JP2664279B2 - 化学的異種発光検定方法とその装置 - Google Patents

化学的異種発光検定方法とその装置

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Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、固体表面からの化学的発光信号を測定する
方法とその測定装置とに関し、詳述すれば、免疫学的化
学反応による固定生成物が多孔質固形要素から発する化
学的発光信号（chemiluminescent signal）を測定する
異種免疫学的検定に用いる測定方法と測定装置とに関す
る。
（従来の技術） いくつかの化学的発光度自動測定装置には、化学的発
光信号を記録するのに撮像装置と濃度計とを利用してい
る。その一例は、米国特許第4,231,754号公報と同第4,5
93,728号公報や、「Clinical Chemistry（臨床化学）」
誌（30,806,1984）におけるソープ（Thorpe）等による
論稿や、「Analyst（分析）」誌（110,65,1985）におけ
るパンス（Bunce）等による論稿などに開示されてい
る。
このような装置では、その両側にトリガー溶液供給口
と検出器とを備えた、被覆を施した透明微小滴定プレー
トを固相として利用することもあり、その一例はヨーロ
ッパ特許出願第025,350号や、「Clinical Chemistry
（臨床化学）」誌（27,1378−1387,1981）におけるシュ
ーローダー（Schroeder）等による論稿に開示されてい
る。ところが、この従来公知の方法は、分析物分子の捕
獲用固相への拡散に限度があることから反応速度が遅
く、それが為に用途に非常に限られているなどの問題点
がある。叉、この従来公知の方法を利用すると感度が限
られているので、ATPとルミノール系トレーサーとを利
用した反応に用いるのが通常である。
試験管内における磁気分離と磁性微粒子とは、チバ・
コーニング・ダイアグノスチックス（Ciba−Cornig Dia
gnostics）社から商標名「Magic Lite（マジック・ライ
ト）」として市販されている装置にみられるようなチュ
ーブ型輝度計（tube luminometer）で懸濁粒子の発光信
号を読み取ることで追跡することができる。微粒子は茶
色を呈していて化学的発光信号と干渉するので、測定に
当たって用いるこの粒子は非に少量にせざるを得ず、そ
れが為に反応が非常に緩慢になっている。例えば、甲状
腺刺激ホルモン（TSH）のアッセイでは、３時間に亙る
インキュベーション時間が必要と報告されている。更
に、操作ステップも複数あって複雑だし、それが為に自
動化が困難になっている。試験管内で化学的発光信号が
出されるその他の輝度計としては、バートホールド（Be
rthold）社や、ハミルトン（Hamilton）社、ターナー・
デザイン（Turner Design）社、アナリティカル・ルミ
ネッセンス（Analytical Luminescence）社から市販さ
れている。
白色微小滴定プレートにおいて化学的発光反応を増強
させ、それに伴って発生した発光信号を可動マスクと光
電子増倍管とを備えた輝度計で読み取る方法がヨーロッ
パ特許出願第194,102号に開示されており、それがアマ
ーシャム（Amersham）社から商標名「Amerlite（アメラ
イト）」で市販されている装置に実施されている。この
方法でも、被覆を施した微小滴定プレートを用いるELIS
A分析法におけるのと同様な問題点、即ち、反応物質の
捕獲相への拡散が緩慢であるなどの問題点がある。
（発明の目的と構成） 本発明は、異種免疫学的検定で分離手段として用いら
れている多孔質固形要素において不動化、即ち、固定し
た免疫複合体から化学的発光信号を直接積極的に出さし
めて、その発光信号を測定する方法と、斯かる測定を行
う装置とを提供するのを目的としたものである。殊に、
本発明は、高感度にて化学的異種発光の免疫学的検定を
自動的に行う自動手段を提供するものである。
本発明による測定方法と測定装置は、多孔質固形要素
により固定される試験サンプルに含まれる分析物よりな
る不動免疫複合体が発する化学的発光信号を測定するも
のである。特に、分析物は、当該分析物に対して結合親
和性のある微粒子ないし多イオン（polyionic）捕獲物
質を用いて液相に捕獲された後、多孔質固形要素により
固定されることにより、化学的発光信号が化学的に発せ
られ、且つ、検出される。従って、本発明の測定方法で
は、溶液における拡散速度を高速にすることができるか
ら、広範囲に亙る分析物に対して高感度の検定を行うこ
とができる利点がある。
本発明による化学的発光度検定を行う測定装置は、開
口部と、好ましくは化学的発光性反応生成複合体を固定
させることができると共に、当該多孔質固形要素により
固定されなかった他の反応生成物の通過を許容する、多
孔質固形要素としての繊維マトリックスとを備えた容器
で構成されている。反応生成物は多孔質固形要素により
固定されるが、これは粒子状反応体を介して固定される
か、又は、親水性・疎水性結合反応、イオン結合反応な
ど、多孔質固形要素と反応生成物との間での相互作用の
結果として固定されるのである。容器の近傍には検出装
置が移動自在に配置してあって、移動すると当該容器と
協働して遮光シールを形成するようになっているので、
外光に妨げられることなく低レベルの化学的発光度を測
定することができるようになっている。この検出装置
は、多孔質固形要素に化学的発光活性化用溶液を均一に
配分する配分手段を備えている。前記した開口部は漏斗
状で、前記活性化用溶液の供給手段には、前記漏斗状開
口部の内表面には対峙したポートが設けられていてもよ
い。
本発明による測定方法と測定装置とを適用するに当た
っては、化学的発光標識体が標識反応物質として利用さ
れるのであれば、異種結合反応系を形成する従来公知の
方法を用いることができる。前述の検定（assay）を行
うためおの検定試薬はどのようなものであっても良い
が、一般には、検出すべき分析物、該分析物の特定の結
合パートナ、標識反応物質の三種で構成されているのが
通常であり、その内の標識した反応物質は、分析物の特
定結合パートナと同一であっても良いし、叉はそれとは
異なっていても良い。検定反応物質は同時、もしくは順
次、混合させられるが、その際対応する結合パートナに
結合されるようになる。その時の結合の度合いは、用い
た分析物の量に応じて左右する。一般に、結合種と自由
種とは物理的には互いに分離しており、何れかの分画に
含まれている標識体の量は、利用した特定の標識体の活
性を測定することにより求めることができる。このよう
な方法には、競合免疫検定結合法、サンドイッチ免疫検
定法、免疫量子法（immunometric technique）として知
られている方法が含まれている。このような異種免疫学
的検定法では、標識反応物質の自由種と結合種の分離
は、何れかの種を固定することにより達成されるのが通
常である。
化学的発光度検定を行う本発明の方法は、化学的発光
性の第１複合体に分析物を結合させて第２複合体を得、
また、当該第２複合体を、この第２複合体の結合部位を
有する粒子支持体に結合させて固定し得る反応複合体を
形成し、その後この反応複合体を多孔質固形要素に接触
せしめ、然る後、化学的発光信号が発生するように前記
多孔質固形要素に化学的発光活性化用溶液を均一に分布
させることからなる。この化学的発光信号は、測定され
ると共に、試験サンプル内の分析物の量との相関がとら
れるようになっている。
好ましくは、化学的発光度検定を行う本発明の方法
は、化学的発光性の第１複合体に分析物を結合させて第
２複合体を得、また、当該第２複合体をイオン成分（io
nic moiety）に結合させて固定し得る帯電反応複合体
（immobilizable charged reaction complex）を形成
し、その後この帯電反応複合体を、前記帯電反応複合体
の電荷とは逆極性のイオン電荷を有する多孔質固形要素
に接触せしめて、両者間でのイオン結合反応の結果とし
て前記帯電反応複合体を前記多孔質固形要素で固定する
ことからなるようにするのが望ましい。その後、化学的
発光活性化用溶液を多孔質固形要素に均一に分布され
て、終局的には測定することで試験サンプル内の分析物
の量と相関のある化学的発光信号が得られるようにす
る。
本発明によれば、多孔質固形要素上で固定した分離反
応複合体をチューブへ移し変えるか、叉は、チューブ型
輝度計を用いなくとも、当該分離反応複合体から化学的
発光信号を出さしめると共に、その化学的発光信号を検
出することにより、化学的異種発光を利用した免疫学的
検定を自動化できる。液体での改良された拡散条件を利
用するために、一次捕獲反応を液相において行い、可不
動性反応複合体を、疎水反応、アニオン型反応とかの可
不動性反応複合体と多孔質固形要素との相互作用の結果
として多孔質固形要素により固定する。化学的発光信号
は多孔質固形要素から発して、この多孔質固形要素の片
側に近接している検出器により検出される。他方、固定
されなかった反応生成物、即ち、分析物に結合されなか
った化学的発光性結合複合体は、多孔質固形要素の反対
側と密に接触している吸収材により処置される。多孔質
固形要素は、インキュベーション用ウェルと分離・検出
用ウェルとからなる使捨て式反応装置と一体化されてい
る。検出器には、分離・検出用ウェルを囲繞する囲いが
設けられているので、化学的発光信号が発せられると共
に、当該発光信号が検出される個所に遮光室が形成され
る。この囲いと全体の何れか一方がＺ軸方向に移動自在
になっているから、遮光室が外気からシールされるよう
になっている。
本発明の多孔質固形要素は、繊維マトリックスの形で
用いるのが望ましく、この多孔質固形要素と反応複合体
との間での相互作用の結果として当該反応複合体を固定
