TWI619809B - 微生物之檢查方法及其裝置 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種供測定試樣溶液中之微生物量所用的微生物之檢查裝置1，具備：攪拌混合機構7，在以透光材質形成之試樣容器5施行添加有試樣與螢光染色試劑之試樣溶液的攪拌‧混合；激發光源10，以攪拌混合機構7攪拌試樣溶液5並具備對試樣容器5之被照射面照射激發光的光源；光接收機構14，偵測藉由來自激發光源10之激發光而螢光發光的光線，轉換為電氣訊號；以及控制機構23，藉由來自光接收機構14的電氣訊號檢測發光數，自該發光數算初試樣容器5中的試樣所含有之微生物量。

Description

微生物之檢查方法及其裝置
本發明係關於一種微生物之檢查方法及其裝置，特別是關於一種適合檢測包含於壓艙水等而於其中生存之浮游生物等微生物的微生物之檢查方法及其裝置。
未載運行李之船舶，為了使該船舶穩定而搭載壓艙水航行，在載運行李的海域中將所搭載之該壓艙水排出。
壓艙水，一般而言，因在與搭載的海域相異之海域排出，故該壓艙水所含有之浮游生物或細菌等微生物被載運至原本之棲息地以外的海域，有引起破壞生態系等之問題的疑慮。
為了處理此等問題，策劃關於壓艙水的管制之國際性規則，採納「用於控制及管理船舶之壓艙水及沉澱物的國際條約(壓艙水管理條約)」。
關於上述壓艙水管理條約的「對於壓艙水採樣之指引(G2)」，在「壓艙水排出基準(D-2)」中，將自船舶排出之壓艙水所含有而生存於其中的微生物之容許個體數，以該微生物之最小尺寸加以區分規定。例如以如下方式規定：對於最小尺寸為50μm以上之微生物(以下稱作「L尺寸生物」)為10個/m3以下，對於最小尺寸為10μm以上未滿50μm之微生物(以下稱作「s尺寸生物」)為10個/mL以下。
至今為止，作為量測在上述壓艙水等水中棲息的微生物細胞之方法，已知有專利文獻1記載之方法。
上述專利文獻1記載之方法為一種微生物細胞之活細胞的量測方法：首先，使與存在於微生物之活細胞的酶或輔酶反應並在細胞內產生螢光物質之化學物質，與含有微生物之測定對象試樣作用。其次，施行一定時間的混合接觸，對試樣照射激發細胞內產生的螢光物質所必須之波長的光線。而後將試樣中自各個微生物發出的光以點的數量加以量測。
藉此，將習知之洋菜培養方法中必須之10小時~數十小時的測定時間顯著地提早為10分鐘以內。此外，將活菌發出的光作為點藉由建立光學性地、電性地偵測量測之手段而可將活菌直接自動計數，具有可使殺菌裝置的控制、製品品質的迅速管理快速地施行之優點。
然則，上述專利文獻1記載之方法，因水的種類、溫度、染色劑的種類、濃度、染色時間等之不同而有測定值產生差異的情形。
作為其他方法，已知有：為了確認將上述壓艙水排出時是否滿足上述排出基準，使以送水泵汲取的海水對流通槽流通並進行影像量測之方法(例如專利文獻2)；使以送水泵汲取的海水對孔隙相異之過濾單元流通，使濾網上之微生物發光並計算微生物數量(例如專利文獻3)等之微生物檢查裝置。
上述專利文獻2記載之微生物檢查裝置，具備：染色部，使液體之試樣流動並將存在於該試樣中之具有活細胞的生物染色；濃縮部，使施加該染色之試樣流動並濃縮以使該生物的濃度提提高；個體量測部，取得該濃縮之試樣中的含有該生物之個體其影像資訊；以及控制機構，藉由以該個體量測部輸出之該個體的影像資訊施行該生物之測定。
藉此，由於可將試樣之液體中的生物之染色步驟、液體中的生物之濃 縮步驟、液體中的生物之資訊取得步驟等一連串地施行，故與個別施行各方式之手法相比，可將結束一個步驟試樣之一部分前進至次一步驟為止的待機時間大幅地縮短，或使其為0，在防止待機時間之染色狀態的劣化之意味下具有可取得穩定的生物死活之資訊等優點。
然則，上述專利文獻2記載之微生物檢查裝置，為了使以送水泵汲取的海水於各種步驟依序流通，故裝置大型化，製造成本變高。而測定結束有至少花費數小時之情形。
此外，上述專利文獻3記載之微生物檢查裝置，其特徵為具備如下步驟：使海水對將孔隙相異之3種濾網直列地配置而構成的過濾單元流通之步驟；使補集於濾網而生存的微生物產生之發色、發光及螢光中的任一項發生之步驟；以及檢測發色、發光及螢光中的任一項並藉由影像解析計算壓艙水或海水中的微生物數之步驟。
藉此，可實現階段性的各尺寸之微生物的捕捉，此一結果，可迅速地測定是否滿足各尺寸之基準所限制的容許殘存基準。
然則，專利文獻3記載之微生物檢查裝置，與專利文獻1同樣地使以送水泵汲取的海水於各種步驟依序流通，有裝置大型化、製造成本變高之情形。
[習知技術文獻] 【專利文獻】
專利文獻1 日本特開平3-43069
專利文獻2 日本特開2009-85898
專利文獻3 日本特開2007-135582
鑑於上述問題，本發明之技術課題在於提供一種，能夠將壓艙水中之微生物的量簡便、短時間、且高精度地測定的微生物之檢查方法及其裝置。
為了解決上述問題，本發明提供一種技術手段，係用於測定試樣溶液中之微生物量的微生物之檢查裝置；具備：攪拌混合機構，具有以透光材質形成之試樣容器，在該試樣容器內施行試樣溶液的攪拌‧混合；激發光源，對該試樣容器照射激發光；光接收機構，偵測光線而轉換為電氣訊號；以及控制機構，計算該試樣容器中之試樣所含有的微生物量；該試樣溶液，係於試樣添加將微生物染色之螢光染色試劑而構成；該光接收機構，偵測來自該激發光源之該激發光的照射所產生之，來自該試樣溶液的螢光發光；該控制機構，依據來自該光接收機構之電氣訊號檢測發光數，計算該試樣容器中之試樣所含有的微生物量。
藉此，於試樣容器添加試樣、將微生物染色之螢光染色試劑，藉由攪拌混合機構施行試樣容器的攪拌‧混合，接著攪拌試樣溶液並使激發光入射至試樣容器，進一步，由於以光接收機構接收微生物的螢光發光，故若與未加攪拌而靜置量測之方法比較，則在極短時間微生物明亮地發光，可簡便並短時間地量測壓艙水中之微生物的量。此外，因本發明之裝置並非為流通式故可將裝置小型化，製造成本亦變得低廉。
此外，申請專利範圍第2項之發明，其特徵為：於該光接收機構與該控制機構之間具備濾波機構；該濾波機構，過濾來自該光接收機構之電氣訊號中的，低頻成分之雜訊及高頻成分之雜訊。
藉此，將電氣訊號導入控制機構前，以濾波機構過濾擾動，故可明確地區別和微生物的螢光發光之光接收量相對應的電氣訊號與擾動。藉此，可不產生微生物量的測定誤差，亦不產生測定值產生差異的問題地，穩定測定。
而申請專利範圍第3項之發明，其特徵為：該濾波機構，為連結高通濾波器與低通濾波器之帶通濾波器。
申請專利範圍第4項之發明，其特徵為：該激發光源，配置為直交於該試樣容器而照射激發光；該光接收機構，配置為以與該激發光源之激發光直交的角度接收該螢光發光。
藉此，來自激發光源之激發光不入射至直接接收光機構，此外，由於螢光發光的厚度部分變薄(例如，如同圖2，發光部分的寬度雖為過去之20mm~30mm，但如寬度M(3mm)地變窄，厚度部分變薄)，故背景與微生物的螢光發光之光量的差異變得極為明確，提高微生物之螢光發光的檢測精度。
此外，申請專利範圍第5項之發明，其特徵為：於該光接收機構與該試樣容器之間，設置狹縫構件。
藉此，由於使成為雜訊的背景之螢光發光的面積縮窄，故提升對於背景之螢光發光的微生物之螢光發光的訊號之比，提高微生物之螢光發光的檢測精度。
進一步，申請專利範圍第6項之發明，其特徵為：於該激發光源與該試樣容器之間，設置將來自該激發光源的光線轉換為平行光之平行光轉換機構。
藉此，抑制來自激發光源之激發光的擴散，因以平行光照射試樣容器之被照射面，故背景之螢光發光的厚度部分變薄，提升對於背景之螢光發光的微生物之螢光發光的訊號之比，提高微生物之螢光發光的檢測精度。
申請專利範圍第7項之發明，其特徵為：該平行光轉換機構，於平板穿設螺紋孔而形成。
藉此，藉低價的材料使來自激發光源之激發光受螺紋孔限制角度，可使自螺紋孔照射之光線的定向角縮窄。因此，由於使背景之螢光發光的厚度部分變薄，故提升對於背景之螢光發光的微生物之螢光發光的訊號之比，提高微生物之螢光發光的檢測精度。
此外，申請專利範圍第8項之發明，其特徵為：該平行光轉換機構，係以凸透鏡形成。
藉此，可藉由低價的材料將來自激發光源之激發光的定向角縮窄。因此，背景之螢光發光的厚度部分變薄，提升對於背景之螢光發光的微生物之螢光發光的訊號之比，提高微生物之螢光發光的檢測精度。
申請專利範圍第9項之發明，為用於測定試樣溶液中之微生物量的微生物之檢查方法，包含如下步驟：攪拌混合步驟，於試樣容器內施行對試樣添加將微生物染色之螢光染色試劑的試樣溶液之攪拌‧混合；激發步驟，對該試樣容器照射激發光；光接收步驟，偵測該激發光的照射產生之來自該試樣容器的螢光發光，將其轉換為電氣訊號；以及微生物數推定步驟，自以該光接收步驟轉換出的電氣訊號檢測發光數，計算該試樣容器中之試樣所含有的微生物量。
藉此，若與未加攪拌而靜置量測之方法比較，則在極短時間微生物明亮地發光，可簡便並短時間地量測壓艙水中之微生物的量。此外，由於螢光發光的厚度部分變薄，故背景與微生物的螢光發光之光量差變得極為明確，可提高微生物之螢光發光的檢測精度。
此外，申請專利範圍第10項之發明，其特徵為：於該光接收步驟與該微生物數推定步驟之間，具備濾波步驟，將以該光接收步驟轉換出的電氣訊號中，其低頻成分之雜訊及高頻成分之雜訊加以過濾。
藉此，將電氣訊號導入控制機構前，以濾波機構過濾擾動，故可明確地區別和微生物的螢光發光之光接收量相對應的電氣訊號與擾動。藉此，可不產生微生物量的測定誤差，亦不產生測定值產生差異的問題地，穩定測定。
依本發明，可提供一種將壓艙水中之微生物的量簡便、短時間、且高精度地測定的微生物之檢查方法及其裝置。
1‧‧‧檢查裝置
2‧‧‧本體部
3‧‧‧操作部
3a‧‧‧電源鍵
3b‧‧‧測定開始鍵
3c‧‧‧外部輸出鍵
3d‧‧‧設定鍵
4‧‧‧顯示部
5‧‧‧試樣容器
6‧‧‧測定部
7‧‧‧轉子
8‧‧‧保持板
8a、8b‧‧‧保持板
9‧‧‧試樣容器收納部
10‧‧‧LED光源
11‧‧‧平行光轉換機構
12‧‧‧激發光用帶通濾波器
13‧‧‧光源部
14‧‧‧光電倍增管(PMT)
15‧‧‧螢光用帶通濾波器
16‧‧‧聚光用透鏡
17‧‧‧狹縫
18‧‧‧繼光鏡
19‧‧‧光接收部
20‧‧‧筐體
21‧‧‧AC電源
22‧‧‧二次電池
23‧‧‧CPU基板
24‧‧‧AC/DC轉換器
25‧‧‧RAM
26‧‧‧ROM
27‧‧‧磁力攪拌器
28‧‧‧風扇
29‧‧‧外部輸出端子
30‧‧‧蓋部
31‧‧‧平板
32‧‧‧螺紋孔
33‧‧‧凸透鏡
34‧‧‧濾波機構
35‧‧‧運算放大器
36‧‧‧高通濾波電路
37‧‧‧低通濾波電路
38‧‧‧帶通濾波電路
C1、C2‧‧‧電容器
F‧‧‧光接收面
G‧‧‧被照射面
OP‧‧‧運算放大器
R、R1、R2‧‧‧電阻
S‧‧‧試樣溶液
圖1 顯示本發明之實施形態的微生物之檢查裝置的全體之立體圖。
圖2 本發明之實施形態的測定部之概略平截面圖。
圖3 顯示本發明之第1實施形態的微生物之檢查裝置的全體構成之方塊圖。
圖4 顯示本發明之第1實施形態的微生物之檢查裝置的測定流程之流程圖。
圖5 顯示本發明之第2實施形態的微生物之檢查裝置的全體構成之方塊圖。
圖6 顯示本發明之第2實施形態的濾波機構其電路之一例的圖。
圖7 顯示本發明之第2實施形態的微生物之檢查裝置的測定流程之流程圖。
圖8 A、B 顯示平行光轉換機構之一實施形態的概略剖面圖。
