NO327714B1 - Anordning og metode for kromatografisk deteksjon av en analytt i en blodprove. - Google Patents
Anordning og metode for kromatografisk deteksjon av en analytt i en blodprove. Download PDFInfo
- Publication number
- NO327714B1 NO327714B1 NO20003569A NO20003569A NO327714B1 NO 327714 B1 NO327714 B1 NO 327714B1 NO 20003569 A NO20003569 A NO 20003569A NO 20003569 A NO20003569 A NO 20003569A NO 327714 B1 NO327714 B1 NO 327714B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- poly
- bound
- conjugate
- chromatography
- polycation
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 90
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 90
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 85
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 83
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 62
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 57
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 51
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 50
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- -1 poly(diallyldimethylammonium chloride) Polymers 0.000 claims description 40
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 39
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims description 36
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 24
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 21
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 18
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 12
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 9
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 claims description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 6
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 4
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 claims description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001464 poly(sodium 4-styrenesulfonate) Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000371 poly(diallyldimethylammonium chloride) polymer Polymers 0.000 claims 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 98
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 81
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 70
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 45
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 45
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 22
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 14
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 14
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 14
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 13
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 13
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 13
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 12
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 11
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000009471 action Effects 0.000 description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 10
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 9
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 5
- 150000003342 selenium Chemical class 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 239000002801 charged material Substances 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920000075 poly(4-vinylpyridine) Polymers 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- KZKAYEGOIJEWQB-UHFFFAOYSA-N 1,3-dibromopropane;n,n,n',n'-tetramethylhexane-1,6-diamine Chemical compound BrCCCBr.CN(C)CCCCCCN(C)C KZKAYEGOIJEWQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-O 4-ethenylpyridine;hydron Chemical compound C=CC1=CC=[NH+]C=C1 KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N Angelic acid Natural products CC=C(C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 229920001131 Pulp (paper) Polymers 0.000 description 1
- 239000004772 Sontara Substances 0.000 description 1
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 244000078885 bloodborne pathogen Species 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Substances O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950007870 hexadimethrine bromide Drugs 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229940050176 methyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229910052755 nonmetal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 1
- JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N selenium dioxide Chemical compound O=[Se]=O JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 238000009600 syphilis test Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N tiglic acid Chemical compound C\C=C(/C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N vinylsulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C=C NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/5695—Mycobacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
- G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
- G01N2333/162—HIV-1, HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, DC4-Binding site
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/20—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/35—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/824—Immunological separation techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/105831—Protein or peptide standard or control [e.g., hemoglobin, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
Description
Oppfinnelsens tekniske område
Den foreliggende oppfinnelsen angår kromatografitestanord-ninger og en fremgangsmåte for deteksjon av en analytt i en fullblodsprøve, og mer spesielt til en anordning og fremgangsmåte som anvender en agens som separerer røde blodceller for å aggregere disse blodcellene, og en nøytralise-rende agens for å nøytralisere enhver negativ effekt som agensen som separerer røde blodceller kan ha på testsystemet .
Bakgrunn for oppfinnelsen
Moderne, kliniske, diagnostiske fremgangsmåter utføres rutinemessig på blodprøver. Dessverre interfererer røde blodceller med mange diagnostiske bestemmelser. I analyt-tester kan røde blodceller inhibere binding mellom spesifikke bindingsparmedlemmer. Likeledes har røde blodceller enzymaktivitet som kan, avhengig av hvilken test som blir anvendt, interferere med signalet som blir produsert. Videre, i et raskt testformat ved anvendelse av en kromatografitestanordning, spesielt en kromatografisk immuntestanordning, kan røde blodceller inhibere væskestrøm som er nødvendig for at reaksjoner skal skje på anordningen. Av disse- og andre grunner, utføres mange testfremgangsmåter på plasma eller serum som først må bli separert fra en fullblodsprøve.
I det europeiske patentet EP 0325413 er det beskrevet en metode og en kromatografisk teststripeanordning for å detektere en analytt i en fullblodsprøve der det til deler av teststripen er bundet et kationisk agens for separasjon av røde blodceller fra plasma og i tillegg et område på teststripen som inneholder et spesifikt bindingspar ikke-diffust bundet til teststripen.
Det fins mange kjente teknikker for å separere røde blodceller fra plasma i en fullblodsprøve. Sentrifugering er en velkjent fremgangsmåte i faget der plasma (før koagulasjon) og serum (etter koagulasjon) separeres fra fullblod. I denne fremgangsmåten samles de røde blodcellene på bunnen av testrøret og serumet fjernes ved dekantering eller en annen fremgangsmåte. Det å dele fullblod inn i lag med sentrifugering har imidlertid mange ulemper. Generelt forut-setter sentrifugering et stort blodprøvevolum. Videre er fremgangsmåten tidkrevende og er avhengig av tungvint labo-ratorieutstyr som ofte ikke oppbevares på legekontor. Dessuten øker den ekstra håndteringen av blodet eksponeringen for potensielle farer med blodtransporterte patogener.
For å redusere eller eliminere behovet for sentrifugering har testanordninger blitt utviklet som anvender gradient-membraner eller oppfangingsmembraner for å separere røde blodceller fra væskedelen i blodet. Immobiliserte antistoffer mot røde blodceller har også blitt anvendt.
Andre kjente teknikker for separering av røde blodceller fra plasma eller serum innbefatter (1) slå sammen en full-blodsprøve med en agens som binder røde blodceller og fil-trere blandingen gjennom et fast, porøst element der minst ett spesifikt bindingsparmedlem er bundet for å fjerne de agglutinerte røde blodcellene; (2) føre fullblod gjennom et mikrofiberfilter av glass som kan eller ikke kan ha en agglutinerende agens inkorporert; (3) benytte en barriere eller et eksklusjonslag av polysakkarider for å hindre at røde blodceller passerer gjennom og interfererer med deteksjon eller visualisering av et signal på en tørr teststrim-mel; og (4) anvende en fast fase med en polykationisk over-flate som binder røde blodceller men ikke plasma.
Mange av disse separeringsteknikkene for røde blodceller fra plasma er dyre, kompliserte, kan resultere i ufullsten-dig separering av røde blodceller og kan forårsake hemolyse. Hemolyse fører til uspesifikk binding eller høy bakgrunn som resulterer i redusert testsensitivitet. Dette kan skyldes fritt hemoglobin som kan farge deteksjonsområdet slik at området får en farge som spenner fra rosa til mør-kerødbrun. Som et resultat av dette kan produksjonen av et visuelt, kjemisk signal bli fullstendig eller delvis skjult i nærvær av hemoglobinfargen i deteksjonsområdet. Videre har anvendelsen av en separerende agens, som et polykation, i et testsystem en tendens til å interferere med systemet, ofte ved å aggregere andre reagenser eller bindingsmedlemmer i tillegg til de røde blodcellene.
Det er derfor behov for en anordning og fremgangsmåte for deteksjon av en analytt i en blodprøve uten å påvirke testsystemet uheldig. En slik anordning og fremgangsmåte bør være egnet for fullblodsprøver av ulike størrelser, innbefattende små prøver.
Oppsummering av oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelsen relateres til en kromato-graf ianordning innbefattende en kromatografibærer som definerer en bane for væskestrøm som kan sørge for kapillær strøm, et påføringssete for nevnte blodprøve som er i kontakt med væskestrømmen i kromatografibæreren, et deteksjonssete på kromatografibæreren atskilt fra påførings-setet, en diffust bundet, merket substans lokalisert ned-strøms for påføringssetet, en diffust bundet agens som separerer røde blodceller for å separere plasma eller serum fra blodprøven oppstrøms for deteksjonssetet, og en diffust bundet, nøytraliserende agens som kan binde den separerende agensen nedstrøms for den bundne, separerende agensen og oppstrøms for nevnte deteksjonssete der en positiv ladning til nevnte separerende agens nøytraliseres. Fortrinnsvis er agensen som separerer røde blodceller lokalisert på påfø-ringssetet slik at de røde blodcellene vil bli separert fra serumet eller plasmaet før serumet eller plasmaet forflytter seg nedover kromatografibæreren.
Den foreliggende oppfinnelsen angår også en fremgangsmåte for å detektere nærværet av en analytt i en prøve, fortrinnsvis en blodprøve, som innbefatter tilveiebringelse av en kromatografibærer som definerer en bane for væskestrøm som kan sørge for kapillær strøm, der det langs med denne bæreren er (a) et påføringssete for blodprøven som er i kontakt med væskestrømmen i nevnte kromatografibærer, (b) et deteksjonssete på kromatografibæreren som er atskilt fra påføringssetet, (c) en diffust bundet, merket substans lokalisert nedstrøms for påføringssetet, (d) en diffust bundet agens som separerer røde blodceller for å separere plasma eller serum fra nevnte blodprøve oppstrøms for deteksjonssetet og (e) en diffust bundet, nøytraliserende agens, som kan binde den separerende agensen, lokalisert nedstrøms for den bundne, separerende agensen og oppstrøms for deteksjonssetet, der en positiv ladning til den separerende agensen nøytraliseres; la påføringssetet komme i kontakt med blodprøven slik at agensen som separerer røde blodceller separerer plasmaet eller serumet fra blodprøven, og den nøytraliserende agensen nøytraliserer den positive ladningen til den separerende agensen etter som prøven strømmer langs strømningsbanen; og detektere nærværet av analytt i blodprøven.
Kort beskrivelse av figurene
Figur 1 viser en foretrukket utførelse av kromatografitest-anordningen i den foreliggende oppfinnelsen.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelsen er basert på observasjonen av at røde blodceller i fullblodsprøver interfererer med bestemmelser av tilstedeværelsen eller mengden av analytt i en blodprøve, som ellers kunne bli gjort enkelt via testsystemer. I en immuntest er det for eksempel usannsynlig at en fullblodsprøve, som kommer i kontakt med et påførings-sete, vil bevege seg ned strimmelen via kapillær påvirkning pga. det hindrende- eller interfererende nærværet av de røde blodcellene. Den foreliggende oppfinnelsen løser dette problemet uten å påvirke sensitiviteten til testsystemet.
De følgende definisjonene kan være nyttige for å forstå utførelsene av den foreliggende oppfinnelsen.
"Analytt" eller "analytt av interesse" henviser til forbin-delsen eller blandingen som skal bli detektert eller målt, som har minst én epitope eller ett bindingssete. Analytten kan være enhver substans som har et naturlig forekommende, analyttspesifikt bindingsmedlem eller som et analyttspesifikt bindingsmedlem kan bli fremstilt for. Analytter innbefatter, men er ikke begrenset til, toksiner, organiske forbindelser, proteiner, peptider, mikroorganismer, amino-syrer, nukleinsyrer, hormoner, steroider, vitaminer, lege-midler (innbefattende de som blir administrert for terapeu-tiske formål så vel som de som blir administrert for ulov-lige formål) og metabolitter av eller antistoffer til enhver av substansene ovenfor. Begrepet "analytt" innbefatter også en hvilken som helst antigen substans, hapten, antistoff, makromolekyl og kombinasjoner derav.
"Kromatografibærer" henviser til ethvert egnet porøst, absorberende, isotropt eller kapillært materiale, som innbefatter deteksjonssetet til anordningen og som analytten eller testprøven kan bli transportert gjennom ved hjelp av kapillær påvirkning eller via samme prinsipp som når en veke suger opp væske. Fagfolk vil forstå at kromatografibæreren kan bli laget av et enkelt materiale eller mer enn ett materiale (f.eks. kan ulike soner, deler, lag, områder eller seter bli laget av ulike materialer) så lenge som de mange lagene er i væskestrømkontakt med hverandre og dermed gjør det mulig for testprøven å passere mellom materialene. Kontakt med væskestrømmen muliggjør passeringen av minst noen komponenter i prøven, dvs. analytt, mellom sonene av det porøse materialet og er fortrinnsvis enhetlig langs kontaktgrenseflaten mellom de ulike sonene. Naturlige, syn-tetiske eller naturlig forekommende materialer som er modi-
fisert syntetisk kan bli anvendt som kromatografibæreren og innbefatter, men er ikke begrenset til: papir (fibrøst) eller membraner (mikroporøse) av cellulosematerialer slik som papir; cellulose og cellulosederivater som cellulose-acetat og nitrocellulose; fiberglass; tøy, både naturlig forekommende (f.eks. bomull) og syntetisk (f.eks. nylon); porøse geler og lignende.
"Markør" henviser til enhver substans som kan produsere et signal som er detekterbart visuelt eller instrumentalt. Ulike markører som er nyttige for anvendelse i den foreliggende oppfinnelsen innbefatter markører som produserer kje-miske- eller fysiske signaler. Eksempler innbefatter enzy-mer og substrater, kromagener, fluorescerende forbindelser, kjemiluminescerende forbindelser, fargede eller fargbare organiske polymerlatekspartikler, og liposomer eller andre vesikler inneholdende direkte synlige substanser. Fortrinnsvis anvendes radioaktive markører, kolloidale metallpartikler eller kolloidale ikke-metallpartikler i den foreliggende oppfinnelsen. Foretrukne markører innbefatter kolloidale gull- og latekspartikler.
"Merket substans" eller "konjugat" henviser til en substans innbefattende en detekterbar markør festet til et spesifikt bindingsmedlem. Festet kan være kovalent- eller ikke-kovalent binding og kan innbefatte nukleinsyrehybridisering. Markøren lar den merkede substansen få produsere et detekterbart signal som direkte eller indirekte er relatert til analyttmengden i en testprøve. Den spesifikke bindings-medlemkomponenten til den merkede substansen er selektert for å binde direkte eller indirekte til analytten.
"Spesifikt bindingsmedlem" henviser til et medlem av et spesifikt bindingspar, dvs. to ulike molekyler der ett av molekylene binder spesifikt til det andre molekylet kjemisk- eller fysiskt. Hvis det spesifikke bindingsmedlemmet er en immunreaktant kan det for eksempel være et antistoff, antigen, hapten eller kompleks derav, og hvis et antistoff
anvendes, kan det være et monoklonalt- eller polyklonalt antistoff, et rekombinant protein eller antistoff, et kimæ-risk antistoff, en blanding(er) eller fragment(er) derav, så vel som en blanding av et antistoff og andre spesifikke bindingsmedlemmer. Spesifikke eksempler på spesifikke bindingsmedlemmer innbefatter biotin og avidin, et antistoff og dets korresponderende antigen (der begge ikke har noe forhold til en prøve som skal bli undersøkt), en enkeltkje-det nukleinsyre og dens komplementære kjede, og lignende.
"Oppfangingssubstans" henviser til ett eller flere spesifikke bindingsmedlemmer som er festet i eller på en del av den kromatografiske bæreren for å danne ett eller flere "oppfangingsseter" der analytten, den merkede reagensen, og/eller kontrollreagensen blir immobilisert på kromato-graf ibæreren. Festefremgangsmåten er ikke kritisk for den foreliggende oppfinnelsen. Oppfangingssubstansen gjør observasjonen av det detekterbare signalet lettere ved å hovedsakelig separere analytten og/eller den merkede substansen fra ubundne testreagenser og de gjenværende komponentene i testprøven. Oppfangingssubstansen kan bli immobilisert på kromatografibæreren før eller under utføringen av testen ved hjelp av enhver egnet festefremgangsmåte. Videre kan oppfangingssubstansen bli tilveiebragt på et enkelt
deteksjonssete eller i flere seter på eller i kromatografibæreren. Oppfangingssubstansen kan også bli gitt i en rekke konfigurasjoner for å sørge for ulike deteksjons- eller målingsformater. For eksempel kan oppfangingssubstansen bli formet som en bokstav, et tall, ikon eller symbol eller enhver kombinasjon derav.
Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer spesielt en kromatografitestanordning for å detektere nærværet av en analytt i en prøve, fortrinnsvis en blodprøve. Anordningen er fortrinnsvis i form av en kromatografistrimmel med en kromatografibærer som definerer en bane for væskestrøm som kan sørge for kapillær strøm, et påføringssete for blod-prøven og et deteksjonssete atskilt fra påføringssetet for å detektere nærværet eller mengden av en analytt til stede i blodprøven. Fortrinnsvis innbefatter anordningen også en merket substans (eller konjugat) som er bundet diffust til kromatografibæreren. I en foretrukket utførelse vil den merkede substansen binde til analytten eller konkurrere med analytten for binding på deteksjonssetet. Anordningen inneholder fortrinnsvis to ekstra agenser bundet diffust til den kromatografiske bæreren: (1) en agens som separerer røde blodceller oppstrøms (heretter er forflytningsretnin-gen til en prøve som er forårsaket av kapillær påvirkning kalt "nedstrøms" og den motsatte retningen er kalt "opp-strøms") i forhold til deteksjonssetet som kan separere plasma eller serum fra blodprøven og (2) en nøytraliserende agens nedstrøms for agensen som separerer røde blodceller og oppstrøms for deteksjonssetet for å nøytralisere enhver effekt, spesielt en ugunstig effekt, av agensen som separerer røde blodceller på kromatografisystemet.
I sammenheng med den foreliggende oppfinnelsen kan uttryk-ket "diffust bundet," når det blir anvendt om en gitt reagens, angå enhver reagens anvendt i den foreliggende oppfinnelsen som innbefatter, men ikke er begrenset til, en merket substans, et spesifikt bindingsmedlem, en agens som separerer røde blodceller eller en nøytraliserende agens, og betyr at reagensen(e) er bundet på en slik måte at den bundne reagensen(e) kan forflytte seg langs strømnings-banen.
For formål i den foreliggende oppfinnelsen kan ethvert testsystem bli anvendt. Immuntestsystemer er foretrukket og innbefatter, men er ikke begrenset til, laterale gjennom-strømningssystemer, vertikale gjennomstrømningssystemer, bløtleggingssystemer og målepinner. En generell beskrivelse av kjente testsystemer er fremlagt nedenfor.
I en kromatografistrimmel er i hvert fall et påføringssete for prøven og et deteksjonssete generelt arrangert på en kromatografibærer. En prøveløsning, i dette tilfellet fortrinnsvis en blodprøve, som er mistenkt for å inneholde en analytt av interesse, dvs. en analytt, forflytter seg gjennom kromatografibæreren med kapillær påvirkning når den blir satt til prøvepåføringssetet og en merket substans eller konjugat, som er del av en merkingsfremgangsmåte utført på en kromatografibærer på forhånd, er akkumulert på deteksjonssetet i direkte eller inverst forhold til nærværet eller mengden av substansen som skal bli undersøkt i prøveløsningen, effektuert med en bindingsreaksjon (slik som en immunologisk reaksjon), slik at tilstedeværelsen eller mengden av substans som skal bli undersøkt i prøve-løsningen kan bli funnet ved å måle nærværet eller mengden av den dermed akkumulerte, merkede substansen eller konjugatet. Ulike kromatografistrimler er kjent og alle disse kjente kromatografistrimlene, innbefattende de som vil bli beskrevet senere, kan bli anvendt i den foreliggende oppfinnelsen. Begrepet "kromatografitestanordning," slik det er anvendt heri, betyr en kromatografistrimmel som frem-stilles på en slik måte at den kan bli anvendt i en test og kan bli lagret og transportert.
Det følgende beskriver et typisk eksempel på en kromato-graf istrimmel . Et påføringssete for prøven kan være lokalisert på det samme stedet som den merkede substansen foreligger, fortrinnsvis i en posisjon oppstrøms for den merkede substansen. Når en prøveløsning, som er mistenkt for å inneholde en analytt som skal bli undersøkt, kommer i kontakt med påføringssetet for prøven, forflytter prøveløsnin-gen seg gjennom kromatografibæreren i nedstrømsretningen sammen med analytten ved kapillær påvirkning. Normalt er analytten en forbindelse som binder på en bestemt måte til en oppfangingssubstans festet til deteksjonssetet, eller den er en forbindelse som binder på en bestemt måte til et konjugat som binder spesifikt til oppfangingssubstansen på deteksjonssetet. For eksempel er analytten et antistoff når oppfangingssubstansen er et antigen eller konjugatet inneholder et antigen, og analytten er et antigen når oppfangingssubstansen er et antistoff eller konjugatet inneholder et antistoff. Som ytterligere et eksempel kan analytten være en nukleinsyre som binder til et komplementært konjugat og oppfangingssubstans.
Når påføringssetet for prøven er lokalisert oppstrøms i forhold til en merket substans, kan den merkede substansen bli plassert tilgrensende i forhold til prøvepåføringssetet eller i en posisjon atskilt fra prøvepåføringssetet.
Tilsetning av den merkede substansen kan bli utført med ulike fremgangsmåter, som for eksempel ved å tilsette den i en bestemt posisjon utenfor deteksjonssetet på kromato-graf istrimmelen etter tilsetning av prøveløsningen.
Siden den merkede substansen er plassert på en slik måte at den forflytter seg med den kapillære påvirkningen av prøve-løsningen, forflytter den merkede substansen seg i ned-strømsretningen når prøveløsningen tilsettes påførings-setet.
Deteksjonssetet er generelt lokalisert i en posisjon ned-strøms for den merkede substansen og med en bestemt avstand fra den merkede substansen. I deteksjonssetet er en oppfangingssubstans, som bare binder til en analytt eller et konjugat på en bestemt måte eller binder spesifikt til hver av substansene som skal bli undersøkt og en merket substans, festet til kromatografibæreren. I én utførelse binder derfor analytten (enkelte ganger koblet til en merket substans) , som blir forflyttet ved kapillær påvirkning av prø-veløsningen, til oppfangingssubstansen eller til et konjugat som i sin tur binder til oppfangingssubstansen. Den merkede substansen binder til den dermed bundne substansen som skal bli undersøkt og fremkaller dermed akkumulering av den merkede substansen i deteksjonen av nærværet eller mengden av analytten. Alternativt binder den merkede substansen og analytten, som blir forflyttet ved kapillær påvirkning, kompetitivt til oppfangingssubstansen eller til et konjugat som i sin tur binder til oppfangingssubstansen, og fremkaller dermed akkumulering av den merkede substansen i invers proporsjon i forhold til substansmengden som skal bli undersøkt.
Det er et tilfelle der en bestemt merket substans binder til både en oppfangingssubstans (eller et konjugat som i sin tur binder en oppfangingssubstans) og en analytt, men ikke samtidig, og i det tilfellet binder analytten først til den merkede substansen og den gjenværende merkede substansen, som ikke bandt substansen som skal bli undersøkt, binder til oppfangingssubstansen. Som en følge av dette kan nærværet eller mengden av analytten bli analysert ved å måle den merkede substansen som er akkumulert i deteksjonsområdet.
Ved leilighetsvise behov er ulike substanser lokalisert oppstrøms for deteksjonssetet. For eksempel kan et konjugat bli lokalisert på dette viset på en flyttbar måte.
I noen tilfeller kan ett eller flere ekstra deteksjonsseter bli plassert nedstrøms i forhold til det første deteksjonssetet. Dessuten kan det være ytterligere en forlengelse av kromatografibæreren nedstrøms for deteksjonssetet slik at en prøveløsning kan bli avgitt fullstendig eller bæreren kan bli utstyrt med et materiale for anvendelse i absorp-sjon av prøveløsningen.
Derfor kan nærværet eller mengden av en analytt av interesse i en prøveløsning bli funnet ved å måle nærværet eller mengden av en merket substans akkumulert i deteksjonssetet. I ett tilfelle kan dette bli oppnådd visuelt.
Det er meningen at den foreliggende oppfinnelsen skal bli anvendt med enhver blodprøve, innbefattende serum og plasma, men anvendes fortrinnsvis med en blodprøve inneholdende røde blodceller, f.eks. fullblod.
Før det søkes etter analytten av interesse i blodprøven fjernes fortrinnsvis de røde blodcellene for at testen skal ha den ønskede sensitiviteten. Derfor, i henhold til den foreliggende oppfinnelsen, bindes en agens som separerer røde blodceller til kromatografibæreren. Fortrinnsvis er agensen som separerer røde blodceller bundet diffust til kromatografibæreren. Agensen som separerer røde blodceller kan være bundet til kromatografibæreren på enhver lokalise-ring der de røde blodcellene vil bli separert fra plasmaet eller serumet. Den er fortrinnsvis bundet diffust til den kromatografiske bæreren oppstrøms for deteksjonssetet. Mest foretrukket er agensen som separerer røde blodceller bundet diffust til prøvepåføringssetet. Denne lokaliseringen er gunstig fordi den forårsaker aggregasjon av de røde blodcellene med en gang de overføres til kromatografibæreren, hvilket resulterer i minimal, om noen, forstyrrelse av strømmen til serumet eller plasmaet langs bæreren med kapillær påvirkning.
Agensen som separerer røde blodceller i den foreliggende oppfinnelsen kan være enhver substans som er i stand til å aggregere røde blodceller. Foretrukne agenser er positivt ladede materialer som polykationer, innbefattende f.eks. poly-L-lysinhydrobromid; poly(dimetyldiallylammonium)klorid (Merquat<®->100, Merquat® 280, Merquat<®> 550); poly-L-argininhydroklorid; poly-L-histidin; poly(4-vinylpyridin), poly(4-vinylpyridin)hydroklorid; poly(4-vinylpyridin) kryssbundet, metylkloridkvaternært salt; poly(4-vinylpyridin-co-styren); poly(4-vinylpyridinium poly(hydrogenfluorid)); poly(4-vinylpyridinium-p-toluensulfonat); poly(4-vinylpyridinium-tribromid); poly(4-vinylpyrrolidon-co-2-dimetylaminoetyl-metakrylat); polyvinylpyrrolidon, kryssbundet; polyvinylpyrrolidon, poly(melamin-co-formaldehyd); delvis metylert; heksadimetrinbromid; poly(Glu, Lys) 1:4 hydrobromid; poly-(Lys, Ala) 3:1 hydrobromid; poly(Lys, Ala) 2:1 hydrobromid; poly-L-lysin suksinylert; poly(Lys, Ala) 1:1 hydrobromid; og poly(Lys, Trp) 1:4 hydrobromid. Det mest foretrukne polykationet er poly(dimetyldiallylammonium)klorid (Merquat<®> -100) .
Agensen som separerer røde blodceller i den foreliggende oppfinnelsen kan bli anvendt i enhver egnet mengde som kan separere de røde blodcellene fra resten av prøven. Fortrinnsvis kan agensen som separerer røde blodceller foreligge i en konsentrasjon på ca. 0,04 % til ca. 1,3 % (vekt per volum), der fra ca. 0,13 % til ca. 0,33 % (vekt per volum) er mer foretrukket og ca. 0,20 % til ca. 0,33 %
(vekt per volum) er mest foretrukket.
En positiv ladning på agensen som separerer røde blodceller har en tendens til å aggregere enhver negativt ladet agens som er til stede på strimmelen. For eksempel kan også en merket substans eller et konjugat bundet til kromatografibæreren bli aggregert av agensen som separerer røde blodceller som interfererer med binding av analytten til konjugatet eller, i en kompetitiv test, bindingen av den merkede substansen og analytten av interesse til oppfangingssubstansen på deteksjonssetet eller et konjugat. Til slutt kan sensitiviteten og nøyaktigheten til immuntestsystemet bli redusert.
Når den blodcelleseparerende agensen er et positivt ladet materiale, benytter derfor den foreliggende oppfinnelsen fortrinnsvis en nøytraliserende agens. Den nøytraliserende agensen kan nøytralisere den positive ladningen til agensen som separerer røde blodceller, og dermed eliminere eller i hvert fall minimalisere enhver interferens med testsystemet forårsaket av agensen som separerer røde blodceller. Fortrinnsvis er den nøytraliserende agensen bundet diffust til den kromatografiske bæreren. Den nøytraliserende agensen kan være bundet diffust på ethvert sted på den kromatografiske bæreren der den kan nøytralisere en agens som separerer røde blodceller, men er fortrinnsvis lokalisert ned-strøms for agensen som separerer røde blodceller og opp-strøms for deteksjonssetet, og er mer foretrukket lokalisert på det samme stedet på kromatografibæreren som den diffust bundne, merkede substansen.
Den nøytraliserende agensen kan være ethvert polyanion som kan nøytralisere den positive ladningen til agensen som separerer røde blodceller. Foretrukne polyanioner innbefatter poly(akrylsyre), poly(akrylsyre, Na-salt), poly(metylmetakrylsyre), poly(Na-4-styrensulfonat), poly(vinylsulfonsyre), poly-L-asparaginsyre og karboksymetylcellulose, der dekstransulfat er mest foretrukket.
Den nøytraliserende agensen kan foreligge i enhver mengde som er i stand til å nøytralisere den positive ladningen til agensen som separerer røde blodceller. Generelt er konsentrasjonen av den nøytraliserende agensen avhengig av hvilken konsentrasjon som blir anvendt av agensen som separerer røde blodceller. Fortrinnsvis foreligger den nøytra-liserende agensen i en konsentrasjon på ca. 0,33 % til ca. 20 % (vekt per volum), der ca. 0,34 % til ca. 10 % (vekt per volum) er mer foretrukket og 0,34 % til 10 % (vekt per volum) er mest foretrukket.
Figur 1 viser en utførelse av en immunkromatografitest-anordning i henhold til den foreliggende oppfinnelsen. Anordningen 10 innbefatter en kromatografibærer 20. Plassert på kromatografibæreren 20 er et påføringssete 30 for blodprøven. I denne foretrukne utførelsen er agensen som separerer røde blodceller, dvs. Merquat<®> 100, lokalisert på påføringssetet 30. Tilgrensende til påføringssetet 30 er et konjugatområde 40 inneholdende konjugatet, dvs. selenium-merket bindingssubstans og en nøytraliserende agens, dvs.
dekstransulfat. Videre nedstrøms er deteksjonssetet 50 som, etter at testen har blitt utført, vil ha en kontrollinje 60 og, hvis substansen som skal bli undersøkt er til stede, en testlinje 70.
I en annen utførelse av den foreliggende oppfinnelsen kan en buffer komme i kontakt med påføringssetet, fortrinnsvis etter at påføringssetet har vært i kontakt med prøven. Bufferen bidrar til opprettholdelsen av en godkjent væske-strømhastighet langs strømningsbanen til kromatografibæreren. Bufferen kan være enhver substans som kan strømme kapillært langs væskestrømbanen innbefattende, men ikke begrenset til, fosfatbuffer, fosfatbufret saltvann, Tris-HC1 buffer, karbonatbuffer, sitratbuffer, HEPES (2-hydrok-sypiperazin-N'-2-etansulfonsyre) -buffer, MOPS (3-(N-morfo-lino)propansulfonsyre) -buffer, MES (2-(N-morfolino)etan-sulfonsyre) -buffer og lignende. Selv om konsentrasjonen og pH kan være enhver konsentrasjon og pH som vil fungere i den ønskede testanordningen, er molariteten fortrinnsvis i et område fra ca. 10 mM til ca. 100 rtiM og pH er fra ca. 5-9 og mer foretrukket fra ca. 6-8. Mest foretrukket er den anvendte bufferen 50 mM fosfatbuffer, pH 7,4.
Væskevolumet som blir anvendt i den foreliggende oppfinnelsen er avhengig av anordningens størrelse. Ønskelig anvendes nok væskevolum for å muliggjøre væskestrøm gjennom anordningen til deteksjonssetet. Fortrinnsvis er væskevolumet i et område på ca. 25 ^1 til ca. 100 og mer foretrukket fra ca. 40 ^1 til ca. 60 ^1. Når det er nødvendig kan derfor bufferen bli tilsatt i et volum som spenner fra ca. 10 ^1 til ca. 40 og mer foretrukket fra ca. 20 ^1 til ca. 30 ul.
Den foreliggende oppfinnelsen er også rettet mot en fremgangsmåte for å detektere nærværet av en analytt i en blod-prøve. Fortrinnsvis benytter fremgangsmåten den kromatografiske immuntestanordningen i den foreliggende oppfinnelsen. Fremgangsmåten innbefatter spesifikt (1) tilveiebringelse av en kromatografibærer som utgjør en bane for væskestrøm som kan sørge for kapillær strøm, der det langs denne er et påføringssete for blodprøven som er i kontakt med væsken i kromatografibæreren, et deteksjonssete på kromatografibæreren atskilt fra påføringssetet, en diffust merket substans (eller et konjugat) som binder til eller konkurrerer med analytten for binding i deteksjonssetet, en diffust bundet agens som separerer røde blodceller for å separere plasma eller serum fra nevnte blodprøve oppstrøms for deteksjonssetet, og et konjugat bundet til kromatografibæreren; (2) la påføringssetet komme i kontakt med blodprø-ven slik at agensen som separerer røde blodceller separerer disse blodcellene fra plasmaet eller serumet til blodprø-ven, og den nøytraliserende agensen nøytraliserer den positive ladningen til den separerende agensen; og (3) deteksjon av nærværet av analytt i blodprøven.
Fortrinnsvis er den blodcelleseparerende agensen et positivt ladet materiale og væskestrømbanen inneholder en diffust bundet, nøytraliserende agens, som fortrinnsvis kan binde nevnte agens som separerer røde blodceller og er lokalisert nedstrøms for nevnte agens som separerer røde blodceller og oppstrøms for nevnte deteksjonssete der den positive ladningen til nevnte separerende agens nøytralise-res .
I den foretrukne utførelsen av Figur 1 tilsettes derfor en blodprøve til påføringssetet 30 og agensen som separerer
røde blodceller separerer disse blodcellene ved å aggregere dem og tillate at plasmaet eller serumet forflytter seg med kapillær påvirkning ned kromatografibæreren 20. Den nøytra-liserende agensen i konjugatområdet 40 nøytraliserer effek-tene av agensen som separerer røde blodceller på anordningen 10, og konjugatet og analytten binder til konjugatet tilstedeværende i konjugatområdet 40. Analytten som er bundet til konjugatet fortsetter å forflytte seg nedstrøms til deteksjonssetet 50. Hvis analytten av interesse er til stede vil testlinje 70 bli synlig. For å vise at testen fungerer korrekt, vil kontrollinje 60 være synlig uavhengig om analytten av interesse foreligger eller ei.
Den foreliggende oppfinnelsen kan fortrinnsvis innbefatte et ikke-reaktivt deksel eller forsegling rundt anordningen. Fortrinnsvis omslutter dekselet i hvert fall kromatografibæreren for å unngå kontakt med og kontaminasjon av oppfan-gingssetene. Dekselet kan også innbefatte en forhøyning nær påføringssetet for å lette mottakelsen og/eller oppbevarin-gen av et bestemt volum av prøven. I tillegg kan dekselet omfatte et utskåret område eller områder i form av en bokstav, et tall, ikon eller symbol eller enhver kombinasjon derav. I denne utførelsen utgjør det utskårede området eller områdene konstruksjonen av bestemt deteksjonssete(r) når strimmelen er fullstendig stengt. Det er foretrukket at en tilstrekkelig del av strimmelen er innpakket for å hindre at påført prøve kommer i kontakt med deteksjons-setene uten først å ha passert gjennom en del av strimmelen .
Anordningen og fremgangsmåten i den foreliggende oppfinnelsen kan bli anvendt i ethvert testsystem der en blodprøve inneholder en analytt av interesse. Eksempler på foretrukne systemer innbefatter, men er ikke begrenset til, hepatitt C-virus ("HCV"), hepatitt A-virus ("HAV"), humant immun-sviktvirus ("HIV"), hepatitt B-overflateantistoff ("HBsAb"), hepatitt B-overflateantigen ("HBsAg"), hepatitt B-kjerneantistoff ("HBcAb"), hepatitt B-kjerneantigen ("HBcAg"), karsinoembryonalt antigen ("CEA"), alfa-feto-proten ("AFP"), en pankreatisk kreftmarkør ("CA19-9"), syfilis, tuberkulose, malaria, Leishmania og denguefeber.
De følgende eksemplene illustrerer videre den foreliggende oppfinnelsen, men skal ikke på noen som helst måte bli tol-ket som at de begrenser dens omfang.
EKSEMPLER
Eksempel 1
Aggregasjon av røde blodceller vs. aggregasjon av Se- konjugat med polykationer
For formålet i den foreliggende oppfinnelsen er aggregasjon av røde blodceller i fullblod ønsket, mens aggregasjon av seleniumkonjugatet er uønsket. Ulike polykationer ble testet for å se hvilke som ville forårsake tilstrekkelig aggregasjon av røde blodceller, mens de bare aggregerte seleniumkonjugatet minimalt.
Seleniumkonjugat av HIV-1 rekombinant protein ble fremstilt på den følgende måten: Først ble seleniumkolloid fremstilt ved å reagere 32 mM seleniumoksid med 91 mM L-askorbinsyre i en vandig løsning i 72 timer ved 42 °C. Dette selenium-kolloidet ble fortynnet til en optisk tetthet på 30 ved en bølgelengde på 550 nm og deretter reagert med 4 0 ^g/ml av rekombinant HIV-1 hylsterprotein i 30 mM Tris-buffer, pH 7,4 i 20 minutter ved romtemperatur. Dette seleniumkolloidmerkede HIV-1 proteinkonjugatet ble deretter fortynnet til en optisk tetthet på 30 ved en bølgelengde på 550 nm i 10 mM Tris-buffer, pH 7,4 inneholdende 0,1 % kasein, og inku-bert i 20 minutter ved romtemperatur. Konjugatløsningen ble deretter sentrifugert ved 1970 x g i 20 minutter ved 4 °C, supernatanten fjernet og pelleten kastet. Et volum av 30 mM Tris-buffer, pH 7,4 inneholdende 2 % kasein, som var ekvi-valent med én tiendedel av volumet til supernatanten, ble deretter satt til supernatanten. Til slutt ble denne konju-gatløsningen fortynnet til en optisk tetthet på 10 ved en bølgelengde på 550 nm i 50 mM Tris-buffer, pH 7,4 inneholdende 1 % kasein, 2 % sukrose og 2 % laktose.
Vandige løsninger av de følgende polykationene ble fremstilt ved 0,25 % (vekt/volum): Poly-L-Lysinhydrobromid, molekylvekt (mw) 37000; Poly-L-Argininhydroklorid, mw 12100, 42400 og 92000; Poly-L-Histidin, mw 18400; Heksadimetrinbromid, Poly (Lysin, Alanin) 3:1 hydrobromid, mw 35000; Poly (Lysin, Alanin) 2:1 hydrobromid, mw 49300; Poly (Lysin, Alanin) 1:1 hydrobromid, mw 41600, Poly (Lysin, Tryptofan) 1:4 hydrobromid, mw 38000 (alle polykationene ovenfor ble kjøpt fra Sigma, St. Louis, MO); Poly (diallyl-dimetylammoniumklorid) , mw 10<5> til IO<6> (Merquat<®> -100, Cal-gon, Pittsburgh, PA).
Evnen disse polykationene hadde til å aggregere enten røde blodceller i fullblod eller seleniumkonjugatet ble observert i separate reaksjoner ved tilsetning av 350 ^1 av 0,25 % av de ulike polykationløsningene til et like stort volum av enten fullblod eller seleniumkonjugatet. Løsningene ble blandet og lagret ved romtemperatur i 10 minutter, deretter ble aggregasjon evaluert visuelt. Resultatene er oppsummert i Tabell 1. Én pluss (+) indikerer svak aggregasjon, 2+ indikerer moderat aggregasjon, og 3+ og 4+ indikerer sterk aggregasjon.
Et polykation som forårsaker aggregasjon av røde blodceller (2+ eller mer), mens det forårsaker minimal aggregasjon av seleniumkonjugatet (2+ eller mindre), vil være et godt valg. De polykationene som har 2+ i begge kategoriene til-fredsstiller disse kriteriene. Poly-L-Lysin HBr og Merquat<®->100 ble valgt for videre arbeid, der Merquat<®->100 er den mest kostnadseffektive.
Eksempel 2
Forebyggelse av konjugataggregasjon med polyanion- nøytrali-sering
A. Konjugatforflytning og aggregasjonforebyggelse ved
anvendelse av dekstransulfat
Ved å anvende Poly-L-Lysin som den polykationiske reagensen som aggregerer røde blodceller, ble ulike konsentrasjoner av polyaniondekstransulfatet testet for å se om den positive ladningen til polykationet kunne bli nøytralisert med dekstransulfatet, og dermed forebygge aggregasjon av seleniumkonjugatet forårsaket av polykationet. Dekstransulfatet ble tilsatt etter at polykationet allerede hadde forårsaket aggregasjon av røde blodceller, men før polykationinter-aksjonen med seleniumkonjugatet. Det følgende forsøket eva-luerte effekten av polykationet og dekstransulfatet på aggregasjonen av seleniumkonjugatet og dets evne til deretter å strømme langs immunkromatografistrimmelen.
En immunkromatografistrimmel sammensatt av et prøveområde, et nøytraliseringsområde, et konjugatområde og en deteksjonsstrimmel, ble montert. Prøveområdet ble fremstilt ved å dynke et glassfiberfilter, som er 4 mm bredt og 20 mm langt, (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) i en vandig løsning med 0,33 % Poly-L-Lysinhydrobromid, mw 37000 (Sigma, St. Louis, MO), og deretter tørke det under vakuum.
Nøytraliseringsområder, inneholdende ulike konsentrasjoner av dekstransulfat, ble fremstilt ved å gjøre filtrene, som var 4 mm brede og 13 mm lange, laget av tremasse og poly-ester (Sontara 8801, Du pont, Wilmington, Delaware) våte i vandige løsninger inneholdende 0 %, 1,1 %, 3,3 % eller 10 % dekstransulfat, mw 5000 (Sigma, St. Louis, MO). Etter bløt-gjøring ble områdene tørket under vakuum.
Konjugatområdet ble fremstilt ved å dynke et glassfiberfilter, som var 4 mm bredt og 4,3 mm langt, (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) i seleniumkolloidmerket rekombinant HIV-1 proteinkonjugat fremstilt og fortynnet som i Eksempel 1. Etter bløtgjøring ble konjugatområdet tørket under vakuum .
Deteksjonsstrimmelen var et nitrocellulosemembranfilter som var 4 mm bredt og 40 mm langt (katalog #H9643G1, Millipore, Bedford, MA). HIV-1 hylsterantigen, ved en konsentrasjon på 5 mg/ml i 100 mM Tris-buffer, pH 7,4 inneholdende 1% sukrose, ble satt til nitrocellulosemembranen for å danne en linje på tvers av bredden på strimmelen i en posisjon ca. 1 cm fra enden av membranen. Linjen ble dekket med polyesterlaminat (kode # 7733, Adhesives Research Inc., Glen Rock, PA). Dette fikk stå å tørke tilstrekkelig slik at antigenet ble festet til nitrocellulosen.
Immunkromatografistrimler, 4 mm brede, ble montert ved anvendelse av komponentene ovenfor ved å plassere dem ende-mot-ende på langs med et overlapp på 1 mm mellom hver del, med det 20 mm lange prøveområdet på én ende, der ett av de 13 mm lange nøytraliseringsområdene ble plassert rett ved siden av, etterfulgt av et 4,3 mm langt konjugatområde og til slutt en 40 mm lang deteksjonsstrimmel. Den monterte strimmelen ble deretter dekket med polyesterlaminat (kode #8648, Adhesives Research Inc., Glen Rock, PA) fra toppen av deteksjonsstrimmelen til 10 mm fra bunnen av strimmelen, som førte til at ca. 10 mm av prøveområdet ble eksponert. Åtti ^1 plasma ble deretter overført til prøveområdene på hver immunkromatografistrimmel inneholdende nøytralise-ringsområder med enten 0 %, 1,1 %, 3,3 % eller 10 % deks-transulf at. Aggregasjon av det røde seleniumkonjugatet og konjugatets evne til å strømme langs strimmelen ble observert visuelt.
Resultater som er vist i Tabell 2 nedenfor indikerte, uten nærvær av dekstransulfat for å nøytralisere ladningen til polykationløsningen, at seleniumkonjugatet aggregerte og ikke var i stand til å strømme langs strimmelen. Det var et inverst forhold mellom konjugataggregasjon og forflytning, der konsentrasjoner av dekstransulfat på 3,3 % eller mer var tilstrekkelig for å forebygge konjugataggregasjon og tillate konjugatet å strømme langs strimmelen.
B. Aggregasjon av røde blodceller i nærvær av dekstran-sulf at
For å kunne vurdere effekten av dekstransulfat på aggregasjon av røde blodceller, ble forsøket ovenfor repetert ved anvendelse av fullblod som prøven med 10 % dekstransulfat på et 4,3 mm langt og 4 mm bredt nøytraliseringsområde. Etter monteringen av immunkromatografistrimmelen som beskrevet ovenfor, ved å anvende dette nøytraliseringsområ-det, ble 80 ^1 fullblod overført til prøveområdet. Femten minutter senere ble resultatene av aggregasjon av røde blodceller observert visuelt og det resulterende plasmaets evne til å strømme langs strimmelen ble målt. De røde blodcellene aggregerte, ble holdt tilbake på prøveområdet og forflyttet seg ikke på strimmelen, mens plasmaet forflyttet seg 33 mm langs strimmelen i løpet av 15 minutter. Dette indikerte at polykationet i prøveområdet fortsatt var i stand til å forårsake aggregasjon av de røde blodcellene i fullblodsprøven, og at nærværet av polyanionet, dekstransulfat, i nøytraliseringsområdet ikke interfererte med denne aggregasjonen av røde blodceller.
C. Forebyggelse av konjugataggregasjon med polyanioner
Andre polyanioner ble testet for å evaluere deres evne til å forebygge aggregasjon av seleniumkonjugatet som i Eksempel 2.A. Et 15,5 mm langt og 4 mm bredt prøveområde ble gjort våt i en vandig løsning inneholdende 0,26 % Merquat<®>
-100 og deretter tørket ved 55 °C. Nøytraliseringsområder ble ikke anvendt, og i stedet ble seleniumkonjugatet fortynnet i 10 mM Tris-buffer, pH 7,4 inneholdende 1 % kasein, 2 % sukrose, 2 % laktose og 0 %, 1,1 % eller 3,3 % av polyanionet dekstransulfat, mw 5000 (Sigma, St. Louis, MO) eller 0 %, 0,5 %, 1 % i eller 2 % av ett av de følgende polyanionene (alle fra Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI): Poly (akrylsyre), mw 5000; Poly (natrium-4-styren-sulfonat), mw 70.000; Poly (vinylsulfonsyre, natriumsalt); Poly (metylmetakrylsyre), mw 9500; Poly (akrylsyre, natriumsalt) , mw 2100. Konjugatområder ble gjort våte i de ulike seleniumkonjugatløsningene og tørket under vakuum. Deteksjonsstrimmelen ble fremstilt som i Eksempel 2.A. og immun-kromatograf istrimler ble montert. Femti ^1 plasma ble deretter overført til prøveområdene på hver immunkromatografistrimmel inneholdende konjugatområder med de ulike polyanionene. Aggregasjon av det røde seleniumkonjugatet ble observert visuelt. Tabell 3 viser den relative mengden av konjugataggregasjon som ble observert med de ulike poly-anionkonsentrasjonene som ble testet.
Som tidligere aggregerte seleniumkonjugatet hvis det ikke var et polyanion til stede for å nøytralisere den positive ladningen til polykationet fra prøveområdet (som er nødven-dig for aggregasjon av røde blodceller når fullblod blir testet). Alle polyanionene som ble anvendt i konjugerings-området hindret at konjugataggregasjon skjedde ved minst én av konsentrasjonene som ble testet. Dette forsøket viste også at polyanionet ikke måtte bli overført til et separat område, men kunne bli kombinert med seleniumkonjugatet på konj ugeringsområdet.
Eksempel 3
Anvendelse av dekstransulfat i nøytraliseringsområde vs.
konjugeringsområde i en HIV- 1 antistofftest
Immunkromatografistrimler ble fremstilt som i Eksempel 2.A. enten med eller uten et 4 mm bredt og 4,3 mm langt glassfiberfilter (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) nøytrali-seringsområde. Når det ble anvendt, ble nøytraliserings-området gjort vått i en vandig løsning inneholdende 3,3 % dekstransulfat og deretter tørket under vakuum. I strimler uten et nøytraliseringsområde ble seleniumkonjugatet fortynnet i 10 mM Tris-buffer, pH 7,4 inneholdende 1 % kasein, 2 % sukrose, 2 % laktose og 3,3 % dekstransulfat, og konjugatområdet ble gjort vått i denne løsningen og deretter tørket under vakuum. Det anvendte prøveområdet var som det i Eksempel 2.A. bortsett fra at det ble gjort vått i en vandig løsning med 0,2 % Merquat<®> -100.
Humant serum inneholdende HIV-1 antistoffer ble fortynnet 1:2048 i enten HIV-negativt humant fullblod (basert på plasmavolum) med en hematokrittverdi på 50 % eller i HIV-negativt humant plasma. Ytterligere tre 1:2 serielle fortynninger ble laget, igjen ved å anvende enten fullblod eller plasma som fortynningsmidlet. Åtti ^1 av negativt fullblod eller prøver fra fortynningsserien med HIV-1 positivt fullblod ble satt til prøveområdet på immunkromato-graf istrimler fremstilt med dekstransulfat på et separat nøytraliseringsområde eller dekstransulfat i seleniumkonju-gatløsningen på konjugatområdet. Åtti ^1 av negativt plasma eller prøver fra fortynningsserien med HIV-1 positivt plasma ble bare testet på immunkromatografistrimler med dekstransulfat på konjugatområdet. Resultater ble avlest 15 minutter etter påføring av prøven (Tabell 4). Et positivt resultat viste en rød farge på deteksjonsstrimmelen der det røde selenium HIV-1 antigen konjugat-HIV-1 antistoffkom-plekset var bundet til HIV-1 antigenet på linjen på strimmelen. Et negativt resultat viste ingen farge i denne regionen på deteksjonsstrimmelen.
Resultatene i Tabell 4 indikerer at HIV-1 antistoffer er detekterbare fra fullblod i en immunkromatografistrimmel-test ved å anvende polykationet Merquat<®> -100 for å aggregere røde blodceller og tillate at prøven strømmer langs strimmelen, og polyanionet dekstransulfat som en nøytrali-serende agens for å forebygge aggregasjon av seleniumkonjugatet med polykationet og tillate at konjugatet binder og danner et kompleks med en positiv prøve og strømmer langs strimmelen til deteksjonsområdet. Polyanionet ble vist å være effektivt når det enten ble anvendt i et separat nøy-traliseringsområde eller kombinert med seleniumkonjugatet på konjugatområdet. I denne testen viste sensitiviteten for deteksjon av HIV-1 antistoffer en 2-fold forbedring når polyanionet (dekstransulfat) ble anvendt i konjugatområdet i stedet for på et separat nøytraliseringsområde.
I tillegg indikerer resultatene i Tabell 4 at polykationet effektivt aggregerer de røde blodcellene i fullblodet, hvilket er vist med den samme sensitiviteten for deteksjon av HIV-1 antistoffer enten det er i fullblod, der de røde blodcellene må bli aggregert for at prøven skal forflytte seg, eller plasma, der det ikke er noen røde blodceller som kan hindre forflytning av prøven. Dette viser også at nærværet av polyanionet, enten i et separat nøytraliserings-område eller i konjugatområdet, ikke interfererer med poly-kationets evne til å effektivt forårsake aggregasjon av røde blodceller i fullblod.
Eksempel 4
Anvendelse av Merquat<®> og ulike polyanioner i en HBsAg- test
Immunkromatografistrimler ble fremstilt for deteksjonen av Hepatitt B-overflateantigen (HBsAg) i fullblodsprøver. Merquat<®->100 ble anvendt som polykationet for aggregasjonen av røde blodceller i prøveområdet, og ulike polyanioner ble evaluert i konjugatområdet som polykation-nøytraliserende reagenser for å hindre aggregasjon av seleniumkonjugatet.
Immunkromatografistrimler, som er sammensatt av et prøve-område, et konjugatområde og en deteksjonsstrimmel, ble montert. Prøveområdet ble fremstilt ved å dynke et 4 mm bredt og 15,5 mm langt glassfiberfilter i en vandig løsning med 0,26 % Merquat<®->100 og deretter tørke det ved 55 °C.
Seleniumkonjugatet ble fremstilt ved å anvende seleniumkolloid, som i Eksempel 1, og 12 ^g/ml monoklonalt muse-antistoff til HBsAg (anti-HBs). Dette seleniumkolloidmerkede anti-HBs konjugatet ble deretter fortynnet til en optisk tetthet på 2,6 ved en bølgelengde på 550 nm i Tris-buffer inneholdende ett av de følgende polyanionene: 0,5 % Poly (akrylsyre), mw 2000 (PAA-2000); 0,5 % Poly (akrylsyre), mw 240.000 (PAA-240.000); 0,5 % dekstransulfat, mw 5000; 0,8 % Poly-L-asparaginsyre, mw 36.300; 0,5 % Karboksymetylcellulose, mw 90.000 (CMC). Dekstransulfatet og Poly-L-asparaginsyren var fra Sigma, St. Louis, MO, og de gjenværende polyanionene var fra Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.
Konjugatområdet ble fremstilt ved å dynke et glassfiberfilter, som var 4 mm bredt og 4,3 mm langt, i seleniumkolloidmerket anti-HBs konjugat som var fremstilt og fortynnet med ett av polyanionene ovenfor. Etter bløtgjøring ble konjugatområdet tørket under vakuum.
Deteksjonsstrimmelen var et 4 mm bredt og 40 mm langt nitrocellulosemembranfilter, som var fremstilt som i Eksempel 2 ved å anvende monoklonalt anti-HBs fra mus ved en konsentrasjon på 3 mg/ml og satt til nitrocellulosemembranen for å danne en linje på tvers av bredden på strimmelen i en posisjon ca. 1 cm fra membranenden. Linjen ble dekket med polyesterlaminat. Denne fikk stå å tørke tilstrekkelig slik at antistoffet ble festet til nitrocellulosen.
Immunkromatografistrimler ble montert ved anvendelse av komponentene ovenfor ved å plassere dem ende-mot-ende på langs, med et overlapp på 1 mm, med prøveområdet på én ende, der et konjugatområde ble plassert rett ved siden av og til slutt en deteksjonsstrimmel. Den monterte strimmelen ble deretter dekket med polyesterlaminat, og ca. 10 mm av prøveområdet ble eksponert.
Rekombinant HBsAg ble satt til HBsAg-negativt humant fullblod med en hematokrittverdi på 50 % til en konsentrasjon på 12,5 ng/ml. Ytterligere tre 1:2 serielle fortynninger ble laget i fullblod. Femti ^1 av negativt fullblod eller prøver fra fortynningsserien med HBsAg-positivt fullblod ble satt til prøveområdet på immunkromatografistrimler fremstilt med ulike polyanioner i konjugatområdet. Resultater ble avlest 15 minutter etter påføring av prøven (Tabell 5). Et positivt resultat viste en rød farge på deteksjonsstrimmelen, der det røde selenium anti-HBs konjugat-HBsAg komplekset var bundet til anti-HBs på linjen på strimmelen. Et negativt resultat viste ingen farge i denne regionen på deteksjonsstrimmelen. Aggregasjon av det røde seleniumkonjugatet på begynnelsen av deteksjonsstrimmelen ble observert visuelt.
Mens alle polyanionene gjorde deteksjon av HBsAg mulig, hadde de polyanionene som forebygget konjugataggregasjon, PAA-2000, dekstransulfat og Poly-L-asparaginsyre, en 2 til 4-fold mer sensitiv deteksjon av HBsAg i fullblodsprøver.
Forsøket ovenfor ble repetert ved anvendelse av det seleniumkolloidmerkede konjugatet fortynnet i Tris-buffer inneholdende PAA-2000 som polyanionet, bortsett fra at 25 ^1 av 50 mM fosfatbuffer, pH 7,4, ble satt til prøveområdet ett minutt etter tilsetning av HBsAg-fullblodsprøvene. Resultatene som ble fremskaffet ved å anvende denne fremgangsmåten, ved tilsetningen av bufferen etter påføringen av prøven, var identiske med resultatene uten dette trinnet. Derfor kan disse testene bli gjort enten med eller uten tilsetning av buffer etter påføring av prøven.
Eksempel 5
Anvendelse av Merquat<®> og dekstransulfat i en test for tuberkulose
Immunkromatografistrimler ble fremstilt for deteksjonen av antistoff til Mycobacterium tuberculosis (anti-Mtb) i full-blodsprøver. Merquat<®> -100 ble anvendt som polykationet for aggregasjonen av røde blodceller i prøveområdet, og ulike konsentrasjoner av polyanionet dekstransulfat ble evaluert i konjugatområdet som den polykation-nøytraliserende reagensen for å hindre aggregasjon av seleniumkonjugatet. Immunkromatografistrimler, sammensatt av et prøveområde, et konjugatområde og en deteksjonsstrimmel, ble montert. Prø-veområdet ble fremstilt ved å dynke et 4 mm bredt og 15,5 mm langt glassfiberfilter i en vandig løsning med 0,26 % Merquat<®> -100 og deretter tørke det i vakuum.
Seleniumkonjugatet ble fremstilt ved å anvende seleniumkolloid, som i Eksempel 1, og 3,5 ^g/ml av rekombinant Mtb-antigen fra E. coli. Dette seleniumkolloidmerkede Mtb-konjugatet ble deretter fortynnet til en optisk tetthet på 2,5 ved en bølgelengde på 550 nm i Tris-buffer inneholdende enten 0 %, 0,34 %, 1,1 % eller 3,3 % dekstransulfat.
Konjugatområdet ble fremstilt ved å dynke et glassfiberfilter, som var 4 mm bredt og 4,3 mm langt, i seleniumkolloidmerket Mtb-konjugat, fremstilt og fortynnet med én av dekstransulfatkonsentrasjonene ovenfor. Etter bløtgjø-ring ble konjugatområdet tørket under vakuum.
Deteksjonsstrimmelen var et 4 mm bredt og 40 mm langt nitrocellulosemembranfilter, som var fremstilt som i Eksempel 2 ved å anvende rekombinant Mtb-antigen ved en konsentrasjon på 0,15 mg/ml og satt til nitrocellulosemembranen for å danne en linje på tvers av bredden på strimmelen i en posisjon ca. 1 cm fra enden av membranen. Linjen ble dekket med polyesterlaminat. Denne fikk stå å tørke tilstrekkelig slik at antigenet ble festet til nitrocellulosen.
Immunkromatografistrimler ble montert ved å anvende komponentene ovenfor ved å plassere dem ende-mot-ende på langs, med et overlapp på 1 mm, med prøveområdet på én ende, ved siden av der et konjugatområde ble plassert og til slutt en deteksjonsstrimmel. Den monterte strimmelen ble deretter dekket med polyesterlaminat, som førte til at ca. 10 mm av prøveområdet ble eksponert.
Anti-Mtb-positivt serum ble fortynnet 1:100 i negativt humant fullblod med en hematokrittverdi på 50 %. Ytterligere to 1:2 serielle fortynninger ble laget i fullblod. Femti ^1 av negativt fullblod eller prøver fra fortynningsserien med det anti-Mtb-positive fullblodet ble satt til prøveområdet på immunkromatografistrimler fremstilt med ulike konsentrasjoner av dekstransulfat i konjugatområdet. Resultater ble avlest 15 minutter etter påføring av prøven (Tabell 6). Et positivt resultat viste en rød farge på deteksjonsstrimmelen, der det røde selenium Mtb-konjugat-anti-Mtb-komplekset var bundet til Mtb på linjen på strimmelen. Et negativt resultat viste ingen farge i denne regionen på deteksjonsstrimmelen. Aggregasjon av det røde seleniumkonjugatet på begynnelsen av deteksjonsstrimmelen ble observert visuelt.
Resultatene i Tabell 6 viser at testen ikke fungerer uten nærvær av et polyanion, i dette tilfellet dekstransulfat, for å forebygge aggregasjon av konjugatet. Det er et inverst forhold mellom konjugataggregasjon og testsensitivitet. Ved en dekstransulfatkonsentrasjon på 3,3 % forekom-mer ingen konjugataggregasjon og testen er mest sensitiv i deteksjonen av anti-Mtb.
Eksempel 6
Syfilistest ved anvendelse av Merquat<®> og dekstransulfat
Immunkromatografistrimler ble fremstilt for deteksjonen av antistoff mot Treponema pallidum (anti-TP) i fullblod eller plasmaprøver. Ved å sammenligne deteksjonssensitiviteten i fullblod i forhold til plasma kunne man bestemme om røde blodceller i fullblod aggregerte effektivt med polykationet uten å interferere med og dermed redusere testens detek-sjonssensitivitet. Merquat<®> -100 ble anvendt som polykationet for aggregasjonen av røde blodceller i prøveområdet, og polyanionet dekstransulfat ble anvendt i konjugatområdet som den polykation-nøytraliserende reagensen for å hindre aggregasjon av seleniumkonjugatet.
Immunkromatografistrimler, sammensatt av et prøveområde, et konjugatområde og en deteksjonsstrimmel, ble montert. Prø-veområdet ble fremstilt ved å dynke et 4 mm bredt og 15,5 mm langt glassfiberfilter i en vandig løsning med 0,2 % Merquat<®> -100 og deretter tørke det ved 55 °C.
Seleniumkonjugatet ble fremstilt ved å anvende seleniumkolloid, som i Eksempel 1, og 7,5 fKj/ml av Treponema pallidum-lysat (TP). Dette seleniumkolloidmerkede TP-konjugatet ble deretter fortynnet til en optisk tetthet på 2,8 ved en bøl-gelengde på 550 nm i Tris-buffer inneholdende 3,3 % dekstransulfat .
Konjugatområdet ble fremstilt ved å dynke et glassfiberfilter, som var 4 mm bredt og 4,3 mm langt, i det seleniumkolloidmerkede TP-konjugatet fremstilt ovenfor. Etter bløtgjø-ring ble konjugatområdet tørket under vakuum.
Deteksjonsstrimmelen var et 4 mm bredt og 40 mm langt
nitrocellulosemembranfilter, som var fremstilt som i Eksempel 2 ved å anvende Treponema palladiumlysat ved en konsentrasjon på 44 ug/ml og satt til nitrocellulosemembranen for å danne en linje på tvers av bredden på strimmelen i en
posisjon ca. 1 cm fra enden av membranen. Linjen ble dekket med polyesterlaminat. Denne fikk stå å tørke tilstrekkelig slik at TP-lysatet ble festet til nitrocellulosen.
Immunkromatografistrimler ble montert ved anvendelse av komponentene ovenfor ved å plassere dem ende-mot-ende på langs, med et overlapp på 1 mm, med prøveområdet på én ende, ved siden av der et konjugatområde ble plassert, og til slutt en deteksjonsstrimmel. Den monterte strimmelen ble deretter dekket med polyesterlaminat, som førte til at ca. 10 mm av prøveområdet ble eksponert.
Anti-TP-positivt humant serum ble fortynnet 1:10,8 i enten negativt humant fullblod med en hematokrittverdi på 50 % eller i negativt humant plasma. Ytterligere fire 1:2 serielle fortynninger ble laget, igjen ved å anvende enten fullblod eller plasma som fortynningsmidlet. Seksti ^1 av negativt fullblod eller plasma, eller prøver fra det anti-TP-positive fullblodet eller plasmafortynningsserien, ble satt til prøveområdet på immunkromatografistrimlene. Resultater ble avlest 15 minutter etter påføring av prøven (Tabell 7). Et positivt resultat viste en rød farge på deteksjonsstrimmelen, der det røde selenium TP-konjugat-anti-TP-komplekset var bundet til TP-lysatet på linjen på strimmelen. Et negativt resultat viste ingen farge i denne regionen på deteksjonsstrimmelen.
Tabell 7 viser at deteksjonssensitiviteten av anti-TP var den samme i både fullblod og plasma, hvilket indikerte at polykationet, Merquat<®> -100, effektivt aggregerte de røde blodcellene i fullblodet.
Mens denne oppfinnelsen har blitt beskrevet med hovedvekt på foretrukne utførelser, vil det være innlysende for fagfolk at de foretrukne utførelsene kan bli variert. Det er meningen at oppfinnelsen kan bli praktisert på annen måte enn det som er beskrevet spesifikt heri.
Claims (12)
1. Kromatografitestanordning for å detektere nærværet av en analytt i en blodprøve, omfattende: en kromatografibærer som definerer en bane for væskestrøm og sørger for kapillær strøm, et påføringssete for nevnte blodprøve som er i kontakt med væskestrømmen i nevnte kromatografibærer, et deteksjonssete på nevnte kromatografibærer atskilt fra nevnte påføringssete som har en ikke-diffust bundet oppfangingssubstans bundet dertil, en diffust bundet, merket substans lokalisert nedstrøms for nevnte påføringssete, et diffust bundet polykation for å separere plasma eller serum fra nevnte blodprøve oppstrøms for nevnte deteksjonssete, og et diffust bundet polyanion for å nøytralisere polykationet nedstrøms for nevnte bundne polykation og oppstrøms for nevnte deteksjonssete.
2. Kromatografitestanordning ifølge krav 1, hvor nevnte anordning er en immuntestanordning.
3. Kromatografitestanordning ifølge krav 1, hvor nevnte polykation er bundet på nevnte påføringssete for nevnte blodprøve.
4. Kromatografitestanordning ifølge krav 1, hvor nevnte polykation er valgt fra gruppen bestående av poly-L-lysinhydrobromid, poly-L-argininhydroklorid, poly-L-histidin, poly(lysin, alanin) 3:1 hydrobromid, poly(lysin, alanin) 2:1 hydrobromid, poly(lysin, alanin) 1:1 hydrobromid, poly-(lysin, tryptofan) 1:4 hydrobromid og poly(diallyldimetyl-ammoniumklorid), og fortrinnsvis er poly-(diallyldimetylammoniumklorid).
5. Kromatografitestanordning ifølge krav 1, hvor nevnte polyanion er valgt fra gruppen bestående av dekstransulfat, poly(akrylsyre), poly(natrium-4-styrensulfonat), poly-(vinylsulfonsyre), poly(metylmetakrylsyre), poly-L-asparaginsyre og karboksymetylcellulose, fortrinnsvis dekstransulfat .
6. Kromatografitestanordning ifølge krav 1, hvor nevnte polyanion er bundet diffust til kromatografibæreren på det samme stedet som nevnte merkede substans.
7. Kromatografitestanordning ifølge krav 1, hvor nevnte merkede substans er en selenium-merket substans.
8. Fremgangsmåte for å detektere nærværet av en analytt i en blodprøve, omfattende trinnene å: tilveiebringe en kromatografibærer som definerer en bane for væskestrøm og sørger for kapillær strøm, der det langs denne er (a) et påføringssete for nevnte blodprøve som er i kontakt med væskestrømmen i nevnte kromatografibærer, (b) et deteksjonssete på nevnte kromatografibærer atskilt fra nevnte påføringssete som har en ikke-diffust bundet oppfangingssubstans bundet dertil, (c) en merket substans lokalisert nedstrøms for nevnte påføringssete, (d) et diffust bundet polykation for å separere plasma eller serum fra nevnte blodprøve oppstrøms for nevnte deteksjonssete, og (e) et diffust bundet polyanion for nøytralisering av polykationet lokalisert nedstrøms for nevnte bundne polykation og oppstrøms for nevnte deteksjonssete; la nevnte påføringssete komme i kontakt med nevnte blod-prøve; og detektere nærværet av analytt i nevnte blodprøve.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 8, hvor nevnte merkede substans er en selenium-merket substans.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 8, hvor nevnte polyanion er bundet diffust til kromatografibæreren på det samme stedet som nevnte merkede substans.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 8, hvor nevnte polykation er valgt fra gruppen bestående av poly-L-lysinhydrobromid, poly-L-argininhydroklorid, poly-L-histidin, poly(lysin, alanin) 3:1 hydrobromid, poly(lysin, alanin) 2:1 hydrobromid, poly(lysin, alanin) 1:1 hydrobromid, poly(lysin, tryptofan) 1:4 hydrobromid og poly(diallyldimetylammonium-klorid).
12. Fremgangsmåte ifølge krav 8, hvor nevnte polyanion er valgt fra gruppen bestående av dekstransulfat, poly(akrylsyre) , poly(natrium-4-styrensulfonat), poly(vinylsulfonsyre) , poly(metylmetakrylsyre), poly-L-asparaginsyre og karboksymetylcellulose.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/007,651 US6673629B2 (en) | 1998-01-15 | 1998-01-15 | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |
| PCT/US1998/027802 WO1999036781A1 (en) | 1998-01-15 | 1998-12-29 | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20003569D0 NO20003569D0 (no) | 2000-07-11 |
| NO20003569L NO20003569L (no) | 2000-09-14 |
| NO327714B1 true NO327714B1 (no) | 2009-09-14 |
Family
ID=21727406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20003569A NO327714B1 (no) | 1998-01-15 | 2000-07-11 | Anordning og metode for kromatografisk deteksjon av en analytt i en blodprove. |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6673629B2 (no) |
| EP (2) | EP1047943B1 (no) |
| JP (1) | JP4270751B2 (no) |
| KR (1) | KR100575390B1 (no) |
| CN (2) | CN1125343C (no) |
| AR (1) | AR014312A1 (no) |
| AT (2) | ATE298425T1 (no) |
| AU (1) | AU748387B2 (no) |
| BR (1) | BR9814007A (no) |
| CA (1) | CA2318459C (no) |
| CO (1) | CO5090841A1 (no) |
| CZ (1) | CZ294954B6 (no) |
| DE (2) | DE69816339T2 (no) |
| DK (2) | DK1047943T3 (no) |
| ES (2) | ES2244861T3 (no) |
| HK (1) | HK1035027A1 (no) |
| HU (1) | HU225975B1 (no) |
| ID (1) | ID26635A (no) |
| IL (1) | IL136236A (no) |
| LT (1) | LT2000071A (no) |
| MY (1) | MY129171A (no) |
| NO (1) | NO327714B1 (no) |
| NZ (1) | NZ504710A (no) |
| PL (1) | PL196464B1 (no) |
| PT (2) | PT1371984E (no) |
| TR (1) | TR200002051T2 (no) |
| TW (1) | TW594012B (no) |
| UY (1) | UY25351A1 (no) |
| WO (1) | WO1999036781A1 (no) |
| ZA (1) | ZA9811953B (no) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60142394D1 (de) * | 2000-06-28 | 2010-07-29 | Panasonic Corp | Biozensor |
| JPWO2002037099A1 (ja) * | 2000-10-27 | 2004-03-11 | 国際試薬株式会社 | 腎障害の診断方法 |
| JP2002303629A (ja) * | 2001-04-06 | 2002-10-18 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫クロマトデバイス及びそれを用いた被検物質測定方法 |
| US6841159B2 (en) * | 2002-01-30 | 2005-01-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Rapid lateral flow assay for determining exposure to Mycobacterium tuberculosis and other mycobacteria |
| CA2493795A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-02-12 | Emi Sumida | Method of preparing platelet rich plasma |
| WO2004065010A2 (en) * | 2003-01-21 | 2004-08-05 | Micronics Inc. | Method and system for microfluidic manipulation, amplification and analysis of fluids, for example, bacteria assays and antiglobulin testing |
| ES2366646T3 (es) * | 2003-11-05 | 2011-10-24 | Elan Pharma International Limited | Composiciones en forma de nanopartículas que tienen un péptido como estabilizante superficial. |
| SE0400662D0 (sv) | 2004-03-24 | 2004-03-24 | Aamic Ab | Assay device and method |
| SE527036C2 (sv) * | 2004-06-02 | 2005-12-13 | Aamic Ab | Analysanordning med reglerat flöde och motsvarande förfarande |
| GB0417601D0 (en) * | 2004-08-06 | 2004-09-08 | Inverness Medical Switzerland | Assay device & method |
| KR20130019031A (ko) | 2004-09-23 | 2013-02-25 | 트리패스 이미징, 인코포레이티드 | 생물학적 시료의 고정을 위한 다가양이온성 중합체 코팅 |
| US7816122B2 (en) * | 2005-10-18 | 2010-10-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Lateral flow device with onboard reagents |
| DE102005056592A1 (de) * | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Basf Ag | Herstellung und Verwendung von hochfunktionellen, hoch-oder hyperverzweigten Polylysinen |
| US7618810B2 (en) * | 2005-12-14 | 2009-11-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Metering strip and method for lateral flow assay devices |
| US20080023395A1 (en) * | 2006-07-31 | 2008-01-31 | Sigma Aldrich Co. | Compositions and Methods for Isolation of Biological Molecules |
| CL2007002615A1 (es) * | 2006-09-08 | 2008-04-18 | Wyeth Corp | Metodos para aislar o purificar un producto que comprende poner el producto enlazado en contacto con al menos una solucion de lavado que comprende arginina y luego eluir el producto; y dicho producto. |
| KR20100014250A (ko) * | 2006-11-29 | 2010-02-10 | 마이크로센스 메드텍 리미티드 | 마이코박테리아 유사 미생물의 포획 |
| GB0623866D0 (en) * | 2006-11-29 | 2007-01-10 | Wilson Stuart M | Capture of mycobacteria like micro-organisms |
| US20080261247A1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-10-23 | Parviz Lalezari | Method of detecting red cell antigen-antibody reactions |
| CN101750244B (zh) * | 2008-10-13 | 2014-03-12 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种分离血液样本中红细胞的方法以及运用 |
| EP2269737B1 (en) | 2009-07-02 | 2017-09-13 | Amic AB | Assay device comprising serial reaction zones |
| KR100946566B1 (ko) * | 2009-11-18 | 2010-03-11 | 주식회사 인포피아 | 측방 유동 면역 분석 디바이스 |
| US20120302456A1 (en) * | 2010-11-23 | 2012-11-29 | President And Fellows Of Harvard College | Vertical flow-through devices for multiplexed elisa driven by wicking |
| WO2013147308A1 (ja) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 |
| WO2013147307A1 (ja) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 |
| JP6399632B2 (ja) * | 2013-10-02 | 2018-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップ、および該テストストリップを使用するイムノクロマトグラフィー |
| US9913929B2 (en) | 2013-10-18 | 2018-03-13 | Fortus Medical, Inc. | Bone marrow aspirate enhanced bone graft |
| CN110780066A (zh) * | 2014-12-16 | 2020-02-11 | 积水医疗株式会社 | 用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱 |
| US10610242B2 (en) | 2015-05-08 | 2020-04-07 | Fortus Medical, Inc. | Bone fragment and tissue harvesting system |
| JP6675834B2 (ja) * | 2015-05-21 | 2020-04-08 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法 |
| AU2017207860A1 (en) * | 2016-01-15 | 2018-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for detecting an analyte |
| JP6738608B2 (ja) * | 2016-01-22 | 2020-08-12 | 田中貴金属工業株式会社 | クロマトグラフ媒体 |
| US10456502B2 (en) | 2016-09-07 | 2019-10-29 | Fortus Medical, Inc. | Bone void filler preparation system |
| CA3049651C (en) * | 2017-01-11 | 2023-01-31 | Cypher Medical, Llc | Method of estimating blood volume |
| EP3634245A4 (en) | 2017-06-07 | 2021-03-17 | Fortus Medical, Inc. | CONJUNCTIVE TISSUE PROGENITOR CELL SUCTION AND TREATMENT SYSTEM |
| US11278336B2 (en) | 2018-03-22 | 2022-03-22 | Fortus Medical, Inc. | Osteomedullary tissue processing system |
| CN110308276A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-10-08 | 郑州轻工业学院 | 一种增加黄曲霉毒素b1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液 |
| DK3986588T3 (da) * | 2019-06-20 | 2024-01-15 | UCB Biopharma SRL | HPLC-baseret detektering af flokkuleringsmidler i en proteinprøve |
| CN110823670B (zh) * | 2019-11-27 | 2023-03-24 | 香港大德昌龙生物科技有限公司 | 用于分离血细胞的组合物、血细胞分离方法、检测试剂盒和检测装置 |
| AU2022343290A1 (en) * | 2021-09-10 | 2024-03-21 | Quidel Corporation | Agglutinating agents, devices and methods for whole blood assays |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4308232A (en) * | 1979-07-09 | 1981-12-29 | Sherwood Medical Industries Inc. | Anticoagulant stopper coating |
| DE3029579C2 (de) * | 1980-08-05 | 1985-12-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut |
| US5073484A (en) | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| US4594327A (en) | 1983-11-02 | 1986-06-10 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Assay method for whole blood samples |
| US4678757A (en) * | 1985-04-11 | 1987-07-07 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Device and method for whole blood separation and analysis |
| US4806311A (en) * | 1985-08-28 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Multizone analytical element having labeled reagent concentration zone |
| US4935147A (en) * | 1985-12-20 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
| US4753776A (en) | 1986-10-29 | 1988-06-28 | Biotrack, Inc. | Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter |
| US5120643A (en) | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
| JPH02140147A (ja) | 1988-01-19 | 1990-05-29 | Syntex Usa Inc | 赤血球から血漿を分離する方法および装置 |
| US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
| US5670381A (en) | 1988-01-29 | 1997-09-23 | Abbott Laboratories | Devices for performing ion-capture binding assays |
| US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
| DE3903114A1 (de) * | 1989-02-02 | 1990-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines enzyms aus einem isoenzymgemisch sowie hierfuer geeigneter testtraeger und dessen verwendung |
| US4933092A (en) | 1989-04-07 | 1990-06-12 | Abbott Laboratories | Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood |
| US5306623A (en) * | 1989-08-28 | 1994-04-26 | Lifescan, Inc. | Visual blood glucose concentration test strip |
| US5435970A (en) * | 1989-12-18 | 1995-07-25 | Environmental Diagnostics, Inc. | Device for analysis for constituents in biological fluids |
| US5212060A (en) | 1990-04-27 | 1993-05-18 | Genesis Labs, Inc. | Dry test strip comprising a dextran barrier for excluding erythrocytes |
| US5186843A (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-16 | Ahlstrom Filtration, Inc. | Blood separation media and method for separating plasma from whole blood |
| US5547576A (en) * | 1992-07-06 | 1996-08-20 | Terumo Kabushiki Kaisha | Pathogenic substance removing material and a blood filter containing the material |
| AU706456B2 (en) | 1995-03-27 | 1999-06-17 | Lifescan, Inc. | Chemical timer for a direct-reading reagent test strip |
| US5725774A (en) | 1995-04-07 | 1998-03-10 | Lxn Corp. | Whole blood separation method and devices using the same |
| US5753497A (en) * | 1995-12-22 | 1998-05-19 | Universal Health Watch Inc | Diagnostic assay providing blood separation |
-
1998
- 1998-01-15 US US09/007,651 patent/US6673629B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 EP EP98966118A patent/EP1047943B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CN CN98813110A patent/CN1125343C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 HU HU0100557A patent/HU225975B1/hu unknown
- 1998-12-29 ES ES03009811T patent/ES2244861T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 MY MYPI98005927A patent/MY129171A/en unknown
- 1998-12-29 CZ CZ20002606A patent/CZ294954B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 PT PT03009811T patent/PT1371984E/pt unknown
- 1998-12-29 CA CA2318459A patent/CA2318459C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 PT PT98966118T patent/PT1047943E/pt unknown
- 1998-12-29 AT AT03009811T patent/ATE298425T1/de active
- 1998-12-29 WO PCT/US1998/027802 patent/WO1999036781A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-29 NZ NZ504710A patent/NZ504710A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 IL IL13623698A patent/IL136236A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 JP JP2000540442A patent/JP4270751B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DK DK98966118T patent/DK1047943T3/da active
- 1998-12-29 EP EP03009811A patent/EP1371984B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 AT AT98966118T patent/ATE244890T1/de active
- 1998-12-29 CN CNB031579124A patent/CN1213303C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 PL PL342658A patent/PL196464B1/pl unknown
- 1998-12-29 DK DK03009811T patent/DK1371984T3/da active
- 1998-12-29 BR BR9814007-8A patent/BR9814007A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-12-29 TR TR2000/02051T patent/TR200002051T2/xx unknown
- 1998-12-29 ES ES98966118T patent/ES2202931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69816339T patent/DE69816339T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69830675T patent/DE69830675T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 AU AU22092/99A patent/AU748387B2/en not_active Expired
- 1998-12-29 ID IDW20001354A patent/ID26635A/id unknown
- 1998-12-29 KR KR1020007007787A patent/KR100575390B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-30 ZA ZA9811953A patent/ZA9811953B/xx unknown
-
1999
- 1999-01-13 CO CO99001481A patent/CO5090841A1/es unknown
- 1999-01-14 UY UY25351A patent/UY25351A1/es not_active IP Right Cessation
- 1999-01-15 AR ARP990100131A patent/AR014312A1/es active IP Right Grant
- 1999-04-03 TW TW088100600A patent/TW594012B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-07-11 NO NO20003569A patent/NO327714B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 LT LT2000071A patent/LT2000071A/lt unknown
-
2001
- 2001-08-09 HK HK01105549A patent/HK1035027A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO327714B1 (no) | Anordning og metode for kromatografisk deteksjon av en analytt i en blodprove. | |
| JP7330945B2 (ja) | 分析物検出の改善のためのアッセイ法 | |
| US5824268A (en) | Rapid self-contained assay format | |
| JP3358737B2 (ja) | 改良された投与量応答曲線を有するアッセイ | |
| KR100946566B1 (ko) | 측방 유동 면역 분석 디바이스 | |
| JP2007187664A (ja) | 改良された対照区画を有する免疫学的試験素子 | |
| AU5347000A (en) | Flow-through assay for visually detecting the presence of influenza A and B | |
| US20070092978A1 (en) | Target ligand detection | |
| KR20010013751A (ko) | 항체측정방법 및 항체측정장치 | |
| CA2046130A1 (en) | Biologically active reagent, analytical element and methods for use of the reagent | |
| US20020106696A1 (en) | Test device for detecting semen and method of use | |
| CN116027035B (zh) | 一种用于提高hiv1/2尿液胶体金免疫层析检测准确率的试剂盒及制备方法 | |
| JP3493544B2 (ja) | 抗体アッセイ装置 | |
| WO1992008978A1 (en) | Immunoassay for the determination of anti-hiv antibodies in human samples | |
| JP2002214236A (ja) | 血中抗原検出方法及び装置 | |
| EP0756173A1 (en) | Reagent for detecting substances and method for diagnosing rheumatoid arthritis | |
| MXPA00006963A (en) | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use | |
| JPH11118801A (ja) | 免疫分析装置 | |
| WO1992022816A1 (en) | Solid phase immunoassay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |