PL173150B1 - Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu oraz sposób otrzymywania tych pochodnych - Google Patents

Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu oraz sposób otrzymywania tych pochodnych

Info

Publication number
PL173150B1
PL173150B1 PL93299803A PL29980393A PL173150B1 PL 173150 B1 PL173150 B1 PL 173150B1 PL 93299803 A PL93299803 A PL 93299803A PL 29980393 A PL29980393 A PL 29980393A PL 173150 B1 PL173150 B1 PL 173150B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
derivatives
derivative
formula
compound
methyl
Prior art date
Application number
PL93299803A
Other languages
English (en)
Other versions
PL299803A1 (en
Inventor
Avigdor Scherz
Yoram Salomon
Leszek Fiedor
Original Assignee
Yeda Res & Dev
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yeda Res & Dev filed Critical Yeda Res & Dev
Publication of PL299803A1 publication Critical patent/PL299803A1/xx
Publication of PL173150B1 publication Critical patent/PL173150B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0036—Porphyrins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0052—Small organic molecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
    • C07K14/68—Melanocyte-stimulating hormone [MSH]
    • C07K14/685—Alpha-melanotropin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system

Abstract

1 1 . Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu o wzorze ogólnym X-CO-Y-A-R(I), w którym X-C O -jest reszta C 17 propionylowa zwiazku wybranego z grupy obejmujacej chlorofil (Chl), bakterio- chlorofil (Bchl) oraz Chl i Bhl, w których centralny atom Mg jest zastapiony innym atomem dwuwartosciowego metalu, Y oznacza tlen, siarke lub grupe NH, A oznacza wiazanie kowalencyjne, albo rozgaleziony lub prosty, nasycony lub nienasycony lancuch weglo- wodorowy skladajacy sie z 2 do 20 atomów wegla, niepodstawiony lub podstawiony jedna lub kilkoma grupami funkcyjnymi wybrany- mi sposród OH, COOH, NH2 i CONH2 oraz zakonczony funkcjo- nalna grupa wybrana sposród OH, COOH i NH2, wzglednie taki lancuch weglowodorowy, w który wprowadzony jest heteroatom wybrany z grupy obejmujacej O, S lub N, albo pierscien fenylowy, R oznacza rodnik wybrany sposród (1) aminokwasów zawie- rajacych grupe OH lub SH, albo z ich pochodnych wybranych spo- sród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylowa i tert-butoksykarbonylowa, przy czym jesli A jest wiazaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S, (2) pe- ptydów zawierajacych grupe OH lub SH, albo z ich pochodnych wy- branych sposród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylowa i tert-butoksykar- bonylowa, przy czym jesli A jest wiazaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S, (3) peptydów okreslonych w (2) lub bialek, bedacych specyficznymi ligandami komórek, albo peptydów lub bialek polaczonych z ugrupowaniem X-CO-A- przez rodnik ami- nokwasowy okreslony w (1) Fig 2 F ig . 3 PL

