KR20220010527A - 친수성 기를 포함하는 링커를 갖는 항체 약물 콘쥬게이트 - Google Patents

친수성 기를 포함하는 링커를 갖는 항체 약물 콘쥬게이트 Download PDF

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KR20220010527A
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주오리앙 첸
카츠마사 나카지마
매튜 티. 버거
조셉 안토니 드'알레시오
에릭 멕네일
마크 지. 팔레르모
빙 유
치앙 장
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노파르티스 아게
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Abstract

링커, 링커-약물 그룹 및 친수성 기를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 본원에서 제공된다.

Description

친수성 기를 포함하는 링커를 갖는 항체 약물 콘쥬게이트
관련 출원
본 출원은 2019년 5월 20일자로 출원된 미국 가출원 제62/850,094호에 대한 이익 및 우선권을 주장하며, 이의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 발명은 하나 이상의 소수성 약물 화합물을 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)의 용해도 개선을 위한 링커를 제공한다.
항체 약물 콘쥬게이트(ADC) 디자인의 일 양태는 약물 모이어티를 표적화 모이어티에 연결하는 화학적 링커의 디자인이다. 전형적으로, ADC는 소수성 약물 모이어티를 사용하지만, 이러한 약물 모이어티가 상대적으로 소수성인 링커와 조합되어 사용되는 경우 ADC의 생체적합성 및 약학적 효능에 영향을 줄 수 있는 용해도 문제가 발생할 수 있다.
링커 전략이 이러한 난제의 극복을 시도하기 위하여 보고되었다(구체적으로 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 친수성 링커(문헌[R. P. Lyon, T. D. Bovee, S. O. Doronina, P. J. Burke, J. H. Hunter, H. D. Neff-LaFord, M. Jonas, M. E. Anderson, J. R. Setter, P. D. Senter, Nat. Biotechnol ., 2015, 33, 733-735], 및 WO2015057699 참조), 술포네이트를 포함하는 링커(문헌[R. Y. Zhao, S. D. Wilhelm, C. Audette, G. Jones, B. A. Leece, A. C. Lazar, V. S. Goldmacher, R. Singh, Y. Kovtun, W. C. Widdison, J. M. Lambert, R. V. J. Chari, J. Med . Chem., 2011, 54, 3606-3623]) 및 탄수화물 백본을 갖는 링커(문헌[F.S. Ekholm, H.
Figure pct00001
, A. Vilkman, V.
Figure pct00002
, J. Helin, J. Saarinen, T. Satomaa, ChemMedChem., 2016, 11(22):2501-2505])의 디자인). 그러나, 개선된 약동학적 및 약력학적 특성을 갖는 소수성 약물의 표적화된 전달을 허용하는 항체 약물 콘쥬게이트 형식에 대한 필요성이 여전히 남아 있다.
본 발명은 링커-약물 콘쥬게이트의 용해도를 개선하는 데 사용하기 위한 링커를 제공하며, 여기서, 이러한 콘쥬게이트는 하나 이상의 소수성 약물 화합물을 포함하고, 링커는 하나 이상의 친수성 기를 포함한다. 본 발명의 다양한 실시 형태가 본원에 기술된다.
본 발명은 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)의 용해도를 개선하는 데 사용하기 위한 링커를 추가로 제공하며, 여기서, ADC는 하나 이상의 소수성 약물 화합물을 포함하고, 링커는 하나 이상의 친수성 기를 포함한다. 본 발명의 다양한 실시 형태가 본원에 기술된다.
일 실시 형태에서, 하나 이상의 자가 희생 기를 포함하는 링커가 본원에 개시되며, 여기서, 상기 하나 이상의 자가 희생 기는 각각 하나 이상의 친수성 모이어티로 치환된다.
일 실시 형태에서, 링커-약물 그룹이 본원에 개시되며, 여기서, 링커는 하나 이상의 자가 희생 기가 약물에 커플링된 것을 포함하고, 상기 하나 이상의 자가 희생 기는 각각 하나 이상의 친수성 모이어티로 치환된다.
일 실시 형태에서, 하나 이상의 링커-약물 그룹을 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트가 본원에 개시되며, 여기서, 링커는 하나 이상의 자가 희생 기가 약물에 커플링된 것을 포함하고, 상기 하나 이상의 자가 희생 기는 각각 하나 이상의 친수성 모이어티로 치환된다.
일 실시 형태에는 하기 화학식 I의 링커-약물 그룹, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 있다:
[화학식 I]
Figure pct00003
여기서,
R1은 반응기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00004
Figure pct00005
-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬이고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결된다.
화학식 I의 링커-약물 그룹의 일 실시 형태에는 하기 화학식 II의 링커-약물 그룹, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 있다:
[화학식 II]
Figure pct00006
여기서,
R1은 반응기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00007
Figure pct00008
-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결된다.
일 실시 형태에는 하기 화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트가 있다:
[화학식 III]
Figure pct00009
여기서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은 커플링 기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 링커이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00010
Figure pct00011
-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트의 일 실시 형태에는 하기 화학식 IV의 항체 약물 콘쥬게이트가 있다:
[화학식 IV]
Figure pct00012
여기서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은 커플링 기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00013
Figure pct00014
-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
본 발명의 또 다른 양태는 하기 화학식 V의 구조를 갖는 링커이다:
[화학식 V]
Figure pct00015
여기서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00016
Figure pct00017
**-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이다.
화학식 V의 링커의 일 실시 형태에는 하기 화학식 VI의 구조를 갖는 링커가 있다:
[화학식 VI]
Figure pct00018
여기서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00019
Figure pct00020
-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
L3은 스페이서 모이어티이다.
친수성 모이어티를 포함하는 본원에 기술된 링커는 항체-약물 콘쥬게이트(ADC)의 전체 친수성에 기여하고 ADC의 수용해도를 개선시킨다. 본원에 기술된 링커는 또한 예기치 않게도 ADC 응집을 감소시키고 ADC의 약동학적 및 약력학적 특성을 개선시킨다. 또한, 본원에 기술된 친수성 링커는 본원에 기술된 링커-약물 그룹의 개선된 수용해도를 허용함으로써 링커-약물 그룹에 대한 개선된 항체 콘쥬게이션을 허용하며, 이는 ADC, 구체적으로 소수성 약물 모이어티를 포함하는 ADC의 정제 및 전체 합성 수율을 개선시킨다.
도 1: 선택된 세포주 전체에 걸쳐 적정된 항체 약물 콘쥬게이트의 세포 활성의 선 그래프. A: HT-29 PCAD+; B: FaDu; C: HCC70; D:HT-29; 및 E: HCC1954.
도 2: HCC1954 세포주 전체에 걸쳐 적정된 항체 약물 콘쥬게이트의 카스파아제-3/7 활성의 선 그래프. A: 24시간 후 및 B: 48시간 후.
도 3: SCID-베이지색 암컷 마우스에서 HCC70 인간 TNBC 이종이식 모델에서 PCAD-ADC 및 huIgG1 이소타입-매칭 대조 ADC의 효능 및 내용성. 도 3a) 항종양 반응; 도 3b) 및 도 3c), 치료 시작 시 체중과 비교한 체중의 변화. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시된다. * p<0.05, 제20일에 비처리군과 비교(Dunnett 사후 검정을 이용한 일원 분산 분석).
본 발명의 다양한 열거된 실시 형태가 본원에 기술된다. 각각의 실시 형태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시 형태를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
본 출원의 본문 전체에 걸쳐, 명세서의 본문(예를 들어 표 3)과 서열 목록 사이에 차이가 존재할 경우, 본 명세서의 본문이 우선한다.
정의
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고 불포화체를 함유하지 않는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C1-C6알킬"은, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 불포화체를 함유하지 않으며, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖고, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착되는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. "C1-C6알킬" 기의 비제한적 예는 메틸(C1알킬), 에틸(C2알킬), 1-메틸에틸(C3알킬), n-프로필(C3알킬), 이소프로필(C3알킬), n-부틸(C4알킬), 이소부틸(C4알킬), sec-부틸(C4알킬), tert-부틸(C4알킬), n-펜틸(C5알킬), 이소펜틸(C5알킬), 네오펜틸(C5알킬) 및 헥실(C6알킬)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알케닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고 적어도 하나의 이중 결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼 기를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-Ce알케닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지며, 적어도 하나의 이중 결합을 함유하고, 2 내지 6개의 탄소 원자를 가지며, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착되는, 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C6알케닐" 기의 비제한적 예는 에테닐(C2알케닐), 프로프-1-에닐(C3알케닐), 부트-1-에닐(C4알케닐), 펜트-1-에닐(C5알케닐), 펜트-4-에닐(C5알케닐), 펜타-1,4-디에닐(C5알케닐), 헥사-1-에닐(C6알케닐), 헥사-2-에닐(C6알케닐), 헥사-3-에닐(C6알케닐), 헥사-1-,4-디에닐(C6알케닐), 헥사-1-,5-디에닐(C6알케닐) 및 헥사-2-,4-디에닐(C6알케닐)을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-C3알케닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지며, 적어도 하나의 이중 결합을 함유하고, 2 내지 3개의 탄소 원자를 가지며, 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착되는, 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C3알케닐" 기의 비제한적 예는 에테닐(C2알케닐) 및 프로프-1-에닐(C3알케닐)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고 불포화체를 함유하지 않는 2가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C1-C6알킬렌"은, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 불포화체를 함유하지 않으며, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 2가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. "C1-C6알킬렌" 기의 비제한적 예는 메틸렌(C1알킬렌), 에틸렌(C2알킬렌), 1-메틸에틸렌(C3알킬렌), n-프로필렌(C3알킬렌), 이소프로필렌(C3알킬렌), n-부틸렌(C4알킬렌), 이소부틸렌(C4알킬렌), sec-부틸렌(C4알킬렌), tert-부틸렌(C4알킬렌), n-펜틸렌(C5알킬렌), 이소펜틸렌(C5알킬렌), 네오펜틸렌(C5알킬렌), 및 헥실렌(C6알킬렌)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알케닐렌"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고 적어도 하나의 이중 결합을 함유하는 2가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-C6알케닐렌"은, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 적어도 하나의 이중 결합을 함유하며, 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 2가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C6알케닐렌" 기의 비제한적 예는 에테닐렌(C2알케닐렌), 프로프-1-에닐렌(C3알케닐렌), 부트-1-에닐렌(C4알케닐렌), 펜트-1-에닐렌(C5알케닐렌), 펜트-4-에닐렌(C5알케닐렌), 펜타-1,4-디에닐렌(C5알케닐렌), 헥사-1-에닐렌(C6알케닐렌), 헥사-2-에닐렌(C6알케닐렌), 헥사-3-에닐렌(C6알케닐렌), 헥사-1-,4-디에닐렌(C6알케닐렌), 헥사-1-,5-디에닐렌(C6알케닐렌) 및 헥사-2-,4-디에닐렌(C6알케닐렌)을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "C2-C6알케닐렌"은, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 적어도 하나의 이중 결합을 함유하며, 2 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 2가 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼 기를 지칭한다. "C2-C3알케닐렌" 기의 비제한적 예는 에테닐렌(C2알케닐렌) 및 프로프-1-에닐렌(C3알케닐렌)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "시클로알킬", 또는 "C3-C8시클로알킬"은 포화, 단환식, 융합 이환식, 융합 삼환식 또는 가교 다환식 고리 시스템을 지칭한다. 융합 이환식 또는 가교 다환식 고리 시스템의 비제한적 예는 바이시클로[1.1.1]펜탄, 바이시클로[2.1.1]헥산, 바이시클로[2.2.1]헵탄, 바이시클로[3.1.1]헵탄, 바이시클로[3.2.1]옥탄, 바이시클로[2.2.2]옥탄 및 아다만타닐을 포함한다. 단환식 C3-C8시클로알킬 기의 비제한적 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 및 시클로옥틸 기를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리에틸렌 글리콜" 또는 "PEG"는 (OCH2CH2) 기로 이루어진 선형 쇄, 분지쇄 또는 성상 배열을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -(OCH2CH2)t*-이며, 여기서, t는 4~40이며, "-"는 자가 희생 스페이서를 향한 말단을 나타내며, "*-"는 말단 기 R'에 대한 부착점을 나타내며, R'는 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이다. 다른 실시 형태에서, 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -(CH2CH2O)t*-이며, 여기서, t는 4~40이며, "-"는 자가 희생 스페이서를 향한 말단을 나타내며, "*-"는 말단 기 R''에 대한 부착점을 나타내며, R''는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리알킬렌 글리콜"은 (O(CH2)m)t 기로 이루어진 선형 쇄, 분지쇄 또는 성상 배열을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 -(O(CH2)m)t*-이며, 여기서, m은 1~10이며, t는 4~40이며, "-"는 자가 희생 스페이서를 향한 말단을 나타내며, "*-"는 말단 기 R'에 대한 부착점을 나타내며, R'는 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이다. 다른 실시 형태에서, 폴리에틸렌 또는 PEG 기는 (CH2)mO)t*-이며, 여기서, m은 1~10이며, t는 4~40이며, "-"는 자가 희생 스페이서를 향한 말단을 나타내며, "*-"는 말단 기 R''에 대한 부착점을 나타내며, R''는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약물 모이어티", "D" 또는 "약물"은 약물을 본 발명의 링커-약물 그룹에 혼입하기 위하여 사용될 수 있는 반응성 작용기 및 원하는 생물학적 활성을 보유한 임의의 화합물을 지칭한다. 원하는 생물학적 활성은 인간 또는 다른 동물의 질환의 진단, 치유, 완화, 치료 또는 예방을 포함한다. 반응성 작용기는 화학식 I 및 화학식 II의 화합물 및 화학식 III 및 화학식 IV의 콘쥬게이트에서 "A"에 대한 결합을 형성한다. 일부 실시 형태에서, 약물 모이어티는 "A"와 결합을 형성할 수 있는 질소 원자를 갖는다. 다른 실시 형태에서, 약물 모이어티는 "A"와 결합을 형성할 수 있는 히드록실 기를 갖는다. 다른 실시 형태에서, 약물 모이어티는 "A"와 결합을 형성할 수 있는 카르복실산을 갖는다. 다른 실시 형태에서, 약물 모이어티는 "A"와 결합을 형성할 수 있는 카르보닐 기를 갖는다. 또 다른 실시 형태에서, 약물 모이어티는 "A"와 결합을 형성할 수 있는 술프히드릴 기를 갖는다.
필요한 반응성 작용기가 존재하는 경우, 용어 "약물 모이어티", "D" 또는 "약물"은 또한, 공식 미국 약전, 미국 공식 동종요법 약전 또는 공식 국내 처방집, 또는 이의 임의의 부록에서 약물로 인정되는 화학물질을 지칭한다. 예시적인 약물은 미국 의사 처방 참고집(Physician's Desk Reference; PDR) 및 미국 식품의약국(FDA)에서 관리하는 Orange Book에 기재되어 있다.
일 실시 형태에서, 약물 모이어티(D)는 세포독성, 세포증식억제 또는 면역억제 약물일 수 있다. 이러한 세포독성 또는 면역억제 약물은 예를 들어 항튜불린제, 튜불린 억제제, DNA 마이너 그루브(minor groove) 결합제, DNA 복제 억제제, 알킬화제, 항생제, 항엽산제, 항대사물질, 화학요법 증감제, 토포이소머라아제 억제제, 빈카 알칼로이드 등을 포함한다. 이러한 세포독성 약물의 예는 예를 들어 아우리스타틴, 캄프토테신, 듀오카르마이신, 에토포시드, 메이탄신 및 메이탄시노이드, 탁산, 벤조디아제핀 또는 벤조디아제핀 함유 약물(예를 들어, 피롤로[1,4]-벤조디아제핀(PBD)), 인돌리노벤조디아제핀 및 옥사졸리디노벤조디아제핀 및 빈카 알칼로이드를 포함한다.
본 발명의 효과는 약물 모이어티가 소수성인 실시 형태에서 더욱 두드러질 것이다. 따라서, 본 발명의 약물 모이어티는 바람직하게는 소수성이며 1.5 이상, 2.0 이상, 또는 2.5 이상의 SlogP 값을 갖는다. 일부 양태에서, 본 발명에 사용되는 약물은 (a) 약 1.5, 약 2, 또는 2.5 내지 약 7, (b) 약 1.5, 약 2, 또는 2.5 내지 약 6, (c) 약 1.5, 약 2 또는 약 2.5 내지 약 5, (d) 약 1.5, 약 2, 또는 2.5 내지 약 4, 또는 (e) 약 1.5, 약 2 또는 약 2.5 내지 약 3의 SlogP 값을 가질 것이다.
소수성은 SlogP를 사용하여 측정될 수 있다. SlogP는 옥탄올/물 분배 계수(내포된 수소 포함)의 로그로 정의되며 Chemical Computing group의 MOE™ 프로그램을 사용하여 계산될 수 있다(SlogP 값은 문헌[Wildman, 25 S.A., Crippen, G.M.; Prediction of Physiochemical Parameters by Atomic Contributions; J. Chern. lnf Comput. Sci. 39 No. 5 (1999) 868-873]을 사용하여 계산됨).
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "반응기"는 항체 또는 항체 단편의 작용기와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기이다. 이러한 작용기의 비제한적 예는 본원에 제공된 표 1의 반응기를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "커플링 기"는 가교 스페이서를 항체 또는 이의 단편에 연결하는 2가 모이어티를 지칭한다. 커플링 기는 반응기와 항체 또는 이의 단편 상의 작용기 사이의 반응에 의해 형성되는 2가 모이어티이다. 이러한 2가 모이어티의 비제한적 예는 본원에 제공된 표 1 및 표 2에 제공된 2가 화학적 모이어티를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "가교 스페이서"는 2가 펩티드 스페이서를 반응기에 연결하거나 2가 펩티드 스페이서를 커플링 기에 연결하는 2가 모이어티를 형성하도록 함께 공유적으로 부착되는 하나 이상의 링커 성분을 지칭한다. 특정 실시 형태에서 "가교 스페이서"는 아미드 결합을 통하여 2가 펩티드 스페이서의 N-말단에 부착되는 카르복실 기를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "스페이서 모이어티"는 자가 희생 스페이서를 친수성 모이어티에 연결하는 모이어티를 형성하도록 함께 공유적으로 부착되는 하나 이상의 링커 성분을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "2가 펩티드 스페이서"는 가교 스페이서를 자가 희생 스페이서에 연결하는 모이어티를 형성하도록 함께 공유적으로 부착되는 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 링커를 지칭한다. 상기 하나 이상의 아미노산 잔기는 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu), 페닐알라닌(Phe), 글리신(Gly), 히스티딘( His), 이소류신(Ile), 라이신(Lys), 류신(Leu), 메티오닌(Met), 아스파라긴(Asn), 프롤린(Pro), 글루타민(Gln), 아르기닌(Arg), 세린(Ser), 트레오닌( Thr), 발린(Val), 트립토판(Trp), 티로신(Tyr), 시트룰린(Cit), 노르발린(Nva), 노르류신(Nle), 셀레노시스테인(Sec), 피롤리신(Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기일 수 있다.
특정 실시 형태에서, "2가 펩티드 스페이서"는 각각의 잔기가 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu), 페닐알라닌(Phe), 글리신(Gly), 히스티딘(His), 이소류신(Ile), 라이신(Lys), 류신(Leu), 메티오닌(Met), 아스파라긴(Asn), 프롤린(Pro), 글루타민( Gln), 아르기닌(Arg), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 발린(Val), 트립토판(Trp), 티로신(Tyr), 시트룰린(Cit), 노르발린(Nva), 노르류신(Nle), 셀레노시스테인( Sec), 피롤리신(Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기로부터 독립적으로 선택되는 2 내지 4개의 아미노산 잔기의 조합, 예를 들어 -ValCit*; -CitVal*; -AlaAla*; -AlaCit*; -CitAla*; -AsnCit*; -CitAsn*; -CitCit*; -ValGlu*; -GluVal*; -SerCit*; -CitSer*; -LysCit*; -CitLys*; -AspCit*; -CitAsp*; -AlaVal*; -ValAla*; -PheAla*; -AlaPhe*; -PheLys*; -LysPhe*; -ValLys*; -LysVal*; -AlaLys*; -LysAla*; -PheCit*; -CitPhe*; -LeuCit*; -CitLeu*; -IleCit*; -CitIle*; -PheArg*; -ArgPhe*; -CitTrp*; -TrpCit*; -PhePheLys*; -LysPhePhe*; -DPhePheLys*; -DLysPhePhe*; -GlyPheLys*; -LysPheGly*; -GlyPheLeuGly-[서열 번호 160]; -GlyLeuPheGly-[서열 번호 161]; -AlaLeuAlaLeu-[서열 번호 162], -GlyGlyGly*; -GlyGlyGlyGly-[서열 번호 163]; -GlyPheValGly-[서열 번호 164]; 및 -GlyValPheGly-[서열 번호 165]이며, 여기서, "-"는 가교 스페이서에 대한 부착점을 나타내고, "*"는 자가 희생 스페이서에 대한 부착점을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "링커 성분"은 다음을 지칭한다:
a) 알킬렌 기: -(CH2)n-(선형 또는 분지형일 수 있음)(여기서, 이 경우 n은 1~18임);
b) 알케닐렌 기;
c) 알키닐렌 기;
d) 알케닐 기;
e) 알키닐 기;
f) 에틸렌 글리콜 단위: -OCH2CH2 또는 -CH2CH2O;
g) 폴리에틸렌 글리콜 단위: (-CH2CH2O-)x(여기서, 이 경우 x는 2~20임);
h) -O;
i) -S;
j) 카르보닐: -C(=O);
k) 에스테르: -C(=O)-O- 또는 -O-C(=O);
l) 카르보네이트: -OC(=O)O;
m) 아민: -NH;
n) 3차 아민
o) 아미드: -C(=O)-NH-, -NH-C(=O)- 또는 -C(=O)N(C1-6알킬);
p) 카르바메이트: -OC(=O)NH- 또는 -NHC(=O)O;
q) 우레아: -NHC(=O)NH;
r) 술폰아미드: -S(O)2NH- 또는 -NHS(O)2;
s) 에테르: -CH2O- 또는 -OCH2;
t) 카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 당류, 포스페이트 및 포스포네이트로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기로 치환된 알킬렌;
u) 카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 당류, 포스페이트 및 포스포네이트로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기로 치환된 알케닐렌;
v) 카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 당류, 포스페이트 및 포스포네이트로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기로 치환된 알키닐렌;
w) 하나 이상의 메틸렌 기가 하나 이상의 -S-, -NH- 또는 -O- 모이어티로 대체된 C1-C10알킬렌;
x) 2개의 이용가능한 부착점을 갖는 고리 시스템, 예컨대 페닐(1,2-, 1,3- 및 1,4-이치환된 페닐 포함), C5-C6 헤테로아릴, C3-C8 시클로알킬(1,1-이치환된 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실, 및 1,4-이치환된 시클로헥실 포함), 및 C4-C8 헤테로시클로알킬로부터 선택되는 2가 고리;
y) 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu), 페닐알라닌(Phe), 글리신(Gly), 히스티딘( His), 이소류신(Ile), 라이신(Lys), 류신(Leu), 메티오닌(Met), 아스파라긴(Asn), 프롤린(Pro), 글루타민(Gln), 아르기닌(Arg), 세린(Ser), 트레오닌( Thr), 발린(Val), 트립토판(Trp), 티로신(Tyr), 시트룰린(Cit), 노르발린(Nva), 노르류신(Nle), 셀레노시스테인(Sec), 피롤리신(Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기;
각각의 잔기가 알라닌(Ala), 시스테인(Cys), 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu), 페닐알라닌(Phe), 글리신(Gly), 히스티딘(His), 이소류신(Ile), 라이신(Lys), 류신(Leu), 메티오닌(Met), 아스파라긴(Asn), 프롤린(Pro), 글루타민( Gln), 아르기닌(Arg), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 발린(Val), 트립토판(Trp), 티로신(Tyr), 시트룰린(Cit), 노르발린(Nva), 노르류신(Nle), 셀레노시스테인( Sec), 피롤리신(Pyl), 호모세린, 호모시스테인 및 데스메틸 피롤리신으로부터 선택되는 아미노산의 잔기로부터 독립적으로 선택되는 2개 이상의 아미노산 잔기의 조합, 예를 들어 Val-Cit; Cit-Val; Ala-Ala; Ala-Cit; Cit-Ala; Asn-Cit; Cit-Asn; Cit-Cit; Val-Glu; Glu-Val; Ser-Cit; Cit-Ser; Lys-Cit; Cit-Lys; Asp-Cit; Cit-Asp; Ala-Val; Val-Ala; Phe-Lys; Lys-Phe; Val-Lys; Lys-Val; Ala-Lys; Lys-Ala; Phe-Cit; Cit-Phe; Leu-Cit; Cit-Leu; Ile-Cit; Cit-Ile; Phe-Arg; Arg-Phe; Cit-Trp; 및 Trp-Cit;
및
z) 자가 희생 스페이서(여기서, 자가 희생 스페이서는 산 유도 절단, 펩티다아제 유도 절단, 에스테라아제 유도 절단, 글리코시다아제 유도 절단, 포스포디에스테라아제 유도 절단, 포스파타아제 유도 절단, 프로테아제 유도 절단, 리파아제 유도 절단 또는 디술피드 결합 절단에 민감한 하나 이상의 보호기(트리거링 기)를 포함한다.
이러한 자가 희생 스페이서의 비제한적 예는 다음을 포함한다:
Figure pct00021
및
Figure pct00022
,
여기서,
PG는 보호기(트리거링 기)이며;
Xa는 O, NH 또는 S이며;
Xb는 O, NH, NCH3 또는 S이며;
Xc는 O 또는 NH이며;
Ya는 CH2, CH2O 또는 CH2NH이며;
Yb는 CH2, O 또는 NH이며;
Yc는 결합, CH2, O 또는 NH이며;
LG는 본 발명의 링커-약물 그룹의 약물 모이어티(D)와 같은 이탈기이다.
이러한 자가 희생 스페이서의 추가의 비제한적 예는 문헌[Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492 - 7509]에 기술되어 있다.
또한, 링커 성분은 2개의 반응기 사이의 반응에 의해 쉽게 형성되는 화학적 모이어티일 수 있다. 이러한 화학적 모이어티의 비제한적 예는 표 1에 주어져 있다.
[표 1]
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
여기서, 표 1에서 R32는 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 또는 피리딘이며; 표 1에서 R35는 H, C1- 6알킬, 페닐, 또는 1 내지 3개의 -OH 기로 치환된 C1- 4알킬이며; 표 1에서 각각의 R7은 H, C1- 6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1- 4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1- 4알킬로부터 독립적으로 선택되며; 표 1에서 R37은 H, 페닐 및 피리딘으로부터 독립적으로 선택되며; 표 1에서 q는 0, 1, 2 또는 3이며; 표 1에서 R8 또는 R13은 H 또는 메틸이며; 표 1에서 R9 또는 R14는 H, -CH3 또는 페닐이며; 표 1에서 R은 H 또는 적합한 치환체, 예를 들어, 알킬이다.
또한, 링커 성분은 하기 표 2에 주어진 기일 수 있다.
[표 2]
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
본원에서 사용되는 바와 같이, 화합물의 부분 구조가 예시되는 경우 물결선(
Figure pct00033
)은 분자의 나머지에 대한 부분 구조의 부착점을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "자가 희생 스페이서"는 산 유도 절단, 펩티다아제 유도 절단, 에스테라아제 유도 절단, 글리코시다아제 유도 절단, 포스포디에스테라아제 유도 절단, 포스파타아제 유도 절단, 프로테아제 유도 절단, 리파아제 유도 절단 또는 디술피드 결합 절단에 의해 활성화되는 하나 이상의 트리거링 기(TG)를 포함하는 모이어티를 지칭하며, 활성화 후 보호기는 제거되고, 이는 분해 반응의 캐스케이드를 생성하여 이탈기의 일시적 순차적 방출을 초래한다. 이러한 반응 캐스케이드는 1,4-, 1,6- 또는 1,8- 제거 반응일 수 있지만, 이에 한정되지 않을 수 있다.
이러한 자가 희생 스페이서의 비제한적 예는 다음을 포함한다:
Figure pct00034
Figure pct00035
및
Figure pct00036
여기서, 이러한 기는 선택적으로 치환될 수 있으며,
TG는 트리거링 기이며;
Xa는 O, NH 또는 S이며;
Xb는 O, NH, NCH3 또는 S이며;
Xc는 O 또는 NH이며;
Ya는 CH2, CH2O 또는 CH2NH이며;
Yb는 CH2, O 또는 NH이며;
Yc는 결합, CH2, O 또는 NH이며;
LG는 본 발명의 링커-약물 그룹의 약물 모이어티(D)와 같은 이탈기이다.
이러한 자가 희생 스페이서의 추가의 비제한적 예는 문헌[Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492 - 7509]에 기술되어 있다.
특정 실시 형태에서, 자가 희생 스페이서는 구조
Figure pct00037
를 갖는 모이어티이며, 여기서, Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서이며, A, D, L3 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다.
바람직한 실시 형태에서, 자가 희생 스페이서는 구조
Figure pct00038
를 갖는 모이어티이며, 여기서, Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서이며, D, L3 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다.
다른 바람직한 실시 형태에서, 자가 희생 스페이서는 구조
Figure pct00039
를 갖는 모이어티이며, 여기서, Lp는 효소적으로 절단가능한 2가 펩티드 스페이서이며, D, L3 및 R2는 본원에 정의된 바와 같다. 일부 실시 형태에서, D는 4차화된 3차 아민-함유 약물 모이어티이며, 여기서, 암모늄 양이온은 선택적으로 쯔비터이온 형태로 존재하거나 1가 음이온 반대이온을 갖는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "친수성 모이어티"는 약물 모이어티(D)가 본 발명의 링커 기에 부착되는 경우 약물 모이어티(D)의 수용해도를 증가시키는 친수성을 갖는 모이어티를 지칭한다. 이러한 친수성 기의 예는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, 1 내지 3개의
Figure pct00040
기로 치환된 C2-C6알킬 및 폴리사르코신, 예컨대 화학식
Figure pct00041
을 갖는 것을 포함하지만, 이에 한정되지 않으며, 여기서, n은 2 내지 25의 정수이며; R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이다.
일부 실시 형태에서, 친수성 모이어티는 화학식
Figure pct00042
의 폴리에틸렌 글리콜을 포함하며, 여기서, R은 H, -CH3, -CH2CH2NHC(=O)ORa, -CH2CH2NHC(=O)Ra, 또는 -CH2CH2C(=O)ORa이며, R'는 OH, -OCH3, -CH2CH2NHC(=O)ORa, -CH2CH2NHC(=O)Ra, 또는 -OCH2CH2C(=O)ORa이며, Ra는 H, 또는 OH 또는 C1-4 알콕실 중 어느 하나로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬이며, 각각의 m 및 n은 2 내지 25(예를 들어, 3 내지 25)의 정수이다. 일부 실시 형태에서, 친수성 모이어티는
Figure pct00043
을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 항원에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자로부터 유래된 단백질 또는 폴리펩티드 서열을 지칭한다. 항체는 다클론 또는 단클론, 다중 쇄 또는 단쇄, 또는 온전한 면역글로불린일 수 있고, 천연 공급원으로부터 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 자연 발생 "항체"는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2, 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR)으로 칭해지는 초가변성의 영역들로 더 세분될 수 있으며, 이들 사이에는 프레임워크 영역(framework region; FR)으로 칭해지는 더 보존된 영역들이 산재되어 있다. 각각의 VH 및 VL은 다음 순서로 아미노-말단으로부터 카르복실-말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전 보체계의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함한, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 단클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타 항체, 또는 키메라 항체일 수 있다. 항체는 임의의 이소형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, 및 IgY), 클래스(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2), 또는 서브클래스의 항체일 수 있다.
용어 "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편" 또는 "기능성 단편"은 항원의 에피토프와(예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/불안정화, 공간 분포에 의해) 특이적으로 상호작용하는 능력을 보유하는 항체의 적어도 일부분을 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, scFv 항체 단편, 디술피드-연결 Fv(sdFv), VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편, 선형 항체, 단일 도메인 항체, 예컨대 sdAb(VL 또는 VH), 낙타과 VHH 도메인, 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편과 같은 항체 단편으로 형성된 다중특이성 항체, 및 항체의 단리된 CDR 또는 다른 에피토프 결합 단편을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 항원 결합 단편은 또한 단일 도메인 항체, 맥시바디, 미니바디, 나노바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv 내에 혼입될 수 있다(예를 들어 문헌[Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005] 참조). 항원 결합 단편은 또한, 피브로넥틴 III형(Fn3)과 같은 폴리펩티드를 기반으로 한 스캐폴드에 그래프팅될 수 있다(피브로넥틴 폴리펩티드 미니바디를 기술한 미국 특허 제6,703,199호 참조). 용어 "scFv"는 경쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하며, 여기서, 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역은, 예를 들어 합성 링커, 예를 들어 짧은 가요성 폴리펩티드 링커를 통하여 인접하여 연결되고 단쇄 폴리펩티드로서 발현될 수 있고, scFv는 그것이 유래된 온전한 항체의 특이성을 유지한다. 명시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 바와 같이, scFv는 예를 들어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단과 관련하여, VL 및 VH 가변 영역을 어느 순서로도 가질 수 있고, scFv는 VL-링커-VH를 포함할 수 있거나 또는 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항원 특이성 및 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 서열을 지칭한다. 예를 들어, 일반적으로 각각의 중쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(예를 들어 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)이 존재하고 각각의 경쇄 가변 영역 내에 3개의 CDR(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)이 존재한다. 주어진 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]("Kabat" 넘버링 체계), 문헌[Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948]("Chothia" 넘버링 체계), 또는 이들의 조합, 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링(문헌[Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]("IMGT" 넘버링 체계)에 기술된 것들을 포함한, 다수의 잘 알려진 체계 중 임의의 것을 이용하여 결정될 수 있다. 주어진 CDR 영역(예를 들어, HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2, 또는 LC CDR3)에 대한 조합된 Kabat 및 Chothia 넘버링 체계에 있어서, 일부 실시 형태에서, CDR은 Chothia CDR의 일부로서 정의된 아미노산 잔기와 함께, Kabat CDR의 일부로서 정의된 아미노산 잔기에 상응한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "Chothia" 번호 체계에 따라 정의된 CDR은 때로는 "초가변 루프"로 지칭되기도 한다.
예를 들어, Kabat 하에서, 중쇄 가변 도메인(VH) 내의 CDR 아미노산 잔기는 31~35(HCDR1)(예를 들어, 위치 35 이후의 삽입(들)), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; 경쇄 가변 도메인(VL) 내의 CDR 아미노산 잔기는 24~34(LCDR1)(예를 들어, 위치 27 이후의 삽입(들)), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)로 넘버링된다. 또 다른 예로서, Chothia 하에서, VH 내의 CDR 아미노산은 26~32(HCDR1)(예를 들어, 위치 31 이후의 삽입(들)), 52~56(HCDR2), 및 95~102(HCDR3)로 넘버링되고; VL 내의 아미노산 잔기는 26~32(LCDR1)(예를 들어, 위치 30 이후의 삽입(들)), 50~52(LCDR2), 및 91~96(LCDR3)으로 넘버링된다. Kabat과 Chothia 둘 다의 CDR 정의를 조합함으로써, CDR은 예를 들어 인간 VH 내의 아미노산 잔기 26~35(HCDR1), 50~65(HCDR2), 및 95~102(HCDR3) 및 인간 VL 내의 아미노산 잔기 24~34(LCDR1), 50~56(LCDR2), 및 89~97(LCDR3)을 포함하거나 이들로 이루어진다. IMGT 하에서, VH 내의 CDR 아미노산 잔기는 대략 26~35(CDR1), 51~57(CDR2), 및 93~102(CDR3)로 넘버링되고, VL 내의 CDR 아미노산 잔기는 대략 27~32(CDR1), 50~52(CDR2), 및 89~97(CDR3)로 넘버링된다("Kabat"에 따른 넘버링). IMGT 하에서, 항체의 CDR 영역은 IMGT/DomainGap Align 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린에 특이적으로 결합할 수 있거나 달리 분자와 상호작용할 수 있는 임의의 단백질 결정기를 포함한다. 에피토프 결정기는 일반적으로, 분자의 화학적 활성 표면 그룹, 예컨대 아미노산 또는 탄수화물 또는 당 측쇄로 이루어지고, 특이적인 3차원 구조적 특성뿐만 아니라 특이적인 전하 특성도 가질 수 있다. 에피토프는 "선형" 또는 "입체형태적"일 수 있다. 입체형태적 에피토프와 선형 에피토프는 전자에 대한 결합이 변성 용매의 존재 하에서 상실되지만 후자는 그렇지 않다는 점에서 구별된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나 동일한 유전자원으로부터 유래된 항체, 이중특이성 항체 등을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 이 용어는 또한, 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 포함한다. 단일클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "인간 항체"는 프레임워크 영역과 CDR 영역 둘 다가 인간 기원의 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역도 이러한 인간 서열, 예를 들어, 인간 생식세포 계열 서열, 또는 인간 생식세포 계열 서열의 돌연변이 버전, 또는 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 컨센서스 프레임워크 서열을 함유하는 항체로부터 유래되며, 이는 예를 들어, 문헌[Knappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86)]에 기술된 바와 같다. 면역글로불린 가변 도메인, 예를 들어 CDR의 구조 및 위치는 잘 알려진 넘버링 체계, 예를 들어 Kabat 넘버링 체계, Chothia 넘버링 체계, 또는 Kabat와 Chothia의 조합, 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링을 이용하여 정의될 수 있다(예를 들어, 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat et al.]; 문헌[Al Lazikani et al., (1997) J. Mol. Bio. 273:927 948)]; 문헌[Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edit., NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services]; 문헌[Chothia et al., (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917]; 문헌[Chothia et al., (1989) Nature 342:877-883]; 문헌[Al-Lazikani et al., (1997) J. Mal. Biol. 273:927-948]; 및 문헌[Lefranc, M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)]; 문헌[Lefranc, M.-P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)] 참조).
본 발명의 인간 항체는 인간 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 안정성 또는 제조의 촉진을 위한 보존적 치환, 또는 생체 내에서의 체세포 돌연변이에 의해 또는 시험관 내에서의 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 또 다른 포유동물 종의 생식세포 계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그래프팅된 항체를 포함하고자 하는 것이 아니다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 어구 "재조합 인간 항체"는 재조합적 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 모든 인간 항체, 예컨대 인간 면역글로불린 유전자 또는 이로부터 제조된 하이브리도마에 대해 유전자이식 또는 염색체이식된 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체, 인간 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예를 들어 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 단리된 항체, 재조합형 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 인간 면역글로불린 유전자, 서열의 전부 또는 일부를 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 것을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는, 프레임워크 영역 및 CDR 영역이 인간 생식세포 계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진다. 그러나 특정 실시 형태에서 이러한 재조합 인간 항체는 시험관 내 돌연변이 유발(또는, 인간 Ig 서열에 대해 유전자이식된 동물이 사용될 때, 생체 내 체세포 돌연변이 유발) 처리될 수 있고, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포 계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체 내 인간 항체 생식세포 계열 레퍼토리 내에 자연적으로는 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc 영역"은 CH3, CH2, 및 항체의 불변 도메인의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 선택적으로, Fc 영역은 일부 항체 클래스에 존재하는 CH4 도메인을 포함할 수 있다. Fc 영역은 항체의 불변 도메인의 전체 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH1 영역을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 항체의 Fc 영역 및 CH3 영역을 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 항체의 불변 도메인으로부터의 Fc 영역, CH1 영역, 및 C카파/람다 영역을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 결합 분자는 불변 영역, 예를 들어 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일 실시 형태에서, 이러한 불변 영역은 야생형 불변 영역과 비교하여 변형된다. 즉, 본원에 개시된 본 발명의 폴리펩티드는 3개의 중쇄 불변 도메인(CH1, CH2, 또는 CH3) 중 하나 이상 및/또는 경쇄 불변 영역 도메인(CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 변형의 예는 하나 이상의 도메인에서의 1개 이상의 아미노산의 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 이러한 변화는 이펙터 기능, 반감기 등을 최적화하기 위해 포함될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "결합 특이성"은 하나의 항원 결정기와 반응하고 다른 항원 결정기와는 반응하지 않는 개별 항체 결합 부위의 능력을 지칭한다. 항체의 결합 부위는 이 분자의 Fab 부분에 위치하고, 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역으로부터 구축된다. 항체의 결합 친화도는 단일 항원 결정기와 항체 상의 단일 결합 부위 사이의 반응의 강도이다. 이는 항원 결정기와 항체의 결합 부위 사이에 작용하는 인력과 척력의 합이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서의 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 지칭한다. 각각의 항원 부위 내에서, 항체 "아암"의 가변 영역은 여러 부위에서 항원과 약한 비공유 결합력을 통해 상호작용하며; 상호작용이 많을수록 친화성은 더 강하다.
용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체 또는 항체 단편의 결합 특징에 대한 영향이나 변경이 크지 않은 아미노산 변형을 지칭한다. 이러한 보존적 변형에는 아미노산 치환, 부가 및 결실이 포함된다. 변형은 당업계에 공지된 표준 기술, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 본 발명의 항체 또는 항체 단편 내에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당업계에서 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신), 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 항체 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀리의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기술된 기능 분석을 이용하여 테스트될 수 있다.
용어 "상동성" 또는 "동일성"은 2개의 중합체 분자 사이, 예를 들어 2개의 DNA 분자 또는 2개의 RNA 분자와 같은 2개의 핵산 분자 사이, 또는 2개의 폴리펩티드 분자 사이의 서브유닛 서열 동일성을 지칭한다. 두 분자 모두에서 서브유닛 위치가 동일한 단량체 서브유닛에 의해 점유된 경우, 예를 들어 2개의 DNA 분자 각각에서 하나의 위치가 아데닌에 의해 점유되는 경우에, 이들은 그 위치에서 상동성이거나 동일하다. 두 서열 사이의 상동성은 매칭되거나 상동성인 위치의 수의 직접적인 함수이다; 예를 들어, 두 서열에서의 위치의 절반(예를 들어, 길이가 10개의 서브유닛인 중합체에서 5개의 위치)이 상동성일 경우, 두 서열은 50% 상동성이고; 위치의 90%(예를 들어 10개 중 9개)가 매칭되거나 상동성일 경우, 두 서열은 90% 상동성이다. "서열 동일성"의 백분율은 비교창에 걸쳐 최적으로 정렬된 두 서열을 비교함으로써 결정될 수 있으며, 비교창에서의 아미노산 서열의 단편은 두 서열의 최적 정렬을 위해 기준 서열(부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 부가 또는 결실(예를 들어, 갭 또는 오버행)을 포함할 수 있다. 상기 백분율은 두 서열 모두에서 동일한 아미노산 잔기가 나타나는 위치의 수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 수를 비교창에서의 총 위치의 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 결과는 쿼리 서열에 대한 대상 서열의 동일성 퍼센트이다. 상기 두 서열 사이의 동일성 퍼센트는 상기 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수로서, 상기 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다.
두 서열 사이의 서열의 비교 및 동일성 퍼센트의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 두 아미노산 서열들 사이의 동일성 퍼센트는 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, 문헌[Needleman and Wunsch((1970) J. Mol. Biol. 48:444-453)]의 알고리즘을 이용하여 결정되며, 이는 GCG 소프트웨어 패키지(www.gcg.com에서 이용가능함)의 GAP 프로그램 내에 포함된 것이다. 또 다른 바람직한 실시 형태에서, 두 뉴클레오타이드 서열들 사이의 동일성 퍼센트는 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램(www.gcg.com에서 이용가능함)을 사용하여 결정된다. 특히 바람직한 파라미터 세트(및 달리 명시되지 않는 한 사용되어야 하는 것)는 12의 갭 페널티, 4의 갭 확장 페널티, 및 5의 프레임시프트 갭 페널티를 갖는 Blossum 62 스코어링 매트릭스이다.
두 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 동일성 퍼센트는 PAM120 가중 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티를 사용하여, ALIGN 프로그램(버전 2.0) 내에 포함된 문헌[E. Meyers and W. Miller((1989) CABIOS, 4:11-17)]의 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다.
본원에 기술된 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어 다른 패밀리의 구성원 또는 관련 서열을 식별하기 위해 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한 "쿼리 서열"로서 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌[Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 이용하여 수행될 수 있다. 본 발명의 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 워드길이 = 12를 이용하여 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행할 수 있다. 본 발명의 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드길이 = 3을 이용하여 BLAST 단백질 검색을 수행할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, 문헌[Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기술된 바와 같이 Gapped BLAST를 이용할 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터가 사용될 수 있다. www.ncbi.nlm.nih.gov 참조.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물" 또는 "제약 조성물"은 본 발명의 화합물과 적어도 하나의(선택적으로 하나 초과의) 다른 제약상 허용가능한 화학 성분, 예컨대 담체, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁제, 증점제, 및/또는 부형제의 혼합물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "광학 이성질체" 또는 "입체이성질체"는 주어진 본 발명의 화합물에 대해 존재할 수 있는 다양한 입체 이성질체 배열 중 임의의 배열을 지칭하며, 기하 이성질체를 포함한다. 탄소 원자의 키랄 중심에 치환체가 부착될 수 있음이 이해된다. 용어 "키랄"은 거울상 파트너 상에서의 비중첩성(non-superimposability)의 특성을 갖는 분자를 지칭하며, 한편 용어 "비키랄(achiral)"은 거울상 파트너 상에 중첩가능한 분자를 지칭한다. 따라서, 본 발명은 화합물의 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 또는 라세미체를 포함한다. "거울상 이성질체"는 서로 중첩되지 않는 거울상인 한 쌍의 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상 이성질체의 1:1 혼합물은 "라세미" 혼합물이다. 이 용어는 적절한 경우 라세미 혼합물을 나타내는 데 사용된다. "부분입체 이성질체"는 적어도 2개의 비대칭 원자를 갖지만, 서로 거울상인 것이 아닌 입체이성질체이다. 절대 입체화학은 Cahn-lngold-Prelog R-S 시스템에 따라 특정된다. 화합물이 순수한 거울상 이성질체인 경우, 각각의 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S 중 어느 하나로 특정될 수 있다. 절대 배열이 알려지지 않은 분해 화합물은 나트륨 D 라인의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향(우선 또는 좌선)에 따라 (+) 또는 (-)로 표기될 수 있다. 본원에 기술된 특정 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심 또는 축을 포함하므로, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로 정의될 수 있는 다른 입체 이성질체 형태를 발생시킬 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 당업자에게 알려진 바와 같은 모든 용매, 분산 매체, 코팅, 계면활성제, 산화방지제, 방부제(예를 들어, 항세균제, 항진균제), 등장제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정제, 결합제, 부형제, 붕해제, 활택제, 감미제, 착향제, 염료 등 및 이들의 조합을 포함한다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 임의의 통상적인 담체가 활성 성분과 불상용성인 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 방해하지 않으며 투여 대상체에게 그다지 자극을 유발하지 않는 염을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 포유동물 및 비포유동물을 포함한다. 포유동물의 예는 인간, 침팬지, 유인원, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 토끼, 개, 고양이, 래트트, 마우스, 기니피크 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 비포유동물의 예는 조류, 어류 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 흔히, 대상체는 인간이다.
"이러한 치료를 필요로 하는 대상체"라는 용어는 이러한 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로, 또는 삶의 질에 있어서 이익을 얻게 될 대상체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애를 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 일 실시 형태에서, 질환 또는 장애를 개선하는 것(즉, 질환 또는 이의 임상 증상 중 적어도 하나의 발현을 늦추거나 저지하거나 감소시키는 것)을 지칭한다. 또 다른 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자가 식별하지 못할 수도 있는 것을 비롯하여 적어도 하나의 신체 파라미터를 완화시키거나 개선시키는 것을 지칭한다. 또 다른 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 물리적으로(예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리적으로(예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 이들 둘 모두로 질환 또는 장애를 조절하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애를 "예방하다", "예방하는" 또는 "예방"이라는 용어는 질환 또는 장애의 예방적 처치; 또는 질환 또는 장애의 발병 또는 진행의 지연을 지칭한다.
용어 "치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 용량"은 상호교환적으로 원하는 결과(즉, 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 증상의 개선, 증상 또는 병태의 완화, 질환 진행의 지연, 종양 크기 감소, 종양 성장 억제, 전이 방지, 바이러스, 박테리아, 진균 또는 기생충 감염의 억제 또는 방지)를 일으키는 데 충분한 양을 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 치료적 유효량은 바람직하지 않은 부작용을 유도 또는 야기하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 치료적 유효량은 부작용을 유도하거나 야기하지만 환자의 상태를 고려하여 의료 제공자가 허용할 수 있는 것만이다. 치료적 유효량은, 먼저 낮은 용량을 투여한 후, 원하는 효과가 달성될 때까지 그 용량을 점증적으로 증가시켜 결정할 수 있다. 본 발명의 분자의 "예방적 유효 용량" 또는 "예방적 유효량"은 암과 관련된 증상을 비롯한 질환 증상의 발병을 예방할 수 있다. 본 발명의 분자의 "치료적 유효 용량" 또는 "치료적 유효량"은 암과 관련된 증상을 비롯한 질환 증상의 중증도를 감소시킬 수 있다.
본원에 제공된 화합물 명칭은 ChemBioDraw Ultra 버전 14.0을 사용하여 얻어졌다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 맥락에서(특히 청구범위의 맥락에서) 사용된 단수 형태 및 유사한 용어는 본원에서 달리 명시되지 않는 한 또는 맥락에 의해 명백히 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에 제공된 모든 화학식은 또한 화합물의 비표지 형태와, 동위원소 표지된 형태를 나타내고자 한다. 동위원소 표지 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는 본원에 제공된 화학식으로 표시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 포함될 수 있는 동위원소는, 예를 들어, 수소의 동위원소를 포함한다.
링커-약물 그룹
본 발명의 링커-약물 그룹은 하기 화학식 I의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이다:
[화학식 I]
Figure pct00044
여기서,
R1은 반응기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00045
Figure pct00046
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결된다.
본 발명의 링커-약물 그룹의 특정 양태 및 예는 하기 열거된 실시 형태 목록에 제공된다. 각각의 실시 형태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시 형태를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
실시 형태 1. 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은 반응기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00047
Figure pct00048
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 2. 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은 반응기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
Figure pct00049
기는
Figure pct00050
로부터 선택되는 것으로서,
Figure pct00051
의 *는 약물 모이어티의 N 또는 O에 대한 부착점을 나타내고,
Figure pct00052
의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00053
Figure pct00054
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 3. 하기 화학식 II의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
[화학식 II]
Figure pct00055
여기서,
R1은 반응기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00056
Figure pct00057
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결된다.
실시 형태 4. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00058
, -ONH2, -NH2,
Figure pct00059
Figure pct00060
, -N3,
Figure pct00061
, -SH, -SR3, -SSR4, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I,
Figure pct00062
, -C(O)NHNH2,
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
이며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**;
*-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**;
*-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00067
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되며;
R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이며;
각각의 R5는 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 R7은 H, C1- 6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1- 4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1- 4알킬로부터 독립적으로 선택되며;
X1은
Figure pct00068
이며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00069
Figure pct00070
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00071
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
(i) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** , -NH-, 또는 -CH2N(Rb)C(=O)CH2-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내거나; 또는
(ii) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**,
-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*, 또는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*이고, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 5. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00072
, -ONH2,
Figure pct00073
또는
Figure pct00074
이며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00075
Figure pct00076
및
Figure pct00077
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00078
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00079
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00080
Figure pct00081
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 6. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 5 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00082
이며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00083
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00084
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00085
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00086
Figure pct00087
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 5 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 7. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 6 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00088
이며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00089
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00090
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00091
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 6 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 8. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 7 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00092
이며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00093
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00094
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00095
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 7 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 9. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R1은 표 1 또는 표 2로부터 선택되는 반응기인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 10. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00096
, -ONH2, -NH2,
Figure pct00097
Figure pct00098
-N3,
Figure pct00099
, -SH, -SR3, -SSR4, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I,
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 11. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00104
, -ONH2, -NH2,
Figure pct00105
Figure pct00106
-N3,
Figure pct00107
, -SH, -SR3, -SSR4, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I,
Figure pct00108
, -C(O)NHNH2,
Figure pct00109
또는
Figure pct00110
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 12. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00111
, -ONH2,
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 13. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00115
, -ONH2,
Figure pct00116
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 14. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R1은
Figure pct00117
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 15. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R1은 -ONH2인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 16. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R1은
Figure pct00118
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 17. 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서,
R1은
Figure pct00119
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 9 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 18. 구조
Figure pct00120
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 19. 구조
Figure pct00121
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 20. 구조
Figure pct00122
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 21. 구조
Figure pct00123
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, 각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 22. 구조
Figure pct00124
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, 각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 23. 구조
Figure pct00125
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 24. 구조
Figure pct00126
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 25. 구조
Figure pct00127
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로서, Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 26. 구조
Figure pct00128
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 27. 구조
Figure pct00129
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 28. 구조
Figure pct00130
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 29. 구조
Figure pct00131
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 30. 구조
Figure pct00132
를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 31. 본원에 포함된 표 4A~4C 중 어느 하나의 화합물의 구조를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
실시 형태 32. 하기 화학식 V의 구조를 갖는 화학식 I의 링커-약물 그룹의 링커:
[화학식 V]
Figure pct00133
여기서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00134
Figure pct00135
, **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이다.
실시 형태 33. 실시 형태 32에 있어서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00136
Figure pct00137
, **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티인, 링커.
실시 형태 34. 실시 형태 32 또는 33에 있어서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
Figure pct00138
기는
Figure pct00139
로부터 선택되는 것으로서,
Figure pct00140
의 *는 약물 모이어티의 N 또는 O에 대한 부착점을 나타내고,
Figure pct00141
의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00142
Figure pct00143
, **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티인, 링커.
실시 형태 35. 실시 형태 32 내지 34 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00144
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되며;
X1은
Figure pct00145
이며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00146
Figure pct00147
, **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00148
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
(i) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-**, -NH-, 또는 -CH2N(Rb)C(=O)CH2-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내거나; 또는
(ii) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*, 또는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*이고, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 링커.
실시 형태 36. 실시 형태 32 내지 35 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00149
,
Figure pct00150
및
Figure pct00151
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00152
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00153
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00154
Figure pct00155
, **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내는, 링커.
실시 형태 37. 실시 형태 32 내지 36 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00156
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00157
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00158
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, **-OC(=O)-,
Figure pct00159
Figure pct00160
, **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내는, 링커.
실시 형태 38. 실시 형태 32 내지 37 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00161
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00162
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00163
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 **-OC(=O)-로서, A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내는, 링커.
실시 형태 39. 실시 형태 32 내지 38 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00164
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00165
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00166
기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 **-OC(=O)-로서, A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내는, 링커.
실시 형태 40. 하기 화학식 VI의 구조를 갖는 구조를 갖는 화학식 V의 링커:
[화학식 VI]
Figure pct00167
여기서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00168
Figure pct00169
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
L3은 스페이서 모이어티이다.
실시 형태 41. 실시 형태 40에 있어서,
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00170
Figure pct00171
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
L3은 스페이서 모이어티인, 링커.
실시 형태 42. 실시 형태 40 또는 41에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00172
기로 치환됨), 또는 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되며;
X1은
Figure pct00173
이며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00174
Figure pct00175
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
L3은 구조
Figure pct00176
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
(i) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** , -NH-, 또는 -CH2N(Rb)C(=O)CH2-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내거나; 또는
(ii) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**,
-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*,
***-C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*, 또는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*이고, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 링커.
실시 형태 43. 실시 형태 40 내지 42 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00177
,
Figure pct00178
및
Figure pct00179
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00180
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00181
기로 치환됨), 또는 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00182
Figure pct00183
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는, 링커.
실시 형태 44. 실시 형태 40 내지 43 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00184
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00185
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00186
기로 치환됨), 또는 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00187
Figure pct00188
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는, 링커.
실시 형태 45. 실시 형태 40 내지 44 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00189
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00190
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00191
기로 치환됨), 또는 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 -OC(=O)-인, 링커.
실시 형태 46. 실시 형태 40 내지 45 중 어느 하나에 있어서,
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00192
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00193
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00194
기로 치환됨), 또는 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 -OC(=O)-인, 링커.
실시 형태 47. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00195
를 갖는 링커로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 링커.
실시 형태 48. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00196
를 갖는 링커로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 링커.
실시 형태 49. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00197
를 갖는 링커로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 링커.
실시 형태 50. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00198
를 갖는 링커로서,
각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택되는, 링커.
실시 형태 51. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00199
를 갖는 링커로서,
각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택되는, 링커.
실시 형태 52. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00200
를 갖는 링커로서,
Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 링커.
실시 형태 53. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00201
를 갖는 링커로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 링커.
실시 형태 54. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00202
를 갖는 링커로서,
Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH인, 링커.
실시 형태 55. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 다음의 구조를 갖는, 링커:
Figure pct00203
.
실시 형태 56. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 다음의 구조를 갖는, 링커:
Figure pct00204
.
실시 형태 57. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 다음의 구조를 갖는, 링커:
Figure pct00205
.
실시 형태 58. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 다음의 구조를 갖는, 링커:
Figure pct00206
.
실시 형태 59. 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 구조
Figure pct00207
.
예시의 목적으로, 본원에 나타낸 일반 반응식은 본 발명의 화합물 및 주요 중간체를 합성하기 위한 잠재적 경로를 제공한다. 개별 반응 단계에 대한 더 상세한 설명은 하기 실시예 섹션을 참조한다. 특정 출발 물질 및 시약이 반응식에 표시되고 이하 논의되지만, 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공하기 위해 다른 출발 물질 및 시약으로 쉽게 대체할 수 있다. 또한, 하기 방법에 의해 제조된 많은 화합물은 당업자에게 잘 알려진 통상적인 화학을 사용하여 본 개시내용에 비추어 추가로 변형될 수 있다.
예로서, 화학식 II의 화합물의 일반적인 합성이 하기 반응식 1에 예시되어 있다.
[반응식 1]
Figure pct00208
본 발명의 항체 약물 콘쥬게이트
본 발명은 하나 이상의 친수성 모이어티를 포함하는 링커를 포함하는, 본원에서 면역콘쥬게이트로도 지칭되는 항체 약물 콘쥬게이트를 제공한다.
본 발명의 항체 약물 콘쥬게이트는 하기 화학식 III의 구조를 갖는다:
[화학식 III]
Figure pct00209
여기서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은 커플링 기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00210
Figure pct00211
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
본 발명의 항체 약물 콘쥬게이트의 특정한 양태 및 예가 하기 열거된 실시 형태 목록에 제공된다. 각각의 실시 형태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시 형태를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
실시 형태 60. 화학식 III의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은 커플링 기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00212
Figure pct00213
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 면역콘쥬게이트.
실시 형태 61. 화학식 III 또는 실시 형태 60의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은 커플링 기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
Figure pct00214
기는
Figure pct00215
로부터 선택되는 것으로서,
Figure pct00216
의 *는 약물 모이어티의 N 또는 O에 대한 부착점을 나타내고,
Figure pct00217
의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 친수성 모이어티이며;
L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00218
Figure pct00219
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 면역콘쥬게이트.
실시 형태 62. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 61 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, 하기 화학식 IV의 구조를 갖는, 면역콘쥬게이트:
[화학식 IV]
Figure pct00220
여기서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은 커플링 기이며;
L1은 가교 스페이서이며;
Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
R2는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00221
Figure pct00222
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 스페이서 모이어티이며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16이다.
실시 형태 63. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 62 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은
Figure pct00223
Figure pct00224
, -S-, -C(=O)-, -ON=***, -NHC(=O)CH2-***, -S(=O)2CH2CH2-***, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-***, -NHS(=O)2CH2CH2-***, -NHC(=O)CH2CH2-***, -CH2NHCH2CH2-***, -NHCH2CH2-***,
Figure pct00225
Figure pct00226
Figure pct00227
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00228
기로 치환됨), 및 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되며;
R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이며;
각각의 R5는 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 R7은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되며;
X1은
Figure pct00229
이며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00230
Figure pct00231
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00232
