JP4801630B2 - 液体の微生物分析用のサンプルを調製するための方法およびユニット - Google Patents

Description

本発明は、液体の微生物分析のためのサンプルの調製に関する。

異なるタイプの微生物を含むことができる液体が存在することが知られており、その中で微生物分析は１つまたはいくつかのタイプだけにしか関係しないはずである。

これらの液体は、例えば、単クローン抗体についての製造者連鎖の終わりに存在する。詳細には、この種の液体（前記抗体を生成できるようにした真核生物を生じる）は、細菌および／またはウイルスのために汚染される場合がある。

真核生物細胞があると、ゲルの増殖培地についての従来の検出（偽陰性検出）の場合には微生物の成長に悪影響を及ぼし得る毒性を放出することによって、あるいはルミネセンス、蛍光発光による、または増幅もしくは交雑形成による高速検出（偽陽性検出）の場合にはその結果の読みを混乱させることによって、あるいはこれらの微生物の核酸についての任意の他の分析方法によって、細菌およびウイルスの微生物分析が妨げられることがある。

したがって、このタイプの液体について信頼できる分析を行うためには、検出が望まれるタイプの微生物に属する微生物（上述した例では細菌および／またはウイルス）だけから選択が行われるサンプルを調製することが適切である。

液体を分析するためのサンプルを調製する方法はすでに知られており、そこでは検出すべき微生物は、異なるタイプの微生物の間の形態学的特徴（物理的および／または化学的な）の差異を活用することによって選択される。

詳細には、サンプル中に残しておくことが望まれないタイプの微生物に属する微生物を特定的に溶解するように構成された試薬を分析すべき液体中に加えることと、膜上で液体を濾過してそれにより溶解物質（破壊されて溶解をこうむり、膜を介して通過してしまったもの）のせいで特定的に反応しなかった検出すべき微生物を単独で含むサンプルをこの膜上に収集することとから成る、選択のステップを含む調製方法がすでに知られている。次いで、上述のように収集されたサンプルは回収されて、従来のまたは高速の微生物分析技術を用いて分析される。

また、サンプルを形成するための他の解法は、低速で遠心力を作用させることによってそれらの質量の差異によって他のものから遠ざかるように微生物を分離することから成る。
米国特許出願公開第２００４／２１９６２８号明細書 英国特許出願公開第２２９７９２６号明細書 米国特許第４２１５１９８号明細書 米国特許第２９２３６６９号明細書 米国特許第５１１６７５４号明細書

本発明は、同様な方法ではあるが、また同時に改善されたパフォーマンスを有し実施するのにより簡単でより好都合な方法により、サンプルを調製することに関する。

これを目的として、所定の形態学的特徴をそれぞれ有するいくつかの異なるタイプの微生物を含み得る液体について微生物分析のためのサンプルを調製する方法を提供し、この方法は、前記異なるタイプの微生物から微生物の選択を行うステップを含み、選択を行う前記ステップは、
その中で第１の膜および第２の膜が固定される概ね管状の本体であって前記液体を導入するための開口、前記導入開口と前記第１の膜との間の第１の隔室、前記第１の膜と第２の膜との間の第２の隔室、および前記第１の膜と前記第２の膜の反対の側の第３の隔室を有する前記本体と、所定の第１の細孔径を有する前記第１の膜と、前記第１の膜の前記所定の第１の細孔径よりも小さい所定の第２の細孔径を有する前記第２の膜とを備える前記サンプルを調製するためのユニットを得るステップと、
前記第１の膜を介して第１の隔室から第２の隔室へ前記液体の所定の容量を通過させるステップと、
前記第２の膜上に前記サンプルを収集するために前記第２の膜を介して第２の隔室から第３の隔室へ上述のように第２の隔室に到達した濾過液のすべてを通過させるステップであって、前記微生物はそのサイズが前記第１の膜の所定の細孔径よりも小さく前記第２の膜の所定の細孔径よりも大きい前記異なるタイプの微生物から選択されるステップと、
前記第２の膜上に上述のように収集された前記サンプルを回収するステップと
を含むことを特徴とする。

本発明による方法では、分析すべき微生物（例えば細菌および／またはウイルス）から形成されるサンプルは、第１の膜を介して通過するにはサイズが大きすぎる、望まれていない微生物（例えば真核生物細胞）から分離された後に第２の膜上に収集される。