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu o wzorze ogólnym X-CO-Y-A=R (I), w którym: X-CO- jest resztąC'17 propionylową związku wybranego z grupy obejmującej chlorofil (Chl), bakteriochlorofil (Bchl) oraz Chl i Bchl, w których centralny atom Mg jest zastąpiony innym atomem dwuwartościowego metalu; Y oznacza tlen, siarkę lub grupę NH; A oznacza wiązanie kowalencyjne, albo rozgałęziony lub prosty, nasycony lub nienasycony łańcuch węglowodorowy składający się z 2 do 20 atomów węgla, niepodstawiony lub podstawiony jedną lub kilkoma grupami funkcyjnymi wybranymi spośród OH, COOH, nH2 i CONH2 oraz zakończony funkcjonalnągrupąwybraną spośród OH, COOH i NH2, względnie taki łańcuch węglowodorowy, w który wprowadzony jest heteroatom wybrany z grupy obejmującej O, S lub N, albo pierścień fenylowy; R oznacza rodnik wybrany spośród: (1) aminokwasów zawierających grupę OH lub SH, albo z ich pochodnych wybranych spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tert-butoksykarbonylową, przy czym jeśli A jest wiązaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S; (2) peptydów zawierających grupę OH lub SH, albo z ich pochodnych wybranych spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytyl<^i^iąi tert-butoksykarbonylową, przy czym jeśli A jest wiązaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S; (3) peptydów określonych w (2) lub białek, będących specyficznymi ligandami komórek, albo peptydów lub białek połączonych z ugrupowaniem X-CO-A- przez rodnik aminokwasowy określony w (1).
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania pochodnych chlorofilu i bakteriochlorofilu o wzorze ogólnym X-CO-Y-A-R na drodze katalitycznej kondensacji.
Znane jest zastosowanie fotosensybilizatorów w leczeniu raka. W tej metodzie, znanej jako terapia fotodynamiczna (PDT - photodynamic therapy), podane uprzednio chromofory w procesie fotouczulania wytwarzają in situ atomowy (singletowy) tlen, rodniki tlenu i nadtlenki, niszczące złośliwe komórki (Dougherty, 1987). W metodzie tej stosowane sąnietoksyczne lekarstwa w połączeniu z bezpiecznym napromieniowaniem fotouczulającym. Metoda ta jest potencjalnie bardziej selektywna, chociaż nie mniej destrukcyjna, niż powszechnie stosowana chemioterapia i radioterapia, przez co należy spodziewać się polepszeniajakości życia leczonych pacjentów.
Fotosensybilizatory używane w metodzie PDT muszą mieć wysoką wydajność kwantową wytwarzania atomowego tlenu oraz wysokie powinowactwo i selektywność w stosunku do tkanki złośliwej. Względnie wysoką wydajność kwantową tworzenia wzbudzonego stanu trypletowego mają porfiryny. Różnica pomiędzy energiami tego stanu i podstawowego stanu smgletowego sprawia, że są one dobrymi donorami energii, wzbudzającymi tlen ze stanu podstawowego (trypleto-wego) do stanu singletowego. Od pewnego czasu wiadomo, że hematoporfiryna (HP) (Fig.1) i jej pochodne (HPD) mają tendencję do odkładania się w tkankach nowotworowych. Z tego powodu HP i mieszaniny HPD stały się preferowanymi związkami w metodzie PDT.
Dostępna w handlu mieszanina pochodnych hematoporfiryny (HPD), stosowna jako środek do PDT, nazywa się Photofrin II (Quarda Logic Technologies, Inc., Vancouver, BC, Kanada) i w dużej części zawiera oligomery HP połączone eterowo. Oligomery te mają wysoki współczynnik absorpcji światła dla długości fali około 400 nm (tak zwane pasmo Soreta), ale znacznie mniejszy w paśmie widzialnym 500-630 nm (tak zwane pasmo Q). Niestety, ze względu na duże tłumienie światła widzialnego i UV przez tkanki zwierzęce, wydajność kwantowa fotou6
173 150 czulania in situjest bardzo niska. Dlatego dla skutecznego leczenia nowotworów wymagane jest intensywne naświetlanie i duże ilości HPD. Wraz z wzrostem ilości podawanych HPD zwiększa się możliwość ich akumulacji w normalnej tkance, a zatem i ryzyko jej uszkodzenia. Dodatkową wadąjest powolne wydalanie HPD z ludzkiego ciała. Pacjenci leczeni HPD cierpią tygodniami na fototoksyczność skóry.
Wady te spowodowały poszukiwanie nowych środków leczniczych, absorbujących światło poniżej 650 nm i cechujących się zwiększonym odkładaniem się w tkankach nowotworowych (McRobert i wsp., 1989).
W celu zwiększenia specyficzności i stopnia odkładania się w tkankach nowotworowych, testowano pochodne porfiny zawierające różne grupy funkcyjne przyłączone do reszty pirolowej. Przesunięcie absorpcji związków HPD w kierunku czerwieni osiągnięto przez zmianę układu elektronów π w porfirynie.
W następstwie tego zwiększyło się zainteresowanie wykorzystaniem pochodnych Chl i Bchl jako środków do PDT (Kreimer-Birnbaum, 1989; Spike i Bommer. 199l). Chl i Bchl są odpowiednio pochodnymi dwu- i czterowodoroporfiryny, zawierającymi 4 pirylowe i jeden izocykliczny pierścienie połączone ze sobąi z atomem Mg, jak przedstawiono to wFig. 2 dla chlorofilu a (Chla) i w Fig. 3 dla bakteriochlorofilu a (Bchla), gdzie M oznacza Mg, natomiast R jest rodnikiem fitylowym lub geranylogeranylowym w Bchla i fitylowym w Chla. Cząsteczka Bchla różni się od Chla dwoma dodatkowo zredukowanymi węglami β (boczne węgle pierścienia pirolowego). Różnorodność cząsteczek Chla i Bchla wynika z rozmaitości podstawników w pierścieniu makrocyklicznym i w grupie alkoholowej, która estryfikuje resztę kwasu 17-propionowego. W występującym w naturze Bchla reszta alkoholowa jest fitylem lub geranylogenarylem, podczas gdy na przykład w Bchlb jest geranylogenarylem. Kwasy wywodzące się z chlorofilu i bakteriochlorofilu są nazywane odpowiednio chlorofilidem (Chlide) i bakteriochlorofilidem (Bchlide). Wolne kwasy wywodzące się z Chla i Bchla są nazywane odpowiednio Chlidea i Bchlidea. Związki wywodzące się z Chl i Bchl pozbawione centralnego atomu metalu nazywane są odpowiednio feofityną (Pheo) i bakteriofeofityną (Bpheo). Feofityny wywodzące się z Chla i Bchla nazywane są odpowiednio Pheoa i Bpheoa. Wolne kwasy wywodzące się z feofityny i bakteriofeofityny nazywane są odpowiednio feoforbidem i bakteriofeoforbidem.
Cząsteczki Chl i Bchl gromadząenergię słonecznąi inicjuj ąprzeniesienie elektronów w fotosyntezie biologicznej. Ich najniższe przejście energetyczne (tak zwane przejście Qv) postaci mono-merycznej występuje przy 670-800nm i może być przesunięte do ΐ0θΟ nm w postaciach aglomerowanych. Przejścia te mają skrajnie wysokie współczynniki ekstynkcji. Prawdopodobieństwo wewnątrzsystemowego przejścia z wzbudzonego stanu singletowego cząsteczek Chl i Bchl do ich najniższego stanu trypletowego jest dosyć wysokie (30-50%) i zapewnia wysoką wydajność wzbudzonych cząsteczek tlenu. Rzeczywiście, fotosensybilizacja tlenu cząsteczkami Chl i Bchl manifestuje się udziałem w ważnych degradacyjnych procesach w fotosyntezujących bakteriach i roślinach i z tego względu wszystkie fotosyntezujące organizmy mają rozmaite mechanizmy obronne przeciw atomowemu tlenowi i rodnikom tlenowym. Ponieważ Chl i Bchl są związkami zwykle konsumowanymi przez zwierzęta, ich rozkład in vivo jest bardzo szybki w porównaniu do HP i HPD (Llewellyn i wsp., 1990). Jest to ważna zaleta, zmniejszająca zależność pacjenta od długiego naświetlania.