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
(i) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**,
-NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** , -NH-, 또는 -CH2N(Rb)C(=O)CH2-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내거나; 또는
(ii) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*, 또는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*이고, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 62 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 64. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은
Figure pct00233
Figure pct00234
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00235
,
Figure pct00236
및
Figure pct00237
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00238
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00239
기로 치환됨), 및 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00240
Figure pct00241
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 65. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 64 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은
Figure pct00242
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00243
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00244
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00245
기로 치환됨), 및 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합, -OC(=O)-*,
Figure pct00246
Figure pct00247
, -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 64 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 66. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 65 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은
Figure pct00248
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00249
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00250
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고 X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00251
기로 치환됨), 및 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 65 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 67. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 66 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
R100은
Figure pct00252
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내며;
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R100에 대한 부착점을 나타내며;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
Lp는
Figure pct00253
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
L3은 구조
Figure pct00254
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**로서, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00255
기로 치환됨), 및 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 66 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 68. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 62 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, R100은 커플링 기인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 62 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 69. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R100은
Figure pct00256
Figure pct00257
, -S-, -C(=O)-, -ON=***, -NHC(=O)CH2-***, -S(=O)2CH2CH2-***, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-***, -NHS(=O)2CH2CH2-***, -NHC(=O)CH2CH2-***, -CH2NHCH2CH2-***, -NHCH2CH2-***,
Figure pct00258
Figure pct00259
Figure pct00260
Figure pct00261
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 70. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R100은
Figure pct00262
Figure pct00263
, -S-, -C(=O)-, -ON=***, -NHC(=O)CH2-***, -S(=O)2CH2CH2-***, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2-***, -NHS(=O)2CH2CH2-***, -NHC(=O)CH2CH2-***, -CH2NHCH2CH2-***, -NHCH2CH2-***,
Figure pct00264
Figure pct00265
Figure pct00266
, 또는
Figure pct00267
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 71. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R100은
Figure pct00268
Figure pct00269
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 72. 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R100은
Figure pct00270
Figure pct00271
로서, R100의 ***는 Ab에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 63 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 73. 구조
Figure pct00272
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 74. 구조
Figure pct00273
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 75. 구조
Figure pct00274
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 76. 구조
Figure pct00275
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택되며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 77. 구조
Figure pct00276
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택되며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 78. 구조
Figure pct00277
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 79. 구조
Figure pct00278
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 80. 구조
Figure pct00279
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서,
Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH이며, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 81. 구조
Figure pct00280
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 82. 구조
Figure pct00281
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 83. 구조
Figure pct00282
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 84. 구조
Figure pct00283
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 85. 구조
Figure pct00284
를 갖는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트로서, y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
본 발명의 링커-약물 그룹, 링커 및 항체 약물 콘쥬게이트의 특정한 양태 및 예가 하기 추가의 열거된 실시 형태의 목록에 제공된다. 각각의 실시 형태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시 형태를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
실시 형태 86.
G는
Figure pct00285
로서, G의 *는 L2에 대한 부착점을 나타내고, G의 **는 L3에 대한 부착점을 나타내고, G의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 2 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 39 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 61 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 87.
G는
Figure pct00286
로서, G의 *는 L2에 대한 부착점을 나타내고, G의 **는 L3에 대한 부착점을 나타내고, G의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 2 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 39 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 61 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 88.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 89.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 90.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; 또는 *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 91.
L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-** 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 92. L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 93. L1은 *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 94. L1은 *-C(=O)(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 95. L1은 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 존재하는 경우 R1에 대한 부착점을 나타내거나 또는 L1의 **는 존재하는 경우 R100에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트.
실시 형태 96. Lp는 2가 펩티드 스페이서, 예를 들어, 효소적으로 절단가능한 스페이서인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 97. Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 98. Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기, 예를 들어 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 99. Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 100.
Lp는
Figure pct00287
Figure pct00288
및
Figure pct00289
로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 II의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 I의 G에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 101.
Lp는
Figure pct00290
로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 II의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 I의 G에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 102.
Lp는
Figure pct00291
로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 II의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 I의 G에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 103.
Lp는
Figure pct00292
로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 II의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 I의 G에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 104.
Lp는
Figure pct00293
로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 II의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 I의 G에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 105.
Lp는
Figure pct00294
로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고, Lp의 **는 화학식 II의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내거나 또는 Lp의 **는 화학식 I의 G에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 95 중 어느 하나의 것.
실시 형태 106. L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 105 중 어느 하나의 것.
실시 형태 107. L2는 결합 또는 메틸렌인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 105 중 어느 하나의 것.
실시 형태 108. L2는 결합인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 105 중 어느 하나의 것.
실시 형태 109. L2는 메틸렌인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 105 중 어느 하나의 것.
실시 형태 110. A는 결합, -OC(=O)-,
Figure pct00295
-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 109 중 어느 하나의 것.
실시 형태 111. A는 결합 또는 -OC(=O)인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 109 중 어느 하나의 것.
실시 형태 112. A는 결합인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 109 중 어느 하나의 것.
실시 형태 113. A는 -OC(=O)인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 109 중 어느 하나의 것.
실시 형태 114.
A는
Figure pct00296
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 109 중 어느 하나의 것.
실시 형태 115.
A는 -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 109 중 어느 하나의 것.
실시 형태 116. L3은 스페이서 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 117.
L3은 구조
Figure pct00297
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
-NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**,-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 118.
L3은 구조
Figure pct00298
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
-NHC(=O)CH2NH-**, NHC(=O)CH2NHC(=O)-**,-CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합이며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 119.
L3은 구조
Figure pct00299
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 트리아졸릴이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 120.
L3은 구조
Figure pct00300
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 121.
L3은 구조
Figure pct00301
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 122.
L3은 구조
Figure pct00302
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 결합이며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 123.
L3은 구조
Figure pct00303
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 트리아졸릴이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 124.
L3은 구조
Figure pct00304
를 갖는 스페이서 모이어티로서,
W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 115 중 어느 하나의 것.
실시 형태 125. R2는 친수성 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 126. R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, C2-C6알킬(1 내지 3개의
Figure pct00305
기로 치환됨), 및 폴리사르코신으로부터 선택되는 친수성 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 127. R2는 당인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 128. R2는 올리고당인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 129. R2는 폴리펩티드인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 130. R2는 폴리알킬렌 글리콜인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 131. R2는 구조 -(O(CH2)m)tR’를 갖는 폴리알킬렌 글리콜로서, R’는 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이고, m은 1~10이고, t는 4~40인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 132. R2는 구조 -((CH2)mO)tR’’-를 갖는 폴리알킬렌 글리콜로서, R’’는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이고, m은 1~10이고, t는 4~40인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 133. R2는 폴리알킬렌 글리콜인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 134. R2는 구조 -(OCH2CH2)tR’를 갖는 폴리에틸렌 글리콜로서, R’는 OH, OCH3 또는 OCH2CH2C(=O)OH이고, t는 4~40인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 135. R2는 구조 -(CH2CH2O)tR’’-를 갖는 폴리에틸렌 글리콜로서, R’’는 H, CH3 또는 CH2CH2C(=O)OH이고, t는 4~40인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 136.
R2는
Figure pct00306
Figure pct00307
(여기서, n은 1 내지 6의 정수임),
Figure pct00308
(여기서, R2의 * 또는 물결선은 X 또는 L3에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 137.
R2는
Figure pct00309
Figure pct00310
로서, R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 138.
R2는
Figure pct00311
로서, R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 139.
R2는
Figure pct00312
로서, R2의 *는 X 또는 L3에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 124 중 어느 하나의 것.
실시 형태 140. 각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 139 중 어느 하나의 것.
실시 형태 141. 각각의 R3은 H인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 139 중 어느 하나의 것
실시 형태 142. 각각의 R3은 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 139 중 어느 하나의 것.
실시 형태 143.
X1은
Figure pct00313
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 142 중 어느 하나의 것.
실시 형태 144.
X1은
Figure pct00314
인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 142 중 어느 하나의 것.
실시 형태 145.
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 144 중 어느 하나의 것.
실시 형태 146.
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 144 중 어느 하나의 것.
실시 형태 147.
각각의 m은 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 144 중 어느 하나의 것.
실시 형태 148.
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 147 중 어느 하나의 것.
실시 형태 149.
각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 147 중 어느 하나의 것.
실시 형태 150.
각각의 n은 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 147 중 어느 하나의 것.
실시 형태 151.
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 150 중 어느 하나의 것.
실시 형태 152.
각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 150 중 어느 하나의 것.
실시 형태 153.
각각의 t는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 150 중 어느 하나의 것.
실시 형태 154.
각각의 t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18로부터 독립적으로 선택되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 화학식 V의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 및 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 150 중 어느 하나의 것.
실시 형태 155. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 156. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 157. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 158. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 159. y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 160. y는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 161. y는 1, 2, 3 또는 4인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 162. y는 1 또는 2인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 163. y는 2인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 164. y는 4인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 165. y는 6인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 166. y는 8인, 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 154 중 어느 하나의 것.
실시 형태 167. D는 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 168.
D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 169. D는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 170.
D는 N 또는 O를 포함하는 소수성 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는(예를 들어, D는 A에 연결되는 경우 4차 암모늄일 수 있는), 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 171. D는 1.5 내지 7의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 172. D는 1.5 내지 6의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 173. D는 1.5 내지 5의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 174. D는 1.5 내지 4의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 175. D는 1.5 내지 3의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 176. D는 1.5 내지 2의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 177. D는 2 내지 7의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 178. D는 2 내지 6의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 179. D는 2 내지 5의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 180. D는 2 내지 4의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 181. D는 2 내지 3의 SlogP 값을 갖는 소수성 약물 모이어티인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 182. D는 아우리스타틴인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 183. D는 다음의 것인, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것:
Figure pct00315
실시 형태 184. D는 MCL-1 억제제가 아닌, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 185. D는 BCL-2 억제제가 아닌, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 186. D는 BCL-XL 억제제가 아닌, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 187. 화학식 I에서의 링커(즉, D를 포함하지 않는 부분) 또는 화학식 III에서의 링커(즉, Ab와 D를 연결하는 부분)는 본원에 개시된, 예를 들어 표 4A~4C의 L2 내지 L208, 예컨대
Figure pct00316
Figure pct00317
로부터 선택되는 링커로서, 물결선은 D에 대한 부착점을 나타내는, 화학식 I의 화합물 또는 실시 형태 1 내지 17 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 화학식 III의 면역콘쥬게이트 또는 실시 형태 60 내지 72 중 어느 하나의 면역콘쥬게이트, 또는 실시 형태 86 내지 166 중 어느 하나의 것.
실시 형태 188. 본원에 기술된 L2 내지 L208로부터 선택되는 임의의 링커로부터 유도된, 화학식 V의 구조를 갖는 화학식 I의 링커-약물 그룹의 링커 또는 실시 형태 32 내지 46 중 어느 하나의 링커, 예를 들어
Figure pct00318
(L2로부터 유도됨),
Figure pct00319
(L71로부터 유도됨),
Figure pct00320
(L179로부터 유도됨), 및
Figure pct00321
(L208)로부터 유도됨)(여기서, 물결선은 D에 대한 부착점을 나타내며, *는 항체 또는 이의 단편에 대한 부착점을 나타냄).
콘쥬게이션 방법
본 발명은 본 발명의 링커-약물 그룹을 항체 또는 항체 단편에 콘쥬게이션시켜 하나 이상의 친수성 모이어티를 갖는 링커를 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트를 생성하는 다양한 방법을 제공한다.
화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 일반적인 반응식이 하기 반응식 2에 예시되어 있다:
[반응식 2]
Figure pct00322
여기서, RG2는 상응하는 R100 기를 형성하도록 양립가능 R1 기와 반응하는 반응기이다(이러한 기들은 표 1에 예시됨). D, R1, L1, Lp, Ab, y 및 R100은 본원에 정의된 바와 같다.
반응식 3은 화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 일반적인 접근법을 추가로 예시하며, 여기서, 항체는 R100 기(본원에 정의된 바와 같음)를 통하여 링커-약물 그룹을 항체에 공유적으로 부착하도록 R1 기(본원에 정의된 바와 같음)와 반응하는 반응기(RG2)를 포함한다. 단지 예시 목적으로, 반응식 3은 4개의 RG2 기를 갖는 항체를 보여준다.
[반응식 3]
Figure pct00323
일 양태에서, 링커-약물 그룹은 항체의 변형 시스테인 잔기를 통하여 항체에 콘쥬게이션된다(예를 들어 WO2014/124316 참조). 반응식 4는 화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시하며, 여기서, 항체의 조작 시스테인 잔기로부터 생성된 유리 티올 기는 R100 기(여기서, R100은 숙신이미드 고리임)를 통하여 링커-약물 그룹을 항체에 공유적으로 부착하도록 R1 기(여기서, R1은 말레이미드임)와 반응한다. 단지 예시 목적으로, 반응식 4는 4개의 유리 티올 기를 갖는 항체를 보여준다.
[반응식 4]
Figure pct00324
또 다른 양태에서, 링커-약물 그룹은 항체의 라이신 잔기를 통하여 항체에 콘쥬게이션된다. 반응식 5는 화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시하며, 여기서, 항체의 라이신 잔기로부터의 유리 아민 기는 R100 기(여기서, R100은 아미드임)를 통하여 링커-약물 그룹을 항체에 공유적으로 부착하도록 R1 기(여기서, R1은 NHS 에스테르, 펜타플루오로페닐 또는 테트라플루오로페닐임)와 반응한다. 단지 예시 목적으로, 반응식 5는 4개의 아민 기를 갖는 항체를 보여준다.
[반응식 5]
Figure pct00325
또 다른 양태에서, 링커-약물 그룹은 항체의 자연 발생 디술피드 가교체에서 옥심 가교체의 형성을 통하여 항체에 콘쥬게이션된다. 옥심 가교체는 처음에 항체의 사슬간 디술피드 가교체의 환원에 의해 케톤 가교체를 생성하고 1,3-디할로아세톤(예를 들어 1,3-디클로로아세톤)을 사용하여 재가교함으로써 형성된다. 히드록실 아민을 포함하는 링커-약물 그룹과의 후속 반응은 링커-약물 그룹을 항체에 부착시키는 옥심 결합(옥심 가교체)을 형성한다(예를 들어 WO2014/083505 참조). 반응식 6은 화학식 III의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시한다.
[반응식 6]
Figure pct00326
화학식 IV의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 일반적인 반응식이 하기 반응식 7에 예시되어 있다:
[반응식 7]
Figure pct00327
여기서, RG2는 상응하는 R100 기를 형성하도록 양립가능 R1 기와 반응하는 반응기이다(이러한 기들은 표 1에 예시됨). D, R1, L1, Lp, Ab, y 및 R100은 본원에 정의된 바와 같다.
반응식 8은 화학식 IV의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 일반적인 접근법을 추가로 예시하며, 여기서, 항체는 R100 기(본원에 정의된 바와 같음)를 통하여 링커-약물 그룹을 항체에 공유적으로 부착하도록 R1 기(본원에 정의된 바와 같음)와 반응하는 반응기(RG2)를 포함한다. 단지 예시 목적으로, 반응식 8은 4개의 RG2 기를 갖는 항체를 보여준다.
[반응식 8]
Figure pct00328
일 양태에서, 링커-약물 그룹은 항체의 변형 시스테인 잔기를 통하여 항체에 콘쥬게이션된다(예를 들어 WO2014/124316 참조). 반응식 9는 화학식 IV의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시하며, 여기서, 항체의 조작 시스테인 잔기로부터 생성된 유리 티올 기는 R100 기(여기서, R100은 숙신이미드 고리임)를 통하여 링커-약물 그룹을 항체에 공유적으로 부착하도록 R1 기(여기서, R1은 말레이미드임)와 반응한다. 단지 예시 목적으로, 반응식 9는 4개의 유리 티올 기를 갖는 항체를 보여준다.
[반응식 9]
Figure pct00329
또 다른 양태에서, 링커-약물 그룹은 항체의 라이신 잔기를 통하여 항체에 콘쥬게이션된다. 반응식 10은 화학식 IV의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시하며, 여기서, 항체의 라이신 잔기로부터의 유리 아민 기는 R100 기(여기서, R100은 아미드임)를 통하여 링커-약물 그룹을 항체에 공유적으로 부착하도록 R1 기(여기서, R1은 NHS 에스테르, 펜타플루오로페닐 또는 테트라플루오로페닐임)와 반응한다. 단지 예시 목적으로, 반응식 10은 4개의 아민 기를 갖는 항체를 보여준다.
[반응식 10]
Figure pct00330
또 다른 양태에서, 링커-약물 그룹은 항체의 자연 발생 디술피드 가교체에서 옥심 가교체의 형성을 통하여 항체에 콘쥬게이션된다. 옥심 가교체는 처음에 항체의 사슬간 디술피드 가교체의 환원에 의해 케톤 가교체를 생성하고 1,3-디할로아세톤(예를 들어 1,3-디클로로아세톤)을 사용하여 재가교함으로써 형성된다. 히드록실 아민을 포함하는 링커-약물 그룹과의 후속 반응은 링커-약물 그룹을 항체에 부착시키는 옥심 결합(옥심 가교체)을 형성한다(예를 들어 WO2014/083505 참조). 반응식 11은 화학식 IV의 항체 약물 콘쥬게이트의 형성을 위한 이러한 접근법을 예시한다.
[반응식 11]
Figure pct00331
본 발명의 항체 콘쥬게이트를 평가하기 위한 분석 방법론의 일부 양태에 대한 프로토콜이 또한 제공된다. 이러한 분석 방법론 및 결과는 콘쥬게이트가 유리한 특성, 예를 들어 제조하기 더 쉽도록, 환자에 투여하기 더 쉽도록, 더 효과적이도록, 및/또는 잠재적으로 환자에 더 안전하도록 하는 특성을 갖는다는 점을 입증할 수 있다. 한 예로는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의한 분자 크기의 결정이 있으며, 여기서 샘플 내의 원하는 항체 종의 양은 샘플에 존재하는 고분자량 오염물(예를 들어, 이량체, 다량체, 또는 응집된 항체) 또는 저분자량 오염물(예를 들어, 항체 단편, 분해 산물, 또는 개별 항체 쇄)의 양과 비교하여 결정된다. 일반적으로, 항체 샘플의 다른 특성, 예컨대 비제한적인 예로서 제거율, 면역원성 및 독성에 대한 예를 들어 응집체의 영향으로 인해 더 많은 양의 단량체, 및 더 적은 양의 예를 들어 응집된 항체를 갖는 것이 바람직하다. 추가의 예로는 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC)에 의한 소수성의 결정이 있으며, 여기서 샘플의 소수성은 알려진 특성의 표준 항체 세트와 비교하여 평가된다. 일반적으로, 항체 샘플의 다른 특성, 예컨대 비제한적인 예로서 응집, 시간 경과에 따른 응집, 표면에 대한 부착, 간독성, 제거율 및 약동학적 노출에 대한 소수성의 영향으로 인해 낮은 소수성을 갖는 것이 바람직하다. 문헌[Damle, N.K., Nat Biotechnol. 2008; 26(8):884-885]; 문헌[Singh, S.K., Pharm Res. 2015; 32(11):3541-71]을 참조한다. 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정할 때, 더 높은 소수성 지수 점수(즉, HIC 컬럼으로부터의 더 빠른 용출)는 콘쥬게이트의 더 낮은 소수성을 반영한다. 하기 실시예에 나타낸 바와 같이, 테스트된 항체 콘쥬게이트 대부분은 0.8보다 큰 소수성 지수를 나타냈다. 일부 실시 형태에서, 소수성 상호작용 크로마토그래피로 측정시 0.8 이상의 소수성 지수를 갖는 항체 콘쥬게이트가 제공된다.
항체
본 발명은 항원, 예를 들어 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공한다. 본 발명의 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 실시예에 기술된 바와 같이 단리된 인간 단클론 항체 또는 이의 단편을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
특정 실시 형태에서 본 발명은 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 상기 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 7, 27, 47, 67, 87, 107, 또는 154의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함한다. 특정 실시 형태에서 본 발명은 또한 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 상기 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 하기 표 3에 열거된 VH CDR 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 본 발명은 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 상기 항체는 하기 표 3에 열거된 VH CDR 중 임의의 것의 아미노산 서열을 갖는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 VH CDR을 포함한다(또는 대안적으로, 이로 이루어진다).
본 발명은 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 상기 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 17, 37, 57, 77, 97, 117, 또는 166의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 본 발명은 또한 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 상기 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 하기 표 3에 열거된 VL CDR 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR을 포함한다. 특히, 본 발명은 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 상기 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 하기 표 3에 열거된 VL CDR 중 임의의 것의 아미노산 서열을 갖는 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 VL CDR을 포함한다(또는 대안적으로, 이로 이루어진다).
본 발명의 다른 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은, 돌연변이되었으나, 표 3에 기술된 서열에 표시된 CDR 영역과 적어도 60, 70, 80, 90 또는 95%의 CDR 영역 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 표 3에 기술된 서열에 표시된 CDR 영역과 비교할 때 CDR 영역에 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 아미노산이 돌연변이된, 돌연변이 아미노산 서열들을 포함한다.
본 발명은 또한 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄 및 경쇄 둘 다의 불변 영역에 변형을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 여기서, 특정 아미노산 잔기는 시스테인으로 돌연변이되었고, 이는 본원에서 "CysMab" 또는 "Cys" 항체로도 지칭된다. 상기 논의된 바와 같이, 약물 모이어티는 약물 모이어티의 수를 제어하면서("DAR 제어") 부위 특이적으로 항체 상의 시스테인 잔기에 콘쥬게이션될 수 있다. 면역콘쥬게이션을 부위 특이적으로 제어하기 위한 항체에 대한 시스테인 변형은 예를 들어 그 전체가 본원에 포함된 WO2014/124316에 개시되어 있다.
일부 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 위치 152 및 375에서 변형되었으며, 여기서, 상기 위치는 EU 넘버링 시스템에 따라 정의된다. 즉, 변형은 E152C 및 S375C이다. 다른 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 위치 360 및 카파 경쇄의 위치 107에서 변형되었으며, 여기서, 상기 위치는 EU 넘버링 시스템에 따라 정의된다. 즉, 변형은 K360C 및 K107C이다. 이들 돌연변이의 위치는 예를 들어 표 3의 서열 번호 148~150에서 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄 불변 영역과 관련하여 예시되어 있다. 표 3 전체에 걸쳐, 야생형 서열로부터의 시스테인 변형은 밑줄로 표시되어 있다.
본 발명은 또한 P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체의 VH, VL, 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 코딩하는 핵산 서열을 제공한다. 이러한 핵산 서열은 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화될 수 있다.
[표 3]
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본 발명의 다른 항체는, 아미노산 또는 아미노산을 코딩하는 핵산이 돌연변이되었으나, 표 3에 기술된 서열과 적어도 60, 70, 80, 90 또는 95%의 동일성을 갖는 것들을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표 3에 기술된 서열에 도시된 가변 영역과 비교할 때 가변 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 돌연변이되었지만 표 3에 열거된 항체들과 실질적으로 동일한 치료 활성을 보유한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 면역콘쥬게이트에 유용한 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 변형되거나 조작된 항체, 예컨대 약물 모이어티에 대한 콘쥬게이션 부위로서 하나 이상의 시스테인 잔기를 도입하도록 변형된 항체를 포함한다(문헌[Junutula JR, et al.: Nat Biotechnol 2008, 26:925-932]). 일 실시 형태에서, 본 발명은 본원에 기술된 위치에서 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하는 변형된 항체 또는 이의 항체 단편을 제공한다. 시스테인 치환 부위는 항체의 불변 영역이므로, 다양한 항체에 적용될 수 있고, 이들 부위는 안정적이고 균일한 콘쥬게이트를 제공하도록 선택된다. 변형된 항체 또는 단편은 2개 이상의 시스테인 치환을 가질 수 있고, 이들 치환은 본원에 기술된 다른 항체 변형 및 콘쥬게이션 방법과 조합하여 사용될 수 있다. 시스테인을 항체의 특정 위치에 삽입하는 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Lyons et al, (1990) Protein Eng., 3:703-708], WO 2011/005481, WO2014/124316을 참조한다. 특정 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 위치 117, 119, 121, 124, 139, 152, 153, 155, 157, 164, 169, 171, 174, 189, 205, 207, 246, 258, 269, 274, 286, 288, 290, 292, 293, 320, 322, 326, 333, 334, 335, 337, 344, 355, 360, 375, 382, 390, 392, 398, 400, 및 422로부터 선택되는 불변 영역에서 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 일부 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 중쇄의 위치 107, 108, 109, 114, 129, 142, 143, 145, 152, 154, 156, 159, 161, 165, 168, 169, 170, 182, 183, 197, 199, 및 203으로부터 선택되는 불변 영역에서 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 인간 카파 경쇄이다. 특정 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에서 2개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 이 조합은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 또는 항체 경쇄의 위치 107에서의 치환을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 특정 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에서 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 치환은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 항체 경쇄의 위치 107, 항체 경쇄의 위치 165, 또는 항체 경쇄의 위치 159이고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 인간 카파쇄이다. 특정 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 그의 불변 영역에서 2개의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 그 조합은 항체 중쇄의 위치 375 및 항체 중쇄의 위치 152에서 시스테인을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 특정 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 중쇄의 위치 360에서 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 다른 특정 실시 형태에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 경쇄의 위치 107에서 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 카파쇄이다. 이들 위치의 예시적인 실시 형태가 서열 번호 148, 149, 및 150에 개시된 불변 영역 서열에 예시되어 있다. 이들 위치의 특정 실시 형태가 서열 번호 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 및 147에 항-P-카드헤린 항체 서열에 대하여 개시되어 있다.
이들 각각의 항체는 P-카드헤린에 결합할 수 있으므로, VH, VL, 전장 경쇄, 및 전장 중쇄 서열(아미노산 서열 및 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열)은 "혼합 및 매칭"되어, 본 발명의 다른 P-카드헤린-결합 항체를 생성할 수 있다. 이러한 "혼합 및 매칭된" P-카드헤린-결합 항체는 당업계에 공지된 결합 분석법(예컨대 ELISA, 및 실시예 섹선에 기술된 다른 분석법)을 사용하여 테스트될 수 있다. 이들 사슬이 혼합 및 매칭될 때, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍으로부터의 전장 중쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 중쇄 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 교체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍으로부터의 전장 경쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 경쇄 서열로 대체되어야 한다. 따라서, 일 양태에서, 본 발명은 서열 번호 7, 27, 47, 67, 87, 및 107로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 17, 37, 57, 77, 97, 및 117로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 영역을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공하며, 여기서, 항체는 P-카드헤린에 특이적으로 결합한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 (i) 서열 번호 9, 29, 49, 69, 89, 및 109로 이루어진 군으로부터 선택되는 포유동물 발현 시스템의 세포에서의 발현에 최적화된 아미노산 서열을 포함하는 전장 중쇄; 및 서열 번호 19, 39, 59, 79, 99, 및 119로 이루어진 군으로부터 선택되는 포유동물의 세포에서의 발현에 최적화된 아미노산 서열을 포함하는 전장 경쇄를 갖는 단리된 단클론 항체; 또는 (ii) 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 표 3에 기술된 바와 같은 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합을 포함하는 P-카드헤린-결합 항체를 포함하는 항체 콘쥬게이트를 제공한다. 항체의 VH CDR1의 아미노산 서열은 서열 번호 1, 21, 41, 61, 81, 및 101에 나타나 있다. 항체의 VH CDR2의 아미노산 서열은 서열 번호 2, 22, 42, 62, 82, 및 102에 나타나 있다. 항체의 VH CDR3의 아미노산 서열은 서열 번호 3, 23, 43, 63, 83, 및 103에 나타나 있다. 항체의 VL CDR1의 아미노산 서열은 서열 번호 11, 31, 51, 71, 91, 및 111에 나타나 있다. 항체의 VL CDR2의 아미노산 서열은 서열 번호 12, 32, 52, 72, 92, 및 112에 나타나 있다. 항체의 VL CDR3의 아미노산 서열은 서열 번호 13, 33, 53, 73, 93, 및 113에 나타나 있다.
이들 항체가 각각 P-카드헤린에 결합할 수 있고, 항원-결합 특이성이 주로 CDR1, 2 및 3 영역에 의해 제공됨을 고려하면, VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 "혼합 및 매칭"될 수 있다(즉, 상이한 항체들로부터의 CDR들은 혼합 및 매칭될 수 있음). 이러한 "혼합 및 매칭된" P-카드헤린-결합 항체는 당업계에 공지된 결합 분석법 및 실시예에 기술된 분석법(예컨대 ELISA)을 사용하여 테스트될 수 있다. VH CDR 서열이 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VH 서열로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 마찬가지로, VL CDR 서열이 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VL 서열로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 본 발명의 단클론 항체에 대해 하나 이상의 VH 및/또는 VL CDR 영역 서열을 본원에 예시된 CDR 서열로부터의 구조적으로 유사한 서열로 치환함으로써 새로운 VH 및 VL 서열이 생성될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.
따라서, 본 발명은 서열 번호 1, 21, 41, 61, 81, 및 101로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1; 서열 번호 2, 22, 42, 62, 82, 및 102로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2; 서열 번호 3, 23, 43, 63, 83, 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; 서열 번호 11, 31, 51, 71, 91, 및 111로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1; 서열 번호 12, 32, 52, 72, 92, 및 112로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 13, 33, 53, 73, 93, 및 113으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 단리된 단클론 항체 또는 이의 항원 결합 영역을 제공하며, 항체는 P-카드헤린에 특이적으로 결합한다.
특정 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 1의 중쇄 CDR1, 서열 번호 2의 중쇄 CDR2; 서열 번호 3의 중쇄 CDR3; 서열 번호 11의 경쇄 CDR1; 서열 번호 12의 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 13의 경쇄 CDR3을 포함한다.
또 다른 특정 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 21의 중쇄 CDR1, 서열 번호 22의 중쇄 CDR2; 서열 번호 23의 중쇄 CDR3; 서열 번호 31의 경쇄 CDR1; 서열 번호 32의 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 33의 경쇄 CDR3을 포함한다.
또 다른 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 41의 중쇄 CDR1, 서열 번호 42의 중쇄 CDR2; 서열 번호 43의 중쇄 CDR3; 서열 번호 51의 경쇄 CDR1; 서열 번호 52의 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 53의 경쇄 CDR3을 포함한다.
추가 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 61의 중쇄 CDR1, 서열 번호 62의 중쇄 CDR2; 서열 번호 63의 중쇄 CDR3; 서열 번호 71의 경쇄 CDR1; 서열 번호 72의 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 73의 경쇄 CDR3을 포함한다.
또 다른 특정 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 81의 중쇄 CDR1, 서열 번호 82의 중쇄 CDR2; 서열 번호 83의 중쇄 CDR3; 서열 번호 91의 경쇄 CDR1; 서열 번호 92의 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 93의 경쇄 CDR3을 포함한다.
추가의 특정 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 서열 번호 101의 중쇄 CDR1, 서열 번호 102의 중쇄 CDR2; 서열 번호 103의 중쇄 CDR3; 서열 번호 111의 경쇄 CDR1; 서열 번호 112의 경쇄 CDR2; 및 서열 번호 113의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 실시 형태에서, P-카드헤린에 특이적으로 결합하는 항체는 표 3에 기술된 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)이다.
2. Fc 영역의 프레임워크의 추가 변경
본 발명의 면역콘쥬게이트는, 예를 들어 항체의 특성을 개선시키기 위해 VH 및/또는 VL 내에 프레임워크 잔기에 대한 변형을 추가로 포함하는 변형된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 한 접근법은 1개 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식세포 계열 서열로 "역-돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 거친 항체는, 항체가 유래된 생식세포 계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을, 항체가 유래된 생식세포 계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열들을 이들의 생식세포 계열 배열로 복귀시키기 위해, 체세포 돌연변이는 예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발에 의해 생식세포 계열 서열로 "역-돌연변이화될" 수 있다. 이러한 "역-돌연변이된" 항체도 본 발명에 포함시키고자 한다.
또 다른 유형의 프레임워크 변형은, 프레임워크 영역 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜, T-세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 것을 포함한다. 이 접근법은 "탈면역화"라고도 하며, Carr 등의 미국 특허 공개 제20030153043호에 더 상세히 기술되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형 외에도 또는 대안적으로, 본 발명의 항체는 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합, 및/또는 항원 의존성 세포독성(ADCC)을 변경시키기 위해 Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 항체는 화학적으로 변형될 수 있거나(예컨대 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음), 항체의 글리코실화를 변경시키기 위해, 즉, 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경시키기 위해 변형될 수 있다. 이들 실시 형태는 각각 아래에 더 상세히 기술된다.
일 실시 형태에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수가 변경(예를 들어 증가 또는 감소)되도록 변형된다. 이 접근법은 Bodmer 등에 의한 미국 특허 제5,677,425호에 더 기술되어 있다. CH1의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는 예를 들어, 경쇄 및 중쇄의 어셈블리를 용이하게 하거나 항체의 안정성을 증가시키거나 감소시키도록 변경된다.
또 다른 실시 형태에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물학적 반감기를 감소시키도록 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 하나 이상의 아미노산 돌연변이는, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 나빠진 스타필로코커스 단백질 A(SpA) 결합성을 갖도록, Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역 내로 도입된다. 이 접근법은 Ward 등의 미국 특허 제6,165,745호에 더 상세히 기술되어 있다.
또 다른 실시 형태에서, Fc 영역은 항체의 이펙터 기능을 변경시키기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 변경된다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산은, 항체가 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화도를 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력은 보유하도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이펙터 리간드(이에 대한 친화도가 변경됨)는 예를 들어, Fc 수용체 또는 보체의 C1 구성성분일 수 있다. 이 접근법은 Winter 등의 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 더 상세히 기술되어 있다.
다른 실시 형태에서, 아미노산 잔기로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산은 항체가 C1q 결합을 변경시키고/시키거나 보체 의존성 세포독성(CDC)을 감소시키거나 없애도록 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이 접근법은 Idusogie 등의 미국 특허 6,194,551호에 기술되어 있다.
다른 실시 형태에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경됨으로써 보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이 접근법은, 예를 들어 Bodmer 등의 PCT 공개 WO 94/29351에 기술되어 있다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 하나 이상의 아미노산은 하나 이상의 동종이형 아미노산 잔기로 대체된다. 동종이형 아미노산 잔기는 또한 문헌[Jefferis et al., MAbs. 1:332-338 (2009)]에 기술된 바와 같은 카파 이소타입의 경쇄의 불변 영역뿐만 아니라 IgG1, IgG2 및 IgG3 하위클래스의 중쇄의 불변 영역도 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.
또 다른 실시 형태에서, Fc 영역은 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써, 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 증가시키고/증가시키거나 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 변형된다. 이 접근법은 Presta의 PCT 공개 WO 00/42072호에 기술되어 있다. 또한, FcγRl, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 있어서 인간 IgG1 상의 결합 부위가 맵핑되었고 개선된 결합성을 갖는 변이체가 기술되었다(문헌[Shields et al., J. Biol. Chem. 276:6591-6604, 2001] 참조).
또 다른 실시 형태에서, 항체의 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 비글리코실화된 항체가 제조될 수 있다(즉, 항체에 글리코실화가 결여됨). 글리코실화는, 예를 들어 "항원"에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경함으로써 이루어질 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위의 제거를 초래하여, 이로써 해당 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 비글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 이 접근법은, 예를 들어 Co 등의 미국 특허 제5,714,350호 및 제6,350,861호에 기술되어 있다.
추가로 또는 대안적으로, 변경된 유형의 글리코실화를 갖는 항체, 예컨대 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화(hypofucosylated) 항체 또는 증가된 양분성(bisecting) GlcNac 구조를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 증명되었다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어, 변경된 글리코실화 기구를 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변경된 글리코실화 기구를 갖는 세포는 당업계에 기재되어 있고, 본 발명의 재조합 항체를 발현시켜 이로써 변경된 글리코실화를 갖는 항체를 생성하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, Hang 등의 유럽 특허 제1,176,195호에는 세포주에서 발현된 항체가 저푸코실화를 나타내도록, 푸코실 트랜스퍼라제를 코딩하는 FUT8 유전자가 기능적으로 파괴된 세포주가 기술하고 있다. Presta의 PCT 공개 WO 03/035835는 푸코스를 Asn(297)-연결된 탄수화물에 부착시키는 능력이 감소되어, 해당 숙주 세포에서 발현되는 항체의 저푸코실화를 초래하는 변이형 CHO 세포주, Lecl3 세포를 기술하고 있다(또한 문헌[Shields et al., (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740] 참조). Umana 등의 PCT 공개 WO 99/54342에는 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라아제(예컨대 베타(1,4)-N 아세틸글루코사미닐트랜스퍼라아제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주(따라서 조작된 세포주에서 발현된 항체는 증가된 양분성 GlcNac 구조를 나타내며 이는 항체의 증가된 ADCC 활성을 초래함)가 기술되어 있다(또한 문헌[Umana et al., Nat. Biotech. 17:176-180, 1999] 참조).
또 다른 실시 형태에서, 항체는 이의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근법들이 가능하다. 예를 들어, 하나 이상의 하기 돌연변이가 도입될 수 있다: Ward의 미국 특허 제6,277,375호에 기술된 바와 같은, T252L, T254S, T256F. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는, Presta 등의 미국 특허 제5,869,046호 및 제6,121,022호에 기술된 바와 같이 IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프들로부터 취한 구제(salvage) 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
3. 항체의 생성
항체 및 이의 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 당업계에 알려진 임의의 수단(재조합 발현, 화학적 합성, 및 항체 사량체의 효소적 분해를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 의해 제조될 수 있는 반면, 전장 단클론 항체는, 예를 들어 하이브리도마 또는 재조합적 생성에 의해 얻을 수 있다. 재조합 발현은 당업계에 알려진 임의의 적절한 숙주 세포, 예를 들어 포유동물 숙주 세포, 박테리아 숙주 세포, 효모 숙주 세포, 곤충 숙주 세포 등에서 일어날 수 있다.
본원에 기술된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 본원에 기술된 바와 같은 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 절편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 또한 본 발명에 제공된다. 일부 양태에서, 중쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 8, 28, 48, 68, 88, 108, 및 151로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 경쇄 가변 영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 18, 38, 58, 78, 98, 118, 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 중쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 10, 30, 50, 70, 90, 110, 또는 152의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 20, 40, 60, 80, 100, 120, 또는 154의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 항체의 가변 영역 서열만을 코딩할 수 있다. 이들은 또한 항체의 가변 영역 및 불변 영역 둘 다를 코딩할 수 있다. 일부 폴리뉴클레오티드 서열은 예시된 항-P-카드헤린 항체 중 하나의 중쇄 및 경쇄 모두의 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 코딩한다. 일부 다른 폴리뉴클레오티드는 항체들 중 하나의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역과 각각 실질적으로 동일한 2개의 폴리펩티드 절편을 코딩한다.
폴리뉴클레오티드 서열은 드노보(de novo) 고상 DNA 합성에 의해, 또는 항체 또는 이의 결합 단편을 코딩하는 기존의 서열(예컨대, 아래 실시예에 기술된 바와 같은 서열들)의 PCR 돌연변이 유발에 의해 제조될 수 있다. 핵산의 직접적인 화학적 합성은 당업계에 공지된 방법, 예컨대, 문헌[Narang et al., Meth. Enzymol. 68:90, 1979]의 포스포트리에스테르 방법; 문헌[Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109, 1979]의 포스포디에스테르 방법; 문헌[Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981]의 디에틸포스포르아미다이트 방법; 및 미국 특허 제4,458,066호의 고체 지지체 방법에 의해 달성될 수 있다. PCR에 의해 폴리뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하는 것은, 예를 들어, 문헌 [PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992]; [PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990]; [Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991]; 및 [Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991]에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
또한, 본원에 기술된 항체의 생산을 위한 발현 벡터 및 숙주 세포가 본 발명에서 제공된다. 항체 사슬 또는 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위해 다양한 발현 벡터들이 이용될 수 있다. 바이러스 기반 발현 벡터와 비바이러스 발현 벡터 둘 다가 포유동물 숙주 세포에서 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 비바이러스 벡터 및 시스템은 플라스미드, 에피솜 벡터(전형적으로는, 단백질 또는 RNA 발현을 위한 발현 카세트가 있음), 및 인간 인공 염색체(예를 들어, 문헌[Harrington et al., Nat Genet. 15:345, 1997] 참조)를 포함한다. 예를 들어, 포유동물(예를 들어, 인간) 세포에서의 항-P-카드헤린 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 발현에 유용한 비바이러스 벡터는 pThioHis A, B & C, pcDNATM3.1/His, pEBVHis A, B & C(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재), MPSV 벡터, 및 다른 단백질 발현을 위한, 당업계에 공지된 다수의 기타 벡터를 포함한다. 유용한 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노연관 바이러스, 헤르페스 바이러스를 기초로 한 벡터, SV40, 유두종 바이러스, HBP 엡스타인 바 바이러스, 백시나 바이러스 벡터 및 셈리키 포레스트 바이러스(SFV; Semliki Forest Virus)를 기초로 한 벡터를 포함한다. 문헌[Brent et al., 위 참조]; [Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995]; 및 [Rosenfeld et al., Cell 68:143, 1992] 참조.
발현 벡터의 선택은 벡터가 발현되는 의도된 숙주 세포에 따라 다르다. 일반적으로, 발현 벡터는 항-P-카드헤린 항체 쇄 또는 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 프로모터 및 기타 조절 서열(예를 들어, 인핸서)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 유도 조건인 경우를 제외하고는, 삽입된 서열의 발현을 방지하기 위해 유도성 프로모터가 사용된다. 유도성 프로모터는, 예를 들어 아라비노스, lacZ, 메탈로티오네인 프로모터 또는 열 충격 프로모터를 포함한다. 발현 산물이 숙주 세포에 의해 더 잘 관용되는 코딩 서열에 대해 집단을 편향시키지 않으면서, 형질전환된 유기체의 배양물을 비유도 조건 하에 확장시킬 수 있다. 프로모터 외에도, 항체 쇄 또는 단편의 효율적인 발현을 위한 다른 조절 요소가 또한 필요하거나 요구될 수 있다. 이러한 요소는 전형적으로 ATG 개시 코돈 및 인접한 리보솜 결합 부위 또는 기타 서열을 포함한다. 또한, 사용되는 세포 시스템에 적합한 인핸서를 포함하는 것에 의해 발현 효율을 증진시킬 수 있다(예를 들어, 문헌[Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994]; 및 문헌[Bittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987] 참조). 예를 들어, SV40 인핸서 또는 CMV 인핸서가 포유동물 숙주 세포에서의 발현을 증가시키기 위하여 사용될 수 있다.
발현 벡터는 삽입된 항체 서열에 의해 코딩된 폴리펩티드와 융합 단백질을 형성하기 위해 분비 신호 서열 위치를 또한 제공할 수 있다. 보다 종종, 삽입된 항체 서열은 벡터에 포함되기 이전에 신호 서열에 연결된다. 항-P-카드헤린 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 서열을 수용하는 데 사용되는 벡터는 또한, 때때로 불변 영역 또는 이의 일부를 코딩한다. 이러한 벡터는 가변 영역이 불변 영역과의 융합 단백질로서 발현되게 하고, 이에 의해 온전한 항체 또는 이의 단편을 생산할 수 있게 한다. 전형적으로, 이러한 불변 영역은 인간 불변 영역이다.
항체 사슬을 갖고 발현시키는 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 이. 콜라이는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 클로닝하고 발현시키는 데 유용한 하나의 원핵 숙주이다. 사용하기에 적절한 다른 미생물 숙주는 바실루스(bacillus), 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 다른 엔테로박테리아세아에(enterobacteriaceae), 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia) 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종을 포함한다. 이러한 원핵생물 숙주에서, 숙주 세포와 양립가능한 발현 제어 서열(예를 들어, 복제 기점)을 전형적으로 함유하는 발현 벡터를 또한 제조할 수 있다. 또한, 임의의 수의 다양한 주지된 프로모터, 예컨대 락토스 프로모터 시스템, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, 베타-락타마아제 프로모터 시스템, 또는 파지 람다로부터의 프로모터 시스템이 존재할 것이다. 프로모터는 전형적으로, 선택적으로 오퍼레이터 서열과 함께, 발현을 제어하고, 전사 및 번역을 개시하고 완료하기 위한 리보솜 결합 부위 서열 등을 가지고 있다. 다른 미생물, 예컨대 효모가 또한, 본 발명의 항체 폴리펩티드를 발현시키기 위해 이용될 수 있다. 바큘로바이러스 벡터와 조합된 곤충 세포를 또한 사용할 수 있다.
일부 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 항체 폴리펩티드를 발현시키고 생성하기 위해 포유동물 숙주 세포가 사용된다. 예를 들어, 이들은 내인성 면역글로불린 유전자를 발현하는 하이브리도마 세포주(예를 들어, 실시예에 기술된 바와 같은 골수종 하이브리도마 클론), 또는 외인성 발현 벡터를 보유하는 포유동물 세포주(예를 들어, 아래에 예시된 SP2/0 골수종 세포)일 수 있다. 이들은 임의의 정상적인 사멸성 또는 정상적 또는 비정상적인 불멸성 동물 또는 인간 세포를 포함한다. 예를 들어, CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, 형질변환된 B 세포 및 하이브리도마를 포함하여, 온전한 면역글로불린을 분비할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주들이 개발되어 왔다. 폴리펩티드를 발현시키기 위해 포유동물 조직 세포 배양을 사용하는 것은 예를 들어 문헌[Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987]에 일반적으로 논의되어 있다. 포유동물 숙주 세포용 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제 기점, 프로모터, 및 인핸서(예를 들어, 문헌[Queen et al., Immunol. Rev. 89:49-68, 1986] 참조), 및 필요한 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결인자 서열을 포함할 수 있다. 이러한 발현 벡터들은 보통 포유동물 유전자로부터 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터를 함유한다. 적합한 프로모터는 구성적, 세포 유형-특이적, 단계-특이적, 및/또는 조정 가능 또는 조절 가능한 프로모터일 수 있다. 유용한 프로모터는 메탈로티오네인 프로모터, 구성적 아데노바이러스 주요 후기 프로모터, 덱사메타손-유도성 MMTV 프로모터, SV40 프로모터, MRP polIII 프로모터, 구성적 MPSV 프로모터, 테트라사이클린-유도성 CMV 프로모터(예컨대 인간 극초기 CMV 프로모터), 구성적 CMV 프로모터, 및 당업계에 공지된 프로모터-인핸서 조합을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
관심 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 발현 벡터를 도입하는 방법은 세포 숙주의 유형에 따라 다르다. 예를 들어, 염화칼슘 형질감염이 원핵생물 세포에 통상적으로 사용되는 반면, 인산칼슘 처리 또는 전기천공은 다른 세포 숙주에 사용될 수 있다(일반적으로, 문헌[Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 -4, Cold Spring Harbor Press, NY 참조). 다른 방법은, 예를 들어 전기천공, 인산칼슘 처리, 리포솜-매개 형질전환, 주입 및 미세주입, 발리스틱(ballistic) 방법, 비로좀, 면역리포솜, 다가양이온:핵산 콘쥬게이트, 네이키드 DNA, 인공 비리온, 헤르페스 바이러스 구조 단백질 Vp22에 대한 융합(Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997), DNA의 작용제-개선된 흡수, 및 생체 외 형질도입을 포함한다. 재조합 단백질을 장기간 고수율로 제조하기 위해서는, 안정적인 발현이 흔히 요망될 것이다. 예를 들어, 항체 사슬 또는 결합 단편을 안정하게 발현하는 세포주는, 바이러스 복제 기원 또는 내인성 발현 요소 및 선별 마커 유전자를 함유하는 본 발명의 발현 벡터를 사용하여 제조될 수 있다. 벡터의 도입 후, 선별 배지로 전환하기 전에 세포를 강화 배지에서 1일 내지 2일 동안 성장시킬 수 있다. 선별 마커의 목적은 선택에 대한 저항성을 부여하는 것이며, 선별 마커의 존재는 선별 배지에서 도입 서열을 성공적으로 발현시키는 세포가 성장할 수 있게 한다. 안정적으로 형질감염된 저항성 세포는 세포 유형에 적합한 조직 배양 기술을 이용해 증식될 수 있다.
치료적 용도 및 치료 방법
제공되는 항체 콘쥬게이트는 다양한 용도(암의 치료를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 유용하다. 특정 실시 형태에서, 본원에 제공된 항체 콘쥬게이트는 종양 성장의 억제, 종양 부피의 감소, 분화 유도, 및/또는 종양의 종양원성의 감소에 유용하다. 사용 방법은 시험관 내, 생체 외, 또는 생체 내 방법일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 질환(예를 들어 암)의 치료, 예방, 또는 개선을 필요로 하는 대상체(예를 들어, 인간 환자)에게 본원에 기술된 임의의 항체 콘쥬게이트를 투여하여 대상체의 질환을 치료, 예방, 또는 개선하는 방법이 본원에 제공된다. 대상체(예를 들어, 인간 환자)의 질환을 치료 또는 예방하기 위한 본 발명의 항체 콘쥬게이트의 용도가 또한 제공된다. 대상체의 질환의 치료 또는 예방에서의 항체 콘쥬게이트의 용도가 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 대상체의 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 항체 콘쥬게이트가 제공된다. 특정 실시 형태에서, 항체 콘쥬게이트로 치료되는 질환은 암이다.
다른 양태에서, 본원에 기술된 면역콘쥬게이트는 고형 종양의 치료에 사용될 수 있다. 고형 종양의 예는 다양한 기관계의 악성 종양, 예를 들어, 육종, 선암종, 모세포종, 및 암종, 예컨대 간, 폐, 유방, 림프, 담관장관(예를 들어, 결장), 비뇨생식관(예를 들어, 신장, 요로상피 세포), 전립선, 및 인두에 영향을 미치는 것들을 포함한다. 선암은 대부분의 결장암, 직장암, 신장 세포 암종, 간암, 소세포 폐암, 폐의 비소세포 암종, 소장암 및 식도암과 같은 악성 종양을 포함한다. 일 실시 형태에서, 암은 흑색종, 예를 들어 진행된 병기의 흑색종이다. 치료될 수 있는 다른 암의 예는 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 결장직장암, 항문암, 복막암, 위장암 또는 위암, 식도암, 침샘암, 고환암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 음경 암종, 교모세포종, 신경모세포종, 자궁경부암, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 식도암, 소장암, 내분비계 암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함하는 만성 또는 급성 백혈병, 소아기 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추 신경계(CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관형성, 척추 축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 신경내분비 종양(유암종, 가스트린종 및 섬세포암 포함), 중피종, 신경초종(청각 신경종 포함), 수막종, 유표피암, 편평세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 암을 포함하는, 환경적으로 유발된 암, 및 상기 암들의 조합을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본원에 기술된 면역콘쥬게이트는 혈액암을 치료하는데 사용될 수 있다. 혈액암은 백혈병, 림프종 및 혈액, 골수 및 림프계에 영향을 미치는 악성 림프증식성 병태를 포함한다.
백혈병은 급성 백혈병 및 만성 백혈병으로 분류될 수 있다. 급성 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML) 및 급성 림프성 백혈병(ALL)으로 추가로 분류될 수 있다. 만성 백혈병은 만성 골수성 백혈병(CML) 및 만성 림프성 백혈병(CLL)을 포함한다. 다른 관련 병태는 골수성 혈액 세포의 비효과적인 생산(또는 이형성증) 및 AML로의 변환 위험에 의해 통합된 다양한 혈액 병태의 집합인 골수이형성 증후군(MDS, 이전에 "전백혈병"으로 공지됨)을 포함한다.
림프종은 림프구에서 발생한 혈액 세포 종양의 군이다. 예시적인 림프종은 비 호지킨 림프종 및 호지킨 림프종을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 암은, 예를 들어, 비제한적으로, 예컨대 B 세포 급성 림프구 백혈병("BALL"), T 세포 급성 림프구 백혈병("TALL"), 급성 림프구 백혈병("ALL")을 포함하는 급성 백혈병; 비제한적으로, 예컨대 만성 골수 백혈병(CML), 만성 림프성 백혈병(CLL)을 포함하는 하나 이상의 만성 백혈병; 비제한적으로, 예컨대 B 세포 전림프구 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 미만성 대형 B 세포 림프종, 소포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포- 또는 대세포-소포성 림프종, 악성 림프증식성 질환, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변역부 림프종, 다발성 골수종, 골수형성이상 및 골수형성이상 증후군, 비호지킨 림프종, 형질모세포 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하는 추가의 혈액암 또는 혈액 질환, 및 골수 혈액 세포의 비유효 생산(또는 형성이상)으로 통합되는 혈액 병태의 다양한 콜렉션인 "전백혈병" 등을 비제한적으로 포함하는 혈액암이다. 또한, 종양 항원 발현과 관련된 질환은, 예를 들어 본원에 기술된 바와 같은 종양 항원을 발현하는 비정형 및/또는 비-고전적 암, 악성 종양, 전암성 병태 또는 증식성 질환을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 전술한 암의 전이성 병변 또한 본 발명의 방법 및 조성물을 사용하여 치료 또는 예방될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 암은 항체 콘쥬게이트의 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체가 결합하는 표적 종양 항원을 발현하는 세포를 특징으로 한다. 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 면역콘쥬게이트는 종양 항원(예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 종양 항원)에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)을 포함할 수 있다. 이러한 종양 항원의 존재 또는 과발현을 검출하는 방법은 당업자에게 공지되어 있으며, 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 사용한 면역조직적합성(IHC) 분석, 종양 항원의 RNA 발현 수준 탐지 등과 같은 방법을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 종양 항원은 하기 표적 중 하나 이상으로부터 선택된다: 수용체 티로신-단백질 키나아제 ERBB2(Her2/neu); 수용체 티로신-단백질 키나아제 ERBB3(Her3); 수용체 티로신-단백질 키나아제 ERBB4(Her4); 표피 성장 인자 수용체(EGFR); E-카드헤린; P-카드혜린; 카드헤린 6; 카텝신 D; 에스트로겐 수용체; 프로게스테론 수용체; CA125; CA15-3; CA19-9; P-당단백질(CD243); CD2; CD19; CD20; CD22; CD24; CD27; CD30; CD37; CD38; CD40; CD44v6; CD45; CD47; CD52; CD56; CD70; CD71; CD79a; CD79b; CD72; CD97; CD179a; CD123; CD137; CD171; CS-1(CD2 서브세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319 및 19A24로도 지칭됨); C형 렉틴 유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECL1); 표피 성장 인자 수용체 변이체 III(EGFRvIII); 강글리오시드 G2(GD2); 강글리오시드 GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer); TNF 수용체 패밀리 구성원 B 세포 성숙(BCMA); Tn 항원((Tn Ag) 또는 (GalNAcα-Ser/Thr)); 전립선 특이적 막 항원(PSMA); 수용체 티로신 키나아제 유사 고아 수용체 1(ROR1); Fms 유사 티로신 키나아제 3(FLT3); 종양 연관 당단백질 72(TAG72); 암배아성 항원(CEA); 상피 세포 부착 분자(EPCAM); B7H3(CD276); KIT(CD117); 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 메소텔린; 인터루킨 11 수용체 알파(IL-11Ra); 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 프로테아제 세린 21(테스티신(Testisin) 또는 PRSS21); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); 루이스(Y) 항원; 혈소판 유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 단계 특이적 배아 항원-4(SSEA-4); 폴레이트 수용체 알파; 신경 세포 부착 분자(NCAM); 프로스타제(Prostase); 전립선 산 포스파타제(PAP); 돌연변이된 신장 인자 2(ELF2M); 에프린(Ephrin) B2; 섬유모세포 활성화 단백질 알파(FAP); 인슐린 유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체), 탄산 탈수효소 IX(CAIX); 프로테아좀(프로좀(Prosome), 마크로파인(Macropain)) 서브유닛, 베타형, 9(LMP2); 당단백질 100(gp100); 절단점 클러스터 영역(BCR) 및 아벨슨(Abelson) 뮤린 백혈병 바이러스 종양유전자 상동체 1(Ab1)로 이루어진 종양유전자 융합 단백질(bcr-ab1); 티로시나제; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 푸코실 GM1; 시알릴 루이스 부착 분자(sLe); 강글리오시드 GM3(aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer); 트랜스글루타미나제 5(TGS5); 고분자량 흑색종 연관 항원(HMWMAA); o-아세틸-GD2 강글리오시드(OAcGD2); 폴레이트 수용체 베타; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커 7 관련(TEM7R); 갑상선 자극 호르몬 수용체(TSHR); G 단백질 커플링된 수용체 클래스 C군 5, 구성원 D(GPRC5D); 염색체 X 오픈 리딩 프레임 61(CXORF61); 역형성 림프종 키나아제(ALK); 폴리시알산; 태반 특이적 1(PLAC1); 글로보H(globoH) 글리코세라미드의 육당류 부분(글로보H); 유선 분화 항원(NY-BR-1); 아드레날린수용체 베타 3(ADRB3); 패넥신(pannexin) 3(PANX3); G 단백질 커플링된 수용체 20(GPR20); 후각 수용체 51E2(OR51E2); TCR 감마 대안적 리딩 프레임 단백질(TARP); 윌름스 종양 단백질(WT1); 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-1a); 흑색종 연관 항원 1(MAGE-A1); 염색체 12p에 위치한 ETS 전위-변이체 유전자 6(ETV6-AML); 정자 단백질 17(SPA17); X 항원 패밀리, 구성원 1A(XAGE1); 안지오포이에틴 결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 흑색종 암 고환 항원-1(MAD-CT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); Fos 관련 항원 1; 종양 단백질 p53(p53); p53 돌연변이체; 프로스테인(prostein); 서바이빙(surviving); 텔로머라아제; 전립선 암종 종양 항원-1(PCTA-1 또는 갈렉틴(Galectin) 8); T 세포 1에 의해 인식되는 흑색종 항원(MelanA 또는 MART1); 래트 육종(Ras) 돌연변이체; 인간 텔로머라아제 역전사효소(hTERT); 육종 전위 절단점; 흑색종 아폽토시스 억제제(ML-IAP); ERG(막관통 프로테아제, 세린 2(TMPRSS2) ETS 융합 유전자); N-아세틸 글루코사미닐 트랜스퍼라아제 V(NA17); 쌍 형성된 박스 단백질 Pax-3(PAX3); 안드로겐 수용체; 사이클린 B1; v-myc 조류 골수구종증 바이러스 종양유전자 신경모세포종 유래 상동체(MYCN); Ras 상동체 패밀리 구성원 C(RhoC); 티로시나제 관련 단백질 2(TRP-2); 시토크롬 P450 1B1(CYP1B1); CCCTC 결합 인자(징크 핑거 단백질) 유사(BORIS 또는 각인된 부위의 조절원(Brother of the Regulator of Imprinted Sites)); T 세포 3에 의해 인식되는 편평 세포 암종 항원(SART3); 쌍 형성된 박스 단백질 Pax-5(PAX5); 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES1); 림프구 특이적 단백질 티로신 키나아제(LCK); A 키나제 앵커 단백질 4(AKAP-4); 활막 육종, X 절단점 2(SSX2); 진행성 당화 최종산물에 대한 수용체(RAGE-1); 신장 편재 1(RU1); 신장 편재 2(RU2); 레구마인(legumain); 인간 유두종 바이러스 E6(HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 장 카복실 에스테라아제; 돌연변이된 열 충격 단백질 70-2(mut hsp70-2); 백혈구 연관 면역글로불린 유사 수용체 1(LAIR1); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 서브패밀리 A 구성원 2(LILRA2); CD300 분자 유사 패밀리 구성원 f(CD300LF); C형 렉틴 도메인 패밀리 12 구성원 A(CLEC12A); 골수 기질 세포 항원 2(BST2); EGF 유사 모듈 함유 뮤신 유사 호르몬 수용체 유사 2(EMR2); 림프구 항원 75(LY75); 글리피칸(Glypican)-3(GPC3); 및 면역글로불린 람다-유사 폴리펩티드 1(IGLL1); CD184; LGR5; AXL; RON; CD352/SLAMf6; KAAG-1; 5T4; c-Met; ITGA3; 엔도시알린(Endosialin); CD166; SAIL(c15orf54); NaPi2b; DLL3; CD133; FZD7; 디스어드헤린(Dysadherin); PD-L1; SLITRK6; Nectin-4; FGFR2; FGFR3; FGFR4; CEACAM1; CEACAM5; CD74; STEAP-1; PMEL17; Muc16; FcRH5; TENB2; Ly6E; ETBR; 158P1D7; 161P2F10B; 191p4d12; 162p1e6; Notch3; PTK7; 및 EFNA4.
종양 지지 항원
