JPS60149950A - ケミルミネツセントの検出法 - Google Patents
ケミルミネツセントの検出法Info
- Publication number
- JPS60149950A JPS60149950A JP480184A JP480184A JPS60149950A JP S60149950 A JPS60149950 A JP S60149950A JP 480184 A JP480184 A JP 480184A JP 480184 A JP480184 A JP 480184A JP S60149950 A JPS60149950 A JP S60149950A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- chemiluminescent
- luminol
- concentration
- hypochlorite
- hydrogen peroxide
- Prior art date
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
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- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は化学発光物質（ケミルミネッセント）を用いる
免疫定量法における、ケミルミネッセントの検出法に関
するものである。
免疫定量法における、ケミルミネッセントの検出法に関
するものである。
ケミルミネッセントを利用した免疫定量（ケミルミネッ
セント免疫定量）の歴史は比較的新しいが、これまでに
幾つかの報告がなされている。例えば、抗ウサギＩｇＧ
にルミノールに標識してウサギＩｇＧを測定したシンプ
ソン（Ｊ、Ｓ、Ａ。
セント免疫定量）の歴史は比較的新しいが、これまでに
幾つかの報告がなされている。例えば、抗ウサギＩｇＧ
にルミノールに標識してウサギＩｇＧを測定したシンプ
ソン（Ｊ、Ｓ、Ａ。
Ｓｊｍｐｓｏｎ ）等の報告（Ｎａｔｕｒｅ、 ２７９
．６４６（１９７９））を始め数件の報告が知られてい
る。
．６４６（１９７９））を始め数件の報告が知られてい
る。
また、上記免疫定量に関する特許提案もなされている。
すなわち、チャールス・エル・メイヤー・ジュニア−（
特開昭５４−２０１３１）、 リロイ・ニス・バーシュ
等（特開昭５４−２０１３２．５４−２０１３３ ）、
ブルース・ジエイ・オウバハート等（特開昭５６−６
１６２）の提案が知られている。これら報告及び特許か
らも明らかなように・ケミルミネッセント免疫定量の方
法は、使用する材料、プロセス等により極めて多種多様
である。
特開昭５４−２０１３１）、 リロイ・ニス・バーシュ
等（特開昭５４−２０１３２．５４−２０１３３ ）、
ブルース・ジエイ・オウバハート等（特開昭５６−６
１６２）の提案が知られている。これら報告及び特許か
らも明らかなように・ケミルミネッセント免疫定量の方
法は、使用する材料、プロセス等により極めて多種多様
である。
この中でケミルミネッセントを抗体又は抗原に標識する
方法においては、標識したケミルミネッセントの高感度
、高精度測定が必要である。また標識ケミルミネッセン
トとしては、発光効率、安定性等に優れているルミノー
ル及びその誘導体が適していると考えられている。
方法においては、標識したケミルミネッセントの高感度
、高精度測定が必要である。また標識ケミルミネッセン
トとしては、発光効率、安定性等に優れているルミノー
ル及びその誘導体が適していると考えられている。
ケミルミネッセントを発光させるには種々の物質を牟独
又１ｄ−緒に用いるが、次のようなものが適切であると
考えられている。すなわち、過酸化水素、次亜塩素酸塩
・水酸化ナトリウム・ｐｃｌｌ＋などの金属イオン、Ｆ
ｅ （ＩＩＩ）−ポルフィリン（ヘモグロビン、ヘミン
等）、過酸化酵素等がある。これらの物質はいずれも発
火誘起剤として有効であるが・従来必ずしも適切に用い
られていない。例えば、シンプソン等は、ルミノールを
発光させるのに、試料１０ｔｔｔに対し、０．１ Ｍ
Ｎａ ＯＨ（１ｍｔ）、５．４ｍＭＨ２（ｈ（１００μ
Ａ）、１ｍ Ｍ Ｎ ａ ＯＣｌ （１ｍ ｌ ）を使
用していル。メイヤーＵインシュリン・ルミノール複合
体の測光に０．５％Ｎａ０ＣＬ（０，０１ＮＮａｏＨ溶
液）を単独で用いている。ケミルミネッセントの発光効
率は、発光誘起剤の使用法により著しく変化し適切な組
成で用いないと最高効率は得られない。
又１ｄ−緒に用いるが、次のようなものが適切であると
考えられている。すなわち、過酸化水素、次亜塩素酸塩
・水酸化ナトリウム・ｐｃｌｌ＋などの金属イオン、Ｆ
ｅ （ＩＩＩ）−ポルフィリン（ヘモグロビン、ヘミン
等）、過酸化酵素等がある。これらの物質はいずれも発
火誘起剤として有効であるが・従来必ずしも適切に用い
られていない。例えば、シンプソン等は、ルミノールを
発光させるのに、試料１０ｔｔｔに対し、０．１ Ｍ
Ｎａ ＯＨ（１ｍｔ）、５．４ｍＭＨ２（ｈ（１００μ
Ａ）、１ｍ Ｍ Ｎ ａ ＯＣｌ （１ｍ ｌ ）を使
用していル。メイヤーＵインシュリン・ルミノール複合
体の測光に０．５％Ｎａ０ＣＬ（０，０１ＮＮａｏＨ溶
液）を単独で用いている。ケミルミネッセントの発光効
率は、発光誘起剤の使用法により著しく変化し適切な組
成で用いないと最高効率は得られない。
免疫定量は・特定の極微量生化学物質を多成分混合系よ
り分離・定量するために用いられるもので、高感度、高
精度でなければならない。これを達成するためには、標
識物質の選定と測定法が特に重要である。
り分離・定量するために用いられるもので、高感度、高
精度でなければならない。これを達成するためには、標
識物質の選定と測定法が特に重要である。
本発明は・ルミノール等のケミルミネッセントを標識と
して用りる免疫定量におけるケミルミネッセントの高感
度、高精度計測技術を提供することを目的としている。
して用りる免疫定量におけるケミルミネッセントの高感
度、高精度計測技術を提供することを目的としている。
さらに詳しく述べるならば、有機高分子ゲルまたは膜に
結合または、閉じ込められたケミルミネッセントの発光
誘起剤として次亜塩素酸塩・過酸化水素系を用いた場合
の溌適発光法を提供することを目的としている。
結合または、閉じ込められたケミルミネッセントの発光
誘起剤として次亜塩素酸塩・過酸化水素系を用いた場合
の溌適発光法を提供することを目的としている。
ルミノールなどのケミルミネッセントを利用すルイムノ
アッセイでは、固相支持体を用いるサンドイツチ法と呼
ばれる手法が主に採用されてきて贋る。この固相支持体
として、ガラス、又は有機高分子から成るビーズ、ある
いはチューブが利用され、これに適するケミルミネッセ
ントの発光法が提案されてきている。
アッセイでは、固相支持体を用いるサンドイツチ法と呼
ばれる手法が主に採用されてきて贋る。この固相支持体
として、ガラス、又は有機高分子から成るビーズ、ある
いはチューブが利用され、これに適するケミルミネッセ
ントの発光法が提案されてきている。
ところが、有機高分子ゲル、または膜を抗体、または抗
原の固定化支持体として用いるイムノアッセイにおいて
は、従来条件による発光では効率が非常に低く、はとん
どケミルミネッセントの検出が不可能であった。
原の固定化支持体として用いるイムノアッセイにおいて
は、従来条件による発光では効率が非常に低く、はとん
どケミルミネッセントの検出が不可能であった。
本発明者らは、との原因を酸化剤がゲルまたは膜に浸透
する速度が遅く、充分にゲルまたは膜の内部の酸化剤濃
度が高まらないことによると考え、特に、過酸化水素、
次亜塩素酸塩のアルカリ溶液を用いて、これらの濃度を
変えて実験し、ルミノール等を極めて高効率で発光させ
得る条件を見出した。
する速度が遅く、充分にゲルまたは膜の内部の酸化剤濃
度が高まらないことによると考え、特に、過酸化水素、
次亜塩素酸塩のアルカリ溶液を用いて、これらの濃度を
変えて実験し、ルミノール等を極めて高効率で発光させ
得る条件を見出した。
すなわち・１０〜１００ｍｍｏｔ／７ の次亜塩素酸塩
と１００〜１０００ ｍｍ０７／ｌの過酸化水素よりな
る溶液でケミルミネッセントを発光させ検出する方法で
ある。
と１００〜１０００ ｍｍ０７／ｌの過酸化水素よりな
る溶液でケミルミネッセントを発光させ検出する方法で
ある。
ルミノールを１０−’ Ｎ水酸化ナトリウム溶液に溶か
して、アクリルアミドゲルに含浸させた。また・市販の
５チ次亜塩素酸ナトリウム溶液で希釈し所定の濃度とし
た。
して、アクリルアミドゲルに含浸させた。また・市販の
５チ次亜塩素酸ナトリウム溶液で希釈し所定の濃度とし
た。
上記ルミノールを含浸させたアクリルアミドゲルを容量
約４ｍｔの透明角型セルに採り、これに種々の濃度の過
酸化水素１００μｔを添加した。
約４ｍｔの透明角型セルに採り、これに種々の濃度の過
酸化水素１００μｔを添加した。
次いで上記次亜塩素酸ナトリウム溶液２００Ａｔを加え
てルミノールを発光させ、その発光量をフォトンカウン
ターで計測した。その結果を第１図、に示した。
てルミノールを発光させ、その発光量をフォトンカウン
ターで計測した。その結果を第１図、に示した。
図において、縦軸は測定フォトン数、横軸は次亜塩素酸
ナトリウム濃度、また図の曲線１，２゜３．４．５はそ
れぞれ、過酸化水素濃度５０゜１００．５００，１００
０．５０００ｍｎ１０７／７を表わしている・すなわち
、ルミノールの発光量は過酸化水素濃度、及び次亜塩素
酸す） ＩＪウム濃度に依存し、ともに実験した範囲内
で高濃度はど発光量が大きいことがわかる。しかし、過
酸化水素濃度が１０００ Ｉｎ ｍｏｔ／を以上では濃
度の影響は小さく、発光量は濃度を高くしても大きな増
加はない。したがって過酸化水素は、その強い酸化力に
よる腐食等の影響を考慮し、１００ Ｑｍｍｏｔ／を以
下で使用することが望ましい。
ナトリウム濃度、また図の曲線１，２゜３．４．５はそ
れぞれ、過酸化水素濃度５０゜１００．５００，１００
０．５０００ｍｎ１０７／７を表わしている・すなわち
、ルミノールの発光量は過酸化水素濃度、及び次亜塩素
酸す） ＩＪウム濃度に依存し、ともに実験した範囲内
で高濃度はど発光量が大きいことがわかる。しかし、過
酸化水素濃度が１０００ Ｉｎ ｍｏｔ／を以上では濃
度の影響は小さく、発光量は濃度を高くしても大きな増
加はない。したがって過酸化水素は、その強い酸化力に
よる腐食等の影響を考慮し、１００ Ｑｍｍｏｔ／を以
下で使用することが望ましい。
まだ次亜塩素酸ナトリウムでも、表１のように高濃度で
は酸化力が強く腐食性があり、また強い塩素臭を伴い実
用的には、１００ ｍ ｍｏｌ／を以下で使用すること
が望ましい。しかし、１０ｍｍ０Ａ／を以下の低濃度で
は、取扱いは安易であるが発光量が小さく、Ｓ／Ｎ比が
低い。
は酸化力が強く腐食性があり、また強い塩素臭を伴い実
用的には、１００ ｍ ｍｏｌ／を以下で使用すること
が望ましい。しかし、１０ｍｍ０Ａ／を以下の低濃度で
は、取扱いは安易であるが発光量が小さく、Ｓ／Ｎ比が
低い。
したがって、適正な濃度としては、次亜塩素酸ナトリウ
ムが、１０〜１０ Ｑｍｍｏｔ／ｌ、過酸化水素が１０
０〜１０００１００Ｏ／ｌの範囲が望ましい。
ムが、１０〜１０ Ｑｍｍｏｔ／ｌ、過酸化水素が１０
０〜１０００１００Ｏ／ｌの範囲が望ましい。
次に・ルミノールの濃度を１０−ｇ〜１０−’ ｍｏｔ
／ｌにわたって変化させて測定を行なったが・それぞれ
の場合で上記の酸化剤濃度依存性は同様に観察された。
／ｌにわたって変化させて測定を行なったが・それぞれ
の場合で上記の酸化剤濃度依存性は同様に観察された。
またよルミノール濃度と発光量の比例性もそれぞれの条
件で保たれていることが確認された。
件で保たれていることが確認された。
ルミノール等を抗体等に結合させても上記の傾向は変わ
らない。
らない。
注）−；弱い、ない
＋：やや強い
＋＋；強い
十＋＋；非常に強い
〔発明の効果〕
ルミノールの発光において、その酸化剤組成を最適に選
ぶことにより１発光効率を最大にすることができた。こ
の効果は、発光物質を標識とじて用いる免疫定量の感度
向上に直接反映している。
ぶことにより１発光効率を最大にすることができた。こ
の効果は、発光物質を標識とじて用いる免疫定量の感度
向上に直接反映している。
第１図は本発明の効果を示す実験例で、ルミノールの化
学発光の次亜塩素酸す） ＩＪウム濃度依存性を示す図
である。 １・・・過酸化水素濃度 ５Ｑｍｍｏｔ／１２・・・
ｔｔ ｌ Ｑ Ｑｍｍｏｔ／４３−／／ ５００ｍｍ０
１／１ ４−・・〃１０００ｍｍｏｔ／Ａ 第 １ 図
学発光の次亜塩素酸す） ＩＪウム濃度依存性を示す図
である。 １・・・過酸化水素濃度 ５Ｑｍｍｏｔ／１２・・・
ｔｔ ｌ Ｑ Ｑｍｍｏｔ／４３−／／ ５００ｍｍ０
１／１ ４−・・〃１０００ｍｍｏｔ／Ａ 第 １ 図
Claims (1)
- １、 １０〜１００ｍｍ０１／ｌの次亜塩素酸塩と１０
０〜１００ Ｑ ｍ ｍｏｚ／ｌの過酸化水素とよりな
るアルカリ性溶液でケミルミネッセントを２、 ケミル
ミネッセントが、有機高分子ゲル・または膜状物に結合
、あるいは閉じ込められてぃ３、 ケミルミネッセント
がルミノール及びその誘導体・並びに・生物活性を有す
る有機物質に化学的に結合したルミノール及びその誘導
体の一売曾法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP480184A JPS60149950A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | ケミルミネツセントの検出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP480184A JPS60149950A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | ケミルミネツセントの検出法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60149950A true JPS60149950A (ja) | 1985-08-07 |
Family
ID=11593866
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP480184A Pending JPS60149950A (ja) | 1984-01-17 | 1984-01-17 | ケミルミネツセントの検出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60149950A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63133039A (ja) * | 1986-11-25 | 1988-06-04 | Hamamatsu Photonics Kk | 薄膜の物質透過性能を評価する方法 |
| JPH01307635A (ja) * | 1988-06-03 | 1989-12-12 | Hamamatsu Photonics Kk | 被試験用薄膜の物質透過性能を評価する方法 |
| JPH0251043A (ja) * | 1988-08-11 | 1990-02-21 | Hamamatsu Photonics Kk | 隔体の気体透過試験方法 |
| JPH03154853A (ja) * | 1989-10-23 | 1991-07-02 | Abbott Lab | 化学的異種発光検定方法とその装置 |
| JPH03173231A (ja) * | 1989-12-01 | 1991-07-26 | Nec Corp | 自動車電話制御装置 |
-
1984
- 1984-01-17 JP JP480184A patent/JPS60149950A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63133039A (ja) * | 1986-11-25 | 1988-06-04 | Hamamatsu Photonics Kk | 薄膜の物質透過性能を評価する方法 |
| JPH0553223B2 (ja) * | 1986-11-25 | 1993-08-09 | Hamamatsu Photonics Kk | |
| JPH01307635A (ja) * | 1988-06-03 | 1989-12-12 | Hamamatsu Photonics Kk | 被試験用薄膜の物質透過性能を評価する方法 |
| JPH0553376B2 (ja) * | 1988-06-03 | 1993-08-09 | Hamamatsu Photonics Kk | |
| JPH0251043A (ja) * | 1988-08-11 | 1990-02-21 | Hamamatsu Photonics Kk | 隔体の気体透過試験方法 |
| JPH0553377B2 (ja) * | 1988-08-11 | 1993-08-09 | Hamamatsu Photonics Kk | |
| JPH03154853A (ja) * | 1989-10-23 | 1991-07-02 | Abbott Lab | 化学的異種発光検定方法とその装置 |
| JPH03173231A (ja) * | 1989-12-01 | 1991-07-26 | Nec Corp | 自動車電話制御装置 |
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