圖9 A、B 顯示因狹縫之有無而使觀察面縮窄的作用圖。
圖10A、B 顯示微生物的個體數與光電倍增管(PMT)的光接收計數之相關關係的圖表。
圖11A~D 顯示可否檢測微生物死活之試驗的圖表。
圖12A~C 顯示裝設濾波機構前之取得電壓的波形之圖表。
圖13A~D 顯示裝設濾波機構後之取得電壓的波形之圖表。
[實施本發明之最佳形態] (第1實施形態)
將用於實施本發明之形態參考附圖並加以說明。圖1為顯示本實施形態的微生物之檢查裝置的全體之立體圖；圖2為本實施形態的測定部之概略平截面圖；圖3為顯示本實施形態的微生物之檢查裝置的全體構成之方塊圖。
如圖1及圖2所示，本發明之檢查裝置1，具備以下元件而構成主要部：本體部2，內建CPU基板等控制機構，施行測定結果等資訊處理作業或統計處理作業等；操作部3，由並設於該本體部2之操作鍵等配置構成而形成；顯示部4，為了顯示該測定結果等而以液晶面板等形成；以及測定部6，收納有以透光之透明材質(例如玻璃、石英或丙烯酸樹脂等)形成的分批式之試樣容器5，光學地計算試樣溶液S中之微生物數。符號7為用於將收納在試樣容器4內之試樣溶液S加以攪拌的轉子，該轉子7與試樣溶液S及發光試劑一同收納於該試樣容器5內，成為在將該試樣容器5收納於測定部6時，藉由內建在該測定部5內之磁力攪拌器27旋轉驅動的構成。藉此，可將試樣容器5內之由試樣與發光試劑構成的試樣溶液S以既定溫度攪拌混合並計算試樣溶液S中之微生物數，若與未加攪拌而靜置量測之方法比較，則在極短時間微生物明亮地發光，可簡便並短時間地量測壓艙水中之微生物的量。
圖1所示之檢查裝置1的尺寸，在寬度為300mm，進深為300mm，高度為100mm，重量為約2~4kg的範圍形成，收納於手提箱(未圖示)等，可攜帶，可進行船舶內之測定、或屋外之測定。
以透光之透明材質形成的分批式之試樣容器5，形成為底面50mmX50mm，高度60mm之角柱狀，設定為水位40mm時的內容量為100ml(毫升)。試樣容器5不限為此等角柱狀，若可將內容量確保為100ml(毫升)程度，則可為圓柱狀，亦可為立方體。
該測定部6，如圖1、圖2及圖3所示，具備：試樣容器收納部9，收納試樣容器5而加以保持；光源部13，朝向該試樣容器5照射激發光；以及光接收部19，用於藉由自該光源部13照射之激發光觀察受發光試劑染色而於試樣容器5內漂浮的微生物。而後，自光接收部19，與計算試樣溶液S中之微生物數，並施行測定結果等資訊處理作業或統計處理作業等之CPU基板23電性連接。
該試樣容器收納部9，藉由以將該試樣容器5之至少二面包圍的保持板 8a、8b形成，以不遮斷來自該光源部13之光線的照射之方式將該試樣容器5收納保持。
而如圖2所示，以對試樣容器5之被照射面G使法線AP的激發光入射之方式配置光源部13。該光源部13具備：LED光源10，配置於該試樣容器收納部9附近；平行光轉換機構11，配置於該LED光源10之前面，將散射光轉換為平行光(將LED的光線，轉換為朝向一面以相同角度均一地照射光線之平行光的構件)；以及激發光用帶通濾波器12，將由狹縫狀之平行光構成的激發光對試樣容器5照射。
圖8為顯示平行光轉換機構11之一實施形態的概略剖面圖。圖8A所示之例子為，於既定厚度之平板31穿設既定徑的螺紋孔32而形成平行光轉換機構11，配合光路長度適當設定平板31的厚度L與螺紋孔的孔徑。藉此，自LED光源10照射之入射角度θ的散射光，通過螺紋孔32時轉換為平行光。圖8A所示之例子中，θ與L的最佳條件係藉由SN比之試驗加以決定，例如，若使其為M3(螺紋孔的外徑)X0.5(間距)，則θ為9.5°，L為15mm時最佳。
圖8B所示之平行光轉換機構11，於LED光源10之前面設置有凸透鏡33，自LED光源10照射的散射光，在通過凸透鏡33內射出至外部時轉換為平行光。
本實施形態之光源部13，雖使用LED光源10作為光源，但若可激發微生物所含有之螢光物質，則不限為LED光源10，亦可採用能夠照射平行光的平行光LED光源、雷射光源或燈泡。自然，採用能夠照射平行光的平行光LED或雷射光源時，不需要前述之平行光轉換機構11。
如圖2所示，該光接收部19，將其光接收面F配置成具有與來自光源部13之法線AP的激發光直交之角度。此外，光接收部19具備：光電倍增管(PMT)14，配置構成為對自該LED光源10朝向試樣容器5照射激發光的平行光，以與其垂直之光軸接收螢光；螢光用帶通濾波器15，配置於 該光電倍增管(PMT)14之前面；聚光用透鏡16，配置於該螢光用帶通濾波器15之前面；狹縫17，配置於該聚光用透鏡16之前面；以及繼光鏡18，設置於該狹縫17與該試樣容器5之間隙，激發微生物所含有之螢光物質，用於藉此使發光的螢光聚光而成像。
該光電倍增管(PMT)14與試樣容器5之間的狹縫17，將觀察面縮窄為狹縫狀。亦即，相對於如圖9A地不具狹縫之狀態中，監視以圓形成光接收面F的背景，而如圖9B地具有狹縫之狀態中，監視以除去斜線以外之縱長狹縫形成光接收面F的背景。因此，光接收面F之光接收面積如同圖9B地縮窄，結果使成為雜訊的背景之螢光發光的面積亦縮窄，故提升對於背景之螢光發光的微生物之螢光發光的訊號之比，提高微生物之螢光發光的檢測精度。
另，光接收部19，雖顯示使用光電倍增管(PMT)14作為光接收感測器之例子，但並不限於此，可採用矽二極體(SiPD)、雪崩光電二極體(APD)等，能夠與光電倍增管(PMT)同樣地偵測微生物所含有之螢光物質的發光之各種光檢測器。
進一步，參考圖3，說明本實施形態之檢查裝置1的電性控制構成。於形成本體部2之筐體20內的中央配置CPU基板23，其自AC電源21與二次電池22接收電源的供給，解析以該光電倍增管(PMT)14自光轉換為電的輸出訊號、判定是否為任意的亮度範圍以上、將任意亮度的訊號脈波計數、施行該LED光源10的開啟‧關閉控制等。於該AC電源21與該CPU基板23之間，夾設AC/DC轉換器24。
