JP2020012002A - 改善されたリガンド−薬物コンジュゲート薬物動態のためのｐｅｇ化薬物−リンカー - Google Patents

改善されたリガンド−薬物コンジュゲート薬物動態のためのｐｅｇ化薬物−リンカー Download PDF

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Abstract

【課題】本発明は、薬物単位に対して並列配向であるＰＥＧ単位を含むリガンド−薬物コンジュゲートを提供する。【解決手段】本発明は、とりわけ、リガンド−薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）、これらを調製および使用する方法、ならびにその中間体を提供する。リガンド−薬物コンジュゲートは循環中は安定的であるが、その薬物カーゴが、標的とした細胞の近傍においてまたは標的とした細胞内で放出されると、標的とした細胞に対して細胞死をもたらし、または標的とした細胞の増殖を阻害することができる。主要な実施形態では、本発明のＬＤＣは、式Ｉの構造によって表される。【選択図】なし

Description

関連出願の引用
本非仮出願は、米国特許法第１１９条第（ｅ）項のもとで、米国出願第６１／８９１，
３２０号（２０１３年１０月１５日出願）、同第６１／９４１，９０４号（２０１４年２
月１９日出願）、同第６１／９４７，７４２号（２０１４年３月４日出願）、および同第
６１／９７５，３１８号（２０１４年４月４日出願）に対する優先権を主張する。これら
の出願の全ては、その全体が本明細書中に参考として援用される。
配列表
２０１４年１０月９日に作成された、１３ＫＢの２７００−００１１４ＰＣ−ＳＴ２５
．ｔｘｔの名称の配列表は、本明細書中に参考として援用される。
がん細胞への細胞毒性剤の標的化送達のためのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の使用に
ついて多大な関心が寄せられてきた。典型的にはリンカーを介して抗体に細胞毒性剤を結
合させることによる抗体薬物コンジュゲートの設計は、種々の要因を考慮することが関与
している。これらの要因には、細胞毒性剤のコンジュゲーションのための化学基のアイデ
ンティティーおよび場所、薬剤放出の機序、細胞毒性剤の放出を実現する構造的要素（複
数可）（存在する場合）、ならびに放出された遊離薬剤の構造的修飾（存在する場合）が
含まれる。さらに、細胞毒性剤が抗体の内部移行の後に放出される場合、構造的要素、お
よび薬剤放出の機序は、コンジュゲートの細胞内輸送と一致しなければならない。
いくつかの異なる薬物クラスが抗体を介した送達について評価されてきた一方、僅かな
薬物クラスのみが、臨床開発を正当化する適切な毒性プロファイルを有する一方で、抗体
薬物コンジュゲートとして十分に活性であることが証明されてきた。１つのこのようなク
ラスは、天然物であるドラスタチン１０と関連するアウリスタチンである。代表的なアウ
リスタチンは、ＭＭＡＥ（Ｎ−メチルバリン−バリン−ドライソロイシン（ｄｏｌａｉｓ
ｏｌｅｕｉｎｅ）−ドラプロリン（ｄｏｌａｐｒｏｉｎｅ）−ノルエフェドリン）および
ＭＭＡＦ（Ｎ−メチルバリン−バリン−ドライソロイシン−ドラプロリンフェニルアラニ
ン）を含む。
ＭＭＡＥは遊離薬物として活性である細胞毒性剤の一例であり、モノクローナル抗体（
ｍＡｂ）にコンジュゲートしたとき高度に強力であり、細胞中への内部移行後に放出され
る。ＭＭＡＥは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン（ｍｃ−ｖｃ−）および自
壊的基ｐ−アミノベンジル−カルバモイル（ＰＡＢＣ）を含有するカテプシンＢによって
切断可能なペプチドをベースとするリンカーを介してＭＭＡＥのＮ末端アミノ酸において
ｍＡｂに首尾よくコンジュゲートされて、下記の構造、ｍＡｂ−（ｍｃ−ｖｃ−ＰＡＢＣ
−ＭＭＡＥ）ｐの抗体薬物コンジュゲートが生成されてきた。（先の式において、ｐは、
抗体当たりの（ｍｃ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＥ）単位の数を指す。）ｖｃペプチドおよ
び自壊的ＰＡＢＣ基の間の結合の切断によって、ＰＡＢＣ基はＭＭＡＥから放出され、遊
離ＭＭＡＥを遊離させる。
別のアウリスタチンであるＭＭＡＦは、（ＭＭＡＥと比較して）遊離薬物として相対的
に活性が低いが、抗体にコンジュゲートし、細胞中に内部移行されると、高度に強力であ
る。ＭＭＡＦは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン（ｍｃ−ｖｃ−）および自
壊的基ｐ−アミノベンジル−カルバモイル（ＰＡＢＣ）を含有するカテプシンＢによって
切断可能なペプチドをベースとするリンカーを介してＭＭＡＦのＮ末端アミノ酸において
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）に首尾よくコンジュゲートされて、構造、ｍＡｂ−（ｍｃ
−ｖｃ−ＰＡＢＣ−ＭＭＡＦ）ｐ（式中、ｐは、抗体当たりの（ｍｃ−ｖｃ−ＰＡＢＣ−
ＭＭＡＦ）単位の数を指す）の抗体−薬物コンジュゲートが生成されてきた。ペプチドリ
ンカーの切断によって、自壊的ＰＡＢＣ基はＭＭＡＦから放出され、遊離ＭＭＡＦを遊離
させる。
ＭＭＡＦはまた、薬物−リンカーであるマレイミドカプロイルＭＭＡＦ（ｍｃＭＭＡＦ
）を含有する切断可能でないコンジュゲートとして活性であることが見出された。このコ
ンジュゲートであるｍＡｂ−（ｍｃＭＭＡＦ）ｐが細胞中に内部移行されたとき、放出さ
れる活性種はｃｙｓ−ｍｃＭＭＡＦである。リンカーは切断可能でないため、マレイミド
カプロイルおよび抗体のシステイン残基は、ＭＭＡＦのＮ末端に結合したままである。Ｍ
ＭＡＦはまた、そのＣ末端アミノ酸であるフェニルアラニンにおいてペプチド−マレイミ
ドカプロイルリンカーへと結合しているＣ末端コンジュゲートとして活性であることが報
告された。このコンジュゲート（ＭＭＡＦ−ペプチド−ｍｃ）ｐ−ｍＡｂが細胞中に内部
移行されたとき、ＭＭＡＦ（フェニルアラニン）−ペプチド結合の切断に続いて、活性種
ＭＭＡＦが放出される。
動物モデルにおいて、これらのＭＭＡＥコンジュゲートおよびＭＭＡＦコンジュゲート
は、薬物動態特性において薬物負荷量（ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ）依存的な減少を示し
た。特に、各抗体へと結合している薬物−リンカー単位の数が増加すると、コンジュゲー
トのＰＫは減少した。
したがって、コンジュゲートの設計における別の重要な要因は、標的化薬剤当たり送達
することができる薬物の量である（すなわち、各標的化薬剤（例えば、抗体）へと結合し
ている細胞毒性剤の数であり、薬物負荷（ｄｒｕｇ ｌｏａｄ）または薬物負荷量と称さ
れる）。歴史的に、より高い薬物負荷はより低い薬物負荷より優れている（例えば、８負
荷対４負荷）という仮説があった。より高く負荷されたコンジュゲートは標的とした細胞
により多くの薬物（細胞毒性剤）を送達するという理論的解釈があった。この理論的解釈
は、より高い薬物負荷量を有するコンジュゲートがｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞系に対してよ
り活性であったという観察によって支持された。しかし、その後のある特定の研究により
、この仮説が動物モデルにおいて確認されなかったことが明らかにされた。ある特定のア
ウリスタチンの４または８の薬物負荷を有するコンジュゲートは、マウスモデルにおいて
同様の活性を有することが観察された。Ｈａｍｂｌｅｔｔら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．、１０巻：７０６３〜７０頁（２００４年）。Ｈａｍｂｌｅｔｔらは、
より高く負荷されたＡＤＣが動物モデルにおいて循環からより急速にクリアランスされた
ことをさらに報告した。このより速いクリアランスは、より低く負荷された種と比較した
、より高く負荷された種についてのＰＫの傾向を示唆した。Ｈａｍｂｌｅｔｔら。さらに
、より高く負荷されたコンジュゲートは、マウスにおいてより低いＭＴＤを有し、結果と
して、報告されたより狭い治療指数を有した。同上。対照的に、モノクローナル抗体の操
作された部位に２の薬物負荷量を有するＡＤＣは、ある特定の４負荷されたＡＤＣと比較
して同じまたはより良好なＰＫおよび治療指数を有することが報告された。例えば、Ｊｕ
ｎｕｔｕｌａら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１６巻：４７６９頁（２
０１０年）を参照されたい。それゆえ、最近の傾向は、低い薬物負荷量を有するＡＤＣを
開発することである。
Ｈａｍｂｌｅｔｔら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１０巻：７０６３〜７０頁（２００４年） Ｊｕｎｕｔｕｌａら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１６巻：４７６９頁（２０１０年）
したがって、より高い薬物負荷量を可能とするが、より低く負荷されたコンジュゲート
の他の特徴、例えば、好ましいＰＫ特性を維持する、抗体薬物コンジュゲートの型（ｆｏ
ｒｍａｔ）（およびより一般に、他のコンジュゲートのための型）が必要とされている。
驚いたことに、本発明は、これらの必要性に取り組む。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
リガンド単位、および前記リガンド単位に共有結合的に結合した１個または複数のリンカー−薬物部分を含み、各リンカー−薬物部分は、１個または複数の薬物単位へと各薬物単位についての放出可能なアセンブリー単位の媒介によって前記リガンド単位を接続し、かつ各リンカー−薬物部分の前記薬物単位に対して並列配向でポリエチレングリコール単位を接続する、並列コネクター単位を含み、前記放出可能なアセンブリー単位は、前記リガンド単位によって標的とされる標的部位に近接して遊離薬物を放出することができ、前記リンカー−薬物部分は、リガンド−薬物コンジュゲートへの１〜３２個の薬物単位の負荷量を実現する、リガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２）
前記リガンド−薬物が、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）によって表される構造、


を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚは、ストレッチャー単位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤは、薬物結合単位であり、
下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４または８〜１２）の範囲の整数であり、
下付き文字ｔは、０〜８、好ましくは０、１、２または３であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１であるとき、ｍは２、３または４である、項目１に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３）
前記リガンド−薬物コンジュゲートが、構造、

によって表されるかまたは薬学的に許容されるその塩である、項目２に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４）
下付き文字ｓが、０である、項目２または３に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５）
下付き文字ｓが、１であり、下付き文字ｍが、２、３または４である、項目２または３に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目６）
前記リガンド−薬物コンジュゲートが、式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂ、


または薬学的に許容されるその塩によって表される構造を有する、項目２に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目７）
各並列コネクター単位（Ｌｐ）が、アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒドまたはポリアミンを含む、項目１から６のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目８）
各並列コネクター（Ｌｐ）単位が、構造、

を独立で有し、式中、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のＬｐの共有結合による結合部位を示し、Ｒ１１０は、

であり、式中、アスタリスクは、ｘと標識されている炭素への前記Ｒ１１０部分の共有結合による結合を示し、前記Ｒ１１０部分中の波線は、前記リガンド−薬物部分内のＬｐの前記３個の結合部位の１つを示し、
各Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、好ましくはＨまたはＣＨ３から独立に選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＨから独立に選択され、
各Ｙ’は、ＮＨ、Ｏ、またはＳから独立に選択され、
下付き文字ｃは、１〜１０の範囲の整数、好ましくは１、２、または３から独立に選択される、項目１から６のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目９）
各並列コネクター（Ｌｐ）単位が、構造が下記の式、

に示すようなＤ／Ｌ−リシンに対応し、式中、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のＬｐの共有結合による結合部位を示す、項目７に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１０）
各並列コネクター（Ｌｐ）単位が、構造が下記の式

に示すようなＤ／Ｌ−システインまたはＤ／Ｌ−ペニシラミンに対応し、式中、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のＬｐの共有結合による結合部位を示す、項目７に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１１）
各並列コネクター（Ｌｐ）単位が、

の構造を有し、式中、硫黄原子に隣接する波線は、放出可能なアセンブリー単位への共有結合による結合を示す、項目１０に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１２）
各並列コネクター（Ｌｐ）単位の構造が、式Ａ、

によって独立に表され、式中、
ＡＡ１は、アミノ酸、任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン（好ましくは任意選択で置換されているＣ１〜１２ヘテロアルキレン）、任意選択で置換されているＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロから独立に選択され、
下付き文字ｕは、０〜４から独立に選択される整数であり、各Ｌｐ単位の少なくとも１個のＡＡ１は、ＰＥＧ、ＡＤ、ＡまたはＺ単位またはＸ−Ｄ部分への結合部位を提供する官能化側鎖を有し、
波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のＬｐの前記共有結合による結合部位を示す、項目２から６のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１３）
各並列コネクター単位（Ｌｐ）の各ＡＡ１が、独立に選択したアミノ酸であり、あるいは任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で置換されているＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロであり、ただし、ＡＡ１の２つ以下は、任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で置換されているＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロである、項目１２に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１４）
Ａが存在するとき、各Ａが、１〜１０個のアミノ酸、アミノアルコールまたはアミノアルデヒドもしくはポリアミン、または互いに共有結合しているこれらの組合せである、項目２から１３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１５）
ＡＤが存在するとき、各ＡＤが、１〜１０個の独立に選択したアミノ酸またはアミノアルコールまたはアミノアルデヒドもしくはポリアミン、または互いに共有結合しているこれらの組合せである、項目２から１４のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１６）
Ｚが、

の構造を有し、式中、Ｒ１７は、−（ＣＨ２）５Ｃ（＝Ｏ）−であり、アスタリスクは、前記リガンド単位への各Ｚの共有結合による結合を示し、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のリンカー−薬物部分の残部への各Ｚの共有結合による結合を示す、項目２から１５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１７）
Ｚが、

の構造を有し、式中、アスタリスクは、前記リガンド単位への各Ｚの結合を示し、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のリンカー−薬物部分の残部への各Ｚの共有結合による結合を示す、項目２から１５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１８）
下付き文字ｔが、０、１または２である、項目２から１７のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目１９）
下付き文字ｐが、６〜１４の範囲の整数である、項目２から１８のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２０）
前記リガンド−薬物コンジュゲートが、

の構造によって表されるまたは薬学的に許容されるその塩である、項目２、１６、または１７に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２１）
前記リガンド単位に結合した６〜３２個または８〜３２個の薬物単位が存在する、項目１から１８のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２２）
ＰＥＧが、約７２個以下の（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位、好ましくは約３６個以下の（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２３）
ＰＥＧが、合計８〜７２個、８〜６０個、８〜４８個、８〜３６個もしくは８〜２４個の（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位、１０〜７２個、１０〜６０個、１０〜４８個、１０〜３６個もしくは１０〜２４個の（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位、または１２〜７２個、１２〜６０個、１２〜４８個、１２〜３６個もしくは１２〜２４個の（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位を含む、項目１から２３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２４）
前記ＰＥＧ単位が、１個または複数の直鎖状ＰＥＧ鎖を含む、項目１から２３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２５）
前記ＰＥＧ単位が、

の構造を有し、式中、波線は、前記並列コネクター単位への前記ＰＥＧ単位の結合の部位を示し、
Ｒ２０は、ＰＥＧ結合単位であり、
Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位であり、
Ｒ２２は、ＰＥＧカップリング単位であり、
ｎは、４〜７２、好ましくは６〜７２、８〜７２、１０〜７２または１２〜７２から独立に選択され、
ｅは、２〜５であり、
各ｎ’は、１〜７２から独立に選択され、ただし、前記ＰＥＧ単位において、少なくとも４個、好ましくは少なくとも６個、少なくとも８個、少なくとも１０個、または少なくとも１２個のＰＥＧ（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位が存在する、項目１から２１のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２６）
Ｒ２０が、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−ＣＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１〜１０アルキル、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｏ−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＣＯ２−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２−Ｃ１〜１０アルキル−、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜１０アルキル−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０アルキル−Ｏ−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０アルキル−ＣＯ２−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、

であり、
各Ｒ２１が、独立に、−Ｃ１〜１０アルキル、−Ｃ２〜１０アルキル−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ２〜１０アルキル−ＯＨ、−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ２、Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ（Ｃ１〜３アルキル）、またはＣ２〜１０アルキル−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２であり、
各Ｒ２２が、独立に、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ２〜１０アルキル−Ｏ−、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、または−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ−である、項目２５に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２７）
Ｒ２０が、−ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）−である、項目２６に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２８）
前記ＰＥＧ単位が、

の構造を有し、式中、波線は、前記並列コネクター単位への結合の部位を示し、各ｎは、４〜７２の範囲の整数から独立に選択される、項目２５に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目２９）
ｎが、６〜２４または８〜２４から独立に選択される、項目２８に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３０）
前記ＰＥＧ単位が、少なくとも６個の−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−サブ単位を有する、項目１から２９のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３１）
前記ＰＥＧ単位が、少なくとも８個の−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−サブ単位および約３６個以下のサブ単位−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−を有する、項目１から３０のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３２）
前記薬物単位が、疎水性である、先行する項目のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３３）
前記薬物単位が、２．５またはそれ超のＳｌｏｇＰ値を有する薬物の薬物単位である、項目３２に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３４）
前記薬物単位が、アウリスタチンである、項目３２に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３５）
前記アウリスタチン薬物単位が、式ＤＥ、

の構造によって表され、式中、それぞれの場所において独立に、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され、
Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
あるいはＲ４およびＲ５は、一緒に炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ＲａおよびＲｂは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から独立に選択され、ｎは、２、３、４、５および６からなる群から選択され、
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され、
各Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から独立に選択され、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）からなる群から選択される、項目３４に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３６）
前記放出可能なアセンブリー単位が、それに対して前記薬物単位が結合しているグリコシド結合を介して自壊的基に連結している糖部分を含み、その結果前記リガンドによって標的とされる前記部位におけるグリコシダーゼによる前記グリコシド結合の切断は、前記リガンド−薬物コンジュゲートからの遊離薬物の放出をもたらす、項目１から３５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３７）
前記放出可能なアセンブリー単位が、グルクロニド単位を含み、式、

によって表され、式中、Ｓｕは、前記グルクロニド部分であり、−Ｏ’−は、酸素グリコシド結合を表し、各Ｒは、独立に、水素、ハロゲン、−ＣＮ、または−ＮＯ２であり、波線は、ＬＰ、ＡＤまたはＡへの前記自壊的基の結合（直接的、または共有結合による結合単位を通して間接的に）を示し、アスタリスクは、前記薬物単位への前記自壊的基の結合（直接的、またはスペーサー単位を介して間接的に）を示す、項目３６に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３８）
前記放出可能なアセンブリー単位が、カテプシンＢによって切断可能なペプチドを含む、項目１から３５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目３９）
−Ｘ−Ｄが、

の構造を有し、式中、ＱＣＯは、任意選択の共有結合による結合単位であり、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲートの薬物リンカー部分の残部への共有結合による結合を示す、項目１から３５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４０）
−Ｘ−Ｄが、

であり、式中、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲートの薬物リンカー部分の残部への共有結合性を示す、項目３９に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４１）
−Ｘ−Ｄが、

の構造を有し、式中、波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲートの薬物リンカー部分の残部への共有結合による結合を示す、項目１から３５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４２）
前記リガンド単位が、モノクローナル抗体である、項目１から４１のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４３）
前記リガンドが抗体であり、前記抗体が、前記抗体のシステイン残基の硫黄原子を介して各ストレッチャー単位（Ｚ）にコンジュゲートしている、項目１から４２のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４４）
前記システイン残基が、天然に存在するものであり、鎖間のジスルフィドからである、項目４３に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４５）
前記システイン残基が、天然に存在しないものであり、前記抗体中に導入されたシステインからである、項目４３に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４６）
前記導入されたシステインが、ＥＵインデックスに従って残基２３９にある、項目４５に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４７）
前記リガンド単位に結合した６〜１４個の薬物単位が存在する、先行する項目のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４８）
前記リガンド単位が抗体であり、下付き文字ｐが８であり、前記抗体が、前記抗体の前記鎖間のジスルフィドの前記硫黄原子を通してストレッチャー単位（Ｚ）にコンジュゲートしている、項目２から４７のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目４９）
前記リガンドが、抗体であり、下付き文字ｐが、１０〜１４または１０〜１２の範囲の整数であり、前記抗体が、前記抗体の前記鎖間のジスルフィドからの硫黄原子および前記抗体中に導入されたシステイン残基の両方によって各ストレッチャー単位にコンジュゲートしている、項目２から４７のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５０）
前記システイン残基が、ＥＵインデックスに従って２３９位にある、項目４９に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５１）
前記リガンド単位が、少なくとも約８０Ｋｄの分子量を有する、項目１から５０のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５２）
前記並列コネクター単位が、（ａ）約５００ダルトン以下、好ましくは約２００ダルトン以下の質量を有する、項目２から５１のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲート化合物。
（項目５３）
前記ストレッチャー単位が、約１０００ダルトン以下、好ましくは約２００ダルトン以下の質量を有する、項目２から５２のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲート化合物。
（項目５４）
前記分岐単位が存在するとき、前記分岐単位が、約１０００ダルトン以下、好ましくは約５００ダルトン以下の質量を有する、項目２から５３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５５）
前記薬物結合単位が存在するとき、前記薬物結合単位が、約１０００ダルトン以下、好ましくは約５００ダルトン以下の質量を有する、項目２から５４のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５６）
前記放出可能なアセンブリー単位が、約５０００ダルトン以下の質量、好ましくは約１００ダルトンから、または約２００ダルトンから、または約３００ダルトンから約１０００ダルトンの質量を有する、項目２から５５のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５７）
前記ＰＥＧ単位は別として、前記リガンド−薬物コンジュゲート中に存在する４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の他のポリエチレングリコールサブ単位が存在する、先行する項目のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５８）
前記リガンド単位および前記薬物単位の間に５０個以下、４５個以下、４０個以下、３５個以下、３０個以下、または２５個以下の介在する原子が存在する、先行する項目のいずれかに記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目５９）
前記リガンド単位および前記放出可能なアセンブリー単位の切断可能な単位の間に４０個以下、３５個以下、３０個以下、または２５個以下の介在する原子が存在する、先行する項目のいずれかに記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目６０）
前記ＰＥＧ単位中に存在する原子より、前記リガンドおよび前記薬物単位の間に介在する原子の方が少ない、先行する項目のいずれかに記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目６１）
前記ＰＥＧ単位中に存在する原子より、前記リガンドおよび前記放出可能なアセンブリー単位の前記切断可能な単位の間に介在する原子の方が少ない、先行する項目のいずれかに記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目６２）
前記ＰＥＧ単位の遠位端部と前記並列コネクター単位との間に介在する原子より、前記リガンドおよび前記薬物単位の間に介在する原子の方が少ない、先行する項目のいずれかに記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目６３）
前記ＰＥＧ単位の遠位端部と前記並列コネクター単位との間に介在する原子より、前記リガンドおよび前記放出可能なアセンブリー単位の前記切断可能な単位の間に介在する原子の方がより少ない、先行する項目のいずれかに記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物。
（項目６４）
医薬組成物中のリガンド単位当たりの薬物−リンカー部分の平均数が、約４〜約１４の範囲である、項目１から６３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート化合物の集団、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
（項目６５）
前記組成物中のリガンド単位当たりの薬物−リンカー部分の平均数が、約６〜約１４の範囲である、項目６４に記載の医薬組成物。
（項目６６）
前記組成物中のリガンド単位当たりの薬物−リンカー部分の平均数が、約８〜約１４の範囲である、項目６４に記載の医薬組成物。
（項目６７）
前記組成物中のリガンド当たりの薬物−リンカーの平均分子数が、約８〜約１２の範囲である、項目６４に記載の医薬組成物。
（項目６８）
前記組成物中のリガンド当たりの薬物−リンカーの平均分子数が、約８である、項目６６に記載の医薬組成物。
（項目６９）
式ＩＶ、Ｖ、またはＶＩ、

の構造または薬学的に許容されるその塩によって表され、式中、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤは、薬物結合単位であり、
下付き文字ｔは、整数であり、０〜８、好ましくは０、１、２、または３であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１であるとき、ｍは２、３または４である、薬物−リンカー化合物。
（項目７０）

または薬学的に許容されるその塩の構造を有する、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７１）
ｓが、０である（すなわち、Ａが、存在しない）、項目６９または７０に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７２）
ｓが、１であり、ｍが、２〜４である、項目６９または７０または７１に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７３）
前記薬物−リンカーが、式ＩＶａ、ＩＶｂ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、ＶＩａまたはＶＩｂ、

または薬学的に許容されるその塩によって表される構造を有する、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７４）
ＬＰが、アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒドまたはポリアミンである、項目６９から７３のいずれか一項に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７５）
各ＬＰが、

の構造を独立に有し、式中、波線は、化合物内の共有結合による結合部位を示し、Ｒ１１０は、

の構造を有し、式中、アスタリスクは、ｘと標識されている炭素への前記Ｒ１１０部分の結合を示し、前記Ｒ１１０部分中の波線は、前記リガンド−薬物コンジュゲート内のＬｐの前記３個の結合部位の１つを示し、
各Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、好ましくは水素またはＣＨ３から独立に選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＨから独立に選択され、
各Ｙ’は、ＮＨ、Ｏ、またはＳから独立に選択され、
下付き文字ｃは、１〜１０の範囲の整数、好ましくは１、２、または３から独立に選択される、項目６９から７３のいずれか一項に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７６）
各ＬＰが、構造が下記の式、

において示すようなＤ／Ｌリシンに対応する、項目７４に記載の薬物−リンカー化合物。（項目７７）
Ａが存在するとき、Ａは、１〜１０個のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ポリアミン、またはこれらの組合せである、項目７０から７６のいずれか一項に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７８）
ＡＤが存在するとき、ＡＤは、１〜１０個のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ポリアミン、またはこれらの組合せである、項目７０から７７のいずれか一項に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目７９）
Ｚ’が、アミン保護基で任意選択で保護された、


の構造を有し、式中、波線は、前記薬物−リンカー構造の残部への共有結合による結合を示す、項目６９から７８のいずれか一項に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８０）

または薬学的に許容されるその塩の構造を有する、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８１）

または薬学的に許容されるその塩の構造を有する、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８２）


または薬学的に許容されるその塩の構造を有する、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８３）

または薬学的に許容されるその塩の構造を有し、式中、Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位であり、ｎは、６〜７２、８〜７２、または８〜２４の範囲の整数である、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８４）

または薬学的に許容されるその塩の構造を有し、式中、Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位であり、ｎは、６〜７２、または８〜７２、または８〜２４である、項目６９に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８５）
ｎが、８、１２、または２４である、項目８３または８４に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８６）
Ｒ２１が、メチル、エチルまたはプロピルである、項目８３または８４または８５に記載の薬物−リンカー化合物。
（項目８７）
医薬組成物中のリガンド当たりの薬物−リンカーの平均分子数が、約８〜約１４の範囲である、リガンド単位にコンジュゲートした、項目６９から８６のいずれか一項に記載の薬物−リンカー化合物に構造が対応する、薬物−リンカー部分を有するリガンド−薬物コンジュゲートの集団、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
（項目８８）
リガンド薬物コンジュゲートのそれぞれの並列配向されたＰＥＧ単位が、少なくとも８個から２４個以下のＰＥＧサブ単位を有する、項目６４から６８、および８７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目８９）
リガンド薬物コンジュゲートのそれぞれの並列配向されたＰＥＧ単位が、少なくとも１２個から２４個以下のＰＥＧサブ単位を有する、項目６４から６８および８７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９０）
平均薬物−リンカー負荷量についての値がまた、前記組成物中の優勢であるリガンド−薬物コンジュゲートの前記薬物−リンカー負荷量を表す、項目６４から６９および８７から８９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目９１）
前記ＰＥＧ単位は別として、前記リガンド−薬物コンジュゲート中に存在する他のＰＥＧサブ単位が存在しない、項目１から６３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート。
（項目９２）
式ＶＩＩ、ＶＩＩＩまたはＩＸ、

を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単位であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位であり、
Ａ’は、２〜４個のＸ−Ｄ単位、好ましくは２個のＸ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる分岐単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤ’は、−Ｘ−Ｄ単位へと共有結合による結合を形成することができる薬物結合単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位であり、
下付き文字ｔは、整数であり、０〜８、好ましくは０、１、２、または３であり、
下付き文字ｍは、整数であり、１〜４、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、整数であり、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１であるとき、ｍは２〜４である、リンカー化合物。
（項目９３）
ＬＰ’が、下記の式において示すような保護されたシステインまたはペニシラミンであり、

式中、波線は、前記化合物内の共有結合による結合を示し、ＲＰＲは、チオール保護基である、項目９２に記載のリンカー化合物。
（項目９４）
式ＶＩＩＩを有し、ｔが、１であり、ＡＤ’が、

であり、式中、ＲＰＲは、チオール保護基であり、波線は、前記化合物内の共有結合による結合を示す、項目９２に記載のリンカー化合物。
（項目９５）
式、

を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、ＲＰＲは、チオール保護基である、項目９２に記載のリンカー化合物。
（項目９６）
式、

を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、ＲＰＲは、チオール保護基である、項目９２に記載のリンカー化合物。
（項目９７）
下記のような式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、

を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ−は、ストレッチャー単位であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位であり、
Ａ’は、２〜４個のＸ−Ｄ単位、好ましくは２個のＸ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる分岐単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤ’は、Ｘ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる薬物結合単位であり、
下付き文字ｐは、整数であり、１〜１４、好ましくは約２〜約１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）であり、
下付き文字ｔは、整数であり、０〜８、好ましくは０、１、２、または３であり、
下付き文字ｍは、整数であり、１〜４、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、整数であり、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１であるとき、ｍは２〜４である、リガンド−リンカー化合物。
（項目９８）
前記リンカー−リガンドリンカー化合物が、式ＸＩａ、ＸＩｂ、ＸＩｃ、ＸＩｄ、ＸＩＩａまたはＸＩＩｂの構造、


を有するかまたは薬学的に許容されるその塩である、項目９７に記載のリガンド−リンカー化合物。
（項目９９）
前記ＰＥＧ単位を欠いている、または前記ＰＥＧ単位を含有するが、前記抗体および薬物に対して直列配向で配置されているリガンド−薬物コンジュゲートを含む医薬組成物と比較して、改善された薬物動態特性を示す、項目６４から６８および８７から９０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１００）
対応するコンジュゲートしていないリガンドを含む医薬組成物と比較して、同じまたは実質的に同じ薬物動態特性を示す、項目６４から６８および８７から９０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目１０１）
がんを処置する方法であって、それを必要とする被験体に有効量の項目１から６３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート、または項目６４から６８、８７から９０、もしくは９９から１００のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記リガンド−薬物コンジュゲートの前記リガンド単位は、がん細胞によって発現される標的抗原に特異的に結合する、方法。
（項目１０２）
前記リガンドが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０（好ましくはキメラもしくはヒト化ＡＣ１０抗体）、ＣＤ３３、ＣＤ７０、アルファ−ｖ−ベータ−６、またはＬｉｖ−１抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体である、項目１から６３のいずれか一項に記載のリガンド−薬物コンジュゲート。
図１は、８個の薬物／Ａｂの平均薬物負荷量を有する、ＰＥＧ化されていないＡＤＣである、ｃＡＣ１０−［ｍｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−１）組成物、並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１０）組成物、および直列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）組成物をより高い単回用量（２ｍｇ／ｋｇ）で投与した異種移植片Ｌ５４０ｃｙモデル（ホジキンリンパ腫）についての移植後日数に対する平均腫瘍体積である。
図２は、８個の薬物／Ａｂの平均薬物負荷量を有する、ＰＥＧ化されていないＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１）組成物、並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１０）組成物、および直列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）組成物をより高い単回用量（０．６ｍｇ／ｋｇ）で投与した異種移植片Ｋａｒｐａｓ２９９モデル（ＡＬＣＬ）についての移植後日数に対する平均腫瘍体積である。
図３は、ＰＥＧ化されていないＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１）組成物、並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１０）組成物、および直列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）組成物をより低い単回用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）で投与した異種移植片Ｌ５４０ｃｙモデル（ホジキンリンパ腫）についての移植後日数に対する平均腫瘍体積である。
図４は、８個の薬物／Ａｂの平均薬物負荷量を有する、ＰＥＧ化されていないＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１）組成物、並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１０）組成物、および直列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）組成物をより低い単回用量（０．１５ｍｇ／ｋｇ）で投与した異種移植片Ｋａｒｐａｓ２９９モデル（ＡＬＣＬ）についての移植後日数に対する平均腫瘍体積である。
図５は、８個の薬物／Ａｂの平均薬物負荷量（すなわち、ｐは８である）を有する、ＰＥＧ化されていないＡＤＣである、ｃＡＣ１０−［ＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−１４）組成物、および並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１６）組成物を０．２ｍｇ／ｋｇで単回投与した異種移植片Ｋａｒｐａｓ２９９モデル（ＡＬＣＬ）についての移植後日数に対する平均腫瘍体積である。
図６は、８個の薬物／Ａｂの平均薬物負荷量（すなわち、ｐは８である）を有する、ＰＥＧ化されていないＡＤＣである、ｈＢＵ１２−［ＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ］ｐ（ｈＢＵ１２−１４）組成物、および並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｈＢＵ１２−１６）組成物を１ｍｇ／ｋｇで単回投与した異種移植片Ｒａｍｏｓモデル（バーキットリンパ腫）についての移植後日数に対する平均腫瘍体積である。
図７は、コンジュゲートしていないｃＡＣ１０抗体組成物、８個の薬物／Ａｂの平均薬物負荷量を有する、ｃＡＣ１０抗体のＰＥＧ化されていないＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１）組成物、並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１０）組成物、および直列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）組成物の単回静脈内（ｉｎｔａｖｅｎｅｏｕｓ）３ｍｇ／Ｋｇ投与に続く、ラットにおける薬物動態学的（ｐｈａｒｍｏｋｉｎｅｔｉｃ）プロファイル（日数による時間に対するμｇ／ｍＬの総Ａｂ濃度）である。
図８は、ＰＥＧ化されていない薬物リンカーおよび並列配向されたＰＥＧ化された薬物リンカー部分を有する、８個の薬物／Ａｂを有するｃＡＣ１０ＡＤＣのサイズ排除クロマトグラムであり、薬物−リンカー部分は、異なる（ｖａｒｉｎｇ）長さのＰＥＧ単位を有するＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ：ｃＡＣ１０−Ａ（ＰＥＧ化されていない）、ｃＡＣ１０−Ｂ（ＰＥＧ１２）、ｃＡＣ１０−Ｃ（ＰＥＧ２４）、ｃＡＣ１０−Ｄ（ＰＥＧ３６）、ｃＡＣ１０−Ｅ（ＰＥＧ１２＋ＰＥＧ３６）、ｃＡＣ１０−Ｆ（ＰＥＧ２４＋ＰＥＧ３６）、およびｃＡＣ１０−Ｇ（ＰＥＧ３６＋ＰＥＧ３６）である。
図９は、ｎ−エチルアミノマレイミドを使用してキャッピングしたＰＥＧ２ ４足場を有する対照コンジュゲートｃＡＣ１０−ＮＡＥＭ（ｃＡＣ１０−Ｉ）（すなわち、結合した薬物単位がない）と比較した、８個の薬物／Ａｂを有するｃＡＣ１０ＡＤＣの単回静脈内３ｍｇ／Ｋｇ投与に続く、ラットにおける薬物動態学的プロファイル（日数による時間に対するμｇ／ｍＬの総Ａｂ濃度）であり、該ＡＤＣは、ＰＥＧ化されていない薬物リンカーを有し、そのＡＤＣコンジュゲートがｃ−ＡＣ１０−ＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（ｃＡＣ１０−Ａ）、およびｃＡＣ１０−ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ（ｃＡＣ１０−Ｋ）である、ＡＤＣ、および並列配向されたＰＥＧ化された薬物リンカー部分を有し、−Ｘ−ＤがＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ（ｃＡＣ１０−Ｃ）またはｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ（ｃＡＣ１０−Ｌ）であって、ｐが８である、ｃＡＣ１０−［ＭＤｐｒ（−Ｘ−Ｄ）−ＰＥＧ２４］ｐの構造によって表されるＡＤＣである。
図１０は、ｎ−エチルアミノマレイミドを使用してキャッピングしたＰＥＧ足場を有する対応する対照コンジュゲート（すなわち、結合した薬物単位がない）：ＰＥＧ１２（ｃＡＣ１０−Ｈ）、ＰＥＧ２４（ｃＡＣ１０−Ｉ）、およびＰＥＧ３６（ｃＡＣ１０−Ｊ）と比較した、８個の薬物／Ａｂを有するｃＡＣ１０ＡＤＣの単回静脈内３ｍｇ／Ｋｇ投与に続くラットにおける薬物動態学的プロファイル（日数による時間に対するμｇ／ｍＬの総Ａｂ濃度）であり、該ＡＤＣは、ＰＥＧ化されていない薬物リンカーを有し、そのＡＤＣコンジュゲートがｃ−ＡＣ１０−［ＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−Ａ）であるＡＤＣ、または並列配向されたＰＥＧ化された薬物リンカー部分を有し、ｐが８であり、−Ｘ−ＤがＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥであり、ＰＥＧが、異なる長さを有するＰＥＧ単位：ＰＥＧ１２（ｃＡＣ１０−Ｂ）、ＰＥＧ２４（ｃＡＣ１０−Ｃ）、およびＰＥＧ３６（ｃＡＣ１０−Ｄ）である、ｃＡＣ１０−［ＭＤｐｒ（−Ｘ−Ｄ）−ＰＥＧ］ｐの構造によって表されるＡＤＣである。
図１１は、未処置の動物と比較した、２ｍｇ／ＫｇのＰＥＧ化されていないＡＤＣ：ｃ−ＡＣ１０−［ＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−Ａ）を静脈内に１回投与したＬ５４０ｃｙ異種移植片モデルにおける腫瘍移植後の日数に対する腫瘍体積（ｍｍ２）である。
図１２は、未処置の動物と比較した、２ｍｇ／Ｋｇの並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−Ｂ）：ｃＡＣ１０−［ＭＤｐｒ（−Ｘ−Ｄ）−ＰＥＧ１ ２］ｐ（式中、ｐは８であり、−Ｘ−ＤはＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである）を静脈内に１回投与したＬ５４０ｃｙ異種移植片モデルにおける腫瘍移植後の日数に対する腫瘍体積（ｍｍ２）である。
図１３は、未処置の動物と比較した、２ｍｇ／Ｋｇの並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−Ｃ）：ｃＡＣ１０−［ＭＤｐｒ（−Ｘ−Ｄ）−ＰＥＧ２ ４］ｐ（式中、ｐは８であり、−Ｘ−ＤはＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである）を静脈内に１回投与したＬ５４０ｃｙ異種移植片モデルにおける腫瘍移植後の日数に対する腫瘍体積（ｍｍ２）である。
図１４は、未処置の動物と比較した、抗原ＬＩＶ−１を標的とするＰＥＧ化されていないＡＤＣ：ｈＬＩＶ２２−［ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ）］ｐまたはｈＬＩＶ２２−［ＭＤｐｒ（−Ｘ−Ｄ）−ＰＥＧ２４］ｐ（式中、ｐは８であり、−Ｘ−Ｄはｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである）による、異種移植片乳がんモデルにおける腫瘍移植後の日数に対する平均腫瘍体積（ｍｍ２）である。
図１５は、未処置の動物と比較した、１ｍｇ／Ｋｇまたは０．５ｍｇ／ＫｇのＰＥＧ化されていないＡＤＣ：ｃＡＣ１０−［ｍｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−１）またはその対応する並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ：ｃＡＣ１０−｛ｍｃ−［ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ］−ＰＥＧ２４｝ｐ（ｃＡＣ１０−１０）（式中、ｐは４である）を静脈内に１回投与したＬ５４０ｃｙ異種移植片モデルにおける腫瘍移植後の日数に対する平均腫瘍体積（ｍｍ２）である。
図１６は、未処置の動物と比較した、０．３ｍｇ／Ｋｇまたは０．１５ｍｇ／ＫｇのＰＥＧ化されていないＡＤＣ：ｃＡＣ１０−［ｍｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−１）またはその対応する並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ：ｃＡＣ１０−｛ｍｃ−［ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ］−ＰＥＧ２４｝ｐ（ｃＡＣ１０−１０）（式中、ｐは４である）を静脈内に１回投与したＫａｒｐａｓ２９９異種移植片モデルにおける腫瘍移植後の日数に対する平均腫瘍体積（ｍｍ２）である。
図１７は、非ホジキンリンパ腫細胞系のパネルに対する、ＰＥＧ化された足場のＰＥＧ単位について異なる長さを有するその足場を有する、８個の薬物を負荷されたｈＢＵ１２ＡＤＣについての用量反応曲線であり、該足場は、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＥＧ）ｘ（ＰＡＢ（ｇｌｕ））の構造によって表される薬物−リンカーを有し、、ここで、Ｌｐは並列コネクター単位としてのリシンであり、ｘは０（ｈＢＵ１２−１４）であり（ここではリシンのイプシロンアミノにおけるＰＥＧ単位はアセチルで置き換えられている）、ｘは、２（ｈＢＵ１２−４３）、４（ｈＢＵ１２−４２）、８（ｈＢＵ１２−１８）、１２（ｈＢＵ１２−１７）、２４（ｈＢＵ１２−１６）であり、またはＰＥＧ４−（ＰＥＧ４）３の分岐状構造（ｈＢＵ１２−１９）である。
図１８は、コンジュゲートしていない非標的化抗体（ｈ００）、そのコンジュゲート（ｉｔｓ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）の単回静脈内１ｍｇ／Ｋｇ投与に続く、ラットにおける薬物動態学的プロファイル（日数による時間に対するμｇ／ｍＬの総Ａｂ濃度）であり、そのコンジュゲートはそのＰＥＧ単位について異なる長さを有するＰＥＧ化された足場を有し、該足場は、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＥＧ）ｘ（ＰＡＢ（ｇｌｕ））の構造によって表される薬物−リンカーを有し、ここで、Ｌｐは並列コネクター単位としてのリシンであり、ｘは０（ｈ００−１４）（ここではリシンのイプシロンアミノにおけるＰＥＧ単位はアセチルで置き換えられている）であり、ｘは、２（ｈ００−４３）、４（ｈ００−４２）、８（ｈ００−１８）、１２（ｈ００−１７）または２４（ｈ００−１６）である。
図１９は、未処置の動物と比較した、そのＰＥＧ単位について異なる長さを有するＰＥＧ化された足場を有するｈＢＵ１２ＡＤＣの１ｍｇ／Ｋｇまたは３ｍｇ／Ｋｇの単回用量静脈内投与後の、ＣＤ１９−陽性ＲＬびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける腫瘍移植後の日数に対する平均腫瘍体積（ｍｍ２）であり、該足場は、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＥＧ）ｘ（ＰＡＢ（ｇｌｕｃ））の構造によって表される薬物−リンカーを有し、ここで、Ｌｐは並列コネクター単位としてのリシンであり、ｘは０（ｈＢＵ１２−１４）（ここではリシンのイプシロンアミノにおけるＰＥＧ単位はアセチルで置き換えられている）であり、ｘは、２（ｈＢＵ１２−４３）、４（ｈＢＵ１２−４２）、８（ｈＢＵ１２−１８）、１２（ｈＢＵ１２−１７）または２４（ｈＢＵ１２−１６）である。
図２０は、ＰＥＧ化されていないＡＤＣである、ｃＡＣ１０−［ｍｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）ＭＭＡＥ］ｐ（ｃＡＣ１０−１）、並列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣであって、薬物−リンカーｍｃ−Ｌｐ−（ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ）ＰＥＧ２４を有するもの（ｃＡＣ１０−１０）、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥ）ＰＥＧ２４を有するもの（ｃＡＣ１０−１６）（ここで、並列コネクター単位ＬＰはリシンである）、または直列配向されたＰＥＧ化されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）の１ｍｇ／Ｋｇの単回用量投与後の、マウスにおけるＣＤ３０＋Ｌ５４０ｃｙホジキンリンパ腫の異種移植片腫瘍における薬物濃度（ｎＭ）であり、ここで、それらのＡＤＣは８の平均薬物負荷量を有する。
図２１は、未処置の動物と比較した、そのＰＥＧ単位について異なる長さを有するＰＥＧ化された足場を有する標的化されていない対照のＰＥＧ化された薬物コンジュゲートの５０ｍｇ／Ｋｇの単回静脈内投与に対する、経時的な体重変化％によって示される忍容性であり、該足場は、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＥＧ）ｘ（ＰＡＢ（ｇｌｕｃ））の構造によって表される薬物−リンカーを有し、ここで、Ｌｐは並列コネクター単位としてのリシンであり、ｘは０（ｈ００−４３）であり（ここではリシンのイプシロンアミノにおけるＰＥＧ単位はアセチルで置き換えられている）、ｘは、２（ｈ００−４３）、４（ｈ００−４２）、８（ｈ００−１８）、１２（ｈ００−１７）または２４（ｈ００−１６）であり、ここで、それらのＡＤＣは８の平均薬物負荷量を有する。
図２２は、そのＰＥＧ単位について異なる長さを有するＰＥＧ化された足場を有する標的化されていない対照のＰＥＧ化された薬物コンジュゲートについてのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラムであり、該足場は、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＥＧ）ｘ（ＰＡＢ（ｇｌｕｃ））の構造によって表される薬物−リンカーを有し、ここで、Ｌｐは並列コネクター単位としてのリシンであり、ｘは、８（ｈ００−１８）、１２（ｈ００−１７）または２４（ｈ００−１６）である。
図２３は、そのＰＥＧ単位について異なる長さを有するＰＥＧ化された足場を有する標的化されていない対照のＰＥＧ化された薬物コンジュゲートについての、２−コンパートメントモデル（ｍｍｏｄｅｌ）にフィットさせた消失半減期および分布であり、該足場は、ＭＤｐｒ−Ｌｐ−（ＰＥＧ）ｘ（ＰＡＢ（ｇｌｕｃ））の構造によって表される薬物−リンカーを有し、ここで、Ｌｐは並列コネクター単位としてのリシンであり、ｘは、８（ｈ００−１８）、１２（ｈ００−１７）または２４（ｈ００−１６）である。
発明の概要
本発明は、とりわけ、リガンド−薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）、これらを調製および
使用する方法、ならびにその中間体を提供する。リガンド−薬物コンジュゲートは、循環
中は安定的であるが、その薬物カーゴが標的とした細胞の近傍でまたはその細胞内で放出
されると、標的とした細胞に対して細胞死をもたらし、または標的とした細胞の増殖を阻
害することができる。
主要な実施形態では、本発明のＬＤＣは、下記の式Ｉ、

の構造によって表され、式中、Ｄは薬物単位であり、ＰＥＧは、薬物−リンカーの疎水性
をマスクするポリエチレングリコール単位であり、Ｌｐは、ＰＥＧ単位がＸ−Ｄに対して
並列配向であることを可能とする並列コネクター単位であり、ｍが１超であるとき、Ａは
任意選択でサブ単位からなる分岐単位であり、またはｍが１であるとき、Ａは存在せず、
ＸはＬＤＣからの各Ｄの放出を実現する放出可能なアセンブリー単位であり、Ｚは任意選
択のスペーサー単位であり、これを通して、Ｌｐは標的化リガンドであるＬに結合してい
る。
他の主要な実施形態では、本発明のＬＤＣは、下記の式ＩＩ、

の構造によって表され、式中、ＡＤは、ＰＥＧ単位に対して並列配向であるｔによって示
されるＸ−Ｄ部分のさらなる結合を可能とする薬物結合単位であり、Ｌ、Ｌｐ、Ｚ、Ａ、
Ｘ、Ｄ、ｍ、ｐおよびｓは、式Ｉについて定義された通りである。
さらに他の主要な実施形態では、本発明のＬＤＣは、下記の式ＩＩＩ、

