JP2020532963A - Rnaポリメラーゼバリアント - Google Patents
Rnaポリメラーゼバリアント Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020532963A JP2020532963A JP2020509060A JP2020509060A JP2020532963A JP 2020532963 A JP2020532963 A JP 2020532963A JP 2020509060 A JP2020509060 A JP 2020509060A JP 2020509060 A JP2020509060 A JP 2020509060A JP 2020532963 A JP2020532963 A JP 2020532963A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- rna polymerase
- ome
- rna
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 title claims abstract description 387
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 title claims abstract description 387
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 736
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 541
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 claims abstract description 279
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 131
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 107
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims abstract description 95
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 94
- 102220484577 Protein NDNF_S43A_mutation Human genes 0.000 claims abstract description 79
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims abstract description 66
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 61
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 53
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 50
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims abstract description 19
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 9
- 102220005330 rs34956202 Human genes 0.000 claims abstract 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims description 327
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 242
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 223
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 197
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 73
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 68
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 68
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 68
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 62
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 62
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 61
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 61
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 60
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 59
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 59
- -1 nucleoside triphosphates Chemical class 0.000 claims description 58
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 55
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 51
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 51
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 51
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 51
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 46
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 44
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims description 44
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims description 44
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 41
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 38
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 35
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 34
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 29
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 27
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 25
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 24
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 23
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 22
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 21
- 101100030389 Dictyostelium discoideum ppp4c gene Proteins 0.000 claims description 20
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 20
- 101150113223 pppA gene Proteins 0.000 claims description 20
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 12
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 12
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N Guanine Natural products O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical group O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims description 6
- UNYRXUHVPHCQHZ-ZLOOHWKQSA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate;[(2r,3s,4r,5r)-5-(2,4-dioxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1.C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UNYRXUHVPHCQHZ-ZLOOHWKQSA-N 0.000 claims description 5
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 claims description 4
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 656
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 4
- 102220005204 rs63750783 Human genes 0.000 description 188
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 69
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 58
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 58
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 53
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 46
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 43
- 239000000047 product Substances 0.000 description 37
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 32
- 102220490099 Neutral ceramidase_R257A_mutation Human genes 0.000 description 30
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 27
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 27
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 27
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 26
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 26
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 24
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 24
- XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N Guanosine-5'-triphosphate Chemical class C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 22
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 21
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical class C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 20
- PGAVKCOVUIYSFO-XVFCMESISA-N UTP Chemical class O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 PGAVKCOVUIYSFO-XVFCMESISA-N 0.000 description 19
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 18
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 17
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 16
- 210000004980 monocyte derived macrophage Anatomy 0.000 description 16
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 16
- UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 1-methylpseudouridine Chemical compound O=C1NC(=O)N(C)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 15
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 1-methylpseudouridine Natural products O=C1NC(=O)N(C)C=C1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- PCDQPRRSZKQHHS-XVFCMESISA-N CTP Chemical class O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 PCDQPRRSZKQHHS-XVFCMESISA-N 0.000 description 13
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 13
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 13
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 102220631830 AH receptor-interacting protein_E42R_mutation Human genes 0.000 description 11
- 102220604081 Homeobox protein SIX3_E45R_mutation Human genes 0.000 description 11
- 102220615649 Synaptotagmin-3_M46A_mutation Human genes 0.000 description 11
- 108010028263 bacteriophage T3 RNA polymerase Proteins 0.000 description 11
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 11
- PGAVKCOVUIYSFO-UHFFFAOYSA-N uridine-triphosphate Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 PGAVKCOVUIYSFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108010065868 RNA polymerase SP6 Proteins 0.000 description 10
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 229950010342 uridine triphosphate Drugs 0.000 description 10
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 10
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 9
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 9
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 125000006552 (C3-C8) cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 7
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 description 7
- 150000001295 alanines Chemical class 0.000 description 7
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 7
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 125000006570 (C5-C6) heteroaryl group Chemical group 0.000 description 6
- ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 5-methoxyuridine Chemical compound O=C1NC(=O)C(OC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 0.000 description 6
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 description 6
- 102220480322 Copper-transporting ATPase 2_Y44A_mutation Human genes 0.000 description 6
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 6
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 description 5
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 5
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 5
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 5
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102220480922 Nicotinate phosphoribosyltransferase_G47L_mutation Human genes 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 108010046983 Ribonuclease T1 Proteins 0.000 description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 5
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 5
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 5
- XKMLYUALXHKNFT-UHFFFAOYSA-N rGTP Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XKMLYUALXHKNFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 102220005148 rs34743882 Human genes 0.000 description 5
- 102200082806 rs35303218 Human genes 0.000 description 5
- 102220231743 rs367575427 Human genes 0.000 description 5
- 102220081547 rs863223734 Human genes 0.000 description 5
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 108091069025 single-strand RNA Proteins 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 4
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OLRONOIBERDKRE-XUTVFYLZSA-N [[(2r,3s,4r,5s)-3,4-dihydroxy-5-(1-methyl-2,4-dioxopyrimidin-5-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical class O=C1NC(=O)N(C)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 OLRONOIBERDKRE-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 3
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 3
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 3
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 102200020898 rs122453115 Human genes 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 3
- GBXQPDCOMJJCMJ-UHFFFAOYSA-M trimethyl-[6-(trimethylazaniumyl)hexyl]azanium;bromide Chemical compound [Br-].C[N+](C)(C)CCCCCC[N+](C)(C)C GBXQPDCOMJJCMJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWIADYZPOWUWEW-XVFCMESISA-N CDP Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 ZWIADYZPOWUWEW-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGWNDRXFNXRZMB-UUOKFMHZSA-N GDP Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O QGWNDRXFNXRZMB-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N L-alanyl-L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEFJQIDDEAULHB-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 101100273253 Rhizopus niveus RNAP gene Proteins 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- XCCTYIAWTASOJW-XVFCMESISA-N Uridine-5'-Diphosphate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 XCCTYIAWTASOJW-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000000516 activation analysis Methods 0.000 description 2
- 108010056243 alanylalanine Proteins 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 229920006227 ethylene-grafted-maleic anhydride Polymers 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGWNDRXFNXRZMB-UHFFFAOYSA-N guanidine diphosphate Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O QGWNDRXFNXRZMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 201000003694 methylmalonic acidemia Diseases 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004737 (C1-C6) haloalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000171 (C1-C6) haloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006708 (C5-C14) heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- KYEKLQMDNZPEFU-KVTDHHQDSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1,3,5-triazine-2,4-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)N=C1 KYEKLQMDNZPEFU-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- MUSPKJVFRAYWAR-XVFCMESISA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)thiolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)S[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MUSPKJVFRAYWAR-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- VBSTXRUAXCTZBQ-UHFFFAOYSA-N 1-hexyl-4-phenylpiperazine Chemical group C1CN(CCCCCC)CCN1C1=CC=CC=C1 VBSTXRUAXCTZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 2'-O-methyl uridine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001779 2'-O-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methyluridine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- OLXZPDWKRNYJJZ-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyadenosine Chemical group C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 OLXZPDWKRNYJJZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- BVLGKOVALHRKNM-XUTVFYLZSA-N 2-Thio-1-methylpseudouridine Chemical compound CN1C=C(C(=O)NC1=S)[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)CO)O)O BVLGKOVALHRKNM-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 1
- CWXIOHYALLRNSZ-JWMKEVCDSA-N 2-Thiodihydropseudouridine Chemical compound C1C(C(=O)NC(=S)N1)[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)CO)O)O CWXIOHYALLRNSZ-JWMKEVCDSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical group Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- VRVXMIJPUBNPGH-XVFCMESISA-N 2-thio-dihydrouridine Chemical compound OC[C@H]1O[C@H]([C@H](O)[C@@H]1O)N1CCC(=O)NC1=S VRVXMIJPUBNPGH-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- FGFVODMBKZRMMW-XUTVFYLZSA-N 4-Methoxy-2-thiopseudouridine Chemical compound COC1=C(C=NC(=S)N1)[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)CO)O)O FGFVODMBKZRMMW-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 1
- HOCJTJWYMOSXMU-XUTVFYLZSA-N 4-Methoxypseudouridine Chemical compound COC1=C(C=NC(=O)N1)[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)CO)O)O HOCJTJWYMOSXMU-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 1
- VTGBLFNEDHVUQA-XUTVFYLZSA-N 4-Thio-1-methyl-pseudouridine Chemical compound S=C1NC(=O)N(C)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 VTGBLFNEDHVUQA-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDHOXEOVAJVODV-GBNDHIKLSA-N 5-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=S)NC1=O DDHOXEOVAJVODV-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- BNAWMJKJLNJZFU-GBNDHIKLSA-N 5-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=S BNAWMJKJLNJZFU-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 125000003345 AMP group Chemical group 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 108091028075 Circular RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028732 Concatemer Proteins 0.000 description 1
- 102000008158 DNA Ligase ATP Human genes 0.000 description 1
- 108010060248 DNA Ligase ATP Proteins 0.000 description 1
- YKWUPFSEFXSGRT-JWMKEVCDSA-N Dihydropseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1C(=O)NC(=O)NC1 YKWUPFSEFXSGRT-JWMKEVCDSA-N 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108700023863 Gene Components Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108020005198 Long Noncoding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710127797 Macrophage colony-stimulating factor 1 Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014450 RNA Polymerase III Human genes 0.000 description 1
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N TTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 RZCIEJXAILMSQK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- JACRWUWPXAESPB-QMMMGPOBSA-N Tropic acid Natural products OC[C@H](C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JACRWUWPXAESPB-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIJVOACVHQZMKI-JXOAFFINSA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 YIJVOACVHQZMKI-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 229960003697 abatacept Drugs 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- MQFIKAWTCOXAAY-UHFFFAOYSA-N acetic acid;n-butylbutan-1-amine Chemical compound CC([O-])=O.CCCC[NH2+]CCCC MQFIKAWTCOXAAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 108010017893 alanyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940074608 allergen extract Drugs 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006242 amine protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960001838 canakinumab Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000001369 canonical nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- SIEILFNCEFEENQ-UHFFFAOYSA-N dibromoacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Br)Br SIEILFNCEFEENQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960000980 entecavir Drugs 0.000 description 1
- YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N entecavir hydrate Chemical compound O.C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)C1=C YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013332 literature search Methods 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000001035 methylating effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005257 nucleotidylation Effects 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960005311 telbivudine Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N telbivudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229960003636 vidarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12N9/1247—DNA-directed RNA polymerase (2.7.7.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12Y207/07006—DNA-directed RNA polymerase (2.7.7.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3521—Methyl
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
- C12N2320/53—Methods for regulating/modulating their activity reducing unwanted side-effects
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/11—Protein-serine/threonine kinases (2.7.11)
- C12Y207/11023—[RNA-polymerase-subunit] kinase (2.7.11.23)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、2017年8月18日に出願された米国仮出願第62/547,677号、2018年2月9日に出願された米国仮出願第62/628,484号、及び2018年3月5日に出願された米国仮出願第62/638,684号、2018年5月29日に出願された米国仮出願第62/677,527号の35U.S.C.§119(e)下の利益を主張し、それらの各出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
RNAポリメラーゼ(DNA依存性RNAポリメラーゼ)は、成長中のRNA鎖の3´末端へのリボヌクレオチドの連続的な付加を触媒する酵素であり(5´→3´方向のRNAの転写)、ヌクレオシド三リン酸(NTP)を酵素の基質として作用し、ヌクレオチドの配列はDNA鋳型によって特定される。転写は、塩基の相補的対合に依存する。二重ヘリックスの2本の鎖は局所的に分離し、分離した鎖の1つは鋳型(DNA鋳型)として機能する。次いで、RNAポリメラーゼは、鋳型中の相補的な塩基によって、DNA鋳型上の遊離ヌクレオチドのアライメントを触媒する。したがって、ポリメラーゼが成長中のRNA鎖の3´末端へのリボヌクレオチドの連続的な追加を触媒する場合、RNAポリメラーゼはRNAポリメラーゼ活性を有するとみなす。
本開示のRNAポリメラーゼバリアントは、WT RNAポリメラーゼと比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。例えば、配列番号1のアミノ酸配列を有するWT T7 RNAポリメラーゼに関して、43位のセリンは「野生型アミノ酸」とみなされ、43位のセリンのアラニンへの置換は高いヘリックス性向を有する「アミノ酸置換」とみなされる。
リボ核酸(RNA)合成のための共転写キャッピング方法も本明細書で提供される。すなわち、RNAは「ワンポット(one−pot)」反応で生成され、別々のキャッピング反応を必要としない。したがって、本方法は、いくつかの実施形態では、RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型をT7 RNAポリメラーゼバリアント、ヌクレオシド三リン酸、及びキャップ類似体と反応させることを含む。
環B2及び環B3はそれぞれ独立して、核酸塩基または修飾核酸塩基であり、
X2はO、S(O)p、NR24、またはCR25R26であり、pは0、1、または2であり、
Y0は、OまたはCR6R7であり、
Y1は、O、S(O)n、CR6R7、またはNR8であり、nは0、1、または2であり、
各−−−は、単結合または不存在であり、各−−−が単結合の場合、YiはO、S(O)n、CR6R7、またはNR8であり、各−−−が不存在である場合、Y1は空(void)であり、
Y2は、(OP(O)R4)m(mは0、1、または2である)または−O−(CR40R41)u−Q0−(CR42R43)v−であり、ここで、Q0は結合、O、S(O)r、NR44、またはCR45R46であり、rは0、1、または2であり、u及びvの各々は、独立して、1、2、3または4であり、
各R2及びR2´は、独立して、ハロ、LNA、またはOR3であり、
各R3は、独立して、H、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルであり、R3は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルである場合、ハロ、OH、または1つ以上のOHもしくはOC(O)−C1−C6アルキルで任意選択により置換されたC1−C6アルコキシルのうちの1つ以上で任意選択により置換され、
各R4及びR4´は、独立して、H、ハロ、C1−C6アルキル、OH、SH、SeH、またはBH3 −であり、
R6、R7、及びR8の各々は、独立して、−Q1−T1であり、ここで、Q1は、結合、またはハロ、シアノ、OH、及びC1−C6アルコキシのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C3アルキルリンカーであり、T1は、H、ハロ、OH、COOH、シアノ、またはRs1であり、ここで、Rs1は、C1−C3アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C1−C6アルコキシル、C(O)O−C1−C6アルキル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、NR31R32、(NR31R32R33)+、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5もしくは6員のヘテロアリールであり、Rs1は、ハロ、OH、オキソ、C1−C6アルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、シアノ、C1−C6アルコキシル、NR31R32、(NR31R32R33)+、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、4〜12員のヘテロシクロアルキル、及び5または6員のヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基で任意選択により置換され、
R10、R11、R12、R13R14、及びR15の各々は、独立して、−Q2−T2であり、ここで、Q2は、結合、またはハロ、シアノ、OH、及びC1−C6アルコキシのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C3アルキルリンカーであり、T2は、H、ハロ、OH、NH2、シアノ、NO2、N3、Rs2、またはORs2であり、ここで、Rs2は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、NHC(O)−C1−C6アルキル、NR31R32、(NR31R32R33)+、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5もしくは6員のヘテロアリールあり、Rs2は、ハロ、OH、オキソ、C1−C6アルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、シアノ、C1−C6アルコキシル、NR31R32、(NR31R32R33)+、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール,4〜12員のヘテロシクロアルキル、及び5または6員のヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基で任意選択により置換され、あるいはR12はR14と一緒にオキソであり、またはR13はR15と一緒にオキソであり、
R20、R21、R22、及びR23の各々は、独立して、−Q3−T3であり、ここで、Q3は、結合、またはハロ、シアノ、OH、及びC1−C6アルコキシのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C3アルキルリンカーであり、T3は、H、ハロ、OH、NH2、シアノ、NO2、N3、RS3、またはORS3であり、ここで、RS3は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、NHC(O)−C1−C6アルキル、モノ−C1−C6アルキルアミノ、ジ−C1−C6アルキルアミノ、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5もしくは6員のヘテロアリールあり、Rs3は、ハロ、OH、オキソ、C1−C6アルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、シアノ、C1−C6アルコキシル、アミノ、モノ−C1−C6アルキルアミノ、ジ−C1−C6アルキルアミノ、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、4〜12員のヘテロシクロアルキル、及び5または6員のヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基で任意選択により置換され、
R24、R25、及びR26の各々は、独立して、HまたはC1−C6アルキルであり、
R27及びR28の各々は、独立して、HまたはOR29であり、あるいはR27及びR28は一緒になって、O−R30−Oを形成し、各R29は、独立して、H、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルであり、R29、は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルである場合、ハロ、OH、または1つ以上のOHもしくはOC(O)−C1−C6アルキルで任意選択により置換されたC1−C6アルコキシルのうちの1つ以上で任意選択により置換され、
R30は、ハロ、OH、及びC1−C6アルコキシルのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C6アルキレンであり、