これらのサイズの差異に基づく微生物についてのこのような選択は特に有効であり、上述した先行技術の方法においてよりも多くの場合より有効である。

このことの説明としては、遠心力を作用させる場合には収集すべき微生物の一部分が遠心力によって排除すべき微生物に捕捉され、そして化学的溶解の場合には溶解物質が完全に選択的ではなくしたがって収集すべき微生物のうちの少ないがゼロではない分量が溶解をこうむって膜上に収集されないが、本発明による方法（サイズによる選択）の場合にはこの種の限界効果は無視できまたは存在すらしないことが考えられる。

好ましい特徴によれば、製造および使用の双方に関する簡単さおよび便利さを理由として、
調製ユニットを得るステップは、その本体が前記第１の膜が固定される第１の部分、および前記第２の膜が固定される第２の部分を備え前記各部分が互いから取外し可能であるその調製ユニットを選択するステップを含み、前記サンプルを回収するステップは、前記本体の前記第１の部分から前記本体の前記第２の部分を分離するステップを含み、かつ／または
調製ユニットを得るステップは、前記第２の隔室に連通して塞がれていないことが可能な補助開口がその本体に形成される調製ユニットを選択するステップを含み、前記サンプルを回収するステップは、前記開口の栓を抜くステップと、前記補助開口によって前記第２の膜上に選択された前記微生物を溶解するための薬品を置くステップと、次いで前記第２の膜を介して第２の隔室から第３の隔室へそのように形成された溶解物を通過させるステップとを含む。

したがって、取外し可能である２つの部分で形成された本体によって、またはその本体に設けられた開口部によって第２の膜に、より具体的にはサンプルが収集された第２の膜の表面に手を届かせることが可能である。

他の好ましい特徴によれば、上に述べたのと同じ理由から、
前記膜を介して前記液体を通過させるステップは、減圧下にある前記第３の隔室を配置することによって行われ、
前記膜を介して前記液体を通過させるステップは、増大した圧力下にある前記第１の隔室を配置することによって行われ、
前記膜を介して前記液体を通過させるステップは、前記調製ユニットに遠心力を作用させることによって行われ、
調製ユニットを得るステップは、前記第１の膜として１μｍよりも大きい細孔径の膜を選択するステップを含み、
調製ユニットを得るステップは、前記第２の膜として０．６５μｍよりも小さい細孔径の膜を選択するステップを含み、かつ／または
調製ユニットを得るステップは、前記第２の膜として０．１μｍよりも小さい細孔径の膜を選択するステップを含む。

第２の態様によれば、本発明はまた、上述した方法を履行するのに適したサンプルを調製するためのユニットであって、その中で第１の膜および第２の膜が固定される概ね管状の本体であって前記液体を導入するための開口、前記導入開口と前記第１の膜との間の第１の隔室、前記第１の膜と第２の膜との間の第２の隔室、および前記第１の膜から前記第２の膜の反対の側の第３の隔室を有する前記本体と、所定の第１の細孔径を有する前記第１の膜と、前記第１の膜の前記所定の第１の細孔径よりも小さい所定の第２の細孔径を有する前記第２の膜とを含み、前記ユニットは前記第１の膜によって第１の隔室から第２の隔室へ前記液体の所定の容量を通過させて次いで前記第２の膜上に前記サンプルを収集するために前記第２の膜を介して第２の隔室から第３の隔室へ上述のように第２の隔室に到達した濾過液のすべてを通過させるように構成され、また前記本体は前記第２の膜上に上述のように収集された前記サンプルを回収するための手段を備えることを特徴とするユニットに関する。

したがって調製ユニットは、２つの膜を介して所定の容量の全体を（もちろんこの膜によって保有された一部を除いて）通過させ、そしてさらにサンプルを回収するための手段によってサンプルに手を届かせることができるようにデザインされる。

いくつかのステージを有する簡単な濾過ユニット（例えば溶解浄化ユニット）は、本発明による調製ユニットとして機能できず、このような濾過ユニットは膜から作られていないので第２のステージによって中間の隔室に到達する濾過液のすべてを通過させるように構成されておらず（残留する濾過液が常に残っているであろう）、かつ／または上記サンプルを回収するための手段を欠くことに留意されたい。

好ましい特徴によれば、製造および使用の双方に関する簡単さおよび便利さを理由として、前記第１の膜は濡れると空気に透過性がある。

このようにして、液体が第１の隔室から完全に無くなって第１の膜がこの隔室へ向けられた面で空気と接触すると、その細孔の十分なサイズによってこの膜は依然として空気に透過性があり（無泡立ち点現象（ｎｏ ｂｕｂｂｌｅ ｐｏｉｎｔ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ））、これにより空気はこの膜によって第２の隔室の中に貫入でき、それが含む液体を排出することができる。

好ましい他の特徴によれば、上に述べたのと同じ理由から、
前記第１の膜の細孔は１μｍよりも大きい直径であり、
前記第２の膜の細孔は０．６５μｍよりも小さい直径であり、
前記第２の膜の細孔は０．１μｍよりも小さい直径であり、
前記本体は前記第１の膜が固定される第１の部分、および前記第２の膜が固定される第２の部分を備え、前記回復手段は前記第１の部分から前記第２の部分を分離するための手段であり、
前記回復手段は、前記本体に形成され前記第２の隔室に連通して塞がれていないことが可能な開口を備え、
前記本体は前記第３の隔室を画定するカップを備え、かつ／または
前記カップは取外し可能である。

本発明の特徴および利点は、添付の図面について好ましいが非限定的な例示として与えられる次に述べる説明から明らかになるであろう。

図１に示される調製ユニット１は、その中で膜３および膜４、ならびに２つの多孔質支持体５および多孔質支持体６が固定される概ね管状の本体２を含む。

膜３および膜４はポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）から成り、膜３は５μｍに等しい直径の細孔を有し、膜４は０．４μｍに等しい直径の細孔を有する。

本体２は部分９および部分１０によって形成され、一方は他方の中に嵌め込まれている。部分９は液体を導入するための開口７を有し、部分１０はその液体の出口のための開口８を有する。

部分９は、片面に開口７を画定し、その反対面に第２の部分１６を継ぎ合わせた第１の円筒形部分１５を有し、この第２の部分１６はやはり円筒形で部分１５の直径よりも小さい直径であり、部分１５および部分１６は横断環状壁１７によって互いに連結されている。

横断壁１７に隣接して、多孔質支持体５が固定され膜３が封着され、この膜は開口７と同じ面側から多孔質支持体５に面１２で当たっている（図１参照）。

部分１０は、円筒形部分１５の直径と実質的に等しい直径の第１の円筒形部分２０、円筒形部分１６の直径と実質的に等しい直径の第２の円筒形部分２１、および部分２１の直径よりも小さい直径の第３の円筒形部分２２を含み、この第３の円筒形部分は開口８を画定している。

部分２０および部分２１は横断環状壁２３によって互いに連結されるが、部分２１および部分２２は横断環状壁２４によって互いに連結される。

環状壁２３に隣接して、多孔質支持体６が固定され膜４が封着され、この膜は多孔質支持体６に面１４で当たっており、この膜の面１３は多孔質支持体５に面している（図１参照）。

膜３を有する部分９は、濾過すべき液体を導入するための隔室２６を画定し、嵌め込まれた状態の部分９および部分１０は膜３および膜４と共に中間の隔室２７を画定するが、膜４を有する部分１０は液体を排出するための隔室２８を画定する。

本体２の部分１０の中に部分９が嵌め込まれた状態で、円筒形部分１６の外側になる表面は円筒形部分２０の内面に面するが、これらは弾性変形によって互いに当たりそれにより部分９および部分１０が共に固締されることを維持する。

次いで、分析すべき液体からサンプルを調製する異なるステップについて説明することにし、この液体はこの細胞の中にその存在を検出することが望まれる真核生物細胞および細菌を含むことができる。

第１のステップでは、操作者は円筒形部分２２を真空源（例えば真空ポンプ）に連結して隔室２８を減圧下に置き、隔室２６の中に液体の所定の容量（例えば１０ｍｌ）を吐出する。

隔室２８を減圧下に置くことは隔室２７を減圧下に置くことになり、これにより液体の所定の容量が、吸引され、膜３および支持体５を介して通過して隔室２７を占有する。

膜３の細孔は、最も大きいサイズの微生物（ここでは真核生物細胞）だけがこの膜によって保有されるように寸法決めされるが、その他の微生物（ここでは細菌）はこの膜および多孔質支持体５を介して通過して隔室２７を占有する濾過液内に到達する。

さらに膜３の細孔のサイズが大きいと、この膜は濡れている場合でさえも依然として空気に透過性があり（泡立ち点現象の不在（ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｂｕｂｂｌｅ ｐｏｉｎｔ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ））、これにより空気が膜３によって隔室２７の中に貫入できることを意味する。

この膜により空気が通過できるので、隔室２７に含まれる濾過液は、次いで膜４および支持体６を介して流れて隔室２８を占有し、次いで出口開口８を経て本体２を去る。

膜４の細孔は、検出することが望まれる細菌を保有するように寸法決めされる。

いったんこれらの操作が行われてしまうと、操作者は円筒形部分２２から真空源を切り離す。

次に、操作者は部分１０に対して部分９を滑らせることによって部分９および部分１０を分離し、これにより図２に示すようにこれらは互いから離脱する。

膜４、また特にサンプルが収集されてしまったこの膜の面１３は、このようにして手が届くようにされる。

次いで、この膜を取り出してこれをゲルの増殖培地と接触状態に置き、そのあと培養器の中にこのアセンブリを置いて細菌を培養することができる。

他の解法は、ルミネセンスにより細菌のＡＴＰの存在を明らかにする試薬を面１３側からその上に置くことによってこの膜を処理する（部分１０からこの膜を取り出してしまった後、または取り出していない状態で）ことから成り、または他の可能性には蛍光発光により細菌を識別することを可能にする試薬がある。

さらに他の解法は、従来の方法（例えばＰＣＲタイプの方法）によって膜４上に収集された細菌のＤＮＡを分析することから成る。

また、膜と無関係にサンプルを回収することが望まれる場合には、細菌を溶解するための薬品をこの膜上に置くこともできる。

再び真空源にユニットを連結することによって、次いで細菌の生物学的材料を含む溶解物は、膜４そのあと隔室２８を通過して開口８の先方に配置された容器内に収集される。次いで、この容器内に回収された液体は高速の微生物学的検出方法（例えばルミネセンスによる方法）によって分析され得る。

本発明によるユニットを微生物用の高速検出方法と組み合わせて使用すると、いくつかのタイプの微生物を含み得るあらゆる種類の液体サンプルを短時間で大規模に検証することが可能となる。

調製ユニットの他の実施形態が図３に示される。

全体として、類似の部材については、それに番号１００が加えられた同様の参照符号が使用された。

調製ユニット１０１は、遠心機内に配置されそれによりこの調製ユニットを減圧下に置く必要もなく２つの膜を介して液体を通過させるように構成される。

この実施形態では、環状部分２４および円筒形部分２２は排除されているが、先の実施形態の部分２１に対して円筒形部分１２１が延在され、これにより本体１０２に属するカップ１３０をその上に嵌合させて液体が開口１０８から出てくる場合に第２の濾過液を取り出すことが可能であり、またはそのほかに、膜４から無関係にサンプルを回収することが望まれる場合には（この膜上に溶解物質を置くことによって）、いったん第２の濾過液が無くなるとこのカップ内に溶解物を回収することが可能である。

したがってこのカップは、部分１１０から分離されて（円筒形部分１２１に沿って滑らせることによって）第２の濾過液を空けるように、または、例えばルミネセンスによりＡＴＰの存在を明らかにする試薬をカップの中に加えることによって溶解物の高速微生物学的検出を行うためにその溶解物に手を届かせるように構成される。

他の実施形態が図４に示される。

この実施形態では調製ユニット２０１は、取外し可能なストッパ２３３によって液密に塞がれる開口２３２は別として調製ユニット１０１と同様な構造を有し、このストッパは本体２０２の部分２１０の円筒形部分２２０に横向きに配置される。

いったんサンプルが調製されてストッパ２３３が取り外されると、この開口により、本体２０２の部分２０９および部分２１０を分離する必要もなく、必要に応じて隔室２２７にそして例えば溶解物質をそこに置くために特に膜３の面１３に、手を届かせることが可能になり、次いで微生物の生物学的材料がカップ２３０内に回収される。

１つの変形では、膜４の細孔はこの膜上に細菌および／またはウイルスを収集するように０．１μｍよりも小さい直径である。

他の変形では、例えばピストンと液体との間に空気のある容量を残すことにより円筒形部分１５に係合したピストンを用いて導入チャンバ２６を増大した圧力下に置くことによって、液体は膜３および膜４を介して通過する。ピストンが作動されると、ピストンは、液体の容量ならびにこのピストンと液体との間で圧縮された空気の容量の変位を起こし、これにより隔室２６は増大した圧力下に置かれる。したがって液体は、隔室２７の中に貫入し次いでピストンにより押し動かされた空気によってどっと流され、次には空気もまた、依然として空気に透過性がある膜３を介して隔室２７の中に貫入する。

更なる変形では、検出すべき微生物は細菌もしくはウイルスではなく、酵母菌（第１の膜によって保有されないほど十分に小さいサイズである）もしくは例えばカビである。

他の変形では、分析すべき液体は真核生物を含まなくて、酵母菌もしくはそのほかに繊維状真菌などの他のタイプの微生物（検出すべき微生物から分離すべきものである）を含む。

他の変形では、調製ユニットの本体の２つの部分は共にスナップ嵌合し、この各部分の分離は例えばスナップ嵌合している足部を折ることによって行われる。

他の変形では、上記２つの部分は、一体物を形成し、これらを互いから分離するために破壊される脆弱帯によって連結される。

他の変形では、サンプルを収集する膜が調製ユニットの本体に封着されなくて、Ｏリングシールに押圧され、かつ／またはこの膜がポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリカーボネート、ポリエステル、もしくは他の可能性ではセルロースエステルから成形される。

本発明は、説明され図示された実施形態に限定されるものではなく、いかなる変形形態にも効力が及ぶ。

本発明による調製ユニットの断面図である。 図１と同様なユニットの図であるが、このユニットの共に嵌め込まれた本体の２つの部分が分離された図である。 調製ユニットの第２の実施形態の図１に類似した図である。 調製ユニットの第３の実施形態の図１に類似した図である。

符号の説明

１、１０１、２０１ 調製ユニット
２、１０２、２０２ 本体
３ 第１の膜
４ 第２の膜
５、６ 多孔質支持体
７、１０７、２０７、８、１０８、２０８ 開口
９、１０９、２０９ 第１の部分
１０、１１０、２１０ 第２の部分
１１、１２、１３、１４ 面
１５、１１５、２１５ 第１の円筒形部分
１６、１１６、２１６ 第２の円筒形部分、手段
１７、１１７、２１７、２３、１２３、２２３、２４ 横断環状壁
２０、１２０、２２０ 第１の円筒形部分、手段
２１、１２１、２２１ 第２の円筒形部分
２２ 第３の円筒形部分
２６、１２６、２２６ 第１の隔室
２７、１２７、２２７ 第２の隔室
２８、１２８、２２８ 第３の隔室
１３０、２３０ カップ
２３２ 補助開口、手段
２３３ 取外し可能ストッパ

Claims (16)

1. 所定の形態学的特徴をそれぞれ有するいくつかの異なるタイプの微生物を含むことができる液体の微生物分析のためのサンプルを調製する方法にして、その方法は前記異なるタイプの微生物から微生物の選択を行うステップを含み、選択を行う前記ステップが、
   その中で第１の膜（３）および第２の膜（４）が固定される概ね管状の本体（２０２）であって、前記液体を導入するための開口（２０７）、前記導入開口（２０７）と前記第１の膜（３）との間の第１の隔室（２２６）、前記第１の膜（３）と第２の膜（４）との間の第２の隔室（２２７）、および前記第２の膜（４）に関して前記第１の膜とは反対の側の第３の隔室（２２８）を有する前記本体（２０２）を含み、前記第１の膜（３）は所定の第１の細孔径を有し、前記第２の膜（４）は前記第１の膜（３）の前記所定の第１の細孔径よりも小さい所定の第２の細孔径を有する、前記サンプルを調製するための調製ユニット（２０１）を得るステップと、
   前記第１の膜（３）を介して第１の隔室（２２６）から第２の隔室（２２７）へ前記液体の所定の容量を通過させるステップと、
   前記異なるタイプの微生物から選択された、サイズが前記第１の膜（３）の所定の細孔径よりも小さく前記第２の膜（４）の所定の細孔径よりも大きい微生物を有する前記サンプルを、前記第２の膜（４）上に収集するために、前記第２の膜（４）を介して第２の隔室（２２７）から第３の隔室（２２８）へ上述のように第２の隔室（２２７）に到達した濾過液のすべてを通過させるステップと、
   前記第２の膜（４）上に上述のように収集された前記サンプルを回収するステップと
   を含む方法であって、
   調製ユニットを得るステップが、ストッパを取り外すことができ、前記第２の隔室（２２７）に連通している補助開口（２３２）がその本体（２０２）に形成されている調製ユニット（２０１）を選択するステップを含み、
   前記サンプルを回収するステップが、前記開口（２３２）のストッパを取り外すステップと、前記補助開口（２３２）によって前記第２の膜（４）上に選択された前記微生物を溶解するための薬品を置くステップと、次いで前記第２の膜（４）を介して第２の隔室（２２７）から第３の隔室（２２８）へそのように形成された溶解物を通過させるステップとを含むことを特徴とする、方法。
2. 調製ユニットを得るステップが、その本体（２０２）は前記第１の膜（３）が固定される第１の部分（２０９）、および前記第２の膜（４）が固定される第２の部分（２１０）を備え前記各部分は互いから取外し可能であるその調製ユニット（２０１）を選択するステップを含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
3. 前記膜（３）および膜（４）を介して前記液体を通過させるステップが、減圧下にある前記第３の隔室（２８）を配置することによって行われることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記膜（３）および膜（４）を介して前記液体を通過させるステップが、増大した圧力下にある前記第１の隔室（２６）を配置することによって行われることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
5. 前記膜（３）および膜（４）を介して前記液体を通過させるステップが、前記調製ユニット（２０１）に遠心力を作用させることによって行われることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
6. 調製ユニット（２０１）を得るステップが、前記第１の膜（３）として１μｍよりも大きい細孔径の膜を選択するステップを含むことを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
7. 調製ユニットを得るステップが、前記第２の膜（４）として０．６５μｍよりも小さい細孔径の膜を選択するステップを含むことを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
8. 調製ユニットを得るステップが、前記第２の膜として０．１μｍよりも小さい細孔径の膜を選択するステップを含むことを特徴とする、請求項７に記載の方法。
9. 請求項１から８のいずれか一項に記載の方法を履行するのに適したサンプルを調製するためのユニットであって、その中で第１の膜（３）および第２の膜（４）が固定される概ね管状の本体（２０２）を備え、前記本体（２０２）は、前記液体を導入するための開口（２０７）、前記導入開口（２０７）と前記第１の膜（３）との間の第１の隔室（２２６）、前記第１の膜（３）と第２の膜（４）との間の第２の隔室（２２７）、および前記第２の膜（４）に関して前記第１の膜（３）とは反対の側の第３の隔室（２２８）を有し、前記第１の膜（３）は所定の第１の細孔径を有し、前記第２の膜（４）は前記第１の膜（３）の前記所定の第１の細孔径よりも小さい所定の第２の細孔径を有し、前記ユニットが前記第１の膜（３）によって第１の隔室から第２の隔室へ前記液体の所定の容量を通過させて次いで前記第２の膜（４）上に前記サンプルを収集するために前記第２の膜（４）を介して第２の隔室から第３の隔室へ上述のように第２の隔室（２２７）に到達した濾過液のすべてを通過させるように構成され、また前記本体が前記第２の膜（４）上に上述のように収集された前記サンプルを回収するための回収手段（２３２）を備えたユニットであって、
   前記回収手段が、前記本体（２０２）に形成された、ストッパを取り外すことができ、前記第２の隔室（２２７）に連通する開口（２３２）を備えることを特徴とする、ユニット。
10. 前記第１の膜（３）が、濡れると空気に透過性があることを特徴とする、請求項９に記載のユニット。
11. 前記第１の膜（３）の細孔が、１μｍよりも大きい直径であることを特徴とする、請求項１０に記載のユニット。
12. 前記第２の膜（４）の細孔が、０．６５μｍよりも小さい直径であることを特徴とする、請求項９から１１のいずれか一項に記載のユニット。
13. 前記第２の膜（４）の細孔が、０．１μｍよりも小さい直径であることを特徴とする、請求項１２に記載のユニット。
14. 前記本体（２０２）が、前記第１の膜（３）が固定される第１の部分（２０９）、および前記第２の膜（４）が固定される第２の部分（２１０）を備えることを特徴とする、請求項９から１３のいずれか一項に記載のユニット。
15. 前記本体（２０２）が、前記第３の隔室（２２８）を画定するカップ（２３０）を備えることを特徴とする、請求項９から１４のいずれか一項に記載のユニット。
16. 前記カップ（２３０）が、取外し可能であることを特徴とする請求項１５に記載のユニット。

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