。収
率１８％。
【００７２】実施例８：ＣｈｌｉｄｅａとＮ−ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボニルチロシルメチルエステル（Ｎ−ｔ
ＢＯＣ−Ｔｙｒ−ＯＭｅ）との触媒エステル化反応によ
るＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルチロシルメチルエ
ステルクロロフィリドａの製造 乾燥Ｃｈｌｉｄｅａ（３．４ｍｇ）、ＤＣＣ（５８ｍ
ｇ）、ＤＭＡＰ（１．３８ｍｇ）及びＮ−ｔＢＯＣ一Ｔ
ｙｒ−ＯＭｅ（シグマ社）（１５倍過剰）を乾燥ジクロ
ロメタン１ｍＬに溶解し、Ａｒ下で密封し、そして室
温、暗所で４０時間撹拌した。生成物を分取シリカゲル
ＴＬＣプレートで単離し、そしてＤＥＡＥ−セファロー
ズカラムで更に精製した。収率２５％。
【００７３】実施例９：ＢｃｈｌｉｄｅａとＺ−Ｓｅｒ
２−ＯＭｅ及びＮ−ｔＢＯＣ−Ｔｙｒ−ＯＭｅとの触媒
エステル化反応によるＢｃｈｌａ−セリン結合体及びＢ
ｃｈｌａ−チロシン結合体の製造 Ｂｃｈｌｉｄｅａと上記化合物の各々とのエステル化反
応（縮合）をそれぞれＣｈｌｉｄｅａについて実施例７
〜８で述ベたようにして行った。表１はＮ−ｔｅｒｔ−
ブトキシカルボニルチロシルメチルエステルバクテリオ
クロロフィリドａ（Ｂｃｈｌａ−Ｎ−ｔＢＯＣ−Ｔｙｒ
−ＯＭｅ：化合物ＩＸ）及びカルボベゾキシセリルセリ
ルメチルエステルバクテリオクロロフィリドａ（Ｂｃｈ
ｌａ−Ｚ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅ：化合物ＶＩＩＩ）のＮＭ
Ｒシフトを示す。
【００７４】実施例１０：Ｃｈｌ類及びＢｃｈｌ類中の
中心ＭｇのＺｎ及びＣｕによる置換 Ｚｎ又はＣｕのＣｈｌｉｄｅａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅへ
の挿入は室温において非常に緩和な条件下で容易に起こ
る。
【００７５】Ｌ−セリルメチルエステルフェオフォルビ
ドａ（Ｐｈｅｏ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ：化合物Ｘ）を氷酢酸
との反応におけるＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅのデメ
タレーションで得た。Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの
少部分を数滴の酢酸に溶解し、１０〜１５秒後にその酸
をＮ２下で蒸発させた。Ｐｈｅｏ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの褐
色がかった残分を酢酸Ｚｎ（又は酢酸Ｃｕ１１）のエタ
ノール中０．１Ｍ溶液２ｍＬに溶解し、それを撹拌しな
がらＡｒ雰囲気下、室温において暗所に２０分間保持し
た。この大環状化合物の配位状態における変化には可視
範囲における吸収スペクトルの変化が伴われ、その反応
の進行は分光分析で追跡することができた。生成物の可
視吸収スペクトルを図７に示す。これらの条件下では、
メタレーション反応はほとんど定量的で、Ｃｈｌａ−Ｌ
−Ｓｅｒ−ＯＭｅのＺｎ誘導体及びＣｕ誘導体が得られ
た。
【００７６】実施例１１：Ｃｈｌｉｄｅａ、Ｂｃｈｌｉ
ｄｅａ並びにＣｈｌａ−セリン結合体及びＢｃｈｌａ−
セリン結合体の培養中の黒色腫細胞に対する吸収 （ａ）試験管内検定 Ｃｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体の黒色腫細胞に対する
親和性のモニターは次のようにして行った。マウスのＭ
２Ｒ黒色腫細胞［ガースト（Ｇｅｒｓｔ）等、１９８６
年］をＣＯ２８％の吸湿された雰囲気中、３７℃におい
てウマの血清１０％を含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２中で単
層として培養した（合流率１００％まで）。４８時間
後、細胞を色々な濃度（１〜１００μＭ）のＣｈｌｉｄ
ｅａ、Ｂｃｈｌｉｄｅａ、Ｃｈｌａ−セリン結合体、Ｂ
ｃｈｌａ−セリン結合体並びにＨＰＤ（フォトフィリン
ＩＩ）で３時間処理した。Ｃｈｌ誘導体又はＢｃｈｌ誘
導体の細胞に対する吸収の程度を調べるために、培地を
吸い出し、その細胞を燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３
回洗浄し、そしてそれら顔料をアセトンで抽出した。そ
の溶液中のＣｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体の濃度を、
それらの光学的吸収と蛍光をアセトン中の既知顔料濃度
のそれらと比較することによって求めた。
【００７７】ウマの血清の存在下における３時閘のイン
キュベーションに続いてＭ２Ｒ細胞に吸収されたＣｈｌ
ｉｄｅａとＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ及び対応する
Ｂｃｈｌａ誘導体の分子数を図１０及び１１に示す。そ
れらの図から分かるように、Ｃｈｌｉｄｅａ及びＣｈｌ
ａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅはＭ２Ｒ黒色腫細胞にフォトフ
ィリンＩＩ（ＨＰＤ）より良好に吸収される。Ｂｃｈｌ
ｉｄｅａ及びＢｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅは黒色腫
細胞にそれぞれ同程度及びフォトフィリンＩＩより約５
倍少なく吸収される。吸収された分子数は培地中のそれ
らの初期濃度に直線的に依存し、そして顔料吸収はイン
キュベーションの最初の時間中に平衡に達する（表
２）。血清の不存在下では、Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−Ｏ
ＭｅはＣｈｌａより約１５倍良好に吸収される（データ
ーは示さず）。
【００７８】
【表２】
【００７９】（ｂ）生体内検定 １０％エタノール／ＰＢＳに溶解したＣｈｌ又はＢｃｈ
ｌを複数のマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射する。対照
群として、複数の注射しないマウスと賦形剤を注射した
マウスを使用する。動物組織の一部分又は完全な器官
（例えば、脾臓、肝臓、脳等）を切り裂き、アセトン中
で均質化し、次いで遠心分離する。その上層液が顔料を
含有する。上層液中の顔料濃度は蛍光分光分析法で測定
する。
【００８０】実施例１２：培養液中の黒色腫細胞に対す
るＣｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体の毒性 Ｃｈｌｉｄｅａ及びＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ結合
体の培養中の黒色腫細胞に対する光力学的効果を次のよ
うにして試験した。即ち、単層（合流率１００％まで）
としてのＭ２Ｒマウス黒色腫細胞を顔料のＣｈｌａ、Ｃ
ｈｌｉｄｅａ及びＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅで３０
分間処理した。続いて、培養物にその上から６７０ｎ
ｍ、５ｍＷのＧａＡｓダイオードレーザー（光源Ａ）、
５０００μアインシュタイン／ｃｍ２、１５０Ｗのキセ
ノンランプ（光源Ｂ）又は１５００μアインシュタイ
ン、９０Ｗのハロゲンランプ（光源Ｃ）を１０分間照射
した。対照群は未処理細胞、暗所に保たれた顔料処理細
胞及び照射未処理細胞を包含していた。照射３時間後に
細胞形態の照射による変化を位相差鏡検法で調べた。
【００８１】完全な／生きている細胞には入れず、損傷
を受けた細胞の核に選択的に蓄積するプロピジウムアイ
オダイド［２，７−ジアミノ−９−フェニル−１０−
（ジエチルアミノプロピル）−フェナントリジニウムア
イオダイド ｍｅｔｈ−アイオダイド］（ＰＩＤ）で単
層の光力学的に処理された領域中の死んだ細胞を染色
し、そのアイオダイドの赤色蛍光をモニターすることに
よってそれら死んだ細胞を評価することにより種々のＣ
ｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ誘導体の細胞溶解活性の評価を
行った。染色された培養物中の蛍光性の核の測定は蛍光
鏡検法で行った［イェー（Ｙｅｈ）、１９８１年］。結
果を図１４及び１５に示す。しかし、処理細胞の培養物
を顕微鏡検査することに基づくこの方法は、非常に多数
の細胞培養物に適用されるＰＤＴ薬剤の細胞溶解活性の
系統的な定量的スクーリングと評価に対して最も適した
ものと言うわけではない。
【００８２】別法として、光力学的毒性を［３Ｈ］チミ
ジンの配合によって調べた。この場合、ＰＤＴに続いて
行われる［３Ｈ］チミジンの配合率の変更は次のように
して行った。即ち、細胞培養物（１０％胎児性ウシ血清
中で成長せしめられた、合流率約４０〜５０％の細胞４
〜５×１０４個／ウエル）にチミジン［メチル−３Ｈ］
１μＣｉ／ｍＬを３７℃で２時間律動的に送った。次
に、培養物を冷燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄
し、７．５％氷冷トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で４℃にお
いて３０分間処理し、そしてエタノールで２回洗浄し
た。次に、１ＭのＮａＯＨ０．３ｍＬに細胞を３７℃に
おいて１５分間溶解させた。各１００μＬの試料を１Ｎ
のＨＣｌ・１００μＬと０．１Ｍイミダゾール４ｍＬで
中和し、そしてキシレンシンチレーター／ルマックス
（Ｌｕｍａｘ）の２０：８（容量／容量）混合物中で細
胞を数えた。図１２Ａで説明される実験において、Ｍ２
Ｒ細胞をＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅでその濃度を次
第に高めながら６０分間処理し、続いて光源Ｂを照射し
た。図１２Ａから分かるように、光力学的損傷は細胞の
２４時間後における［３Ｈ］チミジン配合能の用量依存
性低下で表される。効果は完全に光依存性であって、そ
れは暗所対照例及び未処理照明対照例では認められなか
った。同様の結果がＦＳ１１ヒト表皮線維芽細胞（図１
２Ｂ）及びヒトＴ４７Ｄ胸癌細胞（図１２Ｃ）により得
られた（光源Ｂを使用）。結果は３重反復測定の平均±
ＳＤとして与えられる。
【００８３】ＰＤＴの効果をまたクローン原性検定によ
って測定した。即ち、上記のように（図１２Ａ）色々な
濃度のＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅによる細胞の処理
及び照射工程が完了して２４時間後に、培養物をトリプ
シン化し、そして成育可能細胞の数をトリパンブルー排
除法で求めた。適切な希釈を行い、そして６−ウエルの
コースタープレート（Ｃｏｓｔａｒ ｐｌａｔｅｓ）に
細胞２５０個／ウエルを接種した。培養１１〜１２日
後、培地を吸い出し、そのコロニーを固定し、メタノー
ル中クリスタルバイオレットで染色し、そしてコロニー
数（細胞４０個／コロニー以上）を解剖顕微鏡下で数え
た。図１３に見ることができるように、光力学的処理は
生存細胞の数をＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅに関して
用量依存性様式で減少させたが、暗所対照又は未処理照
明対照ではその減少はなかった。図１２Ａと図１３との
結果を比較すると、それは２つの形態間に良好な相関関
係があることを示している。結果は３重反復測定の平均
±ＳＤとして与えられる。
【００８４】細胞溶解を推論するために用いることがで
きる他の方法に、（１）［３Ｈ］アデニン負荷に続く処
理細胞の細胞溶解活性の測定、（２）５２Ｃｒ負荷によ
る細胞溶解活性の測定及び（３）ビデオ−マイクロ画像
形成技術による壊死領域の検出がある。ＰＩＤの使用は
損傷をうけた細胞のみによる蛍光染料の選択的摂取に基
づくが、方法１及び２は予備インキュベーション工程の
際の放射性トレーサーの摂取に基づくもので、薬剤は第
二工程で放射能の放出を誘発する。後者の２つの方法は
十分な反復試験物中の数十乃至数百の試料の詳細な滴定
に必要とされる多重検定（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｓｓａ
ｙｓ）に適している。
【００８５】図１４は４×１０−６ＭのＣｈｌａ−Ｌ−
Ｓｅｒ−ＯＭｅと共に３０分間インキュベートした黒色
腫細胞の単層上の２つの領域を示す。領域Ａ（図１４、
左）に照射を行い（光源Ａ）、一方領域Ｂは暗所に保
つ。照射細胞（領域Ａ）は著しく減少しているようであ
り、皿との接触を失っているように思われ、そしてそれ
らの細胞膜は分解され、不規則となっているようであ
る。同じ培養物（図１４、右）をＰＩＤ蛍光鏡検法で調
べると、それは細胞の損傷が光力学的に処理された領域
に限られ、形態変化と細胞死との間には１：１の相関関
係があることを示し、一方生きている細胞の核はＰＩＤ
から何んらの蛍光も示さなかった（図１４の領域Ａと
Ｂ、即ち左右を比較されたい）。倍率がより高い照射域
のへりは蛍光性の核を有する照射されたＰＩＤ処理細胞
を示し、それらに隣接して正常な形態を持つ未照射対照
細胞と未染色細胞が存在する（図１５）。同等に照射さ
れた対照の未処理細胞には損傷は確認できなかった（図
１６）。同様の形態変化が４×１０−６ＭのＣｈｌｉｄ
ｅａと共にインキュベートされた黒色腫細胞の１０分照
射後に認められた（図示されず）。
【００８６】実施例１３：Ｃｈｌ結合体及びＢｃｈｌ結
合体による複数のマウスの処理 （ａ）腫瘍の移植：Ｍ２Ｒ細胞を通常通りに単層として
保持する。細胞をゴムポリスマンの助けを借りて掻き取
り、標準食塩水に懸濁させる。細胞１×１０６個／０．
１ｍＬを雄のＣ５７Ｂ１又はＣＤ１ヌードマウスの側腹
部又はバッチに皮下注射する。約３〜５週間で腫瘍は目
で見えるようになる。これらの腫瘍は固体の局限された
構造のものとして成長し、移植７〜８週間後に約１０ｇ
の質量に達することができる。同様の方法をマウスＭ２
Ｒか、又はヒト（ＦＯ／１、ＭＲＩ／Ｈ／２２１、ＨＳ
６９５Ｔメラニン欠乏黒色腫又はＳＫ／ＭＥＬ／２８）
の黒色腫腫瘍が移植されているヌードマウスに使用す
る。
【００８７】（ｂ）注射と照射：複数のマウスに１０％
エタノール−ＰＢＳ溶液中のＣｈｌ誘導体及びＢｃｈｌ
誘導体、即ちＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ及びＢｃｈ
ｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ２０ｍｇ／ｋｇをｉ．ｐ．注
射した。５時間後、その腫瘍に１時間照射した。複数の
対照マウスには（ｉ）上記エタノール−ＰＢＳ溶液を注
射し、そして１時間照射し；（ｉｉ）上記Ｃｈｌ誘導体
及びＢｃｈｌ誘導体を注射し、そして暗所に保った。
【００８８】（ｃ）照射２４時間後、それらマウスを頚
部脱臼により殺した。必要な通り、腫瘍の配向を組織染
色の助けを借りて維持し、そして腫瘍を標準的な組織学
的切片形成経路により更に処理した。
【００８９】（ｄ）照射なしでの、正常ハウジング（ｎ
ｏｒｍａｌ ｈｏｕｓｉｎｇ）条件下における複数のＣ
５７Ｂ１マウス中のＣｈｌ−セリン結合体及びＢｃｈｌ
−セリン結合体、即ちＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ及
びＢｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの毒性を１０％エタ
ノール／ＰＢＳに溶解した上記化合物の注射によって評
価した。複数の対照マウスには上記ビヒクルのみを注射
した。注射量４０ｍｇ／ｋｇ体重まではそれらマウスの
挙動に顕著な影響はなく、マウスは最長で１４日間状態
よく生存していた。この薬剤用量はしかして使用用量と
してずば抜けて高いもので、従って処理のＬＤ５０対Ｅ
Ｃ５０（治療指数の限界）はこれを更に決定しなければ
ならない。
【００９０】（ｅ）病巣照射（５ｍＷのＧａ／Ａｓダイ
オードレーザー、６７０ｎｍ）に起因する複数のＣｈｌ
ａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ処理ヌードマウスにおける皮膚
細胞毒性を試験した。即ち、１０％エタノール／ＰＢＳ
中のＣｈｌ／Ｂｃｈｌ−結合体（２０ｍｇ／ｋｇ）を複
数のヌードマウスに注射（ｉ．ｖ．）し、２４時間後に
それらマウスの皮膚に４時間照射した。複数の対照マウ
スに（ｉ）上記エタノール−ＰＢＳ溶液を注射し、暗所
に保つ；（ｉｉ）対照マウスをＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−
ＯＭｅ処理せずに４時間照射（光源Ａ）した。照射２４
時間後、それらマウスを頚部脱臼により殺した。必要な
通り、照射域の配向を組織染色の助けを借りて維持し、
そして皮膚試料を標準的な組織学的方法により更に処理
した。実験動物における皮膚の照射は照射部位に損傷を
もたらし、真皮、表皮及び皮下脂肪層（ＳＦ）を通して
組織の壊死がもたらされることが見いだされた（図１
５）。壊死領域直下の区域の白血球（ＬＵ）が浸潤され
ていることで、明白な免疫応答があったことが示され
た。壊死領域に隣接する非照射皮膚は正常のようであ
る。対照群には皮膚刺激の徴候は認められなかった（デ
ーターは示されず）。
【００９１】（ｆ）Ｂｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅに
よるＭ２Ｒ黒色腫の腫瘍の光力学的処理：１：１エタノ
ール：食塩水０．０５ｍＬ中のＢｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ
−ＯＭｅ５０〜１５０μｇをＣＤ１ヌードマウスに前以
て移植した直径５〜６ｍｍの腫瘍の中に及びその周囲に
麻酔［ネムブタール（Ｎｅｍｂｕｔａｌ）６．０ｍｇ／
ｋｇ］下で注射した。注射は皮膚に注射針を腫瘍から１
０〜１５ｍｍ挿通することにより行い、その薬剤の腫瘍
自体への送出は腫瘍上方の皮膚及び腫瘍の外面はそのま
ま残るようにその内面から行った。次に、麻酔がかけら
れたマウスをベットに入れ、そして腫瘍部位に強度１９
０００μアインシュタイン／ｃｍ２のハロゲン白色光を
６０分間照射した。照射部位の直径は９ｍｍで、腫瘍領
域をカバーするだけであった。腫瘍の構造及び寸法の変
化の追跡を磁気共鳴画像形成法（ＭＲＩ）を用いて数週
間にわたり行った。処理前後の腫瘍形状の違いを図１８
に示す。肩甲骨に近い上部胸郭に移植された腫瘍は処理
前の図１８Ａに高ＭＲＩ信号による明るい構造（Ｔ）と
してはっきり認めることができるが、８４時間後には本
質的に除去されていた。２週間後に小さな再発があった
（図１８Ｂ）。２回目の処理（Ｂｃｈｌ−Ｌ−Ｓｅｒ−
ＯＭｅの照明）は３週間後も再発をもたらさなかった
（図１８Ｃ）。
【００９２】（ｇ）色々な組織及び器官の中の、並びに
処理されたヌードマウスとブラック（ｂｌａｃｋ）マウ
スの腫瘍の中のＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの保持性
を評価した。即ち、１０％エタノール／ＰＢＳ中Ｃｈｌ
ａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅをＣ５７Ｂ１雄ヌードマウス、
ＣＤ１雄ヌードマウス及びＣＤ１雌ヌードマウスにｉ．
ｐ．注射した（２０ｍｇ／ｋｇ、５〜１０匹のマウスの
平均）。組織試料（脂肪、筋肉、皮膚、血液）、完全器
官（脾臓、肝臓、脳、肺臓、心臓等）及び腫瘍を取り出
し、アセトン中で均質化し、次いで遠心分離した。上層
液中の顔料濃度を蛍光鏡検法で測定した。図１９にＣｈ
ｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの腫瘍中並びに色々な組織及
び器官中の１２時間後の分布を示す。
【００９３】実施例１４：チロシルエチルエステルクロ
ロフィリド及び同バクテリオクロロフィリドの製造
【００９４】（ａ）Ｃｈｌｄｅａ又はＢｃｈｌｉｄｅａ
のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｎ ＨＳ）に
よる活性化 真空乾燥したＣｈｌｄｅａ又はＢｃｈｌｉｄｅａ（５ｍ
ｇ）と乾燥ＮＨＳ（９．６ｍｇ）との混合物及びＤＣＣ
（５ｍｇ）をアルミナ上で乾燥したテトラヒドロフラン
（ＴＨＦ）２ｍＬに溶解した。この反応混台物をＡｒ下
で密封し、室温で４８時間撹拌し、次いで更に４８時間
５℃に保った。各工程は暗所で行った。反応完結後、そ
の溶媒をＮ２下で蒸発させ、緑色の残分をアセトンに再
溶解し、そして小さいＣＭ−セファローズカラム（ファ
ーマシア社；０．５×５．０ｃｍ）に供し、アセトン中
で平衡させた。そのカラムをアセトン１５〜２０ｍＬで
洗浄し、そして活性化されたＣｈｌｉｄｅ（ＮＨＳ−Ｃ
ｈｌｄｅａ又はＮＨＳ−Ｂｃｈｌｉｄｅａ）をアセトン
中３〜５％のメタノールで溶離した。溶離されたＮＨＳ
−Ｃｈｌｄｅａ又はＮＨＳ−Ｂｃｈｌｉｄｅａを同様に
して更に精製した。収量：２．９５〜４．１５ｍｇ（５
０〜８０％）。
【００９５】（ｂ）ＮＨＳ−Ｃｈｌｄｅａ及びＮＨＳ−
Ｂｃｈｌｉｄｅａのチロシンエチルエステル（Ｔｒｙ−
ＯＥｔ）に対する触媒結合 上記工程（ａ）の精製されたＮＨＳ−Ｃｈｌｄｅａ又は
ＮＨＳ−Ｂｃｈｌｉｄｅａ（２ｍｇ）を乾燥ＴＨＦ１ｍ
Ｌに溶解し、その溶液にチロシンエチルエステル（シグ
マ社）５ｍｇを加えた。この反応混合物をＡｒ下で密封
し、室温で４８時間撹拌し、次いで暗所中、５℃に４８
時間保った。この反応混合物の組成をヴィダック（Ｖｙ
ｄａｃ）Ｃ−１８ＨＰＬＣカラム［米国、ＩＩＩ州、デ
ィアフィールド（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ）のオールテク
アソシエーツ社（ＡｌｌｔｅｃｈＡｓｓｏｃｉａｔｅ
ｓ，Ｉｎｃ．）を用いて分析した。分離条件は次の通り
であった：カラム−２５０ｍｍ×４．６ｍｍ；充填−ヴ
ィダック２１８ＴＰ、粒径１０μ、孔寸法３００Å；移
動相−アセトニトリル／水（７：３）；流量−１ｍＬ／
分。Ｃｈｌｄｅａ−Ｔｒｙ−ＯＥｔ結合体又はＢｃｈｌ
ｉｄｅａ−Ｔｒｙ−ＯＥｔ結合体は保持時間９．５分で
溶離された。反応生成物をＣＭ−セファローズを用いて
実施例４におけるようにして精製した。
【００９６】実施例１５：Ｃｈｌａ−及びＢｃｈｌａ−
α−ＭＳＨ結合体の製造 α−メラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）は次式を有す
る：
【化３】Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈ
ｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒ
ｏ−Ｖａｌ−ＮＨ２
【００９７】Ａｒ下でポリエチレン製試験管に入れら
れ、トリエチルアミン（ＴＥＡ）０．０７ｍｇを含有す
る、アセトニトリルと水との８：２混合物中α−ＭＳＨ
１ｍｇの撹拌された溶液１ｍＬに少容量（約０．２ｍ
Ｌ）のアセトニトリル中のＮＨＳ−Ｃｈｌｉｄｅａ（実
施例１４ａで製造）２．１５ｍｇを加え、短時間超音波
処理した。Ａｒ下で密封したこの反応混合物を暗所、室
温において６６時間撹拌した。反応の途中において、反
応混合物から反応の開始から０、３、１９、４５及び６
６時間後に１５μＬづつを採取し、ＨＰＬＣ分析にかけ
た。
【００９８】反応混合物の各既知少量（１５μＬ）をＮ
２下で乾燥し、ＴＦＡ０．１％を含有する水中にアセト
ニトリルを２０％（％は全てｖ／ｖ）含む混合物５０〜
１００μＬに再溶解した。この溶液をＣ−１８ＨＰＬＣ
力ラムに注入した。集められた画分は次の保持時間を有
していた：２４分−未反応α−ＭＳＨ；３６分−Ｃｈｌ
ａ−α−ＭＳＨ結合体；７６分−Ｃｈｌｉｄｅａ。分離
条件は次の通りであった：カラム−２５０ｍｍ×４．６
ｍｍ；充填−ヴィダック２１８ＴＰ、粒径１０μ、孔寸
法３００Å；移動層Ａ−水中ＴＦＡ０．１％；移動層Ｂ
−アセトニトリル中ＴＦＡ０．１％；勾配−０分から５
分までＢ２０％、次いで１０分にわたりＢ２０〜５５
％、そして２５分にわたりＢ５５〜８０％、その後Ｂ８
０％で洗浄；流量−１ｍＬ／分。
【００９９】Ｂｃｈｌａ−α−ＭＳＨ結合体を同様にし
て製造した。ただし、Ｂｃｈｌｉｄｅａを出発物質とし
て用いた。精製後、ペプチドとＢｃｈｌａとのスペクト
ルの特徴を有する画分を集めた。
【０１００】Ｃｈｌａ−α−ＭＳＨ結合体の生物学的活
性をマウスのＭ２Ｒ細胞培養物中において環式ＡＭＰ
（ｃＡＭＰ）を刺激するその能力をα−ＭＳＨの効力の
ある同族体である［Ｎｌｅ４，Ｄ−Ｐｈｅ７］α−ＭＳ
Ｈに比較して測定することによって評価した。ｃＡＭＰ
の蓄積はガースト等（１９８６年）が記載するようにし
て行った。図２０に示されるように、Ｃｈｌａ−α−Ｍ
ＳＨ結台体は上記α−ＭＳＨ同族体の活性と比較して同
じ効力を保持している。
【０１０１】実施例１６：Ｃｈｌａ−及びＢｃｈｌａ−
蛋白質結合体の製造 Ｎ２下でポリエチレン製試験管に入れられ、トリエチル
アミン（ＴＥＡ）０．１ｍｇを含有する、ウシ血清アル
ブミン（ＢＳＡ）、ガンマー免疫グロブリンＧ（Ｉｇ
Ｇ）及びピーナッツ凝集素から選択される蛋白質数ミリ
グラムの緩衝ＰＢＳ（燐酸塩緩衝剤０．１Ｍ、ｐＨ７．
６）中の撹拌されている溶液１ｍＬに実施例１４ａで製
造した過剰のＮＨＳ−Ｃｈｌｉｄｅａ又はＮＨＳ−Ｂｃ
ｈｌｉｄｅａを幾つかの１０μＬ部づつの濃縮アセトン
溶液として３０分にわたり添加し、続いて短時間超音波
処理した。
【０１０２】各場合の試薬の量は次の通りであった：
【０１０３】−ＢＳＡ２．５ｍｇ−ＮＨＳ−Ｃｈｌｉｄ
ｅ０．０４５ｍｇ −１ｇＧ３ｍｇ−ＮＨＳ−Ｃｈｌｉｄｅ０．０４１ｍｇ −ＰＮＡ１ｍｇ−ＮＨＳ−Ｃｈｌｉｄｅ０．０７０ｍｇ
【０１０４】Ａｒ下で密封した反応混合物を暗所、室温
において２４時間撹拌した。
【０１０５】Ｃｈｌａ−又はＢｃｈｌａ−蛋白質結合体
をバイオ−ゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ）Ｐ−１０［米国、Ｃ
ａ州のハーキュレス社（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）、バイオ−
ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）］のミニ−カラム（０．５ｃｍ
×５ｃｍ）で精製した。カラムはＰＢＳ中で予備膨潤さ
れた上記ゲルから次のようにして調製した：ＰＢＳ中で
の平衡後、カラムをＰＢＳ中のＢＳＡ（１〜２ｍｇ）溶
液数ミリリットルで洗浄し、そしてＢＳＡの過剰分をＰ
ＢＳで溶離した。反応混合物の少量の試料（５０〜６０
μＬ）をカラムに装填し、ＰＢＳで溶離した。未反応の
ＮＨＳ−Ｃｈｌｉｄｅａ又はＮＨＳ−Ｂｃｈｌｉｄｅａ
は頂部に保持され、そしてカラムに沿って移動した結合
体の緑色バンドを採集した。
【０１０６】Ｃｈｌａ−及びＢｃｈｌａ−蛋白質結合体
は水溶液中に超遠心分離すると採集することができる緑
色の沈澱を形成する。これらの沈澱は洗浄剤、例えば１
％のトリトン−Ｘ１００と共に超音波処理することによ
って再溶解させることができる。これらの結合体はＣｈ
ｌａ（又はＢｃｈｌａ）と蛋白質の両者のスペクトルの
特徴を示す。それらはＵＶ範囲で光を強く吸収し、かつ
モノマーとしての及びアグレゲートとしてのＣｈｌａ又
はＢｃｈｌａのバンドを示す（データーは示さず）。
【０１０７】文献 ドーハーティー，Ｔ．Ｊ．、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈ
ｔｏｂｉｏｌ．、１９８７、４５：８７９−８８９。
【０１０８】フィーダー，Ｌ．等、ＦＥＢＳに提出、１
９９３。
【０１０９】ガースト，Ｊ．Ｅ．等、Ｍｏｌ．ａｎｄ
Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１９８６、４６：
１３７−１４７。
【０１１０】ハンブライト，Ｐ、１９７５、“Ｐｏｒｐ
ｈｒｉｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｌｌｏｐｏｒｐｈｒｉｎ
ｓ”、スミス，Ｋ．Ｍ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｋ．Ｍ．）編、
エルセビア社（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、２３３−２７８。
【０１１１】ヒンニネン，Ｐ．Ａ．、１９９１、“Ｃｈ
ｌｏｒｏｐｈｙｌｌｓ”、シーアー，Ｈ．（Ｓｃｈｅｅ
ｒ，Ｈ）編、ＣＲＣプレス社（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ）、
１４５−２１０。
【０１１２】クレーマー−バーンバウム，Ｍ．，１９８
９、Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．、２
６：１５７−１７３。
【０１１３】ロイポルド，Ｄ及びフレヤー，Ｗ．、Ｊ．
Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、Ｂ：Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ、１９９２、３１１−３１４。
【０１１４】レウェリン，Ｃ．Ａ．等、Ｐｈｏｔｏｃｈ
ｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、１９９０、５２：１０４
３−１０４７。
【０１１５】マックロバート，Ａ．Ｊ．等、１９８９、
ＣＩＢＡ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＳｙｍｐｏｓｉｕｍ
１４６、“Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ Ｃｏｍ
ｐｏｕｎｄｓ：Ｔｈｅｉｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｕｓｅ”、ジ
ョン ワイレー アンド サンズ社（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ）、４−１２。
【０１１６】モーサー，Ｊ．Ｋ．等、１９９２、ｉｎ
Ａｂｓｔｒ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｃｏｎｆ．ＰＤＴ ＆ Ｍ
ｅｄｉｃａｌ Ｌａｓｅｒ Ａｐｐｉｃａｔｉｏｎｓ
（Ｍｉｌａｎ）。
【０１１７】スパイクス，Ｊ．Ｄ．及びボーマー，Ｊ．
Ｃ．、１９９１、“Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ”、シーア
ー，Ｈ．編、ＣＲＣプレス社、１１８１−１２０４。
【０１１８】ワシーレフスキー，Ｍ．Ｒ．、Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔ、１９７７、１６：１３７３−１
３７６。
【０１１９】ワシーレフスキー，Ｍ．Ｒ．等、１９８
０、Ｊ．Ｏｒｅｇ．Ｃｈｅｍ．、４５：１９６９。
【０１２０】イェー，Ｃ．−Ｊ．Ｇ．等、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９８１、４３：２６９−２
７５。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１はＲ１＝Ｒ２＝−ＣＨＯＨ−ＣＨ３である
ヘマトポルフィリン、即ちＨＰの構造を示す。
【図２】図２はＣｈｌａ（Ｍ＝Ｍｇ、Ｒ＝フィチル）、
Ｃｈｌｉｄｅａ（Ｍ＝Ｍｇ、Ｒ＝Ｈ）及びＰｈｅｏａ
（Ｍ＝２Ｈ、Ｒ＝フィチル）の構造を示す。
【図３】図３はＢｃｈｌａ（Ｍ＝Ｍｇ、Ｒ＝フィチ
ル）、Ｂｃｈｌｉｄｅａ（（Ｍ＝Ｍｇ、Ｒ＝Ｈ）及びＢ
ｐｈｅｏａ（Ｍ＝２Ｈ、Ｒ＝フィチル）の構造を示す。
【図４】図４はＣｈｌａとＬ−セリンメチルエステル
（Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ）とのクロロフィラーゼ（Ｃｈｌ
ａｓｅ）の存在下における酵素エステル交換反応の反応
式を示す。
【図５】図５はＢｃｈｌｉｄｅａとカルボベンゾキシセ
リルセリンメチルエステル（Ｚ−Ｓｅｒ２−ＯＭｅ；式
中、Ｚはカルボベンゾキシである）との触媒エステル化
反応の反応式を示す。
【図６】図６ａはＣｈｌａの１００％アセトン中での光
学的吸収スペクトルを示す。図６ｂはＣｈｌａ−Ｌ−Ｓ
ｅｒ−ＯＭｅの１００％アセトン中での光学的吸収スペ
クトルを示す。図６ｃはＢｃｈｌａの１００％アセトン
中での光学的吸収スペクトルを示す。図６ｄはＢｃｈｌ
ａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの１００％アセトン中での光学
的吸収スペクトルを示す。
【図７】図７ａはＰｈｅｏａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの１
００％エタノール中での光学的吸収スペクトルを示す。
図７ｂはＺｎ−Ｐｈｅｏａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの１０
０％エタノール中での光学的吸収スペクトルを示す。図
７ｃはＣｕ−Ｐｈｅｏａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの１００
％エタノール中での光学的吸収スペクトルを示す。
【図８】図８ａは固体のＣｈｌａのフーリエ転移赤外
（ＦＴＩＲ）スペクトルを示す。図８ｂはＣｈｌｉｄｅ
ａのフーリエ転移赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルを示す。
図８ｃはＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅのフーリエ転移
赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルを示す。
【図９】図９ａは固体のＢｃｈｌａのＦＴＩＲスペクト
ルを示す。図９ｂはＢｃｈｌｉｄｅａのＦＴＩＲスペク
トルを示す。図９ＣはＢｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ
のＦＴＩＲスペクトルを示す。
【図１０】図１０はＣｈｌｉｄｅａ（黒塗りの三角）、
Ｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ（黒塗りの円）及びＨＰ
Ｄ（黒塗りの四角）の培養中のＭ２Ｒ黒色腫細胞に対す
る吸収のインキュベーション培地中顔料濃度に対する依
存性を示す。
【図１１】図１１はＢｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅ
（黒塗りの円）及びＢｃｈｌｉｄｅａ（黒塗りの三角）
の培養中のＭ２Ｒ黒色腫細胞に対する吸収のインキュベ
ーション培地中顔料濃度の関数としての依存性を示す。
【図１２】図１２ＡはＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅに
より後続照射あり（明）及び後続光照射なし（暗）で処
理したときの、マウスのＭ２Ｒ黒色腫細胞への［３Ｈ］
チミジンの配合に対するＰＤＴの効果を示す。図１２Ｂ
はＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅにより後続照射あり
（明）及び後続光照射なし（暗）で処理したときの、Ｆ
Ｓ−１１ヒト包皮線維芽細胞への［３Ｈ］チミジンの配
合に対するＰＤＴの効果を示す。図１２ＣはＣｈｌａ−
Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅにより後続照射あり（明）及び後続
光照射なし（暗）で処理したときの、ヒトのＴ４７Ｄ胸
癌細胞への［３Ｈ］チミジンの配合に対するＰＤＴの効
果を示す。
【図１３】図１３はＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅによ
り後続照射あり（明）及び後続光照射なし（暗）で処理
したときのＭ２Ｒマウス黒色腫細胞の増殖のクローニン
グ効率に対するＰＤＴの効果を示す。
【図１４】図１４ａは４×１０−６ＭのＣｈｌａ−Ｌ−
Ｓｅｒ−ＯＭｅと共に１時間インキュベートされ、そし
て６７０ｎｍのレーザー（５ｍＷ）で１０分間照射され
たＭ２Ｒ細胞の単層の位相差顕微鏡写真（左）を示す。
図１４ｂは４×１０−６ＭのＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−Ｏ
Ｍｅと共に１時間インキュベートされ、そして６７０ｎ
ｍのレーザー（５ｍＷ）で１０分間照射されたＭ２Ｒ細
胞の単層の蛍光顕微鏡写真（右）を示す。照射３時間
後、細胞をプロビジウムアイオダイド（ＰＩＤ）で処理
し、それらのＰＩＤ蛍光を測定した。レーザービームで
照射された円形領域（Ａ）は損傷を受けた細胞と死んだ
細胞が分離された区域を示す。暗所に保たれた照射域
（Ｂ）の周囲の領域中の細胞は正常な形態を有する
（左）。同一単層の蛍光顕微鏡写真（右）において、領
域（Ａ）中に残っている損傷を受けた細胞はＰＩＤのラ
ベルが付けられ、一方領域（Ｂ）中の細胞は未染色のま
まで、従って無損傷として数えられる。
【図１５】図１５は図１４に記載されたように処理され
たＭ２Ｒ細胞の単層の位相差／蛍光顕微鏡写真を示す。
ＰＩＤラベルが付けられた核（Ｎｕ）を隣接対照細胞
（Ｃ）の一番近くの損傷細胞に見ることができる照射領
域の境界が示される。対照細胞（Ｃ）は照射されず、従
ってそれら対照細胞は正常な形態と末染色の核を有す
る。
【図１６】図１６は増感剤なしで１０分間照射されたＭ
２Ｒ細胞の単層の位相差顕微鏡写真を示す。細胞形状に
変化は認められない。細胞にはＰＩＤ染色によるラベル
付けは行われなかった（図示されず）。
【図１７】図１７は光力学的に処理されたヌードマウス
（Ａ：ｍａｇ×３０；Ｂ：ｍａｇ×７０）の皮膚の断面
を示す。即ち、ヌードマウスをＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−
ＯＭｅ（２０ｍｇ／Ｋｇ）で処理し、２４時間後に４時
間照射した。２４時間の追加時間の後、マウスを殺し
た。その皮膚を切り離し、そして直ちにブアン固定液に
固定した。照射された皮膚組織のパラフィン切片を変成
トリクローム（ヘマトキシリン／エオシン／明緑色、ホ
スホロモリブデン酸）で染色し、照射領域の配向を実験
中一定に保った。壊死領域（ＮＣ）の中央を通って切片
を取った。照射を受けなかった正常な皮膚は壊死領域
（Ａ）の両側に認められる。壊死は真皮及び表皮を貫通
し、典型的には脂肪の小滴が詰まっている皮下の脂肪層
に達している。壊死領域直下の白血球（ＬＵ）の浸潤も
認められる。
【図１８】図１８ＡはＣＤ１ヌードマウスに移植され
た、Ｂｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅで処理する前のＭ
２Ｒ黒色腫の腫瘍（Ｔ）の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を示
す。図１８ＢはＣＤ１ヌードマウスに移植されたＢｃｈ
ｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅで処理された、Ｍ２Ｒ黒色腫
の腫瘍（Ｔ）の最初の処理から２週間後の磁気共鳴画像
（ＭＲＩ）を示す。図１８ＣはＣＤ１ヌードマウスに移
植されたＢｃｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅで処理され
た、Ｍ２Ｒ黒色腫の腫瘍（Ｔ）の２回目の処理から２週
間後の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を示す。（Ｂ）では若干
の再発が認められるが、（Ｃ）では再発はない。
【図１９】図１９はＣＤ１ヌードマウスの幾つかの器官
におけるＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅの処理１２時間
後の分布を示す。
【図２０】図２０はマウスのＭ２Ｒ黒色腫細胞の培養に
際してＣｈｌａ−α−ＭＳＨ（黒塗りの円）により誘発
された、及びα−ＭＳＨ同族体（白抜きの円）で誘発さ
れたｃＡＭＰの形成を示す。Ｃｈｌａ−α−ＭＳＨの濃
度はＣｈｌ部分の可能性のある最低吸光係数で測定され
る。
【手続補正書】
【提出日】平成６年６月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１４】ａは生物の形態を示す写真であり、４×１０
−６ＭのＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅと共に１時間イ
ンキュベートされ、そして６７０ｎｍのレーザー（５ｍ
Ｗ）で１０分間照射されたＭ２Ｒ細胞の単層の位相差顕
微鏡写真（左）を示す。ｂは生物の形態を示す写真であ
り、４×１０−６ＭのＣｈｌａ−Ｌ−Ｓｅｒ−ＯＭｅと
共に１時間インキュベートされ、そして６７０ｎｍのレ
ーザー（５ｍＷ）で１０分間照射されたＭ２Ｒ細胞の単
層の蛍光顕微鏡写真（右）を示す。 照射３時間後、細
胞をプロビジウムアイオダイド（ＰＩＤ）で処理し、そ
れらのＰＩＤ蛍光を測定した。レーザービームで照射さ
れた円形領域（Ａ）は損傷を受けた細胞と死んだ細胞が
分離された区域を示す。暗所に保たれた照射域（Ｂ）の
周囲の領域中の細胞は正常な形態を有する（左）。同一
単層の蛍光顕微鏡写真（右）において、領域（Ａ）中に
残っている損傷を受けた細胞はＰＩＤのラベルが付けら
れ、一方領域（Ｂ）中の細胞は未染色のままで、従って
無損傷として数えられる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図１５
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１５】生物の形態を示す写真であり、図１４に記載
されたように処理されたＭ２Ｒ細胞の単層の位相差／蛍
光顕微鏡写真を示す。ＰＩＤラベルが付けられた核（Ｎ
ｕ）を隣接対照細胞（Ｃ）の一番近くの損傷細胞に見る
ことができる照射領域の境界が示される。対照細胞
（Ｃ）は照射されず、従ってそれら対照細胞は正常な形
態と未染色の核を有する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図１６
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１６】生物の形態を示す写真であり、増感剤なしで
１０分間照射されたＭ２Ｒ細胞の単層の位相差顕微鏡写
真を示す。細胞形状に変化は認められない。細胞にはＰ
ＩＤ染色によるラベル付けは行われなかった（図示され
ず）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/22 39/395 Ｃ 9284−4Ｃ Ｃ０７Ｋ 5/023 8318−4Ｈ 14/795 8318−4Ｈ 16/00 8318−4Ｈ Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｔ 7055−2Ｊ 33/574 9015−2Ｊ // Ａ６１Ｎ 5/06 Ｅ 7507−4Ｃ (72)発明者 レスゼック フィードアー ポーランド国シェスジン，ゴーナ ストリ ート 29エイ／９

Claims (32)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】Ｘ−ＣＯ−Ｙ−Ａ−Ｒ （Ｉ） （式中、Ｘ−ＣＯ−はクロロフィル（Ｃｈｌ）又はバク
    テリオクロロフィル（Ｂｃｈｌ）のＣ１７−プロピオニ
    ル残基を表し；ＹはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ａは共有結
    合であるか、又は２〜２０個の炭素原子を有し、所望に
    よってヘテロ原子及び／又は炭素環式−若しくは複素環
    式−部分で遮断されている、飽和又は不飽和の置換され
    又は置換されていない炭化水素鎖であり；そしてＲはア
    ミノ酸、ペプチド若しくは蛋白質の残基であるか、又は
    それらの誘導体である。）で表される化合物。
  2. 【請求項２】 Ａが所望によってＯ、Ｎ又はＳから選択
    されるヘテロ原子で遮断され、及び／又はＯＨ、Ｎ
    Ｈ２、ＣＯＯＨ及びＣＯＮＨ２から選択される官能基に
    より置換されているＣ５〜Ｃ２０の脂肪族鎖である、請
    求項１に記載の化合物。
  3. 【請求項３】 Ａが共有結合である、請求項１に記載の
    化合物。
  4. 【請求項４】 Ｃｈｌ残基又はＢｃｈｌ残基が、中心Ｍ
    ｇ原子が除かれ又はＶ、Ｚｎ、Ｃｕ、Ｃｏ、Ｎｉ及びＳ
    ｎのような他の二価の金属で置換されている化合物を含
    めてＣｈｌ又はＢｃｈｌの天然又は合成誘導体に由来す
    るものである、請求項１に記載の化合物。
  5. 【請求項５】 ＹがＯである、請求項１〜４のいずれか
    に記載の化合物。
  6. 【請求項６】 Ｒがアミノ酸又はその誘導体の残基であ
    る、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
  7. 【請求項７】 アミノ酸がセリンである、請求項６に記
    載の化合物。
  8. 【請求項８】 Ｌ−セリルメチルエステルクロロフィリ
    ドａ。
  9. 【請求項９】 Ｌ−セリルメチルエステルバクテリオク
    ロロフィリドａ。
  10. 【請求項１０】 アミノ酸がチロシンである、請求項６
    に記載の化合物。
  11. 【請求項１１】 Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルチ
    ロシルメチルエステルクロロフィリドａ。
  12. 【請求項１２】 Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−
    チロシルメチルエステルバクテリオクロロフィリドａ。
  13. 【請求項１３】 Ｒがペプチド残基である、請求項１〜
    ５のいずれかに記載の化合物。
  14. 【請求項１４】 Ｒがカルボベンゾキシセリルセリンメ
    チルエステル残基である、請求項１３に記載の化合物。
  15. 【請求項１５】 中心Ｍｇ原子が除かれている請求項４
    に記載の化合物。
  16. 【請求項１６】 Ｌ−セリルメチルエステルフェオフォ
    ルビドａ。
  17. 【請求項１７】 中心Ｍｇ原子が二価の金属で置換され
    ている、請求項５に記載の化合物。
  18. 【請求項１８】 金属がＺｎであるか又はＣｕである、
    請求項１７に記載の化合物。
  19. 【請求項１９】 Ｌ−セリルメチルエステル Ｚｎ−ク
    ロロフィリドａ。
  20. 【請求項２０】 Ｌ−セリルメチルエステル Ｃｕ−ク
    ロロフィリドａ。
  21. 【請求項２１】 Ｒがペプチドホルモンの残基である、
    請求項１３に記載の化合物。
  22. 【請求項２２】 Ｒがα−メラノサイト刺激ホルモンの
    残基である、請求項２１に記載の化合物。
  23. 【請求項２３】 Ｃｈｌａ−α−ＭＳＨ。
  24. 【請求項２４】 Ｂｃｈｌ−α−ＭＳＨ。
  25. 【請求項２５】 Ｒが蛋白質残基である、請求項１〜５
    のいずれかに記載の化合物。
  26. 【請求項２６】 Ｒが抗体の残基である、請求項２５に
    記載の化合物。
  27. 【請求項２７】 天然のＣｈｌ又はＢＣｈｌをクロロフ
    ィラーゼの存在下で適当なＲ−ＯＨ化合物とエステル交
    換することから成る、ＹがＯであり、Ａが共有結合であ
    る請求項１に記載の化合物の製造法。
  28. 【請求項２８】 Ｃｈｌｉｄｅ誘導体又はＢｃｈｌｉｄ
    ｅ誘導体をジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣ
    Ｃ）と４−ジメチルアミノピリジンとの存在下又はＮ−
    ヒドロキシスクシンイミドとＤＣＣとの存在下で適当な
    Ｒ−ＯＨ化合物、Ｒ−ＳＨ化合物又はＲ−ＮＨ２化合物
    と触媒縮合させることから成る、Ａが共有結合である式
    （Ｉ）で表される化合物の製造法。
  29. 【請求項２９】 請求項１に記載の化合物を活性成分と
    して含んで成る製剤組成物。
  30. 【請求項３０】 腫瘍の光力学療法のための、請求項２
    ９に記載の製剤組成物。
  31. 【請求項３１】 患者に適切な量の請求項１に記載の化
    合物を注射し、続いて局所的照射を行うことから成る、
    腫瘍及び転移性腫瘍の光力学療法。
  32. 【請求項３２】 請求項１に記載の化合物の、腫瘍の診
    断のための使用。
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