LT2000071A - Polikatijonų neutralizavimas chromotografijos įtaise, skirtame neapdorotam kraujuj analizuoti - Google Patents
Polikatijonų neutralizavimas chromotografijos įtaise, skirtame neapdorotam kraujuj analizuoti Download PDFInfo
- Publication number
- LT2000071A LT2000071A LT2000071A LT2000071A LT2000071A LT 2000071 A LT2000071 A LT 2000071A LT 2000071 A LT2000071 A LT 2000071A LT 2000071 A LT2000071 A LT 2000071A LT 2000071 A LT2000071 A LT 2000071A
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- poly
- chromatographic
- conjugate
- sample
- hydrobromide
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 86
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 86
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 title description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 93
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 77
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 53
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 51
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 51
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 50
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 48
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 47
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 41
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 37
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 32
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 16
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 16
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 14
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 14
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 9
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 9
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 8
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims description 8
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 8
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 6
- UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N Angelic acid Natural products CC=C(C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 5
- UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N tiglic acid Chemical compound C\C=C(/C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N 0.000 claims description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 4
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 claims description 4
- NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N vinylsulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C=C NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 polyphysine Chemical compound 0.000 claims description 3
- 238000007813 chromatographic assay Methods 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims 2
- 229920001464 poly(sodium 4-styrenesulfonate) Polymers 0.000 claims 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 96
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 44
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 44
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 16
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 14
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 13
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 12
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 12
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 12
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 11
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 9
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 9
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 9
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 9
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 5
- 150000003342 selenium Chemical class 0.000 description 5
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 229920000075 poly(4-vinylpyridine) Polymers 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- RCMPDPZUFZOHKM-BTVCFUMJSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O RCMPDPZUFZOHKM-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 2
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMGRUKXSXEPFQ-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridin-1-ium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound C=CC1=CC=[NH+]C=C1.CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 FWMGRUKXSXEPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYPSPXFRXXXUNB-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridine;hydrochloride Chemical compound Cl.C=CC1=CC=NC=C1 DYPSPXFRXXXUNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241001070941 Castanea Species 0.000 description 1
- 235000014036 Castanea Nutrition 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000004772 Sontara Substances 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 244000078885 bloodborne pathogen Species 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000002801 charged material Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- AJFWXXBXHSCCMK-UHFFFAOYSA-N chloromethane;4-ethenylpyridine Chemical compound ClC.C=CC1=CC=NC=C1 AJFWXXBXHSCCMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229940000986 dextran 110 Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229920001456 poly(acrylic acid sodium salt) Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N selenium dioxide Chemical compound O=[Se]=O JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- XFTALRAZSCGSKN-UHFFFAOYSA-M sodium;4-ethenylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC=C(C=C)C=C1 XFTALRAZSCGSKN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BWYYYTVSBPRQCN-UHFFFAOYSA-M sodium;ethenesulfonate Chemical class [Na+].[O-]S(=O)(=O)C=C BWYYYTVSBPRQCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 238000009600 syphilis test Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/5695—Mycobacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
- G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
- G01N2333/162—HIV-1, HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, DC4-Binding site
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/20—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/35—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/824—Immunological separation techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/105831—Protein or peptide standard or control [e.g., hemoglobin, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
POLIKATIJONŲ NEUTRALIZAVIMAS CHROMATOGRAFIJOS ĮTAISE SKIRTAME NEAPDOROTAM KRAUJUI ANALIZUOTI Išradimo technikos sritis Šis išradimas yra susijęs su chromatografinio testavimo įtaisais ir analitės nustatymo būdu neapdoroto kraujo mėginyje, o konkrečiau su jtaisu ir būdu, naudojant eritrocitus atskiriantį agentą eritrocitams agreguoti ir neutralizavimo agentą bet kokiems neigiamiems efektams, kuriuos gali duoti eritrocitus atskiriantis agentas j testavimo sistemą, pašalinti.
Ankstesnis technikos lygis
Modernūs klinikinės diagnostikos metodai yra paprastai atliekami imant kraujo mėginius. Deja, eritrocitai trukdo daugeliui diagnostinių nustatymų. Nustatant analitę, eritrocitai gali inhibuoti surišimą tarp specifiškai susirišančių poros narių. Be to, eritrocitai pasižymi fermentiniu aktyvumu, kuris, priklausomai nuo naudojamo testo, gali trukdyti signalo gavimui. Dar daugiau, greitame teste, kuriame naudojamas chromatografinio testavimo įtaisas, ypatingai chromatografinio imunotestavimo įtaisas, eritrocitai gali trukdyti skysčio slinkimui, kurio reikia, kad įtaise vyktų reakcijos. Dėl šių ir kitų priežasčių daugelis tyrimų atliekami su plazma arba serumu, kurie turi būti pirmiausia išskiriami iš kraujo mėginio.
Eritrocitų atskyrimui nuo plazmos iš kraujo mėginio yra žinoma daug metodikų. Gerai žinomas šioje srityje būdas yra centrifugavimas, kuriame plazma (prieš sukrešėjimą) ir serumas (po sukrešėjimo) yra išskiriami iš kraujo. Šioje procedūroje eritrocitai nusėda ant mėgintuvėlio dugno, o serumas yra atskiriamas nudekantuojant arba kokiu nors kitu būdu. Tačiau toks kraujo sluoksniavimas centrifugavimo būdu turi daug nepatogumų. Bendrai paėmus, centrifugavimas reikalauja, kad būtų imami dideli kraujo mėginiai. Be to, šis būdas užima daug laiko ir reikalauja gremėzdiškos laboratorinės įrangos, dažniausiai nesančios gydymo įstaigoje. Pagaliau papildomos manipuliacijos su krauju didina sąlyčio su kraujo kilmės patogenais riziką.
Norint sumažint arba pašalinti centrifugavimo poreikį, buvo sukurti testavimo įtaisai, kuriuose naudojamos gradientinės membranos arba sulaikančios membranos atskirti eritocitams nuo skystosios kraujo dalies. Taip pat buvo naudojami imobilizuoti anti-eritocitiniai antikūnai.
Kitos žinomos metodikos eritrocitams atskirti nuo plazmos arba serumo yra: (1) kraujo mėginio sumaišymas su eritocitus surišančiu agentu, mišinio nufiltravimas per kietą drėgmę sugeriantį elementą, prie kurio yra prijungtas bent vienas specifiškai surišančios poros narys sulipusiems eritrocitams pašalinti; (2) kraujo perleidimas per stiklinį mikropluoštinį filtrą, kuriame gali būti arba nebūti įterptas sulipinantis agentas; (3) panaudojimas barjero arba išskiriančio sluoksnio iš polisacharidinės medžiagos, kad eritrocitai nepatektų ir netrukdytų signalo detektavimui arba vizualizavimui ant sausos testavimo justelės; ir (4) naudojimas pagrindo, turinčio polikatijoninį paviršių, kuris suriša eritocitus, bet nesuriša plazmos.
Dauguma iš šių eritocitų atskyrimo nuo plazmos metodikų yra brangiai kainuojančios, komplikuotos, gali nepilnai atskirti eritrocitus ir gali sukelti hemolizę. Hemolizė duoda nespecifinį surišimą arba didelius fonus, sukeliančius testo jautrumo sumažėjimą. Tai gali būti dėl laisvo hemoglobino, kuris nuspalvina detektavimo zoną taip, kad ši zona gali įgyti spalvą nuo rožinės iki-tamsiai kaštoninės. Dėl šios priežasties hemoglobino spalvos buvimas detektavimo zonoje gali visiškai arba dalinai nustelbti vizualinį cheminį signalą. Be to, atskiriančio agento, tokio. kaip polikatijonas, panaudojimas testavimo sistemoje linkęs trukdyti sistemai, apart eritrocitų, dažniausiai dėl kitų reagentų arba rišiklių agregacijos.
Taigi, egzistuoja poreikis sukurti prietaisą ir būdą analitei nustatyti kraujo mėginyje nepaveikiant nepalankiai testavimo sistemos. Toks prietaisas ir būdas turėtų būti tinkamas įvairaus dydžio neapdoroto kraujo mėginiams, įskaitant mažus mėginius. 94 3 Išradimo santrauka Šis išradimas yra susijęs su chromatografiniu įtaisu, apimančiu apibrėžiantį skysčio kelią chromatografinį nešiklį, galintį palaikyti kapiliarinį tekėjimą, minėto kraujo mėginio uždėjimo vietą skysčio kelyje, duodančią sąlytį su chromatografiniu nešikliu, detektavimo vietą ant chromatografinio nešiklio, esančią toliau nuo uždėjimo vietos, difuziškai prijungtą žymėtą medžiagą, esančią pasroviui nuo uždėjimo vietos, difuziškai prijungtą eritrocitus atskiriantį agentą plazmos arba serumo išskyrimui iš kraujo mėginio, esantį prieš srovę nuo detektavimo vietos, ir difuziškai prijungtą neutralizuojantį agentą, galintį susijungti su atskiriančiu agentu, esantį pasroviui nuo prijungto atskiriančio agento ir prieš srovę nuo minėtos detektavimo vietos, tokiu būdu neutralizuojant minėto atskiriančio agento teigiamą krūvį. Pageidautina, kad eritrocitus atskiriantis agentas būtų prie uždėjimo vietos taip, kad eritrocitai būtų atskiriami nuo serumo arba plazmos prieš pradedant serumui arba plazmai slinkti chromatografiniu nešikliu. Šis išradimas taip pat yra skirtas analitės buvimo mėginyje, pageidautina kraujo mėginyje, nustatymo būdui, kuris apima pateikimą apibrėžiančio skysčio kelią chromatografinio nešiklio, galinčio palaikyti kapiliarinį tekėjimą, kuriame yra išdėstyta (a) minėto kraujo mėginio uždėjimo vieta skysčio kelyje, duodanti sąlytį su minėtu chromatografiniu nešikliu, (b) detektavimo vieta ant chromatografinio nešiklio, esanti toliau nuo uždėjimo vietos, (c)- difuziškai prijungta žymėta medžiaga, esanti pasroviui nuo uždėjimo vietos, (d) difuziškai prijungtas eritrocitus atskiriantis agentas plazmos arba serumo išskyrimui iš kraujo mėginio, esantis prieš srovę nuo detektavimo vietos, ir (e) difuziškai prijungtas neutralizuojantis agentas, galintis susijungti su atskiriančiu agentu, esantis pasroviui nuo prijungto atskiriančio agento ir prieš srovę nuo minėtos detektavimo vietos, tokiu būdu neutralizuojant minėto atskiriančio agento teigiamą krūvį; uždėjimo vietos ir kraujo mėginio suleidimą į sąlytį taip, kad eritrocitus atskiriantis agentas išskiria plazmą arba serumą iš kraujo mėginio, o neutralizuojantis agentas 95 4 neutralizuoja atskiriančio agento teigiamą krūvį, kai mėginys slenka srauto keliu; ir analitės nustatymą kraujo mėginyje.
Trumpas figūrų aprašymas
Fig.1 pavaizduotas ši išradimo chromatografinio testavimo įtaiso tinkamiausias įgyvendinimo variantas.
Smulkus išradimo aprašymas Šis išradimas yra paremtas pastebėjimu, kad eritrocitai neapdoroto kraujo mėginiuose trukdo nustatyti analitės buvimą arba jos kiekį kraujo mėginyje, ką kitu atveju labai nesunku padaryti panaudojant testavimo sistemas. Pavyzdžiui, imunotestavimo atveju mažai tikėtina, kad neapdoroto kraujo mėginys, suleistas į sąlytį su uždėjimo vieta, slinks juostelė dėka kapiliarinio poveikio, nes tam trukdo eritrocitų buvimas. Šiame išradime tokia problema yra įveikiama nepažeidžiant testo sistemos jautrumo.
Toliau duodami apibrėžimai gali būti naudingi šio išradimo įgyvendinimo variantams suprasti. “Analitė" arba “dominanti analitė” reiškia norimą nustatyti arba išmatuoti junginį arba kompoziciją, kurie turi bent vieną epitopą arba rišančią vietą. Analitė gali būti bet kokia medžiaga, kuriai yra gamtoje esantis analitę specifiškai surišantis narys arba kuriai gali būti pagamintas analitę specifiškai surišantis narys. Analitėmis yra, bet jomis neapsiribojama, toksinai, organiniai junginiai, baltymai, peptidai, mikroorganizmai, aminorūgštys, nukleorūgštys, hormonai, steroidai, vitaminai, vaistai (įskaitant vartojamus terapiniams tikslams bei vartojamus uždraustiems tikslams) ir bet kurios iš aukščiau minėtų medžiagų metabolitai arba antikūnai prieš šias medžiagas. Terminas “analitė” taip pat apima bet kokias antigenines medžiagas, haptenus, antikūnus, makromolekules ir jų derinius. “Chromatografinis nešiklis" reiškia bet kokią tinkamą porėtą, absorbuojančią, drėgmę sugeriančią, izotropinę arba kapiliarinę medžiagą, 5 I ' 96 kurioje yra įtaiso detektavimo vieta ir per kurią gali judėti analitė arba tiriamasis mėginys dėl kapiliarinio arba įsiurbiančio poveikio. Specialistams bus suprantama, kad chromatografinis nešiklis gali būti padarytas iš vienos medžiagos arba daugiau nei vienos medžiagos (pvz., skirtingos zonos, dalys, sluoksniai, plotai arba vietos gali būti padarytos iš skirtingų medžiagų) taip, kad įvairiarūšiai sluoksniai užtikrina tiriamojo mėginio perėjimą iš vienos medžiagos j kitą. Tekančių skysčių sąlytis leidžia pereiti mažiausiai kelioms mėginio komponentėms, t.y. analitei, tarp poringos medžiagos zonų ir geriausia, kai šis perėjimas yra vienodas per sąlyčio tarp įvairių zonų ribą. Chromatografiniais nešikliais gali būti naudojamos gamtinės, sintetinės arba gamtinės sintetiškai modifikuotos medžiagos; jie apima, jais neapsiribojant, popierių (pluoštinį) arba celiuliozinių medžiagų, kaip antai popieriaus, membranas (mikroporines); celiuliozę ir celiuliozės darinius, tokius kaip celiuliozės acetatas ir nitroceliuliozė; stiklo pluoštą; kaip natūralų (pvz. medvilnę), taip ir sintetinį (pvz. nailoną) audinį; poringus gelius; ir pan.' “Žymė” reiškia bet kokią medžiagą, kuri gali duoti signalą, nustatomą vizualiniais arba instrumentiniais būdais. Įvairios žymės, tinkamos naudoti šiame išradime, apima žymes, kurios duoda signalus arba cheminiais, arba fizikiniais būdais. Jų pavyzdžiais yra fermentai ir substratai, chromagenai, fluorescuojantys junginiai, chemiliuminescuojantys junginiai, spalvotos arba nudažomos organinio polimero latekso dalelės ir liposomos arba kitos pūslelės, turinčios tiesiogiai matomų medžiagų. Geriausia šiame išradime naudoti radioaktyvias žymes, metalų koloidines daleles arba nemetalų koloidines daleles. Tinkamiausios žymės yra koloidinio aukso ir latekso dalelės. “Žymėtoji medžiaga” arba “konjugatas” reiškia medžiagą, kurioje yra detektuojama žymė, prijungta prie specifiškai surišančio nario. Prijungimas gali būti kovalentinis arba nekovalentinis ryšys, o taip pat gali būti nukleorūgščių hibridizacija. Žymė suteikia žymėtajai medžiagai galimybę duoti signalą, kuris yra tiesiogiai arba netiesiogiai susijęs su analitės kiekiu tiriamajame mėginyje. Žymėtosios medžiagos specifiškai surišančio nario 97 6 komponentas yra parinktas taip, kad jis tiesiogiai arba netiesiogiai susijungtų su analite. “Specifiškai surišantis narys" reiškia specifiškai susirišančios poros, t.y. dviejų skirtingų molekulių, kur viena iš molekulių specifiškai rišasi su antrąja molekule cheminiais arba fizikiniais būdais, narį. Jeigu specifiškai surišantis narys yra imunoreagentas, jis gali būti, pavyzdžiui, antikūnas, antigenas, haptenas arba jo kompleksas, ir jeigu yra naudojamas antikūnas, jis gali būti monokloninis arba polikloninis antikūnas, rekombinantinis baltymas arba antikūnas, chimerinis antikūnas, jų mišinys(-ai) arba fragmentas(-ai), o taip pat antikūno ir kitų specifiškai surišančių narių mišinys. Konkrečiais specifiškai surišančių narių pavyzdžiais yra biotinas ir avidinas, antikūnas ir jj atitinkantis antigenas (abu neturintys ryšio su tiriamu mėginiu), viengrandė nukleorūgštis ir jos komplementas ir pan. “Sulaikanti medžiaga” reiškia vieną arba daugiau specifiškai surišančių narių, prijungtų viduje arba ant chromatografinio nešiklio dalies, sudarant vieną arba daugiau “sulaikymo vietų”, kur analitė, žymėtasis reagentas ir/arba kontrolinis reagentas imobilizuojasi ant chromatografinio nešiklio. Prijungimo būdas nėra labai svarbus šiame išradime. Sulaikanti medžiaga palengvina detektuojamo signalo stebėjimą, atskirdama analitę ir/arba žymėtąją medžiagą nuo nesujungtų testavimo reagentų ir likusių tiriamojo mėginio komponentų. Sulaikanti medžiaga gali būti imobilizuota ant chromatografinio nešiklio prieš bandymo atlikimą arba atliekant bandymą, panaudojant bet kokį tinkamą prijungimo būdą. Be to, sulaikanti medžiaga gali būti pateikiama vienoje detektavimo vietoje arba keliose vietose ant chromatografinio nešiklio arba jo viduje, Sulaikanti medžiaga gali būti pateikiama įvairiausiomis konfigūracijomis, gaunant įvairius detektavimo arba matavimo formatus. Pavyzdžiui, sulaikanti medžiaga gali būti raidės, skaičiaus, ženklo, simbolio arba bet kokio jų derinio konfigūracijos.
Konkrečiau kalbant, šiame išradime pateikiamas chromatografinio testavimo įtaisas analitės buvimo nustatymui mėginyje, pageidautina kraujo mėginyje. Geriausia, kad įtaisas būtų chromatografinės juostelės formos, turinčios chromatografinį nešiklį, kuris apibrėžia skysčio judėjimo kelią ir gali
7 I 98 palaikyti kapiliarinį tekėjimą, kraujo mėginio uždėjimo vietą ir detektavimo vietą, nutolusią nuo uždėjimo vietos, analitės buvimui arba jos kiekiui kraujo mėginyje nustatyti. Pageidautina, kad jtaise taip pat būtų žymėtoji medžiaga (arba konjugatas), difuziškai prijungta prie chromatografinio nešiklio. Tinkamiausiame įgyvendinimo variante žymėtoji medžiaga prisijungs prie analitės arba konkuruos su analite dėl prisijungimo detektavimo vietoje. Pageidautina, kad įtaise būtų du papildomi agentai, difuziškai prijungti prie chromatografinio nešiklio: (1) eritrocitus atskiriantis agentas, esantis prieš srovę (čia ir toliau kapiliarinio poveikio sukelto mėginio judėjimo kryptis yra vadinama “pasroviui", o priešinga kryptis vandinama “prieš srovę") nuo detektavimo vietos, kuris gali išskirti plazmą arba serumą iš kraujo mėginio, ir (2) neutralizuojantis agentas, esantis pasroviui nuo eritrocitus atskiriančio agento ir prieš srovę nuo detektavimo vietos, kad būtų neutralizuojamas bet koks, ypatingai nepalankus, eritrocitus atskiriančio agento efektas į chromatografijos sistemą. Šio išradimo kontekste terminas “difuziškai prijungtas”, taikomas duotam reagentui, gali būti apibrėžiamas kaip bet koks šiame išradime naudojamas reagentas, įskaitant (bet neapsiribojant) žymėtąją medžiagą, specifiškai surišantį narį, eritrocitus atskiriantį agentą arba neutralizavimo agentą, ir reiškia, kad reagentas (-ai) yra prijungti tokiu būdu, kuris leidžia prijungtam (-iems) reagentui(-ams) judėti pagal srovę. Šio išradimo tikslams gali būti naudojama bet kokia testavimo sistema. Tinkamiausios yra imunotestavimo sistemos, įskaitant (bet neapsiribojant) šoninio srauto sistemas, vertikalaus srauto sistemas, įsisiurbimo sistemas ir įmerkiamus strypelius. Toliau duodamas žinomų testavimo sistemų bendras aprašymas.
Paprastai chromatografinėje juostelėje ant chromatografinio nešiklio yra apibrėžta bent jau mėginio uždėjimo vieta ir detektavimo vieta. Mėginio tirpalas, šiuo atveju pageidautina, kad tai būtų kraujo mėginys, kuriame galima įtarti, kad yra dominanti analitė, uždėjus jį ant uždėjimo vietos, slenka chromatografiniu nešikliu dėl kapiliarinio poveikio, o žymėtoji medžiaga arba konjugatas, kuris yra laikomas žymėjimo priemonėse, išdėstytose ant 8 8 O o chromatografinio nešiklio iš anksto, yra sukaupti detektavimo vietoje tiesiogine arba atvirkštine proporcija nustatomos medžiagos buvimui arba kiekiui mėginio tirpale, kurį veikia surišimo reakcija (tokia kaip imunologinė reakcija), taip, kad mėginio tirpale nustatomos medžiagos buvimas arba kiekis gali būti nustatomas matuojant tokiu būdu susikaupusios žymėtosios medžiagos arba konjugato buvimą arba kiekj. Yra žinomi įvairūs chromatografinių juostelių tipai, ir visos šios žinomos chromatografinės juostelės, įskaitas tas, kurios bus aprašytos vėliau, gali būti naudojamos šiame išradime. Čia naudojamas terminas “chromatografinio testavimo įtaisas” reiškia chromatografinę juostelę, kuri yra pagaminta taip, kad ji gali būti naudojama testavimui ir gali būti laikoma bei transportuojama.
Toliau aprašomas tipiškas chromatografinės juostelės pavyzdys. Mėginio uždėjimo vieta gali būti toje pačioje vietoje, kurioje yra žymėtoji medžiaga, bet geriau, kai ji yra prieš srovę nuo žymėtosios medžiagos. Kai mėginio tirpalas, kuriame įtariama, kad gali būti analitės, suleidžiamas į sąlytį su mėginio uždėjimo vieta, mėginio tirpalas slenka chromatografinių nešikliu kartu su analite dėl kapiliarinių jėgų veikimo. Paprastai analitė yra junginys, kuris susiriša specifiniu būdu su sulaikančia medžiaga, fiksuota detektavimo vietoje, arba ji yra junginys, kuris susiriša specifiniu būdu su konjugatu, kuris specifiškai susiriša su sulaikančia medžiaga detektavimo vietoje. Pavyzdžiui, analitė yra antikūnas, kai sulaikanti medžiaga yra antigenas arba konjugatas turintis antigeną, ir analitė yra antigenas, kai sulaikantį medžiaga yra antikūnas arba konjugatas turintis antikūną. Dar kitas pavyzdys: analite gali būti nukleorūgštis, kuri jungiasi prie komplementaraus konjugato ir rišančios medžiagos.
Kai mėginio uždėjimo vieta yra prieš srovę nuo žymėtosios medžiagos, žymėtoji medžiaga gali būti greta mėginio uždėjimo vietos arba padėtyje, nutolusioje nuo mėginio uždėjimo vietos. Žymėtąją medžiagą galima pridėti įvairiais būdais, pavyzdžiui, padedant ją į tam tikrą padėtį už chromatografinės juostelės detektavimo vietos ribų po mėginio tirpalo pridėjimo. 9 )
Kadangi žymėtoji medžiaga yra tokia, kuri juda dėl mėginio tirpalo kapiliarinio poveikio, žymėtoji medžiaga juda pasroviui, kai j mėginio pridėjimo priemones pridedama mėginio tirpalo.
Detektavimo vieta paprastai yra pasroviui nuo žymėtosios medžiagos ir tam tikru atstumu nutolusi nuo žymėtosios medžiagos. Detektavimo vietoje prie chromatografinio nešiklio yra prijungta sulaikanti medžiaga, kuri specifiniu būdu susijungia tik su analite arba konjugatu, arba specifiškai susijungia su kiekviena iš nustatomų medžiagų ir žymėtąja medžiaga. Dėl šios priežasties viename įgyvendinimo variante analitė (kartais prijungta prie žymėtosios medžiagos), stumiama mėginio tirpalo kapiliarinio poveikio, susiriša su sulaikančia medžiaga arba su konjugatu, kuris savo ruožtu susiriša su sulaikančia medžiaga. Žymėtoji medžiaga prisijungia prie tokiu būdu prijungtos nustatomos medžiagos, ir taip sukaupiama žymėtoji medžiaga detektavimo priemonėse, gaunant atsaką j analitės buvimą arba kiekį. Kitu atveju žymėtoji medžiaga ir analitė, stumiamos kapiliarinio poveikio, prisijungia konkurentiškai prie sulaikančios medžiagos, tokiu būdu veikdamos žymėtosios medžiagos susikaupimą atvirkštine proporcija nustatomos medžiagos kiekiui. Būna atvejų, kai tam tikra žymėtoji medžiaga susijungia ir su sulaikančia medžiaga (arba konjugatu, kuris savo ruožtu susijungia su sulaikančia medžiaga), ir su analite, bet ne vienu metu, ir tokiu atveju pirmiausia prie žymėtosios medžiagos prisijungia analitė, o likusi žymėtoji medžiaga,' kuri neprisijungė prie nustatomos medžiagos, prisijungia prie sulaikančios medžiagos. Tada analitės buvimas arba kiekis gali būti nustatomas matuojant susikaupusią žymėtąją medžiagą detektavimo priemonėse.
Jeigu yra reikalas, prieš srovę nuo detektavimo vietos yra išdėstomos įvairios medžiagos. Pavyzdžiui, tokiu judamu būdu gali būti patalpintas konjugatas.
Kai kuriais atvejais pasroviui nuo pirmosios detektavimo vietos gali būti išdėstytos viena arba daugiau kitų detektavimo vietų. Be to, pasroviui nuo detektavimo vietos chromatografinis nešiklis gali būti toliau prailgintas taip, 101 10 kad mėginio tirpalas visiškai susinaudotų, arba į nešiklį gali būti pridėta medžiagos, skirtos mėginio tirpalui sugerti.
Taigi, dominančios analitės buvimas mėginio tirpale arba jos kiekis gali būti nustatomas matuojant žymėtosios medžiagos, sukauptos detektavimo vietoje, buvimą arba kiekį. Atskiru atveju tai gali būti nustatoma vizualiai.
Numatoma, kad šis išradimas bus naudojamas bet kokiems kraujo mėginiams, įskaitant serumą ir plazmą, bet geriau jį naudoti kraujo mėginiams, turintiems eritrocitų, t.y. neapdorotam kraujui.
Prieš nustatant dominančią analitę kraujo mėginyje, pageidautina pašalinti eritrocitus, kad testas būtų norimo jautrumo. Taigi, pagal šį išradimą prie chromatografinio nešiklio yra prijungtas eritrocitus atskiriantis agentas. Geriau, kai eritrocitus atskiriantis agentas yra difuziškai prijungtas prie chromatografinio nešiklio. Eritrocitus atskiriantis agentas gali būti prijungtas prie chromatografinio nešiklio bet kurioje vietoje, kuri funkcionuos atskirdama eritrocitus nuo plazmos arba serumo. Geriau, kai jis yra difuziškai prijungtas prie chromatografinio nešiklio prieš srovę nuo detektavimo vietos. Geriausia, kai eritrocitus atskiriantis agentas yra difuziškai prijungtas mėginio uždėjimo vietoje. Ši vieta yra tinkamiausia todėl, kad eritrocitų agregacija sukeliama tuoj pat, kai tik jie uždedami ant chromatografinio nešiklio, ir gaunamas minimalus, jei toks išvis yra, trukdymas serumo arba plazmos slinkimui nešikliu veikiant kapiliarinėms jėgoms. Šio. išradimo eritrocitus atskiriantis agentas gali būti bet kokia medžiaga, galinti agreguoti eritrocitus. Tinkamiausiais agentais yra teigiamą krūvį turinčios medžiagos, tokios kaip polikatijonai, įskaitant, pvz., poli-L-lizino hidrobromidą; poli(dimetilalilamonio) chloridą (Merquat®-100, Merquat® 280, Merquat® 550); poli-L-arginino hidrochloridą; poli-L-histidiną; poli(4-vinilpiridiną), poli(4-vinilpiridino) hidrochloridą, susiūto poli(4-vinilpiridino) metilchlorido ketvirtinę druską; poli(4-vinilpiridin-ko-stireną); poli(4-vinilpiridinio poli(hidrofluoridą)); poli(4-vinilpiridinio-p-toluensulfonatą); poli(4-vinilpiridinio-tribromidą); poli(4-vinilpirolidon-ko-2-dimetilaminoetilo metakrilatą); susiūtą polivinilpirolidoną; polivinilpirolidoną, poli(melamin-ko- ( 102 11 formaldehidą); dalinai metilintą heksadimetrino bromidą; poli(Glu.Lys) 1:4 hidrobromidą; poli(Lys.Ala) 3:1 hidrobromidą; poli(Lys,Ala) 2:1 hidrobromidą; sukcinilintą poli-L-liziną; poli(Lys.Ala) 1:1 hidrobromidą ir poli(Lys,Trp) 1:4 hidrobromidą. Tinkamiausias polikatijonas yra poli(dimetilalilamonio) chloridas (Merquat®-100).
Gali būti naudojami bet kokie šio išradimo eritrocitus atskiriančio agento kiekiai, kurie funkcionuoja atskirdami eritrocitus nuo likusios mėginio dalies. Pageidautina, kad eritrocitus atskiriančio agento būtų nuo maždaug 0,04 % iki maždaug 1,3 % (masė/tūryje), geriau nuo maždaug 0,13 % iki maždaug 0,33 % (masė/tūryje) ir visų geriausia - nuo maždaug 0,20 % iki maždaug 0,33 % (masė/tūryje).
Eritrocitus atskiriančio agento teigiamas krūvis yra linkęs agreguoti bet kokias neigiamą krūvj turinčias medžiagas, esančias ant juostelės. Pavyzdžiui, eritrocitus atskiriantis agentas taip pat gali agreguoti prie chromatografinio nešiklio prijungtą žymėtąją medžiagą arba korijugatą, trukdydamas prisijungti analitei prie konjugato arba konkurenciniame testavime - žymėtajai medžiagai ir dominančiai analitei prisijungti prie sulaikančios medžiagos detektavimo vietoje arba prie konjugato. Tokiu būdu iškyla pavojus imunotestavimo sistemos jautrumui ir tikslumui. Dėl šios priežasties, kai eritrocitus atskiriantis agentas yra teigiamą krūvj turinti medžiaga, šiame išradime pageidautina naudoti neutralizuojantį agentą. Neutralizuojantis agentas gali neutralizuoti eritrocitus atskiriančio agento teigiamą krūvj, tokiu būdu pašalindamas arba bent jau sumažindamas neigiamą įtaką testavimo sistemai, kurią sukelia eritrocitus atskiriantis agentas. Geriau, kai neutralizuojantis agentas yra difuziškai prijungtas prie chromatografinio nešiklio. Neutralizuojantis agentas gali būti difuziškai prijungtas prie chromatografinio nešiklio bet kurioje vietoje, kur jis funkcionuos neutralizuodamas eritrocitus atskiriantj agentą, bet geriau, kai jis yra prijungtas pasroviui nuo eritrocitus atskiriančio agento ir prieš srovę nuo detektavimo vietos, o visų geriausia, kai jis yra toje pačioje chromatografinės juostelės vietoje kaip ir difuziškai prijungta žymėtoji medžiaga. 12 ι 103
Neutralizuojantis agentas gali būti bet koks polianijonas, galintis neutralizuoti eritrocitus atskiriančio agento teigiamą krūvj. Tinkamiausiais polianijonais yra poli(akrilo rūgštis), poli(akrilo rūgšties Na druska), poli(metilmetakrilo rūgštis), poli(Na-4-stireno sulfonatas), poli(vinilsulfonrūgštis), poli-L-asparto rūgštis ir karboksimetilceliuliozė, o visų tinkamiausias yra dekstrano sulfatas.
Gali būti naudojami bet kokie neutralizuojančio agento kiekiai, kurie funkcionuoja neutralizuodami eritrocitus atskiriančio agento teigiamus krūvius. Paprastai neutralizuojančio agento koncentracija priklauso nuo naudojamos eritrocitus atskiriančio agento koncentracijos. Pageidautina, kad neutralizuojančio agento būtų nuo maždaug 0,33 % iki maždaug 20 % (masė/tūryje), geriau nuo maždaug 0,34 % iki maždaug 10 % (masė/tūryje) ir visų geriausia - nuo maždaug 0,34 % iki maždaug 10 % (masėAūryje).
Fig.1 pavaizduotas imunochromatografinio testavimo jtaiso įgyvendinimo variantas pagal šj išradimą. J įtaisą 10 įeina chromatografinis nešiklis 20. Ant chromatografinio nešiklio 10 yra numatyta kraujo mėginio uždėjimo vieta 30. Šiame tinkamiausiame įgyvendinimo variante eritrocitus atskiriantis agentas, t.y. Merquat® 100, yra uždėjimo vietoje 30. Greta uždėjimo vietos 30 yra konjugato tarpiklis 40, turintis konjugato, t.y. selenu žymėtos rišančios medžiagos ir neutralizavimo agento, t.y. dekstrano sulfato. Toliau pasroviui yra detektavimo vieta 50, kur atlikus bandymą pasirodys kontrolinis tarpiklis 60, o jeigu yra analizuojamoji medžiaga - testavimo tarpiklis 70·.
Kitame šio išradimo įgyvendinimo variante ant uždėjimo vietos gali būti užpilama buferio, geriausia po to, kai uždedamas mėginys. Buferis padeda palaikyti priimtiną skysčio slinkimo greitį per chromatografinį nešiklį. Buferiu gali būti bet kokia medžiaga, kuri gali judėti dėl kapiliarinio poveikio pagal srauto kelią, įskaitant (bet neapsiribojant) fosfatinį buferį, fosfatinį buferį su valgomąja druska, Tris-HCI buferį, karbonatinį buferį, citratinį buferį, HEPES (2-hidroksipiperazin-N’-2-etansulfonrūgšties) buferį, MOPS (3-(N-morfolino)-propansulfonrūgšties) buferį, MES (2-(N-morfolino)etansulfonrūgšties) buferį ir pan. Nors koncentracija ir pH gali būti bet kokie, kurie tinka norimo 104 13 testavimo įtaisui, geriau, kai moliaringumas yra nuo maždaug 10 mM iki maždaug 100 mM, o pH yra maždaug 5-9, geriausia 6-8. Geriausia naudoti 50 mM fosfatinį buferį, pH 7,4. Šiame išradime naudojamas skysčio tūris priklauso nuo įtaiso dydžio. Pageidautina naudoti pakankamai skysčio, kad būtų užtikrintas skysčio slinkimas įtaisu iki detektavimo vietos. Pageidautina, kad skysčio tūris būtų nuo maždaug 25 μΙ iki maždaug 100 μΙ, ir geriausia, kai jo yra nuo maždaug 40 μΙ iki maždaug 60 μΙ. Tokiu būdu, jeigu reikia, galima pridėti nuo maždaug 10 μΙ iki maždaug 40 μΙ, geriausia nuo maždaug 20 μΙ iki maždaug 30 μΙ, buferio. Šis išradimas taip pat yra skirtas analitės buvimo kraujo mėginyje nustatymo būdui. Geriausia šiame būde naudoti šio išradimo chromatografinį imunotestavimo įtaisą. Konkrečiau kalbant, šis būdas apima: (1) pateikimą apibrėžiančio skysčio kelią chromatografinio nešiklio, galinčio palaikyti kapiliarinį tekėjimą, kuriame yra kraujo mėginio uždėjimo vieta, duodanti sąlytį su chromatografiniu nešikliu, detektavimo vieta ant chromatografinio nešiklio, esanti toliau nuo uždėjimo vietos, difuziškai prijungta žymėtoji medžiaga (arba konjugatas), kuri susiriša arba konkuruoja su analite dėl prisijungimo prie detektavimo vietos, difuziškai prijungtas eritrocitus atskiriantis agentas plazmos arba serumo išskyrimui iš minėto kraujo mėginio, esantis prieš srovę nuo detektavimo vietos, ir konjugatas, prijuntas prie chromatografinio nešiklio: (2) uždėjimo vietos sąlytį su kraujo mėginiu taip, kad eritrocitus atskiriantis agentas atskiria eritrocitus nuo kraujo mėginio plazmos arba serumo, o neutralizuojantis agentas neutralizuoja atskiriančio agento teigiamą krūvį; ir (3) analitės buvimo kraujo mėginyje nustatymą.
Pageidautina, kad eritrocitus atskiriantis agentas būtų teigiamą krūvį turinti medžiaga, o skysčio slinkimo kelyje būtų difuziškai prijungtas neutralizuojantis agentas, kuris gali susirišti su minėtu eritrocitus atskiriančiu agentu, ir jis būtų pasroviui nuo minėto eritrocitus atskiriančio agento ir prieš srovę nuo detektavimo vietos, tokiu būdu neutralizuojant minėto atskiriančio agento teigiamą krūvį.
14 I 105
Taigi, tinkamiausiame fig.1 parodytame įgyvendinimo variante kraujo mėginys uždedamas ant uždėjimo vietos 30, ir eritrocitus atskiriantis agentas atskiria eritrocitus juos agreguodamas ir leisdamas plazmai arba serumui slinkti dėl kapiliarinio poveikio chromatografiniu nešikliu 20. Neutralizuojantis agentas, esantis konjugato tarpiklyje 40, neutralizuoja eritrocitus atskiriančio agento poveikį įtaise 10, o konjugatas ir analitė prisijungia prie konjugato, esančio konjugato tarpiklyje 40. Prie konjugato prisijungusi analitė toliau slenka pasroviui iki detektavimo vietos 50. Jeigu yra dominanti analitė, pasirodo testavimo tarpiklis 70. Parodymui, kad testavimas vyksta teisingai, išryškėja kontrolinis tarpiklis 60 nepriklausomai nuo to, ar yra dominanti analitė, ar jos nėra.
Pageidautina, kad šio išradimo įtaisas turėtų nereaktingą dangtelį arba įdėtį. Būtų geriausia, kad įdėtis apimtų bent jau chromatografinį nešiklį ir būtų galima išvengti kontakto su juo ir galimo užteršimo imant rankomis. Dangtelyje taip pat gali būti pakelta zona greta uždėjimo vietos tam tikro mėginio tūrio paėmimui ir/arba palaikymui palengvinti. Be to, dangtelyje gali būti raidės, skaičiaus, ženklo, simbolio arba bet kokio jų derinio formos išpjauta zona arba zonos. Šiame įgyvendinimo variante išpjauta zona arba zonos sudaro konkrečių detektavimo vietų vaizdą, o juostelė yra visiškai uždara. Geriau, kai gana didelė juostelės dalis yra {pakuota, nes taip apsisaugoma nuo uždedamo mėginio sąlyčio su detektavimo vietomis dar jam nepraėjus per juostelę. Šio išradimo įtaisas ir būdas gali būti naudojami bet kokioje testavimo sistemoje, kurioje kraujo mėginyje yra dominanti analitė. Tinkamiausių sistemų pavyzdžiais yra (bet jais neapsiribojama) hepatito C virusas (“HCV”), hepatito A virusas (“HAV”), žmogaus imunodeficito virusas (“ŽIV”), hepatito B paviršinis antikūnas (“HBsAb”), hepatito B paviršinis antigenas (“HBsAg”), hepatito B giluminis antikūnas (“HBcAb”), hepatito B giluminis antigenas (“HBcAg”), karcinoembrioninis antigenas (“CEA”), alfa-fetoproteinas (“AFP”), kasos vėžio markeris (“CA19-9"), sifilis, tuberkuliozė, maliarija, leišmanija ir dengė karštligė. I I 106 15
Toliau duodami pavyzdžiai plačiau iliustruoja šj išradimą, bet jokiu būdu neturi būti aiškinami kaip ribojantys jo apimtį.
Pavyzdžiai 1 pavyzdys
Polikatiionu sukeltos eritrocitu aaeraaciios ir Se-koniuaato aareaaciios palyginimas Šiame išradime eritrocitu (ere) agregacija kraujyje yra pageidautina, o seleno konjugato - nepageidautina. Buvo išbandyti įvairūs katijonai, kurie galėtų sukelti pakankamą ere agregaciją ir minimaliai agreguotų seleno konjugatą. ŽIV-1 rekombinantinio baltymo seleno konjugatas buvo pagamintas tokiu būdu: pirmiausia buvo pagamintas seleno koloidas, veikiant 32 mM seleno oksidą 91 mM L-askorbo rūgštimi vandeniniame tirpale 72 vai. 42 °C temperatūroje. Šis seleno koloidas buvo praskiestas iki optinio tankio 30, esant 550 nm bangos ilgiui, po to 20 minučių kambario temperatūroje veikiamas 40 μg/ml rekombinantinio ŽIV-1 apvalkalo baltymo 30 mM Tris buferyje, pH 7,4; Po to šis seleno koloidu žymėto ŽIV-1 baltymo konjugatas buvo praskiestas iki optinio tankio 30, esant 550 nm bangos ilgiui, 10 mM Tris buferiu, pH 7,4, turinčiu 0,1 % kazeino, ir inkubuotas 20 minučių kambario temperatūroje. Tada konjugato tirpalas centrifuguotas esant 1970 x g 20 minučių 4 °C temperatūroje, nuopilas atskirtas, o nuosėdos išmestos. Po to į nuopilą pridėta viena dešimtoji jo tūrio 30 mM Tris buferio, pH 7,4, turinčio 2 % kazeino. Pabaigoje šis konjugato tirpalas buvo praskiestas iki optinio tankio 10, esant 550 nm bangos ilgiui, 50 mM Tris buferiu, pH 7,4, turinčiu 0,1 % kazeino, 2 % sacharozės ir 2 % laktozės.
Buvo pagaminti tokių katijonų 0,25 % (m/t) tirpalai: poli-L-lizino hidrobromido, molekulinė masė (MM) 37000; poli-L-arginino hidrochlorido, MM 12100, 42400 ir 92000; poli-L-histidino, MM 18400; heksadimetrino bromido; poli(lizinas, alaninas) 3:1 hidrobromido, MM 35000; poli(lizinas, 16 107 alaninas) 2:1 hidrobromido, MM 49300; poliflizinas, alaninas) 1:1 hidrobromido, MM 41600; poliflizinas, triptofanas) 1:4 hidrobromido, MM 38000; (visi šia polikatijonai buvo gauti iš Sigma, St. Louis, MO); poli(dialildimetilamonio chlorido), MM 105-106 (Merquat®-100, Calgon, Pittsburgh, PA). Šių polikatijonų sugebėjimas agreguoti arba ere kraujyje, arba seleno konjugatą buvo stebėtas atskirose reakcijose, pridedant 350 μΙ 0,25 % įvairių katijonų tirpalo j tokį pat tūrį arba kraujo, arba seleno konjugato. Tirpalai buvo sumaišomi ir laikomi kambario temperatūroje 10 minučių, po to vizualiai įvertinama agregacija. Rezultatai reziumuoti 1 lentelėje. Vienas pliusas (+) rodo silpną agregaciją, 2+ rodo vidutinę agregaciją, o 3+ ir 4+ rodo stiprią agregaciją. 1 lentelė
Polikatijonas Molekulinė masė Agregacija Eritrocitai Se- konjugatas Poli-L-Lys HBr 37000 2+ 2+ Merquat®-100 105-106 2+ 2+ Poli-L-Arg HCI 12100 2+ 2+ Poli-L-Arg HCI 42400 2+ 2+ Poli-L-Arg HCI 92000 2+ 2+ Poli-L-His 18400 + 4+ Heksadimetrino Br + + Poli(Lys,Ala) 3:1 HBr 35000 2+ 2+ Poli (Lys,Ala) 2:1 HBr 49300 + 2+ Poli(Lys.Ala) 1:1 HBr 41600 + 2+ Poli (Lys,-Trp) 1:4 HBr 38000 3+ 3+
Polikatijonas, kuris sukelia ere agregaciją (2+ arba didesnę), sukeldamas minimalią seleno konjugato agregaciją (2+ arba mažesnę), turėtų būti tinkamas. Polikatijonai, turintys 2+ abiejose kategorijose, atitinka šį kriterijų. Tolimesniam darbui pasirinkta poli-L-lizino HBr ir Merquat®-100; efektyviausias yra Merquat®-100. 2 pavyzdys
Apsisaugojimas nuo koniuaato aareaaciios panaudojant neutralizavimą poliani tonais 108 17 A. Koniuaato slinkimas ir apsisaugojimas nuo aareaaciios naudojant dekstrano sulfatą. Naudojant poli-L-liziną kaip polikatijoninj ere agreguojantj reagentą, buvo tiriamos įvairios polianijono dekstrano sulfato koncentracijos, norint nustatyti, ar teigiamas polikatijono krūvis gali būti neutralizuotas dekstrano sulfatu, tokiu būdu išvengiant polikatijono sukeltos seleno konjugato agregacijos. Dekstrano sulfatas buvo dedamas po to, kai polikatijonas jau sukėlė ere agregaciją, bet prieš polikatijono sąveiką su seleno konjugatu. Toliau aprašytame eksperimente įvertintas polikatijono ir dekstrano sulfato poveikis į seleno konjugato agregaciją ir po to jo sugebėjimas slinkti imunochromatografine juostele.
Buvo sukomponuota imunochromatografinė juostelė, susidedanti iš mėginio tarpiklio, neutralizacijos tarpiklio, konjugato tarpiklio ir detektavimo tarpiklio. Mėginio tarpiklis buvo pagamintas išmirkant 4 mm pločio ir 20 mm ilgio stiklo pluošto filtrą (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) vandeniniame 0,33 % poli-L-lizino hidrobromido MM 3700 (Sigma, St. Louis, MO) tirpale, po to išdžiovinant jį vakuume.
Neutralizavimo tarpikliai, turintys įvairias dekstrano sulfato koncentracijas, buvo pagaminti išmirkant 4 mm pločio ir 13 mm ilgio filtrus, padarytus iš medienos ir poliesterio (Sontara 8801, Du Pont, VVilmington, Delvvare) vandeniniuose tirpaluose, turinčiuose 0 %, 1,1 %, 3,3 % arba 10 % dekstrano sulfato, MM 5000 (Sigma, St. Louis, MO). Išmirkyti tarpikliai buvo džiovinami-vakuume.
Konjugato tarpiklis buvo pagamintas išmirkant 4 mm pločio ir 4,3 mm ilgio stiklo pluošto filtrą (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) seleno koloidu žymėto ŽIV-1 rekombinantinio baltymo konjugate, pagamintame ir praskiestame taip, kaip aprašyta 1 pavyzdyje. Išmirkytas konjugato tarpiklis buvo džiovinamas vakuume.
Detektavimo juostelė buvo 4 mm pločio ir 40 mm ilgio nitroceliuliozinis membraninis filtras (catalogue #H964G1, Millipore, Bedford, MA). Ant šios nitroceliuliozinės membranos buvo uždėtas ŽIV-1 apvalkalo antigenas, imant 5 mg/ml 100 mM Tris buferyje, pH 7,4, turinčiame 1 % sacharozės, 18 I ' 109 koncentraciją, taip, kad skersai juostelę pasidarytų linija, esanti maždaug 1 cm atstumu nuo membranos galo. Šis liniuotas ruožas buvo užfiksuojamas poliesterio laminatu (code # 7733, Adhesives Research Ine., Glen Rock, PA).
Juostelė padžiovinama, kad antigenas prisitvirtintų prie nitroceliuliozės.
Imunochromatografinės juostelės (4 mm pločio) buvo sumontuojamos panaudojant aukščiau aprašytus komponentus, uždedant juos vieną ant kito išilgai su 1 mm persiklojimais tarp atskirų dalių, imant 20 mm ilgio mėginio tarpiklį viename gale, po to dedant vieną iš 13 mm ilgio neutralizavimo tarpiklių, po to 4,3 mm ilgio konjugato tarpiklį ir gale 40 mm ilgio detektavimo juostelę. Sumontuota juostelė padengiama poliesterio laminatu (code # 8648,
Adhesives Research Ine., Glen Rock, PA) nuo detektavimo tarpiklio viršaus iki 10 mm atstumo nuo juostelės galo, paliekant maždaug 10 mm nepadengto mėginio tarpiklio. Po to ant imunochromatografinių juostelių, turinčių neutralizavimo tarpiklius su 0 %, 1,1 %, 3,3 % ir 10 % dekstrano sulfato, mėginio tarpiklių uždedama po 80 μΙ plazmos. Raudono seleno konjugato agregacija ir jo sugebėjimas slinkti juostele buvo stebimas vizualiai.
Rezultatai, parodyti toliau duodamoje 2 lentelėje, parodė, kad nesant . dekstrano sulfato, skirto polikatijonų tirpalo krūviui neutralizuoti, seleno konjugatas agreguojasi ir negali slinkti juostele. Stebima atvirkštinė priklausomybė tarp konjugato agregacijos ir slinkimo; 3,3 % arba didesnės dekstrano sulfato koncentracijos pakanka, kad būtų išvengiama konjugato agregacijos ir užtikrinamas slinkimas juostele. 2 lentelė
Dekstrano sulfato koncentracija Konjugato agregacija Konjugato slinkimas 0% + + - 1,1 % + +/- 3,3 % - + 10% - + B. Eritrocitu aareaaciia esant dekstrano sulfatui. Norint įvertinti dekstrano sulfato poveikį į ere agregaciją, buvo pakartotas aukščiau aprašytas eksperimentas mėginiu naudojant kraują ir imant 10 % dekstrano 110 19 sulfato turintį 4,3 mm ilgio ir 4 mm pločio neutralizavimo tarpiklį. Sumontavus imunochromatografinę juostelę taip, kaip aprašyta aukščiau, naudojant šį neutralizavimo tarpiklį, ant mėginio tarpiklio uždedama 80 μΙ neapdoroto kraujo. Po 15 min. vizualiai stebima ere agregacija ir išmatuojamas išsiskyrusios plazmos sugebėjimas slinkti juostele. Ere agregavosi, buvo sulaikyti mėginio tarpiklyje ir neslinko juostele, tuo tarpu kai plazma per 15 minučių nukeliavo juostele 33 mm. Tai rodo, kad polikatijonas mėginio tarpiklyje dar gali sukelti ere agregaciją kraujo mėginyje, o polianijono (dekstrino sulfato) buvimas neutralizavimo tarpiklyje ere agregacijai netrukdo. C. Apsisaugojimas nuo koniuaato aareaaciios panaudojant poliani jonus. Buvo tirtas kitų anijonų sugebėjimas apsaugoti seleno konjugatą nuo agregacijos pagal 2A pavyzdyje aprašytą metodiką. 15,5 mm ilgio ir 4 mm pločio mėginio tarpiklis buvo išmirkytas vandeniniame tirpale, turinčiame 0,26 % Merquat®-100, po to išdžiovintas 55 °C temperatūroje. Neutralizavimo tarpiklis nebuvo naudojamas, o vietoj to seleno konjugatas buvo skiedžiamas 10 mM Tris buferiu, pH 7,4, turinčiu 1 % kazeino, 2 % sacharozės, 2 % laktozės ir 0 %, 1,1 % arba 3,3 % polianijoninio dekstrano sulfato, MM 5000 (Sigma, St. Louis, MO), arba 0 %, 0,5 %, 1 % arba 2 % vieno iš šių polianijonų (visi iš Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wl): poli(akrilo rūgšties), MM 5000; poli(natrio-4-stirensulfonato), MM 70000; poli(vinilsulfonrūgšties natrio druskos); poli(metilmetakrilo rūgšties), MM 9500; poli(akrilo rūgšties natrio druskos), MM 2100. Konjugato tarpikliai buvo išmirkomi įvairiuose seleno konjugato tirpaluose ir išdžiovinami vakuume. Detektavimo juostelė buvo pagaminta taip pat kaip ir 2A pavyzdyje ir sumontuotos imunochromatografinės juostelės. Ant kiekvienos chromatografinės juostelės, turinčios konjugato tarpiklius su įvairiais polianijonais, mėginio tarpiklio uždedama po 50 μΙ plazmos. Raudono seleno konjugato agregacija stebėta vizualiai. Santykinis konjugato agregacijos laipsnis, stebimas esant įvairioms tirtųjų polianijonų koncentracijoms, parodytas 3 lentelėje. 3 lentelė
Seleno konjugato agregacija 111 20
Polianijonas Polianijono koncentracija 0% 0,5% 1-1,1% 2% 3,3% Dekstrano sulfatas Poli(akrilo rūgštis) Poli(Na-4-stirensulfonatas) Poli(vinilsulfonrūgštis) Poli(metilmetakrilo rūgštis) Poli(akrilo rūgšties Na druska) + + nt + nt + + - - nt ++ ++ ++ + nt + + +/- - - nt ++ - - - nt + + + +/- - nt nt = netirta
Kaip ir prieš tai aprašytame pavyzdyje, seleno konjugatas agregavosi, jeigu nebuvo polianijono teigiamam polikatijono (reikalingo ere agreguoti, jeigu tiriamas neapdorotas kraujas) krūviui neutralizuoti mėginio tarpiklyje. Visi konjugato tarpiklyje panaudoti polikatijonai (bent viena iš tirtųjų jų koncentracijų) apsaugojo nuo konjugato agregacijos. Šis eksperimentas taip pat parodė, kad polianijonams nereikia atskiro tarpiklio, bet jie gali būti sudedami su seleno konjugatu konjugato tarpiklyje. 21 21' 11 2 3 pavyzdys
Dekstrano sulfato panaudojimo neutralizavimo tarpiklyje palyginimas su panaudojimu koniuaato tarpiklyje ŽIV-1 antikūnu testavime
Imunochromatografinės juostelės, turinčios arba neturinčios 4 mm pločio ir 4,3 mm ilgio stiklo pluošto (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) neutralizavimo tarpiklį, buvo pagamintos taip pat, kaip ir 2A pavyzdyje. Kai buvo naudojamas neutralizavimo tarpiklis, jis buvo išmirkomas vandeniniame tirpale, turinčiame 3,3 % dekstrano sulfato, po to išdžiovinamas vakuume. Juostelėse be neutralizacijos tarpiklio seleno konjugatas buvo praskiedžiamas 10 mM Tris buferiu, pH 7,4, turinčiu 1 % kazeino, 2 % sacharozės, 2 % laktozės ir 3,3 % dekstrano sulfato, šiame tirpale išmirkomas konjugato tarpiklis, po to išdžiovinamas vakuume. Mėginio tarpiklis buvo naudotas toks pats kaip ir 2A pavyzdyje, išskyrus tai, kad jis buvo išmirkytas 0,2 % Merquat®-100 vandeniniame tirpale. Žmogaus serumas, turintis ŽIV-1 antikūnų, buvo praskėstas 1:2048 arba ŽIV neigiamu žmogaus krauju (skaičiuojant pagal plazmos tūrį) su 50 % hematokrito reikšme, arba ŽIV neigiama žmogaus plazma. Buvo padaryti trys tolimesni serijiniai 1:2 skiedimai, skiedikliu vėlgi naudojant arba neapdorotą kraują, arba plazmą. Ant imunochromatografinių juostelių, pagamintų su dekstrano sulfatu atskirame neutralizavimo tarpiklyje, arba dekstrano sulfatu seleno konjugato tirpale ir esančiu konjugato tarpiklyje, mėginio tarpiklių uždedama- po 80 μΙ neigiamo neapdoroto kraujo arba praskiestos neapdorotu krauju įvairios koncentracijos ŽIV-1 teigiamų mėginių. Aštuoniasdešimt μΙ neigiamos plazmos arba iš ŽIV-1 teigiamos plazmos praskiestų mėginių serijos buvo tiriama tik ant chromatografinių juostelių su dekstrano sulfatu konjugato tarpiklyje. Rezultatai buvo atskaitomi praėjus 15 minučių po mėginių uždėjimo (4 lentelė). Teigiamas rezultatas davė raudoną spalvą ant detektavimo juostelės, kur raudonas seleno ŽIV-1 antigeno konjugato ir ŽIV-1 antikūno kompleksas prisijungė prie ŽIV-1 antigeno ant juostelės liniuotosios dalies. Neigiamas rezultatas ant detektavimo juostelės šioje srityje spalvos nedavė. 22 22 t ' 113 4 lentelė Dekstrano sulfatas neutralizavimo tarpiklyje Dekstrano sulfatas konjugato tarpiklyje Mėginio praskiedimas Kraujas Kraujas Plazma 1:2048 + + + 1:4096 + + + 1:8192 - + + 1:16384 nt - - Neigiama kontrolė - - - nt = netirta 4 lentelės rezultatai rodo, kad ŽIV-1 antikūnus galima nustatyti neapdoroto kraujo mėginyje imunochromatografinės juostelės testu, naudojant polikatijonu Merquat®-100 eritrocitams agreguoti ir taip leidžiant mėginiui slinkti juostele, ir naudojant polianijonu dekstrano sulfatą kaip neutralizuojanti agentą, apsaugantį nuo seleno konjugato agregacijos, kurią sukelia polikatijonai, ir taip leidžiant konjugatui susijungti ir sudaryti kompleksą su teigiamu mėginiu ir slinkti juostele iki detektavimo vietos. Buvo parodyta, kad polianijonas yra efektyvus naudojant jj arba atskirame neutralizavimo tarpiklyje, arba sumaišius su seleno konjugatu konjugato tarpiklyje. Šiame teste ŽIV-1 antikūnų nustatymo jautrumas buvo 2 kartus didesnis, kai polianijonas (dekstrano sulfatas) buvo naudojamas konjugato tarpiklyje, lyginant su atskiru neutralizavimo tarpikliu.
Be to, iš 4 lentelės rezultatų matyti, kad polikatijonai efektyviai agreguoja ere kraujyje, ką rodo vienodas ŽIV-1 antikūnų nustatymo jautrumas kraujyje, kur ere turi būti agreguojami, kad mėginys slinktų juostele, ir plazmoje, kur nėra ere, trukdančių plazmos slinkimui. Tai taip pat rodo, kad polianijono buvimas (kaip atskirame neutralizavimo tarpiklyje, taip ir konjugato tarpiklyje) netrukdo polikationui efektyviai agreguoti ere kraujyje. 4 pavyzdys
Merauat® ir ivairiu polianiionu panaudojimas HBsAa teste 23 ι 114
Buvo pagamintos imunochromatografinės juostelės hepatito B paviršiniam antigenui (HBsAg) nustatyti neapdoroto kraujo mėginiuose. Kaip polikatijonas eritrocitams agreguoti buvo naudotas Merquat®-100 mėginio tarpiklyje, o įvairūs polianijonai, kaip polikatijonų neutralizavimo reagentai apsisaugojimui nuo seleno konjugato agregacijos, buvo tiriami konjugato tarpiklyje.
Buvo sukomponuotos chromatografinės juostelės, susidedančios iš mėginio tarpiklio, konjugato tarpiklio ir detektavimo juostelės. Mėginio tarpiklis buvo pagamintas išmirkant 4 mm pločio ir 15,5 mm ilgio stiklo pluošto filtrą 0,26 % vandeniniame Merquat®-100 tirpale, po to išdžiovinant jį 55 °C temperatūroje.
Seleno konjugatas buvo pagamintas naudojant 1 pavyzdyje aprašytą seleno koloidą ir 12 μg/ml pelės monokloninį antikūną HBsAg (anti-HBs). Šis seleno koloidu žymėtas anti-HBs konjugatas po to buvo praskiestas iki optinio tankio 2,6, esant 550 nm bangos ilgiui, Tris buferiu, turinčiu vieną iš šių polianijonų: 0,5 % poli(akrilo rūgšties), MM 2000 (PAA-2000); 0,5 % poli(akrilo rūgšties), MM 240000 (PAA-240000); 0,5 % dekstrano sulfato; 0,8 % poli-L-asparto rūgšties, MM 36300; 0,5 % karboksimetilceliuliozės, MM 90000 (CMC). Dekstrano sulfatas ir poli-L-asparto rūgštis buvo iš Sigma, St.
Louis, MO, o likusieji polianijonai - iš Aldrich Chemical Co., Milvvaukee, Wl.
Konjugato tarpiklis buvo paruoštas išmirkant 4 mm pločio ir 4,3 mm ilgio stiklo pluošto filtrą seleno koloidu žymėtame anti-HBs konjugate, pagamintame ir praskiestame vienu iš aukščiau minėtų anijonų. Išmirkytas konjugato tarpiklis buvo išdžiovintas vakuume.
Detektavimo juostelė buvo 4 mm pločio ir 40 mm ilgio nitroceliuliozinis membraninis filtras, paruoštas kaip 2 pavyzdyje, naudojant pelės monokloninį anti-HBs, kurio koncentracija yra 3 mg/ml, kuris buvo įdėtas į nitroceliuliozinę membraną taip, kad skersai juostelę susidarytų linija, esanti maždaug 1 cm atstumu nuo membranos galo. Ši liniuotą zona buvo užfiksuojama poliesterio laminatu. Juostelė padžiovinama, kad antigenas prisitvirtintų prie nitroceliuliozės. 24 115
Imunochromatografinės juostelės buvo sumontuojamos panaudojant aukščiau aprašytus komponentus, dedant juos vieną ant kito išilgai su 1 mm persiklojimais, viename gale dedant mėginio tarpiklį, po to konjugato tarpiklį ir ant galo detektavimo juostelę. Po to sumontuota juostelė padengiama poliesterio laminatu, paliekant maždaug 10 mm nepadengto mėginio tarpiklio. J HBsAg neigiamą žmogaus kraują su 50 % hematokrito reikšme buvo pridėta rekombinantinio HBsAg iki 12,5 ng/ml koncentracijos. Buvo padaryti trys tolesni 1:2 serijiniai praskiedimai neapdorotu krauju. Ant imunochromatografinių juostelių, pagamintų su įvairiais polianijonais konjugato tarpiklyje, mėginio tarpiklių uždedama po 50 μΙ neigiamo neapdoroto kraujo arba praskiestų neapdorotu krauju įvairaus praskiedimo laipsnio HBsAg teigiamų mėginių. Rezultatai buvo atskaitomi praėjus 15 minučių po mėginių uždėjimo (5 lentelė). Teigiamas rezultatas davė raudoną spalvą ant detektavimo juostelės, kur raudonas seleno anti-HBs konjugato ir HBsAg kompleksas buvo prijungtas prie anti-HBs ant juostelės liniuotos dalies. Neigiamas rezultatas ant detektavimo juostelės šioje srityje spalvos nedavė. Raudono seleno konjugato agregacija prie įėjimo į detektavimo juostelę buvo stebėta vizualiai. 5 lentelė
Poliani jonas I H BsAg koncentracija (ng/ml Konjugato agregacija I 12,5 6,25 3,13 1,56 0 PAA-2000 + + + - - - PAA-240000 + + - - - + Dekstrano + + + . - - sulfatas Poli-L-Asp + + + - - - CMC + - - - - +
Nors visi polianijonai leido nustatyti HBsAg, tie iš jų, kurie apsaugojo nuo konjugato agregacijos (PAA-2000, dekstrano sulfatas ir poli-L-asparto rūgštis), davė 2-4 kartus didesnį HBsAg nustatymo jautrumą kraujo mėginiuose. 25 2511 6
Aukščiau aprašytas eksperimentas buvo pakartotas, naudojant seleno koloidu žymėtą konjugatą, praskiestą Tris buferiu, kuriame polianijonu yra PM-2000, išskyrus tai, kad ant mėginio tarpiklio, praėjus vienai minutei po kraujo mėginių su HBsAg uždėjimo, pridedama 25 μΙ 50 mM fosfatinio buferio, pH 7,4. Rezultatai, gauti naudojant šią metodiką, pridedant buferio po mėginio uždėjimo, buvo identiški rezultatams be šios stadijos. Taigi, šie testai gali būti atliekami pridedant arba nepridedant buferio po mėginio uždėjimo. 5 pavyzdys
Merauat® ir dekstrano sulfato panaudojimas tuberkuliozės teste
Buvo pagamintos imunochromatografinės juostelės Mycobacterium tuberculosis antikūnui (anti-Mtb) nustatyti neapdoroto kraujo mėginiuose. Kaip polikatijonas eritrocitams agreguoti buvo naudotas Merquat®-100 mėginio tarpiklyje, ir buvo tirtos įvairios dekstrano sulfato, kaip polikatijonus neutralizuojančio reagento, kad būtų apsisaugoma nuo seleno konjugato agregacijos, koncentracijos konjugato tarpiklyje.
Buvo sukomponuotos chromatografinės juostelės, susidedančios iš mėginio tarpiklio, konjugato tarpiklio ir detektavimo juostelės. Mėginio tarpiklis buvo pagamintas išmirkant 4 mm pločio ir 15,5 mm ilgio stiklo pluošto filtrą 0,26 % vandeniniame Merquat®-100 tirpale, po to išdžiovinant jį vakuume.
Seleno konjugatas buvo pagamintas naudojant 1 pavyzdyje aprašytą seleno koloidą ir 3,5 μg/ml rekombinantinio Mtb antigeno iš E. coli. Šis seleno koloidu žymėtas Mtb konjugatas po to buvo praskiestas iki optinio tankio 2,5, esant 550 nm bangos ilgiui, Tris buferiu, turinčiu 0 %, 0,34 %, 1,1 % arba 3,3 % dekstrano sulfato.
Konjugato tarpiklis buvo paruoštas išmirkant 4 mm pločio ir 4,3 mm ilgio stiklo pluošto filtrą seleno koloidu žymėtame Mtb konjugate, pagamintame ir praskiestame vienu iš aukščiau minėtų koncentracijų dekstrano tirpalų. Išmirkytas konjugato tarpiklis buvo išdžiovintas vakuume. 26 117
Detektavimo juostelė buvo 4 mm pločio ir 40 mm ilgio nitroceliuliozinis membraninis filtras, paruoštas kaip 2 pavyzdyje, naudojant rekombinantinj Mtb antigeną, kurio koncentracija yra 0,15 mg/ml, kuris buvo jdėtas j nitroceliuliozinę membraną taip, kad skersai juostelę susidarytų linija, esanti maždaug 1 cm atstumu nuo membranos galo. Ši liniuotą zona buvo užfiksuojama poliesterio laminatu. Juostelė padžiovinama, kad antigenas prisitvirtintų prie nitroceliuliozės.
Imunochromatografinės juostelės buvo sumontuojamos panaudojant aukščiau aprašytus komponentus, dedant juos vieną ant kito išilgai su 1 mm persiklojimais, viename gale dedant mėginio tarpiklį, po to konjugato tarpiklį ir ant galo detektavimo juostelę. Po to sumontuota juostelė padengiama poliesterio laminatu, paliekant maždaug 10 mm nepadengto mėginio tarpiklio.
Anti-Mtb teigiamas serumas buvo praskiestas 1:1000 neigiamu žmogaus krauju su 50 % hematokrito reikšme. Buvo padaryti du tolesni 1:2 serijiniai praskiedimai neapdorotu krauju. Ant imunochromatografinių juostelių, pagamintų su įvairiomis dekstrano sulfato koncentracijomis konjugato tarpiklyje, mėginio tarpiklių uždedama po 50 μΙ neigiamo neapdoroto kraujo arba praskiestų neapdorotu krauju įvairaus praskiedimo laipsnio Mtb teigiamų mėginių. Rezultatai buvo atskaitomi .praėjus 15 minučių po mėginių uždėjimo (6 lentelė). Teigiamas rezultatas davė raudoną spalvą ant detektavimo juostelės, kur raudonas seleno Mtb konjugato ir anti-Mtb kompleksas buvo prijungtas prie Mtb ant juostelės liniuotos dalies. Neigiamas rezultatas ant detektavimo juostelės šioje srityje spalvos nedavė. Raudono seleno konjugato agregacija prie įėjimo į detektavimo juostelę buvo stebėta vizualiai. 6 lentelė
Dekstrano Anti-Mtb praskiedimas Konjugato sulfatas (%) 1:100 1:200 1:400 Neigiama kontrolė agregacija 0 - - - - + + 0,34 - - - - ++ 1,1 + - - + 27 27I 118
6 lentelės duomenys rodo, kad testas nefunkcionuoja be polianijono, šiuo atveju dekstrano sulfato, apsaugančio konjugatą nuo agregacijos. Stebimas atvirkštinis ryšys tarp konjugato agregacijos ir testo jautrumo. Kai dekstrano sulfato koncentracija yra 3,3 %, konjugato agregacija nevyksta ir gaunamas didžiausias anti-Mtb nustatymo jautrumas. 6 pavyzdys
Sifilio testas naudojant Merauat® ir dekstrano sulfatą
Buvo pagamintos imunochromatografinės juostelės Tmponema pallidum antikūnui (anti-TP) nustatyti neapdoroto kraujo mėginiuose. Lyginant detektavimo jautrumą kraujyje ir plazmoje, reikia nustatyti, ar polikatijonai efektyviai agregavo ere, kad jie netrukdytų nustatymui ir nesumažintų testo jautrumo. Kaip polikatijonas ere agreguoti buvo naudotas Merquat®-100 mėginio tarpiklyje, o konjugato tarpiklyje buvo naudotas polianijonas dekstrano sulfatas, kaip polikatijonus neutralizuojantis reagentas, kad būtų apsisaugoma nuo seleno konjugato agregacijos.
Buvo sukomponuotos chromatografinės juostelės, susidedančios iš mėginio tarpiklio, konjugato tarpiklio ir detektavimo juostelės. Mėginio tarpiklis buvo pagamintas išmirkant 4 mm pločio ir 15,5 mm ilgio stiklo pluošto filtrą 0,2 % vandeniniame Merquat®-100 tirpale, po to išdžiovinant jj 55 °C temperatūroje.
Seleno konjugatas buvo pagamintas naudojant 1 pavyzdyje aprašytą seleno koloidą ir 7,5 μg/ml Treponema pallidum lizato (TP). Šis seleno koloidu žymėtas TP konjugatas po to buvo praskiestas iki optinio tankio 2,8, esant 550 nm bangos ilgiui, Tris buferiu, turinčiu 3,3 % dekstrano sulfato.
Konjugato tarpiklis buvo paruoštas išmirkant 4 mm pločio ir 4,3 mm ilgio stiklo pluošto filtrą aukščiau pagamintame seleno koloidu žymėtame TP konjugate. Išmirkytas konjugato tarpiklis buvo išdžiovintas vakuume. 28 119
Detektavimo juostelė buvo 4 mm pločio ir 40 mm ilgio nitroceliuliozinis membraninis filtras, paruoštas kaip 2 pavyzdyje, naudojant 44 pg/ml koncentracijos Treponema pallidum lizatą, kuris buvo jdėtas j nitroceliuliozinę membraną taip, kad skersai juostelę susidarytų linija, esanti maždaug 1 cm atstumu nuo membranos galo. Ši liniuotą zona buvo užfiksuojama poliesterio laminatu. Juostelė padžiovinama, kad TP lizatas prisitvirtintų prie nitroceliuliozės.
Imunochromatografinės juostelės buvo sumontuojamos panaudojant aukščiau aprašytus komponentus, dedant juos vieną ant kito išilgai su 1 mm persiklojimais, viename gale dedant mėginio tarpiklį, po to konjugato tarpiklį ir ant galo detektavimo juostelę. Po to sumontuota juostelė padengiama poliesterio laminatu, paliekant maždaug 10 mm nepadengto mėginio tarpiklio.
Anti-TP teigiamas žmogaus serumas buvo praskiestas 1:10,8 arba neigiamu žmogaus krauju su 50 % hematokrito reikšme, arba neigiama žmogaus plazma. Buvo padaryti keturi tolesni 1:2 serijiniai praskiedimai, skiedikliu vėlgi naudojant arba neapdorotą kraują, arba plazmą. Ant imunochromatografinių juostelių mėginio tarpiklių uždedama po 60 μΙ neigiamo neapdoroto kraujo arba plazmos, arba praskiestų neapdorotu krauju arba plazma įvairaus praskiedimo laipsnio anti-TP teigiamų mėginių. Rezultatai buvo atskaitomi praėjus 15 minučių po mėginių uždėjimo (7 lentelė). Teigiamas rezultatas davė raudoną spalvą ant detektavimo juostelės, kur raudonas seleno TP konjugato ir anti-TP kompleksas buvo prijungtas prie TP lizato ant juostelės liniuotos dalies. Neigiamas rezultatas ant detektavimo juostelės šioje srityje spalvos nedavė. 7 lentelėje parodyta, kad anti-TP detektavimo jautrumas buvo toks pats ir kraujyje ir plazmoje, o tai reiškia, kad polikatijonas (Merquat®-100) efektyviai agregavo ere kraujyje. 7 lentelė
Anti-TP mėginio praskiedimas Kraujas Plazma 1:10,8 + + 1:21,6 + + 1 20 29 1:43,2 + + 1:86,4 + + 1:172,8 - - Neigiama kontrolė - -
Visos čia pacituotos publikacijos, patentai ir patentinės paraiškos yra pridedamos kaip literatūros šaltiniai pilnoje apimtyje, lyg kad atskiras dokumentas būtų atskirai ir konkrečiai nurodytas kaip įtrauktas j nuorodas ir duotas pilnumoje.
Nors šis išradimas buvo aprašytas pabrėžiant tinkamiausius jo įgyvendinimo variantus, specialistams bus aišku, kad tinkamiausi įgyvendinimo variantai gali būti keičiami. Turima galvoje, kad išradimas gali būti naudojamas ir kitaip nei čia konkrečiai nurodyta. Tokiu būdu, šis išradimas apima visas modifikacijas, kurios patenka j šio išradimo sferą, išdėstytą aprašyme ir toliau duodamoje apibrėžtyje.
Claims (18)
- 30 I 121 IŠRADIMO APIBRĖŽTIS 1. Chromatografinio testavimo įtaisas analitės nustatymui kraujo mėginyje, besiskiriantis tuo, kad jis susideda iš: skysčio slinkimo kelią apibrėžiančio chromatografinio nešiklio, galinčio palaikyti kapiliarinį tekėjimą: minėto kraujo mėginio uždėjimo vietos skysčio kelyje, duodančios sąlytį su minėtu chromatografiniu nešikliu, detektavimo vietos ant minėto chromatografinio nešiklio, esančios toliau nuo minėtos uždėjimo vietos, difuziškai prijungtos žymėtosios medžiagos, esančios pasroviui nuo minėtos uždėjimo vietos, difuziškai prijungto eritrocitus atskiriančio agento plazmos arba serumo išskyrimui iš minėto kraujo mėginio, esančio prieš srovę nuo minėtos detektavimo vietos, ir difuziškai prijungto neutralizuojančio agento, esančio pasroviui nuo . minėto prijungto atskiriančio agento ir prieš srovę nuo minėtos detektavimo vietos.
- 2. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad jis yra imunotestavimo įtaisas.
- 3. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad minėtas eritrocitus atskiriantis agentas yra prijungtas minėto kraujo mėginio uždėjimo vietoje.
- 4. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad minėtas eritrocitus atskiriantis agentas yra teigiamą krūvį turinti medžiaga.
- 5. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 4 punktą, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad minėta teigiamą krūvį turinti medžiaga yra polikatijonas, pasirinktas iš grupės, susidedančios iš poli-L-lizino hidrobromido, poli-L-arginino hidrochlorido, poli-L-histidino, poli(lizinas, alaninas) 3:1 122 31 hidrobromido, poli(lizinas, alaninas) 2:1 hidrobromido, poli(lizinas, alaninas) 1:1 hidrobromido, poli(lizinas, triptofanas) 1:4 hidrobromido ir poli(dialildimetilamonio chlorido).
- 6. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 4 punktą, b e s i s k i r i a n - t i s tuo, kad minėta teigiamą krūvį turinti medžiaga yra poli(dialildimetilamonio chloridas).
- 7. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad minėtas neutralizuojantis agentas yra neigiamą krūvį turinti medžiaga.
- 8. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 7 punktą, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad minėta neigiamą krūvį turinti medžiaga yra polianijonas, pasirinktas iš dekstrano sulfato, poli(akrilo rūgšties), poli(natrio-4-stirensulfonato), poli(vinilsulfonrūgšties), poli(metilmetakrilo rūgšties), poli-L-asparto rūgšties ir karboksimetilceliuliozės.
- 9. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 7 punktą, b e s i s k i r i a n - t i s tuo, kad minėta neigiamą krūvį turinti medžiaga yra dekstrano sulfatas.
- 10. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 1 punktą, besisk i - r i a n t i s tuo, kad minėtas neutralizuojantis agentas yra difuziškai prijungtas prie chromatografinio nešiklio toje pačioje vietoje kaip ir minėta žymėtoji medžiaga.
- 11. Chromatografinio testavimo įtaisas pagal 1 punktą, besisk i - r i a n t i s tuo, kad minėta žymėtoji medžiaga yra selenu žymėta medžiaga.
- 12. Analitės buvimo kraujo mėginyje nustatymo būdas, b e s i s k i r i a n -1 i s tuo, kad jis susideda iš šių stadijų: skysčio slinkimo kelią apibrėžiančio chromatografinio nešiklio, galinčio palaikyti kapiliarinį tekėjimą, kuriame yra išdėstyta (a) minėto kraujo mėginio uždėjimo vieta skysčio kelyje, duodanti sąlytį su minėtu chromatografiniu nešikliu, (b) detektavimo vieta ant minėto chromatografinio nešiklio, esanti toliau nuo minėtos uždėjimo vietos, (c) žymėtoji medžiaga, esanti pasroviui nuo minėtos uždėjimo vietos, (d) difuziškai prijungtas eritrocitus atskiriantis 123 32 agentas plazmos arba serumo išskyrimui iš minėto kraujo mėginio, esantis prieš srovę nuo minėtos detektavimo vietos, ir (e) difuziškai prijungtas neutralizuojantis agentas, esantis pasroviui nuo minėto prijungto atskiriančio agento ir prieš srovę nuo minėtos detektavimo vietos, pateikimo; minėtos uždėjimo vietos sąlyčio su minėtu kraujo mėginiu; ir analitės buvimo nustatymo minėtame kraujo mėginyje.
- 13. Būdas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta žymėtoji medžiaga yra selenu žymėta medžiaga.
- 14. Būdas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas neutralizuojantis agentas yra difuziškai prijungtas prie chromatografinio nešiklio toje pačioje vietoje kaip ir minėta žymėtoji medžiaga.
- 15. Būdas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas eritrocitus atskiriantis agentas yra teigiamą krūvj turinti medžiaga.
- 16. Būdas pagal 15 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta teigiamą krūvj turinti medžiaga yra polikatijonas, pasirinktas iš grupės, susidedančios iš poli-L-lizino hidrobromido, poli-L-arginino hidrochlorido, poli-L-histidino, poli(lizinas, alaninas) 3:1 hidrobromido, poli(lizinas, alaninas) 2:1 hidrobromido, poliflizinas, alaninas) 1:1 hidrobromido, poli(lizinas, triptofanas) 1:4 hidrobromido ir poli(dialildimetilamonio chlorido).
- 17. Būdas pagal 12 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas neutralizuojantis agentas yra neigiamą krūvį turinti medžiaga.
- 18. Būdas pagal 17 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta neigiamą Krūvį turinti medžiaga yra polianijonas, pasirinktas iš dekstrano sulfato, poli(akrilo rūgšties), poli(natrio-4-stirensulfonato), poli(vinilsulfonrūgšties), poli(metilmetakrilo rūgšties), poli-L-asparto rūgšties ir karboksimetilceliuliozės.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/007,651 US6673629B2 (en) | 1998-01-15 | 1998-01-15 | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LT2000071A true LT2000071A (lt) | 2000-11-27 |
Family
ID=21727406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LT2000071A LT2000071A (lt) | 1998-01-15 | 2000-07-18 | Polikatijonų neutralizavimas chromotografijos įtaise, skirtame neapdorotam kraujuj analizuoti |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6673629B2 (lt) |
| EP (2) | EP1371984B1 (lt) |
| JP (1) | JP4270751B2 (lt) |
| KR (1) | KR100575390B1 (lt) |
| CN (2) | CN1213303C (lt) |
| AR (1) | AR014312A1 (lt) |
| AT (2) | ATE244890T1 (lt) |
| AU (1) | AU748387B2 (lt) |
| BR (1) | BR9814007A (lt) |
| CA (1) | CA2318459C (lt) |
| CO (1) | CO5090841A1 (lt) |
| CZ (1) | CZ294954B6 (lt) |
| DE (2) | DE69816339T2 (lt) |
| DK (2) | DK1371984T3 (lt) |
| ES (2) | ES2202931T3 (lt) |
| HK (1) | HK1035027A1 (lt) |
| HU (1) | HU225975B1 (lt) |
| ID (1) | ID26635A (lt) |
| IL (1) | IL136236A (lt) |
| LT (1) | LT2000071A (lt) |
| MY (1) | MY129171A (lt) |
| NO (1) | NO327714B1 (lt) |
| NZ (1) | NZ504710A (lt) |
| PL (1) | PL196464B1 (lt) |
| PT (2) | PT1047943E (lt) |
| TR (1) | TR200002051T2 (lt) |
| TW (1) | TW594012B (lt) |
| UY (1) | UY25351A1 (lt) |
| WO (1) | WO1999036781A1 (lt) |
| ZA (1) | ZA9811953B (lt) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60142394D1 (de) * | 2000-06-28 | 2010-07-29 | Panasonic Corp | Biozensor |
| JPWO2002037099A1 (ja) * | 2000-10-27 | 2004-03-11 | 国際試薬株式会社 | 腎障害の診断方法 |
| JP2002303629A (ja) * | 2001-04-06 | 2002-10-18 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫クロマトデバイス及びそれを用いた被検物質測定方法 |
| US6841159B2 (en) | 2002-01-30 | 2005-01-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Rapid lateral flow assay for determining exposure to Mycobacterium tuberculosis and other mycobacteria |
| JPWO2004012750A1 (ja) * | 2002-08-02 | 2006-11-30 | 東レ株式会社 | 血小板多血漿の調製方法 |
| WO2004065010A2 (en) * | 2003-01-21 | 2004-08-05 | Micronics Inc. | Method and system for microfluidic manipulation, amplification and analysis of fluids, for example, bacteria assays and antiglobulin testing |
| WO2005044234A2 (en) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | Elan Pharma International Ltd. | Nanoparticulate compositions having a peptide as a surface stabilizer |
| SE0400662D0 (sv) * | 2004-03-24 | 2004-03-24 | Aamic Ab | Assay device and method |
| SE527036C2 (sv) * | 2004-06-02 | 2005-12-13 | Aamic Ab | Analysanordning med reglerat flöde och motsvarande förfarande |
| GB0417601D0 (en) * | 2004-08-06 | 2004-09-08 | Inverness Medical Switzerland | Assay device & method |
| KR20130019031A (ko) * | 2004-09-23 | 2013-02-25 | 트리패스 이미징, 인코포레이티드 | 생물학적 시료의 고정을 위한 다가양이온성 중합체 코팅 |
| US7816122B2 (en) * | 2005-10-18 | 2010-10-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Lateral flow device with onboard reagents |
| DE102005056592A1 (de) * | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Basf Ag | Herstellung und Verwendung von hochfunktionellen, hoch-oder hyperverzweigten Polylysinen |
| US7618810B2 (en) * | 2005-12-14 | 2009-11-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Metering strip and method for lateral flow assay devices |
| US20080023395A1 (en) * | 2006-07-31 | 2008-01-31 | Sigma Aldrich Co. | Compositions and Methods for Isolation of Biological Molecules |
| EP2059258B1 (en) * | 2006-09-08 | 2019-11-13 | Wyeth LLC | Arginine wash in protein purification using affinity chromatography |
| GB0623866D0 (en) * | 2006-11-29 | 2007-01-10 | Wilson Stuart M | Capture of mycobacteria like micro-organisms |
| AU2007327687B2 (en) * | 2006-11-29 | 2012-12-20 | Microsens Medtech Ltd | Capture of mycobacteria like micro-organisms |
| WO2008124021A1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-10-16 | Clavina Diagnostics, Inc. | Method of detecting red cell antigen-antibody reactions |
| CN101750244B (zh) * | 2008-10-13 | 2014-03-12 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种分离血液样本中红细胞的方法以及运用 |
| EP2269737B1 (en) | 2009-07-02 | 2017-09-13 | Amic AB | Assay device comprising serial reaction zones |
| KR100946566B1 (ko) * | 2009-11-18 | 2010-03-11 | 주식회사 인포피아 | 측방 유동 면역 분석 디바이스 |
| US20120302456A1 (en) * | 2010-11-23 | 2012-11-29 | President And Fellows Of Harvard College | Vertical flow-through devices for multiplexed elisa driven by wicking |
| WO2013147308A1 (ja) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 |
| US9885707B2 (en) | 2012-03-30 | 2018-02-06 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting object in red blood cell-containing sample |
| JP6399632B2 (ja) * | 2013-10-02 | 2018-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップ、および該テストストリップを使用するイムノクロマトグラフィー |
| EP3057600B1 (en) | 2013-10-18 | 2019-03-13 | Fortus Medical, Inc. | Method of preparing a bone marrow aspirate enhanced bone graft |
| CN110780066A (zh) * | 2014-12-16 | 2020-02-11 | 积水医疗株式会社 | 用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱 |
| US10610242B2 (en) | 2015-05-08 | 2020-04-07 | Fortus Medical, Inc. | Bone fragment and tissue harvesting system |
| JP6675834B2 (ja) * | 2015-05-21 | 2020-04-08 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法 |
| US20190025298A1 (en) * | 2016-01-15 | 2019-01-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for detecting an analyte |
| JP6738608B2 (ja) * | 2016-01-22 | 2020-08-12 | 田中貴金属工業株式会社 | クロマトグラフ媒体 |
| US10456502B2 (en) | 2016-09-07 | 2019-10-29 | Fortus Medical, Inc. | Bone void filler preparation system |
| CA3177475A1 (en) * | 2017-01-11 | 2018-07-19 | Cypher Medical, Llc | Method of estimating blood volume |
| EP3634245A4 (en) | 2017-06-07 | 2021-03-17 | Fortus Medical, Inc. | CONJUNCTIVE TISSUE PROGENITOR CELL SUCTION AND TREATMENT SYSTEM |
| US11278336B2 (en) | 2018-03-22 | 2022-03-22 | Fortus Medical, Inc. | Osteomedullary tissue processing system |
| CN110308276A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-10-08 | 郑州轻工业学院 | 一种增加黄曲霉毒素b1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液 |
| SG11202112000YA (en) * | 2019-06-20 | 2021-11-29 | UCB Biopharma SRL | Hplc-based detection of flocculation agents in a protein sample |
| CN110823670B (zh) * | 2019-11-27 | 2023-03-24 | 香港大德昌龙生物科技有限公司 | 用于分离血细胞的组合物、血细胞分离方法、检测试剂盒和检测装置 |
| EP4399521A1 (en) * | 2021-09-10 | 2024-07-17 | Quidel Corporation | Agglutinating agents, devices and methods for whole blood assays |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4308232A (en) * | 1979-07-09 | 1981-12-29 | Sherwood Medical Industries Inc. | Anticoagulant stopper coating |
| DE3029579C2 (de) * | 1980-08-05 | 1985-12-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut |
| US5073484A (en) | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| US4594327A (en) | 1983-11-02 | 1986-06-10 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Assay method for whole blood samples |
| US4678757A (en) * | 1985-04-11 | 1987-07-07 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Device and method for whole blood separation and analysis |
| US4806311A (en) * | 1985-08-28 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Multizone analytical element having labeled reagent concentration zone |
| US4935147A (en) * | 1985-12-20 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
| US4753776A (en) | 1986-10-29 | 1988-06-28 | Biotrack, Inc. | Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter |
| US5120643A (en) | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
| JPH02140147A (ja) | 1988-01-19 | 1990-05-29 | Syntex Usa Inc | 赤血球から血漿を分離する方法および装置 |
| US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
| US5670381A (en) | 1988-01-29 | 1997-09-23 | Abbott Laboratories | Devices for performing ion-capture binding assays |
| US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
| DE3903114A1 (de) * | 1989-02-02 | 1990-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines enzyms aus einem isoenzymgemisch sowie hierfuer geeigneter testtraeger und dessen verwendung |
| US4933092A (en) | 1989-04-07 | 1990-06-12 | Abbott Laboratories | Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood |
| US5306623A (en) * | 1989-08-28 | 1994-04-26 | Lifescan, Inc. | Visual blood glucose concentration test strip |
| US5435970A (en) * | 1989-12-18 | 1995-07-25 | Environmental Diagnostics, Inc. | Device for analysis for constituents in biological fluids |
| US5212060A (en) | 1990-04-27 | 1993-05-18 | Genesis Labs, Inc. | Dry test strip comprising a dextran barrier for excluding erythrocytes |
| US5186843A (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-16 | Ahlstrom Filtration, Inc. | Blood separation media and method for separating plasma from whole blood |
| DE69327891T2 (de) * | 1992-07-06 | 2000-07-20 | Terumo K.K., Tokio/Tokyo | Material zur Entfernung von pathogener Substanz und mit diesem Material hergestellter Blutfilter |
| AU706456B2 (en) | 1995-03-27 | 1999-06-17 | Lifescan, Inc. | Chemical timer for a direct-reading reagent test strip |
| US5725774A (en) | 1995-04-07 | 1998-03-10 | Lxn Corp. | Whole blood separation method and devices using the same |
| US5753497A (en) * | 1995-12-22 | 1998-05-19 | Universal Health Watch Inc | Diagnostic assay providing blood separation |
-
1998
- 1998-01-15 US US09/007,651 patent/US6673629B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 HU HU0100557A patent/HU225975B1/hu unknown
- 1998-12-29 AU AU22092/99A patent/AU748387B2/en not_active Expired
- 1998-12-29 DK DK03009811T patent/DK1371984T3/da active
- 1998-12-29 IL IL13623698A patent/IL136236A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 AT AT98966118T patent/ATE244890T1/de active
- 1998-12-29 KR KR1020007007787A patent/KR100575390B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 DK DK98966118T patent/DK1047943T3/da active
- 1998-12-29 TR TR2000/02051T patent/TR200002051T2/xx unknown
- 1998-12-29 NZ NZ504710A patent/NZ504710A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 JP JP2000540442A patent/JP4270751B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 BR BR9814007-8A patent/BR9814007A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-12-29 ID IDW20001354A patent/ID26635A/id unknown
- 1998-12-29 ES ES98966118T patent/ES2202931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 AT AT03009811T patent/ATE298425T1/de active
- 1998-12-29 MY MYPI98005927A patent/MY129171A/en unknown
- 1998-12-29 ES ES03009811T patent/ES2244861T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 EP EP03009811A patent/EP1371984B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 WO PCT/US1998/027802 patent/WO1999036781A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-29 CN CNB031579124A patent/CN1213303C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69816339T patent/DE69816339T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CA CA2318459A patent/CA2318459C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 EP EP98966118A patent/EP1047943B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 PT PT98966118T patent/PT1047943E/pt unknown
- 1998-12-29 PL PL342658A patent/PL196464B1/pl unknown
- 1998-12-29 PT PT03009811T patent/PT1371984E/pt unknown
- 1998-12-29 CN CN98813110A patent/CN1125343C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69830675T patent/DE69830675T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CZ CZ20002606A patent/CZ294954B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-30 ZA ZA9811953A patent/ZA9811953B/xx unknown
-
1999
- 1999-01-13 CO CO99001481A patent/CO5090841A1/es unknown
- 1999-01-14 UY UY25351A patent/UY25351A1/es not_active IP Right Cessation
- 1999-01-15 AR ARP990100131A patent/AR014312A1/es active IP Right Grant
- 1999-04-03 TW TW088100600A patent/TW594012B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-07-11 NO NO20003569A patent/NO327714B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 LT LT2000071A patent/LT2000071A/lt unknown
-
2001
- 2001-08-09 HK HK01105549A patent/HK1035027A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LT2000071A (lt) | Polikatijonų neutralizavimas chromotografijos įtaise, skirtame neapdorotam kraujuj analizuoti | |
| JP2948318B2 (ja) | 特異的結合アッセイ用の赤血球の分離方法 | |
| US5212060A (en) | Dry test strip comprising a dextran barrier for excluding erythrocytes | |
| KR100209072B1 (ko) | 숙신이미드함유 중합체로 생물학적 활성 시약을 제조하는 방법, 분석 요소 및 이것의 사용방법 | |
| HUT73379A (en) | Chromatographic assay device for detection or determination of an analyte in a sample | |
| WO2007097917A1 (en) | Combination vertical and lateral flow immunoassay device | |
| US20070092978A1 (en) | Target ligand detection | |
| CN102565382B (zh) | 一种检测血液样本中过敏原特异性IgE抗体的免疫层析方法 | |
| CN1300581C (zh) | Sars病毒抗体检测方法及快速诊断试剂盒和制备方法 | |
| EP1659407A1 (en) | Diagnostic control system | |
| EP0287731A2 (en) | Dry test strips having a red blood cell exclusion layer | |
| EP0970107B1 (en) | Cyclosporine derivatives and uses thereof | |
| JPH11352127A (ja) | 非特異的吸着防止剤 | |
| Choy et al. | A comparison of immunological methods for the detection of Trichinella spiralis antigen | |
| MXPA00006963A (en) | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use | |
| WO1992022816A1 (en) | Solid phase immunoassay | |
| DE3924239A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von immunologisch nachweisbaren substanzen |