일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 면역콘쥬게이트는 종양 지지 항원(예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 종양 지지 항원)에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)을 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 종양 지지 항원은 기질 세포, 항원 제시 세포, 또는 골수 유래 억제 세포(MDSC) 상에 존재하는 항원이다. 기질 세포는 미세환경에서 세포 분열을 촉진하도록 성장 인자를 분비할 수 있다. MDSC 세포는 T 세포의 증식 및 활성화를 억제할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기질 세포 항원은 다음 중 하나 이상으로부터 선택된다: 골수 기질 세포 항원 2(BST2), 섬유모세포 활성화 단백질(FAP) 및 테나신. 실시 형태에서, MDSC 항원은 다음 중 하나 이상으로부터 선택된다: CD33, CD11b, C14, CD15, 및 CD66b. 따라서, 일부 실시 형태에서, 종양 지지 항원은 다음 중 하나 이상으로부터 선택된다: 골수 기질 세포 항원 2(BST2), 섬유모세포 활성화 단백질(FAP) 또는 테나신, CD33, CD11b, C14, CD15, 및 CD66b.
본원에 기술된 항체 콘쥬게이트는 다양한 비악성 질환 또는 장애, 예컨대 염증성 장 질환(IBD), 위장 궤양, 메네트리어병, B형 간염, C형 간염, 분비 선종 또는 단백질 소실 증후군, 신장 장애, 혈관형성 장애, 안 질환, 예컨대 노화 관련 황반변성, 추정 안 히스토플라즈마증 증후군, 또는 노화 관련 황반변성, 뼈 관련 병리, 예컨대 골관절염, 구루병 및 골다공증, 전신 과다점성 증후군, 오슬러 웨버-랑뒤 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 또는 화상, 외상, 방사선, 뇌졸중, 저산소증 또는 허혈에 따른 부종, 당뇨병성 신장 질환, 파제트병, 광노화(예를 들어, 인간 피부의 자외선에 의해 발생), 양성 전립선 비대, 아데노바이러스, 한타바이러스, 보렐리아 부르그도페리, 예르시니아 종, 및 보르데텔라 백일해로부터 선택되는 미생물 병원체를 포함한 특정 미생물 감염, 혈소판 응집으로 인한 혈전, 생식 병태, 예컨대 자궁내막증, 난소 과잉자극 증후군, 자간전증, 기능부전성 자궁 출혈, 또는 불규칙 과다월경, 급성 및 만성 신장질환(증식성 사구체신염 포함), 비대성 반흔 형성, 내독소 쇼크 및 진균증, 가족성 선종성 폴립증, 골수이형성 증후군, 무형성 빈혈, 허혈 손상, 폐, 신장, 또는 간의 섬유증, 비후성 유문협착증, 요로 폐색 증후군, 건선성 관절염을 치료하는 데 사용될 수 있는 것으로 또한 예상된다.
이러한 항체 콘쥬게이트의 투여 방법은 비경구(예를 들어, 정맥내) 투여, 예를 들어 일정 기간에 걸친 볼루스 또는 연속 주입으로서의 주사, 경구 투여, 근육내 투여, 종양내 투여, 근육내 투여, 복강내 투여, 뇌척수내 투여, 피하 투여, 관절내 투여, 활액내 투여, 림프절에의 주사, 또는 척추강내 투여를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
질환의 치료를 위해, 본 발명의 항체 콘쥬게이트의 적절한 투여량은 다양한 인자, 예컨대 치료할 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 질환의 반응성, 이전의 요법, 환자의 임상 병력 등에 의존한다. 항체 콘쥬게이트는 1회, 또는 수 일에서 수 개월까지 지속되는 일련의 치료에 걸쳐, 또는 치료가 이루어지거나 질환 상태의 감소(예를 들어, 종양 크기의 감소)가 달성될 때까지 투여될 수 있다. 최적의 투여 스케줄은 환자의 신체 내 약물 축적을 측정하여 계산될 수 있고, 특정 항체 콘쥬게이트의 상대적 효능에 따라 달라질 것이다. 일부 실시 형태에서, 투여량은 체중 kg당 0.01 mg 내지 20 mg(예를 들어, 0.01 mg, 0.02 mg, 0.03 mg, 0.04 mg, 0.05 mg, 0.06 mg, 0.07 mg, 0.08 mg, 0.09 mg, 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg, 또는 20 mg)이고, 매일, 매주, 매월, 또는 매년 1회 이상 투여될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 항체 콘쥬게이트는 2주에 1회 또는 3주에 1회 투여된다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 항체 콘쥬게이트는 한 번만 투여된다. 치료하는 의사는 체액 또는 체조직 내 약물의 측정된 체류 시간 및 농도에 기초하여 투여의 반복률을 추정할 수 있다.
제약 조성물
본원에 기술된 하나 이상의 항체 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물 또는 살균 조성물을 제조하기 위해, 제공된 항체 콘쥬게이트는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 혼합될 수 있다.
치료제 및 진단제의 제형은 생리적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와, 예를 들어 동결건조 분말, 슬러리, 수성 용액, 로션, 또는 현탁액의 형태로 혼합하여 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hardman et al., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y., 2001]; 문헌[Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y., 2000]; 문헌[Avis, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY, 1993]; 문헌[Lieberman, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY, 1990]; 문헌[Lieberman, et al. (eds.) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY, 1990]; 문헌[Weiner and Kotkoskie, Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 2000] 참조).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물은 동결건조 제제이다. 특정 실시 형태에서, 항체 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물은 항체 콘쥬게이트, 히스티딘, 수크로스 및 폴리소르베이트 20을 함유하는 바이알 내의 동결건조물이다. 특정 실시 형태에서, 항체 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물은 항체 콘쥬게이트, 숙신산나트륨 및 폴리소르베이트 20을 함유하는 바이알 내의 동결건조물이다. 특정 실시 형태에서, 항체 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물은 항체 콘쥬게이트, 트레할로스, 시트레이트 및 폴리소르베이트 8을 함유하는 바이알 내의 동결건조물이다. 동결건조물은 주사를 위해, 예를 들어 물, 염수로 재구성될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 용액은 약 5.0의 pH에서 항체 콘쥬게이트, 히스티딘, 수크로스, 및 폴리소르베이트 20를 포함한다. 다른 특정 실시 형태에서, 용액은 항체 콘쥬게이트, 숙신산나트륨, 및 폴리소르베이트 20을 포함한다. 다른 특정 실시 형태에서, 용액은 약 6.6의 pH에서 항체 콘쥬게이트, 트레할로스 탈수화물, 시트레이트 탈수화물, 시트르산, 및 폴리소르베이트 8을 포함한다. 정맥내 투여를 위해, 수득된 용액은 통상적으로 담체 용액 중에 추가로 희석될 것이다.
치료제에 대한 투여 요법의 선택은 개체의 혈청 또는 조직 전환율, 증상의 수준, 개체의 면역원성, 및 생물학적 매트릭스 내의 표적 세포의 접근성을 포함하는 여러 인자에 따라 다르다. 특정 실시 형태에서, 투여 요법은 허용가능한 부작용 수준에 맞게 환자에게 전달되는 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 전달되는 생물제제의 양은 부분적으로 특정 개체 및 치료되는 병태의 중증도에 따라 다르다. 항체, 사이토카인 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 데 있어서 지침을 이용할 수 있다(예를 들어, 문헌[Wawrzynczak, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK, 1996]; 문헌[Kresina (ed.), Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1991]; 문헌[Bach (ed.), Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1993]; 문헌[Baert et al., New Engl. J. Med. 348:601-608, 2003]; 문헌[Milgrom et al., New Engl. J. Med. 341:1966-1973, 1999]; 문헌[Slamon et al., New Engl. J. Med. 344:783-792, 2001]; 문헌[Beniaminovitz et al., New Engl. J. Med. 342:613-619, 2000]; 문헌[Ghosh et al., New Engl. J. Med. 348:24-32, 2003]; 문헌[Lipsky et al., New Engl. J. Med. 343:1594-1602, 2000] 참조).
적절한 용량의 결정은 예를 들어 치료에 영향을 미치는 것으로 당업계에 알려지거나 의심되는, 또는 치료에 영향을 미칠 것으로 예상되는 파라미터 또는 인자를 이용해 임상의에 의해 이루어진다. 일반적으로, 용량은 최적 용량보다 다소 적은 양으로 시작하여, 이후 임의의 부정적 부작용에 대해 원하는 또는 최적의 효과가 달성될 때까지 조금씩 증가된다. 중요한 진단 조치는 예를 들어 염증의 증상 또는 생성된 염증성 사이토카인의 수준의 조치를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물 내 유효 성분의 실제 투여량 수준은, 환자에게 독성이 없으면서 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 유효 성분의 양이 되도록 달라질 수 있다. 선택된 투여량 수준은 사용되는 본 발명의 특정 조성물, 또는 이의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 지속기간, 사용되는 특정 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 전반적 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에 알려진 유사 인자를 포함한 다양한 약동학적 인자에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 항체 콘쥬게이트를 포함하는 조성물은 연속 주입에 의해, 또는 예를 들어 1일, 1주의 간격으로, 또는 1주에 1~7회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 또는 8주에 1회 투여함으로써 제공될 수 있다. 투여는 정맥내로, 피하로, 국소적으로, 경구로, 비강으로, 직장으로, 근육내로, 뇌내로, 또는 흡입에 의해 제공될 수 있다. 구체적인 용량 프로토콜은 바람직하지 않은 심각한 부작용을 피하는 최대 용량 또는 투여 빈도를 포함하는 것이다.
본 발명의 항체 콘쥬게이트의 경우, 환자에게 투여되는 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg일 수 있다. 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.001 mg/kg 내지 50 ㎎/kg, 0.005 mg/kg 내지 20 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 20 mg/kg, 0.02 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.05 내지 5 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 8 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 2 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg일 수 있다. 항체 콘쥬게이트의 투여량은 환자의 체중(㎏)에 투여될 용량(mg/kg)을 곱하여 계산될 수 있다.
본 발명의 항체 콘쥬게이트의 투여는 반복될 수 있고, 투여 간격은 1일 미만, 적어도 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 적어도 6개월일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체 콘쥬게이트는 매주 2회, 매주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 또는 덜 빈번하게 투여된다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 항체 콘쥬게이트의 투여는 2주마다 반복된다.
특정 환자에 대한 유효량은, 치료되는 병태, 환자의 전반적 건강, 투여의 방법, 경로 및 용량, 및 부작용의 심각성과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다(예를 들어, 문헌[Maynard et al., A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, Fla., 1996]; 문헌[Dent, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK, 2001] 참조).
투여 경로는, 예를 들어 국소 또는 피부 적용, 피하, 정맥내, 복강내, 뇌내, 근육내, 안내, 동맥내, 뇌척수내, 병변내 투여에 의한 주사 또는 주입, 또는 지효성 방출 시스템 또는 이식에 의한 것일 수 있다(예를 들어, 문헌[Sidman et al., Biopolymers 22:547-556, 1983]; 문헌[Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277, 1981]; 문헌[Langer, Chem. Tech. 12:98-105, 1982]; 문헌[Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692, 1985]; 문헌[Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030-4034, 1980]; 미국 특허 제6,350,466호 및 제6,316,024호 참조). 필요한 경우에, 조성물은 또한, 주사 부위에서의 통증을 경감하기 위해 가용화제 또는 국부 마취제, 예컨대 리도카인, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 또한, 예를 들어 흡입기 또는 분무기, 및 에어로졸화제 함유 제형의 사용에 의해 폐 투여가 이용될 수도 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호, 및 제4,880,078호; 그리고 PCT 공개 번호 WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, 및 WO 99/66903(이들 각각은 전체가 본 설명에 참조로 포함됨)를 참조한다.
이러한 추가 성분의 예는 당업계에 잘 알려져 있다.
제2 치료제, 예를 들어 사이토카인, 스테로이드, 화학요법제, 항생제 또는 방사선을 이용한 공동 투여 또는 치료 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Hardman et al.,eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10.sup.th ed., McGraw-Hill, New York, N.Y.]; 문헌[Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA]; 문헌[Chabner and Longo(eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., Pa.] 참조). 유효량의 치료제는 증상을 적어도 10%; 적어도 20%; 적어도 약 30%; 적어도 40% 또는 적어도 50%만큼 감소시킬 수 있다.
본 발명의 항체 콘쥬게이트와 조합하여 투여될 수 있는 추가 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 본 발명의 항체 콘쥬게이트와 5분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간의 간격, 약 1시간의 간격, 약 1 내지 약 2시간의 간격, 약 2시간 내지 약 3시간의 간격, 약 3시간 내지 약 4시간의 간격, 약 4시간 내지 약 5시간의 간격, 약 5시간 내지 약 6시간의 간격, 약 6시간 내지 약 7시간의 간격, 약 7시간 내지 약 8시간의 간격, 약 8시간 내지 약 9시간의 간격, 약 9시간 내지 약 10시간의 간격, 약 10시간 내지 약 11시간의 간격, 약 11시간 내지 약 12시간의 간격, 약 12시간 내지 18시간의 간격, 18시간 내지 24시간의 간격, 24시간 내지 36시간의 간격, 36시간 내지 48시간의 간격, 48시간 내지 52시간의 간격, 52시간 내지 60시간의 간격, 60시간 내지 72시간의 간격, 72시간 내지 84시간의 간격, 84시간 내지 96시간의 간격, 또는 96시간 내지 120시간의 간격을 두고 투여될 수 있다. 하나의 동일한 환자 방문 내에서 둘 이상의 요법이 투여될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 본 발명의 항체 콘쥬게이트는 생체 내에서 적절히 분포되도록 제형화될 수 있다. 예시적인 표적화 모이어티는 폴레이트 또는 비오틴(예를 들어, Low 등의 미국 특허 제5,416,016호); 만노사이드(문헌[Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038]); 항체(문헌[Bloeman et al., (1995) FEBS Lett. 357:140]; 문헌[Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180]); 계면활성제 단백질 A 수용체(문헌[Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134]); p 120(문헌[Schreier et al, (1994) J. Biol. Chem. 269:9090])을 포함하며; 또한 문헌[K. Keinanen; M. L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123]; 문헌[J. J. Killion; I. J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 참조한다.
본 발명은 본 발명의 항체 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물을 단독으로 또는 다른 요법과 조합하여 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위한 프로토콜을 제공한다. 본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상체에게 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 주기적으로 투여될 수도 있다. 요법(예를 들어, 제제) 중 하나에 대한 내성 발생의 감소, 요법(예를 들어, 제제) 중 하나의 부작용의 방지 또는 감소, 및/또는 요법의 효능 개선을 위해, 주기 요법은 일정 기간 동안의 제1 요법(예를 들어, 제1 예방제 또는 치료제)의 투여에 이은 일정 기간 동안의 제2 요법(예를 들어, 제2 예방제 또는 치료제)의 투여, 및 이러한 순차적 투여, 즉 사이클의 반복을 포함한다.
본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상체에게 병행적으로 투여될 수 있다.
용어 "병행적으로"는 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)을 정확히 동시에 투여하는 것으로 제한되는 것이 아니라, 본 발명의 항체 또는 이의 단편을 포함하는 제약 조성물이, 본 발명의 항체 또는 항체 콘쥬게이트가 다른 요법(들)과 함께 작용하여 이들이 달리 투여되는 경우보다 증가된 이익을 제공할 수 있도록 일정 순서로 일정 시간 간격 내에 대상체에게 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, 각각의 요법은 동시에 또는 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 대상체에 투여될 수 있지만; 동시에 투여되지 않는 경우, 이들은 원하는 치료 효과 또는 예방 효과를 제공하도록 충분히 가까운 시간 내에 투여되어야 한다. 각각의 요법은 임의의 적절한 형태로, 임의의 적합한 경로에 의해 개별적으로 대상체에게 투여될 수 있다. 다양한 실시 형태에서, 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 5분 미만의 간격, 15분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간 미만의 간격, 약 1시간의 간격, 약 1시간 내지 약 2시간의 간격, 약 2시간 내지 약 3시간의 간격, 약 3시간 내지 약 4시간의 간격, 약 4시간 내지 약 5시간의 간격, 약 5시간 내지 약 6시간의 간격, 약 6시간 내지 약 7시간의 간격, 약 7시간 내지 약 8시간의 간격, 약 8시간 내지 약 9시간의 간격, 약 9시간 내지 약 10시간의 간격, 약 10시간 내지 약 11시간의 간격, 약 11시간 내지 약 12시간의 간격, 24시간의 간격, 48시간의 간격, 72시간의 간격, 또는 1주의 간격을 두고 대상체에게 투여된다. 다른 실시 형태에서, 동일한 환자 방문 내에서 둘 이상의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)이 투여된다.
병용 요법의 예방제 또는 치료제는 동일한 제약 조성물로 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 병용 요법의 예방제 또는 치료제는 개별 제약 조성물로 대상체에게 병행적으로 투여될 수 있다. 예방제 또는 치료제는 동일한 또는 상이한 투여 경로로 대상체에게 투여될 수 있다.
실시예
본 발명은 다음의 실시예에서 추가로 설명되며, 이는 청구범위에 기술된 본 발명의 범주를 한정하려는 것이 아니다.
온도는 섭씨 온도로 제공된다. 달리 언급되지 않으면, 모든 증발은 감압 하에, 전형적으로 약 15 mmHg 내지 100 mmHg(=20~133 mbar)에서 수행된다. 최종 생성물, 중간체 및 출발 물질의 구조는 표준 분석 방법, 예를 들어, 마이크로분석 및 분광적 특성, 예를 들어, MS, IR, NMR에 의해 확인된다. 사용되는 약어는 당업계에서 통상적인 것들이다.
본 발명의 화합물을 합성하는 데 사용되는 모든 출발 물질, 빌딩 블록, 시약, 산, 염기, 탈수제, 용매, 및 촉매는 구매가능하거나 당업자에게 알려진 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있거나, 본원에 기술된 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.
약어:
사용되는 약어는 당업계에서 통상적인 것들이거나 다음과 같다.
Figure pct00358
분석 방법
하기 파라미터를 갖는 기기를 사용하여 LC/MS 데이터를 획득하였다:
Figure pct00359
LC/MS 데이터를 생성하는 데 사용한 방법은 다음과 같았다:
방법 A: 2분 산성 방법
용출제 A1: 물 중 0.1% 포름산
용출제 B1: 아세토니트릴 중 0.1% 포름산
유량: 1.0 mL/분
정지 시간: 3.00분
pH: 2.6
컬럼: AcQuity UPLC BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm
컬럼 온도: 50℃
TAC: 210~400 nm
질량 범위: 120~1500 Da
스캔 시간: 0.3초
구배:
Figure pct00360
방법 B: 2분 염기성 방법
용출제 A2: 물 중 5 mM 수산화암모늄
용출제 B2: 아세토니트릴 중 5 mM 수산화암모늄
유량: 1.0 mL/분
정지 시간: 3.00분
pH: 10.2
컬럼: AcQuity UPLC BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm
컬럼 온도: 50℃
TAC: 210~400 nm
질량 범위: 120~1500 Da
스캔 시간: 0.3초
구배:
Figure pct00361
방법 C: 5분 산성 방법
유량: 1.0 mL/분
정지 시간: 5.20분
pH: 2.6
컬럼: AcQuity UPLC BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm
컬럼 온도: 50℃
TAC: 210~400 nm
질량 범위: 120~1500 Da
스캔 시간: 0.3초
구배:
Figure pct00362
하기 파라미터를 갖는 기기를 사용하여 HRMS 데이터를 획득하였다:
Figure pct00363
링커/페이로드 및 합성 중간체에 대한 HRMS 데이터를 생성하는 데 사용한 방법은 다음과 같았다:
방법 D: 5분 산성 방법
유량: 1.0 mL/분
정지 시간: 5.2분
pH: 2.6
컬럼: AcQuity UPLC BEH C18 1.7 μm 2.1x50 mm
컬럼 온도: 50℃
TAC: 210~400 nm
질량 범위: 300~4000 Da
프로세싱 범위: 해당 없음
스캔 시간: 0.5초
구배:
Figure pct00364
항체-약물 콘쥬게이트에 대한 HRMS 데이터를 생성하는 데 사용한 방법은 다음과 같았다:
방법 E: 단백질 방법
유량: 1.0 mL/분
정지 시간: 3.30분
pH: 2.6
컬럼: ProSwift RP-3U 4.6x50 mm SS
컬럼 온도: 50℃
TAC: 210~400 nm
질량 범위: 600~3900 Da
프로세싱 범위: 14000~170000 Da
스캔 시간: 1.5초
구배:
Figure pct00365
하기 파라미터 및 12분의 실행 길이를 갖는 기기를 사용하여 크기 배제 크로마토그래피 데이터를 획득하였다:
Figure pct00366
실시예 1: 링커 중간체의 합성
실시예 1-1: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)
Figure pct00367
(LI-1)
단계 1: 다음의 합성: 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조산,
Figure pct00368
CCl4 (3000 mL) 중 2-메틸-4-니트로벤조산 (300 g, 1.5371 mol)의 교반 용액에 NBS (300.93 g, 1.6908 mol) 및 AIBN (37.86 g, 0.2305 mol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 TLC 분석으로 모니터링하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (2 리터)으로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (2 x 2 리터)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 용출제로서 석유 에테르 중 2~3%의 에틸아세테이트를 사용하여 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하고, 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조산을 수득하였다 (250 g, 59%의 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.35 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.20 (q, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.00 (s, 3H).
단계 2: 다음의 합성: 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조산,
Figure pct00369
ACN (5000 mL) 중 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조산 (250 g, 0.9122 mol)의 혼합물에 프로프-2-인-1-올 (255.68 g, 265.50 mL, 4.5609 mol, d=0.963 g/mL) 및 Cs2CO3 (743.03 g, 2.2805 mol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 16시간 동안 80℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통하여 여과시키고, 에틸아세테이트 (2 리터)로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 수득된 조 화합물에 포화 NaHCO3 용액 (1 리터)을 첨가하고, 수성 층을 2 N HCl (2 리터)을 사용하여 pH 2까지 산성화하였다. 여과 및 진공 건조 후 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조산을 수득하였다 (130 g, 60.6%). 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 13.61 (brs, 1H), 8.37 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.23 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.37 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.52 (t, J=2.4 Hz, 1H)
단계 3: 다음의 합성: 메틸 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트,
Figure pct00370
MeOH (1300 mL) 중 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조산 (130 g, 0.5527 mol)의 교반 용액에 SOCl2 (526.08 g, 320.78 mL, 4.4219 mol, d=1.64 g/mL)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 용매를 감압 하에 증발시켰다. 수득된 잔사를 에틸아세테이트 (1000 mL)에 용해시키고, 포화 NaHCO3 (600 mL), 물 (500 mL) 및 염수 용액 (500 mL)으로 세척하였다. 분리된 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켜 메틸 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트 (110 g, 80%의 수율)를 생성하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.56 (t, J=0.8 Hz, 1H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.35 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.49 (t, J=2.4 Hz, 1H).
단계 4: 다음의 합성: 메틸 4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트,
Figure pct00371
EtOH (1100 mL)와 H2O (550 mL)의 혼합물 중 메틸 4-니트로-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트 (110 g, 0.4414 mol)의 용액에 Fe 분말 (197.21 g, 3.5310 mol) 및 NH4Cl (188.88 g, 3.5310 mol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 셀라이트를 통하여 여과시키고, 에틸아세테이트 (2 리터)로 세척하였다. 여과액을 부피의 절반까지 감압 하에 농축시켰다. 잔사에 에틸아세테이트 (1.5 리터)를 첨가하고, 두 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 리터)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. SiO2 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 15~20%의 에틸아세테이트)로 정제하여 메틸 4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트 (70 g, 72%의 수율)를 생성하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.67 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.78 (t, J=1.6 Hz, 1H), 6.48 (q, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.25 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.70 (d, J=4.0 Hz, 3H), 3.42 (t, J=2.4 Hz, 1H).
단계 5: 다음의 합성: (4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)메탄올,
Figure pct00372
THF (1000 mL)의 교반 용액에 LiAlH4 (THF 중 1 M) (21.23 g, 798.2 mmol, 798.2 mL)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. THF (800 mL) 중 메틸 4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤조에이트 (70 g, 319.3 mmol)의 용액을 0℃에서 서서히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 그 후 물 (22 mL)을 매우 서서히 첨가하고, 이어서 20% NaOH (22 mL) 및 물 (66 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 무수 황산나트륨을 첨가하여 여분의 물을 흡수하였다. 상기 혼합물을 셀라이트를 통하여 여과시켰다. 필터 케이크를 에틸아세테이트 (1000 mL) 및 10% MeOH/DCM (500 mL)으로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 조 화합물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피 (용출제로서 석유 에테르 중 35~40%의 에틸아세테이트)로 정제하여 (4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)메탄올 (50.6 g, 83%의 수율)을 생성하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.98 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.43 (dd, J=2.4, 8.0 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.64 (t, J=5.2 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.34 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.46 (t, J=2.4 Hz, 1H).
단계 6: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00373
DMF (10 mL) 중 (4-아미노-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)메탄올 (1.92 g, 10.04 mmol, 1.0 당량), (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-아미노-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (3.99 g, 10.04 mmol, 1.0 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (4.20 g, 11.04 mmol, 1.1 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.62 mL, 15.06 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 1시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 물 (200 mL)에 부었다. 생성된 고형물을 여과시키고, 물로 헹구고, 진공 하에 건조시키고, (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (6.08 g, 99%). LCMS: MH+=571.5; Rt=0.93분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 7: 다음의 합성: (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드
Figure pct00374
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (6.08 g, 10.65 mmol, 1.0 당량)에 디메틸아민 (THF 중 2 M, 21.31 mL, 42.62 mmol, 4 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 1.5시간 동안 교반시킨 후, 형성된 검 유사 잔사로부터 상청액을 따라내었다. 잔사를 에테르 (3 x 50 mL)로 미분화하고, 생성된 고형물을 여과시키고, 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드를 수득하였다 (3.50 g, 10.04 mmol, 94%). LCMS: MH+ 349.3; Rt=0.42분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 8: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)
Figure pct00375
(LI-1)
DMF (10 mL) 중 (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (3.50 g, 10.04 mmol, 1.0 당량), (tert-부톡시카르보닐)-L-발린 (2.62 g, 12.05 mmol, 1.2 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (4.58 g, 12.05 mmol, 1.2 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (3.50 mL, 20.08 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 2시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 물 (200 mL)에 붓고, 생성된 현탁액을 EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~20% 메탄올 / 디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)를 수득하였다 (2.49 g, 4.55 mmol, 45%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00 (s, 1H), 7.96 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (dq, J = 4.9, 2.2 Hz, 2H, aryl), 7.32 (d, J = 8.9 Hz, 1H, aryl), 6.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.95 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.01 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.45 (dd, J = 25.2, 5.3 Hz, 3H), 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.83 (dd, J = 8.9, 6.7 Hz, 1H), 3.49 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.97 (dh, J = 26.0, 6.5 Hz, 2H), 1.96 (h, J = 6.6 Hz, 1H), 1.74 - 1.50 (m, 2H), 1.39 (m, 11H), 0.84 (dd, J = 16.2, 6.7 Hz, 6H). LCMS: MNa+ 570.5; Rt=0.79분 (2분 산성 방법-방법 A).
실시예 1-2: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (LI-2)
Figure pct00376
(LI-2)
단계 1: 다음의 합성: 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산
Figure pct00377
MeOH (1000 mL) 중 6-니트로이소벤조푸란-1(3H)-온 (90 g, 502.43 mmol, 1.00 당량)의 용액에 H2O (150 mL) 중 KOH (28.19 g, 502.43 mmol, 1.00 당량)를 첨가하였다. 갈색 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 갈색 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, DCM (2000 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물에 TBDPSCl (296.91 g, 1.08 mol, 277.49 mL, 2.15 당량) 및 이미다졸 (171.03 g, 2.51 mol, 5.00 당량)을 첨가하고, 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 1/1)로 정제하고, 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산 (34 g, 74.16 mmol, 14.76%의 수율)을 백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.13 (s, 9 H) 5.26 (s, 2 H) 7.34 - 7.48 (m, 6 H) 7.68 (br d, J=8 Hz, 4 H) 8.24 (br d, J=8 Hz, 1 H) 8.46 (br d, J=8 Hz, 1 H) 8.74 (s, 1 H)
단계 2: 다음의 합성: (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)메탄올
Figure pct00378
THF (205 mL) 중 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산 (41 g, 94.14 mmol, 1 당량)의 혼합물에 BH3. THF (1 M, 470.68 mL, 5 당량)를 첨가하였다. 황색 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물에 MeOH (400 mL)를 첨가하고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 그 후 H2O (200 mL) 및 DCM (300 mL)을 첨가하고, DCM (3 ×200 mL)으로 추출하고, 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 1/1)로 정제하였다. (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)메탄올 (34 g, 80.65 mmol, 85.7%의 수율)을 백색 고형물로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 1.10 (s, 9 H) 4.58 (s, 2 H) 4.89 (s, 2 H) 7.32 - 7.51 (m, 6 H) 7.68 (dd, J=8, 1.38 Hz, 4 H) 7.76 (d, J=8 Hz, 1 H) 8.15 (dd, J=8 2.26 Hz, 1 H) 8.30 (d, J=2 Hz, 1 H).
단계 3: 다음의 합성: 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤즈알데히드
Figure pct00379
DCM (450 mL) 중 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)메탄올 (34 g, 80.65 mmol, 1 당량)의 용액에 MnO2 (56.09 g, 645.22 mmol, 8 당량)를 첨가하였다. 흑색 혼합물을 25℃에서 36시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물에 MeOH (400 mL)를 첨가하고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 그 후 H2O (200 mL) 및 DCM (300 mL)을 첨가하고, DCM (3 ×200 mL)으로 추출하고, 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (CH2Cl2=100%)로 정제하였다. 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤즈알데히드 (30 g, 71.51 mmol, 88.7%의 수율)를 백색 고형물로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.14 (s, 9 H) 5.26 (s, 2 H) 7.34 - 7.53 (m, 6 H) 7.60 - 7.73 (m, 4 H) 8.13 (d, J=8Hz, 1 H) 8.48 (dd, J=8, 2.51 Hz, 1 H) 8.67 (d, J=2 Hz, 1 H) 10.16 (s, 1 H)
단계 4: 다음의 합성: N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민
Figure pct00380
DCM (130 mL) 중 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤즈알데히드 (12.6 g, 30.03 mmol, 1 당량)의 용액에 프로프-2-인-1-아민 (4.14 g, 75.08 mmol, 4.81 mL, 2.5 당량) 및 MgSO4 (36.15 g, 300.33 mmol, 10 당량)를 첨가하고, 그 후 현탁 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 약간의 반응 용액을 취하고, NaBH4로 처리하였으며, TLC는 하나의 새로운 점이 형성되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. (E)-N-[[2-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-5-니트로-페닐]메틸]프로프-2-인-1-이민 (12 g, 조 물질)을 황색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.11 (s, 9 H) 2.48 (t, J=2.38 Hz, 1 H) 4.52 (t, J=2.13 Hz, 2 H) 5.09 (s, 2 H) 7.35 - 7.49 (m, 6 H) 7.63 - 7.72 (m, 4 H) 7.79 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.25 (dd, J=8.53, 2.51 Hz, 1 H) 8.68 (d, J=2.26 Hz, 1 H) 8.84 (t, J=1.88 Hz, 1 H).
(E)-N-[[2-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-5-니트로-페닐]메틸]프로프-2-인-1-이민 (12 g, 26.28 mmol, 1 당량)을 MeOH (100 mL) 및 THF (50 mL)에 용해시키고, 그 후 NaBH4 (1.49 g, 39.42 mmol, 1.5 당량)를 첨가하고, 황색 혼합물을 -20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. LCMS는 원하는 화합물이 검출되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 -20℃에서 MeOH 200 mL를 첨가하여 켄칭하고, 그 후 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 EtOAc 500 mL로 용해시키고, 염수 150 mL로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (0~10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용출제)로 정제하였다. N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민 (9 g, 18.45 mmol, 70%의 수율)을 담황색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.12 (s, 9 H) 2.13 (t, J=2.38 Hz, 1 H) 3.33 (d, J=2.51 Hz, 2 H) 3.80 (s, 2 H) 4.93 (s, 2 H) 7.36 - 7.49 (m, 6 H) 7.69 (dd, J=7.91, 1.38 Hz, 4 H) 7.77 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=8.41, 2.38 Hz, 1 H) 8.24 (d, J=2.26 Hz, 1 H).
단계 5: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트
Figure pct00381
디옥산 (90 mL) 중 N-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)프로프-2-인-1-아민 (9 g, 19.62 mmol, 1 당량) 및 Fmoc-OSU (7.28 g, 21.59 mmol, 1.1 당량)의 용액에 포화 NaHCO3 (90 mL)을 첨가하고, 백색 현탁액을 20℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 H2O 150 mL로 희석시키고, EtOAc (매회 150 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 200 mL로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (0~30% 에틸 아세테이트/석유 에테르의 용출제)로 정제하였다. (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (7.7 g, 11.08 mmol, 56.48%의 수율, 98%의 순도)를 백색 고형물로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.12 (s, 9 H) 2.17 (br d, J=14.31 Hz, 1 H) 3.87 - 4.97 (m, 9 H) 6.98 - 8.28 (m, 21 H).
단계 6: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트
Figure pct00382
10% AcOH/CH2Cl2 (100 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (5.0 g, 7.34 mmol, 1.0 당량)의 빙조 냉각 용액에 Zn (7.20 g, 110 mmol, 15 당량)을 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반시키고, 이때 이것을 셀라이트 패드를 통하여 여과시켰다. 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, 잔사를 EtOAc에 용해시키고, NaHCO3(포화), NaCl(포화)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~75% EtOAc/헵탄) 후 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다 (2.99 g, 62%). LCMS: MH+=651.6; Rt=3.77분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 7: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트
Figure pct00383
CH2Cl2 (40 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (2.99 g, 4.59 mmol, 1.0 당량) 및 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (1.72 g, 4.59 mmol, 1.0 당량)에 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (2.27 g, 9.18 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 10분 동안 교반시킨 후, MeOH (1 mL)를 첨가하였으며, 용액은 균질해졌다. 반응물을 16시간 동안 교반시키고, 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~15% MeOH/CH2Cl2)로 정제 후 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다 (2.78 g, 60%). LCMS: MH+=1008.8; Rt=3.77분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 8: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트
Figure pct00384
(9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (1.60 g, 1.588 mmol, 1.0 당량)에 MeOH 중 2 M 디메틸아민 (30 mL, 60 mmol, 37 당량) 및 THF (10 mL)를 첨가하였다. 3시간 동안 정치시킨 후 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, 잔사를 Et2O로 미분화하여 Fmoc 탈보호 부산물을 제거하였다. 생성된 고형물에 CH2Cl2 (16 mL) 및 피리딘 (4 mL)을 첨가하고, 불균질 용액에 프로파르길 클로로포르메이트 (155 uL, 1.588 mmole, 1.0 당량)를 첨가하였다. 30분 동안 교반시킨 후 추가의 프로파르길 클로로포르메이트 (155 uL, 1.588 mmole, 1.0 당량)를 첨가하였다. 추가 20분 동안 교반시킨 후 MeOH (1 mL)를 첨가하여 잔존 클로로포르메이트를 켄칭하고, 휘발성 물질을 진공에서 제거하였다. ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~15% MeOH/CH2Cl2)에 의한 정제시에 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다 (984 mg, 71%). LCMS: MH+=867.8; Rt=3.40분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 9: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (LI-2)
Figure pct00385
(LI-2)
THF (7.5 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (984 mg, 1.135 mmol, 1.0 당량)의 용액에 THF 중 1.0 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (2.27 mL, 2.27 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 6시간 동안 정치시킨 후 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, 잔사를 ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~40% MeOH/CH2Cl2)로 정제하고, 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 수득하였다 (629 mg, 88%). LCMS: MH+=629.6; Rt=1.74분 (5분 산성 방법-방법 C).
실시예 1-3: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (LI-3)
Figure pct00386
(LI-3)
단계 1: 다음의 합성: 2-(히드록시메틸)-N-메틸-5-니트로벤즈아미드
Figure pct00387
MeOH (1500 mL) 중 6-니트로이소벤조푸란-1(3H)-온 (500 g, 2.79 mol)의 교반 현탁액에 MeNH2 (3.00 kg, 29.94 mol, 600 mL, 31.0%의 순도)를 25℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과시키고, 물로 2회 세척하고 (600 mL), 고 진공 하에 건조시켜 잔사를 얻었다. 생성물 2-(히드록시메틸)-N-메틸-5-니트로벤즈아미드 (560 g, 조 물질)를 백색 고형물로 수득하였다. LCMS: RT = 0.537분, MS m/z = 193.2. 1H NMR: 400 MHz DMSO δ 8.57 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 2.4, 8.6 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.54 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.78 (d, J = 4.4 Hz, 3H).
단계 2: 다음의 합성: (2-((메틸아미노)메틸)-4-니트로페닐)메탄올
Figure pct00388
THF (5000 mL) 중 2-(히드록시메틸)-N-메틸-5-니트로벤즈아미드 (560 g, 2.66 mol)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 그 후 BH3-Me2S (506 g, 6.66 mol) (THF 중 2.0 M)를 60분 동안 적가하고, 혼합물을 5시간 동안 70℃까지 가열하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되었음을 보여주었다. 완료 후, 메탄올 중 4 M HCl (1200 mL)을 0℃에서 반응 혼합물에 첨가하고, and 65℃에서 8시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 고형물을 여과시키고, 감압에서 농축시켰다. (2-((메틸아미노)메틸)-4-니트로페닐)메탄올을 백색 고형물로 수득하였다 (520 g). LCMS: RT = 0.742분, MS m/z = 197.1 [M+H]+. 1H NMR: 400 MHz DMSO δ 9.25 (br s, 2H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 2.4, 8.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.72 (br s, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.15 (br s, 2H), 2.55 - 2.45 (m, 3H)
단계 3: 다음의 합성: 1-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)-N-메틸메탄아민
Figure pct00389
DCM (2600 mL) 중 (2-((메틸아미노)메틸)-4-니트로페닐)메탄올 (520 g, 2.65 mol) 및 이미다졸 (721 g, 10.6 mol)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 그 후 TBDPS-Cl (1.09 kg, 3.98 mol, 1.02 L)을 적가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 빙냉수 (1000 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 제공하였다. 조 생성물을 실리카 겔에서 크로마토그래피 (에틸 아세테이트:석유 에테르 (10/1로부터 1까지)로 용출)에 의해 정제하여 잔사를 제공하였다. 1-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)-N-메틸메탄아민 (600 g)을 황색 액체로 수득하였다. LCMS: 생성물: RT = 0.910분, MS m/z = 435.2 [M+H]+
1H NMR: 400 MHz CDCl3 δ 8.23 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.15 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 4H), 7.50 - 7.37 (m, 6H), 4.88 (s, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.12 (s, 9H)
단계 4: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(메틸)카르바메이트
Figure pct00390
THF (4000 mL) 중 1-(2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로페닐)-N-메틸메탄아민 (400 g, 920.3 mmol)의 용액에 Fmoc-OSU (341.5 g, 1.01 mol) 및 Et3N (186.2 g, 1.84 mol, 256.2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 물 (1600 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (1000 mL)로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 제공하였다. 조 생성물을 실리카 겔에서 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 (1/0으로부터 1/1까지)에 의해 정제하여 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(메틸)카르바메이트 (405 g)를 백색 고형물로 제공하였다. LCMS: RT = 0.931분, MS m/z = 657.2 [M+H]+.
1H NMR: 400 MHz CDCl3 δ 8.21 - 7.96 (m, 1H), 7.87 - 7.68 (m, 3H), 7.68 - 7.62 (m, 4H), 7.62 - 7.47 (m, 2H), 7.47 - 7.28 (m, 9H), 7.26 - 7.05 (m, 2H), 4.81 (br s, 1H), 4.62 - 4.37 (m, 4H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 1H), 2.87 (br d, J = 5.2 Hz, 3H), 1.12 (s, 9H).
단계 5: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트
Figure pct00391
MeOH (90 mL) 및 EtOAc (30 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤질)(메틸)카르바메이트 (3.0 g, 4.57 mmole, 1.0 당량)의 용액을 탈기시키고, 3방향 마개를 통하여 N2의 벌룬으로 퍼지하였다. 탈기/N2 퍼지를 2회 반복한 후, 10% Pd/C deGussa 타입 (0.486 g, 0.457 mmol, 0.1 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 탈기시키고, 3방향 마개를 통하여 2 H2의 벌룬으로 퍼지하였다. 탈기/H2 퍼지를 2회 반복한 후, 반응물을 H2의 벌룬 압력 하에 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 탈기시키고, N2로 퍼지하고, 셀라이트 패드를 통하여 여과시켰다 (MeOH로 추가로 용출시킴). 휘발성 물질을 진공에서 제거하고 하이 백(high vac)에서 펌핑한 후 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다 (2.78 g, 97%). LCMS: MH+=627.7; Rt=1.59분 (2분 산성 방법-방법 A). 1H NMR: 400 MHz CDCl3 δ 7.80 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.74 - 7.67 (m, 5H), 7.64 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 - 7.30 (m, 10H), 7.23 - 7.06 (m, 2H), 6.61 - 6.41 (m, 2H), 4.66 (br d, J = 7.2 Hz, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.51 - 4.34 (m, 2H), 4.32 - 4.10 (m, 1H), 3.66 (br s, 2H), 2.96 - 2.78 (m, 3H), , 1.07 (s, 9H).
단계 6: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트
Figure pct00392
2:1의 CH2Cl2/MeOH (60 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (2.86 g, 4.56 mmol, 1.0 당량) 및 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (1.71 g, 4.56 mmol, 1.0 당량)에 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (2.256 g, 9.12 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 균질 용액을 16시간 동안 교반시키고, 이때 추가의 (S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄산 (0.340 g, 0.2 당량) 및 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (0.452 g, 0.4 당량)를 첨가하여 반응이 완료되게 하였다. 추가 5시간 동안 교반시킨 후 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~5% MeOH/CH2Cl2)로 정제한 후 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다 (2.95 g, 65%). LCMS: MH+=984.1; Rt=1.54분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 7: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트
Figure pct00393
THF (10 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (2.05 g, 2.085 mmol, 1.0 당량)에 MeOH 중 2.0 M 디메틸 아민 (10.42 mL, 20.85 mmol, 10 당량)을 첨가하였다. 16시간 동안 교반시킨 후 휘발성 물질을 진공에서 제거하였다. 잔사를 CH2Cl2 (20 mL)에 용해시키고, DIEA (0.533 mL, 4.17 mmol, 2 당량) 및 프로파르길 클로로포르메이트 (0.264 mL, 2.71 mmol, 1.3 당량)를 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반시킨 후 반응물을 CH2Cl2 (20 mL)로 희석시키고, NaHCO3 (포화), NaCl (포화)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~15% MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (1.04 g, 59%)를 생성하였다. LCMS: MH+=843.8; Rt=1.35분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 8: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (LI-3)
Figure pct00394
(LI-3)
THF (10.0 mL) 중 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (1.6 g, 1.90 mmol, 1.0 당량)의 0℃ 용액에 THF 중 1.0 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (3.80 mL, 3.80 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 실온까지 가온하고 16시간 동안 교반시킨 후, 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, 잔사를 EtOAc에 용해시키고, NaHCO3(포화), NaCl (포화)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 잔사를 ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~30% MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (LI-3) (1.0 g, 87%)를 생성하였다. LCMS: MH+=605.7; Rt=0.81분 (2분 산성 방법-방법 A).
실시예 1-4: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-4)
Figure pct00395
(LI-4)
단계 1: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00396
DMF (50 mL) 중 (4-아미노-2-니트로페닐)메탄올 (10 g, 59.5 mmol, 1.0 당량), (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-아미노-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (23.64 g, 59.5 mmol, 1.0 당량), 및 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (8.50 g, 62.4 mmol, 1.05 당량)의 용액에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드　(11.97 g, 62.4 mmol, 1.05 당량)를 첨가하였다. 주위 온도에서 16시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 물 (4 L)에 붓고, 30분 동안 교반시켰다. 생성된 고형물을 여과시키고, 물로 헹구고, 진공 하에 건조시켰다. (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (31.49 g, 57.5 mmol, 97%). LCMS: MH+=548; Rt=2.02분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 2: 다음의 합성: (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)-5-우레이도펜탄아미드
Figure pct00397
DMF (50 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-((4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (31.49 g, 57.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에 디메틸아민 (MeOH 중 2 M, 331 mL, 661 mmol, 11.5 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 24시간 동안 교반시킨 후, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, 생성된 잔사를 디에틸 에테르 (3 x 2L)로 미분화하였다. 생성된 잔사를 진공 하에 건조시키고, (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)-5-우레이도펜탄아미드를 수득하였다 (21.85 g, 57.5 mmol, 99%). LCMS: MH+=326.4; Rt=0.35분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 3: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00398
DMF (40 mL) 중 (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)-5-우레이도펜탄아미드 (10.89 g, 28.8 mmol, 1.0 당량), (tert-부톡시카르보닐)-L-발린 (6.25 g, 28.8 mmol, 1.0 당량), 및 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (3.92 g, 28.8 mmol, 1.0 당량)의 용액에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드　(5.52 g, 28.8 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 주위 온도에서 24시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 물 (2 L)에 적가하고, 30분 동안 교반시키고, 4℃까지 하룻밤 냉각시켰다. 혼합물을 NaCl로 포화시키고, 생성된 고형물을 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켰다. Tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (11.96 g, 22.8 mmol, 79%). LCMS: MH+=525.4; Rt=0.79분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 4: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00399
DMF (31 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (11.96 g, 22.8 mmol, 1.0 당량) 및 이미다졸 (15.52 g, 228 mmol, 10 당량)의 현탁액에 tert-부틸디메틸클로로실란 (13.68 g, 90.76 mmol, 4.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 48시간 동안 교반시키고, 그 후 45℃에서 4시간 동안 가열하였다. 혼합물을 물에 붓고, 96시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과시키고, 물 (2 x 100 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~30% 메탄올/디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (8.02 g, 12.56 mmol, 55%). LCMS: MH+=639.6; Rt=1.22분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 5: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-아미노-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00400
질소 분위기 하에 메탄올 (250 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-니트로페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (8.02 g, 12.56 mmol, 1.0 당량)의 용액에 탄소상 팔라듐 (10 중량%, 2.00 g, 1.884 mmol, 0.15 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 1 atm 이수소 하에 두고, 주위 온도에서 18시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 셀라이트를 통하여 여과시키고, 진공 하에 건조시켰다. SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~40% 메탄올/디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-아미노-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (4.82 g, 7.92 mmol, 63%). LCMS: MH+=609.6; Rt=2.65분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 6: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-4)
Figure pct00401
(LI-4)
단계 6a):
2 M 수산화나트륨 수용액 (63.3 mL, 127 mmol NaOH, 3.0 당량) 중 글리신 (3.19 g, 42.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에 프로파르길 클로로포르메이트 (5.0 g, 42.5 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 건조 후, ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)글리신,
Figure pct00402
을 수득하였다 (3.97 g, 25.3 mmol, 59%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 3.48 (t, J=2.40 Hz, 1 H) 3.66 (d, J=6.19 Hz, 2 H) 4.63 (d, J=2.40 Hz, 2 H) 7.63 (t, J=6.13 Hz, 1 H) 12.57 (br s, 1 H).
단계 6b):
DMF (5 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-아미노-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (2.7 g, 4.43 mmol, 1.0 당량)의 용액에 ((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)글리신 (0.732 g, 4.66 mmol, 1.05 당량), 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (0.664 g, 4.88 mmol, 1.1 당량), 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드　히드로클로라이드 (0.935 g, 4.88 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (500 mL)에 적가하고, 추가 20분 동안 교반시켰다. 생성된 침전물을 여과시키고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~50% 메탄올/디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-4)를 수득하였다 (1.52 g, 2.40 mmol, 54%). LCMS: MH+=634.6; Rt=1.97분 (5분 산성 방법-방법 C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.76 - 0.91 (m, 6 H) 1.30 - 1.47 (m, 11 H) 1.51 - 1.73 (m, 2 H) 1.87 - 2.00 (m, 1 H) 2.89 - 3.07 (m, 2 H) 3.50 (t, J=2.32 Hz, 1 H) 3.73 - 3.87 (m, 3 H) 4.37 - 4.47 (m, 3 H) 4.65 (d, J=2.45 Hz, 2 H) 5.30 (t, J=5.44 Hz, 1 H) 5.38 (s, 2 H) 5.96 (t, J=5.81 Hz, 1 H) 6.72 (br d, J=8.93 Hz, 1 H) 7.25 (d, J=8.44 Hz, 1 H) 7.45 (dd, J=8.25, 2.02 Hz, 1 H) 7.78 (br t, J=5.87 Hz, 1 H) 7.87 - 8.00 (m, 2 H) 9.51 (s, 1 H) 10.04 (s, 1 H).
실시예 1-5: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-5)
Figure pct00403
(LI-5)
단계 1: 다음의 합성: 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드
Figure pct00404
디클로로메탄 (6 mL) 중 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로벤조산 (1.00 g, 2.30 mmol, 1.0 당량) 및 디프로파르길아민 (0.257 g, 2.76 mmol, 1.2 당량)의 용액에 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (1.048 g, 2.76 mmol, 1.2 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.445 g, 3.44 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반시키고, 그 후 물로 희석시키고, 디에틸 에테르 (3 x 25 mL)로 추출하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~100% 에틸 아세테이트/헵탄)로 정제한 후, 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드를 수득하였다 (1.08 g, 2.115 mmol, 92%). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.35 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.02 - 7.92 (m, 1H), 7.71 - 7.62 (m, 4H), 7.51 - 7.35 (m, 6H), 4.87 (s, 2H), 4.39 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.21 (s, 1H), 2.08 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 1.13 (s, 9H).
단계 2: 다음의 합성: 5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드
Figure pct00405
에탄올 (4 mL) 및 물 (4 mL) 중 2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-5-니트로-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드 (1.08 g, 2.115 mmol, 1.0 당량)의 교반 현탁액에 아연 분말 (0.553 g, 8.46 mmol, 4 당량) 및 염화암모늄 (0.453 g, 8.46 mmol, 4 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 24시간 동안 교반시키고, 그 후 물로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 진공 하에 건조시킨 후, 5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드를 수득하였다 (972 mg, 2.02 mmol, 96%). LCMS: MH+=481.4; Rt=1.33분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 3: 다음의 합성: (S)-5-(2-아미노-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드
Figure pct00406
DMF (4 mL) 중 5-아미노-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드 (972 mg, 2.02 mmol, 1.0 당량), (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-(1-아미노-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트 (804 mg, 2.02 mmol, 1.0 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (846 mg, 2.22 mmol, 1.1 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.53 mL, 3.03 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (400 mL)에 붓고, 3시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과시키고, 진공 하에 건조시키고, 그 후 테트라히드로푸란 중 2 M 디메틸아민 용액 (2.02 mL, 4.04 mmol, 2 당량)에 용해시키고, 주위 온도에서 4시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 진공 하에 제거하고, SiO2 ISCO 크로마토그래피로 정제한 후, (S)-5-(2-아미노-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드를 수득하였다 (1.018 g, 1.596 mmol, 79%). LCMS: MH+=638.6; Rt=1.22분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 4: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00407
DMF (3 mL) 중 (S)-5-(2-아미노-5-우레이도펜탄아미도)-2-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-N,N-디(프로프-2-인-1-일)벤즈아미드 (1.00 g, 1.568 mmol, 1.0 당량), (tert-부톡시카르보닐)-L-발린 (0.341 g, 1.568 mmol, 1.0 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (0.656 g, 1.725 mmol, 1.1 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.41 mL, 2.352 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 주위 온도에서 1시간 동안 교반시킨 후, 혼합물을 물 (30 mL) 및 염수 (30 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 생성된 잔사를 SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~50% 메탄올/디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (1.30 g, 1.553 mmol, 99%). LCMS: MH+=837.5; Rt=1.32분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 5: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-5)
Figure pct00408
(LI-5)
테트라히드로푸란 (5 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (1.30 g, 1.553 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 테트라히드로푸란 중 1 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 용액 (3.11 mL, 3.11 mmol, 2.0 당량)을 적가하였다. 주위 온도에서 18시간 동안 교반시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하였다. SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~50% 메탄올/디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-5)를 수득하였다 (0.703 g, 1.174 mmol, 76%). LCMS: MH+=599.4; Rt=0.76분 (2분 산성 방법-방법 A ). 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.71 - 7.59 (m, 2H), 7.52 - 7.43 (m, 1H), 4.51 (d, J = 29.4 Hz, 4H), 4.11 - 4.04 (m, 2H), 3.95 - 3.85 (m, 1H), 3.28 - 3.06 (m, 2H), 2.76 (m, 2H), 2.11 - 2.03 (m, 1H), 1.97 - 1.83 (m, 1H), 1.75 (dtd, J = 14.2, 9.4, 5.1 Hz, 1H), 1.70 - 1.51 (m, 3H), 1.44 (m, 9H), 1.00 - 0.90 (m, 6H).
실시예 2: 약물 성분의 합성
실시예 2-1: 다음의 합성: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (P1)
Figure pct00409
(P1)
단계 1: 다음의 합성: 메틸 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트
Figure pct00410
메탄올 (50 mL) 중 메틸 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트 (2.00 g, 3.23 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄소상 팔라듐 (10 중량%, 0.343 g, 0.323 mmol, 0.1 당량)을 첨가하였다. 건조 질소로 5분 동안 반응물을 버블링하고, 그 후 반응물을 1 atm의 H2 하에 두었다. 주위 온도에서 1시간 동안 교반시킨 후, 건조 질소로 혼합물을 5분 동안 버블링하였다. 혼합물을 셀라이트를 통하여 여과시켰다 (50 mL 메탄올로 헹굼). 여과액을 농축시키고, 진공 하에 건조시키고, 메틸 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트를 수득하였다 (1.55 g, 3.19 mmol, 99%). LCMS: MH+=486.1; Rt=0.93분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 2: 다음의 합성: tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-1,3-디메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00411
DMF (6 mL) 중 메틸 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트 (1.55 g, 3.19 mmol, 1.00 당량), (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (0.77 g, 3.19 mmol, 1.00 당량), 및 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (0.500 g, 3.67 mmol, 1.15 당량)의 교반 용액에 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드　히드로클로라이드 (0.704 g, 3.67 mmol, 1.15 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (100 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 1 M 수성 수산화나트륨 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 그 후 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 진공 하에 건조시킨 후, tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-1,3-디메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다 (2.20 g, 3.10 mmol, 97%). LCMS: MH+=709.5; Rt=1.23분 (2분 염기성 방법-방법 B).
단계 3: 다음의 합성: (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산
Figure pct00412
물 (5 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (0.26 g, 6.21 mmol, 2.0 당량)의 용액을 테트라히드로푸란 (5 mL) 및 메탄올 (5 mL) 중 tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-1,3-디메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (2.20 g, 3.10 mmol, 1.0 당량)의 용액에 적가하였다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 주위 온도에서 18시간 동안 교반시켰다. 그 후, 혼합물을 1 M 수성 HCl (6.5 mL)로 켄칭하고, 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 생성된 잔사를 에틸 아세테이트 (50 mL)와 염수 (100 mL) 사이에 분배하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 진공 하에 건조시킨 후, (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산을 수득하였다 (1.96 g, 2.82 mmol, 91%). LCMS: MH+=695.5; Rt=0.73분 (2분 염기성 방법-방법 B).
단계 4: 다음의 합성: tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00413
DMF (1 mL) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (250 mg, 0.360 mmol, 1.0 당량), (S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에탄-1-아민 히드로클로라이드 (95 mg, 0.396 mmol, 1.1 당량), 및 (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (150 mg, 0.396 mmol, 1.1 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.25 mL, 1.44 mmol, 4 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 염수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. SiO2 ISCO 크로마토그래피 (0~20% 메탄올/디클로로메탄)로 정제한 후, tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다 (317 mg, 0.360 mmol, 99%). LCMS: MH+=881.5; Rt=1.23분 (2분 염기성 방법-방법 B).
단계 5: 다음의 합성: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (P1)
Figure pct00414
(P1)
디클로로메탄 (5 mL) 중 tert-부틸 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (317 mg, 0.360 mmol, 1.0 당량)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 1.5시간 동안 교반시키고, 그 후 휘발성 물질을 진공 하에 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (25 mL)와, NaCl로 포화된 1 M 수성 NaOH (50 mL) 사이에 분배하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. RP-HPLC ISCO 골드 크로마토그래피 (10~100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)로 정제한 후, (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (P1)를 수득하였다 (268 mg, 0.299 mmol, 83%). LCMS: MH+=781.5; Rt=1.11분 (2분 염기성 방법-방법 B).
실시예 3: 예시적인 링커-약물 화합물의 합성
실시예 3-1: 다음의 합성: 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L4-P1)
Figure pct00415
(L4-P1)
단계 1: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00416
DMF (2 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1) (500 mg, 0.913 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 비스(4-니트로페닐)카르보네이트 (306 mg, 1.004 mmol, 1.1 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.32 mL, 1.826 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 4 mL의 DMSO로 희석시키고, RP-HPLC ISCO 골드 크로마토그래피 (10~100% 아세토니트릴/물, 0.1% 트리플루오로아세트산 개질제)로 정제한 후, tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (550 mg, 0.772 mmol, 85%). LCMS: MNa+=735.4; Rt=1.05분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 2: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00417
DMF (1 mL) 중 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (P1) (50 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)의 용액에 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (45.6 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.112 mL, 0.640 mmol, 10 당량)을 첨가하였다. 생성된 용액을 주위 온도에서 18시간 동안 교반시키고, 그 후 2 mL의 DMSO로 희석시켰다. RP-HPLC ISCO 골드 크로마토그래피 (10~100% 아세토니트릴/물, 0.1% 트리플루오로아세트산 개질제)로 정제한 후, 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다 (56 mg, 0.041 mmol, 64%). LCMS: MH+=1353.3; Rt=1.13분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 3: 다음의 합성: 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00418
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (55 mg, 0.041 mmol, 1.0 당량) 및 25-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산 (33 mg, 0.082 mmol, 2.0 당량)에 t-BuOH (1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 하우스 진공을 통하여 탈기시키고, 3방향 마개를 통하여 N2 벌룬으로 퍼지하였다. 탈기/퍼지를 3회 반복하였다. 16 mg/mL의 아스코르브산나트륨 수용액 (0.75 mL, 0.061 mmol, 1.5 당량)을 첨가하고, 용액을 탈기시키고, N2로 3회 퍼지하였다. 4 mg/mL의 황산구리 수용액 (0.75 mL, 0.0123 mmol, 0.3 당량)을 첨가하고, 용액을 탈기시키고, N2로 3회 퍼지하였다. N2 하에 3시간 동안 교반시킨 후, 반응물을 DMSO (3 mL)로 희석시키고, RP-HPLC ISCO 골드 크로마토그래피 (10~100% MeCN/H2O, 0.1% TFA 개질제)로 정제하였다 동결건조시 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (63 mg, 0.036 mmol, 88%)를 수득하였다. LCMS: [M+2H]2+=883.1; Rt=1.11분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 4: 다음의 합성: 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L4-P1)
2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (63 mg, 0.036 mmol, 1.0 당량)에 25% TFA/CH2Cl2 (2 mL)를 첨가하였다 45분 동안 정치시킨 후, 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, CH2Cl2를 첨가하고, 휘발성 물질을 진공에서 제거하고, 잔사를 진공 하에 건조시켰다. 잔사를 DMF (1 mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (93 μL, 0.540 mmol, 15 당량) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노에이트 (22 mg, 0.072 mmol, 2 당량)를 첨가하였다. 2시간 동안 교반시킨 후, 용액을 DMSO (2 mL)로 희석시키고, RP-ISCO 골드 크로마토그래피로 정제하였다. 동결건조시 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L4-P1) (6.0 mg, 3.16 μmol, 9%)를 수득하였다. HRMS: M+=1858.9881, Rt=2.49분 (5분 산성 방법-방법 D).
실시예 3-2: 다음의 합성: 2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L2-P1)
Figure pct00419
(L2-P1)
단계 1: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트