するのに用いられる。尚、検定信号（assay signal）
は、この両者間での相互作用に伴って発せられる。この
多孔質固形要素は、ガラス、セルローズ、ナイロン、そ
れに当業者によく知られているその他の天然叉は人工素
材などの織繊維材から選定するのが望ましい。別の方法
としては、多孔質ガラス濾板や、多孔質セラミック濾
板、多孔質ポリマー濾板の何れから選定しても良い。兎
も角、未反応試薬とサンプルとが多孔質固形要素を適当
に貫流し得る有効孔径と空隙率とが得られるように、こ
のような多孔質固形要素の素材や、寸法、孔径などを選
定することは当業者には容易にできることである。
多孔質固形要素をイオン捕獲プロセスで用いる場合、
水溶性ポリカチオン型ポリマーで処理する。水溶性ポリ
カチオンの選定の仕方や、その量と使い方などについて
は、当業者には判断がつくことである。また、当業者に
は陽極電荷群を発生させるために多孔質固形要素の表面
を微分化（derivatization）したり、表面処理法を適用
したりすることも考えられるところである。ここで重要
なのは、発生した化学的発光信号が吸収もしくは減衰さ
れないように、多孔質固形要素を透明ないし白色材料で
構成することである。
前述したように多孔質固形要素として繊維マトリック
スを用いるが、その好ましい一例を挙げれば、公称厚さ
が0.055インチで、マサシューセッツ州イースト・ウォ
ルポールに所在するホロングズワース・アンド・ボーズ
（Hollongsworth ＆ Vose）社から市販されている商品
番号No.HC4111なるガラス繊維製フィルターペーパーが
ある。繊維マトリックスの有効孔径ないし繊維間離開量
（離開距離）は、検定に用いられる微粒子の径よりも大
きくなるように選ばれるが、当該有効孔径としては10ミ
クロン以上が好ましい。このように有効孔径として10ミ
クロン以上を選べば、多孔質固形要素を構成する繊維上
で反応複合体が固定された後でも、多孔質固形要素上に
適量の空隙がそのまま残る一方で、反応物質とサンプル
との通過を許容するから、多孔質固形要素の表面上に液
体がろ過されずに滞留するのを阻止することができ、こ
れにより、例えば検出装置がトリガー溶液の飛沫で濡れ
るのを防ぐことができる。
本発明によれば、溶液相免疫学的化学反応を迅速化す
るために、1988年１月29日に米国にて出願をなした米国
特許出願第150,278号に開示されている負極帯電ポリマ
ーテール（polymer tail）で反応複合体を固定するイオ
ン捕獲法を利用することもできる。固定し得る免疫複合
体は、負極帯電ポリアニオン／免疫複合体と予め処理し
た陽極帯電多孔質固形要素との間でのイオン反応によ
り、反応混合物の残部から分離されると共に、これから
詳述する本発明の方法により検出される。
本発明によれば、量子論的に歩留まりの大きい、安定
したルミネッセンストレーサーを得るためには、1989年
６月23日に米国にて出願をなした米国特許出願第371,76
3号に開示されている如くのアクリジニウムスルファン
アミド標識化学法を利用しても良い。
また、本発明によれば、高感度検定を行う上で積分さ
れる持続時間の長い信号が得られるためにも、従来公知
のアルカリ性ホスファターゼ標識法とジオキセタンで触
媒した化学的発光法とを用いても良い。
特定の結合検定においては、プローブないし標識体と
して化学的発光性のものを利用することができる。例え
ば、このような化学的発光性標識体は活性化反応物質と
直接反応して、アクリジニウムスルフォンアミドの如く
の光信号を発するようになる。別の方法としては、この
ような化学的発光性標識体は、アルカリ性ホスファター
ゼ、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼなどの基
体からの発光を促進する触媒の役をなす。
このような方法を組み合わせて用いれば、ウイルス粒
子や、高分子抗原、ハプテンなどを同定する簡単で、速
やかな高感度免疫学的アッセイを達成するに当たって特
に役立つ。Ｂ型肝炎の表層抗原（Hepatitis B Surface
antigen）をアッセイする場合でのこのようなアッセイ
は、他の方法による精度よりも高精度を有している。例
えば、Ｂ型肝炎の表層抗原について化学的発光を利用し
た免疫学的アッセイ（Clin.Chem.,27,1378−1384,198
1）では、それぞれ1.5時間に亙るインキュベーション時
間が２回あって、最低検出限度が2ng/mLであり、インキ
ュベーション次官を16時間に増加させると、最低検出限
度を1ng/mLとすることができる。それに対して、本発明
による方法と検出装置とを利用すれば、１時間もかから
ない全アッセイ時間以内にナノグラム単位以下のＢ型肝
炎の表層抗原を検出することができる。
本発明の好ましい一実施例によれば、同定すべき分析
物に対する抗体に付着していて、試験サンプルに含まれ
る分析物と化学的発光で標識した抗体と同時叉は順次、
反応容器に添加されたポリグルタミン酸の如くのポリア
ニオン酸を用いることにより、サンドイッチ免疫学的検
定を実施することができる。反応混合物は、特定の結合
反応を最大化し得る時間と条件の下でインキュベーショ
ンする。その後、反応混合物を分離・検出用ウェルに移
すのが、その際には手操作式叉は自動滴下装置（ピペッ
ト）の如くの機械的手段、もしくは、1988年４月22日に
米国において出願をなした米国特許出願第184,726号に
開示されている如くの非接触型流体圧ないし液圧手段を
用いて移しかえる。
アクリジニウムで標識したアッセイからの化学的発光
信号が発せられると、前述の遮光室内において多孔質固
形要素上で同時に検出される。この発光信号は、化学的
発光信号の立上がり時間（rise time）と立下がり時間
（decay time）の合計よりも長く、また、トリガーされ
た反応混合物の多孔質固形要素での滞留時間よりも長い
時間に亙って積分される。
別の方法としては、前述のサンドイッチ免疫学的検定
を、抗体に付着していて、酵素で標識した抗体ないし抗
原と同時叉は順次、反応容器に添加されたポリグルタミ
ン酸の如くのポリアニオン酸を用いることで実施しても
良い。アルカリ性ホスファターゼないしβ−ガラクトシ
ダーゼで標識した抗原ないし抗体を用いることもでき
る。この場合での反応混合物は、前述と同様に特定の結
合反応が最大化されるような時間と条件の下でインキュ
ベーションする。また、前述と同様に、反応混合物を分
離・検出用ウェルに移し、その後、化学的発光指示薬を
その混合物に添加して、分離・検出用ウェルが検出ヘッ
ドと接合して遮光室が形成される前に当該分離・検出用
ウェル内の多孔質固形要素から化学的発光信号が発せら
れるようにする。この化学的発光信号も、多孔質固形要
素における発光性反応混合物の滞留時間よりも一般に短
い時間に亙って積分される。
また、本発明によれば、インキュベーション工程と分
離・検出工程とは、それぞれ独立したウェルで行う。こ
うすることで、サンプルと結合体（conjugate）とが多
孔質固形要素と分離・検出用ウェルの壁部とに接触して
いる接触時間を制限することができる。従って、多孔質
固形要素と分離・検出用ウェルの壁部とに結合する標識
反応物質とサンプルの量を、米国特許第4,652,533号公
報や、J.Immuno.Methods（67,21−35,184）、Clin.Che
m,（32,1682−1686,1986）などに開示されている同一ウ
ェルでのインキュベーション、洗浄、検出に比べてほぼ
減少させることができ、従って、検定感度を向上させる
ことがきる。
反応混合物をインキュベーションすると共に、分離・
検出用ウェルへ反応混合物を移すのに好ましい装置は、
本願出願人が本願と同日出願した同時係属中の特願平２
−283239号（米国特許第５、244、630号、特許第251542
8号）に開示されている。そこに開示されている装置
は、漏斗状構造体と多孔質固形要素と吸収材とからな
り、これらは、多孔質固形要素（繊維マトリックス）と
吸収材とが緻密に接触すると共に、前記吸収材に吸収さ
れた流体により置換された基体を排気できるように組み
立てられている。ここでの吸収材の吸収能は、検定工程
で用いられる洗浄溶液、サンプル、反応物質の合計体積
よりも大きくなるように選定されているので、保持され
た反応生成物を適切に洗浄できると共に、多孔質固形要
素上に過剰流体が滞留するのを防ぐことができ、また、
検出装置がトリガー溶液の飛沫で濡れてしまうのを防ぐ
こともできるのである。漏斗状構造体と多孔質固形要素
とは、装置が多孔質固形要素上で発生した化学的発光信
号を検出すべく検出ヘッドと接合した時に形成される遮
光室の一部を構成している。
尚、前述の免疫学的化学反応の反応複合体を保持する
多孔質固形要素を利用した反応容器や、反応混合物を移
し変える手段、真空手段とか加圧手段などの余分の反応
物質と洗浄溶液とを排出する手段など検出ヘッドに用い
る構成機素類は、前述したもしくは後述する構成のもの
に限定されるべきではなく、当業者にはこの他の公正が
容易に考えられるところである。
（実 施 例） 以後、添付図面を参照しながら、本発明の好ましい実
施例を詳述する。
化学的発光検出装置の一例を第１図に示す。図示の検
出装置は、フレーム４、検出ヘッド５、可撓性ダイヤフ
ラム６、昇降機構７とで構成されている。フレーム４
は、タイミングベルトを介して複数の使捨て式反応装
置、即ち、使捨て式反応トレーが所定間欠送り速度で搬
送される調温トンネル上に、検出装置を装架ないし懸架
させるためのものである。検出ヘッド５は、流体ライン
11、12用ポートを有する囲繞体10を備えている。昇降機
構７は、前記囲繞体10をＺ軸に沿って上昇、下降させる
ものである。囲繞体10がこの昇降機構７の作用により下
降すると、化学的発光信号が生じて検出される使捨て式
反応トレーのインキュベーション用ウェルと分離・検出
用ウェルを遮光シールして遮光室を醸し出すようになっ
