JPH11352127A - 非特異的吸着防止剤 - Google Patents
非特異的吸着防止剤Info
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- JPH11352127A JPH11352127A JP17405198A JP17405198A JPH11352127A JP H11352127 A JPH11352127 A JP H11352127A JP 17405198 A JP17405198 A JP 17405198A JP 17405198 A JP17405198 A JP 17405198A JP H11352127 A JPH11352127 A JP H11352127A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
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Abstract
(57)【要約】
【課題】免疫反応に影響を与えずに、測定に使用する、
遊離の抗原、抗体またはその標識体の、抗体或は抗原結
合固相や反応容器への非特異的吸着を防止し、高精度で
高感度な分析法を可能にする非特異的吸着防止剤の提
供。 【解決手段】分子中にスペーサーとして疎水性の二官能
性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化合
物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及び
ポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエーテ
ルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物からな
る、抗体又は抗原の非特異的吸着防止剤。
遊離の抗原、抗体またはその標識体の、抗体或は抗原結
合固相や反応容器への非特異的吸着を防止し、高精度で
高感度な分析法を可能にする非特異的吸着防止剤の提
供。 【解決手段】分子中にスペーサーとして疎水性の二官能
性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化合
物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及び
ポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエーテ
ルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物からな
る、抗体又は抗原の非特異的吸着防止剤。
Description
【発明の属する技術分野】本発明は、臨床検査、診断薬
分野に於て用いられる免疫反応を利用した測定法に使用
される、遊離の抗原、抗体又はこれらに標識物を結合さ
せたもの（以下、単に標識体という場合がある）の、抗
体或は抗原結合固相（以下、単に「結合固相」と略称す
る）や免疫反応容器への非特異的吸着防止剤、及びこれ
を用いた非特異的吸着防止方法に関する。
分野に於て用いられる免疫反応を利用した測定法に使用
される、遊離の抗原、抗体又はこれらに標識物を結合さ
せたもの（以下、単に標識体という場合がある）の、抗
体或は抗原結合固相（以下、単に「結合固相」と略称す
る）や免疫反応容器への非特異的吸着防止剤、及びこれ
を用いた非特異的吸着防止方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、臨床検査、診断薬分野において、
免疫反応を利用した測定法が広く行われてきており、微
量の生体成分の分析に広く用いられている。本測定法に
おいて、検出感度を左右する要因の一つとして、測定に
使用される、遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体の、
結合固相や免疫反応容器への非特異的吸着が挙げられ
る。これらの吸着は検出感度や再現性の低下の原因とな
っている。
免疫反応を利用した測定法が広く行われてきており、微
量の生体成分の分析に広く用いられている。本測定法に
おいて、検出感度を左右する要因の一つとして、測定に
使用される、遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体の、
結合固相や免疫反応容器への非特異的吸着が挙げられ
る。これらの吸着は検出感度や再現性の低下の原因とな
っている。
【０００３】従来、これらの結合固相や免疫反応容器へ
の吸着を防止するための方法として、結合固相や免疫反
応容器を、アルブミン等の免疫反応に無関係なタンパク
質でブロッキングする方法、ポリビニルアルコールを用
いてブロッキングする方法（特開平4-19561号公報）、
或は2-メタクリロイルオキシエチルスルホリルコリン重
合体を用いてブロッキングする方法（特開平7-83923号
公報）等が知られている。
の吸着を防止するための方法として、結合固相や免疫反
応容器を、アルブミン等の免疫反応に無関係なタンパク
質でブロッキングする方法、ポリビニルアルコールを用
いてブロッキングする方法（特開平4-19561号公報）、
或は2-メタクリロイルオキシエチルスルホリルコリン重
合体を用いてブロッキングする方法（特開平7-83923号
公報）等が知られている。
【０００４】結合固相への非特異的吸着は上記した如き
ブロッキング剤の測定系内への添加である程度回避する
ことも可能ではあるが、まだ充分とはいえず、反応容器
への非特異的吸着は、予め反応容器を上記のようにブロ
ッキング剤で処理しなければならず、操作が煩雑であ
る。
ブロッキング剤の測定系内への添加である程度回避する
ことも可能ではあるが、まだ充分とはいえず、反応容器
への非特異的吸着は、予め反応容器を上記のようにブロ
ッキング剤で処理しなければならず、操作が煩雑であ
る。
【０００５】一方、特開平6-66798号公報や特開平9-800
48号公報に記載されているような界面活性剤を使用する
方法は、直接、測定系に添加して使用することが可能で
あるが、この方法では反応容器を未処理で使用した場合
には充分な効果が得られない、また、測定対象のタンパ
ク質がその構造中に脂質を含んでいる場合には界面活性
剤の使用によってその構造を破壊してしまうため使用で
きない、等の問題があった。
48号公報に記載されているような界面活性剤を使用する
方法は、直接、測定系に添加して使用することが可能で
あるが、この方法では反応容器を未処理で使用した場合
には充分な効果が得られない、また、測定対象のタンパ
ク質がその構造中に脂質を含んでいる場合には界面活性
剤の使用によってその構造を破壊してしまうため使用で
きない、等の問題があった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上記した如き状況に鑑
み本発明が解決しようとする課題は、免疫反応に影響を
与えず、測定に使用する遊離の抗原、抗体またはその標
識体の、結合固相や反応容器への非特異的吸着を防止
し、高精度で高感度な分析方法を可能にする非特異的吸
着防止剤を提供することにある。
み本発明が解決しようとする課題は、免疫反応に影響を
与えず、測定に使用する遊離の抗原、抗体またはその標
識体の、結合固相や反応容器への非特異的吸着を防止
し、高精度で高感度な分析方法を可能にする非特異的吸
着防止剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決する目的でなされたものであり、(１)分子中にスペー
サーとして疎水性の二官能性化合物を導入してなるポリ
エチレングリコール化合物、ポリ（ビニルピロリドン／
ビニルアセテート）及びポリエチレングリコールテトラ
ヒドロフルフリルエーテルから選ばれた少なくとも１つ
の水溶性化合物からなる、抗体又は抗原の非特異的吸着
防止剤、
決する目的でなされたものであり、(１)分子中にスペー
サーとして疎水性の二官能性化合物を導入してなるポリ
エチレングリコール化合物、ポリ（ビニルピロリドン／
ビニルアセテート）及びポリエチレングリコールテトラ
ヒドロフルフリルエーテルから選ばれた少なくとも１つ
の水溶性化合物からなる、抗体又は抗原の非特異的吸着
防止剤、
【０００８】(２)分子中にスペーサーとして疎水性の二
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物を抗体
又は抗原を含有する溶液中に共存させることを特徴とす
る、抗原又は抗体の非特異的吸着防止方法、
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物を抗体
又は抗原を含有する溶液中に共存させることを特徴とす
る、抗原又は抗体の非特異的吸着防止方法、
【０００９】(３)分子中にスペーサーとして疎水性の二
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含有する溶液を用いることを特徴とす
る、免疫学的測定方法、
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含有する溶液を用いることを特徴とす
る、免疫学的測定方法、
【００１０】(４)分子中にスペーサーとして疎水性の二
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含んでなる抗体又は抗原組成物、及び
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含んでなる抗体又は抗原組成物、及び
【００１１】(５)分子中にスペーサーとして疎水性の二
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含んでなる免疫学的測定用試薬、に関す
る。
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含んでなる免疫学的測定用試薬、に関す
る。
【００１２】即ち、本発明者らは、遊離の抗原、抗体又
はこれらの標識体の、結合固相や反応容器への非特異的
吸着を防止し、且つ目的の免疫反応に影響を与えず、高
精度で高感度な分析方法を可能にする非特異的吸着防止
剤を求めて鋭意研究を重ねた結果、水溶性化合物であ
る、分子中にスペーサーとして疎水性の二官能性化合物
を導入してなるポリエチレングリコール化合物、ポリ
（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及びポリエチ
レングリコールテトラヒドロフルフリルエーテル（以
下、本発明に係る水溶性ポリマーと略称することがあ
る）が、上記目的を達成し得ることを見出し、本発明を
完成するに到った。
はこれらの標識体の、結合固相や反応容器への非特異的
吸着を防止し、且つ目的の免疫反応に影響を与えず、高
精度で高感度な分析方法を可能にする非特異的吸着防止
剤を求めて鋭意研究を重ねた結果、水溶性化合物であ
る、分子中にスペーサーとして疎水性の二官能性化合物
を導入してなるポリエチレングリコール化合物、ポリ
（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及びポリエチ
レングリコールテトラヒドロフルフリルエーテル（以
下、本発明に係る水溶性ポリマーと略称することがあ
る）が、上記目的を達成し得ることを見出し、本発明を
完成するに到った。
【００１３】本発明に係る分子中にスペーサーとして疎
水性の二官能性化合物を導入してなるポリエチレングリ
コール化合物としては、例えば重量平均分子量１０００
０〜１０００００、好ましくは１５０００〜５０００
０、疎水性の二官能性化合物ユニットとポリエチレング
リコールユニットの重量比率が２０：１〜１：１、好ま
しくは１５：１〜３：２のものが挙げられ、スペーサー
はポリエチレングリコール鎖の途中の任意の位置に存在
すればよい。スペーサーとして用いられる疎水性の二官
能性化合物としては、例えば下記の一般式［１］で示さ
れる化合物が好ましく挙げられる。
水性の二官能性化合物を導入してなるポリエチレングリ
コール化合物としては、例えば重量平均分子量１０００
０〜１０００００、好ましくは１５０００〜５０００
０、疎水性の二官能性化合物ユニットとポリエチレング
リコールユニットの重量比率が２０：１〜１：１、好ま
しくは１５：１〜３：２のものが挙げられ、スペーサー
はポリエチレングリコール鎖の途中の任意の位置に存在
すればよい。スペーサーとして用いられる疎水性の二官
能性化合物としては、例えば下記の一般式［１］で示さ
れる化合物が好ましく挙げられる。
【００１４】
【化１】 （式中、Ｒは結合手又は低級アルキレン基を表わす。）
【００１５】一般式［１］に於いて、Ｒで示される低級
アルキレン基としては、炭素数１〜６、好ましくは１〜
４のものが挙げられ、直鎖状でも分枝状でも良く、具体
的にはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレ
ン基、２−メチルプロピレン基、ペンチレン基、２，２
−ジメチルプロピレン基、２−エチルプロピレン基、ヘ
キシレン基等が挙げられる。また、その具体例として、
例えばビスフェノールＡグリシジルエーテルが挙げられ
る。
アルキレン基としては、炭素数１〜６、好ましくは１〜
４のものが挙げられ、直鎖状でも分枝状でも良く、具体
的にはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレ
ン基、２−メチルプロピレン基、ペンチレン基、２，２
−ジメチルプロピレン基、２−エチルプロピレン基、ヘ
キシレン基等が挙げられる。また、その具体例として、
例えばビスフェノールＡグリシジルエーテルが挙げられ
る。
【００１６】ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテー
ト）としては、例えば重量平均分子量１００００〜１０
０００００、好ましくは２００００〜１０００００、ビ
ニルピロリドンユニットとビニルアセテートユニットと
の結合比率が８０：２０〜５０：５０、好ましくは７
０：３０〜５５：４５のものが挙げられる。
ト）としては、例えば重量平均分子量１００００〜１０
０００００、好ましくは２００００〜１０００００、ビ
ニルピロリドンユニットとビニルアセテートユニットと
の結合比率が８０：２０〜５０：５０、好ましくは７
０：３０〜５５：４５のものが挙げられる。
【００１７】また、ポリエチレングリコールテトラヒド
ロフルフリルエーテルとしては、ポリエチレングリコー
ルの末端にテトラヒドロフルフリル基がエーテル結合し
た構造を有する化合物であり、例えば分子量２００から
２０００、好ましくは２００から５００のものが挙げら
れる。
ロフルフリルエーテルとしては、ポリエチレングリコー
ルの末端にテトラヒドロフルフリル基がエーテル結合し
た構造を有する化合物であり、例えば分子量２００から
２０００、好ましくは２００から５００のものが挙げら
れる。
【００１８】尚、これら本発明に係る水溶性ポリマー
は、市販のものを用いても良いし、常法に従って合成し
たものを用いても良い。
は、市販のものを用いても良いし、常法に従って合成し
たものを用いても良い。
【００１９】本発明に係る水溶性ポリマーは、夫々単独
で用いても、或はこれらを２種以上適宜組合せて用いて
もよい。これらの非特異的吸着剤としての使用濃度は、
結合固相や反応容器への非特異的吸着を防止し得、且つ
目的の抗原抗体反応を阻害しない濃度であればよい。分
子中にスペーサーとして疎水性の二官能性化合物を導入
してなるポリエチレングリコール化合物を単独で用いる
場合は、反応系内に通常０．０１〜１０w/v％、好まし
くは０．１〜１w/v％となるように添加され、ポリ（ビ
ニルピロリドン／ビニルアセテート）を単独で用いる場
合は、反応系内に通常０．０１〜１０w/v％、好ましく
は０．１〜１w/v％となるように添加され、ポリエチレ
ングリコールテトラヒドロフルフリルエーテルを単独で
用いる場合は、反応系内に通常０．０１〜１０w/v％、
好ましくは０．１〜１w/v％となるように添加される。
また、これらを２種以上組み合わせて用いる場合は、そ
の合計が通常０．０１〜１０w/v％、好ましくは０．１
〜１w/v％となるように添加される。
で用いても、或はこれらを２種以上適宜組合せて用いて
もよい。これらの非特異的吸着剤としての使用濃度は、
結合固相や反応容器への非特異的吸着を防止し得、且つ
目的の抗原抗体反応を阻害しない濃度であればよい。分
子中にスペーサーとして疎水性の二官能性化合物を導入
してなるポリエチレングリコール化合物を単独で用いる
場合は、反応系内に通常０．０１〜１０w/v％、好まし
くは０．１〜１w/v％となるように添加され、ポリ（ビ
ニルピロリドン／ビニルアセテート）を単独で用いる場
合は、反応系内に通常０．０１〜１０w/v％、好ましく
は０．１〜１w/v％となるように添加され、ポリエチレ
ングリコールテトラヒドロフルフリルエーテルを単独で
用いる場合は、反応系内に通常０．０１〜１０w/v％、
好ましくは０．１〜１w/v％となるように添加される。
また、これらを２種以上組み合わせて用いる場合は、そ
の合計が通常０．０１〜１０w/v％、好ましくは０．１
〜１w/v％となるように添加される。
【００２０】本発明の非特異的吸着防止剤により、結合
固相や反応容器への非特異的吸着を防止し得る抗原とし
ては、例えば血清，血液，血漿，髄液等の生体体液、
尿、リンパ球、血球、各種細胞類等の生体由来の試料中
に含まれる蛋白質、ペプチド、核酸、糖鎖、ホルモン、
薬物等が代表的なものとして挙げられる。更に、具体的
には例えばα-フェトプロテイン(AFP)，CA19-9，前立腺
特異抗原(PSA)、癌胎児性抗原(CEA)，癌細胞の産生する
特殊な糖鎖を有する物質等の癌マーカー、例えば免疫グ
ロブリンＡ(IgA)，免疫グロブリンＥ(IgE)，免疫グロブ
リンＧ(IgG)，免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ），β2-ミク
ログロブリン，アルブミン，フェリチン等の血清蛋白
質、例えばＣ-ペプチド，アンジオテンシン Ｉ等のペプ
チド、例えばアミラーゼ，アルカリホスファターゼ，γ
-グルタミルトランスフェラーゼ(γ-GTP)等の酵素蛋
白、例えばルベラウイルス，ヘルペスウイルス，肝炎ウ
イルス，ATLウイルス，AIDSウイルス等臨床的に注目さ
れているウイルスに由来する抗原、ウイルス等の病原体
のデオキシリボ核酸(DNA)やリボ核酸(RNA)或はこれら核
酸を構成する１本鎖ポリヌクレオチド、ウイルス等の病
原体に由来する抗原性物質、例えばスギその他の草木の
花粉や室内塵等のアレルゲン、例えばリポ蛋白質等の脂
質、例えばトリプシン，プラスミン，セリンプロテアー
ゼ等のプロテアーゼ、例えばインシュリン，ヒト絨毛性
ゴナドトロピン(hCG)，サイロキシン(T4)，トリヨード
サイロニン(T3)，プロラクチン，甲状腺刺激ホルモン(T
SH)等のホルモン、例えばジゴキシン， フェニトイン，
モルヒネ，ニコチン等の薬物等が挙げられる。
固相や反応容器への非特異的吸着を防止し得る抗原とし
ては、例えば血清，血液，血漿，髄液等の生体体液、
尿、リンパ球、血球、各種細胞類等の生体由来の試料中
に含まれる蛋白質、ペプチド、核酸、糖鎖、ホルモン、
薬物等が代表的なものとして挙げられる。更に、具体的
には例えばα-フェトプロテイン(AFP)，CA19-9，前立腺
特異抗原(PSA)、癌胎児性抗原(CEA)，癌細胞の産生する
特殊な糖鎖を有する物質等の癌マーカー、例えば免疫グ
ロブリンＡ(IgA)，免疫グロブリンＥ(IgE)，免疫グロブ
リンＧ(IgG)，免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ），β2-ミク
ログロブリン，アルブミン，フェリチン等の血清蛋白
質、例えばＣ-ペプチド，アンジオテンシン Ｉ等のペプ
チド、例えばアミラーゼ，アルカリホスファターゼ，γ
-グルタミルトランスフェラーゼ(γ-GTP)等の酵素蛋
白、例えばルベラウイルス，ヘルペスウイルス，肝炎ウ
イルス，ATLウイルス，AIDSウイルス等臨床的に注目さ
れているウイルスに由来する抗原、ウイルス等の病原体
のデオキシリボ核酸(DNA)やリボ核酸(RNA)或はこれら核
酸を構成する１本鎖ポリヌクレオチド、ウイルス等の病
原体に由来する抗原性物質、例えばスギその他の草木の
花粉や室内塵等のアレルゲン、例えばリポ蛋白質等の脂
質、例えばトリプシン，プラスミン，セリンプロテアー
ゼ等のプロテアーゼ、例えばインシュリン，ヒト絨毛性
ゴナドトロピン(hCG)，サイロキシン(T4)，トリヨード
サイロニン(T3)，プロラクチン，甲状腺刺激ホルモン(T
SH)等のホルモン、例えばジゴキシン， フェニトイン，
モルヒネ，ニコチン等の薬物等が挙げられる。
【００２１】本発明の非特異的吸着防止剤により、結合
固相や反応容器への非特異的吸着を防止し得る抗体とし
ては、上記した如き抗原に対する抗体が挙げられる。
固相や反応容器への非特異的吸着を防止し得る抗体とし
ては、上記した如き抗原に対する抗体が挙げられる。
【００２２】上記抗原又は抗体の標識物質としては、例
えば酵素免疫測定法（EIA）において用いられるアルカ
リホスファターゼ，β-ガラクトシダーゼ，パーオキシ
ダーゼ，マイクロパーオキシダーゼ，グルコースオキシ
ダーゼ，グルコース-6-リン酸脱水素酵素，リンゴ酸脱
水素酵素，ルシフェラーゼ等の酵素類、例えば放射免疫
測定法（RIA）で用いられる99mＴｃ，131Ｉ，125Ｉ，14
Ｃ，3Ｈ等の放射性同位元素、例えば蛍光免疫測定法（F
IA）で用いられるフルオレセイン，ダンシル，フルオレ
スカミン，クマリン，ナフチルアミン或はこれらの誘導
体等の蛍光性物質、例えばルシフェリン，イソルミノー
ル，ルミノール，ビス(2,4,6-トリフロロフェニル）オ
キザレート等の発光性物質、例えばフェノール，ナフト
ール，アントラセン或はこれらの誘導体等の紫外部に吸
収を有する物質、例えば4ーアミノ-2,2,6,6-テトラメチ
ルピペリジン-1-オキシル，3-アミノ-2,2,5,5-テトラメ
チルピロリジン-1-オキシル，2,6-ジ-t-ブチル-α-(3,5
-ジ-t-ブチル-4-オキソ-2,5-シクロヘキサジエン-1-イ
リデン)ーp-トリルオキシル等のオキシル基を有する化合
物に代表されるスピンラベル化剤としての性質を有する
物質等が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。
えば酵素免疫測定法（EIA）において用いられるアルカ
リホスファターゼ，β-ガラクトシダーゼ，パーオキシ
ダーゼ，マイクロパーオキシダーゼ，グルコースオキシ
ダーゼ，グルコース-6-リン酸脱水素酵素，リンゴ酸脱
水素酵素，ルシフェラーゼ等の酵素類、例えば放射免疫
測定法（RIA）で用いられる99mＴｃ，131Ｉ，125Ｉ，14
Ｃ，3Ｈ等の放射性同位元素、例えば蛍光免疫測定法（F
IA）で用いられるフルオレセイン，ダンシル，フルオレ
スカミン，クマリン，ナフチルアミン或はこれらの誘導
体等の蛍光性物質、例えばルシフェリン，イソルミノー
ル，ルミノール，ビス(2,4,6-トリフロロフェニル）オ
キザレート等の発光性物質、例えばフェノール，ナフト
ール，アントラセン或はこれらの誘導体等の紫外部に吸
収を有する物質、例えば4ーアミノ-2,2,6,6-テトラメチ
ルピペリジン-1-オキシル，3-アミノ-2,2,5,5-テトラメ
チルピロリジン-1-オキシル，2,6-ジ-t-ブチル-α-(3,5
-ジ-t-ブチル-4-オキソ-2,5-シクロヘキサジエン-1-イ
リデン)ーp-トリルオキシル等のオキシル基を有する化合
物に代表されるスピンラベル化剤としての性質を有する
物質等が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。
【００２３】本発明に係る水溶性ポリマーを用いて非特
異的吸着を防止するためには、少なくとも免疫反応の際
にその系内に、本発明に係る水溶性ポリマーが上記した
如き濃度存在するようにすればよく、存在させる方法は
特に限定されないが、例えば、免疫反応時に使用される
緩衝液、遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体を含有す
る試液或は検体等に本発明に係る水溶性ポリマーを予め
添加溶解させておいても、また検体と必要な試液とを混
合する際に添加溶解させても良い。尚、非特異的吸着防
止効果を考慮すると、遊離の抗原、抗体又はこれらの標
識体を含有する試液中に本発明に係る水溶性ポリマーを
予め添加しておくことが望ましい。
異的吸着を防止するためには、少なくとも免疫反応の際
にその系内に、本発明に係る水溶性ポリマーが上記した
如き濃度存在するようにすればよく、存在させる方法は
特に限定されないが、例えば、免疫反応時に使用される
緩衝液、遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体を含有す
る試液或は検体等に本発明に係る水溶性ポリマーを予め
添加溶解させておいても、また検体と必要な試液とを混
合する際に添加溶解させても良い。尚、非特異的吸着防
止効果を考慮すると、遊離の抗原、抗体又はこれらの標
識体を含有する試液中に本発明に係る水溶性ポリマーを
予め添加しておくことが望ましい。
【００２４】本発明の組成物は本発明に係る水溶性ポリ
マーを遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体を含有する
試液に溶解して得られる溶液が一般であり、この組成物
は、免疫学的測定方法に供されるまで、凍結処理や凍結
乾燥処理等を施した状態、或は溶液等の状態等、多種の
形態で保存し得る。そして、用時、これらの組成物を測
定系に添加すればよい。
マーを遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体を含有する
試液に溶解して得られる溶液が一般であり、この組成物
は、免疫学的測定方法に供されるまで、凍結処理や凍結
乾燥処理等を施した状態、或は溶液等の状態等、多種の
形態で保存し得る。そして、用時、これらの組成物を測
定系に添加すればよい。
【００２５】本発明の非特異的吸着防止剤により非特異
的吸着を防止し得る結合固相に於ける固相の材質及び形
状としては特に限定されるものではないが、例えばポリ
スチレン，ポリ塩化ビニル，ポリプロピレン，アクリル
樹脂，ポリメチルメタクリレート等の合成高分子、ガラ
ス、金属、セラミック、シリコンラバー等から調製され
た、例えば試験管、タイタープレート、ビーズ、ラテッ
クス、磁性微粒子等や、ニトロセルロース、硝酸セルロ
ース、ガラス繊維、ナイロン、修飾ナイロン、活性基修
飾ナイロン、ポリビニリデンジフルオロライド（ＰＶＤ
Ｆ）、修飾ＰＶＤＦ、紙、レーヨン、綿糸、ポリエステ
ル、ポリプロピレン、ポリウレタン等から調製された膜
状やシート状の吸収性担体（イムノクロマト法等で用い
られる）等が挙げられる。
的吸着を防止し得る結合固相に於ける固相の材質及び形
状としては特に限定されるものではないが、例えばポリ
スチレン，ポリ塩化ビニル，ポリプロピレン，アクリル
樹脂，ポリメチルメタクリレート等の合成高分子、ガラ
ス、金属、セラミック、シリコンラバー等から調製され
た、例えば試験管、タイタープレート、ビーズ、ラテッ
クス、磁性微粒子等や、ニトロセルロース、硝酸セルロ
ース、ガラス繊維、ナイロン、修飾ナイロン、活性基修
飾ナイロン、ポリビニリデンジフルオロライド（ＰＶＤ
Ｆ）、修飾ＰＶＤＦ、紙、レーヨン、綿糸、ポリエステ
ル、ポリプロピレン、ポリウレタン等から調製された膜
状やシート状の吸収性担体（イムノクロマト法等で用い
られる）等が挙げられる。
【００２６】固相に結合させる抗原又は抗体は検体中の
測定すべき物質に応じて適宜選択される。固相に対する
抗体又は抗原の結合は、化学的結合であっても物理的結
合（吸着）であってもよい。
測定すべき物質に応じて適宜選択される。固相に対する
抗体又は抗原の結合は、化学的結合であっても物理的結
合（吸着）であってもよい。
【００２７】本発明の免疫学的測定方法に於ける検体と
しては種々のものが使用でき特に限定されないが、例え
ば、血清、血漿、血液、髄液等の各種体液や尿等の排泄
物、糞便等の希釈物から固形分を除去したもの、各種組
織の抽出液等が挙げられる。
しては種々のものが使用でき特に限定されないが、例え
ば、血清、血漿、血液、髄液等の各種体液や尿等の排泄
物、糞便等の希釈物から固形分を除去したもの、各種組
織の抽出液等が挙げられる。
【００２８】本発明の免疫学的測定方法は、本発明に係
る吸着防止剤を免疫反応系内に存在させる以外は、自体
公知の免疫学的測定方法、例えば、酵素免疫測定方法
（EIA）、放射免疫測定方法（RIA）、蛍光免疫測定方法
（FIA）等の免疫学的測定方法に準じて行えば良い。ま
た、その測定原理としては、サンドイッチ法、競合法、
二抗体法等種々のものが挙げられる。
る吸着防止剤を免疫反応系内に存在させる以外は、自体
公知の免疫学的測定方法、例えば、酵素免疫測定方法
（EIA）、放射免疫測定方法（RIA）、蛍光免疫測定方法
（FIA）等の免疫学的測定方法に準じて行えば良い。ま
た、その測定原理としては、サンドイッチ法、競合法、
二抗体法等種々のものが挙げられる。
【００２９】本発明に於て、免疫反応容器としては種々
のものが使用でき、例えばガラス又はプラスチック製の
チューブ、多数のチューブが一体成形された専用のトレ
イ、マイクロタイタープレート、或いはイムノクロマト
法で用いられる吸収性担体等が挙げられる。
のものが使用でき、例えばガラス又はプラスチック製の
チューブ、多数のチューブが一体成形された専用のトレ
イ、マイクロタイタープレート、或いはイムノクロマト
法で用いられる吸収性担体等が挙げられる。
【００３０】尚、固相としてマイクロタイタープレー
ト、チューブ、吸収性担体（イムノクロマト法の場合
等）等を用いる場合は、固相自体を免疫反応容器とする
ことができるが、固相化担体とは別途に各種の反応容器
を用いても良い。
ト、チューブ、吸収性担体（イムノクロマト法の場合
等）等を用いる場合は、固相自体を免疫反応容器とする
ことができるが、固相化担体とは別途に各種の反応容器
を用いても良い。
【００３１】本発明に係る試薬、組成物又は溶液中に
は、共存する試薬等の安定性や抗原と抗体との反応等を
阻害しないものであれば通常この分野で用いられるその
他の試薬類、例えば緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパ
ク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等が含ま
れていてもよい。またその濃度も、通常、この分野で用
いられる濃度範囲から適宜選択すればよい。
は、共存する試薬等の安定性や抗原と抗体との反応等を
阻害しないものであれば通常この分野で用いられるその
他の試薬類、例えば緩衝剤、反応促進剤、糖類、タンパ
ク質、塩類、界面活性剤等の安定化剤、防腐剤等が含ま
れていてもよい。またその濃度も、通常、この分野で用
いられる濃度範囲から適宜選択すればよい。
【００３２】本発明に係る試薬、組成物又は溶液に於て
用いることのできる緩衝剤としては、例えばトリス緩衝
剤、リン酸緩衝剤、ベロナール緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、
グッド緩衝剤等通常免疫比濁法、免疫比ろう法、酵素免
疫測定法(EIA)、放射免疫測定方法(RIA)、蛍光免疫測定
方法(FIA)等に用いられている緩衝剤は全て挙げられ、
測定反応時のｐＨとしては抗原抗体反応を抑制しない範
囲であれば特に限定されないが、通常６〜１０である。
用いることのできる緩衝剤としては、例えばトリス緩衝
剤、リン酸緩衝剤、ベロナール緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、
グッド緩衝剤等通常免疫比濁法、免疫比ろう法、酵素免
疫測定法(EIA)、放射免疫測定方法(RIA)、蛍光免疫測定
方法(FIA)等に用いられている緩衝剤は全て挙げられ、
測定反応時のｐＨとしては抗原抗体反応を抑制しない範
囲であれば特に限定されないが、通常６〜１０である。
【００３３】以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳細
に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるも
のではない。
に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるも
のではない。
【００３４】
【実施例】実施例１ (１)抗HBeモノクローナル抗体の作製 HBe抗原（スクリプス社製）をフロイント完全アジュバ
ントとともにBALB/cマウス（雌）に免疫（２回）後、摘
出した脾臓細胞とミエローマ細胞（F0）とをポリエチレ
ングリコールを用いる常法（特開平5-244983号公報に記
載された方法）により融合させた。その後、常法により
抗HBeモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを選別
し、これを培養して抗HBeモノクローナル抗体を得た。
得られた抗HBeモノクローナル抗体を常法（石川栄治
著、「酵素標識法」、学会出版センター、1991年、ｐ．
62の方法）によりペルオキシダーゼ（POD、ベーリンガ
ーマンハイム社製）標識し、標識抗体を作製した。
ントとともにBALB/cマウス（雌）に免疫（２回）後、摘
出した脾臓細胞とミエローマ細胞（F0）とをポリエチレ
ングリコールを用いる常法（特開平5-244983号公報に記
載された方法）により融合させた。その後、常法により
抗HBeモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを選別
し、これを培養して抗HBeモノクローナル抗体を得た。
得られた抗HBeモノクローナル抗体を常法（石川栄治
著、「酵素標識法」、学会出版センター、1991年、ｐ．
62の方法）によりペルオキシダーゼ（POD、ベーリンガ
ーマンハイム社製）標識し、標識抗体を作製した。
【００３５】(２)POD標識抗体溶液 上記(１)で得た標識抗体を2.5μgAb/mLとなるように２
％BSAを含む50mM ２−モルフォリノエタンスルホン酸１
水和物（MES）緩衝液（ｐＨ6.5）に溶解後、分子中にス
ペーサーとしてビスフェノールＡグリシジルエーテルを
導入してなるポリエチレングリコール化合物［シグマア
ルドリッチ社製、分子量；１５０００〜２００００、２
分子のポリエチレングリコール（分子量７０００〜９０
００）をビスフェノールＡグリシジルエーテルで結合し
たもの］、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテー
ト）（シグマアルドリッチ社製、平均分子量；５０００
０、ビニルピロリドンユニット：ビニルアセテートユニ
ット＝６０：４０）又はポリエチレングリコールモノテ
トラヒドロフルフリルエーテル（フルカ社製、ジエチレ
ングリコールモノテトラヒドロフルフリルエーテルとト
リエチレングリコールモノテトラヒドロフルフリルエー
テルとの混合物）を、夫々0.5W/V％の濃度になるように
溶解したものをPOD標識抗体液とした。尚、比較とし
て、非特異的吸着防止剤を加えないもの、並びに、非特
異的吸着剤として公知のポリビニルアルコール（和光純
薬工業社製、分子量；平均重合度１５００〜２０００、
けん化率 ７５％）を０．５w/v％、又はスペーサーを含
まないポリエチレングリコール（和光純薬工業社製、分
子量；４０００〜２００００）を０．５w/v％含むもの
も同時に調製した。これらのPOD標識抗体溶液を用い、
以下に示す方法で測定を行って非特異的吸着 防止効果
を調べた。
％BSAを含む50mM ２−モルフォリノエタンスルホン酸１
水和物（MES）緩衝液（ｐＨ6.5）に溶解後、分子中にス
ペーサーとしてビスフェノールＡグリシジルエーテルを
導入してなるポリエチレングリコール化合物［シグマア
ルドリッチ社製、分子量；１５０００〜２００００、２
分子のポリエチレングリコール（分子量７０００〜９０
００）をビスフェノールＡグリシジルエーテルで結合し
たもの］、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテー
ト）（シグマアルドリッチ社製、平均分子量；５０００
０、ビニルピロリドンユニット：ビニルアセテートユニ
ット＝６０：４０）又はポリエチレングリコールモノテ
トラヒドロフルフリルエーテル（フルカ社製、ジエチレ
ングリコールモノテトラヒドロフルフリルエーテルとト
リエチレングリコールモノテトラヒドロフルフリルエー
テルとの混合物）を、夫々0.5W/V％の濃度になるように
溶解したものをPOD標識抗体液とした。尚、比較とし
て、非特異的吸着防止剤を加えないもの、並びに、非特
異的吸着剤として公知のポリビニルアルコール（和光純
薬工業社製、分子量；平均重合度１５００〜２０００、
けん化率 ７５％）を０．５w/v％、又はスペーサーを含
まないポリエチレングリコール（和光純薬工業社製、分
子量；４０００〜２００００）を０．５w/v％含むもの
も同時に調製した。これらのPOD標識抗体溶液を用い、
以下に示す方法で測定を行って非特異的吸着 防止効果
を調べた。
【００３６】(３)吸着防止効果の検討 ポリスチレンボール（イムノケミカル社製）を、上記
(１)で得たＰＯＤ未標識抗HBeモノクローナル抗体 20μ
g/mLを含む50mM ３−モルフォリノプロパンスルホン酸
（MOPS）緩衝液（ｐＨ7.5）中に浸漬し、４℃で一夜静
置後、１％ BSAを含む50mM MOPS緩衝液（ｐＨ7.5）中に
浸漬して、さらに４℃で一夜静置し、抗HBeモノクロー
ナル抗体固定化ボールを作製した。ポリプロピレンチュ
ーブに１％BSAを含む50mM MOPS緩衝液（ｐＨ7.5） 200
μLを分注し、上記のように調製した抗HBeモノクローナ
ル抗体固定化ボール１個を加えて37℃で７分間反応させ
た。次いで該ボールを生理食塩液１mLで３回洗浄後、所
定のPOD標識抗体溶液200μLを加えて37℃で７分間反応
させた。該ボールを生理食塩液 １ｍLで３回洗浄後、５
mMルミノール（和光純薬工業社製）及び0.02％過酸化水
素を含む50mMトリス緩衝液（ｐＨ8.5）200μLを加え、
化学発光計（ベルトールド社製、オートルマットLB95
3）にて１秒間の化学発光積算量を測定した。
(１)で得たＰＯＤ未標識抗HBeモノクローナル抗体 20μ
g/mLを含む50mM ３−モルフォリノプロパンスルホン酸
（MOPS）緩衝液（ｐＨ7.5）中に浸漬し、４℃で一夜静
置後、１％ BSAを含む50mM MOPS緩衝液（ｐＨ7.5）中に
浸漬して、さらに４℃で一夜静置し、抗HBeモノクロー
ナル抗体固定化ボールを作製した。ポリプロピレンチュ
ーブに１％BSAを含む50mM MOPS緩衝液（ｐＨ7.5） 200
μLを分注し、上記のように調製した抗HBeモノクローナ
ル抗体固定化ボール１個を加えて37℃で７分間反応させ
た。次いで該ボールを生理食塩液１mLで３回洗浄後、所
定のPOD標識抗体溶液200μLを加えて37℃で７分間反応
させた。該ボールを生理食塩液 １ｍLで３回洗浄後、５
mMルミノール（和光純薬工業社製）及び0.02％過酸化水
素を含む50mMトリス緩衝液（ｐＨ8.5）200μLを加え、
化学発光計（ベルトールド社製、オートルマットLB95
3）にて１秒間の化学発光積算量を測定した。
【００３７】尚、非特異的吸着防止能(％)は下式１によ
り算出した。結果を表１に示す。
り算出した。結果を表１に示す。
【００３８】
【式１】［式１］ 注；Samボール：非特異的吸着防止剤添加ＰＯＤ標識抗
体溶液中で反応させて得られたボール Refボール：非特異的吸着防止剤無添加ＰＯＤ標識抗体
溶液中で反応させて得られたボール
体溶液中で反応させて得られたボール Refボール：非特異的吸着防止剤無添加ＰＯＤ標識抗体
溶液中で反応させて得られたボール
【００３９】
【表１】
【００４０】表１の結果から、本発明の非特異的吸着防
止剤を添加すると、従来から免疫アッセイ用ブロッキン
グ剤として用いられているポリビニルアルコールと比べ
て明らかに優れた非特異的吸着防止効果が得られること
が判る。
止剤を添加すると、従来から免疫アッセイ用ブロッキン
グ剤として用いられているポリビニルアルコールと比べ
て明らかに優れた非特異的吸着防止効果が得られること
が判る。
【００４１】実施例２ 本発明の非特異的吸着防止剤添加による免疫反応への影
響を調べるため、以下のような実験を行った。先ず、HB
e抗原（スクリプス社製）と１％BSAを含む50mM MOPS緩
衝液（ｐＨ7.5）を用いて調製したHBe抗原溶液（含有
量；０または0.2 U/ｍL）200μLをポリプロピレンチュ
ーブに分注し、実施例１の（３）で調製した抗HBeモノ
クローナル抗体固定化ボール１個を加えて37℃で７分間
反応させた。次いで該ボールを生理食塩水１mLで３回洗
浄後、１％ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテー
ト）（シグマアルドリッチ社製、重量平均分子量；５０
０００、ビニルピロリドンユニット：ビニルアセテート
ユニット＝６０：４０）と、実施例１の（１）で調製し
たPOD標識抗体を2.5μgAb/mL含む50mM MOPS緩衝液（ｐ
Ｈ6.5）200μLを加えて37℃で７分間反応させた。該ボ
ールを生理食塩水１mLで３回洗浄後、５mMルミノール
（和光純薬工業社製）及び0.02％過酸化水素水を含む50
mM トリス緩衝液（ｐＨ8.5）200μLを加え、化学発光計
（ベルトールド社製、オートルマットLB953）にて１秒
間の化学発光積算量を測定した。結果を表２に示す。
響を調べるため、以下のような実験を行った。先ず、HB
e抗原（スクリプス社製）と１％BSAを含む50mM MOPS緩
衝液（ｐＨ7.5）を用いて調製したHBe抗原溶液（含有
量；０または0.2 U/ｍL）200μLをポリプロピレンチュ
ーブに分注し、実施例１の（３）で調製した抗HBeモノ
クローナル抗体固定化ボール１個を加えて37℃で７分間
反応させた。次いで該ボールを生理食塩水１mLで３回洗
浄後、１％ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテー
ト）（シグマアルドリッチ社製、重量平均分子量；５０
０００、ビニルピロリドンユニット：ビニルアセテート
ユニット＝６０：４０）と、実施例１の（１）で調製し
たPOD標識抗体を2.5μgAb/mL含む50mM MOPS緩衝液（ｐ
Ｈ6.5）200μLを加えて37℃で７分間反応させた。該ボ
ールを生理食塩水１mLで３回洗浄後、５mMルミノール
（和光純薬工業社製）及び0.02％過酸化水素水を含む50
mM トリス緩衝液（ｐＨ8.5）200μLを加え、化学発光計
（ベルトールド社製、オートルマットLB953）にて１秒
間の化学発光積算量を測定した。結果を表２に示す。
【００４２】また、Ｓ／Ｎ比（シグナル／ノイズ比）を
下式２により算出した。その結果も表２に併せて示す。
下式２により算出した。その結果も表２に併せて示す。
【００４３】
【式２】［式２］
【００４４】
【表２】
【００４５】表２の結果から、本発明の非特異的吸着防
止剤の添加によって、免疫反応に影響を与えず、Ｓ／Ｎ
比が良くなることが判る。
止剤の添加によって、免疫反応に影響を与えず、Ｓ／Ｎ
比が良くなることが判る。
【００４６】実施例３ (1)金コロイト゛標識抗体溶液の調製) 常法により自製した抗HBs抗原モノクロ−ナル抗体溶液
（蛋白濃度：20mg/ml）10μｌと、フレンス（Frens）の
方法［Nature Phys.Sci.,vol.241,20-22(1973)］で調製
し0.1M K2CO3でpHを6.5に調整した金コロイド溶液（金
コロイドの平均粒経：30nm。ＯＤ520nm＝1.2）6mlとを
混合し1時間反応させた後、反応液に分散剤としてポリ
エチレングリコール（シグマ社製。商品名：カーボワッ
クス20M）を終濃度で0.05％となるように添加した。そ
の後、反応液を15000rpm×20分で遠心分離処理し、上清
を除き、得られた残渣を50mMリン酸緩衝液(pH7.4) 3ml
に懸濁し、金コロイド標識抗HBs抗原モノクロ−ナル抗
体溶液を調製した。
（蛋白濃度：20mg/ml）10μｌと、フレンス（Frens）の
方法［Nature Phys.Sci.,vol.241,20-22(1973)］で調製
し0.1M K2CO3でpHを6.5に調整した金コロイド溶液（金
コロイドの平均粒経：30nm。ＯＤ520nm＝1.2）6mlとを
混合し1時間反応させた後、反応液に分散剤としてポリ
エチレングリコール（シグマ社製。商品名：カーボワッ
クス20M）を終濃度で0.05％となるように添加した。そ
の後、反応液を15000rpm×20分で遠心分離処理し、上清
を除き、得られた残渣を50mMリン酸緩衝液(pH7.4) 3ml
に懸濁し、金コロイド標識抗HBs抗原モノクロ−ナル抗
体溶液を調製した。
【００４７】(2)ブロッキング効果の検討 上記(1)で得た金コロイト゛標識抗体溶液に、本発明の非特異
的吸着防止剤である、分子中にスペーサーとしてビスフ
ェノールＡグリシジルエーテルを導入してなるポリエチ
レングリコール化合物［シグマアルドリッチ社製、分子
量；１５０００〜２００００、２分子のポリエチレング
リコール（分子量７０００〜９０００）をビスフェノー
ルＡグリシジルエーテルで結合したもの］又はポリ（ビ
ニルピロリドン／ビニルアセテート）（シグマアルドリ
ッチ社製、平均分子量；５００００、ビニルピロリドン
ユニット：ビニルアセテートユニット＝６０：４０）を
１%添加したものを、ブロッキング処理していないニト
ロセルロース膜(ミリポア社製。10mm×6mm)の中央に2μ
l 滴下して乾燥させた後、当該膜の下端を血清に浸漬し
て展開した場合の金コロイト゛標識抗体の展開状態を調べ
た。
的吸着防止剤である、分子中にスペーサーとしてビスフ
ェノールＡグリシジルエーテルを導入してなるポリエチ
レングリコール化合物［シグマアルドリッチ社製、分子
量；１５０００〜２００００、２分子のポリエチレング
リコール（分子量７０００〜９０００）をビスフェノー
ルＡグリシジルエーテルで結合したもの］又はポリ（ビ
ニルピロリドン／ビニルアセテート）（シグマアルドリ
ッチ社製、平均分子量；５００００、ビニルピロリドン
ユニット：ビニルアセテートユニット＝６０：４０）を
１%添加したものを、ブロッキング処理していないニト
ロセルロース膜(ミリポア社製。10mm×6mm)の中央に2μ
l 滴下して乾燥させた後、当該膜の下端を血清に浸漬し
て展開した場合の金コロイト゛標識抗体の展開状態を調べ
た。
【００４８】その結果、何れの非特異的吸着防止剤を用
いた場合も、金コロイド標識抗体溶液を滴下乾燥した位
置での金コロイド標識抗体の残存は見られず、ニトロセ
ルロース膜に於いても非特異的吸着防止効果を奏するこ
とが判った。
いた場合も、金コロイド標識抗体溶液を滴下乾燥した位
置での金コロイド標識抗体の残存は見られず、ニトロセ
ルロース膜に於いても非特異的吸着防止効果を奏するこ
とが判った。
【００４９】実施例４ (1)判定部位を有する展開膜の調製 40mm×6mmのニトロセルロース膜（ミリポア社製）の端
から20mmの位置に、自製した抗HBs抗原モノクロ−ナル
抗体溶液（蛋白濃度：20mg/ml）0.5μLを線状に塗布
後、乾燥して固定化して、判定部を有する展開膜を調製
した。
から20mmの位置に、自製した抗HBs抗原モノクロ−ナル
抗体溶液（蛋白濃度：20mg/ml）0.5μLを線状に塗布
後、乾燥して固定化して、判定部を有する展開膜を調製
した。
【００５０】(2)金コロイト゛標識抗体含浸膜の調製 実施例３の(1)で調製した金コロイト゛標識抗HBs抗原モノク
ロ−ナル抗体溶液に、ポリ（ビニルピロリドン／ビニル
アセテート）（シグマアルドリッチ社製、平均分子量；
５００００、ビニルピロリドンユニット：ビニルアセテ
ートユニット＝６０：４０）を0.5又は１%添加したもの
に不織布(商品名：ローフ゜ロソーフ゛。日本ホ゜ール（株）製。)に
含浸後、乾燥して金コロイド標識抗体含浸膜を調製し
た。
ロ−ナル抗体溶液に、ポリ（ビニルピロリドン／ビニル
アセテート）（シグマアルドリッチ社製、平均分子量；
５００００、ビニルピロリドンユニット：ビニルアセテ
ートユニット＝６０：４０）を0.5又は１%添加したもの
に不織布(商品名：ローフ゜ロソーフ゛。日本ホ゜ール（株）製。)に
含浸後、乾燥して金コロイド標識抗体含浸膜を調製し
た。
【００５１】(3)試験用具の組立 塩化ヒ゛ニルシート60mm×6mmの中央部に展開膜を両面テープで
接着し、次いで、当該展開膜の一端に10mm×6mmの金コロイ
ト゛標識抗体含浸膜を展開膜と1〜2mm重なるように両面テ
ープで接着した。また、金コロイト゛標識抗体含浸膜の展開
膜と接していない端に10mm×6mmの不織布(商品名；ローフ゜
ロソーフ゛。日本ホ゜ール（株）製)を金コロイト゛標識抗体含浸膜と1
〜2mm重なるように両面テープで接着して検体吸収部と
した。更に、展開膜の金コロイト゛標識抗体含浸膜と接して
いない端に10mm×6mmの濾紙を両面テープで接着して試
験用具とした。
接着し、次いで、当該展開膜の一端に10mm×6mmの金コロイ
ト゛標識抗体含浸膜を展開膜と1〜2mm重なるように両面テ
ープで接着した。また、金コロイト゛標識抗体含浸膜の展開
膜と接していない端に10mm×6mmの不織布(商品名；ローフ゜
ロソーフ゛。日本ホ゜ール（株）製)を金コロイト゛標識抗体含浸膜と1
〜2mm重なるように両面テープで接着して検体吸収部と
した。更に、展開膜の金コロイト゛標識抗体含浸膜と接して
いない端に10mm×6mmの濾紙を両面テープで接着して試
験用具とした。
【００５２】(4)測定 HBs抗原を含まない陰性血清に既知濃度のHBs抗原を添加
して0-80ng/mlの標準を作製した。これらの標準を上記
試験用具の検体吸収部に50μl滴下した後、検体の展開
に要する時間経過後、判定部の着色を観察した。結果を
表３に示す。尚、表３中、＋は判定部に着色が見られた
ことを表し、−は判定部に着色が見られなかったことを
示す。
して0-80ng/mlの標準を作製した。これらの標準を上記
試験用具の検体吸収部に50μl滴下した後、検体の展開
に要する時間経過後、判定部の着色を観察した。結果を
表３に示す。尚、表３中、＋は判定部に着色が見られた
ことを表し、−は判定部に着色が見られなかったことを
示す。
【００５３】
【表３】
【００５４】表３の結果から、HBs抗原含有量が０の試
料を用いた場合には判定部に着色が見られず、HBs抗原
含有試料を用いると判定部に着色が見られることが判
る。即ち、本発明の非特異的吸着防止剤は、イムノクロ
マト法に於いても有効に働き、金コロイド標識抗体の非
特異的吸着を防止し得ることが判る。
料を用いた場合には判定部に着色が見られず、HBs抗原
含有試料を用いると判定部に着色が見られることが判
る。即ち、本発明の非特異的吸着防止剤は、イムノクロ
マト法に於いても有効に働き、金コロイド標識抗体の非
特異的吸着を防止し得ることが判る。
【００５５】
【発明の効果】以上述べた如く、本発明は免疫反応に影
響を与えず、遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体の抗
原或は抗体結合固相や反応容器への非特異的吸着を防止
する非特異的吸着防止剤並びに非特異的吸着防止方法を
提供するものであり、本発明の方法によれば、免疫反応
系に本発明の非特異的吸着防止剤を存在させるだけで結
合固相や反応容器への非特異的吸着を防止することがで
き、高精度で高感度な分析が可能となる。
響を与えず、遊離の抗原、抗体又はこれらの標識体の抗
原或は抗体結合固相や反応容器への非特異的吸着を防止
する非特異的吸着防止剤並びに非特異的吸着防止方法を
提供するものであり、本発明の方法によれば、免疫反応
系に本発明の非特異的吸着防止剤を存在させるだけで結
合固相や反応容器への非特異的吸着を防止することがで
き、高精度で高感度な分析が可能となる。
Claims (11)
- 【請求項１】 分子中にスペーサーとして疎水性の二官
能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化合
物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及び
ポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエーテ
ルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物からな
る、抗体又は抗原の非特異的吸着防止剤。 - 【請求項２】 二官能性化合物がビスフェノールＡグリ
シジルエーテルである請求項１に記載の非特異的吸着防
止剤。 - 【請求項３】 分子中にスペーサーとして疎水性の二官
能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化合
物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及び
ポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエーテ
ルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物を抗体又
は抗原を含有する溶液中に共存させることを特徴とす
る、抗原又は抗体の非特異的吸着防止方法。 - 【請求項４】 疎水性の二官能性化合物がビスフェノー
ルＡグリシジルエーテルである請求項３に記載の非特異
的吸着防止方法。 - 【請求項５】 分子中にスペーサーとして疎水性の二官
能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化合
物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及び
ポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエーテ
ルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗体
又は抗原とを含有する溶液を用いることを特徴とする、
免疫学的測定方法。 - 【請求項６】 疎水性の二官能性化合物がビスフェノー
ルＡグリシジルエーテルである請求項５に記載の免疫学
的測定方法。 - 【請求項７】 分子中にスペーサーとして疎水性の二官
能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化合
物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及び
ポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエーテ
ルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗体
又は抗原とを含んでなる抗体又は抗原組成物。 - 【請求項８】 疎水性の二官能性化合物がビスフェノー
ルＡグリシジルエーテルである請求項７に記載の抗体又
は抗原組成物。 - 【請求項９】 抗体又は抗原組成物が溶液である、請求
項７又は８に記載の組成物。 - 【請求項１０】 分子中にスペーサーとして疎水性の二
官能性化合物を導入してなるポリエチレングリコール化
合物、ポリ（ビニルピロリドン／ビニルアセテート）及
びポリエチレングリコールテトラヒドロフルフリルエー
テルから選ばれた少なくとも１つの水溶性化合物と、抗
体又は抗原とを含んでなる免疫学的測定用試薬。 - 【請求項１１】 疎水性の二官能性化合物がビスフェノ
ールＡグリシジルエーテルである請求項１０に記載の免
疫学的測定用試薬。 【０００１】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17405198A JP4000671B2 (ja) | 1998-06-05 | 1998-06-05 | 非特異的吸着防止剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17405198A JP4000671B2 (ja) | 1998-06-05 | 1998-06-05 | 非特異的吸着防止剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11352127A true JPH11352127A (ja) | 1999-12-24 |
| JP4000671B2 JP4000671B2 (ja) | 2007-10-31 |
Family
ID=15971771
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17405198A Expired - Lifetime JP4000671B2 (ja) | 1998-06-05 | 1998-06-05 | 非特異的吸着防止剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4000671B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006189317A (ja) * | 2005-01-06 | 2006-07-20 | Sysmex Corp | イムノクロマトグラフ法用試験具 |
| WO2007077238A1 (de) * | 2006-01-03 | 2007-07-12 | Qiagen Gmbh | Verwendung von polymeren zur erhöhung der signalintensität bei der durchführung von nachweisreaktionen |
| EP1936372A1 (en) * | 2006-12-14 | 2008-06-25 | JSR Corporation | Non-specific adsorption inhibitor, probe-bonded particles, and method for producing the same |
| WO2008146631A1 (ja) | 2007-05-30 | 2008-12-04 | Jsr Corporation | 非特異吸着防止剤 |
| US7964414B2 (en) | 2005-03-22 | 2011-06-21 | Fujifilm Corporation | Biosensor with suppressed non-specific adsorption |
| WO2013022085A1 (ja) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Jsr株式会社 | 新規重合体、該重合体を含有する表面親水化剤および親水性表面を有する基材の製造方法 |
-
1998
- 1998-06-05 JP JP17405198A patent/JP4000671B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006189317A (ja) * | 2005-01-06 | 2006-07-20 | Sysmex Corp | イムノクロマトグラフ法用試験具 |
| JP4628110B2 (ja) * | 2005-01-06 | 2011-02-09 | シスメックス株式会社 | イムノクロマトグラフ法用試験具 |
| US7964414B2 (en) | 2005-03-22 | 2011-06-21 | Fujifilm Corporation | Biosensor with suppressed non-specific adsorption |
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| US8404494B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-03-26 | Jsr Corporation | Non-specific adsorption inhibitor, probe-bonded particles, and method for producing the same |
| US8617803B2 (en) | 2006-12-14 | 2013-12-31 | Jsr Corporation | Non-specific adsorption inhibitor, probe-bonded particles, and method for producing the same |
| WO2008146631A1 (ja) | 2007-05-30 | 2008-12-04 | Jsr Corporation | 非特異吸着防止剤 |
| US8859699B2 (en) | 2007-05-30 | 2014-10-14 | Jsr Corporation | Non-specific adsorption inhibitor |
| WO2013022085A1 (ja) | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Jsr株式会社 | 新規重合体、該重合体を含有する表面親水化剤および親水性表面を有する基材の製造方法 |
| KR20140032000A (ko) | 2011-08-10 | 2014-03-13 | 제이에스알 가부시끼가이샤 | 신규 중합체, 상기 중합체를 함유하는 표면 친수화제 및 친수성 표면을 갖는 기재의 제조 방법 |
| KR20160105526A (ko) | 2011-08-10 | 2016-09-06 | 제이에스알 가부시끼가이샤 | 신규 중합체, 상기 중합체를 함유하는 표면 친수화제 및 친수성 표면을 갖는 기재의 제조 방법 |
| US9493600B2 (en) | 2011-08-10 | 2016-11-15 | Jsr Corporation | Polymer, surface hydrophilizing agent containing said polymer, and manufacturing method for substrate having hydrophilic surface |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4000671B2 (ja) | 2007-10-31 |
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