Figure pct00420
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 실시예 3-1, 단계 1에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)를 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (LI-3) (300 mg, 0.496 mmol, 1.0 당량)로 대체하고 N,N-디이소프로필에틸아민을 생략하였다.
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트: (347 mg, 0.451 mmol, 91%). LCMS: MH+=770.3, Rt=2.39분 (5분 산성 방법-방법 C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.19 (s, 1H), 8.35 - 8.28 (m, 2H), 8.00 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.72 - 7.64 (m, 1H), 7.61 - 7.54 (m, 2H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.73 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.95 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.30 (s, 2H), 4.71 (s, 2H), 4.59 (s, 2H), 4.42 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 3.87 - 3.79 (m, 1H), 3.51 (d, J = 22.1 Hz, 1H), 3.07 - 2.89 (m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.00 - 1.88 (m, 1H), 1.75 - 1.43 (m, 3H), 1.42 - 1.32 (m, 10H), 0.83 (dd, J = 16.0, 6.7 Hz, 6H).
단계 2: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00421
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 2에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (43 mg, 0.056 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (33.7 mg, 0.024 mmol, 43%). LCMS: [M+2H]2+ 707.0, Rt=2.55분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 3: 다음의 합성: 2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00422
2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 3에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((메틸((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (33.7 mg, 0.024 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (25.1 mg, 0.014 mmol, 57%). LCMS: [M+2H]2+ 911.1, Rt=2.47분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 4: 다음의 합성: 2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L2-P1)
2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L2-P1)를 실시예 3-1, 단계 4에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (19.9 mg, 0.011 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)(메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L2-P1): (14.5 mg, 7.49 μmol, 68%). HRMS: M+=1916.0000, Rt=2.50분 (5분 산성 방법-방법 D).
실시예 3-3: 다음의 합성: 2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L3-P1)
Figure pct00423
(L3-P1)
단계 1: 다음의 합성: 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트
Figure pct00424
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 실시예 3-1, 단계 1에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)를 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (LI-2) (380 mg, 0.604 mmol, 1.0 당량)로 대체하고 N,N-디이소프로필에틸아민을 생략하였다.
프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트: (374 mg, 0.472 mmol, 78%). LCMS: MH+ 794.8, Rt=2.46분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 2: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00425
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 2에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 프로프-2-인-1-일 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)벤질)(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (44.3 mg, 0.056 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (71.2 mg, 0.050 mmol, 89%). HRMS: MH+=1435.7600 Rt=2.70분 (5분 산성 방법-방법 D).
단계 3: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00426
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 3에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (71.2 mg, 0.050 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (53.9 mg, 0.032 mmol, 64%). HRMS: MH+=1530.7600 Rt=2.63분 (5분 산성 방법-방법 D).
단계 4: 다음의 합성: 2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L3-P1)
2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L3-P1)를 실시예 3-1, 단계 4에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (26.7 mg, 0.017 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)아미노)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L3-P1): (21.1 mg, 8.26 μmol, 47%). HRMS: MH+=2349.2400 Rt=2.51분 (5분 산성 방법-방법 D).
실시예 3-4: 다음의 합성: 2-(2-((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L5-P1)
Figure pct00427
(L5-P1)
단계 1: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00428
Tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 3-1, 단계 1에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)를 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-4) (552 mg, 0.871 mmol, 1.0 당량)로 대체하고 N,N-디이소프로필에틸아민을 생략하였다.
Tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트: (388 mg, 0.486 mmol, 55%). LCMS: MH+ 799.7, Rt=2.14분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 2: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00429
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3, 단계 2에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (44.6 mg, 0.056 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (66.5 mg, 0.046 mmol, 83%). HRMS: MH+=1440.7500 Rt=2.70분 (5분 산성 방법-방법 D).
단계 3: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00430
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 4에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (66.5 mg, 0.046 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (51.4 mg, 0.033 mmol, 72%). HRMS: MH+=1535.7500 Rt=2.50분 (5분 산성 방법-방법 D).
단계 4: 다음의 합성: 2-(2-((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L5-P1)
2-(2-((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L5-P1)를 실시예 3-1, 단계 3에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(2-(((프로프-2-인-1-일옥시)카르보닐)아미노)아세트아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (27.3 mg, 0.018 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
2-(2-((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)카르보닐)아미노)아세트아미도)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L5-P1): (18.9 mg, 9.33 μmol, 52%). HRMS: MH+=1944.9900 Rt=2.45분 (5분 산성 방법-방법 D).
실시예 3-5: 다음의 합성: 2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L6-P1)
Figure pct00431
(L6-P1)
단계 1: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00432
Tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 3-1, 단계 1에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-1)를 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (LI-5) (1.51 g, 2.52 mmol, 1.0 당량)로 대체하고 N,N-디이소프로필에틸아민을 생략하였다.
Tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트: (1.33 g, 1.741 mmol, 69%). LCMS: MH+ 764.3, Rt=1.00분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 2: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00433
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3, 단계 2에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (42.7 mg, 0.056 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (50.9 mg, 0.036 mmol, 64%). LCMS: MH+ 1406.0, Rt=1.14분 (2분 염기성 방법-방법 B).
단계 3: 다음의 합성: 2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00434
2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 3에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(디(프로프-2-인-1-일)카르바모일)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (50 mg, 0.036 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (79 mg, 0.036 mmol, 99%). LCMS: [M+2H]2+ 1112.8, Rt=1.04분 (2분 산성 방법-방법 A).
단계 4: 다음의 합성: 2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L6-P1)
2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L6-P1)를 실시예 3-1, 단계 4에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (79 mg, 0.036 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
2-(비스((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바모일)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L6-P1) (8.1 mg, 3.32 μmol, 9%). HRMS: MH+=2319.2450 Rt=2.47분 (5분 산성 방법-방법 D).
실시예 3-6: 다음의 합성: (1R,3S,4S)-2-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(75-메틸-74-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-75-아자헥사헵타콘탄-76-일)벤질)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-메틸-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-윰 (L137-P2) 또는 (1R,3S,4S)-2-(2-(((1-(38-카르복시-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카옥사옥타트리아콘틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-메틸-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-윰 (L140-P2)
단계 1: 다음의 합성: tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
Figure pct00435
0℃의 아세토니트릴 (13.3 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (2.00 g, 3.65 mmol, 1.0 당량)의 용액에 티오닐 클로라이드 (0.53 mL, 7.30 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 빙조에서 1시간 동안 교반시킨 후, 용액을 물 (40 mL)로 희석시키고, 생성된 백색 침전물을 여과, 공기 건조 및 고 진공 하에서의 건조에 의해 수집하여 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(클로로메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 생성하였다. LCMS: MNa+ 588.5; Rt=2.17분 (5분 산성 방법).
단계 2: 다음의 합성: (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트
Figure pct00436
CH2Cl2 (10 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(히드록시메틸)벤질)(메틸)카르바메이트 (200 mg, 0.269 mmol, 1.0 당량)에 피리딘 (0.130 mL, 1.61 mmol, 6 당량)을 첨가하였다. 불균질 혼합물을 0℃ 빙조에서 티오닐 클로라이드 (0.059 mL, 0.806 mmol, 3 당량)에서 냉각시켰다. 빙조에서 잠시 교반시킨 후, 반응물을 실온까지 2시간 동안 가온하면서 교반시켰다. 반응물을 ISCO SiO2 크로마토그래피 (0~30% MeOH/CH2Cl2)로 정제하고, (9H-플루오렌-9-일)메틸 (5-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)-2-(클로로메틸)벤질)(메틸)카르바메이트를 수득하였다. LCMS: MH+=763.2; Rt=1.18분 (2분 산성 방법).
단계 3: 다음의 합성: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (P2)
Figure pct00437
(1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드를 표준 환원성 아민화 조건 하에 파라포름알데히드로 처리하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드를 생성할 수 있다.
단계 4: 표 4C의 L137-P2, L140-P2 및 기타 화합물의 합성은 다음 반응식 중 하나에 따라 이루어질 수 있다:
Figure pct00438
실시예 3-1 내지 3-6에 기술된 방법을 사용하여 합성할 수 있는 추가적인 링커-약물 화합물의 예가 하기 표 4A~4C에 제공되어 있다.
[표 4A]
Figure pct00439
Figure pct00440
Figure pct00441
Figure pct00442
Figure pct00443
Figure pct00444
Figure pct00445
Figure pct00446
Figure pct00447
Figure pct00448
Figure pct00449
Figure pct00450
Figure pct00451
Figure pct00452
[표 4B]
Figure pct00453
Figure pct00454
Figure pct00455
Figure pct00456
Figure pct00457
Figure pct00458
Figure pct00459
Figure pct00460
Figure pct00461
Figure pct00462
Figure pct00463
Figure pct00464
Figure pct00465
Figure pct00466
Figure pct00467
Figure pct00468
Figure pct00469
Figure pct00470
Figure pct00471
[표 4C]
Figure pct00472
Figure pct00473
Figure pct00474
Figure pct00475
Figure pct00476
Figure pct00477
Figure pct00478
Figure pct00479
Figure pct00480
Figure pct00481
Figure pct00482
Figure pct00483
Figure pct00484
Figure pct00485
Figure pct00486
Figure pct00487
Figure pct00488
Figure pct00489
Figure pct00490
실시예 4: 비-페길화 링커-약물 화합물의 합성
실시예 4-1: 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L1-P1)
Figure pct00491
(L1-P1)
단계 1. 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure pct00492
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 실시예 3-1, 단계 2에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-((프로프-2-인-1-일옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (36 mg, 0.056 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트: (65 mg, 0.051 mmol, 91%). LCMS: MH+=781.4 (단편), Rt=2.55분 (5분 산성 방법-방법 C).
단계 2. 다음의 합성: 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L1-P1)
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L1-P1)를 실시예 3-1, 단계 4에 설명된 절차를 사용하여 수득하였으며, 단 2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사펜타코산-25-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)메틸)-4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (25.5 mg, 0.020 mmol, 1.0 당량)로 대체하였다.
4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자바이시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (L1-P1): (19 mg, 0.014 mmol, 68%). HRMS: M+=1381.7100, Rt=2.52분 (5분 산성 방법-방법 D).
실시예 5: P-카드헤린 항체 약물 콘쥬게이트의 생성 및 특성화
실시예 5A: 특정 시스테인(Cys) 돌연변이를 갖는 P-카드헤린 항체의 제조
부위-특이적 시스테인 돌연변이를 갖는 항-p-카드헤린 항체, 특히 P-Cad mab2의 제조는 (NOV169N31Q로서) WO 2016/203432에 이전에 기술된 바 있으며, 이의 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 라이너(Liner)-약물에 *?*대한 Cys 돌연변이 항-p-카드헤린 항체의 환원, 재산화 및 콘쥬게이션
포유동물 세포에서 발현된 항체의 조작된 Cys 잔기는 생합성 중에 부가물(디술피드), 예컨대 글루타티온(GSH) 및/또는 시스테인에 의해 변형되기 때문에(문헌[Chen et al. 2009]), 처음에 발현된 변형된 Cys는 티올 반응성 시약, 예컨대 말레이미도 또는 브로모- 아세트아미드 또는 요오도-아세트아미드 기에 대해 비반응성이다. 조작된 Cys 잔기를 콘쥬게이션시키기 위해서는, 디술피드를 환원시켜 글루타티온 또는 시스테인 부가물을 제거할 필요가 있으며, 이는 일반적으로 발현 항체의 모든 디술피드의 환원을 수반한다. 이는 먼저 항체를 디티오트레이톨(DTT)과 같은 환원제에 노출시킨 다음 항체의 모든 천연 디술피드 결합을 재산화시켜 기능적 항체 구조를 복원 및/또는 안정화시킴으로써 달성될 수 있다. 따라서, 천연 디술피드 결합 및 조작된 Cys 잔기(들)의 시스테인 또는 GSH 부가물들 사이의 디술피드 결합을 환원시키기 위해, 새로 제조된 DTT를 이전에 정제된 Cys 돌연변이 항체에 10 mM 또는 20 mM의 최종 농도까지 첨가하였다. 37℃에서 1시간 동안 DTT와 함께 항체를 인큐베이션한 후, 매일 완충액을 교환하면서 혼합물을 3일 동안 PBS에 대해 투석하여 DTT를 제거하였다. 대안적으로, DTT를 겔 여과 단계에 의해 제거할 수 있다. DTT를 제거한 후, 항체 용액을 재산화시켜 천연 디술피드 결합이 재형성되게 한다. 개별 중쇄 및 경쇄 분자로부터 항체 사량체를 분리할 수 있는 역상 HPLC로 재산화 과정을 모니터링하였다. 반응물을 80℃까지 가열된 PRLP-S 4000A 컬럼(50 mm x 2.1 mm, Agilent)에서 분석하고, 0.1%의 TFA를 함유하는 물 중의 30% 내지 60%의 아세토니트릴의 선형 구배에 의해 1.5 ml/분의 유량으로 컬럼 용출을 수행하였다. 컬럼으로부터의 단백질의 용출을 280 nm에서 모니터링하였다. 재산화가 완료될 때까지 인큐베이션을 계속하였다. 재산화 후, 말레이미드 함유 화합물((L1-P1), (L2-P1), (L3-P1), (L4-P1) 또는 (L5-P1) 또는 (L6-P1))을 조작된 Cys에 대하여 전형적으로 1:1, 1.5:1, 2.5:1, 또는 5:1의 몰비로 PBS 완충액(pH 7.2) 중 재산화 항체에 첨가하고, 5 내지 60분 또는 그 이상 동안 인큐베이션을 수행하였다. 전형적으로, 표준 방법에 의한 단백질 A 수지를 통한 정제에 이어 PBS로 완충액 교환을 하여 여분의 유리 화합물을 제거하였다.
Cys 돌연변이 항체를 대안적으로 온-수지(on-resin) 방법을 사용하여 환원 및 재산화시켰다. 단백질 A 세파로스 비드(10 mg 항체당 1 ml)를 PBS(칼슘 또는 마그네슘 염 없음)에서 평형화하고, 그 후 배치 모드에서 항체 샘플에 첨가하고 15~20분 동안 인큐베이션하였다. pH 8.0의 0.5 M 인산나트륨 250 ml에 3.4 g의 NaOH를 첨가하여 제조된 용액 10 ml에 850 mg의 시스테인 HCl을 용해시켜 0.5 M 시스테인의 스톡을 제조하였다. 그 후, 20 mM 시스테인을 항체/비드 슬러리에 첨가하고, 실온에서 30~60분 동안 부드럽게 혼합하였다. 비드를 중력 컬럼에 로딩하고, 30분 내에 50 베드 부피의 PBS로 세척한 후, 1 베드 부피의 PBS에 재현탁된 비드로 컬럼을 캡핑하였다. 재산화의 속도를 조정하기 위하여, 50 nM 내지 1 μM의 염화구리를 선택적으로 첨가하였다. 재산화 진행을 다양한 시점에서 모니터링하였으며, 여기서, 25 μL의 수지 슬러리를 제거하고, 1 μL의 20 mM MC-valcit-MMAE를 첨가하고, 튜브를 수 회 교반시켰다. 그 후 수지를 원심분리하고, 상청액을 제거하고, 그 후 50 μL의 항체 용출 완충액(Thermo)으로 용출시키고, 상청액으로 수지를 펠렛화하여 Agilent PLRP-S 4000A 5 μm, 4.6x50 mm 컬럼을 사용하여 역상 크로마토그래피로 분석하였다(완충액 A는 물, 0.1% TFA, 완충액 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 유지된 컬럼, 유량 1.5 ml/분). 재산화가 원하는 완료성까지 진행되었으면, 조작된 시스테인에 대한 1~5 몰당량의 화합물((L1-P1), (L2-P1), (L3-P1), (L4-P1) 또는 (L5-P1) 또는 (L6-P1))의 첨가에 의해 콘쥬게이션이 즉시 개시될 수 있었고, 혼합물을 실온에서 5~10분 동안 반응시킨 후, 컬럼을 적어도 20 컬럼 부피의 PBS로 세척하였다. 항체 콘쥬게이트를 항체 용출 완충액(Thermo)으로 용출시키고, pH 8.0의 0.5 M 인산나트륨 0.1 부피로 중화시키고, PBS로 완충액 교환을 하였다.
대안적으로, 수지에서 항체와의 콘쥬게이션을 개시하는 대신, 적어도 20 컬럼 부피의 PBS로 컬럼을 세척하고, 항체를 IgG 용출 완충액으로 용출시키고 pH 8.0의 완충액으로 중화시켰다. 그 후, 항체를 콘쥬게이션 반응에 사용하거나, 향후 사용을 위해 급속 동결시켰다.
실시예 5B (P-Cad mab2-L1-P1): P-Cad mab2 항체의 용액 (4.0 mg, 1x PBS 완충액 중 5.0 mg/mL 용액 800 μL, 0.027 μmol, 1.0 당량)에 L1-P1 (DMSO 중 20 mM 용액 10.76 μL, 0.215 μmol, 8.0 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 400 rpm에서 진탕시키고, 이때 혼합물을 초원심분리 (4 mL Amicon 10 kD 컷오프 막 필터, PBS 완충액으로 샘플을 4 mL의 총 부피까지 희석한 후 7500 x g에서 10분 동안 원심분리, 6회 반복)에 의해 정제하였다. 5.0 mg/mL까지 희석시킨 후, 콘쥬게이트 P-Cad mab2-L1-P1을 수득하였다 (4.08 mg, 0.027 μmol, 99%). HRMS 데이터 (단백질 방법)는 154192의 질량을 나타내며, 이때 DAR은 DAR3 및 DAR4 종에 대한 피크의 MS 강도를 비교하여 계산할 경우 3.8이다. 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)는 210 및 280 nm에서 고분자량 피크 흡광도의 면적을 단량체 ADC에 대한 피크 흡광도의 면적과 비교하여 결정되는 바와 같이 <1% 응집률을 나타낸다.
실시예 5C (P-Cad mab2-L4-P1): 실시예 5B에 설명된 절차에 따라, P-Cad mab2 항체 (2.5 mg, 5.0 mg/mL 용액 500 μL, 0.017 μmol, 1.0 당량) 및 L4-P1 (DMSO 중 10 mM 용액 13.45 μL, 0.135 μmol, 8.0 당량)을 사용하여, 콘쥬게이트 P-Cad mab2-L4-P1을 수득하였다 (2.64 mg, 0.017 μmol, 99%). HRMS 데이터 (단백질 방법)는 156104의 질량을 나타내며, 이때 DAR은 3.9이다. SEC는 <1% 응집률을 나타낸다.
실시예 5D (P-Cad mab2-L2-P1): 실시예 5B에 설명된 절차에 따라, P-Cad mab2 항체 (2.0 mg, 5.0 mg/mL 용액 400 μL, 0.027 μmol, 1.0 당량) 및 L2-P1 (DMSO 중 20 mM 용액 5.38 μL, 0.108 μmol, 8.0 당량)을 사용하여, 콘쥬게이트 P-Cad mab2-L2-P1을 수득하였다 (2.01 mg, 0.013 μmol, 96%). HRMS 데이터 (단백질 방법)는 156333의 질량을 나타내며, 이때 DAR은 3.9이다. SEC는 <1% 응집률을 나타낸다.
실시예 5E (P-Cad mab2-L3-P1): 실시예 5B에 설명된 절차에 따라, P-Cad mab2 항체 (2.5 mg, 5.0 mg/mL 용액 500 μL, 0.017 μmol, 1.0 당량) 및 L3-P1 (DMSO 중 20 mM 용액 5.89 μL, 0.118 μmol, 7.0 당량)을 사용하여, 콘쥬게이트 P-Cad mab2-L3-P1을 수득하였다 (2.15 mg, 0.014 μmol, 81%). HRMS 데이터 (단백질 방법)는 158065의 질량을 나타내며, 이때 DAR은 4.0이다. SEC는 1% 응집률을 나타낸다.
실시예 5F (P-Cad mab2-L5-P1): 실시예 5B에 설명된 절차에 따라, P-Cad mab2 항체 (2.5 mg, 5.0 mg/mL 용액 500 μL, 0.017 μmol, 1.0 당량) 및 L5-P1 (DMSO 중 20 mM 용액 5.89 μL, 0.118 μmol, 7.0 당량)을 사용하여, 콘쥬게이트 P-Cad mab2-L5-P1을 수득하였다 (2.31 mg, 0.015 μmol, 88%). HRMS 데이터 (단백질 방법)는 156446의 질량을 나타내며, 이때 DAR은 3.7이다. SEC는 1% 응집률을 나타낸다.
실시예 5G (P-Cad mab2-L6-P1): 실시예 5B에 설명된 절차에 따라, P-Cad mab2 항체 (2.5 mg, 5.0 mg/mL 용액 500 μL, 0.017 μmol, 1.0 당량) 및 L6-P1 (DMSO 중 10 mM 용액 13.44 μL, 0.134 μmol, 8.0 당량)을 사용하여, 콘쥬게이트 P-Cad mab2-L6-P1을 수득하였다 (2.28 mg, 0.015 μmol, 86%). HRMS 데이터 (단백질 방법)는 158100의 질량을 나타내며, 이때 DAR은 3.8이다. SEC는 <1% 응집률을 나타낸다.
실시예 6: 항-P-카드헤린 ADC의 시험관 내 평가
세포주
항체 약물 콘쥬게이트를 다음의 4가지 내인성 암 세포주 및 관심 표적을 과발현하도록 조작된 1가지의 동종동계 세포주에 대하여 테스트하였다. FaDu (ATCC 번호 HTB-43, 이글 최소 필수 배지(Eagle's Minimum Essential Medium) + 10% FBS에서 배양), HCC70 (ATCC 번호 CRL-2315, RPMI-1640 + 10% FBS에서 배양), HCC1954 (ATCC 번호 CRL-2338, RPMI-1640 + 10% FBS에서 배양) 및 HT-29 (ATCC 번호 HTB-38, 변형 맥코이 5a 배지(McCoy’s 5a Medium Modified) + 10% FBS에서 배양). HT-29 세포주를 형질감염시켜 관심 외인성 단백질인 P-카드헤린을 발현하는 안정한 HT-29 세포주, HT-29 PCAD+ (변형 맥코이 5a 배지 + 10% FBS에서 배양)를 생성하였다.
세포의 증식 및 생존의 억제
세포의 증식 및 생존을 억제하는 P-카드헤린 링커 변이체 항체 약물 콘쥬게이트의 능력을 Promega CellTiter-Glo® 증식 분석을 사용하여 평가하였다.
세포주를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 증식 분석을 위한 시딩 전에, 세포를 분석 최소 2일 전에 분할하여 최적의 성장 밀도를 보장하였다. 시딩 당일에, 세포를 0.25% 트립신을 사용하여 조직 배양 플라스크에서 들어 올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기(Vi-Cell XR Cell Viability Analyzer, Beckman Coulter)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 백색 투명 바닥 384웰 TC 처리 플레이트(Corning 카탈로그
번호 3765)에 시딩하였다. HT-29 세포 및 HT-29 PCAD+ 세포를 45 μL의 표준 성장 배지에서 웰당 500개 세포의 밀도로 시딩하였다. FaDu, HCC70 및 HCC1954 세포를 45 μL의 표준 성장 배지에서 웰당 1,500개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 다음 날, 유리 MMAE(모노메틸 아우리스타틴 E), P-카드헤린 표적화 ADC 및 비-표적화 이소타입 ADC를 표준 성장 배지에서 10X로 제조하였다. 그 후, 제조된 약물 처리제를 세포에 첨가하여 웰당 50 μL의 최종 부피 및 0.0076 ~ 150 nM의 최종 농도를 생성하였다. 각각의 약물 농도를 사중으로 테스트하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 5일 동안 인큐베이션하고, 그 후 세포를 용해시키고 총 아데노신 트리포스페이트(ATP) 함량을 측정하는 시약인 CellTiter Glo® (Promega, 카탈로그 번호 G7573) 25 μL를 첨가하여 세포 생존율을 평가하였다. 발광 판독기(EnVision Multilabel Plate Reader, PerkinElmer)를 사용하여 판독하기 전에 발광 신호를 안정화하기 위해 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 약물 처리제의 효과를 평가하기 위하여, 비처리 세포(100% 생존율)를 포함하는 웰의 발광 카운트를 사용하여 처리 샘플을 정규화하였다. 가변 기울기 모델을 사용하여 GraphPad PRISM 버전 7.02 소프트웨어의 데이터에 비선형 회귀 곡선을 맞추었다. IC50 및 Amax 값을 생성된 곡선으로부터 외삽하였다.
5가지의 대표적인 암 세포주의 용량 반응 곡선이 도 1에 예시되어 있다. 세포의 성장 또는 생존의 50%를 억제하는 데 필요한 처리제의 농도(IC50)는 표 5에 요약된 테스트된 세포주의 대표적인 IC50 값을 이용하여 계산하였다.
[표 5]
Figure pct00493
카스파아제-3/7 활성의 유도
증식에 대한 영향 외에도, 카스파아제-3/7 활성을 유도하는 능력에 대하여 링커 변이체를 포함하는 P-카드헤린 표적화 ADC를 또한 평가하였다.
세포주 HCC1954를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 성장에 최적인 배지에서 배양하였다. 분석을 위한 시딩 전에, 세포를 분석 최소 2일 전에 분할하여 최적의 성장 밀도를 보장하였다. 시딩 당일에, 세포를 0.25% 트립신을 사용하여 조직 배양 플라스크에서 들어 올렸다. 세포 생존율 및 세포 밀도를 세포 계수기(Vi-Cell XR Cell Viability Analyzer, Beckman Coulter)를 사용하여 결정하였다. 85% 초과의 생존율을 갖는 세포를 백색 투명 바닥 384웰 TC 처리 플레이트(Corning 카탈로그 번호 3765)에서 20 μL의 표준 성장 배지에서 웰당 3,000개 세포의 밀도로 시딩하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 다음 날, 유리 MMAE(모노메틸 아우리스타틴 E), ADC를 표적화하는 P-카드헤린 및 비-표적화 이소타입 ADC를 표준 성장 배지에서 5X로 제조하였다. 그 후, 제조된 약물 처리제를 세포에 첨가하여 웰당 25 μL의 최종 부피 및 0.0076 ~ 300 nM의 최종 농도를 생성하였다. 각각의 약물 농도를 사중으로 테스트하였다. 플레이트를 조직 배양 인큐베이터에서 5% CO2, 37℃에서 24시간 및 48시간 동안 인큐베이션하고, 그 후, 세포를 용해시키고 발광성 카스파아제-3/7 기질의 카스파아제 절단 후 발광 신호를 생성하는 시약인 Caspase-Glo® 3/7 (Promega, 카탈로그 번호 G8093) 25 μL를 첨가하여 카스파아제-3/7 활성을 평가하였다. 플레이트를 세포 용해를 유도하도록 5분 동안 적절한 혼합을 제공하는 속도로 오비탈 진탕기에서 실온의 암실에서 인큐베이션하였다. 그 후 발광 판독기(EnVision Multilabel Plate Reader, PerkinElmer)를 사용하여 판독하기 전에 발광 신호를 안정화하기 위해 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 약물 처리제의 효과를 평가하기 위하여, 비처리 세포(100% 생존율)를 포함하는 웰의 발광 카운트를 사용하여 처리 샘플을 정규화하였다. 가변 기울기 모델을 사용하여 GraphPad PRISM 버전 7.02 소프트웨어의 데이터에 비선형 회귀 곡선을 맞추었다.
HCC1954의 용량 반응 곡선이 도 2에 예시되어 있다.
실시예 7: 마우스에서 HCC70 삼중 음성 유방암(TNBC) 모델에 대한 항-P-카드헤린 ADC의 생체 내 효능
상기 시험관 내 연구는 항-PCAD-ADC에 의한 HCC70 세포주에서의 세포 성장의 표적 의존적이고 강력한 억제를 보여주었기 때문에, 이 TNBC 모델에서 생체 내에서의 이들 ADC의 항종양 활성을 평가하였다.
방법
10% FCS (BioConcept Ltd. Amimed, # 2-01F30), 2　mM L-글루타민 (BioConcept Ltd. Amimed, #5-10K00-H), 1 mM 피루브산나트륨 (BioConcept Ltd. Amimed, #5-60F00-H), 10 mM HEPES (Gibco #11560496) 및 14 mM D-글루코스 (Life Technologies, # A2494001)가 보충된 RPMI1640 (BioConcept Ltd. Amimed)에서 공기 중 5% CO2의 분위기에서 37℃에서 HCC70 세포를 배양하였다. HCC70 이종이식편을 확립하기 위하여 세포를 수확하고, HBSS (Gibco, #14175)에 재현탁하고, Matrigel (BD Bioscience, #354234)(1:1 v/v)과 혼합한 후 1 x 107개의 세포를 포함하는 100 μL를 암컷 SCID 베이지색 마우스 (Charles River, 독일)의 유방 지방 패드에 가깝게 피하 주사하였다. 세포 접종 후 종양 성장을 정기적으로 모니터링하고, 동물을 약 200 mm3의 평균 종양 부피를 갖는 처리군 (n=6)으로 무작위화하였다. 대조군은 비처리되었고, 나머지 군은 5 mg/kg의 단회 정맥내 (iv) 용량의 투여에 의해 이소타입-ADC 또는 항-PCAD-ADC로 처리하였다. 5 mg/kg 용량을 선택하였으며, 그 이유는 이것이 이 모델에서 ADC 후보 간의 차이를 식별하기 위한 창을 제공할 것으로 예상되었기 때문이다. 용량은 개별 마우스 체중에 맞추어 조정하였다. iv 용량 부피는 10 ml/kg이었고 각각의 ADC는 물 중 0.9%(w/v) NaCl에 용해시켰다.
처리 후 20일차의 종양 부피 데이터는 GraphPad Prism 7.00(GraphPad Software)을 사용하여 통계적으로 분석하였다. 종양 부피는 20일차의 양쪽의 어느 한 날에 측정할 경우 20일차에 외삽되었다. 데이터에서의 분산이 정규 분포를 따르는 경우, 데이터를 처리군 대 비처리 대조군의 비교를 위해 Dunnett 사후 검정을 이용한 일원 분산 분석을 사용하여 분석하였다. 이소타입 대조군 대 상응하는 ADC 처리군의 종양 부피의 비교를 위하여, 데이터가 정규 분포를 따르는 경우 t-검정을 사용하거나 데이터가 정규 분포를 따르지 않은 경우 Mann Whitney 검정을 사용하였다. 적용가능한 경우, 결과는 평균 ± SEM으로 제시된다.
효능의 척도로서의 %T/C 값은 다음에 따라 실험 종료시에 계산된다:
(Δ종양 부피처리군/Δ종양 부피대조군)*100
종양 퇴행은 다음에 따라 계산하였다:
-(Δ종양 부피처리군/종양 부피시작시 처리군)*100
여기서 △종양 부피는 평가일에서의 평균 종양 부피 마이너스 실험 시작시의 평균 종양 부피를 나타낸다.
결과: 효능 및 내용성
모든 항-PCAD-ADC 처리군의 평균 종양 부피는 20일차에 비처리군 및 상응하는 huIgG1 이소타입-매칭 ADC 대조군과 유의하게 상이하였다(일원 분산 분석; Dunn 방법, 또는 t-검정 또는 Mann Whitney 검정, p ≤ 0.05) (표 6, 도 3). 비처리군과 비교하여 20일차에 어떤 군에서도 유의한 체중 손실이 관찰되지 않았다(그림 3).
[표 6]
Figure pct00494
본원에 기술된 실시예 및 실시 형태는 단지 예시의 목적을 위한 것이고, 이에 비추어 다양한 변형 또는 변경이 당업자에게 제안될 것이며, 이러한 변형 또는 변경은 본 출원의 사상과 범위 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되는 것으로 이해된다.
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Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 151 caggtgcaat tgcagcagag cggtccgggc ctggtgaaac cgagccagac cctgagcctg 60 acctgcgcga tttccggaga tagcgtgagc tctcagtctg ctgcttggaa ctggattcgt 120 cagagcccga gccgtggcct cgagtggctg ggccgtatct actaccgtag caaatggtac 180 aacgactatg ccttgagcgt gaaaagccgc attaccatta acccggatac ttcgaaaaac 240 cagtttagcc tgcaactgaa cagcgtgacc ccggaagata cggccgtgta ttattgcgcg 300 cgtggtgaag gttacggtcg tgaaggtttc gctatctggg gccaaggcac cctggtgact 360 gttagctca 369 <210> 152 <211> 1359 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 152 caggtgcaat tgcagcagag cggtccgggc ctggtgaaac cgagccagac cctgagcctg 60 acctgcgcga tttccggaga tagcgtgagc tctcagtctg ctgcttggaa ctggattcgt 120 cagagcccga gccgtggcct cgagtggctg ggccgtatct actaccgtag caaatggtac 180 aacgactatg ccttgagcgt gaaaagccgc attaccatta acccggatac ttcgaaaaac 240 cagtttagcc tgcaactgaa cagcgtgacc ccggaagata cggccgtgta ttattgcgcg 300 cgtggtgaag gttacggtcg tgaaggtttc gctatctggg gccaaggcac cctggtgact 360 gttagctcag cctctacgaa aggcccaagc gtatttcccc tggctccttc tagtaaatca 420 acctcaggtg gtacagcagc ccttggctgc ctggtcaaag actatttccc ctgtccggtg 480 accgtctcat ggaactcagg tgctttgaca tctggtgtgc atacattccc agctgtgctg 540 caaagtagtg gactgtacag cctttccagc gtggtcacgg tgccaagtag ctccttgggt 600 actcagactt atatctgcaa tgtgaaccac aagccctcta acacgaaggt ggacaagcgc 660 gtggagccca aatcttgcga taagacgcat acttgtcccc catgccctgc tcctgagctg 720 ttgggaggcc cgtcagtgtt cttgttccct ccgaagccta aggacacttt gatgataagt 780 aggacaccag aggtgacttg cgtggtggtt gatgtgtccc atgaagatcc cgaggtcaaa 840 tttaattggt acgtagatgg tgtcgaagtt cacaatgcta agactaagcc aagggaagag 900 cagtacaaca gtacatatag ggtagtctcc gtgctgacag tcctccacca ggactggttg 960 aacggcaagg aatacaaatg taaggtgtca aacaaagctc tgcctgctcc cattgagaaa 1020 acaatctcta aagccaaagg ccagccgaga gagccccaag tctacacttt gcccccgagc 1080 agggaggaaa tgaccaagaa tcaggtgagt ctgacgtgcc tcgtcaaagg attttatcca 1140 tgcgatattg cagttgaatg ggagagcaat ggccagccag agaacaacta taaaaccaca 1200 ccacccgtgc tcgactctga tggcagcttc ttcctctata gcaagctgac agtcgataaa 1260 tctcgctggc agcaaggcaa tgtgttctcc tgctccgtca tgcacgaggc tttgcataac 1320 cattatactc aaaaatctct gtccctgtca cctggtaaa 1359 <210> 153 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 153 gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacctgca gagccagcca gactatttct aacactctgg cttggtacca gcagaaaccg 120 ggcaaagcgc cgaaactatt aatctacgct gcttctaacc tgcaaagcgg cgtgccgagc 180 cgctttagcg gcagcggatc cggcaccgat ttcaccctga ccattagctc tctgcaaccg 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tacctgtctt ggttcacctt tggccagggc 300 acgaaagttg aaattaaa 318 <210> 154 <211> 639 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 154 gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacctgca gagccagcca gactatttct aacactctgg cttggtacca gcagaaaccg 120 ggcaaagcgc cgaaactatt aatctacgct gcttctaacc tgcaaagcgg cgtgccgagc 180 cgctttagcg gcagcggatc cggcaccgat ttcaccctga ccattagctc tctgcaaccg 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tacctgtctt ggttcacctt tggccagggc 300 acgaaagttg aaattaaacg tacggtggcc gctcccagcg tgttcatctt cccccccagc 360 gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420 cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggaa 480 agcgtcaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg 540 agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600 tccagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639 <210> 155 <400> 155 000 <210> 156 <400> 156 000 <210> 157 <400> 157 000 <210> 158 <400> 158 000 <210> 159 <400> 159 000 <210> 160 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 160 Gly Phe Leu Gly 1 <210> 161 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 161 Gly Leu Phe Gly 1 <210> 162 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 162 Ala Leu Ala Leu 1 <210> 163 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 163 Gly Gly Gly Gly 1 <210> 164 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 164 Gly Phe Val Gly 1 <210> 165 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 165 Gly Val Phe Gly 1 <210> 166 <400> 166 000