R31、R32、及びR33の各々は、独立して、H、C1−C6アルキル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5または6員のヘテロアリールであり、
R40、R41、R42、及びR43の各々は、独立して、H、ハロ、OH、シアノ、N3、OP(O)R47R48、または1つ以上のOP(O)R47R48で任意選択により置換されたC1−C6アルキルであり、あるいは1つのR41及び1つのR43は、それらが結合している炭素原子及びQ0と一緒になって、C4−C10シクロアルキル、4〜14員のヘテロシクロアルキル、C6−C10アリール、または5〜14員のヘテロアリールを形成し、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、または5〜6員のヘテロアリールの各々は、OH、ハロ、シアノ、N3、オキソ、OP(O)R47R48、C1−C6アルキル、C1−C6ハロアルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、C1−C6アルコキシル、C1−C6ハロアルコキシル、アミノ、モノ−C1−C6アルキルアミノ、及びジ−C1−C6アルキルアミノのうちの1つ以上で任意選択により置換され、
R44は、H、C1−C6アルキル、またはアミン保護基であり、
R45及びR46の各々は、独立して、H、OP(O)R47R48、または1つ以上のOP(O)R47R48で任意選択により置換されたC1−C6アルキルであり、
R47及びR48の各々は、独立して、H、ハロ、C1−C6アルキル、OH、SH、SeH、またはBH3 −である。
本開示のいくつかの態様は、RNA転写物の生成をもたらす条件下で、DNA鋳型をRNAポリメラーゼ(例えば、T7 RNAポリメラーゼバリアントなどのT7 RNAポリメラーゼ)と接触させることを含む、RNA転写物(例えば、mRNA転写物)を生成(合成)する方法を提供する。
本開示に従って生成されたRNA転写物には、mRNA(修飾mRNA及び/または非修飾RNAを含む)、lncRNA、自己複製RNA、環状RNA、CRISPRガイドRNAなどが含まれる。実施形態では、RNAは、ポリペプチド(例えば、治療用ポリペプチド)をコードするRNA(例えばmRNAまたは自己複製RNA)である。したがって、本開示のRNAポリメラーゼバリアントを使用して生成されたRNA転写物は、非常に多くの用途で使用され得る。
本開示のT7 RNAPバリアントは、いくつかの実施形態では、IVT反応においてトリヌクレオチドキャップなどのキャップ類似体と組み合わせて使用されるとき、IVT後の精製がなくても、検出可能なサイトカイン応答を誘導しないRNAを生成する。したがって、いくつかの実施形態では、IVT RNA及び薬学的に許容される賦形剤を含む組成物であって、IVT後の精製なしで、サイトカイン誘導RNA混入物を実質的に含まない(例えば、含まないか、または10%未満、1%未満、0.1%未満、または0.01%未満含む)、該組成物が本明細書で提供される。
本開示のRNAポリメラーゼバリアントを含むインビトロ転写キットなどのキットも本明細書で提供される。キットは、本明細書に記載の任意の1つ以上(少なくとも1つ)のIVT成分及び任意の1つ以上(少なくとも1つ)のRNAポリメラーゼバリアントを含み得る。例えば、キットは、緩衝系、NTP、及び位置E42、S43、Y44、E45、M46、G47、A255、R257、A258、G259、A260、L261及び/またはA262における少なくとも1つ(もしくは少なくとも2つ、または少なくとも3つ)のアミノ酸置換ならびに任意選択によりC末端において少なくとも1つのアミノ酸付加を有する配列番号1、99、または100のアミノ酸配列を有するT7 RNAポリメラーゼバリアントを含み得る。
本開示の追加の実施形態には、以下の番号の段落のものが包含される:
段落1.リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれて前記RNAポリメラーゼバリアントの少なくとも1つのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせる少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、前記リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアント。
RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型を(a)T7 RNAポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれてRNAポリメラーゼバリアントの少なくとも1つのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせる少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、前記T7 RNAポリメラーゼバリアント、(b)ヌクレオシド三リン酸、及び(c)配列GpppA2′OmepGを含むトリヌクレオチドキャップと反応させることを含むプロセスによって生成され、前記ポリヌクレオチド鋳型が、鋳型位置+1に2´−デオキシチミジン残基を含む、請求項65〜71のいずれか1項に記載の組成物。
Cヘリックス及びCリンカーT7 RNAポリメラーゼバリアントを、表3及び表4に示される置換を用いて生成した。
hEPO DNA鋳型、ならびに(1)野生型(WT)T7 RNAポリメラーゼ(WT #1及びWT #2)、(2)G47A C末端G T7 RNAポリメラーゼバリアント(「G47A*」)(配列番号110)、及び(3)S43A C末端G T7 RNAポリメラーゼバリアント(「S43A*」)(配列番号108)を使用して、インビトロ転写反応を行った。DBAA(ジブチルアンモニウムアセテート)HPLC分析は、すべてのhEPO転写物の純度がほぼ同じであったことを示した(図1)。
BJ線維芽細胞を、実施例2に記載されるIVT反応により生成されたhEPO mRNAでトランスフェクトした。mRNAを、精製しないか、または逆相(RP)クロマトグラフィーにより精製した。図2(左のグラフ)に示されるように、S43A* T7 RNAポリメラーゼバリアントまたはG47A* T7 RNAポリメラーゼバリアントを使用して生成された精製されていないmRNAは、WT T7ポリメラーゼを使用して生成された精製されたmRNAと同程度に「コールド(cold)」(サイトカイン応答を示さなかった)であった。ほぼ同等のmRNA発現レベルを、図2(右のグラフ)に示す。これらの実験で使用されたmRNAは、いずれのヌクレオチド修飾も含まなかった。
標準dsRNA ELISAを使用して、非修飾hEPO mRNA(図7)またはm1ψヌクレオチド修飾(図8、上のグラフ)もしくはmo5Uヌクレオチド修飾(図8、下のグラフ)のいずれかを含むhEPO mRNAを生成するために使用されるIVT反応におけるdsRNA混入物(例えば、40ヌクレオチド塩基対よりも長い)を評価した。dsRNAアッセイは、S43A* T7 RNAポリメラーゼバリアント及びG47A* T7 RNAポリメラーゼバリアントが、WT T7 RNAポリメラーゼよりも少ないdsRNAを生成したことを示した(図7及び図8)。
転写物の3′不均一性は、RNAse T1消化を使用して測定することができる。RNAse T1は、Gヌクレオチドの後にmRNAを特異的に切断する。エンドヌクレオチド切断は、5′水酸化物(OH)及び3′一リン酸(mP)「瘢痕」をもたらす。したがって、RNAse T1消化は、3′末端で鋳型のない付加を有する及び有さない転写物を区別するために使用され得る。この実施例では、実施例2で生成されたhEPO mRNAは、ポリAテール及びXbaI制限部位(例えば、AnUCUAG)で終了する。WT T7 RNAポリメラーゼを使用して生成されたhEPO mRNA、S43A* T7 RNAポリメラーゼバリアント、またはG47A* T7 RNAポリメラーゼバリアントを、RNAse T1で消化し、LCMSによって分析して、オリゴフィンガープリントを生成した。均質な3′末端(5´OH/3´OH)は、32780Daでピークに達することが見出されたが、一方で、「瘢痕」(5´OH/3´mP)は、32860Daでピークに達した(図9A)。「瘢痕」は、転写物が、カルボキシ末端で鋳型のない付加を有したことを示す。T7 RNAポリメラーゼバリアントを使用して生成されたhEPO mRNA、S43A*、またはG47A*は、より高い3′末端集団分布を有し、それらがより均質な3′末端及び改善された3′末端不均一性を有することを示す(図9B)。
アッセイを使用して、T7 RNAPバリアント、G47A*、及びS43A*によって生成された鋳型のない付加の程度を調べた。このアッセイでは、酵素ポリメラーゼを使用してライゲーションレフトマーを作製した(例えば、図11Aを参照のこと)。次いで、レフトマーを、5´−モノリン酸化ライトマーRNAにすぐ隣接する完全に相補的なDNAスプリントにアニーリングした。DNAスプリントは、典型的には、40nt長であり、ライトマーは、典型的には、5´末端においてフルオロフォアで修飾される。次いで、DNAリガーゼIを、触媒条件下で添加し、反応がEDTAでクエンチされる前に、所望の反応時間の間、ライゲーションを進めた。次いで、混合物を、変性ポリアクリルアミドゲル(PAGE−D)に充填される前に、95℃で5分間4Mの尿素中で変性した(図11B)。ゲル中のアクリルアミドのパーセンテージは、予期される構築物の長さによるが、典型的には、>50ntのレフトマー長については6%アクリルアミド、及び典型的なmRNAの長さにアプローチするレフトマーについては20%アクリルアミドである。6%アクリルアミドゲルを、一定の180Vで25分間実行し、20%アクリルアミドゲルを、一定の180Vで120分間実行した。次いで、ゲルを、ライトマー及び新しくライゲーションされた産物に存在するフルオロフォアに適切な励起波長及び発光波長を使用してTyphoonまたは同様のスキャナーで画像化した。ライトマー及びライゲーションされた産物は、サイズに基づくゲル上で異なって移動し、2つのバンドの強度は、ライゲーション反応の効率に正確に対応するであろう。レフトマーの酵素合成の間の鋳型のないヌクレオチド付加の程度がより大きいほど、予期されるライゲーション収量はより低い。
標準インビトロ転写(IVT)アッセイでは、T7 RNAポリメラーゼは、5′GTPで転写を開始することが好ましい。そのような標準IVTアッセイによって生成された一本鎖RNA(ssRNA)分子は、別々の酵素キャッピングステップを必要とする(図13)。例えば、キャップ1 RNA(7mGpppN2′−Om−RNA)は、ワクシニアキャッピング及び2´−O−メチルトランスフェラーゼ(2´OMTase)を使用してキャッピングアッセイにおいて生成され得る。キャップ1は、典型的には、細胞における効率的なタンパク質翻訳及びmRNA安定性のために使用される。しかしながら、いくつかのmRNA配列は、キャッピングすることが難しく、キャッピング/メチル化酵素は、非常に高価である。
実施例7に記載される共転写キャッピングアッセイを使用して、転写開始が5´−GTP(Gstart)または5´−ATP(Astart)を必要とするモデル構築物へのキャッピング効率を比較した。5′UTR及び47−mer RNAオリゴヌクレオチドをコードするモデル構築物を、IVTの鋳型として使用した。全RNA産物を、質量分析によって評価し、結果は、Astart構築物が、Gstart構築物と比較して GAGまたはGmAGトリヌクレオチドをより効率的に組み込むことを示す(図18A)。データはここでは示されていないが、Cstart及びUstart構築物が少量のキャップされた生成物を生成したこともまた観察された。
1−メチル−シュードウリジンで化学修飾されたmRNAの共転写キャッピングもまた評価した。3つのモデル構築物を使用した:hEPO、Luc(ルシフェラーゼをコードする)、及びeGFP。すべてのIVT鋳型は、Astart鋳型であった。鋳型は、PCR断片またはプラスミドであり得る。キャッピングアッセイ反応混合物は、鋳型、T7 RNAポリメラーゼバリアントG47A*、7.5mMのNTP、及び7.5mMのトリヌクレオチド(GAGまたはGmAG)を含んだ。NTP中のUTPを、1−メチルシュードウリジンで置き換えて、化学修飾されたmRNAを生成した。ワクシニアキャップ1を、標準キャッピングアッセイにおいて生成対照として使用した。mRNA産物を、RNase Hキャップアッセイ、T1フィンガープリンティング、及びフラグメントアナライザーを使用して分析し、それらの完全性を判定した。サイトカイン応答を誘発すること及びBJ線維芽細胞においてコードされたタンパク質を発現することにおけるmRNA産物の能力もまた試験した。
G47A*ポリメラーゼは、翻訳されたタンパク質のC末端で余分なグリシン(「フットグリシン」)を含む。フットグリシンの存在を、トリプシン消化及び精製されたG47A*タンパク質の質量分析によって確認した(データには示されていない)。G47A*のC末端フット領域の役割を、G47A*の活性部位に対するその近接のために、より詳細に試験した。
実施例5のように、フットグリシンを有するWTまたはG47A* T7 RNAPを使用して生成されたhEPO mRNAを、RNAse T1で消化し、LCMSによって分析して、オリゴフィンガープリントを生成した。WT T7 RNAP IVT反応を、NTPの等モル濃度(WT EQ)またはGTP及びATP(WTアルファ(A))のモル過剰のいずれかで行った。LCMS分析は、均質な3′末端(5´OH/3´OH)は、32780Daでピークに達し、「瘢痕」(5´OH/3´mP)は、32860Daでピークに達することを明らかにした(図24A)。「瘢痕」は、転写物が、3´末端で鋳型のない付加を有したことを示す。WT T7 RNAP及びNTPの等モル濃度(WT EQ)を使用して生成されたhEPO mRNAは、3´末端集団分布を減少し、減少された3´均一性及び鋳型のない付加を有するより多くのランオン生成物を示す(図24B)。しかしながら、フットグリシンを有するG47A* T7 RNAPを使用して生成されたhEPO mRNAは、より高い3′末端集団分布を有し、それらはより均質な3′末端を有し、3′末端の不均一性を改善したことを示す(図24B)。
hEPO mRNA生成物への免疫応答を刺激することにおけるT7 RNAPフットグリシンの役割は、実施例7のように、BJ線維芽細胞におけるサイトカイン(IFNβ)生成を誘発するそれらの能力を評価することによって評価した。興味深いことに、WT T7 RNAP生成された非修飾及びシュードウリジン修飾hEPO mRNAが、高いサイトカイン応答を誘発したが、一方で、フットグリシン生成された非修飾及びシュードウリジン修飾hEPO mRNAを有するWT T7 RNAPは、BJ線維芽細胞においてより少ないサイトカイン生成を刺激した(図25)。フットグリシンを有するG47A*バリアント T7 RNAPによって生成されたhEPO mRNAは、BJ線維芽細胞においてサイトカイン生成を刺激することをしそびれて、免疫応答を誘発しそびれることにおいてフットグリシン及びG47A T7 RNAポリメラーゼバリアントの間の相加的効果を示す(図25)。
アッセイを開発して、WT及びG47AバリアントT7 RNAPによって生成されたhEPO mRNA種へのフットグリシン残基の効果を調べた。試験されたT7 RNAPは、以下の通りであった。(1)WT+G(フットグリシン)、(2)G47Aバリアント、または(3)G47Aバリアント+G(G47A*バリアント)。IVT反応は、列挙されるT7 RNAPのうちの1つ、shORFan鋳型、NTP(非修飾または修飾されたUTPのいずれか)、及び32P−CTPを含んだ。反応を、所望の長さの時間の後にEDTAで終了した。次いで、反応混合物を、変性ポリアクリルアミドゲル(20%アクリルアミド)に充填される前に、95℃で5分間4Mの尿素中で変性した(図26A)。ゲルを20ワットで30分間、次いで40ワットで2時間実行した。画像を、Typhoonスキャナーを使用する画像化の前にホスフォイメージャースクリーンに移動した(1時間の露光時間)。32P−CTPの使用は、完全長生成物(shORFan mRNAを示す)、ランオン転写生成物(上の箱)(図26A)、及び逆相補mRNA産物(図26A、下の箱)を標識する。結果はまた、以下の表10に要約される。これらのデータは、フットグリシンを有するT7 RNAPが、WTまたはG47A T7 RNAPのいずれかより少ない混入dsRNAに関連することを示す(図26A(下の箱)及び図26B)。さらに、フットグリシンは、WTまたはG47AバリアントT7 RNAPと比較して、減少されたランオン転写(図26A(上の箱)、図26B)と関連する。
インビトロ転写mRNAは、典型的には、例えば、逆相クロマトグラフィー(RP)によって精製され、サイトカイン誘発不純物(dsRNA)及びプロセス不純物(例えば、タンパク質/DNA)を除去し、全RNA純度を改善する。しかしながら、この精製プロセスはしばしば、mRNA産物の著しい喪失をもたらす。RPを排除することは、ターンアラウンドタイムを低減し、大規模に動作及び操作複雑性を排除し、費用を節約する。さらに、RP中に使用される高温度が、mRNAの画分を加水分解することができるため、RPを排除することは、mRNA発現レベルを増加させる。したがって、RPの必要性を排除するためにmRNA産物及び精製戦略を開発した。この実施例に提供される方法によって生成されたmRNAは、「トリヌクレオチドキャップされたG47A* mRNA」 と称され、それは、G47A* T7 RNAPバリアント(G47A置換及び追加のC末端Gを有する)を使用するインビトロ転写アッセイにおいてトリヌクレオチドGpppA2′OmepGで共転写でキャップされているmRNAである。
この実施例では、ヒトエリスロポエチン(hEPO)をコードするmRNAの単回の0.5mpk用量を、MC3脂質ナノ粒子中に配合し、6週間(1日目、8日目、15日目、22日目、29日目、及び36日目に)C57Bl/6マウス(n=5)に毎週投与した。以下のmRNAを投与した。(1)NTPの等モル濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製された非修飾mRNA(化学Aプロセス1 dT)、(2)GTP/ATPの過剰濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、逆相クロマトグラフィーによって精製されたシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス2 RP)、(3)GTP/ATPの過剰濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製されたシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス2 dT)、(4)NTPの等モル濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製されたシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス1 dT)、(5)逆相クロマトグラフィーによって精製されたシュードウリジン修飾トリヌクレオチドキャップされたG47A* mRNA(G47A* T7 RNAPバリアントを使用してキャップ及び生成されたトリヌクレオチド)(化学Bプロセス3 RP)、(6)オリゴdT精製によって精製されたシュードウリジン修飾トリヌクレオチドキャップG47A* mRNA(化学Bプロセス3 dT)、ならびに(7)G47A* T7 RNAPバリアントを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製されたキャップされていないシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス4 dT))。各用量後6時間、以下を評価した:血清サイトカインレベル、mRNA発現、及び抗−PEG IgMレベル。B細胞活性化を、36日目の用量後6時間評価した。化学Aは、非修飾ウリジン三リン酸ヌクレオチドの使用を示し、化学Bは、1−メチル−シュードウリジン三リン酸ヌクレオチドの使用を示す。プロセス1は、IVT及びワクシニアキャップ1における等モルNTPを指し、プロセス2は、4:2:1:1のGTP:ATP:CTP:UTP及びワクシニアキャップ1を含むIVTを指し、プロセス3は、IVTにおける等モルNTP及びGAGを指し、プロセス4は、IVT及びキャップなしにおける等モルNTPを指す。
mRNAを、プロセス1(等モルNTP)またはプロセス2(4:2:1:1のGTP:ATP:CTP:UTP)を使用してWTまたはG47A*酵素のいずれかで調製した。次世代シーケンシング(NGS)について、mRNAを、逆転写酵素によってcDNAに変換し、アダプターをライゲーションしてシーケンシングライブラリを準備した。NGSデータを、親配列と比較し、観察された任意のインデルを表にした。インデル頻度は、WT及びG47A*に匹敵した(図37A)。同様に、NGSデータを、任意の点変異について分析した。点変異頻度は、WT及びG47A*に匹敵した(図37B)。
本出願は、2017年8月18日に出願された米国仮出願第62/547,677号、2018年2月9日に出願された米国仮出願第62/628,484号、及び2018年3月5日に出願された米国仮出願第62/638,684号、2018年5月29日に出願された米国仮出願第62/677,527号の35U.S.C.§119(e)下の利益を主張し、それらの各出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
RNAポリメラーゼ(DNA依存性RNAポリメラーゼ)は、成長中のRNA鎖の3´末端へのリボヌクレオチドの連続的な付加を触媒する酵素であり(5´→3´方向のRNAの転写)、ヌクレオシド三リン酸(NTP)を酵素の基質として作用し、ヌクレオチドの配列はDNA鋳型によって特定される。転写は、塩基の相補的対合に依存する。二重ヘリックスの2本の鎖は局所的に分離し、分離した鎖の1つは鋳型(DNA鋳型)として機能する。次いで、RNAポリメラーゼは、鋳型中の相補的な塩基によって、DNA鋳型上の遊離ヌクレオチドのアライメントを触媒する。したがって、ポリメラーゼが成長中のRNA鎖の3´末端へのリボヌクレオチドの連続的な追加を触媒する場合、RNAポリメラーゼはRNAポリメラーゼ活性を有するとみなす。
本開示のRNAポリメラーゼバリアントは、WT RNAポリメラーゼと比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。例えば、配列番号1のアミノ酸配列を有するWT T7 RNAポリメラーゼに関して、43位のセリンは「野生型アミノ酸」とみなされ、43位のセリンのアラニンへの置換は高いヘリックス性向を有する「アミノ酸置換」とみなされる。
リボ核酸(RNA)合成のための共転写キャッピング方法も本明細書で提供される。すなわち、RNAは「ワンポット(one−pot)」反応で生成され、別々のキャッピング反応を必要としない。したがって、本方法は、いくつかの実施形態では、RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型をT7 RNAポリメラーゼバリアント、ヌクレオシド三リン酸、及びキャップ類似体と反応させることを含む。
環B2及び環B3はそれぞれ独立して、核酸塩基または修飾核酸塩基であり、
X2はO、S(O)p、NR24、またはCR25R26であり、pは0、1、または2であり、
Y0は、OまたはCR6R7であり、
Y1は、O、S(O)n、CR6R7、またはNR8であり、nは0、1、または2であり、
各−−−は、単結合または不存在であり、各−−−が単結合の場合、YiはO、S(O)n、CR6R7、またはNR8であり、各−−−が不存在である場合、Y1は空(void)であり、
Y2は、(OP(O)R4)m(mは0、1、または2である)または−O−(CR40R41)u−Q0−(CR42R43)v−であり、ここで、Q0は結合、O、S(O)r、NR44、またはCR45R46であり、rは0、1、または2であり、u及びvの各々は、独立して、1、2、3または4であり、
各R2及びR2´は、独立して、ハロ、LNA、またはOR3であり、
各R3は、独立して、H、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルであり、R3は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルである場合、ハロ、OH、または1つ以上のOHもしくはOC(O)−C1−C6アルキルで任意選択により置換されたC1−C6アルコキシルのうちの1つ以上で任意選択により置換され、
各R4及びR4´は、独立して、H、ハロ、C1−C6アルキル、OH、SH、SeH、またはBH3 −であり、
R6、R7、及びR8の各々は、独立して、−Q1−T1であり、ここで、Q1は、結合、またはハロ、シアノ、OH、及びC1−C6アルコキシのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C3アルキルリンカーであり、T1は、H、ハロ、OH、COOH、シアノ、またはRs1であり、ここで、Rs1は、C1−C3アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C1−C6アルコキシル、C(O)O−C1−C6アルキル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、NR31R32、(NR31R32R33)+、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5もしくは6員のヘテロアリールであり、Rs1は、ハロ、OH、オキソ、C1−C6アルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、シアノ、C1−C6アルコキシル、NR31R32、(NR31R32R33)+、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、4〜12員のヘテロシクロアルキル、及び5または6員のヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基で任意選択により置換され、
R10、R11、R12、R13R14、及びR15の各々は、独立して、−Q2−T2であり、ここで、Q2は、結合、またはハロ、シアノ、OH、及びC1−C6アルコキシのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C3アルキルリンカーであり、T2は、H、ハロ、OH、NH2、シアノ、NO2、N3、Rs2、またはORs2であり、ここで、Rs2は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、NHC(O)−C1−C6アルキル、NR31R32、(NR31R32R33)+、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5もしくは6員のヘテロアリールあり、Rs2は、ハロ、OH、オキソ、C1−C6アルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、シアノ、C1−C6アルコキシル、NR31R32、(NR31R32R33)+、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール,4〜12員のヘテロシクロアルキル、及び5または6員のヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基で任意選択により置換され、あるいはR12はR14と一緒にオキソであり、またはR13はR15と一緒にオキソであり、
R20、R21、R22、及びR23の各々は、独立して、−Q3−T3であり、ここで、Q3は、結合、またはハロ、シアノ、OH、及びC1−C6アルコキシのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C3アルキルリンカーであり、T3は、H、ハロ、OH、NH2、シアノ、NO2、N3、RS3、またはORS3であり、ここで、RS3は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、C2−C6アルキニル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、NHC(O)−C1−C6アルキル、モノ−C1−C6アルキルアミノ、ジ−C1−C6アルキルアミノ、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5もしくは6員のヘテロアリールあり、Rs3は、ハロ、OH、オキソ、C1−C6アルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、シアノ、C1−C6アルコキシル、アミノ、モノ−C1−C6アルキルアミノ、ジ−C1−C6アルキルアミノ、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、4〜12員のヘテロシクロアルキル、及び5または6員のヘテロアリールからなる群から選択される1つ以上の置換基で任意選択により置換され、
R24、R25、及びR26の各々は、独立して、HまたはC1−C6アルキルであり、
R27及びR28の各々は、独立して、HまたはOR29であり、あるいはR27及びR28は一緒になって、O−R30−Oを形成し、各R29は、独立して、H、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルであり、R29、は、C1−C6アルキル、C2−C6アルケニル、またはC2−C6アルキニルである場合、ハロ、OH、または1つ以上のOHもしくはOC(O)−C1−C6アルキルで任意選択により置換されたC1−C6アルコキシルのうちの1つ以上で任意選択により置換され、
R30は、ハロ、OH、及びC1−C6アルコキシルのうちの1つ以上で任意選択により置換されたC1−C6アルキレンであり、
R31、R32、及びR33の各々は、独立して、H、C1−C6アルキル、C3−C8シクロアルキル、C6−C10アリール、4〜12員のヘテロシクロアルキル、または5または6員のヘテロアリールであり、
R40、R41、R42、及びR43の各々は、独立して、H、ハロ、OH、シアノ、N3、OP(O)R47R48、または1つ以上のOP(O)R47R48で任意選択により置換されたC1−C6アルキルであり、あるいは1つのR41及び1つのR43は、それらが結合している炭素原子及びQ0と一緒になって、C4−C10シクロアルキル、4〜14員のヘテロシクロアルキル、C6−C10アリール、または5〜14員のヘテロアリールを形成し、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、または5〜6員のヘテロアリールの各々は、OH、ハロ、シアノ、N3、オキソ、OP(O)R47R48、C1−C6アルキル、C1−C6ハロアルキル、COOH、C(O)O−C1−C6アルキル、C1−C6アルコキシル、C1−C6ハロアルコキシル、アミノ、モノ−C1−C6アルキルアミノ、及びジ−C1−C6アルキルアミノのうちの1つ以上で任意選択により置換され、
R44は、H、C1−C6アルキル、またはアミン保護基であり、
R45及びR46の各々は、独立して、H、OP(O)R47R48、または1つ以上のOP(O)R47R48で任意選択により置換されたC1−C6アルキルであり、
R47及びR48の各々は、独立して、H、ハロ、C1−C6アルキル、OH、SH、SeH、またはBH3 −である。
本開示のいくつかの態様は、RNA転写物の生成をもたらす条件下で、DNA鋳型をRNAポリメラーゼ(例えば、T7 RNAポリメラーゼバリアントなどのT7 RNAポリメラーゼ)と接触させることを含む、RNA転写物(例えば、mRNA転写物)を生成(合成)する方法を提供する。
本開示に従って生成されたRNA転写物には、mRNA(修飾mRNA及び/または非修飾RNAを含む)、lncRNA、自己複製RNA、環状RNA、CRISPRガイドRNAなどが含まれる。実施形態では、RNAは、ポリペプチド(例えば、治療用ポリペプチド)をコードするRNA(例えばmRNAまたは自己複製RNA)である。したがって、本開示のRNAポリメラーゼバリアントを使用して生成されたRNA転写物は、非常に多くの用途で使用され得る。
本開示のT7 RNAPバリアントは、いくつかの実施形態では、IVT反応においてトリヌクレオチドキャップなどのキャップ類似体と組み合わせて使用されるとき、IVT後の精製がなくても、検出可能なサイトカイン応答を誘導しないRNAを生成する。したがって、いくつかの実施形態では、IVT RNA及び薬学的に許容される賦形剤を含む組成物であって、IVT後の精製なしで、サイトカイン誘導RNA混入物を実質的に含まない(例えば、含まないか、または10%未満、1%未満、0.1%未満、または0.01%未満含む)、該組成物が本明細書で提供される。
本開示のRNAポリメラーゼバリアントを含むインビトロ転写キットなどのキットも本明細書で提供される。キットは、本明細書に記載の任意の1つ以上(少なくとも1つ)のIVT成分及び任意の1つ以上(少なくとも1つ)のRNAポリメラーゼバリアントを含み得る。例えば、キットは、緩衝系、NTP、及び位置E42、S43、Y44、E45、M46、G47、A255、R257、A258、G259、A260、L261及び/またはA262における少なくとも1つ(もしくは少なくとも2つ、または少なくとも3つ)のアミノ酸置換ならびに任意選択によりC末端において少なくとも1つのアミノ酸付加を有する配列番号1、99、または100のアミノ酸配列を有するT7 RNAポリメラーゼバリアントを含み得る。
本開示の追加の実施形態には、以下の番号の段落のものが包含される:
段落1.リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれて前記RNAポリメラーゼバリアントの少なくとも1つのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせる少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、前記リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアント。
RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型を(a)T7 RNAポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれてRNAポリメラーゼバリアントの少なくとも1つのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせる少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、前記T7 RNAポリメラーゼバリアント、(b)ヌクレオシド三リン酸、及び(c)配列GpppA2′OmepGを含むトリヌクレオチドキャップと反応させることを含むプロセスによって生成され、前記ポリヌクレオチド鋳型が、鋳型位置+1に2´−デオキシチミジン残基を含む、請求項65〜71のいずれか1項に記載の組成物。
Cヘリックス及びCリンカーT7 RNAポリメラーゼバリアントを、表3及び表4に示される置換を用いて生成した。
hEPO DNA鋳型、ならびに(1)野生型(WT)T7 RNAポリメラーゼ(WT #1及びWT #2)、(2)G47A C末端G T7 RNAポリメラーゼバリアント(「G47A*」)(配列番号110)、及び(3)S43A C末端G T7 RNAポリメラーゼバリアント(「S43A*」)(配列番号108)を使用して、インビトロ転写反応を行った。DBAA(ジブチルアンモニウムアセテート)HPLC分析は、すべてのhEPO転写物の純度がほぼ同じであったことを示した(図1)。
BJ線維芽細胞を、実施例2に記載されるIVT反応により生成されたhEPO mRNAでトランスフェクトした。mRNAを、精製しないか、または逆相(RP)クロマトグラフィーにより精製した。図2(左のグラフ)に示されるように、S43A* T7 RNAポリメラーゼバリアントまたはG47A* T7 RNAポリメラーゼバリアントを使用して生成された精製されていないmRNAは、WT T7ポリメラーゼを使用して生成された精製されたmRNAと同程度に「コールド(cold)」(サイトカイン応答を示さなかった)であった。ほぼ同等のmRNA発現レベルを、図2(右のグラフ)に示す。これらの実験で使用されたmRNAは、いずれのヌクレオチド修飾も含まなかった。
標準dsRNA ELISAを使用して、非修飾hEPO mRNA(図7)またはm1ψヌクレオチド修飾(図8、上のグラフ)もしくはmo5Uヌクレオチド修飾(図8、下のグラフ)のいずれかを含むhEPO mRNAを生成するために使用されるIVT反応におけるdsRNA混入物(例えば、40ヌクレオチド塩基対よりも長い)を評価した。dsRNAアッセイは、S43A* T7 RNAポリメラーゼバリアント及びG47A* T7 RNAポリメラーゼバリアントが、WT T7 RNAポリメラーゼよりも少ないdsRNAを生成したことを示した(図7及び図8)。
転写物の3′不均一性は、RNAse T1消化を使用して測定することができる。RNAse T1は、Gヌクレオチドの後にmRNAを特異的に切断する。エンドヌクレオチド切断は、5′水酸化物(OH)及び3′一リン酸(mP)「瘢痕」をもたらす。したがって、RNAse T1消化は、3′末端で鋳型のない付加を有する及び有さない転写物を区別するために使用され得る。この実施例では、実施例2で生成されたhEPO mRNAは、ポリAテール及びXbaI制限部位(例えば、AnUCUAG)で終了する。WT T7 RNAポリメラーゼを使用して生成されたhEPO mRNA、S43A* T7 RNAポリメラーゼバリアント、またはG47A* T7 RNAポリメラーゼバリアントを、RNAse T1で消化し、LCMSによって分析して、オリゴフィンガープリントを生成した。均質な3′末端(5´OH/3´OH)は、32780Daでピークに達することが見出されたが、一方で、「瘢痕」(5´OH/3´mP)は、32860Daでピークに達した(図9A)。「瘢痕」は、転写物が、カルボキシ末端で鋳型のない付加を有したことを示す。T7 RNAポリメラーゼバリアントを使用して生成されたhEPO mRNA、S43A*、またはG47A*は、より高い3′末端集団分布を有し、それらがより均質な3′末端及び改善された3′末端不均一性を有することを示す(図9B)。
アッセイを使用して、T7 RNAPバリアント、G47A*、及びS43A*によって生成された鋳型のない付加の程度を調べた。このアッセイでは、酵素ポリメラーゼを使用してライゲーションレフトマーを作製した(例えば、図11Aを参照のこと)。次いで、レフトマーを、5´−モノリン酸化ライトマーRNAにすぐ隣接する完全に相補的なDNAスプリントにアニーリングした。DNAスプリントは、典型的には、40nt長であり、ライトマーは、典型的には、5´末端においてフルオロフォアで修飾される。次いで、DNAリガーゼIを、触媒条件下で添加し、反応がEDTAでクエンチされる前に、所望の反応時間の間、ライゲーションを進めた。次いで、混合物を、変性ポリアクリルアミドゲル(PAGE−D)に充填される前に、95℃で5分間4Mの尿素中で変性した(図11B)。ゲル中のアクリルアミドのパーセンテージは、予期される構築物の長さによるが、典型的には、>50ntのレフトマー長については6%アクリルアミド、及び典型的なmRNAの長さにアプローチするレフトマーについては20%アクリルアミドである。6%アクリルアミドゲルを、一定の180Vで25分間実行し、20%アクリルアミドゲルを、一定の180Vで120分間実行した。次いで、ゲルを、ライトマー及び新しくライゲーションされた産物に存在するフルオロフォアに適切な励起波長及び発光波長を使用してTyphoonまたは同様のスキャナーで画像化した。ライトマー及びライゲーションされた産物は、サイズに基づくゲル上で異なって移動し、2つのバンドの強度は、ライゲーション反応の効率に正確に対応するであろう。レフトマーの酵素合成の間の鋳型のないヌクレオチド付加の程度がより大きいほど、予期されるライゲーション収量はより低い。
標準インビトロ転写(IVT)アッセイでは、T7 RNAポリメラーゼは、5′GTPで転写を開始することが好ましい。そのような標準IVTアッセイによって生成された一本鎖RNA(ssRNA)分子は、別々の酵素キャッピングステップを必要とする(図13)。例えば、キャップ1 RNA(7mGpppN2′−Om−RNA)は、ワクシニアキャッピング及び2´−O−メチルトランスフェラーゼ(2´OMTase)を使用してキャッピングアッセイにおいて生成され得る。キャップ1は、典型的には、細胞における効率的なタンパク質翻訳及びmRNA安定性のために使用される。しかしながら、いくつかのmRNA配列は、キャッピングすることが難しく、キャッピング/メチル化酵素は、非常に高価である。
実施例7に記載される共転写キャッピングアッセイを使用して、転写開始が5´−GTP(Gstart)または5´−ATP(Astart)を必要とするモデル構築物へのキャッピング効率を比較した。5′UTR及び47−mer RNAオリゴヌクレオチドをコードするモデル構築物を、IVTの鋳型として使用した。全RNA産物を、質量分析によって評価し、結果は、Astart構築物が、Gstart構築物と比較して GAGまたはGmAGトリヌクレオチドをより効率的に組み込むことを示す(図18A)。データはここでは示されていないが、Cstart及びUstart構築物が少量のキャップされた生成物を生成したこともまた観察された。
1−メチル−シュードウリジンで化学修飾されたmRNAの共転写キャッピングもまた評価した。3つのモデル構築物を使用した:hEPO、Luc(ルシフェラーゼをコードする)、及びeGFP。すべてのIVT鋳型は、Astart鋳型であった。鋳型は、PCR断片またはプラスミドであり得る。キャッピングアッセイ反応混合物は、鋳型、T7 RNAポリメラーゼバリアントG47A*、7.5mMのNTP、及び7.5mMのトリヌクレオチド(GAGまたはGmAG)を含んだ。NTP中のUTPを、1−メチルシュードウリジンで置き換えて、化学修飾されたmRNAを生成した。ワクシニアキャップ1を、標準キャッピングアッセイにおいて生成対照として使用した。mRNA産物を、RNase Hキャップアッセイ、T1フィンガープリンティング、及びフラグメントアナライザーを使用して分析し、それらの完全性を判定した。サイトカイン応答を誘発すること及びBJ線維芽細胞においてコードされたタンパク質を発現することにおけるmRNA産物の能力もまた試験した。
G47A*ポリメラーゼは、翻訳されたタンパク質のC末端で余分なグリシン(「フットグリシン」)を含む。フットグリシンの存在を、トリプシン消化及び精製されたG47A*タンパク質の質量分析によって確認した(データには示されていない)。G47A*のC末端フット領域の役割を、G47A*の活性部位に対するその近接のために、より詳細に試験した。
実施例5のように、フットグリシンを有するWTまたはG47A* T7 RNAPを使用して生成されたhEPO mRNAを、RNAse T1で消化し、LCMSによって分析して、オリゴフィンガープリントを生成した。WT T7 RNAP IVT反応を、NTPの等モル濃度(WT EQ)またはGTP及びATP(WTアルファ(A))のモル過剰のいずれかで行った。LCMS分析は、均質な3′末端(5´OH/3´OH)は、32780Daでピークに達し、「瘢痕」(5´OH/3´mP)は、32860Daでピークに達することを明らかにした(図24A)。「瘢痕」は、転写物が、3´末端で鋳型のない付加を有したことを示す。WT T7 RNAP及びNTPの等モル濃度(WT EQ)を使用して生成されたhEPO mRNAは、3´末端集団分布を減少し、減少された3´均一性及び鋳型のない付加を有するより多くのランオン生成物を示す(図24B)。しかしながら、フットグリシンを有するG47A* T7 RNAPを使用して生成されたhEPO mRNAは、より高い3′末端集団分布を有し、それらはより均質な3′末端を有し、3′末端の不均一性を改善したことを示す(図24B)。
hEPO mRNA生成物への免疫応答を刺激することにおけるT7 RNAPフットグリシンの役割は、実施例7のように、BJ線維芽細胞におけるサイトカイン(IFNβ)生成を誘発するそれらの能力を評価することによって評価した。興味深いことに、WT T7 RNAP生成された非修飾及びシュードウリジン修飾hEPO mRNAが、高いサイトカイン応答を誘発したが、一方で、フットグリシン生成された非修飾及びシュードウリジン修飾hEPO mRNAを有するWT T7 RNAPは、BJ線維芽細胞においてより少ないサイトカイン生成を刺激した(図25)。フットグリシンを有するG47A*バリアント T7 RNAPによって生成されたhEPO mRNAは、BJ線維芽細胞においてサイトカイン生成を刺激することをしそびれて、免疫応答を誘発しそびれることにおいてフットグリシン及びG47A T7 RNAポリメラーゼバリアントの間の相加的効果を示す(図25)。
アッセイを開発して、WT及びG47AバリアントT7 RNAPによって生成されたhEPO mRNA種へのフットグリシン残基の効果を調べた。試験されたT7 RNAPは、以下の通りであった。(1)WT+G(フットグリシン)、(2)G47Aバリアント、または(3)G47Aバリアント+G(G47A*バリアント)。IVT反応は、列挙されるT7 RNAPのうちの1つ、shORFan鋳型、NTP(非修飾または修飾されたUTPのいずれか)、及び32P−CTPを含んだ。反応を、所望の長さの時間の後にEDTAで終了した。次いで、反応混合物を、変性ポリアクリルアミドゲル(20%アクリルアミド)に充填される前に、95℃で5分間4Mの尿素中で変性した(図26A)。ゲルを20ワットで30分間、次いで40ワットで2時間実行した。画像を、Typhoonスキャナーを使用する画像化の前にホスフォイメージャースクリーンに移動した(1時間の露光時間)。32P−CTPの使用は、完全長生成物(shORFan mRNAを示す)、ランオン転写生成物(上の箱)(図26A)、及び逆相補mRNA産物(図26A、下の箱)を標識する。結果はまた、以下の表10に要約される。これらのデータは、フットグリシンを有するT7 RNAPが、WTまたはG47A T7 RNAPのいずれかより少ない混入dsRNAに関連することを示す(図26A(下の箱)及び図26B)。さらに、フットグリシンは、WTまたはG47AバリアントT7 RNAPと比較して、減少されたランオン転写(図26A(上の箱)、図26B)と関連する。
インビトロ転写mRNAは、典型的には、例えば、逆相クロマトグラフィー(RP)によって精製され、サイトカイン誘発不純物(dsRNA)及びプロセス不純物(例えば、タンパク質/DNA)を除去し、全RNA純度を改善する。しかしながら、この精製プロセスはしばしば、mRNA産物の著しい喪失をもたらす。RPを排除することは、ターンアラウンドタイムを低減し、大規模に動作及び操作複雑性を排除し、費用を節約する。さらに、RP中に使用される高温度が、mRNAの画分を加水分解することができるため、RPを排除することは、mRNA発現レベルを増加させる。したがって、RPの必要性を排除するためにmRNA産物及び精製戦略を開発した。この実施例に提供される方法によって生成されたmRNAは、「トリヌクレオチドキャップされたG47A* mRNA」 と称され、それは、G47A* T7 RNAPバリアント(G47A置換及び追加のC末端Gを有する)を使用するインビトロ転写アッセイにおいてトリヌクレオチドGpppA2′OmepGで共転写でキャップされているmRNAである。
この実施例では、ヒトエリスロポエチン(hEPO)をコードするmRNAの単回の0.5mpk用量を、MC3脂質ナノ粒子中に配合し、6週間(1日目、8日目、15日目、22日目、29日目、及び36日目に)C57Bl/6マウス(n=5)に毎週投与した。以下のmRNAを投与した。(1)NTPの等モル濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製された非修飾mRNA(化学Aプロセス1 dT)、(2)GTP/ATPの過剰濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、逆相クロマトグラフィーによって精製されたシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス2 RP)、(3)GTP/ATPの過剰濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製されたシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス2 dT)、(4)NTPの等モル濃度の存在下で野生型T7ポリメラーゼを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製されたシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス1 dT)、(5)逆相クロマトグラフィーによって精製されたシュードウリジン修飾トリヌクレオチドキャップされたG47A* mRNA(G47A* T7 RNAPバリアントを使用してキャップ及び生成されたトリヌクレオチド)(化学Bプロセス3 RP)、(6)オリゴdT精製によって精製されたシュードウリジン修飾トリヌクレオチドキャップG47A* mRNA(化学Bプロセス3 dT)、ならびに(7)G47A* T7 RNAPバリアントを使用して生成され、オリゴdT精製によって精製されたキャップされていないシュードウリジン修飾mRNA(化学Bプロセス4 dT))。各用量後6時間、以下を評価した:血清サイトカインレベル、mRNA発現、及び抗−PEG IgMレベル。B細胞活性化を、36日目の用量後6時間評価した。化学Aは、非修飾ウリジン三リン酸ヌクレオチドの使用を示し、化学Bは、1−メチル−シュードウリジン三リン酸ヌクレオチドの使用を示す。プロセス1は、IVT及びワクシニアキャップ1における等モルNTPを指し、プロセス2は、4:2:1:1のGTP:ATP:CTP:UTP及びワクシニアキャップ1を含むIVTを指し、プロセス3は、IVTにおける等モルNTP及びGAGを指し、プロセス4は、IVT及びキャップなしにおける等モルNTPを指す。
mRNAを、プロセス1(等モルNTP)またはプロセス2(4:2:1:1のGTP:ATP:CTP:UTP)を使用してWTまたはG47A*酵素のいずれかで調製した。次世代シーケンシング(NGS)について、mRNAを、逆転写酵素によってcDNAに変換し、アダプターをライゲーションしてシーケンシングライブラリを準備した。NGSデータを、親配列と比較し、観察された任意のインデルを表にした。インデル頻度は、WT及びG47A*に匹敵した(図37A)。同様に、NGSデータを、任意の点変異について分析した。点変異頻度は、WT及びG47A*に匹敵した(図37B)。
Claims (77)
- リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれて前記RNAポリメラーゼバリアントのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせるアミノ酸置換を含む、前記リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアント。
- 前記アミノ酸置換が、野生型アミノ酸と比較して高いヘリックス性向を有する、請求項1に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記RNAポリメラーゼが、T7 RNAポリメラーゼである、請求項1または2に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記ループ構造が、Cヘリックス構造中にある、請求項1〜3のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記ループ構造が、Cリンカー構造中にある、請求項1〜4のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記アミノ酸置換が、高ヘリックス性向アミノ酸置換である、請求項1〜4のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記高ヘリックス性向酸置換が、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、リジン、グルタミン、及びグルタミン酸から選択される、請求項6に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記高ヘリックス性向アミノ酸置換が、アラニンである、請求項7に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記T7 RNAポリメラーゼバリアントが、配列番号1と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記T7 RNAポリメラーゼが、E42、S43、Y44、E45、M46、G47、A255、R257、A258、G259、A260、L261、及びA262から選択される位置に高ヘリックス性向アミノ酸のアミノ酸置換を含むように修飾された配列番号1と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、または100%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項9に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記アミノ酸置換が、S43Aを含む、請求項10に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記アミノ酸置換が、G47Aを含む、請求項10に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 追加のC末端アミノ酸をさらに含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記追加のC末端アミノ酸が、グリシン(G)を含む、請求項13に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記RNAポリメラーゼバリアントが、配列番号108のアミノ酸配列を含む、請求項11、13、または14のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記RNAポリメラーゼバリアントが、配列番号110のアミノ酸配列を含む、請求項12〜14のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 野生型RNAポリメラーゼと比較して追加のC末端アミノ酸を含む、リボ核酸(RNA)ポリメラーゼバリアント。
- 前記RNAポリメラーゼバリアントが、T7 RNAポリメラーゼバリアントである、請求項17に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記RNAポリメラーゼバリアントが、野生型T7 RNAポリメラーゼと少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、または少なくとも99%の同一性を有する、請求項18に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記RNAポリメラーゼバリアントが、野生型T7 RNAポリメラーゼと比較してアミノ酸置換を含む、請求項17または18に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 2つの追加のC末端アミノ酸を含む、請求項17〜20のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記2つの追加のC末端アミノ酸が、同じ種類のアミノ酸または2つの異なる種類のアミノ酸を含む、請求項21に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 1〜5個または1〜10個の追加のC末端アミノ酸を含む、請求項17〜22のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- FAFAXnモチーフを含むC末端を含み、Xが任意のアミノ酸であり、nがゼロより大きい任意の整数である、RNAポリメラーゼバリアント。
- Xが、GまたはAである、請求項24に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- nがゼロより大きい任意の整数であり、任意選択により、nが1、2、3、4、または5である、請求項24または25に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- FAFAGモチーフを含むC末端を含む、RNAポリメラーゼバリアント、任意選択によりT7 RNAポリメラーゼバリアント。
- XAFAXnモチーフ、FXFAXnモチーフ、FAXAXnモチーフ、またはFAFXXnモチーフを含むC末端を含み、各Xが任意のアミノ酸であり、nはゼロより大きい任意の整数である、RNAポリメラーゼバリアント、任意選択によりT7 RNAポリメラーゼバリアント。
- アミノ酸置換をさらに含む、請求項17〜28のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記アミノ酸置換が、野生型RNAポリメラーゼのE42、S43、Y44、E45、M46、G47、R257、A258、G259、A260、L261、及びA262から選択される位置の高ヘリックス性向アミノ酸であり、任意選択により、前記野生型RNAポリメラーゼが、配列番号1のアミノ酸配列または配列番号1のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項29に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記高ヘリックス性向アミノ酸が、アラニンである、請求項30に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- 前記アミノ酸置換が、S43AまたはG47Aである、請求項31に記載のRNAポリメラーゼバリアント。
- RNA転写物の生成をもたらす条件下で、DNA鋳型を請求項1〜32のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼと接触させることを含む、リボ核酸(RNA)を生成する方法。
- ヌクレオシド三リン酸及び緩衝液の存在下において、RNA転写物の生成をもたらす条件下で、DNA鋳型を請求項1〜32のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼと接触させることを含む、インビトロ転写(IVT)反応を行う方法。
- 前記生成されたRNA転写物が、任意選択により未精製の形態で細胞に送達されたとき、野生型RNAポリメラーゼを用いて生成されたRNAと比較して少なくとも50%低いサイトカイン応答を刺激する、請求項33または34に記載の方法。
- 生成された二本鎖RNA(dsRNA)転写物の濃度が、野生型ポリメラーゼを使用して生成されたdsRNA転写物と比較して少なくとも50%低い、請求項33〜35のいずれか1項に記載の方法。
- 前記生成されたRNA転写物の20%未満が、3´不均一性を示す、請求項33〜36のいずれか1項に記載の方法。
- 前記生成されたRNA転写物の50%未満が、二本鎖混入物である、請求項33〜37のいずれか1項に記載の方法。
- 前記生成されたRNA転写物の50%未満が、ランオンRNA転写物である、請求項33〜38のいずれか1項に記載の方法。
- 生成された完全長RNA転写物の量が、前記DNA鋳型の量よりも少なくとも15倍大きい、請求項33〜39のいずれか1項に記載の方法。
- 二本鎖混入物:生成された完全長RNA転写物の比が、1:1未満である、請求項33〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 前記生成されたRNA転写物が、前記DNA鋳型と比較して100ヌクレオチドあたり1未満の変異を有する、請求項33〜41のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜32のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアントをコードする核酸。
- 請求項43に記載の核酸を含むベクター。
- 請求項43に記載の核酸または請求項44に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項1〜32のいずれか1項に記載のRNAポリメラーゼバリアント及び任意選択によりインビトロ転写(IVT)試薬を含む、組成物またはキット。
- 請求項33〜42のいずれか1項に記載の方法により生成される、リボ核酸(RNA)、任意選択によりメッセンジャーRNA(mRNA)。
- 脂質ナノ粒子中に製剤化された請求項47に記載のRNAであって、任意選択により、前記脂質ナノ粒子が、20〜60%のイオン化可能なアミノ脂質、5〜25%の非カチオン性脂質、25〜55%のステロール、及び0.5〜15%のPEG修飾脂質のモル比を含む、前記RNA。
- RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型をRNAポリメラーゼバリアント、任意選択によりT7 RNAポリメラーゼバリアント、ヌクレオシド三リン酸、及びキャップ類似体と反応させることを含む、リボ核酸(RNA)合成のための共転写キャッピング方法。
- 前記生成されたRNA転写物の80%超、85%超、90%超、または95%超が、機能性キャップを含む、請求項49に記載の方法。
- 前記ヌクレオシド三リン酸が、非修飾もしくは修飾ATP、修飾もしくは非修飾UTP、修飾もしくは非修飾GTP、及び/または修飾もしくは非修飾CTPを含む、請求項49または50に記載の方法。
- 前記RNAポリメラーゼバリアントが、請求項1〜32のいずれか1つに記載のRNAポリメラーゼバリアントである、請求項49〜51のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヌクレオシド三リン酸及びキャップ類似体が、前記反応において等モル濃度で存在する、請求項49〜52のいずれか1項に記載の方法。
- 前記反応におけるキャップ類似体とヌクレオシド三リン酸とのモル比が、1:1より大きいか、または1:1に等しく、任意選択により、前記ヌクレオシド三リン酸がGTP及び/またはATPを含む、請求項49〜53のいずれか1項に記載の方法。
- 前記キャップ類似体が、ジヌクレオチドキャップ、トリヌクレオチドキャップ、またはテトラヌクレオチドキャップである、請求項49〜54のいずれか1項に記載の方法。
- 前記キャップが、以下の配列:GAA、GAC、GAG、GAU、GCA、GCC、GCG、GCU、GGA、GGC、GGG、GGU、GUA、GUC、GUG、及びGUUから選択される配列を含む、請求項55に記載の方法。
- 前記トリヌクレオチドキャップが、以下の配列:
(a)m7GpppApA、m7GpppApC、m7GpppApG、m7GpppApU、m7GpppCpA、m7GpppCpC、m7GpppCpG、m7GpppCpU、m7GpppGpA、m7GpppGpC、m7GpppGpG、m7GpppGpU、m7GpppUpA、m7GpppUpC、m7GpppUpG、及びm7GpppUpU;
(b)m7G3′OMepppApA、m7G3′OMepppApC、m7G3′OMepppApG、m7G3′OMepppApU、m7G3′OMepppCpA、m7G3′OMepppCpC、m7G3′OMepppCpG、m7G3′OMepppCpU、m7G3′OMepppGpA、m7G3′OMepppGpC、m7G3′OMepppGpG、m7G3′OMepppGpU、m7G3′OMepppUpA、m7G3′OMepppUpC、m7G3′OMepppUpG、及びm7G3′OMepppUpU;
(c)m7G3′OMepppA2′OMepA、m7G3′OMepppA2′OMepC、m7G3′OMepppA2′OMepG、m7G3′OMepppA2′OMepU、m7G3′OMepppC2′OMepA、m7G3′OMepppC2′OMepC、m7G3′OMepppC2′OMepG、m7G3′OMepppC2′OMepU、m7G3′OMepppG2′OMepA、m7G3′OMepppG2′OMepC、m7G3′OMepppG2′OMepG、m7G3′OMepppG2′OMepU、m7G3′OMepppU2′OMepA、m7G3′OMepppU2′OMepC、m7G3′OMepppU2′OMepG、及びm7G3′OMepppU2′OMepU;または
(d)m7GpppA2′OMepA、m7GpppA2′OMepC、m7GpppA2′OMepG、m7GpppA2′OMepU、m7GpppC2′OMepA、m7GpppC2′OMepC、m7GpppC2′OMepG、m7GpppC2′OMepU、m7GpppG2′OMepA、m7GpppG2′OMepC、m7GpppG2′OMepG、m7GpppG2′OMepU、m7GpppU2′OMepA、m7GpppU2′OMepC、m7GpppU2′OMepG、及びm7GpppU2′OMepUから選択される配列を含む、請求項56に記載の方法。 - 前記トリヌクレオチドキャップが、以下の配列:GAG、GCG、GUG、及びGGGから選択される配列を含む、請求項56または57に記載の方法。
- 前記トリヌクレオチドキャップが、配列GAGを含む、請求項58に記載の方法。
- 前記トリヌクレオチドキャップが、GpppA2′OmepGを含む、請求項59に記載の方法。
- 前記ポリヌクレオチド鋳型が、鋳型位置+1に2´−デオキシチミジン残基を含む、請求項49〜60のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ポリヌクレオチド鋳型が、鋳型位置+1に2´−デオキシシチジン残基を含む、請求項49〜60のいずれか1項に記載の方法。
- RNA合成のための共転写キャッピング方法であって、RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型を(a)T7 RNAポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれてRNAポリメラーゼバリアントの少なくとも1つのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせる少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、前記T7 RNAポリメラーゼバリアント、(b)ヌクレオシド三リン酸、及び(c)配列GpppA2′OmepGを含むトリヌクレオチドキャップと反応させることを含み、前記ポリヌクレオチド鋳型が、鋳型位置+1に2´−デオキシチミジン残基を含む、前記方法。
- 前記生成されたRNA転写物が、任意選択により未精製の形態で、細胞に送達されたときに、検出可能なサイトカイン応答を刺激しないか、またはベースライン対照を上回るサイトカイン応答を刺激しない、請求項49〜63のいずれか1項に記載の方法。
- インビトロ転写(IVT)RNA及び薬学的に許容される賦形剤を含む組成物であって、IVT後の精製なしでサイトカイン誘導RNA混入物を実質的に含まない、前記組成物。
- インビトロ転写(IVT)RNA及び薬学的に許容される賦形剤を含む組成物であって、5%未満のキャップされていないRNA種を含む、前記組成物。
- 前記IVT RNAの80%超、85%超、90%超、または95%超が機能性キャップを含む、請求項65または66に記載の組成物。
- 前記IVT RNAが化学修飾されていない、請求項65〜67のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記IVT RNAが化学修飾されている、請求項65〜67のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記IVT RNAの95%超が、一本鎖完全長転写物を含む、請求項65〜69のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記RNAが、
RNA転写物を生成するためのインビトロ転写反応条件下で、ポリヌクレオチド鋳型を(a)T7 RNAポリメラーゼバリアントであって、野生型RNAポリメラーゼと比較して、前記RNAポリメラーゼバリアントが開始複合体から伸長複合体に移行するにつれてRNAポリメラーゼバリアントの少なくとも1つのループ構造にヘリックス構造へのコンフォメーション変化を受けさせる少なくとも1つのアミノ酸置換を含む、前記T7 RNAポリメラーゼバリアント、(b)ヌクレオシド三リン酸、及び(c)配列GpppA2′OmepGを含むトリヌクレオチドキャップと反応させることを含むプロセスによって生成され、前記ポリヌクレオチド鋳型が、鋳型位置+1に2´−デオキシチミジン残基を含む、請求項65〜70のいずれか1項に記載の組成物。 - 野生型T7 RNAポリメラーゼと少なくとも90%の同一性を有し、(a)配列番号1のアミノ酸47位に対応するアミノ酸位置のアラニン及び(b)追加のC末端グリシンを含むように修飾されているアミノ酸配列を含む、T7リボ核酸(RNA)ポリメラーゼ。
- トリヌクレオチドキャップをさらに含む、請求項72に記載のT7 RNAポリメラーゼ。
- 前記トリヌクレオチドキャップが、GpppA2′OmepGである、請求項73に記載のT7 RNAポリメラーゼ。
- 野生型T7 RNAポリメラーゼと少なくとも90%の同一性を有し、(a)配列番号1のアミノ酸43位に対応するアミノ酸位置のアラニン及び(b)追加のC末端グリシンを含むように修飾されているアミノ酸配列を含む、T7リボ核酸(RNA)ポリメラーゼ。
- トリヌクレオチドキャップをさらに含む、請求項75に記載のT7 RNAポリメラーゼ。
- 前記トリヌクレオチドキャップが、GpppA2′OmepGである、請求項76に記載のT7 RNAポリメラーゼ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023105367A JP2023129421A (ja) | 2017-08-18 | 2023-06-27 | Rnaポリメラーゼバリアント |
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762547677P | 2017-08-18 | 2017-08-18 | |
US62/547,677 | 2017-08-18 | ||
US201862628484P | 2018-02-09 | 2018-02-09 | |
US62/628,484 | 2018-02-09 | ||
US201862638684P | 2018-03-05 | 2018-03-05 | |
US62/638,684 | 2018-03-05 | ||
US201862677527P | 2018-05-29 | 2018-05-29 | |
US62/677,527 | 2018-05-29 | ||
PCT/US2018/046989 WO2019036682A1 (en) | 2017-08-18 | 2018-08-17 | RNA VARIANTS POLYMERASE |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023105367A Division JP2023129421A (ja) | 2017-08-18 | 2023-06-27 | Rnaポリメラーゼバリアント |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020532963A true JP2020532963A (ja) | 2020-11-19 |
JP2020532963A5 JP2020532963A5 (ja) | 2021-09-30 |
JP7408098B2 JP7408098B2 (ja) | 2024-01-05 |
Family
ID=65362870
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020509060A Active JP7408098B2 (ja) | 2017-08-18 | 2018-08-17 | Rnaポリメラーゼバリアント |
JP2023105367A Pending JP2023129421A (ja) | 2017-08-18 | 2023-06-27 | Rnaポリメラーゼバリアント |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023105367A Pending JP2023129421A (ja) | 2017-08-18 | 2023-06-27 | Rnaポリメラーゼバリアント |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US10526629B2 (ja) |
EP (1) | EP3668971B8 (ja) |
JP (2) | JP7408098B2 (ja) |
CN (1) | CN111212905A (ja) |
MA (1) | MA49913A (ja) |
WO (1) | WO2019036682A1 (ja) |
Families Citing this family (83)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9464124B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-10-11 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
LT3134131T (lt) | 2014-04-23 | 2022-02-10 | Modernatx, Inc. | Nukleorūgšties vakcinos |
US11364292B2 (en) | 2015-07-21 | 2022-06-21 | Modernatx, Inc. | CHIKV RNA vaccines |
EP4218805A1 (en) | 2015-07-21 | 2023-08-02 | ModernaTX, Inc. | Infectious disease vaccines |
US11564893B2 (en) | 2015-08-17 | 2023-01-31 | Modernatx, Inc. | Methods for preparing particles and related compositions |
WO2017070624A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Modernatx, Inc. | Tropical disease vaccines |
TW201729838A (zh) | 2015-10-22 | 2017-09-01 | 現代公司 | 用於水痘帶狀疱疹病毒 (vzv)之核酸疫苗 |
MA46316A (fr) | 2015-10-22 | 2021-03-24 | Modernatx Inc | Vaccin contre le cytomégalovirus humain |