於該CPU基板23，分別將該光電倍增管(PMT)14、該LED光源10、作為讀取寫入用記憶部之RAM25及作為讀取專用記憶部之ROM26電性連接。此外，將圖1所示之操作部3之電源鍵3a、測定開始鍵3b、外部輸出鍵3c及設定鍵3d電性連接。而後，成為可藉由以下按鍵施行如下動作之構成：藉由該電源鍵3a的按壓施行開啟‧關閉之切換控制；藉由該測定開 始鍵3b的按壓開始測定；藉由外部輸出鍵3c的按壓對外部之印表機或個人電腦施行資料之傳送；藉由設定鍵3d的按壓，施行測定的種類之切換(切換為L尺寸微生物的測定或S尺寸微生物的測定)、判定基準的設定之變更、閾值的設定之變更、測定時間的設定之變更。
其他，於該CPU基板23，連接使該轉子7藉由磁力旋轉之磁力攪拌器27、以液晶面板等形成之顯示部4、CPU基板23等控制機器之冷卻用風扇28、及RS-232C等外部輸出端子29。
圖4為顯示測定流程之流程圖，參考圖1至圖4說明上述構成中的作用。
首先，操作者使用移液器等，自溫度20℃程度之壓艙水採取100ml(毫升)作為試樣，投入試樣容器5(圖4之步驟1)。其次，於試樣容器5內添加螢光染色試劑(圖4之步驟2)。此一螢光染色試劑可使用一般所知的鈣黃綠素AM(Calcein-AM、德國Promocell GMBH社製)、FDA等。鈣黃綠素AM，具有容易對浮游植物染色之傾向；FDA，具有容易對動物性浮游生物染色之傾向；因此，若將染色試劑產生之染色，藉由混合鈣黃綠素AM與FDA之試劑施行染色，則減短試劑的染色時間，可使染色所需之時間為過去的一半。之後，操作者於試樣容器5投入轉子7後，收納至檢查裝置1之測定部6，覆蓋測定部6的蓋部30藉而使測定準備結束。此處，若按壓電源鍵3a，則轉子7藉由該測定部6內所內建之磁力攪拌器27的驅動而旋轉，攪拌試樣溶液S(圖4之步驟3)。
接著，操作者藉由操作部之測定開始鍵3b的按壓，於既定時間後將LED光源10點燈，使透射激發光用帶通濾波器12的光線照射試樣容器5。此時，例如以波長特性450nm~490nm之波長的光線照射，使試樣容器5內之試樣(微生物)螢光發光(圖4之步驟4)。而後，此螢光透射螢光用帶通濾波器15而被光電倍增管(PMT)14偵測(圖4之步驟5)。
光電倍增管(PMT)14，藉由光電效果的利用將光能轉換為電能，並附加電流放大功能，可高感度地偵測螢光發光。將偵測到的電氣訊號送往CPU基板23，計數一定閾值以上之光接收波形(圖4之步驟6)。
進一步，CPU基板23，自光接收波形計數值推定存在於該試樣容器5內的水100ml(毫升)中之微生物數，於顯示部4顯示是否滿足排水基準(圖4之步驟7)。
(第2實施形態)
本實施形態中，在光接收部19與CPU基板23之間設置濾波機構34的點與第1實施形態相異。其他構成與第1實施形態相同故省略說明。以下，依據附圖加以說明。
測定部6，如圖1、圖2及圖5所示，具備：試樣容器收納部9，收納試樣容器5而加以保持；光源部13，朝向該試樣容器5照射激發光；以及光接收部19，用於藉由自該光源部13照射之激發光觀察在試樣容器5內漂浮發光的微生物。而後，自光接收部19起，介由濾波機構34與CPU基板23電性連接。CPU基板23，可藉來自光接收部19的電氣訊號計算試樣溶液S中之微生物數，施行測定結果等資訊處理作業或統計處理作業等。
圖6為顯示作為本發明之要部的濾波機構其電路之一例的圖。如圖6所示，於光電倍增管(PMT)14與CPU基板23之間，將運算放大器35、高通濾波電路36及低通濾波電路37電性連接。該運算放大器35，將以該光電倍增管(PMT)14因應接收之光接收量而產生的輸出電流轉換為電壓，即便為微小的電流仍可檢測。此外，高通濾波電路36為，可使輸入訊號中，較既定頻率更高之頻率的成分不衰減，而較既定頻率更低之頻率的成分遞減之濾波機構。另一方面，低通濾波電路37為，可使輸入訊號中，較既定頻率更低之頻率的成分不衰減，而較既定頻率更高之頻率的成分遞減之濾波機構。而若將該高通濾波電路36與低通濾波電路37連結，則成為僅使必要範圍的頻率通過之帶通濾波電路38。
該運算放大器35，具有運算放大器OP與電阻R。而該高通濾波電路36及低通濾波電路37，分別具有互相電性連接之電阻R1、R2與電容器C1、C2。藉此，以運算放大器35將來自光電倍增管(PMT)14的輸出電流轉換為電壓，其次，自帶通濾波電路38之輸入側輸入訊號Vin(t)，則輸出側中成為擾動的電氣訊號被過濾而輸出訊號Vout(t)。若將此一經過濾的訊號Vout(t)輸入CPU基板23，則因和微生物的螢光發光之光接收量相對應的電氣訊號與擾動已被明確地區別，故可不產生微生物量的測定誤差，亦不產生測定值差異的問題地，穩定測定。
圖7為顯示測定流程之流程圖，參考圖1、圖2、圖5至圖7說明上述構成中的作用。
首先，操作者使用移液器等，自溫度20℃程度之壓艙水採取100ml(毫升)作為試樣，投入試樣容器5(圖7之步驟1)。其次，於試樣容器5內添加螢光染色試劑(圖7之步驟2)。此一螢光染色試劑可使用一般所知的鈣黃綠素AM(Calcein-AM、德國Promocell GMBH社製)、FDA等。鈣黃綠素AM，具有容易對浮游植物染色之傾向；FDA，具有容易對動物性浮游生物染色之傾向；因此，若將染色試劑產生之染色，藉由混合鈣黃綠素AM與FDA之試劑施行染色，則減短試劑的染色時間，可使染色所需之時間為過去的一半。之後，操作者於試樣容器5投入轉子7後，收納至檢查裝置1之測定部6，覆蓋測定部6的蓋部30藉而使測定準備結束。此處，若按壓電源鍵3a，則轉子7藉由該測定部6內所內建之磁力攪拌器27的驅動而旋轉，攪拌試樣溶液S(圖7之步驟3)。
接著，操作者藉由操作部之測定開始鍵3b的按壓，於既定時間後將LED光源10點燈，使透射激發光用帶通濾波器12的光線照射試樣容器5。此時，例如以波長特性450nm~490nm之波長的光線照射，使試樣容器5內之試樣(微生物)螢光發光(圖7之步驟4)。而後，此螢光透射螢光用帶通濾波器15而被光電倍增管(PMT)14偵測(圖7之步驟5)。
光電倍增管(PMT)14，藉由光電效果的利用將光能轉換為電能，並附加電流放大功能，可高感度地偵測螢光發光。將偵測出的電氣訊號，以運算放大器35放大而輸入至帶通濾波電路36，輸出已將成為擾動的電氣訊號過濾之訊號(圖7之步驟6)。接著，將已過濾成為擾動的電氣訊號之訊號傳送至CPU基板23，計數一定閾值以上之光接收波形(圖7之步驟7)。
進一步，CPU基板23，自螢光波形計數值推定存在於該試樣容器5內的水100ml(毫升)中之微生物數，於顯示部4顯示是否滿足排水基準(圖7之步驟8)。
以下，對本發明之實施例加以說明。首先，施行上述實施形態的微生物之檢查裝置的檢查精度之確認試驗。
[實施例1]
調査微生物的個體數與光電倍增管(PMT)的光接收計數之相關關係。將S型海水壺形輪蟲(最小尺寸約100μm=L尺寸生物)於複數個試樣容器5(100mL容量)分別個體別地收納5個體、10個體、50個體、100個體、1000個體，分別以螢光染色試劑FDA(濃度0.01[毫莫耳/公升])染色。此一結果，反應收納之微生物的個體數，波形的計數數量漸增加，對5個體、10個體、50個體及100個體之5樣本直線地回應(參考圖10A、圖10B)。因此，可自獲得的波形的計數數量推定存在於壓艙水100mL中之微生物的個體數。
[實施例2]
施行可否依存活死亡檢測微生物之試驗(參考圖11A~圖11D)。將藉由熱進行殺滅處理(60℃，30分的加熱)之S型海水壺形輪蟲(最小尺寸約100μm=L尺寸生物)，以螢光染色試劑FDA(濃度0.01[毫莫耳/公升)染色。製作殺滅處理1小時後、殺滅處理20小時後、殺滅處理5天後的3樣本分別測定。此一結果，經殺滅處理之樣本皆未發現一定閾值以上的波形，可判別未經殺滅處理而存在微生物之樣本與經殺滅處理而不存在微生物之 樣本。
[實施例3]
比較在該光電倍增管(PMT)14與CPU基板23之間，裝設濾波機構前與裝設後其取得電壓的波形。
圖12為裝設濾波機構前之取得電壓的波形。圖12A所示之取得電壓的波形，混雜有：擾動(背景成分約0.9V波形)、可確認為超過閾值之活的微生物之明確的峰、以及未超過閾值之不明的峰3種。此外，圖12B所示之取得電壓的波形，混雜有：擾動(背景成分約1.4V波形)、以及可確認為超過閾值之活的微生物之明確的峰2種。進一步，圖12C所示之取得電壓的波形，混雜有：擾動(背景成分約0.4V波形)、以及未超過閾值之不明的峰2種。
圖13為裝設濾波機構後之取得電壓的波形。圖13A所示之取得電壓的波形為，為了去除成為擾動的背景成分，僅裝設高通濾波電路36時的波形。與圖12B所示之波形比較，則了解將約1.4V之背景成分收斂至0V，去除擾動。
圖13B之波形為，將圖13A所示之以虛線的圓包圍之峰的波形放大時之上升波形。圖13B之波形，包夾閾值而重複上下浮動，為測定誤差增大之要因。因而宜以去除此等高頻波形之目的裝設低通濾波電路37。
圖13C所示之取得電壓的波形為，為了施行擾動的去除與高頻波形的去除，而裝設將高通濾波電路36與低通濾波電路37結合的帶通濾波器38時之波形。與圖13A之波形比較，則去除高頻雜訊而波形變得平滑。
圖13D之波形為，將圖13C所示之以虛線的圓包圍之峰的波形放大時之上升波形。圖13D之波形，消除如圖13B之鋸齒狀波形而變得平滑，亦無包夾閾值而重複上下浮動之情形。藉此，使測定誤差極小，藉而可精度良好地測定。
如同以上地依本實施形態，則於試樣容器5添加試樣與螢光染色試劑後，以攪拌混合機構7施行試樣溶液的攪拌‧混合，其次，攪拌該試樣溶液並使激發光入射至該試樣容器之被照射面，進一步，以光接收機構接收微生物的螢光發光，故若與未加攪拌而靜置量測之方法比較，則在極短時間微生物明亮地發光，可簡便並短時間地量測壓艙水中之微生物的量。而可使裝置小型化，製造成本變得低價。
此外，電氣訊號被導入控制機構前，因以濾波機構將擾動過濾，故可明確地區別和微生物的螢光發光之光接收量相對應的電氣訊號與擾動，可不產生微生物量的測定誤差，亦不產生測定值差異的問題地，穩定測定。
[產業上利用性]
本發明，可適用於供在排出壓艙水時確認是否滿足排出基準所使用的微生物之檢查裝置。

Claims (8)

  1. 一種微生物之檢查裝置，用以藉由作為試樣而採取之試樣容器內的水中所存在之微生物數，而推定自船舶排出之壓艙水所含有而生存於其中的微生物容許個體數，並測定是否滿足該壓艙水的排水基準，具備：攪拌混合機構，試樣容器係以透光材質形成，在該試樣容器內施行試樣溶液的攪拌。混合；激發光源，對該試樣容器照射激發光；光接收機構，由偵測光線而轉換為電氣訊號之光電倍增管構成；控制機構，計算該試樣容器中之試樣所含有的微生物量，且測定是否滿足該壓艙水的排水基準；以及濾波機構，設在該光接收機構與該控制機構之間；該試樣溶液，係於試樣添加將微生物染色之螢光染色試劑而構成；該光接收機構，偵測由來自該激發光源之該激發光的照射微生物通過既定之光接收範圍時所產生之來自於該試樣溶液的螢光發光；該控制機構，依據來自該光接收機構之電氣訊號，將一定閾值以上之明確的波峰加以計數而檢測發光數，計算出該試樣容器中之試樣所含有的微生物量，藉以偵測生存之微生物；該濾波機構，將來自該光接收機構之電氣訊號中的低頻成分之雜訊及高頻成分之雜訊加以過濾；該控制機構，連接有包含各種操作鍵之操作部；該操作部，包含可切換測定對象的尺寸之設定鍵。