の構造によって表され、式中、ＡＤ、Ｌ、ＬＰ、ＰＥＧ、Ｚ、Ａ、Ｘ、Ｄ、ｍ、ｐ、ｓお
よびｔは、式ＩＩについて定義された通りである。
発明の説明
全般
本発明は、リガンド−薬物コンジュゲートのポリエチレングリコール構成要素（ＰＥＧ
単位）の配向が、コンジュゲートのこのように得られた薬物動態に対して深い影響を有す
ることができるという驚くべき発見に部分的に基づいている。具体的には、リガンド−薬
物コンジュゲートの薬物単位に対するＰＥＧ単位の並列配置は、ＰＥＧ単位を有さないコ
ンジュゲート、または薬物単位と直列配向で配置されているＰＥＧ単位を有するコンジュ
ゲートと比較して、コンジュゲートの薬物動態を改善できることを本発明者らは発見した
。ＰＥＧ単位上に存在する繰り返しポリエチレングリコールサブ単位の数は、コンジュゲ
ートのこのように得られた薬物動態に影響を与えることを本発明者らはさらに発見した。
並列配置にあり、かつ薬物の疎水性をマスクするのに適当なサイズのＰＥＧ単位を有する
コンジュゲート、および場合によって、リンカーの構成要素を設計することによって、よ
り低く負荷されたコンジュゲートの他の特徴、例えば、好ましいＰＫ特性を維持する一方
で、より高い薬物負荷量を可能とするリガンド−薬物コンジュゲートの型を調製すること
ができる。リガンド−薬物コンジュゲートを、これらが「遊離」薬物を放出するような様
式で、さらに設計する。
定義
特に断りのない限り、下記の用語および語句は、本明細書において使用する場合、下記
の意味を有することを意図する。商品名が本明細書において使用されるとき、商品名は、
文脈によって他に示さない限り、製品の製剤、ジェネリック薬物、および商品名のある製
品の活性医薬成分（複数可）を含む。
「並列コネクター単位」とは、本明細書において使用する場合、並列配向でＰＥＧ単位
を薬物単位と接続する分岐状リンカー単位構成要素を指す。本明細書において使用する場
合、語句「並列配向」、「並列配置」、「並列接続」および同様の用語は、並列配置され
た、または並列配向された、または並列接続された構成要素が、それぞれがＬｐに繋がれ
ている１個の端部および１個の遊離端部を有するような様式で、並列コネクター単位（Ｌ
ｐ）へと結合している構成を指す。典型的には、Ｌｐは、１個または複数のリンカー単位
構成要素を通して薬物単位を接続し、そのうち１つ（または１つのみ）は、放出可能なア
センブリー単位、およびＰＥＧ単位であり、薬物およびＰＥＧ単位は、薬物単位の疎水性
がＰＥＧ単位によってマスクされるように、並列配向にある。一部の態様では、ＡＤに接
続された薬物単位は、そのＬｐにおけるＰＥＧ単位と並列配向であるように、さらなる分
岐は、Ｌｐへと接続されている１個または複数の薬物結合単位（ＡＤ）によって提供され
る。所与のリンカー−薬物部分についての疎水性をマスクすることが必要とされるこれら
のＰＥＧ単位のみは、その薬物単位に対して並列配向である必要があり、これはＬｐへと
接続している薬物およびポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｅｌｅｎｅ）グリコール単位の
全てが、互いに対して並列配向にあることを必ずしも必要としない。
用語「並列」は、本明細書においてリガンド−薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）を構成す
るＬｐからのＬＤＣの２個の構成要素の分岐を示すために使用され、それは、２個の構成
要素が空間中で並んでいること、またはいくらかの長さもしくはこれらの全長に亘ってこ
れらの間に同じ距離を有することを示すために使用されない。並列配向された構成要素が
それ自体分岐状であり、それゆえ複数の端部を有する場合、これは１個の繋がれている端
部のみをさらに有する。
ＬＤＣの薬物単位に対して並列配向にあるＰＥＧ単位を有するＬＤＣは、リンカー単位
（すなわち、並列コネクター単位）の構成要素に接続している１個の末端、および１個ま
たは複数の遊離の繋がれていない末端（複数可）を有するＰＥＧ単位を含むＬＤＣを指す
。ＰＥＧ単位の遊離の繋がれていない末端は、例えば、未反応の官能基、例えば、アルコ
キシ、カルボン酸、アルキレンカルボン酸、アルコール、または他の官能基の形態を取る
ことができる。薬物単位に対するＰＥＧ単位の並列配向は、ＰＥＧ単位の原子が薬物単位
およびリガンド単位の間に挿入されていないため、リガンド単位および薬物単位の間の原
子の数を最小化するように作用する。ＬＤＣにおいて、リンカー単位は、（例えば、細胞
内（ｉｎｔｒａｃｅｕｌｌａｒ）切断によって）標的部位においてＬＤＣから生物活性の
ある薬物部分を放出することができる放出可能なアセンブリー単位からなる。場合によっ
て、放出される薬物部分は、薬物単位中に組み込まれており、それゆえＰＥＧ単位、また
はリガンド単位の分解生成物に結合されたままでない親薬物である。他の場合、放出され
る生物活性のある薬物部分は、保持されたリンカー単位（ＰＥＧ単位以外）の部分を有す
る親薬物である。
放出可能なアセンブリー単位と称される放出機序を有するリンカー単位構成要素が、Ｌ
ｐおよび薬物単位の間に挿入されている。ＰＥＧ単位と同様に、薬物単位は、並列コネク
ター単位および１個または複数の遊離の繋がれていない末端（またはいくつかの環状薬物
の場合、遊離末端はない）に（たとえ放出可能なアセンブリー単位を通して間接的であっ
ても）結合している１個の端部を有する。薬物単位に対して並列（すなわち、分岐状）配
向にあるＰＥＧ単位を有するＬＤＣの例示的なグラフ図は、下記の通りである。
語句「直列配向」または「直列配置」または「直列接続」とは、ＬＤＣ中の構成要素の
構成を指し、ここで直列的に配向された構成要素は、これが２個の繋がれている端部を有
し、各端部がＬＤＣの異なる構成要素に接続しているような様式で結合している。ＬＤＣ
のリガンド単位および薬物単位に対して直列配向にあるＰＥＧ単位を有するＬＤＣは、（
典型的には、リンカー単位の構成要素を介して間接的に）１個の末端におけるリガンドに
、および（典型的には、リンカー単位の他の構成要素を介して間接的に）別の末端におけ
る薬物単位に繋がれているＰＥＧ単位を含むＬＤＣを指す。ＰＥＧ単位の直列配置は、リ
ガンド単位および薬物単位の間の原子の数を増加させる。ＰＥＧ単位の原子の少なくとも
いくつかは、薬物単位およびリガンド単位の間に挿入されているためである。例えば、Ｐ
ＥＧ単位を特徴付ける１個または複数の（ＯＣＨ２ＣＨ２）サブ単位は、薬物単位および
リガンド単位の間に挿入されている。リガンド単位および薬物単位に対して直列配向にあ
るＰＥＧ単位を有するリガンド−薬物コンジュゲートの例示的なグラフ図は、下記の通り
である。
リガンド―Ｚ１―（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ―Ｚ２―薬物
式中、Ｚ１およびＺ２は、リンカー単位の任意選択のストレッチャー構成要素である。
用語「抗体」とは、本明細書において使用する場合、最も広範な意味で使用され、イン
タクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体（例
えば、二重特異性抗体）、および所望の生物活性を示す抗体フラグメントを特にカバーす
る。ただし、抗体フラグメントは、薬物−リンカーのために必要な数の結合部位を有する
。抗体の天然形態は四量体であり、２個の同一の対の免疫グロブリン鎖からなり、それぞ
れの対は１個の軽鎖および１個の重鎖を有する。それぞれの対において、軽鎖および重鎖
可変領域（ＶＬおよびＶＨ）は、一緒になって主に抗原への結合に関与する。軽鎖および
重鎖可変ドメインは、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とまた称される、３個の超可
変領域によって中断されるフレームワーク領域からなる。定常領域は、免疫系によって認
識され、またはこれと相互作用し得る。（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、２００１年、Ｉｍ
ｍｕｎｏ． Ｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋを参照されたい）。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ
、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４
、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものでよい。抗体は、任意の適切な種に
由来することができる。一部の態様では、抗体は、ヒトまたはマウス起源のものである。
抗体は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体でよい。
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書において使用する場合、実質的に均質な抗
体の集団から得た抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得
る可能な天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的で
あり、単一の抗原部位を指向している。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均
質な集団から得られるものとしての抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産
生を必要とするとは解釈されない。
「インタクトな抗体」とは、抗体クラスについて適切な場合の、抗原結合性可変領域、
ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）ならびに重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３お
よびＣＨ４を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天
然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。
「抗体フラグメント」は、抗原結合領域またはその可変領域を含むインタクトな抗体の
ポーションを含む。本発明において有用であるために、抗体フラグメントは、薬物−リン
カーへの結合のための必要な数の部位を有さなければならない。結合部位は、天然に存在
するもの、または天然に存在しないものでよい。
「抗原」は、そこに抗体が特異的に結合する実体である。
用語「特異的結合」および「特異的に結合する」とは、抗体または抗体誘導体が、多数
の他の抗原とではなく、その対応する標的抗原と高度に選択的な様式で結合することを意
味する。典型的には、抗体または抗体誘導体は、少なくとも約１×１０−７Ｍ、好ましく
は１０−８Ｍから１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍの親和
性で結合し、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ
、カゼイン）に結合するその親和性の少なくとも２倍大きい親和性で所定の抗原に結合す
る。
用語「阻害する」または「の阻害」とは、測定可能な量だけ低減させ、または完全に防
止することを意味する。
用語「治療有効量」とは、哺乳動物における疾患または障害を処置するのに有効なコン
ジュゲートの量を指す。がんの場合、コンジュゲートの治療有効量は、がん細胞の数を低
減し得る、腫瘍のサイズを低減し得る、末梢器官中へのがん細胞浸潤を阻害し得る（すな
わち、ある程度緩徐化させ、好ましくは停止し得る）、腫瘍転移を阻害し得る（すなわち
、ある程度緩徐化させ、好ましくは停止し得る）、ある程度、腫瘍増殖を阻害し得る、か
つ／またはがんと関連する症状の１つもしくは複数をある程度軽減し得る。薬物が成長を
阻害し、かつ／または存在するがん細胞を死滅させ得る程度にまで、薬物は細胞増殖抑制
性および／または細胞毒性でよい。がん療法のために、有効性は、例えば、疾患の進行ま
での時間（ＴＴＰ）をアセスメントし、かつ／または奏効率（ＲＲ）を決定することによ
って測定することができる。
文脈によって他に示さない限り、用語「実質的な」または「実質的に」とは、集団の、
混合物または試料の大部分、すなわち集団の、混合物または試料の＞５０％、好ましくは
集団の５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５
％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７
％超、９８％超、または９９％超を指す。
用語「細胞内で切断される」および「細胞内切断」とは、リガンド−薬物コンジュゲー
ト（例えば、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）など）における細胞の内部での代謝過程
または反応を指し、それによって薬物部分（Ｄ）およびリガンド単位（例えば、抗体（Ａ
ｂ））の間の共有結合による結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）が、例え
ば、放出可能なアセンブリー単位の作用によって切断され、細胞の内部で遊離薬物がその
分解生成物を含めたＬＤＣから解離することをもたらす。それゆえ、この解離からもたら
される部分は細胞内代謝物である。
用語「細胞毒性活性」とは、薬物またはリガンド−薬物コンジュゲートまたはリガンド
−薬物コンジュゲートの細胞内代謝物の細胞死滅効果を指す。細胞毒性活性は、細胞の半
分が細胞毒性剤への曝露から生存する単位体積当たりの濃度（モル濃度（ｍｏｌａｒ）ま
たは質量）であるＩＣ５０値によって表し得る。
用語「細胞増殖抑制活性」とは、細胞増殖抑制剤、または細胞増殖抑制剤をその薬物単
位として有するリガンド−薬物コンジュゲート、またはその細胞内代謝物（代謝物は細胞
増殖抑制剤である）の、細胞殺滅以外の抗増殖性効果を指す。
用語「細胞毒性剤」とは、本明細書において使用する場合、細胞毒性活性を有し、かつ
細胞の破壊をもたらす物質を指す。この用語は、放射性同位体（例えば、２１１Ａｔ、１
３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ
、６０Ｃ、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、ならびに毒素、例えば、合成類似
体およびその誘導体を含めた、細菌起源、真菌起源、植物起源または動物起源の小分子毒
素または酵素的活性毒素を含むことを意図する。
用語「細胞増殖抑制剤」とは、本明細書において使用する場合、細胞増殖抑制活性を有
する、例えば、細胞成長または増殖に関与する細胞の機能を阻害する、または細胞成長ま
たは増殖の一因となる物質を指す。細胞増殖抑制剤は、阻害剤、例えば、タンパク質阻害
剤、例えば、酵素阻害剤を含む。
用語「がん」および「がんの」とは、レギュレートされない細胞成長によって典型的に
は特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態または障害を指し、またはそれを記載
する。「腫瘍」は、１つまたは複数のがん細胞を含む。
「自己免疫疾患」とは、本明細書において、個体自身の組織またはタンパク質から生じ
、かつこれらに対する疾患または障害である。
「患者」とは、本明細書において使用する場合、ＬＤＣを投与する被験体を指す。「患
者」の例には、これらに限定されないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、ヒトでは
ない霊長類、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、トリおよび家禽が含まれる。典型的
には、患者は、ラット、マウス、イヌ、ヒトではない霊長類またはヒトである。一部の態
様では、患者は、有効量のＬＤＣを必要としているヒトである。
用語「処置する」または「処置」とは、文脈によって他に示さない限り、治療的処置、
および再発を予防する予防的措置を指し、その目的は、望まれない生理学的変化または障
害、例えば、がんの発生または拡散を阻害または緩徐化する（減らす）ことである。本発
明の目的のために、有益または所望の臨床結果には、これらに限定されないが、検出可能
なものであろうともまたは検出が不可能なものであろうとも、症状の軽減、疾患の程度の
減弱、疾患の安定化した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延または緩徐化
、病態の回復または緩和、および寛解（部分的または全体的であろうと）が含まれる。「
処置」はまた、処置を受けない場合の予想される生存と比較した、生存の延長を意味する
ことができる。処置を必要とするものは、上記状態または障害を既に有するもの、および
上記状態または障害を有する傾向があるものを含む。
がんとの関連で、用語「処置する」は、腫瘍細胞、がん細胞、または腫瘍の成長を阻害
すること、腫瘍細胞またはがん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍量を減らすこと
、またはがん性細胞の数を減少させること、およびその疾患と関連する１つまたは複数の
症状を回復させることのいずれかまたは全てを含む。
自己免疫疾患との関連で、用語「処置する」は、これらに限定されないが、自己免疫性
抗体を産生する細胞を含めた自己免疫疾患の状態と関連する細胞の複製を阻害すること、
自己免疫性抗体量を減らすこと、および自己免疫疾患の１つまたは複数の症状を回復させ
ることのいずれかまたは全てを含む。
語句「薬学的に許容される塩」とは、本明細書において使用する場合、化合物（例えば
、薬物、薬物−リンカー、またはリガンド−薬物コンジュゲート）の薬学的に許容される
有機塩または無機塩を指す。化合物は少なくとも１個のアミノ基を含有することができ、
したがって、酸付加塩は、アミノ基と形成することができる。例示的な塩には、これらに
限定されないが、硫酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、クロ
リド、ブロミド、ヨージド、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチ
ン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸
塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲ
ンチシネート（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩
、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン
酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、
１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が含まれる。薬学
的に許容される塩は、別の分子、例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオ
ンの含有を伴い得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機または無
機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に複数個の電荷を帯び
た原子を有し得る。複数の電荷を帯びた原子が薬学的に許容される塩の部分である場合は
、複数の対イオンを有することができる。このように、薬学的に許容される塩は、１個も
しくは複数の電荷を帯びた原子および／または１個もしくは複数の対イオンを有すること
ができる。
他に示さない限り、用語「アルキル」は、それ自体で、または別の用語の部分として、
示した数の炭素原子を有する置換または非置換の直鎖または分岐状の飽和または不飽和の
炭化水素を指す（例えば、「−Ｃ１〜Ｃ８アルキル」または「−Ｃ１〜Ｃ１０」アルキル
は、それぞれ、１〜８個または１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基を指す）。炭素
原子の数が示されないとき、アルキル基は、１〜８個の炭素原子を有する。代表的な直鎖
「−Ｃ１〜Ｃ８アルキル」基には、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ
−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチルおよび−
ｎ−オクチルが含まれる。一方では、分岐状−Ｃ１〜Ｃ８アルキルには、これらに限定さ
れないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−
イソペンチル、および−２−メチルブチルが含まれる。不飽和−Ｃ２〜Ｃ８アルキルには
、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−
イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、
−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、−１−ヘキシル、２
−ヘキシル、−３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−
ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニルおよび−３−メチル−１ブチニルが含ま
れる。一部の態様では、アルキル基は、置換されていない。アルキル基は、１個または複
数の基で置換することができる。他の態様では、アルキル基は飽和している。
他に示さない限り、「アルキレン」は、それ自体で、または別の用語の部分として、記
述した数の炭素原子、典型的には１〜１０個の炭素原子の、親アルカンの同じかまたは２
個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去に由来する２個の一価ラジカル中心を有
する、置換または非置換の飽和または不飽和の分岐状または直鎖または環状の炭化水素ラ
ジカルを指す。典型的なアルキレンラジカルには、これらに限定されないが、メチレン（
−ＣＨ２−）、１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ
２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが含まれる。好ま
しい態様では、アルキレンは、分岐状または直鎖の炭化水素である（すなわち、これは環
状炭化水素ではない）。本明細書において提供する実施形態のいずれかでは、アルキレン
は、飽和アルキレンでよい。
他に示さない限り、「アリール」は、それ自体で、または別の用語の部分として、親芳
香族環系の単一の炭素原子からの１個の水素原子の除去によって得られる、６〜２０個の
炭素（好ましくは６〜１４個の炭素）原子の置換または非置換の一価炭素環式芳香族炭化
水素ラジカルを意味する。いくつかのアリール基は、例示的な構造において、「Ａｒ」と
表される。典型的なアリール基には、これらに限定されないが、ベンゼン、置換ベンゼン
、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルに由来するラジカルなどが含まれる。例示的な
アリール基は、フェニル基である。
他に示さない限り、「アリーレン」は、それ自体で、または別の用語の部分として、ア
リール基の水素原子の１個が結合で置き換えられている、上記に定義されているようなア
リール基であり（すなわち、これは二価である）、例示的な基としてフェニルを用いる下
記の構造において示すようにオルト、メタ、またはパラ配向でよい。

選択した実施形態では、例えば、並列コネクター単位、分岐単位または薬物結合単位がア
リーレンを含むとき、このアリーレンは、アリール基の水素原子の１個または２個が結合
で置き換えられている、上記で定義したアリール基である（すなわち、アリーレンは、二
価または三価でよい）。
他に示さない限り、「Ｃ３〜Ｃ８複素環」は、それ自体で、または別の用語の部分とし
て、３〜８個の炭素原子（環員とまた称される）およびＮ、Ｏ、ＰまたはＳから独立に選
択される１〜４個のヘテロ原子環員を有し、かつ親環系の環原子から１個の水素原子を除
去することに由来する、一価の置換または非置換の芳香族または非芳香族の単環式または
二環式環系を指す。複素環中の１個または複数のＮ、ＣまたはＳ原子は酸化することがで
きる。ヘテロ原子を含む環は、芳香族または非芳香族でよい。他に断らない限り、複素環
は、任意のヘテロ原子または炭素原子においてそのペンダント基に結合しており、これは
安定的な構造をもたらす。Ｃ３〜Ｃ８複素環の代表例には、これらに限定されないが、ピ
ロリジニル、アゼチジニル、ピペリジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、テト
ラヒドロピラニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル
、ピロリル、チオフェニル（チオフェン）、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラ
ゾリル、ピリミジニル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、およ
びイソオキサゾリルが含まれる。
他に示さない限り、「Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ」は、それ自体で、または別の用語の部
分として、複素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３
〜Ｃ８複素環基を指す（すなわち、これは二価である）。選択した実施形態では、例えば
、並列コネクター単位、分岐単位または薬物結合単位がヘテロシクロを含むとき、このヘ
テロシクロは、複素環基の水素原子の１個または２個が結合で置き換えられている、上記
で定義した複素環基である（すなわち、ヘテロシクロは、二価または三価でよい）。
他に示さない限り、「Ｃ３〜Ｃ８炭素環」は、それ自体で、または別の用語の部分とし
て、親環系の環原子からの１個の水素原子の除去に由来する、３員、４員、５員、６員、
７員または８員の一価の置換または非置換の飽和または不飽和の非芳香族単環式または二
環式炭素環式環である。代表的な−Ｃ３〜Ｃ８炭素環には、これらに限定されないが、シ
クロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル
、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、１，４−シクロヘキサジエニル、
シクロヘプチル、１，３−シクロヘプタジエニル、１，３，５−シクロヘプタトリエニル
、シクロオクチル、およびシクロオクタジエニルが含まれる。
他に示さない限り、「Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ」は、それ自体で、または別の用語の部
分として、炭素環基の水素原子のもう１個が結合で置き換えられている、上記で定義した
Ｃ３〜Ｃ８炭素環基を指す（すなわち、これは二価である）。選択した実施形態では、例
えば、並列コネクター単位、分岐単位または薬物結合単位がカルボシクロを含むとき、こ
のカルボシクロは、炭素環基の水素原子の１個または２個は、結合で置き換えられている
、上記で定義した炭素環基である（すなわち、カルボシクロは、二価または三価でよい）
。
他に示さない限り、用語「ヘテロアルキル」は、それ自体で、または別の用語と組み合
わせて、特に明記しない限り、安定的な直鎖または分岐鎖炭化水素、またはこれらの組合
せを意味し、これは完全飽和しており、または１〜３の不飽和度を含有し、記述した数の
炭素原子、ならびにＯ、Ｎ、ＳｉおよびＳからなる群から選択される１〜１０個、好まし
くは１〜３個のヘテロ原子からなり、ここで窒素および硫黄原子は、任意選択で酸化され
ていてもよく、窒素ヘテロ原子は、任意選択で四級化されていてもよい。ヘテロ原子（複
数可）Ｏ、ＮおよびＳは、ヘテロアルキル基の任意の内部の位置において、またはアルキ
ル基が分子の残部に結合している位置において配置し得る。ヘテロ原子Ｓｉは、アルキル
基が分子の残部に結合している位置を含めて、ヘテロアルキル基の任意の位置において配
置し得る。例には、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、
−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−
ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ３
、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３
）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ３、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３が
含まれる。２個までのヘテロ原子は、連続的、例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３および
−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３でよい。好ましい実施形態では、Ｃ１〜Ｃ４ヘテロアル
キルまたはヘテロアルキレンは、１〜４個の炭素原子および１個または２個のヘテロ原子
を有し、Ｃ１〜Ｃ３ヘテロアルキルまたはヘテロアルキレンは、１〜３個の炭素原子およ
び１個または２個のヘテロ原子を有する。一部の態様では、ヘテロアルキルまたはヘテロ
アルキレンは飽和している。
他に示さない限り、用語「ヘテロアルキレン」は、それ自体で、または別の置換基の部
分として、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−および−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ
２−ＮＨ−ＣＨ２−によって例示されるような（上記で考察するような）ヘテロアルキル
に由来する二価基を意味する。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子はまた、鎖末端
の一方または両方を占めることができる。またさらに、アルキレンおよびヘテロアルキレ
ン連結基について、連結基の配向は暗示されない。選択した実施形態では、例えば、並列
コネクター単位、分岐単位または薬物結合単位がヘテロアルキレンを含むとき、このヘテ
ロアルキレンは、ヘテロアルキル基の水素原子の１個または２個が結合で置き換えられて
いる、上記で定義したヘテロアルキル基である（すなわち、ヘテロアルキレンは、二価ま
たは三価でよい）。
「置換アルキル」および「置換アリール」とは、それぞれ、１個または複数の水素原子
が置換基でそれぞれ独立に置き換えられているアルキルおよびアリールを意味する。典型
的な置換基には、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ
−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝
Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）
Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）
２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ
）（ＯＲ）２、−ＰＯ− ３、−ＰＯ３Ｈ２、−ＡｓＯ２Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝
Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ
、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、またはＣ（＝ＮＲ）ＮＲ２が
含まれ、各Ｘは、独立に、ハロゲン：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり、各Ｒは
、独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−Ｃ６〜Ｃ２０アリール、−Ｃ３〜Ｃ１４複
素環、保護基またはプロドラッグ部分である。典型的な置換基はまた、（＝Ｏ）を含む。
上記のようなアルキレン、炭素環、カルボシクロ、アリーレン、ヘテロアルキル、ヘテロ
アルキレン、複素環、およびヘテロシクロ基はまた、同様に置換され得る。
本明細書において使用する場合、用語「遊離薬物」とは、ＰＥＧ単位にまたはリガンド
単位の分解生成物に直接的または間接的にのいずれかで共有結合で結合していない生物活
性のある薬物部分を指す。遊離薬物は、ＬＤＣ中の放出可能なアセンブリー単位によって
実現される放出機序を介したリンカー単位からの切断によって直ちに生じるような薬物、
またはそれに続く細胞内の変換または代謝を指すことができる。一部の態様では、遊離薬
物は形態Ｈ−Ｄを有し、または電荷を帯びた部分として存在し得る。遊離薬物は、所望の
生物学的効果を発揮することができる薬理学的活性種である。一部の態様では、薬理学的
（ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ）活性種は親薬物でなくてもよく、それに続く
細胞内代謝を受けてこなかったリンカー単位の構成要素を含み得る。
リガンド−薬物コンジュゲート化合物および関連する中間体
本発明は、好ましくないＰＫ特性を有するリガンド−薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）が
、本明細書に記載のようなその薬物単位に対して並列配向であるＰＥＧ単位の配置によっ
て改善されるこれらのＰＫ特性を有することができるという発見に部分的に基づいている
。一部の態様では、ＰＥＧ化されたコンジュゲートのクリアランスプロファイルは、高い
薬物負荷量においてでさえ、コンジュゲートしていないリガンド（すなわち、標的化薬剤
、例えば、抗体または関連する抗原結合フラグメント）のクリアランスプロファイルと同
様である。ＬＤＣは、リガンド単位（すなわち、標的化リガンド）、リンカー単位、およ
び薬物単位を含む。標的化リガンドへのその結合の前または後のリンカー単位は、薬物単
位をリガンド単位へと接続させ、かつ薬物単位に対して並列構成であるＰＥＧ単位を含む
。この並列構成は、放出可能なアセンブリー単位による薬物単位、およびＰＥＧ単位の、
並列コネクター単位への結合から生ずる。リンカー単位は、薬物単位へと接続したとき、
薬物−リンカーと言及することができる。ＬＤＣの集団は好ましくは、リガンド単位当た
り少なくとも約６個、約７個または約８個の薬物−リンカーの平均薬物−リンカー負荷量
を有する。
ＰＥＧ単位は、薬物−リンカーの疎水性構成要素の最適化されたレベルの疎水性のマス
キングを与えるように設計される。この理由のために、本明細書において教示するような
ＰＥＧ単位の組込みは、コンジュゲートしていないリガンドと比較して、結果として生じ
たコンジュゲートの薬物動態に負の影響を与えるのに十分な疎水性を他の方法で有する薬
物−リンカーに特に適している。これらのより不良な薬物動態は、より大きな血漿クリア
ランスを含む。それゆえ、コンジュゲートしていないリガンドに対して有意により大きな
血漿クリアランスおよび対応してより低い血漿曝露を示すリガンド薬物コンジュゲートは
、本発明によって利益を得る。
リガンド−薬物コンジュゲートは、薬物単位およびＰＥＧ単位の疎水性薬物−リンカー
部分内の並列配向によってより好ましい薬物動態学的特性を有し、それによって血漿クリ
アランスに対する薬物−リンカー部分の薬物単位および／または他の構成要素の疎水性の
負のインパクトは低減または取り除かれる（すなわち、薬物−リンカー部分の疎水性はマ
スクされる）。並列配向は並列コネクター単位（ＬＰ）によって達成される。並列コネク
ター単位は、薬物単位、ＰＥＧ単位および適当な分岐構成のリガンドを接続して、必要な
並列配向を実現するように作用するためである。並列コネクター単位は、コンジュゲート
の構成要素のための結合部位を有する足場と考えることができ、これはＰＥＧ単位と並列
配向にある複数の薬物単位を有するように多重化された（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ）、Ｐ
ＥＧ化された多重化された足場を提供することができる。一部の実施形態では、その疎水
性が並列配向されたＰＥＧ単位によってマスクされる薬物−リンカー部分中の疎水性構成
要素は、疎水性薬物単位である。
薬物単位は、放出可能なアセンブリー単位を介して並列コネクター単位に結合している
。放出可能なアセンブリー単位は、例えば、細胞毒性または細胞増殖抑制性を誘導するの
に十分な、標的細胞における薬物の効率的な放出を可能とする。典型的には、放出可能な
アセンブリー単位は、コンジュゲートが一旦標的細胞中に内部移行されると遊離薬物を効
率的に放出するよう、設計されるが、それはまた、標的細胞の近傍において遊離薬物を放
出するようにも設計し得る。切断のための適切な認識部位は、ＬＤＣの薬物単位（複数可
）の効率的な放出を可能にする部位である。典型的には、認識部位は、ペプチド切断部位
（例えば、ペプチドをベースとする放出可能なアセンブリー単位中）、糖切断部位（例え
ば、糖をベースとする放出可能なアセンブリー単位中）、またはジスルフィド切断部位（
例えば、ジスルフィドをベースとする放出可能なアセンブリー単位中）である。ペプチド
切断部位の例は、細胞内プロテアーゼによって認識される部位、例えば、リソソーム中に
存在する部位を含む。糖切断部位の例は、グルクロニダーゼ、例えば、ベータ−グルクロ
ニダーゼを含めた、グリコシダーゼによって認識される部位を含む。
任意の生理活性化合物（すなわち、薬物）は、本発明における薬物単位として使用する
ことができる。生理活性化合物は、ＬＤＣ中への薬物単位としてのその組込みのための適
切な部位を有してもよく、または、その目的のために修飾することができ、リンカー単位
の部分を保持し得るかもしくは保持し得ないその修飾された薬物がＬＤＣから放出される
とき、親薬物の所望の生物活性を実質的に保持し続ける。好ましい薬物単位は、親生理活
性化合物の放出を提供する。薬物単位は、アウリスタチンまたは非アウリスタチン薬物で
よく、これは薬物−リンカー部分の疎水性構成要素であり、その疎水性は並列配向された
薬物単位によってマスクされる。本発明の効果は、薬物単位、放出可能なアセンブリー単
位、または薬物単位／放出可能なアセンブリー単位の組合せが、天然で疎水性であり、そ
れによって結果として生じたコンジュゲートの薬物動態に負の影響を与える実施形態では
より明白となる。疎水性薬物の例は、モノメチルアウリスタチンＥ、およびモノメチルア
ウリスタチンＥと匹敵する、またはこれより大きい疎水性を有する薬物を含む。疎水性の
放出可能なアセンブリー単位の例は、本明細書において特に例示する疎水性自壊的構成要
素を有するペプチドをベースとする、および糖をベースとする放出可能なアセンブリー単
位、ならびにこのような放出可能なアセンブリー単位と匹敵する、またはこれより大きい
疎水性を有する放出可能なアセンブリー単位を含む。
疎水性は、ＳｌｏｇＰを使用して測定することができる。ＳｌｏｇＰは、オクタノール
／水の分配係数の対数として定義され（暗に示された水素を含めた）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐからのプログラムＭＯＥ（商標）を使用して計算する
ことができる（Ｗｉｌｄｍａｎ， Ｓ．Ａ．、Ｃｒｉｐｐｅｎ， Ｇ．Ｍ．；Ｐｒｅｄｉ
ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｂｙ Ａｔ
ｏｍｉｃ Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ；Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｆ． Ｃｏｍｐｕｔ．
Ｓｃｉ．、３９巻、５号（１９９９年）８６８〜８７３頁を使用して計算したＳｌｏｇ
Ｐ値）。参照薬物単位または放出可能なアセンブリー単位と匹敵する疎水性を有する薬物
単位または放出可能なアセンブリー単位に言及するとき、ＳｌｏｇＰ値は、参照薬物単位
または放出可能なアセンブリー単位のＳｌｏｇＰ値の２０％以内、好ましくは１０％以内
である。
上記を考慮して、本発明は、実施形態の１つの群では、リガンド−薬物コンジュゲート
の集団を含むリガンド−薬物コンジュゲート組成物を提供する。リガンド−薬物コンジュ
ゲートは、リガンド単位およびそこに結合した複数の薬物−リンカー単位を含む。好まし
くは、組成物中にリガンド当たり平均で約６〜約１４個、約６〜約１２個、約６〜約１０
個、約８〜約１４個、約８〜約１２個、約８〜約１０個の薬物−リンカー単位が存在する
。リガンドへの例示的な結合は、チオエーテル連結を介してである。リガンド上の例示的
なコンジュゲーション部位は、鎖間のジスルフィド残基および／またはリガンド中に導入
されたチオール含有残基、例えば、導入されたシステインの還元から得られるチオール基
である。結合は、例えば、鎖間のジスルフィドに由来する、および０〜８個の導入された
システイン残基に由来するチオール残基を介してでよい。
実施形態の関連する群では、疾患の処置のためにリガンド−薬物コンジュゲートを患者
に投与するための方法を提供する。疾患は、例えば、がんまたは自己免疫疾患でよい。リ
ガンド−薬物コンジュゲートは、治療有効量で、治療的に有効なスケジュールで投与され
る。
実施形態
本発明のいくつかの実施形態を下記に記載し、それに続いて、リガンド−薬物コンジュ
ゲートおよびその中間体を構成する構成要素についてのより詳細な考察を記載する。リガ
ンド−薬物コンジュゲートおよびその中間体の構成要素のための選択した実施形態のいず
れかは、本明細書に記載の本発明のそれぞれおよび全ての態様に適用することができるか
、またはこれらは単一の態様に関し得る。選択した実施形態は、任意の組合せで一緒に組
み合わせられ得る。
リガンド−薬物コンジュゲート化合物
実施形態の１つの群では、本明細書において提供するのは、遊離薬物を放出することが
できるＬＤＣ化合物であり、ＬＤＣ化合物は、下記の式ＡＡ、

または薬学的に許容されるその塩によって表され、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚは、ストレッチャー単位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜
１４または８〜約１２）の範囲の整数であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２、３または４である。
実施形態の別の群では、式ＡＡは、個々のＬＤＣ化合物ではなく、ＬＤＣ組成物（すな
わち、個々のＬＤＣ化合物の集団を含む組成物）を表す。そのような実施形態では、ｐは
、組成物中のリガンド当たりの薬物−リンカーの平均数を表す。そのような実施形態では
、ｐは典型的には整数値でなく、１〜約１４、好ましくは約２〜約１２（好ましくは約６
〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）の範囲でよい。他の変数（
例えば、Ｌ、Ｚ、Ａ、ＬＰ、ＰＥＧ、Ｘ、Ｄ、ｓ、およびｍ）は同じままである。
実施形態の別の群では、ＬＤＣ組成物は、ＬＤＣ化合物の集団を含み、個々のＬＤＣ化
合物は、式ＡＡによって表され、それぞれの個々のＬＤＣ化合物について、ｐは、１〜１
４、好ましくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４または８〜約１２）
の範囲の整数から独立に選択され、組成物中のリガンド当たりの薬物−リンカーの平均数
は、１〜約１４、好ましくは約２〜約１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約
８〜約１４または約８〜約１２）である。
一部の態様では、１〜３２個、または２〜３２個（好ましくは６〜３２個または８〜３
２個）の薬物単位は、各リガンド単位に結合している。リガンド−薬物コンジュゲートの
集団は、リガンド当たり平均で１〜３２個または約２〜３２個（好ましくは約６〜３２個
または約８〜３２個）の薬物単位を有することができる。
式ＡＡによって表されるＬＤＣ化合物またはＬＤＣ組成物の選択した実施形態は、
１）ｍは１であり、ｓは０であるもの、
２）ｍは２〜４であり、ｓは１であるもの、
３）ｍは２であり、ｓは１であるもの、
４）ｍは１であり、ｓは０であり、ＬＤＣ化合物について、ｐは、６〜１４、８〜１４、
または８〜１２の範囲の整数であり、あるいはＬＤＣ組成物について、ｐは、６〜約１４
、約８〜約１４、または約８〜約１２の範囲の数であるもの、
５）ｍは２〜４であり、ｓは１であり、ＬＤＣ化合物について、ｐは、６〜１４、８〜１
４、または８〜１２の範囲の整数であり、あるいはＬＤＣ組成物について、ｐは、６〜約
１４、約８〜約１４、または約８〜約１２の範囲の数であるもの、
６）ｍは２であり、ｓは１であり、ＬＤＣ化合物について、ｐは、６〜１４、８〜１４、
または８〜１２の範囲の整数であり、あるいはＬＤＣ組成物について、ｐは、６〜約１４
、約８〜約１４、または約８〜約１２の範囲の数であるもの、
７）ｍは２であり、ｓは１であり、ｐは８であるもの、
８）ｍは１であり、ｓは０であり、ｐは８であるもの、
９）リガンド単位に結合した１〜３２個または約２〜３２個（好ましくは約６〜約３２個
または約８〜約３２個）の薬物単位が存在する、このパラグラフの１〜８に記載する実施
形態のいずれか１つ、
１０）ＬＰが、天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ま
たはポリアミンである、このパラグラフの１〜９に記載する実施形態のいずれか１つ
を含む。
式ＡＡによって表されるＬＤＣ化合物またはＬＤＣ組成物の選択した実施形態は、下記
の式ＡＡ１およびＡＡ２、

を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚは、ストレッチャー単位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、存在する分岐単位であり、
リガンド−薬物コンジュゲート化合物について、下付き文字ｐは、１〜１４の範囲、好ま
しくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４または８〜１２）の範囲の整
数であり、あるいはリガンド−薬物コンジュゲート組成物について、ｐは、１〜約１４の
範囲、好ましくは約２〜約１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４
または約８〜約１２）の範囲の数である。
上記のものを含めて、ｐ値が存在する、本明細書において提供するＬＤＣ化合物につい
て選択した実施形態のいずれかにおいて、ｐは、１〜１４、２〜１４、２〜１０、４〜１
２、６〜１４、６〜１２、８〜１２または８〜１０の範囲の整数でよい。下付き文字ｐは
、１、または２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、また
は９、または１０、または１１、または１２、または１３、または１４でよい。
上記のものを含めて、ｐ値が存在する、本明細書において提供するＬＤＣ組成物につい
て選択した実施形態のいずれかにおいて、ｐは、１〜約１４、約２〜約１４、約２〜約１
０、約４〜約１２、約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１２または約８〜約１０の範
囲である。下付き文字ｐは、１もしくは約１、または２もしくは約２、または３もしくは
約３、または４もしくは約４、または５もしくは約５、または６もしくは約６、または７
もしくは約７、または８もしくは約８、または９もしくは約９、または１０もしくは約１
０、または１１もしくは約１１、または１２もしくは約１２、または１３もしくは約１３
、または１４もしくは約１４でよい。
実施形態の別の群では、本明細書において提供するのは、遊離薬物を放出することがで
きるリガンド−薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）であり、１〜３２個の薬物単位（好ましく
は２〜３２個の薬物単位、６〜３２個の薬物単位、８〜３２個の薬物単位、６〜１４個の
薬物単位、約８〜約１４個の薬物単位、または約８〜約１２個の薬物単位）は、リンカー
単位を通してＬＤＣの標的化リガンドにコンジュゲートされており、薬物−リンカー部分
の各薬物単位は、リガンド（Ｌ）によって標的とされる部位に近接して遊離薬物を放出す
る切断可能な構成要素（すなわち、放出可能なアセンブリー単位）を通してそのリンカー
単位へと結合しており、ＬＤＣは、それへとリガンド単位が接続している並列コネクター
単位（Ｌｐ）、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位をさらに含み、リンカー−
薬物部分のＰＥＧおよび薬物単位は、互いに平行配向で接続している。ポリエチレングリ
コール単位は、４〜７２個（好ましくは６〜７２個の繰り返し−ＯＣＨ２ＣＨ２−単位、
より好ましくは６〜３６個、または８〜２４個）の繰り返し単位を有する。リガンドは、
抗体単位、好ましくはインタクトな抗体単位でよい。切断可能なリンカーは、例えば、ペ
プチド切断部位、糖切断部位、またはジスルフィド切断部位を含むことができる。薬物は
、アウリスタチンまたは非アウリスタチンでよい。アウリスタチン（ａｕｒｉｓａｔｉｎ
）または非アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥと匹敵する、またはこれより
大きい疎水性を有することができる。アウリスタチンは、モノメチルアウリスタチンＥで
よい。一部の態様では、ＡＤＣは、ＰＥＧ単位を欠いているか、またはＰＥＧ単位を含有
するが、抗体および薬物に対して直列配向で配置されている同じもしくは実質的に同じＡ
ＤＣと比較して、改善された薬物動態特性を示す。一部の態様では、ＡＤＣは、コンジュ
ゲートされてないときの抗体構成要素と同じもしくは実質的に同じ薬物動態特性を示す。
薬物−リンカー化合物
一部の態様では、リガンド−薬物コンジュゲートを設計するとき、リガンド単位へのコ
ンジュゲーション前に完全な薬物−リンカーを合成することが望ましい。そのような実施
形態では、薬物−リンカー化合物は、中間化合物として作用する。下記のように、その構
造が、式ＢＢ、

または薬学的に許容されるその塩によって表され、式中、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数であり、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２〜４である、例示的な薬物−リンカー化合物を提供する。
式ＢＢの選択した実施形態は、
１）ｍは１であり、ｓは０であるもの、
２）ｍは、２、３または４であり、ｓは１であるもの、
３）ｍは２であり、ｓは１であるもの、
４）ＬＰが、天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、また
はポリアミンである、このパラグラフの１〜３に記載する実施形態のいずれか１つ
を含む。
式ＢＢの選択した実施形態は、下記の式、

または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、存在する分岐単位である。
中間体リンカー化合物
一部の態様では、リガンド−薬物コンジュゲートを設計するとき、リガンド−薬物コン
ジュゲートの−Ｘ−Ｄ構成要素を結合させる前に、リンカーの構成要素をリガンド単位（
例えば、抗体）へとコンジュゲートすることが望ましいことがある。例えば、チオール含
有置換基、例えば、システインが使用されて、−Ｘ−Ｄ構成要素を結合させる実施形態で
は、リガンド−薬物コンジュゲートの−Ｘ−Ｄ構成要素を結合させる前に、リンカーの構
成要素をリガンド単位（例えば、抗体）へとコンジュゲートすることが望ましいことがあ
る。一部のこのような実施形態では、並列コネクター単位は、放出可能なアセンブリー単
位への共有結合的連結を形成することができるが、まだそこに結合されていない。並列コ
ネクター単位は、合成を容易にするために保護基によって保護することができる。保護基
は、放出可能なアセンブリー単位への結合の直前に除去することができる。
例示的な中間体リンカー化合物は、下記のように式ＣＣ、

を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であるものとして提供され、式中、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＬＰ’は、薬物−放出単位への共有結合による結合を形成することができる並列コネクタ
ー単位であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数であり、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２、３または４である。
式ＣＣの選択した実施形態は、下記の式、

または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位であり、
Ａは、分岐単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
である。
一部の態様では、中間体リンカー化合物は、リガンド単位にコンジュゲートして、中間
体リガンド−リンカー化合物を形成する。中間体リガンド−リンカー化合物の例示的な実
施形態は、下記に示す構造、

または薬学的に許容されるその塩によって表され、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚは、ストレッチャー単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜
１４または８〜１２）の範囲の整数であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２、３または４である。
実施形態の別の群では、式ＤＤは、個々の中間体リガンド−リンカー化合物を表さない
が、個々の中間体リガンド−リンカー化合物の集団を含む組成物を表す。そのような実施
形態では、ｐは、組成物中のリガンド当たりの中間体リンカーの平均数を表す。そのよう
な実施形態では、ｐは典型的には整数値ではなく、１〜約１４、好ましくは約２〜約１２
（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）の範囲で
よい。他の変数（例えば、Ｌ、Ｚ、Ａ、ＬＰ、ＰＥＧ、ｓ、およびｍ）は同じままである
。
式ＤＤの選択した実施形態は、下記の式、

または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ−は、ストレッチャー単位であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
であり、
Ａは、分岐単位であり、
中間体リガンド−リンカー化合物について、下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜
１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４または８〜１２）の範囲の整数であり、
あるいは中間体リガンド−リンカー組成物について、下付き文字ｐは、１〜約１４、好ま
しくは約２〜約１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８
〜約１２）の範囲の数である。
さらなる実施形態
式ＡＡのコンジュゲートおよびその中間体は、ＰＥＧ単位当たり１個の薬物単位を含む
こと、１：１の比を可能とする。しかし、ＰＥＧ単位当たり１個の薬物、またはＰＥＧ単
位当たり２個もしくはそれ超の薬物を有する薬物コンジュゲートを提供することが望まし
いことがある。したがって、本発明は、ＰＥＧ単位当たり少なくとも１個の薬物を有する
リガンド−薬物コンジュゲートおよびその中間体を提供する。
リガンド−薬物コンジュゲートのコア構成要素（すなわち、リガンド単位、ストレッチ
ャー単位、並列コネクター単位、ＰＥＧ単位、放出可能なアセンブリー単位、および薬物
単位）が存在する限り、さらなる薬物単位を含むリガンド−薬物コンジュゲートの合成は
、本明細書において提供する教示を使用して容易に達成することができることを当業者は
認識する。さらなる分岐単位および／または薬物結合単位を含むことは、ＰＥＧ単位当た
り複数の薬物の結合を可能とする。さらなる−Ｘ−Ｄ単位は、分岐単位または薬物結合単
位を介して結合している。
実施形態の１つの群では、遊離薬物を放出することができるこのようなＬＤＣ化合物は
、式（Ｉ）、（ＩＩ）、もしくは（ＩＩＩ）、


または薬学的に許容されるその塩によって表され、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚは、ストレッチャー単位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤは、薬物結合単位であり、
下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜
１４または８〜１２）の範囲の整数であり、
下付き文字ｔは、０〜８の範囲の整数であり、好ましくは０、１、２または３であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数であり、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２、３または４である。
実施形態の別の群では、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩは、個々のＬＤＣ化合物ではなく、Ｌ
ＤＣ組成物（すなわち、個々のＬＤＣ化合物の集団を含む組成物）を表す。そのような実
施形態では、ｐは、組成物中のリガンド当たりの薬物−リンカー平均数を表す。そのよう
な実施形態では、ｐは典型的には整数値でなく、１〜約１４、好ましくは約２〜約１２（
好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）の範囲でよ
い。他の変数（例えば、Ｌ、Ｚ、Ａ、ＬＰ、ＰＥＧ、Ｘ、Ｄ、ＡＤ、ｓ、ｍ、およびｔ）
は同じままである。
実施形態の別の群では、ＬＤＣ組成物は、ＬＤＣ化合物の集団を含み、個々のＬＤＣ化
合物は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩによって表され、それぞれの個々のＬＤＣ化合物について
、ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４また
は８〜約１２）の範囲の整数から独立に選択され、組成物中のリガンド当たりの薬物−リ
ンカーの平均数は、１〜約１４、好ましくは約２〜約１２（好ましくは約６〜約１４、約
６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）である。
一部の態様では、１〜３２個、または２〜３２個（好ましくは６〜３２個または８〜３
２個）の薬物単位は、各リガンド単位に結合している。リガンド−薬物コンジュゲートの
集団は、リガンド当たり平均で１〜３２個または約２〜３２個（好ましくは約６〜３２個
または約８〜３２個）の薬物単位を有することができる。
式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの選択した実施形態は、
１）ｍは１であり、ｓは０であるもの、
２）ｍは、２、３または４であり、ｓは１であるもの、
３）ｍは２であり、ｓは１であるもの、
４）ｍは１であり、ｓは０であり、リガンド−薬物コンジュゲート化合物について、ｐは
、２〜１２、４〜１２、８〜１４、または８〜１２の範囲の整数であり、あるいはリガン
ド−薬物コンジュゲート組成物について、ｐは、約２〜約１２、約４〜約１２、約８〜約
１４、または約８〜約１２の範囲の数であるもの、
５）ｍは、２、３または４であり、ｓは１であり、リガンド−薬物コンジュゲート化合物
について、ｐは、約２〜約１２、約４〜約１２、約８〜約１４、または約８〜約１２の範
囲の整数であり、あるいはリガンド−薬物コンジュゲート組成物について、ｐは、約２〜
約１２、約４〜約１２、約８〜約１４、または約８〜約１２の範囲の数であるもの、
６）ｍは２であり、ｓは１であり、リガンド−薬物コンジュゲート化合物について、ｐは
、２〜１２、４〜１２、６〜１４、６〜１２、８〜１４、または約８〜約１２の範囲の整
数であり、あるいはリガンド−薬物コンジュゲート組成物について、ｐは、約２〜約１２
、約４〜約１２、約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４、または約８〜約１２の範
囲の数であるもの、
７）ｍは２であり、ｓは１であり、ｐは８であるもの、
８）ｍは１であり、ｓは０であり、ｐは８であるもの、
９）ｔが０である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１０）ｔが１〜８である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１１）ｔが１である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１２）ｔが２である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１３）ｔが３である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１４）ｔが４である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１５）ｔが５である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１６）ｔが６である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１７）ｔが７である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１８）ｔが８である、このパラグラフの１〜８に記載する実施形態のいずれか１つ、
１９）リガンド単位に結合した１〜３２個、または約２〜３２個の薬物単位が存在する、
このパラグラフの１〜１８に記載する実施形態のいずれか１つ、
２０）リガンド単位に結合した６〜３２個または約８〜３２個の薬物単位が存在する、こ
のパラグラフの１〜１８に記載する実施形態のいずれか１つ、
２１）ＬＰが、天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ま
たはポリアミンである、このパラグラフの１〜２０に記載する実施形態のいずれか１つ
を含む。
上記のものを含めて、ｐ値が存在する、本明細書において提供するＬＤＣ化合物につい
ての選択した実施形態のいずれかにおいて、ｐは、１〜１４、２〜１４、２〜１０、４〜
１２、６〜１４、６〜１２、８〜１２または８〜１０の範囲の整数でよい。下付き文字ｐ
は、１、または２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、ま
たは９、または１０、または１１、または１２、または１３、または１４でよい。
上記のものを含めて、ｐ値が存在する、本明細書において提供するＬＤＣ組成物につい
ての選択した実施形態のいずれかにおいて、ｐは、１〜約１４、約２〜約１４、約２〜約
１０、約４〜約１２、約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１２または約８〜約１０の
範囲である。下付き文字ｐは、１もしくは約１、または２もしくは約２、または３もしく
は約３、または４もしくは約４、または５もしくは約５、または６もしくは約６、または
７もしくは約７、または８もしくは約８、または９もしくは約９、または１０もしくは約
１０、または１１もしくは約１１、または１２もしくは約１２、または１３もしくは約１
３、または１４もしくは約１４でよい。他の変数（例えば、Ｌ、Ｚ、Ａ、ＬＰ、ＰＥＧ、
Ｘ、Ｄ、ＡＤ、ｓ、ｍ、およびｔ）は同じままである。
式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの選択した実施形態は、下記の式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩ
ｂ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、およびＩＩＩｂ、


または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚは、ストレッチャー単位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤは、薬物結合単位であり、
リガンド−薬物コンジュゲート化合物について、下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは
２〜１２（好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４、または８〜１２）の範囲の整数で
あり、またはリガンド−薬物コンジュゲート組成物について、下付き文字ｐは、１〜約１
４、好ましくは約２〜約１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４、
または約８〜約１２）の範囲の数であり、
下付き文字ｔは、０〜８の範囲の整数であり、好ましくは０、１、２または３である。
式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩＩａ、およびＩＩＩｂの選択し
た実施形態は、
１）ｔは０であるもの、
２）ｔは１〜８であるもの、
３）ｔは１であるもの、
４）ｔは２であるもの、
５）ｔは３であるもの、
６）ｔは４であるもの、
７）ｔは５であるもの、
８）ｔは７であるもの、
９）ｔは８であるもの、
１０）リガンド単位に結合した１〜３２個、約２〜３２個、６〜３２個または約８〜３２
個の薬物単位が存在する、このパラグラフの１〜１０に記載した実施形態のいずれか、
１１）ＬＰが、天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ま
たはポリアミンである、このパラグラフの１〜１１に記載した実施形態のいずれか
を含む。
ＬＤＣ組成物についての式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩＩａ、
およびＩＩＩｂの実施形態は、ｐが、６〜約１２；約８〜約１２および約８〜約１０の範
囲の数であるものを含む。これらの組成物について、下付き文字ｐは、６もしくは約６、
または７もしくは約７、または８もしくは約８、または９もしくは約９、または１０もし
くは約１０、または１１もしくは約１１、または１２もしくは約１２、または１３もしく
は約１３、または１４もしくは約１４でよい。これらの実施形態のいずれかにおいて、ｔ
は、０〜８、１〜８、または０、１、２、３、４、５、６、７、または８でよい。
ＬＤＣ化合物についての式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、ＩＩＩａ、
およびＩＩＩｂの実施形態は、ｐが、６〜１２；８〜１２および８〜１０の範囲の整数で
あるものを含む。下付き文字ｐは、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１
４でよい。これらの実施形態のいずれかにおいて、ｔは、０〜８、１〜８、または０、１
、２、３、４、５、６、７、または８でよい。
薬物−リンカー化合物
下記の通り、式ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、


を有するかまたは薬学的に許容されるその塩である、ＰＥＧ単位当たり少なくとも１個の
薬物を有する例示的な薬物−リンカー化合物が提供され、式中、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐であり、
ＡＤは、薬物結合単位であり、
下付き文字ｔは、０〜８の範囲の整数であり、好ましくは０、１、２または３であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数であり、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２、３または４である。
式ＩＶ、ＶおよびＶＩの選択した実施形態は、
１）ｍは１であり、ｓは０であるもの、
２）ｍは２〜４であり、ｓは１であるもの、
３）ｍは２であり、ｓは１であるもの、
４）ｔが０である、このパラグラフの１〜３に記載する実施形態のいずれか、
５）ｔが１である、このパラグラフの１〜３に記載する実施形態のいずれか、
６）ｔが２である、このパラグラフの１〜３に記載する実施形態のいずれか、および
７）ＬＰが、天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、また
はポリアミンである、このパラグラフの１〜６に記載する実施形態のいずれか
を含む。
式ＩＶ、ＶおよびＶＩの選択した実施形態は、下記の式、


または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
Ｄは、薬物単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ｘは、放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
Ａは、任意選択の分岐であり、
ＡＤは、薬物結合単位であり、
下付き文字ｔは、０〜８の範囲の整数であり、好ましくは０、１、２または３である。
中間体リンカー化合物
ＰＥＧ単位当たり少なくとも１個の薬物を含む例示的な中間体リンカー化合物は、下記
の通り、式ＶＩＩ、ＶＩＩＩまたはＩＸ、

有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ａ’は、２〜４個のＸ−Ｄ単位、好ましくは２個のＸ−Ｄ単位への共有結合による結合を
形成することができる分岐単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤ’は、−Ｘ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる薬物結合単位で
あり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
であり、
下付き文字ｔは、０〜８の範囲の整数であり、好ましくは０、１、２または３であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数であり、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは、２、３または４であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位である。
式ＶＩＩＩまたはＩＸの選択した実施形態は、下記、

または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ’は、リガンド単位への共有結合による結合を形成することができるストレッチャー単
位であり、
Ａは、分岐単位であり、
ＡＤ’は、−Ｘ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる薬物結合単位で
あり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
であり、
下付き文字ｔは、０〜８の範囲の整数であり、好ましくは０、１、２または３であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位である。
中間体リンカー化合物および式ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＸＩ、ＶＩＩＩａ、ＶＩＩＩｂ、Ｖ
ＩＩＩｃ、ＶＩＩＩｄ、ＩＸａ、およびＩＸｂ、ストレッチャー単位は、リガンド単位（
例えば、抗体）へとコンジュゲートして、中間体リガンド−リンカー化合物を形成するこ
とができ、これは各リガンド単位に結合した１〜１４個のリンカーを提供する。例示的な
実施形態を下記に示し、ここでｐは、１〜１４であり、他の可変基の全ては、中間体リン
カー化合物について本明細書に記載の通りである。例示的なリガンド−リンカー化合物、
およびこれらの化合物を含む組成物（すなわち、リガンド−リンカー組成物）は、下記の
通り、式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、

によって表される構造を有するかまたは薬学的に許容されるその塩であり、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ−は、ストレッチャー単位であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
であり、
Ａ’は、２〜４個のＸ−Ｄ単位、好ましくは２個のＸ−Ｄ単位への共有結合による結合を
形成することができる分岐単位であり、
Ａは、任意選択の分岐単位であり、
ＡＤ’は、Ｘ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる薬物結合単位であ
り、
リガンド−リンカー化合物について、下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（
好ましくは６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）の範囲の整数
であり、あるいは
リガンド−リンカー組成物について、下付き文字ｐは、１〜約１４、好ましくは約２〜約
１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）の範
囲の数であり、
下付き文字ｔは、０〜８であり、好ましくは０、１、２または３であり、
下付き文字ｍは、１〜４の範囲の整数であり、好ましくは１または２であり、
下付き文字ｓは、０または１であり、ただし、ｓが０であるとき、ｍは１であり、ｓが１
であるとき、ｍは２、３または４である。
式ＸＩおよびＸＩＩの選択した実施形態は、下記の式、

または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
Ｌは、リガンド単位であり、
ＰＥＧは、ポリエチレングリコール単位であり、
Ｚ−は、ストレッチャー単位であり、
ＬＰは、並列コネクター単位であり、
ＬＰ’は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成することができる並列コネクター単位
であり、
Ａは、分岐単位であり、
ＡＤ’は、Ｘ−Ｄ単位への共有結合による結合を形成することができる薬物結合単位であ
り、
リガンド−リンカー化合物について、下付き文字ｐは、１〜１４、好ましくは２〜１２（
好ましくは６〜１４、６〜１２、８〜１４、または８〜１２）の範囲の整数であり、ある
いは
リガンド−リンカー組成物について、下付き文字ｐは、１〜約１４、好ましくは約２〜約
１２（好ましくは約６〜約１４、約６〜約１２、約８〜約１４または約８〜約１２）の範
囲の数であり、
下付き文字ｔは、０〜８であり、
−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出可能なアセンブリー単位である。
構成要素群
本明細書に記載されているリガンド−薬物コンジュゲートおよび中間化合物の中心は、
得られるＬＤＣの薬物動態に影響を与えるための、その薬物単位と並列配向であるＰＥＧ
単位の配置である。ＰＥＧ単位の配置は、並列コネクター単位によって達成される。並列
コネクター単位は、リガンドを、ポリエチレングリコール単位および薬物単位へと接続す
る役割を果たし、それゆえＰＥＧおよび薬物単位は並列構成にあり、これによって、リガ
ンド、ＰＥＧおよび薬物単位が分岐状構成にアレンジされる。したがって、並列コネクタ
ー単位は、リガンド−薬物コンジュゲート、およびこれらの調製のための中間化合物の構
成要素のための結合部位を有する足場であると考えることができる。
並列コネクターとして作用するために、ＬＰ単位は、リンカー内の３個の結合部位を介
して結合している。結合部位の１つは、ＬＰ単位をＰＥＧ単位へと結合させる。第２の結
合部位は、ＬＰ単位を放出可能なアセンブリー単位へと結合させる（場合によって、分岐
単位Ａまたは薬物結合単位ＡＤを介して）。第３の結合部位は、ＬＰ単位をストレッチャ
ー単位へと結合させる（場合によって、薬物結合単位、ＡＤ、および／または分岐単位Ａ
を介して）。並列コネクター単位は、ＰＥＧ単位とは別個の単位であり、ＰＥＧ単位のＰ
ＥＧ結合単位構成要素を介してそこに結合している。言い換えると、並列コネクター単位
は、ＰＥＧ単位のサブ単位ではない。
ＰＥＧ単位当たり複数個の薬物を有するリガンド−薬物コンジュゲートおよびその中間
体について、放出可能なアセンブリー単位への並列コネクター単位の結合は、分岐単位ま
たは薬物結合単位を通してでよい。ストレッチャー単位への並列コネクター単位の結合は
、薬物結合単位ＡＤおよび／または任意選択でさらなる分岐単位を介してでよい。これら
の実施形態の全てにおいて、ＬＰ単位は、３つの離間した化学部分を一緒に共有結合的に
連結することができる三官能性化学部分と考えることができる。認識されるように、選択
した中間化合物について、ＬＰ単位は、ＬＰ’によって表され、薬物−放出単位を介して
薬物にまだ結合していないが、（例えば、薬物−放出単位を介した）薬物への結合のため
の任意選択で保護された官能基を有する。また認識されるように、三官能性という用語は
、３個の結合部位を示すために使用し、ＬＰまたはＬＰ’単位上に存在する官能基の数を
示すために使用しない。
並列コネクター単位は、１個または複数（典型的には、１〜５個または１〜４個または
１〜３個または１個または２個）の天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、ア
ミノアルデヒド、またはポリアミンから調製することができる。
天然または非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、またはポリアミ
ンが本発明のコンジュゲートまたは中間体中に存在すると言及するとき（これらがＬＰ単
位の部分であろうと、本明細書に記載されているコンジュゲートもしくは中間体の他の構
成要素であろうと）、このアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、またはポリ
アミンは、本明細書においてまたアセンブルされた形態と称される残基形態で存在するこ
とを認識されたい。例えば、並列コネクター単位が２個のアミノ酸である実施形態では、
２個のアミノ酸は、これらの間にペプチド結合を伴う残基として存在する。並列コネクタ
ー単位がアミノアルコールからなる実施形態では、アミノアルコールは残基として存在し
、ここでは例えば、そのアミノ基は、並列コネクター単位の別の残基またはコンジュゲー
トの別の構成要素へと、その他の残基／構成要素のカルボニル含有官能基を通して結合し
ており、一方で、そのヒドロキシル基は、エーテルとして結合しているか、あるいは並列
コネクター単位のさらに別の残基またはコンジュゲートの別の構成要素のカルボニル含有
官能基を通して結合している。並列コネクター単位がアミノアルデヒドからなる実施形態
では、アミノアルデヒドは、残基として存在し、ここで例えば、そのアミノ基は、並列コ
ネクター単位の別の残基またはコンジュゲートの別の構成要素へと、この他の残基／構成
要素のカルボニル含有官能基を通して結合しており、一方で、そのアルデヒド官能基は、
イミノ（ｉｍｍｉｎｏ）官能基に変換されているか、または並列コネクター単位のさらに
別の残基またはコンジュゲートの別の構成要素のアミノ基に結合したとき、それに続く還
元によって窒素−炭素結合を提供する。アミノアルコールまたはアミノアルデヒドは、ア
ルデヒドまたはヒドロキシル官能基へのそのカルボン酸官能基の還元によって天然または
非天然のアミノ酸に由来し得る。
並列コネクター単位残基が、その単位についての分岐残基であるとき、この残基は、そ
れに対して並列コネクター単位の別の残基、−Ｘ−Ｄ部分、またはＰＥＧ単位、またはリ
ンカー単位の他の構成要素が結合している第３の官能基を有することが理解される。例え
ば、並列接続単位のアミノ酸または他のアミン含有酸残基は、官能化側鎖を有することが
できるか、または官能化側鎖で置換することができ、分岐残基のために必要とされる必要
な３個の結合点を提供する。例えば、セリンは、３個の官能基、すなわち、酸、アミノお
よびヒドロキシル官能基を有し、並列コネクター単位中へのその組込みの目的のために合
わせたアミノ酸およびアミノアルコール残基として見なし得る。チロシンはまた、この場
合、そのフェノール側鎖においてヒドロキシル基を含有し、並列コネクター単位中へのそ
の組込みの目的のためにセリンと同様に、分岐残基と見なし得る。
別の例において、並列コネクター単位の分岐残基がシステインであるとき、そのアミノ
およびカルボン酸基は、アミノ酸またはアミン含有酸について従前に考察した様式で残基
形態で存在し、分岐残基のための３個の必要な結合点のうち２つを提供し、一方、そのチ
オール基は、−Ｘ−Ｄ部分、またはＰＥＧ単位またはリンカー単位の他の構成要素にジス
ルフィドとして結合するとき、残基形態で存在するか、あるいは、例えば、チオール官能
基が、リンカー単位構成要素のマレイミド含有基と反応するとき、硫黄−炭素結合におい
て存在する。場合によって、残基チオール基は、並列コネクター単位の別の残基、または
リンカー単位の別の構成要素に結合したとき、その酸化された形態（すなわち、−Ｓ（＝
Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−）にある。また別の例において、リシンのアルファアミノ
およびカルボン酸基は、残基形態で存在し、並列コネクター単位の分岐残基に必要とされ
る３個の必要な結合点のうち２つを提供し、一方、その残基形態のイプシロンアミノ基は
、第３の結合点を提供する。ヒスチジンはまた、２個のアミノ基を有するアミノ酸とみな
してもよく、ここで第２のアミノ基は、イミダゾール含有側鎖のＮＨである。
別の例において、並列コネクター単位の分岐残基がアスパラギン酸またはグルタミン酸
であるとき、それらの残基形態のアミノ酸のアルファアミノおよびＣ末端カルボン酸基は
、並列コネクター単位の分岐残基のために必要とされる３個の必要な結合点のうちの２つ
を提供し、一方、その残基形態のそのベータまたはガンマカルボン酸基は、第３の結合点
を提供する。天然に存在するアミノ酸が、並列コネクター単位の残基として記載されるが
、官能化されたアミノ酸側鎖を天然で含有せず、分岐残基であることが必要とされる場合
において、アミノ酸構造は、必要な第３の結合点を提供するために、残基形態であるとき
、そのアミノおよびカルボン酸官能基以外にさらなる官能基を有するように修飾されるこ
とが理解される。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸は、その側鎖の炭素において、ヒ
ドロキシル、アミノ、アルデヒド、チオール、カルボン酸基または他の官能基、あるいは
これらの官能基のいずれか１つで置換されている他の部分（例えば、アリールもしくはア
リールアルキル）で置換されて、必要な３個の結合点を有する非天然アミノ（ａｍｎｉｏ
）酸を提供し得る。このような非天然アミノ酸は、アミノ酸および導入された官能基の残
基形態について上記のような並列コネクター単位中に組み込まれる。
同様に、アミノアルデヒドまたはアミノアルコールが、並列接続単位中に分岐残基とし
て組み込まれているとき、このアミノアルデヒドまたはアミノアルコールは、第３の官能
基を有し、そのアミノおよびアルデヒド官能基と共に、必要な３個の結合点を提供する。
これらの場合、アミノアルデヒドまたはアミノアルコールは、構造が、官能化側鎖を有す
る天然アミノ酸、または上記のような天然アミノ酸の側鎖中に導入された官能基を有する
非天然アミノ酸に対応してもよく、この天然または非天然のアミノ酸のカルボン酸は、ヒ
ドロキシまたはアルデヒド官能基に還元される。
アミノ酸は、アルファ、ベータ、もしくはガンマアミノ酸または他のアミン含有酸化合
物でよく、天然または非天然のアミノ酸側鎖が結合しているキラル炭素を含有する場合、
そのＤまたはＬ異性体でよい。並列コネクター単位が、複数の天然もしくは非天然のアミ
ノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、またはポリアミンでできているとき、これ
らのアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ポリアミンまたはこれらの組合せ
は、共有結合を介して一緒に連結し、並列コネクター単位を形成する。
アミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒドは、場合によって、非天然でよ
く、コンジュゲートまたは中間化合物の構成要素への結合のための官能化側鎖を有するよ
うに修飾することができる（並列コネクター単位の分岐残基について上記のように）。例
示的な官能化されたアミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒドは、例えば、
アジドまたはアルキン官能化されたアミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒ
ド（例えば、クリックケミストリーを使用した結合のためのアジド基またはアルキン基を
有するように修飾されたアミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒド）を含む
。アミノ酸上に存在する官能基（例えば、アミンポーション、カルボン酸ポーションおよ
び側鎖ポーション（例えば、アミノ部分、ヒドロキシル基、別のカルボン酸、チオール、
アジドまたはアルキンのいずれであれ））の独立した活性化および反応のための方法は、
当技術分野で周知である。
並列コネクター単位は、１個またはそれ超（典型的には、１〜５個または１〜４個また
は１〜３個または１個または２個）のアミノ酸、任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘ
テロアルキレン（好ましくは任意選択で置換されているＣ１〜１２ヘテロアルキレン）、
任意選択で置換されているＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４
アリーレン、任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロ、またはこれらの組合せ
を含むことができる。一部の態様では、並列コネクター単位は、２個以下または１個以下
の任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で置換されているＣ
３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択
で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロを含む。任意選択の置換基は、（＝Ｏ）、−Ｘ
、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、
−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝
Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）
２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（
ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ＝ ３、−ＰＯ３Ｈ２、−ＡｓＯ２Ｈ２、−Ｃ
（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）
ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２
、または−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２を含み、各Ｘは、独立に、ハロゲン：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂ
ｒ、または−Ｉであり、各Ｒは、独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−Ｃ６〜Ｃ２
０アリール、−Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護基またはプロドラッグ部分である。好ましい任
意選択の置換基は、（＝Ｏ）、−Ｘ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、および−ＮＲ２である。
並列コネクター単位は直鎖または分岐鎖でよく、式Ａ、

によって表すことができ、式中、
ＡＡ１は、アミノ酸、任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン（好ましく
は任意選択で置換されているＣ１〜１２ヘテロアルキレン）、任意選択で置換されている
Ｃ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選
択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロから独立に選択されるＬＰのサブ単位であり
、下付き文字ｕは、０〜４から独立に選択され、波線は、リガンド−薬物コンジュゲート
またはその中間体内の共有結合による結合部位を示す。任意選択で置換されているヘテロ
アルキレン（ｈｅｔｅｏｒａｌｋｙｌｅｎｅ）、複素環、アリーレンまたはカルボシクロ
は、サブ単位の間、およびリガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合のた
めの官能基を有する。
一部の態様では、ＡＡ１の少なくとも１つの例は、アミノ酸である。下付き文字ｕは、
０、１、２、３、または４でよい。一部の態様では、ＡＡ１はアミノ酸であり、ｕは０で
ある。一部の態様では、並列コネクター単位は、２個以下の任意選択で置換されているＣ
１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で置換されているＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択
で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カ
ルボシクロを含む。並列コネクター単位が式Ａを有する一部の態様では、並列コネクター
単位は、１個以下の任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で
置換されているＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン
、または任意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロを含む。
並列コネクター単位またはそのアミノ酸サブ単位は、アルファ、ベータ、またはガンマ
アミノ酸でよく、天然もしくは非天然でよい。アミノ酸は、ＤまたはＬ異性体でよい。並
列コネクター単位内、またはコンジュゲート（もしくはリンカー）の他の構成要素との結
合は、例えば、アミノ、カルボキシ、または他の官能基を介してでよい。官能基の独立し
た活性化および反応のための方法は、当技術分野で周知である。
並列コネクター単位またはそのアミノ酸サブ単位は、チオール含有アミノ酸のＤまたは
Ｌ異性体から独立に選択することができる。チオール含有アミノ酸は、例えば、システイ
ン、ホモシステイン、またはペニシラミンでよい。
並列コネクター単位またはそのアミノ酸サブ単位は、下記のアミノ酸：アラニン（β−
アラニンを含めた）、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、ヒスチ
ジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リシン、ロイシン、メ
チオニン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファン、プロリン、オルニチン、ペ
ニシラミン、Ｂ−アラニン、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、ヘテロシクロ−カ
ルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、およびその誘導体のＬ−または
Ｄ−異性体からなる群から独立に選択することができる。
好ましいアミノ酸には、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リ
シン、セリン、トレオニン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セ
レノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン、
およびアラニンが含まれる。
例示的なＬＰまたはそのＡＡ１サブ単位は、

を含み、式中、Ｒ１１０は、

であり、Ｒ１１１は、水素、ｐ−ヒドロキシベンジル、メチル、イソプロピル、イソブチ
ル、ｓｅｃ−ブチル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、
−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ
ＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）
３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２
、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、
−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（
ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチ
ル−、

から独立に選択され、式中、アスタリスクは、ｘと標識されている炭素への結合を示し、
Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル（好ましくは水素またはＣＨ３）から独立
に選択され、
Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−アリーレン−、
−Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アル
キレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アル
キレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０
アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、および−（
Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−
）からなる群から独立に選択され、
Ｙは、

であり、
Ｙ’は、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、または−Ｎ（ＣＨ３）−であり、
下付き文字ｐ、ｑ、およびｄは、０〜５から独立に選択される整数であり、波線は、化合
物内の共有結合による結合、水素、ＯＨまたはＣ１〜３非置換アルキル基を示し、ただし
、波線の少なくとも１つは、化合物内の共有結合による結合を示す。一部の態様では、波
線の全ては、化合物内の共有結合による結合を示す（例えば、ＬＰが、いずれのサブ単位
も含まないとき）。
実施形態の１つの群では、ＬＰは、留意する構成要素への共有結合的連結を独立に形成
することができる官能基を有する複素環式環である（例えば、塩化シアヌルから形成され
るトリアゾール複素環式環）。実施形態の別の群では、ＬＰは、上で述べたような結合し
た官能基を有するアルカンである。また他の実施形態では、ＬＰは、窒素原子でよい。
一部の実施形態では、−ＬＰ−は、アセンブルされると、下記で示す式、

を有し、式中、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合部位（
例えば、−Ｘ（直接的、またはＡもしくはＡＤを介して間接的に）への、およびＺ（直接
的、またはＡもしくはＡＤを介して間接的に）へのＰＥＧ）を示し、Ｒ１１０は、

であり、式中、アスタリスクは、ｘと標識されている炭素への結合を示し、波線は、３個
の結合部位の１つを示し、
Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、好ましくは水素またはＣＨ３から独立に
選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＨから独立に選択され、
Ｙ’は、ＮＨ、Ｏ、またはＳから独立に選択され、
下付き文字ｃは、１〜１０から独立に選択される整数、好ましくは１、２、または３であ
る。
好ましい実施形態では、Ｒ１１０は、

ではない。
並列コネクター単位またはそのアミノ酸サブ単位は、下記の式を有することができ、

式中、下付き文字ｎは、１〜４の範囲の整数であり、
Ｘｐは、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｃ２〜
Ｃ８ヘテロシクロ−からなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ２は、−Ｈ、−Ｃ１〜３アルキル、−フェニル、または−Ｃ２〜Ｃ５複素環
（好ましくはＨまたはＣ１〜３アルキル）からなる群から独立に選択され、波線は、化合
物内の共有結合による結合を示す。
一部の実施形態では、ＸＰは、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖によって提供される。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸
、システイン、ペニシラミン、セリンまたはトレオニンのＤまたはＬ異性体から独立に選
択することができる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸
、システイン、またはペニシラミンのＤまたはＬ異性体から独立に選択することができる
。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、下記のアミノ酸：アルギニン、アスパラ
ギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン酸、グルタミン、リシン、セリン、チロ
シン、トレオニン、トリプトファン、オルニチン、ペニシラミン、アミノアルキン酸、ア
ミノアルカン二酸、ヘテロシクロ−カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカ
ン酸、およびその誘導体からなる群から独立に選択することができる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、下記のこれらの天然アミノ酸：アルギニ
ン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン酸、グルタミン、リシン、
システイン、ペニシラミン、セリン、チロシン、トレオニン、およびトリプトファンのＬ
−異性体からなる群から独立に選択することができる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、下記のこれらの天然アミノ酸：アルギニ
ン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グルタミン酸、グルタミン、フェニル
アラニン、リシン、システイン、ペニシラミン、セリン、チロシン、トレオニン、および
トリプトファンのＤ−異性体からなる群から独立に選択することができる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、チオール含有アミノ酸のＤまたはＬ異性
体から独立に選択することができる。チオール含有アミノ酸は、例えば、システイン、ホ
モシステイン、またはペニシラミンでよい。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、下記のアミノ酸：アラニン（β−アラニ
ンを含めた）、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、ヒスチジン、
グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リシン、ロイシン、メチオニ
ン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファン、プロリン、オルニチン、ペニシラ
ミン、Ｂ−アラニン、アミノアルキン酸、アミノアルカン二酸、ヘテロシクロ−カルボン
酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、およびその誘導体のＬ−またはＤ−異
性体からなる群から独立に選択することができる。
好ましいアミノ酸は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リシ
ン、セリン、トレオニン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セレ
ノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、およびバリ
ンを含む。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アラニン誘導体からなる群から独立に選
択することができるが、ただし、適当な数の機能的単位が存在する。アラニン誘導体の例
の例示には、これらに限定されないが、デヒドロ−アラニン、４−チアゾリルアラニン、
２−ピリジルアラニン、３−ピリジルアラニン、４−ピリジルアラニン、β−（１−ナフ
チル）−アラニン、β−（２−ナフチル）−アラニン、α−アミノ酪酸、β−クロロ−ア
ラニン、β−シアノ−アラニン、β−シクロペンチル−アラニン、β−シクロヘキシル−
アラニン、β−ヨード−アラニン、β−シクロペンテニル−アラニン、β−ｔＢｕ−アラ
ニン、β−シクロプロピル−アラニン、β−ジフェニル−アラニン、β−フルオロ−アラ
ニン、β−ピペラジニル−アラニン（ピペラジン環は保護されているか、または保護され
ていない）、β−（２−キノリル）−アラニン、β−（１，２，４−トリアゾール−１−
イル）−アラニン、β−ウレイド−アラニン、Ｈ−β−（３−ベンゾチエニル）−Ａｌａ
−ＯＨ、およびＨ−β−（２−チエニル）−Ａｌａ−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アルギニンおよびそのアルギニン誘導体
からなる群から独立に選択することができる。アルギニンおよびその誘導体の例の例示に
は、これらに限定されないが、アルギニン（Ａｒｇ）、Ｎ−アルキル−アルギニン、Ｈ−
Ａｒｇ（Ｍｅ）−ＯＨ、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＨ２）−ＯＨ、Ｈ−Ａｒｇ（ＮＯ２）−ＯＨ、Ｈ
−Ａｒｇ（Ａｃ）２−ＯＨ、Ｈ−Ａｒｇ（Ｍｅ）２−ＯＨ（非対称的）、Ｈ−Ａｒｇ（Ｍ
ｅ）２−ＯＨ（対称的）、２−アミノ−４−（２’−ヒドロキシグアニジノ）−酪酸（Ｎ
−ω−ヒドロキシ−ノル−アルギニン）およびホモアルギニンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アスパラギン酸およびその誘導体からな
る群から独立に選択することができる。アスパラギン酸およびその誘導体の例の例示には
、これらに限定されないが、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、Ｎ−アルキル−アスパラギン酸
、およびＨ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アスパラギンおよびその誘導体からなる
群から独立に選択することができる。アスパラギンおよびその誘導体の例の例示には、こ
れらに限定されないが、アスパラギン（Ａｓｎ）、Ｎ−アルキル−アスパラギン、および
イソアスパラギン（Ｈ−Ａｓｐ−ＮＨ２）が含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、システインおよびその誘導体からなる群
から独立に選択することができる。システイン（Ｃｙｓ）誘導体（遊離ＳＨ基を含有しな
い）の例の例示には、これらに限定されないが、Ｃｙｓ（ＳｔＢｕ）、Ｈ−Ｃｙｓ（Ａｃ
ｍ）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（ＳｔＢｕ）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ
（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｓ−Ｅｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（ＳＯ３Ｈ）−ＯＨ、Ｈ
−Ｃｙｓ（アミノエチル）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（カルバモイル）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｓ
−フェニル）−ＯＨ、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、およびＨ−Ｃｙｓ（ヒドロキシエチ
ル）−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、ヒスチジンおよびその誘導体からなる群
から独立に選択することができる。ヒスチジンおよびその誘導体の例の例示には、これら
に限定されないが、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、Ｎ−アルキル−ヒスチジン、Ｈ−Ｈｉｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｈ−Ｈｉｓ（１−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｈ−Ｈｉ
ｓ（１−Ｔｏｓ）−ＯＨ、Ｈ−２，５−ジヨード−Ｈｉｓ−ＯＨ、およびＨ−Ｈｉｓ（３
−Ｍｅ）−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、グリシン誘導体からなる群から独立に選
択することができる。グリシン誘導体の例の例示には、これらに限定されないが、Ｈ−プ
ロパルギルグリシン（

）、α−アミノグリシン（保護されているか、または保護されていない）、β−シクロプ
ロピル−グリシン、α−アリルグリシン、およびネオペンチルグリシンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、グルタミン酸およびその誘導体からなる
群から独立に選択することができる。グルタミン酸およびその誘導体の例の例示には、こ
れらに限定されないが、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、Ｎ−アルキル−グルタミン酸、Ｈ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｈ−γ−ヒドロキシ−Ｇｌｕ−ＯＨ、Ｈ−γ−メチレン−Ｇｌ
ｕ−ＯＨ、Ｈ−γ−カルボキシ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）２−ＯＨ、およびピログルタミン酸
が含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、グルタミンおよびその誘導体からなる群
から独立に選択することができる。グルタミンおよびその誘導体の例の例示には、これら
に限定されないが、グルタミン（Ｇｌｎ）、Ｎ−アルキル−グルタミン、イソグルタミン
（Ｈ−Ｇｌｕ−ＮＨ２）、Ｈ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、およびＨ−Ｇｌｎ（イソプロピ
ル）−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）誘導体から
なる群から独立に選択することができる。フェニルアラニン誘導体の例の例示には、これ
らに限定されないが、Ｈ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｈ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ（Ｚ）−
ＯＨ、Ｈ−ｐ−ブロモ−Ｐｈｅ−ＯＨ、ＨＨ−ｐ−カルボキシ−Ｐｈｅ（ＯｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｈ−ｐ−カルボキシ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｈ−ｐ−シアノ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｈ−ｐ−フル
オロ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｈ−３，４−ジクロロ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｈ−ｐ−ヨード−Ｐｈｅ−
ＯＨ、Ｈ−ｐ−ニトロ−Ｐｈｅ−ＯＨ、クロロ−フェニルアラニンおよびβ−ホモフェニ
ルアラニンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、リシンおよびその誘導体からなる群から
独立に選択することができる。リシンおよびその誘導体の例の例示には、これらに限定さ
れないが、リシン（Ｌｙｓ）、Ｎ−アルキル−リシン、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｈ
−Ｌｙｓ（Ａｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｌｙｓ（ホルミル）−ＯＨ、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｍｅ）２−ＯＨ
、Ｈ−Ｌｙｓ（ニコチノイル）−ＯＨ、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｍｅ）３−ＯＨ、Ｈ−ｔｒａｎｓ−
４，５−デヒドロ−Ｌｙｓ−ＯＨ、Ｈ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｈ−δ−ヒド
ロキシ−Ｌｙｓ−ＯＨ、Ｈ−δ−ヒドロキシ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｌｙｓ（ア
セトアミドイル）−ＯＨ、およびＨ−Ｌｙｓ（イソプロピル）−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、ロイシン誘導体からなる群から独立に選
択することができる。ロイシン誘導体の例の例示には、これらに限定されないが、４，５
−デヒドロロイシンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、メチオニン誘導体からなる群から独立に
選択することができる。メチオニン誘導体の例の例示には、これらに限定されないが、メ
チオニン（Ｍｅｔ）、Ｈ−Ｍｅｔ（＝Ｏ）−ＯＨ、およびＨ−Ｍｅｔ（＝Ｏ）２−ＯＨが
含まれ、ここではメチオニン側鎖の硫黄原子は、酸化された形態である。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、セリンおよびその誘導体からなる群から
独立に選択することができる。セリンおよびその誘導体の例の例示には、これらに限定さ
れないが、セリン（Ｓｅｒ）、Ｎ−アルキル−セリン、Ｈ−Ｓｅｒ（Ａｃ）−ＯＨ、Ｈ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｈ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｈ−Ｓｅｒ（ｐ−クロロ−Ｂｚ
ｌ）−ＯＨ、Ｈ−β−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｈ−β−（２
−チエニル）−Ｓｅｒ−ＯＨ、イソセリンＮ−アルキル−イソセリン、および３−フェニ
ルイソセリンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、チロシンおよびその誘導体からなる群か
ら独立に選択することができる。チロシンおよびその誘導体の例の例示には、これらに限
定されないが、チロシン（Ｔｙｒ）、Ｎ−アルキル−チロシン、Ｈ−３，５−ジニトロ−
Ｔｙｒ−ＯＨ、Ｈ−３−アミノ−Ｔｙｒ−ＯＨ、Ｈ−３，５−ジブロモ−Ｔｙｒ−ＯＨ、
Ｈ−３，５−ジヨード−Ｔｙｒ−ＯＨ、Ｈ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ、Ｈ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｈ−Ｔｙｒ（Ｅ
ｔ）−ＯＨ、Ｈ−３−ヨード−Ｔｙｒ−ＯＨ、およびＨ−３−ニトロ−Ｔｙｒ−ＯＨが含
まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、トレオニンおよびその誘導体からなる群
から独立に選択することができる。トレオニンおよびその誘導体の例の例示には、これら
に限定されないが、トレオニン（Ｔｈｒ）、Ｎ−アルキル−トレオニン、ａｌｌｏ−トレ
オニン、Ｈ−Ｔｈｒ（Ａｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、およびＨ−Ｔｈｒ（
Ｂｚｌ）−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、トリプトファンおよびその誘導体からな
る群から独立に選択することができる。トリプトファンおよびその誘導体の例の例示には
、これらに限定されないが、トリプトファン（Ｔｒｐ）、Ｎ−アルキル−トリプトファン
、Ｈ−５−Ｍｅ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｈ−５−ヒドロキシ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｈ−４−Ｍｅ−Ｔ
ｒｐ−ＯＨ、Ｈ−α−Ｍｅ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｈ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｔｒｐ（
ホルミル）−ＯＨ、およびＨ−Ｔｒｐ（メシチレン−２−スルホニル）−ＯＨが含まれる
。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、プロリンおよびその誘導体からなる群か
ら独立に選択することができる。プロリンおよびその誘導体の例の例示には、これらに限
定されないが、プロリン（Ｐｒｏ）、Ｎ−アルキル−プロリン、ホモプロリン、チオプロ
リン、ヒドロキシプロリン（Ｈ−Ｈｙｐ−ＯＨ）、Ｈ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｈ−Ｈ
ｙｐ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｈ−３，４−デヒドロ−Ｐｒｏ−ＯＨ、４−ケト−プロリン、α
−Ｍｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ、およびＨ−４−フルオロ−Ｐｒｏ−ＯＨが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、オルニチンおよびその誘導体からなる群
から独立に選択することができる。オルニチンおよびその誘導体の例の例示には、これら
に限定されないが、オルニチン（Ｏｒｎ）、Ｎ−アルキル−オルニチン、Ｈ−Ｏｒｎ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｏｒｎ（Ｚ）−ＯＨ、Ｈ−α−ジフルオロ−Ｍｅ−Ｏｒｎ−ＯＨ（エ
フロルニチン（Ｅｆｌｏｒｎｉｔｉｎｅ））、およびＨ−Ｏｒｎ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨが
含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、ペニシラミンおよびその誘導体からなる
群から独立に選択することができる。ペニシラミンおよびその誘導体の例の例示には、こ
れらに限定されないが、ペニシラミン、Ｈ−ペニシラミン（Ａｃｍ）−ＯＨ（Ｈ−β，β
−ジメチルｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ）およびＮ−アルキル−ペニシラミンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、β−アラニン誘導体からなる群から独立
に選択することができる。β−アラニン誘導体の例の例示には、これらに限定されないが
、デヒドロ−アラニンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アミノアルカン酸誘導体からなる群から
独立に選択することができる。アミノアルカン酸誘導体の例の例示には、これらに限定さ
れないが、４−（ネオペンチルオキシスルホニル）−アミノ酪酸、ピペリジル酢酸、３−
アミノプロピオン酸、および３−アミノ−３−（３−ピリジル）−プロピオン酸が含まれ
る。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アミノアルキン酸およびその誘導体から
なる群から独立に選択することができる。アミノアルキン酸およびその誘導体の例の例示
には、これらに限定されないが、Ｎ−アルキルアミノアルキン酸、６−アミノ−４−ヘキ
シン酸、６−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−ヘキシン酸が含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アミノアルカン二酸およびその誘導体か
らなる群から独立に選択することができる。アミノアルカン二酸およびその誘導体の例の
例示には、これらに限定されないが、Ｎ−アルキルアミノアルカン二酸、２−アミノヘキ
サン二酸、２−アミノヘプタン二酸、２−アミノオクタン二酸（Ｈ−Ａｓｕ−ＯＨ）が含
まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、アミノ−ヘテロシクロ−アルカン酸およ
びその誘導体からなる群から独立に選択することができる。アミノ−ヘテロシクロ−アル
カン酸およびその誘導体の例の例示には、これらに限定されないが、Ｎ−アルキルアミノ
−ヘテロシクロ−アルカン酸、４−アミノ−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カル
ボン酸、４−アミノ−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸、４−アミノ−ピペ
リジン−４−カルボン酸（Ｈ−Ｐｉｐ−ＯＨ；１−保護されている、または保護されてい
ない）、３−アミノ−３−（３−ピリジル）−プロピオン酸が含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、シトルリンおよびその誘導体からなる群
から独立に選択することができる。シトルリンおよびその誘導体の例の例示には、これら
に限定されないが、シトルリン（ｃｉｔ）、Ｎ−アルキル−シトルリン、チオシトルリン
、Ｓ−メチル−チオシトルリン、およびホモシトルリンが含まれる。
スタチンおよびその誘導体の例の例示には、これらに限定されないが、スタチン、Ｎ−
アルキル−スタチン、シクロヘキシルスタチン、およびフェニルスタチンが含まれる。
各並列コネクター単位またはそのサブ単位は、ジアミノアルカン酸およびその誘導体か
らなる群から独立に選択することができる。ジアミノアルカン酸（Ｄａｂ）およびその誘
導体の例の例示には、これらに限定されないが、Ｎ−アルキル−ジアミノ−アルカン酸、
Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ−アルカン酸、α，γ−ジアミノ酪酸（Ｈ−Ｄａｂ−ＯＨ）、
Ｈ−Ｄａｂ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｈ−Ｄａｂ（Ｚ）−Ｏ
Ｈ、α，β−ジアミノプロピオン酸およびその側鎖保護されたバージョンが含まれる。
例示的なＬＰ単位またはそのサブ単位、リシンまたはシステインまたはペニシラミン（
ｐｅｎｃｉｌｌａｍｉｎｅ）を下記に示す。波線は、ＰＥＧ、放出可能なアセンブリー単
位への（直接的に、または分岐単位もしくは薬物結合単位を介した）およびストレッチャ
ー単位への（直接的に、または分岐単位もしくは薬物結合単位を介した）結合部位を示す
。アミノ酸のＬおよびＤ異性体は、本明細書における使用に適している。
リシンをＬＰ単位として有する例示的なリガンド−薬物コンジュゲートまたは薬物−リ
ンカー化合物を下記に示し、ここでＺ、Ｌ、Ｘ、Ｄ、ＰＥＧ、Ｚ’、ｐ、およびＰＥＧは
、本明細書に記載の通りである。アミノ酸のＬおよびＤ異性体は、本明細書における使用
に適している。
ＬＰ単位としてシステインまたはペニシラミンを有する例示的なリガンド−薬物コンジ
ュゲートを、下記に示し、ここでＺ、Ｌ、Ｘ、Ｄ、Ｚ’、ＰＥＧ、およびｐは、本明細書
に記載の通りである。アミノ酸のＬおよびＤ異性体は、本明細書における使用に適してい
る。

本発明の特定の化合物（例えば、中間体リンカー化合物およびリガンド−リンカー化合
物）について、並列コネクター単位は、−Ｘ−Ｄへの共有結合による結合を形成すること
ができるが、−Ｘ−Ｄへとまだ接続されておらず、並列コネクター単位は、リガンド−薬
物コンジュゲート中にまだ完全にはアセンブルされておらず、したがって、放出可能なア
センブリー単位上に存在する基に対して反応性である官能基を含むことが理解される。結
合のための官能基を有する例示的な並列コネクター単位は、下記の通りであり、

式中、
下付き文字ｎは、１〜４であり、
Ｘｐ’’は、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、および−Ｓ（＝Ｏ）−からな
る群から選択され、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、フェニル、またはＣ２〜Ｃ５複素環からなる
群から独立に選択され、
Ｒ６は、保護基、Ｈ、−Ｃ１〜３アルキル、または−ＯＨであり、
波線は、中間体リンカー化合物またはリガンド−リンカー化合物の残部内の共有結合によ
る結合を示す。
Ｘｐ’’を提供する特に好ましい反応性官能基は、ジスルフィド結合またはチオエーテ
ル結合を形成するスルフヒドリル基である。官能基は、保護基によって保護することがで
きる。ＬＰは、チオール含有基（例えば、チオール含有アミノ酸）でよく、したがって、
ＬＰ’は、保護されたチオール含有アミノ酸、例えば、下記で示すような保護されたシス
テインでよい。システインのＬ−異性体を下記の表示において示すが、システインのＤ−
異性体が適している。さらに、ｔ−ブチルチオール保護基は、任意の他の適切なチオール
保護基で置き換えることができる。チオール保護基は、ｔ−ブチルスルフィド、ｎ−ブチ
ルスルフィド、ｎ−プロピルスルフィド、硫化メチル、硫化フェニル、チオピリジル、硫
化イソプロピル、硫化エチル、およびシステイニルを含む。
ＬＰ’は、保護されたチオール含有アミノ酸を含むジペプチド、下記で示すような保護
されたシステイン−アラニンジペプチドでよく、

式中、波線は、リンカー中間化合物の残部内のＬｐ’の共有結合による結合を示す。
好ましい実施形態では、ＬＰ単位は、リガンド−薬物コンジュゲートの薬物−リンカー
部分への疎水性の追加を最小化するために、または疎水性の追加の一因とならないように
、選択される。
本発明の好ましい態様では、ＬＰ単位は、約５００ダルトン以下、約２００ダルトン以
下、約１０〜約５００ダルトン、または約１０〜約２００ダルトンの質量を有する。
リガンド−薬物コンジュゲートの末端には、リガンド単位、薬物単位およびＰＥＧ単位
が存在する。
リガンド単位：
本発明の一部の実施形態では、リガンド単位が存在する。リガンド単位（Ｌ−）は、標
的部分に特異的に結合する標的化薬剤である。リガンドは、細胞構成要素（細胞結合剤）
に、または目的の他の標的分子に特異的に結合することができる。リガンド単位は、リガ
ンド単位が相互作用する特定の標的細胞集団に対して薬物単位が標的とし、提示するよう
に作用する。リガンドには、これらに限定されないが、タンパク質、ポリペプチドおよび
ペプチドが含まれる。適切なリガンド単位は、例えば、抗体、例えば、完全長抗体および
その抗原結合フラグメント、インターフェロン、リンフォカイン、ホルモン、成長因子お
よびコロニー刺激因子、ビタミン、栄養素−輸送分子（これらに限定されないが、トラン
スフェリンなど）、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質を含む。リガンドは、例
えば、非抗体タンパク質標的化薬剤であり得る。代わりに、リガンドは、例えば、抗体で
あり得る。好ましいリガンドは、より大きな分子量のタンパク質、例えば、少なくとも約
８０Ｋｄの分子量を有するリガンドである。
リガンド単位は、ストレッチャー単位への結合を形成することができる。リガンド単位
は、天然に存在するもの、または天然に存在しない（例えば、操作された）ものであろう
と、薬物−リンカーのために必要な数の結合部位を有さなければならない。例えば、下付
き文字ｐの値が６〜１４であるために、リガンド単位は、６〜１４個のリガンド単位と結
合を形成することができなければならない。結合部位は、天然に生じることができ、また
はリガンド中に操作することができる。リガンド単位は、リガンドの反応性もしくは活性
化可能な（ａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ）ヘテロ原子またはヘテロ原子含有官能基を介して、
リンカー単位のストレッチャー単位への結合を形成することができる。リガンド単位上に
存在し得る反応性もしくは活性化可能なヘテロ原子またはヘテロ原子含有官能基は、硫黄
（一実施形態では、リガンドのスルフヒドリル基から）、Ｃ＝Ｏまたは（一実施形態では
、リガンドのカルボニル基、カルボキシル基またはヒドロキシル基から）および窒素（一
実施形態では、リガンドの第一級または第二級アミノ基から）を含む。これらのヘテロ原
子は、リガンドの天然状態のリガンド、例えば、天然に存在する抗体上に存在することが
でき、または化学修飾もしくは生物工学によってリガンド中に導入することができる。
一実施形態では、リガンド単位は、スルフヒドリル基を有し、リガンド単位は、スルフ
ヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位に結合している。
別の実施形態では、リガンドは、リンカー単位のストレッチャー単位の活性化エステル
（このようなエステルには、これらに限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、
ペンタフルオロフェニル、およびｐ−ニトロフェニルエステルが含まれる）と反応し、従
ってリガンド単位の窒素原子およびリンカー単位のＣ＝Ｏ基からなるアミド結合を形成す
ることができるリシン残基を有する。
さらに別の態様では、リガンド単位は、化学修飾されて、１個または複数のスルフヒド
リル基を導入することができる、１個または複数のリシン残基を有する。リガンド単位は
、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位に結合する。リシンを修飾するため
に使用することができる試薬には、これらに限定されないが、Ｎ−スクシンイミジルＳ−
アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）および２−イミノチオラン塩酸塩（トラウト試薬）
が含まれる。
別の実施形態では、リガンド単位は、化学修飾されて、１個または複数のスルフヒドリ
ル基を有することができる１個または複数の炭水化物基を有することができる。リガンド
単位は、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位のストレッチャー単位に結合
している。
さらに別の実施形態では、リガンド単位は、酸化されて、アルデヒド（−ＣＨＯ）基を
提供することができる１個または複数の炭水化物基を有することができる（例えば、Ｌａ
ｇｕｚｚａら、１９８９年、Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、３２巻（３号）：５４８〜５
５頁を参照されたい）。対応するアルデヒドは、ストレッチャー単位上の反応部位と結合
を形成することができる。リガンド上のカルボニル基と反応することができるストレッチ
ャー単位上の反応部位には、これらに限定されないが、ヒドラジンおよびヒドロキシルア
ミンが含まれる。薬物単位の結合または会合のためのタンパク質の修飾のための他のプロ
トコルは、Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２巻、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（２００２年）（
参照により本明細書中に組み込まれている）に記載されている。
リガンド単位は、ストレッチャー単位上の反応性基と結合を形成する。種々の反応性基
は有用であり、リガンド単位の性質によって決まる。反応性基は、ストレッチャー単位（
Ｌへの結合の前）上に存在するマレイミドでよく、ストレッチャー単位へのＬの共有結合
による結合は、リガンド単位のスルフヒドリル基によって達成され、チオ−置換スクシン
イミドが形成される。スルフヒドリル基は、リガンドの天然状態のリガンド、例えば、天
然に存在する残基上に存在することができ、またはリガンド中に化学修飾によって導入す
ることができる。
さらに別の実施形態では、リガンドは抗体であり、スルフヒドリル基は、鎖間のジスル
フィドの還元によって生じる。したがって、一部の実施形態では、リンカー単位は、還元
された鎖間のジスルフィドのシステイン残基にコンジュゲートしている。
さらに別の実施形態では、リガンドは抗体であり、スルフヒドリル基は、例えば、シス
テイン残基の導入によって、抗体中に化学的に導入される。したがって、一部の実施形態
では、ストレッチャー単位は、導入されたシステイン残基にコンジュゲートされる。
バイオコンジュゲートについて、薬物コンジュゲーションの部位は、コンジュゲーショ
ンの容易さ、薬物−リンカーの安定性、それゆえ得られたバイオコンジュゲートの生物物
理学的特性に対する効果、およびｉｎ−ｖｉｔｒｏでの細胞毒性を含めたいくつかのパラ
メーターに影響を与えることができることが観察された。薬物−リンカーの安定性に関し
て、リガンドへの薬物−リンカーのコンジュゲーションの部位は、脱離反応を受けるコン
ジュゲートした薬物−リンカーの能力、および薬物リンカーがバイオコンジュゲートのリ
ガンドから、バイオコンジュゲートの環境中の存在する代替の反応性チオール、例えば、
血漿中にある場合、アルブミン、遊離システイン、またはグルタチオン中の反応性チオー
ルなどへと移る能力に影響を与えることができる。このような部位は、例えば、鎖間のジ
スルフィドおよび選択したシステイン操作された部位を含む。本明細書に記載されている
リガンド−薬物コンジュゲートは、他の部位に加えて、脱離反応を受けやすくない部位（
例えば、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従って２３９位）においてチオール残基
にコンジュゲートすることができる。
コンジュゲートが、抗体の代わりに非免疫反応性タンパク質リガンド、ポリペプチドリ
ガンド、またはペプチドリガンドを含むとき、有用な非免疫反応性タンパク質リガンド、
ポリペプチドリガンド、またはペプチドリガンドには、これらに限定されないが、トラン
スフェリン、上皮成長因子（「ＥＧＦ」）、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペ
プチド、血小板由来増殖因子、ＩＬ−２、ＩＬ−６、トランスフォーミング増殖因子（「
ＴＧＦ」）、例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β、ワクチニア増殖因子（「ＶＧＦ」）
、インスリンおよびインスリン様成長因子ＩおよびＩＩ、ソマトスタチン、レクチン、な
らびに低密度リポタンパク質からのアポタンパク質が含まれる。
特に好ましいリガンドは、インタクトな抗体を含めた抗体である。実際は、本明細書に
記載されている実施形態のいずれかにおいて、リガンド単位は、抗体でよい。有用なポリ
クローナル抗体は、免疫された動物の血清に由来する抗体分子の不均質な集団である。有
用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定基（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、
微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸、またはそのフラグメン
ト）に対する抗体の均質な集団である。目的の抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ
）は、培養において連続細胞系による抗体分子の産生を実現する当技術分野において公知
の任意の技術を使用することによって調製することができる。
有用なモノクローナル抗体には、これらに限定されないが、ヒトモノクローナル抗体、
ヒト化モノクローナル抗体、またはキメラのヒト−マウス（または他の種）モノクローナ
ル抗体が含まれる。抗体は、完全長抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。ヒトモ
ノクローナル抗体は、多数の当技術分野で公知の技術のいずれかによって作製し得る（例
えば、Ｔｅｎｇら、１９８３年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳ
Ａ．、８０巻：７３０８〜７３１２頁；Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３年、Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ Ｔｏｄａｙ、４巻：７２〜７９頁；およびＯｌｓｓｏｎら、１９８２年、Ｍｅｔｈ
． Ｅｎｚｙｍｏｌ．、９２巻：３〜１６頁）。
抗体は、標的細胞（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、もしくは微生物抗原）に免
疫特異的に結合する抗体の機能的活性フラグメント、誘導体もしくは類似体、または腫瘍
細胞もしくはマトリックスに結合する他の抗体でよい。これに関しては、「機能的活性な
」とは、フラグメント、誘導体または類似体が、標的細胞に免疫特異的に結合することが
できることを意味する。どのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを決定するために、ＣＤＲ配
列を含有する合成ペプチドを、当技術分野において公知の任意の結合アッセイ方法（例え
ば、ＢＩＡコアアッセイ）によって、抗原を用いる結合アッセイにおいて使用することが
できる（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｎａｔｉｏｎａ
ｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ；Ｋａｂａｔ
Ｅら、１９８０年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１２５巻（３号）：９６１〜９６９
頁を参照されたい）。
他の有用な抗体は、これらに限定されないが、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフ
ラグメント、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ、トリボディ、テトラボディ、ｓｃＦｖ、ｓ
ｃＦｖ−ＦＶなどの抗体のフラグメント、または抗体と同じ特異性を有する任意の他の分
子を含む。
さらに、標準的組換えＤＮＡ技術を使用して作製することができる、ヒトおよび非ヒト
ポーションの両方を含む組換え抗体、例えば、キメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗
体は、有用な抗体である。キメラ抗体は、異なるポーションが、異なる動物種、例えば、
マウスモノクローナルに由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有するも
のに由来する分子である。（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれてい
る米国特許第４，８１６，５６７号；および米国特許第４，８１６，３９７号を参照され
たい。）ヒト化抗体は、非ヒト種からの１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）、お
よびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する非ヒト種からの抗体分子
である。（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている米国特許第５，
５８５，０８９号を参照されたい。）このようなキメラ抗体およびヒト化モノクローナル
抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術によって、例えば、これらの各々が参照に
より本明細書中にその全体が組み込まれている、国際公開第ＷＯ８７／０２６７１号；欧
州特許出願公開第０１８４１８７号；欧州特許出願公開第０１７１４９６号；欧州特許出
願公開第０１７３４９４号；国際公開第ＷＯ８６／０１５３３号；米国特許第４，８１６
，５６７号；欧州特許出願公開第０１２０２３号；Ｂｅｒｔｅｒら、１９８８年、Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ、２４０巻：１０４１〜１０４３頁；Ｌｉｕら、１９８７年、Ｐｒｏｃ． Ｎａ
ｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８４巻：３４３９〜３４４３頁；Ｌｉｕら、１
９８７年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３９巻：３５２１〜３５２６頁；Ｓｕｎら、１９
８７年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８４巻：２１４〜２
１８頁；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７年、Ｃａｎｃｅｒ． Ｒｅｓ．、４７巻：９９
９〜１００５頁；Ｗｏｏｄら、１９８５年、Ｎａｔｕｒｅ、３１４巻：４４６〜４４９頁
；およびＳｈａｗら、１９８８年、Ｊ． Ｎａｔｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、８０
巻：１５５３〜１５５９頁；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻
：１２０２〜１２０７頁；Ｏｉら、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、４巻：２
１４頁；米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ、
３２１巻：５５２〜５２５頁；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２
３９巻：１５３４頁；およびＢｅｉｄｌｅｒら、１９８８年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、
１４１巻：４０５３〜４０６０頁に記載されている方法を使用して産生することができる
。
完全ヒト抗体は特に望ましく、内在性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現する
ことができないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニッ
クマウスを使用して産生することができる。
抗体は、すなわち、このような共有結合による結合によって、抗体がその抗原結合免疫
特異性を保持することを可能とする限り、任意のタイプの分子の共有結合による結合によ
って修飾されている類似体および誘導体を含む。例えば、限定するためではなく、抗体の
誘導体および類似体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミ
ド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞抗体単位
または他のタンパク質への連結などによってさらに修飾されているものを含む。多数の化
学修飾のいずれかは、これらに限定されないが、特異的化学切断、アセチル化、ホルミル
化、ツニカマイシンの存在下での代謝合成などを含めた公知の技術によって行うことがで
きる。さらに、類似体または誘導体は、１種または複数の非天然アミノ酸を含有すること
ができる。
抗体は、Ｆｃ受容体と相互作用するアミノ酸残基において修飾（例えば、置換、欠失ま
たは付加）を有することができる。特に、抗体は、抗ＦｃドメインおよびＦｃＲｎ受容体
の間の相互作用に関与していると同定されているアミノ酸残基において修飾を有すること
ができる（例えば、参照により本明細書中にその全体が組み込まれている国際公開第ＷＯ
９７／３４６３１号を参照されたい）。
がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に得ることができ、または当業者に
は公知の任意の方法、例えば、化学合成もしくは組換え発現技術などによって産生するこ
とができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、
例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたは同様のデータベース、文献資料から、または
通例のクローニングおよび配列決定によって得ることができる。
特定の実施形態では、がんの処置のための公知の抗体を使用することができる。がん細
胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に得ることができ、または当業者には公知の
任意の方法、例えば、組換え発現技術などによって産生することができる。がん細胞抗原
に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデ
ータベースまたは同様のデータベース、文献資料から、または通例のクローニングおよび
配列決定によって得ることができる。
別の特定の実施形態では、自己免疫疾患の処置のための抗体は、本発明の組成物および
方法に従って使用される。自己免疫性抗体の産生に関与している細胞の抗原に対して免疫
特異的な抗体は、任意の機関（例えば、大学の科学者もしくは会社）から得ることができ
、または当業者には公知の任意の方法、例えば、化学合成もしくは組換え発現技術などに
よって産生することができる。
ある特定の実施形態では、有用な抗体は、活性化リンパ球上に発現している受容体また
は受容体複合体に結合することができる。受容体または受容体複合体は、免疫グロブリン
遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー、インテ
グリン、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、主要組織適合性タンパク質、レクチン
、または補体制御タンパク質を含むことができる。
一部の態様では、抗体は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ７０、アル
ファ−ｖ−ベータ−６、Ｌｉｖ−１またはＬｅｗｉｓ Ｙ抗原に特異的に結合する。
抗ＣＤ３０抗体は、例えば、キメラＡＣ１０抗体、ブレンツキシマブでよい。抗ＣＤ３
０抗体は、配列番号１に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、配列番号２
に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、配列番号７に記載されているアミ
ノ酸配列を有するヒトガンマＩ定常領域、および配列番号８に記載されているアミノ酸配
列を有するヒトカッパ定常領域を有することができる。
抗ＣＤ３０抗体は、例えば、ヒト化ＡＣ１０抗体でよい。抗ＣＤ３０抗体は、配列番号
９に記載されているアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、配列番号１０に記載されている
アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を有することができる。抗体は、２３９位（ＥＵイン
デックスに従って）においてセリンからシステインへの置換を任意選択で有する配列番号
７に記載されているアミノ酸配列を有するヒトガンマＩ定常領域、および配列番号８に記
載されているアミノ酸配列を有するヒトカッパ定常領域をさらに含むことができる。
抗ＣＤ７０抗体は、例えば、ヒト化抗体でよい（例えば、ＵＳ２００９／０１４８９４
２を参照されたい）。例示的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号３に記載され
ているアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号４に記載されているアミノ酸
配列を有する軽鎖可変領域を有する。
抗ＣＤ１９抗体は、例えば、ヒト化抗体でよい（例えば、参照により本明細書にその全
体が全ての目的のために組み込まれているＵＳ２００９／０１３６５２６を参照されたい
）。例示的な実施形態では、ｈＢＵ１２抗体は、配列番号５に記載されているアミノ酸配
列を有する重鎖可変領域、および配列番号６に記載されているアミノ酸配列を有する軽鎖
可変領域を有する。
抗体は、ヒト化抗ＣＤ３３抗体（参照により本明細書にその全体が全ての目的のために
組み込まれているＵＳ２０１３／０３０９２２３）、ヒト化抗ベータ６抗体（例えば、参
照により本明細書にその全体が全ての目的のために組み込まれているＷＯ２０１３／１２
３１５２を参照されたい）、ヒト化抗Ｌｉｖ−１抗体（例えば、参照により本明細書にそ
の全体が全ての目的のために組み込まれているＵＳ２０１３／０２５９８６０を参照され
たい）、またはヒト化ＡＣ１０抗体（例えば、参照により本明細書にその全体が全ての目
的のために組み込まれているＵＳ８，２５７，７０６を参照されたい）でよい。
リガンドへの例示的な結合は、チオエーテル連結を介してである。チオエーテル連結は
、鎖間のジスルフィド結合、導入されたシステイン残基（ｒｅｓｉｄｅ）、およびこれら
の組合せを介してでよい。
薬物単位：
本発明の効果は、薬物が天然で疎水性である実施形態ではより明白となる。したがって
、本発明の薬物は、好ましくは天然で疎水性である。
薬物単位（Ｄ）は、本明細書において細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤または免疫抑制剤と
また称される細胞毒性薬、細胞増殖抑制薬または免疫抑制薬でよい。薬物単位は、放出可
能なアセンブリー単位（Ｘ）と結合を形成することができる原子を有する。一部の実施形
態では、薬物単位Ｄは、放出可能なアセンブリー単位（Ｘ）と結合を形成することができ
る窒素原子を有する。他の実施形態では、薬物単位Ｄは、放出可能なアセンブリー単位（
Ｘ）と結合を形成することができるカルボン酸を有する。他の実施形態では、薬物単位Ｄ
は、放出可能なアセンブリー単位Ｘと結合を形成することができるスルフヒドリル基を有
する。また他の実施形態では、薬物単位Ｄは、放出可能なアセンブリー単位Ｘと結合を形
成することができるヒドロキシル基またはケトンまたはアルコールを有する。
有用なクラスの細胞毒性剤または免疫抑制剤は、例えば、抗チューブリン剤、ＤＮＡ副
溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗剤、化学療
法増感剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどを含む。特に、有用なクラ
スの細胞毒性剤の例は、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡアルキル化剤、およびチュー
ブリン阻害剤を含む。例示的な細胞毒性剤は、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン
、デュオカルマイシン、エトポシド、メイタンシンおよびマイタンシノイド、タキサン、
ベンゾジアゼピンまたはベンゾジアゼピン含有薬物（例えば、ピロロ［１，４］−ベンゾ
ジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン、およびオキサゾリジノベンゾジア
ゼピン）ならびにビンカアルカロイドを含む。選択したベンゾジアゼピン含有薬物は、Ｗ
Ｏ２０１０／０９１１５０、ＷＯ２０１２／１１２７０８、ＷＯ２００７／０８５９３０
、およびＷＯ２０１１／０２３８８３に記載されている。
ある特定の実施形態では、細胞毒性剤は、メイタンシンまたはマイタンシノイド（例え
ば、ＤＭ１、ＤＭ４）、抗チューブリン剤の別の群である。（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎ
ｃ．；またＣｈａｒｉら、１９９２年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５２巻：１２７〜１３
１頁および米国特許第８，１６３，８８８号を参照されたい）。
一部の実施形態では、薬物は、ベンゾジアゼピン（ベンゾジアゼピン含有薬物、例えば
、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン、および
オキサゾリジノベンゾジアゼピンを含めた）である。
ＰＢＤは、一般構造のものであるが、