Wciąż sąjednak problemy związane ze stosowaniem ekstraktów Chl i Bchl do PDT. Po pierwsze, ze względu na silną hydrofobowość są one z trudem dostarczane do nowotworu. Po drugie, są one bardzo nietrwałe w normalnych warunkach podawania, to jest w obecności tlenu, temperaturze pokojowej i przy normalnym oświetleniu. Po trzecie, nie ma możliwości skierowania ich wybiórczo do tkanki złośliwej. Ze względu na te ograniczenia, potencjalne użycie tych fotosyntetycznych pigmentów jako sensybilizatorów w PDT jest obecnie trudne do zrealizowania. Bardzo pożądane byłoby zsyntetyzowanie pochodnych Chl i Bchl, które pozwoliłoby pokonać te trudności i mogły być efektywnie używane w PDT. Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu o takich właściwościach. Budowę chemiczną tych pochodnych chlorofilu i bakteriofilu określono powyżej, przy czym szczególnie istotne są związki uzy173 150 skane przez reakcję Chl i Bchl z aminokwasami zawierającymi grupy OH lub SH i z ich pochodnymi oraz związki otrzymane przez dalszą reakcję wyżej wymienionych związków z hormonami, na przykład z α-melanotropiną lub z przeciwciałami specyficznymi dla nowotworów·. Istotne są również pochodne Chl i Bchl, w których zmieniono centralny atom Mg na metale poprawiające wydajność stanu trypletowego, jak też pochodne Chl i Bchl o wzorze ogólnym (I), w którym korzystnie A oznacza wiązanie kowalencyjne, Y jest atomem tlenu, a R jest przyłączony bezpośrednio do grupy kwasu C17 propionowego Chl lub Bchl przez wiązanie estrowe.
Sposobem według wynalazku nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu o wzorze ogólnym (I) otrzymuje się przez katalityczną kondensację pochodnych Chlide lub Bchlide o wzorze X-COOH ze związkiem R-OH, na przykład Z-Ser2-OMe, stosując imid kwasu N-hydroksybursztynowego (NHS) i dwucykloheksylokarbodwuimid (DCC) lub 4-dwumetyloamino-pirydynę (DMAP) i DCC, w celu uaktywnienia grupy karboksylowej w Chlide lub Bchlide (fig. 4).
Uogólniając, przedmiotem wynalazkujest sposób wytwarzania związków według wynalazku na drodze katalitycznej kondensacji, polegający naprzereagowywaniu chlorofilidu (Chlide) lub bakteriochlorofilidu (Bchlide) o wzorze X-COOH z aminokwasem, peptydem, białkiem lub ich pochodnymi o wzorze R-A-OH, R-A-SH lub R-A-NTU, w obecności imidu kwasu N-hydroksybursztynowego i dwucykloheksylokarbodwuimidu lub 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu, a następnie na wyodrębnieniu z mieszaniny reakcyjnej uzyskanego związku o wzorze X-CO-Y-A-R.
Kilka estrów otrzymano powyższym sposobem, stosując serynę i jej pochodne, takie jak chlorowodorek estru metylowego L-seryny, ester metylowy N-trytylo-L-seryny i ester metylowy karbobenzoksyserylo-L-seryny. Pochodne te mogąbyć wykorzystywane bezpośrednio lub mogą służyć do połączenia innych cząsteczek z makrocyklem Chl lub Bchl.
Związki o wzorze (I), w którym Y oznacza siarkę, a A jest wiązaniem kowalencyjnym, mogą być uzyskane przez katalityczną kondensację pochodnej Chlide lub Bchlide ze związkiem R-SH, w obecności DCC i DMAP.
Związki o wzorze (I), w którym Y oznacza NH, a A jest wiązaniem kowalencyjnym, mogą być uzyskane przez kondensację katalityczną pochodnej Chlide lub Bchlide ze związkiem R-NH2, w obecności DCC i DMAP lub NHS i DCC.
W reakcji pochodnej Chlide lub Bchlide z peptydami lub białkiem zawierającymi aminokwas z rodnikami hydroksylowym, merkaptanowym i/lub aminowym może nie być pewne czy przyłączenie nastąpi poprzez tlen, siarkę czy grupę NH, lecz wynalazek obejmuje wszystkie te połączenia, niezależnie od ich struktury.
Aby pozyskać podstawione metalem pochodne Chl i Bchl, Mg jest zastępowany przed przyłączeniem pigmentu do aminokwasu lub komórkowo specyficznego ligandu. Zamianę centralnego atomu Mg w Chl i jego pochodnych na Cu, Ni, Zn, V, Co i inne dwuwartościowe metale prowadzi się standardowymi metodami np. poddając feofitynę działaniu soli pożądanego metalu, np. octanu cynku lub octanu miedzi, w bezwodnym etanolu i w temperaturze otoczenia (Hambright, 1975; Hynninen, 1991). W przypadku Bchl i jego pochodnych, centralny atom Mg może być zastąpiony przez Zn lub Cu w podobnym procesie, w którym działa się octanem Zn lub Cu w lodowatym kwasie octowym, w atmosferze argonu i w podwyższonej temperaturze (Fiedor i wsp., 1993).
Jeżeli A we wzorze ogólnym (I) jest łańcuchem węglowodorowym to zawiera końcową grupę funkcyjną, przez którąpołączonyjest z resztąR. Na przykład, grupa estrowa powstaj e w reakcji końcowej grupy karboksylowej łańcucha A z grupą hydroksylową aminokwasu, bądź w reakcji końcowej grupy hydroksylowej łańcucha A z grupą karboksylową aminokwasu; grupa amidowa powstaje w reakcji końcowej grupy karboksylowej łańcucha A z grupą aminową aminokwasu albo w reakcji końcowej grupy aminowej łańcucha A z grupąkarboksylową aminokwasu itp.
Nowe estry mają taką samą absorbcję optyczną i charakterystykę fotofizyczną jak odpowiednie związki Chl i Bchl. Dlatego należy się spodziewać, że umieszczone w leczonej tkance nowe estry Chl i Bchl będą skutecznymi środkami fotodynamicznymi.
Przyłączenie białek do -cząsteczek Chl i Bchl, np. hormonów, czynników wzrostu lub ich pochodnych i przeciwciał oraz odżywek komórkowych, np. tyrozyny, ma na celu zwiększenie ich zatrzymywania w nowotworze i leczonych miejscach. Zwiększenie przesunięcia widma do czerwieni zezwala na głębszą penetrację nowotworu, bez osłabienia systemu naturalnego Zastąpienie Mg innymi metalami ma na celu optymalizację wewnętrznej i metabolicznej stabilności Chl i Bchl oraz międzysystemowego przejścia do wzbudzonego stanu trypletowego, a także otwiera możliwość nowych metod diagnostycznych.
Przeciwciała specyficzne w stosunku do nowotworu kierująChl i Bchl do tkanki nowotworowej lub leczonego miejsca, podczas gdy hormony i odżywki komórkowe mogą być także pobierane przez tkanki normalne. Jakkolwiek komórki wybrane jako cele dla hormonów i odżywek komórkowych, takie jak melanocyty, w normalnych warunkach są rozrzucone wśród innych komórek, to po przemianie w komórki złośliwe, gromadzą się w postaci guza. W rezultacie, należy spodziewać się, że stężenie fotosensybilizatora w tkance złośliwej dramatycznie wzrośnie, w porównaniu do jego stężenia w tkance normalnej, w której komórki sąbardziej rozproszone. Zapewnia to wzmocnienie efektu PDT w tkance nowotworowej. Efekt ten umożliwia stosowanie dawek światła niższych niż próg uszkadzania normalnej tkanki, co zmniejsza wymagania na przestrzennie ścisłe zdefiniowanie wiązki promieniowania. Dodatkowo, posiadając bardzo silne właściwości fluorescencyjne Chl i Bchl mogąbyć wykorzystywane do fluorescencyjnego ukazywania miejsc nowotworowych.
Nowotwory czerniakowe nadają się do leczenia nowymi fotosensybilizatorami Chl i Bchl według wynalazku z kilku powodów. We wczesnym stadium choroby złośliwy czerniak i inne nowotwory skóry są bardzo podatne na PDT. Stosowana dotychczas terapia fotodynamiczna z wykorzystaniem światła zielonego, jak również tradycyjna chemioterapia i radioterapia nie są jak dotąd skuteczne w leczeniu czerniaka. Istnieje jednak kilka specyficznych ligandów kierujących fotosensybilizatory do nowotworu. Zastosowanie wzbudzających się pod wpływem fal długich nowych pochodnych Chl i Bchl powinno przezwyciężyć wady tradycyjnych fotosensybilizatorów, wywoływane absorpcją melaniny.
Nowotwór czerniak rozwija się z rakowego przeobrażenia melanocytów (włącznie z mutacjami wywoływanymi promieniowaniem UV). Normalne melanocyty stanowią mały procent komórek zdrowej skóry ludzkiej i znajdują się w podstawowej warstewce tkanek pomiędzy naskórkiem i skórą właściwą, gdzie każde z nich jest otoczone przez 30-40 keratynocytów i jedną komórkę Langerhansa. Czerniakjest szczególnie trudnym przypadkiem dla metody PDT, ponieważ komórki nowotworowe mogą zawierać nierozpuszczalne czarne eumelaniny (poli 5,6-indolochinony), mające szerokie pasmo absorpcji w pobliżu 540 nm i w związku z tym konkurujące z każdym fotouczulaczem o promieniowanie o długości fali krótszej niż 650 nm. Na dodatek cząsteczki melaniny mogą likwidować powstałe rodniki tlenu i w ten sposób przeciwdziałać niszczeniu komórek. W rezultacie tego, leczenie czerniaka metodą PDT z zastosowaniem zwykłych HPD nie jest zbyt obiecujące. Posiadając maksymalną absorpcję optyczną powyżej 650 nm, wzbudzone Chl i Bchl i ich syntetyczne pochodne nie powinny być przesłaniane melaniną. Dodatkowo, komórki czerniaka (to znaczy przekształcone melanocyty) zużywają znaczne ilości tyrozyny podczas syntezy melaniny, mają duże powinowactwo do melantropin (przysadkowe hormony stymulujące α-, β-, γ- melanocyty (MSH)) i kilku znanych przeciwciał. Dlatego mogą być dobrym celem dla tyrozynowych, melanokortynowych lub przeciwciałowych połączeń Chl i Bchl, pod warunkiem, że wytworzenie połączeń nie wpływa silnie na rozpoznawanie ligandów przez receptory komórkowe. Ponieważ stężenie melanocytów powiększa się prawie 40-krotnie w czerniaku w porównaniu z normalnymi komórkami skóry, można spodziewać się, że efekt fotodynamiczny drastycznie się zwiększy.