  2. 如申請專利範圍第1項之微生物之檢查裝置，其中，該濾波機構為連結高通濾波器與低通濾波器之帶通濾波器。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之微生物之檢查裝置，其中，該激發光源係配置成直交於該試樣容器而照射激發光：該光接收機構係配置為以與該激發光源之激發光直交的角度接收該螢光發光。
  4. 如申請專利範圍第1或2項之微生物之檢查裝置，其係在該光接收機構與該試樣容器之間，設置狹縫構件而構成。
  5. 如申請專利範圍第1或2項之微生物之檢查裝置，其係在該激發光源與 該試樣容器之間，設置將來自該激發光源的光線轉換為平行光之平行光轉換機構。
  6. 如申請專利範圍第5項之微生物之檢查裝置，其中，該平行光轉換機構係於平板穿設螺紋孔而形成。
  7. 如申請專利範圍第5項之微生物之檢查裝置，其中，該平行光轉換機構，係以凸透鏡形成。
  8. 一種微生物之檢查方法，用以藉由作為試樣而採取之試樣容器內的水中所存在之微生物數，而推定自船舶排出之壓艙水所含有而生存於其中的微生物容許個體數，並測定是否滿足該壓艙水的排水基準，包含如下步驟：攪拌混合步驟，於試樣容器內施行對試樣添加將微生物染色之螢光染色試劑的試樣溶液之攪拌。混合；激發步驟，對該試樣容器照射激發光；光接收步驟，偵測該激發光的照射微生物通過既定之光接收範圍時所產生之來自該試樣容器的螢光發光，將其轉換為電氣訊號；以及微生物數推定步驟，自以該光接收步驟轉換出的電氣訊號，將一定閾值以上之明確的波峰加以計數而檢測發光數，計算出該試樣容器中之試樣所含有的微生物量，藉以偵測生存之微生物；且在該光接收步驟與該微生物數推定步驟之間，具備濾波步驟，將以該光接收步驟轉換出的電氣訊號中的低頻成分之雜訊及高頻成分之雜訊加以過濾。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6238046B2 (ja) 2013-05-29 2017-11-29 株式会社サタケ 微生物の検査方法
KR101490738B1 (ko) * 2013-10-15 2015-02-11 (주)한국해양기상기술 플랑크톤 검사장치
GB2541743B (en) 2015-08-28 2019-05-22 Chelsea Tech Group Ltd Ballast water monitoring device
CN105675554A (zh) * 2015-12-30 2016-06-15 谱尼测试科技(天津)有限公司 一种检测保健食品中总黄酮的荧光光度法
GB2552221B (en) 2016-07-15 2021-06-16 Chelsea Tech Ltd Counting Photoactive Cells
JP2018093758A (ja) * 2016-12-09 2018-06-21 株式会社サタケ 微生物の検査方法及びその装置
KR102130242B1 (ko) * 2019-01-30 2020-07-03 한국해양대학교 산학협력단 염색 혼합시약을 이용한 처리된 선박 평형수 검사방법
JP7322593B2 (ja) * 2019-08-23 2023-08-08 株式会社サタケ 微生物の検査装置及びその方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020119438A1 (en) * 1995-12-29 2002-08-29 Fuminori Kato Method for determining viable cell count
CN201497706U (zh) * 2009-10-15 2010-06-02 承慰才 生活饮用水cod在线自动检测仪
US20110042582A1 (en) * 2008-02-05 2011-02-24 Pocared Diagnostics Ltd. System for Conducting the Identification of Bacteria in Biological Samples
WO2011088014A2 (en) * 2010-01-12 2011-07-21 Nexcelom Bioscience Llc Systems and methods for counting cells and biomolecules

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3127560A1 (de) * 1981-07-11 1983-02-17 Jochimsen, Siegfried, 2300 Kiel Geraet zum erfassen und messen der blutgerinnungszeit mit einem zur aufnahme der messkuevette dienenden temperierbaren metallblock, einer ruehreinrichtung und einer lichtoptischen truebungsmesseinrichtung
JP2637561B2 (ja) 1989-07-10 1997-08-06 三菱重工業株式会社 微生物細胞の生細胞の計測方法
JP2734489B2 (ja) * 1990-02-21 1998-03-30 三菱重工業株式会社 微生物生細胞の計数方法及び装置