これらの芳香族Ａ環およびピロロＣ環の両方の、置換基の数、タイプおよび位置、ならび
にＣ環の飽和度が異なることができる。Ｂ環において、ＤＮＡのアルキル化に関与する求
電子性中心であるＮ１０−Ｃ１１位においてイミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（Ｎ
Ｈ−ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ）
）のいずれかが存在する。公知の天然物の全ては、キラルＣ１１ａ位において（Ｓ）−配
向を有し、これはこの天然物にＣ環からＡ環に向かって見たときの右回りのねじれを提供
する。これはこの天然物にＢ型ＤＮＡの副溝とのイソヘリシティーのための適当な三次元
形状を与え、これによって結合部位にぴったりと合う。副溝において付加体を形成するＰ
ＢＤの能力によって、ＰＢＤはＤＮＡプロセシングを妨げ、したがって抗腫瘍剤としての
これらの使用を妨げることができる。これらの分子の生物活性は、例えば、柔軟なアルキ
レンリンカーを介して、２個のＰＢＤ単位のＣ８／Ｃ’−ヒドロキシル官能基を通してこ
れらの２個のＰＢＤ単位を一緒に接合することによって増強することができる。ＰＢＤ二
量体は、配列選択的ＤＮＡ損傷、例えば、これらの生物活性に主に関与していると考えら
れる回文構造の５’−Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ−３’鎖間架橋を形成すると考えられる。
薬物単位は、例えば、モノメチルアウリスタチンＥと匹敵するか、またはこれより大き
い疎水性を有する、アウリスタチンまたは非アウリスタチン薬物でよい。一部の態様では
、薬物は、モノメチルアウリスタチンＥと匹敵するか、またはこれより大きい疎水性を有
する、ＭＭＡＥまたはアウリスタチンである。アウリスタチン薬物は、例えば、そのＮ末
端またはＣ末端を介して放出可能なアセンブリー単位へと共有結合で結合することができ
る。ＭＭＡＥは、２．５９のＳｌｏｇＰ値を有する。一部の態様では、本発明において使
用される薬物は、１．５もしくはそれ超、２．０もしくはそれ超、または２．５もしくは
それ超のＳｌｏｇＰ値を有する。一部の態様では、本発明において使用される薬物は、（
ａ）約１．５、約２、もしくは２．５から約７、（ｂ）約１．５、約２、もしくは２．５
から約６、（ｃ）約１．５、約２、もしくは約２．５から約５、（ｄ）約１．５、約２、
もしくは２．５から約４、または（ｅ）約１．５、約２、もしくは約２．５から約３のＳ
ｌｏｇＰ値を有する。
薬物単位は、下記の式ＤＥを有することができ、ここで放出可能なアセンブリー単位へ
の結合は、Ｎ末端を介してであり、

式中、それぞれの場所において独立に、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−
アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜
Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−
アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜
Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され、
Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
あるいはＲ４およびＲ５は、一緒に炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し
、ＲａおよびＲｂは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から独
立に選択され、ｎは、２、３、４、５および６からなる群から選択され、
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−
アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜
Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され、
各Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８ア
ルキル）からなる群から独立に選択され、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−
（Ｃ３〜Ｃ８複素環）、および−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）か
らなる群から選択される。
そのＮ末端を介してコンジュゲートしているＭＭＡＥを下記に示す。
一部の実施形態では、薬物単位は、ビンカ化合物、カンプトテシンまたはアントラサイ
クリン（ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎ）細胞毒性化合物である。これらの薬物単位の構造例
は、Ｘ−Ｄ部分において存在するとき、薬物−リンカー中間体のために本明細書に記載さ
れている。
リガンド−薬物コンジュゲートが細胞系に対して細胞増殖抑制効果または細胞毒性効果
を発揮するかを決定するために使用することができるいくつかの異なるアッセイが存在す
る。リガンド−薬物コンジュゲートが細胞系に対して細胞増殖抑制効果または細胞毒性効
果を発揮するかを決定するための一例において、チミジン組込みアッセイを使用する。例
えば、５，０００個細胞／９６ウェルプレートのウェルの密度の細胞を、７２時間の期間
培養し、７２時間の期間の最後の８時間の間に０．５μＣｉの３Ｈ−チミジンに曝露させ
、リガンド−薬物コンジュゲートの存在下、および非存在下での培養物の細胞中への３Ｈ
−チミジンの組込みを測定する。同じ条件下で培養されたが、リガンド−薬物コンジュゲ
ートと接触していない同じ細胞系の細胞と比較して、培養物の細胞が３Ｈ−チミジン組込
みを低減させた場合、そのリガンド−薬物コンジュゲートは、細胞系に対して細胞増殖抑
制効果または細胞毒性効果を有する。
別の例において、リガンド−薬物コンジュゲートが細胞系に対して細胞増殖抑制効果ま
たは細胞毒性効果を発揮するかを決定するために、細胞生存率を、細胞中で色素、例えば
、ニュートラルレッド、トリパンブルー、またはＡＬＡＭＡＲ（商標）ブルーの取込みを
決定することによって測定する（例えば、Ｐａｇｅら、１９９３年、Ｉｎｔｌ． Ｊ．
ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、３巻：４７３〜４７６頁を参照されたい）。このようなアッセ
イにおいて、色素を含有する培地中で細胞をインキュベートし、細胞を洗浄し、色素の細
胞の取込みを反映する残存する色素を分光光度法で測定する。タンパク質結合色素スルホ
ローダミンＢ（ＳＲＢ）をまた使用して、細胞毒性を測定することができる（Ｓｋｅｈａ
ｎら、１９９０年、Ｊ． Ｎａｔ’ｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、８２巻：１１０７〜
１２頁）。好ましいリガンド−薬物コンジュゲートは、細胞系に対して１０００ｎｇ／ｍ
ｌ未満、好ましくは５００ｎｇ／ｍｌ未満、より好ましくは１００ｎｇ／ｍｌ未満、さら
に最も好ましくは５０未満またはそれどころか１０ｎｇ／ｍｌ未満のＩＣ５０値（５０％
の細胞死滅を生じさせるｍＡＢ濃度として定義される）を有するものを含む。
薬物をリンカーに連結するための一般手順は当技術分野において公知である。例えば、
米国特許第８，１６３，８８８号、同第７，６５９，２４１号、同第７，４９８，２９８
号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１０２５６１５７号および国際出願第ＷＯ２０１１０
２３８８３号、およびＷＯ２００５１１２９１９を参照されたい。
ポリエチレングリコール単位（ＰＥＧ）
多分散性ＰＥＧ、単分散性ＰＥＧＳおよび別個のＰＥＧを使用して、本発明の化合物を
作製することができる。多分散性ＰＥＧは、サイズおよび分子量の不均一な混合物であり
、一方、単分散性ＰＥＧは典型的には、不均一な混合物から精製され、したがって、単一
の鎖長および分子量を実現する。好ましいＰＥＧ単位は、別個のＰＥＧ、すなわち重合過
程によるのではなくステップ毎の様式で合成された化合物である。別個のＰＥＧは、明確
および特定の鎖長を有する単一分子を提供する。
本明細書において提供するＰＥＧ単位は、１個または複数のポリエチレングリコール鎖
を含む。ポリエチレングリコール鎖は、例えば、直鎖状、分岐状または星形状の構成で一
緒に連結することができる。典型的には、ＰＥＧ鎖の少なくとも１つは、並列コネクター
単位への共有結合による結合のために１つの端部において誘導体化されている。並列コネ
クター単位への例示的な結合は、条件付きでなく切断可能な連結により、または条件付き
で切断可能な連結を介する。例示的な結合は、アミド連結、エーテル連結、エステル連結
、ヒドラゾン連結、オキシム連結、ジスルフィド連結、ペプチド連結またはトリアゾール
連結を介してである。一部の態様では、ＬＰへの結合は、条件付きでなく切断可能な連結
によってである。一部の態様では、ＬＰへの結合は、エステル連結、ヒドラゾン連結、オ
キシム連結、またはジスルフィド連結を介してではない。一部の態様では、ＬＰへの結合
は、ヒドラゾン連結を介してではない。
条件付きで切断可能な連結は、血漿中で循環している間は切断に対して実質的に感受性
でないが、細胞内または腫瘍内環境において切断に対して感受性である連結を指す。条件
付きでなく切断可能な連結は、いかなる生物環境においても切断に対して実質的に感受性
でないものである。ヒドラゾンの化学的加水分解、ジスルフィドの還元、およびペプチド
結合またはグリコシド連結の酵素的切断は、条件付きで切断可能な連結の例である。
ＰＥＧ単位は、リガンド−薬物コンジュゲート（またはその中間体）に並列コネクター
単位において直接結合している。ＰＥＧ単位の他の末端（複数可）は遊離し、繋がれてお
らず、メトキシ、カルボン酸、アルコールまたは他の適切な官能基の形態を取り得る。メ
トキシ、カルボン酸、アルコールまたは他の適切な官能基は、ＰＥＧ単位の末端ＰＥＧサ
ブ単位のためのキャップとして作用する。繋がれていないとは、その繋がれていない部位
において、薬物単位に、リガンド単位に、または薬物単位および／もしくはリガンド単位
を連結する連結構成要素に、ＰＥＧ単位が結合していないことを意味する。ＰＥＧ単位が
複数個のＰＥＧ鎖を含む実施形態について、複数のＰＥＧ鎖は、同じかまたは異なる化学
部分でよい（例えば、異なる分子量のＰＥＧ、またはサブ単位の数）。複数のＰＥＧ鎖は
、単一の結合部位において並列コネクター単位に結合している。ＰＥＧ単位は、繰り返し
ポリエチレングリコールサブ単位を含むことに加えて、また非ＰＥＧ材料を含有し得るこ
とを当業者は理解する（例えば、複数のＰＥＧ鎖の互いへのカップリングを促進するか、
または並列コネクター単位へのカップリングを促進する）。非ＰＥＧ材料は、繰り返し−
ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−サブ単位の部分ではないＰＥＧ単位中の原子を指す。本明細書において
提供する実施形態では、ＰＥＧ単位は、非ＰＥＧ要素を介して互いに連結している２個の
モノマーＰＥＧ鎖を含むことができる。本明細書において提供する他の実施形態では、Ｐ
ＥＧ単位は、並列コネクター単位に結合している中心コアに結合している２個の直鎖状Ｐ
ＥＧ鎖を含むことができる（すなわち、ＰＥＧ単位自体は分岐状である）。
当業者が利用可能ないくつかのＰＥＧ結合方法が存在する［例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎら
（１９９０年）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８巻：３４３頁（部位特異的突然変異誘
発後のそのグリコシル化部位におけるインターロイキン−２のＰＥＧ化）；ＥＰ０４０１
３８４（Ｇ−ＣＳＦへのＰＥＧのカップリング）；Ｍａｌｉｋら、（１９９２年）、Ｅｘ
ｐ． Ｈｅｍａｔｏｌ．、２０巻：１０２８〜１０３５頁（トレシルクロリドを使用した
ＧＭ−ＣＳＦのＰＥＧ化）；ＡＣＴ公開番号第ＷＯ９０／１２８７４号（システイン特異
的ｍＰＥＧ誘導体を使用した組換え技術によって導入されたシステイン残基を含有するエ
リスロポエチンのＰＥＧ化）；米国特許第５，７５７，０７８号（ＥＰＯペプチドのＰＥ
Ｇ化）；米国特許第５，６７２，６６２号（ポリ（エチレングリコール）およびプロピオ
ン酸またはブタン酸で一置換されている関連するポリマー、およびバイオ技術用途のため
のその機能的誘導体）；米国特許第６，０７７，９３９号（ペプチドのＮ−末端アルファ
炭素のＰＥＧ化）；Ｖｅｒｏｎｅｓｅら、（１９８５年）Ａｐｐｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｂｉｏｅｃｈｎｏｌ、１１巻：１４１〜１４２頁（ＰＥＧ−ニトロフェニルカーボネー
ト（「ＰＥＧ−ＮＰＣ」）またはＰＥＧ−トリクロロフェニルカーボネートによるペプチ
ドのＮ−末端α−炭素のＰＥＧ化）；ならびにＶｅｒｏｎｅｓｅ、（２００１年）Ｂｉｏ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ、２２巻：４０５〜４１７頁（ペプチドおよびタンパク質ＰＥＧ化に
ついての総論）を参照されたい］。
例えば、ＰＥＧは、反応性基を介してアミノ酸残基に共有結合し得る。反応性基は、そ
れに対して活性化ＰＥＧ分子が結合し得るものである（例えば、遊離アミノまたはカルボ
キシル基）。例えば、Ｎ末端アミノ酸残基およびリシン（Ｋ）残基は、遊離アミノ基を有
し、Ｃ末端アミノ酸残基は、遊離カルボキシル基を有する。スルフヒドリル基（例えば、
システイン残基上で見出されるような）はまた、ＰＥＧを結合させるための反応性基とし
て使用し得る。さらに、ポリペプチドのＣ末端において特異的に活性化基（例えば、ヒド
ラジド、アルデヒド、および芳香族−アミノ基）を導入するための酵素によって補助され
る方法が記載されている（Ｓｃｈｗａｒｚら、（１９９０年）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙ
ｍｏｌ．、１８４巻：１６０頁；Ｒｏｓｅら、（１９９１年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ
Ｃｈｅｍ．、２巻：１５４頁；およびＧａｅｒｔｎｅｒら、（１９９４年）Ｊ． Ｂｉ
ｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６９巻：７２２４頁を参照されたい］。
一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、異なる反応性部分を有するメトキシル化ＰＥＧ（
「ｍＰＥＧ」）を使用してアミノ基に結合し得る。このような反応性部分の非限定的例に
は、スクシンイミジルスクシネート（ＳＳ）、スクシンイミジルカーボネート（ＳＣ）、
ｍＰＥＧ−イミデート、パラ−ニトロフェニルカーボネート（ＮＰＣ）、スクシンイミジ
ルプロピオネート（ＳＰＡ）、および塩化シアヌルが含まれる。このようなｍＰＥＧの非
限定的例は、ｍＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート（ｍＰＥＧ−ＳＳ）、ｍＰＥＧ２
−スクシンイミジルスクシネート（ｍＰＥＧ２−ＳＳ）；ｍＰＥＧ−スクシンイミジルカ
ーボネート（ｍＰＥＧ−ＳＣ）、ｍＰＥＧ２−スクシンイミジルカーボネート（ｍＰＥＧ
２−ＳＣ）；ｍＰＥＧ−イミデート、ｍＰＥＧ−パラ−ニトロフェニルカーボネート（ｍ
ＰＥＧ−ＮＰＣ）、ｍＰＥＧ−イミデート；ｍＰＥＧ２−パラ−ニトロフェニルカーボネ
ート（ｍＰＥＧ２−ＮＰＣ）；ｍＰＥＧ−スクシンイミジルプロピオネート（ｍＰＥＧ−
ＳＰＡ）；ｍＰＥＧ２−スクシンイミジルプロピオネート（ｍＰＥＧ、−ＳＰＡ）；ｍＰ
ＥＧ−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ｍＰＥＧ−ＮＨＳ）；ｍＰＥＧ２−Ｎ−ヒドロ
キシ−スクシンイミド（ｍＰＥＧ２−ＮＨＳ）；ｍＰＥＧ−シアヌルクロリド；ｍＰＥＧ
２−シアヌルクロリド；ｍＰＥＧ２−リシノール−ＮＰＣ、およびｍＰＥＧ２−Ｌｙｓ−
ＮＨＳを含む。
一般に、ＰＥＧ単位を構成するＰＥＧ鎖の少なくとも１つは、並列コネクター単位に結
合することができるように官能化される。官能化は、例えば、アミン、チオール、ＮＨＳ
エステル、マレイミド、アルキン、アジド、カルボニル、または他の官能基を介してでよ
い。ＰＥＧ単位は、非ＰＥＧ材料（すなわち、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−からならない材料）を
さらに含み、並列コネクター単位へのカップリングを促進すること、または２個もしくは
それ超のＰＥＧ鎖のカップリングを促進することができる。
多種多様のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）種を使用することができ、実質的に任意
の適切な反応性ＰＥＧ試薬を使用することができる。一部の実施形態では、反応性ＰＥＧ
試薬は、ＬＰへの結合によってカルバメートまたはアミド結合の形成をもたらす。下記の
ＰＥＧ試薬は、様々な実施形態で有用である。ｍＰＥＧ２−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ２−ＡＬＤ
、マルチアームＰＥＧ、ｍＰＥＧ（ＭＡＬ）２、ｍＰＥＧ２（ＭＡＬ）、ｍＰＥＧ−ＮＨ
２、ｍＰＥＧ−ＳＰＡ、ｍＰＥＧ−ＳＢＡ、ｍＰＥＧ−チオエステル、ｍＰＥＧ−ダブル
エステル、ｍＰＥＧ−ＢＴＣ、ｍＰＥＧ−ＢｕｔｙｒＡＬＤ、ｍＰＥＧ−ＡＣＥＴ、ヘテ
ロ官能性ＰＥＧ（ＮＨ２−ＰＥＧ−ＣＯＯＨ、Ｂｏｃ−ＰＥＧ−ＮＨＳ、Ｆｍｏｃ−ＰＥ
Ｇ−ＮＨＳ、ＮＨＳ−ＰＥＧ−ＶＳ、ＮＨＳ−ＰＥＧ−ＭＡＬ）、ＰＥＧアクリレート（
ＡＣＲＬ−ＰＥＧ−ＮＨＳ）、ＰＥＧ−リン脂質（例えば、ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、当業
者によって選択された化学物質によって活性化されたグリセリンをベースとするＰＥＧの
ＧＬシリーズを含めたＳＵＮＢＲＩＴＥ（商標）シリーズのマルチアームＰＥＧ、ＳＵＮ
ＢＲＩＴＥ活性化ＰＥＧのいずれか（これらに限定されないが、カルボキシル−ＰＥＧ、
ｐ−ＮＰ−ＰＥＧ、Ｔｒｅｓｙｌ−ＰＥＧ、アルデヒドＰＥＧ、アセタール−ＰＥＧ、ア
ミノ−ＰＥＧ、チオール−ＰＥＧ、マレイミド−ＰＥＧ、ヒドロキシル−ＰＥＧ−アミン
、アミノ−ＰＥＧ−ＣＯＯＫヒドロキシル−ＰＥＧ−アルデヒド、カルボン酸無水物タイ
プ−ＰＥＧ、官能化ＰＥＧ−リン脂質を含めた）、ならびにこれらの特定の用途および利
用のために当業者によって選択されるような他の同様および／または適切な反応性ＰＥＧ
。
ＰＥＧ単位の付加は、このように得られたリガンド−薬物コンジュゲートの薬物動態に
対して２つの潜在的なインパクトを有し得る。所望のインパクトは、薬物−リンカーの露
出した疎水性要素によって誘発される非特異的な相互作用の低減から生じるクリアランス
の減少（および結果として生じる曝露の増加）である。第２のインパクトは望まれないイ
ンパクトであり、リガンド−薬物コンジュゲートの分子量の増加から生じ得る分布の体積
および速度の減少である。ＰＥＧサブ単位の数が増加することによって、コンジュゲート
の流体力学的半径が増加し、拡散率の減少をもたらす。そして次に、拡散率の減少は、リ
ガンド−薬物コンジュゲートが腫瘍中に浸透する能力を減弱し得る（Ｓｃｈｍｉｄｔおよ
びＷｉｔｔｒｕｐ、Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ、２００９年；８巻：２８６１〜２
８７１頁）。これらの２つの競合する薬物動態学的効果のために、ＬＤＣのクリアランス
を減少させ、したがって血漿曝露を増加させるほど十分に大きいが、その拡散率を非常に
減弱させ、リガンド−薬物コンジュゲートが意図する標的細胞集団に到達する能力を低減
し得るほど大きくない、ＰＥＧを使用することが望ましい。特に、薬物−リンカーのため
の最適なＰＥＧサイズを選択するための方法について、実施例（例えば、実施例１、１８
、および２１）を参照されたい。
実施形態の１つの群では、ＰＥＧ単位は、少なくとも６個のサブ単位、少なくとも７個
のサブ単位、少なくとも８個のサブ単位、少なくとも９個のサブ単位、少なくとも１０個
のサブ単位、少なくとも１１個のサブ単位、少なくとも１２個のサブ単位、少なくとも１
３個のサブ単位、少なくとも１４個のサブ単位、少なくとも１５個のサブ単位、少なくと
も１６個のサブ単位、少なくとも１７個のサブ単位、少なくとも１８個のサブ単位、少な
くとも１９個のサブ単位、少なくとも２０個のサブ単位、少なくとも２１個のサブ単位、
少なくとも２２個のサブ単位、少なくとも２３個のサブ単位、または少なくとも２４個の
サブ単位を含む。本明細書において使用する場合、サブ単位とは、ＰＥＧ単位について言
及するとき、式

を有するポリエチレングリコールサブ単位を指す。一部のこのような実施形態では、ＰＥ
Ｇ単位は、約７２個以下のサブ単位を含む。
実施形態の１つの群では、ＰＥＧ単位は、それぞれが、少なくとも２個のサブ単位、少
なくとも３個のサブ単位、少なくとも４個のサブ単位、少なくとも５個のサブ単位、少な
くとも６個のサブ単位、少なくとも７個のサブ単位、少なくとも８個のサブ単位、少なく
とも９個のサブ単位、少なくとも１０個のサブ単位、少なくとも１１個のサブ単位、少な
くとも１２個のサブ単位、少なくとも１３個のサブ単位、少なくとも１４個のサブ単位、
少なくとも１５個のサブ単位、少なくとも１６個のサブ単位、少なくとも１７個のサブ単
位、少なくとも１８個のサブ単位、少なくとも１９個のサブ単位、少なくとも２０個のサ
ブ単位、少なくとも２１個のサブ単位、少なくとも２２個のサブ単位、少なくとも２３個
のサブ単位、または少なくとも２４個のサブ単位を有する、１個または複数の直鎖状ＰＥ
Ｇ鎖を含む。好ましい実施形態では、ＰＥＧ単位は、合計少なくとも６個のサブ単位、少
なくとも８個、少なくとも１０個のサブ単位、または少なくとも１２個のサブ単位を含む
。一部のこのような実施形態では、ＰＥＧ単位は、合計約７２個のサブ単位以下、好まし
くは合計約３６個のサブ単位以下を含む。
実施形態の別の群では、ＰＥＧ単位は、合計４〜７２個、４〜６０個、４〜４８個、４
〜３６個もしくは４〜２４個のサブ単位、５〜７２個、５〜６０個、５〜４８個、５〜３
６個もしくは５〜２４個のサブ単位、６〜７２個、６〜６０個、６〜４８個、６〜３６個
もしくは６〜２４個のサブ単位、７〜７２個、７〜６０個、７〜４８個、７〜３６個もし
くは７〜２４個のサブ単位、８〜７２個、８〜６０個、８〜４８個、８〜３６個もしくは
８〜２４個のサブ単位、９〜７２個、９〜６０個、９〜４８個、９〜３６個もしくは９〜
２４個のサブ単位、１０〜７２個、１０〜６０個、１０〜４８個、１０〜３６個もしくは
１０〜２４個のサブ単位、１１〜７２個、１１〜６０個、１１〜４８個、１１〜３６個も
しくは１１〜２４個のサブ単位、１２〜７２個、１２〜６０個、１２〜４８個、１２〜３
６個もしくは１２〜２４個のサブ単位、１３〜７２個、１３〜６０個、１３〜４８個、１
３〜３６個もしくは１３〜２４個のサブ単位、１４〜７２個、１４〜６０個、１４〜４８
個、１４〜３６個もしくは１４〜２４個のサブ単位、１５〜７２個、１５〜６０個、１５
〜４８個、１５〜３６個もしくは１５〜２４個のサブ単位、１６〜７２個、１６〜６０個
、１６〜４８個、１６〜３６個もしくは１６〜２４個のサブ単位、１７〜７２個、１７〜
６０個、１７〜４８個、１７〜３６個もしくは１７〜２４個のサブ単位、１８〜７２個、
１８〜６０個、１８〜４８個、１８〜３６個もしくは１８〜２４個のサブ単位、１９〜７
２個、１９〜６０個、１９〜４８個、１９〜３６個もしくは１９〜２４個のサブ単位、２
０〜７２個、２０〜６０個、２０〜４８個、２０〜３６個もしくは２０〜２４個のサブ単
位、２１〜７２個、２１〜６０個、２１〜４８個、２１〜３６個もしくは２１〜２４個の
サブ単位、２２〜７２個、２２〜６０個、２２〜４８個、２２〜３６個もしくは２２〜２
４個のサブ単位、２３〜７２個、２３〜６０個、２３〜４８個、２３〜３６個もしくは２
３〜２４個のサブ単位、または２４〜７２個、２４〜６０個、２４〜４８個、２４〜３６
個もしくは２４個のサブ単位を含む。
実施形態の別の群では、ＰＥＧ単位は、合計４〜７２個、４〜６０個、４〜４８個、４
〜３６個もしくは４〜２４個のサブ単位、５〜７２個、５〜６０個、５〜４８個、５〜３
６個もしくは５〜２４個のサブ単位、６〜７２個、６〜６０個、６〜４８個、６〜３６個
もしくは６〜２４個のサブ単位、７〜７２個、７〜６０個、７〜４８個、７〜３６個もし
くは７〜２４個のサブ単位、８〜７２個、８〜６０個、８〜４８個、８〜３６個もしくは
８〜２４個のサブ単位、９〜７２個、９〜６０個、９〜４８個、９〜３６個もしくは９〜
２４個のサブ単位、１０〜７２個、１０〜６０個、１０〜４８個、１０〜３６個もしくは
１０〜２４個のサブ単位、１１〜７２個、１１〜６０個、１１〜４８個、１１〜３６個も
しくは１１〜２４個のサブ単位、１２〜７２個、１２〜６０個、１２〜４８個、１２〜３
６個もしくは１２〜２４個のサブ単位、１３〜７２個、１３〜６０個、１３〜４８個、１
３〜３６個もしくは１３〜２４個のサブ単位、１４〜７２個、１４〜６０個、１４〜４８
個、１４〜３６個もしくは１４〜２４個のサブ単位、１５〜７２個、１５〜６０個、１５
〜４８個、１５〜３６個もしくは１５〜２４個のサブ単位、１６〜７２個、１６〜６０個
、１６〜４８個、１６〜３６個もしくは１６〜２４個のサブ単位、１７〜７２個、１７〜
６０個、１７〜４８個、１７〜３６個もしくは１７〜２４個のサブ単位、１８〜７２個、
１８〜６０個、１８〜４８個、１８〜３６個もしくは１８〜２４個のサブ単位、１９〜７
２個、１９〜６０個、１９〜４８個、１９〜３６個もしくは１９〜２４個のサブ単位、２
０〜７２個、２０〜６０個、２０〜４８個、２０〜３６個もしくは２０〜２４個のサブ単
位、２１〜７２個、２１〜６０個、２１〜４８個、２１〜３６個もしくは２１〜２４個の
サブ単位、２２〜７２個、２２〜６０個、２２〜４８個、２２〜３６個もしくは２２〜２
４個のサブ単位、２３〜７２個、２３〜６０個、２３〜４８個、２３〜３６個もしくは２
３〜２４個のサブ単位、または２４〜７２個、２４〜６０個、２４〜４８個、２４〜３６
個もしくは２４個のサブ単位を有する、１個または複数の直鎖状ＰＥＧ鎖を含む。
実施形態の別の群では、ＰＥＧ単位は、少なくとも２個のサブ単位、少なくとも３個の
サブ単位、少なくとも４個のサブ単位、少なくとも５個のサブ単位、少なくとも６個のサ
ブ単位、少なくとも７個のサブ単位、少なくとも８個のサブ単位、少なくとも９個のサブ
単位、少なくとも１０個のサブ単位、少なくとも１１個のサブ単位、少なくとも１２個の
サブ単位、少なくとも１３個のサブ単位、少なくとも１４個のサブ単位、少なくとも１５
個のサブ単位、少なくとも１６個のサブ単位、少なくとも１７個のサブ単位、少なくとも
１８個のサブ単位、少なくとも１９個のサブ単位、少なくとも２０個のサブ単位、少なく
とも２１個のサブ単位、少なくとも２２個のサブ単位、少なくとも２３個のサブ単位、ま
たは少なくとも２４個のサブ単位を有する誘導体化された単一の直鎖状ＰＥＧ鎖である。
実施形態の別の群では、ＰＥＧ単位は、６〜７２個、６〜６０個、６〜４８個、６〜３
６個もしくは６〜２４個のサブ単位、７〜７２個、７〜６０個、７〜４８個、７〜３６個
もしくは７〜２４個のサブ単位、８〜７２個、８〜６０個、８〜４８個、８〜３６個もし
くは８〜２４個のサブ単位、９〜７２個、９〜６０個、９〜４８個、９〜３６個もしくは
９〜２４個のサブ単位、１０〜７２個、１０〜６０個、１０〜４８個、１０〜３６個もし
くは１０〜２４個のサブ単位、１１〜７２個、１１〜６０個、１１〜４８個、１１〜３６
個もしくは１１〜２４個のサブ単位、１２〜７２個、１２〜６０個、１２〜４８個、１２
〜３６個もしくは１２〜２４個のサブ単位、１３〜７２個、１３〜６０個、１３〜４８個
、１３〜３６個もしくは１３〜２４個のサブ単位、１４〜７２個、１４〜６０個、１４〜
４８個、１４〜３６個もしくは１４〜２４個のサブ単位、１５〜７２個、１５〜６０個、
１５〜４８個、１５〜３６個もしくは１５〜２４個のサブ単位、１６〜７２個、１６〜６
０個、１６〜４８個、１６〜３６個もしくは１６〜２４個のサブ単位、１７〜７２個、１
７〜６０個、１７〜４８個、１７〜３６個もしくは１７〜２４個のサブ単位、１８〜７２
個、１８〜６０個、１８〜４８個、１８〜３６個もしくは１８〜２４個のサブ単位、１９
〜７２個、１９〜６０個、１９〜４８個、１９〜３６個もしくは１９〜２４個のサブ単位
、２０〜７２個、２０〜６０個、２０〜４８個、２０〜３６個もしくは２０〜２４個のサ
ブ単位、２１〜７２個、２１〜６０個、２１〜４８個、２１〜３６個もしくは２１〜２４
個のサブ単位、２２〜７２個、２２〜６０個、２２〜４８個、２２〜３６個もしくは２２
〜２４個のサブ単位、２３〜７２個、２３〜６０個、２３〜４８個、２３〜３６個もしく
は２３〜２４個のサブ単位、または２４〜７２個、２４〜６０個、２４〜４８個、２４〜
３６個もしくは２４個のサブ単位を有する誘導体化された単一の直鎖状ＰＥＧ鎖である。
実施形態の別の群では、ＰＥＧ単位は、２〜７２個、２〜６０個、２〜４８個、２〜３
６個もしくは２〜２４個のサブ単位、２〜７２個、２〜６０個、２〜４８個、２〜３６個
もしくは２〜２４個のサブ単位、３〜７２個、３〜６０個、３〜４８個、３〜３６個もし
くは３〜２４個のサブ単位、３〜７２個、３〜６０個、３〜４８個、３〜３６個もしくは
３〜２４個のサブ単位、４〜７２個、４〜６０個、４〜４８個、４〜３６個もしくは４〜
２４個のサブ単位、５〜７２個、５〜６０個、５〜４８個、５〜３６個もしくは５〜２４
個のサブ単位を有する誘導体化された単一の直鎖状ＰＥＧ鎖である。
本明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて使用することができる例示的な
直鎖状ＰＥＧ単位は、下記の通りであり、

式中、波線は、並列コネクター単位への結合の部位を示し、
Ｒ２０は、ＰＥＧ結合単位であり、
Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位であり、
Ｒ２２は、ＰＥＧカップリング単位であり（すなわち、複数のＰＥＧサブ単位鎖を一緒に
カップリングするため）、
ｎは、２〜７２（好ましくは４〜７２、より好ましくは６〜７２、８〜７２、１０〜７２
、１２〜７２または６〜２４）から独立に選択され、
ｅは、２〜５であり、
各ｎ’は、１〜７２から独立に選択される。好ましい実施形態では、ＰＥＧ単位中に、少
なくとも６個、好ましくは少なくとも８個、少なくとも１０個、または少なくとも１２個
のＰＥＧサブ単位が存在する。一部の実施形態では、ＰＥＧ単位中に、７２個以下または
３６個以下のＰＥＧサブ単位が存在する。
好ましい実施形態では、ｎは、８または約８、１２または約１２、２４または約２４で
ある。
ＰＥＧ結合単位は、ＰＥＧ単位の部分であり、ＰＥＧ単位を並列コネクター単位へと連
結するように作用する。これに関しては、並列コネクター単位は、ＰＥＧ単位と結合を形
成する官能基を有する。並列コネクター単位へのＰＥＧ単位の結合のための官能基は、ジ
スルフィド結合またはチオエーテル結合を形成するスルフヒドリル基、ヒドラゾン結合を
形成するアルデヒド、ケトン、またはヒドラジン基、オキシム結合を形成するヒドロキシ
ルアミン、ペプチド結合を形成するカルボン酸基またはアミノ基、エステル結合を形成す
るカルボン酸基またはヒドロキシ基、スルホンアミド結合を形成するスルホン酸、カルバ
メート結合を形成するアルコール、およびスルホンアミド結合またはカルバメート結合ま
たはアミド結合を形成するアミンを含む。したがって、ＰＥＧ単位は、例えば、ジスルフ
ィド、チオエーテル、ヒドラゾン、オキシム、ペプチド、エステル、スルホンアミド、カ
ルバメート、またはアミド結合を介して、並列コネクター単位に結合させることができる
。典型的には、ＰＥＧ結合単位は、ＰＥＧ単位を並列コネクター単位へと結合させるとき
に起こる、環化付加、付加、付加／脱離または置換反応の生成物である。
ＰＥＧカップリング単位は、ＰＥＧ単位の部分であり、繰り返しＣＨ２ＣＨ２Ｏ−サブ
単位の２個またはそれ超の鎖を接続するように作用する非ＰＥＧ材料である。例示的な実
施形態では、ＰＥＧカップリング単位Ｒ２２は、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ
−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ２
〜１０アルキル−Ｏ−、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、または−Ｃ２〜１０アルキル−Ｎ
Ｈ−である。
例示的な実施形態では、ＰＥＧ結合単位Ｒ２０は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−
Ｓ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ
１〜１０アルキル−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−ＣＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜
１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０ア
ルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ１
〜１０アルキル、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｏ−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＣＯ２−、−Ｃ
１〜１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｃ（
Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２−Ｃ１
〜１０アルキル−、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜１０アルキル−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−
Ｃ１〜１０アルキル−Ｏ−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０アルキル−ＮＨ−、＝Ｎ
−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０アルキル−ＣＯ２−、＝Ｎ−（ＯまたはＮ）−Ｃ１〜１０
アルキル−Ｓ−、

であり、
各Ｒ２１は、独立に、−Ｃ１〜１０アルキル、−Ｃ２〜１０アルキル−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ２
〜１０アルキル−ＯＨ、−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ２、Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ（Ｃ
１〜３アルキル）、またはＣ２〜１０アルキル−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２であり、
各Ｒ２２は、独立に、−Ｃ１〜１０アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ１〜１０アルキル
−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ−、−Ｃ２〜１０アルキル−Ｏ−、−
Ｃ１〜１０アルキル−Ｓ−、または−Ｃ２〜１０アルキル−ＮＨ−である。
一部の実施形態では、Ｒ２０は、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、トリアゾール連結基、ま
たは−Ｓ−、またはマレイミド連結基、例えば、

であり、式中、波線は、並列コネクター単位への結合の部位を示し、アスタリスクは、Ｐ
ＥＧ単位内の結合の部位を示す。一部のこのような態様では、Ｒ２１は、Ｃ１〜１０アル
キル、−Ｃ２〜１０アルキル−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ２〜１０アルキル−ＯＨ、または−Ｃ２〜
１０アルキル−ＮＨ２である。
本明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて使用することができる例示的な
直鎖状ＰＥＧ単位は、下記の通りであり、

式中、波線は、並列コネクター単位への結合の部位を示し、各ｎは、４〜７２、６〜７２
、８〜７２、１０〜７２、１２〜７２、６〜２４、または８〜２４から独立に選択される
。一部の態様では、ｎは、約８、約１２、または約２４である。
本明細書に記載のように、ＰＥＧ単位は、これが結果として生じたリガンド−薬物コン
ジュゲートのクリアランスを改善させるが、腫瘍中に浸透するコンジュゲートの能力に有
意にインパクトを与えないように選択される。リガンド−薬物コンジュゲートの薬物単位
および放出可能なアセンブリー単位がマレイミドグルクロニドＭＭＡＥ薬物−リンカーの
疎水性と匹敵する疎水性を有する実施形態では（実施例において示すような）、使用のた
めに選択されるＰＥＧ単位は好ましくは、８個のサブ単位〜約２４個のサブ単位、より好
ましくは約１２個のサブ単位を有する。コンジュゲートの薬物単位および放出可能なアセ
ンブリー単位がマレイミドグルクロニドＭＭＡＥ薬物−リンカーの疎水性より大きな疎水
性を有する実施形態では、より多くのサブ単位を有するＰＥＧ単位を選択することができ
る。実施例セクションにおいて示される方法を使用して、特定の薬物−リンカーのための
サブ単位の理想的な数を同定することができる。
本発明の好ましい実施形態では、ＰＥＧ単位は、約３００ダルトン〜約５キロダルトン
；約３００ダルトン〜約４キロダルトン；約３００ダルトン〜約３キロダルトン；約３０
０ダルトン〜約２キロダルトン；または約３００ダルトン〜約１キロダルトンである。一
部のこのような態様では、ＰＥＧ単位は、少なくとも６個のサブ単位または少なくとも８
個、１０個または１２個のサブ単位を有する。一部のこのような態様では、ＰＥＧ単位は
、少なくとも６個のサブ単位または少なくとも８個、１０個または１２個のサブ単位であ
るが、７２個以下のサブ単位、好ましくは３６個以下のサブ単位を有する。
本発明の好ましい実施形態では、ＰＥＧ単位は別として、薬物−リンカー中に存在する
他のＰＥＧサブ単位は存在しない（すなわち、本明細書において提供するコンジュゲート
およびリンカーの他の構成要素のいずれにもＰＥＧサブ単位がない）。本発明の他の態様
では、ＰＥＧ単位は別として、薬物−リンカー中に存在する８個以下、７個以下、６個以
下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下または１個以下の他のポリエチレングリコ
ールサブ単位が存在する（すなわち、本明細書において提供するコンジュゲートおよびリ
ンカーの他の構成要素において８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３
個以下、２個以下、または１個以下の他のポリエチレングリコールサブ単位）。構成要素
は、ストレッチャー単位、並列コネクター単位、薬物単位、分岐単位、および放出可能な
アセンブリー単位を含む。
ＰＥＧサブ単位に言及するとき、および文脈によって、例えば、リガンド−薬物コンジ
ュゲートまたは中間化合物の集団に言及し、そして多分散性ＰＥＧを使用するとき、サブ
単位の数は、平均数を表すことができることを認識されたい。
ストレッチャー単位：
ストレッチャー単位（−Ｚ−）は、リガンド単位を並列コネクター単位へと連結するよ
うに作用する。これに関しては、ストレッチャー単位は、リガンド単位の官能基と結合を
形成することができる官能基を有する。ストレッチャー単位はまた、任意選択の分岐単位
または並列コネクター単位の官能基と結合を形成することができる官能基を有する。ＰＥ
Ｇ単位当たりそれ超の薬物単位を有するリガンド−薬物コンジュゲートおよび中間体にお
いて、ストレッチャー単位は、リガンド単位の官能基と結合を形成することができる官能
基、および分岐単位、並列コネクター単位、または薬物結合単位と結合を形成することが
できる官能基を有する。天然で、または化学操作によってのいずれかで、リガンド単位上
に存在することができる有用な官能基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル（
−ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭水化物のアノマーヒドロキシル基、お
よびカルボキシルが含まれる。一態様では、リガンド単位の官能基は、スルフヒドリルお
よびアミノである。ストレッチャー単位は、リガンド単位への結合のための、例えば、マ
レイミド基、アルデヒド、ケトン、カルボニル、またはハロアセトアミドを含むことがで
きる。
一部の態様では、薬物−リンカー化合物または中間体リンカー化合物のストレッチャー
単位は、リガンド単位（例えば、抗体）上に存在する求核基に対して反応性である求電子
基を有する。リガンド上の有用な求核基には、これらに限定されないが、スルフヒドリル
、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。リガンドの求核基のヘテロ原子は、ストレッ
チャー単位上の求電子基に対して反応性であり、ストレッチャー単位への共有結合を形成
する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロアセトアミ
ド基が含まれる。リガンドとしての抗体について、求電子基は、到達可能な求核基を有す
る抗体のための抗体結合のための好都合な部位を提供する。
別の実施形態では、ストレッチャー単位は、リガンド単位（例えば、抗体）上に存在す
る求電子基に対して反応性である求核基を有する反応部位を有する。リガンド上の有用な
求電子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンおよびカルボニル基が
含まれる。ストレッチャー単位の求核基のヘテロ原子は、リガンド上の求電子基と反応し
て、抗体への共有結合を形成することができる。ストレッチャー単位上の有用な求核基に
は、これらに限定されないが、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、アミノ、ヒドラジン、
チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれ
る。リガンドとしての抗体について、抗体上の求電子基は、求核性ストレッチャー単位へ
の結合のための好都合な部位を提供する。
一部の態様では、コンジュゲートは、並列コネクター単位に結合するための反応部位を
有するストレッチャー単位のセクションを使用し、リガンド単位のための反応部位を有す
るストレッチャー単位の別のセクションを導入して、調製することができる。一態様では
、ストレッチャー単位は、リガンド単位、例えば、抗体上に存在する求核基と反応性であ
る求電子基を有する反応部位を有する。求電子基は、リガンド（例えば、抗体）結合のた
めの好都合な部位を提供する。抗体上の有用な求核基には、これらに限定されないが、ス
ルフヒドリル、ヒドロキシルおよびアミノ基が含まれる。抗体の求核基のヘテロ原子は、
ストレッチャー単位上の求電子基に対して反応性であり、ストレッチャー単位への共有結
合を形成する。有用な求電子基には、これらに限定されないが、マレイミドおよびハロア
セトアミド基およびＮＨＳエステルが含まれる。
別の実施形態では、ストレッチャー単位は、リガンド単位上に存在する求電子基と反応
性である求核基を有する反応部位を有する。リガンド単位（例えば、抗体）上の求電子基
は、ストレッチャー単位への結合のための好都合な部位を提供する。抗体上の有用な求電
子基には、これらに限定されないが、アルデヒドおよびケトンのカルボニル基が含まれる
。ストレッチャー単位の求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体への共
有結合を形成することができる。ストレッチャー単位上の有用な求核基には、これらに限
定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒド
ラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。
一部の実施形態では、ストレッチャー単位は、ストレッチャー単位のマレイミド基を介
してリガンド単位の硫黄原子と結合を形成する。硫黄原子は、リガンド単位のスルフヒド
リル基に由来することができる。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は、式ＸＶ
ａおよびＸＶｂの角カッコ内のものを含み、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまた
はその中間体内の結合を示し、Ｒ１７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘ
テロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−
アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０
アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜
Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１
〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−
Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘ
テロアルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ
１〜Ｃ８アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ１０アル
キレン−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ
）−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ
３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロ
シクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ（
＝Ｏ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−
Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３〜Ｃ
８カルボシクロ−ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−ＮＨ−、−アリーレン−ＮＨ
−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−ＮＨ−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アル
キレン−ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−ＮＨ−、−
（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシ
クロ−ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−ＮＨ−、−（
Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレ
ン−Ｓ−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｓ−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−Ｓ−、−
Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−Ｓ−、−アリーレン−Ｓ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−
アリーレン−Ｓ−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アル
キレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ
１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−Ｓ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−
（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｓ−、または−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−Ｓ−である。Ｒ１７置換基のいずれかは、置換されていてもよく、または
置換されていなくてもよい。一部の態様では、Ｒ１７置換基は、非置換である。一部の態
様では、Ｒ１７置換基は、任意選択で置換されている。一部の態様では、Ｒ１７基は、塩
基性単位、例えば、−（ＣＨ２）ｘＮＨ２、−（ＣＨ２）ｘＮＨＲａ、および−（ＣＨ２
）ｘＮＲａ ２（式中、ｘは、１〜４の整数であり、各Ｒａは、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ
１〜６ハロアルキルからなる群から独立に選択されるか、または２個のＲａ基はそれらが
結合している窒素と合わさり、アゼチジニル、ピロリジニルまたはピペリジニル基を形成
する）で任意選択で置換されている。明確に示さない場合でさえ、ｐは、１〜１４である
ことを理解すべきである。
例示的なストレッチャー単位は、式ＸＶａのものであり、Ｒ１７は、−Ｃ２〜Ｃ５アル
キレン−Ｃ（＝Ｏ）−であり、アルキレンは、塩基性単位、例えば、−（ＣＨ２）ｘＮＨ
２、−（ＣＨ２）ｘＮＨＲａ、および−（ＣＨ２）ｘＮＲａ ２（式中、ｘは、１〜４の整
数であり、各Ｒａは、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ１〜６ハロアルキルからなる群から独立
に選択されるか、または２個のＲａ基はそれらが結合している窒素と合わさり、アゼチジ
ニル、ピロリジニルまたはピペリジニル基を形成する）で任意選択で置換されている。例
示的な実施形態は、下記の通りである。
置換スクシンイミドは、下記で示すような加水分解された形態で存在し得ることが理解
される。
リガンドへのコンジュゲーション前の例示的なストレッチャー単位は、下記を含む。
ストレッチャー単位のアミノ基は、合成の間にアミノ保護基、例えば、酸に不安定な保
護基（例えば、ＢＯＣ）によって適切に保護し得ることが理解される。
さらに別の例示的なストレッチャー単位は、式ＸＶｂのものであり、Ｒ１７は、−（Ｃ
Ｈ２）５−である：
別の実施形態では、ストレッチャー単位は、リガンド単位の硫黄原子とストレッチャー
単位の硫黄原子との間のジスルフィド結合を介して、リガンド単位へと連結している。こ
の実施形態の代表的なストレッチャー単位を、式ＸＶＩの角カッコ内に示し、波線は、リ
ガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合を示し、Ｒ１７は、式ＸＶａおよ
びＸＶｂについて上記の通りである。
さらに別の実施形態では、ストレッチャーの反応性基は、リガンドの第一級または第二
級アミノ基と結合を形成することができる反応部位を含有する。これらの反応部位の例に
は、これらに限定されないが、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、４−
ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエ
ステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアン酸エステルおよびイソチオシア
ン酸エステルが含まれる。この実施形態の代表的なストレッチャー単位を、式ＸＶＩＩａ
、ＸＶＩＩｂ、およびＸＶＩＩｃの角カッコ内に示し、波線は、リガンド−薬物コンジュ
ゲートまたはその中間体内の結合を示し、Ｒ１７は、式ＸＶａおよびＸＶｂについて上記
の通りである。

さらに別の実施形態では、ストレッチャーの反応性基は、リガンド上に存在することが
できる修飾された炭水化物の（−ＣＨＯ）基に対して反応性である反応部位を含有する。
例えば、炭水化物は、試薬、例えば、過ヨウ素酸ナトリウムを使用して穏やかに酸化する
ことができ、酸化された炭水化物のこのように得られた（−ＣＨＯ）単位は、官能基、例
えば、ヒドラジド、オキシム、第一級または第二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバ
ゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジド、例えば、Ｋａｎｅｋｏ
， Ｔ．ら（１９９１年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２巻：１３３〜４１
頁によって記載されたものを含有するストレッチャーと縮合させることができる。この実
施形態の代表的なストレッチャー単位を、式ＸＶＩＩＩａ、ＸＶＩＩＩｂ、およびＸＶＩ
ＩＩｃの角カッコ内に示し、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内
の結合を示し、Ｒ１７は、式ＸＶａおよびＸＶｂについて上記の通りである。
本発明の一部の実施形態では、ストレッチャー単位の長さを延長することが望ましい。
したがって、ストレッチャー単位は、さらなる構成要素を含むことができる。例えば、ス
トレッチャー単位は、式ＸＶａ１の角カッコ内のものを含むことができ、

式中、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体の残部への結合を示し、
Ｒ１７は、上記の通りであり、好ましくはＲ１７は、−Ｃ２〜Ｃ５アルキレン−Ｃ（＝
Ｏ）−であり、アルキレンは、塩基性単位、例えば、−（ＣＨ２）ｘＮＨ２、−（ＣＨ２
）ｘＮＨＲａ、および−（ＣＨ２）ｘＮＲａ ２で任意選択で置換されており、ｘは、１〜
４の整数であり、各Ｒａは、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ１〜６ハロアルキルからなる群か
ら独立に選択されるか、または２個のＲａ基はそれらが結合している窒素と合わさり、ア
ゼチジニル、ピロリジニルまたはピペリジニル基を形成し、
Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−アリーレン−
、−Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０ア
ルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０ア
ルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、または−
（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−である。好ましい実施形態では
、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−である。
本発明の好ましい態様では、ストレッチャー単位は、約１０００ダルトン以下、約５０
０ダルトン以下、約２００ダルトン以下、約３０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００
ダルトンから約１０００ダルトン、約３０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルト
ンから約５００ダルトン、または約３０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルトン
から約２００ダルトンの質量を有する。
任意選択の分岐単位（Ａ）
薬物−リンカーへと、および最終的に、リガンドへとさらなる薬物を加えることが望ま
しい場合、分岐単位がリガンド−薬物コンジュゲート中に含まれる。分岐単位は、２〜４
個の並列コネクター単位と、２〜４個の薬物結合単位と、または２〜４個の−Ｘ−Ｄ単位
と、共有結合を形成することができる。したがって、分岐単位は、ｍが１超である場合、
構造、例えば、


において、複数の


部分の結合を可能とする。分岐単位は、リンカー内の分岐を可能とする方法で設計される
ことを当業者は認識する。分岐単位として作用するために、分岐単位は、リガンド−薬物
コンジュゲートまたはその中間体内の結合のための、少なくとも第１、第２および第３の
結合部位を有する。言い換えると、分岐単位は、少なくとも三官能性でなくてはならない
。ｍが３または４である実施形態では、分岐単位は、リガンド−薬物コンジュゲートまた
はその中間体内の共有結合による結合のための４個または５個の部位を有する。一部の態
様では、分岐単位は、単一の単位であり、または２個もしくはそれ超のサブ単位（例えば
、２〜１０個、好ましくは２〜５個、例えば、２個、３個、４個、もしくは５個）を有し
て、必要な数の結合部位を提供し、分岐単位またはそのサブ単位は、独立に選択した天然
もしくは非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、またはポリアミンま
たはこれらの組合せである。必要な数の結合を有するために必要に応じて、アミノ酸、ア
ミノアルコール、アミノアルデヒド、またはポリアミンの少なくとも１つは、ＬＰ単位、
および／またはＺ単位、および／またはＡＤ単位および／またはＸ−Ｄ部分のための結合
部位を提供する官能化側鎖を有する。一部の態様では、１個または複数のアミノ酸（複数
可）、アミノアルコール（複数可）、またはアミノアルデヒド（複数可）は非天然であり
、結合部位のための１個または複数の官能化側鎖を有するように修飾される。例示的な官
能化されたアミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒドは、例えば、アジドま
たはアルキン官能化されたアミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒド（例え
ば、クリックケミストリーを使用した結合のためのアジド基またはアルキン基を有するよ
うに修飾されたアミノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒド）を含む。
各アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒドまたはポリアミンは、天然もしくは
非天然でよい。同様に、各アミノ酸は、Ｄ−またはＬ−異性体でよい。分岐単位が２個の
並列コネクター単位、２個のＸ−Ｄ単位または２個の薬物結合単位を接続することができ
る一部の実施形態では、この分岐単位は、アセンブルされると、下記で示す式、

を有し、式中、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の３個の結合
部位の２つまたは３つを示し、Ｒ１１０は、

であり、式中、アスタリスクは、ｘと標識されている炭素への結合を示し、波線は、分岐
単位の３個の結合部位の１つを示し、
各Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、好ましくは水素またはＣＨ３から独立
に選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＨから独立に選択され、
各Ｙ’は、ＮＨ、Ｏ、またはＳから独立に選択され、
下付き文字ｃは、独立に、１〜１０、好ましくは１〜３の範囲の整数である。
好ましい実施形態では、Ｒ１１０は、

ではない。
分岐単位が２個の並列コネクター単位または２個の薬物結合単位に接続することができ
る一部の実施形態では、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体中の各分岐単位
は、アセンブルされると、下記で示す式を独立に有し、

式中、下付き文字ｎは、１〜４であり、
Ｘｂは、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、および−Ｓ（＝Ｏ）−からなる群
から選択され、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、フェニル、およびＣ２〜Ｃ５複素環（好まし
くはＨまたはＣ１〜３アルキル）からなる群から独立に選択され、波線は、リガンド−薬
物コンジュゲートまたはその中間体内の分岐単位の共有結合による結合を示す。
分岐単位のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒドまたはポリアミンは、本明
細書に記載のような任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン（好ましくは
任意選択で置換されているＣ１〜１２ヘテロアルキレン）、任意選択で置換されているＣ
３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択
で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロで任意選択で置き換えることができる。任意選
択で置換されているヘテロアルキレン、複素環、アリーレンまたはカルボシクロは、リガ
ンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合のための官能基を有する。
任意選択の置換基は、（＝Ｏ）、−Ｘ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ２、−ＮＲ３、
＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−
ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、
−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ
Ｒ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ− ３
、−ＰＯ３Ｈ２、−ＡｓＯ２Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、
−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、または−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２を含み、式中、各
Ｘは、独立に、ハロゲン：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであり、各Ｒは、独立に、
−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−Ｃ６〜Ｃ２０アリール、−Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護
基またはプロドラッグ部分である。好ましい任意選択の置換基は、（＝Ｏ）、−Ｘ、−Ｒ
、−ＯＲ、−ＳＲ、および−ＮＲ２である。
例示的な分岐単位は、下記に示すようなリシンであり、波線およびアスタリスクは、リ
ガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の共有結合的連結を示す。
本明細書において提供する特定の中間化合物についての式において、任意選択の分岐単
位は−Ｘ−Ｄ部分への２〜４個の共有結合による結合を形成することができるが、まだそ
こに結合していないことを認識されたい。そのような実施形態では、分岐単位は、部分的
にアセンブルされた形態であり、したがって、−Ｘ−Ｄ部分の放出可能なアセンブリー単
位上に存在する基に対して反応性である２個またはそれ超の官能基を含む。特に好ましい
反応性官能基は、ジスルフィド結合またはチオエーテルを形成することができるスルフヒ
ドリル基を含む。
本発明の好ましい態様では、分岐単位は、約１０００ダルトン以下、約５００ダルトン
以下、約２００ダルトン以下、約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルトンか
ら約１０００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルトンから約５
００ダルトン、または約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルトンから約２０
０ダルトンの質量を有する。
薬物結合単位（ＡＤ）
薬物−リンカー部分へと、および最終的には、リガンドへとさらなる−Ｘ−Ｄ部分（す
なわち、薬物単位へと共有結合で結合している放出可能なアセンブリー単位）を加えるこ
とが望ましい場合、分岐単位と同様に、薬物結合単位がリガンド−薬物コンジュゲート中
に含まれる。薬物結合単位は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の配置
によって、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体の構成要素への連結のための
２個の結合部位または３個の結合部位を有する。薬物結合単位は、薬物−リンカー部分内
の、および最終的にはリガンド単位へのさらなる−Ｘ−Ｄ単位の結合を実現するような役
割を果たす任意の基でよいことを当業者は認識する。一部の実施形態では、各薬物結合単
位は、単一の単位であるか、または２個もしくはそれ超のサブ単位（例えば、２〜１０個
、好ましくは２〜５個、例えば、２個、３個、４個、もしくは５個）を有し、薬物結合単
位またはそのサブ単位は、天然もしくは非天然のアミノ酸、アミノアルコール、アミノア
ルデヒド、ジアミン、またはポリアミンまたはこれらの組合せから独立に選択される。必
要に応じて必要な数の結合を有するために、アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデ
ヒド、またはポリアミンの少なくとも１つは、ＬＰ単位、および／またはＺ単位、および
／またはＡＤ単位および／またはＸ−Ｄ部分のための結合部位を提供する官能化側鎖を有
する。アミノ酸（複数可）、アミノアルコール（複数可）、またはアミノアルデヒド（複
数可）は非天然でよく、修飾されて放出可能なアセンブリー単位への結合のための１個ま
たは複数の官能化側鎖を有することができる。例示的な官能化されたアミノ酸、アミノア
ルコール、またはアミノアルデヒドは、例えば、アジドまたはアルキン官能化されたアミ
ノ酸、アミノアルコール、またはアミノアルデヒド（例えば、クリックケミストリーを使
用した結合のためのアジド基またはアルキン基を有するように修飾されたアミノ酸、アミ
ノアルコール、またはアミノアルデヒド）を含む。
ＡＤ単位が３個の結合部位を有する一部の態様では、ＡＤ単位は、そのアセンブルされ
た形態で、下記で示す式、

を有し、式中、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の３個のＡＤ
結合部位の２つまたは３つを示し、Ｒ１１０は、

であり、式中、アスタリスクは、ｘと標識されている炭素への結合を示し、波線は、３個
の結合部位の１つを示し、
Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、好ましくは水素またはＣＨ３から独立に
選択され、
Ｙは、ＮまたはＣＨから独立に選択され、
Ｙ’は、ＮＨ、Ｏ、またはＳから独立に選択され、
下付き文字ｃは、１〜１０、好ましくは１〜３から独立に選択される。
好ましい態様では、Ｒ１１０は、

ではない。
ＡＤ単位が２個の結合部位を有する実施形態（すなわち、末端ＡＤ単位）では、上で示
した結合部位の１つは、例えば、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１〜３非置換アルキル基で置き換え
ることができる。
ＡＤ単位が３個の結合部位を有する一部の実施形態では、ＡＤ単位は、そのアセンブル
された形態で、下記で示す式を独立で有し、

式中、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合部位を示し、ｘ
、Ｒ１００およびＲ１１０は、直前に従前記載された通りであり、
Ｒ１１１は、ｐ−ヒドロキシベンジル、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブ
チル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮ
Ｈ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（Ｃ
Ｈ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ
３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）
４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３
ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２Ｎ
Ｈ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、

である。
ＡＤ単位が３個の結合部位を有する一部の実施形態では、ＡＤ単位は、２個またはそれ
超のアミノ酸からなる。このような例示的なアミノＡＤ単位は、下記で示すようなシステ
イン−アラニンであり、波線およびアスタリスクは、リガンド−薬物コンジュゲートまた
はその中間体内の結合を示す。

一部の実施形態では、アスタリスクは、放出可能なアセンブリー単位への共有結合による
結合を示す。
ＡＤ単位が２個の結合部位を有する一部の実施形態では、ＡＤ単位は、２個またはそれ
超のアミノ酸からなる。このような例示的なアミノＡＤ単位は、下記で示すようなシステ
イン−アラニンであり、波線およびアスタリスクは、リガンド−薬物コンジュゲートまた
はその中間体内の結合を示す。

一部の実施形態では、アスタリスクは、放出可能なアセンブリー単位への共有結合による
結合を示す。
ＡＤ単位のアミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒドまたはポリアミンは、本明
細書に記載のような任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン（好ましくは
任意選択で置換されているＣ１〜１２ヘテロアルキレン）、任意選択で置換されているＣ
３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択
で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロで任意選択で置き換えられることができる。任
意選択で置換されているヘテロアルキレン、複素環、アリーレンまたはカルボシクロは、
リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合のための官能基を有する。任意
選択の置換基は、（＝Ｏ）、−Ｘ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ
、ＣＸ３、ＣＮ、ＯＣＮ、ＳＣＮ、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、ＮＣＳ、ＮＯ、ＮＯ２、＝Ｎ２、Ｎ３、
ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、ＳＯ３ −、ＳＯ３Ｈ、Ｓ（＝
Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ
）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、ＰＯ− ３、ＰＯ３Ｈ２、ＡｓＯ２Ｈ２、Ｃ（＝
Ｏ）Ｒ、Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯ２−、Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、Ｃ（＝Ｏ
）ＳＲ、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、またはＣ（＝ＮＲ）Ｎ
Ｒ２を含み、式中、各Ｘは、独立に、ハロゲン：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉであ
り、各Ｒは、独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−Ｃ６〜Ｃ２０アリール、−Ｃ３
〜Ｃ１４複素環、保護基またはプロドラッグ部分である。好ましい任意選択の置換基は、
（＝Ｏ）、Ｘ、Ｒ、ＯＲ、ＳＲ、およびＮＲ２である。
薬物結合単位は直鎖または分岐状でよく、式Ｂ、

によって表すことができ、式中、
ＢＢ１は、アミノ酸、任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン（好ましく
は任意選択で置換されているＣ１〜１２ヘテロアルキレン）、任意選択で置換されている
Ｃ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選
択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロから独立に選択され、
下付き文字ｕは、０〜４から独立に選択され、波線は、リガンド−薬物コンジュゲートま
たはその中間体内の共有結合による結合部位を示す。任意選択で置換されているヘテロア
ルキレン、複素環、アリーレンまたはカルボシクロは、ＢＢサブ単位の間およびリガンド
−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合のための官能基を有する。
一部の実施形態では、ＢＢ１の少なくとも１つの場合は、アミノ薬物結合単位を定義す
るアミノ酸である。下付き文字ｕは、０、１、２、３、または４でよい。一部の態様では
、ＢＢ１はアミノ酸であり、ｕは０である。一部の実施形態では、ＡＤ単位は、２個以下
の任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で置換されているＣ
３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任意選択
で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロを含む。一部の実施形態では、ＡＤ単位は、１
個以下の任意選択で置換されているＣ１〜２０ヘテロアルキレン、任意選択で置換されて
いるＣ３〜８ヘテロシクロ、任意選択で置換されているＣ６〜１４アリーレン、または任
意選択で置換されているＣ３〜Ｃ８カルボシクロを含む。任意選択で置換されているヘテ
ロアルキレン、複素環、アリーレンまたはカルボシクロは、ＢＢサブ単位の間およびリガ
ンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合のための官能基を有する。
アミノ薬物結合単位のアミノ酸は、アルファ、ベータ、またはガンマアミノ酸でよく、
天然もしくは非天然でよい。アミノ酸は、ＤまたはＬ異性体でよい。アミノ薬物結合単位
内のまたはコンジュゲート（もしくはリンカー）の他の構成要素との結合は、例えば、ア
ミノ、カルボキシ、または他の官能基を介してでよい。任意選択で置換されているヘテロ
アルキレンは、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の結合のための官能基
を有する。官能基の独立した活性化および反応のための方法は、当技術分野で周知である
。
本明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて、薬物結合単位（アミノ薬物結
合単位を含めた）のアミノ酸は、チオール含有アミノ酸のＤまたはＬ異性体から独立に選
択することができる。チオール含有アミノ酸は、例えば、システイン、ホモシステイン、
またはペニシラミンでよい。
別の実施形態では、薬物結合単位（アミノ薬物結合単位を含めた）を構成するアミノ酸
は、下記のアミノ酸：アラニン（β−アラニンを含めた）、アルギニン、アスパラギン酸
、アスパラギン、システイン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェ
ニルアラニン、リシン、ロイシン、メチオニン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプ
トファン、プロリン、オルニチン、ペニシラミン、Ｂ−アラニン、アミノアルキン酸、ア
ミノアルカン二酸、ヘテロシクロ−カルボン酸、シトルリン、スタチン、ジアミノアルカ
ン酸、およびその誘導体のＬ−またはＤ−異性体からなる群から独立に選択することがで
きる。
好ましいアミノ酸は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン、オルニチン、リシ
ン、セリン、トレオニン、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セレ
ノシステイン、プロリン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、バリン、お
よびアラニンを含む。
本明細書に記載されている特定の化合物、例えば、薬物結合単位が、−Ｘ−Ｄへの共有
結合による結合を形成することができるが、−Ｘ−Ｄへとまだ接続していないものについ
ての式において、薬物結合単位は、部分的にアセンブルされた形態であり、したがって、
放出可能なアセンブリー単位上に存在する基に対して反応性である官能基を含むことが理
解される。特に好ましい反応性官能基は、スルフヒドリル基を含み、ジスルフィド結合ま
たはチオエーテル結合を形成する。一部の態様では、反応性硫黄原子は、保護基によって
保護される。チオール保護基、またはコンジュゲーション化学における使用は当技術分野
で周知であり、例えば、アルキル（ａｌｋｙ）チオール（例えば、ｔ−ブチルチオール、
エタンチオール、２−プロパンチオール、２−ピリジンチオール）保護基、芳香族チオー
ル保護基（例えば、２−ピリジンチオール）およびアセチル保護基を含む。
本発明の好ましい態様では、薬物結合単位は、約１０００ダルトン以下、約５００ダル
トン以下、約２００ダルトン以下、約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルト
ンから約１０００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルトンから
約５００ダルトン、または約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００ダルトンから約
２００ダルトンの質量を有する。
放出可能なアセンブリー単位（Ｘ）
放出可能なアセンブリー単位（−Ｘ−）は、薬物単位をリガンド−薬物コンジュゲート
の残部へと連結させる。放出可能なアセンブリー単位の主要な機能は、リガンドによって
標的化された部位において遊離薬物を放出することである。このように、放出可能なアセ
ンブリー単位は、薬物単位への切断可能な連結を形成することができるか、または切断可
能な連結を含有し、薬物を放出する（例えば、抗原が媒介する内部移行によって）。好ま
しい実施形態では、放出可能なアセンブリー単位のための放出機序は、酵素的放出機序ま
たはジスルフィド消失機序である。酵素的放出機序のための認識部位は、例えば、ペプチ
ド切断部位または糖切断部位（例えば、グルクロニド切断部位）でよい。
放出可能なアセンブリー単位は、１〜３個の構成要素、切断可能な単位（ＱＣＬ）、任
意選択のスペーサー単位（ＱＳＰ）、および任意選択の共有結合による結合単位（ＱＣＯ
）を含むことができる。スペーサー単位は、存在するとき、切断可能な単位および薬物単
位を連結するように作用する。したがって、スペーサー単位が存在する実施形態では、ス
ペーサー単位は薬物単位へと直接連結し、切断可能な単位はスペーサー単位を介して薬物
単位へと連結する。スペーサー単位が存在しない実施形態では、切断可能な単位は、薬物
単位へと直接連結する。
したがって、放出可能なアセンブリー単位は、下記の式によって表すことができ、ＱＣ
Ｏは、共有結合による結合単位であり、ＱＳＰは、スペーサー単位であり、ＱＣＬは、切
断可能な単位である。共有結合による結合単位は、存在しても、または存在しなくてもよ
く、スペーサー単位は、存在しても、または存在しなくてもよい。アスタリスクは、薬物
単位への共有結合による結合の部位を示し、波線は、（場合によってＬＰ、Ａ、またはＡ
Ｄへの）リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体内の共有結合による結合を示す
。
スペーサー単位が存在せず、かつ共有結合による結合単位が存在する実施形態では、−
Ｘ−Ｄは、式ＸＩＸによって表すことができ、共有結合による結合単位に隣接する波線は
、リンカーの残部（場合によって、ＬＰ、Ａ、またはＡＤ）への共有結合による結合を示
す。
共有結合による結合単位が存在せず、かつスペーサー単位が存在しない実施形態では、
−Ｘ−Ｄは、式ＸＸによって表すことができ、切断可能な単位に隣接する波線は、リンカ
ーの残部（場合によって、ＬＰ、Ａ、またはＡＤ）への共有結合による結合を示す。
スペーサー単位が存在し、かつ共有結合による結合単位が存在する実施形態では、−Ｘ
−Ｄは、式ＸＸＩによって表すことができ、共有結合による結合単位に隣接する波線は、
リンカーの残部（場合によって、ＬＰ、Ａ、またはＡＤ）への共有結合による結合を示す
。
スペーサー単位が存在し、かつ共有結合による結合単位が存在しない実施形態では、−
Ｘ−Ｄは、式ＸＸＩＩによって表すことができ、切断可能な単位またはスペーサー単位に
隣接する波線は、リンカーの残部（場合によって、ＬＰ、Ａ、またはＡＤ）への共有結合
による結合を示す。
−Ｘ−Ｄ（式ＸＩＸ〜ＸＸＩＶ）についての上記の定義の任意のものは、本明細書にお
いて提供する式および実施形態のいずれか、ならびに選択した実施形態のいずれかにおい
て使用することができることを当業者は理解する。各Ｘ、Ｄ、および各ＱＣＯ、ＱＣＬ、
またはＱＳＰ単位は、同じかまたは異なってもよい。
本発明の好ましい態様では、放出可能なアセンブリー単位は、約５０００ダルトン以下
、約４０００ダルトン以下、約３０００ダルトン以下、約２０００ダルトン以下、約１０
００ダルトン以下、約８００ダルトン以下、または約５００ダルトン以下の質量を有する
。一部の態様では、放出可能なアセンブリー単位は、約１００ダルトンから、もしくは約
２００ダルトンから、もしくは約３００ダルトンから約５０００ダルトン、約１００ダル
トンから、もしくは約２００ダルトンから、もしくは約３００ダルトンから約４０００ダ
ルトン、約１００ダルトンから、もしくは約２００ダルトンから、もしくは約３００ダル
トンから約３０００ダルトン、約１００ダルトンから、もしくは約２００ダルトンから、
もしくは約３００ダルトンから約２０００ダルトン、約１００ダルトンから、もしくは約
２００ダルトンから、もしくは約３００ダルトンから約１０００ダルトン、約１００ダル
トンから、もしくは約２００ダルトンから、もしくは約３００ダルトンから約８００ダル
トン、または約１００ダルトンから、もしくは約２００ダルトンから、もしくは約３００
ダルトンから約５００ダルトンの質量を有する。
中間体リンカーまたは薬物−リンカー化合物の構成要素は、リガンド単位を欠いている
リガンド−薬物コンジュゲートと同じ様式で連結することができることを当業者は理解す
る。
切断可能な単位（ＱＣＬ）
切断可能な単位は、放出可能なアセンブリー単位の、存在しなければならない唯一の構
成要素である。一部の態様では、切断可能な単位は、薬物単位と切断可能な結合を形成す
る。一部の態様では、切断可能な単位は、スペーサー単位と切断可能な結合を形成する。
一部の態様では、切断可能な結合は切断可能な単位内にあるが、（例えば、切断に続く１
，６−脱離反応による）遊離薬物の放出を可能とする。切断可能な結合を形成するための
官能基は、例えば、ジスルフィド結合を形成するためのスルフヒドリル基、ヒドラゾン結
合を形成するためのアルデヒド、ケトン、またはヒドラジン基、オキシム結合を形成する
ためのヒドロキシルアミン基、ペプチド結合を形成するためのカルボン酸基またはアミノ
基、エステル結合を形成するためのカルボン酸基またはヒドロキシ基、およびグリコシド
結合を形成するための糖を含むことができる。
切断可能な単位の性質は、広範に変化することができる。例えば、切断可能なリンカー
は、ジスルフィド交換によって切断可能なジスルフィド含有リンカー、酸性ｐＨで切断可
能な酸に不安定なリンカー、ならびにヒドロラーゼ（例えば、ペプチダーゼ、エステラー
ゼ、およびグルクロニダーゼ）によって切断可能なリンカーを含む。
切断可能な単位の構造および配列は、単位が標的部位において存在する酵素の作用によ
って切断されるようなものでよい。他の態様では、切断可能な単位は、他の機序によって
切断可能であり得る。切断可能な単位は、１個または複数の切断部位を含むことができる
。
一部の実施形態では、切断可能な単位は、１個のアミノ酸、またはアミノ酸の１個もし
くは複数の配列を含む。切断可能な単位は、例えば、モノペプチド、ジペプチド、トリペ
プチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペ
プチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチド単位を含
むことができる。
切断可能な単位の各アミノ酸は、天然もしくは非天然および／またはＤ−もしくはＬ−
異性体でよく、ただし当然ながら、切断可能な結合が存在する。一部の実施形態では、切
断可能な単位は、天然アミノ酸のみを含む。一部の実施形態では、切断可能な単位は、連
続した配列における１〜１２個のアミノ酸を含む。
一部の実施形態では、切断可能な単位の各アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパ
ラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニル
アラニン、リシン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン
、トリプトファン、バリン、システイン、メチオニン、セレノシステイン、オルニチン、
ペニシラミン、β−アラニン、アミノアルカン酸、アミノアルキン酸、アミノアルカン二
酸、アミノ安息香酸、アミノ−ヘテロシクロ−アルカン酸、ヘテロシクロ−カルボン酸、
シトルリン、スタチン、ジアミノアルカン酸、およびその誘導体からなる群から独立に選
択される。一部の実施形態では、各アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸
、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルアラニン
、リシン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン、トリプ
トファン、バリン、システイン、メチオニン、およびセレノシステインからなる群から独
立に選択される。一部の実施形態では、各アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラ
ギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミン酸、グルタミン、フェニルア
ラニン、リシン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニン、イソロイシン、プロリン、
トリプトファン、およびバリンからなる群から独立に選択される。一部の実施形態では、
各アミノ酸は、タンパク新生または非タンパク新生アミノ酸から選択される。
別の実施形態では、切断可能な単位の各アミノ酸は、下記のＬ−（天然）アミノ酸：ア
ラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタミ
ン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リシン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオニ
ン、イソロイシン、トリプトファンおよびバリンからなる群から独立に選択される。
別の実施形態では、切断可能な単位の各アミノ酸は、下記の、これらの天然アミノ酸：
アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、グリシン、グルタ
ミン酸、グルタミン、フェニルアラニン、リシン、ロイシン、セリン、チロシン、トレオ
ニン、イソロイシン、トリプトファンおよびバリンのＤ−異性体からなる群から独立に選
択される。
一部の実施形態では、切断可能な単位と薬物単位またはスペーサー単位との間の結合は
、腫瘍関連プロテアーゼを含めた１種または複数の酵素によって酵素的に切断し、薬物単
位（−Ｄ）を遊離することができ、これは一実施形態では、放出によってｉｎ ｖｉｖｏ
でプロトン化し、薬物（Ｄ）を提供する。
有用な切断可能な単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼによる酵素的切
断へのこれらの選択性において設計および最適化することができる。一実施形態では、切
断可能な単位と薬物単位またはスペーサー単位との間の連結（または結合）は、その切断
がカテプシンＢ、ＣおよびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるもので
ある。
ある特定の実施形態では、切断可能な単位は、天然アミノ酸のみを含むことができる。
他の実施形態では、切断可能な単位は、非天然アミノ酸のみを含むことができる。一部の
実施形態では、切断可能な単位は、非天然アミノ酸に連結した天然アミノ酸を含むことが
できる。一部の実施形態では、切断可能な単位は、天然アミノ酸のＤ−異性体に連結した
天然アミノ酸を含むことができる。
例示的な切断可能な単位は、ジペプチド−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−また
は−Ｖａｌ−Ａｌａである。
一部の実施形態では、切断可能な単位は、ペプチドを含み、１〜１２個のアミノ酸を含
む。一部のこのような実施形態では、ペプチドは、薬物単位に直接的にコンジュゲートし
、スペーサー単位は存在しない。一部のこのような実施形態では、ペプチドは、ジペプチ
ドである。
一部の実施形態では、切断可能な単位−ＣＵ−は、−（−ＡＭ−）１〜１２−、または
（−ＡＭ−ＡＭ−）１〜６によって表され、ＡＭは、出現する毎に独立に、天然もしくは
非天然アミノ酸から選択される。一態様では、ＡＭは、出現する毎に独立に、天然アミノ
酸から選択される。アミノ酸は典型的には、アミノ酸中に存在する機能的単位、例えば、
そのカルボン酸またはアミノ末端を通して薬物単位またはスペーサー単位へと連結してい
ることを当業者は認識する。
他の態様では、切断可能な単位は、糖切断部位を含む。一部のこのような実施形態では
、切断可能な単位は、酸素グリコシド結合を介して自壊的基に連結している糖部分（Ｓｕ
）を含む。このような態様では、自壊的基は、切断可能な単位、ＱＣＬの部分と考えられ
る。「自壊的基」は、３つの離間した化学部分（すなわち、糖部分（グリコシド結合を介
した）、薬物単位（直接的、またはスペーサー単位ＱＳＰを介して間接的に）、およびＬ
Ｐ単位、Ａ単位またはＡＤ単位（直接的、または共有結合による結合単位ＱＣＯを介して
間接的に））を一緒に共有結合的に連結することができる三官能性化学部分である。グリ
コシド結合は、標的部位において切断され、薬物の放出をもたらす自壊的反応順序を開始
させることができるものである。
したがって、切断可能な単位は、グリコシド結合（−Ｏ’−）を介して式の自壊的基（
Ｋ）に連結している糖部分（Ｓｕ）を含むことができ、

式中、自壊的基Ｋは、場合によって、薬物単位との共有結合（直接的、またはスペーサー
単位を介して間接的に）およびＬＰ、ＡＤ、またはＡとの共有結合（直接的、または共有
結合による結合単位を介して間接的に）を形成する。
切断可能な単位は、例えば、式、

によって表すことができ、式中、Ｓｕは、糖部分であり、−Ｏ’−は、酸素グリコシド結
合を表し、各Ｒは、独立に、水素、ハロゲン、−ＣＮ、または−ＮＯ２であり、波線は、
ＬＰ、ＡＤまたはＡへの結合（直接的、または共有結合による結合単位を通して間接的に
）を示し、アスタリスクは、薬物単位への結合（直接的、またはスペーサー単位を介して
間接的に−スペーサー単位は、存在するとき、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）−でよい）を示す。
一部のこのような実施形態では、糖切断部位は、ベータ−グルクロニダーゼによって認
識され、切断可能な単位はグルクロニド単位を含む。グルクロニド単位は、グリコシド結
合（−Ｏ’−）を介して式の自壊的基（Ｋ）に連結しているグルクロン酸を含むことがで
き、

式中、自壊的基Ｋは、場合によって、薬物単位との共有結合（直接的、またはスペーサー
単位を介して間接的に）およびＬＰ、ＡＤ、またはＡとの共有結合（直接的、または共有
結合による結合単位を介して間接的に）を形成する。
グルクロニド単位は、例えば、式、

によって表すことができ、式中、波線は、ＬＰ、ＡＤまたはＡへの共有結合による結合（
直接的、または共有結合による結合単位を通して間接的に）を示し、アスタリスクは、薬
物単位への共有結合による結合（直接的、またはスペーサー単位を介して間接的に）を示
す。
一部の実施形態では、切断可能な単位は、糖切断部位を含み、−Ｘ−Ｄは、下記の式、


によって表され、式中、Ｓｕは糖部分であり、−Ｏ’−は酸素グリコシド結合を表し、各
Ｒは、独立に、水素またはハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２または他の電子吸引基であり、Ｑ
ＣＯは、共有結合による結合単位であり、波形結合は、リンカー単位の残部（場合によっ
て、ＬＰ、ＡまたはＡＤ）への共有結合による結合を示す。
切断可能な単位がグルクロニド単位を含むとき、−Ｘ−Ｄは、例えば、下記の式、

によって表すことができ、式中、波形結合は、リンカー単位の残部への共有結合による結
合（場合によって、ＬＰ、ＡまたはＡＤ）を示し、ＱＣＯは、共有結合による結合単位で
ある。
一部の他の実施形態では、切断可能な単位自体は、硫黄原子を含み、これはスペーサー
単位または薬物単位の硫黄原子と結合を形成し、ジスルフィドまたは立体障害ジスルフィ
ドを形成することができる。ジスルフィドの２個の硫黄原子の間に切断が起こる。一部の
このような実施形態では、硫黄原子の１つは、薬物単位から切断され、ただし、さらなる
放出機序は存在せず、他の硫黄原子は薬物単位に結合したままであり、薬物単位の部分と
なる。
種々のジスルフィドリンカーは、当技術分野において公知であり、例えば、ＳＡＴＡ（
Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジ
ル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−
３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）、ＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカ
ルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、および
ＳＰＰ（Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート）を使用して
形成することができるものを含めて、本発明における使用のために適合させることができ
る。（例えば、Ｔｈｏｒｐｅら、１９８７年、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４７巻：５９２
４〜５９３１頁；Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋら、Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓにおい
て： Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａ
ｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ． Ｗ． Ｖｏｇｅｌ編、Ｏｘｆｏｒｄ
Ｕ． Ｐｒｅｓｓ、１９８７年を参照されたい。また米国特許第４，８８０，９３５号
を参照されたい。）
一部の実施形態では、切断可能な単位はｐＨ感受性であり、例えば、リソソーム中で加
水分解性である酸に不安定なリンカーを含む（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チ
オセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、またはケ
タール基）ものが使用され得る。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；同第５，
８２４，８０５号；同第５，６２２，９２９号；ＤｕｂｏｗｃｈｉｋおよびＷａｌｋｅｒ
、１９９９年、Ｐｈａｒｍ． Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３巻：６７〜１２３頁；Ｎ
ｅｖｉｌｌｅら、１９８９年、Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６４巻：１４６５３〜１４６
６１頁を参照されたい）。このようなリンカーは、中性ｐＨ条件、例えば、血液中のｐＨ
条件下で、相対的に安定的であるが、リソソームの近似のｐＨであるｐＨ５．５未満また
は５．０未満において不安定である。
一部の実施形態では、切断可能な単位は、薬物単位に直接コンジュゲートし、切断可能
な単位は、切断可能なペプチド、またはジスルフィド結合を介して薬物単位に連結してい
る。
スペーサー単位（ＱＳＰ）
スペーサー単位は、存在するとき、薬物単位を切断可能な単位へと連結するように作用
する。スペーサー単位は、２つの一般タイプのものである。自壊的および非自壊的。非自
壊的単位は、スペーサー単位の部分もしくは全てが切断後に薬物単位に結合したままであ
り、さらに分解もしくは自発的に崩壊して「遊離薬物」を生成してもよく、または薬物単
位自体の部分となってもよいものである。非自壊的単位の例には、これらに限定されない
が、グリシン−グリシン単位および単一のグリシン単位が含まれる（両方とも、スキーム
Ａにおいて示す）（下記）。グリシン−グリシン単位または単一のグリシン単位を含有す
るリガンド−薬物コンジュゲートが、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、がん細胞関連プロテア
ーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼを介して酵素的切断を受けるとき、グリシン−グリ
シン−薬物単位またはグリシン−薬物単位は、コンジュゲートから切断される。一実施形
態では、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、グリシン−薬物単位結合が切断さ
れ、薬物を遊離させる。
一実施形態では、非自壊的単位は、−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−である。別の実施形態では、非
自壊的単位は、−Ｇｌｙ−である。
別の実施形態では、スペーサー単位は、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位
（スキームＢおよびＣ、下記を参照されたい）を含み、フェニレンポーションは、Ｑｍで
置換されており、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、または
他の電子供与基または−ハロゲン、−ニトロ、−シアノまたは他の電子吸引基であり、ｍ
は、０〜４の範囲の整数である。
代わりに、自壊的スペーサー単位を含有するコンジュゲートは、別々の加水分解ステッ
プの必要性を伴わずに、−Ｄを放出することができる。一部の態様では、ストレッチャー
単位は、ＰＡＢ基のアミノ窒素原子を介してペプチド切断可能な単位へと連結しており、
かつカーボネート、カルバメートまたはエーテル基を介して薬物単位へと直接接続してい
るＰＡＢ基を含む。ＰＡＢ基および隣接するカルボニルは、スペーサー単位を構成する。
いずれの特定の理論にも機序にも束縛されるものではないが、スキームＢは、Ｔｏｋｉら
、２００２年、Ｊ Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．、６７巻：１８６６〜１８７２頁によって支持
されたカルバメートまたはカーボネート基を介して−Ｄに直接結合しているＰＡＢ基の薬
物放出が可能である機序を示す。

式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニ
トロまたは−シアノであり、ｍは、０〜４の範囲の整数である。
いずれの特定の理論にも機序にも束縛されるものではないが、スキームＣは、エーテル
またはアミン連結を介して−Ｄに直接結合しているＰＡＢ基の薬物放出が可能である機序
を示し、

式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニ
トロまたは−シアノであり、ｍは、０〜４の範囲の整数である。
いずれの特定の理論にも機序にも束縛されるものではないが、スキームＤは、カルボニ
ルを介して−Ｄに直接結合しているグルクロニド単位のＰＡＢ基の薬物放出が可能である
機序を示す。
自壊的単位の他の例は、電子的にＰＡＢ基と同様である芳香族化合物を含むもの、例え
ば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（例えば、Ｈａｙら、１９９９年、
Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．９巻：２２３７頁を参照されたい）
およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールを含む。アミド結合加水分解によっ
て環化を受けるスペーサー、例えば、置換および非置換４−アミノ酪酸アミド（例えば、
Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、１９９５年、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２巻：２２
３頁を参照されたい）、適当に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．
２．２］環系（例えば、Ｓｔｏｒｍら、１９７２年、Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｃｈｅｍ． Ｓ
ｏｃ．、９４巻：５８１５頁を参照されたい）ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸
アミド（例えば、Ａｍｓｂｅｒｒｙら、１９９０年、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．、５５
巻：５８６７頁を参照されたい）を使用することができる。グリシンのα位において置換
されているアミン含有薬物の脱離（例えば、Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら、１９８４年、Ｊ．
Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．、２７巻：１４４７頁を参照されたい）はまた、例示的なコンジュ
ゲートにおいて有用な自壊的スペーサーの例である。
本発明の好ましい実施形態では、スペーサー単位は、１個、２個、または３個の自壊的
または非自壊的基からなる。
本発明の好ましい実施形態では、スペーサー単位は、約１０００ダルトン以下、約５０
０ダルトン以下、約４００ダルトン以下、約３００ダルトン以下、または約１０ダルトン
、５０ダルトンもしくは１００ダルトンから約１０００ダルトン、約１０ダルトン、５０
ダルトンもしくは１００ダルトンから約５００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダルトン
もしくは１００ダルトンから約４００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは
１００ダルトンから約３００ダルトン、または約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１
００ダルトンから約２００ダルトンの質量を有する。
共有結合による結合単位（ＱＣＯ）
共有結合による結合単位は、存在するとき、放出可能なリンカーアセンブリー単位のフ
レームワークを延長し、ＬＰおよび薬物単位の間により大きな距離を実現する。これに関
しては、共有結合による結合単位は、１つの末端における任意選択の分岐単位Ａもしくは
ＬＰまたは薬物結合単位ＡＤの官能基と結合を形成することができる官能基、および他の
末端上の切断可能な単位の官能基と結合を形成することができる官能基を有する。一部の
態様では、例示的な結合は、条件付きでなく切断可能な連結によるものである。
共有結合による結合単位は、分子の残部への切断可能な単位の結合を提供する役割を果
たす任意の基または部分でよいことを当業者は認識する。一部の態様では、共有結合によ
る結合単位は、アセンブリーの前に、リガンド−薬物コンジュゲートまたはその中間体の
構成要素に結合を形成し、かつ結合することができる２個の官能基を有する。共有結合に
よる結合単位は、アセンブリーの前に、２個超の官能基を有し得るが、本発明の目的のた
めに、これらの官能基のうちの２つを介してリガンド−薬物コンジュゲートまたはその中
間体の構成要素へと結合していることを当業者は理解する。共有結合による結合単位は、
１個または複数（例えば、１〜１０個、好ましくは、１個、２個、３個、または４個）の
天然もしくは非天然アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、ジアミン、または
天然もしくは非天然アミノ酸、アミノアルコール、アミノアルデヒド、またはジアミンの
ものでよい。一部の態様では、共有結合による結合単位は、天然もしくは非天然アミノ酸
、アミノアルコール、アミノアルデヒド、またはジアミンである。共有結合による結合単
位として作用することができる例示的なアミノ酸は、β−アラニンを含む。
一部の実施形態では、共有結合による結合単位は、下記で示す式、

を有し、式中、Ｒ１１１は、ｐ−ヒドロキシベンジル、メチル、イソプロピル、イソブチ
ル、ｓｅｃ−ブチル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、
−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ
ＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）
３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２
、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、
−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（
ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチ
ル−、

であり、各Ｒ１００は、水素または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、好ましくは水素またはＣＨ３
から独立に選択され、
ｃは、１〜１０から独立に選択される整数、好ましくは１〜３である。
切断可能な単位への連結のためのカルボニル基を有する代表的な共有結合による結合単
位は、下記の通りであり、

式中、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−アリーレ
ン−、−Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、また
は−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−である。好ましい実施形態
では、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレンである。
切断可能な単位への連結のためのカルボニル基を有する代表的な共有結合による結合単
位は、下記の通りであり、

式中、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−アリーレ
ン−、−Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、また
は−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−である。好ましい実施形態
では、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレンである。
切断可能な単位への連結のためのＮＨ基を有する代表的な共有結合による結合単位は、
下記の通りであり、

式中、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−アリーレ
ン−、−Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、また
は−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−である。好ましい実施形態
では、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレンである。
切断可能な単位への連結のためのＮＨ基を有する代表的な共有結合による結合単位は、
下記の通りであり、

式中、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−、−アリーレ
ン−、−Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１
０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、また
は−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−である。好ましい実施形態
では、Ｒ１３は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキレンである。
共有結合による結合単位の選択した実施形態は、下記を含み、窒素に隣接する波線は、
ＬＰ（またはＡＤまたはＡ）への共有結合による結合を示し、カルボニルに隣接する波線
は、切断可能な単位への共有結合による結合を示し、ｍは、１〜６、好ましくは２〜６、
より好ましくは２〜４の範囲の整数である。
一部の態様では、共有結合による結合単位は、任意選択で置換されているＣ１〜８ヘテ
ロアルキレンである。
一部の態様、特に、共有結合による結合単位が、並列コネクター単位、分岐単位、また
は薬物結合単位の硫黄原子と結合を形成する態様では、共有結合による結合単位は、共有
結合による結合単位のマレイミド基を介して硫黄原子と結合を形成する。この実施形態の
代表的な共有結合による結合単位は、式ＸＸＩＩＩおよびＸＸＩＶの角カッコ内のものを
含み、波線は、本明細書に定義されているような切断可能な単位への結合を示し、アスタ
リスクは、並列コネクター単位、分岐単位、または薬物結合単位の硫黄原子への結合を示
し、Ｒ１７’は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−、−Ｃ
３〜Ｃ８カルボシクロ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ
１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（
Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン
−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−Ｃ（＝
Ｏ）−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−Ｃ
（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｃ
（＝Ｏ）−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ１０ア
ルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）
−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ３〜Ｃ
８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン
−ＮＨ−、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−ＮＨ−
、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−ＮＨ−、−アリーレン−ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アル
キレン−アリーレン−ＮＨ−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１
〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシク
ロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−ＮＨ−、−Ｃ１〜
Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−ＮＨ−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ
）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−ＮＨ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、Ｃ１〜Ｃ１０
ヘテロアルキレン−Ｓ−、−Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ−Ｓ−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキ
ル）−Ｓ−、−アリーレン−Ｓ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−Ｓ−、−ア
リーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８カ
ルボシクロ）−Ｓ−、−（Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｓ−、
−Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ−Ｓ−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシク
ロ）−Ｓ−、または−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−Ｓ−であ
る。Ｒ１７’置換基は、任意選択で置換することができる。一部の態様では、Ｒ１７’置
換基は、置換されていない。一部の態様では、Ｒ１７’基は、塩基性単位、例えば、−（
ＣＨ２）ｘＮＨ２、−（ＣＨ２）ｘＮＨＲａ、および−（ＣＨ２）ｘＮＲａ ２（式中、ｘ
は、１〜４の整数であり、各Ｒａは、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ１〜６ハロアルキルから
なる群から独立に選択され、または２個のＲａ基はそれらが結合している窒素と合わさり
、アゼチジニル、ピロリジニルまたはピペリジニル基を形成する）で任意選択で置換され
ている。
例示的な共有結合による結合単位は、式ＸＸＩＩＩのものであり、Ｒ１７’は、−Ｃ２
〜Ｃ５アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）−であり、アルキレンは、塩基性単位、例えば、−（ＣＨ
２）ｘＮＨ２、−（ＣＨ２）ｘＮＨＲａ、および−（ＣＨ２）ｘＮＲａ ２で任意選択で置
換されており、ｘは、１〜４の範囲の整数であり、各Ｒａは、Ｃ１〜６アルキルおよびＣ
１〜６ハロアルキルからなる群から独立に選択され、または２個のＲａ基はそれらが結合
している窒素と合わさり、アゼチジニル、ピロリジニルまたはピペリジニル基を形成する
。例示的な実施形態は、下記の通りである。
上記で示した置換スクシンイミドは、加水分解された形態で存在し得ることが理解され
る（すなわち、カルボニル−窒素結合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）
。
ストレッチャー単位のアミノ基は、アミノ保護基、例えば、酸に不安定な保護基（例え
ば、ＢＯＣ）によって保護し得ることが理解される。
本発明の好ましい態様では、共有結合による結合単位は、約１０００ダルトン以下、約
５００ダルトン以下、約４００ダルトン以下、約３００ダルトン以下、約１０ダルトン、
５０ダルトンもしくは１００ダルトンから約５００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダル
トンもしくは１００ダルトンから約５００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダルトンもし
くは１００ダルトンから約４００ダルトン、約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１０
０ダルトンから約３００ダルトン、または約１０ダルトン、５０ダルトンもしくは１００
ダルトンから約２００ダルトンの質量を有する。
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場
当業者が認識するように、本発明において使用するために選択されるＰＥＧ単位のサイ
ズは、ＰＥＧ単位の付加の前の、その薬物−リンカー部分の薬物およびリンカー構成要素
の疎水性によって決まる。式ＤＤ、Ｘ、ＸＩ、またはＸＩＩの中間化合物は、改善された
ＰＫパラメーターおよび／または最小の凝集を有するＡＤＣをもたらす薬物およびＰＥＧ
単位の組合せについてスクリーニングするために使用することができる、ＰＥＧ化された
コンジュゲーション足場として作用することができる。ＰＥＧ化されたコンジュゲーショ
ン足場によって、所与の薬物−リンカーのためのＰＥＧサブ単位の数の最適化のためのプ
ラットホームが可能となる。
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場は、変化する薬物およびＰＥＧ部分の並列コン
ジュゲーションによって、ＰＥＧが、広範囲の通常の薬物−リンカー（すなわち、本発明
による並列接続されたＰＥＧ単位を含有しない薬物−リンカー）について、疎水性をマス
クし、ＰＫパラメーターを改善させる能力を検査することを可能とするように特に設計さ
れている。薬物−リンカーの疎水性をマスクするが、大きすぎて、リガンド−薬物コンジ
ュゲートが標的とした部位に拡散し、または標的とした細胞に入り、薬物を放出する能力
に負の影響を与えない十分なサイズのＰＥＧ単位を選択することが好ましい。
特に好ましい実施形態では、ＰＥＧの最適化のために使用する通常の薬物−リンカーは
、抗体のチオール基へコンジュゲートするための反応性基、例えば、マレイミド含有薬物
−リンカーおよびプロテアーゼによって切断可能な放出可能なアセンブリー単位Ｘを有す
るものである。したがって、コンジュゲーション足場と共に使用するためのプロテアーゼ
によって切断可能な放出可能なアセンブリー単位Ｘを有する例示的なＸ−Ｄ単位は、下記
を含み、Ｄは、本明細書に記載のような任意の薬物単位である。

他の特に好ましい実施形態では、ＰＥＧの最適化のために使用する通常の薬物−リンカ
ーは、抗体のチオール基へコンジュゲートするための反応性基、例えば、マレイミド含有
薬物−リンカー、およびグリコシダーゼによって切断可能な放出可能なアセンブリー単位
Ｘを有するものである。したがって、コンジュゲーション足場と共に使用するためのグリ
コシダーゼによって切断可能な放出可能なアセンブリー単位Ｘを有する例示的なＸ−Ｄ単
位は、下記を含み、Ｄは、本明細書に記載のような任意の薬物単位である。
ＰＥＧの最適化のために使用される薬物−リンカーがチオール受容基、例えば、マレイ
ミド部分へのコンジュゲーションのための反応性基を有するものである実施形態では、コ
ンジュゲーション足場は、脱保護されたとき、薬物−リンカーのチオール受容基へと共有
結合による結合が可能である保護されたチオール含有残基を有する。保護されたチオール
含有残基は、並列コネクター単位（または分岐単位または薬物結合単位）の構成要素でよ
い。例示的なＰＥＧ化されたコンジュゲート足場は、式ＤＤのものであり、ＬＰ’単位は
、下記の式、

を有するアミノ酸を含み、式中、
下付き文字ｎは、１〜４の範囲の整数であり、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、フェニル、またはＣ２〜Ｃ５複素環（好まし
くは水素、メチル、エチル、またはプロピル）からなる群から独立に選択され、
ＲＰＲは、適切なチオール保護基である。
例示的なＰＥＧ化されたコンジュゲート足場は、式ＤＤのものであり、ＬＰ’単位は、
保護されたシステイン、ホモシステイン、またはペニシラミンを含む。アミノ酸のＤまた
はＬ異性体が適切である。ＬＰ’単位として使用するための例示的なアミノ酸は、下記で
示すようなシステインであり、適切な保護基としてｔ−ブチルチオを有する。
適切に保護されたリガンド−リンカー中間化合物中の例示的なＰＥＧ化されたコンジュ
ゲーション足場は、下記を含む。

適切に保護されたリガンド−リンカー中間化合物中の他の例示的なＰＥＧ化されたコン
ジュゲーション足場は、下記を含む。

例示的なＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場は、薬物−リンカーとのコンジュゲー
ションの後に、下記のようなリガンド−薬物コンジュゲートを提供する。



例示的な中間体コンジュゲーション足場は、式（ＣＣ）のものであり、ＬＰ’単位は、
下記の式、

を有するアミノ酸を含み、式中、
下付き文字ｎは、１〜４の範囲の整数であり、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、フェニル、またはＣ２〜Ｃ５複素環（好まし
くは水素、メチル、エチル、またはプロピル）からなる群から独立に選択され、
ＲＰＲは、適切なチオール保護基である。
適切に保護されたリンカー中間化合物中の例示的な中間体のＰＥＧ化されたコンジュゲ
ート足場を下記に示す。


例示的なＰＥＧ化されたコンジュゲート足場は、式ＸＩのものであり得、ＬＰ’単位お
よび薬物結合単位ＡＤ’は、それぞれ下記の式、

を有する独立に選択したアミノ酸を含み、式中、
下付き文字ｎは、１〜４の範囲の整数であり、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈ、Ｃ１〜３アルキル、フェニル、またはＣ２〜Ｃ５複素環（好まし
くは水素、メチル、エチル、またはプロピル）からなる群から独立に選択され、
ＲＰＲは、適切なチオール保護基である。
適切に保護されたリガンド−リンカー中間化合物中の式ＸＩの例示的なＰＥＧ化された
コンジュゲート足場を下記に示す。
例示的なＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場は、薬物−リンカーとのコンジュゲー
ションの後に、式ＩＩのリガンド−薬物コンジュゲートを提供する。
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場および中間体について、ストレッチャー単位、
ＺまたはＺ’、ＰＥＧ、リガンド、保護基ＲＰＲ、および下付き文字ｐは、本明細書にお
いて提供する実施形態のいずれかにおいて記載されている通りである。例示的な態様では
、ストレッチャー単位は、本明細書に記載のようなマレイミド含有ストレッチャー単位で
ある。例示的な実施形態では、ＰＥＧ単位は、６〜７２個、１０〜７２個、または１２〜
７２個のサブ単位を有し、ストレッチャー単位は、本明細書に記載のようなマレイミド含
有ストレッチャー単位、およびＸＶａについて本明細書において提供した実施形態のいず
れかである。
したがって、本発明は、リガンド−薬物コンジュゲートにおいて使用するためのＰＥＧ
単位を選択する方法を提供し、方法は、（ｉ）式（ＤＤ）を有するコンジュゲーション足
場を提供するステップであって、並列コネクター単位は、チオール保護されたシステイン
を含むステップと、（ｉｉ）チオール保護されたシステインから保護基を除去して、遊離
チオールを有する脱保護されたコンジュゲーション足場を形成させるステップと、（ｉｉ
ｉ）脱保護されたコンジュゲーション足場と、遊離チオールとの共有結合による結合のた
めの官能基を有する薬物−リンカーとを、リガンド−薬物コンジュゲートを形成する条件
下で接触させるステップとを含む。方法は、結果として生じたリガンド−薬物コンジュゲ
ートのＰＫパラメーターを試験することをさらに含むことができる（例えば、実施例８ま
たは２１を参照されたい）。また提供するのは、このような方法によって産生されたリガ
ンド薬物コンジュゲートである。
また提供するのは、リガンド−薬物コンジュゲートにおいて使用するためのＰＥＧ単位
を選択する方法であり、方法は、（ｉ）式ＸＩまたはＸＩＩを有するコンジュゲーション
足場を提供するステップであって、並列コネクター単位および薬物結合単位（複数可）が
、チオール保護されたシステインを含むステップと、（ｉｉ）チオール保護されたシステ
インから保護基を除去し、遊離チオールを有する脱保護されたコンジュゲーション足場を
形成させるステップと、（ｉｉｉ）脱保護されたコンジュゲーション足場と、遊離チオー
ルとの共有結合による結合のための官能基を有する薬物−リンカーとを、リガンド−薬物
コンジュゲートを形成させる条件下で接触させるステップとを含む。方法は、結果として
生じたリガンド−薬物コンジュゲートのＰＫパラメーターを試験することをさらに含むこ
とができる（例えば、実施例２１を参照されたい）。また提供するのは、このような方法
によって産生されたリガンド薬物コンジュゲートである。
薬物負荷量
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＡＡのリガンド−薬物コンジュゲートに全体的に言及する
と、リガンド当たりの薬物−リンカー単位の数は、ｐによって表される。このようなコン
ジュゲートの集団における個々のリガンド−薬物コンジュゲートに言及するとき、ｐは、
リガンド当たりの薬物−リンカー分子の数を表す整数である。複数のコンジュゲートを含
有する組成物（すなわち、ＬＤＣ組成物）に言及するとき、ｐは、リガンド当たりの薬物
−リンカーの平均数を表し、より典型的には整数ではない数である。抗体−薬物コンジュ
ゲート（ＡＤＣ）からなるＬＤＣ組成物について記載する実験におけるこれらの場合にお
いて、特定の数の薬物単位／抗体の薬物負荷（例えば、８負荷、１６負荷または３２負荷
）について言及する場合、この値は、組成物中の平均薬物負荷量および優勢であるＡＤＣ
の薬物負荷量を指し、これは、リンカー−薬物化合物と反応する、または適用可能である
場合、リガンド中間体（続いて−Ｘ−Ｄが導入される）と反応する抗体上の反応部位の数
によって決まる。リガンド−薬物コンジュゲートの集団において、リガンド当たり平均で
１〜１４個の薬物−リンカー、リガンド当たり平均で約６〜約１４個、約６〜約１２個、
約６〜約１０個、約８〜約１４個、約８〜約１２個、または約８〜約１０個の薬物−リン
カー単位が存在することができる。リガンドへの例示的な結合は、チオエーテル連結を介
してである。リガンド上の例示的なコンジュゲーション部位は、鎖間のジスルフィド残基
のチオールおよび／またはリガンド中に導入された残基、例えば、導入されたシステイン
である。平均薬物負荷が約８、１０、１２、１４、１６、または３２である実施形態に言
及するとき、８、１０、１２、１４、１６、または３２の値は典型的にはまた、組成物中
の優勢であるリガンド薬物コンジュゲートの薬物負荷量を指す。同様に、リガンド当たり
平均で約８〜約１４個、約８〜約１２個、または約８〜約１０個の薬物−リンカー単位が
存在する実施形態に言及するとき、その値は典型的にはまた、組成物中の優勢であるＡＤ
Ｃの薬物−リンカー負荷量を指す。
コンジュゲーション反応からの調製物中のリガンド単位当たりの薬物−リンカー単位の
平均数は、通常の手段、例えば、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣおよびＨＰＬＣ
によって特性決定し得る。リガンド−リンカー−薬物コンジュゲートの量的分布を、ｐに
関してまた決定し得る。場合によって、均質なリガンド−薬物コンジュゲート（ｐは、他
の薬物負荷量を有するリガンド−薬物コンジュゲートからの特定の値である）の分離、精
製、および特性決定は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成し得る。
組成物
本発明は、本明細書に記載されているリガンド−薬物コンジュゲートのいずれかを含む
組成物を提供する。例えば、本発明は、式ＡＡ、Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのリガンド−薬
物コンジュゲートを含む組成物、およびこれらの選択した実施形態のいずれかを提供する
。実施形態のいずれかにおいて、変数は本明細書に定義されている通りである。
式（ｆｏｒｍｌａ）ＡＡ、Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩが、個々の（ｉｎｖｉｄｉｄｕａｌ
）ＬＤＣ化合物を表さないが、ＬＤＣ組成物（すなわち、リガンド薬物コンジュゲートの
集団を含む組成物）を表すとき、下付き文字ｐは、組成物中のリガンド分子（例えば、抗
体分子）当たりの薬物−リンカー分子の平均数を表す。同様に、式ＤＤ、Ｘ、ＸＩ、およ
びＸＩＩが、個々のリガンド−リンカー中間化合物を表さず、リガンドリンカー中間体組
成物（すなわち、リガンドリンカー中間体化合物の集団を含む組成物）を表すとき、下付
き文字ｐは、組成物中のリガンド分子（例えば、抗体）当たりのリンカー分子の平均数を
表す。組成物は、そこに結合した様々な数（例えば、１〜１４、２〜１２、４〜１２、６
〜１２、８〜１２）の薬物−リンカーを有するリガンド−薬物コンジュゲートのコレクシ
ョン（または集団）を含み、平均ｐ値に達することができることが理解される。代わりに
、組成物は、そこに結合した同じもしくは実質的に同じ数の薬物−リンカー（１〜１４）
を有するリガンド−薬物コンジュゲートのコレクション（または集団）を含み、平均ｐ値
に達することができる。コレクションまたは集団という用語は、この文脈において、同意
語として使用される。組成物内に、小さな割合のコンジュゲートしていない抗体が存在し
てもよく、これはまた平均ｐ値に反映される。本発明のリガンド−薬物コンジュゲートの
集団を含む組成物について、リガンド当たり平均で１〜１４個の薬物−リンカー、リガン
ド当たり平均で約６〜約１４個、約６〜約１２個、約６〜約１０個、約８〜約１４個、約
８〜約１２個、または約８〜約１０個の薬物−リンカー単位が存在してもよい。本発明に
おいて教示されるようなＰＥＧの使用は、高い薬物負荷、例えば、リガンド当たり少なく
とも約６個、より好ましくは少なくとも約８個の薬物−リンカーの平均薬物負荷量を有す
るリガンド−薬物コンジュゲートに特に適しており、各薬物−リンカーは、さらに１個の
−Ｘ−Ｄ部分、好ましくは１個、２個または４個を有する。したがって、本明細書におい
て提供する組成物は好ましくは、組成物中にリガンド当たり少なくとも約８個の薬物−リ
ンカー分子の平均薬物−リンカー負荷量を有し、好ましくはリガンド単位当たり約８個、
１０個、１２個、または１６個から約３２個の薬物単位を有する。
一部の態様では、組成物は、本明細書に記載されているリガンド−薬物コンジュゲート
および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。例えば、本発明は、式Ｉ、ＩＩ
、またはＩＩＩのコンジュゲート、およびこれらの選択した実施形態のいずれかを含む医
薬組成物を提供する。一部の態様では、医薬組成物は、液体形態である。一部の態様では
、これは凍結乾燥した粉末である。
医薬組成物を含めた組成物は、精製した形態で提供することができる。本明細書におい
て使用する場合、「精製した」とは、単離したとき、単離物が、単離物の重量によって少
なくとも９５％の、および、別の態様では、少なくとも９８％のコンジュゲートを含有す
ることを意味する。
薬物動態
先に言及したように、ある特定のリガンド−薬物コンジュゲートの薬物動態プロファイ
ルは、ＰＥＧ単位の付加によって有意に変化することができることを本発明者らは発見し
た。場合によっては、リガンド単位および薬物単位と並列配向のＰＥＧの配置は、リガン
ド−薬物コンジュゲートの血漿クリアランスを減少させ、血漿曝露を増加させ、これはこ
のようなコンジュゲートの所望の薬理学的（ｐｈａｍａｏｌｏｇｉｃａｌ）活性を改善さ
せる。驚いたことに、リガンド単位および薬物単位と直列配向のＰＥＧ単位の配置は、薬
物動態学的効果において同じ改善を実現せず、場合によっては、そのＰＥＧ化されていな
いカウンターパートに対して、実際にクリアランスを増加させ、相対的曝露を減少させた
。本発明までは、疎水性化合物のＰＥＧ化による疎水性の減少に向けた努力は、ＰＥＧ単
位の配向効果について考慮していなかった。
リガンド−薬物コンジュゲートの薬物動態パラメーターを測定する多くの方法が存在す
る。１つの方法は、リガンド−薬物コンジュゲート濃度、すなわち、ある特定の時点にお
ける所与の体積の血漿または血清中のリガンド−薬物コンジュゲートの量を決定すること
である。別の方法は、薬物クリアランス、すなわち、単位時間当たりリガンド−薬物コン
ジュゲートがクリアランスされる血漿（または血清）の体積を決定することである。第３
の方法は、曲線下面積（ＡＵＣ）、すなわち、濃度−時間曲線の積分値を決定することで
ある。濃度、クリアランス、およびＡＵＣは、被験体への、目的の薬剤の投与後の、横軸
（Ｘ軸）に沿った時間（日数）に対して、縦軸（Ｙ軸）に沿った総抗体の血清（または血
漿）濃度（μｇ／ｍｌ）をプロットすることによって決定することができる。例えば、１
つの方法において、（ｉ）コンジュゲートしていないリガンド、（ｉｉ）本発明のリガン
ド−薬物コンジュゲート、および（ｉｉｉ）比較リガンド−薬物コンジュゲートの用量を
マウスに注射し、注射の後の様々な時点（例えば、１日、２日、３日、７日、１４日、２
１日、２８日、３５日、４２日、４９日、および５６日）において血液試料を集め、血清
を単離することによって薬物動態パラメーターを測定する。血清（または血漿）濃度は、
当技術分野において公知の方法によって測定することができる。例えば、血清（または血
漿）濃度は、適当な検出機序を使用して、総リガンド（例えば、抗体）についてサンドイ
ッチＥＬＩＳＡによって測定することができる。各動物についての血清（または血漿）濃
度データは、適当なソフトウェアを使用して分析して、ある特定の時点における濃度、薬
物クリアランスおよびＡＵＣについての値に達することができる。別の実施形態では、薬
物動態学的データは、放射性標識されたコンジュゲートを使用して生成することができる
。例えば、動物に放射性標識されたリガンドまたはリガンド−薬物コンジュゲートを投与
することができ、血漿（または血清）濃度を液体シンチレーション計測によって測定する
。一部の実施形態では、使用する動物モデルはラットモデルである。
一部の実施形態では、本発明のリガンド−薬物コンジュゲートの薬物動態プロファイル
は、そのコンジュゲートしていないリガンドの薬物動態プロファイルと似ている。したが
って、本明細書において提供するのは、コンジュゲートしていないリガンドのクリアラン
ス値の約３倍以内もしくは約２倍以内のクリアランス値、および／またはコンジュゲート
していないリガンドのＡＵＣ値の少なくとも２５％もしくは少なくとも３０％であるＡＵ
Ｃ値を有するリガンド−薬物コンジュゲートである（例えば、表２を参照されたい）。
一部の実施形態では、本発明のリガンド−薬物コンジュゲートの薬物動態プロファイル
は、比較コンジュゲートと比較して改善する。したがって、本明細書において提供するの
は、比較コンジュゲート（すなわち、薬物−リンカー部分に対して並列配向であるＰＥＧ
単位を有さない）と比較して、改善された濃度値、クリアランス値および／またはＡＵＣ
値を有するリガンド−薬物コンジュゲートである。改善されたクリアランス値という用語
は、リガンド−薬物コンジュゲートが、比較コンジュゲートのクリアランス値より少なく
とも２倍または少なくとも３倍良好であるクリアランスを有することを意味する（例えば
、４８．６ｍＬ／日／ｋｇまたは５７．８ｍＬ／日／ｋｇの値と比較して１４．２ｍＬ／
日／ｋｇの値）。改善されたＡＵＣ値という用語は、リガンド−薬物コンジュゲートが、
比較コンジュゲートのＡＵＣ値より少なくとも２倍または少なくとも３倍良好であるＡＵ
Ｃ値を有することを意味する（例えば、６７日＊μｇ／ｍｌまたは５２日＊μｇ／ｍｌの
値の値と比較して２２９．７日＊μｇ／ｍｌの値）。
比較コンジュゲートは、ＰＥＧ単位を欠いている同じもしくは実質的に同様のコンジュ
ゲート、並列配向で配置されているＰＥＧ単位を欠いているが、リガンド単位および薬物
単位に対して直列配向で配置されているＰＥＧ単位を含有する同じもしくは実質的に同様
のコンジュゲートでよい。一部の実施形態では、比較コンジュゲートは、同じ薬物単位を
含み、かつＰＥＧ単位を有さないコンジュゲートであるか（すなわち、ＰＥＧ単位を欠い
ている同じもしくは実質的に同様のコンジュゲート）、またはリガンド単位および薬物単
位に対して直列配向で配置されているＰＥＧ単位を有するコンジュゲート（すなわち、Ｐ
ＥＧ単位を有するが、並列配向で配置されていない同じもしくは実質的に同じコンジュゲ
ート）である。一般に、リガンド−薬物コンジュゲートおよび比較コンジュゲートは、同
じ薬物負荷量（組成物中のリガンド単位当たりの薬物の平均数）を有する。
本明細書において使用する場合、語句「ＰＥＧ単位を欠いている同じもしくは実質的に
同様のコンジュゲート」とは一般に、同じもしくは実質的に同じリガンド単位、薬物単位
、ならびにリンカー単位（例えば、ストレッチャー単位、および放出可能なアセンブリー
単位）を含むが、並列コネクター単位ＬＰおよびＰＥＧ単位を欠いているコンジュゲート
を指す。本発明のリガンド−薬物コンジュゲートに大部分密接に似ているＰＥＧ単位を欠
いている比較コンジュゲートについて、比較コンジュゲートは、同じリガンド単位、薬物
単位、放出可能なアセンブリー単位、ストレッチャー単位および並列コネクター単位（お
よび、適当である場合、ＡＤまたはＡ単位）を含む。しかし、並列コネクター単位は、Ｐ
ＥＧ単位に結合していないが、官能基、例えば、アセチル基で終結している（例えば、実
施例における化合物４４を参照されたい）。
本明細書において使用する場合、語句「並列配向で配置されているＰＥＧ単位を欠いて
いるが、リガンド単位および薬物単位に対して直列配向で配置されているＰＥＧ単位を含
有する、同じもしくは実質的に同じコンジュゲート」（すなわち、ＰＥＧ単位を有するが
、並列配向で配置されない同じもしくは実質的に同じコンジュゲート）とは一般に、同じ
もしくは実質的に同じリガンド単位、薬物単位、ならびにリンカー単位（例えば、ストレ
ッチャー単位、および放出可能なアセンブリー単位）を含むが、並列構成でそこに結合し
ている並列コネクター単位ＬＰおよびＰＥＧ単位を欠いており、かつリガンド単位および
薬物単位と直列配向のリンカー中にＰＥＧ単位を含むコンジュゲートを指す。
用語「実質的に同じ」とは、この文脈において、いくつかの軽微なバリエーションが存
在し得るが、このようなバリエーションがコンジュゲートの様々な構成要素の化学合成お
よび結合を主に容易にするためであることを意味する。ＰＥＧ単位を並列配向で有する本
発明のコンジュゲートと比較した、ＰＥＧまたは直列配向のＰＥＧ単位を有さない比較コ
ンジュゲートの例についての実施例セクションを参照されたい。
コンジュゲートしていないリガンドに対して有意により大きな血漿クリアランスおよび
対応してより低い血漿曝露を示すリガンド−薬物コンジュゲートは本発明によって利益を
得る。なぜなら、これらが本明細書に記載のように修飾されて、ＰＥＧ単位を含むことが
できるためである。コンジュゲートしていないリガンドに対して有意により大きな血漿ク
リアランスは、コンジュゲートしていないリガンドについての血漿クリアランス値の２倍
超、３倍超または４倍超であるクリアランス値を指す（例えば、表２を参照されたい）。
コンジュゲートしていないリガンドに対してより低い血漿曝露は、コンジュゲートしてい
ないリガンドのＡＵＣの３０％もしくはそれ未満、２５％もしくはそれ未満、または２０
％もしくはそれ未満であるＡＵＣ値を指す（例えば、表２を参照されたい）。
一部の実施形態では、本明細書において提供するのは、コンジュゲートしていないリガ
ンドのクリアランス値の約３倍以内もしくは約２倍以内のクリアランス値、および／また
はコンジュゲートしていないリガンドのＡＵＣ値の少なくとも２５％もしくは少なくとも
３０％であるＡＵＣ値を有するリガンド−薬物コンジュゲートである。
一部の実施形態では、本発明において薬物単位として使用される薬物は、ＰＥＧを欠い
ている、または直列配向のＰＥＧを含むリガンド薬物コンジュゲートとしてリガンドにコ
ンジュゲートしているとき、コンジュゲートしていないリガンドに対して有意により大き
な血漿クリアランスおよび対応してより低い血漿曝露を示すリガンド−薬物コンジュゲー
トを生じさせるものである。コンジュゲートしていないリガンドに対して有意により大き
な血漿クリアランスは、コンジュゲートしていないリガンドについての血漿クリアランス
値の２倍超、３倍超または４倍超であるクリアランス値を指す（例えば、表２を参照され
たい）。コンジュゲートしていないリガンドに対してより低い血漿曝露は、コンジュゲー
トしていないリガンドのＡＵＣの３０％もしくはそれ未満、２５％もしくはそれ未満、ま
たは２０％もしくはそれ未満であるＡＵＣ値を指す（例えば、表２を参照されたい）。
疎水性薬物単位または疎水性薬物−リンカーを有するリガンド−薬物−コンジュゲート
は本発明によって利益を得る。なぜなら、これらが本明細書に記載のように修飾されて、
ＰＥＧ単位を含み得、かつ、本発明の適用によって増強されるこれらの薬物動態パラメー
ターを見出すことができるからである。
好ましい実施形態では、リガンドは、抗体である。
凝集
ある特定のリガンド−薬物コンジュゲートの凝集は、疎水性薬物リンカー部分に対して
並列配向であるＰＥＧ単位の付加によって有意に低減し得ることを本発明者らはまた発見
した。
一部の実施形態では、本発明において使用される薬物は、ＰＥＧを欠いており、または
直列配向のＰＥＧを含み、かつリガンド当たり平均で４個、８個または１６個の薬物を有
するリガンド薬物コンジュゲートとしてリガンドにコンジュゲートしているとき、ＳＥＣ
によって測定して、４％もしくはそれ超、５％もしくはそれ超、または１０％もしくはそ
れ超の凝集レベルを有するリガンド−薬物コンジュゲートを生じさせるものである。
本発明は、リガンド単位当たり平均で８個もしくはそれ超の薬物、抗体当たり１０個も
しくはそれ超の薬物、抗体当たり１２個もしくはそれ超の薬物、抗体当たり１６個もしく
はそれ超の薬物、または抗体当たり３２個の薬物を有し、約１％または約２％または約３
％の凝集レベルを有するリガンド−薬物コンジュゲートの集団を提供する（例えば、１ま
たはＩＩの式、式中、ｐは４または８であり、ｍは１であり、ｓは０であり、ｔは０であ
る；式ＩＩ、式中、ｐは８であり、ｍは２であり、ｓは１であり、ｔは０である）
好ましい態様では、リガンド単位は、抗体である。
選択した実施形態
本発明の例示的な−Ｘ−Ｄ単位は、下記を含み、式中、波線は、場合によって、ＬＰ、
Ａ、またはＡＤ単位に結合した共有結合性を示し、

上記で示した置換スクシンイミドは、加水分解された形態で存在し得ることが理解される
（すなわち、カルボニル−窒素結合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。
本発明の例示的な薬物−リンカー化合物は、下記の構造、


によって表されるものまたは薬学的に許容されるその塩を含み、式中、ＰＥＧ単位は、本
明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて記載された通りであり、分散性また
は非分散性でよく、ｎは、６〜７２、８〜７２、１０〜７２、１２〜７２、１２〜３８、
１２〜３６、６〜２４、または最も好ましくは８〜２４もしくは１２〜２４の範囲の整数
であり、ＲＰＲは、水素または保護基、例えば、酸に不安定な保護基、例えば、ＢＯＣで
ある。一部の実施形態では、ｎは、８、１０、１２または２４である。分散性ＰＥＧ単位
前駆体を使用して調製したリガンド−薬物コンジュゲートの集団（すなわち、ＬＤＣ組成
物）について、この前駆体は好ましくは、約６〜７２個、８〜７２個、１０〜７２個、１
２〜７２個、１２〜３８個、１２〜３６個、６〜２４個、もしくは最も好ましくは８〜約
２４個のサブ単位、または約１２〜約３８個のサブ単位を有するＰＥＧ単位に対応するピ
ーク平均ＭＷを有する。ＰＥＧが非分散性であるとき、ＬＤＣ組成物の各ＬＤＣは典型的
には、同じ数のＰＥＧサブ単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）、すなわち、同じ整数値のｎを有す
るＰＥＧ単位を有する。非分散性ＰＥＧ単位は、例えば、

の構造を有し得、式中、Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または
−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈであり、ｎは、８〜１２、８〜２４または１２〜３８の範囲の整
数である。
２倍の薬物負荷量を実現する本発明の例示的な薬物−リンカー化合物は、下記の構造、


およびｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄが、ｍｃ−ＶＡ−ＰＡＢ−Ｄまたはｍｃ−ＶＡ−Ｄまたは
任意の他のＸ−Ｄ単位で置き換えられている構造によって表されるものを含み、
式中、ＲＰＲは、水素または保護基、例えば、酸に不安定な保護基、例えば、ＢＯＣであ
り、
ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄは、

の構造を有し、
ｍｃ−ＶＡ−ＰＡＢ−Ｄは、

の構造を有し、
ｍｃ−ＶＡ−Ｄは、

の構造を有し、
ＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−Ｄは、

の構造を有し、
ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄ、ｍｃ−ＶＡ−ＰＡＢ−Ｄ、ｍｃ−ＶＡ−Ｄ、およびＭＤｐｒ−
ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−Ｄは、ＰＥＧ化された足場に結合した例示的な−Ｘ−Ｄ部分であり
、波線は、ＰＥＧ化された足場の硫黄へのｍｃまたはＭＤｐｒのスクシンイミド環の共有
結合を示し、
ＰＥＧは、本明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて記載されている通りで
あり、分散性ＰＥＧ単位前駆体を使用して調製したＬＤＣの集団を記載するとき、分散性
でよく（ここで分散性ＰＥＧ単位前駆体は好ましくは、約８〜約２４個のサブ単位または
約１２〜約３８個のサブ単位のｎを有するＰＥＧ単位に対応するピーク平均ＭＷを有する
）、または非分散性である（整数値のｎを有するＰＥＧ単位として定義され、ＬＤＣ組成
物の各ＬＤＣは、同じ整数値のｎを有するＰＥＧ単位を有する）。一部の実施形態では、
非分散性ＰＥＧ単位は、

の構造を有し、式中、Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−
ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈであり、波線は、ＰＥＧ化された足場へのＰＥＧ単位の共有結合を
示し、ｎは、８〜２４または１２〜３８の範囲の整数である。
一部の実施形態では、ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄ、ｍｃ−ＶＡ−Ｄ、およびｍｃ−ＶＡ−
ＰＡＢ−Ｄ中のｍｃ部分（このｍｃ部分が存在する上記の構造のいずれかにおいて、ｍｃ
部分は、

の構造を有し、式中、スクシンイミド部分への波線は、ＰＥＧ化された足場への共有結合
を示し、カルボニルへの波線は、−Ｘ−Ｄの残部への共有結合を示す）は、

（式中、ＲＰＲは、水素または保護基である）の構造を有するＭＤｐｒ部分で置き換えら
れており、ＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄ、ＭＤｐｒ−ＶＡ−ＤおよびＭＤｐｒ−ＶＡ−Ｐ
ＡＢ−Ｄを提供し、これはさらなる例示的な−Ｘ−Ｄ部分である。
ＭＤｐｒ含有−Ｘ−Ｄ部分のいずれか１つにおけるＭＤｐｒ中の置換スクシンイミドは
、加水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち、カルボニル−窒素結合
の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。ｍｃからなる−Ｘ−Ｄ部分はまた、
加水分解された形態のそのスクシンイミド環を有し得る。
２倍の薬物負荷量を実現する本発明の他の例示的な薬物−リンカー化合物は、下記を含
み、


式中、ｍｃ−ＶＡ−Ｄ、ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−Ｄ、ｍｃ−ＶＡ−ＰＡＢＡ−ＤおよびＭ
Ｄｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−Ｄは、上記の２倍の薬物負荷量構造について記載したよう
な例示的な−Ｘ−Ｄ部分であり、独立に選択されるＰＥＧＡおよびＰＥＧＢは、本明細書
において提供するＰＥＧ単位についての実施形態のいずれかにおいて記載する通りであり
、分散性ＰＥＧ単位前駆体を使用して調製したリガンド−薬物コンジュゲートの集団（す
なわち、ＬＤＣ組成物）について言及するとき、分散性でよく、ここで分散性ＰＥＧ単位
前駆体は好ましくは、約８〜約２４個のサブ単位または約１２〜約３８個のサブ単位のｎ
を有するＰＥＧ単位に対応するピーク平均ＭＷを有し、あるいはＰＥＧＡは、非分散性で
ある（すなわち、このＡＤＣからなるＬＤＣ組成物の各ＬＤＣが同じ整数値のｎを有する
ＰＥＧ単位を有するように、整数値によって同定される異なる数のＰＥＧサブ単位を有す
るＰＥＧ単位）。一部の実施形態では、ＰＥＧＡは、

の構造を有する非分散性ＰＥＧ単位であり、かつ／またはＰＥＧＢは、

の構造を有する非分散性ＰＥＧ単位であり、式中、各Ｒ２１は、独立に選択したＰＥＧキ
ャッピング単位であり、独立に選択されるｎのそれぞれの場合は、８〜２４または１２〜
３８の範囲の整数である。好ましい実施形態では、１個のＲ２１は、−ＣＨ３であり、他
方は、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
一部の実施形態では、ｍｃ部分が存在する上記の構造のいずれかにおける

の構造を有するｍｃ部分は、

の構造（式中、ＲＰＲは、水素または保護基である）を有するＭＤｐｒ部分で置き換えら
れており、ＭＤｐｒ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄ、ＭＤｐｒ−ＶＡ−ＤおよびＭＤｐｒ−ＶＡ−Ｐ
ＡＢ−Ｄを−Ｘ−Ｄとして提供する。
他の実施形態では、ＭＤｐｒ部分が存在する上記の構造におけるＭＤｐｒ部分は、ｍｃ
部分で置き換えられており、ｍｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）Ｄを−Ｘ−Ｄとして提供する。
ＭＤｐｒ含有−Ｘ−Ｄ部分のいずれかの１つにおけるＭＤｐｒ中の置換スクシンイミド
は、加水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち、カルボニル−窒素結
合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。ｍｃからなる−Ｘ−Ｄ部分はまた
、加水分解された形態のそのスクシンイミド環を有し得る。
４倍の薬物負荷量を実現する本発明の例示的な薬物−リンカー化合物は、下記を含み、

式中、ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄは、上記の２倍の薬物負荷量構造について記載される通り
であり、ＰＥＧは、本明細書において提供する実施形態のいずれかに記載されている通り
であり、分散性ＰＥＧ単位前駆体を使用して調製したリガンド−薬物コンジュゲート（す
なわち、ＬＤＣ組成物）の集団について言及するとき、分散性でよく（分散性ＰＥＧ単位
前駆体は好ましくは、約８〜約２４個のサブ単位または約１２〜約３８個のサブ単位のｎ
を有するＰＥＧ単位に対応するピーク平均ＭＷを有する）、または非分散性である（すな
わち、このＡＤＣからなるＬＤＣ組成物の各ＬＤＣが同じ整数値のｎを有するＰＥＧ単位
を有するように、整数値によって同定される異なる数のＰＥＧサブ単位を有するＰＥＧ単
位）。一部の実施形態では、非分散性ＰＥＧ単位は、

の構造を有し、式中、Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位であり、波線は、ＰＥＧ化され
た足場への共有結合を示し、ｎは、８〜２４または１２〜３８の範囲の整数である。好ま
しくはＲ２１は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
一部の実施形態では、−Ｘ−Ｄ部分としてのｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄを、ＭＤｐｒ−Ｖ
Ｃ−ＰＡＢ−Ｄ、ｍｃ−ＶＡ−ＰＡＢ−ＤおよびＭＤｐｒ−ＶＡ−ＰＡＢ−Ｄを含めた本
明細書に記載されている−Ｘ−Ｄ部分のいずれかの１つで置き換える。
ＭＤｐｒ含有−Ｘ−Ｄ部分のいずれかの１つにおけるＭＤｐｒ中の置換スクシンイミド
は、加水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち、カルボニル−窒素結
合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。ｍｃからなる−Ｘ−Ｄ部分はまた
、加水分解された形態でそのスクシンイミド環を有し得る。
４倍の薬物負荷量を実現する本発明の他の例示的な薬物−リンカー化合物は、下記を含
み、

式中、ＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−Ｄは、上記の２倍の薬物負荷量構造について記載
した通りであり、ＰＥＧは、本明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて記載
される場合、分散性ＰＥＧ単位前駆体を使用して調製されたリガンド−薬物コンジュゲー
トの集団（すなわち、ＬＤＣ組成物）に言及するとき、分散性でよく、ここで分散性ＰＥ
Ｇ単位前駆体は好ましくは、約８〜約２４個のサブ単位または約１２〜約３８個のサブ単
位のｎを有するＰＥＧ単位に対応するピーク平均ＭＷを有し、あるいはＰＥＧＡは、非分
散性である（すなわち、このＡＤＣからなるＬＤＣ組成物の各ＬＤＣは同じ整数値のｎを
有するＰＥＧ単位を有するように、整数値によって同定される異なる数のＰＥＧサブ単位
を有するＰＥＧ単位）。一部の実施形態では、非分散性ＰＥＧ単位は、

の構造を有し、式中、Ｒ２１は、ＰＥＧキャッピング単位であり、波線は、ＰＥＧ化され
た足場への共有結合を示し、ｎは、８〜２４または１２〜３８の範囲の整数である。好ま
しくはＲ２１は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
一部の実施形態では、−Ｘ−Ｄ部分としてのＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−Ｄは、ｍ
ｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−Ｄで置き換えられている。
ＭＤｐｒ含有−Ｘ−Ｄ部分のいずれかの１つにおけるＭＤｐｒ中の置換スクシンイミド
は、加水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち、カルボニル−窒素結
合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。ｍｃからなる−Ｘ−Ｄ部分はまた
、加水分解された形態のそのスクシンイミド環を有し得る。
本発明の例示的なリガンド−薬物コンジュゲートは、下記の構造、



によって表されるものまたは薬学的に許容されるその塩を含み、式中、ｐは、１〜１４、
好ましくは２〜１２、６〜１２、８〜１２、または８〜１０の範囲の整数であり、Ａｂは
、抗体、好ましくはモノクローナル抗体であり、Ｄは、薬物単位であり、ｎは、６〜７２
、８〜７２、１０〜７２、１２〜７２、１２〜３６または３８、６〜２４、または最も好
ましくは８〜２４の範囲の整数である。ＰＥＧは、ＰＥＧ単位について本明細書において
提供する実施形態のいずれかに記載されている通りである。特に、

（式中、波線は、抗体−薬物コンジュゲートの薬物−リガンド部分の残部への共有結合を
示す）などの部分からなる抗体−薬物コンジュゲートについて、Ａｂ−置換スクシンイミ
ドは、加水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち、カルボニル−窒素
結合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。
上記の代表的な構造はまた、組成物を表すことができ、この場合、ｐは、組成物中のリ
ガンド当たりの薬物−リンカーの平均数を表すことが理解される。そのような実施形態で
は、ｐは典型的には、整数値ではなく、１〜１４、好ましくは２〜１２、６〜１２、８〜
１２、または８〜１０の範囲でよい。
２倍の薬物負荷量を実現する本発明の例示的なリガンド−薬物コンジュゲートは、下記
の構造、


および−Ｘ−Ｄ部分ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢ−Ｄがｍｃ−ＶＡ−ＰＡＢ−ＤおよびＭＤｐｒ−
ＶＡ−ＰＡＢ−Ｄを含めた本明細書に記載されている−Ｘ−Ｄ部分のいずれかの１つで置
き換えられている構造、

によって表されるものまたは薬学的に許容されるその塩を含み、式中、ｐは、１〜１４、
好ましくは２〜１２、６〜１２、８〜１２、または８〜１０の範囲の整数であり、Ａｂは
、抗体、好ましくはモノクローナル抗体であり、Ｄは、薬物単位であり、ｎは、６〜７２
、８〜７２、１０〜７２、１２〜７２、１２〜３６または３８、６〜２４、または最も好
ましくは８〜２４の範囲の整数である。ＰＥＧは、ＰＥＧ単位について本明細書において
提供する実施形態のいずれかにおいて記載された通りである。ＡｂまたはＳに結合してい
る置換スクシンイミドは、加水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち
、カルボニル−窒素結合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。
Ａｂで置換されているＭＤｐｒ部分中、または−Ｘ−Ｄ部分中のスクシンイミドは、加
水分解された形態で存在し得ることが理解される（すなわち、カルボニル−窒素結合の両
方ではなく一方に亘って水分子が付加される）。Ａｂで置換されているｍｃ部分中、また
は−Ｘ−Ｄ部分中のスクシンイミドはまた、加水分解された形態で存在することができる
。
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬物単位Ｄは、下記のようなＭＭＡＥでよく、式
中、波線は、薬物−リンカー部分の残部への結合の部位を示す。
ＤがＭＭＡＥであるものを含めて一部の好ましい態様では、ｐは、６、７、８、９、１
０、１１、または１２である。ＤがＭＭＡＥであるものを含めて一部の実施形態では、抗
体は、抗体のシステイン残基の硫黄原子を介してリンカーにコンジュゲートしている。シ
ステイン残基は、天然に存在するもの、または天然に存在しないものでよい。例えば、一
部の態様では、システインは、鎖間のジスルフィドからである。他の態様では、システイ
ン残基は、導入されたシステイン（例えば、２３９位において導入されたシステイン）か
らである。一部の態様では、抗体は、その鎖間のジスルフィドを介して、および導入され
たシステインを介して薬物−リンカーに結合する。
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬物単位Ｄは、下記のようなＭＭＡＦでよく、式
中、波線は、薬物−リンカー部分の残部への結合の部位を示す。
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬物単位Ｄは、下記のようなカンプトテシン自体
について例示したカンプトテシン化合物でよく、式中、波線は、薬物−リンカー部分の残
部への結合の部位を示す。
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬物単位Ｄは、下記のようなビンブラスチンヒド
ラジドについて例示したようなビンカ化合物でよく、式中、波線は、薬物−リンカー部分
の残部への結合の部位を示す。
上記の実施形態のいずれかにおいて、薬物単位Ｄは、下記のように例示されるアントラ
サイクリン化合物でよく、式中、波線は、薬物−リンカー部分の残部への結合の部位を示
す。
本発明のチオール保護されたリンカー中間化合物および対応するリガンド−リンカー化
合物中の例示的なＰＥＧ化された足場は、下記、


または薬学的に許容されるその塩を含み、式中、
ｎは、２〜７２、好ましくは４〜７２または８〜７２または８〜２４であり、
ｐは、１〜１４、好ましくは約２〜約１２であり、
Ａｂは、抗体、好ましくはモノクローナル抗体である。
上記の式において、リガンド−置換スクシンイミドは、これらの加水分解された形態で
存在し得ることが理解される（すなわち、スクシンイミドのＣ−Ｎ結合の両方ではなく一
方に亘って水分子が付加される）。さらに、上記の実施形態のいずれかにおいて、ｔ−ブ
チルチオール保護基は、任意の他の適切なチオール保護基で置き換えることができる。
本発明のリンカー中間化合物および対応するリガンド−リンカー化合物としての例示的
な多重化されたＰＥＧ化された足場は、下記を含み、




式中、波線は、リガンド単位への共有結合による結合を示し、Ｒ２１は、独立に選択した
ＰＥＧキャッピング基、好ましくはメチルまたは３−プロピオン酸であり、ｎは、独立に
、２〜７２、好ましくは４〜７２または８〜７２または８〜２４の範囲であり、２４がよ
り好ましい。チオール保護基は、別の適切なチオール保護基で置き換えることができる。
一部の好ましい実施形態では、ｐは、６、７、８、９、１０、１１、または１２である
。一部の実施形態では、抗体は、抗体のシステイン残基の硫黄原子を介してリンカーにコ
ンジュゲートしている。システイン残基は、天然に存在するもの、または天然に存在しな
いものでよい。例えば、一部の実施形態では、システインは、鎖間のジスルフィドからで
ある。他の実施形態では、システイン残基は、導入されたシステイン（例えば、２３９位
において導入されたシステイン）からである。一部の実施形態では、抗体は、その鎖間の
ジスルフィドおよび導入されたシステインを介して薬物−リンカーに結合している。
本発明の一部の態様では、リガンド−薬物コンジュゲートのリガンド単位および薬物単
位の間に５０個以下、４５個以下、４０個以下、３５個以下、３０個以下、または２５個
以下の介在する原子が存在する。本発明の一部の態様では、リガンド−薬物コンジュゲー
トのリガンド単位および切断可能な単位の間に４０個以下、３５個以下、３０個以下、ま
たは２５個以下の介在する原子が存在する。
一部の実施形態では、ＰＥＧ単位中の原子が存在するより、リガンド−薬物コンジュゲ
ートのリガンドおよび薬物単位の間により少ない介在する原子が存在する。一部の実施形
態では、ＰＥＧ単位中の原子が存在するより、リガンド−薬物コンジュゲートのリガンド
および切断可能な単位の間により少ない介在する原子が存在する。
一部の実施形態では、ＰＥＧ単位の遠位端部と並列コネクター単位との間に介在する原
子が存在するより、リガンド−薬物コンジュゲートのリガンドおよび薬物単位の間により
少ない介在する原子が存在する。一部の実施形態では、ＰＥＧ単位の遠位端部と並列コネ
クター単位との間に介在する原子が存在するより、リガンド−薬物コンジュゲートのリガ
ンドおよび切断可能な単位の間により少ない介在する原子が存在する。
本発明の好ましい実施形態では、薬物は、好ましくはアウリスタチン（例えば、ＭＭＡ
Ｅ、またはＭＭＡＥと匹敵するもしくはより大きな疎水性を有するアウリスタチン）であ
り、放出可能なアセンブリー単位は、ベータ−グルクロニダーゼによって切断可能なグル
クロニド単位を含み、ＰＥＧ単位は、少なくとも６個、少なくとも８個、少なくとも１０
個、または少なくとも１２個のサブ単位ではあるが７２個以下のサブ単位、好ましくは３
６個以下または２４個以下のサブ単位を含む。好ましい態様では、ＰＥＧ単位は、約８〜
約２４個のサブ単位、最も好ましくは約１２個のサブ単位を含む。リガンド−薬物コンジ
ュゲートまたはその中間体の他の構成要素は、本明細書において提供する実施形態のいず
れかにおいて記載されている通りであり得る。
本発明の好ましい組成物は、リガンド−薬物コンジュゲートの集団を含み、ここでリガ
ンド単位は、抗体（例えば、インタクトな抗体）であり、薬物単位は、アウリスタチンま
たは非アウリスタチン（好ましくはアウリスタチン、例えば、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＥと
匹敵するもしくはより大きな疎水性を有するアウリスタチン）であり、放出可能なアセン
ブリー単位は、ベータ−グルクロニダーゼによって切断可能なグルクロニド単位を含み、
ＰＥＧ単位は、少なくとも６個、少なくとも８個、少なくとも１０個、または少なくとも
１２個のサブ単位ではあるが、７２個以下のサブ単位、好ましくは３６個以下または２４
個以下のサブ単位を含み、組成物中の抗体当たりの薬物−リンカー部分の平均数は、少な
くとも６、または少なくとも約８である。好ましい態様では、ＰＥＧ単位は、約８〜約２
４個のサブ単位、最も好ましくは約１２個のサブ単位を含む。リガンド−薬物コンジュゲ
ートの他の構成要素は、本明細書において提供する実施形態のいずれかにおいて記載され
ている通りであり得る。
使用方法
がんの処置
リガンド−薬物コンジュゲートは、腫瘍細胞もしくはがん細胞の増殖を阻害し、腫瘍も
しくはがん細胞においてアポトーシスをもたらし、または患者においてがんを処置するの
に有用である。したがって、がんの処置のための種々の状況においてリガンド−薬物コン
ジュゲートを使用することができる。リガンド−薬物コンジュゲートを使用して、薬物を
腫瘍細胞またはがん細胞に送達することができる。理論に束縛されるものではないが、一
実施形態では、リガンド−薬物コンジュゲートのリガンド単位は、がん細胞もしくは腫瘍
細胞関連抗原に結合し、または会合し、リガンド−薬物コンジュゲートは、受容体媒介エ
ンドサイトーシスまたは他の内部移行機序によって腫瘍細胞またはがん細胞内に取り込ま
れる（内部移行する）ことができる。抗原は、腫瘍細胞もしくはがん細胞に結合すること
ができ、または腫瘍細胞もしくはがん細胞と関連している細胞外マトリックスタンパク質
でよい。細胞内に入ると、薬物は、切断可能な機序によって細胞内で放出される。代わり
の実施形態では、薬物または薬物単位は、腫瘍細胞またはがん細胞の外でリガンド−薬物
コンジュゲートから切断され、薬物または薬物単位はそれに続いて、細胞に浸透する。
一実施形態では、リガンド単位は、腫瘍細胞またはがん細胞に結合する。
別の実施形態では、リガンド単位は、腫瘍細胞またはがん細胞の表面上にある腫瘍細胞
抗原またはがん細胞抗原に結合する。
別の実施形態では、リガンド単位は、腫瘍細胞またはがん細胞と関連する細胞外マトリ
ックスタンパク質である腫瘍細胞抗原またはがん細胞抗原に結合する。
特定の腫瘍細胞またはがん細胞についてのリガンド単位の特異性は、最も効果的に処置
されるこれらの腫瘍またはがんを決定するために重要であり得る。例えば、造血性のがん
に存在するがん細胞抗原を標的とするリガンド−薬物コンジュゲートは、血液悪性腫瘍を
処置するために有用であり得る（例えば、抗ＣＤ３０、抗ＣＤ７０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ
３３結合リガンド単位（例えば、抗体）は、血液悪性腫瘍を処置するのに有用であり得る
）。固形腫瘍に存在するがん細胞抗原を標的とするリガンド−薬物コンジュゲートは、こ
のような固形腫瘍を処置するのに有用であり得る。
リガンド−薬物コンジュゲートで処置することができるがんには、これらに限定されな
いが、造血性のがん、例えば、リンパ腫（ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）
および白血病など、ならびに固形腫瘍が含まれる。造血性のがんの例には、濾胞性リンパ
腫、未分化大細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、急性骨髄芽球性白血病、慢性骨髄球
性白血病、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、および多発性骨髄
腫が含まれる。固形腫瘍の例には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉
腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、
ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、結腸直腸がん、腎臓がん、膵臓が
ん、骨がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、食道がん、胃がん、口腔がん、鼻腔がん、
咽喉がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、
嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、
胎児性癌、ウイルムス腫瘍、子宮頸がん、子宮がん、睾丸がん、小細胞肺癌、膀胱癌、肺
がん、上皮癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、
松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、皮膚がん、黒色腫、神経芽細
胞腫、および網膜芽細胞腫が含まれる。
がんについての多様式治療
これらに限定されないが、腫瘍、転移、または制御されない細胞成長によって特徴付け
られる他の疾患もしくは障害を含めたがんは、リガンド−薬物コンジュゲートの投与によ
って処置または阻害することができる。
他の実施形態では、がんを処置する方法であって、それを必要とする患者に有効量のリ
ガンド−薬物コンジュゲートおよび化学療法剤を投与することを含む、方法を提供する。
一実施形態では、化学療法剤は、それによってがんの処置が難治性であると見出されてこ
なかったものである。別の実施形態では、化学療法剤は、それによってがんの処置が難治
性であると見出されてきたものである。リガンド−薬物コンジュゲートは、がんについて
の処置として手術をまた受けた患者に投与することができる。
一部の実施形態では、患者はまた、さらなる処置、例えば、放射線療法を受ける。特定
の実施形態では、リガンド−薬物コンジュゲートは、化学療法剤とまたは放射線療法と併
行的に投与される。別の特定の実施形態では、化学療法剤または放射線療法は、リガンド
−薬物コンジュゲートの投与の前または後に投与される。
化学療法剤は、一連のセッションに亘って投与することができる。化学療法剤の任意の
１つまたは組合せ、例えば、標準治療の化学療法剤（複数可）を投与することができる。
さらに、リガンド−薬物コンジュゲートによるがんの処置の方法は、化学療法または放
射線療法が、かなり有毒であり、例えば、処置される被験体にとって許容されないまたは
耐えられない副作用をもたらすことが証明され、または証明することができる場合に、化
学療法または放射線療法への代替として提供される。処置される患者は、どの処置が許容
されるまたは耐えられるかが分かるかに応じて、別のがん処置、例えば、手術、放射線療
法または化学療法により任意選択で処置することができる。
自己免疫疾患の処置
リガンド−薬物コンジュゲートは、自己免疫疾患を生じさせる細胞を死滅させ、または
その細胞の複製を阻害するため、または自己免疫疾患を処置するために有用である。リガ
ンド−薬物コンジュゲートは、患者において自己免疫疾患の処置のために種々の状況にお
いてそれに応じて使用することができる。リガンド−薬物コンジュゲートを使用して、薬
物を標的細胞へと送達することができる。理論に束縛されるものではないが、一実施形態
では、リガンド−薬物コンジュゲートは、標的細胞の表面上の抗原と会合し、次いで、リ
ガンド−薬物コンジュゲートは、受容体媒介エンドサイトーシスによって標的細胞内に取
り込まれる。一旦細胞内に入ると、リンカー単位は切断され、薬物または薬物単位の放出
をもたらす。次いで、放出された薬物は、自由にサイトゾル中を移動し、細胞毒性活性ま
たは細胞増殖抑制活性が誘導される。代わりの実施形態では、薬物は、標的細胞の外側で
リガンド−薬物コンジュゲートから切断され、薬物または薬物単位はそれに続いて細胞に
浸透する。
一実施形態では、リガンド単位は、自己免疫性抗原へと結合する。一態様では、抗原は
、自己免疫状態に関与している細胞の表面上に存在する。
別の実施形態では、リガンド単位は、細胞の表面上にある自己免疫性抗原に結合する。
一実施形態では、リガンド単位は、自己免疫疾患の状態と関連する活性化リンパ球に結
合する。
さらなる実施形態では、リガンド−薬物コンジュゲートは、特定の自己免疫疾患と関連
する自己免疫性抗体を産生する細胞を死滅させ、またはその細胞の増殖を阻害する。
リガンド−薬物コンジュゲートで処置することができる特定のタイプの自己免疫疾患に
は、これらに限定されないが、Ｔｈ２リンパ球が関連する障害（例えば、アトピー性皮膚
炎、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身性硬化症、お
よび移植片対宿主病）；Ｔｈ１リンパ球が関連する障害（例えば、関節リウマチ、多発性
硬化症、乾癬、シェーグレン症候群（Ｓｊｏｒｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、橋本
甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、および結核）；な
らびに活性化Ｂリンパ球が関連する障害（例えば、全身性エリテマトーデス、グッドパス
チャー症候群、関節リウマチ、およびＩ型糖尿病）が含まれる。
自己免疫疾患の複数薬物療法
自己免疫疾患を処置するための方法であって、それを必要とする患者に有効量のリガン
ド−薬物コンジュゲート、および自己免疫疾患の処置のために公知である別の治療剤を投
与することを含む、方法がまた開示されている。
組成物および投与の方法
本発明は、本明細書に記載されているリガンド−薬物コンジュゲートおよび薬学的に許
容される担体を含む医薬組成物を提供する。リガンド−薬物コンジュゲートは、それにリ
ガンド単位が結合する抗原の発現と関連する障害の処置のために、化合物を患者に投与す
ることを可能とする任意の形態でよい。例えば、コンジュゲートは、液体または固体の形
態でよい。好ましい投与経路は、非経口である。非経口投与は、皮下注射、静脈内注射、
筋内注射、胸骨内注射または注入技術を含む。一態様では、組成物は、非経口的に投与さ
れる。一態様では、コンジュゲートは、静脈内に投与される。投与は、任意の好都合な経
路によって、例えば、注入またはボーラス注射によってでよい。
医薬組成物は、患者への組成物の投与によって化合物が生物学的に利用可能となるよう
に製剤化することができる。組成物は、１個または複数の投薬単位の形態を取ることがで
き、例えば、錠剤は、単回の投薬単位でよい。
医薬組成物の調製において使用される材料は、使用される量で無毒性であり得る。医薬
組成物中の活性成分（複数可）の最適な投与量は、種々の要因によって決まることは当業
者には明らかである。関連要因には、これらに限定されないが、動物のタイプ（例えば、
ヒト）、化合物の特定の形態、投与の様式、および用いる組成物が含まれる。
組成物は、例えば、液体の形態でよい。液体は、注射による送達のために有用であり得
る。注射による投与のための組成物において、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散化剤、
懸濁化剤、緩衝剤、安定剤および等張剤の１つまたは複数をまた含むことができる。
液体組成物はまた、これらが液剤、懸濁剤または他の同様の形態であろうとも、下記の
１つまたは複数を含むことができる：無菌の賦形剤（ｄｉｌｕｅｎｔ）、例えば、注射用
水、食塩溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム、不揮発性油
、例えば、溶媒または懸濁媒としての役割を果たすことができる合成モノまたはジグリセ
リド（ｄｉｇｙｌｃｅｒｉｄｅ）、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキス
トリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールま
たはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；
キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、アミノ酸、アセテート
、シトレートまたはホスフェート；洗剤、例えば、非イオン性界面活性剤、ポリオール；
および浸透圧の調節のための剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経口
の組成物は、ガラス、プラスチックまたは他の材料でできているアンプル、使い捨て注射
器または複数用量バイアル中に封入することができる。生理食塩水は、例示的なアジュバ
ントである。注射用組成物は好ましくは無菌である。
特定の障害または状態の処置において有効であるコンジュゲートの量は障害または状態
の性質によって決まり、標準的な臨床技術によって決定することができる。さらに、ｉｎ
ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのアッセイを任意選択で用いて、最適な投与量範囲の
同定を助けることができる。組成物中に用いる正確な用量はまた、投与経路、および疾患
または障害の重症度によって決まり、医師の判断および各患者の状況によって決定すべき
である。
組成物は、適切な投与量が得られるような有効量の化合物を含む。典型的には、この量
は、組成物の重量によって化合物の少なくとも約０．０１％である。
静脈内投与のために、組成物は、動物の体重ｋｇ当たり約０．０１〜約１００ｍｇのリ
ガンド−薬物コンジュゲートを含むことができる。一態様では、組成物は、動物の体重ｋ
ｇ当たり約１〜約１００ｍｇのリガンド−薬物コンジュゲートを含むことができる。別の
態様では、投与される量は、約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の化合物である。
一般に、患者に投与されるコンジュゲートの投与量は典型的には、約０．０１ｍｇ／ｋ
ｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ被験体の体重である。一部の実施形態では、患者に投与される投
与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ被験体の体重である。一部の実施形態
では、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ被験体の体重
である。一部の実施形態では、患者に投与される投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０
ｍｇ／ｋｇ被験体の体重である。一部の実施形態では、投与される投与量は、約０．１ｍ
ｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ被験体の体重で
ある。一部の実施形態では、投与される投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ被
験体の体重である。一部の実施形態では、投与される投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０
ｍｇ／ｋｇ被験体の体重である。一部の実施形態では、投与される投与量は、処置サイク
ルに亘って、約０．１〜４ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは０．１〜３．２ｍｇ／ｋｇ
、またはさらにより好ましくは０．１〜２．７ｍｇ／ｋｇ被験体の体重である。
用語「担体」とは、それと一緒に化合物を投与する、賦形剤、アジュバントまたは添加
剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）を指す。このような医薬担体は、液体、例えば、水および油（
石油起源、動物起源、野菜起源または合成起源のものを含めた）、例えば、ピーナッツ油
、ダイズ油、鉱油、ゴマ油でよい。担体は、食塩水、アラビアゴム、ゼラチン、デンプン
糊、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素でよい。さらに、助剤、安定化剤、増粘
剤、滑沢剤および着色剤を使用することができる。一実施形態では、患者に投与するとき
、化合物または組成物および薬学的に許容される担体は無菌である。化合物が静脈内に投
与されるとき、水が例示的な担体である。食塩水およびデキストロース水溶液およびグリ
セロール溶液はまた、特に、注射用溶液のために、液体担体として用いることができる。
適切な医薬担体はまた、添加剤、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロー
ス、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、
モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、
プロピレン、グリコール、水、エタノールを含む。本組成物はまた、必要に応じて、微量
の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することができる。
一実施形態では、コンジュゲートは、動物、特に、人間への静脈内投与のために適合さ
せた医薬組成物として通例の手順によって製剤化する。典型的には、静脈内投与のための
担体またはビヒクルは、無菌の等張性の緩衝水溶液である。必要である場合、組成物はま
た、可溶化剤を含むことができる。静脈内投与のための組成物は、注射の部位における疼
痛を和らげるための局所麻酔剤、例えば、リグノカインを任意選択で含むことができる。
一般に、成分は、別々に、または単位剤形で一緒に混合されて、例えば、密封された容器
、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサッシェ中の乾燥した凍結乾燥粉末または水
非含有の濃縮物として提供される。コンジュゲートが注入によって投与される場合、これ
は、例えば、無菌の医薬グレードの水または食塩水を含有する注入ボトルで調剤すること
ができる。コンジュゲートが注射によって投与される場合、成分を投与の前に混合するこ
とができるように、注射用滅菌水または食塩水のアンプルを提供することができる。
医薬組成物は一般に、無菌の実質的に等張性のものとして、および米国食品医薬品局の
全ての適正製造規範（ＧＭＰ）の規制に完全にのっとり製剤化される。
例示的な方法
本明細書において提供するのは、本明細書に記載のような式（ＩＶ）、（Ｖ）、または
（ＶＩ）の構造によって表される薬物−リンカー化合物を調製する方法であり、この方法
は、ステップ（ａ）：本明細書に記載のような式ＶＩＩ、ＶＩＩＩまたはＩＸの構造によ
って表される中間体リンカー化合物と、十分な量のＸ’−Ｄ部分とを接触させて、Ｌｐ’
およびＡＤ’のそれぞれの場合についてＬｐ−Ｘ−ＤまたはＡＤ−Ｘ−Ｄ部分を形成する
ためにＬｐ’またはＡＤ’と反応させるステップを含み、−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合
した放出可能なアセンブリー単位であり、Ｘ’−Ｄは、薬物単位に結合した放出可能なア
センブリー単位前駆体であり、Ｘ’は、Ｌｐ’および／またはＡＤ’と反応することがで
きる。
一部の態様では、このように調製された薬物−リンカーは、本明細書に記載のような式
ＩＶａ、ＩＶｂ、Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ、ＶＩａまたはＶＩｂによって表される構造を有し、
ステップ（ａ）において使用される中間体リンカー化合物は、本明細書に記載のような式
ＶＩＩＩａ、ＶＩＩＩｂ、ＶＩＩＩｃ、ＶＩＩＩｄ、ＩＸａまたはＩＸｂによって表され
る構造を有する。
方法は、（ａ’）のステップ：構造が式ＶＩＩＩａ、ＶＩＩＩｂ、ＶＩＩＩｃ、ＶＩＩ
Ｉｄ、ＩＸａまたはＩＸｂに対応する適切に保護された中間体リンカー化合物を脱保護す
るステップをさらに含むことができ、ｔは、０であり、適切に保護されたＡＤ’またはＬ
ｐ’は、

