CN110308276A - 一种增加黄曲霉毒素b1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液 - Google Patents

一种增加黄曲霉毒素b1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，每1000mL由以下物料制成：11‑13g缓冲液、20‑70g的海藻糖、5‑10g的Tween‑80、5‑10g的Triton X‑405、1‑5g的聚乙二醇300、10‑40g的牛血清白蛋白、0.05‑0.15g的叠氮钠、0.1‑1g的海藻酸钠、0.01‑0.5g的硫酸葡聚糖和0.01‑0.5g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，即得，本发明操作简单，成本低，材料易得，检测灵敏度提高了1倍以上，具有良好的社会和经济效益。

Description

一种增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品 垫处理液
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其是一种增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液。
背景技术
胶体金是一种常用的免疫检测标记技术，它是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原/抗体的一种常规免疫标记技术，在食品安全检测、医学诊断、环境监测等领域有广泛应用，同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能利用到，采用该标记物制备的快速检测试纸条是一种基于侧向层析法检测技术建立起来的一种快速检测技术手段；结合胶体金阅读仪等专业设备，可以定性定量的测定各种类型的抗原、抗体，在食品安全领域常用于检测黄曲霉毒素、违法添加剂等。
黄曲霉毒素（Aflatoxins）是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少，产生的黄曲霉毒素主要有B1、B2、G1、G2 以及另外两种代谢产物M1、M2；其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的；B1、B2、G1、G2、M1 和 M2 在分子结构上十分接近，B1、B2和G1、G2是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表，B1和B2被奶牛进食之后，分别有一小部分会转化为M1和M2进入奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源。
中国政府对各种食物中黄曲霉毒素的最高允许量如下：玉米，花生，花生油,坚果和干果（核桃杏仁）最高允许含量20 ug/kg（黄曲霉毒素B1）；玉米，花生仁制品（按原料折算）20 ug/kg（黄曲霉毒素B1）；大米其他食用油（香油，菜籽油大豆油，葵花油胡麻油，茶油麻油，玉米胚芽油米糠油，棉籽油）10 ug/kg（黄曲霉毒素B1）；其他粮食（麦类面粉，薯干），发酵食品（酱油食用醋，豆豉腐乳制品），淀粉类制品（糕点饼干，面包裱花蛋糕）5 ug/kg(黄曲霉毒素B1）；牛乳及其制品（消毒牛奶，新鲜生牛乳全脂牛奶粉，淡炼乳，甜炼乳奶油，黄油）新鲜猪组织（肝，肾血，瘦肉）0.5 ug/kg（黄曲霉毒素M1）。快速检测黄曲霉毒素B1一般使用胶体金竞争法试纸条测试。
胶体金层析试纸条通常包含以下部件：背板、吸水纸、NC膜、胶体金垫、样品垫。其制备过程包括以下流程：NC膜选型、黄曲霉毒素完全抗原包被到NC膜、胶体金标记黄曲霉毒素抗体、样品垫粘贴到背板、吸水纸粘贴到背板，组装好的大板裁切成试纸条。
在试纸条的制备过程中，每一个工艺操作步骤对试纸条的灵敏度都有重要影响，通常要增加试纸条的灵敏度，工程师会选择两种主要解决方案，一种是增加包被浓度，另一种是增加标记物浓度。在大部分情况下，这两种解决方案可以有效提高试纸条的灵敏度，但是在某些情况下，通过这两种技术方案难以实现提高灵敏度的目标，为满足试剂盒的性能指标要求，必须采取其他的技术手段实现提高灵敏度，才能实现开发目标。
发明内容
针对上述问题，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的在于提供一种增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液。
为实现上述目的，本发明的技术方案是，一种增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，每1000mL由以下物料制成：11-13g缓冲液、20-70g的海藻糖、5-10g的Tween-80、5-10g的Triton X-405、1-5g的聚乙二醇300、10-40g的牛血清白蛋白、0.05-0.15g的叠氮钠、0.1-1g的海藻酸钠、0.01-0.5g的硫酸葡聚糖和0.01-0.5g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，即得。
本发明操作简单，成本低，材料易得，检测灵敏度提高了1倍以上，具有良好的社会和经济效益。
具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施时，每1000mL由以下物料制成：11-13g缓冲液、20-70g的海藻糖、5-10g的Tween-80、5-10g的Triton X-405、1-5g的聚乙二醇300、10-40g的牛血清白蛋白、0.05-0.15g的叠氮钠、0.1-1g的海藻酸钠、0.01-0.5g的硫酸葡聚糖和0.01-0.5g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，即得。
为保证更好的实施效果，每1000mL由以下物料制成：12.1g缓冲液、50g的海藻糖、5g的Tween-80、4g的Triton X-405、1g的聚乙二醇300、20g的牛血清白蛋白、0.1g的叠氮钠、0.5g的海藻酸钠、0.25g的硫酸葡聚糖和0.25g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，即得。
所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，磷酸盐缓冲液pH值为7.0-8.5，Tris缓冲液pH值为7.5-8.5。
所述方法制备的增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，样品垫处理液被样品垫充分吸收后，烘干，裁切成所需规格，应用到黄曲霉毒素的检测卡大板中。
本发明在具体实施时，11-15g缓冲液、20-70g的海藻糖、5-10g的Tween-80、5-10g的Triton X-405、1-5g的聚乙二醇300、10-40g的牛血清白蛋白、0.05-0.15g的叠氮钠、0.1-1g的海藻酸钠、0.01-0.5g的硫酸葡聚糖和0.01-0.5g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，得到样品垫处理液，将样品垫放入托盘，样品垫处理液倒入托盘，使样品垫充分浸泡2小时后取出，水平放置到烘箱内。37℃烘干6小时以上，取出，根据需要裁切成所需规格，应用到黄曲霉毒素的检测卡大板中。
经科学试验，本发明所制得的样品垫制备方法简单，具有提高检测灵敏度的作用，并经过对比试验，效果很好，具体资料如下。
实施例1：制被含0.15%增强剂的样品垫
（1）取1000mL试剂瓶，加入纯水800g，称取Tris 12.1g，海藻糖20g，Tween-80 5g，TritonX -405 3g，聚乙二醇300 2g，BSA（牛血清白蛋白） 20g，叠氮钠 0.1g，海藻酸钠1.0g，硫酸葡聚糖0.45g，聚丙烯酰胺0.05g。将以上物料逐一加入试剂瓶，每加入一个物料，充分混匀后再添加下一个物料。充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至 8.0，补加纯水到1000g，备用；
（2）将奥斯龙8964型号的样品垫5张放入托盘（长35cm，宽28cm），取250mL的样品垫处理液，倒入托盘，使样品垫充分浸透，并浸泡2小时；
（3）取出浸泡完成的样品垫，水平放置到烘箱内，37℃烘干6小时以上。将干燥的样品垫根据需要，裁切成合适的尺寸，应用到试纸条中。
实施例2：制不含增强剂的样品垫
（1）取1000mL试剂瓶，加入纯水800g，称取Tris 12.1g，海藻糖20g，Tween-80 5g，TritonX -405 3g，聚乙二醇300 2g，BSA （牛血清白蛋白）20g，叠氮钠 0.1g。将以上物料逐一加入试剂瓶，每加入一个物料，充分混匀后再添加下一个物料。充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至 8.0，补加纯水到1000g，备用；
（2）将奥斯龙8964型号的样品垫5张放入托盘（长35cm，宽28cm），取250mL的样品垫处理液，倒入托盘，使样品垫充分浸透，并浸泡2小时；
（3）取出浸泡完成的样品垫，水平放置到烘箱内，37℃烘干6小时以上。将干燥的样品垫根据需要，裁切成合适的尺寸，应用到试纸条中。
结合实验得出，使用本发明含有增强剂的样品垫与不含增强剂的样品垫相比，试纸条对黄曲霉毒素B1的最低检出量分别为2.5 PPB和5 PPB，灵敏度测试提高了1倍，本发明成本较低，材料易得，配伍严谨，具有良好的社会和经济效益。

Claims (4)

1.一种增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，其特征在于，每1000mL由以下物料制成：11-15g缓冲液、20-70g的海藻糖、5-10g的Tween-80、5-10g的Triton X-405、1-5g的聚乙二醇300、10-40g的牛血清白蛋白、0.05-0.15g的叠氮钠、0.1-1g的海藻酸钠、0.01-0.5g的硫酸葡聚糖和0.01-0.5g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，即得。
2.根据权利要求1所述的增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，其特征在于，每1000mL由以下物料制成：12.1g缓冲液、50g的海藻糖、5g的Tween-80、4g的Triton X-405、1g的聚乙二醇300、20g的牛血清白蛋白、0.1g的叠氮钠、0.5g的海藻酸钠、0.25g的硫酸葡聚糖和0.25g的聚丙烯酰胺，余量为水或去离子水，充分混匀后，用4M的盐酸调节pH值至8.0，即得。
3.根据权利要求1或2所述的增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，磷酸盐缓冲液pH值为7.0-8.5，Tris缓冲液pH值为7.5-8.5。
4.权利要求1-3所述方法制备的增加黄曲霉毒素B1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液，样品垫处理液被样品垫充分吸收后，烘干，裁切成所需规格，应用到黄曲霉毒素的检测卡大板中。
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