EP0443700A3 (en) 1990-02-21 1991-10-16 Mitsubishi Jukogyo Kabushiki Kaisha Method for counting living cells of microbes and apparatus therefor
US7273749B1 (en) 1990-06-04 2007-09-25 University Of Utah Research Foundation Container for carrying out and monitoring biological processes
JP2543260B2 (ja) 1991-03-11 1996-10-16 松下電器産業株式会社 照明装置
JP3171302B2 (ja) * 1994-12-28 2001-05-28 日立電子エンジニアリング株式会社 Ｄｎａ塩基配列決定のための波形ピーク決定方法およびｄｎａ塩基配列決定装置
JPH1099096A (ja) * 1995-12-29 1998-04-21 Ishihara Sangyo Kaisha Ltd 生存細胞数の測定方法
JP2000512744A (ja) 1996-05-16 2000-09-26 アフィメトリックス，インコーポレイテッド 標識材料を検出するシステムおよび方法
US7410793B2 (en) * 1999-05-17 2008-08-12 Applera Corporation Optical instrument including excitation source
DE60006970T2 (de) * 1999-08-05 2004-10-28 3M Innovative Properties Co., Saint Paul Fluorogene verbindungen und ihre verwendungen
US6375139B1 (en) 2000-10-20 2002-04-23 Seth Murray Anchoring device for use in rock crevices and the like during rock climbing activities
JP4714366B2 (ja) 2001-05-10 2011-06-29 パナソニックエコシステムズ株式会社 特定微生物計量装置
BR0214680A (pt) * 2001-12-06 2006-05-30 Biocontrol Systems Inc coleta de amostra e sistema de teste
JP2003169695A (ja) * 2001-12-10 2003-06-17 Nippon Mizushori Giken:Kk 微生物計測方法及び装置
JP3889334B2 (ja) * 2002-07-31 2007-03-07 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 化学発光および蛍光の経時変化測定装置および方法
JP4315794B2 (ja) 2002-12-27 2009-08-19 オリンパス株式会社 共焦点顕微鏡
US20120221256A1 (en) 2003-03-29 2012-08-30 Midas Mediscience Functional characterization of biological samples
GB0307352D0 (en) * 2003-03-29 2003-05-07 Qinetiq Ltd Improvements in and relating to the analysis of compounds
JP4484442B2 (ja) 2003-04-10 2010-06-16 シスメックス株式会社 細菌測定方法と装置とプログラム
KR100608498B1 (ko) * 2003-07-19 2006-08-08 주식회사 디지탈바이오테크놀러지 미세입자 계수 장치
WO2005098022A1 (ja) 2004-04-06 2005-10-20 Bussan Nanotech Research Institute, Inc. 細菌計数方法及び細菌計数装置
JP4503390B2 (ja) * 2004-08-03 2010-07-14 メタウォーター株式会社 有害物質の検出装置及び検出方法
BRPI0606807A2 (pt) * 2005-01-31 2009-07-14 Univ Illinois dispositivo para analisar partìculas em uma amostra e método para analisar partìculas em uma amostra que contém as referidas partìculas
JP2006227117A (ja) 2005-02-15 2006-08-31 Iiyama Corp 液晶表示装置
US20080279441A1 (en) 2005-03-29 2008-11-13 Yuichiro Matsuo Cell-Image Analysis Method, Cell-Image Analysis Program, Cell-Image Analysis Apparatus, Screening Method, and Screening Apparatus
JP2006340686A (ja) * 2005-06-10 2006-12-21 Olympus Corp 細胞解析方法、細胞解析プログラムおよび細胞解析装置
JP4710393B2 (ja) 2005-04-19 2011-06-29 株式会社島津製作所 蛍光分光光度計における励起スペクトル補正方法
JP4792880B2 (ja) * 2005-09-08 2011-10-12 パナソニック株式会社 微生物計数方法および微生物計数装置
JP2007135582A (ja) 2005-10-19 2007-06-07 Jfe Engineering Kk バラスト水中の微生物検出方法および装置
WO2007118209A2 (en) * 2006-04-07 2007-10-18 Kim Laboratories Apparatus and method for rapid detection of analytes
FR2902799B1 (fr) 2006-06-27 2012-10-26 Millipore Corp Procede et unite de preparation d'un echantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide
JP2008029271A (ja) 2006-07-31 2008-02-14 Matsushita Electric Ind Co Ltd 細菌検出装置及び方法
JP2009085898A (ja) * 2007-10-03 2009-04-23 Hitachi Ltd 生物検査装置
EP2235203B1 (en) 2007-12-21 2014-10-08 3M Innovative Properties Company Microbiological systems and methods of fluid sample analysis
JP2009201421A (ja) 2008-02-28 2009-09-10 Metawater Co Ltd 微生物計測方法及び装置
JP5206047B2 (ja) * 2008-03-18 2013-06-12 パナソニック株式会社 核酸解析方法
JP2010112809A (ja) 2008-11-06 2010-05-20 Shimadzu Corp 分光蛍光光度計
JP2010181205A (ja) 2009-02-03 2010-08-19 Shimadzu Corp 分光蛍光光度計
JP5152083B2 (ja) 2009-04-13 2013-02-27 株式会社島津製作所 分光蛍光光度計
JP5167194B2 (ja) * 2009-04-28 2013-03-21 株式会社日立エンジニアリング・アンド・サービス 微生物検査装置
CN101906384B (zh) * 2009-06-03 2013-03-27 中国科学院电子学研究所 一种细菌流动计数检测的仪表装置和方法
JP2011013167A (ja) 2009-07-06 2011-01-20 Hitachi High-Technologies Corp 分光蛍光光度計及び試料セル
JP5218328B2 (ja) 2009-08-12 2013-06-26 株式会社Ｉｈｉ 微生物検出装置
JP2011153945A (ja) 2010-01-28 2011-08-11 Hitachi High-Technologies Corp 分光蛍光光度計、および液体クロマトグラフ用蛍光検出器
CN105572019B (zh) * 2010-04-15 2018-12-21 洛伊克德克斯有限公司 用于快速确定医学疾病的设备、系统和方法
JP2013535193A (ja) * 2010-07-23 2013-09-12 ベックマン コールター， インコーポレイテッド 分析装置を含むシステムおよび方法
TW201217783A (en) * 2010-09-15 2012-05-01 Mbio Diagnostics Inc System and method for detecting multiple molecules in one assay
US20150337350A1 (en) * 2012-06-22 2015-11-26 Wayne State University Automated viability testing system

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020119438A1 (en) * 1995-12-29 2002-08-29 Fuminori Kato Method for determining viable cell count
US20110042582A1 (en) * 2008-02-05 2011-02-24 Pocared Diagnostics Ltd. System for Conducting the Identification of Bacteria in Biological Samples
CN201497706U (zh) * 2009-10-15 2010-06-02 承慰才 生活饮用水cod在线自动检测仪
WO2011088014A2 (en) * 2010-01-12 2011-07-21 Nexcelom Bioscience Llc Systems and methods for counting cells and biomolecules

Also Published As

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