PL196464B1 - Analityczne urządzenie chromatograficzne oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi - Google Patents
Analityczne urządzenie chromatograficzne oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwiInfo
- Publication number
- PL196464B1 PL196464B1 PL342658A PL34265898A PL196464B1 PL 196464 B1 PL196464 B1 PL 196464B1 PL 342658 A PL342658 A PL 342658A PL 34265898 A PL34265898 A PL 34265898A PL 196464 B1 PL196464 B1 PL 196464B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- poly
- bound
- polycation
- substance
- conjugate
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 90
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 29
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 title description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 85
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 50
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 50
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims description 47
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 46
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 22
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 20
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 20
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 15
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 15
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 claims description 10
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 9
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 8
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 8
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N Angelic acid Natural products CC=C(C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- 229920000371 poly(diallyldimethylammonium chloride) polymer Polymers 0.000 claims description 7
- UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N tiglic acid Chemical compound C\C=C(/C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 6
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 6
- NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N vinylsulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C=C NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 5
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001464 poly(sodium 4-styrenesulfonate) Polymers 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims 2
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 74
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 33
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 18
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 100
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 48
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 48
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 46
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 39
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 17
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 14
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 14
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 13
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 13
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 12
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 10
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 9
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 150000003342 selenium Chemical class 0.000 description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 4
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229920000075 poly(4-vinylpyridine) Polymers 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 3
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000002801 charged material Substances 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- YIOJGTBNHQAVBO-UHFFFAOYSA-N dimethyl-bis(prop-2-enyl)azanium Chemical compound C=CC[N+](C)(C)CC=C YIOJGTBNHQAVBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000013528 metallic particle Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- MEXAGTSTSPYCEP-JEDNCBNOSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;hydrobromide Chemical compound Br.NCCCC[C@H](N)C(O)=O MEXAGTSTSPYCEP-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MAGFQRLKWCCTQJ-UHFFFAOYSA-M 4-ethenylbenzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=C(C=C)C=C1 MAGFQRLKWCCTQJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MAGFQRLKWCCTQJ-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylbenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C(C=C)C=C1 MAGFQRLKWCCTQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMGRUKXSXEPFQ-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridin-1-ium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound C=CC1=CC=[NH+]C=C1.CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 FWMGRUKXSXEPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYPSPXFRXXXUNB-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridine;hydrochloride Chemical compound Cl.C=CC1=CC=NC=C1 DYPSPXFRXXXUNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- RDDREUKTFRNXBQ-UHFFFAOYSA-N Br.Br.Br.C=CC1=CC=NC=C1 Chemical compound Br.Br.Br.C=CC1=CC=NC=C1 RDDREUKTFRNXBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 229920001131 Pulp (paper) Polymers 0.000 description 1
- 239000004772 Sontara Substances 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 244000078885 bloodborne pathogen Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Substances O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- -1 poly (sodium vinylsulfenic acid Chemical compound 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- ZIJTYIRGFVHPHZ-UHFFFAOYSA-N selenium oxide(seo) Chemical class [Se]=O ZIJTYIRGFVHPHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/5695—Mycobacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
- G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
- G01N2333/162—HIV-1, HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, DC4-Binding site
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/20—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/35—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/824—Immunological separation techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/105831—Protein or peptide standard or control [e.g., hemoglobin, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
1. Analityczne urz adzenie chromatograficzne do wykrywania obecno sci przedmiotu analizy w próbce krwi, znamienne tym, ze zawiera no snik chromatograficzny, który definiuje drog e dla przep lywu p lynu, zdolny do zapewnienia prze- p lywu kapilarnego, miejsce nanoszenia próbki krwi w kontakcie z p lynem przep lywaj acym przez no snik chromatogra- ficzny, centrum detekcji na no sniku chromatograficznym oddalone od miejsca nanoszenia, posiadaj ace niedy- fuzyjnie zwi azan a substancj e wychwytuj aca, zwi aza- n a w tym miejscu, dyfuzyjnie zwi azan a znaczon a substancj e umieszczon a poni zej miejsca nanoszenia, dyfuzyjnie zwi azany polikation do oddzielania osocza lub surowicy z próbki krwi powy zej centrum detekcji, i dyfuzyjnie zwi azany polianion do neutralizacji po- likationu poni zej zwi azanego polikationu, a powy zej centrum detekcji. PL PL PL PL
Description
Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia: 29.12.1998 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
29.12.1998, PCT/US98/27802 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
22.07.1999, WO99/36781 PCT Gazette nr 29/99 (51) Int.Cl.
G01N 33/558 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) G01N 33/576 (2006.01) G01N 33/571 (2006.01)
| (54) Analityczne urządzenie chromatograficzne (54) oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi | |
| (30) Pierwszeństwo: 15.01.1998,US,09/007,651 | (73) Uprawniony z patentu: ABBOTT LABORATORIES,Abbott Park,US (72) Twórca(y) wynalazku: Toru Yoshimura,Chiba,JP |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: | Toshihiro Ogasawara,Chiba,JP |
| 02.07.2001 BUP 14/01 | Michihiro Saito,Chiba,JP John P. Groff,Gurnee,US |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | |
| 31.01.2008 WUP 01/08 | (74) Pełnomocnik: Wanda Kulikowska, KULIKOWSKA & KULIKOWSKI |
(57) 1. Analityczne urządzenie chromatograficzne do wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi, znamienne tym, że zawiera nośnik chromatograficzny, który definiuje drogę dla przepływu płynu, zdolny do zapewnienia przepływu kapilarnego, miejsce nanoszenia próbki krwi w kontakcie z płynem przepł ywającym przez nośnik chromatograficzny, centrum detekcji na nośniku chromatograficznym oddalone od miejsca nanoszenia, posiadające niedyfuzyjnie związaną substancję wychwytującą, związaną w tym miejscu, dyfuzyjnie związaną znaczoną substancję umieszczoną poniżej miejsca nanoszenia, dyfuzyjnie związany polikation do oddzielania osocza lub surowicy z próbki krwi powyżej centrum detekcji, i dyfuzyjnie związany polianion do neutralizacji polikationu poniżej związanego polikationu, a powyżej centrum detekcji.
PL 196 464 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem obecnego wynalazku jest analityczne urządzenie chromatograficzne do wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi.
Nowoczesne metody diagnostyki klinicznej są rutynowo przeprowadzane z użyciem próbek krwi. Jednakże, czerwone krwinki interferują z wieloma oznaczeniami diagnostycznymi. Podczas oznaczania danego przedmiotu analizy czerwone krwinki mogą inhibitować wiązania specyficznych par, partnerów reakcji. Podobnie, czerwone krwinki wykazują aktywność enzymatyczną, która w zależ ności od rodzaju wykonywanego oznaczenia, może interferować z wynikowym sygnałem. Dalej, w formacie szybkiego testu z użyciem urządzenia chromatograficznego, zwłaszcza urządzenia chromatograficznego do oznaczeń immunologicznych, czerwone krwinki mogą inhibitować przepływ płynu, który jest niezbędny dla reakcji zachodzących w urządzeniu. Z tego i innych powodów wiele metodologii oznaczeń jest przeprowadzanych na osoczu lub surowicy, które muszą być najpierw oddzielone od pełnej krwi
Istnieje wiele technik oddzielania czerwonych krwinek od próbek pełnej krwi. Wirowanie jest sposobem dobrze znanym w dziedzinie, w wyniku którego osocze (przed skrzepnięciem) i surowica (po skrzepnięciu) są oddzielane od pełnej krwi. W tej procedurze czerwone krwinki osiadają na dnie probówki, a surowica jest oddzielana poprzez dekantację lub innym sposobem. Jednakże rozwarstwianie pełnej krwi drogą wirowania ma wiele niedogodności. Wirowanie wymaga dużej próbki krwi do separacji. Dalej, sposób jest czasochłonny i wymaga skomplikowanego wyposażenia laboratoryjnego, często niedostępnego w gabinecie lekarskim. Wreszcie, dodatkowe operacje z krwią zwiększają ewentualne ryzyko narażenia na patogeny pochodzące z krwi.
W celu zmniejszenia lub wyeliminowania potrzeby wirowania, zaprojektowano urz ą dzenia analityczne, w których wykorzystuje się membrany gradientowe lub membrany wychwytujące do oddzielenia czerwonych krwinek od ciekłej próbki krwi. Stosuje się również immobilizowane przeciwciała przeciw-czerwonym krwinkom.
Inne znane techniki do oddzielania czerwonych krwinek od osocza lub surowicy obejmują: (1) łączenie próbki pełnej krwi ze środkiem wiążącym czerwone krwinki i sączenie mieszaniny przez stały sorbent, z którym jest wiązana co najmniej jedna specyficzna para partnerów reakcji w celu usunięcia aglutynowanych czerwonych krwinek; (2) przepuszczanie pełnej krwi przez włókninowy filtr szklany, który może mieć wbudowany, lub nie, reagent aglutynujący; (3) wykorzystywanie bariery lub warstwy wykluczającej materiału polisacharydowego zapobiegającej przedostawaniu się czerwonych krwinek i interferującej z detekcją lub wizualizacją sygnału w teście z suchym pasmem; i (4) użycie nośnika mającego powierzchnię polikationową, która wiąże czerwone krwinki, a nie wiąże osocza.
Wiele spośród tych technik oddzielania czerwonych krwinek od osocza jest kosztownych, skomplikowanych, może prowadzić do niepełnego oddzielenia czerwonych krwinek i może wywoływać hemolizę. Hemoliza prowadzi do niespecyficznego wiązania lub bardziej skomplikowanych procesów, powodujących zmniejszenie czułości oznaczenia. Przyczyną tego może być wolna hemoglobina, która zabarwia strefę detekcji tak, że strefa uzyskuje barwę od różowej do ciemnokasztanowej. W rezultacie wizualizowany sygnał chemiczny może być częściowo lub całkowicie przesłaniany wskutek obecności barwy hemoglobiny w strefie detekcji. Dalej, zastosowanie środka separującego, takiego jak polikation, w układzie oznaczeniowym, ma tendencję do oddziaływania z układem, często poprzez agregację innych reagentów lub partnerów wiązania, innych niż czerwone krwinki.
Stosownie do tego, istnieje zapotrzebowanie na urządzenie i sposób oznaczania przedmiotu analizy w próbce krwi, które nie oddziaływałoby niekorzystnie na układ analityczny. Takie urządzenie i sposób powinny być odpowiednie do próbek peł nej krwi o róż nej wielko ści, takż e i mał ych próbek.
Analityczne urządzenie chromatograficzne do wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi wedł ug wynalazku zawiera nośnik chromatograficzny, który definiuje drogę dla przepływu płynu, zdolny do zapewnienia przepływu kapilarnego, miejsce nanoszenia próbki krwi w kontakcie z płynem przepływającym przez nośnik chromatograficzny, centrum detekcji na nośniku chromatograficznym oddalone od miejsca nanoszenia, posiadające niedyfuzyjnie związaną substancję wychwytującą, związaną w tym miejscu, dyfuzyjnie związaną znaczoną substancję umieszczoną poniżej miejsca nanoszenia,
PL 196 464 B1 dyfuzyjnie związany polikation do oddzielania osocza lub surowicy z próbki krwi powyżej centrum detekcji, i dyfuzyjnie związany polianion do neutralizacji polikationu poniżej związanego polikationu, a powyżej centrum detekcji.
Korzystnie, urządzeniem jest urządzenie do oznaczeń immunologicznych.
Korzystnie, polikation jest związany w miejscu nanoszenia próbki krwi. Takim polikationem może być bromowodorek poli-L-lizyny, chlorowodorek poli-L-argininy, poli-L-histydynę, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 3:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 2:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 1:1, bromowodorek poli(lizyny, tryptofanu) 1:4 i poli(chlorek diallilodimetyloamoniowy).
Korzystnie, polikationem jest poli(chlorek diallilodimetyloamoniowy).
Korzystnie, polianion jest wybrany z grupy zawierającej siarczan dekstranu, poli(kwas akrylowy), poli(4-styrenosulfonian sodu), poli(kwas winylosulfonowy), poli(kwas metylometakrylowy), kwas poli-L-asparaginowy i karboksymetylocelulozę.
Korzystnie, polianionem jest siarczan dekstranu.
Korzystnie, polianion jest dyfuzyjnie związany z nośnikiem chromatograficznym w tym samym miejscu co substancja znaczona.
Korzystnie, znaczoną substancją jest substancja znaczona selenem.
Sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi według wynalazku obejmuje etapy dostarczenia nośnika chromatograficznego, który definiuje drogę dla przepływu płynu, zdolnego do zapewnienia przepływu kapilarnego, wzdłuż którego znajdują się (a) miejsce nanoszenia próbki krwi w kontakcie z płynem przepływającym przez nośnik chromatograficzny, (b) centrum detekcji na nośniku chromatograficznym oddalone od miejsca nanoszenia, posiadające niedyfuzyjnie związaną substancję wychwytującą związaną w tym miejscu, (c) substancja znaczona umieszczona poniżej miejsca nanoszenia, (d) dyfuzyjnie związany polikation do oddzielania osocza lub surowicy z próbki krwi powyżej centrum detekcji, i (e) dyfuzyjnie związany polianion do neutralizacji polikationu umieszczony poniżej związanego polikationu, a powyżej centrum detekcji;
zetknięcia miejsca nanoszenia z próbką krwi; i detekcji obecności przedmiotu analizy w próbce krwi.
Korzystnie, znaczona substancja stanowi substancję znaczoną selenem.
Korzystnie, polianion jest dyfuzyjnie związany z nośnikiem chromatograficznym w tym samym miejscu co znaczona substancja.
Korzystnie, polikation jest wybrany z grupy zawierającej bromowodorek poli-L-lizyny, chlorowodorek poli-L-argininy, poli-L-histydynę, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 3:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 2:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 1:1, bromowodorek poli(lizyny, tryptofanu) 1:4 i poli(chlorek diallilodimetylo-amoniowy).
Korzystnie, polianion jest wybrany z grupy zawierającej siarczan dekstranu, poli(kwas akrylowy), poli(4-styrenosulfonian sodu), poli(kwas winylosulfonowy), poli(kwas metylometakrylowy), kwas poli-L-asparaginowy i karboksymetylocelulozę.
Przedmiot wynalazku w przykładzie realizacji jest uwidoczniony na rysunku, na którym fig. 1 przedstawia analityczne urządzenie chromatograficzne.
Obecny wynalazek jest oparty na obserwacji, że czerwone krwinki w próbkach pełnej krwi interferują w oznaczeniach obecności lub braku przedmiotu analizy w próbce krwi, które mogą być w innych wypadkach łatwo wykonane za pomocą układów analitycznych. Na przykład w immunooznaczeniach próbka pełnej krwi po zetknięciu z miejscem nanoszenia nie ulega rozwinięciu pod działaniem sił kapilarnych wskutek przesłaniającej lub interferującej obecności czerwonych krwinek. Obecny wynalazek przezwycięża ten problem bez pogarszania czułości układu analitycznego.
Następujące definicje mogą być użyteczne dla zrozumienia praktycznych realizacji według obecnego wynalazku.
„Przedmiot analizy” lub „dany przedmiot analizy” odnosi się do związku lub kompozycji, która jest wykrywana lub oznaczana, która posiada co najmniej jeden epitop lub centrum wiążące. Substancją analizowaną może być jakakolwiek substancja, dla której istnieje naturalnie występujący specyficzny partner wiążący lub dla której specyficzny partner wiążący może być otrzymany. Przedmioty analizy obejmują, nie ograniczając zakresu, toksyny, związki organiczne, proteiny, peptydy, mikroorganizmy, aminokwasy, kwasy nukleinowe, hormony, steroidy, witaminy, leki (łącznie z tymi podawanymi w celach terapeutycznych jak również z tymi podawanymi nielegalnie) oraz metabolity lub
PL 196 464 B1 przeciwciała względem jakiejkolwiek z powyższych substancji. Termin „przedmiot analizy” obejmuje również substancje antygeniczne, hapteny, przeciwciała, makrocząsteczki i ich kombinacje.
„Nośnik chromatograficzny” odnosi się do jakiegokolwiek porowatego, absorpcyjnego, sorpcyjnego, izotropowego lub kapilarnego materiału, który zawiera centrum detekcji urządzenia, i przez który przedmiot analizy lub próbka testowa może być transportowana siłami kapilarnymi lub przez podsiąkanie. Specjalista w dziedzinie dostrzeże, że nośnik chromatograficzny może być wykonany z pojedynczego materiału lub więcej niż z jednego materiału (np. różne strefy, części, warstwy, obszary lub centra mogą być wykonane z różnych materiałów), o ile mnogie warstwy są w kontakcie z przepływającym płynem i o ile możliwy jest przepływ próbki testowej pomiędzy materiałami. Kontakt z przepływającym płynem umożliwia przechodzenie co najmniej niektórych składników próbki, tj. przedmiotu analizy, pomiędzy strefami porowatego materiału i jest korzystnie izotropowy w obrębie przestrzeni międzyfazowej pomiędzy różnymi strefami. Naturalne, syntetyczne lub naturalnie występujące materiały, które zostały syntetycznie zmodyfikowane, mogą zostać użyte jako nośnik chromatograficzny i obejmują, nie ograniczają zakresu: papier (włóknisty) lub membrany (mikroporowate) z materiałów celulozowych, takie jak papier; celulozę i pochodne celulozy, takie jak octan celulozy i nitroceluloza; włókna szklane; włókna, zarówno występujące naturalnie (np. bawełna) jak i syntetyczne (np. nylon); porowate żele; i podobne.
„Znacznik” odnosi się do jakiejkolwiek substancji, która jest zdolna do wytworzenia sygnału, który jest wykrywalny drogą wizualną lub instrumentalną. Rozmaite znaczniki odpowiednie do zastosowania w obecnym wynalazku obejmują znaczniki, które wytwarzają sygnały na drodze zarówno chemicznej jak i fizycznej. Przykłady obejmują enzymy i substraty, chromageny, związki fluoroscencyjne, związki chemiluminescencyjne, barwne lub barwione cząsteczki organicznych lateksów polimerowych oraz liposomy lub inne pęcherzyki zawierające wprost widoczne substancje. Korzystnie w obecnym wynalazku są wykorzystywane znaczniki radioaktywne, koloidalne cząstki metaliczne lub koloidalne niemetaliczne cząstki. Korzystne znaczniki obejmują cząstki koloidalnego złota oraz lateksu.
„Substancja znaczona” lub „sprzężona” odnosi się do substancji zawierającej wykrywalny znacznik dołączony do specyficznego partnera wiążącego. Połączenie może być wiązaniem kowalencyjnym lub niekowalencyjnym i może obejmować hybrydyzację kwasów nukleinowych. Znacznik powoduje, że substancja znaczona wytwarza wykrywalny sygnał, które jest bezpośrednio lub pośrednio związany z zawartością przedmiotu analizy w próbce testowej. Składnik specyficzny partner wiążący substancji znaczonej jest wybrany tak, aby wiązać się bezpośrednio lub pośrednio z przedmiotem analizy.
„Specyficzny partner wiążący” odnosi się do partnera specyficznej pary wiążącej, tj. dwóch różnych cząsteczek, z których jedna specyficznie wiąże się z drugą cząsteczką drogą chemiczną lub fizyczną. Jeśli specyficznym partnerem wiążącym jest immunoreagent, to może stanowić na przykład przeciwciało, hapten lub jego kompleks, a jeśli przeciwciało jest zastosowane, to może stanowić przeciwciało monoklonalne lub poliklonalne, proteinę rekombinacyjną lub przeciwciało, chimeryczne przeciwciało, mieszaninę(mieszaniny) lub jego fragment(fragmenty), jak również mieszaninę przeciwciał i innych specyficznych partnerów wiążących. Konkretne przykłady specyficznych partnerów wiążących obejmują biotynę i awidynę, przeciwciało i jego odpowiedni antygen (oba nie pokrewne oznaczanej próbce), pojedyncze włókno kwasu nukleinowego i jego uzupełnienie oraz podobne.
„Substancja wychwytująca” odnosi się do jednego lub więcej specyficznych partnerów wiążących, które są dołączone w obrębie lub w części nośnika chromatograficznego, tworząc jedno lub więcej „centrów wychwytujących”, w których przedmiot analizy, reagent znaczony i/lub reagent kontrolny staje się immobilizowanym na nośniku chromatograficznym. Sposób dołączenia nie ma zasadniczego znaczenia dla obecnego wynalazku. Substancja wychwytująca ułatwia obserwację wykrywalnego sygnału poprzez faktyczne odseparowanie przedmiotu analizy i/lub substancji znaczonej od nie związanych reagentów analitycznych oraz pozostałych składników próbki testowej. Substancja wychwytująca może być immobilizowana na nośniku chromatograficznym przed lub w trakcie przeprowadzania oznaczenia za pomocą odpowiedniej metody łączenia. Dalej, substancja wychwytująca może być dostarczona w pojedynczym centrum detekcji lub w mnogich centrach detekcji lub w nośniku chromatograficznym. Substancja wychwytująca może być również dostarczona w rozmaitych konfiguracjach w celu wytworzenia różnych formatów detekcji lub pomiaru. Na przykład substancja wychwytująca może być skonfigurowana jako litera, liczba, ikona lub symbol, lub ich kombinacja.
PL 196 464 B1
W szczególności obecny wynalazek dostarcza analityczne urządzenie chromatograficzne do wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce, korzystnie w próbce krwi. Urządzenie korzystnie ma postać paska chromatograficznego, mającego nośnik chromatograficzny definiujący drogę dla przepływu płynu, i który jest zdolny do zapewnienia przepływu kapilarnego, miejsce nanoszenia próbki krwi i centrum detekcji oddalone od miejsca nanoszenia do wykrywania obecności lub określania ilości obecnego przedmiotu analizy w próbce krwi. Urządzenie również zawiera substancję znaczoną (lub sprzężoną) związaną dyfuzyjnie z nośnikiem chromatograficznym. W korzystnej praktycznej realizacji substancja znaczona wiąże się z przedmiotem analizy lub konkuruje z przedmiotem analizy w wią zaniu się z centrum detekcji. Urzą dzenie zawiera dwa dodatkowe reagenty zwią zane dyfuzyjnie z noś nikiem chromatograficznym: (1) reagent separujący czerwone krwinki, powyż ej (niniejszym ruch próbki wywołany działaniem sił kapilarnych jest nazywany „ruchem w kierunku dolnym” a kierunek przeciwny jest nazywany „górnym”) centrum detekcji, który jest zdolny do oddzielenia osocza lub surowicy od próbki krwi i (2) reagent neutralizujący, poniżej reagenta separującego czerwone krwinki i powyżej centrum detekcji, w celu zneutralizowania jakiegokolwiek działania, zwłaszcza niekorzystnego działania, reagenta separującego czerwone krwinki na układ chromatograficzny.
W kontekś cie obecnego wynalazku wyrażenie „dyfuzyjnie związany” zastosowane dla danego reagenta może być zdefiniowane jako jakikolwiek reagent zastosowany według obecnego wynalazku obejmujący, nie ograniczając zakresu, substancję znaczoną, specyficznego partnera wiążącego, reagenta separującego czerwone krwinki lub reagenta neutralizującego, ma oznaczać, że reagent (reagenty) jest/są związane w sposób, który umożliwia związanym reagentom przepływ wzdłuż drogi przepływu.
Dla celów obecnego wynalazku może być wykorzystany jakikolwiek układ analityczny. Układy do oznaczeń immunologicznych są korzystne obejmując, nie ograniczając zakresu, układy bocznego przepływu, układy wzdłużnego przepływu, układy nasiąkające i zanurzane pręciki. Opis ogólny znanych układów został przytoczony poniżej.
Na ogół, na pasku chromatograficznym, co najmniej miejsce nanoszenia próbki i centrum detekcji są zlokalizowane na nośniku chromatograficznym. Roztwór próbki, w tym przypadku korzystnie próbki krwi, przypuszczalnie zawierający dany przedmiot analizy, rozwija się na nośniku chromatograficznym wskutek sił kapilarnych po wprowadzeniu w miejscu nanoszenia próbki, a substancja znaczona lub sprzężona, która jest zawarta w środkach znaczonych zlokalizowanych uprzednio na nośniku chromatograficznym w centrum detekcji proporcjonalnie lub odwrotnie proporcjonalnie do zawartości lub ilości oznaczanej substancji w roztworze próbki, wstępuje w reakcję wiązania (taką jak reakcja immunologiczna), tak że zawartość lub ilość oznaczanej substancji w roztworze próbki może być określona poprzez pomiar zawartości lub ilości tak zakumulowanej substancji znaczonej lub sprzężonej. Znane są rozmaite rodzaje pasków chromatograficznych, i wszystkie te znane paski chromatograficzne, łącznie z tymi, które zostaną opisane poniżej, mogą być użyte w obecnym wynalazku. Termin „analityczne urządzenie chromatograficzne” niniejszym stosowany oznacza pasek chromatograficzny, który jest wytwarzany w taki sposób, że może być użyty do oznaczenia i może być przechowywany oraz transportowany.
Poniżej jest opisany typowy przykład paska chromatograficznego. Miejsce nanoszenia próbki jest zlokalizowane powyżej substancji znaczonej. Gdy roztwór próbki przypuszczalnie zawierający oznaczany przedmiot analizy styka się z miejscem nanoszenia próbki, roztwór próbki rozwija się na nośniku chromatograficznym w kierunku dolnym łącznie z przedmiotem analizy, wskutek działania sił kapilarnych. Zwykle przedmiotem analizy jest związek, który wiąże się w sposób specyficzny z substancją wychwytującą utwierdzoną w centrum detekcji, lub jest związkiem, który wiąże się w sposób specyficzny z substancją sprzężoną, która wiąże się specyficznie z substancją wychwytującą w centrum detekcji. Na przykład przedmiotem analizy jest przeciwciało, podczas gdy substancją wychwytującą jest antygen lub substancja sprzężona zawierająca antygen, a przedmiotem analizy jest antygen, podczas gdy substancją wychwytująca jest przeciwciało lub substancja sprzężona zawierająca przeciwciało. Zgodnie z innym przykładem przedmiotem analizy może być kwas nukleinowy, który wiąże się z uzupełniającą substancją sprzężoną i substancją wychwytującą.
Jeśli miejsce nanoszenia próbki jest zlokalizowane powyżej miejsca substancji znaczonej, substancja znaczona może być umieszczona w sąsiedztwie miejsca nanoszenia próbki lub w pozycji oddzielonej od miejsca nanoszenia próbki.
PL 196 464 B1
Wprowadzenie substancji znaczonej może być dokonane rozmaitymi sposobami, na przykład poprzez wprowadzenie jej w pewną pozycję poza centrum detekcji paska chromatograficznego po dodaniu roztworu próbki.
Ponieważ substancja znaczona jest umieszczona w taki sposób, aby poruszała się wskutek ruchu kapilarnego roztworu próbki, substancja znaczona porusza się w kierunku dolnym po dodaniu roztworu próbki do miejsca wprowadzania próbki.
Centrum detekcji jest zlokalizowane na ogół w pozycji poniżej substancji znaczonej i w pewnej odległości od substancji znaczonej. W centrum detekcji substancja wychwytująca, która wiąże się tylko z przedmiotem analizy lub substancją sprzężoną w sposób specyficzny, lub wiąże się specyficznie z każdą z oznaczanych substancji i substancją znaczoną, jest utwierdzona na nośniku chromatograficznym. W konsekwencji w jednej praktycznej realizacji przedmiot analizy (czasami związany z substancją znaczoną ) poruszany ruchem kapilarnym roztworu próbki, wiąże się z substancją wychwytującą lub sprzężoną, która z kolei wiąże się z substancją wychwytującą. Substancja wychwytującą wiąże się z tak związaną oznaczaną substancją, wywołując zatem akumulowanie substancji znaczonej w miejscu detekcji w reakcji na zawartość lub ilość przedmiotu analizy. Alternatywnie substancja znaczona i przedmiot analizy, w wyniku ruchu kapilarnego, wiążą się konkurencyjnie z substancją wychwytującą lub sprzężoną, która z kolei wiąże się z substancją znaczoną, wywołując zatem akumulowanie substancji znaczonej odwrotnie proporcjonalnie do ilości substancji oznaczanej.
Występuje przypadek, w którym pewna znaczona substancja wiążę się zarówno z substancją wychwytującą (lub sprzężoną, która z kolei wiąże się z substancją wychwytującą) i przedmiotem analizy, ale nie jednocześnie, i w tym przypadku przedmiot analizy najpierw wiążę się z substancją znaczoną, a pozostała substancja znaczona, która nie wiąże się z substancją oznaczaną wiąże się z substancją wychwytującą. W konsekwencji zawartość lub ilość przedmiotu analizy może zostać określona poprzez zmierzenie substancji znaczonej zakumulowanej w miejscu detekcji.
Stosownie do wymagań, różne substancje są zlokalizowane powyżej centrum detekcji. Na przykład substancja sprzężona może być tak zlokalizowana w sposób umożliwiający przemieszczanie się.
W pewnych przypadkach jedno lub wię cej dodatkowych centrów detekcji moż e być rozmieszczone poniżej pierwszego centrum detekcji. Również, poniżej centrum detekcji może znajdować się dalsza ścieżka nośnika chromatograficznego, tak że roztwór próbki może być całkowicie wchłonięty lub nośnik może być zaopatrzony w materiał użyty do zaabsorbowania roztworu próbki.
A zatem zawartość lub ilość danego przedmiotu analizy w roztworze próbki moż e być wykryta poprzez zmierzenie zawartości lub ilości substancji znaczonej zakumulowanej w centrum detekcji. W jednym z przypadków moż e być to dokonane wizualnie.
Obecny wynalazek winien być zastosowany do próbki krwi, łącznie z surowicą i osoczem, ale korzystnie jest stosowany do próbki krwi zawierającej czerwone krwinki, np. pełnej krwi.
Przed oznaczeniem danego przedmiotu analizy w próbce krwi czerwone krwinki są korzystnie usuwane, jeśli oznaczenie ma działać z żądaną czułością. A zatem zgodnie z obecnym wynalazkiem, reagent separujący czerwone krwinki jest związany z nośnikiem chromatograficznym. Reagent separujący czerwone krwinki jest dyfuzyjnie związany z nośnikiem chromatograficznym. Reagent separujący czerwone krwinki jest związany z nośnikiem chromatograficznym w dowolnym miejscu, które zapewni oddzielenie czerwonych krwinek od osocza lub surowicy. Jest on związany dyfuzyjnie z nośnikiem chromatograficznym powyżej centrum detekcji. Najbardziej korzystnie reagent separujący czerwone krwinki jest dyfuzyjnie związany z miejscu nanoszenia próbki. Lokalizacja ta jest korzystna, ponieważ powoduje agregację czerwonych krwinek zaraz po naniesieniu na nośnik chromatograficzny, co minimalizuje jakiekolwiek interferencje z kapilarnym przepływem surowicy lub osocza wzdłuż nośnika
Reagent separujący czerwone krwinki według obecnego wynalazku to materiał naładowany dodatnio, taki jak polikationy, obejmujące np. bromowodorek poli-L-lizyny; chlorek poli(dimetylodialliloamoniowy) (Merquat®-100, Merguat® 280, Merquat® 550); chlorowodorek poli-Largininy; poli-L-histydyna; poli(4-winylopirydyna), chlorowodorek poli(4-winylopirydyny); usieciowana poli(4-winylopirydyna), metylowana, chlorek soli czwartorzędowej; poli(4-winylopirydyna-ko-styren); poli(fluorowodorek) poli(4-winylopirydyny); poli(p-toluenosulfonian 4-winylopirydyny); poli(tribromek 4-winylopirydyny); poli(4-winylopirolidon-ko-metakrylan dimetyloaminoetylu); usieciowany poliwinylopirolidon; poliwinylopirolidon, poli(melamino-ko-formaldehyd); częściowo metylowamy; bromek heksadimetryny; bromowodorek poli(Glu, Lys) 1:4; bromowodorek poli(Lys, Ala) 3:1; bromowodorek poli(Lys, Ala) 2:1; sukcynylowana poli-L-lizyna; bromowodorek poli(Lys, Ala) 1:1; oraz bromowodorek
PL 196 464 B1 poli(Lys, Trp) 1:4. Najbardziej korzystnym polikationem jest chlorek poli(dimetylodialliloamononiowy) (Merquat®-100).
Reagent separujący czerwone krwinki według obecnego wynalazku może być użyty w jakiejkolwiek odpowiedniej iloś ci, która zapewni oddzielenie czerwonych krwinek od reszty próbki. Korzystnie reagent separujący czerwone krwinki może znajdować się w stężeniu od około 0,04% do około 1,3% (wagowo/objętościowych), przy czym bardziej korzystnie od około 0,13% do około 0,33% (wagowo/objętościowych) i najbardziej korzystnie od około 0,20% do około 0,33% (wagowo/objętościowych).
Ładunek dodatni reagenta separującego czerwone krwinki ma tendencję do agregowania jakiegokolwiek ujemnie naładowanego reagenta znajdującego się na pasku. Na przykład substancja znaczona lub sprzężona związana z nośnikiem chromatograficznym może również ulegać agregacji działaniem reagenta separującego czerwone krwinki interferując z wiązaniem się przedmiotu analizy z substancją sprzężoną lub, w oznaczeniu konkurencyjnym, wiązanie substancji znaczonej i danego przedmiotu analizy z substancją wychwytującą w centrum detekcji lub substancją sprzężoną. W rezultacie czułość i dokładność może ulec pogorszeniu.
Zgodnie z tym, jako że reagent separujące czerwone krwinki stanowi materiał naładowany dodatnio, w obecnym wynalazku wykorzystuje się reagent neutralizujący. Reagent neutralizujący jest zdolny do neutralizowania ładunku dodatniego reagenta separującego czerwone krwinki, eliminując lub co najmniej minimalizując jakiekolwiek interferencje w układzie analitycznym wywoływane przez reagent separujący czerwone krwinki. Reagent neutralizujący jest dyfuzyjnie związany z nośnikiem chromatograficznym. Reagent neutralizujący jest umieszczony poniżej reagenta separującego czerwone krwinki i powyżej centrum detekcji, a bardziej korzystnie jest umieszczony w tym samym miejscu urządzenia chromatograficznego co związana dyfuzyjnie substancja znaczona.