の構造を有し、式中、Ｒ１１１は、必要とされるとき適切な保護を伴う、水素、ｐ−ヒド
ロキシベンジル、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、−ＣＨ２ＯＨ、
−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯ
Ｈ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｎ
Ｈ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３Ｎ
ＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２
）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（
ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメ
チル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−

から独立に選択され、
ＲＰＲは、適切なチオール保護基であり、波線は、中間体リンカー化合物内の適切な保護
されたＡＤ’またはＬｐ’部分の共有結合による結合を示し、
ステップ（ａ）において、ステップ（ａ’）からのこのように得られた脱保護された式Ｖ
ＩＩＩａ、ＶＩＩＩｂ、ＶＩＩＩｃ、ＶＩＩＩｄ、ＩＸａまたはＩＸｂ生成物とＸ’−Ｄ
部分とを接触させ、Ｘ’は、ＡＤ’またはＬｐ’の遊離チオール基と反応して、チオ−置
換スクシンイミド部分を形成することができるマレイミド部分からなる。
代わりに、方法は、ａ’のステップ：この構造を有する式ＶＩＩＩａ、ＶＩＩＩｂ、Ｖ
ＩＩＩｃ、ＶＩＩＩｄ、ＩＸａまたはＩＸｂへ、中間体リンカー化合物前駆体を脱保護す
るステップをさらに含むことができ、ｔは、１であり、ＡＤ’−ＡＤ’またはＡＤ’−Ｌ
ｐ’は、適切に保護されており、適切に保護されたＡＤ’−ＡＤ’またはＡＤ’−Ｌｐ’
は、

の構造を有し、式中、Ｒ１１１は、水素またはメチルであり、ＲＰＲは、脱保護されてい
る適切なチオール保護基であり、波線は、中間体リンカー化合物内の適切な保護されたＡ
Ｄ’部分の共有結合による結合を示し、ステップ（ａ）において、ステップ（ａ’）から
のこのように得られた脱保護された式ＶＩＩＩａ、ＶＩＩＩｂ、ＶＩＩＩｃ、ＶＩＩＩｄ
、ＩＸａまたはＩＸｂ生成物と、Ｘ’−Ｄ部分とを接触させ、Ｘ’は、ＡＤ’−ＡＤ’ま
たはＡＤ’−Ｌｐ’の遊離チオール基と反応して、チオ−置換スクシンイミド含有部分を
形成することができるマレイミド含有部分からなる。
本明細書において提供するのは、本明細書に記載のような式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの構
造によって表されるリガンド−薬物コンジュゲートを調製する方法であり、方法は、ステ
ップ（ａ）：本明細書に記載のような式Ｘ、ＸＩまたはＸＩＩの構造によって表されるリ
ガンド−リンカー化合物と、十分な量のＸ’−Ｄ部分とを接触させて、Ｌｐ’およびＡＤ
’のそれぞれの場合についてＬｐ−Ｘ−ＤまたはＡＤ−Ｘ−Ｄ部分を形成するために、Ｌ
ｐ’またはＡＤ’と反応させるステップを含み、−Ｘ−Ｄは、薬物単位へと結合した放出
可能なアセンブリー単位であり、Ｘ’−Ｄは、薬物単位に結合した放出可能なアセンブリ
ー単位前駆体であり、Ｘ’は、Ｌｐ’および／またはＡＤ’と反応することができる。
このように調製された例示的なリガンド−薬物コンジュゲートは、本明細書に記載のよ
うな式Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂによって表され
る構造を有し、リガンド−リンカー化合物は、本明細書に記載のような式ＸＩａ、ＸＩｂ
、ＸＩｃ、ＸＩｄ、ＸＩＩａまたはＸＩＩｂによって表される構造を有する。
方法は、ステップａ’：構造が本明細書に記載のような式Ｘ、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩａ、
ＸＩｂ、ＸＩｃ、ＸＩｄ、ＸＩＩａまたはＸＩＩｂに対応する適切に保護されたリガンド
−リンカー化合物を脱保護するステップをさらに含むことができ、ｔは、０であり、適切
に保護されたＡＤ’またはＬｐ’は、

の構造を有し、式中、Ｒ１１１は、必要とされるとき適切な保護を伴う、水素、ｐ−ヒド
ロキシベンジル、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、−ＣＨ２ＯＨ、
−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯ
Ｈ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｎ
Ｈ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３Ｎ
ＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２
）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（
ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメ
チル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−

から独立に選択され、式中、ＲＰＲは、適切なチオール保護基であり、波線は、中間体リ
ガンド−リンカー化合物内の適切な保護されたＡＤ’またはＬｐ’部分の共有結合による
結合を示し、
ステップ（ａ）において、ステップ（ａ’）からのこのように得られた脱保護された式Ｘ
、ＸＩ、ＸＩＩ、ＸＩａ、ＸＩｂ、ＸＩｃ、ＸＩｄ、ＸＩＩａまたはＸＩＩｂ生成物と、
Ｘ’−Ｄ部分とを接触させ、Ｘ’は、ＡＤ’またはＬｐ’の遊離チオール基と反応し、チ
オ−置換スクシンイミド部分を形成することができるマレイミド部分からなる。
代わりに、方法は、ステップ（ａ’）：構造が式ＸＩａ、ＸＩｂ、ＸＩｃ、ＸＩｄ、Ｘ
ＩＩａまたはＸＩＩｂに対応するリガンド−リンカー化合物を脱保護するステップをさら
に含むことができ、ｔは、１であり、ＡＤ’−ＡＤ’またはＡＤ’−Ｌｐ’は、適切に保
護されており、適切に保護されたＡＤ’−ＡＤ’部分は、

の構造を有し、式中、Ｒ１１１は、水素またはメチルであり、ＲＰＲは、脱保護されてい
る適切なチオール保護基であり、波線は、中間体リガンド−リンカー化合物内の適切な保
護されたＡＤ’部分の共有結合による結合を示し、ステップ（ａ）において、ステップ（
ａ’）からのこのように得られた脱保護された式ＸＩａ、ＸＩｂ、ＸＩｃ、ＸＩｄ、ＸＩ
ＩａまたはＸＩＩｂ生成物と、Ｘ’−Ｄ部分とを接触させ、Ｘ’は、ＡＤ’−ＡＤ’また
はＡＤ’−Ｌｐ’の遊離チオール基と反応して、チオ−置換スクシンイミド含有部分を形
成することができるマレイミド含有部分からなる。
ステップ（ａ’）からもたらされる遊離チオール（複数可）と反応することができる例
示的なマレイミド部分は、

（式中、Ｒ１７は、−（ＣＨ２）５Ｃ（＝Ｏ）−であり、波線は、Ｘ’−Ｄ部分内の結合
を示す）の構造を有するか、または

（式中、波線は、Ｘ’−Ｄ部分内の結合を示し、アミノ基は、ＲＰＲ保護されたチオール
基の脱保護のための条件下で安定的であるアミノ保護基によって任意選択で保護されてい
る）の構造を有する。
一般的な情報。全ての市販の無水溶媒をそれ以上精製することなく使用した。ＰＥＧ試
薬は、Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ（Ｐｏｗｅｌｌ、ＯＨ）から得た。分析用薄層
クロマトグラフィーは、シリカゲル６０Ｆ２５４アルミニウムシート（ＥＭＤ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ、Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ、ＮＪ）で行った。放射状クロマトグラフィーを、Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ装置（Ｈａｒｒｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃ
Ａ）で行った。カラムクロマトグラフィーを、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ Ｏｎｅ
フラッシュ精製システム（Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ、ＮＣ）で行った。分析用ＨＰＬＣは、Ｖ
ａｒｉａｎ ＰｒｏＳｔａｒ３３０ＰＤＡ検出器と共に構成されるＶａｒｉａｎ Ｐｒｏ
Ｓｔａｒ２１０溶媒送達システムで行った。試料をＣ１２ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙ
ｎｅｒｇｉ、２．０×１５０ｍｍ、４μｍ、８０Å逆相カラムで溶出させた。酸性移動相
は、両方とも０．０５％トリフルオロ酢酸または０．１％ギ酸のいずれか（各化合物につ
いて示す）を含有する、アセトニトリルおよび水からなった。化合物を、注射後１分にお
ける５％から１１分における９５％の直線勾配の酸性アセトニトリル、それに続く１５分
まで均一濃度の９５％アセトニトリル（流量＝１．０ｍＬ／分）で溶出させた。２つの異
なるシステムに対してＬＣ−ＭＳを行った。ＬＣ−ＭＳシステム１は、Ｃ１２Ｐｈｅｎｏ
ｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ、２．０×１５０ｍｍ、４μｍ、８０Å逆相カラムを備えた
ＨＰ Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣ機器とインターフェースしたＺＭＤ Ｍｉｃｒｏ
ｍａｓｓ質量分析計からなった。酸性溶離液は、１０分に亘る０．１％ギ酸水溶液中の５
％〜９５％の直線勾配のアセトニトリル、それに続く５分間の均一濃度の９５％アセトニ
トリル（流量＝０．４ｍＬ／分）から成った。ＬＣ−ＭＳシステム２は、Ｗａｔｅｒｓ２
９９６フォトダイオードアレイ検出器を有するＷａｔｅｒｓ２６９５ Ｓｅｐａｒａｔｉ
ｏｎｓ ＭｏｄｕｌｅとインターフェースしたＷａｔｅｒｓ Ｘｅｖｏ Ｇ２Ｔｏｆ質量
分析計からなった。カラム、移動相、勾配、および流量は、ＬＣ−ＭＳシステム１につい
てと同じであった。
抗体−薬物コンジュゲートのＬＣ−ＭＳデータは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈ
−クラスＵＰＬＣシステムにカップリングしたＷａｔｅｒｓ Ｘｅｖｏ ＧＳ−Ｓ ＱＴ
ＯＦで得た。試料を分析用逆相カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐ
ＬＲＰ−Ｓ、３００Å、２．１ｍｍ ＩＤ×５０ｍｍ、８μｍ）で８０℃にてクロマトグ
ラフにかけ、１２．５分に亘る０．０５％ＴＦＡ水溶液中のアセトニトリル中の０．０１
％ＴＦＡの２５％〜６５％の直線勾配、それに続く１．５分間のアセトニトリル中の均一
濃度６５％の０．０１％ＴＦＡで、１ｍＬ／分の流量で溶出させた。軽鎖および重鎖につ
いての質量分析法データは５００〜４０００ｍ／ｚの質量範囲を使用してＥＳＩ＋モード
で得て、ＭａｘＥｎｔ１を使用して畳み込みを解き、このように得られたコンジュゲート
の質量を決定した。
分取ＨＰＬＣは、Ｖａｒｉａｎ ＰｒｏＳｔａｒ３３０ＰＤＡ検出器と共に構成される
Ｖａｒｉａｎ ＰｒｏＳｔａｒ２１０溶媒送達システムで行った。生成物を、水中の０．
１％ギ酸（溶媒Ａ）およびアセトニトリル中の０．１％ギ酸（溶媒Ｂ）で溶出するＣ１２
Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ１０．０×２５０ｍｍ、４μｍ、８０Å逆相カラ
ムで精製した。精製方法は、溶媒Ａ対溶媒Ｂの下記の勾配：９０：１０、０分から５分；
９０：１０から１０：９０、５分から８０分；それに続いて、均一濃度の１０：９０、５
分間からなった。流量は４．６ｍＬ／分であり、２５４ｎｍでモニターを行った。スキー
ム３および４における化合物についての分取ＨＰＬＣを、両方の移動相中で０．１％ギ酸
の代わりに０．１％トリフルオロ酢酸を用いて行った。ＮＭＲスペクトルデータをＶａｒ
ｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ４００ＭＨｚ分光計で集めた。結合定数（Ｊ）はヘルツで報告す
る。
（実施例１）
直列配向のＰＥＧ単位を含むグルクロニド−ＭＭＡＥ薬物−リンカーの合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（３−アミノプロパンアミド）−４−（
（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（
（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニ
ルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピ
ロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメ
チル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデ
シル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カ
ルボン酸（３）：化合物２の合成は従前に記載されてきた（参照により本明細書に組み込
まれている米国特許出願公開第２００８／０２４１１２８号）。グルクロニド−ＭＭＡＥ
中間体２（４０ｍｇ、２６．８μｍｏｌ）を含有するフラスコに、０．９ｍＬのメタノー
ルおよび０．９ｍＬのテトラヒドロフランを加えた。次いで、溶液を氷浴中で冷却し、水
酸化リチウム一水和物（６．８ｍｇ、１６１μｍｏｌ）を０．９ｍＬの水中の溶液として
滴下添加した。次いで、反応物を氷上で１．５時間撹拌し、この時点において、ＬＣ／Ｍ
Ｓは生成物への完全な変換を明らかにした。次いで、氷酢酸（９．２μＬ、１６１μｍｏ
ｌ）を加え、反応物を濃縮乾固した。分取ＨＰＬＣによって、完全に脱保護されたグルク
ロニド−ＭＭＡＥリンカー中間体３（２６ｍｇ、８７％）を油性残渣として得た。分析用
ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ｔＲ９．３分。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１１．１０分、
ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１１３０．４８（Ｍ＋Ｈ）＋、ｍ／ｚ（ＥＳ−）実測値、１１
２８．６３（Ｍ−Ｈ）−。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１
１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−
（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１
−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエ
チル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，
１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）−２−（１−（２，５−ジオキ
ソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３，７９−ジオキソ−７，１０，
１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６，４９，５
２，５５，５８，６１，６４，６７，７０，７３，７６−テトラコサオキサ−４，８０−
ジアザトリオクタコンタンアミド）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒ
ドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（４）：無水ＤＭＦ（０．９４ｍＬ）に溶解した脱
保護されたグルクロニド−ＭＭＡＥ中間体３（２６ｍｇ、２３μｍｏｌ）を含有するフラ
スコに、マレイミド−ＰＥＧ２４−ＮＨＳエステル（３２ｍｇ、２３μｍｏｌ）をジメチ
ルアセトアミド中の溶液（２００ｍｇ／ｍＬ）として加えた。ジイソプロピルエチルアミ
ン（２０μＬ、１１５μｍｏｌ）を加え、反応物を窒素下で周囲温度にて６時間撹拌し、
この時点において、ＬＣ／ＭＳは所望の生成物への変換を明らかにした。反応物を分取Ｈ
ＰＬＣによって精製し、直鎖状マレイミド−ＰＥＧ２４−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカ
ー４（３１ｍｇ、５５％）を油性残渣として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ
（ｐｐｍ） ０．９２ （ｍ， １６Ｈ）， １．１５ （ｍ， ６Ｈ）， １．４２
（ｍ， ２Ｈ）， １．６０ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．
２０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．４８ （ｍ， ６Ｈ）， ２．６６ （ｍ， ３Ｈ），
２．９６ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１０ （ｓ， ２Ｈ）， ３．２７ （ｓ， ２Ｈ）
， ３．３１ （ｓ， ８Ｈ）， ３．３８ （ｍ， ５Ｈ）， ３．４４ （ｍ， ２
Ｈ）， ３．５７ （ｍ， ６Ｈ）， ３．６２ （ｍ， ７９Ｈ）， ３．７７ （ｍ
， ５Ｈ）， ３．８７ （ｔ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．０５ （ｍ
， １Ｈ）， ４．２１ （ｍ， ３Ｈ）， ４．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．６１
（ｍ， ２Ｈ）， ４．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１４ （ｍ， ３Ｈ）， ６．８
２ （ｓ， ２Ｈ）， ７．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｍ， ２Ｈ）， ７
．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４ （ｄ， Ｊ ＝
８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ８．１０ （ｍ， １Ｈ），
８．２７ （ｍ， ２Ｈ）．分析用ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ｔＲ９．９分。ＬＣ−
ＭＳシステム１：ｔＲ１１．９４分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１２０５．３４（Ｍ＋２
Ｈ）２＋。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１０．３８分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２４１
０．３２２５（Ｍ＋Ｈ）＋。
（実施例２）
並列配向でＰＥＧ単位を含むグルクロニド−ＭＭＡＥ薬物−リンカーの合成
（Ｓ）−８０−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）
−７４−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５
，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラ
コサオキサ−７５−アザヘンオクタコンタン−８１−酸（６）：
Ｎα−Ｆｍｏｃ−リシン５（３０ｍｇ、８１．５μｍｏｌ）を含有するフラスコに、１
．６ｍＬの無水ジクロロメタン、それに続いてメトキシ−ＰＥＧ２４−ＯＳｕ（１００ｍ
ｇ、８１．５μｍｏｌ）を加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（７１μＬ、４０８μｍｏｌ）を
加え、反応物を窒素下で室温にて撹拌し、それに続いてＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳを行った
。２時間後、ＬＣ／ＭＳは生成物への変換を明らかにした。反応溶液をジクロロメタンに
希釈し、精製のために１ｍｍのｃｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎプレート上に直接添加した。プ
レートを増加する量のメタノール（０％〜１５％）を伴うジクロロメタンで溶出させ、所
望の生成物６（６３ｍｇ、５３％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１７、ＣＨ２Ｃｌ２中１
０％ＭｅＯＨ。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ （ｐｐｍ） １．４８ （ｍ， ６
Ｈ）， ２．４７ （ｍ， ５Ｈ）， ３．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３８ （ｓ，
３Ｈ）， ３．６３ （ｍ， ８６Ｈ）， ４．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３６
（ｍ， １Ｈ）， ７．２６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６
０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７１ （ｍ， ３Ｈ）．分析用ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：
ｔＲ１０．８分。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１１．９５分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、
１４６８．４０（Ｍ＋Ｈ）＋、ｍ／ｚ（ＥＳ−）実測値、１４６６．３６（Ｍ−Ｈ）−。
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル８０−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−
イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−７４−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７
，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，
５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７５−アザヘンオクタコンタン−８
１−オエート（７）：
フラスコに、Ｎα−Ｆｍｏｃ−リシン（ＰＥＧ２４）−ＯＨ６（６３ｍｇ、４３μｍｏ
ｌ）および０．４３ｍＬの無水テトラヒドロフランを充填した。Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミド（ｈｙｄｒｏｘｏｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）（５．５ｍｇ、４７μｍｏｌ）、そ
れに続いてジイソプロピルカルボジイミド（７．３μＬ、４７μｍｏｌ）を加えた。反応
物を窒素下で密封し、一晩撹拌した。１８時間後、さらなるＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ド（５．５ｍｇ、４７μｍｏｌ）およびジイソプロピルカルボジイミド（７．３μＬ、４
７μｍｏｌ）を加え、さらに４時間撹拌を続け、この時点において、ＬＣ／ＭＳは生成物
への完全な変換を明らかにした。粗反応物をジクロロメタンに希釈し、増加する量のメタ
ノール（０％〜１０％）を伴うジクロロメタンで溶出する１ｍｍプレートでの放射状クロ
マトグラフィーによって精製し、所望の活性化エステル７（３６ｍｇ）を得た。さらなる
特性決定をせずに、材料をさらに使用した。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４３、ＣＨ２Ｃｌ２中の
１０％ＭｅＯＨ。分析用ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ｔＲ１１．４分。ＬＣ−ＭＳシステ
ム２：ｔＲ１１．０１分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１５６４．８３７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−８０−（（（（９Ｈ−フルオ
レン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−７４，８１−ジオキソ−２，５，８
，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，
５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７５，８２−ジ
アザペンタオクタコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（
（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（
１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メト
キシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）
−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−
ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒド
ロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（８）：脱保護されたグルクロニド
−ＭＭＡＥリンカー中間体３（２６ｍｇ、２３μｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミド（
０．５８ｍＬ）に溶解し、Ｎα−Ｆｍｏｃ−リシン（ＰＥＧ）−ＯＳｕ７（３６ｍｇ、２
３μｍｏｌ）を含有するフラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（２０
μＬ、１１５μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を窒素下で室温にて撹拌した。４．５時
間後、ＬＣ−ＭＳは、生成物への変換を明らかにした。生成物を分取ＨＰＬＣによって精
製し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体８（３０ｍｇ、
２ステップに亘り５０％）を油性残渣として得た。分析用ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ｔ
Ｒ１１．４分。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１２．３１分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１
２９１．０５（Ｍ＋２Ｈ）２＋。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１１．３０分、ｍ／ｚ（Ｅ
Ｓ＋）実測値、２５８０．２５１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−８０−アミノ−７４，８１−
ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８
，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオ
キサ−７５，８２−ジアザペンタオクタコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ
，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ
，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル
）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）
−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−ト
リオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−
３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（９）：Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体８（３０ｍｇ、１２μｍｏ
ｌ）を０．４６ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、それに続いて０．１２ｍＬの
ピペリジンを加えた。反応物を窒素下で３時間撹拌し、次いで、濃縮乾固した。生成物を
分取ＨＰＬＣによって精製し、Ｈ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間
体９（２４ｍｇ、８７％）を油性残渣として得た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ
（ｐｐｍ） ０．９２ （ｍ， １４Ｈ）， １．１４ （ｍ， ６Ｈ）， １．４２
（ｍ， ５Ｈ）， １．７９ （ｍ， ８Ｈ）， ２．２２ （ｍ， ３Ｈ）， ２．４
２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６
５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５ （ｍ， ３Ｈ）， ３
．１０ （ｍ， ３Ｈ）， ３．３１ （ｍ， ８Ｈ）， ３．３５ （ｍ， ６Ｈ），
３．５４ （ｍ， ５Ｈ）， ３．６３ （ｓ， ７０Ｈ）， ３．７２ （ｔ， Ｊ
＝ ６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０７ （ｍ， １
Ｈ）， ４．２２ （ｍ， ３Ｈ）， ４．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １
Ｈ）， ４．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．７１ （ｍ， ２
Ｈ）， ５．１１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．１２ （ｍ， １Ｈ）， ７．２１ （ｍ，
１Ｈ）， ７．３１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７５ （
ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ，
１Ｈ）， ７．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２６ （ｍ，
２Ｈ）．分析用ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ｔＲ８．９分。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔ
Ｒ１１．１８分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１１７８．９７（Ｍ＋２Ｈ）２＋。ＬＣ−Ｍ
Ｓシステム２：ｔＲ９．５０分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２３５８．２３４１（Ｍ＋Ｈ
）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１
１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−
（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１
−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエ
チル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，
１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）−２−（（Ｓ）−８０−（６−
（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）
−７４，８１−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３
２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１
−テトラコサオキサ−７５，８２−ジアザペンタオクタコンタンアミド）フェノキシ）−
３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１０）：マ
レイミドカプロン酸ＮＨＳエステル（４．２ｍｇ、１４μｍｏｌ）を０．６ｍＬの無水ジ
メチルホルムアミドに溶解し、Ｈ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間
体９（２４ｍｇ、１０μｍｏｌ）を含有するフラスコに移した。次いで、ジイソプロピル
エチルアミン（１０μＬ、５８μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を窒素下で室温にて一
晩撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣによって直接的に精製し、ＭＣ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ
２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー１０（２３ｍｇ、９０％）を油性残渣として得
た。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ３ＯＤ） δ （ｐｐｍ） ０．８７ （ｍ， １３Ｈ），
１．１２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．１７ （ｄ， Ｊ ＝ ６
．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２４ （ｍ， ２Ｈ）， １．４８ （ｍ， ９Ｈ），
１．８０ （ｍ， ５Ｈ）， ２．１９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．４２ （ｔ， Ｊ ＝
６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６４ （ｍ， ２Ｈ）
， ２．９６ （ｍ， ３Ｈ）， ３．１０ （ｓ， １Ｈ）， ３．１２ （ｍ， ２
Ｈ）， ３．１５ （ｓ， １Ｈ）， ３．２７ （ｓ， ６Ｈ）， ３．３５ （ｍ，
３Ｈ）， ３．４３ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５８ （
ｍ， ２Ｈ）， ３．６３ （ｍ， ６４Ｈ）， ３．７０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９
２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｍ， ４Ｈ）， ４．５４ （ｍ， １Ｈ）， ４
．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８３ （ｍ， １Ｈ）， ５
．１３ （ｍ， ３Ｈ）， ６．８０ （ｓ， ２Ｈ）， ７．１０ （ｍ， １Ｈ），
７．２０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３８ （ｍ， ２Ｈ
）， ７．７４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９０ （ｍ， ３Ｈ
）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ８．２６ （ｍ， ２Ｈ）．分析用ＨＰＬＣ（０．
１％ギ酸）：ｔＲ１０．６分。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１１．８８分、ｍ／ｚ（ＥＳ
＋）実測値、１２７６．２３（Ｍ＋２Ｈ）２＋。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１０．５４
分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２５５１．２８７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
（実施例３）
ｍＤＰＲ（マレイミド−ジアミノプロパン酸）グルクロニド−ＭＭＡＥ薬物−リンカーの
合成
５０ｍｌの丸底フラスコ中で、Ｈ−ＤＰＲ（ｂｏｃ）−ＯＨおよび無水マレイン酸を４
体積の酢酸に溶解し、溶液を室温にて３時間撹拌した。反応混合物をｒｏｔｏｖａｐで油
へと濃縮し、約１０ｍｌのジクロロメタンを加えることによって生成物を沈殿させた。沈
殿物を真空濾過によって集め、ジクロロメタンで洗浄し、真空オーブン中で一晩乾燥させ
た。
マレイル−ＤＰＲ（ｂｏｃ）−ＯＨを、冷却器を備えた５０ｍｌの丸底フラスコ中でト
ルエン（３ｍｌ）およびトリエチルアミン（２２４ｕＬ）に分子篩上で懸濁した。ＤＭＡ
（約１５０ｕＬ）を加え、溶解性を促進した。溶液を１２５℃に加熱し、４時間還流させ
、その後、反応はＬＣＭＳによって完全であると示された。反応混合物をｒｏｔｏｖａｐ
で濃縮乾固し、ＤＭＳＯに再溶解し、分取ＨＰＬＣによって精製した。生成物を白色の粉
末として単離した。
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
）アミノ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）
プロパノエート（１２）：
（Ｓ）−Ｎα−マレイミド−Ｎβ−Ｂｏｃ−ジアミノプロパン酸１１（スキーム３ａ）
（４００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を７ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解した。Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミド（１７８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、それに続いて１−エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（２９８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を
加えた。反応物を室温にて窒素下で３時間撹拌した。１２０ｍＬの水への希釈によって水
性処理を達成した。次いで、水層を６０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。次いで、合わ
せた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮乾固した。生成物を、ヘ
キサン：酢酸エチルの混合物（５０：５０〜０：１００）で溶出するフラッシュカラムク
ロマトグラフィーによって精製し、（Ｓ）−Ｎα−マレイミド−Ｎβ−Ｂｏｃ−ジアミノ
プロパン酸ＮＨＳエステル［ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ］１２（２９７ｍｇ、５５％）
を得た。ＬＣ−ＭＳシステム１：ｔＲ１２．２３分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２８２．
０５９９（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ基）＋。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１１．３０分、ｍ／ｚ（
ＥＳ＋）実測値、２５８０．２５１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（３−（（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブ
トキシカルボニル）アミノ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロ
ール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１
２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２
Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）ア
ミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２
−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオ
キソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，
４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１３）：ＭＤｐ
ｒ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ１２（３３ｍｇ、８６μｍｏｌ）を１．１ｍＬの無水ジメチルホル
ムアミドに溶解し、脱保護されたグルクロニド−ＭＭＡＥリンカー中間体３（４９ｍｇ、
４３μｍｏｌ）を含有するフラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（３
７μＬ、２２０μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を窒素下で室温にて３０分間撹拌した
。反応を３７μＬの氷酢酸でクエンチし、分取ＨＰＬＣによって精製し、ＭＤｐｒ（Ｂｏ
ｃ）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体１３（３９ｍｇ、６５％）を得た。ＬＣ−ＭＳシス
テム２：ｔＲ１１．０９分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１３９６．７３２１（Ｍ＋Ｈ）＋
。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（３−（（Ｓ）−３−アミノ−２−（２
，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロ
パンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチ
ル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒ
ドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３
−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロ
ピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１
０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−
２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１４）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−グルクロニド−ＭＭＡＥ
中間体１３（１８ｍｇ、１３μｍｏｌ）を含有するフラスコを、０℃に氷浴中窒素下で冷
却した。１０％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン（１．３ｍＬ）溶液を滴下添加した。
次いで、反応物を０℃にて２時間撹拌し、この時点において、ＬＣ−ＭＳは完全なＢｏｃ
脱保護を明らかにした。次いで、反応物を粗残渣に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精製し
、ＭＤｐｒ−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー１４（１５ｍｇ、９２％）を得た。ＬＣ−
ＭＳシステム２：ｔＲ９．１３分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１２９６．６６９７（Ｍ＋
Ｈ）＋。
（実施例４）
並列配向でＰＥＧ単位を含むｍＤＰＲ（マレイミド−ジアミノプロパン酸）グルクロニド
−ＭＭＡＥ薬物−リンカーの合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−８０−（（Ｓ）−３−（（ｔ
ｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−
１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−７４，８１−ジオキソ−２，５，８，１
１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０
，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７５，８２−ジアザ
ペンタオクタコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ
）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ
，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ
−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５
，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオ
キサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキ
シテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１５）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ
１２（３３ｍｇ、８６μｍｏｌ）を０．６６ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、
Ｈ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー中間体９（１３５ｍｇ、５
７μｍｏｌ）を含有するフラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（５０
μＬ、２９０μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を窒素下で室温にて２．５時間撹拌した
。反応を５０μＬの氷酢酸でクエンチし、分取ＨＰＬＣによって精製し、ＭＤｐｒ（Ｂｏ
ｃ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥ中間体１５（８６ｍｇ、５８％）
を得た。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１１．７１分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２６２４
．２００４（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−８０−（（Ｓ）−３−アミノ
−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンア
ミド）−７４，８１−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２
９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８
，７１−テトラコサオキサ−７５，８２−ジアザペンタオクタコンタンアミド）−４−（
（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（
（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニ
ルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピ
ロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメ
チル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデ
シル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カ
ルボン酸（１６）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡ
Ｅ中間体１５（８６ｍｇ、３３ｕｍｏｌ）を含有するフラスコを、氷浴中窒素下で０℃に
冷却した。ジクロロメタン中１０％のトリフルオロ酢酸（３．３ｍＬ）溶液を滴下添加し
た。次いで、反応物を０℃にて２時間撹拌し、この時点において、ＬＣ−ＭＳは完全なＢ
ｏｃ脱保護を明らかにした。次いで、反応物を粗残渣に濃縮し、分取ＨＰＬＣによって精
製し、ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー１６（３８ｍ
ｇ、４６％）を得た。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１０．５４分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測
値、２５２４．２２５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
（実施例５）
並列配向でＰＥＧ１２、ＰＥＧ８、またはＰＥＧ４−（ＰＥＧ４）３単位を含むｍＤＰＲ
（マレイミド−ジアミノプロパン酸）グルクロニド−ＭＭＡＥ薬物−リンカーの合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−４４−（（Ｒ）−３−アミノ
−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンア
ミド）−３８，４５−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２
９，３２，３５−ドデカオキサ−３９，４６−ジアザノナテトラコンタンアミド）−４−
（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−
（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェ
ニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）
ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジ
メチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラ
デシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−
カルボン酸（１７）：ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ１２）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカ
ー１７を、スキーム２および４に記載した１６と同一の様式で調製した。ＬＣ−ＭＳシス
テム２：ｔＲ９．８８分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１９９６．１００１（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−３２−（（Ｒ）−３−アミノ
−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンア
ミド）−２６，３３−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３−オクタオ
キサ−２７，３４−ジアザヘプタトリアコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ
，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ
，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル
）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）
−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−ト
リオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−
３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１８）：Ｍ
Ｄｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ８）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー１７を、スキーム２およ
び４に記載した１６と同一の様式で調製した。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１０．５０分
、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１８１８．８６７８（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−４８−（（Ｒ）−３−アミノ
−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンア
ミド）−１５，２２，３８，４２，４９−ペンタオキソ−２０，２０−ビス（１５−オキ
ソ−２，５，８，１１，１８−ペンタオキサ−１４−アザノナデカン−１９−イル）−２
，５，８，１１，１８，２５，２８，３１，３４−ノナオキサ−１４，２１，３７，４３
，５０−ペンタアザトリペンタコンタンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ
）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）
−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ
）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オ
キソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ
−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，
５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１９）：ＭＤｐｒ−
Ｌｙｓ（ＰＥＧ４［ＰＥＧ４］３）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー１９を、スキーム
２および４に記載した１６と同一の様式で調製した。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ９．９
２分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２６７４．３８１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−２０−（（Ｒ）−３−アミノ
−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンア
ミド）−１４，２１−ジオキソ−２，５，８，１１−テトラオキサ−１５，２２−ジアザ
ペンタコサンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅ
ｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）
−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メ
チル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジ
イソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４
，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（４２）：ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ４）−グル
クロニド−ＭＭＡＥリンカー４２を、スキーム２および４に記載した１６と同一の様式で
調製した。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１０．１８分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１６４
２．８５８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（（Ｓ）−１４−（（Ｒ）−３−アミノ
−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンア
ミド）−８，１５−ジオキソ−２，５−ジオキサ−９，１６−ジアザノナデカンアミド）
−４−（（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−
（２−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１
−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロ
ピル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１
０−ジメチル−３，６，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザ
テトラデシル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
−２−カルボン酸（４３）：ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２）−グルクロニド−ＭＭＡＥリ
ンカー４３を、スキーム２および４に記載した１６と同一の様式で調製した。ＬＣ−ＭＳ
システム２：ｔＲ１０．１０分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１５５４．８０９３（Ｍ＋Ｈ
）＋。
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−（３−（（Ｓ）−６−アセトアミド−２
−（（Ｒ）−３−アミノ−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール
−１−イル）プロパンアミド）ヘキサンアミド）プロパンアミド）−４−（（５Ｓ，８Ｓ
，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（Ｓ）−ｓｅｃ−ブチル）−１２−（２−（（Ｓ）−２−
（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−
２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１
−イル）−２−オキソエチル）−５，８−ジイソプロピル−４，１０−ジメチル−３，６
，９−トリオキソ−２，１３−ジオキサ−４，７，１０−トリアザテトラデシル）フェノ
キシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（４
４）：ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−グルクロニド−ＭＭＡＥリンカー４４を、スキーム２
および４に記載した１６と同一の様式で調製した。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１０．３
８分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、１４６６．８１０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
（実施例６）
並列配向でＰＥＧ単位を含むｍＤＰＲ（マレイミド−ジアミノプロパン酸）バリン−シト
ルリン−ＭＭＡＥ薬物−リンカーの合成
４−（（８０Ｓ，８３Ｓ，８６Ｓ）−８０−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メト
キシ）カルボニル）アミノ）−８３−イソプロピル−７４，８１，８４−トリオキソ−８
６−（３−ウレイドプロピル）−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２
９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８
，７１−テトラコサオキサ−７５，８２，８５−トリアザヘプタオクタコンタンアミド）
ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２
−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン
−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−
１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）ア
ミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソ
ブタン−２−イル）（メチル）カルバメート（２１）：ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ
リンカー（米国特許第７，６５９，２４１号に記載しているように合成された）中間体２
０（１６ｍｇ、１４μｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミド（０．２８ｍＬ）に溶解し、
Ｎα−Ｆｍｏｃ−リシン（ＰＥＧ）−ＯＳｕ７（２５ｍｇ、１７μｍｏｌ）を含有するフ
ラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（１２μＬ、７０μｍｏｌ）を加
え、次いで、反応物を窒素下で室温にて撹拌した。６時間後、ＬＣ−ＭＳは、生成物への
変換を明らかにした。生成物を分取ＨＰＬＣによって精製し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ
２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ中間体２１（１５ｍｇ、４２％）を油性残渣と
して得た。分析用ＨＰＬＣ（０．１％ギ酸）：ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１１．６７分
、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２５７３．２４９３（Ｍ＋Ｈ）＋。
４−（（８０Ｓ，８３Ｓ，８６Ｓ）−８０−アミノ−８３−イソプロピル−７４，８１，
８４−トリオキソ−８６−（３−ウレイドプロピル）−２，５，８，１１，１４，１７，
２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５
９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７５，８２，８５−トリアザヘプタオ
クタコンタンアミド）ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ
）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−
１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプ
ロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４
−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３
−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバメート（２２）：Ｆｍｏｃ−
Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ中間体２１（１５ｍｇ、６μｍ
ｏｌ）を０．１６ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、それに続いて０．０４ｍＬ
のピペリジンを加えた。反応物を窒素下で１．５時間撹拌し、次いで、濃縮乾固した。生
成物を分取ＨＰＬＣによって精製し、Ｈ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ
−ＭＭＡＥ中間体２２（１３ｍｇ、９３％）を油性残渣として得た。ＬＣ−ＭＳシステム
２：ｔＲ９．７２分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２３５１．１７８７（Ｍ＋Ｈ）＋。
４−（（８０Ｓ，８３Ｓ，８６Ｓ）−８０−（（Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカル
ボニル）アミノ）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−
イル）プロパンアミド）−８３−イソプロピル−７４，８１，８４−トリオキソ−８６−
（３−ウレイドプロピル）−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，
３２，３５，３８，４１，４４，４７，５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７
１−テトラコサオキサ−７５，８２，８５−トリアザヘプタオクタコンタンアミド）ベン
ジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（
（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２
−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−
イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ
）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタ
ン−２−イル）（メチル）カルバメート（２３）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＳｕ１２（４
ｍｇ、１１μｍｏｌ）を０．１２ｍＬの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、Ｈ−Ｌｙｓ
（ＰＥＧ２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥリンカー中間体２２（１３ｍｇ、５．
５μｍｏｌ）を含有するフラスコに加えた。次いで、ジイソプロピルエチルアミン（５μ
Ｌ、２８μｍｏｌ）を加え、次いで、反応物を窒素下で室温にて１時間撹拌した。反応を
５μＬの氷酢酸でクエンチし、分取ＨＰＬＣによって精製し、ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙ
ｓ（ＰＥＧ２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ中間体２３（１０ｍｇ、６９％）を
得た。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ１１．２５分、ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２６１７．
３２０３（Ｍ＋Ｈ）＋。
４−（（８０Ｓ，８３Ｓ，８６Ｓ）−８０−（（Ｓ）−３−アミノ−２−（２，５−ジオ
キソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−８３−イソプ
ロピル−７４，８１，８４−トリオキソ−８６−（３−ウレイドプロピル）−２，５，８
，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４，４７，
５０，５３，５６，５９，６２，６５，６８，７１−テトラコサオキサ−７５，８２，８
５−トリアザヘプタオクタコンタンアミド）ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（
（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ
）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−
メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１
−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２
−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバメート
（２４）：ＭＤｐｒ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡ
Ｅ中間体２３（１０ｍｇ、４ｕｍｏｌ）を含有するフラスコを、０℃に氷浴中窒素下で冷
却した。ジクロロメタン中１０％のトリフルオロ酢酸（０．４ｍＬ）溶液を滴下添加した
。次いで、反応物を０℃にて３時間撹拌した。次いで、反応物を粗残渣に濃縮し、分取Ｈ
ＰＬＣによって精製し、ＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−ＶａｌＣｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭ
ＡＥリンカー２４（４ｍｇ、４０％）を得た。ＬＣ−ＭＳシステム２：ｔＲ９．８１分、
ｍ／ｚ（ＥＳ＋）実測値、２５１７．２９３０（Ｍ＋Ｈ）＋。
（実施例７）
並列配向でＰＥＧを含むＡＤＣは、これらのＰＥＧ化されていないカウンターパートまた
は直列配向のＰＥＧを含むＡＤＣと同様のｉｎ ｖｉｔｒｏの活性を示す
対数期増殖で培養した細胞を、２０％ＦＢＳを補充した１５０μＬのＲＰＭＩ１６４０
を含有する９６ウェルプレート中で２４時間播種した。細胞培養培地中のＡＤＣの段階希
釈物を４倍の作業濃度にて調製し、５０μＬの各希釈物を９６ウェルプレートに加えた。
ＡＤＣの添加の後、細胞を試験物質と共に３７℃にて４日間インキュベートした。９６時
間後、増殖阻害をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗ
Ｉ）によってアセスメントし、発光をプレートリーダーで測定した。三連で決定したＩＣ
５０値を、未処置の対照に対する細胞成長における５０％の低減をもたらす濃度としてこ
こで定義する。
化合物１、４、および１０を、米国特許第７，０９０，８４３号に記載されているキメ
ラｃＡＣ１０抗体へとこれらの鎖間のチオールを介して抗体当たり８個の薬物の平均薬物
負荷量でコンジュゲートした。化合物４および１０は、上記に記載されている。化合物１
は、下記の通りである。

結果として生じたＡＤＣのｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞毒性活性を、ＣＤ３０＋およびＣＤ３
０−細胞系に対して測定した。ＰＥＧの負荷も、その構成も、ｉｎ ｖｉｔｒｏの活性に
対して有意なインパクトを有さなかった。ＡＤＣ効力における無視できる差異のみが観察
され、２つの細胞系（Ｌ５４０ｃｙおよびＫａｒｐａｓ−２９９）において、活性は本質
的に同一であった（表１）。

（実施例８）
並列配向でＰＥＧを含むＡＤＣは、直列配向のＰＥＧを含むＡＤＣと比較して好ましい薬
物動態を示す
抗体およびＡＤＣ放射性標識−放射性標識された抗体またはＡＤＣを使用して、薬物動
態（ＰＫ）実験を行った。下記の手順を使用して、ＰＫ試験物質を放射性標識した。さら
なる５０ｍＭのリン酸カリウム（ｐＨ８．０）および５０ｍＭの塩化ナトリウムを補充し
たＰＢＳ中の抗体またはＡＤＣの溶液に、１ｍｇの抗体またはＡＤＣ当たり５５μＣｉの
Ｎ−スクシンイミジルプロピオネート、［プロピオネート−２，３−３Ｈ］−（Ｍｏｒａ
ｖｅｋ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、カタログ番号：ＭＴ９１９、８０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、
１ｍＣｉ／ｍＬ、９：１のヘキサン：酢酸エチル溶液）を加えた。このように得られた混
合物をボルテックスし、室温にて２時間静置した。混合物を４，０００×ｇにて５分間遠
心分離し、下層の水層を取り出し、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−１５Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇ
ａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号：ＵＦＣ９０３０
２４、３０ｋＤａのＭＷＣＯ）中に分割した。コンジュゲートしていない放射能を、４ラ
ウンドの希釈および４，０００×ｇでの遠心分離によって除去した。このように得られた
生成物を無菌の０．２２μｍのＵｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆ
ｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号：ＵＦＣ３０ＧＶ０Ｓ）を
通して濾過し、最終抗体またはＡＤＣ濃度を分光光度法で測定した。各生成物の比放射能
（μＣｉ／ｍｇ）を、液体シンチレーション計測によって決定した。
薬物動態実験−コンジュゲートしていない抗体またはＡＤＣの薬物動態特性を、いくつ
かのげっ歯類モデルにおいて調査した。各実験において、動物の体重ｋｇ当たり１〜３ｍ
ｇの放射性標識された抗体またはＡＤＣを、尾静脈を通して注射した。各試験物質を同型
動物（ｒｅｐｌｉｃａｔｅ ａｎｉｍａｌ）において１回投与した。血液を、様々な時点
において、伏在静脈を介して、または終末採血のための心臓穿刺によってＫ２ＥＤＴＡチ
ューブ中に採取した。血漿を、１０，０００×ｇ、１０分間の遠心分離によって単離した
。各時点からの１０〜２０μＬの血漿の試料を、４ｍＬのＥｃｏｓｃｉｎｔ−Ａ液体シン
チレーションカクテル（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に加え、総放射能
を液体シンチレーション計測によって測定した。このように得られた壊変毎分の値をμＣ
ｉに変換し、放射性標識された試験物質の比放射能を使用して、各時点で血漿中に残る抗
体またはＡＤＣの濃度を計算した。薬物動態パラメーター（クリアランスおよびＡＵＣ）
を、このように得られた血漿濃度データから決定した。静脈内ボーラス投与オプションを
使用して、推定した薬物動態パラメーターを、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ｖ
６．３（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）において非コンパー
トメント分析によって計算した。
化合物１、４、および１０を、これらの鎖間のチオールを介して参照により本明細書に
組み込まれている米国特許第７，０９０，８４３号に記載されているキメラｃＡＣ１０抗
体へと抗体当たり８個の薬物の平均薬物負荷量でコンジュゲートした。予想どおりに、８
コピーのＰＥＧ化されていない薬物−リンカー１を用いて調製したＡＤＣは、コンジュゲ
ートしていない抗体に対して非常に速いクリアランスおよび低い曝露を示した（図７）。
驚いたことに、直列構成のＰＥＧを利用したＰＥＧ化された薬物−リンカー４は、ＰＥＧ
化されていない型よりさらに速いクリアランスおよびより低い曝露を有するＡＤＣを生じ
させた。この設計によって調製したＡＤＣの技術分野における例の数をかんがみて、この
結果は予想されなかった。対照的に、並列構成のＰＥＧを利用する薬物−リンカー１０を
用いて調製したＡＤＣは、ＰＥＧ化されていない型より相当に遅いクリアランスおよび大
きな曝露を有するＡＤＣを生じさせた（図７および表２を参照されたい）。
代わりに、ＥＬＩＳＡをベースとする総抗体（Ｔａｂ）アッセイを使用して、薬物動態
測定値を得ることができる。０．０５Ｍの炭酸塩−炭酸水素塩緩衝液（ｐＨ９．６、Ｓｉ
ｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中の抗ヒトＩｇＧカッパ抗体（０．
５ｍｇ／ｍＬ、抗体溶液、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）の１００μＬの溶液を、
ＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で
コーティングした９６ウェルポリスチレンプレートの各ウェルに加えた。プレートを４℃
にて一晩インキュベートした。インキュベーション後、プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ
−２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）で３回洗浄した。次いで、ウェルを、１％ウシ血
清アルブミンを含有するＰＢＳ−Ｔで室温にて少なくとも１時間ブロックした。ブロック
後、プレートをＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。標準曲線を作製するために、抗体またはＡＤ
Ｃ標準物質の濃縮されたストック（４０倍濃度）をラット血漿またはマウス血漿中で調製
した。次いで、血漿試料および標準物質をＰＢＳ−Ｔ中で１：４０希釈した。希釈した試
料および標準物質（１００μＬ）をＥＬＩＳＡプレートのウェルに加え、室温にて１時間
インキュベートした。インキュベーション後、試料を取り出し、プレートをＰＢＳ−Ｔで
３回洗浄した。ペルオキシダーゼ−ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２Ｆｒａｇｍｅ
ｎｔヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ
ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｇ
ｒｏｖｅ、ＰＡ）の溶液を、ＰＢＳ−Ｔ中で１：３０，０００希釈し、１００μＬを各ウ
ェルに加えた。プレートを室温にて１時間インキュベートした。インキュベーション後、
試料を取り出し、プレートをＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＳｕｒｅＢｌｕｅＴＭＢ Ｍｉ
ｃｒｏｗｅｌｌペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍ
Ｄ）の溶液を、各ウェルに加えた（１００μＬ）。プレートを室温にて１１〜１２分間イ
ンキュベートし、反応物を１００μＬの１ＮのＨＣｌでクエンチした。プレートを、Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘプレートリーダーで４５０ｎｍ
にて読み取った。
（実施例９）
並列配向のＰＥＧを含むＡＤＣは、直列配向のＰＥＧを含むＡＤＣ、またはＰＥＧ単位を
欠いているＡＤＣと比較してｉｎ ｖｉｖｏの活性を改善させた
Ｉｎ ｖｉｖｏの異種移植片モデル−全ての実験は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ
Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅによって完全に認定された施設において動物実験委員会
（Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）に従って行った。Ｋ
ａｒｐａｓ２９９未分化大細胞リンパ腫、Ｌ５４０ｃｙホジキンリンパ腫、Ｒａｍｏｓバ
ーキットリンパ腫、およびＭＣＦ−７乳がんの異種移植片モデルにおいて有効性実験を行
った。免疫力が低下したマウスにおいて細胞懸濁液または腫瘍フラグメントを皮下移植し
た。ＭＣＦ−７腫瘍を皮下に移植して担持させたマウスに、１７β−エストラジオールの
徐放性錠剤を共投与した。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したとき、マウスを研究群
に無作為化した。ＡＤＣまたは対照を、一度ｉｐ投与した。時間の関数としての腫瘍体積
は、式（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して決定した。腫瘍体積が１０００ｍｍ３に達したとき、
動物を安楽死させた。持続的な退縮を示すマウスを、移植後概ね１００日に終了させた。
２ｍｇ／ｋｇ（単回用量）の各ＡＤＣを投与したＬ５４０ｃｙモデル（図１）を用いて
、およびＫａｒｐａｓ−２９９モデルについては０．６ｍｇ／ｋｇ（単回用量）（図２）
で最初の研究を行った。経時的な腫瘍体積のプロットを図１および２に示す。全ての薬物
−リンカーを、これらの鎖間のチオールを介して参照により本明細書に組み込まれている
米国特許第７，０９０，８４３号に記載されているキメラｃＡＣ１０抗体へと、抗体当た
り８個の薬物の平均薬物負荷量でコンジュゲートした。両方のモデルにおいて、１（ｃＡ
Ｃ１０−ｍｃ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）、ＰＥＧ化されていない）および１０（スキーム２に
おけるＰＥＧ化された設計）を用いて調製したＡＤＣは、これらの用量群において全ての
動物（５／５）が治癒し、一方、４を用いて調製したＡＤＣは治癒を生じさせず、腫瘍成
長のわずかな遅延を生じさせた。ｃＡＣ１０−４の減弱した活性は、図７に示すＰＫ研究
において観察される、その非常に低減した曝露と一致する。ｃＡＣ１０−１およびｃＡＣ
１０−１０の間に活性における薬物動態的に決定される差異がまた観察されるが、より低
い用量が必要とされることが考えられた。したがって、両方のモデルにおいて最初の研究
において使用された投与量の２分の１および４分の１の用量レベルを用いて研究を繰り返
した。Ｌ５４０ｃｙについて、１ｍｇ／ｋｇの用量は、ｃＡＣ１０−１０について完全な
治癒（６／６匹）を生じさせ、ｃＡＣ１０−１について２／６匹のみの治癒を生じさせた
（図３）。０．５ｍｇ／ｋｇで、いずれの群についても治癒は観察されなかった。しかし
、ｃＡＣ１０−１０は、ｃＡＣ１０−１より長い腫瘍成長の遅延を実現した（図３）。両
方の用量レベルで、ｃＡＣ１０−１０についてのＬ５４０ｃｙ抗腫瘍活性は、これらのそ
れぞれの薬物動態特性と一致して、ｃＡＣ１０−１についてより大きい。Ｋａｒｐａｓ−
２９９について、０．３ｍｇ／ｋｇの用量は、ｃＡＣ１０−１０について６／６匹の治癒
を生じさせ、ｃＡＣ１０−１について５／６匹の治癒を生じさせた（図４）。０．１５ｍ
ｇ／ｋｇで、ｃＡＣ１０−１０について５／６匹の治癒が観察され、ｃＡＣ１０−１につ
いて２／６匹のみの治癒が観察された（図４）。それゆえ、Ｋａｒｐａｓ−２９９につい
て、ｃＡＣ１０−１０について最も低い用量レベルにおいてより大きな抗腫瘍活性が観察
され、両方のＡＤＣはこのレベルを上回る高い治癒率を示した。
スキーム３および４は、コンジュゲーションのポイントとしてＮα−マレイミド−ジア
ミノプロピオン（ＭＤｐｒ）酸基を組み込んだ、それぞれ、ＰＥＧ化されていないリンカ
ー１およびＰＥＧ化されたリンカー１０の類似体の合成を記載する。Ｋａｒｐａｓ２９９
ＡＬＣＬおよびＲａｍｏｓバーキットリンパ腫モデルにおいて２つのリンカーを評価した
。Ｋａｒｐａｓ２９９について、１４（ＰＥＧ化されていない）および１６（並列ＰＥＧ
化）のｃＡＣ１０コンジュゲートを０．２ｍｇ／ｋｇで１回投与し、腫瘍の伸展における
同様の遅延が観察された（図５）。対照的に、Ｒａｍｏｓモデルにおいて、２つの異なる
用量で、ｈＢＵ１２−１６は、ｈＢＵ１２−１４より大きな抗腫瘍活性を発揮した。２ｍ
ｇ／ｋｇの単回用量に続いて、ｈＢＵ１２−１４についての０／５匹と比較して、ｈＢＵ
１２−１６は５／５匹の治癒を生じさせた（図６）。
（実施例１０）
ｍＤＰＲ−ｃｙｓ（ＳｔＢｕ）−ＰＥＧ２〜３６−ＯＨコンジュゲーション足場およびｍ
ＤＰＲ−ｃｙｓ（ＳｔＢｕ）−ＰＥＧ４８〜７２−ＯＨコンジュゲーション足場の合成

２−クロロトリチル−クロリド樹脂負荷量：多孔質ポリプロピレンディスクをフィット
させたポリプロピレンシリンジに、２−クロロトリチル−クロリド樹脂を負荷した。Ｆｍ
ｏｃ−ＰＥＧｎ−ＯＨ（１当量）およびＤＩＥＡ（１当量）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ／グ
ラムの樹脂）溶液を、シリンジ中に入れた。シリンジをゴム栓でキャップし、５分間撹拌
し、この時点で、さらなるＤＩＥＡ（１．５当量）を加えた。さらに３０分間振盪した後
、ＭｅＯＨ（少なくとも０．８ｍＬ／グラムの樹脂）をシリンジ中に入れ、未反応の樹脂
をクエンチした。５分間振盪した後、溶液をシリンジから取り出し、樹脂をＤＭＦ（６×
５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびジエチルエーテル（６×５ｍＬ）で洗浄した。
樹脂を真空下で乾燥させた。
Ｒｉｎｋアミド樹脂負荷量：Ｆｍｏｃ保護されたＰＥＧまたはアミノ酸（４当量）の無
水ＤＭＦ（１０ｍＬ／グラムの樹脂）溶液に、ＨＡＴＵ（４当量）およびＤＩＥＡ（８当
量）を加えた。溶液を５分間撹拌し、Ｒｉｎｋアミド樹脂を負荷した多孔質ポリプロピレ
ンディスクをフィットさせたポリプロピレンシリンジ中に入れた。反応混合物を最低２時
間撹拌し、反応の完全さをＫａｉｓｅｒ試験によって確認した。樹脂をＤＭＦ（６×５ｍ
Ｌ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびジエチルエーテル（６×５ｍＬ）で洗浄し、真空下
で乾燥させた。
Ｆｍｏｃ脱保護：多孔質ポリプロピレンディスクをフィットさせたポリプロピレンシリ
ンジ中のＦｍｏｃ−ＰＥＧｎ−２−クロロトリチル樹脂を、ＤＣＭ（１０ｍＬ／グラムの
樹脂）で３０分間膨潤させた。ＤＣＭを取り出し、樹脂をＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄し
た。樹脂を、撹拌しながら２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（３×２分および１×６０分）
で洗浄した。反応の完全さをＫａｉｓｅｒ試験によって確認し、このように得られたＦｍ
ｏｃ脱保護された樹脂をＤＭＦ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびジエチル
エーテル（６×５ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させた。
アミノ酸カップリング：Ｆｍｏｃ保護されたＰＥＧ酸、アミノ酸、またはＭＤｐｒ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ（３当量）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ／グラムの樹脂）溶液に、ＨＡＴＵ（３
当量）およびＤＩＥＡ（６当量）を加えた。溶液を５分間撹拌し、Ｆｍｏｃ脱保護アミノ
酸２−クロロトリチル−樹脂を含有するポリプロピレンシリンジ中に入れた。反応混合物
を最低２時間撹拌し、反応の完全さをＫａｉｓｅｒ試験によって確認した。樹脂をＤＭＦ
（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびジエチルエーテル（６×５ｍＬ）で洗浄
し、真空下で乾燥させた。
ＩｖＤｄｅ保護基の除去：ＩｖＤｄｅ保護基を除去するために、ペプチド樹脂を、撹拌
しながら２％ヒドラジンのＤＭＦ溶液（２×３０分）で洗浄した。反応の完全さをＫａｉ
ｓｅｒ試験によって確認し、このように得られたＩｖＤｄｅ脱保護された樹脂をＤＭＦ（
６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびジエチルエーテル（６×５ｍＬ）で洗浄し
、真空下で乾燥させた。
ペプチド樹脂切断：最終ペプチドを、ＤＣＭ（２−クロロトリチル樹脂について３０％
ｖ／ｖまたはＲｉｎｋアミド樹脂について９５％ｖ／ｖ）中のＴＦＡによる１５分間の処
理によって樹脂から切断した。切断後、溶液をさらに６０分間静置し、ＭＤｐｒ残基から
のＢｏｃ保護基の完全な除去を確実にした。このように得られた溶液を窒素流で蒸発させ
、このように得られたペプチドをＬＣ−ＭＳによって分析した。ペプチドを粗製物で使用
するか、または分取逆相ＨＰＬＣによって精製し、それに続いてＬＣ−ＭＳ分析を行った
。
（実施例１１）
抗体および薬物−リンカーへのＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場のコンジュゲーシ
ョン。



式中、ＸＲは、Ｘ’−Ｄ部分中の放出可能なアセンブリー単位前駆体Ｘ’の残部または−
Ｘ−Ｄ部分中の放出可能なアセンブリー（ａｓｓｅｎｂｌｙ）単位Ｘの残部である。
抗体鎖間のジスルフィド結合の完全な還元：ジエチレントリアミン五酢酸（１ｍＭ）を
含有し、さらなるリン酸カリウム（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）で緩衝化したＰＢＳ中の概
ね１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体の溶液に、１２当量のトリス（２−カルボキシエチル）−
ホスフィン（ＴＣＥＰ）を加えた。溶液をボルテックスし、３７℃にて１時間インキュベ
ートした。鎖間のジスルフィド結合の完全な還元を、逆相クロマトグラフィーによって確
認した。還元が不完全であった場合、さらなるＴＣＥＰを加えた。還元後、抗体溶液を、
３ラウンドの希釈および３０ｋＤａのＭＷＣＯフィルターを通す４，０００×ｇでの遠心
分離によって２ｍＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中に脱塩した。このように得られた完全
に還元された抗体（３４）を、無菌の０．２２μｍの遠心濾過膜を通して濾過し、直ちに
使用し、または−８０℃にて貯蔵した。
マレイミド含有ＰＥＧ化された足場のコンジュゲーション：ＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含有
し、さらなるリン酸カリウム（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）で緩衝化したＰＢＳ中の概ね１
０ｍｇ／ｍＬの濃度の完全に還元された抗体（３４）の溶液に、５〜２０ｍＭのＤＭＳＯ
ストック溶液からの１２モル当量のＭＤｐｒ−ＰＥＧｎ−ＯＨを加えた。このように得ら
れた溶液を室温にて３０分間静置した。完全なコンジュゲーションを逆相クロマトグラフ
ィーによって確認した。コンジュゲーションが不完全であった場合、さらなるＰＥＧ試薬
を加えた。コンジュゲーション後、抗体溶液を、３ラウンドの希釈および３０ｋＤａのＭ
ＷＣＯフィルターを通す４，０００×ｇでの遠心分離によってＰＢＳ中に脱塩した。この
ように得られたＰＥＧ化された抗体溶液（３６および３７）を無菌の０．２２μｍの遠心
濾過膜を通して濾過し、直ちに使用し、または−８０℃にて貯蔵した。
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場からのｔ−ブチルチオール保護基の除去：ジエ
チレントリアミン五酢酸（１ｍＭ）を含有し、さらなるリン酸カリウム（１００ｍＭ、ｐ
Ｈ７．４）で緩衝化したＰＢＳ中の概ね１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＥＧ化された抗体（３
６および３７）の溶液に、２０〜３０当量のＴＣＥＰを加えた。溶液をボルテックスし、
３７℃にて３時間インキュベートした。ｔ−ブチルチオール保護基の完全な除去を、逆相
クロマトグラフィーによって確認した。さらなるＴＣＥＰを加え、還元が不完全であった
場合、３７℃でのインキュベーションを続けた。還元後、抗体溶液を、３ラウンドの希釈
および３０ｋＤａのＭＷＣＯフィルターを通す４，０００×ｇでの遠心分離によって２ｍ
ＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中に脱塩した。このように得られた脱保護されたＰＥＧ化
された抗体溶液（３８および３９）を無菌の０．２２μｍの遠心濾過膜を通して濾過し、
直ちに使用し、または−８０℃にて貯蔵した。
マレイミド含有薬物リンカーのコンジュゲーション：ＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含有し、さ
らなるリン酸カリウム（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）で緩衝化したＰＢＳ中の概ね１０ｍｇ
／ｍＬの濃度の脱保護されたＰＥＧ化された抗体（３８および３９）の溶液に、５〜２０
ｍＭのＤＭＳＯストック溶液からの１２モル当量のマレイミド含有薬物−リンカーを加え
た。このように得られた溶液を室温にて３０分間静置した。完全なコンジュゲーションを
、逆相クロマトグラフィーによって確認した。コンジュゲーションが不完全であった場合
、さらなる薬物−リンカーを加えた。コンジュゲーション後、抗体溶液を、３ラウンドの
希釈および３０ｋＤａのＭＷＣＯフィルターを通す４，０００×ｇでの遠心分離によって
ＰＢＳ中に脱塩した。このように得られたＰＥＧ化された抗体−薬物コンジュゲート溶液
（４０および４１）を無菌の０．２２μｍの遠心濾過膜を通して濾過し、サイズ排除クロ
マトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析し、−８０℃にて貯蔵した。
（実施例１２）
並列配向でＰＥＧを含むＡＤＣは、低い凝集レベルを示した
コンジュゲートのＳＥＣ分析：抗体、ＰＥＧ化されたＡＤＣ試料（５０μｇ）のＡＤＣ
をＰＢＳ中で１ｍｇ／ｍＬに希釈し、３０μＬの注射物をＷａｔｅｒｓ２６９５ＨＰＬＣ
システムの分析用ＳＥＣカラム（ＴＯＳＯＨ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬ、７．
８ｍｍ、ＩＤ×３０ｃｍ、５μｍ）でクロマトグラフィを行った。試料を、９２．５％の
２５ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、３５０ｍＭ ＮａＣｌ、および７．５％の
イソプロピルアルコールによって１ｍＬ／分の流量にて均一濃度で溶出させた。
ＡＤＣの凝集に対するＰＥＧ長さの効果を調査するために、様々なサイズのＰＥＧ単位
を使用してアセンブルしたＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場を用いるか、または用
いずに、抗体当たり８個の薬物を有するｃＡＣ１０−ＭＤｐｒ−ｖｃＭＭＡＥ ＡＤＣを
調製した。ＳＥＣの結果を図８に示す。ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場の含有が
ないもの（ｃＡＣ１０−Ａ）では、ＡＤＣの凝集は１０．４％であった。ＰＥＧ化された
足場を付加することによって、より低い凝集レベルを有するＡＤＣが生成する。凝集はＰ
ＥＧ３６（ｃＡＣ１０−Ｄ）までのＰＥＧ長さの増加と共に減少し、その場合、凝集ピー
クは総シグナルの２．０％であった。ｃＡＣ１０−ＭＤｐｒ−ｖｃＭＭＡＥの場合、ＰＥ
Ｇ３６より長いＰＥＧ単位（ｃＡＣ１０−Ｄ−ｃＡＣ１０−Ｇ）は、凝集をさらに減少さ
せない。
ＳＥＣ研究に含まれる薬物−リンカーの構造：ＡＤＣを、抗体へと鎖間のチオールを介
してコンジュゲートする。抗体−置換スクシンイミドは、その加水分解された形態で存在
し得る（すなわち、スクシンイミドのＣ−Ｎ結合の両方ではなく一方に亘って水分子が付
加される）。


（実施例１３）
並列配向でＰＥＧを含むＡＤＣは、そのＰＥＧ化されていないカウンターパートと同様の
ｉｎ ｖｉｔｒｏの活性を示す
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場を用いて調製したＡＤＣのＩｎ Ｖｉｔｒｏの細
胞毒性
ＣＤ３０を対象としたＭＤｐｒ−ｖｃＭＭＡＥをベースとするＡＤＣを、ＰＥＧ化され
たコンジュゲーション足場の付加あり、およびそれなしに調製した。化合物Ａ（ＰＥＧ化
されていない）、Ｂ（ＰＥＧ１２）、Ｃ（ＰＥＧ２４）、およびＤ（ＰＥＧ３６）のコン
ジュゲートを、ＣＤ３０陽性細胞系、Ｋａｒｐａｓ２９９およびＬ５４０ｃｙに対して試
験した。ＰＥＧを含むことおよびＰＥＧの長さの増加は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞毒性に
おいて無視できる差異をもたらす（表３）。ＭＤｐｒ−ｖｃＭＭＡＥ（ｃＡＣ１０−Ｈ、
ｃＡＣ１０−Ｉ、およびｃＡＣ１０−Ｊ）の代わりにｎ−エチルアミノマレイミド（ＮＡ
ＥＭ）を用いて調製される対照ＡＤＣ（ＰＥＧ化されていないおよびＰＥＧ化された）は
、このアッセイにおいて活性を示さなかったが、これはＰＥＧ化された足場はｉｎ ｖｉ
ｔｒｏの細胞毒性に寄与しないことを示す。
４個の薬物負荷量を有するＰＥＧ化されていないコンジュゲートｃＡＣ１０−Ａと比較
したとき、８個の薬物を負荷されたｃＡＣ１０−Ａは、Ｋａｒｐａｓ２９９およびＬ５４
０ｃｙに対して２〜４倍のｉｎ ｖｉｔｒｏの細胞毒性を有した。しかし、８負荷された
ＡＤＣは、該８負荷されたＡＤＣのより急速なクリアランスのために、ｉｎ ｖｉｖｏの
異種移植片モデルにおいて４負荷されたＡＤＣより優れなかった（実施例１４を参照され
たい）。
実施例２のリンカー−薬物中間体から調製され、かつ薬物に対して並列配向（８個の薬
物／Ａｂ）のＰＥＧ２４単位を有するｍｃ−ＰＡＢＡ（ｇｌｕｃ）−ＭＭＡＥの−Ｘ−Ｄ
を有するＰＥＧ２４ｃＡＣ１０コンジュゲート、ｃＡＣ１０−１０はまた、対応する８負
荷されたＰＥＧ化されていないＡＤＣ（ｃＡＣ１０−１）およびＰＥＧ２４単位を直列配
向で有する８負荷されたＡＤＣ（ｃＡＣ１０−４）（後者は実施例１のリンカー−薬物中
間体から調製した）と比較して、異種移植片モデルにおいてより大きな活性を有した（図
１および２を参照されたい）。
対照として使用するＮＡＥＭでキャップをかけたコンジュゲーション足場：ＡＤＣを、
抗体へと鎖間のチオールを介してコンジュゲートする。抗体−置換スクシンイミドは、そ
の加水分解された形態で存在し得る（すなわち、スクシンイミドのＣ−Ｎ結合の両方では
なく一方に亘って水分子が付加される）。


（実施例１４）
並列配向でＰＥＧを含むＡＤＣは、ＰＥＧを含まないＡＤＣと比較して薬物動態を改善し
た
マウスに、８個の薬物／ｍＡｂを負荷された各ＡＤＣについて３ｍｇ／ｋｇの単回ｉｖ
用量を投与した。予想どおりに、ｍｃ−ｖｃＭＭＡＥ（Ｋ）またはＭＤｐｒ−ｖｃＭＭＡ
Ｅ（Ａ）のいずれかを用いて調製したＰＥＧ化されていないＡＤＣは、ＮＡＥＭを用いて
調製された対照コンジュゲートより非常に急速に循環からクリアランスされた。対応する
ＰＥＧ化されたＡＤＣ ＣおよびＬは、改善されたＰＫ、すなわち、より遅いクリアラン
スを示した（図９）。
マウスＰＫにおいて含まれるさらなる化合物−ＡＤＣを、抗体へと鎖間のチオールを介
してコンジュゲートする。抗体置換スクシンイミドは、その加水分解された形態で存在し
得る（すなわち、スクシンイミドのＣ−Ｎ結合の両方ではなく一方に亘って水分子が付加
される）。
第２の実験において、マウスに、８個の薬物／ｍＡｂを負荷された各ＡＤＣについて３
ｍｇ／ｋｇの単回ｉｖ用量を投与した。上記のように（図９）、ＰＥＧ化されていないＭ
Ｄｐｒ−ｖｃＭＭＡＥ Ａを用いて調製したＡＤＣは、循環からの加速度的なクリアラン
スを示した（図１０）。ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場Ｂ、Ｃ、およびＤを用い
て調製した３種のＡＤＣは、改善されたクリアランスを示した（図１０）。このアッセイ
において、様々な長さのＰＥＧ、ＰＥＧ１２（Ｂ）、ＰＥＧ２４（Ｃ）、およびＰＥＧ３
６（Ｄ）を用いて調製したＡＤＣは、互いに無視できる差異を示した。予測されたように
、ＮＡＥＭでキャップをかけたＰＥＧ化足場（Ｈ、Ｉ、およびＪ）から調製した対照コン
ジュゲートは、ＮＡＥＭでキャップをかけた 抗体と密接に似ているＰＫを示した（図１
０）。

（実施例１５）
並列配向でＰＥＧを含むＡＤＣは、ＰＥＧを含まないＡＤＣと比較して薬物動態を改善し
た
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場あり（Ｂ、Ｃ、およびＤ）、ならびにそれなし
で（Ａ）調製したｃＡＣ１０をベースとするＡＤＣを、Ｌ５４０ｃｙ異種移植片モデルに
おいて分析した。動物に２ｍｇ／ｋｇ（単回用量）の各ＡＤＣを投与し、経時的な腫瘍体
積を測定した。未処置の動物における腫瘍体積は、研究の２５日目に１，０００ｍｍ３に
達した。ＰＥＧ化されていない薬物リンカー（Ａ）を用いて調製されたＡＤＣは、５匹の
マウスのうち２匹を治癒させ、治癒しない動物において腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達
するのに５７．３日の平均時間であった（図１１）。ＰＥＧ１２（Ｂ）でアセンブルした
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場を用いて調製したＡＤＣは、Ａを用いて調製した
ＡＤＣと同様の活性を示した（図１２）。この場合、５匹の動物うち１匹が治癒し、治癒
しない動物において腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達するのに６８．５日の平均時間を要
した。ＰＥＧ２４含有足場（Ｃ）を用いて調製したＡＤＣは、５匹のマウスのうち４匹が
治癒してＡを超える改善を示し、残りの１匹で腫瘍は５３日目に１，０００ｍｍ３に達し
た（図１３）。
第２の実験において、乳癌抗原、ＬＩＶ−１を標的とするｈＬＩＶ２２をベースとする
ＡＤＣ（ｈＬＩＶ２２抗体は、参照（ｒｅｆｅｒｅｉｎ）により本明細書に組み込まれて
いるＰＣＴ公開番号第ＷＯ２０１２／０７８６８８号に記載されている）は、ＰＥＧ２４
のついたコンジュゲーションを可能とする足場（Ｌ）の、およびＰＥＧ２４をのついてい
ないコンジュゲーションを可能とする足場（ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ＰＥＧ２４ ｅｎ
ａｂｌｅｄ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｓｃａｆｆｏｌｄ）（Ｋ）の、ｍｃ−ｖｃＭＭＡ
Ｅを用いて調製した。動物に３ｍｇ／ｋｇ（単回用量）の各ＡＤＣを投与した。研究の未
処置のアームにおいて、腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達するための平均時間は３９．２
日であった。ｈＬＩＶ２２−Ｋによる処置は、この時間を５７．６日に遅延させ、ＰＥＧ
化されたＡＤＣである、ｈＬＩＶ２２−Ｌは、この平均値を７１．４日にさらにシフトさ
せた（図１４）。
（実施例１６）
並列配向でＰＥＧを含み、抗体当たり１６個の薬物を含むＡＤＣは、ＰＥＧを含まないＡ
ＤＣと比較して、より少ない凝集を示した
１６負荷ＡＤＣの凝集に対するＰＥＧの効果を調査するために、抗トランスフェリン受
容体コンジュゲートを、−Ｘ−Ｄ単位としてＭＤｐｒ−グルクロニド−カンプトテシンを
使用して調製した。ＡＤＣを、ＰＥＧ単位の含有ありまたはなしの、標準的８負荷（抗体
当たり８個の薬物）または１６負荷（抗体当たり１６個の薬物）として調製した。コンジ
ュゲーションは、鎖間のジスルフィドを介した。１６個の薬物負荷ＡＤＣを調製するため
に使用された、ＰＥＧ化されたおよび対照のＰＥＧ化されていないコンジュゲーション足
場（それぞれ、ＰＥＧ足場Ａおよび対照（ｃｏｎｔｏｌ）足場Ａ）は、下記の通りである
。
抗体薬物コンジュゲートは、（ａ）足場と、足場のマレイミド単位へのコンジュゲート
付加が可能なチオール基を有する抗体とを接触させて、抗体−置換スクシンイミド部分を
形成させることと、（ｂ）チオール保護基を除去することと、（ｃ）結果として生じた産
物と−Ｘ−Ｄ部分とを接触させることであって、Ｘは、マレイミド単位および切断可能な
単位からなる放出可能なアセンブリー単位であり、Ｘ−Ｄマレイミド単位は、足場および
Ｘ−Ｄ部分に由来するスクシンイミド部分の早すぎる加水分解を回避する一方で、Ｘ−Ｄ
のマレイミド単位をさらなる置換スクシンイミド部分へと変換させるのに適した条件下で
、コンジュゲート付加による、ステップ（ｂ）から得た遊離チオール基と反応させること
ができることと、（ｄ）マレイミド単位としてＭＤｐｒ部分から導入されたスクシンイミ
ド部分のそれぞれについて、スクシンイミドのＣ−Ｎ結合の両方ではなく一方に亘る水分
子の付加による、ステップ（ｃ）から得たリンカー−薬物化合物の集団的置換スクシンイ
ミドを加水分解することとによって、例示的なリガンド中間化合物を表すｎ＝２３を有す
るＰＥＧ足場Ａ、および実施例１１に記載されているような対照足場Ａから調製した。
ＰＥＧ足場Ａは、

（すなわち、式ＶＩＩＩｂ）によって包含され、式中、Ｚ’は、ＭＤｐｒ含有部分であり
、Ａは、中心のリシン残基であり、２個のＬｐは、側面にあるシステイン残基である。
１６個の薬物を負荷されたコンジュゲートを提供する別の適切に保護された足場は、そ
の構造が、

であるＰＥＧ足場Ｂであり、式中、ｎは、３６である。ＰＥＧ足場Ｂは、

（すなわち、式ＶＩＩＩｄ）によって包含され、式中、Ｚ’は、ＭＤｐｒ部分であり、ｔ
は、１であり、ＡＤおよびＬＰは、それぞれシステイン残基である。
ＰＥＧ化されたコンジュゲーション足場を含むことのないものは、１６負荷ＡＤＣの凝
集レベルが２２％であった。薬物単位に対して並列配向であるＰＥＧ単位を有するＰＥＧ
化された足場を付加することによって、８負荷の凝集レベル、すなわち、２％凝集まで凝
集レベルを低下させた。
ＭＤｐｒ−ＰＡＢＡ（ｇｌｕｃ）−カンプトテシンの−Ｘ−Ｄを有する８負荷およびＰ
ＥＧ化された１６負荷抗トランスフェリン受容体ＡＤＣ（ｃＯＫＴ９）を、パネルＴｆＲ
＋がん細胞系に対して試験した。殆どの場合、薬物負荷量を倍増することは、ＡＤＣの効
力を概ね２倍増加させた。いくつかの場合において、薬物負荷量は２倍のみ増加したにも
関わらず（ｅｖｅｎ ｔｈｒｏｕｇｈ）、ＡＤＣの効力は３〜１０倍またはそれ超増加し
た。最も明白には（ｎｏｔｅａｂｌｙ）、１６負荷コンジュゲートは、結腸直腸細胞系Ｈ
Ｔ−２９（ＴｆＲコピー数２３Ｋ）および黒色腫細胞系ＳＫ−ＭＥＬ−５（ＴｆＲコピー
数２１Ｋ）に対して活性であり、一方、８負荷コンジュゲートは、不活性であると考えら
れた（ＩＣ５０＞１μＭ）。
（実施例１７）
並列配向でＰＥＧ２４を有する、抗体当たり４個の薬物を負荷されたＡＤＣは、そのＰＥ
Ｇ化されていないカウンターパートに対して減弱した活性をｉｎ ｖｉｖｏで示す。
ＡＤＣ薬物負荷量が抗体当たり４個の薬物に低減されたとき、ＰＥＧ化されたグルクロ
ニド−ＭＭＡＥリンカー１０を担持するコンジュゲートは、リンカー１を担持するＰＥＧ
化されていないコンジュゲートと同様のＰＫ曝露を有することが見出された。したがって
、ＰＥＧ化は、ｉｎ ｖｉｖｏの異種移植片モデルにおいて活性の増強を実現しなかった
。
抗ＣＤ３０キメラ抗体ｃＡＣ１０を、４個の薬物／抗体の平均負荷量でＰＥＧ化されて
いないリンカー１またはＰＥＧ化されたリンカー１０とコンジュゲートし、Ｌ５４０ｃｙ
ホジキンリンパ腫およびＫａｒｐａｓ２９９未分化大細胞リンパ腫腫瘍モデルにおいて評
価した。Ｌ５４０ｃｙについて（図１３）、動物に、ＡＤＣの単回ｉｐ用量を０．５ｍｇ
／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで投与した。１ｍｇ／ｋｇのより高い用量で、ＰＥＧ化された
もの（ｃＡＣ１０−１０）およびＰＥＧ化されていないもの（ｃＡＣ１０−１）の両方は
等効力であり、５／６匹のマウスにおいて治癒を実現した。しかし、０．５ｍｇ／ｋｇの
より低い用量で、ＰＥＧ化されていないリンカー（ｃＡＣ１０−１）は、より延長された
平均腫瘍増殖の遅延を実現し、２／６匹のマウスが治癒した。一方では、ＰＥＧ化された
リンカー（ｃＡＣ１０−１０）はより強力でなく、マウスは治癒しなかった。類似の結果
をＫａｒｐａｓ２９９異種移植片モデルにおいて得た（図１６）。
これらの知見は、コンジュゲートのＰＫ増強の非存在下で、２４単位のＰＥＧによるＰ
ＥＧ化が、ｉｎ ｖｉｖｏでの活性の僅かな減弱もたらすことを示唆する。これは、ＰＥ
Ｇ化によるコンジュゲートサイズの増加により酵素的薬物放出が損なわれたためまたは透
過性が減少したためであり得る。
（実施例１８）
ＰＥＧ化されたグルクロニド薬物リンカーを負荷されたＡＤＣは、コンジュゲートのＰＫ
特性と一致するｉｎ ｖｉｖｏの活性を示す。
グルクロニドおよびＭＭＡＥの組合せについて最適なＰＥＧサイズが存在するかを決定
するために、ＰＥＧ化されていないもの、ＰＥＧ２、ＰＥＧ４、ＰＥＧ８、ＰＥＧ１２、
ＰＥＧ２４、および分岐状ＰＥＧ４−（ＰＥＧ４）３にまたがって、一連のＰＥＧｘリン
カーを調製し、評価した。それぞれ表４および表５のＰＥＧ化されていないＡＤＣ ｃＡ
Ｃ１０−１４およびｈＢＵ１２−１４は、構造においてＰＥＧ化されたＡＣＤと同様であ
るが、ＬＰ単位を欠いており、ここでＰＥＧ化された足場の場合は、リシン残基である。
最初のｉｎ ｖｉｔｒｏでの作業は、試験した細胞系の大部分において活性に対するＰ
ＥＧサイズの最少の効果を明らかに示した。それぞれ、抗ＣＤ３０および抗ＣＤ１９抗体
、ｃＡＣ１０およびｈＢＵ１２に８個の薬物／抗体をコンジュゲートし、リンパ腫細胞系
のパネルに対して評価した。表４に示すように、ＣＤ３０陽性Ｌ５４０ｃｙ系およびＬ４
２８ホジキンリンパ腫系およびＫａｒｐａｓ２９９未分化大細胞リンパ腫は、ＰＥＧサイ
ズに関わらず、全てのｃＡＣ１０コンジュゲートに対して高度に感受性であった。
表５に示すように、非ホジキンリンパ腫細胞系のパネルに対するＰＥＧｘ−グルクロニ
ド−ＭＭＡＥリンカーを担持するｈＢＵ１２（抗ＣＤ１９）コンジュゲートの活性はより
可変性であった。ＰＥＧサイズは、Ｒａｍｏｓバーキットリンパ腫においてＡＤＣ効力に
対して効果は有さなかった。しかし、コンジュゲート効力は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リ
ンパ腫細胞系ＳＵ−ＤＨＬ−４、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ−２、およびＲＬにおいて、ＰＥＧサ
イズに応じて変動し得るようであった。ＩＣ５０によって測定するように、ＰＥＧサイズ
および活性の間に相関性が存在するようではなかった。しかし、用量反応曲線のより厳密
な検査は、ＰＥＧサイズおよび最大増殖阻害の間に明白な逆相関を明らかにした。これら
のデータを図１７に示す。

ＰＥＧｘシリーズにまたがるコンジュゲートの薬物動態特性を、上記のようにアセスメ
ントした。ラットに、８個の薬物／Ａｂを負荷されたＭＤｐｒ−ＰＥＧｘ−グルクロニド
−ＭＭＡＥリンカーを担持する非結合ヒト化ＩｇＧ（ｈ００）からなる１ｍｇ／ｋｇのコ
ンジュゲートの単回静脈内用量を投与した。血漿試料を様々な時点において採取し、総循
環抗体を上記のように定量した。図１６に示すように、抗体クリアランスは、ＰＥＧサイ
ズと直接の相関性を示した。ＰＥＧ８、ＰＥＧ１２、およびＰＥＧ２４によりＰＥＧ化さ
れたコンジュゲートは、裸の抗体に近似したクリアランス特性を示し、一方では、より短
いＰＥＧおよびＰＥＧ化されていないカウンターパートは、循環からより急速にクリアラ
ンスされた。
異種移植片モデルにおいてＰＥＧｘリンカーをｉｎ ｖｉｖｏで評価した。ＣＤ１９−
陽性ＲＬびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルおよびＣＤ３０−陽性Ｌ５４０ｃｙホジ
キンリンパ腫モデルにおいて研究を行った。ＰＥＧのないリンカー、ＰＥＧ４を有するリ
ンカー、ＰＥＧ８を有するリンカー、ＰＥＧ１２を有するリンカー、およびＰＥＧ２４を
有するリンカーにまたがる抗ＣＤ１９（ｈＢＵ１２）コンジュゲートを、一旦平均腫瘍体
積が１００ｍｍ３に達すると、１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇで１回ｉｐ投与した。Ｒ
Ｌモデルについての結果を図１７に示す。１ｍｇ／ｋｇで、全ての群はわずかな腫瘍増殖
の遅延を発揮し、ＰＥＧサイズおよび活性の間の有意な相関性は観察されなかった。３ｍ
ｇ／ｋｇのより高い用量で、ＰＥＧを担持しないコンジュゲートおよびＰＥＧ４を担持す
るコンジュゲートは、概ね３５日目に腫瘍の伸展を伴って腫瘍成長の遅延を達成した。対
照的に、ＰＥＧ８、ＰＥＧ１２、およびＰＥＧ２４を担持するリンカーを有するコンジュ
ゲートは、３ｍｇ／ｋｇで完全な回復を達成し、ＰＥＧ２４群において１／５匹のマウス
は腫瘍の再成長を経験する。ＰＥＧ４およびＰＥＧ化されていないカウンターパートに対
して、ＰＥＧ８、ＰＥＧ１２、およびＰＥＧ２４のより高い用量での増強された活性は、
図１８におけるＰＫ観察結果と一致する。
（実施例１９）
ＭＭＡＥの腫瘍内送達は、コンジュゲートのＰＫ特性と相関する。
概ね２００ｍｍ３のＣＤ３０−陽性Ｌ５４０ｃｙホジキンリンパ腫腫瘍を担持するマウ
スに、ｍｃ−グルクロニド−ＭＭＡＥ（リンカー１）、ｍｃ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）グル
クロニド−ＭＭＡＥ（リンカー１０）、マレイミド−ＰＥＧ２４−グルクロニド−ＭＭＡ
Ｅ（リンカー４）、またはＭＤｐｒ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ２４）−グルクロニド−ＭＭＡＥ（
リンカー１６）を有する、８個の薬物／Ａｂを負荷されたｃＡＣ１０コンジュゲートの単
回用量を１ｍｇ／ｋｇにて投与した。腫瘍を投与３日後に回収し、腫瘍内濃度を質量分析
法によってアセスメントした。コンジュゲートのＰＫと一致して、並列構成のＰＥＧ２４
（リンカー１０および１６）を有するＡＤＣは、図２０に示すように、ＰＥＧ化されてい
ないコンジュゲート（ｃＡＣ１０−１）に対して、有意により高いＭＭＡＥを腫瘍へと送
達した。さらに、マレイミドおよびグルクロニドの間に直列のストレッチャーとしてのＰ
ＥＧ２４を含有したコンジュゲート（ｃＡＣ１０−４）は、そのカウンターパート（ｃＡ
Ｃ１０−１０）の４分の１のＭＭＡＥを送達した。最後に、ｍＤＰＲマレイミドを組み込
んだもの（ｃＡＣ１０−１６）は、マレイミドカプロイルを含有するカウンターパート（
ｃＡＣ１０−１０）を超えてＭＭＡＥの送達をさらに増加させた。
（実施例２０）
親抗体のＰＫを維持するＰＥＧ化されたリンカーを有する、抗体当たり８個の薬物を負荷
されたＡＤＣは、これらのより短いＰＥＧおよびＰＥＧ化されていないカウンターパート
に対してｉｎ ｖｉｖｏでより良好に許容される。
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３）に、単回ｉｐ用量の５０ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートを
０日目に投与した。マウスを病的状態の外面的徴候について毎日観察し、体重を測定した
。２０％超の体重を失う、または瀕死であることが見出された場合、動物を安楽死させた
。図２１において、０日目に対する体重の変化を時間の関数としてプロットする。各群に
ついて、少なくとも１匹の動物の屠殺によって、プロットを中止した。ＰＥＧを有さない
（ＩｇＧ−１４および−４４）、ＰＥＧ２を有する（ＩｇＧ−４３）、およびＰＥＧ４を
有する（ＩｇＧ−４２）コンジュゲートを投与されたマウスは、有意な体重減少または毒
性の外面的徴候を示し、５日目および７日目の間に安楽死させた。対照的に、ＰＥＧ８（
ＩｇＧ−１８）、ＰＥＧ１２（ＩｇＧ−１７）、およびＰＥＧ２４（ＩｇＧ−１６）を担
持するコンジュゲーを投与されたマウスは、最小の体重減少を示し、瀕死の外面的徴候を
示さなかった。これらのデータは、図１８におけるＰＫプロファイルと併せて、ＰＫ曝露
の減少を伴うコンジュゲートがより大きな急性毒性を発揮することを示唆する。
（実施例２１）
ＰＥＧ長さの最大化
薬物−リンカー上のＰＥＧ鎖の長さが増加するにつれ、コンジュゲートの全体的なサイ
ズおよび流体力学的半径もまた増加する。これを、それぞれ、８個、１２個、および２４
個のＰＥＧ単位を有する薬物−リンカー１８、１７、および１６を用いて調製したＡＤＣ
の分析用サイズ排除クロマトグラフィーの記録（ｔｒａｃｅ）を示す図２２において例示
する。最初の原則から、ＡＤＣの明白なサイズが増加するにつれ、ｉｎ ｖｉｖｏの系に
おけるその拡散率は減少することが予想し得る。これは、ＡＤＣが固形腫瘍中に浸透する
ことができる速度または程度を減弱させる望ましくない効果を有し得る。この拡散率の減
少はまた、データを分布相および消失相についての速度項（ｒａｔｅ ｔｅｒｍ）を含む
２−コンパートメントモデルにフィットさせることによって、血漿薬物動態において観察
することができる。薬物−リンカー１８、１７、および１６（それぞれ、８個、１２個、
および２４個のＰＥＧ単位を有する）を用いて調製したＡＤＣについての薬物動態学的デ
ータを、２１日間集め、２−コンパートメントモデルにフィットさせた。２つのプロセス
（分布および消失）についての半減期を図２３に示す。
８単位から１２単位にＰＥＧ鎖を増加させることにより、血漿からの消失の緩徐化をも
たらす（概ね２日のｔ１／２の増加）が、ＰＥＧを１２単位から２４単位に倍増すること
は、殆どさらなるＰＫの改善を有さないことが、これらのデータから明らかである。逆に
、分布ｔ１／２は、この範囲に亘って殆ど直鎖状の様式で増加し、そのためＰＥＧ鎖を１
２単位から２４単位に倍増することは、組織コンパートメント中への分布のために必要と
される半減時間を殆ど倍増させる。これらのデータは、１２ＰＥＧ単位がこの薬物−リン
カーのための最適な長さであり得ることを示唆する。より大きなＰＥＧは、消失速度に対
する有意な影響なしに分布速度を減少させる効果を有するためである。この実施例は、ど
のようにＰＫデータを使用して、任意の特定の薬物−リンカーのための最適なＰＥＧサイ
ズを選択することができるかを示す。
（実施例２２）
多重のＰＥＧ化された足場の調製
スキーム１２〜１４は、ＰＥＧ化された足場について記載したペプチドカップリング方
法を使用して４個および８個の薬物単位／抗体を提供する、多重のＰＥＧ化された足場Ａ
およびＢ（１６個の薬物単位／抗体を有するＡＤＣを提供する）、ならびに多重のＰＥＧ
化された足場Ｃ（その構造を直後に示す）の合成を示す。

ＰＥＧ足場Ｃは、

の構造によって包含され、式中、Ｚ’は、マレイミド含有（ｃｏｎｔａｎｉｎｇ）部分で
あり、Ａは、分岐リシン−リシン残基であり、ｔは、１であり、各ＡＤおよび各Ｌｐは、
システイン残基である。







スキーム１２〜１４によって調製した足場Ａ、ＢおよびＣについてのＭＳデータを、表６
において示す。

（実施例２３）
多重のＰＥＧ化された足場を組み込んだＡＤＣの調製
スキーム１５〜１６は、抗体および薬物−リンカーへのＰＥＧ化された足場のコンジュ
ゲーションを示す。ＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含有し、さらなるリン酸カリウム（１００ｍＭ
、ｐＨ７．４）で緩衝化したＰＢＳ中の概ね１０ｍｇ／ｍＬの濃度の完全に還元した抗体
（３４）の溶液に、５〜２０ｍＭのＤＭＳＯストック溶液からの１２モル当量のＰＥＧ化
された分岐状薬物担体足場を加えた。このように得られた溶液を室温にて３０分間静置し
た。完全なコンジュゲーションが逆相クロマトグラフィーによって確認された。コンジュ
ゲーションが不完全であった場合、さらなるＰＥＧ試薬を加えた。コンジュゲーション後
、シリンジポンプを使用して抗体溶液を１ｍＬのＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓ
ｕＲｅカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｔｔｓｂ
ｕｒｇｈ、ＰＡ）に結合させ、ＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含有する１０ｍＬのＰＢＳで１ｍＬ
／分にて洗浄した。ｔ−ブチルチオール保護基を除去するために、さらなるリン酸カリウ
ム（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）で緩衝化した３ｍＬの１０ｍＭのＴＣＥＰで１時間に亘り
３７℃にてカラムを洗浄した。次いで、カラムをＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含有する１０ｍＬ
のＰＢＳで１ｍＬ／分にて洗浄し、精製した抗体−足場コンジュゲートを５０ｍＭのグリ
シン（ｐＨ３．０）で溶出した。タンパク質を含有する画分を合わせ、１０％（ｖ／ｖ）
８００ｍＭのリン酸カリウム、５００ｍＭのＮａＣｌ、および５００ｍＭのＥＤＴＡ（ｐ
Ｈ７．４）で中和した。このように得られた溶液（３６）を無菌の０．２２μｍの遠心濾
過膜を通して濾過し、直ちに使用し、または−８０℃にて貯蔵した。
ＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含有し、さらなるリン酸カリウム（１００ｍＭ、ｐＨ７．４）で
緩衝化したＰＢＳ中の概ね５ｍｇ／ｍＬの濃度の脱保護されたＰＥＧ化された抗体（３５
）の溶液に、５〜２０ｍＭのＤＭＳＯストック溶液からの４８モル当量のマレイミド含有
薬物−リンカーを加えた。このように得られた溶液を室温にて３０分間静置した。完全な
コンジュゲーションが逆相クロマトグラフィーによって確認された。コンジュゲーション
が不完全であった場合、さらなる薬物−リンカーを加えた。コンジュゲーション後、抗体
溶液を、３ラウンドの希釈および３０ｋＤａのＭＷＣＯフィルターを通した４，０００×
ｇでの遠心分離によってＰＢＳ中に脱塩した。このように得られたＰＥＧ化された抗体−
薬物コンジュゲート溶液（３７）を無菌の０．２２μｍの遠心濾過膜を通して濾過し、サ
イズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および逆相クロマトグラフィーによって分析し、
−８０℃にて貯蔵した。


（実施例２４）
多重化されたＰＥＧ化された足場を有するＡＤＣの調製および生物活性
実施例２３の手順を使用して、ＰＥＧ化された多重化された足場Ｃ（ｎ＝３７である）
から３２負荷アウリスタチンおよびカンプトテシンＡＤＣを調製した。凝集の量は定量化
のレベル未満であったが、サイズ排除クロマトグラフィーは、３２負荷ＭＭＡＥ ＡＤＣ
が二量体形態で存在し得ることを示した。
ｍｃ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥの−Ｘ−Ｄ部分を有するｃＡＣ１０の３２負荷コンジ
ュゲートは、８負荷ＡＤＣと比較して、薬物負荷量において４倍のみの増加が存在したに
も関わらず、Ｌ５４０ｃｙ（ＣＤ３０コピー数４３３Ｋ）に対する細胞毒性において＞５
倍の改善を示した。さらにより重要なことには、３２負荷コンジュゲートは、別のホジキ
ンリンパ腫細胞系であるＬ−４２８に対して、この細胞系が非常により低いコピー数の標
的とした抗原（ＣＤ３０コピー数７７Ｋ）を有するにも関わらず、活性を有し、一方、８
負荷コンジュゲートは不活性であると考えられた（ＩＣ５０＞１μＭ）。また、３２負荷
ＭＭＡＥコンジュゲートは、ＣＤ３０＋多剤耐性ＡＬＣＬ細胞系に対して細胞毒性活性を
有した。対照的に、８負荷ＭＭＡＥコンジュゲートは、親細胞系に対して３２負荷コンジ
ュゲートと同様の活性を有したが、両方の多剤耐性細胞系に対して不活性であると考えら
れた。
ＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）カンプトテシンの−Ｘ−Ｄ部分を有するｃＡＣ１０ ３
２負荷コンジュゲートは、８負荷コンジュゲートと比較して、Ｌ５４０ｃｙに対して細胞
毒性において３〜４倍の改善を示したが、８負荷コンジュゲートと同様に、Ｌ−４２８に
対して不活性であると考えられた。３２負荷コンジュゲートは、８負荷コンジュゲートと
比較して、ＡＬＣＬ多剤耐性細胞系に対して＞５倍の細胞毒性を有した。
ＭＤｐｒ−ＰＡＢ（ｇｌｕｃ）−カンプトテシンの−Ｘ−Ｄ部分をまた有するｈＢＵ１
２の３２負荷コンジュゲートはまた、８負荷コンジュゲートと比較して、ＲａｊおよびＲ
ａｍｏｓに対して細胞毒性において＞５倍の改善を示し、最も低いＣ１９コピー数を有し
たＲＬに対して活性であった。対照的に、８負荷コンジュゲートは不活性であった。

Claims (1)

  1. 本明細書に記載の発明。
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