Claims (48)

  1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    [화학식 I]
    Figure pct00495

    (여기서,
    R1은 반응기이며;
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
    G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00496
    Figure pct00497
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티이며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결됨).
  2. 제1항에 있어서,
    R1은 반응기이며;
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    Figure pct00498
    기는
    Figure pct00499
    로부터 선택되는 것으로서,
    Figure pct00500
    의 *는 약물 모이어티의 N 또는 O에 대한 부착점을 나타내고,
    Figure pct00501
    의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00502
    Figure pct00503
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티이며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  3. 하기 화학식 II의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염인 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    [화학식 II]
    Figure pct00504

    (여기서,
    R1은 반응기이며;
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00505
    Figure pct00506
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티이며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결됨).
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00507
    , -ONH2, -NH2,
    Figure pct00508
    Figure pct00509
    -N3,
    Figure pct00510
    , -SH, -SR3, -SSR4, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NHS(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I,
    Figure pct00511
    , -C(O)NHNH2,
    Figure pct00512
    Figure pct00513
    Figure pct00514
    Figure pct00515
    이며;
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리펩티드, 폴리사르코신, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00516
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    R4는 2-피리딜 또는 4-피리딜이며;
    각각의 R5는 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 R7은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    X1은
    Figure pct00517
    이며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00518
    Figure pct00519
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00520
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    (i) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**,
    -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**,
    -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** , -NH-, 또는 -CH2N(Rb)C(=O)CH2-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내거나; 또는
    (ii) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*, 또는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*이고, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00521
    , -ONH2,
    Figure pct00522
    , 또는
    Figure pct00523
    이며;
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00524

    Figure pct00525
    및
    Figure pct00526
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00527
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00528
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00529
    Figure pct00530
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00531
    이며;
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00532
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00533
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
    -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00534
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00535
    Figure pct00536
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00537
    이며;
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00538
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00539
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
    -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00540
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00541
    이며;
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00542
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00543
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00544
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00545
    이며;
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내고, L1의 **는 R1에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00546
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 G의 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00547
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜이며;
    A는 결합 또는 -OC(=O)*로서, *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00548

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00549

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  12. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00550

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  13. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00551

    (여기서, 각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택됨).
  14. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00552

    (여기서, 각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택됨).
  15. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00553

    (여기서, Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  16. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00554

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  17. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00555

    (여기서, Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  18. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00556
    .
  19. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00557
    .
  20. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00558
    .
  21. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00559
    .
  22. 하기 구조를 갖는 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    Figure pct00560
    .
  23. 하기 화학식 V의 구조를 갖는 링커:
    [화학식 V]
    Figure pct00561

    (여기서,
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
    G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
    A는 결합, **-OC(=O)-,
    Figure pct00562
    Figure pct00563
    , **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티임).
  24. 제23항에 있어서,
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
    A는 결합, **-OC(=O)-,
    Figure pct00564
    Figure pct00565
    , **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티인 링커.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서,
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    Figure pct00566
    기는
    Figure pct00567
    로부터 선택되는 것으로서,
    Figure pct00568
    의 *는 약물 모이어티의 N 또는 O에 대한 부착점을 나타내고,
    Figure pct00569
    의 ***는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
    A는 결합, **-OC(=O)-,
    Figure pct00570
    Figure pct00571
    , **-OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 **-OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 **는 L2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티인 링커.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 VI의 구조를 갖는 링커:
    [화학식 VI]
    Figure pct00572

    (여기서,
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 2가 펩티드 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-,
    Figure pct00573
    Figure pct00574
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    L3은 스페이서 모이어티임).
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-,
    Figure pct00575
    Figure pct00576
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    L3은 스페이서 모이어티인 링커.
  28. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)O(CH2)mSSC(R3)2(CH2)mC(=O)NR3(CH2)mNR3C(=O)(CH2)m-**; *-C(=O)O(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mNH(CH2)nC(=O)-**; *-C(=O)(CH2)mX1(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nNHC(=O)(CH2)nX1(CH2)n-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)nC(=O)NH(CH2)m-**; *-C(=O)(CH2)mC(R3)2-** 또는 *-C(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-**로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00577
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    각각의 R3은 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    X1은
    Figure pct00578
    이며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는 글리신, 발린, 시트룰린, 라이신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 스페이서이며;
    A는 결합, -OC(=O)-,
    Figure pct00579
    Figure pct00580
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며;
    L3은 구조
    Figure pct00581
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    (i) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**,
    -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**,
    -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-**, -NH-, 또는 -CH2N(Rb)C(=O)CH2-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내거나; 또는
    (ii) W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)O-**, -NHC(=O)C(Rb)2NH-**, NHC(=O)C(Rb)2NHC(=O)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-C4-6 시클로알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-*, ***-(CH2CH2O)n-C(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*, 또는 ***-CH2-트리아졸릴-C1-4 알킬렌-OC(O)NHS(O)2NH-(CH2CH2O)n-*이고, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 또는 3이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내는 링커.
  29. 제23항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00582

    Figure pct00583
    및
    Figure pct00584
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00585
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00586
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-,
    Figure pct00587
    Figure pct00588
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 링커.
  30. 제23항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00589
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00590
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -CH2N(X-R2)C(=O)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, -NHC(=O)NH-**, -OC(=O)NH-**, -S(O)2NH-**, -NHS(O)2-**, -C(=O)-, -C(=O)O-** 또는 -NH-이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합, 트리아졸릴 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00591
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-,
    Figure pct00592
    Figure pct00593
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)- 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 링커.
  31. 제23항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00594
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00595
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, -C(=O)N(X-R2)-**, -C(=O)NRb-**, -C(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)-**, -CH2NRbC(=O)NH-**, -CH2NRbC(=O)NRb-**, -NHC(=O)-**, -NHC(=O)O-**, 또는 -NHC(=O)NH-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 결합 또는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00596
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합 또는 -OC(=O)-인 링커.
  32. 제23항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00597
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00598
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**, -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**이고, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고, W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리알킬렌 글리콜, 당, 올리고당, 폴리사르코신, 폴리펩티드, 또는 C2-C6알킬(1 내지 3개의
    Figure pct00599
    기로 치환됨)로부터 선택되는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합 또는 -OC(=O)-인 링커.
  33. 제23항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 *-C(=O)(CH2)mO(CH2)m-**; *-C(=O)((CH2)mO)t(CH2)n-**; *-C(=O)(CH2)m-**; 또는 *-C(=O)NH((CH2)mO)t(CH2)n-으로서, L1의 *는 Lp에 대한 부착점을 나타내며;
    각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로부터 독립적으로 선택되며;
    각각의 t는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 및 30으로부터 독립적으로 선택되며;
    Lp는
    Figure pct00600
    로부터 선택되는 2가 펩티드 스페이서로서, Lp의 *는 L1에 대한 부착점을 나타내고 Lp의 **는 -NH- 기에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 구조
    Figure pct00601
    를 갖는 스페이서 모이어티로서,
    W는 -CH2O-**, -CH2N(Rb)C(=O)O-**, -NHC(=O)CH2NHC(=O)O-**,
    -CH2N(X-R2)C(=O)O-**, 또는 -C(=O)N(X-R2)-**로서, 각각의 Rb는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 W의 **는 X에 대한 부착점을 나타내며;
    X는 ***-CH2-트리아졸릴-*이고, X의 ***는 W에 대한 부착점을 나타내고, X의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    L3의 *는 R2에 대한 부착점을 나타내며;
    R2는 폴리에틸렌 글리콜이며;
    A는 결합 또는 -OC(=O)-인 링커.
  34. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00602

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  35. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00603

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  36. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00604

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  37. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00605

    (여기서, 각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택됨).
  38. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00606

    (여기서, 각각의 R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH로부터 독립적으로 선택됨).
  39. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00607

    (여기서, Xa는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  40. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00608

    (여기서, R은 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  41. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00609

    (여기서, Xb는 -CH2-, -OCH2-, -NHCH2- 또는 -NRCH2-이며, 각각의 R은 독립적으로 H, -CH3 또는 -CH2CH2C(=O)OH임).
  42. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00610
    .
  43. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00611
    .
  44. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00612
    .
  45. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00613
    .
  46. 제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 구조를 갖는 링커:
    Figure pct00614
    .
  47. 하기 화학식 III의 콘쥬게이트:
    [화학식 III]
    Figure pct00615

    (여기서,
    Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
    R100은 커플링 기이며;
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 2가 펩티드 링커이며;
    G-L2-A는 자가 희생 스페이서이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    L2는 결합, 메틸렌, 네오펜틸렌 또는 C2-C3알케닐렌이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00616
    Figure pct00617
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티이며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
    y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16임).
  48. 하기 화학식 IV의 콘쥬게이트:
    [화학식 IV]
    Figure pct00618

    (여기서,
    Ab는 항체 또는 이의 단편이며;
    R100은 커플링 기이며;
    L1은 가교 스페이서이며;
    Lp는 1 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이며;
    R2는 친수성 모이어티이며;
    A는 결합, -OC(=O)-*,
    Figure pct00619
    Figure pct00620
    , -OC(=O)N(CH3)CH2CH2N(CH3)C(=O)-* 또는 -OC(=O)N(CH3)C(Ra)2C(Ra)2N(CH3)C(=O)-*로서, 각각의 Ra는 H, C1-C6알킬 또는 C3-C8시클로알킬로부터 독립적으로 선택되고 A의 *는 D에 대한 부착점을 나타내며;
    L3은 스페이서 모이어티이며;
    D는 N 또는 O를 포함하는 약물 모이어티로서, D는 A로부터 약물 모이어티의 N 또는 O로의 직접 결합을 통하여 A에 연결되며;
    y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16임).
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