Pochodne Chl i Bchl według wynalazku mogąbyć wykorzystywane w fotodynamicznej terapii kilku typów raka, zwłaszcza raka mózgu, jajnika, piersi, skóry, płuc, przełyku, pęcherza i innych nowotworów wrażliwych na hormony.
, Związki według wynalazku mogą być wykorzystane do leczenia złośliwego czerniaka. Efekt fotodynamiczny tych związków może być monitorowany w komórkach czerniaka w nowo173 150 tworze i w sztucznych kulturach. Przykładami pochodnych mających zastosowanie do tego celu są połączenia Chl lub Bchl z α-melanotropiną, związane z pigmentem albo przez resztę serynową, tyrozynową lub lizynową, albo przez końcową grupę aminową.
Związki według wynalazku podaje się pacjentowi standardowymi metodami stosowanymi w PDT. Ilość i sposób podawania związku ustala się w zależności od rodzaju nowotworu, zaawansowania choroby, wieku i stanu zdrowia pacjenta. Dawki te są jednak znacznie nizsze od obecnie stosowanej dawki photofrinu II, około 20-40 mg HPD/kg wagi ciała. Korzystnymi metodami podawania wodnych roztworów aktywnego związku wraz z farmaceutycznie dopuszczalnymi nośnikami i dodatkami są dożylne zastrzyki i zastrzyki wykonywane bezpośrednio do nowotworu oraz miejscowe leczenie za pomocą odpowiednio do tego przygotowanych preparatów.
W metodzie fotodynamicznej terapii, związki według wynalazku podaje się pacjentowi cierpiącymi na raka, po czym naświetla się chore miejsce silnym źródłem światła o długości fali 670-780 nm.
Nowe pochodne Chl i Bchl mogą być stosowane do foto-destrukcji łagodnych lub złośliwych komórek lub tkanek przez ukierunkowanąna chore miejsce terapię fotodynamiczną(SPD). Pochodne Chl i Bchl przenoszą cząsteczki Chl i Bchl do komórek zbitych ze sobąw tkance nowotworowej po ich degeneracyjnej transformacji (np. melanocyty w czerniaku), ale dobrze od siebie oddzielonych w tkankach normalnych. W rezultacie efekt foto-dynamiczny fotosensybilizatora w nowotworze może być o kilka rzędów większy niż w normalnej tkance. Dzięki temu niszczący próg naświetlania dla nowotworu obniża się do poziomu bezpiecznego dla zdrowej tkanki. Jest to szczególnie ważne w przypadku nowotworów, przy których niemożliwe jest stosowanie konwencjonalnych operacji chirurgicznych.
Terapia fotodynamiczna stosuj ąc bifotoniczny (Leupold i Freyer, 1992) pozwala na rozszerzenie zakresu uczulenia do bliskiej podczerwieni. Wysoki udział wewnętrznych połączeń w pochodnych Chl i Bchl i ich maksimum absorpcji przesunięte do fal długich czyni je użytecznymi w tej odmianie PDT.
Nowe pochodne Chl i Bchl są również użyteczne przy fotodestrukcji normalnych lub złośliwych komórek zwierzęcych, jak również drobnoustrojów w ich kulturach, z wykorzystaniem lub bez wykorzystania SPD. Pochodne te umożliwiają selektywną fotodestrukcję pewnych typów komórek w kulturach lub czynnikach zakaźnych. Pochodne te wykorzystywane są również do kierowania porfiryny do wybranych komórek przez związanie połączeń Chl i Bchl i seryny ze specyficznymi polipeptydami, takimi jak hormony lub inne ligandy receptorowe, ze specyficznymi przeciwciałami komórek i tkanek, np. lektynami. Można je także stosować do fluorescencyjnego znaczenia cząsteczek dla celów analitycznych w laboratoriach, diagnostyce i przemyśle. Ze względu na wysokie współczynniki ekstynkcji, mogą one zastąpić kilka obecnie używanych znaczników fluorescencyjnych, takichjak izorodanek fluoresceiny lub fikoerytryna.
Dla celów diagnostycznych nowe pochodne Chl i Bchl według wynalazku mogą być znakowane atomami promieniotwórczymi standardowymi metodami, np. atomami 67Ga, inIn, 2Q1In, 20'Tl.i mTc. Promieniotwórczy środek diagnostyczny jest podawany pacjentowi najlepiej w zastrzyku dożylnym. Po kilku godzinach lokalizację położenia nowotworu można dokonać standardowymi metodami.
Nowe pochodne Chl i Bchl mają maksymalną absorpcję optycznaprzy takich długościach fal, przy których znacznie zmniejsza się absorpcja wykazywana przez tkanki ludzkie lub zwierzęce (660-830 nm dla postaci monomerycznych i do 1000 nm dla dimerów i większych agregatów). Razem ze zmniejszeniem rozpraszania zezwala to na większą głębokość penetracji lub użytkowanie słabszych i tańszych źródeł światła. Ich współczynniki absorpcji w świetle widzialnym i w bliskiej podczerwieni sąokoło, 10 razy większe w porównaniu z porfirynami, stosowanymi obecnie w PDT. Zastąpienie centralnego atomu Mg innymi metalami zwiększa wydajność wytwarzania atomowego tlenu. Nowe pochodne wykazują większą selektywność w rozpoznawaniu docelowych komórek, co zmniejsza wielkość stosowanych dawek. Niektóre doniesienia wskazuj ąna dużą szybkość wydalania tych pochodnych z organizmu (Spikes i Bommer, 1991).
173 150
Zwykle naświetlanie prowadzone jest światłem laserowym, z takich źródeł jak laser argonowy, nastawiony na emisję fal długości 628 nm lub pulsacyjny laser złoty, emitujący fale o długości 628 nm. Wysoki koszt tego sprzętu ogranicza stosowanie PDT do większych centrów medycznych. Zastosowanie fotosensybilizatorów według wynalazku, absorbujących w podczerwieni i w bliskiej podczerwieni, umożliwia stosowanie środków konwencjonalnych i tańszych, takich jak ksenonowe lampy błyskowe, lampy halogenowe, lasery diodowe lub bezpośrednie naświetlanie słoneczne.
Fig. 1 przedstawia wzór strukturalny hematoporfiryny, HP: IR i IR oznacza -CHOH-CH3
Fig.2 przedstawia wzór strukturalny Chla (M oznacza Mg, R oznacza fityl), Chlidea (M oznacza Mg, R oznacza H) i Pheoa (M oznacza 2H, R oznacza fityl).
Fig.3 przedstawia wzór strukturalny Bchla (M oznacza Mg, R oznacza fityl), Bchlidea (M oznacza Mg, R oznacza H) i Bpheoa (M oznacza 2H, R oznacza fityl).
Fig.4 przedstawia schemat katalitycznej estryfikacji Bchlidea z estrem metylowym karbobenzoksyseryloseryny (Z-Sety-OMe, gdzie Z jest grupąkarbobezoksy).
Fig. 5 przedstawia powstawanie cAMP w kulturze czerniaka MR2 u myszy, wywoływane przez Chla-a-MSH (zaczernione kółka) i przez analog alfa-MSH (puste kółka). Stężenie Chla-a-MSH jest określone przez najniższy możliwy współczynnik absorpcji Chl.
Wynalazek zostanie zilustrowany przykładami, nie ograniczającymi jego zakresu.
Przykładl : Otrzymywanie estru metylowego karbobenzoksyseryloserylowego chlorofilidu przez katalityczną estryfikację Chlidea z Z-Sety-OMe.
Wysuszony Chlidea (3mg), dCc (5,1 mg), DMAP (1,2 mg) i Z-Sety-OMe (5-krotny nadmiar) rozpuszczono w 1 ml bezwodnego dwuchlorometanu, roztwór zamknięto szczelnie w atmosferze Ar i mieszano w ciemności przez 36 godzin w temperaturze pokojowej. Czysty produkt (V) wyodrębniono na preparatywnej płytce z żelem krzemionkowym metodąTLC i oczyszczano go na kolumnie DEAE-Sepharose. Widmo NMR produktu końcowego oraz innych pochodnych Chl i Bchl pokazano w tabeli 1. Wydajność 18%.
1H przesunięcia chemiczne Chlidea, Bchlidea i ich pochodnych (jedynie sygnały silnego pola) w CD3OD, w ppm
Proton Chlidea Bchlidea IV V VIII IX I II III
C-10 9,16s 8,60s 9,6s 9,65s 8,80s 8,80s - - -
C-5 9,48s 8,25s 9,5s 9,33s 8,42s 8,45s - - -
C-20 8,34s 8,18s 8,55s 8,45s 8,25s 8,34s - - -
wiązanie - - 5,33 5,10m 5,33 - - - -
estrowe* m m
reszta aminok- wasu - - - 7,35m 7,35m 6,7-7,0q 7,35m 6,7-7,0q
C-13 6,46s 6,15s 6,40s 6,70s 6,80s 8,80s - - -
* “wiązanie estrowe” pomiędzy karboksylową grupą Bchlidea i Z-Ser?-OMe zgodnie z fig. 5
I Z-Ser2-OMe - Ester metylowy karbobenzoksyseryloseryny
II L-seryna - Ester metylowy L-seryny
III N-tBOC-Tyr-OMe - Ester metylowy N-tert-butoksykarbonylotyrozyny
IV 3-0-(1-0-metylo)-L-serylochlorofilid a
V 3-0-(1-0-metyło-N-karbobenzoksy-L-serylo)-L-serylochlorofilid a
VIII 3-0-(1-()-metylo-N-karbobenzoksy-L-serylo)-L-serylobakLenochlotOfilid a
IX 77()--( - 0-metylo-N-tmtbutoksykarbonylo)-lLyrozylobaktenochloiOfilid a
173 150
Przykład II: Otrzymywanie 7-0-(1-0-metylo-N-tert-butoksy-karbonylo)-L-tyrozylochlorofihdu a przez katalityczną estryfikację Chlidea z estrem metylowym N-tert-butoksykarbonylotyrozyny (N-tBOC-Tyr-OMe).
Wysuszony Chlidea (3,4 mg), DCC (58 mg), DMAP (1,38 mg) i N-tBOC-Tyr-OMe (Sigma) (15-krotny nadmiar) rozpuszczono w 1 ml bezwodnego dwuchlorometanu, roztwór zamknięto szczelnie w atmosferze Ar i mieszano w ciemności przez 40 godzin w temperaturze pokojowej. Produkt wyodrębniono na preparatywnej płytce z żelem ’ krzemionkowym metodą TLC i oczyszczano go na kolumnie DEAE-Sepharose. Wydajność 25%.
Przykład III: Otrzymywanie związków Bchla-serynowych i Bchlatyrozynowych przez katalityczną estryfikację Bchlidea z Z-Ser2-OMe i N-tBOC-Tyr-OMe.
Estryfikację (kondensację) Bchlidea z każdym z powyższych związków przeprowadzono tak jak opisano dla Chlidea, odpowiednio w przykładach II-III. W tabeli 1 pokazano przesunięcia NMR 7-0-(1-0-metylo-N-tert-butoksykarbonylo)-L-tyrozylobaktenochlorofilidu a (BchlaN-tBOC-Tyr-OMe: związek IX) i 3-0-(1-0-metylo-N-karbobenzoksy-L-serylo)-L-serylobakteriochlorofilidu a (Bchla-Z-Ser2-OMe: związek VIII).
Przykład IV: Otrzymywanie 7-0-(1-0-etylo)-L-tyro;zylochlorofiIldu i bakteriochlorofilidu.
a) Aktywacja Chlidea lub Bchlidea imidem kwasu N-hydroksybursztynowego (NHS)
Wysuszonąpod próżnią mieszaninę Chlidea lub Bchlidea (5 mg) z suchym NHS (9,6 mg) i
DCC (5 mg) rozpuszczono 2 ml tetrahydrofuranu (THF) i suszono nad tlenkiem glinu Mieszaninę szczelnie zamknięto w atmosferze Ar i mieszano ją przez 48 godzin w temperaturze pokojowej, po czym trzymano ją przez dodatkowe 48 godzin w 5°C. Wszystko to przeprowadzano w ciemności. Po zakończeniu reakcji odparowano rozpuszczalnik w atmosferze N zieloną pozostałość ponownie rozpuszczono w acetonie i przepuszczono przez małą kolumnę CM-Sepharose (Pharmacia; 0,5x5,0 cm), zrównoważoną acetonem. Kolumnę przemyto 15-20 ml acetonu i aktywowany Chlide (NHS-Chlidea lub NHS-Bchhdea) wymyto 3-5% metanolem w acetonie. Wymyty NHS-Chlidea lub NHS-Bchlidea dalej oczyszczano w ten sam sposób. Wydajność: 2,95-4,15 mg (50-80%).
b) Katalityczne połączenie NHS-Chlidea i NHS-Bchlidea z estrem etylowym tyrozyny (Tyr-OEt).
Oczyszczony NHS-Chlidea lub NHS-Bchlidea, uzyskany w etapie a) (2 mg) rozpuszczono w 1 ml suchego THF i do roztworu dodano 5 mg estru etylowego tyrozyny (Sigma). Mieszaninę szczelnie zamknięto w atmosferze Ar i mieszano ją przez 48 godzin w temperaturze pokojowej, po czym trzymano jąprzez 48 godzin w 5°C w ciemności. Skład mieszaniny reakcyjnej zanalizowano używając kolumny Vydac C-18 HPLC (Alltech Associates. Inc. Derfield, III., USA). Warunki rozdzielania: kolumna 250 mm x 4,6 mm; wypełnienie - Vydac 218TP, wielkość cząstek 10 pm, wielkość porów 300 A°; faza ruchoma - acetonitryl/woda (7:3); szybkość przepływu -1 ml/min. Połączenie Chlidea-Tyr-OEt lub Bchlidea-Tyr-OEt wymywano z czasem retencji 9,5 mm. Produkty reakcji oczyszczano przepuszczając je przez kolumnę CM-Sepharose w 5°C. Kolumnę równoważono acetonem.
Przykład V: Otrzymywanie związków Chla-a-MSH i Bchla-a-MSH.
Hormon stymulujący α-melanocyty (MSH) ma wzór:
Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Tyr-Gly-Lys-Pro-Val-NH2.
Do 1 ml mieszanego roztworu 1 mg α-MSH w mieszaninie 8:2 acetonitrylui wody, umieszczonego w polietylenowej probówce w atmosferze Ar i zawierającego 0,07 mg trójetyloaminy (TEA), dodano 2,15 mg NHS-Chlidea (otrzymanego w przykładzie IVa) w małej objętości (około 0,2 ml) acetonitrylu i krótko mieszano ultradźwiękami. Mieszaninę reakcyjną szczelnie zamknięto w atmosferze Ar i mieszano w temperaturze pokojowej w ciemności przez 66 godzin. W czasie reakcji pobierano z mieszaniny reakcyjnej próbki 15 pl, po 0,3,19,45 i 66 godzinach od początku reakcji, i poddano je analizie HPLC.
Każdą próbkę (15 pl) suszono w atmosferze N2 i ponownie rozpuszczano w50-100pl20% roztworu acetonitrylu w wodzie, zawierającym 0,1% TFA (w stosunku objętościowym). Roz12
173 150 twór wstrzyknięto na kolumnę C-18 HPLC. Zebrane frakcje miały następujące czasy retencji: 24 minuty - nieprzereagowany a-MSH; 36 minut - związek Chla-a-MSH; 76 minut - Chlidea. Warunki separacji: kolumna 250 mm x 4,6 mm; wypełnienie - Vydac 218TP, wielkość cząstek 10 pm, wielkość porów 300 A°; faza ruchoma A - 0,1 % TFA w wodzie; faza ruchoma B-0,1% TFA w acetonitrylu; gradient 20% B od 0 do 5 minut, następnie 20 do 55% B ponad 10 minut i od 55 do 80% B ponad 25 minut, następnie przemywanie 80% B; szybkość przepływu - 1 ml/min.
Związek Bchla-a-MSH otrzymano w podobny sposób, wychodząc z Bchlidea. Po oczyszczeniu, zebrano frakcje o cechach spektralnych peptydu i Bchla.
Aktywność biologiczną związku Chla-a-MSH oszacowano przez określenie jego zdolności do stymulowania cyklicznego AMP (cAMP) w kulturach komórek myszy M2R, w porównaniu do [Nle4, D-Phe7]a-MSH, analogu α-MSH. Akumulację cAMP przeprowadzono w sposób opisany przez Gersta i wsp., 1986. jak widać w fig. 5, związek Chla-a-MSH zachowuje identyczną aktywność jak analog a-MSH.
Przykład VI. Otrzymywanie związków Chla-białko i Bchla-białko.
Do 1ml mieszanego roztworu kilku miligramów białka, wybranego spośród albuminy osocza wołowego (BSA), gammaimmunoglobuliny G (IgG) i aglutyniny orzeszków ziemnych (PNA) w buforowanym PBS (0,1M bufor fosforanowy, pH = 7,6), umieszczonego w polietylenowej probówce w atmosferze N2 i zawierającego 0,1 mg trójetyloaminy (TEA), dodawano w ciągu 30 minut w kilku 10 pl porcjach nadmiar NHS-Chlidea lub NHS-Bchlidea (otrzymanego w przykładzie IVa) w stężonym roztworze acetonowym, po czym mieszaninę krótko mieszano ultradźwiękami.
Ilości reagnetów w każdym przypadku były następujące:
-2,5 mg BSA - 0,045 mg NHS-Chlide
-3 mg IgG - 0,041 mg NHS-Chlide
-1 mg PNA - 0,070 mg NHS-Chlide
Mieszaninę reakcyjną szczelnie zamknięto w atmosferze Ar i mieszano w temperaturze pokojowej w ciemności przez 24 godziny.
Związki Chla-białko i Bchla-białko oczyszczano na mini kolumnie (0,5 cm x 5 cm) BioGel P-10 (Bio-Rad, Hercules, Ca, USA). Kolumnę przygotowywano z żelu wstępnie spęcznionego w PBS w następujący sposób: po zrównoważeniu w PBS kolumnę przemywano kilkoma mililitrami roztworu BSA (1-2 mg) w PBS i nadmiar BSA wymywano PBS. Małąpróbkę mieszaniny reakcyjnej (50-60 pl) umieszczano w kolumnie i wymywano ją PBS. Nieprzereagowany NHS-Chlidea lub NHS-Bchlidea zatrzymywał się na szczycie kolumny, a przesuwająca się wzdłuż kolumny zielona warstwa związku była zbierana.
Związki Chla-białko i Bchla-białko tworząw wodnym roztworze zielono zabarwione osady, które mogą być oddzielone przez ultra odwirowanie. Osady mogą być ponownie rozpuszczone przez mieszanie ultradźwiękowe i dodanie detergentu, na przykład 1% Tritonu-X 100.
Związki te wykazują cechy widmowe zarówno Chla(lub Bchla), jak i białka. Silnie absorbują światło w zakresie UV i mają pasma absorpcji postaci monomerycznych i zagregowanych Chla lub Bchla (danych nie pokazano).
173 150
Fig. 2
Chlidea
Ma
Pheoa
2M
a)
Struture of Chlorophyll a and the IUPAC numbering system Wzór strukturalny chlorofilu i system numeracji według
IUPAC
Fig. 3
b) Structure of Sacteriochiorophyll a
Wzór strukturalny bakteriofilu a
173 150
X ϋΙ = 0 ♦Η
Ζ&4
ΊΣ χ £ Τ Ο—ο—ο—Ο
I
X φ
Ο
I
CM λ_ φ
ω i
Ν
173 150
Fis5
173 150
co2h co2h
Haematoporphyrin (Hp)
R1 = R2=CH{OH)CH3
Pig. 1
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz Cena 4,00 zł

Claims (41)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu o wzorze ogólnym X-CO-Y-A-R(I), w którym: X-CO-jest resztą C17 propionylową związku wybranego z grupy obejmującej chlorofil (Chl), bakteriochlorofil (Bchl) oraz Chl i Bchl, w których centralny atom Mg jest zastąpiony innym atomem dwuwartościowego metalu; Y oznacza tlen, siarkę lub grupę NH; A oznacza wiązanie kowalencyjne, albo rozgałęziony lub prosty, nasycony lub nienasycony łańcuch węglowodorowy składający się z 2 do 20 atomów węgla, niepodstawiony lub podstawiony jedną lub kilkoma grupami funkcyjnymi wybranymi spośród OH, COOH, NH21 CONH2 oraz zakończony funkcjonalnągrupą wybraną spośród OH, COOH i NH2, względnie taki łańcuch węglowodorowy, w który wprowadzony jest heteroatom wybrany z grupy obejmującej O, S lub N, albo pierścień fenylowy; R oznacza rodnik wybrany spośród: (1) aminokwasów zawierających grupę OH lub SH, albo z ich pochodnych wybranych spośród estrów i pochodnych, w których atom N j est chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tert-butoksykarbonylową, przy czym jeśli A jest wiązaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S; (2) peptydów zawierających grupę OH lub SH, albo z ich pochodnych wybranych spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tert-butoksykarbonylową, przy czym jeśli A jest wiązaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S; (3) peptydów określonych w (2) lub białek, będących specyficznymi ligandami komórek, albo peptydów lub białek połączonych z ugrupowaniem X-CO-A- przez rodnik aminokwasowy określony w (1).
  2. 2. Pochodne według zastrz. 1, znamienne tym, że X-CO- jest resztą C17 propionylową Chl lub Bchl; Y oznacza tlen; A oznacza wiązanie kowalencyjne, R oznacza resztę aminokwasową lub peptydową zawierającą grupę OH, albo ich pochodne wybrane spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tert-butoksykarbonylową.
  3. 3. Pochodne według zastrz. 1, znamienne tym, że X-CO- jest resztą C17 propionylową Chl lub Bchl; Y oznacza tlen; A oznacza wiązanie kowalencyjne, R oznacza resztę aminokwasowązawierającą grupę OH, wybraną spośród seryny i tyrozyny, albo alkilowy ester lub alkilowy ester, w którym atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tert-butoksykarbonylową.
  4. 4. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodną taką jest 3-0-(1-0-metylo)-L-serylochlorofilid a.
  5. 5. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodną taką jest 3-0-(1-0-metylo)-L-serylobakteriochlorofilid a.
  6. 6. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodną taką jest 3-0-(1-0-metylo-N-trójfenylometylo)-L-serylochlorofilid a.
  7. 7. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodnątakąjest 7-0-(1 -0-etylo)-Lttyi rozylochlorofilid a.
  8. 8. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodną taką jest 7)0-(1)0)etylo)-L-tyrozylobakteriochlorofilid a.
  9. 9. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodną taką jest 7-0-(1-0)metylo-N-tert-butoksykarbonyloHL-tyrozylochlorofilid a.
  10. 10. Pochodne według zastrz. 3, znamienne tym, że pochodną taką jest 7-0-(1-0)metylo-N-tert-butoksykarbonyloFL-tyrozylobakteriochlorofilid a.
  11. 11. Pochodne według zastrz. 1, znamienne tym, że X-CO- j est resztą C17 propionylową Chl lub Bchl; Y oznacza tlen; A oznacza wiązanie kowalencyjne, R oznacza resztę peptydowąza173 150 wierającągrupę OH, albo jej pochodną wybraną spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tertbutoksykarbonylową.
  12. 12. Pochodne według zastrz. 11, znamienne tym, że pochodną taką jest 3-0-(1-0-metylo-N-karbobenzoksy-L-serylo)-L-serylochlorofilid a.
  13. 13. Pochodne według zastrz. 11, znamienne tym, że pochodną taką jest 3-0-(1-0-metylo-N-karbobenzoksy-L-serylo)~L-serylobakteriochlorofilid a.
  14. 14. Pochodne według zastrz. 1, znamienne tym, że R oznacza resztę peptydową, będącą specyficznym ligandem dla komórek.
  15. 15. Pochodne według zastrz. 14, znamienne tym, że peptydem specyficznym dla komórek jest hormon stymulujący melanocyty (MSH).
  16. 16. Pochodne według zastrz. 15, znamienne tym, że pochodnątakąjest związek chlrofilu z α-MSH o następującej sekwencji składników: Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Tyr-GlyLys-Pro-Val-NH2.
  17. 17. Pochodne według zastrz. 15, znamienne tym, że pochodną takąjest związek bakteriochlorofilu z α-MSH o następującej sekwencji składników: Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Tyr-Gly-Lys-Pro-Val-NH2.
  18. 18. Pochodne według zastrz. 1, znamienne tym, że R oznacza resztę białkową, będącą specyficznym ligandem dla komórek.
  19. 19. Pochodne według zastrz. 18, znamienne tym, że białkiem specyficznym dla komórek jest przeciwciało specyficzne dla nowotworu.
  20. 20. Pochodne według zastrz. 1, znamienne tym, że X-CO-jest resztą C17 propionylową Chl lub Bchl, w których centralny atom Mg jest zastąpiony dwuwartościowym atomem metalu wybranym spośród Zn, Cu, Co, Ni, V i Sn; Y oznacza tlen; A oznacza wiązanie kowalencyjne, R oznacza resztę aminokwasową zawierającą grupę OH, albo jej pochodną wybraną spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tertbutoksykarbonylową.
  21. 21. Pochodne według zastrz. 20, znamienne tym, że pochodną takąjest 3-0-( 1-0-metylo)-L-serylofeoforbid a-Zn.
  22. 22. Pochodne według zastrz. 20, znamienne tym, że pochodną takąjest 3-0-(1-0-metylo)-L-serylofeoforbid a-Cu.
  23. 23. Sposób otrzymywania pochodnych chlorofilu i bakteriofilu o wzorze ogólnym X-CO-Y-A-Rna drodze katalitycznej kondensacji, znamienny tym, że chlorofilid (Chlide) lub bakteriochlorofilid (Bchlide) o wzorze X-COOH, w którym znaczenie symboli jest takie same jak we wzorze uzyskiwanego produktu, w obecności imidu kwasu N-hydroksybursztynowego i dwucykloheksylokarbodwuimidu lub 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu, poddaje się reakcji z aminokwasem, peptydem, białkiem lub z ich pochodną o wzorach R-A-OH, R-A-SH lub R-A-NH2, w których znaczenie symboli jest takie same jak we wzorze uzyskiwanego produktu, po czym wyodrębnia się z mieszaniny reakcyjnej produkt o wzorze X-CO-Y-A-R, w którym: X-CO-jest resztą C17 propionylową związku wybranego z grupy obejmującej chlorofil (Chl), bakteriochlorofil (Bchl) oraz Chl i Bchl, w których centralny atom Mg jest zastąpiony innym atomem dwuwartościowego metalu; Y oznacza tlen, siarkę lub grupę NH; A oznacza wiązanie kowalencyjne, albo rozgałęziony lub prosty, nasycony lub nienasycony łańcuch węglowodorowy składający się z 2 do 20 atomów węgla, niepodstawiony lub podstawiony jedną lub kilkoma grupami funkcyjnymi wybranymi spośród OH, COOH, NH21 CONH2 oraz zakończony funkcjonalną grupą wybraną spośród OH, COOH i NH2, względnie taki łańcuch węglowodorowy, w który wprowadzony jest heteroatom wybrany z grupy obejmującej O, S lub N, albo pierścień fenylowy; R oznacza rodnik wybrany spośród: (1) aminokwasów zawierających grupę OH lub SH, albo ich pochodnych wybranych spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami karbobenzoksy, trytylową i tert-butoksykarbonylową, przy czym jeśli A jest wiązaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S; (2) peptydów zawierających grupę OH lub SH, albo z ich pochodnych wybranych spośród estrów i pochodnych, w których atom N jest chroniony grupami kabobenzoksy, trytylową i tert4
    17:3 150 butoksykarbonylową, przy czym jeśli A jest wiązaniem kowalencyjnym, to Y oznacza O lub S;
    (3) peptydów określonych w (2) lub białek, będących specyficznymi ligandami komórek, albo peptydów lub białek połączonych z ugrupowaniem X-CO-A- przez rodnik aminokwasowy określony w (1).
  24. 24. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że wytwarza się produkt o wzorze X-CO-Y-A-R, w którym A oznacza wiązanie kowalencyjne, 'a Y oznacza atom tlenu.
  25. 25. Sposób według zastrz. 24, znamienny tym, że kondensację przeprowadza się w obecności imidu kwasu N-hydroksybursztynowego i dwucykloheksylokarbodwuimidu.
  26. 26. Sposób według zastrz. 24, znamienny tym, że kondensację przeprowadza się w obecności 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu.
  27. 27. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że wytwarza się związek o wzorze X-COOR poddając reakcji Chlide lub Bchlide o wzorze X-COOH z aminokwasem, peptydem lub białkiem zawierającymi grupę hydroksylową lub z ich pochodnymi o wzorze R-OH, po czym wyodrębnia się z mieszaniny reakcyjnej ester o ogólnym wzorze X-COOR.
  28. 28. Sposób według zastrz. 27, znamienny tym, że związkiem o wzorze R-OHjest aminokwas lub jego pochodna.
  29. 29. Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że związkiem o wzorze R-OH jest ester aminokwasu.
  30. 30. Sposób według zastrz. 29, znamienny tym, że związkiem o wzorze R-OHjest ester metylowy N-tert-butoksy-karbonylotyrozylu (N-tBOC-Tyr-OMe).
  31. 31. Sposób według zastrz. 23, znamienny tym, że związkiem o wzorze R-OHjest ester peptydu lub jego pochodna.
  32. 32. Sposób według zastrz. 31, znamienny tym, że związkiem o wzorze R-OHjest ester karbobenzoksyseryloserynometylowy (Z-Ser2-OMe).
  33. 33. Sposób według zastrz. 26, znamienny tym, że wytwarzanąpochodnąjest 3-0-(1 -0-metylo-N-karbobenzoksy-L-serylo)-L-serylochlorofilid a (Chlide-Z-Ser2-OMe), przy czym reakcji poddaje się Chlidea z Z-Ser2-OMe w obecności 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu, a następnie z mieszaniny reakcyjnej wyodrębnia się produkt Chlide-ZSer2-OMe i oczyszcza się go chromatograficznie.
  34. 34. Sposób według zastrz. 26, znamienny tym, że wytwarzanąpochodnąjest 3-0-(1-0-metylo-N-karbobenzoksy-L-serylo)-L-serylobakteriochlorofilid a (Bchlide-Z-Se^-OMe), przy czym reakcji poddaje się Bchlidea z Z-Se^-OMe w obecności 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu, a następnie z mieszaniny reakcyjnej wyodrębnia się produkt Bchlide-Z-Ser2-OMe i oczyszcza się go chromatograficznie.
  35. 3 5. Sposób według zastrz. 26, znamienny tym, że wytwarzanąpochodnąjest 7 -0-( 1 -0-metylo-N-tert-butoksykarbonylo)-L-tyrozylochlorofilid a (Chlide-N-tBOC-Tyr-OMe), przy czym reakcji poddaje się Chlidea z N-tBOC-Tyr-OMe w obecności 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu, a następnie z mieszaniny reakcyjnej wyodrębnia się produkt Chlide-N-tBOC-Tyr-OMe i oczyszcza się go chromatograficznie.
  36. 36. Sposób według zastrz. 26, znamienny tym, że wytwarzanąpochodnąjest 7-0-(1-0-metylo-N-tert-butoksykarbonylo)-L-tyrozylobakteriochlorofilid a (Bchlide-N-tBOC-Tyr-OMe), przy czym reakcji poddaje się Bchlidea z N-tBOC-Tyr-Ome w obecności 4-dwumetyloaminopirydyny i dwucykloheksylokarbodwuimidu, a następnie z mieszaniny reakcyjnej wyodrębnia się produkt Bchlide-N-tBOC-TyrOMe i oczyszcza się go chromatograficznie.
  37. 37. Sposób według zastrz. 25, znamienny tym, że wytwarzanie związku o wzorze X-COOR rozpoczyna się aktywacją Chlide lub Bchlide o reakcji z imidem kwasu N-hydroksybursztynowego (NHS) i dwucykloheksylokarbodwuimidem, po czym wytworzony NHS-Chlide lub NHS-Bchlide poddaje się reakcji z aminokwasem, peptydem lub białkiem zawierającymi grupę hydroksylową o wzorze R-OH, a następnie wyodrębnia się z mieszaniny reakcyjnej ester o ogólnym wzorze X-COOR i oczyszcza się go chromatograficznie.
  38. 38. Sposób według zastrz. 37, znamienny tym, że wytwarza się produkt o wzorze X-COOR, w którym R oznacza resztę aminokwasową lub jej pochodną.
    173 150
  39. 39. Sposób według zastrz. 38, znamienny tym, że wytwarza się produkt o wzorze X-COOR, w którym R oznacza resztę estru etylowego tyrozyny.
  40. 40. Sposób według zastrz. 39, znamienny tym, że wytwarza się produkt o wzorze X-COOR, w którym R oznacza resztę peptydową lub jej pochodną.
  41. 41. Sposób według zastrz. 40, znamienny tym, że wytwarza się produkt o wzorze X-COOR, w którym R oznacza resztę hormonu stymulującego α-melanocyty.
PL93299803A 1992-07-26 1993-07-26 Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu oraz sposób otrzymywania tych pochodnych PL173150B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IL102645A IL102645A (en) 1992-07-26 1992-07-26 Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL299803A1 PL299803A1 (en) 1994-02-07
PL173150B1 true PL173150B1 (pl) 1998-01-30

Family

ID=11063865

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93299803A PL173150B1 (pl) 1992-07-26 1993-07-26 Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu oraz sposób otrzymywania tych pochodnych
PL93319910A PL173128B1 (pl) 1992-07-26 1993-07-26 Sposób wytwarzania nowych pochodnych chlorofilu i bakteriochlorofilu

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93319910A PL173128B1 (pl) 1992-07-26 1993-07-26 Sposób wytwarzania nowych pochodnych chlorofilu i bakteriochlorofilu

Country Status (16)

Country Link
US (3) US5726169A (pl)
EP (1) EP0584552B1 (pl)
JP (1) JP3612343B2 (pl)
CN (1) CN1040212C (pl)
AT (1) ATE196850T1 (pl)
AU (1) AU674315B2 (pl)
CA (1) CA2101227C (pl)
DE (1) DE69329538T2 (pl)
DK (1) DK0584552T3 (pl)
ES (1) ES2153367T3 (pl)
GR (1) GR3035195T3 (pl)
HU (1) HU221186B1 (pl)
IL (1) IL102645A (pl)
PL (2) PL173150B1 (pl)
PT (1) PT584552E (pl)
ZA (1) ZA935310B (pl)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6147195A (en) * 1993-07-26 2000-11-14 Yeda Research And Development Co., Ltd. Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
IL116126A0 (en) 1995-11-24 1996-01-31 Yeda Res & Dev Process for the preparation of bacteriochlorophyllis some novel compounds of this type and pharmaceutical compositions comprising them
GB9625895D0 (en) 1996-12-13 1997-01-29 Riley Patrick A Novel compound useful as therapeutic agents and assay reagents
CN1074771C (zh) * 1996-12-30 2001-11-14 中国科学院长春应用化学研究所 聚合物载体茂金属催化剂的制备
AU6028598A (en) * 1997-01-09 1998-08-03 Emory University Non-iron metalloporphyrins and methods of use
DE19731741A1 (de) * 1997-07-23 1999-01-28 Deutsches Krebsforsch Konjugat zur Unterscheidung von krankhaftem und gesundem Gewebe
US6284223B1 (en) * 1998-10-15 2001-09-04 Fluoroprobe, Inc. Method for viewing tumor tissue located within a body cavity
US6652836B2 (en) 1998-10-15 2003-11-25 Fluoroprobe, Inc. Method for viewing tumor tissue located within a body cavity
US6299860B1 (en) 1998-10-15 2001-10-09 Fluoro Probe, Inc. Method for viewing diseased tissue located within a body cavity
HU228208B1 (en) 1998-12-09 2013-01-28 Yeda Res & Dev Palladium-substituted bacteriochlorophyll derivatives and use thereof
IL133253A0 (en) 1999-12-01 2001-04-30 Yeda Res & Dev Chlorophyll and bacteriochlorophyll esters, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
US7045117B2 (en) * 1999-12-01 2006-05-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method for tumor diagnosis comprising administering of palladium-substituted bacteriochlorophyll derivatives
EP1267935A2 (en) * 2000-01-12 2003-01-02 Light Sciences Corporation Novel treatment for eye disease
US7235685B2 (en) 2001-07-03 2007-06-26 Mallinckrodt, Inc. Aromatic sulfenates for type I phototherapy
US20020169107A1 (en) * 2001-01-19 2002-11-14 Mallinckrodt Inc. Novel aromatic azides for type I phototherapy
WO2002008174A1 (en) * 2000-07-26 2002-01-31 Patrick Anthony Riley Phenylethylamine derivatives and their use in the treatment of melanoma
WO2002013820A1 (en) * 2000-08-11 2002-02-21 Ceramoptec Industries, Inc. Photosensitizing ointment
AU2006200164B2 (en) * 2001-04-09 2007-03-08 Oncofluor, Inc. Method for viewing tumor tissue located within a body cavity
IL148921A0 (en) * 2002-03-26 2002-09-12 Peptor Ltd Photo active backbone cyclized somatostatin analogs for optical imaging and photodynamic therapy
BR0304716A (pt) 2002-05-08 2004-07-13 Yeda Res & Dev Método para formação de imagens de mri-bold on line, sensibilizada
IL152900A0 (en) * 2002-11-17 2003-06-24 Yeda Res & Dev Water-soluble bacteriochlorophyll derivatives and their pharmaceutical uses
GB0323358D0 (en) * 2003-10-06 2003-11-05 Green Grass Design Ltd Novel compounds and processes
PT1753457T (pt) 2004-06-07 2016-11-10 Yeda Res & Dev Derivados catiónicos de bacterioclorofilas e utilizações dos mesmos
US7947827B2 (en) * 2006-06-30 2011-05-24 State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University Pharmaceutical formulation comprising a metaloporphyrin and method for its purification and use
US9957293B2 (en) 2006-08-23 2018-05-01 Yeda Research And Development Company Ltd. Conjugates of RGD peptides and porphyrin or (bacterio)chlorophyll photosynthesizers and their uses
CA2661319C (en) * 2006-08-23 2015-12-01 Yeda Research And Development Co. Ltd Conjugates of rgd peptides and porphyrin or (bacterio)chlorophyll photosynthesizers and their uses
CA2699912A1 (en) 2007-09-19 2009-03-26 Oncofluor, Inc. Method for imaging and treating organs and tissues
FR2924021B1 (fr) * 2007-11-27 2010-08-13 Du Vernet Michele Eymard Composition pour le traitement de la peau par therapie photodynamique
EP2244787A1 (en) * 2008-01-28 2010-11-03 Yeda Research And Development Company Ltd. Endoscopic imaging photodynamic therapy system and methods of use
AU2009216681A1 (en) * 2008-02-22 2009-08-27 Clinuvel Pharmaceuticals Limited Method for treatment of photosensitivity and phototoxicity
WO2009107139A1 (en) * 2008-02-27 2009-09-03 Yeda Research And Development Co. Ltd Rgd-(bacterio)chlorophyll conjugates for photodynamic therapy and imaging of necrotic tumors
CA2846011C (en) 2011-08-23 2019-10-15 Yeda Research And Development Co.Ltd. (bacterio)chlorophyll photosensitizers for treatment of eye diseases and disorders
EP2934303B1 (en) 2012-12-19 2019-09-04 The Research Foundation for the State University of New York Compositions and method for light triggered release of materials from nanovesicles
CN105579063A (zh) * 2013-06-05 2016-05-11 法尔哈德·哈菲泽 包括光活化活性组分的施用组合物的方法和具有给予药物组合物的方案的药物组合物
RU2536109C1 (ru) * 2013-07-25 2014-12-20 федеральное государственное бюджетное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ комбинированной обработки склерального ложа после эндорезекции внутриглазного новообразования
RU2536116C1 (ru) * 2013-07-25 2014-12-20 федеральное государственное бюджетное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ фотодинамической обработки склерального ложа после эндорезекции внутриглазного новообразования
SG10201506686WA (en) * 2015-08-24 2017-03-30 Agency Science Tech & Res Conjugates
CN111171030B (zh) * 2018-11-12 2022-11-22 浙江海正药业股份有限公司 细菌叶绿素衍生物及其制备方法
CN115093422B (zh) * 2022-06-15 2023-06-20 西北工业大学 一种基于代谢标记策略的新型光敏剂及其制备方法和应用
CN116585530B (zh) * 2023-05-05 2024-02-02 暨南大学 一种高效产氧的叶绿体复合水凝胶及其制备方法与应用

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5156840A (en) * 1982-03-09 1992-10-20 Cytogen Corporation Amine-containing porphyrin derivatives
US4977177A (en) * 1985-04-30 1990-12-11 Nippon Petrochemicals Company, Ltd. Tetrapyrrole polyaminomonocarboxylic acid therapeutic agents
HU204856B (en) * 1987-08-12 1992-02-28 Orszagos Mueszaki Fejlesztesi Process for releasing cell mixtures and tissues from undesired populations and for producing monoclonal antibody - hematoporphyrin conjugates
US4876190A (en) * 1987-10-21 1989-10-24 Becton Dickinson & Company Peridinin-chlorophyll complex as fluorescent label
EP0350948B1 (en) * 1988-07-14 1998-03-18 Toyohakka Kogyo Kabushiki Kaisha Porphyrin derivatives
US5002962A (en) * 1988-07-20 1991-03-26 Health Research, Inc. Photosensitizing agents
US5567687A (en) * 1989-03-06 1996-10-22 University Of Texas Texaphyrins and uses thereof
US5171741A (en) * 1989-04-21 1992-12-15 Health Research, Inc. Bacteriochlorophyll-a derivatives useful in photodynamic therapy
US5238940A (en) * 1990-03-22 1993-08-24 Quadra Logic Technologies Inc. Compositions for photodynamic therapy
DE4121876A1 (de) * 1991-07-02 1993-01-14 Scheer Hugo Modifizierte bakteriochlorophylle, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US5330741A (en) * 1992-02-24 1994-07-19 The Regents Of The University Of California Long-wavelength water soluble chlorin photosensitizers useful for photodynamic therapy and diagnosis of tumors

Also Published As

Publication number Publication date
US5955585A (en) 1999-09-21
HU221186B1 (en) 2002-08-28
PL299803A1 (en) 1994-02-07
JP3612343B2 (ja) 2005-01-19
DE69329538D1 (de) 2000-11-16
EP0584552A2 (en) 1994-03-02
IL102645A (en) 1998-02-22
ATE196850T1 (de) 2000-10-15
JPH0733772A (ja) 1995-02-03
AU4214893A (en) 1994-01-27
CA2101227C (en) 2002-11-12
HUT64949A (en) 1994-03-28
AU674315B2 (en) 1996-12-19
CN1088210A (zh) 1994-06-22
PT584552E (pt) 2001-04-30
CN1040212C (zh) 1998-10-14
ES2153367T3 (es) 2001-03-01
HU9302149D0 (en) 1993-10-28
PL173128B1 (pl) 1998-01-30
DK0584552T3 (da) 2001-02-05
US5650292A (en) 1997-07-22
US5726169A (en) 1998-03-10
EP0584552A3 (en) 1994-08-17
EP0584552B1 (en) 2000-10-11
GR3035195T3 (en) 2001-04-30
IL102645A0 (en) 1993-01-14
CA2101227A1 (en) 1994-01-27
DE69329538T2 (de) 2001-06-07
ZA935310B (en) 1994-02-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL173150B1 (pl) Nowe pochodne chlorofilu i bakteriofilu oraz sposób otrzymywania tych pochodnych
US7169753B2 (en) Chlorophyll and bacteriochlorophyll esters, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
Hoober et al. Photodynamic sensitizers from chlorophyll: purpurin–18 and chlorinp6
JP5555659B2 (ja) 水溶性陰イオン性バクテリオクロロフィル誘導体及びそれらの使用
US6740637B1 (en) Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
AU2005275220B2 (en) Adduct of fluorescent dye and tumor avid tetrapyrrole
Rakestraw et al. Antibody-targeted photolysis: in vitro studies with Sn (IV) chlorin e6 covalently bound to monoclonal antibodies using a modified dextran carrier.
US20110223102A1 (en) Multimodality agents for tumor imaging and therapy
US9155791B2 (en) Metallation enhancements in tumor-imaging and PDT therapy
Jinadasa Design, synthesis, and characterization of porphyrin derivatives for biological applications

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20080726