ている。他方、囲繞体10が同様に上昇すると、測定の終
了時に使捨て式反応トレーが他の場所に自由に搬送され
るように、囲繞体10が当該使捨て式反応トレーからクリ
アーするようになる。
前記特願平２−283239号に開示されている使捨て式反
応トレーを収容するのに適した検出装置の好ましい構成
を第２図に示すが、前記特願平に開示されている使捨て
式反応トレーの構成を第１図、第３図、第４図を参照し
ながら簡単に説明する。使捨て式反応トレー90は、イン
キュベーション用ウェル91と分離・検出用（読取り用）
ウェル92の対が２列、ピッチ距離36ミリで隔離形成され
ており、インキュベーション用ウェル91と分離・検出用
ウェル92とからなるウェル対は、それぞれ遮光室形成用
壁部材90bにより取り囲まれている。また、各ウェル対
におけるインキュベーション用ウェル91と分離・検出用
ウェル92とは、両者の段差で形成される流路90aを介し
て連通しており、インキュベーション用ウェル91におけ
る反応混合物が分離・検出用ウェル92へ洗い流しにより
移されるようになっている。
特に第４図に明確に示すように、インキュベーション
用ウェル91は浅い皿状の構造体であり、分離・検出用ウ
ェル92は、漏斗状構造体92aと多孔質固形要素（繊維マ
トリックス）93と吸収材94とからなる。多孔質固形要素
93と吸収材94とは緻密に接触していると共に、前記吸収
材94に吸収された流体により置換された気体を排気でき
るように組み立てられている。ここでの吸収材94の吸収
能は、検定工程で用いられる洗浄溶液、サンプル、反応
物質の合計体積よりも大きくなるように選定されている
ので、保持された反応生成物を適切に洗浄できると共
に、多孔質固形要素93上に過剰流体が滞留するのを防ぐ
ことができ、また、検出装置がトリガー溶液の飛沫で濡
れてしまうのを防ぐこともできるのである。漏斗状構造
体92aと多孔質固形要素93とは、装置が多孔質固形要素9
3上で発生した化学的発光信号を検出すべく検出ヘッド
と接合した時に形成される遮光室の一部を構成してい
る。
尚、本発明を実施するに当たっては、前述の特願平２
−283239号に開示されている使捨て式反応トレー90が望
ましいものの、その他の使捨て式反応トレーないし装置
を用いることも可能であり、当業者には他の使捨て式反
応装置にあわせて検出ヘッドの外観構成（envelope）を
再構築することが容易に考えられる。
検出装置は、アルミを機械加工して形成した、また
は、ポリウレタンを形成して構築した囲繞体10を備えて
いて、第２図に示すように４個のトリガー溶液注入口13
A〜13Dと、２基の光学検出モジュール15、16と、光子計
数増幅器を収容するこの筐体17、18と、防曇用ヒーター
19から延在する導線とを備えている。第１図に示した黒
色ゴム製の可撓性ダイヤフラム６が囲繞体10に取り付け
られているので、囲繞体10は自由に垂直方向に変位でき
るようになっている。
信号検出モジュールの断面図を第３図に示す。第３図
に示すように、信号検出モジュールは、光導管20、光導
管保護スリーブ21、第２図に示した黒色テフロン製流体
ライン11、12の内の２本と接続した注入ノズル22、23、
光電子増倍管（PMT）24、光電子増倍管用ソケット25、P
MT用ソケット25を保持するためのカラー26とで構成され
ている。光電子増倍管24は、光導管20に対して適切な間
隔を保つように302ステンレススチール製コイルバネ27
により一方向付勢されていると共に、２本のＯリングシ
ール28、29により防湿処置が施されている。光導管20を
囲繞するように隔離して設けた別のＯリングシール30、
31は、光電子増倍管24の検出窓が曇るのを防いでいる。
このＯリングシール30は、誘電率の大きい材料で構成し
て、光電陰極における抵抗濡れを防ぐようにするのが望
ましい。光電子増倍管24はμ金属（mumetal）製シール
ド32に囲繞されていて、両者間にナイロン製スペーサ33
が介装されている。このナイロン製スペーサ33は、検出
装置を組み立てる際に光電子倍増管24が損傷を受けるの
を防いでいる。光電式倍増管24を囲繞するμ金属製シー
ルド32は、それと外ハウジング38とを隔離するために用
いたテフロン製スリーブ37とＯリング34、35とにより、
電気的に絶縁されている。外ハウジング38は、導電性材
料からできていて、検出モジュールを保護している。ま
た、囲繞体10の底には溝39が形成されているが、この溝
39には第４図にも示すように、黒色で不活性の弾性ポリ
マーで出来た遮光用ガスケット40が嵌挿されていて、囲
繞体10が下降した時に使捨て式反応トレー90の表面縁、
即ち、遮光室形成用壁部材90bと係合して囲繞体10の内
部を遮光するようになっている。この遮光用ガスケット
40を構成するのに好ましい弾性ポリマーとしては、ナイ
ロン基層にナイロン製毛羽が形成されている、所謂スエ
ード調の製品で、米国ニューヨーク州ロチェスターに所
在するシューレガル（Schlegal）社が商品番号COE−167
3で販売しているものがある。尚、第４図における41と4
2とは低ワットの防曇用ヒーターであって、測定時に光
導管内で結露が発生するのを防ぐために、光導管の近傍
に温度勾配を発生させるようになっている。
第４図は本発明の検出装置の横側に沿う断面図であっ
て、２基の検出ユニットと囲繞体10、溝39、遮光用ガス
ケット40、防曇用ヒーター41、42、注入ノズル22などを
示している。他方、第５図は、囲繞体10を底から見た分
解図で、溝39と遮光用ガスケット40とを明確に図示した
ものである。
第１図において７を以て示した昇降機構の詳細な構成
を第６図に示す。図示のように昇降機構７は、交流永久
磁石型同期モーター50と、一端が前記同期モーター50に
連結され、他端に駆動カム52が装着されているステンレ
ススチール製シャフト51と、ステンレススチール製支柱
58に一体化されていると共に、その支柱58から直交する
方向に延在する昇降アーム54と、該昇降アーム54に回転
自在に装架され、且つ、前記駆動カム52と常時接触して
いる追従カム53とで構成されている。駆動カム52と追従
カム53とは、前者が同期モーター50により駆動されると
後者も前者との接触により回転して、昇降アーム54、従
って、支柱58を上下動させるようにその形状が定められ
ている。このように上下動する支柱58は、基体に固着し
たガイド棒55と、該ガイド棒55の両側に臨むように昇降
アーム54の自由端面に回動自在に取り付けたガイドロー
ラー56、57とにより確実にＺ軸方向のみに移動するよう
に案内されているから、Ｘ軸方向やＹ軸方向に移動した
り、Ｚ軸を中心として回動したりするようなことはな
い。言うまでもないことではあるが、この他の適当な構
成の案内機構を用いることもできる。囲繞体10はステン
レススチール製支柱58と共に上下動する、即ち、上昇、
下降するのではあるが、このように囲繞体10が上昇位置
と下降位置とに到達した時に同期モーター50の回転を停
止させるなりに当該同期モーター50を制御するために、
その半径方向に延在するスロットが形成されたアルミ製
ディスク59と、該ディスク59の両側に臨ませた一対の光
電センサー61、62からなる回転検出制御装置が用いられ
ている。63は囲繞体下降検出用フラグであり、64は囲繞
体下降検出用センサーであって、囲繞体の下降位置への
到達に伴って検出用フラグ63が検出用センサー64により
検出されることにより、検出ヘッドと使捨て式反応トレ
ー90との整合が確実に達成される。尚、支柱58から両側
方向に延在し、且つ、取付け孔65、66が形成されている
板部材には、囲繞体10が取り付けられるようになってい
る。
第３図において、注入ノズル22、23の先端注入口は分
離・検出用ウェル92に臨んでいる。このノズル22、23が
光導管20の底端面から突出する距離は0.213インチ（5.4
1ミリ）に選ばれている。また、光導管20の底端面は、
多孔質マトリックス93の上面から上方に0.435インチ（1
1.05ミリ）隔離されている。更に、光電管20は直径が８
ミリで、長さが約３インチ（7.6センチ）の研磨したプ
ラスチック棒か、ガラス棒、水晶棒の何れかで構成する
のが望ましい。
第７図に示すように、本発明の検出装置にはトリガー
溶液注入装置70も用いられているが、その注入装置70と
しては、商品名「FMI RH」ポンプ（米国ニューヨーク州
オイスターベイに所在のフルイド・メターリング（Flui
d Metering）社の製品）の如くのピストンポンプが望ま
しい。この注入装置70は、内径0.03インチ（0.76ミ
リ）、外径0.062インチ（15.76ミリ）のテフロン製チュ
ーブ（米国イリノイ州シカゴに所在のコール・パーマー
（Cole Palmer）社の製品）71を介して、三方向電磁弁
（米国ニュージャージー州フローハムパークに所在のア
ンガー・サイエンティフィック（Angar Scientific）社
の製品）72に接続されている。この三方向電磁弁72に供
給されたトリガー溶液は、テフロン製チューブ73、74を
介して、二股マニホールド75、76にそれぞれ供給される
ようになっている。各マニホールド75、76として、本発
明では米国コネチカット州ウエストブルークに所在のリ
ー（Lee）社の製品である「Minstac（マインスタッ
ク）」マルチポートマニホールドを用いた。各マニホー
ルド75、76には２本のテフロン製チューブ77、78ないし
79、80が接続されており、これらのテフロン製チューブ
を介して対応する注入ノズルにトリガー溶液が供給され
るようになっている。尚、テフロン製チューブ77〜80
は、内径が0.5ミリで、外径が1.59ミリのもの（米国ミ
シガン州アンアバーに所在のアンスペック（Anspec）社
の製品）である。アクリジニウムで標識した化学的発光
反応の場合では、トリガー溶液としてアルカリ性過酸化
物溶液を80〜100μＬ、１秒当たり500μＬ以下の割合で
マニホールドを介して分離・検出用ウェル92に注入し
た。
トリガー溶液は２本の注入ノズル22、23を介して互い
に180゜の角度をなすように注入した。内径0.5ミリの注
入ノズルを用い、注入速度を１秒当たり500μＬ以下と
することにより、信号読取り光学系へのトリガー溶液の
液滴飛散を防ぐことができた。このことは、溶液の注入
プロセスをビデオテープに高速撮像記録し、それを再生
することにより確認できた。
光電子増倍管24としてはR647−04ヘッドオン式光電子
増倍管を、ソケット25としてはE849−35型ソケットを、
磁気シールド32としてはE989−09型磁気シールドを用い
た。何れも米国ニュージャージー州ミドルセックスに所
在するハママツ（Hamamatsu）社の製品である。用いた
光電子増倍管は、第７図に示した高電圧供給装置（米国
ニューヨーク州ヒックスビルに所在するバータン・アソ
シエーツ（Bertan Associates）社のモデルPMT−20A/N8
2オプション３）82から約1040ボルトの電圧を供給する
ことで動作させた。尚、この高電圧供給装置82に電力を
供給して動作させるのに、±12ボルト直流電力供給装置
（米国ペンシルヴァニア州イーストンに所在するアコピ
アン（Accopian）社のPart＃12EB50製品）81を用いた。
光電子計数用増幅器ボード84、85には、互いに絶縁した
±５ボルト電力供給器（前掲アコピアン社製のPart＃5E
B100）83から電力を供給することで動作させた。
各光電子計数用増幅器ボード84、85は、12MHzビデオ
増幅器（米国アリゾナ州フェニックスに所在するモトロ
ーラ（Motorola）社の半導体部門の製品MC1733CP）から
なり、弁別器として高速比較器（米国カリフォルニア州
サンバレーに所在するアドバンスト・マイクロ・デバイ
ス（Advanced Micro Devices）社の製品AM686CN）を用
い、また、それから得られたTTL信号を型式74F74のフリ
ップフロップで半分に分割する。フリップフロップから
の出力は、HFBR光ファイバー用送信器（米国カリフォル
ニア州パロアルトに所在のヒューレット・パッカード
（Hewlett Packard）社の製品）を駆動するようになっ
ている。この送信器からのデジタル信号は、光ファイバ
ー伝送路を介してHFBR−2524光ファイバー用受信器に受
信されるようになっているが、これらの構成部品は全て
前掲ヒューレット・パッカード社が市販しているHFBR−
0501キットに含まれているものである。光ファイバー伝
送路を介して送られるデジタル信号は、計数器・タイマ
ーボード86に供給されるので、回路上の接地ループ作用
（ground loop effects）やノイズの混入（noise pick
−up）を防ぐことができるようになっている。計数開始
信号や、積分時間、トリガーポンプ始動・停止、トリガ
ー信号計数などは、この計数器・タイマーボード86によ
り制御されるようになっている。この計数器・タイマー
ボード86は、従来公知の構成で、従来公知の構成部品で
構成されているので、当業者には容易に設計できるもの
である。
計数器・タイマーボード86とトリガー溶液供給ポンプ
とは、例えばIBM PC−XT（米国フロリダ州ボカラトンに
所在のアイ・ビー・エム（IBM）の製品）や、インテル3
10開発システム（米国カリフォルニア州サンバレーに所
在のインテル（Intel）社の製品）の如くのマイクロコ
ンピュータにより、従来公知の規定インターフェースを
介して制御されるようになっている。
ポリイオン結合免疫複合体は、逆極帯電多孔質固形要
素に誘引されるから、未反応サンプルの洗浄効率を最大
化すると共に、多孔質固形要素から標識するために洗剤
と塩組成物の何れか一方、叉は両方を含有させた水溶液
若しくは水で洗浄する。洗浄溶液の体積量は、反応混合
物のそれの数倍、好ましくは３倍に選定する。この洗浄
溶液の組成としては、非特異結合作用（non−specific
binding）を減少させると共に、検定感度を増大させる
立場から選定する。そのためには、水、塩水、高張緩衝
塩溶液の何れかが選ばれる。洗浄サイクル数も検定感度
を左右する要因として重要であるので、何回も洗浄溶液
をかけるのが望ましい。尚、洗浄溶液やタンパク質含有
溶液で多孔質固形要素を予め湿潤させておくことは、非
特異結合作用を減少させ、特異結合作用を増加させる上
で有用である。
本発明による装置は、アクリジニウムで標識した化学
的発光の如くのアルカリ性過酸化物によりトリガーされ
た短持続性の化学的発光や、国際特許公開公報第881 00
694号とヨーロッパ特許公開公報第0 254 051−A2号に開
示されている如くのジオキセタンによる長持続性の化学
的発光を検出するのに利用することができる。短持続性
化学的発光の場合、検出ユニットと使捨て式反応トレー
90とを接合させることにより形成される遮光室内でCL信
号を活性化させる。従って、トリガー溶液注入ノズルと
供給路とマニホールドとポンプとは、検出装置の構成部
品である。長持続性のジオキセタン系化学的発光は、酵
素に対して特異な基質（substrate）を多孔質固形要素
上の酵素標識免疫複合体に添加することにより発生す
る。この一例としては、米国マサチューセッツ州ベッド
フォードに所在するトロピクス（Tropix）社から市販さ
れているアルカリ性ホスファターゼ基質、即ち、３−
（２′−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−
（３″−ホスホロキシ）フェニール−1,2−ジオキセタ
ン・ジゾジウム塩（AMPPD）が挙げられる。この基質
は、使捨て式反応トレー90が検出ヘッドと係合する前で
あって、信号の積分作用が開始する前に、保温ないし培
養、即ち、インキュベーションされるようにしても良
い。全信号強度は強度・時間曲線の一部に亙って集積す
る。
アクリジニウムスルフォンアミド標識化学的発光反応
は、検出装置における２基の注入器を利用して注入した
アルカリ性過酸化物溶液により多孔質固形要素93上でト
リガーされる。この注入器を構成する好ましい材料とし
ては、テフロン（商標名）、ケル−Ｆ（商標名）、ナイ
ロン、超高分子量ポリエチレンないしテフロン被覆ステ
ンレススチールなどが挙げられる。注入器と光導管と多
孔質固形要素93からなる構成は遮光構造として、光導管
の入射窓を多孔質固形要素93に近接させておく。２本の
トリガー溶液注入ノズルは、光導管の円周に対して互い
に180゜隔てて配置するのが望ましい。この光導管は、
光学プラスチック材、ガラス、水晶の何れかで構成して
も良く、叉は、高度に研磨した中空金属筒の形で用いて
も良く、発生した化学的発光信号を光電検出器に導く役
をなすものである。
トリガー溶液は、使捨て式反応トレー90の分離・検出
用ウェル92に導かれて、光読取り光学系への流体の飛散
を最小限にするのに適した低注入速度で注入する。前述
したように、この注入速度としては500μL/秒以下が望
ましい。注入したトリガー溶液は、分離・検出用ウェル
92の漏斗状保持壁92aの壁面に沿って流下しつつカーテ
ン状に広がり、かくして多孔質固形要素93に多方向から
均一に拡散浸透する。
このトリガー溶液の体積量は、多孔質固形要素93の流
体保持能よりも僅かだけ多くなるように選ばれ、好まし
くは50〜100μＬが望ましい。信号積分時間としては、
多孔質固形要素93におけるトリガーされた反応混合物の
滞留時間よりも長くなるようにする。化学的発光反応
は、多孔質固形要素93の表面上のみならず、この多孔質
固形要素93の空隙の内部から起こってくる。
多孔質固形要素93において化学的発光反応を誘発させ
るのに用いるアルカリ性過酸化物溶液に含まれる過酸化
水素の濃度は、0.25N過酸化ナトリウム溶液において0.1
〜1.0体積％の範囲、好ましくは0.3体積％に保持する。
溶液における化学的発光反応は、0.1〜0.25N過酸化ナト
リウム溶液に約0.03体積％の過酸化水素を含有するアル
カリ性過酸化水素によりトリガー、即ち、誘発される。
トリガー溶液の過酸化物の濃度が高ければ高いほど、誘
発された反応混合対が多孔質固形要素93を拡散するに先
立って、短時間以内に高強度の発光信号が発せられる。
アルカリ性ホスファターゼ／ジオキセタン反応による
化学的発光を検出ヘッドの外で誘発するようにしても良
く、それにより生じた信号は、酵素基質反応が安定状態
に達した後に収集する。この場合、トリガー溶液供給ポ
ンプ、供給ライン、注入ノズルなどは用いない。検出ヘ
ッドが使捨て式反応トレー90と接合して、そのことが囲
繞体下降検出用センサーにより検出されると、信号が収
集される。別の方法としては、レートモードで信号を収
集するようにしても良い。その際、トリガー溶液供給ポ
ンプと供給ラインとを用いて基質溶液を供給し、時間の
経過にともなうCL強度の変化を、所定時間に亙って短持
続性読取りを行うことにより計数する。好ましい酵素標
識と基質としては、アルカリ性ホスファターゼと３−
（２′−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４
（３″−ホスホロキシ）フェニール−1,2−ジオキセタ
ン（AMPPD）基質が挙げられる。β−ガラクトシダーゼ
も標識として用いることもでき、また、３−（２′−ス
ピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３″−β−
Ｄ′−ガラクトピロラノ−イロキシ）フェニール−1,2
−ジオキセタン（AMPGD）を基質として用いることもで
きる。
光導管は発生した化学的発光信号を光電子増倍管と検
出用電子回路に導く。好ましい発光信号収集方法として
は、単一光電子計数法を用いることである。低光強度の
信号を検出する方法は、当業者にはよく知られていると
ころであり、また、光電子倍増管の代替品として、冷却
型フォトダイオード、アバランチェ型フォトダイオー
ド、増強型ビジコン管、マイクロチャンネルプレートの
何れかが利用できる。何れにしても、光導管としては、
直径が８ミリで長さが0.5〜３インチ（1.27〜7.62セン
チ）の、高度に研磨した水晶棒で構成するのが望まし
い。しかし、光導管の長さは、包装の都合で適当に選ば
れることがあるから、特定の長さでなければならないこ
とはない。水晶棒の一端をレンズにしたり、プリズム状
に形成したり、光ファイバー束を取り付けたり、或い
は、屈折率に勾配を持たせたレンズとしたりしてもよい
もので、このことは当業者には容易に思いつくところで
ある。
以後、いくつかの例を以て本発明を例示する。
例 Ｉ ガラス繊維マトリックスにおける短寿命アクリ
ジニウム化学発光の活性化および測定の精度 多孔質固形要素における短寿命化学発光信号測定の精
度を下記の態様により測定した。
同時係属中の特願平２−283239号に開示されている使
捨て式反応トレーにおける16個の分離・検出用ウェルに
それぞれ充填したガラス繊維マトリックス（多孔質固形
要素）に、アクリジニウムを標識した抗HBC抗体結合体
溶液（Ｂ型肝炎コア抗原（臨床用ロット））50μＬずつ
を手操作によって注入分配した。過酸化尿素含有錠剤を
0.25M水酸化ナトリウム溶液に溶解し、過酸化物の有効
濃度が0.3％となるように９トリガー液を調製した。本
発明の検出器ヘッド装置の直下へ反応トレーを移動させ
た。検出器ヘッドを下げ、反応トレーの最初の対のウェ
ルに接合させて、密閉した遮光室を形成した。PMTへの
高電圧のスイッチを入れ、３秒間平衡化させた。ついで
PMTの一側へダークカウントを６秒間集めた。トリガー
ポンプの作動を開始し、バルブからこのPMTの下方の分
離・検出ウェルへトリガー液を送った。２つの注入装置
から0.3％アルカリ性過酸化物溶液85μＬを注入する
と、誘発された信号積分が同時に始まり、６秒間積分が
続いた。ついで第２のPMTのダークカウントを６秒間開
始し、さらに化学発光信号を活性化して、同時に６秒間
カウントした。ついで検出ヘッドを上げて反応トレーを
送り、次の対のウェルが検出器ヘッドの直下へ来るよう
に反応トレーを進めた。検出器ヘッドを下げ、反応トレ
ーの８列のウェルの残りについても、ダークカウントお
よびトリガーカウントの過程を反復した。その成績を第
１表に示す。
第１表から、低いダークカウントにより、反応トレー
と検出ヘッドの間の密閉遮光が達成されていることが分
かる。また低い変動計数（CV％）から、多孔質固形要素
中の短寿命化学発光信号の活性化および検出は再現性が
あることが判明した。
例 II 多孔質固形要素に固定化した発光微粒子からの
化学発光信号の活性化および測定の再現性 アクリジニウルスルホンアミド標識したＢ型肝炎コア
抗原に対する抗体（プール品、５μg/mL）を50％ウシ胎
児血清（本願出願人の製品）、２％ヒト血漿、0.1％ツ
イーン（Tween、商標）−20、0.1％エチレンジアミン四
酢酸、0.1％アジ化ナトリウムをリン酸緩衝化食塩水（p
H6.8）に含有する結合体希釈液で希釈した。目的の結合
体濃度は150ng/mLであった。臨床試験のために調製し固
体0.3重量％を含有するロットから、Ｂ型肝炎コア抗原
に対する抗体へ下塗りとして結合させ、ついで組換え体
Ｂ型肝炎コア抗原と結合させたカルボキシル化ポリスチ
レン微粒子をプールした。pH7.2で、16％スクロース含
有リン酸緩衝化食塩水（本願出願人の製品）に微粒子を
浮遊させた。ツイーン（商標）−20の0.1％リン酸緩衝
化食塩水（pH7.2）溶液を移し替え液として使用した。
結合体溶液50mLおよび微粒子浮遊液50mLを混合すること
によって発光微粒子を調製した。反応混合物を水浴（40
℃）で２時間インキュベーションした。ついで室温で24
時間放置することによって、アクリジニウムスルホンア
ミド標識抗体を確実に抗原標識微粒子へ完全結合させ
た。
例Ｉに記載した使捨て式反応トレーの16個の分離・検
出用ウェルにそれぞれ充填した多孔性ガラス繊維マトリ
ックス（多孔質固形要素）に発光微粒子100μＬずつを
分配し水分を完全に除いた。微粒子を、ウシ胎児血清10
0μＬ、脱イオン水100μＬ、0.1％ツイーン（商標）−2
0溶液300μＬの２アリコート量で洗浄した。本発明の化
学発光検出器ヘッドを下げて使捨て式反応トレーと遮光
密閉シールを形成する次のステーションへ、反応トレー
を直進移動させた。0.3％アルカリ性過酸化溶液を使用
してガラス繊維マトリックスに固定化し洗浄した微粒子
を誘発し、生じた化学発光信号を６秒間積分させた。反
応トレーの両側８個ずつのウェルについて平均値および
標準偏差を計算した。
第２表から、低いダークカウントにより、反応トレー
と検出ヘッドの間の密閉遮光が達成されていることが分
かる。また低いCV％から、発光微粒子の包括および多孔
質固形要素中の短寿命化学発光信号の活性化および検出
は再現性があることが判明した。
例 III Ｂ型肝炎表面抗原のための微粒子によるサン
ドイッチCLIA Ｂ型肝炎表面抗原（本願出願人の製品）の化学発光結
合体アクリジニウム標識したヤギポリクローナル抗体
（0.17μg/mL）に対するAyおよびAd感受性パネルおよび
陽性および陰性対照を使用した。
0.1Mリン酸一ナトリウム塩、0.1Mリン酸二ナトリウム
塩、0.1％アジ化ナトリウムおよび53％ウシ血清（同上
アボット・ラボラトリーズ社製）、10％正常ヒト血清か
らなる結合体希釈液を調製し、0.45μｍナルジーン（na
lgene）使捨て式滅菌フイルター（米国ニューヨーク州
ロチェスターに所在のシーブロン（Sybron Corporatio
n）社の事業部であるナルゲ（Nalge Company）社製）で
濾過した。これをpH6.3に調節し、最後に0.2μｍナルジ
ーンフィルターで濾過した。
EDACカップリング法を用いて、固体含量合計が0.24％
となるようにカルボキシル化ポリスチレン微粒子（0.21
μｍ）をIgM抗体HBsAg抗体へ結合させた。
洗浄液は、0.1Mホウ酸塩、0.02％ドデシル硫酸リチウ
ム、0.9％塩化ナトリウムおよび0.1％アジ化ナトリウム
を含有する。
自動ピペット装置を使用し、対照液および試料液それ
ぞれ200μＬを例Ｉに記載した反応トレーの底の浅いイ
ンキュベーション用ウェルへ分取した。モノクローナル
IgMマウス抗Ｂ型肝炎表面抗原で被覆したラテックス粒
子30μＬずつを各インキュベーション用ウェルへ分配し
た。１測定段階当たり0.8インチずつ前進するタイミン
グベルトによりトンネルへ移動する使捨て式反応トレー
で、反応混合物を40℃の加熱トンネル内で20分間インキ
ュベーションした。測定段階を実施するため反応トレー
はその位置に72秒間留まり、ついで次の測定段階のため
再び0.8インチ進ませる。
反応混合物を反応トレーにおける底の浅いインキュベ
ーション用ウェルから分離・検出用ウェルのガラス繊維
マトリックス（多孔質固形要素）へ移し、本明細書に記
載した洗移入方法を用いて、洗浄液300μＬずつ２パル
ス注入により洗浄した。移し替えを終え、洗浄液を吸収
パッドから流し出したあと、アクリジニウム標識したポ
リクローナルヤギ抗HBS抗体30μＬを各繊維パッドへ分
配した。使捨て式反応トレーをタイミングベルトで移動
させ、次の対のウェルが反応混合物を移し替えるよう
に、これを洗転移装置の下へ移動した。洗浄位置への移
動と同一の移動タイミングベルトを使用して反応トレー
をトンネル内でさらに30分間インキュベーションした。
ガラス繊維マトリックスおよび添加したアクリジニウム
標識抗体に保持させて移し替えられた微粒子を、ついで
洗浄ノズルからの0.1％ドデシル硫酸ナトリウム含有洗
浄液各100μＬの３アリコート量で洗浄した。本発明の
化学発光検出器ヘッドを下げ、反応トレー上の最初の対
のウェル表面に合わせて密閉遮光シールを形成する読取
りステーションへ、反応トレーを前と同一速度で移動さ
せる。移し替え、洗浄した微粒子を0.3％アルカリ性過
酸化物溶液を使用して誘発させた。各分離・検出用ウェ
ル毎に測定した信号は微粒子へ付着させたアクリジニウ
ム標識結合体の量に対応するものと考えられ、したがっ
て試料中のＢ型肝炎表面抗原濃度と直接関連していた。
12回反復した陰性対照測定値の標準偏差は104であっ
た。陰性対照の平均値に標準偏差×10を加えることによ
って計算した測定のカットオフ値は2287カウントであっ
た。このように本発明の方法および装置を微粒子捕獲化
学発光免疫測定法に使用することにより、ADサブタイプ
では0.10ng/mL、AYサブタイプでは0.14ng/mLのような低
いＢ型肝炎表面抗原濃度を定量することができる。また
前掲Clinical Chemistry、27巻、1378〜1384頁（1981
年）の第４表に発表されたデータと同一基準を用いると
5ng/mLの最低定量限界が得られる。しかがって本発明の
装置および方法を用いることにより、従来の技術を用い
て報告された成績より１オーダー低いＢ型肝炎表面抗原
の定量限界に達することができた。
例 IV イオン捕獲アルカリ性ホスファターゼ標識化学
発光によるハプテンの競合的結合免疫測定 本例は、乱用薬物フェニルシクリジン（PCP）の競合
的結合測定に関する本発明の検出装置および方法の有用
性を示すものである。この測定を尿試料について、以下
に示すイオン捕獲免疫測定法を用いて実施する。免疫複
合体の作成にはアニオン型ポリマーを捕獲剤として使用
することが含まれる。反応混合物を反応トレーの分離・
検出用ウェルへ移し、予めカチオン型ポリマー溶液で処
理してプラスに荷電させた多孔性プラグに対するイオン
力によって免疫化学反応生成物を固定する。
従来技術で既知の方法を用い、抗フェニルシクリジン
抗体をアルカリ性ホスファターゼで標識した。標識抗体
溶液を、１％魚ゼラチン、25mMトリス、100mM塩化ナト
リウム、1mM塩化マグネシウム、0.1mM塩化亜鉛および0.
1％アジ化ナトリウムを含有する溶液で希釈した。溶液
のpHは7.2であった。予湿液および移し替え液は、25mM
トリス、0.3M塩化ナトリウム、0.1％アジ化ナトリウム
を含有するIMx緩衝液（pH7.2）（本願出願人の製品）で
ある。カチオン型ポリマーは10mM塩化ナトリウムにチェ
ルカット（Celquat、商標）Ｌ−200（前掲ナショナル・
スターチ・アンド・ケミカル社製）を加えた0.5％水溶
液である。
捕獲剤フェニルシクリジン−ポリグルタミン酸は下記
のように調製した。
AG50W−X8イオン交換樹脂（米国カリフォルニア州リ
ッチモンドに所在のバイオ−ラッド（Bio−Rad）社製）
7gを浮遊させた水20mLにポリグルタミン酸ナトリウム塩
（米国ミズーリ州セントルイスに所在のシグマ・ケミカ
ル・カンパニー（Sigma Chemi−cal Company）社製）1g
を加え一夜撹拌した。液体を除去し、凍結乾燥して遊離
酸ポリグルタミン酸（PGAFA）を得た。
４−ヒドロキシフェニルシクリジンの1.1mg（4.24X10
−６モル）のテトラヒドロフラン0.5mL溶液を10％ホス
ゲンのベンゼン溶液0.5mL（130モル過剰）と反応させる
ことにより、フェニルシクリジン−４−クロルぎ酸エス
テルを作成した。室温で反応を2.5時間進行させた。窒
素気流中で溶媒を蒸発し、フェニルシクリジン−４−ク
ロルぎ酸エステルの残留物を得た。残留物をテトラヒド
ロフラン0.5mLに溶解し、遊離液ポリグルタミン酸（分
子量40000）1.7mgの１−メチル−２−ピロリジノン0.5m
L溶液をこれに添加した。一夜室温で反応を実施し、つ
いで反応混合物を蒸発乾固した。乾燥混合物を0.1Mリン
酸緩衝液（pH7.0）1.5mLに溶解し、3500分子量カットオ
フ透析バッグでこれと同じ緩衝液に対して透析した。沈
澱を濾過した。濁った水性濾液が透明になるまで、塩化
メチレンで抽出した。水層を１％魚ゼラチン、25mMトリ
ス、100mM塩化ナトリウム、1M塩化マグネシウム、0.1mM
塩化亜鉛および0.1％アジ化ナトリウムを含有する緩衝
液（pH7.2）で希釈し、55.0μgPGA/mLのフェニルシクリ
ジン−PGA捕獲試薬を調製した。
試料はTDx（商標）蛍光旋光免疫測定キット（本願出
願人の製品）からのフェニルシクリジン・カリブレータ
ーを使用した。ヒトの尿1mL当たりフェニルシクリジン2
50、120、60、25および0ngを含有していることを独立し
た分析方法によって確かめた。本明細書に記載した使捨
て式反応トレーのガラス繊維マトリックス（多孔質固形
要素）を、10mM塩化ナトリウム溶液に溶解した0.5％チ
ェルカット（商標）Ｌ−200（前掲ナショナル・スター
チ・アンド・ケミカル社製）50μＬで処理した。チェル
カット（商標）Ｌ−200溶液を手操作によりそれぞれガ
ラス繊維マトリックスへ加えた。試料（PCPカリブレー
ター）150μＬ、IMx緩衝液45μＬおよびアルカリ性ホス
ファターゼ標識抗フェニルシクリジン抗体の溶液420μ
Ｌを試験管内で37℃で10分間インキュベーションした。
フェニルシクリジン・ポリグルタミン酸捕獲試薬300μ
ＬおよびIMx緩衝液45μＬを反応混合物へ添加し、37℃
でさらに10分間インキュベーションした。手動式ピペッ
トを使用して、反応混合物200μＬを手操作により反応
トレーの処理済みガラス繊維マトリックスへ移した。IM
x緩衝液75μＬの２アリコート量を手操作で多孔性ガラ
ス繊維プラグへ分注することにより過剰の試薬を洗浄し
た。FMI−RHポンプ（前掲フルイド・メターリング社
製）を使用して、化学発光物質、３−（２′−スピロア
ダマンタン）−４−メトキシ−４−（３″−ホスホロキ
シ）フェニル−1,2−ジオキセタン二ナトリウム塩（AMP
PD）100μＬの50mM重炭酸ナトリウム溶液（1mM塩化マグ
ネシウム含有）（pH9.5）をガラス繊維マトリックスへ
分配し、ガラス繊維マトリックス中で10分間インキュベ
ーションした。ポンプ、軌道および検出器ヘッド機能を
IBM PC/XTによって制御した。軌道ステッパーモータ
ー、即ち、パルスモータをステッパーモーター制御ボー
ド（米国オハイオ州ソロンに所在のサイエンティフィッ
ク・ソルション（Scientific Solutions）社製）で制御
した。FMIポンプをMOC3031・オプト・トライアック・ド
ライバーおよびMAC3030−８・トライアックからなるト
ライアック・インターフェース（前掲モトローラ社半導
体部門の製品）によって制御した。ついで反応トレーを
本発明の検出装置の下へ移動させた。基質インキュベー
ション時間がすべてのガラス繊維マトリックスで同一と
なるように基質分配および化学発光信号検出を調節し
た。検出器ヘッドを下げて使捨て式反応トレーに合わ
せ、化学発光測定のための密閉遮光室を形成した。第４
表に示すように、化学発光を１ウェル当たり６秒間積分
した。
第４表における「実効旋光」とは、フルオレセイン標
識したPCP類似体が溶液中の競合的結合測定で抗PCP抗体
へ結合した旋光度の変化を示す。ガラス繊維マトリック
ス上の総括反応生成物の化学発行信号の傾向は商業的に
入手可能な蛍光旋光アナライザー（本願出願人によるTD
xアナライザー）および商業的に入手可能な蛍光旋光キ
ット（本願出願人の製品）を使用した溶液中での従来技
術既知の蛍光旋光の場合と対応している。
例 Ｖ イオン捕獲アクリジニウム標識化学発光による
ハプテンのための競合的結合免疫測定 本例は、乱用薬物フェニルシクリジン（PCP）の競合
的結合測定に関する本発明の装置および方法の有用性を
示すものである。この測定を尿試料について、以下に示
すイオン捕獲免疫測定法を用いて実施する。免疫複合体
を本明細書に記載した使捨て式反応トレーの底の浅いイ
ンクベーション用ウェルに作成し、アニオン型ポリマー
を捕獲剤として使用する。反応混合物を反応トレーの分
離・検出用ウェルへ移し、カチオン型ポリマー溶液で予
め処理した装置のガラス繊維マトリックス（多孔質固形
要素）へ免疫反応生成物をイオン力によって固定化し
た。
当業界で既知であるEDACカップリング法を用いて、モ
ノクローナル抗フェニルシクリジン抗体をアクリジニウ
ムスルホンアミドで標識した。これを例IIIの抗コア結
合体に使用したのと同じ緩衝液に保存した。予湿液およ
び移し替え液は25mMトリス、0.3M塩化ナトリウム、0.1
％アジ化ナトリウムを含有するpH7.2のIMx緩衝液（本願
出願人の製品）である。
カチオン型ポリマーは10mM塩化ナトリウムに溶解した
「チェルカット（商標）Ｌ−200」（前掲ナショナル・
スターチ・アンド・ケミカル社製）の0.5％水溶液であ
り、アニオン捕獲剤フェニルシクリジン・ポリグルタミ
ン酸は例IVにしたがって調製した。試料はTDX（商標）
蛍光旋光免疫測定キットからのフェニルシクリジン・カ
リブレーターである。これらはヒトの尿1mL当たりフェ
ニルシクリジン500、250、120、60、25および0ngを含有
している。IMxトリス緩衝液80μＬ、ついで「チェルカ
ット（商標）Ｌ−200」溶液80μＬを前記反応トレーの
ガラス繊維マトリックスに分配した。２台のFMI−RHポ
ンプを使用して溶液を分配し、トライアックボードを通
じて、インテル310・デベロップメント・システムによ
って制御した。タイミングベルトおよびステッパーモー
ターを使用して反応トレーを直進軌道上で移動させた。
技術的に既知の構成要素を使用したボードによってステ
ッパーモーターを制御した。4.8分後、自動ピペットを
使用して反応トレーの底の浅いインキュベーション用ウ
ェルへカリブレーター（試料］50μＬを分取した。アク
リジニウム標識抗PCP抗体50μＬを各インキュベーショ
ン用ウェルほそれぞれ分配した。１分間当たり0.8イン
チずつ前進するタイミングベルトによってトンネルへ移
動する反応トレーで、32℃に加熱したトンネル内で混合
物を9.6分間インキュベーションし、反応後、各反応段
階毎に反応トレーを36秒間停止させた。移動するタイミ
ングベルト上で9.6分間インキュベーションしたのち、
ウェル中心上方に位置したチップから、1.9mg/mLのPGA
濃度のPCP−PGA捕獲試薬を含有している溶液50μＬをイ
ンキュベーション用ウェルへ分配した。獲得試薬溶液を
FMI−PHポンプによって分配し、トライアック・インタ
ーフェース・ボードを通じて310・デベロップメント・
システムによって制御した。さらに反応混合物を9.6分
間インキュベーションした。反応混合物を移し替える前
に、第４級アンモニウムポリマーで処理したガラス繊維
マトリックスをIMx緩衝液100μＬで洗浄した。
先に記載したように使捨て式反応トレーが移し替え装
置の下へ来たら、反応混合物を底の浅いインキュベーシ
ョン用ウェルから分離・検出用ウェルの予め処理したガ
ラス繊維マトリックスへ移し替え、これを洗浄した。当
該反応トレーをタイミングベルト上で移動させ、次のウ
ェル対を移し替え装置の下へ位置し、反応混合物を移し
替えた。ついで反応トレーを読取り位置へ移動させ、こ
こで本発明の化学発光検出器ヘッドを下げて、反応トレ
ーの最初の対ウェルの表面を接合させて密閉遮光シール
をこしらえた。ガラス繊維マトリックス上に保持され、
固定した免疫複合体を0.3％アルカリ性過酸化物の0.25M
NaOH溶液を使用して誘発し、各PMT/増幅器からの信号
をカウンター／タイマーボードによって制御し、両側の
ウェルをそれぞれ独立したポンプで誘発した。光子カウ
ンター信号を８秒間積分した。各ウェルについて測定し
た信号は、イオン力によってガラス繊維マトリックス表
面に結合しているアクリジニウム標識結合体の量に対応
していると考えられる。第５表にその成績を示し、カウ
ント数および阻害％として表わす。最下段は、フルオレ
セイン標識したPCP類似体が溶液中の競合的結合測定で
抗PCP抗体へ結合した旋光度の変化を示す。ガラス繊維
マトリックス上の包括反応生成物の化学発光信号の傾向
は、商業的に入手可能な傾向旋光アナライザー（前掲の
TDxアナライザー）および商業的に入手可能な蛍光旋光
キットを使用した溶液中での従来技術既知の蛍光旋光の
場合と対応している。
本測定のカットオフ値は25ng/mLであると考えられ
る。この成績（第５表）からPCPを25ng/mLまたはそれ以
上含有しているすべての標準試料は、陰性対照と十分に
区別され、本発明の有用性を示している。
本発明の好ましい態様について説明したが、当業者な
らば、本発明の考案によって種々の改変および改良を思
い浮かべるであろうことは理解し得る。即ち、容器の形
態、材料および色、多孔質固形要素の材料、吸着材の材
料および形態、光導体の形態およびデザイン、検出器の
種類および検出方法、尿素過酸化物として使用する過酸
化物または類似化合物の種類、洗浄液の組成、予湿液の
組成、および非特異的結合を減少させ、本発明による固
定すべき複合体と多孔質固形要素の間に必要な相互作用
を提供する多孔質固形要素の処理方法は、すべて当業者
によって最適化することができる。実施例では１段階サ
ンドイッチ法および競合的測定を示したが、２段階また
はそれ以上の段階の測定方法も実施できる。
固相免疫測定を実施するのに使用する微粒子は好まし
くは多孔質固形要素の平均実効細孔径の大きさを超えな
い平均直径を有するように選ばれる。実施例ではカルボ
キシル化ポリスチレン粒子の使用を開示したが、ポリス
チレン、ポリアクリル酸メチル、誘導化したセルロース
繊維、ポリアクリルアミド等のようなその他の粒子材料
を使用することもできる。
イオン捕獲方法には、ポリアニオン酸誘導化したポリ
カチオン物質として、ポリグルタミン酸を使用する方法
を説明したが、これらの化合物を測定成分または多孔質
固形要素へ結合させるその他の方法も使用できる。
また本発明の測定方法は、小型分子または該酸プロー
ブの測定にも応用し得る。また本発明ではアクリジニウ
ムスルホンアミド標識およびアルカリ性ホスファターゼ
標識したトレーサーについて説明したが、その他のアク
リジニウム化合物またはその類似体または他の発光化合
物へも適用し得る。例えば説明した読み取りヘッド設計
の代わりに、２つのトリガー溶液注入口および別の２つ
の触媒溶液注入口を用いることによるルミノール型化学
発光免疫測定を行なうことができる。また、フェナール
増幅化学発光測定にも応用できる。
本発明の装置および方法はHBsAgまたはHIV粒子のよう
なウイルスまたはその断片の測定に使用し得る。またガ
ン胎児性抗原（CEA）およびα−フェトプロテイン（AF
P）のような巨大分子病状態マーカーも検出でき、ビタ
ミンB12、葉酸およびフェリチンのような栄養状態マー
カーも検出し得る。また本発明の装置により有益に検出
されるものは、ホルモン（例えばＢ−HCG、TSH、LH、FS
H）、細菌（例えばストレプトコッカス類（Streptococc
i），）該酸種（例えばDNAまたはRNA）である。また本
発明は、T3、T4、遊離T4およびジゴキシンのような小型
分枝の競合的結合測定にも有用である。乱用物質も本発
明の方法および装置を使用して検出しすることもでき
る。
アレルギー試験は、タンパク質被覆微粒子を生成し得
る微粒子へアレルゲン抽出物を付着させ、これを体液試
料とインキュベーションとして特異的IgEを捕獲するこ
とによって実施し得る。そのような測定では、結合型Ig
Eと反応させ、ついで洗浄・活性化し、その結果を読み
取り得る結合体としてアクリジニウム標識したヤギ抗ヒ
トIgEを使用することもできる。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明による化学的発光度検出装置の側面図、
第２図は本発明の検出装置の検出ヘッドの好ましい形態
を示す斜視図、第３図は第２図の検出ヘッドの縦断面
図、第４図は第２図の検出ヘッドの垂直軸に沿う断面
図、第５図は本発明の検出装置の底部の分解図、第６図
は本発明の検出装置における昇降機構の斜視図、第７図
は本発明の検出装置の概略ブロック図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 トーマス・エフ・ズレク アメリカ合衆国 イリノイ 60305、リ ヴァー・フォレスト、アッシュランド、 752番 (72)発明者 ケヴィン・アール・ジェンジャー アメリカ合衆国 イリノイ 60645、シ カゴ、エヌ・ハミルトン、6934番 (72)発明者 カーティス・ジェイ・ペペ アメリカ合衆国 イリノイ 60050、マ クヘンリー、コーネル・コート、3609番 (72)発明者 イー―ヘル・ヨウ アメリカ合衆国 イリノイ 60061、ヴ ァーノン・ヒルズ、オースティン・コー ト、102番 (72)発明者 ステファン、エム・コッター アメリカ合衆国 イリノイ 60020、フ ォックス・レイク、グレン・アヴェニュ ー、36番 (56)参考文献 特開 昭62−103542（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−32166（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−170768（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−149950（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−227061（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−101463（ＪＰ，Ａ) 実開 昭59−29751（ＪＰ，Ｕ) 特表 昭61−502214（ＪＰ，Ａ) 特許2515428（ＪＰ，Ｃ１)

Claims (18)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】一部又は全ての反応成分をインキュベーシ
    ョンする第１ウェルと、（ａ）前記第１ウェルに近接し
    て形成されており、前記反応成分を保持する漏斗状保持
    壁、（ｂ）該保持壁の直下に配置されていて、化学的発
    光成分と相互作用する特性を有するものであって、前記
    化学的発光成分の移動を阻止すべく前記化学的発光成分
    を固定化する一方、化学的発光分析におけるその他の反
    応成分の通過を許容する多孔質繊維マトリックス、
    （ｃ）前記繊維マトリックスを通過した前記その他の反
    応成分を吸収すべく前記繊維マトリックスの下方に配置
    した吸収材層とからなる第２ウェルと、前記第１及び第
    ２ウェルをその内側に囲繞して、反応トレーが化学的発
    光検定装置に載置されると該化学的発光検定装置の光電
    検出ヘッドと協働して前記第１ウェルと前記第２ウェル
    とを覆う遮光室を形成する遮光室形成用壁部材と、前記
    第１及び第２ウェルとの間を連通している通路とを備え
    てなる使捨て式反応トレーを用いて化学的発光検定を行
    う前記光電検出ヘッドを含む化学的発光検定装置であっ
    て、 前記第２ウェルにおける前記吸収材層は、化学的発光活
    性化反応に対しては化学的に不活性であり、また、 前記発光検定装置が、化学的発光活性化反応を開始する
    化学的発光活性化溶液を前記繊維マトリックスに均一に
    配分するために、前記漏斗状保持壁の傾斜内面に向かっ
    て配置した複数のポートと、前記光電検出ヘッドを前記
    第１ウェルに対して位置決めするものであって、前記複
    数のポートをその内側に囲繞しており、かつ、前記遮光
    室形成用壁部材と係合してその内部であって、反応トレ
    ーと光電検出ヘッドとの間に前記遮光室を形成する囲繞
    体とを備えてなることを特徴とする化学的発光検定装
    置。
  2. 【請求項２】請求項１に記載の装置であって、前記相互
    作用する特性が、前記化学的発光成分と前記多孔質繊維
    マトリックスとの間での疎水反応を起こす特性であるこ
    とを特徴とする化学的発光検定装置。
  3. 【請求項３】請求項２に記載の装置であって、前記多孔
    質繊維マトリックスが疎水性試薬で処理されていること
    を特徴とする化学的発光検定装置。
  4. 【請求項４】請求項１に記載の装置であって、前記相互
    作用する特性が、前記化学的発光成分と前記多孔質繊維
    マトリックスとの間でのイオン反応を起こす特性である
    ことを特徴とする化学的発光検定装置。
  5. 【請求項５】請求項４に記載のものであって、前記多孔
    質繊維マトリックスはカチオン型試薬で処理されてお
    り、また、前記化学的発光成分はアニオン型試薬で処理
    されていることを特徴とする化学的発光検定装置。
  6. 【請求項６】試験サンプルにおける分析物の量を求める
    べく化学的発光検定を行う方法であって、 一部又は全ての反応成分をインキュベーションする第１
    ウェルと、（ａ）前記第１ウェルに近接して形成されて
    おり、前記反応成分を保持する漏斗状保持部、（ｂ）該
    保持壁の直下に配置されていて、化学的発光の検定に際
    して化学的発光成分と相互作用をする特性を有するもの
    であって、前記化学的発光成分の移動を阻止すべく前記
    化学的発光成分を固定化する一方、化学的発光分析にお
    けるその他の反応成分の通過を許容する多孔質繊維マト
    リックス、（ｃ）前記繊維マトリックスを通過した前記
    その他の反応成分を吸収すべく前記繊維マトリックスの
    下方に配置した吸収材層とからなる第２ウェルと、前記
    第１及び第２ウェルをその内側に囲繞して、反応トレー
    が化学的発光検定装置に載置されると該化学的発光検定
    装置の光電検出ヘッドを囲繞する囲繞体と協働して前記
    第１ウェルと前記第２ウェルとを覆う遮光室を形成する
    遮光室形成用壁部材と、前記第１及び第２ウェルとの間
    を連通している通路とを備えてなる使捨て式反応トレー
    を用意する工程と、 試験サンプルに含まれる分析物の量に応じて当該分析物
    に結合し得る化学的発光成分と前記分析物とからなる反
    応混合物を前記第１ウェルにおいて調製する工程と、 前記反応混合物を前記第１ウェルから前記第２ウェルへ
    と前記通路を介して前記反応混合物を移して、前記第２
    ウェル内の前記多孔質繊維マトリックスで前記化学的発
    光成分と結合した前記分析物を前記相互作用で固定する
    ことにより前記化学的発光成分の移動を阻止する工程
    と、 前記反応トレーを前記光電検出ヘッドに臨ませた後に、
    反応トレーにおける前記遮光室形成用壁部材と発光検定
    装置の前記囲繞体とを係合させて、反応トレーと光電検
    出ヘッドとの間に遮光室を形成する工程と、 前記発光検定装置おいて前記漏斗状保持壁の傾斜内面に
    向かって配置した複数のポートを介して前記第２ウェル
    内の多孔質繊維マトリックスへと、該多孔質繊維マトリ
    ックスに固定した前記化学的発光成分と反応し得る化学
    的発光活性化溶液を配分して化学的発光信号を発生させ
    る工程と、 前記遮光室において前記多孔質繊維マトリックスから生
    ずる前記化学的発光信号を測定する工程とからなるのを
    特徴とする化学的発光検定方法。
  7. 【請求項７】請求項６に記載の方法であって、前記活性
    化溶液を多孔質繊維マトリックスに配分して化学的発光
    信号を発生させる工程が、前記多孔質繊維マトリックス
    にアルカリ性酸化溶液を適用して化学的発光反応を活性
    化することからなるのを特徴とする化学的発光検定方
    法。
  8. 【請求項８】請求項６に記載の方法であって、前記相互
    作用が、前記化学的発光成分と前記多孔質繊維マトリッ
    クスとの間での疎水反応であることを特徴とする化学的
    発光検定方法。
  9. 【請求項９】請求項６に記載の方法であって、前記相互
    作用が、前記化学的発光成分と前記多孔質繊維マトリッ
    クスとの間でのイオン反応であることを特徴とする化学
    的発光検定方法。
  10. 【請求項１０】請求項６に記載の方法であって、前記多
    孔質繊維マトリックスが疎水性試薬で処理されているこ
    とを特徴とする化学的発光検定方法。
  11. 【請求項１１】請求項９に記載の方法であって、前記多
    孔質繊維マトリックスはカチオン型試薬で処理されてお
    り、また、前記化学的発光成分はアニオン型試薬で処理
    されていることを特徴とする化学的発光検定方法。
  12. 【請求項１２】試験サンプルにおける分析物の量を求め
    るべく化学的発光による競合免疫学的検定を行う方法で
    あって、 一部又は全ての反応成分をインキュベーションする第１
    ウェルと、（ａ）前記第１ウェルに近接して形成されて
    おり、前記反応成分を保持する漏斗状保持壁、（ｂ）該
    保持壁の直下に配置されていて、化学的発光成分の移動
    を阻止する一方、化学的発光分析におけるその他の反応
    成分の通過を許容する多孔質繊維マトリックス、（ｃ）
    前記繊維マトリックスを通過した前記その他の反応成分
    を吸収すべく前記繊維マトリックスの下方に配置した吸
    収材層とからなる第２ウェルと、前記第１及び第２ウェ
    ルをその内側に囲繞して、反応トレーが化学的発光検定
    装置に載置されると該化学的発光検定装置の光電検出ヘ
    ッドを囲繞する囲繞体と協働して前記第１ウェルと前記
    第２ウェルとを覆う遮光室を形成する遮光室形成用壁部
    材と、前記第１及び第２ウェルとの間を連通している通
    路とを備えてなる使捨て式反応トレーを用意する工程
    と、 （イ）試験サンプルから得た分析物と、前記化学的発光
    成分で標識した前記分析物の結合性類似物と、前記分析
    物の結合パートナとからなる競合的反応混合物、又は、
    （ロ）試験サンプルから得た分析物と、前記化学的発光
    成分で標識した前記分析物の結合パートナと、固定し得
    る形態の前記分析物とからなる競合的反応混合物を前記
    第１ウェルにおいてインキュベーションする工程と、 前記第１ウェルでインキュベーションした反応混合物
    （イ）又は（ロ）を前記第２ウェルへと前記通路を介し
    て移して、繊維マトリックスと前記反応混合物（イ）に
    おける結合パートナ又は前記反応混合物（ロ）における
    前記固定し得る形態の分析物との相互作用で前記混合物
    （イ）における結合パートナ又は前記混合物（ロ）にお
    ける前記固定し得る形態の分析物を繊維マトリックスに
    保持させることにより、前記繊維マトリックスに保持さ
    れた反応混合物（イ）における前記結合パートナに結合
    している反応混合物（イ）における結合性類似物を標識
    する化学的発光成分、又は、前記繊維マトリックスに保
    持された反応混合物（ロ）における前記固定し得る形態
    の分析物に結合している反応混合物（ロ）における結合
    パートナを標識する化学的発光成分の移動が阻止される
    工程と、 前記反応トレーを前記光電検出ヘッドに臨ませた後に、
    反応トレーにおける前記遮光室形成用壁部材と発光検定
    装置の前記囲繞体とを係合させて、反応トレーと光電検
    出ヘッドとの間に遮光室を形成する工程と、 前記発光検定装置において前記漏斗状保持壁の傾斜内面
    に向かって配置した複数のポートを介して前記第２ウェ
    ル内の多孔質繊維マトリックスへと、反応混合物（イ）
    又は（ロ）における前記結合パートナを介して前記多孔
    質繊維マトリックスに固定した前記化学的発光成分と反
    応し得る化学的発光活性化溶液を配分して化学的発光信
    号を発生させる工程と、 前記遮光室において前記多孔質繊維マトリックスから生
    ずる前記化学的発光信号を測定する工程とからなるのを
    特徴とする化学的発光競合免疫学的検定方法。
  13. 【請求項１３】請求項12に記載の方法であって、前記活
    性化溶液を多孔質繊維マトリックスに配分して化学的発
    光信号を発生させる工程が、前記多孔質繊維マトリック
    スにアルカリ性酸化溶液を適用して化学的発光反応を活
    性化することからなるのを特徴とする化学的発光競合免
    疫学的検定方法。
  14. 【請求項１４】請求項12に記載の方法であって、前記混
    合物を第２ウェルへと移す工程に先立って、前記多孔質
    繊維マトリックスを予め湿潤させることを特徴とする化
    学的発光競合免疫学的検定方法。
  15. 【請求項１５】請求項12に記載の方法であって、前記相
    互作用が、前記化学的発光成分と前記多孔質繊維マトリ
    ックスとの間での疎水反応であることを特徴とする化学
    的発光競合免疫学的検定方法。
  16. 【請求項１６】請求項12に記載の方法であって、前記多
    孔質繊維マトリックスが疎水性試薬で処理されているこ
    とを特徴とする化学的発光競合免疫学的検定方法。
  17. 【請求項１７】請求項12に記載の方法であって、前記相
    互作用が、前記化学的発光成分と前記多孔質繊維マトリ
    ックスとの間でのイオン反応であることを特徴とする化
    学的発光検定方法。
  18. 【請求項１８】請求項17に記載の方法であって、前記多
    孔質繊維マトリックスはカチオン型試薬で処理されてお
    り、また、前記化学的発光成分はアニオン型試薬で処理
    されていることを特徴とする化学的発光検定方法。
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