Reagent neutralizujący stanowi polianion zdolny do neutralizowania ładunku dodatniego reagenta separującego czerwone krwinki. Korzystne polianiony obejmują poli(kwas akrylowy), poli(kwas akrylowy, sól Na), poli(kwas metylometakrylowy), poli(4-styrenosulfonian Na), poli(kwas winylosulfonowy), kwas poli-L-asparaginowy i karboksymetylocelulozę, przy czym siarczan dekstranu jest najbardziej korzystny.
Reagent neutralizujący może być obecny w jakiejkolwiek ilości, która działa neutralizując ładunek dodatni reagenta separującego czerwone krwinki. Na ogół stężenie reagenta neutralizującego jest uzależnione od stężenia użytego reagenta separującego czerwone krwinki. Korzystnie reagent neutralizujący jest obecny w stężeniu od około 0,33% do około 20% (wagowo/objętościowych), przy czym bardziej korzystnie około 0,34% do około 10% (wagowo/objętościowych) i najbardziej korzystnie 0,34% do 10% (wagowo/objętościowych).
Figura 1 przedstawia praktyczną realizację urządzenia immunochromatograficznego według obecnego wynalazku. Urządzenie 10 zawiera nośnik chromatograficzny 20. Na nośniku chromatograficznym 20 znajduje się miejsce nanoszenia 30 próbki krwi. W tej korzystnej praktycznej realizacji reagent separujący czerwone krwinki, tj. Merquat® 100 znajduje się w miejscu nanoszenia 30. W sąsiedztwie miejsca nanoszenia 30 znajduje się wkład zawierający substancję sprzężoną, tj. znaczoną selenem substancję wiążącą oraz środek neutralizujący, tj. siarczan dekstranu. Dalej, poniżej znajduje się centrum detekcji 50, które po przeprowadzeniu oznaczenia wykaże pasek kontrolny 60, a jeśli substancja oznaczana będzie obecna, pasek testowy 70.
W innej praktycznej realizacji wedł ug obecnego wynalazku, bufor moż e stykać się z miejscem nanoszenia, korzystnie po zetknięciu próbki z miejscem nanoszenia. Bufor pomaga zachować właściwą szybkość przepływu wzdłuż drogi przepływu na nośniku chromatograficznym. Buforem może być jakakolwiek substancja, która jest zdolna do przepływu pod działaniem sił kapilarnych wzdłuż drogi przepływu płynu, obejmują, nie ograniczając zakresu, bufor fosforanowy, solanka z buforem fosforanowym, bufor Tris-HCl, bufor węglanowy, bufor cytrynianowy, bufor HEPES (kwas 2-hydroksypiperazyno-N'-2-etanosulfonowy), bufor MOPS (kwas 3-(N-morfolino)propanosulfonowy), bufor MES (kwas 2-(N-morfolino)etanosulfonowy) i podobne. Aczkolwiek stężenie i pH może być jakimkolwiek stężeniem i pH, które będą funkcjonowały w żądanym urządzeniu analitycznym, korzystnie molarność znajduje się w zakresie od około 10 mM do około 100 mM i pH wynosi od około 5-9 i więcej, korzystnie od około 6-8, najbardziej korzystnie wykorzystywanym buforem jest 50 mM bufor fosforanowy, pH 7,4.
Objętość płynu stosowana w obecnym wynalazku zależy od wielkości urządzenia. Zgodnie z oczekiwaniem stosuje się dostateczną ilość płynu aby umożliwić przepływ płynu przez urządzenie do
PL 196 464 B1 centrum detekcji. Korzystnie objętość płynu znajduje się w zakresie około 25 μΐ do około 100 μ|, bardziej korzystnie od około 40 μl do około 60 μΚ Stosownie do tego, jeśli konieczne, bufor może być dodany w zakresie objętości od około 10 μ| do około 40 μ|, a bardziej korzystnie od około 20 μ| do około 30 μΚ
W praktycznej realizacji według Fig. 1 próbka krwi jest nanoszona w miejscu nanoszenia 30 i reagent separujący czerwone krwinki oddziela czerwone krwinki agregując je i umożliwiając aby osocze lub surowica poruszały się działaniem sił kapilarnych w dół nośnika chromatograficznego 20. Reagent neutralizujący we wkładzie sprzężonym 40 neutralizuje działanie reagenta separującego czerwone krwinki w urządzeniu 10, a substancja sprzężona i przedmiot analizy wiążą się we wkładzie sprzężonym 40. Przedmiot analizy związany z substancją sprzężoną porusza się dalej w dół do centrum detekcji 50. Jeśli dany przedmiot analizy jest obecny pojawia się pasek testowy 70. W celu sprawdzenia, że test działa poprawnie, pojawia się pasek kontrolny 60 niezależnie czy dany przedmiot analizy jest obecny czy nie.
Obecny wynalazek może korzystnie obejmować niereaktywną pokrywę lub obudowę otaczającą urządzenie. Korzystnie obudowa zawiera co najmniej nośnik chromatograficzny aby uniknąć kontaktów i zanieczyszczenia miejsc wychwytu. Obudowa może również zawierać obszar w sąsiedztwie miejsca nanoszenia ułatwiający przyjmowanie i/lub zawierający pewną objętość próbki. Dodatkowo, obudowa może zawierać wycięty obszar lub obszary w postaci litery, liczby, ikony lub symbolu, lub jakąkolwiek ich kombinację. W tej praktycznej realizacji wycięty obszar lub obszary tworzą formę szczególnego centrum detekcji, gdzie pasek jest całkowicie obudowany. Jest korzystne, aby dostateczna część paska była obudowana aby zapobiec zetknięciu nanoszonej próbki z centrami detekcji bez uprzedniego rozwinięcia na fragmencie paska.
Urządzenie i sposób według obecnego wynalazku może być zastosowany w układzie analitycznym, w którym próbka krwi zawiera dany przedmiot analizy. Przykłady korzystnych układów obejmują, nie ograniczając zakresu, następujące: wirus zapalenia wątroby C („HCV”), wirus zapalenia wątroby A („HAV”), ludzki wirus zespołu niedoboru odpornościowego („HIV”), przeciwciało przeciw antygenowi powierzchniowemu wirusa zapalenia wątroby B („HBsAb”), antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby B („HBsAg”), przeciwciało przeciw antygenowi korowemu wirusa zapalenia wątroby B („HBcAb”), antygen korowy wirusa zapalenia wątroby B („HBcAg”), płodowy antygen rakowy („CEA”), alfa-fetoproteina („AFP”), marker raka trzustki („CA19-9”), syfilis, gruźlica, malaria, leiszmanioza i gorączka Dengue.
Następujące przykłady dalej ilustrują obecny wynalazek.
Przykłady
P r z y k ł a d 1
Agregacja czerwonych krwinek względem agregacji substancji Se-sprzężonej pod wpływem polikationów.
Dla celów obecnego wynalazku agregacja czerwonych krwinek (rbc) w pełnej krwi jest oczekiwana, natomiast agregacja selenowanej substancji sprzężonej jest niepożądana. Zbadano różne polikationy aby zaobserwować, który mógłby wywoływać dostateczną agregację rbc przy minimalnej agregacji selenowanej substancji sprzężonej.
Selenowaną substancję sprzężoną rekombinacyjnej proteiny HIV-1 otrzymano w następujący sposób: najpierw przygotowano koloid selenu poddając reakcji 32 mM tlenki selenu z 91 mM kwasu L-askorbinowego w wodnym roztworze przez 72 godziny w 42°C. Ten koloid selenu rozcieńczono do gęstości optycznej 30 przy długości fali 550 nm, a następnie poddawano reakcji z 40 μg/ml rekombinacyjnej otoczkowej proteiny HIV-1 w 30 mM buforze Tris, pH 7,4 przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Tą znaczoną koloidem selenowy, sprzężoną proteinę HIV-1 rozcieńczono następnie do gęstości optycznej 30 przy długości fali 550 nm w 10 mM buforze Tris, pH 7,4, zawierającym 0,1% kazeiny i inkubowano przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Sprzężony roztwór następnie wirowano przy 1970- x g przez 20 minut w 4°C, oddzielono supernatant, a pastylkę odrzucono. Objętość 30 mM buforu Tris, pH 7,4, zawierającego 2% kazeiny, równoważną jednej dziesiątej objętości supernatantu, dodano do supernatantu. Na koniec sprzężony roztwór rozcieńczono do gęstości optycznej 10 przy długości fali 550 nm w 50 mM buforze Tris, pH 7,4, zawierającym 1% kazeiny, 2% sukrozy i 2% laktozy.
Przygotowano wodne 0,25% (wag./obj.) roztwory następujących poliokationów: bromowodorek poli-L-lizyny, ciężar cząsteczkowy (mw) 37000; chlorowodorek poli-L-argininy, mw 12100, 42400 i 92000; poli-L-histydynę, mw 18400; bromek heksadimetryny, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 3:1,
PL 196 464 B1 mw 35000; bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 2:1, mw 49300; bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 1:1, mw 41600, bromowodorek poli(lizyny, tryptofanu) 1:4, mw 38000 (wszystkie wymienione polikationy nabyto w Sigmie, St. Louis, MO); poli(chlorek diallilodimetyloamoniowy), mw 105 do 106 (Merquat®-100, Calgon, Pittsburgh, PA).
Zdolność tych polikationów do agregacji zarówno rbc w pełnej krwi lub selenowanej substancji sprzężonej obserwowano w oddzielnych reakcjach dodając 350 μΐ 0,25% roztworów różnych polikationów do równej objętości pełnej krwi lub selenowanej substancji sprzężonej. Roztwory mieszano i utrzymywano w temperaturze pokojowej przez 10 minut, a następnie agregację oceniano wizualnie. Wyniki zestawiono w tabeli 1. Jeden plus (+) oznacza słabą agregację, 2+ oznacza umiarkowaną agregację i 3+ oraz 4+ oznaczają silną agregację.
T a b e l a 1
| Agregacja | |||
| Polikation | Ciężar | Czerwone | Substancja |
| cząsteczkowy | krwinki | Se-sprzężona | |
| Poli-L-Lys HBr | 37000 | 2+ | 2+ |
| Merquat®-100 | 105 do 106 | 2+ | 2+ |
| Poli-L-Arg HCl | 12100 | 2+ | 2+ |
| Poli-L-Arg HCl | 42400 | 2+ | 2+ |
| Poli-L-Arg HCl | 92000 | 2+ | 2+ |
| Poli-L-His | 18400 | + | 4+ |
| Heksadimetryna Br | + | + | |
| Poli(Lys, Ala) 3:1 HBr | 35000 | 2+ | 2+ |
| Poli(Lys, Ala) 2:1 HBr | 49300 | + | 2+ |
| Poli(Lys, Ala) 1:1 HBr | 41600 | + | 2+ |
| Poli(Lys, Trp) 1:4 HBr | 38000 | 3+ | 3+ |
Polikation, który wywołuje agregację rbc (2+ lub większą) z minimalną agregacją selenowanej substancji sprzężonej (2+ lub mniej) byłby dobrym wyborem. Polikationy z 2+ w obu kategoriach spełniają te kryteria. Do dalszych prac wybrano HBr poli-L-lizyny i Merquat®-100, przy czym Merquat®-100 jest najbardziej wydajny w stosunku do ceny.
P r z y k ł a d 2
Zapobieganie agregacji substancji sprzężonej poprzez neutralizacje polianionem.
A. Przepływ substancji sprzężonej i zapobieganie agregacji z użyciem siarczanu dekstranu.
Przy użyciu poli-L-lizyny jako polikationowego reagenta agregującego rbc testowano różne stężenia polianionu, siarczanu dekstranu w celu zorientowania się, czy ładunek dodatni polikationu może być neutralizowany siarczanem dekstranu, a zatem czy może zapobiegać agregacji selenowej substancji sprzężonej wywoływanej przez polikation. Siarczan dekstranu dodano, gdy polikation już wywołał agregację rbc, ale przed oddziaływaniem polikationu z selenową substancją sprzężoną. Następujący eksperyment ocenia działanie polikationu i siarczanu dekstranu na agregację selenowej substancji sprzężonej i w konsekwencji jej zdolność do przepływu wzdłuż paska immunochromatograficznego.
Przygotowano pasek immunochromatograficzny zawierający wkład próbki, wkład neutralizacji, wkład sprzężony i pasek detekcji. Wkład próbki przygotowano przez namoczenie włókninowego filtru szklanego 4 mm szerokości i 20 mm długości (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) w wodnym roztworze 0,33% bromowodorku poli-L-lizyny, mw 37000 (Sigma, St. Louis, MO), a następnie wysuszenie w próżni.
Wkłady neutralizacji zawierające różne stężenia siarczanu dekstranu przygotowano mocząc filtry wykonane ze ścieru drzewnego i poliestru szerokości 4 mm i długości 13 mm (Sontara 8801, Du Pont, Wilmington, Delaware) w wodnych roztworach zawierających 0%, 1,1%, 3,3% lub 10% siarczanu dekstranu, mw 5000 (Sigma, St. Louis, MO). Po namoczeniu wkłady wysuszono w próżni.
PL 196 464 B1
Wkład sprzężony przygotowano przez namoczenie włókninowego filtra szklanego o szerokości 4 mm i dł ugoś ci 4,3 mm (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) w znaczonej koloidem selenowym sprzężonej rekombinacyjnej proteinie HIV-1, przygotowanej i rozcieńczonej jak w przykładzie 12. Po namoczeniu wkład sprzężony wysuszono w próżni.
Pasek detekcji stanowił nitrocelulozowy filtr membranowy o szerokości 4 mm i długości 40 mm (nr katalogowy H9643G1, Millipore, Bedford, MA). Antygen otoczkowy HIV-1 w stężeniu 5 mg/ml w 100 mM buforu Tris, pH 7,4, zawierają cym 1% sukrozy dodano do membrany nitrocelulozowej tak, aby utworzyć linię w poprzek szerokości paska w pozycji około 1 cm od końca membrany. Zakreślony region został powleczony laminatem poliestrowym (kod # 7733, Adhesives Research Inc., Glen Rock, PA). Całość pozostawiono do wyschnięcia, aby utwierdzić antygen na nitrocelulozie.
Przygotowano paski immunochromatograficzne szerokości 4 mm z użyciem powyższych komponentów, umieszczając je ogon-do-ogona podłużnie z 1 mm nakładaniem miedzy każdą sekcją, z 20 mm długości wkładem próbki na jednym końcu, za którym umieszczono jeden z 13 mm długości wkładów neutralizacji, następnie 4,3 mm długości wkładem sprzężonym, i na zakończenie z 40 mm długości paskiem detekcji. Przygotowany pasek nastę pnie powleczono laminatem poliestrowym (kod # 8648, Adhesives Research Inc., Glen Rock, PA) od góry paska detekcji do 10 mm od dołu paska, pozostawiając w przybliżeniu eksponowane 10 mm wkładu próbki. Osiemdziesiąt μΐ osocza następnie naniesiono na wkłady próbek każdego z pasków immunochromatograficznych zawierających wkłady neutralizacji z 0%, 1,1%, 3,3% lub 10% siarczanu dekstranu. Agregację czerwonej selenowej substancji sprzężonej i zdolność substancji sprzężonej do przepływu wzdłuż paska obserwowano wizualnie.
Wyniki, przedstawione w poniższej tabeli 2, wskazują, że w nieobecności siarczanu dekstranu neutralizującego ładunek roztworu polikationu, selenowa substancja sprzężona ulega agregacji i nie jest w stanie przepływać wzdłuż paska. Występuje zależność odwrotnie proporcjonalna pomiędzy agregacją substancji sprzężonej i przepływem, przy czym stężenia siarczanu dekstranu 3,3% lub wyższe są dostateczne, aby zapobiec agregacji substancji sprzężonej i umożliwić jej przepływ wzdłuż paska.
T a b e l a 2
| Stężenie siarczanu dekstranu | Agregacja substancji sprzężonej | Przepływ substancji sprzężonej |
| 0% | ++ | - |
| 1,1% | + | +/- |
| 3,3% | - | + |
| 10% | - | + |
B. Agregacja rbc w obecności siarczanu dekstranu.
W celu oszacowania działania siarczanu dekstranu na agregację rbc powyższy eksperyment powtórzono z użyciem pełnej krwi jako próbki z 10% siarczanem dekstranu na wkładzie neutralizacji o długości 4,3 mm i szerokości 4 mm. Po przygotowaniu paska immunochromatograficznego, jak powyżej, naniesiono 80 μl pełnej krwi na wkład próbki. Piętnaście minut później obserwowano wizualnie wynik agregacji rbc i zmierzono zdolność uzyskanego osocza do przepływu wzdłuż paska. Agregowane rbc były zatrzymywane na wkładzie próbki i nie przepływały na pasek, podczas gdy osocze przepływało 33 mm wzdłuż paska w trakcie 15 minut. Wskazuje to, że polikation we wkładzie próbki wciąż był w stanie wywoływać agregację rbc w próbce pełnej krwi, a obecność polianionu, siarczanu dekstranu, we wkładzie próbki nie oddziaływała z tą agregacją rbc.
C. Zapobieganie agregacji substancji sprzężonej przez polianiony.
Przebadano inne polianiony w celu oszacowania ich zdolności do zapobiegania agregacji selenowej substancji sprzężonej, tak jak w przykładzie 2.A. Wkład próbki o długości 15,5 m i szerokości 4 mm namoczono w wodnym roztworze zawierającym 0,26% Merquat®-100, a następnie wysuszono w 55°C. Nie użyto wkładów neutralizacji, natomiast selenową substancję sprzężoną rozcieńczono w 10 mM buforze Tris, pH 7,4, zawierającym 1% kazeiny, 2% sukrozy, 2% laktozy i 0%, 1,1% lub 3,3% polianionu, siarczanu dekstranu, mw 5000 (Sigma, St. Louis, MO) lub 0%, 0,5%, 1% lub 2% jednego z następujących polianionów (wszystkie z Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI): poli(kwas akrylowy), mw 5000; poli(4-styrenosulfonian sodu), mw 70000; poli(sól sodowa kwasu winylosulfenowego); poli(kwas metylometakrylowy), mw 9500; poli(sól sodowa kwasu akrylowego), mw 2100.
PL 196 464 B1
Wkłady substancji sprzężonej namoczono w różnych roztworach selenowej substancji sprzężonej wysuszono w próżni. Pasek detekcji przygotowano jak w przykładzie 2.A. i przygotowano paski immunochromatograficzne. Pięćdziesiąt μΐ osocza następnie naniesiono na wkłady próbek każdego z pasków immunochromatograficznych zawierających wkłady substancji sprzężonej z rozmaitymi polianionami. Agregację czerwonej selenowej substancji sprzężonej obserwowano wizualnie. Tabela 3 przedstawia względne udziały agregacji substancji sprzężonej obserwowane przy różnych stężeniach testowanych polianionów.
T a b e l a 3
| Agregacja selenowej substancji sprzężonej | |||||
| Stężenie polianionu | |||||
| Polianion | 0% | 0,5% | 1-1,1% | 2% | 3,3% |
| Siarczan dekstranu | ++ | nt | + | nt | - |
| Poli(kwas akrylowy) | ++ | - | - | - | nt |
| Poli(kwas 4-styrenosulfonowy, sól Na) | ++ | + + | ++ | + | nt |
| Poli(kwas winylosulfonowy) | ++ | - | - | - | nt |
| Poli(kwas metylometakryIowy) | ++ | - | - | - | nt |
| Poli(kwas akrylowy, sól Na) | ++ | +/- | +/- | - | nt |
nt = nie badano
Jak poprzednio, selenowa substancja sprzężona ulegała agregacji w nieobecności polianionu, który neutralizowałby ładunek dodatni polikationu z wkładu próbki (który jest konieczny dla agregacji rbc przy testowaniu pełnej krwi).
Wszystkie polianiony stosowane we wkładzie substancji sprzężonej zapobiegały agregacji substancji sprzężonej co najmniej przy jednym z testowanych stężeń. Eksperyment ten wykazał również, że polianion nie musi być nanoszony we wkładzie separacji, ale może być łączony z selenową substancją sprzężoną we wkładzie substancji sprzężonej.
P r z y k ł a d 3
Zastosowanie siarczanu dekstranu we wkładzie neutralizacji względem wkładu substancji sprzężonej w oznaczeniu przeciwciał HIV-1.
Paski immunochromatograficzne przygotowano jak w przykładzie 2.A. zarówno z lub bez wkładu neutralizacji -włókninowego filtra szklanego o szerokości 4 mm i długości 4,3 mm (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH). Jeśli stosowano, wkład neutralizacji moczono w wodnym roztworze zawierającym 3,3% siarczanu dekstranu, a następnie suszono w próżni w paskach bez wkładu neutralizacji selenową substancję sprzężoną rozcieńczano w 10 mM buforze Tris, pH 7,4, zawierającym 1% kazeiny, 2% sukrozy, 2% laktozy i 3,3% siarczanu dekstranu, i wkład substancji sprzężonej moczono w tym roztworze, a następnie suszono w próżni Zastosowano wkład próbki taki jak w przykładzie 2.A., z wyjątkiem tego, że był moczony w wodnym roztworze 0,2% Merquat®-100.
Ludzką surowicę zawierającą przeciwciała HIV-1 rozcieńczono 1:2048 w pełnej krwi HIV negatywnej (względem objętości osocza) o wartości hematokrytu 50% lub w ludzkim osoczu HIV negatywnym. Wykonano trzy dalsze 1:2 seryjne rozcieńczenia, ponownie z użyciem zarówno pełnej krwi jak i osocza jako rozcieńczalnika. Osiemdziesiąt μl negatywnej pełnej krwi lub próbki HIV-pozytywne z serii rozcieńczeń pełną krwią dodano do wkładu próbki pasków immunochromatograficznych przygotowanych z siarczanem dekstranu w oddzielnym wkładzie neutralizacji lub siarczanem dekstranu w roztworze selenowej substancji sprzężonej we wkładzie substancji sprzężonej. Osiemdziesiąt μl negatywnego osocza lub próbki HIV-pozytywne z serii rozcieńczeń osoczem testowano tylko na paskach immunochromatograficznych z siarczanem dekstranu we wkładzie substancji sprzężonej. Wyniki odczytano 15 minut po naniesieniu próbki (tabela 4). Wynik pozytywny wykazuje czerwone zabarwienie na pasku detekcji, gdzie czerwony selenowy antygen HIV-1 kompleksu substancji sprzężonej-przeciwciała HIV-1 jest związany z antygenem HIV-1 w zakreślonym obszarze paska. Wynik negatywny wykazuje brak zabarwienia w tym obszarze na pasku detekcji.
PL 196 464 B1
T a b e l a 4
| Siarczan dekstranu we wkładzie neutralizacji | Siarczan dekstranu we wkładzie substancji sprzężonej | ||
| Rozcieńczenie próbki | Pełna krew | Pełna krew | Osocze |
| 1:2048 | + | + | + |
| 1:4096 | + | + | + |
| 1:8192 | - | + | + |
| 1:16384 | nt | - | - |
| Negatywna próba kontrolna | - | - | - |
nt = nie badano
Wyniki w tabeli 4 wskazują, że przeciwciała HIV-1 są wykrywalne w pełnej krwi w oznaczeniu za pomocą paska immunochromatograficznego z użyciem polikationu Merquat®-100 w celu agregacji rbc i umożliwienia przepływu próbki wzdłuż paska oraz siarczanu dekstranu jako reagenta neutralizującego, zapobiegającego agregacji selenowej substancji sprzężonej przez polikation i umożliwiającego wiązanie substancji sprzężonej i tworzenie kompleksu dla próbki pozytywnej oraz przepływ do obszaru detekcji. Wykazano, że polianion jest skuteczny zarówno gdy jest użyty w oddzielnym wkładzie neutralizacji lub gdy jest połączony z selenową substancją sprzężoną we wkładzie substancji sprzężonej. W tym oznaczeniu czułość wykrywania przeciwciał HIV-1 wykazuje 2-krotną poprawę, gdy polianion (siarczan dekstranu) został użyty we wkładzie substancji sprzężonej niż w oddzielnym wkładzie neutralizacji.
W dodatku wyniki w tabeli 4 wykazują , ż e polikation skutecznie agreguje rbc w peł nej krwi, na co wskazuje identyczna czułość wykrywania przeciwciał HIV-1 zarówno dla pełnej krwi, gdzie rbc muszą ulegać agregacji aby zapewnić przepływ próbki, lub dla osocza, gdzie nie ma rbc utrudniających przepływ próbki. Dowodzi to również, że obecność polianionu zarówno w oddzielnym wkładzie neutralizacji lub we wkładzie substancji sprzężonej nie interferuje ze zdolnością polikationu do skutecznego wywoływania agregacji rbc w pełnej krwi.
P r z y k ł a d 4
Zastosowanie Merquat® i rozmaitych polianionów w oznaczeniu HBsAg
Przygotowano paski immunochromatograficzne do wykrywania antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby B (HBsAg) w próbkach pełnej krwi. Zastosowano Merquat®-100 jako polikation do agregacji rbc we wkładzie próbki i rozmaite polianiony oceniano we wkładzie substancji sprzężonej jako reagenty neutralizujące polikation w celu zapobiegania agregacji selenowej substancji sprzężonej.
Przygotowano paski immunochromatograficzne zawierające wkład próbki, wkład substancji sprzężonej i pasek detekcji. Wkład próbki przygotowano mocząc włókninowy filtr szklany w wodnym roztworze 0,26% Merquat®-100, a następnie susząc go w 55°C.
Selenową substancję sprzężoną przygotowano z użyciem koloidu selenu, jak w przykładzie 1, oraz 12 μg/ml mysiego monoklonalnego przeciwciała względem HBsAg (przeciw-HBs). Tą znaczoną koloidem selenu przeciw-HBs substancję sprzężoną rozcieńczono następnie do gęstości optycznej 2,6 przy długości fali 550 nm w buforze Tris zawierającym jeden z następujących polianionów: 0,5% poli(kwas akrylowy), mw 2000 (PAA-240000); 0,5% siarczan dekstranu, mw 5000; 0,8% kwas poli-L-asparaginowy, mw 36300; 0,5% karboksymetylocelulozę, mw 90000 (CMC). Siarczan dekstranu i kwas poli-L-asparaginowy pochodziły z Sigmy, St. Louis, MO, a pozostałe polianiony pochodziły z Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.
Wkład substancji sprzężonej przygotowano poprzez namoczenie włókninowego filtra szklanego o szerokości 4 mm i długości 4,3 mm w znaczonej koloidem selenu substancji sprzężonej przeciw-HBs, przygotowanej i rozcieńczonej jednym z powyższych polianionów. Po namoczeniu wkład substancji sprzężonej wysuszono w próżni.
Pasek detekcji stanowił membranowy filtr nitrocelulozowy o szerokości 4 mm i długości 40 mm, przygotowany jak w przykładzie 2 z użyciem mysich monoklonalnych przeciw-HBs w stężeniu 3 mg/ml i dodanych do membrany nitrocelulozowej, tak że tworzy linię w poprzek szerokości paska
PL 196 464 B1 w odległ o ś ci około 1 cm od zakoń czenia membrany. Zakreś lony obszar powleczono laminatem poliestrowym. Całość pozostawiono do wyschnięcia aby utwierdzić przeciwciała na nitrocelulozie.
Przygotowano paski immunochromatograficzne z użyciem powyższych komponentów umieszczając je podłużnie ogon-do-ogona z 1 mm nakładaniem, z wkładem próbki na jednym zakończeniu, obok którego umieszczono wkład substancji sprzężonej, a na końcu pasek detekcji. Przygotowany pasek następnie powleczono laminatem poliestrowym pozostawiając w przybliżeniu 10 mm eksponowanego wkładu próbki.
Dodano rekombinacyjną HBsAg do HBsAg negatywnej ludzkiej pełnej krwi o wartości hematokrytu 50% do stężenia 12,5 ng/ml. Dokonano trzy dalsze seryjne rozcieńczenia pełną krwią. Pięćdziesiąt μΐ negatywnej pełnej krwi lub próbki z serii rozcieńczeń pozytywnej HBsAg pełnej krwi dodano do wkładu próbki pasków immunochromatograficznych przygotowanych z rozmaitymi polianionami we wkładzie substancji sprzężonej. Wyniki odczytano 15 minut po naniesieniu próbki (tabela 5). Wynik pozytywny wykazał czerwone zabarwienie na pasku detekcji, gdzie czerwony selenowy kompleks przeciw-HBs-substancji sprzężonej-HBsAg został związany z przeciw-HBs w zakreślonym obszarze paska. Wynik negatywny wykazał brak zabarwienia w tym obszarze na pasku detekcji. Agregację czerwonej substancji sprzężonej na początku paska detekcji obserwowano wizualnie.
T a b e l a 5
| Stężenie HBsAg (ng/ml) | ||||||
| Polianion | 12,5 | 6,25 | 3,13 | 1,56 | 0 | Agregacja substancji sprzężonej |
| PAA-2000 | + | + | + | - | - | - |
| PAA-240000 | + | + | - | - | - | + |
| Siarczan dekstranu | + | + | + | - | - | - |
| Poli-L-Asp | + | + | + | - | - | - |
| CMC | + | - | - | - | - | + |
Aczkolwiek wszystkie polianiony umożliwiały wykrycie HBsAg, polianiony zapobiegające agregacji substancji sprzężonej: PAA-2000, siarczan dekstranu i kwas poli-L-asparaginowy, wykazywały 2 do 4 razy bardziej czułą detekcję HBsAg dla próbek pełnej krwi.
Powyższy eksperyment powtórzono z użyciem znaczonej koloidem selenu substancji sprzężonej rozcieńczonej w buforze Tris zawierającym PAA-2000 jako polianion, z tym wyjątkiem, że dodano 25 μl 50 mM buforu fosforanowego, pH 7,4, do wkładu próbki jedną minutę po dodaniu próbek pełnej krwi HBsAg. Wyniki uzyskane z zastosowaniem tej procedury z dodaniem buforu po naniesieniu próbki były identyczne z wynikami bez tego etapu. A zatem te oznaczenia mogą być wykonane zarówno z lub bez dodawania buforu po naniesieniu próbki.
P r z y k ł a d 5
Zastosowanie Merquat® i siarczanu dekstranu w oznaczeniu w przypadku gruźlicy.
Paski immunochromatograficzne przygotowano do detekcji przeciwciał Mycobacterium tuberculosis (przeciw-Mtb) dla próbek pełnej krwi. Zastosowano Merquat®-100 jako polikation w celu agregacji rbc we wkładzie próbki i oceniano zapobieganie agregacji selenowej substancji sprzężonej dla różnych stężeń polianionu, siarczanu dekstranu - reagenta neutralizującego polikation, we wkładzie substancji sprzężonej.
Przygotowano paski immunochromatograficzne zawierające wkład próbki, wkład substancji sprzężonej i pasek detekcji. Wkład próbki przygotowano mocząc włókninowy filtr szklany o szerokości 4 mm i długości 15,5 mm w wodnym roztworze 0,26% Merquat®-100, a następnie susząc w próżni.
Selenową substancję sprzężoną przygotowano z użyciem koloidu selenu, jak w przykładzie 1, i 3,5 μg/ml rekombinacyjnego antygenu Mtb z E. coli. Tą znaczoną koloidem selenu substancję sprzężoną Mtb następnie rozcieńczono do gęstości optycznej 2,5 przy długości fali 50 nm w buforze Tris zawierającym 0%, 0,34%, 1,1% lub 3,3% siarczanu dekstranu.
Wkład substancji sprzężonej przygotowano mocząc włókninowy filtr szklany o szerokości 4 mm i długości 4,3 mm w znaczonej koloidem selenu substancji sprzężonej Mtb, przygotowanej i rozcieńczonej jednym z powyższych roztworów siarczanu dekstranu. Po namoczeniu wkład wysuszono w próżni.
PL 196 464 B1
Pasek detekcji stanowił membranowy filtr nitrocelulozowy o szerokości 4 mm i długości 40 mm przygotowany jak w przykładzie 2 z użyciem rekombinacyjnego antygenu Mtb w stężeniu 0,15 mg/ml i dodanego do membrany nitrocelulozowej, tak aby utworzyć linię w poprzek szerokoś ci paska oddaloną o około 1 cm od końca membrany. Zakreślony obszar powleczono laminatem poliestrowym. Całość pozostawiono do wyschnięcia aby utwierdzić antygen na nitrocelulozie.
Przygotowano paski immunochromatograficzne z użyciem powyższych komponentów umieszczając je podłużnie ogon-do-ogona z 1 mm nakładaniem, z wkładem próbki na jednym zakończeniu, obok którego umieszczono wkład substancji sprzężonej, a na końcu pasek detekcji. Przygotowany pasek następnie powleczono laminatem poliestrowym pozostawiając w przybliżeniu 10 mm eksponowanego wkładu próbki.
Surowicę przeciw-Mtb pozytywną rozcieńczono 1:100 ludzką negatywną pełną krwią o wartości hematokrytu 50%. Wykonano dwa dalsze seryjne rozcieńczenia 1:2 pełną krwią. Pięćdziesiąt μΐ negatywnej pełnej krwi lub próbki z serii rozcieńczeń przeciw-Mtb pozytywnej pełnej krwi dodano do wkładu próbki pasków immunochromatograficznych przygotowanych z różnymi stężeniami siarczanu dekstranu we wkładzie substancji sprzężonej. Wyniki odczytano 15 minut po naniesieniu próbki (tabela 6). Wynik pozytywny wykazywał czerwone zabarwienie na pasku detekcji, gdzie czerwony kompleks selenu substancja sprzężona Mtb-przeciw-Mtb został związany z Mtb w zakreślonym obszarze paska. Wynik negatywny wykazywał brak zabarwienia w tym obszarze na pasku detekcji. Agregację czerwonej selenowej substancji sprzężonej na początku paska detekcji obserwowano wizualnie.
T a b e l a 6
| Siarczan dekstranu | Rozcieńczenie przeciw-Mtb | ||||
| (%) | 1:100 | 1:200 | 1:400 | Neg. próba kontrolna | Agregacja substancji sprzężonej |
| 0 | - | - | - | - | ++ |
| 0,34 | - | - | - | - | ++ |
| 1,1 | + | - | - | - | + |
| 3,3 | + | + | - | - | - |
Dane w tabeli 6 wykazują, że oznaczenie nie działa w nieobecności polianionu, w tym przypadku siarczanu dekstranu, zapobiegającego agregacji substancji sprzężonej. Występuje zależność odwrotnie proporcjonalna pomiędzy agregacją substancji sprzężonej i czułością oznaczenia. Przy stężeniu 3,3% siarczanu dekstranu nie zachodzi agregacja substancji sprzężonej i oznaczenie wykazuje najbardziej czułą detekcję przeciw-Mtb.
P r z y k ł a d 6
Oznaczenie dla syfilisu z użyciem Merquat® i siarczanu dekstranu.
Przygotowano paski immunochromatograficzne do wykrywania przeciwciał Treponema pallidum (przeciw-TP) w próbkach pełnej krwi lub osocza. Poprzez porównanie czułości detekcji w pełnej krwi oraz w osoczu można określić czy rbc w pełnej krwi są efektywnie agregowane przez polikation, tak aby nie interferowały z oznaczeniem i nie zmniejszały czułości detekcji w oznaczeniu. Merquat®-100 zastosowano jako polikation w celu agregacji rbc we wkładzie próbki, a polianion, siarczan dekstranu, zastosowano we wkładzie substancji sprzężonej jako reagent neutralizujący polikation w celu zapobiegania agregacji selenowej substancji sprzężonej.
Przygotowano paski immunochromatograficzne zawierające wkład próbki, wkład substancji sprzężonej i pasek detekcji. Wkład próbki przygotowano mocząc włókninowy filtr szklany o szerokości 4 mm i długości 15,5 w wodnym 0,2% roztworze Merquat®-100, a następnie susząc w 55°C.
Selenową substancję sprzężoną przygotowano z użyciem koloidu selenu, jak w przykładzie 1, i 7,5 μl lizatu Treponema pallidum (TP). Tą znaczoną koloidem selenu substancję sprzężoną TP rozcieńczono następnie do gęstości optycznej 2,8 przy długości fali 550 nm w buforze Tris zawierającym 3,3% siarczanu dekstranu.
Wkład substancji sprzężonej przygotowano mocząc włókninowy filtr szklany o szerokości 4 mm i długości 4,3 mm w znaczonej koloidem selenu substancji sprzężonej TP, przygotowanej powyżej. Po namoczeniu wkład substancji sprzężonej wysuszono w próżni.
PL 196 464 B1
Pasek detekcji stanowił membranowy filtr nitrocelulozowy o szerokości 4 mm i długości 40 mm, przygotowany jak w przykładzie 2 z użyciem lizatu Treponema pallidum w stężeniu 44 μg/ml i dodanego do membrany nitrocelulozowej, tak aby utworzyć linię w poprzek szerokości paska oddaloną o około 1 cm od końca membrany. Zakreślony obszar powleczono laminatem poliestrowym. Całość pozostawiono do wyschnięcia aby utwierdzić lizat TP na nitrocelulozie.
Przygotowano paski immunochromatograficzne z użyciem powyższych komponentów umieszczając je podłużnie ogon-do-ogona z 1 mm nakładaniem, z wkładem próbki na jednym zakończeniu, obok którego umieszczono wkład substancji sprzężonej, a na końcu pasek detekcji. Przygotowany pasek następnie powleczono laminatem poliestrowym pozostawiając w przybliżeniu 10 mm eksponowanego wkładu próbki.
Surowice przeciw-TP pozytywną rozcieńczono 1:10,8 ludzką negatywną pełną krwią o wartości hematokrytu 50% lub negatywnym ludzkim osoczem. Wykonano cztery dalsze seryjne rozcieńczenia 1:2, ponownie pełną krwią lub osoczem jako rozcieńczalnikiem. Sześćdziesiąt μl negatywnej pełnej krwi lub osocza, lub próbki z serii rozcieńczeń przeciw-TP pozytywnej pełną krwią lub osoczem dodano do wkładu próbki pasków immunochromatograficznych. Wyniki odczytano 15 minut po naniesieniu próbki (tabela 7). Wynik pozytywny wykazywał czerwone zabarwienie na pasku detekcji, gdzie czerwony kompleks selenu substancja sprzężona TP-przeciw-TP został związany z lizatem TP w zakreślonym obszarze paska. Wynik negatywny wykazywał brak zabarwienia w tym obszarze na pasku detekcji.
Tabela 7 wykazuje, że czułość detekcji przeciw-TP jest taka sama dla pełnej krwi i osocza, wskazując, że polikation, Merquat®-100, skutecznie agreguje rbc w próbkach pełnej krwi.
T a b e l a 7
| Rozcieńczenie próbki przeciw-TP | Pełna krew | Osocze |
| 1:10,8 | + | + |
| 1:21,6 | + | + |
| 1:43,2 | + | + |
| 1:86,4 | + | + |
| 1:172,8 | - | - |
| Negatywna próba kontrolna | - | - |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (14)
1. Analityczne urządzenie chromatograficzne do wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi, znamienne tym, że zawiera nośnik chromatograficzny, który definiuje drogę dla przepływu płynu, zdolny do zapewnienia przepływu kapilarnego, miejsce nanoszenia próbki krwi w kontakcie z płynem przepływającym przez nośnik chromatograficzny, centrum detekcji na nośniku chromatograficznym oddalone od miejsca nanoszenia, posiadające niedyfuzyjnie związaną substancję wychwytującą, związaną w tym miejscu, dyfuzyjnie związaną znaczoną substancję umieszczoną poniżej miejsca nanoszenia, dyfuzyjnie związany polikation do oddzielania osocza lub surowicy z próbki krwi powyżej centrum detekcji, i dyfuzyjnie związany polianion do neutralizacji polikationu poniżej związanego polikationu, a powyżej centrum detekcji.
2. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że stanowi urządzenie do oznaczeń immunologicznych.
3. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że polikation jest związany w miejscu nanoszenia próbki krwi.
4. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że polikation wybrany jest z grupy zawierającej bromowodorek poli-L-lizyny, chlorowodorek poli-L-argininy,
PL 196 464 B1 poli-L-histydynę, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 3:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 2:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 1:1, bromowodorek poli(lizyny, tryptofanu) 1:4 i poli(chlorek diallilodimetylo-amoniowy).
5. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 4, znamienne tym, że polikationem jest poli(chlorek diallilodimetyloamoniowy).
6. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że polianion jest wybrany z grupy zawierającej siarczan dekstranu, poli(kwas akrylowy), poli(4-styrenosulfonian sodu), poli(kwas winylosulfonowy), poli(kwas metylometakrylowy), kwas poli-L-asparaginowy i karboksymetylocelulozę.
7. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że polianionem jest siarczan dekstranu.
8. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że polianion jest dyfuzyjnie związany z nośnikiem chromatograficznym w tym samym miejscu co substancja znaczona.
9. Analityczne urządzenie chromatograficzne według zastrz. 1, znamienne tym, że znaczoną substancją jest substancja znaczona selenem.
10. Sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi, znamienny tym, że dostarcza się nośnik chromatograficzny, który definiuje drogę dla przepływu płynu, zdolny do zapewnienia przepływu kapilarnego, wzdłuż którego znajdują się (a) miejsce nanoszenia próbki krwi w kontakcie z płynem przepływającym przez nośnik chromatograficzny, (b) centrum detekcji na nośniku chromatograficznym oddalone od miejsca nanoszenia, posiadające niedyfuzyjnie związaną substancję wychwytującą związaną w tym miejscu, (c) substancja znaczona umieszczona poniżej miejsca nanoszenia, (d) dyfuzyjnie związany polikation do oddzielania osocza lub surowicy z próbki krwi powyżej centrum detekcji, i (e) dyfuzyjnie związany polianion do neutralizacji polikationu umieszczony poniżej związanego polikationu, a powyżej centrum detekcji;
styka się miejsca nanoszenia z próbką krwi; i dokonuje się detekcji obecności przedmiotu analizy w próbce krwi.
11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że znaczona substancja stanowi substancję znaczoną selenem.
12. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że polianion jest dyfuzyjnie związany z nośnikiem chromatograficznym w tym samym miejscu co znaczona substancja.
13. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że polikation jest wybrany z grupy zawierającej bromowodorek poli-L-lizyny, chlorowodorek poli-L-argininy, poli-L-histydynę, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 3:1, bromowodorek poli(lizyny, alaniny) 2:1, bromowodorem poli(lizyny, alaniny) 1:1, bromowodorek poli(lizyny, tryptofanu) 1:4 i poli(chlorek diallilodimetyloamoniowy).
14. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że polianion jest wybrany z grupy zawierającej siarczan dekstranu, poli(kwas akrylowy), poli(4-styrenosulfonian sodu), poli(kwas winylosulfonowy), poli(kwas metylometakrylowy), kwas poli-L-asparaginowy i karboksymetylocelulozę.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/007,651 US6673629B2 (en) | 1998-01-15 | 1998-01-15 | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |
| PCT/US1998/027802 WO1999036781A1 (en) | 1998-01-15 | 1998-12-29 | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL342658A1 PL342658A1 (en) | 2001-07-02 |
| PL196464B1 true PL196464B1 (pl) | 2008-01-31 |
Family
ID=21727406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL342658A PL196464B1 (pl) | 1998-01-15 | 1998-12-29 | Analityczne urządzenie chromatograficzne oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6673629B2 (pl) |
| EP (2) | EP1371984B1 (pl) |
| JP (1) | JP4270751B2 (pl) |
| KR (1) | KR100575390B1 (pl) |
| CN (2) | CN1213303C (pl) |
| AR (1) | AR014312A1 (pl) |
| AT (2) | ATE244890T1 (pl) |
| AU (1) | AU748387B2 (pl) |
| BR (1) | BR9814007A (pl) |
| CA (1) | CA2318459C (pl) |
| CO (1) | CO5090841A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ294954B6 (pl) |
| DE (2) | DE69830675T2 (pl) |
| DK (2) | DK1371984T3 (pl) |
| ES (2) | ES2244861T3 (pl) |
| HK (1) | HK1035027A1 (pl) |
| HU (1) | HU225975B1 (pl) |
| ID (1) | ID26635A (pl) |
| IL (1) | IL136236A (pl) |
| LT (1) | LT2000071A (pl) |
| MY (1) | MY129171A (pl) |
| NO (1) | NO327714B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ504710A (pl) |
| PL (1) | PL196464B1 (pl) |
| PT (2) | PT1047943E (pl) |
| TR (1) | TR200002051T2 (pl) |
| TW (1) | TW594012B (pl) |
| UY (1) | UY25351A1 (pl) |
| WO (1) | WO1999036781A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA9811953B (pl) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60142394D1 (de) * | 2000-06-28 | 2010-07-29 | Panasonic Corp | Biozensor |
| EP1336845B1 (en) * | 2000-10-27 | 2013-03-27 | DENKA SEIKEN Co., Ltd. | Method of diagnosing nephropathy |
| JP2002303629A (ja) * | 2001-04-06 | 2002-10-18 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫クロマトデバイス及びそれを用いた被検物質測定方法 |
| US6841159B2 (en) * | 2002-01-30 | 2005-01-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Rapid lateral flow assay for determining exposure to Mycobacterium tuberculosis and other mycobacteria |
| KR20060059849A (ko) * | 2002-08-02 | 2006-06-02 | 에미 스미다 | 혈소판 다혈장의 조제 방법 |
| EP1592505A2 (en) * | 2003-01-21 | 2005-11-09 | Micronics, Inc. | Method and system for microfluidic manipulation, amplification and analysis of fluids, for example, bacteria assays and antiglobulin testing |
| CA2544627A1 (en) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | Elan Pharma International Ltd. | Nanoparticulate compositions having a peptide as a surface stabilizer |
| SE0400662D0 (sv) | 2004-03-24 | 2004-03-24 | Aamic Ab | Assay device and method |
| SE527036C2 (sv) * | 2004-06-02 | 2005-12-13 | Aamic Ab | Analysanordning med reglerat flöde och motsvarande förfarande |
| GB0417601D0 (en) * | 2004-08-06 | 2004-09-08 | Inverness Medical Switzerland | Assay device & method |
| ES2408655T3 (es) * | 2004-09-23 | 2013-06-21 | Tripath Imaging, Inc. | Recubrimientos poliméricos policatiónicos para inmovilizar muestras biológicas |
| US7816122B2 (en) * | 2005-10-18 | 2010-10-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Lateral flow device with onboard reagents |
| DE102005056592A1 (de) * | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Basf Ag | Herstellung und Verwendung von hochfunktionellen, hoch-oder hyperverzweigten Polylysinen |
| US7618810B2 (en) * | 2005-12-14 | 2009-11-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Metering strip and method for lateral flow assay devices |
| US20080023395A1 (en) * | 2006-07-31 | 2008-01-31 | Sigma Aldrich Co. | Compositions and Methods for Isolation of Biological Molecules |
| WO2008031020A2 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Wyeth | Arginine wash in protein purification using affinity chromatography |
| GB0623866D0 (en) * | 2006-11-29 | 2007-01-10 | Wilson Stuart M | Capture of mycobacteria like micro-organisms |
| BRPI0719425A2 (pt) * | 2006-11-29 | 2014-02-25 | Microsens Medtech Ltd | Métodos para a captura de uma amostra de microrganismos tendo uma superfície hidrofóbica, e para a detecção de um microorganismo, e, kit de ensaio de microrganismo |
| US20080261247A1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-10-23 | Parviz Lalezari | Method of detecting red cell antigen-antibody reactions |
| CN101750244B (zh) * | 2008-10-13 | 2014-03-12 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种分离血液样本中红细胞的方法以及运用 |
| EP2269737B1 (en) | 2009-07-02 | 2017-09-13 | Amic AB | Assay device comprising serial reaction zones |
| KR100946566B1 (ko) * | 2009-11-18 | 2010-03-11 | 주식회사 인포피아 | 측방 유동 면역 분석 디바이스 |
| US20120302456A1 (en) * | 2010-11-23 | 2012-11-29 | President And Fellows Of Harvard College | Vertical flow-through devices for multiplexed elisa driven by wicking |
| US9880164B2 (en) | 2012-03-30 | 2018-01-30 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting object in red blood cell-containing sample |
| EP3351937B1 (en) | 2012-03-30 | 2019-09-11 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic test strip for detecting object in red blood cell-containing sample |
| JP6399632B2 (ja) * | 2013-10-02 | 2018-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップ、および該テストストリップを使用するイムノクロマトグラフィー |
| EP3057600B1 (en) | 2013-10-18 | 2019-03-13 | Fortus Medical, Inc. | Method of preparing a bone marrow aspirate enhanced bone graft |
| US10422798B2 (en) | 2014-12-16 | 2019-09-24 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic test strip for detecting object in red blood cell-containing sample and immunochromatography using the test strip |
| EP3294144B1 (en) | 2015-05-08 | 2023-07-26 | ForCyte Medical, LLC | Bone fragment and tissue harvesting system |
| JP6675834B2 (ja) * | 2015-05-21 | 2020-04-08 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法 |
| US20190025298A1 (en) * | 2016-01-15 | 2019-01-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for detecting an analyte |
| JP6738608B2 (ja) * | 2016-01-22 | 2020-08-12 | 田中貴金属工業株式会社 | クロマトグラフ媒体 |
| US10456502B2 (en) | 2016-09-07 | 2019-10-29 | Fortus Medical, Inc. | Bone void filler preparation system |
| WO2018132619A1 (en) * | 2017-01-11 | 2018-07-19 | Hemodus Medical, Llc | Method of estimating blood volume |
| US11602588B2 (en) | 2017-06-07 | 2023-03-14 | Forcyte Medical, Llc | Connective tissue progenitor cell aspiration and processing system |
| WO2019182788A1 (en) | 2018-03-22 | 2019-09-26 | Fortus Medical, Inc. | Osteomedullary tissue processing system |
| CN110308276A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-10-08 | 郑州轻工业学院 | 一种增加黄曲霉毒素b1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液 |
| JP2022537297A (ja) * | 2019-06-20 | 2022-08-25 | ユーシービー バイオファルマ エスアールエル | タンパク質試料におけるｈｐｌｃに基づく凝集剤の検出 |
| CN110823670B (zh) * | 2019-11-27 | 2023-03-24 | 香港大德昌龙生物科技有限公司 | 用于分离血细胞的组合物、血细胞分离方法、检测试剂盒和检测装置 |
| CA3230920A1 (en) * | 2021-09-10 | 2023-03-16 | Jason J. SUN | Agglutinating agents, devices and methods for whole blood assays |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4308232A (en) * | 1979-07-09 | 1981-12-29 | Sherwood Medical Industries Inc. | Anticoagulant stopper coating |
| DE3029579C2 (de) * | 1980-08-05 | 1985-12-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut |
| US5073484A (en) | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| US4594327A (en) | 1983-11-02 | 1986-06-10 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Assay method for whole blood samples |
| US4678757A (en) * | 1985-04-11 | 1987-07-07 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Device and method for whole blood separation and analysis |
| US4806311A (en) * | 1985-08-28 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Multizone analytical element having labeled reagent concentration zone |
| US4935147A (en) * | 1985-12-20 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
| US4753776A (en) | 1986-10-29 | 1988-06-28 | Biotrack, Inc. | Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter |
| US5120643A (en) | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
| CA1318588C (en) | 1988-01-19 | 1993-06-01 | Henry Jeong | Method and device for separating plasma from red cells |
| US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
| US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
| US5670381A (en) | 1988-01-29 | 1997-09-23 | Abbott Laboratories | Devices for performing ion-capture binding assays |
| DE3903114A1 (de) * | 1989-02-02 | 1990-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines enzyms aus einem isoenzymgemisch sowie hierfuer geeigneter testtraeger und dessen verwendung |
| US4933092A (en) | 1989-04-07 | 1990-06-12 | Abbott Laboratories | Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood |
| US5306623A (en) * | 1989-08-28 | 1994-04-26 | Lifescan, Inc. | Visual blood glucose concentration test strip |
| US5435970A (en) * | 1989-12-18 | 1995-07-25 | Environmental Diagnostics, Inc. | Device for analysis for constituents in biological fluids |
| US5212060A (en) | 1990-04-27 | 1993-05-18 | Genesis Labs, Inc. | Dry test strip comprising a dextran barrier for excluding erythrocytes |
| US5186843A (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-16 | Ahlstrom Filtration, Inc. | Blood separation media and method for separating plasma from whole blood |
| EP0586268B1 (en) * | 1992-07-06 | 2000-02-23 | Terumo Kabushiki Kaisha | A pathogenic substance removing material and a blood filter comprising said material |
| AU706456B2 (en) | 1995-03-27 | 1999-06-17 | Lifescan, Inc. | Chemical timer for a direct-reading reagent test strip |
| US5725774A (en) | 1995-04-07 | 1998-03-10 | Lxn Corp. | Whole blood separation method and devices using the same |
| US5753497A (en) * | 1995-12-22 | 1998-05-19 | Universal Health Watch Inc | Diagnostic assay providing blood separation |
-
1998
- 1998-01-15 US US09/007,651 patent/US6673629B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 AT AT98966118T patent/ATE244890T1/de active
- 1998-12-29 TR TR2000/02051T patent/TR200002051T2/xx unknown
- 1998-12-29 DK DK03009811T patent/DK1371984T3/da active
- 1998-12-29 ES ES03009811T patent/ES2244861T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CN CNB031579124A patent/CN1213303C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CA CA2318459A patent/CA2318459C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DK DK98966118T patent/DK1047943T3/da active
- 1998-12-29 IL IL13623698A patent/IL136236A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 HU HU0100557A patent/HU225975B1/hu unknown
- 1998-12-29 EP EP03009811A patent/EP1371984B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 ID IDW20001354A patent/ID26635A/id unknown
- 1998-12-29 EP EP98966118A patent/EP1047943B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 BR BR9814007-8A patent/BR9814007A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-12-29 AT AT03009811T patent/ATE298425T1/de active
- 1998-12-29 ES ES98966118T patent/ES2202931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 NZ NZ504710A patent/NZ504710A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 KR KR1020007007787A patent/KR100575390B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 PT PT98966118T patent/PT1047943E/pt unknown
- 1998-12-29 MY MYPI98005927A patent/MY129171A/en unknown
- 1998-12-29 PL PL342658A patent/PL196464B1/pl unknown
- 1998-12-29 CN CN98813110A patent/CN1125343C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69830675T patent/DE69830675T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 JP JP2000540442A patent/JP4270751B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CZ CZ20002606A patent/CZ294954B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 AU AU22092/99A patent/AU748387B2/en not_active Expired
- 1998-12-29 DE DE69816339T patent/DE69816339T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 WO PCT/US1998/027802 patent/WO1999036781A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-29 PT PT03009811T patent/PT1371984E/pt unknown
- 1998-12-30 ZA ZA9811953A patent/ZA9811953B/xx unknown
-
1999
- 1999-01-13 CO CO99001481A patent/CO5090841A1/es unknown
- 1999-01-14 UY UY25351A patent/UY25351A1/es not_active IP Right Cessation
- 1999-01-15 AR ARP990100131A patent/AR014312A1/es active IP Right Grant
- 1999-04-03 TW TW088100600A patent/TW594012B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-07-11 NO NO20003569A patent/NO327714B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 LT LT2000071A patent/LT2000071A/lt unknown
-
2001
- 2001-08-09 HK HK01105549A patent/HK1035027A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL196464B1 (pl) | Analityczne urządzenie chromatograficzne oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi | |
| JP2948318B2 (ja) | 特異的結合アッセイ用の赤血球の分離方法 | |
| US5824268A (en) | Rapid self-contained assay format | |
| FI92883B (fi) | Testimenetelmä ja reagenssikitti sitä varten | |
| JP7330945B2 (ja) | 分析物検出の改善のためのアッセイ法 | |
| EP0299428A2 (en) | Process for immunochromatography with colloidal particles | |
| WO1996036878A9 (en) | Rapid self-contained assay format | |
| KR20060109595A (ko) | 개선된 측면 이동 면역분석법과 이를 위한 디바이스 | |
| US20070092978A1 (en) | Target ligand detection | |
| EP1086375A1 (en) | Colloidal colorimetric flow through and lateral flow assays utilizing soluble submicron particles | |
| JP4437211B2 (ja) | 免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法およびそれに用いる検体分析用具 | |
| EP0884594A2 (en) | Analyte-fixation immunochromatographic device | |
| CN218331595U (zh) | IgG抗体亚型检测试剂盒 | |
| CA1335321C (en) | Process for immunochromatography with colloidal particles | |
| MXPA00006963A (en) | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |