JPH0650315B2 - 免疫分析用試薬および免疫分析方法 - Google Patents
免疫分析用試薬および免疫分析方法Info
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- JPH0650315B2 JPH0650315B2 JP60248841A JP24884185A JPH0650315B2 JP H0650315 B2 JPH0650315 B2 JP H0650315B2 JP 60248841 A JP60248841 A JP 60248841A JP 24884185 A JP24884185 A JP 24884185A JP H0650315 B2 JPH0650315 B2 JP H0650315B2
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- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/829—Liposomes, e.g. encapsulation
Description
【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は、免疫分析用試薬および免疫分析方法に係り、
特に生体液中の標的物質（抗原または抗体）を蛍光偏光
法を利用して分析測定するに好適な試薬および分析方法
に関する。
特に生体液中の標的物質（抗原または抗体）を蛍光偏光
法を利用して分析測定するに好適な試薬および分析方法
に関する。
従来の免疫分析方法として、蛍光物質を標識した抗原を
用いて免疫反応を生じさせ、反応液からの蛍光を測定し
て試料中の標的物質を定量分析する方法がある。この方
法を実行し得る装置として、例えば、特開昭59−147266
や特開昭59−217123が知られている。特に後者は、蛍光
側光路に回転偏光子を設け、励起光と平行な偏光成分と
垂直な偏光成分とを取り出し、蛍光偏光を測定するもの
である。
用いて免疫反応を生じさせ、反応液からの蛍光を測定し
て試料中の標的物質を定量分析する方法がある。この方
法を実行し得る装置として、例えば、特開昭59−147266
や特開昭59−217123が知られている。特に後者は、蛍光
側光路に回転偏光子を設け、励起光と平行な偏光成分と
垂直な偏光成分とを取り出し、蛍光偏光を測定するもの
である。
けい光性分子が偏光した光で励起されると、光の吸収と
発光の間に分子のブラウン運動による回転で、励起分子
の配向性が解消してけい光の偏光度が低下する。励起光
側の偏光板を垂直に固定し、けい光側の偏光板をそれに
平行にしたときに得られる蛍光強度をＩとし、垂直に
したときに得られる蛍光強度をＩ⊥とすると、蛍光偏光
度Ｐは次式で表わされる。
発光の間に分子のブラウン運動による回転で、励起分子
の配向性が解消してけい光の偏光度が低下する。励起光
側の偏光板を垂直に固定し、けい光側の偏光板をそれに
平行にしたときに得られる蛍光強度をＩとし、垂直に
したときに得られる蛍光強度をＩ⊥とすると、蛍光偏光
度Ｐは次式で表わされる。
Ｐ＝（Ｉ−Ｉ⊥）／（Ｉ＋Ｉ⊥） …(1) 蛍光物質で標識した抗原が、対応する抗体と結合する
と、分子が著しく大きくなり、けい光分子の回転ブラウ
ン運動が抑えられ、偏光度は抗体が結合する前に比べて
大きくなる。上記の原理を利用したものがけい光偏光分
析（polarization fluoroimmunoassay）であり、まずけ
い光標識抗原と抗体を反応させ、この系に測定しようと
する非標識抗原（未知物質）を加えると抗体を消費し、
抗体と結合する標識抗原が少なくなり、結合しないもの
が多くなる。このものは低分子なので回転ブラウン運動
が活発に起こり、偏光度が小さくなることから、小さく
なった程度に応じ、未知物質の量を求めることができ
る。
と、分子が著しく大きくなり、けい光分子の回転ブラウ
ン運動が抑えられ、偏光度は抗体が結合する前に比べて
大きくなる。上記の原理を利用したものがけい光偏光分
析（polarization fluoroimmunoassay）であり、まずけ
い光標識抗原と抗体を反応させ、この系に測定しようと
する非標識抗原（未知物質）を加えると抗体を消費し、
抗体と結合する標識抗原が少なくなり、結合しないもの
が多くなる。このものは低分子なので回転ブラウン運動
が活発に起こり、偏光度が小さくなることから、小さく
なった程度に応じ、未知物質の量を求めることができ
る。
従来の蛍光偏光を利用した免疫分析方法は、蛍光のバツ
クグラウンドが大きく、実用的に満足な測定精度が得ら
れなかつた。
クグラウンドが大きく、実用的に満足な測定精度が得ら
れなかつた。
本発明の目的は、蛍光偏光法による免疫分析の測定精度
を向上し得る免疫分析方法およびこの分析方法に適用と
得る免疫分析試薬を提供することにある。
を向上し得る免疫分析方法およびこの分析方法に適用と
得る免疫分析試薬を提供することにある。
本発明の免疫分析方法では、蛍光物質を含む特定の流動
性を有する流体を収容しており抗原又は抗体で標識され
た小胞体と、抗体又は抗原を含む液体試料と、補体とを
混合し、小胞体内の流体とこれらの小胞体の外の溶液と
の流動性が異なる状態で免疫反応を生ぜしめ、この反応
液に励起光を照射して反応液に基づく蛍光偏光を測定
し、上記試料中の標的物質の濃度を求めることを特徴と
する。
性を有する流体を収容しており抗原又は抗体で標識され
た小胞体と、抗体又は抗原を含む液体試料と、補体とを
混合し、小胞体内の流体とこれらの小胞体の外の溶液と
の流動性が異なる状態で免疫反応を生ぜしめ、この反応
液に励起光を照射して反応液に基づく蛍光偏光を測定
し、上記試料中の標的物質の濃度を求めることを特徴と
する。
また、本発明免疫分析用試薬では、抗原又は抗体で標識
された小胞体内に蛍光物質を含む特定の流動性を有する
流体が収容されており、小胞体の外の溶液の流動性が小
胞体内の流体の流動性とは異なるように調製されてい
る。補体は、この試薬中にあらかじめ含有させておいて
もよく、あるいは試料と試薬を混合させる際に試料液に
添加してもよい。
された小胞体内に蛍光物質を含む特定の流動性を有する
流体が収容されており、小胞体の外の溶液の流動性が小
胞体内の流体の流動性とは異なるように調製されてい
る。補体は、この試薬中にあらかじめ含有させておいて
もよく、あるいは試料と試薬を混合させる際に試料液に
添加してもよい。
本発明に基づけば、免疫反応が生じた際に、小胞体内部
より流出する蛍光物質から生ずる蛍光の偏光解消度が、
液の流動性もしくは粘性の違いによつて変化するので、
小胞体内外の標識物質を弁別測定することにより試料中
の抗原又は抗体を定量分析し得る。
より流出する蛍光物質から生ずる蛍光の偏光解消度が、
液の流動性もしくは粘性の違いによつて変化するので、
小胞体内外の標識物質を弁別測定することにより試料中
の抗原又は抗体を定量分析し得る。
本発明に基づく免疫分析用試薬は、抗原又は抗体で標識
された膜を持ち内部に蛍光物質が収容された小胞体を有
する溶液からなる。しかもこの小胞体は、補体活性によ
り溶解作用を受ける性質を有している。このような小胞
体としては、動物たとえば羊の赤血球を用いることがで
きる。他の動物の赤血球あるいは赤血球以外の動物細胞
又は人工膜であるリポソームであつても、膜に抗体ある
いは抗原を結合し、内部に蛍光物質を収容することがで
きれば本発明における小胞体として使用することができ
る。膜に結合される抗体あるいは抗原は、被験試料中の
抗原又は抗体と特異的に反応するものを用いる。たとえ
ば測定対象物質が、被験試料中のインシユリンであると
きには、膜には抗インシユリン抗体を結合させる。
された膜を持ち内部に蛍光物質が収容された小胞体を有
する溶液からなる。しかもこの小胞体は、補体活性によ
り溶解作用を受ける性質を有している。このような小胞
体としては、動物たとえば羊の赤血球を用いることがで
きる。他の動物の赤血球あるいは赤血球以外の動物細胞
又は人工膜であるリポソームであつても、膜に抗体ある
いは抗原を結合し、内部に蛍光物質を収容することがで
きれば本発明における小胞体として使用することができ
る。膜に結合される抗体あるいは抗原は、被験試料中の
抗原又は抗体と特異的に反応するものを用いる。たとえ
ば測定対象物質が、被験試料中のインシユリンであると
きには、膜には抗インシユリン抗体を結合させる。
小胞体たとえば羊の赤血球の細胞膜に、抗体たとえば羊
赤血球抗体を結合し、赤血球内に蛍光標識物質たとえば
カルボキシフルオレセインを収容した小胞体の調製法の
一例を次に述べる。まず、羊赤血球をサスペンドした等
張液（０．１５Ｍ塩化ナトリウム含有緩衝液ｐＨ７．
４）と羊赤血球抗体（市販品）とを混合し、羊赤血球の
細胞膜上に抗体を吸着させる。次に、常法である透析法
によつて赤血球内から細胞液等を排出して赤血球内にカ
ルボキシフルオレセインを収容する。このときのカルボ
キシフルオレセインの濃度は、後述の免疫分析方法の必
要に応じて適宜決定することができる。
赤血球抗体を結合し、赤血球内に蛍光標識物質たとえば
カルボキシフルオレセインを収容した小胞体の調製法の
一例を次に述べる。まず、羊赤血球をサスペンドした等
張液（０．１５Ｍ塩化ナトリウム含有緩衝液ｐＨ７．
４）と羊赤血球抗体（市販品）とを混合し、羊赤血球の
細胞膜上に抗体を吸着させる。次に、常法である透析法
によつて赤血球内から細胞液等を排出して赤血球内にカ
ルボキシフルオレセインを収容する。このときのカルボ
キシフルオレセインの濃度は、後述の免疫分析方法の必
要に応じて適宜決定することができる。
また、小胞体たとえばリポソームに抗原を結合するリポ
ソームの調製方法は、Methods in Enzymology，７４
巻、１５２〜１６１頁に記載のＴ．Ｔ．SAMUELらの方法
に準じた。蛍光物質たとえばカルボキシフルオレセイン
を収容する小胞体内の流体の流動性と、小胞体外の溶液
（試薬としての）の流動性は、異なるように試薬系を構
成する。流動性は、例えばグリセリンやポリビニルアル
コールなどの化学物質の濃度を制御することにより適宜
調節することができる。本発明では、小胞体内外の流動
性はどちらが高くても、あるいは低くてもよい。抗原抗
体反応に起因して小胞体が損傷し、小胞体内から蛍光物
質が流出したとき、流動性に関して蛍光物質をとりまく
環境が変化するように、小胞体内外の流動性を決定す
る。すなわち、小胞体内外において蛍光物質の回転自由
度が異なるようにする。
ソームの調製方法は、Methods in Enzymology，７４
巻、１５２〜１６１頁に記載のＴ．Ｔ．SAMUELらの方法
に準じた。蛍光物質たとえばカルボキシフルオレセイン
を収容する小胞体内の流体の流動性と、小胞体外の溶液
（試薬としての）の流動性は、異なるように試薬系を構
成する。流動性は、例えばグリセリンやポリビニルアル
コールなどの化学物質の濃度を制御することにより適宜
調節することができる。本発明では、小胞体内外の流動
性はどちらが高くても、あるいは低くてもよい。抗原抗
体反応に起因して小胞体が損傷し、小胞体内から蛍光物
質が流出したとき、流動性に関して蛍光物質をとりまく
環境が変化するように、小胞体内外の流動性を決定す
る。すなわち、小胞体内外において蛍光物質の回転自由
度が異なるようにする。
試薬中の補体は、動物の血液中に含まれているものを使
用することができる。たとえば、モルモツトの血清を補
体含有液としてそのまま使用することができる。
用することができる。たとえば、モルモツトの血清を補
体含有液としてそのまま使用することができる。
第１図に本発明の実施に用いる装置例の概略構成を示
す。試料セル３は、移動可能な反応容器として用いら
れ、光度計の光路に位置づけられ得る。試料セル３が光
路に位置づけられる前に、試料セルにはフルオレセイン
系けい光物質を収容し抗原で標識した小胞体を含む試薬
液を所定量加え、さらに対応する抗体を含む血液試料を
所定量加えることによつて抗原抗体反応を生ぜしめる。
続いて試料セルは第１図のように光路に位置づけられ
る。
す。試料セル３は、移動可能な反応容器として用いら
れ、光度計の光路に位置づけられ得る。試料セル３が光
路に位置づけられる前に、試料セルにはフルオレセイン
系けい光物質を収容し抗原で標識した小胞体を含む試薬
液を所定量加え、さらに対応する抗体を含む血液試料を
所定量加えることによつて抗原抗体反応を生ぜしめる。
続いて試料セルは第１図のように光路に位置づけられ
る。
この試料セル３には特定波長の偏光が励起光として照射
される。光源１からの光は、励起波長選択器１１を通つ
たあと偏光フイルタ２を通つてセル３に照射される。セ
ル３の少なくとも励起光入射方向と二つのけい光取出方
向の壁面は透光性材料からなつている。試料から発生さ
れるけい光の垂直偏光成分は、固定設置されている垂直
偏光フイルタ７を選択的に透過し光検出器１４で受光さ
れる。また試料からのけい光の平行偏光成分は、固定設
置されている平行偏光フイルタ８を選択的に透過し光検
出器４で受光される。二方向のけい光光路には、けい光
波長選択器１２，１３が配置され、同じけい光波長が選
択される。第１図ではけい光波長選択器を２つ設けてい
るが、けい光の取出方向を一方向とし、１つの波長選択
器で特定の波長光を選択した後、光路を２つに分岐して
各分岐光路に違う偏光成分を取り出す偏光フイルタを設
けることもできる。
される。光源１からの光は、励起波長選択器１１を通つ
たあと偏光フイルタ２を通つてセル３に照射される。セ
ル３の少なくとも励起光入射方向と二つのけい光取出方
向の壁面は透光性材料からなつている。試料から発生さ
れるけい光の垂直偏光成分は、固定設置されている垂直
偏光フイルタ７を選択的に透過し光検出器１４で受光さ
れる。また試料からのけい光の平行偏光成分は、固定設
置されている平行偏光フイルタ８を選択的に透過し光検
出器４で受光される。二方向のけい光光路には、けい光
波長選択器１２，１３が配置され、同じけい光波長が選
択される。第１図ではけい光波長選択器を２つ設けてい
るが、けい光の取出方向を一方向とし、１つの波長選択
器で特定の波長光を選択した後、光路を２つに分岐して
各分岐光路に違う偏光成分を取り出す偏光フイルタを設
けることもできる。
いずれの場合も、光検出器４および１４は同時に同じ発
光源からのけい光を観測できる。各受光信号は増幅器
５，１５で増幅され、演算器９にてけい光偏光度の演算
に供される。演算結果は、被検成分の濃度として、ある
いはけい光偏光度として表示装置６に表示される。
光源からのけい光を観測できる。各受光信号は増幅器
５，１５で増幅され、演算器９にてけい光偏光度の演算
に供される。演算結果は、被検成分の濃度として、ある
いはけい光偏光度として表示装置６に表示される。
本発明に基づく分析方法の第１の例は、蛋白質性の抗原
などのように分子量の比較的大きな物質を蛍光偏光法に
より定量するのに適している。従来の蛍光偏光法による
免疫分析法はいずれも測定対象物質が低分子量物質に限
られており、蛋白質などの高分子量物質を蛍光偏光法に
よつて定量することは不可能であつた。
などのように分子量の比較的大きな物質を蛍光偏光法に
より定量するのに適している。従来の蛍光偏光法による
免疫分析法はいずれも測定対象物質が低分子量物質に限
られており、蛋白質などの高分子量物質を蛍光偏光法に
よつて定量することは不可能であつた。
この実施例では、被検試料例えば血液中の抗原を測定
し、試薬中の小胞体としては、試料中の抗原と特異的に
反応する抗体を膜上に結合させたものを用いる。この小
胞体内部には、蛍光物質および流動性を減ずるためのグ
リセリンが収容されている。試薬液には、小胞体の外に
補体が含有されている。小胞体外の液はグリセリンを含
まないので流動性が高い。
し、試薬中の小胞体としては、試料中の抗原と特異的に
反応する抗体を膜上に結合させたものを用いる。この小
胞体内部には、蛍光物質および流動性を減ずるためのグ
リセリンが収容されている。試薬液には、小胞体の外に
補体が含有されている。小胞体外の液はグリセリンを含
まないので流動性が高い。
まず、反応容器内に被検試料と試薬を添加し、混合す
る。生じた抗原抗体反応により補体が活性化され、これ
によつて小胞体が損傷をうけ小胞体内から蛍光物質が流
出する。試料中の抗原量に応じて小胞体から流出する蛍
光物質量は変動する。さらに、小胞体内は流動性が抑制
されているので、蛍光分子の回転は抑えられるが、抗原
抗体反応により小胞体が損傷を受け蛍光物質が小胞体か
ら流出すると、蛍光分子は自由に回転できる状態にな
る。
る。生じた抗原抗体反応により補体が活性化され、これ
によつて小胞体が損傷をうけ小胞体内から蛍光物質が流
出する。試料中の抗原量に応じて小胞体から流出する蛍
光物質量は変動する。さらに、小胞体内は流動性が抑制
されているので、蛍光分子の回転は抑えられるが、抗原
抗体反応により小胞体が損傷を受け蛍光物質が小胞体か
ら流出すると、蛍光分子は自由に回転できる状態にな
る。
所定時間後、反応液に励起用偏光を照射し、反応液から
の蛍光偏光の解消度を測定し、試料中の抗原濃度を演算
する。この場合、(1) 式の蛍光偏光度は両蛍光偏光の強
度に差がないほど低い値となり、いいかえれば、蛍光偏
光の度合が解消されることになるので、蛍光偏光解消度
（Ｐ値）とも称する。検量線は、既知濃度の抗原が含ま
れる標準試料をあらかじめ測定し分析計の制御記憶部に
記憶しておき、実試料測定時に演算に利用する。
の蛍光偏光の解消度を測定し、試料中の抗原濃度を演算
する。この場合、(1) 式の蛍光偏光度は両蛍光偏光の強
度に差がないほど低い値となり、いいかえれば、蛍光偏
光の度合が解消されることになるので、蛍光偏光解消度
（Ｐ値）とも称する。検量線は、既知濃度の抗原が含ま
れる標準試料をあらかじめ測定し分析計の制御記憶部に
記憶しておき、実試料測定時に演算に利用する。
本発明に基づく分析方法の第２の例は、比較的低分子量
の物質を蛍光偏光法により定量するのに適している。こ
の実施例では、被検試料中の抗原と小胞体膜に結合され
た抗原とが、競合して抗体と反応される。免疫分析用第
１試薬は、抗原で標識された小胞体および補体を含む液
からなる。小胞体内には、蛍光物質とポリビニルアルコ
ールが収容されており、流動性が小胞体の外の溶液より
低い流体が形成されている。第２試薬液には、測定しよ
うとする抗原と特異的に反応する抗体が含有されてい
る。
の物質を蛍光偏光法により定量するのに適している。こ
の実施例では、被検試料中の抗原と小胞体膜に結合され
た抗原とが、競合して抗体と反応される。免疫分析用第
１試薬は、抗原で標識された小胞体および補体を含む液
からなる。小胞体内には、蛍光物質とポリビニルアルコ
ールが収容されており、流動性が小胞体の外の溶液より
低い流体が形成されている。第２試薬液には、測定しよ
うとする抗原と特異的に反応する抗体が含有されてい
る。
まず、測定しようとする抗原を含む試料と、第１試薬液
と、第２試薬液とを反応容器に採取し混合する。試料中
の抗原は、小胞体と結合している抗原と競合して、第２
試薬液の抗体と反応する。生じた抗原抗体反応により前
述の場合と同様に小胞体内から蛍光物質が流出する。そ
こで、小胞体内から流出して自由に回転できる状態にあ
る蛍光物質と、未反応の小胞体内にあり回転が抑制され
ている蛍光物質とを蛍光偏光法により測定することによ
つて、試料中の抗原を定量する。
と、第２試薬液とを反応容器に採取し混合する。試料中
の抗原は、小胞体と結合している抗原と競合して、第２
試薬液の抗体と反応する。生じた抗原抗体反応により前
述の場合と同様に小胞体内から蛍光物質が流出する。そ
こで、小胞体内から流出して自由に回転できる状態にあ
る蛍光物質と、未反応の小胞体内にあり回転が抑制され
ている蛍光物質とを蛍光偏光法により測定することによ
つて、試料中の抗原を定量する。
小胞体内に収容する蛍光物質は、未反応の状態では濃度
消光により蛍光を出さず、小胞体外に流出することによ
つて希薄になると蛍光を出すような例えばカルボキシフ
ルオレセインが使われることが多い。しかしながら、調
製する小胞体の膜の状態あるいは蛍光物質の濃度によつ
ては、未反応の小胞体から発する蛍光を無視できずに測
定精度および測定感度の向上を妨げる要因となる。本方
法によれば、この欠点は改良される。
消光により蛍光を出さず、小胞体外に流出することによ
つて希薄になると蛍光を出すような例えばカルボキシフ
ルオレセインが使われることが多い。しかしながら、調
製する小胞体の膜の状態あるいは蛍光物質の濃度によつ
ては、未反応の小胞体から発する蛍光を無視できずに測
定精度および測定感度の向上を妨げる要因となる。本方
法によれば、この欠点は改良される。
上述したように本発明の実施例に基づけば、蛍光偏光法
によつて低分子量物質と高分子量物質の両者を定量する
ことができる。また、従来の標識法と比較して小胞体内
に収容する蛍光物質量が大過剰であるため、短時間・高
感度分析を実現することができる。
によつて低分子量物質と高分子量物質の両者を定量する
ことができる。また、従来の標識法と比較して小胞体内
に収容する蛍光物質量が大過剰であるため、短時間・高
感度分析を実現することができる。
次に実験例を示す。
（実験例１） 小胞体内外の流動性を制御する際の指標として粘度の異
なる試料について蛍光偏光の解消度を測定した。試料に
は濃度の異なるグリセリン溶液をカルボキシフルオレセ
イン水溶液とともに用いた。結果を第２図に示す。図の
ように、グリセリンの他に、ポリビニルアルコールにつ
いても同様の結果が得られた。
なる試料について蛍光偏光の解消度を測定した。試料に
は濃度の異なるグリセリン溶液をカルボキシフルオレセ
イン水溶液とともに用いた。結果を第２図に示す。図の
ように、グリセリンの他に、ポリビニルアルコールにつ
いても同様の結果が得られた。
（実験例２） 小胞体として羊赤血球を用い、常法に従い蛍光標識物質
としてカルボキシフルオレセインを、又流動性低下剤と
して０．８％ポリビニルアルコールを用いた。あらかじ
め調製したＴ４含有量既知の試料１０μと、抗Ｔ４抗
体２５μと、Ｔ４を結合させた羊赤血球試液５０μ
と補体15μと０．０５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）９００μを混合して３７℃で１５分間反応させ
た。次いで、反応液の蛍光偏光解消度を測定した。この
とき、励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５１５ｎｍとし
た。この結果を第３図に示す。
としてカルボキシフルオレセインを、又流動性低下剤と
して０．８％ポリビニルアルコールを用いた。あらかじ
め調製したＴ４含有量既知の試料１０μと、抗Ｔ４抗
体２５μと、Ｔ４を結合させた羊赤血球試液５０μ
と補体15μと０．０５Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．
４）９００μを混合して３７℃で１５分間反応させ
た。次いで、反応液の蛍光偏光解消度を測定した。この
とき、励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５１５ｎｍとし
た。この結果を第３図に示す。
（実験例３） 小胞体としてスフインゴミエリンから成るリポソームを
用い、蛍光標識物質として０．８％ポリビニルアルコー
ルを含むカルボキシフルオレセインを用いた。あらかじ
め調製した濃度既知のα−フエトプロテインを含む試料
１０μと、抗α−フエトプロテイン抗体を結合したリ
ポソーム試液５０μと補体１５μと０．０５Ｍトリ
ス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）９２５μを混合して３７
℃で１５分間反応させた。次いで、反応液の蛍光偏光解
消度を測定した。この結果を第４図に示す。
用い、蛍光標識物質として０．８％ポリビニルアルコー
ルを含むカルボキシフルオレセインを用いた。あらかじ
め調製した濃度既知のα−フエトプロテインを含む試料
１０μと、抗α−フエトプロテイン抗体を結合したリ
ポソーム試液５０μと補体１５μと０．０５Ｍトリ
ス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）９２５μを混合して３７
℃で１５分間反応させた。次いで、反応液の蛍光偏光解
消度を測定した。この結果を第４図に示す。
本発明によれば、蛍光物質を収容した小胞体の内外の液
の流動性を異ならしめることにより、実用に供し得る高
い測定精度で免疫分析を行うことができる。
の流動性を異ならしめることにより、実用に供し得る高
い測定精度で免疫分析を行うことができる。
第１図は本発明を実行するに適した分析装置の一例を示
す図、第２図は溶媒の粘度と蛍光偏光解消度の関係を示
す実験結果の図、第３図はＴ４定量用検量線例を示す
図、第４図はα−フエトプロテイン定量用検量線例を示
す図である。 ２，７，８……偏光フイルタ、３……試料セル、４，１
４……光検出器。
す図、第２図は溶媒の粘度と蛍光偏光解消度の関係を示
す実験結果の図、第３図はＴ４定量用検量線例を示す
図、第４図はα−フエトプロテイン定量用検量線例を示
す図である。 ２，７，８……偏光フイルタ、３……試料セル、４，１
４……光検出器。
Claims (2)
- 【請求項１】抗原又は抗体で標識された小胞体が溶液中
に含有された免疫分析用試薬において、上記小胞体内に
蛍光物質を含む流体が収容されており、上記小胞体の外
の溶液の流動性が上記小胞体内の上記流体の流動性とは
異なり、且つ上記小胞体内の上記流体の流動性は免疫反
応を行うときの上記小胞体の外の液の流動性とは異なる
ように調製された免疫分析用試薬。 - 【請求項２】蛍光物質を含む流体を収容しており抗原又
は抗体で標識された小胞体と、抗体又は抗原を含む液体
試料と、補体とを混合し、上記小胞体内の流体と上記小
胞体の外の溶液との流動性が異なる状態で免疫反応を生
ぜしめ、この反応液に励起光を照射して反応液に基づく
蛍光偏光を測定し、上記試料中の標的物質の濃度を求め
ることを特徴とする免疫分析方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60248841A JPH0650315B2 (ja) | 1985-11-08 | 1985-11-08 | 免疫分析用試薬および免疫分析方法 |
| DE8686115452T DE3671533D1 (de) | 1985-11-08 | 1986-11-07 | Immunotestverfahren und reagenz dafuer. |
| US06/927,932 US4916080A (en) | 1985-11-08 | 1986-11-07 | Immunoassay with antigen or antibody labelled microcapsules containing fluorescent substance |
| EP86115452A EP0222341B1 (en) | 1985-11-08 | 1986-11-07 | A method for immunoassay and reagents therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60248841A JPH0650315B2 (ja) | 1985-11-08 | 1985-11-08 | 免疫分析用試薬および免疫分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62110155A JPS62110155A (ja) | 1987-05-21 |
| JPH0650315B2 true JPH0650315B2 (ja) | 1994-06-29 |
Family
ID=17184212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60248841A Expired - Lifetime JPH0650315B2 (ja) | 1985-11-08 | 1985-11-08 | 免疫分析用試薬および免疫分析方法 |
Country Status (4)
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|---|---|
| US (1) | US4916080A (ja) |
| EP (1) | EP0222341B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0650315B2 (ja) |
| DE (1) | DE3671533D1 (ja) |
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| EP0257758B1 (en) * | 1986-08-07 | 1993-03-10 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Stable biologically active fluorochemical emulsions |
| JPH0799374B2 (ja) * | 1987-02-06 | 1995-10-25 | 株式会社日立製作所 | 免疫分析用試薬およびこれを用いる免疫分析方法 |
| JP2780116B2 (ja) * | 1989-07-31 | 1998-07-30 | 日水製薬株式会社 | リポソーム分散液安定化剤 |
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| US5756362A (en) * | 1993-10-12 | 1998-05-26 | Cornell Research Foundation, Inc. | Liposome-enhanced immunoaggregation assay and test device |
| US5660991A (en) * | 1994-10-28 | 1997-08-26 | Lakowicz; Joseph R. | Long lifetime anisotropy (polarization) probes for clinical chemistry, immunoassays, affinity assays and biomedical research |
| US5856194A (en) | 1996-09-19 | 1999-01-05 | Abbott Laboratories | Method for determination of item of interest in a sample |
| US5795784A (en) | 1996-09-19 | 1998-08-18 | Abbott Laboratories | Method of performing a process for determining an item of interest in a sample |
| WO2000006990A2 (en) | 1998-07-27 | 2000-02-10 | Ljl Biosystems, Inc. | Apparatus and methods for time-resolved spectroscopic measurements |
| US6326605B1 (en) | 1998-02-20 | 2001-12-04 | Ljl Biosystems, Inc. | Broad range light detection system |
| GB9801120D0 (en) * | 1998-01-21 | 1998-03-18 | Secr Defence | Detection system |
| AU5223899A (en) | 1998-07-27 | 2000-02-21 | Ljl Biosystems, Inc. | Apparatus and methods for spectroscopic measurements |
| ATE273516T1 (de) * | 1999-06-23 | 2004-08-15 | Cornell Res Foundation Inc | Entwässerung/rehydratisierung von markierten liposomen auf einer prüfeinrichtung |
| US6576460B1 (en) | 1999-10-28 | 2003-06-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Filtration-detection device and method of use |
| ATE354793T1 (de) * | 2000-03-20 | 2007-03-15 | Analytical Biolog Services Inc | Verfahren zur erkennung eines analyten durch fluoreszenz |
| WO2003102541A2 (en) | 2002-05-31 | 2003-12-11 | Cornell Research Foundation, Inc. | Universal biosensor and methods of use |
| KR101356279B1 (ko) * | 2011-04-21 | 2014-01-28 | 충북대학교 산학협력단 | 생체분자 상호작용 검출 시스템 및 이를 이용한 검출 방법 |
| CN113167790A (zh) * | 2018-10-24 | 2021-07-23 | 凸版印刷株式会社 | 免疫测定用杯及其制造方法、以及免疫测定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57108643A (en) * | 1980-12-26 | 1982-07-06 | Hitachi Ltd | Method for measuring reaction |
| US4483921A (en) * | 1981-01-12 | 1984-11-20 | Collaborative Research, Inc. | Immunoassay with antigen or antibody labeled liposomes sequestering enzyme |
| US4650770A (en) * | 1981-04-27 | 1987-03-17 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Energy absorbing particle quenching in light emitting competitive protein binding assays |
| US4483929A (en) * | 1982-05-03 | 1984-11-20 | Liposome Technology Incorporated | Liposomes with glycolipid-linked antibodies |
-
1985
- 1985-11-08 JP JP60248841A patent/JPH0650315B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-11-07 US US06/927,932 patent/US4916080A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-11-07 EP EP86115452A patent/EP0222341B1/en not_active Expired
- 1986-11-07 DE DE8686115452T patent/DE3671533D1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3671533D1 (de) | 1990-06-28 |
| JPS62110155A (ja) | 1987-05-21 |
| EP0222341B1 (en) | 1990-05-23 |
| EP0222341A1 (en) | 1987-05-20 |
| US4916080A (en) | 1990-04-10 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |