CZ294954B6 - Chromatografické zkušební zařízení pro detekci přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku - Google Patents
Chromatografické zkušební zařízení pro detekci přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku Download PDFInfo
- Publication number
- CZ294954B6 CZ294954B6 CZ20002606A CZ20002606A CZ294954B6 CZ 294954 B6 CZ294954 B6 CZ 294954B6 CZ 20002606 A CZ20002606 A CZ 20002606A CZ 20002606 A CZ20002606 A CZ 20002606A CZ 294954 B6 CZ294954 B6 CZ 294954B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- poly
- chromatographic
- conjugate
- polycation
- blood sample
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 94
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 94
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 84
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 63
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims abstract description 43
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims abstract description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 77
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 51
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 51
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 45
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 40
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 16
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims description 16
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims description 14
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 10
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 9
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 7
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 7
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000007813 chromatographic assay Methods 0.000 claims description 7
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 6
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 5
- NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N vinylsulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C=C NLVXSWCKKBEXTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N Angelic acid Natural products CC=C(C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 4
- UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N tiglic acid Chemical compound C\C=C(/C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-ONEGZZNKSA-N 0.000 claims description 4
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 claims description 3
- 229920001464 poly(sodium 4-styrenesulfonate) Polymers 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 claims 1
- IQDGSYLLQPDQDV-UHFFFAOYSA-N dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CNC IQDGSYLLQPDQDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 90
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 39
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 98
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 53
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 53
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 13
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 13
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 12
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 12
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 11
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 11
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 5
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 150000003342 selenium Chemical class 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 3
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000002801 charged material Substances 0.000 description 3
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 3
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 229920000075 poly(4-vinylpyridine) Polymers 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- GQOKIYDTHHZSCJ-UHFFFAOYSA-M dimethyl-bis(prop-2-enyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C=CC[N+](C)(C)CC=C GQOKIYDTHHZSCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N selenium dioxide Chemical compound O=[Se]=O JPJALAQPGMAKDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M sodium;(2r)-2-[6-(4-chlorophenoxy)hexyl]oxirane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].C=1C=C(Cl)C=CC=1OCCCCCC[C@]1(C(=O)[O-])CO1 RPACBEVZENYWOL-XFULWGLBSA-M 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridine Chemical compound C=CC1=CC=NC=C1 KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYPSPXFRXXXUNB-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridine;hydrochloride Chemical compound Cl.C=CC1=CC=NC=C1 DYPSPXFRXXXUNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- RDDREUKTFRNXBQ-UHFFFAOYSA-N Br.Br.Br.C=CC1=CC=NC=C1 Chemical compound Br.Br.Br.C=CC1=CC=NC=C1 RDDREUKTFRNXBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229920000877 Melamine resin Polymers 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004772 Sontara Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- IVJISJACKSSFGE-UHFFFAOYSA-N formaldehyde;1,3,5-triazine-2,4,6-triamine Chemical compound O=C.NC1=NC(N)=NC(N)=N1 IVJISJACKSSFGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 description 1
- 239000013528 metallic particle Substances 0.000 description 1
- 229940050176 methyl chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- UCZIPIUJGGENPL-UHFFFAOYSA-N piperazin-2-ol Chemical compound OC1CNCCN1 UCZIPIUJGGENPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 poly (Iysine Chemical compound 0.000 description 1
- 229920000371 poly(diallyldimethylammonium chloride) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H sodium hexametaphosphate Chemical compound [Na]OP1(=O)OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])OP(=O)(O[Na])O1 GCLGEJMYGQKIIW-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/5695—Mycobacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
- G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
- G01N2333/162—HIV-1, HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, DC4-Binding site
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/20—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/35—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/824—Immunological separation techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/105831—Protein or peptide standard or control [e.g., hemoglobin, etc.]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Chromatografické zkušební zařízení zahrnuje chromatografický nosič, který vymezuje dráhu toku a podporuje kapilární tok, aplikační místo pro krevní vzorek, detekční místo s nedifuzně navázanou zachycující látkou, difuzně navázaný polykationt pro oddělování plazmy nebo séra z krevního vzorku proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu a difuzně navázaný polyaniont pro neutralizaci polykationtu po směru toku vzhledem k navázanému polykationtu. Při způsobu u vzorků plné krve se použije činidlo oddělující červené krvinky, pro agregaci červených krvinek a pro umožnění toku plazmy nebo séra kapilárním účinkem, a neutralizační činidlo pro neutralizování jakýchkoli účinků, které by na zařízení a způsob mohlo mít činidlo oddělující červené krvinky.ŕ
Description
Oblast techniky
Předložený vynález se týká chromatografíckých zkušebních zařízení a způsobu detekce analyzované složky ve vzorku plné krve, zejména zařízení a způsobu používajícího činidlo oddělující červené krvinky pro shromáždění červených krvinek, a neutralizační činidlo pro neutralizování jakýchkoliv možných negativních účinků činidla oddělujícího červené krvinky na zkušebním systému.
Dosavadní stav techniky
Moderní klinické diagnostické metody se běžně provádějí na krevních vzorcích. S mnoha diagnostickými stanoveními bohužel interferují červené krvinky. Při zkouškách analyzované složky mohou červené krvinky inhibovat vázání specifických párových členů. Červené krvinky mají také enzymovou aktivitu, která, v závislosti na použité zkoušce, může interferovat s vytvořeným signálem. Dále, při rychlém testu používajícím chromatografícké zkušebních zařízení, zejména chromatografícké zařízení pro imunologické testy, mohou červené krvinky inhibovat tok tekutiny, který je nezbytný pro reakce probíhající v zařízení. Z tohoto i jiných důvodů se mnoho zkušebních metodologií provádí na plazmě nebo na séru, které musí být nejprve odděleny ze vzorku plné krve.
Pro oddělování červených krvinek z plazmy v plném krevním vzorku existuje mnoho známých postupů. Dobře známým způsobem v oboru je centrifugace, kterou se oddělí od plné krve plazma (před srážením) a sérum (po srážení). V tomto postupu se usazují červené krvinky na dno testovací zkumavky a sérum se odděluje dekantací nebo jiným způsobem. Rozvrstvování plné krve centrifugám' má nicméně mnoho nevýhod. Obecně, centrifugace vyžaduje odebrání velkého krevního vzorku. Proces je dále zdlouhavý a vyžaduje nepohodlné laboratorní vybavení, které často v lékařské ordinaci není k dispozici. Zvláštní riziko vystavení choroboplodným zárodkům majícím původ v krvi.
Pro snížení nebo eliminování potřeby centrifugace byla vyvinuta zkušební zařízení, která pro oddělení červených krvinek z kapalné části krve používají gradientní nebo zachycovací membrány. Používají se také znehybněné protilátky proti červeným krvinkám.
Jiné známé postupy pro oddělování Červených krvinek z plazmy nebo séra zahrnují (1) kombinování vzorku plné krve s činidlem vázajícím červené krvinky filtrací směsi skrz pevný savý prvek, na který je vázán alespoň jeden specifický vázající párový člen pro odstranění aglutinovaných červených krvinek, (2) vedení plné krve skrz filtr ze skleněných mikrovláken, ve kterém mize ale nemusí být zabudováno srážecí činidlo, (3) použití bariérové nebo vylučovací vrstvy polysacharidového materiálu pro zamezení průchodu červených krvinek a jejich interference s detekcí nebo vizualizací signálu na suchém testovacím proužku, a (4) použití nosiče, který má polykationtový povrch vázající červené krvinky, ale ne plazmu.
Mnohé z těchto pokusů pro oddělování červených krvinek z plazmy jsou drahé, komplikované, mohou mít za následek neúplné oddělení červených krvinek a mohou způsobit hemolýzu. Hemolýza vede k nespecifickému vázání nebo způsobuje vysoké pozadí zapříčiňující ztrátu citlivosti zkoušky. Toto může být důsledkem volného hemoglobinu, který může zbavit detekční oblast takovým způsobem, že tato oblast může získat barvu v rozmezí od růžové do tmavě kaštanové. V důsledku toho může být vytváření vizuálního chemického signálu zcela nebo částečně znejasněné přítomností hemoglobinového zbarvení v detekční oblasti. Použití oddělovacího
- 1 CZ 294954 B6 činidla, jako je polykationt, má ve zkušebním systému sklon k interferenci se systémem, často agregací jiných činidel nebo vázajících členů než červených krvinek.
Existuje tudíž potřeba zařízení a způsobu detekce analyzované složky v krevním vzorku bez nepříznivého ovlivňování zkušebního systému. Takové zařízení a způsob by měly být vhodné pro vzorky plné krve rozličných velikostí, zahrnujících malé vzorky.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká chromatografického zařízení zahrnujícího chromatografícký nosič, který vymezuje dráhu toku tekutiny schopnou podporování kapilárního toku, aplikační místo pro uvedený krevní vzorek v toku tekutiny umožňujícím styk s chromatografickým nosičem, detekční místo na chromatografíckém nosiči umístěné mimo aplikační místo, difúzně navázanou označenou látku umístěnou po směru toku vzhledem k aplikačnímu místu, difúzně navázané činidlo oddělující červené krvinky pro oddělování plazmy nebo séra z krevního vzorku proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu a difúzně navázané neutralizační činidlo schopné vázat se s oddělujícím činidlem po směru toku vzhledem k navázanému oddělujícímu činidlu a proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu, čímž je neutralizován kladný náboj oddělujícího činidla. Činidlo oddělující červené krvinky je s výhodou umístěno na aplikačním místě, takže červené krvinky budou odděleny od séra nebo plazmy předtím, než sérum nebo plazmaprojde chromatografíckým nosičem.
Předložený vynález je zaměřen také na způsob detekce přítomnosti analyzované složky ve vzorku, s výhodou v krevním vzorku, který zahrnuje poskytnutí chromatografíckého nosiče, který vymezuje dráhu toku tekutiny schopnou podporování kapilárního toku, podél které jsou (a) aplikační místo pro krevní vzorek v toku tekutiny umožňujícím styk s uvedeným chromatografíckým nosičem, (b) detekční místo na chromatografíckém nosiči umístěné mimo aplikační místo, (c) difúzně navázanou označenou látku umístěnou po směru toku vzhledem k aplikačnímu místu, (d) difúzně navázané činidlo oddělující červené krvinky pro oddělování plazmy nebo séra z uvedeného krevního vzorku proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu a (e) difúzně navázané neutralizační činidlo schopné vázat se s oddělujícím činidlem po směru toku vzhledem k navázanému oddělujícímu činidlu a proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu, čímž je neutralizován kladný náboj oddělujícího činidla; uvedení do styku aplikačního místa s krevním vzorkem, tak že činidlo oddělující červené krvinky odděluje plazmu nebo sérum od krevního vzorku a neutralizační činidlo neutralizuje kladný náboj oddělujícího činidla při toku vzorku po dráze toku; a detekce přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 znázorňuje výhodné provedení chromatografíckého zkušebního zařízení podle předkládaného vynálezu.
Předložený vynález je založen na pozorování, že červené krvinky ve vzorcích plné krve interferují se stanovením přítomnosti nebo množství analyzované složky v krevním vzorku, které by jinak mohlo být stanoveno zkušebními systémy. Například při imunologických testech při styku vzorku plné krve s aplikačním místem je nepravděpodobný pohyb po proužku kapilárním účinkem, což je způsobeno brzdicí nebo interferující přítomností červených krvinek. Předložený vynález překonává tento problém bez interference s citlivostí zkušebního systému.
Pro porozumění provedení předloženého vynálezu mohou být užitečné následující definice.
„Analyzovaná složka“ nebo „analyzovaná složka, která je předmětem zájmu“ představuje směs nebo sloučeninu detekovanou nebo měřenou, která má alespoň jeden epitop nebo vazné místo.
-2CZ 294954 B6
Analyzovaná složka může být jakákoli látka, pro kterou existuje přirozeně se vyskytující pro analyzovanou složku specifický vázající člen, nebo pro kterou může být pro analyzovanou složku specifický vázající člen vytvořen. Analyzované složky zahrnují, aniž by na ně byly omezeny, toxiny, organické směsi, proteiny, peptidy, mikroorganismy, aminokyseliny, nukleové kyseliny, hormony, steroidy, vitamíny, léčiva (zahrnující drogy poskytované pro terapeutické účely a také drogy podávané pro nezákonné účely) a metabolity výše uvedených látek nebo jejich protilátky. Termín „analyzovaná složka“ zahrnuje také jakékoli antigenní látky, hapteny, protilátky, makromolekuly a jejich kombinace.
„Chromatografický nosič“ představuje jakýkoli vhodný porézní, absorpční, savý, izotropický nebo kapilární materiál, který zahrnuje detekční místo zařízení, a skrz který se může dostat analyzovaná složka nebo testovací vzorek kapilárním nebo vzlínavým účinkem. Odborníkovi v oboru je zřejmé, že chromatografický nosič může být vyroben z jednoho nebo i více než jednoho materiálu (např. různé oblasti, části, vrstvy, plochy nebo místa mohou být vyrobeny z různých materiálů), takže pokud jsou vícenásobné vrstvy navzájem ve styku umožňujícím tok tekutiny, umožňují tím průchod testovacího vzorku mezi materiály. Styk umožňující tok tekutiny dovoluje průchod alespoň některých složek vzorku, tj. analyzované složky, mezi oblastmi porézního materiálu, a je s výhodou jednotný podél styčné plochy mezi odlišnými oblastmi. Jako chromatografický nosič mohou být použity materiály přírodní, syntetické nebo v přírodě se vyskytující synteticky modifikované materiály, které zahrnují, aniž by na ně byly omezeny: papír (vláknitý) nebo membrány (mikroporézní) z celulózových materiálů jako je papír, celulóza a materiály odvozené od celulózy jako je acetát celulózy a nitrocelulóza, skleněné vlákno, látka, jak se vyskytuje v přírodě (např. bavlna), tak také syntetické materiály (např. nylon), porézní gely a podobně.
„Značkovací látka“ představuje látku, která je schopná produkovat signál, který je vizuálně nebo pomocí nástrojů detekovatelný. Různé vhodné značkovací látky použitelné v předloženém vynálezu zahrnují značky, které tvoří signály bud’ chemickými, nebo fyzikálními prostředky. Příklady zahrnují enzymy a substráty, chromageny, fluorescenční směsi, chemiluminescenční směsi, obarvené a obarvitelné organické polymerní latexové částice a liposomy nebo jiné vezikuly obsahující přímo viditelné látky. V předloženém vynálezu jsou použity s výhodou radioaktivní značkovací látky, koloidní kovové částice nebo koloidní nekovové částice. Výhodné značkovací látky zahrnují koloidní zlato a latexové částice.
„Označená látka“ nebo „konjugát“ představuje látku zahrnující detekovatelnou značkovací látku připojenou ke specifickému vázajícímu členu. Připojení může být kovalentní nebo nekovalentní vazbou a může zahrnovat hybridizaci nukleové kyseliny. Značka dovoluje označené látce vytvářet detekovatelný signál, který se vztahuje přímo nebo nepřímo k množství analyzované složky v testovacím vzorku. Složka specifického vázajícího členu označené látky je vybrána pro navázání přímo nebo nepřímo na analyzovanou složku.
„Specifický vázající člen“ představuje člen specifického vázajícího páru, tj. dvou různých molekul, přičemž se jedna z molekul specificky váže na druhou molekulu chemickým nebo fyzikálním způsobem. Pokud specifický vázající člen je složka imunitní reakce, může být například protilátkou, antigenem, haptenem nebo jejich komplexem, a pokud je použita protilátka, může to být monoklonální nebo polyklonální protilátka, rekombinační protein nebo protilátka, chimérická protilátka, jejich směs (směsi) nebo fragment (fragmenty), a také směs protilátky a jiných specifických vázajících členů. Specifické příklady specifických vázajících členů zahrnují biotin a avidin, protilátku a jejich odpovídající antigen (žádný z nich nemá vztah ke zkoušenému vzorku), jednoprovazcovou nukleovou kyselinu a její komplement a podobně.
„Zachycovací látka“ představuje jeden nebo více specifických vázajících členů, které jsou připojeny v nebo na části chromatografického nosiče pro vytvoření jednoho nebo více „záchytných míst“, ve kterých je analyzovaná složka, označené činidlo a/nebo kontrolní činidlo znehybněno na chromatografickém nosiči. Způsob připojení není pro předložený vynález rozhodující.
-3 CZ 294954 B6
Zachycující látka usnadňuje sledování detekovatelného signálu v podstatě oddělením analyzované složky a/nebo označené látky od nenavázaných zkušebních činidel a zbývajících složek v testovacím vzorku. Zachycující látka se může znehybnit na chromatografickém nosiči před nebo v průběhu provádění zkoušky pomocí jakéhokoli vhodného způsobu připojení. Zachycující látku lze dále použít na jednom detekčním místě nebo na více místech nebo na chromatografíckém nosiči. Zachycující látku lze také použít v různých konfiguracích pro realizaci různých druhů detekce nebo měření. Zachycující látka může mít například konfiguraci písmene, čísla, obrázku, symbolu nebo jakékoli jejich kombinace.
Předložený vynález poskytuje zejména chromatografické zkušební zařízení pro detekci přítomnosti analyzované složky ve vzorku, s výhodou v krevním vzorku. Výhodným tvarem zařízení je chromatografický proužek mající chromatografícký nosič vymezující dráhu toku tekutiny, který je schopen nést kapilární tok, aplikační místo pro krevní vzorek a detekční místo umístěné mimo aplikační místo pro detekci přítomnosti nebo množství analyzované složky přítomné v krevním vzorku. Zařízení s výhodou zahrnuje také označenou látku (nebo konjugát) difúzně navázanou na chromatografický nosič. Ve výhodném vytvoření je označená látka navázaná na analyzovanou složku si konkuruje s analyzovanou složkou v navázání na detekční místo. Zařízení obsahuje výhodně dvě přídavná činidla difúzně navázaná na chromatografický nosič: (1) činidlo oddělující červené krvinky proti směru toku (dále se směr pohybu vzorku způsobený kapilárním účinkem nazývá „po směru toku“ a opačný směr se nazývá „proti směru toku“) vzhledem k detekčnímu místu, které má schopnost oddělit plazmu nebo sérum od krevního vzorku, a (2) neutralizační činidlo po směru toku vzhledem k činidlu oddělujícímu červené krvinky a proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu pro neutralizování jakéhokoli účinku činidla oddělujícího červené krvinky na chromatografický systém, zejména opačného účinku.
V souvislosti s předloženým vynálezem se termín „difúzně vázat“ používá pro dané činidlo definovatelné jako jakékoli z činidel použitých v předloženém vynálezu, která zahrnují, aniž by na ně byla omezena, označenou látku, specifický vázající člen, činidlo oddělující červené krvinky nebo neutralizační činidlo, a zamýšlí se označit, že činidlo je vázáno (činidla jsou vázána) způsobem, který dovoluje vázanému činidlu (vázaným činidlům) téci po diáze toku.
Pro účely předloženého vynálezu může být použit jakýkoli zkušební systém. Upřednostňovány jsou systémy pro imunologické testy zahrnující, aniž by na ně byly omezeny, systémy laterálního toku, systémy vertikálního toku, systémy sání a měřící tyčinky. Obecný popis známých zkušebních systémů je uveden níže.
Obecně, na chromatografickém proužku jsou na chromatografickém nosiči umístěny alespoň aplikační místo pro vzorek a detekční místo. Roztok vzorku, v tomto případě s výhodou krevní vzorek, podezřelý z toho, že obsahuje analyzovanou složku, která je předmětem zájmu, tj. analyzovanou složku, projde chromatografickým nosičem kapilárním účinkem po připojení k místu aplikace vzorku, a označená látka nebo konjugát obsažený v označujících prostředcích předem uspořádaných na chromatografickém nosiči se akumuluje na detekčním místě v přímém nebo nepřímém poměru k přítomnému množství zkoušené látky v roztoku vzorku, ovlivněném vázající reakcí (jako je imunologická reakce), takže přítomnost množství zkoušené látky v roztoku vzorku může být zajištěna měřením přítomnosti nebo množství takto akumulované označené látky nebo konjugátu. Jsou známé různé druhy chromatografických proužků a v předloženém vynálezu mohou být použity všechny z těchto známých chromatografických proužků, zahrnujících také ty, které budou popsány níže. Zde používaný termín „chromatografické zkušební zařízení“ znamená chromatografický proužek, který je vyroben takovým způsobem, že může být použit při zkoušce a může být uskladňován a transportován.
Dále je popsán typický příklad chromatografického proužku. Aplikační místo pro vzorek může být umístěno ve stejném prostoru, kde je označená látka, výhodně v pozici proti směru toku označené látky. Pokud je roztok vzorku, podezřelý z toho, že obsahuje zkoušenou analyzovanou složku, ve styku s místem aplikace, roztok vzorku projde chromatografickým nosičem ve směru
-4CZ 294954 B6 toku spolu s analyzovanou složkou ovlivněnou kapilárním účinkem. Typická analyzovaná složka je směs, která se váže ve specifickém tvaru k zachycující látce upevněné k detekčnímu místu, nebo je to směs, která se váže ve specifickém tvaru ke konjugátu, který se váže specificky k zachycující látce na detekčním místě. Analyzovaná složka je například protilátka, když zachycující látka je antigen nebo konjugát obsahuje antigen, a analyzovanou složka je antigen, když zachycující látka je protilátka nebo konjugát obsahuje protilátku. Podle následujícího příkladu může být analyzovanou složka nukleová kyselina, která se váže ke komplementárnímu konjugátu a k zachycující látce.
Je-li aplikační místo pro vzorek umístěno proti směru toku vzhledem k označené látce, označená látka může být uspořádána v sousedství aplikačního místa pro vzorek nebo na místě odloučeném od aplikačního místa pro vzorek.
Přidání označené látky může být ovlivněno různými prostředky, například jejím přidáním na jiné místo mimo detekční místo chromatografického nosiče po přidání roztoku vzorku.
Protože označená látka je uspořádána takovým způsobem, že se přemisťuje kapilárním účinkem roztoku vzorku, označená látka se pohybuje po směru toku, když je roztok vzorku přidán do prostředků pro přidávání vzorku.
Detekční místo je zpravidla umístěno po směru toku vzhledem k označené látce a v jisté vzdálenosti od označené látky. Na detekčním místě je umístěna na chromatografický nosič zachycující látka, která se váže pouze na analyzovanou složku nebo na konjugát ve specifickém tvaru, nebo se váže specificky na každou ze zkoušených látek a označenou látku. V důsledku toho se v jednom provedení analyzovaná složka (někdy připojená k označené látce) přemisťovaná kapilárním účinkem roztoku vzorku váže k zachycující látce nebo ke konjugátu, který se pak váže k zachycující složce. Označená látka se tedy váže k navázané zkoušené látce, čímž ovlivňuje akumulaci označené látky v detekčních prostředcích v reakci na přítomnost nebo množství analyzované složky. Označená látka a analyzovaná složka přemisťované kapilárním účinkem se eventuelně kompetitivně vážou k zachycující látce nebo ke konjugátu, který se pak váže k zachycující látce, čímž ovlivňuje akumulaci označené látky nepřímo úměrně k množství zkoušené látky.
Existuje případ, při kterém se jistá označená látka váže jak k zachycující látce (nebo ke konjugátu, který se pak váže k zachycující látce), tak také k analyzované složce, nikoli však současně, přičemž se nejprve analyzovaná složka váže k označené látce a zbývající označená látka, která nebyla navázána na zkoušenou látku, se váže k zachycující látce. V důsledku toho je možno analyzovat přítomnost nebo množství analyzované složky měřením označené látky akumulované v detekčních prostředcích.
Podle potřeby jsou různé látky umístěny proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu. Například konjugát takto může být umístěn pohyblivým způsobem.
V některých případech může být umístěno jedno nebo více přídavných detekčních míst po směru toku vzhledem k prvnímu detekčnímu místu. Po směru toku vzhledem k detekčnímu místu může být také další rozšíření chromatografického nosiče, takže roztok vzorku může být zcela vypuštěn, nebo může být nosič opatřen materiálem pro použití při absorpci roztoku vzorku.
Přítomnost nebo množství analyzované složky, která je předmětem zájmu, může tedy být zjištěna měřením přítomnosti nebo množství označené látky akumulované na detekčním místě. V jednom příkladu to bude názorně dokázáno.
Předložený vynález je zamýšlen pro použití jakéhokoli krevního vzorku zahrnujícího sérum a plazmu, ale výhodněji je použit s krevním vzorkem obsahujícím červené krvinky, např. s plnou krví.
-5 CZ 294954 B6
S výhodou jsou před zkouškou na analyzovanou složku, která je předmětem zájmu, z krevního vzorku odstraněny červené krvinky, aby zkouška proběhla s požadovanou citlivostí. Podle předkládaného vynálezu je tedy činidlo oddělující červené krvinky navázáno na chromatografický nosič. Činidlo oddělující červené krvinky je s výhodou difúzně navázáno na chromatografický nosič. Činidlo oddělující červené krvinky může být navázáno na chromatografický nosič na jakémkoli místě, kde bude fungovat při oddělování červených krvinek z plazmy nebo séra. Výhodně je difúzně navázáno na chromatografický nosič proti směru toku směrem k detekčnímu místu. Nejvýhodněji je činidlo oddělující červené krvinky difúzně navázáno na místě aplikace vzorku. Toto umístění je výhodné, protože způsobuje agregaci červených krvinek jakmile jsou aplikovány na chromatografický nosič, přičemž interference v toku séra nebo plazmy po nosiči kapilárním účinkem je minimální, pokud je nějaká.
Činidlo oddělující červené krvinky podle předkládaného vynálezu může být jakákoli látka schopná agregace červených krvinek. Výhodná činidla jsou kladně nabité materiály jako jsou polykationty, zahrnující například poly-1-lysin hydrobromid, poly(dimetyldialylamonium) chlorid (Merquat®-100, Merquat®-280, Merquat®- 550), poly-l-arginin hydrochlorid, poly-l-hystidin, poly(4-vinyl-pyridin), poly(4-vinylpyridm) hydrochlorid, poly(4-vinyl-pyridin) zesíťovaný, metylchloridovou kvartemí sůl, poly(4-vinylpyridin-ko-styren), poly(4-vinylpyridin poly(fluorovodík), poly(4-vinylpyridin-P-toluen-sulfonát), poly(4-vinylpyridin tribromid), poly(4-vinylpyrolidon-2-dimetylaminoetylmetakrylát), polyvinylpyrolidon zesíťovaný, polyvinylpyrolidon, poly(melamin-formaldehyd), částečně metylovaný, hexadimetrinbromid, poly(glu, lys) 1 : 4 hydrobromid, poly(lys, ala) 3 : 1 hydrobromid, poly(lys, ala) 2 : 1 hydrobromid, poly1—lysin sukcinylatovaný, poly(lys, ala) 1 : 1 hydrobromid a poly(lis, trp) 1 : 4 hydrobromid. Nejvýhodnější polykationt je poly(dimetyldialylamonium) chlorid (Merquat®- 100).
Činidlo oddělující červené krvinky podle předkládaného vynálezu může být použito v jakémkoli vhodném množství, které působí oddělování červených krvinek od zbytku vzorku. S výhodou může činidlo oddělující červené krvinky být přítomno v koncentraci od asi 0,04 % do asi 1,3 % (hmotnost na objem), výhodněji od asi 0,13 % do asi 0,33 % (hmotnost na objem), a nejvýhodněji od asi 0,20 % do asi 0,33 % (hmotnost na objem).
Kladný náboj činidla oddělujícího červené krvinky má sklon k agregaci jakéhokoli záporně nabitého činidla přítomného na proužku. Například označená látka nebo konjugát navázaný na chromatografický nosič může být také agregován činidlem oddělujícím červené krvinky interferující s vázáním analyzované složky na konjugát, nebo při konkurenční zkoušce, s vázáním označené látky a analyzované složky, která je předmětem zájmu, k zachycující látce na detekčním místě nebo konjugátu. Konečně, je možné nalézt kompromis citlivosti a přesnosti systému pro imunologické testy.
Pokud je tedy činidlo oddělující červené krvinky kladně nabitý materiál, předložený vynález s výhodou používá neutralizační činidlo. Neutralizační činidlo je schopné neutralizovat kladný náboj činidla oddělujícího červené krvinky, čímž eliminuje nebo alespoň minimalizuje jakoukoli interferenci se zkušebním systémem způsobenou činidlem oddělujícím červené krvinky. Neutralizační činidlo je s výhodou difúzně navázáno na chromatografický nosič. Neutralizační činidlo může být difúzně navázáno na jakékoli místo na chromatografickém nosiči, kde bude působit neutralizaci činidla oddělujícího červené krvinky, ale s výhodou je umístěno po směru toku vzhledem k činidlu oddělujícímu červené krvinky a proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu, a výhodněji je umístěno na stejném místě na chromatografií jako difúzně navázaná označená látka.
Neutralizační činidlo může být jakýkoli polyaniont schopný neutralizace kladného náboje činidla oddělujícího červené krvinky. Výhodné polyanionty zahrnují poly(kyselinu akrylovou), poly(kyselinu akrylovou, Na sůl), poly(metylmetakrylovou kyselinu), poly(Na-4-styren sulfonát), poly(vinylsulfonovou kyselinu), poly-l-asparagovou kyselinu, a karboxymetylcelulózu, přičemž nejvýhodnější je dextransulfát.
-6CZ 294954 B6
Neutralizační činidlo může být přítomno v jakémkoli množství, které působí neutralizaci kladného náboje činidla oddělujícího červené krvinky. Obecně, koncentrace neutralizačního činidla je závislá na koncentraci použitého činidla oddělujícího červené krvinky. S výhodou je neutralizační činidlo přítomno v koncentraci od asi 0,33 % do asi 20 % (hmotnost na objem), výhodněji od asi 0,34 % do asi 10 % (hmotnost na objem), a nejvýhodněji od asi 0,34 % do asi 10 % (hmotnost na objem).
Obrázek 1 znázorňuje vytvoření imunochromatografického zkušebního zařízení podle předloženého vynálezu. Zařízení 10 zahrnuje chromatografícký nosič 20. Na chromatografickém nosiči 20 je umístěno aplikační místo 30 pro krevní vzorek. V tomto výhodném provedení je umístěno činidlo oddělující červené krvinky, tj. Merquat®-100, na aplikačním místě 30. V sousedství aplikačního místa 30 je konjugátová podložka 40 obsahující konjugát, tj. selenem označenou vázající látku a neutralizační činidlo, tj. dextran sulfátu. Dále po směru toku je detekční místo 50, které po provedení zkoušky ukáže kontrolní pás 60, a pokud je přítomna zkoušená látka, testovací pás 70.
V jiném provedení předloženého vynálezu může být uveden do styku s aplikačním místem pufr, s výhodou po uvedení aplikačního místa do styku se vzorkem. Pufrové pomocné prostředky udržují odpovídající rychlost toku tekutiny po dráze toku na chromatografíckém nosiči. Pufr může být jakákoli látka, která je schopna tečení kapilárním účinkem po dráze toku tekutiny, zahrnující, aniž by na něj byla omezena, fosforečnanový pufr, solný -fosforečnanový pufr, Tris-HCI pufr, uhličitanový pufr, citronanový pufr, HEPES (2-hydroxypiperazin-N'-2-etansulfonová kyselina) pufr, MOPS (3-(N-morfolin)propansulfonová kyselina) pufr, MES (2-(N-morfolin)etansulfonová kyselina) pufr a podobně. Ačkoli koncentrace a pH, které budou účinkovat v požadovaném zkušebním zařízení, mohou být jakékoli, molarita je s výhodou v rozmezí od asi 10 mM do asi 100 mM a pH je asi 5 až 9 výhodněji asi 6 až 8. Použitý pufr je nejvýhodněji 50 mM fosforečnanový pufr, pH 7,4.
Objem tekutiny použitý v předloženém vynálezu závisí na velikosti zařízení. Vhodné je použít dostatečný objem tekutiny pro tok tekutiny skrze zařízení k detekčnímu místu. S výhodou je objem, tekutiny v rozmezí od asi 25 μΐ do asi 100 μΐ, výhodněji od asi 40 μΐ do asi 60 μΐ. V případě potřeby může být pufr tedy přidán v rozmezí objemu od asi 10 μΐ do asi 40 μΐ a výhodněji od asi 20 μΐ do asi 30 μΐ.
Předložený vynález je také zaměřen na způsob detekce přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku. Způsob s výhodou používá chromatografické zařízení pro imunologické testy podle předloženého vynálezu. Přesněji, způsob zahrnuje (1) poskytnutí chromatografického nosiče, který vymezuje dráhu toku tekutiny schopnou podporování kapilárního toku, podél kterého jsou aplikační místo pro krevní vzorek, který je ve styku s chromatografíckým nosičem, detekční místo na chromatografíckém nosiči umístěné mimo aplikační místo, difúzně označená látka (nebo konjugát), která se váže k detekčnímu místu, nebo soutěží s analyzovanou složkou o navázání na detekční místo, difúzně navázané činidlo oddělující červené krvinky pro oddělení plazmy nebo séra z uvedeného krevního vzorku proti směru toku vzhledem k detekčnímu místu, a konjugát navázaný na chromatografícký nosič, (2) uvedení aplikačního místa do styku s krevním vzorkem tak, že činidlo oddělující červené krvinky odděluje červené krvinky z plazmy nebo séra krevního vzorku, a neutralizační činidlo neutralizuje kladný náboj oddělujícího činidla, a (3) detekci přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku.
Činidlo oddělující červené krvinky je s výhodou kladně nabitý materiál a dráha toku tekutiny obsahuje difúzně navázané neutralizační činidlo, které je s výhodou schopné vázat se s uvedeným činidlem oddělujícím červené krvinky a je umístěno po směru toku vzhledem k uvedenému činidlu oddělujícímu červené krvinky a proti směru toku vzhledem k uvedenému detekčnímu místu, čímž je neutralizován kladný náboj uvedeného oddělujícího činidla.
-7CZ 294954 B6
Ve výhodném provedení podle obrázku 1 je tedy aplikován krevní vzorek na aplikační místo 30 a činidlo oddělující červené krvinky odděluje červené krvinky jejich agregací a dovolením, aby se plazma nebo sérum pohybovalo kapilárním účinkem dolu po chromatografickém nosiči 20. Neutralizační činidlo v konjugátové podložce 40 neutralizuje účinek činidla oddělujícího červené krvinky na zařízení 10 a konjugát a analyzovaná složka se váže na konjugát přítomný v konjugátové podložce 40. Analyzovaná složka navázaná na konjugát pokračuje v pohybování po směru toku k detekčnímu místu 50. Pokud je přítomna analyzovaná složka, která je předmětem zájmu, objeví se testovací pás 70. Kontrolní pás 60 ukáže, zdaje analyzovaná složka, která je předmětem zájmu, přítomna nebo ne, což udává, že zkouška probíhá správně.
Předložený vynález může výhodně zahrnovat nereaktivní kryt nebo uzavření kolem zařízení. Výhodně kryt uzavírá alespoň chromatografický nosič pro zabránění styku se záchytnými místy a jejich kontaminaci. Kryt může zahrnovat také zvýšenou plochu přiléhající k aplikačnímu místu pro usnadnění přijetí a/nebo zadržení jistého objemu vzorku. Navíc může kryt zahrnovat vyříznutou oblast nebo oblasti ve tvaru písmene, čísla, obrázku, symbolu nebo jakékoli jejich kombinace. V tomto provedení vyříznutá oblast nebo oblasti určují tvar jednotlivých detekčních míst, pokud je proužek zcela uzavřen. S výhodou je dostatečná část proužku obalená pro ochranu použitého vzorku před stykem s detekčními místy bez toho, že by dříve prošel skrz část proužku.
Zařízení a způsob podle předloženého vynálezu mohou být použity v jakémkoli zkušebním systému, ve kterém krevní vzorek obsahuje analyzovanou složku, která je předmětem zájmu. Příklady výhodných systémů zahrnují, aniž by na ně byly omezeny, virus hepatitidy C (hepatitis C virus „HCV“), virus hepatitidy A (hepatitis A virus - „HAV“), virus HIV (human immunodeficiency virus - „HIV“), povrchovou protilátku hepatitidy B (hepatitis B surface antibody „HbsAb“), povrchovou protilátku hepatitidy B (hepatitis B surface antigen - „HbsAg“), jádrovou protilátku hepatitidy B (hepatitis B core antibody - „HbcAb“), jádrovou protilátku hepatitidy B (hepatitis B core antigen - „HbcAg“), karcinoembryonický antigen (carcinoembryonic antigen „CEA“), alfafetoproten(alpha-fetoproten - „AFP“), indikátor pankreatické rakoviny (pancreatic cancer markér -„CA 19-9“), syfilis, tuberkulózu, malárii, leishmaniózu a horečku dengue.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 znázorňuje výhodné provedení chromatografického zkušebního zařízení podle předloženého vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady dále ilustrují předložený vynález, ale neměly by být vykládány jako jakýmkoli způsobem omezující jeho rozsah.
Příklad 1
Agregace červených krvinek versus agregace Se-konjugátu polykationty
Pro účely předloženého vynálezu je požadována agregace červených krvinek v plné krvi, zatímco není žádoucí agregace selenového konjugátu. Byly testovány různé polykationty, aby bylo zjištěno, které by způsobily dostatečnou agregaci červených krvinek, a současně pouze minimální agregaci selenového konjugátu.
Selenový konjugát HIV-1 rekombinačního proteinu byl připraven následujícím způsobem: nejprve byl připraven selenový koloid reakcí 32 mM oxidu seleničitého s 91 mM 1-askorbové kyseliny ve vodném roztoku po dobu 72 hodin při 42 °C. Tento selenový koloid byl zředěn na
-8CZ 294954 B6 optickou hustotu 30 při vlnové délce 550 nm a pak byla umožněna reakce s 40 pg/ml rekombinačního HIV-1 obalového proteinu v 30 mM Tris pufru, při pH 7,4 po dobu 20 minut při teplotě okolí. Tento selenový koloid - označený HIV-1 proteinový konjugát byl pak zředěn na optickou hustotu 30 při vlnové délce 550 nm v 10 mM Tris pufru, při pH 7,4 a obsahu 0,1 % kaseinu, a inkubován po dobu 20 minut při teplotě okolí. Roztok konjugátu byl pak odstředěn při 1970 násobku g po dobu 20 minut při 4 °C, supematant odtažen a granule odstraněny. Pak byl přidán do supernatantu objem 30 mM Tris pufru, při pH 7,4 a obsahu 2 % kaseinu, ekvivalentní jedné desetině objemu supernatantu. Nakonec byl roztok konjugátu zředěn na optickou hustotu 10 při vlnové délce 550 nm v 50 mM Tris pufru, při pH 7,4 a obsahu 1 % kaseinu, 2 % sacharózy a 2 % laktózy.
Byly připraveny 0,25 % (hmotnost na objem) vodné roztoky následujících polykationtů: poly-l-lysin hydrobromid, molekulová hmotnost (m.v.) 37 000, poly-l-arginin hydrochlorid, m.v. 12 100, 42 400 a 92 000, poly-l-histidin, m.v. 18 400, hexadimetrinbromid, poly(Iysin, alanin) 3 : 1 hydrobromid, m.v. 35 000, poly(lysin, alanin) 2 : 1 hydrobromid, m.v. 49 300, poly(lysin, alanin) 1 : 1 hydrobromid, m.v. 41 600, polydysin, triptofan) 1 : 4 hydrobromid, m. v. 38 000 (všechny z výše uvedených polykationtů byly nakoupeny od firmy Sigma, St. Louis,MO), poly(chlorid dialyldimetylamonný), m.v. 105 až 106 (Merquat®-100, Calgon, Pittsburgh, PA).
Schopnost těchto polykationtů agregovat buď červené krvinky v plné krvi nebo selenový konjugát byla sledována v oddělených reakcích přidáním 350 μΐ 0,25 % různých polykationtových roztoků do stejného objemu buď plné krve nebo selenového konjugátu. Roztoky byly míchány a uskladňovány při teplotě okolí po dobu 10 minut, pak byla vizuálně vyhodnocena agregace. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 1. Jedno plus (+) znamená slabou agregaci, 2+ znamenají střední agregaci a 3+ a 4+ znamenají silnou agregaci.
Tabulka 1
| Agregace | |||
| Polykationt | Molekulová | Červené | Se- |
| hmotnost | krvinky | konj ugát | |
| Poly-l-lys Hbr | 37000 | 2+ | 2 + |
| Merquat®-100 | 105 až 106 | 2 + | 2+ |
| Poly-l-Arg HCI | 12100 | 2+ | 2+ |
| Poly-l-Arg HCI | 42400 | 2 + | 2+ |
| Poly-l-Arg HCI | 92000 | 2+ | 2 + |
| Poly-l-his | 18400 | + | 4 + |
| Hexadimetrin Br | ř* | + | |
| Póly(lys, ala) 3:1 HBr | 35000 | 2 + | 2 + |
| Poly(lys, ala) 2:1 HBr | 49300 | + | 2 + |
| Poly(lys, ala) 1:1 HBr | 41600 | + | 2 + |
| Póly(lys, trp) 1:4 HBr | 38000 | 3+ | 3+ |
Vhodnou volbu představuje polykationt, který způsobuje agregaci červených krvinek (2+ nebo větší) zatímco způsobuje minimální agregaci selenového konjugátu (2+ nebo menší). Tato kritéria splňují polykationty s 2+ v obou kategoriích. Pro další práci byly vybrány poly-l-lysin Hbr a Merquat®-! 00, s tím, že cenově nejvýhodnější je Merquat®-! 00.
-9CZ 294954 B6
Příklad 2
Zamezení agregaci konjugátu polyaniontovou neutralizací
A) Zamezení toku a agregace konjugátu použitím dextransulfátu
Při použití poly-l-lysinu jako polykationtového činidla agregujícího červené krvinky byly testovány různé koncentrace polyaniontu dextransulfátu pro zjištění, zda by kladný náboj polykationtu mohl být neutralizován dextransulfátem, čímž je zajištěno zamezení agregace selenového konjugátu způsobené polykationtem. Dextran sulfát byl přidán až poté, co polykationt způsobil agregaci červených krvinek, ale před interakcí polykationtu se selenovýmkonjugátem. Následující experiment vyhodnocoval účinek polykationtu a dextransulfátu na agregaci selenového konjugátu a jeho následující schopnost téci po imunochromatografíckém proužku.
Byl sestaven imunochromatografický proužek, složený z podložky vzorku, neutralizační podložky, konjugátové podložky a detekčního proužku. Podložka vzorku byla připravena napuštěním 4 mm širokého a 20 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) vodným roztokem 0,33 % poly-l-lysin hydrobromidu, m.v. 37 000 (Sigma, St. Louis, MO), pak sušením ve vakuu.
Neutralizační podložky obsahující různé koncentrace dextransulfátu byly připraveny napuštěním 4 mm širokých a 13 mm dlouhých filtrů vyrobených z vlněné drtě a polyesteru (Sontara 8801, Du pont., Wilmington, Delware) vodnými roztoky obsahujícími 0%, 1,1%, 3,3% nebo 10% dextransulfátu, m.v. 5 000 (Sigma, St. Louis, MO). Po napuštění byly podložky sušeny ve vakuu.
Konjugátová podložka byla připravena napuštěním 4 mm širokého a 4,3 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH) selenovým koloidem - označeným HIV-1 rekombinačním proteinovým konjugátem připraveným a zředěným podle příkladu 1. Po napuštění byla konjugátová podložka sušena ve vakuu.
Detekční proužek byl filtr z nitrocelulózové membrány 4 mm široký 40 mm dlouhý (katalog #H9643G1, Millipore, Bedford, MA). Do nitrocelulózové membrány byl přidán HIV-1 krycí antigen v koncentraci 5 mg/ml v 100 mM Tris pufru, při pH 7,4 obsahující 1 % sacharózy, pro vytvoření linie napříč proužkem v místě asi 1 cm od konce membrány. Vyznačená oblast byla překryta polyesterovým laminátem (kód #7733, Adhesives Research lne., Glen Rock, PA). Toto bylo umožněno pro odpovídající sušení, aby byl antigen upevněn k nitrocelulóze.
Imunochromatografické proužky, 4 mm široké, byly sestaveny za použití výše uvedených součástek jejich umístěním konci k sobě podélně s 1 mm přesahem mezi každou oblastí, s 20 mm dlouhou podložkou vzorku na jednom konci, vedle které byla umístěna jedna z 13 mm dlouhých neutralizačních vložek, následovaná 4,3 mm dlouho konjugátovou podložkou a nakonec 40 mm dlouhým detekčním proužkem. Sestavený proužek pak byl překryt polyesterovým laminátem (kód #8648, Adhesives Research lne., Glen Rock, PA) z vrcholu detekčního proužku na 10 mm od spodku proužku, přičemž bylo ponecháno přibližně 10 mm podložky vzoiku nepokrytých. Pak bylo použito 80 μΐ plazmy na podložky vzorku každého z imunochromatografických proužků obsahujících neutralizační podložky s buď 0 %, 1,1 %, 3,3 % nebo 10 % dextransulfátu. Agregace červeného selenového konjugátu a schopnost konjugátu téci po proužku byla vizuálně sledována.
Výsledky, znázorněné níže v tabulce 2, ukazují, že bez přítomnosti dextransulfátu pro neutralizování náboje z polykationtového roztoku se selenový konjugát agregoval a nebyl schopen téci po proužku. Byl tam obrácený vztah mezi agregací a tokem konjugátu, s koncentrací dextransulfátu 3,3 % a větší, vhodnou pro zamezení agregace konjugátu a dovolení konjugátu téci po proužku.
- 10CZ 294954 B6
Tabulka 2
| Koncentrace dextrasulfátu | Agregace konjugátu | Tok konjugátu |
| 0% | ++ | - |
| 1,1 % | + | +/- |
| 3,3 % | - | + |
| 10% | - | 4~ |
B) Agregace červených krvinek za přítomnosti dextransulfátu
Za účelem stanovení účinku dextransulfátu na agregaci červených krvinek byl opakován výše uvedený experiment za použití plné krve jako vzorku s 10 % dextransulfátem na 4,3 mm dlouhou a 4 mm širokou neutralizační podložku. Po sestavení imunochromatografíckého proužku popsaném výše a po použití této neutralizační podložky bylo na podložku vzorku aplikováno 80 μΐ plné krve. O patnáct minut později byl vizuálně sledován výsledek agregace červených krvinek a byla měřena schopnost výsledné plazmy téci po proužku. Červené krvinky, zadrženy na podložce vzorku, byly agregovány a netekly po proužku, zatímco plazma tekla po proužku 33 mm za 15 minut. To ukazuje, že polykationt ve vzorkové podložce byl stále schopen způsobit agregaci červených krvinek ve vzorku plné krve, a že přítomnost polykationtu, dextransulfátu, v neutralizační podložce neinterferovala s touto agregaci červených krvinek.
C) Zamezení agregace konjugátu pomocí polyaniontů
Pro posouzení schopnosti zamezovat agregaci selenového konjugátu byly testovány jiné anionty než v příkladu 2A. 15,5 mm dlouhá a 4 mm široká podložka vzorku byla napuštěna vodným roztokem obsahujícím 0,26% Merquat®-100 a pak byla sušena při 55 °C. Nebyly použity neutralizační podložky a místo toho byl selenový konjugát zředěn na 10 mM Tris pufr, při pH7,4 a obsahu 1 % kaseinu, 2 % sacharózy a 2 % laktózy a 0 %, 1,1 % nebo 3,3 % polyaniontů dextran sulfátu, m.v. 5 000 (Sigma, St. Louis, MO) , nebo 0 %, 0,5 %, 1 % nebo 2 % jednoho z následujících polyaniontů (všechny od firmy Aldrich Chemical, Milwaukee, WI): poly(akrylová kyselina), m.v. 5 000, poly(sodík-4-styren sulfonát), m.v. 70 000, poly(vinylsulfonová kyselina, sodná sůl), poly(metylmetakrylová kyselina), m.v. 9 500, poly(akrylová kyselina, sodná sůl), m.v. 2100. Konjugátové podložky byly napuštěny různými roztoky selenového konjugátu a byly sušeny ve vakuu. Detekční proužek byl připraven jak je popsáno v příkladu 2A a byly sestaveny imunochromatografícké proužky. Pak bylo aplikováno 50 μΐ plazmy na podložky vzorků každého z imunochromatografických proužků obsahujících konjugátové podložky s různými polyanionty. Agregace červeného selenového konjugátu byla vizuálně sledována. Tabulka 3 zachycuje relativní množství agregace konjugátu při různých testovaných koncentracích polyaniontů.
Tabulka 3
| Agregace selenového konjugátu | |||||
| Koncentrace polyaniontů | |||||
| Polyaniont | 0% | 0,5 % | 1-1,1 % | 2% | 3,3 % |
| Dextransulfát | ++ | nt | + | nt | - |
| Poly(akrylová kyselina) | ++ | - | - | - | nt |
| Poly(Na-4-styren sulfonát | ++ | ++ | ++ | + | nt |
| Poly(vinylsulfonová kyselina) | ++ | +/- | - | - | nt |
| Poly(metylakrylová kyselina) | ++ | - | - | - | nt |
| Poly(akrylová kyselina, Na sůl) | ++ | + | +/- | - | nt |
Nt = netestováno
-11 CZ 294954 B6
Jako předtím, agregoval selenový konjugát pokud nebyl přítomný polyaniont pro neutralizaci kladného náboje polykationtu z podložky vzorku (který je nezbytný pro agregaci červených krvinek při testování, plné krve). Všechny z polyaniontů použitých v konjugátové podložce zabránily výskytu agregace konjugátu alespoň v jedné z testovaných koncentrací. Tento experiment ukázal také, že polyaniont nemusel být aplikován na oddělenou podložku, ale mohl být kombinován se selenovým konjugátem na konjugátové podložce.
Příklad 3
Použití dextranu sulfátu v neutralizační podložce versus konjugátová podložka v testu na HIV-1 protilátku
Imunochromatografické proužky byly připraveny jako v příkladu 2A buď s, nebo bez 4 mm širokého a 4,3 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken (Lypore 9524, Lydall, Rochester, NH), neutralizační podložky. Pokud byla použita, byla neutralizační podložka napuštěna vodným roztokem obsahujícím 3,3 % dextransulfátu a pak byla sušena ve vakuu. V proužcích bez neutralizační podložky byl selenový konjugát zředěn v 10 mM Tris pufru, při pH 7,4 a obsahu 1 % kaseinu, 2 % sacharózy, 2 % laktózy a 3,3 % dextransulfátu, konjugátová podložka byla napuštěna tímto roztokem a byla sušena ve vakuu. Použitá podložka vzorku byla jako v příkladu 2A, kromě toho, že byla napuštěna vodným roztokem 0,2 % Merquat®-100.
Lidské sérum obsahující HIV-1 protilátky bylo zředěno 1 :2 048 buď v HIV negativní lidské plné krvi (založené na objemu plazmy) s hodnotou hematokritu 50 % nebo v HIV negativní lidské plazmě. Byla provedena tři následná 1 : 2 sériová ředění, opět za použití buď plné krve, nebo plazmy jako ředidla. 80 μΐ negativní plné krve nebo vzorků z HIV-1 pozitivních sérií ředěných plnou krví bylo přidáno do podložky vzorku imunochromatografických proužků připravených s dextransulfátem na oddělené neutralizační podložce nebo s dextransulfátem v roztoku selenového konjugátu na konjugátové podložce. 80 μΐ negativní plazmy nebo vzorků z HIV-1 pozitivní plazmy sérií ředění bylo testováno pouze na imunochromatografických proužcích s dextransulfátem na konjugátové podložce. Výsledky byly odečteny 15 minut po aplikaci vzorku (tabulka 4). Pozitivní výsledek ukázal červenou barvu na detekčním proužku, kde byl na HIV-1 antigenu na vyznačené oblasti proužku navázán červený selenový HIV-1 antigen, komplex konjugát-HIV-1 protilátka. Negativní výsledek na detekčním proužku neukázal žádnou barvu v této oblasti.
Tabulka 4
| Dextrasulfát v neutralizační podložce | Dextrasulfát v konjugátové podložce | ||
| Zředění vzorku | Plná krev | Plná krev | Plazma |
| 1 : 2 048 | + | + | + |
| 1 :4 096 | + | + | + |
| 1 : 8 192 | - | + | + |
| 1 : 16 384 | nt | - | - |
| Negativní kontrola | — | — | — |
Nt = netestováno
Výsledky v tabulce 4 naznačují, že HIV-1 protilátky jsou zjistitelné z plné krve na imunochromatografickém testovacím proužku za použití polykationtu Merquat®-100 pro agregaci červených krvinek a pro dovolení vzorku téci po proužku, a polyaniontů dextransulfátu jako neutralizačního činidla, zabraňujícího agregaci selenového konjugátu polykationtem a dovolujícího konjugátu vázat se a vytvářet komplex s kladným vzorkem a téci po proužku k detekční
- 12 CZ 294954 B6 oblasti. Ukázalo se, že polyaniont byl efektivní, pokud byl použit buď v oddělené neutralizační podložce, nebo kombinován se selenovým konjugátem na konjugátové podložce. V tomto testu prokázala senzitivita detekce HIV-1 protilátek zlepšení, když byl polyaniont (dextransulfát) použit v konjugátové podložce a ne na oddělené neutralizační podložce.
Navíc výsledky v tabulce 4 naznačují, že polykationt efektivně agreguje červené krvinky v plné krvi, jak ukazuje stejná senzitivita detekce HIV-1 protilátek v plné krvi, kde musejí být červené krvinky agregovány pro tok vzorku, i v plazmě, kde nejsou žádné červené krvinky, které by bránily vzorku v toku. To také ukazuje, že přítomnost polyaniontu, buď v oddělené neutralizační podložce, nebo v konjugátové podložce, neinterferuje se schopností polykationtu efektivně způsobovat agregaci červených krvinek v plné krvi.
Příklad 4
Použití Merquat -100 a různých polyaniontů v HBsAg testu
Imunochromatografické proužky byly připraveny pro detekci povrchového antigenu hepatitidy B (hepatitis B surface antigen - HBsAg) ve vzorcích plné krve. Merquat®-100 byl použit jako polykationt pro agregaci červených krvinek v podložce vzorku a různé polyanionty byly v konjugátové podložce ohodnoceny jako polykationtová neutralizační činidla pro zamezení agregace selenového konjugátu.
Byly sestaveny imunochromatografické proužky, složené z podložky vzorku, konjugátové podložky a detekčního proužku. Podložka vzorku byla připravena napuštěním 4 mm širokého a
15,5 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken vodným roztokem 0,26 % Merquat®-100, a pak sušením při 55 °C.
Selenový konjugát byl připraven za použití selenového koloidu, jako v příkladu 1, a 12 pg/ml myší monoklonální protilátky proti HbsAg (anti-Hbs). Tento selenovým koloidem označený anti-Hbs konjugát byl pak zředěn na optickou hustotu 2,6 při vlnové délce 550 nm v Tris pufru obsahujícím jeden z následujících polyaniontů: 0,5 % póly(akrylová kyselina), m.v. 2 000 (poly(acrylic acid) - PAA-2 000), 0,5 % poly(akrylová kyselina), m. v. 240 000 (PAA-240 000), 0,5 % dextran sulfát, m.v. 5000, 0,8 % poly-l-aspartová kyselina), m. v. 36 300, 0,5 % karboxymetylcelulóza, m.v. 90 000 (carboxymethyl cellulose - CMC). Dextran sulfát a poly-1- aspartová kyselina byly ze Sigma, St. Louis, MO, a zbývající polyanionty byly z Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.
Konjugátová podložka byla připravena napuštěním 4 mm širokého a 4,3 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken selenovým koloidem označeným anti-Hbs konjugátem připraveným a zředěným jedním z výše uvedených polyaniontů. Po napuštění byla konjugátová podložka sušena ve vakuu.
Detekční proužek byl 4 mm široký a 40 mm dlouhý nitrocelulózový membránový filtr, připravený jako v příkladu 2 za použití myší monoklonální anti-Hbs v koncentraci 3 mg/ml a přidaný do nitrocelulózové membrány tak, aby vytvořil linii napříč proužkem v místě asi 1 cm od konce membrány. Označená oblast byla překryta polyesterovým laminátem. To bylo umožněno pro odpovídající sušení, aby byla upevněna protilátka k nitrocelulóze.
Imunochromatografické proužky byly sestaveny za použití výše uvedených komponent jejich umístěním konci k sobě podélně s 1 mm přesahem, s podložkou vzorku na jednom konci, vedle kterého byla umístěna konjugátová podložka, a nakonec detekční proužek. Sestavený proužek byl pak překryt polyesterovým laminátem, přičemž bylo ponecháno přibližně 10 mm podložky vzorku nepokrytých.
-13 CZ 294954 B6
Rekombinant HbsAg byl přidán k HbsAg negativní lidské plné krvi s hodnotou hematokritu 50 % s koncentrací 12,5 ng/ml. Na plné krvi byla provedena série tří dalších ředění. 50 μΐ negativní plné krve nebo vzorků ze sérií ředění HbsAg pozitivní plné krve bylo přidáno do podložky vzorku imunochromatografických proužků připravených s různými polyanionty v konjugátové podložce. Výsledky byly odečteny 15 minut po aplikaci vzorku (tabulka 5). Pozitivní výsledek ukázal červenou barvu na detekčním proužku, kde byl na anti-HBs na vyznačené oblasti proužku navázán červený selenový anti-HBs komplex konjugát-HBsAg. Negativní výsledek neukázal žádnou barvu v této oblasti na detekčním proužku. Agregace červeného selenového konjugátu u vstupu do detekčního proužku byla vizuálně sledována.
Tabulka 5
| Koncentrace HbsAg (ng/ml) | ||||||
| Polyanion | 12,5 | 6,25 | 3,13 | 1,56 | 0 | Agregace konjugátu |
| PAA-2 000 | + | + | + | - | - | - |
| PAA-240 000 | + | + | - | - | - | + |
| Dextransulfát | + | + | + | - | - | - |
| Póly-1-asp | + | + | + | - | - | - |
| CMC | + | - | - | - | - | + |
Zatímco všechny polykationty dovolily detekci objevit HbsAg, ty polykationty, které zabraňují agregaci konjugátu, PAA-2000, dextran sulfát a poly-l-aspartová kyselina, ukazují dvojnásobnou až čtyřnásobnou senzitivitu detekce HbsAg ve vzorcích plné krve.
Výše uvedený experiment byl opakován, přičemž byl použit konjugát označený selenovým koloidem zředěný v Tris pufru obsahujícím PAA-2000 jako polyaniont, který byl, kromě 25 μΐ 50 mM fosfátového pufru, při pH 7,4, přidán do podlážky vzorku jednu minutu po přidání HbsAg vzorků plné krve. Výsledky získané za použití tohoto postupu, s přidáním pufru po aplikaci vzorku, byly identické s výsledky bez tohoto kroku. Testy mohly tedy být dělány buď s nebo bez přidání pufru po aplikaci vzorku.
Příklad 5
Použití Merquat®-100 a dextransulfátu v testu na tuberkulózu
Imunochromatografické proužky byly připraveny pro detekci protilátky proti mykobakteriu tuberkulózy (anti-Mtb) ve vzorcích plné krve. Merquat®-100 byl použit jako polykationt pro agregaci červených krvinek v podložce vzorku a různé koncentrace polyaniontu dextransulfátu byly ohodnoceny v konjugátové podložce jako polykationtové neutralizační činidlo pro zamezení agregace selenového konjugátu.
Byly sestaveny imunochromatografické proužky, složené z podložky vzorku, konjugátové podložky a detekčního proužku. Podložka vzorku byla připravena napuštěním 4 mm širokého a
15,5 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken vodným roztokem 0,26 % Merquat®-100, a pak sušením ve vakuu.
Selenový konjugát byl připraven za použití selenového koloidu, jako v příkladu 1, a 3,5 pg/ml rekombinantu Mtb antigenu z E. coli. Tento selenovým koloidem označený Mtb konjugát byl pak zředěn na optickou hustotu 2,5 při vlnové délce 550 nm v Tris pufru obsahujícím buď 0 %, 0,34 %, 1,1 %, nebo 3,3 % dextransulfátu.
-14CZ 294954 B6
Konjugátová podložka byla připravena napuštěním 4 mm širokého a 4,3 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken selenovým koloidem označeným Mtb konjugátem připraveným a zředěným jednou z výše uvedených koncentrací dextranu. Po napuštění byla konjugátová podložka sušena ve vakuu.
Detekční proužek byl 4 mm široký a 40 mm dlouhý nitrocelulózový membránový filtr, připravený jako v příkladu 2 za použití rekombinantu Mtb antigenu v koncentraci 0,15 mg/ml a přidaný do nitrocelulózové membrány tak, aby vytvořil linii napříč proužkem v místě asi 1 cm od konce membrány. Označená oblast byla překryta polyesterovým laminátem. To bylo umožněno pro odpovídající sušení, aby byla upevněna protilátka k nitrocelulóze.
Imunochromatografické proužky byly sestaveny za použití výše uvedených komponent jejich umístěním konci k sobě podélně s 1 mm přesahem, s podložkou vzorku na jednom konci, vedle kterého byla umístěna konjugátová podložka, a nakonec detekční proužek. Sestavený proužek byl pak překryt polyesterovým laminátem, přičemž bylo ponecháno přibližně 10 mm podložky vzorku nepokrytého.
Anti-Mtb pozitivní sérum bylo zředěno 1 : 100 negativní lidskou plnou krví s hodnotou hematokritu 50 %. Na plné krvi byla provedena tři další 1 : 2 série ředění. 50 μΐ negativní plné krve nebo vzorků ze sérií ředění anti-Mtb pozitivní plné krve bylo přidáno do podložky vzorku imunochromatografických proužků připravených s různými koncentracemi dextransulfátu v konjugátové podložce. Výsledky byly odečteny 15 minut po aplikaci vzorku (tabulka 6). Pozitivní výsledek ukázal červenou barvu na detekčním proužku, kde byl na Mtb na vyznačené oblasti proužku navázán červený selenový Mtb komplex konjugát-anti-Mtb. Negativní výsledek neukázal žádnou barvu v této oblasti na detekčním proužku. Agregace červeného selenového konjugátu u vstupu do detekčního proužku byla vizuálně sledována.
Tabulka 6
| dextrasulfát | Anti - Mtb ředění | ||||
| % | 1 : 100 | 1 : 200 | 1 :400 | Neg. kontrola | Agregace konjugátu |
| 0 | - | - | - | - | ++ |
| 0,34 | - | - | - | - | ++ |
| U | + | - | - | - | + |
| 3,3 | + | + | - | - | - |
Údaje v tabulce 6 ukazují, že test nefunguje bez přítomnosti polyaniontu, v tomto případě dextransulfátu, pro zamezení agregace konjugátu. Mezi agregací konjugátu a sensitivitou testu je inverzní vztah. Při koncentraci dextransulfátu 3,3 % se nevyskytuje žádná agregace konjugátu a test ukazuje největší senzitivitu detekce anti-Mtb.
Příklad 6
Test syfilis za použití Merquat-100 a dextransulfátu
Imunochromatografické proužky byly připraveny pro detekci protilátky proti treponema pallidum (anti-TP) ve vzorcích plné krve, nebo ve vzorcích plazmy. Srovnáním senzitivity detekce v plné krvi nebo v plazmě lze určit, zda by byly červené krvinky v plné krvi efektivně agregovány polykationtem, aby neinterferovaly se senzitivitou detekce zkoušky, čímž by ji snížily. Merquat®-100 byl použit jako polykationt pro agregaci červených krvinek v podložce vzorku a polyaniont dextransulfát byl použit v konjugátové podložce jako polykationtové neutralizační činidlo pro -zamezení agregace selenového konjugátu.
- 15CZ 294954 B6
Byly sestaveny imunochromatografícké proužky, složené z podložky vzorku, konjugátové podložky a detekčního proužku. Podložka vzorku byla připravena napuštěním 4 mm širokého a
15,5 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken vodným roztokem 0,2 % Merquat®-100, a pak sušením při 55 °C.
Selenový konjugát byl připraven za použití selenového koloidu, jako v příkladu 1, a 7,5 pg/ml treponema pallidum lyzátu (TP). Tento selenovým koloidem označený TP konjugát byl pak zředěn na optickou hustotu 2,8 při vlnové délce 550 nm v Tris pufru obsahujícím 3,3 % dextransulfátu.
Konjugátová podložka byla připravena napuštěním 4 mm širokého a 4,3 mm dlouhého filtru ze skleněných vláken selenovým koloidem TP konjugátem připraveným jak je uvedeno výše. Po napuštění byla konjugátová podložka sušena ve vakuu.
Detekční proužek byl 4 mm široký a 40 mm dlouhý nitrocelulózový membránový filtr, připravený jako v příkladu 2 za použití treponema pallidum lyzátu v koncentraci 44 (pg/ml a přidaný do nitrocelulózové membrány tak, aby vytvořil linii napříč proužkem v místě asi 1 cm od konce membrány. Označená oblast byla překryta polyesterovým laminátem. To bylo umožněno pro odpovídající sušení, aby byl upevněn TP lyzát k nitrocelulóze.
Imunochromatografícké proužky byly sestaveny za použití výše uvedených komponent jejich umístěním konci k sobě podélně s I mm přesahem, s podložkou vzorku na jednom konci, vedle kterého byla umístěna konjugátová podložka, a nakonec detekční proužek. Sestavený proužek byl pak překryt polyesterovým laminátem, přičemž bylo ponecháno přibližně 10 mm podložky vzorku nepokrytých.
Anti-TP pozitivní lidské sérum bylo zředěno 1 : 10,8 negativní lidskou plnou krvi s hodnotou hematokritu 50 % nebo negativní lidskou plazmou. Na plné krvi byla provedena čtyři další 1 : 2 série ředění, opět za použití buď plné krve, nebo plazmy jako ředidla. 60 μΐ negativní plné krve nebo plazmy, nebo vzorků ze sérií ředění anti-TP pozitivní plné krve nebo plazmy bylo přidáno do podložky vzorku imunochromatografíckých proužků. Výsledky byly odečteny 15 minut po aplikaci vzorku (tabulka 7). Pozitivní výsledek ukázal červenou barvu na detekčním proužku, kde byl na TP lyzát na vyznačené oblasti proužku navázán červený selenový TP komplex konjugátanti-TP. Negativní výsledek neukázal žádnou barvu v této oblasti na detekčním proužku.
Údaje v tabulce 7 ukazují, že senzitivita detekce anti-TP vzorků je stejná jak pro plnou krev tak pro plazmu, což signalizuje, že polykationt Merquat®-100 je účinný pro agregaci červených krvinek v plné krvi.
Tabulka 7
| Ředění vzorku anti-TP | Plná krev | Plazma |
| 1 : 10,8 | + | + |
| 1 : 21,6 | + | + |
| 1 :43,2 | + | + |
| 1 : 86,4 | + | + |
| 1 : 172,8 | - | - |
| Negativní kontrola | - | - |
Všechny zde citované spisy, patenty a patentové přihlášky, jsou zde začleněny v takovém rozsahu, jako by byl každý jednotlivý dokument začleněn, individuálním a specifickým odkazem a byl zde v úplnosti vyložen.
-16CZ 294954 B6
Zatímco tento vynález byl popsán s důrazem na výhodná provedení, odborníkům v oboru bude zřejmé, že výhodná provedení mohou být obměňována. Rozumí se, že vynález může být využíván i jinak, než jak je zde specificky popsán. Tento vynález zahrnuje také všechny modifikace v rámci smyslu a rozsahu vynálezu, jak je uvedeno v popisu a patentových nárocích.
Claims (17)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Chromatografické zkušební zařízení pro detekci přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku vyznačující se t í m , že zahrnuje:chromatografícký nosič, který vymezuje dráhu toku tekutiny a podporuje kapilární tok, aplikační místo pro uvedený krevní vzorek v toku tekutiny umožňujícím styk s uvedeným chromatografickým nosičem, detekční místo na chromatografickém nosiči umístěné mimo uvedené aplikační místo mající na sebe nedifúzně navázánu zachycující látku, difúzně navázanou označenou látku umístěnou po směru toku vzhledem k aplikačnímu místu, difúzně navázaný polykationt pro oddělování plazmy nebo séra z uvedeného krevního vzorku proti směru toku vzhledem k uvedenému detekčnímu místu a difúzně navázaný polyaniont pro neutralizování polykationtu po směru toku vzhledem k uvedenému navázanému polykationtu a proti směru toku vzhledem k uvedenému detekčnímu místu.
- 2. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedené zařízení je zařízení pro imunologické testy.
- 3. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polykationt je navázán na uvedené místo pro aplikaci uvedeného krevního vzorku.
- 4. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polykationt je vybrán ze skupiny sestávající z poly-l-lysin hydrobromidu, poly-1arginin hydrochloridu, poly-l-histidinu, poly(lysin, alanin) 3 : 1 hydrobromidu, poly(lysin, alanin) 2 : 1 hydrobromidu, poly(lysin, alanin) 1 : 1 hydrobromidu, poly(lysin, tryptofan) 1 : 4 hydrobromidu a póly(dialyl-dimetylamoniumchloridu).
- 5. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polykationt je póly(dialyldimetylamoniumchlorid).
- 6. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polyaniont je vybrán ze skupiny sestávající z dextransulfátu, poly(akrylové kyseliny), poly(sodno-4-styren sulfonátu), poly(vinylsulfonové kyseliny), poly(metylmetakrylové kyseliny), poly-l-aspartové kyseliny a karboxymetylcelulózy.
- 7. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polyaniont je dextransulfát.
- 8. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený polyaniont je difúzně navázán na chromatografícký nosič na stejném místě jako uvedená označená látka.- 17CZ 294954 B6
- 9. Chromatografické zkušební zařízení podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená označená látka je látka označená selenem.
- 10. Způsob detekce přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku, vyznačující se tím, že zahrnuje tyto kroky:poskytnutí chromatografíckého nosiče, který vymezuje dráhu toku tekutiny a podporuje kapilární tok, podél kterého jsou (a) aplikační místo pro uvedený krevní vzorek v toku tekutiny umožňujícím styk s uvedeným chromatografíckým nosičem, (b) detekční místo na uvedeném chromatografickém nosiči umístěné mimo aplikační místo mající na sebe nedifúzně navázánu zachycující látku, c) označenou látku umístěnou po směru toku vzhledem k aplikačnímu místu, (d) difúzně navázaný polykationt pro oddělování plazmy nebo séra z uvedeného krevního vzorku proti směru toku vzhledem k uvedenému detekčnímu místu a (e) difúzně navázaný polyaniont pro neutralizování polykationtu po směru toku vzhledem k uvedenému navázanému polykationtu a proti směru toku vzhledem k uvedenému detekčnímu místu;uvádějící ve styk aplikační místo s uvedeným krevním vzorkem; a detekující přítomnost analyzované složky v uvedeném krevním vzorku.
- 11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že uvedená označená látka je látka označená selenem.
- 12. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že uvedený polyaniont je difúzně navázán na chromatografícký nosič ve stejném místě jako uvedená označená látka.
- 13. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že uvedený polykationt je vybrán ze skupiny sestávající z póly-1-lysin hydrobromidu, poly-l-arginin hydrochloridu, poly-1histidinu, poly(lysin, alanin) 3 : 1 hydrobromidu, poly(lysin, alanin) 2 : 1 hydrobromidu, poly(lysin, alanin) 1 : 1 hydrobromidu, poly(lysin, tryptofan) 1 :4 hydrobromidu a poly(dialyldimetylamoniumchloridu).
- 14. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že uvedený polyaniont je vybrán ze skupiny sestávající z dextransulfátu, poly(akrylové kyseliny), poly(sodno-4-styren sulfonátu), poly(vinylsulfonové kyseliny), poly(metylmetakrylové kyseliny), poly-l-aspartové kyseliny a karboxymetylcelulózy.
- 15. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že analyzovanou složkou je virus selhání lidské imunity HIV typu 1 nebo virus selhání lidské imunity HIV typu 2.
- 16. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že analyzovanou složkou je povrchová protilátka hepatitidy B.
- 17. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že analyzovanou složkou je mikroorganismus Treponema pallidum.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/007,651 US6673629B2 (en) | 1998-01-15 | 1998-01-15 | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20002606A3 CZ20002606A3 (cs) | 2001-02-14 |
| CZ294954B6 true CZ294954B6 (cs) | 2005-04-13 |
Family
ID=21727406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20002606A CZ294954B6 (cs) | 1998-01-15 | 1998-12-29 | Chromatografické zkušební zařízení pro detekci přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6673629B2 (cs) |
| EP (2) | EP1371984B1 (cs) |
| JP (1) | JP4270751B2 (cs) |
| KR (1) | KR100575390B1 (cs) |
| CN (2) | CN1213303C (cs) |
| AR (1) | AR014312A1 (cs) |
| AT (2) | ATE244890T1 (cs) |
| AU (1) | AU748387B2 (cs) |
| BR (1) | BR9814007A (cs) |
| CA (1) | CA2318459C (cs) |
| CO (1) | CO5090841A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ294954B6 (cs) |
| DE (2) | DE69816339T2 (cs) |
| DK (2) | DK1371984T3 (cs) |
| ES (2) | ES2202931T3 (cs) |
| HK (1) | HK1035027A1 (cs) |
| HU (1) | HU225975B1 (cs) |
| ID (1) | ID26635A (cs) |
| IL (1) | IL136236A (cs) |
| LT (1) | LT2000071A (cs) |
| MY (1) | MY129171A (cs) |
| NO (1) | NO327714B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ504710A (cs) |
| PL (1) | PL196464B1 (cs) |
| PT (2) | PT1047943E (cs) |
| TR (1) | TR200002051T2 (cs) |
| TW (1) | TW594012B (cs) |
| UY (1) | UY25351A1 (cs) |
| WO (1) | WO1999036781A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA9811953B (cs) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60142394D1 (de) * | 2000-06-28 | 2010-07-29 | Panasonic Corp | Biozensor |
| JPWO2002037099A1 (ja) * | 2000-10-27 | 2004-03-11 | 国際試薬株式会社 | 腎障害の診断方法 |
| JP2002303629A (ja) * | 2001-04-06 | 2002-10-18 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫クロマトデバイス及びそれを用いた被検物質測定方法 |
| US6841159B2 (en) | 2002-01-30 | 2005-01-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Rapid lateral flow assay for determining exposure to Mycobacterium tuberculosis and other mycobacteria |
| JPWO2004012750A1 (ja) * | 2002-08-02 | 2006-11-30 | 東レ株式会社 | 血小板多血漿の調製方法 |
| WO2004065010A2 (en) * | 2003-01-21 | 2004-08-05 | Micronics Inc. | Method and system for microfluidic manipulation, amplification and analysis of fluids, for example, bacteria assays and antiglobulin testing |
| WO2005044234A2 (en) * | 2003-11-05 | 2005-05-19 | Elan Pharma International Ltd. | Nanoparticulate compositions having a peptide as a surface stabilizer |
| SE0400662D0 (sv) * | 2004-03-24 | 2004-03-24 | Aamic Ab | Assay device and method |
| SE527036C2 (sv) * | 2004-06-02 | 2005-12-13 | Aamic Ab | Analysanordning med reglerat flöde och motsvarande förfarande |
| GB0417601D0 (en) * | 2004-08-06 | 2004-09-08 | Inverness Medical Switzerland | Assay device & method |
| KR20130019031A (ko) * | 2004-09-23 | 2013-02-25 | 트리패스 이미징, 인코포레이티드 | 생물학적 시료의 고정을 위한 다가양이온성 중합체 코팅 |
| US7816122B2 (en) * | 2005-10-18 | 2010-10-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Lateral flow device with onboard reagents |
| DE102005056592A1 (de) * | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Basf Ag | Herstellung und Verwendung von hochfunktionellen, hoch-oder hyperverzweigten Polylysinen |
| US7618810B2 (en) * | 2005-12-14 | 2009-11-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Metering strip and method for lateral flow assay devices |
| US20080023395A1 (en) * | 2006-07-31 | 2008-01-31 | Sigma Aldrich Co. | Compositions and Methods for Isolation of Biological Molecules |
| EP2059258B1 (en) * | 2006-09-08 | 2019-11-13 | Wyeth LLC | Arginine wash in protein purification using affinity chromatography |
| GB0623866D0 (en) * | 2006-11-29 | 2007-01-10 | Wilson Stuart M | Capture of mycobacteria like micro-organisms |
| AU2007327687B2 (en) * | 2006-11-29 | 2012-12-20 | Microsens Medtech Ltd | Capture of mycobacteria like micro-organisms |
| WO2008124021A1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-10-16 | Clavina Diagnostics, Inc. | Method of detecting red cell antigen-antibody reactions |
| CN101750244B (zh) * | 2008-10-13 | 2014-03-12 | 艾博生物医药(杭州)有限公司 | 一种分离血液样本中红细胞的方法以及运用 |
| EP2269737B1 (en) | 2009-07-02 | 2017-09-13 | Amic AB | Assay device comprising serial reaction zones |
| KR100946566B1 (ko) * | 2009-11-18 | 2010-03-11 | 주식회사 인포피아 | 측방 유동 면역 분석 디바이스 |
| US20120302456A1 (en) * | 2010-11-23 | 2012-11-29 | President And Fellows Of Harvard College | Vertical flow-through devices for multiplexed elisa driven by wicking |
| WO2013147308A1 (ja) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップおよびイムノクロマトグラフィーを利用した検出方法 |
| US9885707B2 (en) | 2012-03-30 | 2018-02-06 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Immunochromatographic test strip and detection method using immunochromatography for detecting object in red blood cell-containing sample |
| JP6399632B2 (ja) * | 2013-10-02 | 2018-10-03 | 積水メディカル株式会社 | 赤血球含有サンプル中の対象物を検出するためのイムノクロマトグラフィー用テストストリップ、および該テストストリップを使用するイムノクロマトグラフィー |
| EP3057600B1 (en) | 2013-10-18 | 2019-03-13 | Fortus Medical, Inc. | Method of preparing a bone marrow aspirate enhanced bone graft |
| CN110780066A (zh) * | 2014-12-16 | 2020-02-11 | 积水医疗株式会社 | 用于检测含红细胞的样品中的对象物的免疫色谱用测试条、及使用该测试条的免疫色谱 |
| US10610242B2 (en) | 2015-05-08 | 2020-04-07 | Fortus Medical, Inc. | Bone fragment and tissue harvesting system |
| JP6675834B2 (ja) * | 2015-05-21 | 2020-04-08 | デンカ生研株式会社 | イムノクロマト試験片及びそれを用いたイムノクロマト法 |
| US20190025298A1 (en) * | 2016-01-15 | 2019-01-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for detecting an analyte |
| JP6738608B2 (ja) * | 2016-01-22 | 2020-08-12 | 田中貴金属工業株式会社 | クロマトグラフ媒体 |
| US10456502B2 (en) | 2016-09-07 | 2019-10-29 | Fortus Medical, Inc. | Bone void filler preparation system |
| CA3177475A1 (en) * | 2017-01-11 | 2018-07-19 | Cypher Medical, Llc | Method of estimating blood volume |
| EP3634245A4 (en) | 2017-06-07 | 2021-03-17 | Fortus Medical, Inc. | CONJUNCTIVE TISSUE PROGENITOR CELL SUCTION AND TREATMENT SYSTEM |
| US11278336B2 (en) | 2018-03-22 | 2022-03-22 | Fortus Medical, Inc. | Osteomedullary tissue processing system |
| CN110308276A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-10-08 | 郑州轻工业学院 | 一种增加黄曲霉毒素b1胶体金检测试纸条分析灵敏度的样品垫处理液 |
| SG11202112000YA (en) * | 2019-06-20 | 2021-11-29 | UCB Biopharma SRL | Hplc-based detection of flocculation agents in a protein sample |
| CN110823670B (zh) * | 2019-11-27 | 2023-03-24 | 香港大德昌龙生物科技有限公司 | 用于分离血细胞的组合物、血细胞分离方法、检测试剂盒和检测装置 |
| EP4399521A1 (en) * | 2021-09-10 | 2024-07-17 | Quidel Corporation | Agglutinating agents, devices and methods for whole blood assays |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4308232A (en) * | 1979-07-09 | 1981-12-29 | Sherwood Medical Industries Inc. | Anticoagulant stopper coating |
| DE3029579C2 (de) * | 1980-08-05 | 1985-12-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut |
| US5073484A (en) | 1982-03-09 | 1991-12-17 | Bio-Metric Systems, Inc. | Quantitative analysis apparatus and method |
| US4594327A (en) | 1983-11-02 | 1986-06-10 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Assay method for whole blood samples |
| US4678757A (en) * | 1985-04-11 | 1987-07-07 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Device and method for whole blood separation and analysis |
| US4806311A (en) * | 1985-08-28 | 1989-02-21 | Miles Inc. | Multizone analytical element having labeled reagent concentration zone |
| US4935147A (en) * | 1985-12-20 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
| US4753776A (en) | 1986-10-29 | 1988-06-28 | Biotrack, Inc. | Blood separation device comprising a filter and a capillary flow pathway exiting the filter |
| US5120643A (en) | 1987-07-13 | 1992-06-09 | Abbott Laboratories | Process for immunochromatography with colloidal particles |
| JPH02140147A (ja) | 1988-01-19 | 1990-05-29 | Syntex Usa Inc | 赤血球から血漿を分離する方法および装置 |
| US5459080A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Ion-capture assays using a specific binding member conjugated to carboxymethylamylose |
| US5670381A (en) | 1988-01-29 | 1997-09-23 | Abbott Laboratories | Devices for performing ion-capture binding assays |
| US5459078A (en) * | 1988-01-29 | 1995-10-17 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for performing ion-capture digoxin assays |
| DE3903114A1 (de) * | 1989-02-02 | 1990-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung eines enzyms aus einem isoenzymgemisch sowie hierfuer geeigneter testtraeger und dessen verwendung |
| US4933092A (en) | 1989-04-07 | 1990-06-12 | Abbott Laboratories | Methods and devices for the separation of plasma or serum from whole blood |
| US5306623A (en) * | 1989-08-28 | 1994-04-26 | Lifescan, Inc. | Visual blood glucose concentration test strip |
| US5435970A (en) * | 1989-12-18 | 1995-07-25 | Environmental Diagnostics, Inc. | Device for analysis for constituents in biological fluids |
| US5212060A (en) | 1990-04-27 | 1993-05-18 | Genesis Labs, Inc. | Dry test strip comprising a dextran barrier for excluding erythrocytes |
| US5186843A (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-16 | Ahlstrom Filtration, Inc. | Blood separation media and method for separating plasma from whole blood |
| DE69327891T2 (de) * | 1992-07-06 | 2000-07-20 | Terumo K.K., Tokio/Tokyo | Material zur Entfernung von pathogener Substanz und mit diesem Material hergestellter Blutfilter |
| AU706456B2 (en) | 1995-03-27 | 1999-06-17 | Lifescan, Inc. | Chemical timer for a direct-reading reagent test strip |
| US5725774A (en) | 1995-04-07 | 1998-03-10 | Lxn Corp. | Whole blood separation method and devices using the same |
| US5753497A (en) * | 1995-12-22 | 1998-05-19 | Universal Health Watch Inc | Diagnostic assay providing blood separation |
-
1998
- 1998-01-15 US US09/007,651 patent/US6673629B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 HU HU0100557A patent/HU225975B1/hu unknown
- 1998-12-29 AU AU22092/99A patent/AU748387B2/en not_active Expired
- 1998-12-29 DK DK03009811T patent/DK1371984T3/da active
- 1998-12-29 IL IL13623698A patent/IL136236A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 AT AT98966118T patent/ATE244890T1/de active
- 1998-12-29 KR KR1020007007787A patent/KR100575390B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 DK DK98966118T patent/DK1047943T3/da active
- 1998-12-29 TR TR2000/02051T patent/TR200002051T2/xx unknown
- 1998-12-29 NZ NZ504710A patent/NZ504710A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-12-29 JP JP2000540442A patent/JP4270751B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 BR BR9814007-8A patent/BR9814007A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-12-29 ID IDW20001354A patent/ID26635A/id unknown
- 1998-12-29 ES ES98966118T patent/ES2202931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 AT AT03009811T patent/ATE298425T1/de active
- 1998-12-29 MY MYPI98005927A patent/MY129171A/en unknown
- 1998-12-29 ES ES03009811T patent/ES2244861T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 EP EP03009811A patent/EP1371984B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 WO PCT/US1998/027802 patent/WO1999036781A1/en active IP Right Grant
- 1998-12-29 CN CNB031579124A patent/CN1213303C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69816339T patent/DE69816339T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CA CA2318459A patent/CA2318459C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 EP EP98966118A patent/EP1047943B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 PT PT98966118T patent/PT1047943E/pt unknown
- 1998-12-29 PL PL342658A patent/PL196464B1/pl unknown
- 1998-12-29 PT PT03009811T patent/PT1371984E/pt unknown
- 1998-12-29 CN CN98813110A patent/CN1125343C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 DE DE69830675T patent/DE69830675T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-12-29 CZ CZ20002606A patent/CZ294954B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-12-30 ZA ZA9811953A patent/ZA9811953B/xx unknown
-
1999
- 1999-01-13 CO CO99001481A patent/CO5090841A1/es unknown
- 1999-01-14 UY UY25351A patent/UY25351A1/es not_active IP Right Cessation
- 1999-01-15 AR ARP990100131A patent/AR014312A1/es active IP Right Grant
- 1999-04-03 TW TW088100600A patent/TW594012B/zh not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-07-11 NO NO20003569A patent/NO327714B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 LT LT2000071A patent/LT2000071A/lt unknown
-
2001
- 2001-08-09 HK HK01105549A patent/HK1035027A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ294954B6 (cs) | Chromatografické zkušební zařízení pro detekci přítomnosti analyzované složky v krevním vzorku | |
| JP7330945B2 (ja) | 分析物検出の改善のためのアッセイ法 | |
| JP2609438B2 (ja) | 検定方法 | |
| Grauballe et al. | Optimized enzyme‐linked immunosorbent assay for detection of human and bovine rotavirus in stools: Comparison with electron‐microscopy, immunoelectro‐osmophoresis, and fluorescent antibody techniques | |
| WO2011062405A2 (ko) | 측방 유동 면역 분석 디바이스 | |
| EP0106370A2 (en) | Specific binding assays utilizing analyte-cytolysin conjugates | |
| JP5775197B1 (ja) | 免疫クロマト分析キット及び免疫クロマト分析方法 | |
| US4495296A (en) | Labeled anti-hapten antibodies and their use as a universal reagent for solid phase radio- and/or enzyme-immunoassays | |
| US20070092978A1 (en) | Target ligand detection | |
| EP3339862A1 (en) | Immunological detection method and test strip used therefor | |
| AU592971B2 (en) | Solid phase diffusion assay | |
| JP2017009571A (ja) | マイコプラズマ・ニューモニエ検出用免疫クロマト分析装置 | |
| US6686167B2 (en) | Test device for detecting semen and method of use | |
| CA2266747A1 (en) | Diagnostic test devices with improved fluid movement and resistance to interferences | |
| EP4191244A1 (en) | Test reagent with ameliorated signal reduction | |
| JP2002214236A (ja) | 血中抗原検出方法及び装置 | |
| MXPA00006963A (en) | Neutralization of polycations in a chromatographic device for whole blood use | |
| WO1992022816A1 (en) | Solid phase immunoassay | |
| JPH0382962A (ja) | Ｂ型肝炎ウィルスＣｏｒｅ抗原に対する抗体の検出方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20181229 |