EP4011451A1 (en) | 2015-10-22 | 2022-06-15 | ModernaTX, Inc. | Metapneumovirus mrna vaccines |
SI3386484T1 (sl) | 2015-12-10 | 2022-06-30 | Modernatx, Inc. | Sestave in metode za dovajanje terapevtskih sredstev |
ES2928475T3 (es) | 2016-09-14 | 2022-11-18 | Modernatx Inc | Composiciones de ARN de alta pureza y métodos para su preparación |
CA3041307A1 (en) | 2016-10-21 | 2018-04-26 | Giuseppe Ciaramella | Human cytomegalovirus vaccine |
EP3538146A4 (en) | 2016-11-11 | 2020-07-15 | ModernaTX, Inc. | INFLUENZA VACCINE |
EP3551193A4 (en) | 2016-12-08 | 2020-08-19 | Modernatx, Inc. | NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUSES |
EP3555289A1 (en) | 2016-12-13 | 2019-10-23 | ModernaTX, Inc. | Rna affinity purification |
US11045540B2 (en) | 2017-03-15 | 2021-06-29 | Modernatx, Inc. | Varicella zoster virus (VZV) vaccine |
US11464848B2 (en) | 2017-03-15 | 2022-10-11 | Modernatx, Inc. | Respiratory syncytial virus vaccine |
WO2018170256A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Herpes simplex virus vaccine |
MA52262A (fr) | 2017-03-15 | 2020-02-19 | Modernatx Inc | Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe |
MA47790A (fr) | 2017-03-17 | 2021-05-05 | Modernatx Inc | Vaccins à base d'arn contre des maladies zoonotiques |
US11905525B2 (en) | 2017-04-05 | 2024-02-20 | Modernatx, Inc. | Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins |
MA49421A (fr) | 2017-06-15 | 2020-04-22 | Modernatx Inc | Formulations d'arn |
CN111212905A (zh) | 2017-08-18 | 2020-05-29 | 摩登纳特斯有限公司 | Rna聚合酶变体 |
MA49914A (fr) | 2017-08-18 | 2021-04-21 | Modernatx Inc | Procédés analytiques par hplc |
WO2019036685A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Modernatx, Inc. | METHODS FOR HPLC ANALYSIS |
CN111315359A (zh) | 2017-08-31 | 2020-06-19 | 摩登纳特斯有限公司 | 制备脂质纳米颗粒的方法 |
WO2019055807A1 (en) | 2017-09-14 | 2019-03-21 | Modernatx, Inc. | RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS |
MA54676A (fr) | 2018-01-29 | 2021-11-17 | Modernatx Inc | Vaccins à base d'arn contre le vrs |
US11072808B2 (en) * | 2018-10-04 | 2021-07-27 | New England Biolabs, Inc. | Methods and compositions for increasing capping efficiency of transcribed RNA |
US11351242B1 (en) | 2019-02-12 | 2022-06-07 | Modernatx, Inc. | HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition |
MX2021010075A (es) | 2019-02-20 | 2021-12-10 | Modernatx Inc | Variantes de arn polimerasa para la formacion de casquetes cotranscripcionales. |
US11851694B1 (en) | 2019-02-20 | 2023-12-26 | Modernatx, Inc. | High fidelity in vitro transcription |
AU2020239037A1 (en) * | 2019-03-11 | 2021-09-30 | Modernatx, Inc. | Fed-batch in vitro transcription process |
KR20220133224A (ko) | 2020-01-28 | 2022-10-04 | 모더나티엑스, 인크. | 코로나바이러스 rna 백신 |
JP7438604B2 (ja) | 2020-02-07 | 2024-02-27 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | SARS-COV-2 mRNAドメインワクチン |
AU2021261471A1 (en) | 2020-04-22 | 2022-11-17 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
WO2021222304A1 (en) | 2020-04-27 | 2021-11-04 | Modernatx, Inc. | Sars-cov-2 rna vaccines |
WO2021159130A2 (en) | 2020-05-15 | 2021-08-12 | Modernatx, Inc. | Coronavirus rna vaccines and methods of use |
US11406703B2 (en) | 2020-08-25 | 2022-08-09 | Modernatx, Inc. | Human cytomegalovirus vaccine |
EP4217371A1 (en) | 2020-09-25 | 2023-08-02 | ModernaTX, Inc. | Multi-proline-substituted coronavirus spike protein vaccines |
AU2021360796A1 (en) | 2020-10-14 | 2023-06-08 | RNAimmune, Inc. | PAN-RAS mRNA CANCER VACCINES |
TW202231651A (zh) * | 2020-10-15 | 2022-08-16 | 美商崔斯雷生物公司 | 大規模合成訊息rna |
US20230382943A1 (en) * | 2020-10-20 | 2023-11-30 | St Pharm Co., Ltd. | Oligonucleotide for 5'-capped rna synthesis |
WO2022150717A1 (en) | 2021-01-11 | 2022-07-14 | Modernatx, Inc. | Seasonal rna influenza virus vaccines |
CN112831484B (zh) * | 2021-01-13 | 2022-09-20 | 华中科技大学 | T7-rna聚合酶突变体及其应用 |
US20240100151A1 (en) | 2021-01-15 | 2024-03-28 | Moderna TX, Inc. | Variant strain-based coronavirus vaccines |
WO2022155530A1 (en) | 2021-01-15 | 2022-07-21 | Modernatx, Inc. | Variant strain-based coronavirus vaccines |
US11524023B2 (en) | 2021-02-19 | 2022-12-13 | Modernatx, Inc. | Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same |
AU2022237382A1 (en) | 2021-03-15 | 2023-09-28 | Modernatx, Inc. | Therapeutic use of sars-cov-2 mrna domain vaccines |
WO2022212711A2 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Modernatx, Inc. | Methods for identification and ratio determination of rna species in multivalent rna compositions |
WO2022221335A1 (en) | 2021-04-13 | 2022-10-20 | Modernatx, Inc. | Respiratory virus combination vaccines |
AU2022258463A1 (en) | 2021-04-14 | 2023-11-23 | Modernatx, Inc. | Influenza-coronavirus combination vaccines |
WO2022245888A1 (en) | 2021-05-19 | 2022-11-24 | Modernatx, Inc. | Seasonal flu rna vaccines and methods of use |
WO2022266389A1 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Modernatx, Inc. | Alternative rna purification strategies |
TW202321446A (zh) | 2021-08-13 | 2023-06-01 | 美商現代公司 | 多管柱層析mRNA純化 |
WO2023031788A1 (en) * | 2021-09-01 | 2023-03-09 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | T7 rna polymerase variants for rna synthesis |
WO2023069498A1 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Senda Biosciences, Inc. | Mrna vaccine composition |
WO2023076658A1 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Modernatx, Inc. | Mass spectrometry of mrna |
WO2023081311A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | Modernatx, Inc. | Methods of purifying dna for gene synthesis |
WO2023092069A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Modernatx, Inc. | Sars-cov-2 mrna domain vaccines and methods of use |
WO2023096858A1 (en) | 2021-11-23 | 2023-06-01 | Senda Biosciences, Inc. | A bacteria-derived lipid composition and use thereof |
WO2023107999A2 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-15 | Modernatx, Inc. | Herpes simplex virus mrna vaccines |
WO2023122080A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Senda Biosciences, Inc. | Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs |
WO2023132885A1 (en) | 2022-01-04 | 2023-07-13 | Modernatx, Inc. | Methods of purifying dna for gene synthesis |
WO2023137149A1 (en) | 2022-01-14 | 2023-07-20 | Modernatx, Inc. | In vitro transcription dna purification and recycling |
WO2023147352A1 (en) * | 2022-01-27 | 2023-08-03 | Trilink Biotechnologies, Llc | Trinucleotide cap analogs and methods of use thereof |
WO2023196914A1 (en) | 2022-04-08 | 2023-10-12 | Modernatx, Inc. | Influenza nucleic acid compositions and uses thereof |
WO2023201204A1 (en) | 2022-04-11 | 2023-10-19 | Modernatx, Inc. | Detection of mrna purity in a mixture |
WO2023201296A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Modernatx, Inc. | Ribosomal engagement potency assay |
CN114703162B (zh) * | 2022-04-24 | 2023-08-08 | 江南大学 | 一种具有高转录活性的t7 rna聚合酶突变体及其应用 |
WO2023225524A1 (en) | 2022-05-17 | 2023-11-23 | Modernatx, Inc. | Preparation of highly concentrated mrna |
WO2023230481A1 (en) | 2022-05-24 | 2023-11-30 | Modernatx, Inc. | Orthopoxvirus vaccines |
WO2023235362A1 (en) * | 2022-05-31 | 2023-12-07 | Nutcracker Therapeutics, Inc. | Rna cap analogs and methods of use |
WO2023250119A1 (en) | 2022-06-24 | 2023-12-28 | Modernatx, Inc. | Methods of producing rna |
US11878055B1 (en) | 2022-06-26 | 2024-01-23 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
WO2024010993A1 (en) | 2022-07-06 | 2024-01-11 | Modernatx, Inc. | Primer design for cell-free dna production |
WO2024015890A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Modernatx, Inc. | Norovirus mrna vaccines |
WO2024026287A2 (en) * | 2022-07-25 | 2024-02-01 | University Of Utah Research Foundation | Synthesis of substoichiometric chemically modified mrnas by in vitro transcription |
WO2024026005A1 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Modernatx, Inc. | Methods of rna purification |
WO2024044741A2 (en) * | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Trilink Biotechnologies, Llc | Efficient method for making highly purified 5'-capped oligonucleotides |
WO2024050483A1 (en) | 2022-08-31 | 2024-03-07 | Modernatx, Inc. | Variant strain-based coronavirus vaccines and uses thereof |
WO2024102434A1 (en) | 2022-11-10 | 2024-05-16 | Senda Biosciences, Inc. | Rna compositions comprising lipid nanoparticles or lipid reconstructed natural messenger packs |
CN116926098A (zh) * | 2023-07-31 | 2023-10-24 | 态创生物科技(广州)有限公司 | 增强t7rnap对胶原蛋白/弹力蛋白转录活性的定向进化系统和方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011223982A (ja) * | 2010-03-30 | 2011-11-10 | Tosoh Corp | T7rnaポリメラーゼ融合蛋白質 |
WO2017123748A1 (en) * | 2016-01-13 | 2017-07-20 | New England Biolabs, Inc. | Thermostable variants of t7 rna polymerase |
Family Cites Families (179)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2279675A1 (en) | 1995-12-15 | 1997-06-16 | Enzo Therapeutics, Inc. | Property effecting and/or property exhibiting constructs for localizing a nucleic acid construct within a cell for therapeutic and diagnostic uses |
FR2822164B1 (fr) | 2001-03-19 | 2004-06-18 | Centre Nat Rech Scient | Polypeptides derives des arn polymerases, et leurs utilisations |
TR201909609T4 (tr) | 2005-08-23 | 2019-07-22 | Univ Pennsylvania | Modifiye edilmiş nükleosidleri içeren rna ve kullanım yöntemleri. |
US9012219B2 (en) * | 2005-08-23 | 2015-04-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells |
AU2007238624B2 (en) | 2006-04-14 | 2012-05-31 | Cellscript, Llc | Kits and methods for generating 5' capped RNA |
WO2009021191A2 (en) | 2007-08-08 | 2009-02-12 | Barnes Wayne M | Improved t7 expression system |
KR20110044753A (ko) * | 2008-08-08 | 2011-04-29 | 토소가부시키가이샤 | 기능 개선된 rna 중합효소 변이체 |
CN105331633A (zh) | 2009-08-21 | 2016-02-17 | 梅里亚有限公司 | 重组禽副粘病毒疫苗及其制备和使用方法 |
US9193959B2 (en) | 2010-04-16 | 2015-11-24 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | T7 RNA polymerase variants with enhanced thermostability |
EP2377938A1 (en) | 2010-04-16 | 2011-10-19 | Eukarys | Capping-prone RNA polymerase enzymes and their applications |
US8822663B2 (en) | 2010-08-06 | 2014-09-02 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
PL3590949T3 (pl) | 2010-10-01 | 2022-08-29 | Modernatx, Inc. | Kwasy rybonukleinowe zawierające n1-metylo-pseudouracyle i ich zastosowania |
AU2012236099A1 (en) | 2011-03-31 | 2013-10-03 | Moderna Therapeutics, Inc. | Delivery and formulation of engineered nucleic acids |
ES2538694T3 (es) * | 2011-04-01 | 2015-06-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Variantes de la T7 ARN polimerasa con sustituciones de Cisteína-Serina |
CN103703141B (zh) | 2011-04-08 | 2016-08-17 | 伯乐实验室公司 | 具有降低的非特异性活性的pcr反应混合物 |
BR112013029490A2 (pt) | 2011-05-17 | 2019-09-24 | Moderna Therapeutics Inc | ácidos nucleicos projetados e métodos de uso dos mesmos para vertebrados não humanos |
ES2752081T3 (es) | 2011-06-16 | 2020-04-02 | Univ California | Complejos génicos sintéticos |
US9464124B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-10-11 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
EP3384938A1 (en) | 2011-09-12 | 2018-10-10 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
FR2981088B1 (fr) | 2011-10-06 | 2013-11-29 | Biomerieux Sa | Arn polymerases mutees |
US20140378538A1 (en) | 2011-12-14 | 2014-12-25 | Moderma Therapeutics, Inc. | Methods of responding to a biothreat |
LT2791160T (lt) | 2011-12-16 | 2022-06-10 | Modernatx, Inc. | Modifikuotos mrnr sudėtys |
RU2014129863A (ru) | 2011-12-21 | 2016-02-10 | Модерна Терапьютикс, Инк. | Способы повышения жизнеспособности или увеличения продолжительности жизни органа или экспланта органа |
DK3421601T3 (da) * | 2011-12-30 | 2020-02-24 | Cellscript Llc | Fremstilling og anvendelse af in-vitro-syntetiseret ssRNA til indføring i pattedyrceller med henblik på at inducere en biologisk eller biokemisk effekt |
US9045740B2 (en) | 2012-02-24 | 2015-06-02 | University Of Massachusetts | Modified T7-related RNA polymerases and methods of use thereof |
US20150368625A1 (en) | 2012-03-27 | 2015-12-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Artificial sigma factors based on bisected t7 rna polymerase |
US9283287B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-03-15 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins |
AU2013243951A1 (en) | 2012-04-02 | 2014-10-30 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of secreted proteins |
US10501512B2 (en) | 2012-04-02 | 2019-12-10 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides |
US10501513B2 (en) | 2012-04-02 | 2019-12-10 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides |
WO2014028429A2 (en) | 2012-08-14 | 2014-02-20 | Moderna Therapeutics, Inc. | Enzymes and polymerases for the synthesis of rna |
US20150376581A1 (en) | 2012-10-29 | 2015-12-31 | Technische Universitaet Dortmund | T7 rna polymerase variants and methods of using the same |
JP6144355B2 (ja) | 2012-11-26 | 2017-06-07 | モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX,Inc. | 化学修飾mRNA |
US20150315541A1 (en) | 2012-12-13 | 2015-11-05 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for altering cell phenotype |
EP2931319B1 (en) | 2012-12-13 | 2019-08-21 | ModernaTX, Inc. | Modified nucleic acid molecules and uses thereof |
EP2968391A1 (en) | 2013-03-13 | 2016-01-20 | Moderna Therapeutics, Inc. | Long-lived polynucleotide molecules |
US10258698B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-04-16 | Modernatx, Inc. | Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions |
WO2014144039A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Moderna Therapeutics, Inc. | Characterization of mrna molecules |
US10590161B2 (en) | 2013-03-15 | 2020-03-17 | Modernatx, Inc. | Ion exchange purification of mRNA |
EP2971161B1 (en) | 2013-03-15 | 2018-12-26 | ModernaTX, Inc. | Ribonucleic acid purification |
US8980864B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-03-17 | Moderna Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of altering cholesterol levels |
EP2971033B8 (en) | 2013-03-15 | 2019-07-10 | ModernaTX, Inc. | Manufacturing methods for production of rna transcripts |
DK3019619T3 (da) | 2013-07-11 | 2021-10-11 | Modernatx Inc | Sammensætninger, der omfatter syntetiske polynukleotider, som koder for crispr-beslægtede proteiner, og syntetiske sgrna'er, og anvendelsesfremgangsmåder |
US10023626B2 (en) | 2013-09-30 | 2018-07-17 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides |
WO2015051169A2 (en) | 2013-10-02 | 2015-04-09 | Moderna Therapeutics, Inc. | Polynucleotide molecules and uses thereof |
EA201690675A1 (ru) | 2013-10-03 | 2016-08-31 | Модерна Терапьютикс, Инк. | Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности |
AU2014337156A1 (en) | 2013-10-18 | 2016-05-12 | Modernatx, Inc. | Compositions and methods for tolerizing cellular systems |
MX2016012206A (es) * | 2014-03-20 | 2017-04-06 | Univ Texas | Variantes de t7 rna polimerasa con rango de substrato expandido y rendimiento de transcripcion mejorado. |
LT3134131T (lt) | 2014-04-23 | 2022-02-10 | Modernatx, Inc. | Nukleorūgšties vakcinos |
WO2015196128A2 (en) | 2014-06-19 | 2015-12-23 | Moderna Therapeutics, Inc. | Alternative nucleic acid molecules and uses thereof |
JP2017524357A (ja) | 2014-07-16 | 2017-08-31 | モデルナティエックス インコーポレイテッドModernaTX,Inc. | キメラポリヌクレオチド |
WO2016011306A2 (en) | 2014-07-17 | 2016-01-21 | Moderna Therapeutics, Inc. | Terminal modifications of polynucleotides |
WO2016118724A1 (en) | 2015-01-21 | 2016-07-28 | Moderna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle compositions |
WO2016164762A1 (en) | 2015-04-08 | 2016-10-13 | Moderna Therapeutics, Inc. | Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor egf-a and intracellular domain mutants and methods of using the same |
US11608513B2 (en) | 2015-05-29 | 2023-03-21 | CureVac SE | Method for adding cap structures to RNA using immobilized enzymes |
WO2016201377A1 (en) | 2015-06-10 | 2016-12-15 | Moderna Therapeutics, Inc. | Targeted adaptive vaccines |
WO2017011773A2 (en) | 2015-07-15 | 2017-01-19 | Modernatx, Inc. | Codon-optimized nucleic acids encoding antibodies |
WO2017015457A1 (en) | 2015-07-21 | 2017-01-26 | Modernatx, Inc. | Ebola vaccine |
EP4218805A1 (en) | 2015-07-21 | 2023-08-02 | ModernaTX, Inc. | Infectious disease vaccines |
EP3328394A4 (en) | 2015-07-30 | 2019-03-13 | ModernaTX, Inc. | PEPTIDE CONCATEMERIC EPITAOPE RNA |
WO2017019935A1 (en) | 2015-07-30 | 2017-02-02 | Modernatx, Inc. | Multimeric mrna |
US20180237849A1 (en) | 2015-08-17 | 2018-08-23 | Modernatx, Inc. | Rna mapping/fingerprinting |
US11564893B2 (en) | 2015-08-17 | 2023-01-31 | Modernatx, Inc. | Methods for preparing particles and related compositions |
ES2969082T3 (es) | 2015-09-17 | 2024-05-16 | Modernatx Inc | Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos |
SI3954225T1 (sl) * | 2015-09-21 | 2024-03-29 | Trilink Biotechnologies, Llc | Iniciacijski omejeni oligonukleotidni primer za sintezo 5'-omejenih RNK |
EP3359670B2 (en) | 2015-10-05 | 2024-02-14 | ModernaTX, Inc. | Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs |
CN108473969B (zh) | 2015-10-14 | 2022-09-13 | 川斯勒佰尔公司 | 用于增强生产的rna相关酶的修饰 |
WO2017066789A1 (en) * | 2015-10-16 | 2017-04-20 | Modernatx, Inc. | Mrna cap analogs with modified sugar |
WO2017070624A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Modernatx, Inc. | Tropical disease vaccines |
TW201729838A (zh) | 2015-10-22 | 2017-09-01 | 現代公司 | 用於水痘帶狀疱疹病毒 (vzv)之核酸疫苗 |
EP4011451A1 (en) | 2015-10-22 | 2022-06-15 | ModernaTX, Inc. | Metapneumovirus mrna vaccines |
MA46316A (fr) | 2015-10-22 | 2021-03-24 | Modernatx Inc | Vaccin contre le cytomégalovirus humain |
CN108430456B (zh) | 2015-10-22 | 2022-01-18 | 摩登纳特斯有限公司 | 癌症疫苗 |
MA46317A (fr) | 2015-10-22 | 2019-08-07 | Modernatx Inc | Vaccin contre le virus respiratoire syncytial |
MA45209A (fr) | 2015-10-22 | 2019-04-17 | Modernatx Inc | Vaccins contre les maladies sexuellement transmissibles |
PE20181531A1 (es) | 2015-10-22 | 2018-09-26 | Modernatx Inc | Vacuna del virus herpes simple |
CA3003103A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Modernatx, Inc. | Broad spectrum influenza virus vaccine |
SI3386484T1 (sl) | 2015-12-10 | 2022-06-30 | Modernatx, Inc. | Sestave in metode za dovajanje terapevtskih sredstev |
AU2016369612B2 (en) | 2015-12-17 | 2023-06-01 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding methylmalonyl-CoA mutase |
JP7114465B2 (ja) | 2015-12-22 | 2022-08-08 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | 薬剤の細胞内送達のための化合物および組成物 |
US10465190B1 (en) | 2015-12-23 | 2019-11-05 | Modernatx, Inc. | In vitro transcription methods and constructs |
WO2017127750A1 (en) | 2016-01-22 | 2017-07-27 | Modernatx, Inc. | Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof |
WO2017201342A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding jagged1 for the treatment of alagille syndrome |
US20200085916A1 (en) | 2016-05-18 | 2020-03-19 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding porphobilinogen deaminase for the treatment of acute intermittent porphyria |
AU2017266932B2 (en) | 2016-05-18 | 2023-04-20 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding alpha-galactosidase A for the treatment of Fabry disease |
MA45041A (fr) | 2016-05-18 | 2019-03-27 | Modernatx Inc | Polynucléotides codant pour la galactose-1-phosphate uridylyltransférase destinés au traitement de la galactosémie de type 1 |
WO2017201332A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding acyl-coa dehydrogenase, very long-chain for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency |
CA3024500A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding relaxin |
WO2017201317A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Polyribonucleotides containing reduced uracil content and uses thereof |
SI3458083T1 (sl) | 2016-05-18 | 2023-03-31 | Modernatx, Inc. | Polinukleotidi, ki kodirajo interlevkin-12 (IL12) in njihova uporaba |
CA3024625A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding citrin for the treatment of citrullinemia type 2 |
US20190390181A1 (en) | 2016-05-18 | 2019-12-26 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides Encoding Lipoprotein Lipase for the Treatment of Hyperlipidemia |
CA3024509A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Mrna combination therapy for the treatment of cancer |
WO2017201347A1 (en) | 2016-05-18 | 2017-11-23 | Modernatx, Inc. | Polynucleotides encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator for the treatment of cystic fibrosis |
AU2017286606A1 (en) | 2016-06-14 | 2018-12-13 | Modernatx, Inc. | Stabilized formulations of lipid nanoparticles |
ES2928475T3 (es) * | 2016-09-14 | 2022-11-18 | Modernatx Inc | Composiciones de ARN de alta pureza y métodos para su preparación |
US10487105B2 (en) | 2016-10-19 | 2019-11-26 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Trinucleotide MRNA cap analogs |
CA3041307A1 (en) | 2016-10-21 | 2018-04-26 | Giuseppe Ciaramella | Human cytomegalovirus vaccine |
SG11201903674YA (en) | 2016-10-26 | 2019-05-30 | Modernatx Inc | Messenger ribonucleic acids for enhancing immune responses and methods of use thereof |
EP3532613A4 (en) | 2016-10-26 | 2020-05-06 | ModernaTX, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR RNA MAPPING |
WO2018081788A1 (en) | 2016-10-31 | 2018-05-03 | Cornell University | Methods of enhancing translation ability and stability of rna molecules, treatments, and kits |
WO2018089540A1 (en) | 2016-11-08 | 2018-05-17 | Modernatx, Inc. | Stabilized formulations of lipid nanoparticles |
EP3538146A4 (en) | 2016-11-11 | 2020-07-15 | ModernaTX, Inc. | INFLUENZA VACCINE |
EP3551193A4 (en) | 2016-12-08 | 2020-08-19 | Modernatx, Inc. | NUCLEIC ACID VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUSES |
EP3555289A1 (en) | 2016-12-13 | 2019-10-23 | ModernaTX, Inc. | Rna affinity purification |
US20180243225A1 (en) | 2017-01-25 | 2018-08-30 | Modernatx, Inc. | Ebola/marburg vaccines |
SG10202108307YA (en) | 2017-02-01 | 2021-08-30 | Modernatx Inc | Rna cancer vaccines |
MX2019009070A (es) | 2017-02-01 | 2019-10-30 | Modernatx Inc | Composiciones de arnm terapeuticas inmunomoduladoras que codifican peptidos de mutacion de oncogenes de activacion. |
EP3577221A4 (en) | 2017-02-01 | 2020-12-23 | ModernaTX, Inc. | SECONDARY POLYNUCLEOTIDE STRUCTURE |
EP3582790A4 (en) | 2017-02-16 | 2020-11-25 | ModernaTX, Inc. | VERY POWERFUL IMMUNOGENIC COMPOSITIONS |
WO2018157009A1 (en) | 2017-02-24 | 2018-08-30 | Modernatx, Inc. | Nucleic acid-based therapy of muscular dystrophies |
US11464848B2 (en) | 2017-03-15 | 2022-10-11 | Modernatx, Inc. | Respiratory syncytial virus vaccine |
US11045540B2 (en) | 2017-03-15 | 2021-06-29 | Modernatx, Inc. | Varicella zoster virus (VZV) vaccine |
MA52262A (fr) | 2017-03-15 | 2020-02-19 | Modernatx Inc | Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe |
WO2018170256A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Herpes simplex virus vaccine |
CA3055653A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Lipid nanoparticle formulation |
FI3596041T3 (fi) | 2017-03-15 | 2023-01-31 | Yhdiste ja koostumuksia terapeuttisten aineiden antamiseen solun sisään | |
MA47790A (fr) | 2017-03-17 | 2021-05-05 | Modernatx Inc | Vaccins à base d'arn contre des maladies zoonotiques |
WO2018175783A1 (en) | 2017-03-22 | 2018-09-27 | Modernatx, Inc. | Rna bacterial vaccines |
US11905525B2 (en) | 2017-04-05 | 2024-02-20 | Modernatx, Inc. | Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins |
WO2018200737A1 (en) | 2017-04-26 | 2018-11-01 | Modernatx, Inc. | Herpes simplex virus vaccine |
MA49421A (fr) | 2017-06-15 | 2020-04-22 | Modernatx Inc | Formulations d'arn |
WO2018232355A1 (en) | 2017-06-15 | 2018-12-20 | Modernatx, Inc. | Rna antibodies |
US10034951B1 (en) * | 2017-06-21 | 2018-07-31 | New England Biolabs, Inc. | Use of thermostable RNA polymerases to produce RNAs having reduced immunogenicity |
EP3645711A4 (en) | 2017-06-30 | 2021-04-21 | Codexis, Inc. | T7 RNA POLYMERASE VARIANTS |
WO2019005539A1 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Codexis, Inc. | T7 POLYMERASE RNA VARIANTS |
CN111212905A (zh) | 2017-08-18 | 2020-05-29 | 摩登纳特斯有限公司 | Rna聚合酶变体 |
US20200254086A1 (en) | 2017-08-18 | 2020-08-13 | Moderna TX, Inc. | Efficacious mrna vaccines |
MA49914A (fr) | 2017-08-18 | 2021-04-21 | Modernatx Inc | Procédés analytiques par hplc |
WO2019036685A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Modernatx, Inc. | METHODS FOR HPLC ANALYSIS |
CN111315359A (zh) | 2017-08-31 | 2020-06-19 | 摩登纳特斯有限公司 | 制备脂质纳米颗粒的方法 |
WO2019055807A1 (en) | 2017-09-14 | 2019-03-21 | Modernatx, Inc. | RNA VACCINES AGAINST ZIKA VIRUS |
DK3703658T3 (da) | 2017-10-31 | 2022-07-18 | Astrazeneca Ab | Lipidnanopartikler til administration af modificeret rna, der koder for et vegf-a-polypeptid |
US20190192646A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-06-27 | Modernatx, Inc. | Salmonella vaccines |
CA3083102A1 (en) | 2017-11-21 | 2019-05-31 | Modernatx, Inc. | Epstein-barr virus vaccines |
MA54676A (fr) | 2018-01-29 | 2021-11-17 | Modernatx Inc | Vaccins à base d'arn contre le vrs |
KR20210038886A (ko) | 2018-06-27 | 2021-04-08 | 모더나티엑스, 인크. | 개인화된 암 백신 에피토프 선택 |
WO2020056370A1 (en) | 2018-09-13 | 2020-03-19 | Modernatx, Inc. | Modified mrna for the treatment of progressive familial intrahepatic cholestasis disorders |
US20220047518A1 (en) | 2018-09-19 | 2022-02-17 | Moderna TX, Inc. | Peg lipids and uses thereof |
JP7410135B2 (ja) | 2018-09-19 | 2024-01-09 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | 治療薬の細胞内送達のための化合物及び組成物 |
EP3853305A1 (en) | 2018-09-19 | 2021-07-28 | ModernaTX, Inc. | High-purity peg lipids and uses thereof |
CN113271926A (zh) | 2018-09-20 | 2021-08-17 | 摩登纳特斯有限公司 | 脂质纳米颗粒的制备及其施用方法 |
WO2020097291A1 (en) | 2018-11-07 | 2020-05-14 | Modernatx, Inc. | Rna cancer vaccines |
SG11202108100PA (en) | 2019-01-31 | 2021-08-30 | Modernatx Inc | Methods of preparing lipid nanoparticles |
US11351242B1 (en) | 2019-02-12 | 2022-06-07 | Modernatx, Inc. | HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition |
MX2021010075A (es) | 2019-02-20 | 2021-12-10 | Modernatx Inc | Variantes de arn polimerasa para la formacion de casquetes cotranscripcionales. |
AU2020239037A1 (en) | 2019-03-11 | 2021-09-30 | Modernatx, Inc. | Fed-batch in vitro transcription process |
US20220241399A1 (en) | 2019-03-15 | 2022-08-04 | Moderna TX, Inc. | Hiv rna vaccines |
WO2020243561A1 (en) | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Modernatx, Inc. | Expanded t cell assay |
US20220348900A1 (en) | 2019-08-14 | 2022-11-03 | Modernatx, Inc. | Processes for purifying downstream products of in vitro transcription |
CA3154082A1 (en) | 2019-09-11 | 2021-03-18 | Modernatx, Inc. | Human cytomegalovirus vaccine |
AU2020350759A1 (en) | 2019-09-19 | 2022-03-31 | Modernatx, Inc. | Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents |
AU2020348860A1 (en) | 2019-09-19 | 2022-04-07 | Modernatx, Inc. | Cap guides and methods of use thereof for RNA mapping |
WO2021142306A1 (en) | 2020-01-10 | 2021-07-15 | Modernatx, Inc. | Variational autoencoder for biological sequence generation |
US20210228707A1 (en) | 2020-01-28 | 2021-07-29 | Modernatx, Inc. | Coronavirus rna vaccines |
US20230338506A1 (en) | 2020-01-30 | 2023-10-26 | Modernatx, Inc. | Respiratory virus immunizing compositions |
BR112022014970A2 (pt) | 2020-01-31 | 2022-09-20 | Modernatx Inc | Métodos para preparar nanopartículas lipídicas |
JP7438604B2 (ja) | 2020-02-07 | 2024-02-27 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | SARS-COV-2 mRNAドメインワクチン |
WO2021211343A1 (en) | 2020-04-13 | 2021-10-21 | Modernatx, Inc. | Zika virus mrna vaccines |
WO2021222304A1 (en) | 2020-04-27 | 2021-11-04 | Modernatx, Inc. | Sars-cov-2 rna vaccines |
WO2021159130A2 (en) | 2020-05-15 | 2021-08-12 | Modernatx, Inc. | Coronavirus rna vaccines and methods of use |
WO2021231963A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Modernatx, Inc. | Rna formulations for high volume distribution, and methods of using the same for treating covid-19 |
US20230190761A1 (en) | 2020-05-21 | 2023-06-22 | Modernatx, Inc. | Methylene blue stabilized mrna compositions |
AU2021283934A1 (en) | 2020-06-05 | 2023-01-19 | Modernatx, Inc. | Bacterial strains for DNA production |
US11406703B2 (en) | 2020-08-25 | 2022-08-09 | Modernatx, Inc. | Human cytomegalovirus vaccine |
EP4217371A1 (en) | 2020-09-25 | 2023-08-02 | ModernaTX, Inc. | Multi-proline-substituted coronavirus spike protein vaccines |
WO2022150717A1 (en) | 2021-01-11 | 2022-07-14 | Modernatx, Inc. | Seasonal rna influenza virus vaccines |
WO2022155530A1 (en) | 2021-01-15 | 2022-07-21 | Modernatx, Inc. | Variant strain-based coronavirus vaccines |
US20240100151A1 (en) | 2021-01-15 | 2024-03-28 | Moderna TX, Inc. | Variant strain-based coronavirus vaccines |
CN117355329A (zh) | 2021-03-05 | 2024-01-05 | 摩登纳特斯有限公司 | Vlp肠道病毒疫苗 |
EP4313072A1 (en) | 2021-03-26 | 2024-02-07 | ModernaTX, Inc. | Pertussis vaccine |
TW202304944A (zh) | 2021-03-31 | 2023-02-01 | 美商現代公司 | 用於產生mRNA之三核苷酸及四核苷酸帽的合成 |
WO2022212711A2 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Modernatx, Inc. | Methods for identification and ratio determination of rna species in multivalent rna compositions |
EP4314046A1 (en) | 2021-04-01 | 2024-02-07 | ModernaTX, Inc. | Mucosal expression of antibody structures and isotypes by mrna |
WO2022221336A1 (en) | 2021-04-13 | 2022-10-20 | Modernatx, Inc. | Respiratory syncytial virus mrna vaccines |
WO2022221335A1 (en) | 2021-04-13 | 2022-10-20 | Modernatx, Inc. | Respiratory virus combination vaccines |
WO2022221359A1 (en) | 2021-04-13 | 2022-10-20 | Modernatx, Inc. | Epstein-barr virus mrna vaccines |
AU2022258463A1 (en) | 2021-04-14 | 2023-11-23 | Modernatx, Inc. | Influenza-coronavirus combination vaccines |
WO2023092069A1 (en) | 2021-11-18 | 2023-05-25 | Modernatx, Inc. | Sars-cov-2 mrna domain vaccines and methods of use |
-
2018
- 2018-08-17 CN CN201880066673.3A patent/CN111212905A/zh active Pending
- 2018-08-17 WO PCT/US2018/046989 patent/WO2019036682A1/en unknown
- 2018-08-17 MA MA049913A patent/MA49913A/fr unknown
- 2018-08-17 EP EP18845635.4A patent/EP3668971B8/en active Active
- 2018-08-17 JP JP2020509060A patent/JP7408098B2/ja active Active
-
2019
- 2019-06-05 US US16/432,541 patent/US10526629B2/en active Active
- 2019-10-18 US US16/657,122 patent/US11066686B2/en active Active
-
2021
- 2021-06-17 US US17/350,662 patent/US11767548B2/en active Active
-
2023
- 2023-06-27 JP JP2023105367A patent/JP2023129421A/ja active Pending
- 2023-08-11 US US18/448,856 patent/US20240102066A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011223982A (ja) * | 2010-03-30 | 2011-11-10 | Tosoh Corp | T7rnaポリメラーゼ融合蛋白質 |
WO2017123748A1 (en) * | 2016-01-13 | 2017-07-20 | New England Biolabs, Inc. | Thermostable variants of t7 rna polymerase |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 282, no. 31, JPN6022030611, 2007, pages 22879 - 22886, ISSN: 0004831080 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2019036682A1 (en) | 2019-02-21 |
EP3668971B1 (en) | 2024-04-10 |
US20190309337A1 (en) | 2019-10-10 |
EP3668971A1 (en) | 2020-06-24 |
US20200131550A1 (en) | 2020-04-30 |
JP7408098B2 (ja) | 2024-01-05 |
US20240102066A1 (en) | 2024-03-28 |
JP2023129421A (ja) | 2023-09-14 |
US10526629B2 (en) | 2020-01-07 |
EP3668971A4 (en) | 2021-05-05 |
MA49913A (fr) | 2021-05-05 |
US20210395792A1 (en) | 2021-12-23 |
US11066686B2 (en) | 2021-07-20 |
US11767548B2 (en) | 2023-09-26 |
CN111212905A (zh) | 2020-05-29 |
EP3668971B8 (en) | 2024-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7408098B2 (ja) | Rnaポリメラーゼバリアント | |
US20230104080A1 (en) | Rna polymerase variants for co-transcriptional capping | |
JP2021510074A (ja) | ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼの改変体およびその使用 | |
TWI658139B (zh) | 用以提升核苷酸類似物併入之重組dna聚合酶 | |
ES2353302T3 (es) | Producción enzimática de novo de moléculas de ácido nucleico. | |
WO2017011773A2 (en) | Codon-optimized nucleic acids encoding antibodies | |
JP2022538784A (ja) | 半合成生物における複製、転写および翻訳のための試薬ならびに方法 | |
CN109072203B (zh) | 镜像核酸复制体系 | |
US20220243244A1 (en) | Compositions and methods for in vivo synthesis of unnatural polypeptides | |
JP2023506760A (ja) | ポリヌクレオチドのテンプレートフリー酵素合成のためのキメラ末端デオキシヌクレオチド転移酵素 | |
Betat et al. | Exchange of regions between bacterial poly (A) polymerase and the CCA-adding enzyme generates altered specificities | |
CN114686548A (zh) | 用于增强生产的rna相关酶的修饰 | |
EP3684946B1 (en) | Dna polymerase theta mutants, methods of producing these mutants, and their uses | |
US11851694B1 (en) | High fidelity in vitro transcription | |
JP2023501651A (ja) | ポリヌクレオチドの高効率テンプレートなしの酵素的合成 | |
Kohno et al. | Escherichia coli tRNA (Gm18) methyltransferase (TrmH) requires the correct localization of its methylation site (G18) in the D-loop for efficient methylation | |
CN116555216A (zh) | 可控合成单链dna的末端转移酶变体及应用 | |
KR20240024924A (ko) | 폴리머라제 돌연변이체 및 3'-oh 비차단 가역적 종결자와의 사용 | |
WO2023201294A1 (en) | Rna polymerase variants | |
JP2023537902A (ja) | 大型鏡像タンパク質の化学合成及びその使用 | |
JP2003070483A (ja) | 核酸の連結方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200421 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210817 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210817 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220725 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221025 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221102 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230227 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230627 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230703 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230807 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231019 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231120 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231212 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7408098 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |