JP2023519974A - ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート - Google Patents

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Abstract

本開示は、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ、及び結合部分にコンジュゲートしたｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供する。本コンジュゲートを含む組成物も提供される。本化合物及び組成物は、疾患または状態、例えば、がんの治療を、それを必要とする対象において行うために有用である。【選択図】なし

Description

本開示は、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを提供し、ここでは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、結合部分にコンジュゲートしている。本コンジュゲートを含む組成物も提供される。コンジュゲート及び組成物は、がんの治療を、それを必要とする対象において行うために有用である。
タンパク質の分解は、免疫調節性イミド薬物の有効性により治療戦略として立証されている。これらの化合物は、セレブロン（ＣＲＢＮ）に結合し、ＣＲＬ４ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼにより媒介される基質タンパク質の補充及びユビキチン化を促進する能力を有する。免疫調節性イミドは、「分子接着剤」として作用し、リガーゼと新基質との間のタンパク質相互作用を再プログラムする疎水性パッチとして結合界面を満たすと考えられている。
これらの化合物は、がんに対する新規治療として反響を呼んでいるにもかかわらず、これまで、多発性骨髄腫及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）などの血液悪性腫瘍での使用に限定されてきた。多くが「創薬不可能」と考えられてきた、他のがんタンパク質を分解することにより機能することができる化合物のライブラリを拡大することは、薬物開発の活発な分野である。このため、これらの代替がんタンパク質を標的とし、多様ながんを治療することができる新しい化合物の必要性が継続的に存在する。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲート
Figure 2023519974000001
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ａが、１～１０の整数であり、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
Ｘが、－ＮＲ２－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｒ２）Ｖであり、
ｖが、１または２であり、
各Ｒ２が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１～６の整数であり、
ｍが、２～６の整数であり、
ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、
但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
Ｌが、切断可能なリンカーまたは切断可能でないリンカーであり、
Ｂｍが、タンパク質に特異的に結合することができる結合部分である。
いくつかの態様では、結合部分は、抗体、抗体断片、または抗体結合断片である。
いくつかの態様では、本開示は、ａが、２～８の整数である、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、切断可能でないリンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、Ｌは、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000002
 式中、
ｐが、１～１０の整数であり、
Figure 2023519974000003
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000004
 が、結合部分への結合点である。
いくつかの態様では、Ｌは、
Figure 2023519974000005
 である。
いくつかの態様では、ｐは、５である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、切断可能なリンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、切断可能なリンカーは、プロテアーゼにより切断可能である。いくつかの態様では、Ｌは、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000006
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、各々独立して、存在しないか、またはＬ－もしくはＤ－配位にある天然のアミノ酸残基であり、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とし、
Figure 2023519974000007
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000008
 が、結合部分への結合点である。
いくつかの態様では、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４は、独立して、存在しないか、またはＬ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、及びグリシンからなる群から選択され、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とする。
いくつかの態様では、Ｚ１は、存在しないか、またはグリシンであり、Ｚ２は、存在しないか、またはＬ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、及びグリシンからなる群から選択され、Ｚ３は、Ｌ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンからなる群から選択され、Ｚ４は、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択される。
ある特定の態様では、Ｌは、
Figure 2023519974000009
 である。
いくつかの態様では、ｑは、５である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、生体還元性リンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、Ｌは、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000010
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ’”が、各々独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６）２ＮＣ１－Ｃ６アルキル、及びＣ１－Ｃ６アルキルから選択されるか、または２つのジェミナルＲ基が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロブチルもしくはシクロプロピル環を形成することができ、
Figure 2023519974000011
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000012
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、酸切断可能なリンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、Ｌは、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000013
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000014
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000015
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、クリック－トゥ－リリース（ｃｌｉｃｋ－ｔｏ－ｒｅｌｅａｓｅ）リンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、Ｌは、以下から選択され、
Figure 2023519974000016
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000017
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000018
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、ピロホスファターゼ切断可能なリンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、Ｌは、以下であり、
Figure 2023519974000019
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000020
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000021
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｌが、ベータ－グルコシダーゼ切断可能なリンカーである、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、Ｌは、以下から選択され、
Figure 2023519974000022
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
－－－－が、存在しないか、または結合であり、
Figure 2023519974000023
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000024
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、本開示は、Ｂｍが、抗体またはその抗原結合部分である、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの態様では、結合部分が結合するタンパク質は、表面抗原である。
いくつかの態様では、表面抗原は、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１成長因子、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐ１ＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、ＸＡＧＥ１、またはそれらの組み合わせを含む。
ある特定の態様では、表面抗原は、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ４、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＲＯＰ－２、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、Ｂｍは、抗体であり、この抗体は、リツキシマブ、トラツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オンツキシマブ、イサツキシマブ、サシツズマブ、Ｕ３－１７８４、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、バランタマブ、インダツキシマブ、セツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ１３／５抗体、アレムツズマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、オレゴボマブ、及びベルツズマブからなる群から選択される。いくつかの態様では、抗体は、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＯＲ０００２１３（ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ）、リンツズマブ、またはゲムツズマブである。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｖが、１であり、
ｍ及びｎが、２であり、
Ｒ２が、メチルである。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｖが、２であり、
ｍ及びｎが、２であり、
各Ｒ２が、メチルである。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｏ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｎが、２である。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｓ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｎが、２である。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素であり、
Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
Ｒ２が、メチルである。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
Ｒ２が、水素である。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素であり、
Ｘが、－Ｃ（ＣＨ３）＝である。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、Ｃ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素であり、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｎが、１であり、
ｍが、２であり、
Ｒ２が、メチルである。
ある特定の態様では、本開示は、式（ＩＩ）の化合物
Figure 2023519974000025
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｒ２が、－Ｃ（Ｏ）Ｒ３、－Ｎ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＳＨ、－（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＳＨ、及び－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２から選択され、式中、
Ｒ３が、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
各Ｒ４が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｑ’が、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ４であり、
ｎが、１～６であり、
ｍが、２～５であり、
但し、Ｒ２が、ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎＮＨ２、または－（ＣＨ２）ｎＯＨである場合には、Ｒ１がハロであることを条件とする。
ある特定の態様では、本開示は、式（ＩＩＩ）の化合物
Figure 2023519974000026
 またはその薬学的に許容される塩を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、式（ＩＶ）の化合物
Figure 2023519974000027
 またはその薬学的に許容される塩を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、式（Ｖ）のコンジュゲート
Figure 2023519974000028
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、Ｂｍが、タンパク質に特異的に結合する結合部分である。いくつかの態様では、Ｂｍは、抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの態様では、結合部分が特異的に結合するタンパク質は、表面抗原である。
いくつかの態様では、表面抗原は、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１成長因子、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐ１ＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、ＸＡＧＥ１、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、表面抗原は、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ４、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＲＯＰ－２、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、Ｂｍは、抗体であり、この抗体は、リツキシマブ、トラツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オンツキシマブ、イサツキシマブ、サシツズマブ、Ｕ３－１７８４、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、バランタマブ、インダツキシマブ、セツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ１３／５抗体、アレムツズマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、オレゴボマブ、またはベルツズマブを含む。いくつかの態様では、抗体は、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＯＲ０００２１３、リンツズマブ、またはゲムツズマブである。
ある特定の態様では、本開示は、先行する態様のいずれか１つに記載のコンジュゲートもしくは化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、がんの治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、薬学的に許容される量の先行する態様のいずれかに記載のコンジュゲート、化合物、もしくは組成物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。いくつかの態様では、がんは、乳癌、胃癌、リンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、頭頸部癌、扁平上皮癌、及び／または肝細胞癌である。
いくつかの態様では、本方法は、対象に、薬学的に許容される量の追加の薬剤を、先行する態様のいずれか１つに記載のコンジュゲートもしくは化合物またはその薬学的に許容される塩の前に、後に、またはそれと同時に、投与することをさらに含む。いくつかの態様では、追加の薬剤は細胞毒性剤または免疫応答調節剤である。いくつかの態様では、免疫応答調節剤はチェックポイント阻害剤である。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、及び／またはＬＡＧ－３阻害剤を含む。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供し、本プロセスは、結合部分を、式（Ｉ－１）の化合物
Figure 2023519974000029
 またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
ａが、１～１０の整数であり、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）Ｖ－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
ｖが、１または２であり、
Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ２であり、
各Ｒ２が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１～６の整数であり、
ｍが、２～６の整数であり、
ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、
但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
Ｌ’が、結合部分にコンジュゲートする切断可能なまたは切断可能でないリンカーの前駆体である。
いくつかの態様では、本方法は、結合部分を、式（Ｉ－１）の化合物と反応させる前に、還元することをさらに含む。
いくつかの態様では、ａは、２～８の整数である。
いくつかの態様では、Ｌ’は、切断可能でないリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000030
 式中、
ｐが、１～１０の整数であり、
Figure 2023519974000031
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、Ｌ’は、
Figure 2023519974000032
 である。
いくつかの態様では、ｐは、５である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、切断可能なリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、切断可能なリンカーの前駆体は、プロテアーゼにより切断可能である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000033
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、各々独立して、存在しないか、またはＬ－もしくはＤ－配位にある天然のアミノ酸残基であり、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とし、
Figure 2023519974000034
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４は、独立して、存在しないか、またはＬ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、及びグリシンからなる群から選択され、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とする。
ある特定の態様では、Ｚ１は、存在しないか、またはグリシンであり、Ｚ２は、存在しないか、またはＬ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、及びグリシンからなる群から選択され、Ｚ３は、Ｌ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンからなる群から選択され、Ｚ４は、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択される。
いくつかの態様では、Ｌ’は、
Figure 2023519974000035
 である。
いくつかの態様では、ｑは、５である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、生体還元性リンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000036
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ’”が、各々独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６）２ＮＣ１－Ｃ６アルキル、及びＣ１－Ｃ６アルキルから選択されるか、または２つのジェミナルＲ基が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロブチルもしくはシクロプロピル環を形成することができ、
Figure 2023519974000037
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、酸切断可能なリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000038
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000039
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、クリック－トゥ－リリースリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下から選択され、
Figure 2023519974000040
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000041
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、ピロホスフェート切断可能なリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、
Figure 2023519974000042
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000043
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、Ｌ’は、ベータ－グルコロニダーゼ切断可能なリンカーの前駆体である。ある特定の態様では、Ｌ’は、以下から選択され、
Figure 2023519974000044
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
－－－－が、存在しないか、または結合であり、
Figure 2023519974000045
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、式（Ｉ－１）の化合物を、抗体またはその抗原結合部分を含む結合部分と反応させる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、表面抗原に結合する。
ある特定の態様では、表面抗原は、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１成長因子、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐ１ＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、ＸＡＧＥ１、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、表面抗原は、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ４、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＲＯＰ－２、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの態様では、Ｂｍは、抗体であり、この抗体は、リツキシマブ、トラツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オンツキシマブ、イサツキシマブ、サシツズマブ、Ｕ３－１７８４、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、バランタマブ、インダツキシマブ、セツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ１３／５抗体、アレムツズマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、オレゴボマブ、またはベルツズマブを含む。ある特定の態様では、抗体は、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＯＲ０００２１３、リンツズマブ、またはゲムツズマブである。
ある特定の態様では、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートを式（Ｉ－１）の化合物から調製する方法を提供し、式中、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｖが、１であり、
ｍ及びｎが、２であり、
Ｒ２が、メチルである。
いくつかの態様では、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｖが、２であり、
ｍ及びｎが、２であり、
各Ｒ２が、メチルである。
ある特定の態様では、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｏ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｎが、２である。
ある特定の態様では、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－Ｓ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｎが、２である。
いくつかの態様では、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素であり、
Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
Ｒ２が、メチルである。
いくつかの態様では、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、ハロであり、
Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
Ｒ２が、水素である。
ある特定の態様では、
Ａが、フェニルであり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素であり、
Ｘが、－Ｃ（ＣＨ３）＝である。
いくつかの態様では、
Ａが、Ｃ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素であり、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
ｎが、１であり、
ｍが、２であり、
Ｒ２が、メチルである。
いくつかの態様では、式（Ｉ－１）の化合物は、
Figure 2023519974000046
 である。
ＢＴ－４７４細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉａ））（三角形、実線）、トラスツズマブ単独（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独（十字）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（円）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。Ｌはリンカーである。 ＢＴ－４７４細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（三角形、実線）、ペルツズマブ単独（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独（十字）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（円）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 ＢＴ－４７４がん細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉｃ））（三角形、実線）、トラスツズマブ（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ４単独（十字）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（円）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 ＢＴ－４７４細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉｃ））（三角形、実線）、ペルツズマブ（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ４単独（十字）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（円）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 ＢＴ－４７４細胞株に対する、薬物：抗体比（ＤＡＲ）を変化させた代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ１．６（上向きの三角形、実線）、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ３（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉｂ））ＤＡＲ１．５（下向きの三角形、実線）、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉｃ））ＤＡＲ１．６（円、実線）、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉｄ））ＤＡＲ１．６（四角形、実線）、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）ＤＡＲ８（三角形、点線）、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉｃ））ＤＡＲ８（黒塗りの円、点線）、エンハーツ（登録商標）（菱形、点線）、及びトラスツズマブ（円、点線）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 ＢＴ－４７４細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ）） ＤＡＲ８（上向きの三角形、実線）、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉｃ））ＤＡＲ８（下向きの三角形、実線）、及びエンハーツ（登録商標）（菱形、点線）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 ＳＫ－ＢＲ－３細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラスツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉａ））（三角形、実線）、トラスツズマブ（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独（円）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（十字）で処理したときのＳＫ－ＢＲ－３細胞の生存％を示す。 ＳＫ－ＢＲ－３細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（三角形、実線）、ペルツズマブ（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独（円）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（十字）で処理したときのＳＫ－ＢＲ－３細胞の生存％を示す。 ＨＬ－６０細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（三角形）、マイロターグ（登録商標）（菱形）、及びトラスツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラスツズマブ－化合物（Ｉａ））（円）で処理したときのＨＬ－６０細胞の生存％を示す。 ＨＬ－６０細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ｈｕＭｙ９－６（ＩｇＧ１）－Ｌ－Ｐ１（例えば、ｈｕＭｙ９－６（ＩｇＧ１）－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ８（上向きの黒塗り三角形、実線）、ｈｕＭｙ９－６（ＩｇＧ１）－Ｌ－Ｐ１）（例えば、ｈｕＭｙ９－６（ＩｇＧ１）－化合物（Ｉｄ））ＤＡＲ８（下向きの黒塗り三角形、実線）、リンツズマブＩｇＧ１－Ｌ－Ｐ１（例えば、リンツズマブＩｇＧ１－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ８（上向きの白抜き三角形、点線）、リンツズマブＩｇＧ１－Ｌ－Ｐ１（例えば、リンツズマブＩｇＧ１－化合物（Ｉｄ））ＤＡＲ８（下向きの白抜き三角形、点線）、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ８（四角形）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（円、点線）で処理したときのＨＬ－６０細胞の生存％を示す。 ＨＬ６０細胞株に対する、薬物：抗体比（ＤＡＲ）を変化させた化合物（Ｉａ）のコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－Ｌ－Ｐ１（例えば、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ１．９（上向きの三角形、実線）、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－Ｌ－Ｐ１（例えば、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ３．９（下向きの三角形、実線）、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－Ｌ－Ｐ１（例えば、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ５．５（菱形、実線）、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－Ｌ－Ｐ１（例えば、ｈｕＭｙ９－６ ＩｇＧ１－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ８（四角形、実線）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（円、点線）で処理したときのＨＬ－６０細胞の生存％を示す。 ＨＬ６０細胞株に対する、薬物：抗体比（ＤＡＲ）を変化させた化合物（Ｉａ）のコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ１．２（上向きの三角形、実線）、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ１．８（下向きの三角形、実線）、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ２．３（菱形、実線）、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））ＤＡＲ８（四角形、実線）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（三角形、点線）で処理したときのＨＬ－６０細胞の生存％を示す。 Ｒａｍｏｓ細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は、抗体濃度ログ（Ｍ）を示し、Ｙ軸は、リツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（上向きの三角形、実線）、リツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（下向きの三角形、実線）、リツキシマブ（三角形、点線）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独（十字、点線）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ４単独（星形、点線）、及びトラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（円、点線）で処理したときのＲａｍｏｓ細胞生存％を示す。 Ｄａｕｄｉ細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は、抗体濃度ログ（Ｍ）を示し、Ｙ軸は、リツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（上向きの三角形、実線）、リツキシマブ（三角形、点線）、及びトラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（円、点線）で処理したときのＤａｕｄｉ細胞の生存％を示す。 Ｒａｍｏｓ細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は、抗体濃度ログ（Ｍ）を示し、Ｙ軸は、リツキシマブ－Ｌ－Ｐ４（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉｃ））（上向きの三角形、実線）、リツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（下向きの三角形、実線）、及びｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独で処理したときのＲａｍｏｓ細胞の生存％を示す。 ＮＣＩ－Ｎ８７がん細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロを図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（三角形、実線）、トラツズマブ（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ４単独（十字）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（円）で処理したときのＮＣＩ－Ｎ８７細胞の生存％を示す。 ＮＣＩ－Ｎ８７がん細胞株に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（三角形、実線）、ペルツズマブ（三角形、点線）、カドサイラ（菱形）、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１単独（十字）、及びリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（円）で処理したときのＮＣＩ－Ｎ８７の生存％を示す。 ＢＴ－４７４細胞株に対する、３日間ヒト血清とともにインキュベートした後の代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（ヒト血清）（上向きの三角形、実線）、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（ヒト血清）（下向きの三角形、実線）、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（ヒト血清）（円、実線）、ヒト血清のみ（星形）、トラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（上向きの三角形、点線）、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（下向きの三角形、点線）、及びＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（円、点線）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 ＢＴ－４７４細胞株に対する、３日間マウス血清とともにインキュベートした後の代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は抗体濃度ログ（Ｍ）を示す。Ｙ軸は、トラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（マウス血清）（上向きの三角形、実線）、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（マウス血清）（下向きの三角形、実線）、ＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（マウス血清）（円、実線）、マウス血清のみ（星形）、トラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（上向きの三角形、点線）、ペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（下向きの三角形、点線）、及びＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（円、点線）で処理したときのＢＴ－４７４細胞の生存％を示す。 マウスにおけるＢＴ－４７４（Ｈｅｒ２＋）腫瘍に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は投薬翌日を示す。Ｙ軸は、ビヒクル（黒塗りの円）、５ｍｇ／ｋｇのトラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（四角形）、５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（三角形）、及び５ｍｇ／ｋｇのペルツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ））（白抜きの円）を投薬した後の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。 Ｄａｕｄｉ（ＣＤ２０＋）腫瘍に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は投薬翌日を示す。Ｙ軸は、ビヒクル（黒塗りの円）、５ｍｇ／ｋｇのトラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（四角形）、１ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（三角形）、及び５ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、リツキシマブ－化合物（Ｉａ））（白抜きの円）を投薬した後の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す ＨＬ－６０（ＣＤ３３＋）腫瘍に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は投薬翌日を示す。Ｙ軸は、ビヒクル（黒塗りの円）、５ｍｇ／ｋｇのトラツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、トラツズマブ－化合物（Ｉａ））（四角形）、１ｍｇ／ｋｇのＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（三角形）、及び５ｍｇ／ｋｇのＯＲ０００２１３－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ））（白抜きの円）を投薬した後の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。 ＨＣＣ２１５７細胞株に対するｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は、抗体濃度ログ（Ｍ）を示し、Ｙ軸は、サシツズマブ－Ｌ－Ｐ１（例えば、サシツズマブ－化合物（Ｉａ））（線１）、サシツズマブ単独（線２）、及びｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒＰ１単独（線３）で処理したときのＨＣＣ２１５７細胞の生存％を示す。 ＬＰ１細胞株に対するｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は、抗体濃度ログ（Ｍ）を示し、Ｙ軸は、ＨｕＡＴ １３／５－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＨｕＡＴ １３／５－化合物（Ｉａ））（線１）、ＨｕＡＴ １３／５単独（線２）、及びｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒＰ１単独（線３）で処理したときのＬＰ１ 細胞の生存％を示す。 ＮＣＩ－Ｈ９２９（ＣＤ３８＋）腫瘍に対する代表的なｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ活性を図示する。Ｘ軸は投薬翌日を示す。Ｙ軸は、ビヒクル（円）、５ｍｇ／ｋｇのＨｕＡＴ１３／５－Ｌ－Ｐ１（例えば、ＨｕＡＴ１３／５－化合物（Ｉａ））（四角形）を投薬した後の腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。
本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲート
Figure 2023519974000047
 またはその薬学的に許容される塩を対象とし、式中、
ａが、１～１０の整数であり、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）Ｖ－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｒ２）Ｖであり、
ｖが、１または２であり、
各Ｒ２が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１～６の整数であり、
ｍが、２～６の整数であり、
ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、
但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
Ｌが、切断可能なリンカーまたは切断可能でないリンカーであり、
Ｂｍが、タンパク質に特異的に結合することができる結合部分である。いくつかの態様では、結合部分は、抗体、抗体断片、または抗体結合断片である。
本開示は、結合部分に縮合した上記化合物、本化合物もしくはコンジュゲートを含む組成物、または本化合物もしくはコンジュゲートを使用もしくは作製する方法も提供する。
Ｉ 定義
本明細書をより容易に理解することができるように、ある特定の用語が最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明の全体をとおして示されている。
「ａ」または「ａｎ」存在物という用語は、その存在物の１つ以上を指すことに留意されたい。例えば、「ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ヌクレオチド配列）」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書で同義に使用することができる。特許請求の範囲は、いずれの任意選択の要素も除外するように作成され得ることにさらに留意されたい。したがって、本記載は、特許請求の範囲の要素の列挙に関して「単に」、「のみ」などの排他的な用語の使用、または「否定的な」制限の使用のための先行する基準として働くことが意図される。
さらに、本明細書で使用する場合、「及び／または」は、２つの指定された特徴または構成要素の各々を、他方を伴ってまたは伴わずに、具体的に開示するものと理解される。このため、本明細書における「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の態様の各々を包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
態様が「含む」という語を用いて本明細書で説明されるいかなる場合も、「からなる」及び／または「から本質的になる」という観点から説明される、別様には類似である態様も提供されることを理解されたい。
別途定義されない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本開示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。
単位、接頭辞、及び記号は、そのＳｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）に承認された形式で表記される。数値範囲は、その範囲を定義する数を含むものとする。値の範囲が列挙される場合、その範囲の列挙された上限値と下限値との間の各中間整数値及びその各分数も、かかる値の間の各サブ範囲とともに具体的に開示されることを理解されたい。任意の範囲の上限値及び下限値は、この範囲内に独立して含まれてもよいし、含まれなくてもよく、これら限界値のいずれか一方を含む、いかなる限界値も含まない、またはこれらの限界値の両方を含む各範囲は、本開示内に含まれる。このため、本明細書に列挙される範囲は、列挙された終点を含む範囲内のすべての値の簡略表記であることが理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むと理解される。
値が明示的に列挙される場合、列挙される値とほぼ同じ数量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）または量（ａｍｏｕｎｔ）である値も、本開示の範囲内であることを理解されたい。組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の各部分的組み合わせも具体的に開示され、本開示の範囲内である。逆に、異なる要素または要素の群が個別に開示される場合、それらの組み合わせも開示される。本開示の任意の要素が、複数の代替物を有するとして開示される場合、各代替物が単独でまたは他の代替物との任意の組み合わせで除外される開示の例も、本明細書に開示される。本開示の１つ超の要素が、かかる除外を有することができ、かかる除外を有する要素のすべての組み合わせが、本明細書に開示される。
本明細書で使用する場合、「ＤＡＲ」という用語は、コンジュゲートの薬物抗体比を指し、これは、各抗体に連結したｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ－リンカー複合体の平均数である。ある特定の態様では、本明細書に記載のコンジュゲートのＤＡＲは、１～１０である。いくつかのの態様では、本明細書に記載のコンジュゲートのＤＡＲは、１～８である。いくつかの態様では、本明細書に記載のコンジュゲートのＤＡＲは、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、または１０である。
「抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、全長免疫グロブリン分子、または全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、目的の標的抗原またはその一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指し、かかる標的としては、がん細胞、または自己免疫疾患と関連する自己免疫抗体を産生する細胞が含まれるがこれらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。しかしながら、一態様では、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、またはウサギ起源のものである。
「単一ドメイン抗体」という用語は、ナノボディとしても知られ、約１２ｋＤａ～約１５ｋＤａの分子量を有する単一モノマー可変抗体ドメインからなる抗体断片である。単一体抗体は、重鎖可変ドメインまたは軽鎖に基づき得る。単一ドメイン抗体の例としては、ＶＨＨ断片及びＶＮＡＲ断片が挙げられるが、これらに限定されない。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、概してその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）．ｓｕｂ．２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体；Ｆａｂ発現ライブラリによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及びがん細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原に免疫特異的に結合する上述のもののうちのいずれかのエピトープ結合断片、一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
「インタクトな抗体」は、抗原結合可変ドメイン、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）であっても、そのアミノ酸配列バリアントであってもよい。
本明細書に使用する「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は同一であるが、少量で存在し得る天然の変異の可能性は除く。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらが他の抗体が混入することなく合成され得るという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法によって作製されても、組み換えＤＮＡ法によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、ファージ抗体ライブラリから単離されてもよい。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、所望の生物学的活性を呈する限り、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種由来の抗体、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種由来の抗体、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である「キメラ」抗体、ならびにかかる抗体の断片が具体的に含まれる。目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が含まれる。
モノクローナル抗体（ＭＡｂ）を産生させるために、様々な方法が用いられている。単一種の抗体を産生するクローン細胞株を指すハイブリドーマ技術は、マウス（ｍｏｕｓｅ）（マウス（ｍｕｒｉｎｅ））、ハムスター、ラット、及びヒトを含む様々な種の細胞を使用する。ＭＡｂを調製するための別の方法は、組み換えＤＮＡ技法を含む遺伝子工学を使用する。これらの技法から作製されるモノクローナル抗体には、とりわけ、キメラ抗体及びヒト化抗体が含まれる。キメラ抗体は、１つ超の種類の種に由来する領域をコードするＤＮＡを組み合わせる。例えば、キメラ抗体は、可変領域をマウスから、定常領域をヒトから誘導してもよい。ヒト化抗体は、非ヒト部分を含有するにもかかわらず、主にヒトに由来する。キメラ抗体と同様に、ヒト化抗体は、完全にヒト定常領域を含有してもよい。しかし、キメラ抗体とは異なり、可変領域は、ヒトに部分的に由来してもよい。ヒト化抗体の非ヒト合成部分は、マウス抗体のＣＤＲに由来することが多い。いずれにしても、これらの領域は、抗体が特定の抗原を認識し、結合することを可能にするために重要である。マウス抗体は、診断及び短期療法に有用であるが、有害な免疫原性応答のリスクを増加させることなく、長期にわたって人に投与することはできない。ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）と呼ばれるこの応答は、ヒトの免疫系がマウス抗体を異物として認識し、それを攻撃するときに生じる。ＨＡＭＡ応答は、毒性ショックまたはさらには死亡を引き起こし得る。
キメラ抗体及びヒト化抗体は、投与される抗体の非ヒト部分を最小限に抑えることにより、ＨＡＭＡ応答の可能性を低減する。さらに、キメラ抗体及びヒト化抗体は、抗体依存性細胞傷害性などの二次ヒト免疫応答を活性化する追加の利点を有し得る。
インタクトな抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有してもよく、この機能は、抗体のＦｃ領域（天然配列の配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異形のＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、インタクトな抗体には、異なる「クラス」を割り当てることができる。インタクトな抗体の主要なクラスは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つであり、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元構成は、周知である。
「約」という用語は、本明細書において、およそ、概ね、周囲、または～の辺りを意味するように使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用されるとき、これは、記載される数値の上下にその境界を拡張させることによって、その範囲を修飾する。概して、「約」という用語は、上下（高いまたは低い）例えば１０％の変動で記述された数値を上回る及び下回る数値を修飾し得る。
「投与」、「投与すること」という用語、及びそれらの文法的変形形態は、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）などの組成物を、薬学的に許容される経路を介して対象に導入することを指す。本開示のＥＶ（例えば、エキソソーム）などの組成物の対象への導入は、腫瘍内、経口、肺内、鼻腔内、非経口（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下）、直腸、リンパ内、髄腔内、眼周囲、または局所を含む、任意の好適な経路によるものである。投与には、自己投与及び他人による投与が含まれる。好適な投与経路により、組成物または薬剤がその意図された機能を実行することが可能になる。例えば、好適な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物または薬剤を対象の静脈に導入することにより投与される。
本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、天然であるか、部分的または完全に合成により産生されるかに関わらず、免疫グロブリン、及びその断片を包含する。この用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質も網羅する。「抗体」は、抗原に特異的に結合し、それを認識する免疫グロブリン遺伝子またはその断片からのフレームワーク領域を含むポリペプチドをさらに含む。抗体という用語の使用は、全抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及び組み換え抗体、それらの断片を含み、さらに、一本鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス－ヒト、マウス－霊長類、霊長類－ヒトのモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、例えばｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片などの抗体断片、ダイアボディ、ならびに抗体関連ポリペプチドを含むことを意味する。抗体は、所望の生物学的活性または機能を呈する限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体を含む。本開示のいくつかの態様では、生物学的に活性な分子は、抗体、またはその抗原結合断片を含む分子である。
「抗体－薬物コンジュゲート」及び「ＡＤＣ」という用語は、同義的に使用され、治療剤（本明細書では、薬剤、薬物、または活性医薬成分と称されることがある）または薬剤に、例えば共有結合的に、連結した抗体を指す。本開示のいくつかの態様では、生物活性分子は、抗体－薬物コンジュゲートである。
本明細書で使用する場合、目的の１つ以上の値に適用される場合、「およそ」という用語は、記述される基準値に類似する値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」という用語は、別途記載されない限り、ないしは別様に文脈から明らかでない限り、記述される参照値のいずれかの方向の（それより大きいか、またはそれ未満）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の内に入る値の範囲を指す（かかる数字が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置換されている置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは、当該技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。このため、ポリペプチド中のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸に置き換えられている場合、置換は保存的であると考えられる。別の態様では、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／または組成が異なる構造的に類似のストリングで保存的に置き換えられ得る。
本明細書で使用する場合、「保存された」という用語は、比較される２つ以上の配列の同じ位置で未改変で生じるものである、それぞれ、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。比較的保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の場所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連性の高い配列の間で保存されているものである。
いくつかの態様では、２つ以上の配列は、互いに１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一である」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、互いに少なくとも約７０％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約９０％同一、または少なくとも約９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、互いに少なくとも約３０％同一、少なくとも約４０％同一、少なくとも約５０％同一、少なくとも約６０％同一、少なくとも約７０％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約９０％同一、または少なくとも約９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用することも、その一部、領域、または特徴に適用することもできる。
本明細書で使用する場合、「連結すること」及び「コンジュゲートすること」という用語は、同義的に使用され、各々、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ及び結合部分を含む２つ以上の部分の共有結合または非共有結合を指す。いくつかの態様では、連結することまたはコンジュゲートすることには、リンカーが含まれ得る。
「アミノ酸配列バリアント」と言う用語は、天然配列のポリペプチドとはある程度異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。通常、アミノ酸配列バリアントは、天然の抗体の少なくとも１つの受容体結合ドメインまたは天然の受容体の少なくとも１つのリガンド結合ドメインと、少なくとも約７０％の配列同一性を保有し、典型的には、配列がかかる受容体またはリガンド結合ドメインと少なくとも約８０％、より典型的には少なくとも約９０％相同となる。アミノ酸配列バリアントは、天然のアミノ酸配列のアミノ酸配列内のある特定の位置に、置換、欠失、及び／または挿入を有する。アミノ酸は、従来的な名称、１文字及び３文字のコードで示される。
「配列同一性」は、配列をアライメントし、最大の配列同一性パーセントを達成するように必要に応じてギャップを導入した後に同一である、アミノ酸配列バリアントの残基の割合として定義される。アライメントのための方法及びコンピュータプログラムは、当該技術分野で周知である。１つのかかるコンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって開発された「Ａｌｉｇｎ ２」であり、これは、ユーザ文書ととともにＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．２０５５９に１９９１年１２月１０日に提出されている。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明するために使用される。例示的なＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（対立遺伝子バリアント及び代替的にスプライシングされた形態のこれらの受容体を含む）を含むものであってもよい。Ｆｃ．ガンマ．ＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、それらの細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質側ドメイン内に免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質側ドメイン内に免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。将来的に特定されるものも含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語は、母体ＩｇＧの胎児への移動に関与する新生児受容体ＦｃＲｎも含む。
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的を溶解させる分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の、同種抗原と複合した分子（例えば、抗体）への結合によって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい。
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖が１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合している一方で、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いて、いくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、他端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと位置が揃っており、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと位置が揃っている。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。
「可変」という用語は、可変ドメインのある特定の部分が抗体間の配列の中で大きく異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合性及び特異性に使用されているという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等には分布していない。これは、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインのいずれにおいても超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、主にβ－シート構成を採用し、３つの超可変領域により連結され、β－シート構造に連結し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する４つのＦＲを含む。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって極めて近接して一緒に保持されており、他方の鎖の超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
「超可変領域」という用語は、本明細書で使用するとき、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、概して、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインでは残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変領域では３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔら（上記））、ならびに／または「超可変ループ」からの残基（例えば、軽鎖可変ドメインでは残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、及び９１～９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインでは２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３））を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
抗体のパパイン消化により、各々が単一の抗原結合部位を有する、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片が産生され、残りが「Ｆｃ」断片であり、その名前は、容易に結晶化するその能力を反映している。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原に架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片が得られる。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む、最小の抗体断片である。この領域は、緊密な非共有結合性会合にある１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定するのは、この構成においてである。集合的に、６つの超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な超可変領域を３つのみ含むＦｖの半分）でさえも、全結合部位よりも親和性が低いものの、抗原を認識してそれに結合する能力を有する。
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端への数個の残基の付加によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が少なくとも１つの遊離チオール基を担持するＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。
任意の脊椎動物種に由来する抗体の「軽鎖」には、それらの定常領域のアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる型のうちの１つを割り当てることができる。
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、ここで、これらのドメインは、単一のポリペプチドに存在している。Ｆｖポリペプチドは、さらに、ＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを含んでもよく、このリンカーにより、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を成すことが可能となっている。
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）において、可変軽ドメイン（ＶＬ）に接続した可変重ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間での対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を生成することができる。
非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の配列を最小限に含んだキメラ抗体である。ヒト化は、マウスの抗原結合情報を非免疫原性のヒト抗体アクセプターに移入するための方法であり、多数の治療に有用な薬物をもたらしている。ヒト化の方法は、概して、６つすべてのマウス相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒト抗体フレームワークに移入することによって開始する。これらのＣＤＲがグラフトされた抗体は、概して、抗原結合に対する元々の親和性を保持することはなく、実際に、親和性は重度に損なわれることが多い。ＣＤＲの他に、選択された非ヒト抗体フレームワーク残基も、適切なＣＤＲ構成を維持するために組み込む必要がある。グラフトされたＣＤＲの構造配置を支持するために、鍵となるマウスフレームワーク残基をヒトアクセプターに移入することにより、抗原の結合及び親和性が回復されることが示されている。ほとんどの部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含む。
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され、分離及び／または回収された抗体である。その自然環境の混入成分は、抗体の診断上または治療上の使用を妨げる材料であり、これらには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。ある特定の態様では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定して９５重量％超、または９９重量％超の抗体に、（２）気相タンパク質配列決定装置の使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、あるいは（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用した還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって同種になるように、精製される。単離抗体には、組み換え細胞内でインサイツの抗体が含まれるが、これは、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在していないためである。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されることになる。
「がん」は、体内の異常な細胞の制御されない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。調節されていない細胞の分裂及び成長は、隣接組織に侵入する悪性腫瘍の形成をもたらし、また、リンパ系または血流をとおして体の遠隔部位に転移し得る。本明細書で使用する「がん」は、原発性、転移性、及び再発性のがんを指す。
本明細書で使用する場合、「免疫応答」という用語は、脊椎動物内での外来物質に対する生物学的応答を指し、この応答は、生物をこれらの物質及びそれらによって引き起こされる疾患から保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、または好中球）及びこれらの細胞または肝臓（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）のいずれかによって産生される可溶性巨大分子の作用により媒介され、これは、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病理学的炎症の場合、正常なヒト細胞もしくは組織の選択的標的化、それらへの結合、それらの損傷、それらの破壊、及び／もしくはそれらの脊椎動物の体内からの排除をもたらす。免疫応答としては、例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋ Ｔ細胞などのエフェクターＴ細胞もしくはＴｈ細胞の活性化もしくは阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が挙げられる。本明細書で使用する場合、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は、同義であり、胸腺によって産生されるまたは処理される任意のリンパ球を指す。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＮＫＴ細胞である。
「対象」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語には、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌなどの脊椎動物、ならびにマウス、ラット、及びモルモットなどの齧歯類が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、対象はヒトである。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では同義に使用される。
「治療有効量」または「治療有効用量」という用語は、所望の生物学的、治療的、及び／または予防的結果を提供する薬剤（例えば、本明細書に開示されるｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート）の量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、もしくは病因の減少、改善、緩和、低下、遅延、及び／もしくは軽減、または生物学的システムの任意の他の望ましい改変であり得る。固形腫瘍の場合、有効量は、腫瘍を縮小させる及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（腫瘍成長を抑制するなど）、または他の望ましくない細胞増殖を予防もしくは遅延するのに十分な量を含む。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍の発生を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍再発を予防または遅延するのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞の数を低減し；（ｉｉ）腫瘍のサイズを縮小させ；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を、ある程度、抑制、遅延、緩徐化し、停止させ得；（ｉｖ）腫瘍の転移を抑制し（すなわち、ある程度緩徐化し、停止させ得；（ｖ）腫瘍の成長を抑制し；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を予防または遅延させ；かつ／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。
いくつかの態様では、「治療有効量」は、進行性固形腫瘍などのがんの有意な減少またはがんの進行の緩徐化（退縮）に影響を与えることが臨床的に証明されているｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの量である。疾患退縮を促進する治療薬の能力は、臨床試験中のヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において、またはインビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによってなど、当業者に既知の様々な方法を使用して評価することができる。
本明細書で使用する場合、「標準治療」という用語は、特定のタイプの疾患に対する適当な治療として医療専門家によって受け入れられ、医療専門家によって広く使用される治療を指す。この用語は、「ベストプラクティス」、「標準医療」、及び「標準療法」という用語のいずれかと同義に使用され得る。
例として、「抗がん剤」は、対象におけるがんの退縮を促進するか、またはさらなる腫瘍成長を防止する。ある特定の態様では、治療有効量の薬物は、がんを排除するところまでがん退縮を促進する。
治療に関しての「有効な」及び「有効性」という用語は、薬理学的有効性及び生理学的安全性の両方を含む。薬理学的有効性は、患者におけるがんの退縮を促進する薬物の能力を指す。生理学的安全性は、薬物の投与に起因する細胞、器官、及び／または生物レベルでの毒性レベル、または他の有害な生理学的作用（有害作用）を指す。
本明細書で使用する場合、「免疫チェックポイント阻害剤」という用語は、１つ以上のチェックポイントタンパク質を、完全または部分的に、減少させるか、阻害するか、それらに干渉するか、またはそれらを調節する分子を示す。チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞の活性化または機能を調節する。ＣＴＬＡ－４ならびにそのリガンドであるＣＤ８０及びＣＤ８６、ならびにＰＤ－１及びそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２などの多数のチェックポイントタンパク質が知られている。Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ １２（４）：２５２－６４（２０１２）。これらのタンパク質は、Ｔ細胞応答の共刺激性または阻害性相互作用を担う。免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容性、ならびに生理的免疫応答の期間及び振幅を調節及び維持する。免疫チェックポイント阻害剤は、抗体を含むか、または抗体に由来する。
「治療する」または「治療」という用語は、治療的治療及び予防的または防止処置の両方を指し、その目的は、望ましくない生理学的変化または障害、例えば、がんの発生または拡がりを予防または遅延（緩和）することである。本開示の目的では、有益なまたは所望される臨床結果としては、検出可能であるか検出不能であるかに関わらず、症状の軽減、疾患の程度の減弱、安定化した（すなわち、悪化していない）疾患状態、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の緩和または緩解、及び（部分的であるか完全であるかに関わらず）寛解が挙げられるが、これらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けていなかった場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することも意味し得る。治療を必要とする者としては、病態もしくは障害を既に有する者、及び病態もしくは障害を有する傾向にある者、または病態もしくは障害を予防する必要がある者が挙げられる。
ＩＩ．ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ
本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ
Figure 2023519974000048
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
Ｒ２が、－Ｃ（Ｏ）Ｒ３、－Ｎ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＳＨ、－（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＳＨ、及び－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２から選択され、式中、
Ｒ３が、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
各Ｒ４が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
Ｑ’が、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ４であり、
ｎが、１～６であり、
ｍが、２～５であり、
但し、Ｒ２が、ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎＮＨ２、または－（ＣＨ２）ｎＯＨである場合には、Ｒ１がハロであることを条件とする。
ある特定の態様では、本開示は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供し、
Ａが、フェニル環またはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｕが、ＮＨであり、
Ｒ１が、水素及びハロから選択され、
Ｒ２が、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＳＨ、－Ｎ（Ｒ４）２、及び－Ｃ（Ｏ）Ｒ３から選択され、ここでは、
ｍが、２であり、
ｎが、２であり、
Ｑ’が、－Ｏ－であり、
Ｒ３が、メチルであり、
各Ｒ４が、独立して、水素及びハロから選択され、
但し、Ｒ２が、ＮＨ２または－（ＣＨ２）ｎＯＨである場合には、Ｒ１がハロであることを条件とする。
本明細書で使用する場合、本明細書で使用する「Ｃ１－Ｃ６アルコキシ」という用語は、酸素原子を介して親分子部分に結合したＣ１－Ｃ６アルキル基を指す。
本明細書で使用する場合、「Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル」という用語は、Ｃ１－Ｃ６アルキル基を介して親分子部分に結合したＣ１－Ｃ６アルコキシ基を指す。
本明細書で使用する場合、「Ｃ１－Ｃ６アルキル」という用語は、１～６個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素に由来する基を指す。
本明細書で使用する場合、「Ｃ４－Ｃ１０シクロアルキル」という用語は、４～１０個の炭素原子及び０個のヘテロ原子を有する飽和単環式炭化水素環系を指す。シクロアルキル基の代表例としては、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。７～１０個の原子を含有するシクロアルキル基は、単環式構造であっても、縮合構造であっても、スピロ環式構造であっても、架橋二環式構造であってもよい。
本明細書で使用する場合、「ハロ」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを指す。
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下からなる群から選択される。
Figure 2023519974000049
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000050
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000051
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000052
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000053
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000054
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000055
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000056
いくつかの態様では、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、以下である。
Figure 2023519974000057
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、Ａがフェニルであり、ＵがＮＨであり、Ｒ１がハロであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２であり、ここでは、ｍ及びｎが２であり、Ｑ’がＯであり、一方のＲ４が水素であり、他方がメチルである。
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、Ａがフェニルであり、ＵがＮＨであり、Ｒ１がハロであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２であり、ここでは、ｍ及びｎが２であり、Ｑ’がＯであり、各Ｒ４がメチルである。
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、Ａがフェニルであり、ＵがＮＨであり、Ｒ１がハロであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）ｎＯＨであり、ここでは、ｎが２である。
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、Ａがフェニルであり、ＵがＮＨであり、Ｒ１がハロであり、Ｒ２が－（ＣＨ２）ｎＳＨであり、ここでは、ｎが２である。
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、Ａがフェニルであり、ＵがＮＨであり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が－Ｎ（Ｒ４）２であり、ここでは、一方のＲ４が水素であり、他方がメチルである。
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、Ａがフェニルであり、ＵがＮＨであり、Ｒ１がハロであり、Ｒ２が－Ｎ（Ｒ４）２であり、ここでは、各Ｒ４が水素である。いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、Ａがフェニルであり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が－Ｃ（Ｏ）Ｒ３であり、ここでは、Ｒ３がメチルである。
いくつかの態様では、本開示は、式（ＩＩ）のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供し、式中、ＡがＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、ＵがＮＨであり、Ｒ１が水素であり、Ｒ２が－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２であり、ここでは、ｍ及びｎが２であり、Ｑ’がＯであり、一方のＲ４が水素であり、他方がメチルである。
ＩＩＩ．ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート
本開示は、本明細書に開示される１つ以上のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒのコンジュゲート及び結合部分を提供する。これらのコンジュゲートは、セレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することによりタンパク質を分解し、ＣＲＬ４ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼにより媒介される基質タンパク質の補充及びユビキチン化を促進することができる。これらの薬剤は、「分子接着剤」として作用し、リガーゼと新基質との間のタンパク質相互作用を再プログラムする疎水性パッチとして結合界面を満たす。
いくつかの態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物
Figure 2023519974000058
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ａが、１～１０の整数であり、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｒ１が、水素及びハロから選択され、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｘが、－ＮＲ２－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ２であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１～６の整数であり、
ｍが、２～６の整数であり、
ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、
但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
Ｌが、切断可能なリンカーまたは切断可能でないリンカーであり、
Ｂｍが、結合部分である。
いくつかの態様では、ＵはＮＨである。
いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、腫瘍細胞株に対するインビトロ増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒと結合部分とを含むｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独よりも、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％高いインビトロ増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒと結合部分とを含むｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独よりも、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍高いインビトロ増殖防止活性を有する。
いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独と比較して、ＢＴ－４７４乳癌細胞株に対するインビトロ増殖防止活性、例えば、ＢＴ－４７４乳癌細胞株に対するより高い増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独と比較して、ＳＫ－ＢＲ－３乳癌細胞株に対するインビトロ増殖防止活性、例えば、ＳＫ－ＢＲ－３乳癌細胞株に対するより高い増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独と比較して、ＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞株に対するインビトロ増殖防止活性、例えば、ＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞株に対するより高い増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独と比較して、Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株に対するインビトロ増殖防止活性、例えば、Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株に対するより高い増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独と比較して、ＨＬ－６０急性骨髄性白血病細胞株に対するインビトロ増殖防止活性、例えば、ＨＬ－６０急性骨髄性白血病細胞株に対するより高い増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独または結合部分単独と比較して、Ｒａｍｏｓ非ホジキンリンパ腫細胞株に対するインビトロ増殖防止活性、例えば、Ｒａｍｏｓ非ホジキンリンパ腫細胞株に対するより高い増殖防止活性を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ヒト血清の存在下でそれらの増殖防止活性を維持することができる。本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、がんの治療に使用され得る。
ＩＩＩ．Ａ．リンカー
本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、リンカーを介して結合部分に連結することができる。本明細書で使用する場合、「リンカー」という用語は、結合部分（Ｂｍ）を式（Ｉ）の化合物内のＸ基に接続することができる任意の化学部分を指す。
ある特定の態様では、リンカーは、ヘテロ二官能基を含有し得る。本開示では、「ヘテロ二官能基」という用語は、その一部であるリンカーを結合部分に接続する化学部分を指す。ヘテロ二官能基は、化学的部分の両末端に異なる反応性基を有することを特徴とする。「Ｂｍ」への結合は、化学的または酵素的コンジュゲーション、またはそれらの両方の組み合わせにより達成することができる。化学的コンジュゲーションには、結合部分の表面上のアクセス可能なアミノ酸残基と、ヘテロ二官能基上の反応ハンドルとの制御された反応が伴う。化学的コンジュゲーションの例としては、リシンアミドカップリング、システインカップリング、及び遺伝子工学により組み込まれる非天然アミノ酸を介したカップリングが挙げられるがこれらに限定されず、ここでは、所望の反応ハンドルを有する非天然アミノ酸残基を「Ｂｍ」上に設置する。酵素的コンジュゲーションでは、酵素が、リンカーと、結合部分上のアクセス可能なアミノ残基とのカップリングを媒介する。酵素的コンジュゲーションの例としては、ソルターゼを使用したペプチド転移、微生物トランスグルタミナーゼを使用したペプチド転移、及びＮ－グリカン操作が挙げられるが、これらに限定されない。化学的コンジュゲーション及び酵素的コンジュゲーションはまた、連続して使用されてもよい。例えば、酵素的コンジュゲーションは、その後の化学的コンジュゲーションで利用される「Ｂ ｍ」上に独自の反応ハンドルを設置するためにも使用され得る。
いくつかの態様では、ヘテロ二官能基は、以下から選択され、
Figure 2023519974000059
 式中、
Figure 2023519974000060
 が、リンカーの残りの部分への結合点であり、
Figure 2023519974000061
 Ｂｍへの結合点である。
ある特定の態様では、リンカー「Ｌ」は、切断可能でない。本明細書で使用する場合、「切断可能でないリンカー」という用語は、安定した共有結合的な様式で結合部位をｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒに連結することが可能であり、「切断可能なリンカー」として本明細書で定義されるカテゴリーには該当しない任意の化学部分である。このため、切断可能でないリンカーは、実質的に、酸誘導性の切断、光誘導性の切断、生体還元性の切断、ペプチダーゼ誘導性の切断、エステラーゼ誘導性の切断、及びジスルフィド結合の切断に対して耐性である。「切断に実質的に耐性」は、抗体ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート集団の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９９％において、リンカー内またはリンカーに隣接する化学結合が、上記の薬剤のうちのいずれかにより処理の数時間～数日以内に、切断可能なリンカー内で化学結合（例えば、ジスルフィド結合）を切断する、酸、光解離性切断剤、生体還元剤、ペプチダーゼ、エステラーゼ、または化学的化合物もしくは生理学的化合物によって切断できないままであることを意味する。ある特定の態様では、リンカーは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ及び／または結合部分が活性なままであることができる条件で、酸誘導性の切断、光誘導性の切断、生体還元性の切断、酵素的切断などに感受性ではない。切断可能でないリンカーから生成されたＡＤＣ異化生成物は、抗体からの残留アミノ酸を含有する。これらの異化生成物は、それらが送達される標的細胞において、独自かつ予想外の特性を発揮し得る。
当業者であれば、切断可能でないリンカーと切断可能なリンカーとを容易に区別する。
切断可能でないリンカーの例としては、ＳＭＣＣ（４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル）リンカー、スクシンイミドチオエーテルリンカー、及び以下のようなリンカーが挙げられるがこれらに限定されず、
Figure 2023519974000062
 ｐが、１～１０の整数であり、
Figure 2023519974000063
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000064
 が、結合部分への結合点である。
いくつかの態様では、リンカーは、
Figure 2023519974000065
 である。
いくつかの態様では、ｐは、５である。
ある特定の態様では、リンカーは、切断可能であり得る。いくつかの態様では、リンカーは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ及び／または結合部分が活性なままであることができる条件で、酸誘導性の切断、光誘導性の切断、生体還元性の切断、酵素的切断などに感受性であり得る。
いくつかの態様では、切断可能なリンカーは、酵素的に切断され得る。いくつかの態様では、切断可能なリンカーは、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、エステラーゼ、ベータ－グルロニダーゼ、グリコシダーゼ、ホスホジエステラーゼ、ホスファターゼ、ピロホスファターゼ、またはリパーゼにより切断され得る。
いくつかの態様では、切断可能なリンカーは、プロテアーゼにより切断され得る。プロテアーゼの例としては、カテプシンＢ、ＶＡＧＰテトラペプチドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の態様では、切断可能なリンカーは、ペプチドを含有する。いくつかの態様では、ペプチドは、リンカーの切断部位であり、それにより、リソソーム酵素などの細胞内プロテアーゼへの曝露時の薬物の放出を促進する。ペプチドは、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、及びＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断のために設計及び最適化され得る。２個のアミノ酸を有するペプチドの例としては、アラニン－アラニン（ａｌａ－ａｌａ）、バリン－アラニン（ｖａｌ－ａｌａ）、バリン－シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ－ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ－ｐｈｅ）、フェニルアラニン－リジン（ｆｋまたはｐｈｅ－ｌｙｓ）、フェニルアラニン－ホモリジン（ｐｈｅ－ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ－メチル－バリン－シトルリン（Ｍｅ－ｖａｌ－ｃｉｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。３個のアミノ酸を有するペプチドの例としては、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）、アスパラギン酸－バリン－シトルリン（ａｓｐ－ｖａｌ－ｃｉｔ）、アラニン－アラニン－アスパラギン（ａｌａ－ａｌａ－ａｓｎ）、アラニン－フェニルアラニン－リジン（ａｌａ－ｐｈｅ－ｌｙｓ）、グリシン－グリシン－フェニルアラニン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｐｈｅ）、及びグリシン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。４個のアミノ酸を有するペプチドの例としては、グリシン－グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）及びグリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｐｈｅ－ｇｌｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。上記のアミノ酸の組み合わせは、逆の順序（すなわち、ｃｉｔ－ｖａｌ）でも存在することができる。
本開示のペプチドは、アミノ酸残基のＬ－またはＤ－異性体を含み得る。「天然に存在するアミノ酸」という用語は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｘ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｘ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒを指す。「Ｄ－」は、天然型（「Ｌ－」）アミノ酸における配位に対立するものとして、「Ｄ」（右旋性の）配位を有するアミノ酸を示す。本明細書に記載のアミノ酸は、商業的に入手（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍｔｅｃｈ）してもよいし、当該技術分野で既知の方法を用いて合成してもよい。
ある特定の態様では、リンカー（「Ｌ」）は、以下から選択されるプロテアーゼ切断可能なリンカーであり、
Figure 2023519974000066
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、各々独立して、存在しないか、またはＬ－もしくはＤ－配位にある天然のアミノ酸残基であり、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とし、
Figure 2023519974000067
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000068
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４は、独立して、存在しないか、またはＬ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、及びグリシンからなる群から選択され、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とする。
いくつかの態様では、Ｚ１は、存在しないか、またはグリシンであり、Ｚ２は、存在しないか、またはＬ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、及びグリシンから選択され、Ｚ３は、Ｌ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択され、Ｚ４は、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択される。
いくつかの態様では、Ｌは、
Figure 2023519974000069
 である。
いくつかの態様では、ｑは、５である。
ある特定の態様では、Ｌは、ピロホスファターゼ切断可能なリンカーである。
いくつかの態様では、Ｌは、ピロホスファターゼ切断可能なリンカーであり、
Figure 2023519974000070
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000071
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000072
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、Ｌは、ベータグルコルニダーゼ切断可能なリンカーである。
いくつかの態様では、Ｌは、以下から選択されるベータ－グルコロニダーゼ切断可能なリンカーであり、
Figure 2023519974000073
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
－－－－が、存在しないか、または結合であり、
Figure 2023519974000074
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000075
 が、結合部分への結合点である。
いくつかの態様では、リンカーは、生体還元性である。生体還元性リンカーは、細胞内コンパートメント対血漿における還元電位の差を利用する。腫瘍細胞の細胞質中に存在する還元されたグルタチオンは、正常細胞の細胞質中に存在するものよりも最大１０００倍高く、腫瘍細胞はまた、細胞コンパートメントにおける還元に寄与し得る酵素を含有する。リンカーは、全身循環中にコンジュゲートをインタクトに維持し、グルタチオンの高い細胞内濃度により選択的に切断されて、活性薬物を腫瘍部位で非毒性プロドラッグから放出する。
いくつかの態様では、Ｌは、以下から選択される生体還元性リンカーであり、
Figure 2023519974000076
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ’”が、各々独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６）２ＮＣ１－Ｃ６アルキル、及びＣ１－Ｃ６アルキルから選択されるか、または２つのジェミナルＲ基が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロブチルもしくはシクロプロピル環を形成することができ、
Figure 2023519974000077
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000078
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、リンカーは、酸切断可能である。酸切断可能なリンカーは、血液循環の中性ｐＨで安定なままであるように特別に設計されているが、加水分解を受け、細胞コンパートメントの酸性環境で細胞傷害性薬物を放出する。
いくつかの態様では、Ｌは、以下から選択される酸切断可能なリンカーであり、
Figure 2023519974000079
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000080
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000081
 が、結合部分への結合点である。
ある特定の態様では、Ｌは、Ｌは、クリック－トゥ－リリースリンカーであり、ここでは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒの放出は、テトラジンまたは関連化合物により化学的に惹起される。
いくつかの態様では、Ｌは、以下から選択されるクリック－トゥ－リリースリンカーであり、
Figure 2023519974000082
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000083
 が、Ｘへの結合点であり、
Figure 2023519974000084
 が、結合部分への結合点である。
ＩＩＩ．Ｂ．結合部分
本開示は、結合部分にコンジュゲートされたｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを提供する。本明細書で使用する場合、「結合部分」という用語は、細胞表面マーカーまたは受容体を認識し、それに結合する任意の分子を指す。ある特定の態様では、結合部分は、ポリペプチド部分に限定されないタンパク質に結合する。結合部位は、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒを特定の細胞、組織、または位置に標的化することに加えて、標的細胞または経路に対する増殖防止性（細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性）活性などのある特定の治療効果も有し得る。ある特定の態様では、結合部位は、カルボン酸、アミン、チオール、または化学反応性アミノ酸部位もしくは側鎖などの少なくとも１つの化学反応性基を含むことができるか、または含むように操作することができる。いくつかの態様では、結合部分は、所与の標的細胞集団に対する、細胞表面受容体または抗原などの細胞表面分子と結合するまたは複合体化する標的化部分を含み得る。受容体との特異的結合または複合化の後、細胞は、標的化部分またはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの取り込みを許容し、これは次いで、細胞に内在化される。
いくつかの態様では、「Ｂｍ」基は、細胞表面分子に特異的に結合することができる部分であり得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」基は、細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたはタンパク質であり得る。
ある特定の態様では、「Ｂｍ」基は、抗体、抗体断片、または抗原結合断片であり得る。抗体は、特定の抗原を認識し、それに結合することができる、免疫系によって生成されるタンパク質である。標的抗原は、概して、複数の抗体のＣＤＲにより認識される、エピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する各抗体は、異なる構造を有する。このため、１つの抗原は、１つ超の対応する抗体を有してもよい。本明細書における「抗体」という用語は、最も広義な意味に使用され、具体的には、モノクローナル抗体、単一ドメイン抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含するが、これは、それらが所望の生物活性を呈する場合に限る。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであっても、他の種に由来するものであってもよい。
ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得るモノクローナル抗体は、特定の抗原決定基（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸、またはそれらの断片）に対する抗体の均質な集団である。目的の抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、培養物中の連続細胞株による抗体分子の産生を提供する当該技術分野において既知の任意の技法を使用することにより調製することができる。これらには、ハイブリドーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法、及びＥＢＶ－ハイブリドーマ技法が含まれるが、これらに限定されない。かかる抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含む任意の免疫グロブリンクラス、ならびにその任意のサブクラスのものであってもよい。本開示における使用のｍＡｂを産生するハイブリドーマは、インビトロで培養されても、インビボで培養されてもよい。
有用なモノクローナル抗体としては、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体断片、またはキメラヒト－マウス（または他の種）モノクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトモノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の多数の技法のうちのいずれかにより作製され得る。
抗体はまた、二重特異性抗体であることもできる。二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野において既知である。全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな組み合わせのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）が１０個の異なる抗体分子の混合物を産生する可能性があり、それらのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィーステップを使用して行われる正しい分子の精製は、かなり煩雑であり、生成物の収率は低い。
異なる手法によると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体－抗原結合部位）を、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させる。融合は、ヒンジ、Ｃ．ｓｕｂ．Ｈ２、及びＣ．ｓｕｂ．Ｈ３領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合であってもよい。第１の重鎖定常領域（Ｃ．ｓｕｂ．Ｈ１）は、融合物のうちの少なくとも１つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有してもよい。免疫グロブリン重鎖融合及び所望の場合には免疫グロブリン軽鎖をコードする配列を有する核酸を別個の発現ベクター中に挿入し、好適な宿主生物に同時トランスフェクトする。これにより、構築時に使用される不均等な比率の３つのポリペプチド鎖が最適収率を提供する態様において、３つのポリペプチド断片の相互割合を調整する際に優れた柔軟性が提供される。しかしながら、等比での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現により高収率がもたらされる場合、またはそれらの比率が特に重要ではない場合に、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
二重特異性抗体は、一方のアームにある第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームにあるハイブリッド免疫グロブリン重鎖－軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）を有してもよい。二重特異性分子の半分のみでの免疫グロブリン軽鎖の存在により容易な分離方法が提供されるため、この非対称構造により、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの所望の二重特異性化合物の分離が促進される。かかる技法を使用して、二重特異性抗体を、本明細書に定義される疾患の治療または予防におけるｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒへのコンジュゲーションのために調製することができる。
ハイブリッドまたは二官能性抗体は、生物学的に、すなわち、細胞融合技法により、または化学的に、特に架橋剤またはジスルフィド架橋形成試薬により、誘導することができ、全抗体を含んでも、その断片を含んでもよい。
抗体は、がん細胞抗原、ウイルス抗原、または微生物抗原、もしくは腫瘍細胞、または腫瘍細胞もしくはマトリックスに結合した他の抗体に免疫特異的に結合する抗体の機能的に活性な断片、誘導体、または類似体であり得る。これに関して、「機能的に活性な」は、断片、誘導体、または類似体が、断片、誘導体、または類似体が由来する抗体が認識するのと同じ抗原を認識する抗抗イディオタイプ抗体を励起できることを意味する。具体的には、例示的な態様では、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、抗原を特異的に認識するＣＤＲ配列に対してＣ末端であるフレームワーク及びＣＤＲ配列の欠失により増強され得る。どのＣＤＲ配列が抗原に結合するかを決定するために、ＣＤＲ配列を含有する合成ペプチドを、当該技術分野で既知の任意の結合アッセイ方法による抗原との結合アッセイに使用することができる。
他の有用な抗体としては、抗体分子のペプシン消化により産生され得る、可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖のＣＨ１ドメインを含有するＦ（ａｂ’）２断片、ならびにＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成され得るＦａｂ断片、などであるがこれらに限定されない抗体の断片が挙げられる。他の有用な抗体は、抗体の重鎖及び軽鎖二量体、またはＦｖもしくは一本鎖抗体（ＳＣＡ）などの任意のその最小断片、または抗体と同じ特異性を有する任意の他の分子である。
加えて、標準的な組み換えＤＮＡ技法を使用して作製することができる、ヒト部分と非ヒト部分との両方を含む、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体などの組み換え抗体が、有用な抗体である。キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種に由来する分子、例えば、マウスモノクローナル及びヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変領域を有するものである。ヒト化抗体は、非ヒト種からの１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する、非ヒト種からの抗体分子である。かかるキメラ及びヒト化モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の組み換えＤＮＡ技法により産生され得る。
完全ヒト抗体は、内因性免疫グロブリン重鎖及び軽鎖遺伝子を発現することができないが、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて産生させることができる。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、本開示のポリペプチドの全部または一部を用いて、正常な方法で免疫化される。抗原に指向されたモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して得ることができる。トランスジェニックマウスが保有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配列し、続いてクラススイッチ及び体細胞変異を受ける。このため、かかる技法を使用して、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ抗体を産生させることが可能である。ヒト抗体を産生させるためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ（１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３）を参照されたい。他のヒト抗体は、例えば、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．）及びＧｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆ．）から商業的に入手することができる。
選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「ガイド付き選択」と称される技法を使用して生成することができる。このアプローチでは、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を使用して、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択をガイドする。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリを含む、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。
抗体は、例えば、抗体が、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかで、抗体ではない別のタンパク質（またはその一部、例えば、タンパク質の少なくとも１０、２０、または５０アミノ酸部分）のアミノ酸配列に、共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して融合される、抗体の融合タンパク質、またはその機能的に活性な断片であり得る。抗体またはその断片は、定常ドメインのＮ末端で他のタンパク質に共有結合してもよい。
抗体は、修飾される、すなわち、任意の種類の分子の共有結合により修飾される類似体及び誘導体を含むが、かかる共有結合により抗体がその抗原結合免疫特異性を保持できるようになる場合に限る。例えば、限定するものではないが、抗体の誘導体及び類似体には、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞抗体単位もしくは他のタンパク質への連結などにより、さらに修飾されたものが含まれる。多数の化学修飾のうちのいずれも、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの存在下での代謝合成などを含むがこれらに限定されない既知の技法により実行され得る。加えて、類似体または誘導体は、１つ以上の非天然アミノ酸を含有し得る。
ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート中の抗体は、Ｆｃ受容体と相互作用するアミノ酸残基に修飾（例えば、置換、欠失、または付加）を有する抗体を含み得る。特に、抗体は、抗ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との間の相互作用に関与すると特定されたアミノ酸残基に修飾を有する抗体を含む。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、例えばＧｅｎｅｎｔｅｃｈ（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）から商業的に入手することも、例えば、化学的合成または組み換え発現技法などの当業者に既知の任意の方法によって産生させることもできる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたはそれと同様のデータベースから、文献出版物から、または日常的なクローニング及び配列決定により、入手することができる。
ある特定の態様では、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの抗体は、モノクローナル抗体、例えば、マウスモノクローナル抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体であり得る。いくつかの態様では、抗体は、抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片であり得る。
がんの治療または予防のための既知の抗体は、本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートすることができる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体は、商業的に入手することも、例えば、組み換え発現技法などの当業者に既知の任意の方法によって産生させることもできる。がん細胞抗原に対して免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたはそれと同様のデータベースから、文献出版物から、または日常的なクローニング及び配列決定により、入手することができる。がんの治療に利用可能な抗体の例としては、転移性乳癌を有する患者の治療用のヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体；非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療用のキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ．ＲＴＭ．（リツキシマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；卵巣癌の治療用のマウス抗体であるＯｖａＲｅｘ（オレゴボマブ；ＡｌｔａＲｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＭＡ）；大腸癌の治療用のＩｇＧ．ｓｕｂ．２ａ抗体であるＰａｎｏｒｅｘ（エドレコロマブ、Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ、ＮＣ）；頭頸部癌などの上皮成長因子陽性癌の治療用の抗ＥＧＦＲ ＩｇＧキメラ抗体であるセツキシマブエルビタックス（セツキシマブ、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、ＮＹ）；肉腫の治療用のヒト化抗体であるビタキシン（エタラシズマブ、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．、ＭＤ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の治療用のヒト化ＩｇＧ．ｓｕｂ．１抗体であるコンパスＩ／Ｈ（アレムツズマブ、Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ、ＭＡ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療用のヒト化抗ＣＤ３３ ＩｇＧ抗体であるＳｍａｒｔ ＭＩ９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の治療用のヒト化抗ＣＤ２２ ＩｇＧ抗体であるＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（エプラツズマブ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．、ＮＪ）；非ホジキンリンパ腫の治療用のヒト化抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体であるＳｍａｒｔ ＩＤ １０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の治療用の放射性標識されたマウス抗ＨＬＡ－Ｄｒ１０抗体であるオンコリム（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫の治療用のヒト化抗ＣＤ２ ｍＡｂであるアロミューン（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ、ＣＡ）；肺癌及び大腸癌の治療用の抗ＶＥＧＦヒト化抗体であるアバスチン（ベバシズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫の治療用の抗ＣＤ２２抗体であるエプラツズマブ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ及びＡｍｇｅｎ，ＣＡ）；ならびに大腸癌の治療用のヒト化抗ＣＥＡ抗体であるＣＥＡｃｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＮＪ）が挙げられるが、これらに限定されない。
ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートに有用な他の抗体としては、トラスツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、バランタマブ、インダツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ １３／５ Ｈ３ｓ抗体、イブリツモマブ、トシツモマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、及びベルツズマブが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の態様では、抗体は、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＯＲ０００２１３、リンツズマブ、及びゲムツズマブからなる群から選択される。
ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートに有用な他の抗体としては、以下の抗原に対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない：ＣＡ１２５（卵巣）、ＣＡ１５－３（がん腫）、ＣＡ１９－９（がん腫）、Ｌ６（がん腫）、ルイスＹ（がん腫）、ルイスＸ（がん腫）、アルファフェトプロテイン（がん腫）、ＣＡ ２４２（大腸）、胎盤性アルカリホスファターゼ（がん腫）、前立腺特異的抗原（前立腺）、前立腺酸性ホスファターゼ（前立腺）、上皮成長因子（がん腫）、ＭＡＧＥ－１（がん腫）、ＭＡＧＥ－２（がん腫）、ＭＡＧＥ－３（がん腫）、ＭＡＧＥ－４（がん腫）、抗トランスフェリン受容体（がん腫）、ｐ９７（黒色腫）、ＭＵＣ１－ＫＬＨ（乳癌）、ＣＥＡ（大腸）、ｇｐ１００（黒色腫）、ＭＡＲＴ１（黒色腫）、ＰＳＡ（前立腺）、ＩＬ－２受容体（Ｔ細胞白血病及びリンパ腫）、ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫）、ＣＤ５２（白血病）、ＣＤ３３（白血病）、ＣＤ２２（リンパ腫）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（がん腫）、ＣＤ３８（多発性骨髄腫）、ＣＤ４０（リンパ腫）、ムチン（がん腫）、Ｐ２１（がん腫）、ＭＰＧ（黒色腫）、及びＮｅｕがん遺伝子産物（がん腫）。いくつかの特定の有用な抗体としては、ＢＲ９６ ｍＡｂ（Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９３）２６１，２１２－２１５）、ＢＲ６４（Ｔｒａｉｌ，Ｐ Ａ，ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７）５７，１００－１０５）、Ｓ２Ｃ６ ｍＡｂなどのＣＤ４０抗原に対するｍＡｂ （Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０００） ６０：３２２５－３２３１）、１Ｆ６ ｍＡｂなどのＣＤ７０抗原に対するｍＡｂ、及びＡＣ１０などのＣＤ３０抗原に対するｍＡｂが挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍関連抗原に結合する他の多くの内在化抗体を使用することができ、これらは精査されている。
本コンジュゲートが結合できる他の抗原としては、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１タンパク質、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐ１ＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、及び／またはＸＡＧＥ１が挙げられるが、これらに限定されない。
ＣＤ４０、ＯＸ４０Ｌ、エンドグリン、ＤＥＣ－２０５、４－１ＢＢＬ、ＣＤ３６、ＣＤ３６、ＣＤ２０４、ＭＡＲＣＯ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＣＬＥＣ９Ａ、ＣＬＥＣ５Ａ、デクチン２、ＣＬＥＣ１０Ａ、ＣＤ２０６、ＣＤ６４、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ１Ａ、ＨＶＥＭ、ＣＤ３２Ｂ、ＰＤ－Ｌ１、ＢＤＣＡ－２、ＸＣＲ－１、及びＣＣＲ２などの抗原提示細胞と関連付けられる抗原に結合する抗体も、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートすることができる。
ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの抗体は、活性化リンパ球上に発現された受容体または受容体複合体の両方に結合することができる。受容体または受容体複合体は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、主要組織適合性タンパク質、レクチン、または補体制御タンパク質を含み得る。好適な免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの非限定的な例は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ７９、ＣＤ９０、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、及びＩＣＯＳである。好適なＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーの非限定的な例は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ９５／Ｆａｓ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ１３７／４－１ＢＢ、ＴＮＦ－Ｒ１、ＴＮＦＲ－２、ＲＡＮＫ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、オステオプロテゲリン、Ａｐｏ２／ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＩＬ－Ｒ３、ＴＲＡＩＬ－Ｒ４、及びＡＰＯ－３である。好適なインテグリンの非限定的な例は、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＣＤ２９、ＣＤ４１、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ１０３、及びＣＤ１０４である。好適なレクチンの非限定的な例は、Ｃ型、Ｓ型、及びＩ型レクチンである。
いくつかの態様では、本開示に有用であり得る抗体には、３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））、アビツズマブ、アブレゼキマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アファセビクマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（登録商標））、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブマ、アンデカリキシマブ、アネツマブ、アニフロルマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アプルツマブ、アルシツモマブ（ＣＥＡ－ＳＣＡＮ（登録商標））、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アチドルトクスマブ、アトリズマブ（トシリズマブ、ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標）、ＲＯＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））、アチヌマブ、アトロリムマブ、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、アジンツキシズマブ、バランタマブ、バピネウズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））、バビツキシマブ、ＢＣＤ－１００、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（登録商標））、ベゲロマブ、ベランタマブ、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標））、ベマリツズマブ、ベンラリズマブ（ＦＡＳＥＮＲＡ（登録商標））、ベルメキマブ、ベルサンリマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ（ＳＣＩＮＩＴＩＭＵＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ベズロトクスマブ（ＺＩＮＰＬＡＶＡ（登録商標））、ビシロマブ（ＦＩＢＲＩＳＣＩＮＴ（登録商標））、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビルタミマブ、ビバツズマブ、ブレセルマブ、ブリナツモマブ、ブロンツベトマブ、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブラジクマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ（ＳＩＬＩＱ（商標））、ブロルシズマブ（ＢＥＯＶＵ（登録商標））、ブロンチクツズマブ、ブロスマブ（ＣＲＹＳＶＩＴＡ（登録商標））、カビラリズマブ、カプラシズマブ（ＣＡＢＬＩＶＩ（登録商標））、カミダンルマブ、カムレリズマブ、カナキヌマブ（ＩＬＡＲＩＳ（登録商標））、カンツズマブ、カプロマブ、カルルマブ、カロツキシマブ、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標））、ｃＢＲ９６、ＣＣ４９、セデリズマブ、セミプリマブ（ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標））、セルグツズマブ、セルトレリマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、シビサタマブ、シルムツズマブ、シタツズマブ、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ、コドリツズマブ、コフェツズマブ、コルツキシマブ、コナツムマブ、コンシズマブ、コスフロビキシマブ、ＣＲ６２６１、クレネズマブ、クリザンリズマブ（ＡＤＡＫＶＥＯ（登録商標））、クロテドゥマブ、クサツズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ（ＺＩＮＢＲＹＴＡ（登録商標））、ダロツズマブ、ダピロリズマブ、ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標））、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブ、デノシムマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標））、デパツキシズマブ、デルロツキシマブ、デツノマブ、デザミズマブ、ジヌツキシマブ（ＵＮＩＴＵＸＩＮ（登録商標））、ジリダブマブ、ドマグロズマブ、ドスタルリマブ、ドルリモマブ、ドルリキシズマブ、ドロジツマブ、ＤＳ－８２０１、ドゥリゴツズマブ、ドゥピルマブ（ＤＵＰＩＸＥＮＴ（登録商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ドゥシグツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標））、エドバコマブ、エドレコロマブ（ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標））、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））、エフングマブ（ＭＹＣＯＧＲＡＢ（登録商標））、エルデルマブ、エレザヌマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ（ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ（登録商標））、エルシリモマブ、エマクツズマブエマパルマブ（ＧＡＭＩＦＡＮＴ（登録商標））、エミベツズマブ、エミシズマブ（ＨＥＭＬＩＢＲＡ（登録商標））、エナポタマブ、エナバツズマブ、エンフォルツマブ（ＰＡＤＣＥＶ（登録商標））、エンリモマブ、エノボリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブ、エプチネズマブ（ＶＹＥＰＴＩ（登録商標）エプラツズマブ、エレヌマブ（ＡＩＭＯＶＩＧ（登録商標））、エルリズマブ、エルツマキソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標））、エトラシズマブ（ＡＢＥＧＲＩＮ（登録商標））、エチギリマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（登録商標））、エキシビビルマブ、ファノレソマブ（ＮＥＵＴＲＯＳＰＥＣ（登録商標））、ファラミロマブ、ファリシマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、ファビツズマブ、フィカルツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フロテツズマブ、フォントリズマブ（ＨＵＺＡＦ（登録商標））、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレマネズマブ（ＡＪＯＶＹ（登録商標））、フレソリムマブ、フロボシマブ、フルネベトマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガルカネズマブ（ＥＭＧＡＬＩＴＹ（登録商標））、ガリキシマブ、ガンコタマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲビブマブ、ゲムツズマブ、ゲボキズマブ、ギルベトマブ、ギムシルマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブ、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標））、ゴミリキシマブ、グセルクマブ（ＴＲＥＭＦＹＡ（登録商標））、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、イナルマブ、イバリズマブ（ＴＲＯＧＡＲＺＯ（登録商標））、ＩＢＩ３０８、イブリツモマブ、イクルクマブ、イダルシズマブ（ＰＲＡＸＢＩＮＤ（登録商標））、イファボツズマブ、イゴボマブ（ＩＮＤＩＭＡＣＩＳ－１２５）、イラダツズマブ、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ、イマプレリマブ、イムシロマブ（ＭＹＯＳＣＩＮＴ（登録商標））、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブ、インドゥサツマブ、イネビリズマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、イオマブ－Ｂ、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ（ＳＡＲＣＬＩＳＡ（登録商標））、イスカリマブ、イスチラツマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ（ＴＡＬＴＺ（登録商標））、ケリキシマブ、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標））、ラクノツズマブ、ラジラツヅマブ、ラムパリズマブ、ラナデルマブ（ＴＡＫＨＺＹＲＯ（登録商標））、ランドグロズマブ、ラプリツキシマブ、ラルカビキシマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンダリズマブ、レンベルビマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レロンリマブ、レソファブマブ、レトリズマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブ、リゲリズマブ、リロトマブ、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロンカスツキシマブ、ロルボツズマブ、ロサツキシズマブ、ルカツムマブ、ルリズマブ、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、ルパルツマブ、ルツキズマブ、マパツムマブ、マルゲツキシマブ、マルスタシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マブリリムマブ、メポリズマブ（ＮＵＣＡＬＡ（登録商標））、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツノマブ、ミリキズマブ、ミルベツキシマブ、ミツモマブ、モドツキシマブ、モラリズマブ、モガムリズマブ（ＰＯＴＥＬＩＧＥＯ（登録商標））、モロリムマブ、モスネツズマブ、モタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（登録商標））、モキセツモマブ（ＬＵＭＯＸＩＴＩ（登録商標））、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ ＯＫＴ３（登録商標））、ナコロマブ、ナミルマブ、ナプツモマブ、ナラツキシマブ、ナマツマブ、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、ナビシキズマブ、ナビブマブ、ナキシタマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ（ＰＯＲＴＲＡＺＺＡ（登録商標））、ネモリズマブ、ＮＥＯＤ００１、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ネタキマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標））、ニルセビマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ、オビルトキサキシマブ（ＡＮＴＨＩＭ（登録商標））、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ（ＯＣＲＥＶＵＳ（登録商標））、オドゥリモマブ、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、オララツマブ（ＬＡＲＴＲＵＶＯ（登録商標））、オレクルマブ、オレンダリズマブ、オロキズマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））、オムブルタマブ、ＯＭＳ７２１、オナルツズマブ、オンテシズマブ、オンツキシズマブ、オンバチリマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ）、オルチクマブ、オテリキシズマブ、オチリマブ、オトレルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾガマイシン、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））、パムレブルマブ、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ＰＤＲ００１、ペンブロリズマブ、ペンツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標））、ペラキズマブ、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標））、ペキセリズマブ、ピジリズマブマブ、ピナツズマブ、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブ（Ｐｏｌｉｖｙ）、プレザルマブ、プロザリズマブ、ポガリズマブ、ポネズマブ、ポルガビキシマブ、プラシネズマブ、プレザリズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ １４０、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラネベトマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））、ラバガリマブ、ラブリズマブ（ＵＬＴＯＭＩＲＩＳ（登録商標））、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、ＲＥＧＮ－ＥＢ３、レナトリマブ、レムトルマブ、レスリズマブ（ＣＩＮＱＡＩＲ（登録商標））、リロツムマブ、リヌクマブ、リサンキズマブ（ＳＫＹＲＩＺＩ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、リババズマブ、ｒｍａｂ、ロバツムマブ、ロレズマブ、ロミルキマブ、ロモソズマブ（ＥＶＥＮＩＴＹ（登録商標））、ロンタリズマブ、ロスマンツズマブ、ロバルピツズマブ、ロベリズマブ（ＬＥＵＫＡＲＲＥＳＴ（登録商標））、ロザノリキシズマブ、ルプリズマブ（ＡＮＴＯＶＡ）、ＳＡ２３７、サシツズマブ、サマリズマブ、サムロタマブ、サリルマブ（ＫＥＶＺＡＲＡ（登録商標））、サトラリズマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ（ＣＯＳＥＮＴＹＸ（登録商標））、セリクレルマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セトルスマブ、セビルマブ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＳＨＰ６４７、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルトラツマブ、シルクマブ、ソフィツズマブ、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スパルタリズマブ、スタムルマブ、ＳＴＩ－６１２９、スレソマブ（ＬＥＵＫＯＳＣＡＮ（登録商標））、スプタブマブ、スチムリマブ、スビズマブ、スブラトクスマブ、タバルマブ、タカツズ（ＡＦＰ－ＣＩＤＥ（登録商標））、タボシズマブ、タラコツズマブ、タリズマブ、タムツベトマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、タレクスツマブ、タボリマブ、テフィバズマブ（ＡＵＲＥＸＩＳ（登録商標））、テリモマブ、テリソツズマブ、テシドルマブ、テトラキセタン、テツロマブ、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプロツムマブ（ＴＥＰＥＺＺＡ（登録商標））、テプリズマブ、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、ティブリズマブ、ティシリムマブ（ＴＲＥＭＥＬＩＭＵＭＡＢ（登録商標））、ティガツズマブ、ティミグツマブマブ、ティモルバブ、ティラゴルマブ、ティラゴツマブ、ティスレリズマブ、ティソツマブ、チウキセタン、チルドラキズマブ（ＩＬＵＭＹＡ（登録商標））、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ（アトリズマブ、ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、トムズトキシ
マブ、トラリズマブ、トサトキスマブ、トシツモマブ（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリズマブ、トレボグルマブ、ツコツズマブ、ツビルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（ＳＴＥＬＥＲＡ（登録商標））、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウトミルマブ、バダスツキシマブ、バナリマブ、バンドルツズマブ、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バリサクマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ（ＮＵＶＩＯＮ（登録商標））、ボバリリズマブ、ボロシキシマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標））、ボンレロリズマブ、ボプラテリマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ、ブナキズマブ、キセンツズマブ、ＸＭＡＢ－５５７４、ザルツムマブ（ＨｕＭＥＸ－ＥＧＦｒ）、ザノリムマブ（ＨｕＭＡＸ－ＣＤ４）、ザツキシマブ、ゼノクツズマブ、ジラリムマブ、ゾルベツキシマブ、またはゾリモマブが含まれるが、これらに限定されない。
分子標的または目的の抗原「と結合する」抗体は、抗体が、抗原を発現する細胞を標的とする際に有用であるような十分な親和性でその抗原に結合することができるものである。
本開示では、「Ｂｍ」基は、１つ超のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、１～１０個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、１～９個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、１～８個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、７または８個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、５個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされる。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、６個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされる。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、７個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされる。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、８個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされる。いくつかの態様では、「Ｂｍ」は、９個のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒにコンジュゲートされる。
ＩＶ．組成物及び使用方法
本明細書に記載されるコンジュゲート及び／または化合物は、薬学的または薬学的に許容される塩の形態であってもよい。いくつかの態様では、かかる塩は、無機または有機の酸または塩基に由来する。
好適な酸付加塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオナート、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、ルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３－フェニル－プロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカノアートが挙げられる。
好適な塩基付加塩の例としては、アンモニウム塩、ナトリウム及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミンなどの有機塩基を有する塩、ならびにアルギニン、リジン、及び同類のものなどのアミノ酸を有する塩が挙げられる。
例えば、Ｂｅｒｇｅは、次のＦＤＡに承認された市販の塩を列挙する：アニオンであるアセテート、ベシル酸塩（ベンゼンスルホン酸塩）、安息香酸塩、重炭酸塩、重酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム（エチレンジアミンテトラアセテート）、カンシル酸塩（樟脳スルホン酸塩）、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸（エチレンジアミンテトラアセテート）、エジシル酸塩（１，２－エタンジスルホン酸塩）、エストレート（ラウリル硫酸塩）、エシレート（エタンスルホン酸塩）、フマル酸塩、グルセプト酸塩（グルコヘプトン酸塩）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（グリコールアミドフェニルアルソネート）、ヘキシルレゾルシン酸塩（ｈｅｘｙｌｒｅｓｏｒｃｉｎａｔｅ）、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ’－ジ（デヒドロアビエチル）エチレンジアミン）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イセチオン酸塩（２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシレート（メタンスルホン酸塩）、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、ムケート（ｍｕｃａｔｅ）、ナプシル酸塩（２－ナフタレンスルホン酸塩）、硝酸塩、パモ酸塩（エンボ酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩（８－クロロテオフィリネート）、及びトリエチオジド、有機カチオンであるベンザチン（Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン）、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）、及びプロカイン、ならびに金属カチオンであるアルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛。
Ｂｅｒｇｅは、加えて、次のＦＤＡに承認されていない市販（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ外）の塩を列挙する：アニオンであるアジピン酸塩、アルギン酸塩、アミノサリチル酸塩、アンヒドロメチレンクエン酸塩、アレコリン、アスパラギン酸塩、重硫酸塩、臭化ブチル、樟脳酸塩、ジグルコン酸塩、二臭化水素酸塩、ジコハク酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、フッ化水素、ヨウ化水素酸塩、メチレンビス（サリチル酸塩）、ナパジシル酸塩（１，５－ナフタレンジスルホン酸塩）、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルエチルバルビツール酸塩、ピクリン酸塩、プロピオン酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカノアート、有機カチオンであるベネタミン（ｂｅｎｅｔｈａｍｉｎｅ）（Ｎ－ベンジルフェネチルアミン）、クレミゾール（１－ｐ－クロロベンジル－２－ピロリジン－１’－イルメチルベンズイミダゾール）、ジエチルアミン、ピペラジン、及びトロメタミン（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ならびに金属カチオンであるバリウム及びビスマス。
本明細書に記載されるｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを含む医薬組成物はまた、投与様式に応じて異なってもよい、好適な担体、賦形剤、及び補助剤を含んでもよい。
いくつかの態様では、薬学的組成物は、好適な非経口剤形として製剤化することができる。該製剤は、当該技術分野において既知の様々な方法により調製することができる。医薬組成物は、直接血流中に、筋肉中に、または直接器官中に投与することができる。非経口投与に好適な手段としては、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、及び皮下が挙げられる。非経口投与に好適なデバイスとしては、有針注射器、無針注射器、及び注入技法が挙げられる。
非経口組成物は、典型的には、塩、炭水化物、及び緩衝剤などの賦形剤を含有してもよい水溶液である。しかしながら、組成物はまた、滅菌非水性溶液として、または滅菌パイロジェンフリー水などの好適なビヒクルと併せて使用する乾燥形態として製剤化してもよい。
例えば凍結乾燥による、滅菌条件下での非経口組成物の調製は、当業者に周知の標準的技法を使用して容易に達成することができる。
非経口投与のための製剤は、即時放出及び／または調節放出のために製剤化することができる。調節放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、徐放、標的化放出、及びプログラム放出が含まれる。このため、本組成物は、活性剤の調節放出をもたらす植込み型デポーとして投与するための、固体、半固体、またはチキソトロピー液として製剤化することができる。
非経口製剤は、保存剤などであるがこれらに限定されない、非経口剤形で使用される他の好適な薬学的に許容される賦形剤と混合することができる。
別の態様では、薬学的組成物は、好適な経口剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、ペレット剤、懸濁液、溶液、エマルションなどとして製剤化することができる。他の好適な担体、例えば、崩壊剤、希釈剤、キレート剤、結合剤、流動促進剤、潤滑剤、充填剤、増量剤、抗粘着剤などが存在し得る。
経口投薬製剤はまた、他の好適な医薬品賦形剤、例えば、甘味料、ビヒクル／湿潤剤、着色剤、香味剤、保存剤、粘度向上／増粘剤などを含有してもよい。
本明細書に記載のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、様々ながんを治療するために使用され得る。本開示のある特定のコンジュゲートは、有効性の発現、薬物動態（例えば、吸収、分布、代謝、排泄）、溶解性（例えば、水溶性）、他の医薬品との相互作用（例えば、薬物代謝酵素阻害作用）、安全性（例えば、急性毒性、慢性毒性、遺伝毒性、生殖毒性、心臓毒性、発がん性、中枢毒性）、及び／または安定性（例えば、化学的安定性、酵素に対する安定性）の観点から優れており、医薬品として有用であり得る。
本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、疾患、例えば、がん、例えば、大腸癌（例えば、大腸癌、直腸癌、肛門癌、家族性大腸癌、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、消化管間質腫瘍）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、悪性中皮腫）、中皮腫、膵臓癌（例えば、膵管癌、膵内分泌腫瘍）、咽頭癌、喉頭癌、食道癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ／ｇａｓｔｒｉｃ）癌（例えば、乳頭腺癌、粘液性腺癌、腺扁平上皮癌）、十二指腸癌、小腸癌、乳癌（例えば、浸潤性乳管癌、非浸潤性乳管癌、炎症性乳癌）、卵巣癌（例えば、上皮性卵巣癌、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣性胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍）、精巣腫瘍、前立腺癌（例えば、ホルモン依存性前立腺癌、ホルモン非依存性前立腺癌、去勢療法抵抗性前立腺癌）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌、原発性肝癌、肝外胆管癌）、甲状腺癌（例えば、甲状腺髄様癌）、腎臓癌（例えば、腎細胞癌（例えば、淡明細胞型腎細胞癌）、腎盂と尿管の移行上皮癌）、子宮癌（例えば、子宮頚部癌、子宮体部癌、子宮肉腫）、妊娠性絨毛癌、脳腫瘍（例えば、髄芽細胞腫、神経膠腫、松果体星細胞腫瘍、毛様細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、退形成性星細胞腫、下垂体腺腫）、網膜芽細胞腫、皮膚癌（例えば、基底細胞腫、悪性黒色腫）、肉腫（例えば、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、軟部組織の肉腫、紡錘細胞肉腫）、悪性骨腫瘍、膀胱癌、血液（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ／ｂｌｏｏｄ）癌（例えば、多発性骨髄腫、白血病（例えば、急性骨髄性白血病）、悪性リンパ腫、ホジキン病、慢性骨髄増殖性疾患）、原発不明癌の予防または治療のための薬剤；がん成長阻害剤；がん転移阻害剤；アポトーシス促進剤；前がん病変（例えば、骨髄異型性症候群）の治療のための薬剤などの医薬品として使用することができる。
ある特定の態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、乳癌、胃癌、卵巣癌、子宮癌、肺癌、膵臓癌、肝臓癌、リンパ腫、または血液癌のための医薬品として使用することができる。
さらに、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートまたは、非薬物療法と同時に使用することができる。正確には、コンジュゲートは、非薬物療法、例えば、（１）手術、（２）アンジオテンシンＩＩなどを用いる高血圧化学療法、（３）遺伝子療法、（４）温熱療法、（５）凍結療法、（６）レーザー焼灼法、及び（７）放射線療法と組み合わせることができる。
例えば、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを上述の手術などの前または後に使用することにより、耐性発現の防止、無病生存期間の延長、がんの転移または再発の抑制、延命などの効果が得られてもよい。
加えて、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートによる治療を、支持療法：（ｉ）各種感染症の併発に対する抗生物質（例えば、パンスポリンなどのようなβ－ラクタム系、クラリスロマイシンなどのようなマクロライド系）の投与、（ｉｉ）栄養不良改善のための高カロリー輸液、アミノ酸製剤、または総合ビタミン剤の投与、（ｉｉｉ）疼痛緩和のためのモルヒネ投与、（ｉｖ）悪心、嘔吐、食欲不振、下痢、白血球減少、血小板減少、ヘモグロビン濃度低下、脱毛、肝障害、腎障害、ＤＩＣ、発熱などのような副作用を改善する薬剤の投与、及び（ｖ）がんの多剤耐性を抑制するための薬剤の投与などと組み合わせることが可能である。
いくつかの態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、標準治療療法、例えば、１つ以上の治療薬（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用することができる。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示される腫瘍を治療する方法は、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与することを含む。いくつかの態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、免疫経路の複数の要素が標的化され得るように、１つ以上の抗がん剤と組み合わせて使用することができる。いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路をとおしたシグナル伝達を遮断する）。本方法で使用することができる免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例には、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組み合わせが含まれる。併用治療の包括的かつ非限定的な一覧は、本出願の併用治療の節に詳細に開示されている。
いくつかの態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、追加の治療薬の投与前または投与後に対象に投与される。他の態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、追加の治療薬と同時に対象に投与される。ある特定の態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート及び追加の治療薬は、薬学的に許容される担体中で単一の組成物として同時に投与され得る。他の態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート及び追加の治療薬は、別個の組成物として同時に投与される。
いくつかの態様では、本開示のｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒまたはｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートで治療することができる対象は、ラットまたはマウスなどの非ヒト動物である。いくつかの態様では、治療することができる対象は、ヒトである。
Ｖ．ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ及び組成物を調製する方法
本開示は、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを調製する方法を提供し、本プロセスは、結合部分を、式（Ｉ－１）の化合物：
Figure 2023519974000085
 の化合物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
Ｘが、－ＮＲ２－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ２であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１～６の整数であり、
ｍが、２～６の整数であり、
ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
Ｌ’が、結合部分にコンジュゲートする切断可能なまたは切断可能でないリンカーの前駆体である。
本明細書に記載されるとおり、リンカーの前駆体は、結合部分に接続するヘテロ二官能基を含む。
いくつかの態様では、Ｌ’は、切断可能でないリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000086
 式中、
ｐが、１～１０の整数であり、
Figure 2023519974000087
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、Ｌ’は、
Figure 2023519974000088
 である。
いくつかの態様では、ｐは、５である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、切断可能なリンカーの前駆体である。
いくつかの態様では、リンカーの前駆体は、プロテアーゼにより切断可能である。いくつかの態様では、リンカーの前駆体は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000089
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、各々独立して、存在しないか、またはＬ－もしくはＤ－配位にある天然のアミノ酸残基であり、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とし、
かつ
Figure 2023519974000090
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４は、独立して、存在しないか、またはＬ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、及びグリシンからなる群から選択され、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とする。
いくつかの態様では、Ｚ１は、存在しないか、またはグリシンであり、Ｚ２は、存在しないか、またはＬ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、及びグリシンからなる群から選択され、Ｚ３は、Ｌ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンからなる群から選択され、Ｚ４は、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択される。
いくつかの態様では、Ｌ’は、
Figure 2023519974000091
 である。
いくつかの態様では、ｑは、５である。
いくつかの態様では、Ｌ’は、生体還元性リンカーの前駆体である。いくつかの態様では、生体還元性リンカーの前駆体は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000092
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ’”が、各々独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６）２ＮＣ１－Ｃ６アルキル、及びＣ１－Ｃ６アルキルから選択されるか、または２つのジェミナルＲ基が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロブチルもしくはシクロプロピル環を形成することができ、
Figure 2023519974000093
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、酸切断可能なリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下からなる群から選択され、
Figure 2023519974000094
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000095
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、クリック－トゥ－リリースリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下から選択され、
Figure 2023519974000096
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000097
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、ピロホスファターゼ切断可能なリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、
Figure 2023519974000098
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
Figure 2023519974000099
 が、Ｘへの結合点である。
ある特定の態様では、Ｌ’は、ベータグルコルニダーゼ切断可能なリンカーの前駆体である。いくつかの態様では、Ｌ’は、以下から選択され、
Figure 2023519974000100
 式中、
ｑが、２～１０の整数であり、
－－－－が、存在しないか、または結合であり、
Figure 2023519974000101
 が、Ｘへの結合点である。
いくつかの態様では、式（Ｉ－１）の化合物は、
Figure 2023519974000102
 から選択される。
いくつかの態様では、結合部分は、式（Ｉ－１）の化合物と反応させる前に、前処理される。ある特定の態様では、式（Ｉ－１）の化合物を、抗体またはその抗原結合部分を含む結合部分と反応させる。結合部分が抗体である態様では、抗体は、式（Ｉ－１）の化合物との反応前に、鎖間ジスルフィドを還元するように前処理することができる。
一般合成方法及び中間体
本開示の化合物は、当業者であれば、本開示及び当技術分野の知識に照らして、ならびに／または以下に示すスキーム及び合成例を参照することによって、調製することができる。例示的な合成経路は、以下のスキーム及び実施例に示される。以下のスキーム及び実施例に出てくる変数（例えば、「Ｒ」基）は、本出願の他の場所に出てくるものとは独立して読み取られるべきであることを理解されたい。当業者であれば、以下に示されるスキーム及び実施例が、どのように本明細書に記載される化合物の調製を例解するのかを容易に理解する。
スキームで使用する略語は、概して、当該技術分野で使用される慣例に従う。本明細書及び実施例で使用する化学的略語は、次のとおりに定義する：「ＴＨＦ」テトラヒドロフラン；「ＤＭＦ」Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド；「Ｍｅ」メチル；「Ｂｕ」ブチル；「ＦＡ」ギ酸；「ＰＥ」石油エーテル；「ＭｅＯＨ」メタノール；「ＥｔＯＨ」エタノール；「ＤＣＭ」ジクロロメタン；「ＢＯＣ」または「Ｂｏｃ」「ＴＦＡ」トリフルオロ酢酸；「ＤＭＳＯ」ジメチルスルホキシド；「ＥｔＯＡｃ」酢酸エチル；「ＯＡｃ」アセテート；「ｄｐｐｆ」１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン；「ｄｂａ」ジベンジリデンアセトン；「ＣＤＩ」１，１’－カルボニルジイミダゾール；「ＴＢＡＦ」フッ化テトラブチルアンモニウム；「ＴＢＳＣ１」塩化ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル；「Ｅｔ２Ｏ」ジエチルエーテル；「ＡＣＮ」アセトニトリル；「ｈ」時間；「ｍｉｎ」分；「ｒｔ」室温または保持時時間（文脈による）；「ａｑ．」水性、「ｓａｔ．」飽和；「ｍｉｎ」分；「ＨＯＢｔ」１－ヒドロキシベンゾトリアゾール；「ＨＡＴＵ」１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシド ヘキサフルオロフォスフェートまたはＮ－［（ジメチルアミノ）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ－［４，５－ｂ］ピリジン－１－イルメチレン］－Ｎ－メチルメタンアミニウム ヘキサフルオロホスフェート Ｎ－オキシド；「ＤＩＥＡ」及び「ｉＰｒＮＥｔ２」ジイソプロピルエチルアミン；「Ｅｔ３Ｎ」及び「ＴＥＡ」トリエチルアミン。
Figure 2023519974000103
Figure 2023519974000104
 実施例１：化合物（Ｉａ）の合成
Figure 2023519974000105
 ステップ１：化合物２の合成
ＴＨＦ（７５．００ｍＬ）中の２－クロロ－４－ニトロフェニル）酢酸（化合物１、５．００ｇ、２３．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＢＨ３－Ｍｅ２Ｓ（ＴＨＦ中１０Ｍ）（５．８０ｍＬ、５８．０ｍｍｏｌ、２．５０等量）窒素雰囲気下０℃で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下７０℃で２時間攪拌した。混合物を室温に冷却した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（３ｇ、６４％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２６ （ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０－８．０５ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９９－３．９１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１６－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）．
Figure 2023519974000106
 ステップ２：化合物３の合成
トルエン（１５０．００ｍＬ）中の２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物２、５．００ｇ、２４．８００ｍｍｏｌ、１．００等量）及び２－ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（２９．０ｍＬ、１４８．２８ｍｍｏｌ、８．００等量）攪拌溶液に、Ｂｕ４ＮＨＳＯ４（６．７４ｇ、１９．８４ｍｍｏｌ、０．８０等量）を加えた。上記の混合物に、ＮａＯＨ（Ｈ２Ｏ中５Ｍ）（５００．００ｍＬ）を４０分かけて０℃で滴加した。得られた混合物をさらに２時間２５℃で攪拌した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝４：１）により精製して、２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（８ｇ、６５％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０－８．０４ （ｍ， １Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０９ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８３－３．８０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１７－３．１４（ｍ， ２Ｈ）， １．４５（ｓ， ９Ｈ）．
Figure 2023519974000107
 ステップ３：化合物４の合成
ＤＣＭ（８０．００ｍＬ）中の２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物３、８．００ｇ、１６．１４ｍｍｏｌ、１．００等量、６３．７％）の攪拌溶液に、ＴＦＡ（１６．００ｍＬ）を室温で滴加した。得られた混合物を１時間室温で攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。得られた混合物を水（５００ｍＬ）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。これにより、［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸（６．５ｇ、粗）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： ５１７ （２Ｍ－Ｈ）－
Figure 2023519974000108
 ステップ４：化合物５の合成
ＤＭＦ（６５．００ｍＬ）中の［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸（化合物４、６．３０ｇ、２１．８４ｍｍｏｌ、１．００等量、９０％）及びＨＡＴＵ（１２．４６ｇ、３２．７６ｍｍｏｌ、１．５０等量）の攪拌溶液に、ＣＨ３ＮＨ２．ＨＣｌ（１．７７ｇ、２６．２１ｍｍｏｌ、１．２０等量）及びＤＩＥＡ（１５．２０ｇ、１１７．８ｍｍｏｌ、４．００等量）を室温で滴加した。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。得られた混合物を水で希釈した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］－Ｎ－メチルアセトアミド（１０ｇ、純度：５０％、収率：８４％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：２７３．２８ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000109
 ステップ５：化合物６の合成
ＴＨＦ（３５．００ｍＬ）中の２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物５、３．３ｇ、１２．１０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＢＨ３－ＴＨＦ（ＴＨＦ中１Ｍ）（１２．１０ｍＬ、１２．１０ｍｍｏｌ、１．００等量）を窒素雰囲気下室温で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下７０℃で２時間攪拌した。反応をＭｅＯＨでクエンチした。残留物１Ｎ ＨＣｌでｐＨ６に酸性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ３（飽和、水性）でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。これにより、［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］（メチル）アミン（２．５ｇ、８０％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：２５９．２６ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000110
 ステップ６．化合物７の合成
ＴＨＦ（４０ｍＬ）中の［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］（メチル）アミン（化合物６、２．５０ｇ、９．６９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＢｏｃ２Ｏ（２．５３ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、１．２０等量）の攪拌溶液に、ＴＥＡ（１．１７ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、１．２０等量）を２５℃で滴加した。混合物を２５℃で２時間攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、Ｎ－［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１．７０ｇ、５０％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：３５９．３６ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000111
 ステップ７：化合物８の合成
ＥｔＯＨ（８５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１７ｍＬ）中のＮ－［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物７、１．７０ｇ、４．７４ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮＨ４Ｃｌ（７５０ｍｇ、１４．２ｍｍｏｌ、３．００等量）の攪拌溶液に、Ｆｅ（１．３ｇ、２３．７ｍｍｏｌ、５．００等量）を２５℃で加えた。混合物を８０℃で２時間攪拌した。混合物を室温に冷却した。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＥｔＯＨ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝４：１）により精製して、Ｎ－［２－［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（９００ｍｇ、５８％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：３２９．３３ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000112
 ステップ８：化合物９の合成
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＮ－［２－［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８、５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ジホスゲン（６０１ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ、２．００等量）を２５℃で滴加した。混合物を２５℃で１時間攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮し、ＤＭＦ（５ｍＬ）に再溶解させた。ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ１、下記のとおりに調製、４９９ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．２０等量）及びＴＥＡ（１．５６ｇ、１５．４５ｍｍｏｌ、１０．００等量）の攪拌混合物に、上述した溶液を２５℃で滴加した。混合物を２５℃で１時間攪拌した。得られた混合物を４０ｍＬの氷水で希釈した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５×４０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、（２－（２－クロロ－４－（３－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）ウレイド）フェネトキシ）エチル）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（６７０ｍｇ、７０％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳＩ）：６２８．６３ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000113
 ステップ９：ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＮ－［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物９、６７０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ、１等量）の攪拌溶液に、ＴＦＡ（２．５ｍＬ）を０℃で滴加した。混合物を２５℃で１時間攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。粗生成物を次の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した：カラム、ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８ ＯＢＤ Ｐｒｅｐ Ｃｏｌｕｍｎ、１００μｍ、１９×２５０ｍｍ；移動相、水（０．０５％ ＴＦＡ）及びＡＣＮ（３０分で５％のＢ相から最大６０％）；検出器、ＵＶ ２２０ｎｍ。収集した画分を凍結乾燥させて、１－（３－クロロ－４－［２－［２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－ １－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（５００ｍｇ、８９％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：５２８．５３ （Ｍ＋Ｈ）＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４） δ７．７７ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５７－７．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４９ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１９－５．１ （ｍ， １Ｈ）， ４．５５－４．４１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．７５－３．６７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．２１－３．１５ （ｍ，２Ｈ）， ３．０３－３．９６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９６－２．８４ （ｍ， １Ｈ）， ２．８３－２．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．５５－２．４２ （ｍ， １Ｈ）， ２．２１－２．１２ （ｍ， １Ｈ）．
Figure 2023519974000114
 ステップ１０：化合物（Ｉａ）の合成
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の１－（３－クロロ－４－［２－［２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１、２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１．００等量）及びルチジン（８１ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ、２．００等量）の攪拌混合物に、ＨＯＢＴ（２６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、０．５０等量）及び［４－［（２Ｓ）－５－（カルバモイルアミノ）－２－［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタンアミド］ペンタンアミド］フェニル］炭酸メチル４－ニトロフェニル（２７９ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１．００等量）を室温で分割して加えた。反応混合物を１２時間窒素雰囲気下４０℃で攪拌した。反応を室温に冷却した後、反応を水（３０ｍＬ）でクエンチした。得られた混合物をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（２×３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を真空下で濃縮乾固させた。残留物を逆相カラム（Ｃ１８、移動相Ａ：水中０．１％ ＦＡ、Ｂ：ＡＣＮ）により精製した。収集した画分を真空下で濃縮乾固させた。粗生成物（６０ｍｇ）を次の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した（カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ ＯＢＤカラム ３０×１５０ｍｍ ５ｕｍ、ｎ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で３３ Ｂから５０ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：５．２７分）。収集した画分を凍結乾燥させて、［４－［（２Ｓ）－５－（カルバモイルアミノ）－２－［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタンアミド］ペンタンアミド］フェニル］Ｎ－［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸メチル（２３．８ｍｇ、５％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：１１２６．１１ （Ｍ＋Ｈ）＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９（ｓ， １Ｈ）， １０．００（ｓ， １Ｈ）， ８．８８（ｓ， １Ｈ）， ８．１２－８．０８（ｍ， １Ｈ），７．８５－７．８１（ｍ， ２Ｈ）， ７．７０－７．６７（ｍ， ２Ｈ）， ７．６０－７．５８（ｍ， １Ｈ）， ７．５１（ｓ， １Ｈ）， ７．４７－７．４４（ｍ， １Ｈ）， ７．２８－７．２５（ｍ， ２Ｈ）， ７．１８－７．１２（ｍ， ２Ｈ）， ７．００（ｓ， ２Ｈ）， ６．９０（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．９７－５．９５（ｍ， １Ｈ）， ５．４２（ｓ， ２Ｈ）， ５．１２－５．０５（ｍ， １Ｈ）， ４．９８（ｓ， ２Ｈ）， ４．４２－４．３２（ｍ， ４Ｈ）， ４．１８－４．１５（ｍ， １Ｈ）， ３．５６－３．４０（ｍ， ４Ｈ）， ３．３７－３．３６（ｍ， ３Ｈ），３．０５－２．９０（ｍ， ３Ｈ）， ２．８９－２．８５（ｍ， ５Ｈ）， ２．７２－２．５５（ｍ， ２Ｈ）， ２．４０－２．３３（ｍ， ２Ｈ）， ２．２５－２．１５（ｍ， ２Ｈ）， ２．００－１．８７（ｍ， ２Ｈ）， １．７４－１．５７（ｍ， ２Ｈ）， １．５０－１．４２（ｍ， ５Ｈ）， １．２２－１．１０（ｍ， ３Ｈ）， ０．８５－０．８０（ｍ， ６Ｈ）．
Figure 2023519974000115
Figure 2023519974000116
 実施例２：化合物（Ｉｂ）の合成
Figure 2023519974000117
 ステップ１：化合物１１の合成
ＤＭＦ（８０ｍｌ）中の４－ブロモ－２－（ブロモメチル）安息香酸メチル（化合物１０、２０．０ｇ、６４．８ｍｍｏｌ、１．００等量）及び３－アミノピペリジン－２，６－ジオン塩酸塩（１０．６４ｇ、８３．０ｍｍｏｌ、１．２８等量）の攪拌混合物に、ＴＥＡ（２２．４ｍＬ、１６２．２ｍｍｏｌ、２．５０等量）を窒素雰囲気下２５℃で滴加した。混合物を２５℃で１６時間攪拌した。この後、Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ）、ＡｃＯＨ（２３ｍＬ）、及びＥｔ２０（６０ｍＬ）を２５℃で連続して加えた。混合物を２５℃で２時間攪拌した。沈殿した固体を濾過により収集し、Ｅｔ２Ｏ（６０ｍＬ）で洗浄した。これにより、３－（５－ブロモ－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン（９．０ｇ、４２％）を薄青色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：３２３．３２ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000118
 ステップ２：化合物１２の合成
ＤＭＦ（８ｍＬ）中の３－（５－ブロモ－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン（化合物１１、１．００ｇ、３．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びｄｐｐｆ（５１ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、０．０３等量）の攪拌混合物に、Ｚｎ（ＯＡｃ）２（１７０ｍｇ、０．９２８ｍｍｏｌ、０．３０等量）、Ｚｎ（ＣＮ）２（５４５ｍｇ、４．６４ｍｍｏｌ、１．５０等量）、及びＰｄ２（ｄｂａ）３（２８ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、０．０１等量）を窒素雰囲気下２５℃で加えた。最終反応混合物に、マイクロ波放射線を２時間１２０℃で照射した。混合物を室温に冷却し、濾過した。濾過ケークをＭｅＯＨ（３×３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８０ｇ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）に供して、所望の生成物２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－カルボニトリル（４００ｍｇ、４７％）を茶色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： ２７０ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000119
 ステップ３：ＩＮＴ１の合成
ＭｅＯＨ（２５ｍＬ）中の２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－カルボニトリル（化合物１２、３．０ｇ、１１．１４ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＨＣｌ（１２Ｍ）（３．６ｍＬ）の攪拌混合物に、ＰｔＯ２（１．２５ｇ、５．５ｍｍｏｌ、０．４９等量）を２５℃で加えた。混合物を、水素バルーンを使用して、室温の水素雰囲気下で１６時間水素化した。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＭｅＯＨ（２×３０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた固体をＤＣＭ：ＭｅＯＨ（３：１）（３×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた。これにより、３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（２．５ｇ、８０％）を灰色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： ２７４ （Ｍ＋Ｈ）＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１１．０２ （ｓ， １Ｈ）， ８．１５ （ｓ， １Ｈ）， ７．９８ （ｄ， Ｊ＝８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８９（ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， １Ｈ），５．１６－５．１１ （ｍ， １Ｈ）， ４．５２ （ｄ， Ｊ＝１７．２Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４０ （ｄ， Ｊ＝１７．２Ｈｚ， １Ｈ）， ２．９６－２．９０ （ｍ， １Ｈ）， ２．６０－２．５４ （ｍ， １Ｈ）， ２．４３－２．３４ （ｍ， １Ｈ）， ２．０６－１．９６ （ｍ， １Ｈ）
Figure 2023519974000120
 ステップ４：化合物１４の合成
ＴＨＦ（７５ｍＬ）中の（２－クロロ－４－ニトロフェニル）酢酸（化合物１３、５．００ｇ、２２．５０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＢＨ３－Ｍｅ２Ｓ（ＴＨＦ中１０Ｍ）（５．６０ｍＬ、５６ｍｍｏｌ、２．５０等量）を窒素雰囲気下０℃で滴加した。混合物を７０℃で２時間攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムに適用し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１）で溶出させて、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（４．４４ｇ、８８％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２６ （ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０－８．０５ （ｍ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９９－３．９１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１６－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）
Figure 2023519974000121
 ステップ５：化合物１５の合成
ＤＭＦ（５０．００ｍＬ）中の２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物１４、４．４４ｇ、２２．０２ｍｍｏｌ、１．００等量）及びイミダゾール（４．５０ｇ、６６．０６ｍｍｏｌ、３．００等量）の攪拌混合物に、ＴＢＳＣ１（６．９７ｇ、４６．２５ｍｍｏｌ、２．１０等量）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で１６時間攪拌した。得られた混合物を水（１００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で希釈した。合わせた有機層をブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムに適用し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１０：１）で溶出させて、ｔｅｒｔ－ブチル［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］ジメチルシラン（６．６ｇ、９０％）を無色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２４（ｓ， １Ｈ）， ８．０６－８．０４ （ｍ， １Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８９－３．８６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０６－０．０４ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８５（ｓ， ９Ｈ）， ０．０４（ｓ， ６Ｈ）．
Figure 2023519974000122
 ステップ６：化合物１６の合成
ＥｔＯＨ（１１０ｍＬ）／水（５５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］ジメチルシラン（化合物１５、５．７０ｇ、１８．０５ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＦｅ（１０．０８ｇ、１８０．４５ｍｍｏｌ、１０．００等量）の混合物に、ＮＨ４Ｃｌ（９．６５ｇ、１８０．４５ｍｍｏｌ、１０等量）を加えた。混合物を８０℃で２時間攪拌した。混合物を室温に冷却した。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＥｔＯＨ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発乾固させて、４－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］－３－クロロアニリン（５．２ｇ、粗）を淡茶色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：２８６．２９ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000123
 ステップ７：化合物１７の合成
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の４－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］－３－クロロアニリン（化合物１６、２００．００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＴＥＡ（１４１ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ、２．００等量）の溶液に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＣＤＩ（１１３ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．００等量）を窒素液滴下０℃で滴加した。得られた混合物を２５℃で１時間攪拌した。次に、上記の溶液及びＴＥＡ（１４１ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ１、１９２ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に滴加した。同じ反応を２回繰り返した。得られた混合物を２５℃で１時間攪拌した。反応物を水（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発乾固させた。残留物をシリカゲルカラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製して、１－（４－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］－３－クロロフェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（１７０ｍｇ、２１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：５８５．５９ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000124
 ステップ８：ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ３の合成
ＴＨＦ（２．００ｍＬ）中の１－（４－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］－３－クロロフェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（化合物１７、１７０．００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｎ、０．５８ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ、２．００等量）を０℃で加えた。得られた混合物を２５℃で８時間攪拌した。反応物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製して、１４７ｍｇの粗１－（３－クロロ－４－（２－ヒドロキシエチル）フェニル）－３－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソイソインドリン－５－イル）メチル）尿素を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：４７１．４７ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000125
 ステップ９：化合物１９の合成
２－メチル－２－スルファニルプロパン－１－オール（化合物１８、１．４ｇ、１３．２ｍｍｏｌ、１．００等量）及び５－ニトロ－２－［（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル］ピリジン（化合物１２０、２．０５ｇ、６．６７ｍｍｏｌ、０．５０等量）をジクロロメタン（３．５０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（３．５０ｍＬ）の溶媒の混合物に加えた。得られた混合物を１５℃で攪拌した。次に、二酸化マンガン（２．２９ｇ、２６．２ｍｍｏｌ、２等量）を分割して加えた。得られた混合物を１５℃で１５分間攪拌した。ＬＣＭＳトレース図により、反応の完了が示された。反応物を蒸発乾固させ、残留物を、次の条件の逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中のＡＣＮ（０．１％ ＮＨ４ＨＣＯ３）、３０分で１０％から１００％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を真空下で濃縮乾固させて、２－メチル－２－［（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル］プロパン－１－オール（２．２ｇ、５８％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： ２６１ （Ｍ＋Ｈ）＋．
Figure 2023519974000126
 ステップ１０：化合物２０の合成
無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の２－メチル－２－［（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル］プロパン－１－オール（化合物２０、１．０ｇ、３．８４ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ＭｅＳＯ２Ｎａ（１．５７ｇ、１５．４ｍｍｏｌ、４．００等量）及びヨウ素（１．９５ｇ、７．６８ｍｍｏｌ、２．００等量）を分割して加えた。反応混合物を４５℃で２４時間攪拌した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより精製して（ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝３：１、Ｒｆ＝０．６０；石油エーテル中０～３５％ ＥｔＯＡｃ）、２－（メタンスルホニルスルファニル）－２－メチルプロパン－１－オール（８０ｍｇ、１０％）黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３Ｃ１）： δ３．５０（ｓ， ２Ｈ）， ３．３３（ｓ， ３Ｈ）， ２．１６（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １．４７（ｓ， ６Ｈ）．
Figure 2023519974000127
 ステップ１１：化合物（Ｉｂ）の合成
ＤＭＦ（４ｍＬ）中の１－［３－クロロ－４－（２－ヒドロキシエチル）フェニル］－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ３、２００．００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＴＥＡ（１２９ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、３．００等量）の溶液に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＣＤＩ（１３８ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、２．００等量）の溶液を加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、水（２０ｍＬ×３）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発乾固させて、粗生成物（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］イミダゾール－１－カルボン酸エチル、２００ｍｇ）を淡黄色固体として得た。ＤＭＦ（８ｍＬ）中の粗生成物（１００．００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＣＳ２ＣＯ３（１１５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、２．００等量）の溶液に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２－（メタンスルホニルスルファニル）－２－メチルプロパン－１－オール（化合物２０，５９ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１．８０等量）を室温で滴加した。反応物を１５℃で２２時間攪拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）及び氷冷した水（１００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離させた。水相をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ×３）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で蒸発乾固させて、粗生成物（１５０ｍｇ）を黄色固体として得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣで精製した（カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ ＯＢＤカラム ３０×１５０ｍｍ ５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で３８ Ｂから５８ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：５．１２分）。収集した画分を凍結乾燥させて、１－［３－クロロ－４－［２－（［［２－（メタンスルホニルスルファニル）－２－メチルプロポキシ］カルボニル］－オキシ）エチル］フェニル］－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（１５．７ｍｇ、１１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）：６８１．６８ （Ｍ＋Ｈ）＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９ （ｓ， １Ｈ）， ８．８６ （ｓ， １Ｈ）， ７．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２４－７．１７ （ｍ， １Ｈ）， ６．８７－６．８４ （ｍ， １Ｈ）， ５．７６ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１３－５．１１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３２－４．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．００－２．８７ （ｍ， ３Ｈ）， ２．６２－２．５８ （ｍ， １Ｈ）， ２．４４－２．３４ （ｍ， １Ｈ）， ２．０１－１．９５ （ｍ， １Ｈ）， １．４５ （ｓ， ６Ｈ）．
Figure 2023519974000128
Figure 2023519974000129
 実施例３：化合物（Ｉｃ）の合成
Figure 2023519974000130
 ステップ１：化合物２３の合成
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の（２－アミノフェニル）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物２２、３００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＣＤＩ（２１８ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＴＥＡ（６８ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１．００等量）を窒素雰囲気下０℃で滴加した。混合物を０℃で２時間攪拌した。上記の混合物に、３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ１、３６８ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、１．００等量）を分割して加えた。得られた混合物を一晩７５℃で攪拌した。次に、反応混合物を室温に冷却した。得られた混合物を水（３０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、Ｎ－［２－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（３００ｍｇ、４２％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： ５２２ （Ｍ＋Ｈ）＋
Figure 2023519974000131
 ステップ２．ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ４の合成
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＮ－［２－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物２３、３００ｍｇ、１．００等量）攪拌溶液に、ＴＦＡ（５ｍＬ）を０℃で加えた。混合物を０℃で２時間攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。粗生成物を次の条件で逆相により精製した（Ｃ１８，移動相Ａ：水（０．１％ ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分）。収集した画分を真空下で濃縮して、３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－１－［２－（メチルアミノ）フェニル］尿素（２１０ｍｇ、８７％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： ４２２ （Ｍ＋Ｈ）＋．１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９（ｓ， １Ｈ）， ７．６９ （ｄ， Ｊ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６０（ｓ， １Ｈ）， ７．５３（ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２６－７．２４（ｍ， １Ｈ）， ６．９９－６．９３（ｍ， １Ｈ）， ６．７６－６．７２（ｍ， １Ｈ）， ６．６０－６．５５（ｍ， ２Ｈ）， ５．１４－５．０８（ｍ， １Ｈ）， ５．００－４．８５（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．４８－４．２８（ｍ， ４Ｈ）， ２．９２－２．８２（ｍ， １Ｈ）， ２．７０（ｓ， ３Ｈ）， ２．６２－２．５７（ｍ， １Ｈ）， ２．４９－２．４１（ｍ， １Ｈ）， ２．０２－１．９５（ｍ， １Ｈ）．
Figure 2023519974000132
 ステップ３．化合物（Ｉｃ）の合成
ＤＭＦ（３．００ｍＬ）中の３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－１－［２－（メチルアミノ）フェニル］尿素（Ｐ４、１５０．００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．００等量）、２，６－ルチジン（７６ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、２．００等量）、及びＨＯＢＴ（９６ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、２．００等量）の攪拌溶液に、［４－［（２Ｓ）－５－（カルバモイルアミノ）－２－［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタンアミド］ペンタンアミド］フェニル］炭酸メチル４－ニトロフェニル（３９４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、１．５０等量）を窒素雰囲気下室温で加えた。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製し：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；）、粗生成物（６０ｍｇ）を白色固体として得た。粗生成物（６０ｍｇ）を次の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した（カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ ＯＢＤカラム ３０×１５０ｍｍ ５ｕｍ、ｎ；移動相Ａ：水（０．１％ ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で２４ Ｂから４４ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：６．３３；ＲＴ２：）。収集した画分を凍結乾燥させて、［４－［（２Ｓ）－５－（カルバモイルアミノ）－２－［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタンアミド］ペンタンアミド］フェニル］メチル Ｎ－［２－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］－Ｎ－カルバミン酸メチル（１８．１ｍｇ、５％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ）： １０２０ （Ｍ＋Ｈ）＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９ （ｓ， １Ｈ）， ９．９６（ｓ， １Ｈ）， ８．１９－８．０６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３－７．４１ （ｍ， ５Ｈ）， ７．２０－７．０５ （ｍ， ４Ｈ）， ７．００（ｓ， ２Ｈ）， ６．９５－６．９０（ｍ， １Ｈ）， ５．９５（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．４１（ｓ， ２Ｈ）， ５．１８－４．８９（ｍ， ３Ｈ）， ４．４４－４．２０（ｍ， ５Ｈ）， ４．１９－４．１７（ｍ， １Ｈ）， ３．０９（ｓ， ３Ｈ）， ３．０７－２．８５（ｍ， ３Ｈ）， ２．２２－２．０２（ｍ， ２Ｈ）， ２．００－１．８５（ｍ， ２Ｈ）， １．７１－１．２５（ｍ， １０Ｈ）， １．２０－１．１２（ｍ， ３Ｈ）， ０．８４－０．８０（ｍ， ６Ｈ）
スキーム４は、どのように化合物（Ｉｄ）をｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１から調製したのかを示す。
Figure 2023519974000133
化合物（Ｉｄ）の合成
ＤＭＦ（２．００ｍＬ）中の１－（３－クロロ－４－［２－［２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（Ｐ１、４０．００ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、１．００等量）及び６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサン酸２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２５．００ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ、１．０７等量）の攪拌混合物に、ＤＩＥＡ（２０．００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、２．０４等量）を室温で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下３時間室温で攪拌した。得られた混合物を水（３０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（３０ｍＬ）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を真空下で濃縮乾固させた。残留物を次の条件により精製した：カラム：ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８ ＯＢＤ分取カラム、１００ｕｍ、１９ｍｍ×２５０ｍｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：８．５分で２５ Ｂから５５ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：８分。収集した画分を凍結乾燥させて、Ｎ－［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－メチルヘキサンアミド（化合物（Ｉｄ）、２４ｍｇ、４３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ， ｍ／ｓ）： ７２１，７２３ （Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９ （ｓ， １Ｈ）， ８．７８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７０－７．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄ， Ｊ＝９．６Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８－７．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．００（ｄ， Ｊ＝ ５．６Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．８５－６．８０ （ｍ， １Ｈ）， ５．１２－５．０５ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．３３ （ｍ， ５Ｈ）， ３．３９－３．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ２．９１－２．７６ （ｍ， ７Ｈ）， ２．６８－２．５２ （ｍ， １Ｈ）， ２．４８－２．３５ （ｍ， １Ｈ）， ２．３３－２．２０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０５－１．９５ （ｍ， １Ｈ）， １．４８－１．４４ （ｍ， ５Ｈ）， １．２８－１．１２ （ｍ， ３Ｈ）．
スキーム５Ａ及び５Ｂは、どのようにｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１の代替トリペプチドリンカーとの複合体を調製するのかを示す。
Figure 2023519974000134
Figure 2023519974000135
スキーム６Ａ及び６Ｂは、どのようにｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１のβ－グルクロニドリンカーとの複合体を調製するのかを示す。
Figure 2023519974000136
ステップ１．化合物２５の合成
室温のＳＯＣｌ２（２５ｍＬ）中の３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－プロパン酸（化合物２４、５．００ｇ、１６．０６ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に。得られた混合物を１６時間８０℃で攪拌した。所望の生成物をＬＣＭＳにより検出することができた（ＭｅＯＨによる誘導体、ＭＳ＝３２６）。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を真空下で濃縮して、Ｎ－（３－クロロ－３－オキソプロピル）カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物２５、７．５ｇ、粗）を黄色油として得た。粗生成物を、さらに精製することなく直接次のステップに使用した。１Ｈ－ＮＭＲ分析により、これが所望の生成物であることが示された（ＭｅＯＨによる誘導体）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．８１－７．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６３－７．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４６－７．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４０－７．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３３ （ｓ， １Ｈ）， ４．４２ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２４ （ｔ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４－３．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５０ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５９ （ｔ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ２．化合物２８の合成
ＡＣＮ（１００ｍＬ、１９０．２４ｍｍｏｌ、７５．００等量）中の４－ホルミル－２－ニトロフェノール（化合物２７、４．２１ｇ、２５．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＡｇ２Ｏ（７．００ｇ、３０．２０ｍｍｏｌ、１．２０等量）の攪拌溶液に、化合物２６（１０．００ｇ、２５．１７ｍｍｏｌ、１．００等量）をＮ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下一晩室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＤＣＭ（５０ｍｌ×３）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（ＰＥ：ＥＡ＝１：２）で溶出させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－（４－ホルミル－２－ニトロフェノキシ）オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物２８、１０．５ｇ、８６％）を白色固体として得た。１Ｈ－ＮＭＲ分析により、これが所望の生成物であることが示された。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４８４ ［Ｍ＋１］＋．１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ１０．００ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ８．１３－８．０９ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４７－５．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ４．３７－４．３５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５－３．７３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．１７－２．０６ （ｍ， ９Ｈ）．
ステップ３．化合物２９の合成
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－（４－ホルミル－２－ニトロフェノキシ）オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物２８、６．００ｇ、１２．４１ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＮａＢＨ４（０．４７ｇ、１２．４２ｍｍｏｌ、１．００等量）をＮ２雰囲気下ＲＴで分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を室温の水でクエンチした。得られたものをＮａ２ＳＯ４により乾燥させた。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＤＣＭで洗浄した。得られた混合物を真空下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物２９、５．５ｇ、９１％）を固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４８６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ４．化合物３０の合成
ＥＡ（６０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物２９、５．５０ｇ、１１．３３ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、Ｐｄ／Ｃ（１．１０ｇ、１０％）を室温で分割して加えた。得られた混合物をＨ２雰囲気下室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＤＣＭ及びＭｅＯＨで洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－アミノ－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３０、４．０ｇ、７７％）を固体として得た。粗生成物を、さらに精製することなく直接次のステップに使用した。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４５６［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ５．化合物３１の合成
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－アミノ－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３０、１．００ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮａＨＣＯ３（０．２０ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、１．１等量）の攪拌溶液に、化合物２５（０．８７ｇ、２．６２ｍｍｏｌ、１．２０等量）をＮ２雰囲気下０℃で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下０℃で６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を室温の水でクエンチした。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（ＥＡ＝１００％）で溶出させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－プロパンアミド）－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３１、１．１ｇ、６６％）を薄黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：７４９ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ６．化合物３３の合成
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３１、１．５０ｇ、２．００ｍｍｏｌ、１．００等量）及び炭酸ビス（４－ニトロフェニル）（化合物３２、０．６８ｇ、２．２４ｍｍｏｌ、１．１２等量）の攪拌混合物に、ＤＩＥＡ（０．５２ｇ、４．０１ｍｍｏｌ、２．００等量）をＮ２雰囲気下０℃で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下一晩室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、４０分で１０％から９０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を真空で濃縮乾固させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）－４－［［（４－ニトロフェノキシカルボニル）オキシ］メチル］フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３３、１．４ｇ、４８％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：９１４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Figure 2023519974000137
ステップ７．化合物３４の合成
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）－４－［［（４－ニトロフェノキシカルボニル）オキシ］メチル］フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３３、１．００ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）及び１－（３－クロロ－４－［２－［２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（ｎｅｏｄｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１、０．５８ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＨＯＢＴ（１．１８ｇ、８．７２ｍｍｏｌ、８．００等量）及び２，４－ジメチルピリジン（１．０７ｇ、８．７２ｍｍｏｌ、８．００等量）をＮ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物をさらに精製使用した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、４０分で１０％から８０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を真空下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３４、８００ｍｇ、５６％）を固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１３０２［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ８．化合物３５の合成
ＴＨＦ（８０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物３４、８００．００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＨＣｌ（６Ｎ、８０ｍＬ）をＮ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下３時間５０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、４０分で０％から８０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を凍結乾燥させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物３５、２３０ｍｇ、３２％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１１６２［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ９．化合物３６の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物３５、２３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ピペリジン（０．４ｍＬ）を窒素雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下１０分間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を次の条件で分取ＨＰＬＣによりさらに精製直接使用して（カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ 分取Ｃ１８ ＯＢＤカラム、１９×２５０ｍｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：７分で２０ Ｂから４０ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ １：５．７８分）、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［２－（３－アミノプロパンアミド）－４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］－エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物３６、３５ｍｇ、１８％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：９４０［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ１０．化合物（Ｉｅ）の合成
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［２－（３－アミノプロパンアミド）－４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物３６、３０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＤＩＥＡ（１３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、３．００等量）及び化合物３７（３０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、３．００等量）を窒素雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下１時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を次の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した（カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ ＯＢＤカラム ３０×１５０ｍｍ ５ｕｍ、移動相Ａ：水（０．１％ ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：１０分で２１ Ｂから３６ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：１１．１５分）。収集した画分を凍結乾燥させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］－（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－［３－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］プロパンアミド］フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物（Ｉｅ）、１０．５ｍｇ、２８％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１１３３［Ｍ＋Ｈ］＋．１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９ （ｓ， １Ｈ）， ９．１３ （ｓ， １Ｈ）， ８．１６ （ｓ， １Ｈ）， ７．９２－７．６８ （ｍ， ４Ｈ）， ７．５２ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ＝３，０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８－６．９９ （ｍ， ７Ｈ）， ５．７６ （ｓ， １Ｈ）， ５．２０－５．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９８ （ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ４．７６－４．７４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．３３ （ｍ， ４Ｈ）， ３．６５ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ３．５８－３．５４ （ｍ， ５Ｈ）， ３．３５ （ｄ， Ｊ＝６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９０－２．８３ （ｍ， ７Ｈ）， ２．５７－２．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．４５－２．３０ （ｍ， １Ｈ）， ２．０２－１．９８ （ｍ， ４Ｈ）， １．４８－１．４２ （ｍ， ５Ｈ）， １．４０－１．２０ （ｍ， ３Ｈ）．
スキーム７は、どのようにｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ６のヒドラジンリンカーとの複合体を調製するのかを示す。
Figure 2023519974000138
ステップ１．化合物３８の合成
ＴＨＦ（２．００ｍＬ）中の４－アミノアセトフェノン（化合物３７、１００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ジホスゲン（０．４０ｍＬ）を室温で滴加した。得られた混合物を３０分間０℃で攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。得られた固体をＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に再溶解させた。攪拌溶液に、ＤＭＦ（３．００ｍＬ）及びＴＥＡ（０．５０ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ１、２００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１．００等量）を室温で滴加した。得られた混合物を１時間０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物に水（５ｍＬ）を加え、これをＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を真空下で濃縮した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．０５％ ＴＦＡ）、３５分で１０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集画分を濃縮乾固させて、１－（４－アセチルフェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（化合物３８、８０ｍｇ、２５％）を薄黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ．ｍ／ｚ）：４３５［Ｍ＋１］＋．
ステップ２．化合物（Ｉｆ）の合成
メタノール（５．００ｍＬ）中の１－（４－アセチルフェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（化合物３８、８０．００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．００等量）及び６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンヒドラジド；トリフルオロ酢酸（７５ｍｇ、１．２０等量）の混合物を一晩５０℃で攪拌した。混合物を室温に冷却した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。沈殿した固体を濾過により収集し、ＭｅＯＨ（２×５ｍＬ）で洗浄した。粗固体を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：Ｃ１８カラム；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で１０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出し、真空下で濃縮した。これにより、３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－１－［４－［（１Ｅ）－ｌ－［［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］イミノ］エチル］フェニル］尿素（化合物（Ｉｆ）、４．４ｍｇ、３．７％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ．ｍ／ｚ）：６４２［Ｍ＋１］＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９ （ｓ， １Ｈ）， １０．２６－１０．１５ （ｍ， １Ｈ）， ８．８２ （ｓ， １Ｈ），７．６９－７．６２（ｍ， ３Ｈ）， ７．５２－７．４３ （ｍ， ４Ｈ）， ７．０１－６．９９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１３－５．０９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．３３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．９８－２．８２ （ｍ， １Ｈ）， ２．６２－２．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２０－２．１２ （ｍ， ２Ｈ）， １．５８－１．５１ （ｍ， ６Ｈ），１．２６－１．０９ （ｍ，６Ｈ）
スキーム８は、どのようにｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ２の四級アミンリンカーとの複合体を調製するのかを示す。
Figure 2023519974000139
ステップ１．化合物４０の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－４－（カルバモイルアミノ）－１－［［４－（ヒドロキシメチル）フェニル］カルバモイル］ブチル］カルバモイル］－２－メチルプロピル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド（化合物３９、１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＤＣＭ（２ｍＬ）中のＳＯＣｌ２（２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１等量）をＮ２下０℃で滴加した。得られた混合物０℃で１時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を氷冷した水（２０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（１０ｍＬ＊３）で抽出し、合わせた有機層を、水（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、生成物のＮ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－４－（カルバモイルアミノ）－１－［［４－（クロロメチル）フェニル］－カルバモイル］ブチル］カルバモイル］－２－メチルプロピル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド（化合物４０、８０ｍｇ、５３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５９１，５９３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ２．化合物４２の合成
ＴＨＦ（１３０ｍＬ）中の（２－クロロ－４－ニトロフェニル）酢酸（化合物４１、８．６０ｇ、３９．９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＢＨ３－Ｍｅ２Ｓ（１０．００ｍＬ、１０５．４ｍｍｏｌ、２．６４等量）を０℃で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下４時間７０℃で攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝１：２）により、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出させて、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物４２、７．７ｇ、９６％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２７ （ｄ， Ｊ＝４．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１１－８．０７ （ｍ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ３．化合物４３の合成
トルエン（７０ｍＬ）中の２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物４２、７．７０ｇ、３８．２ｍｍｏｌ、１．００等量）及び２－ブロモ酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（５７．７４ｇ、２９６．０ｍｍｏｌ、７．７５等量）の攪拌混合物に、Ｂｕ４ＮＨＳＯ４（１０．３７ｇ、３０．６ｍｍｏｌ、０．８０等量）を０℃で分割して加えた。上記の混合物に、Ｈ２Ｏ（９０ｍＬ）中のＮａＯＨ（１５．００ｇ、３７５．０ｍｍｏｌ、９．８２等量）を３０時間かけて０℃で滴加した。得られた混合物をさらに４時間室温で攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）により、反応の完了が示された。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１）で溶出させて、２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物４３、１２．２ｇ、９１％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７－８．０３ （ｍ， １Ｈ）， ７．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ３．８３ （ｔ， Ｊ＝ ８．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１６（ｔ， Ｊ＝ ８．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４５（ｓ， ９Ｈ）．
ステップ４．化合物４４の合成
ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中の２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物４３、１２．２０ｇ、３８．６ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＴＦＡ（２０ｍＬ）を０℃で滴加した。得られた混合物を４時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸（化合物４４、８．４ｇ， ８３％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ， ｍ／ｓ）： ５１７ （２Ｍ－Ｈ）－ １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１２．６４（ｓ， １Ｈ）， ８．２０ （ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１１－８．０８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０６ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．０６（ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ５．化合物４５の合成
ＤＭＦ（８０ｍＬ）中の［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］酢酸（化合物４４、８．４０ｇ、３２．３５ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＨＡＴＵ（１９．１９ｇ、５０．４７ｍｍｏｌ、１．５６等量）の攪拌混合物に、ＣＨ３ＮＨ２．ＨＣ１（２．６９ｇ、３９．７９ｍｍｏｌ、１．２３等量）及びＤＩＥＡ（１７．３１ｇ、１３３．９３ｍｍｏｌ、４．１４等量）を窒素雰囲気下０℃で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下４時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を水／氷でクエンチした。得られた混合物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で溶出させて、２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物４５、７．２ｇ、８１％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ， ｍ／ｓ）： ２７３，２７５ （Ｍ＋Ｈ）＋
ステップ６．化合物４６の合成
ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］－Ｎ－メチルアセトアミド（化合物４５、７．２０ｇ、２６．４０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＢＨ３－ＴＨＦ（ＴＨＦ中１０Ｍ、５２．０ｍＬ、５２０．０ｍｍｏｌ、２０等量）を室温で滴加した。得られた混合物を４時間７０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。反応をＭｅＯＨでクエンチした。残留物１Ｎ ＨＣｌでｐＨ６に酸性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ３（飽和、水性）でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝８：１）で溶出させて、［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］（メチル）アミン（化合物４６、５．４ｇ、７９％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ， ｍ／ｓ）： ２５９，２６１ （Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ８．２６ （ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１５－８．１２ （ｍ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７２ （ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．６１（ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１０ （ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８７ （ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．４０ （ｓ， ３Ｈ）．
ステップ７．化合物４７の合成
ＴＨＦ（２０．００ｍＬ）中の［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］（メチル）アミン（化合物４６、４．００ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＢｏｃ２Ｏ（３．８０ｇ、１７．４１ｍｍｏｌ、１．１３等量）の攪拌混合物に、Ｈ２Ｏ（２０．００ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（４．００ｇ、４７．６１ｍｍｏｌ、３．０８等量）を室温で滴加した。得られた混合物を一晩室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１２：１）で溶出させて、Ｎ－［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物４７、４．８ｇ、７７％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ， ｍ／ｓ）： ３５９，３６１（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ８．２４ （ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１３－８．１０ （ｍ， １Ｈ）， ７．６７ （ｄ， Ｊ＝８．０Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０５－４．００（ｍ， １Ｈ）， ３．６９ （ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５０（ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．２８ （ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．０７（ｔ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７５（ｓ， ３Ｈ）， １．３６（ｓ， ９Ｈ）．
ステップ８．化合物４８の合成
ＥｔＯＨ（１１２．００ｍＬ）中のＮ－［２－［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物４７、５．６０ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、１．００等量） の攪拌混合物に、Ｈ２Ｏ（１２．００ｍＬ）中のＮＨ４Ｃｌ（２．５０ｇ、４６．７４ｍｍｏｌ、２．９９等量）及びＦｅ（４．４０ｇ、７８．７９ｍｍｏｌ、５．０５等量）を室温で加えた。得られた混合物を３時間８０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた混合物をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で溶出させて、Ｎ－［２－［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物４８、４．２ｇ、８１％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳ， ｍ／ｓ）： ３２９，３３１ （Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ６．９６ （ｄ， Ｊ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５９（ｄ， Ｊ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．４６－６．４３ （ｍ， １Ｈ）， ５．１８（ｂｒ ｓ， ２Ｈ）， ３．５０－３．４５（ｍ， ４Ｈ）， ３．２９－３．２６（ｍ， ２Ｈ）， ２．７５－２．７１（ｍ， ５Ｈ）， １．３８（ｓ， ９Ｈ）．
ステップ９．化合物４９の合成
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＮ－［２－［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エトキシ］エチル］－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物４８、１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＬｉＡ１Ｈ４（９２ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、８．００等量）を窒素雰囲気下０℃で加えた。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。５つの反応を並行して行った。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。次に、反応を１Ｎ ＮａＯＨ（１０ｍＬ）でクエンチし、濾過し、真空下で濃縮乾固させた後、残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を濃縮乾固させて、３－クロロ－４－［２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エチル］アニリン、４９（１８０ｍｇ、４４％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ） ：２４３，２４５ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１０．化合物５０の合成
ＴＨＦ（９ｍＬ）中の３－クロロ－４－［２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エチル］アニリン（化合物４９、１４０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ジホスゲン（１３７ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、１．２０等量）を窒素雰囲気下０℃で加えた。得られた混合物を０℃で１時間攪拌した。次に、反応溶液を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解させた後、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（１５８ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＴＥＡ（１１７ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、２．００等量）の溶液に窒素雰囲気下で滴加した。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物をメタノールで希釈し、得られた溶液を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、１００ｍｇの生成物を無色固体として得た。粗生成物を次の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８ ＯＢＤカラム、１９×２５０ｍｍ、１０ｕｍ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：７分で１４％から３２％；２２０ｎｍ；ＲＴ１：５．２５分。収集した画分を凍結乾燥させて、１－（３－クロロ－４－［２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（化合物５０、６０ｍｇ、１８％）を無色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５４２，５４４ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１１．化合物（Ｉｇ）の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－４－（カルバモイルアミノ）－１－［［４－（クロロメチル）フェニル］－カルバモイル］ブチル］カルバモイル］－２－メチルプロピル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド（化合物４０、６６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．００等量）、１－（３－クロロ－４－［２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（化合物５０、６０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．００等量）、及びＤＩＥＡ（２９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、２．００等量）の溶液に、ＴＢＡＩ（４ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、０．１０等量）を室温の空気中で加えた。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳトレース図により、反応の完了が示された。得られた混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）、４０分で５％から４５％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相カラムクロマトグラフィーにより精製して、９０ｍｇの粗生成物を黄色油として得た。次に、粗生成物を次の条件：カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ ＯＢＤカラム ３０＊１５０ｍｍ ５ｕｍ、ｎ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で１５ Ｂから３５ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：６．００分により再精製して、（［４－［（２Ｓ）－５－（カルバモイルアミノ）－２－［（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタンアミド］ペンタンアミド］フェニル］メチル）［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］ジメチルアザニウム、化合物（Ｉｇ）（１９ｍｇ、１４．８％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）： １０９６ ［Ｍ－ＦＡ］＋， ５４９ ［１／２（Ｍ－ＦＡ）］＋；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ８．４８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７７－７．７２ （ｍ， ３Ｈ）， ７．５５ － ７．４７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．３７－７．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１８ － ７．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ６．７７ （ｓ， ２Ｈ）， ５．１７－５．１３ （ｑ， Ｊ ＝ ８， ４Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５１ －４．４６ （ｍ， ５Ｈ）， ４．３５ （ｓ， ２Ｈ）， ４．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７９ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．２２－３．１５ （ｍ， １Ｈ）， ３．１１－３．０５ （ｍ， １Ｈ）， ３．００ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．９２ （ｓ， ６Ｈ）， ２．８９ － ２．８４ （ｍ， １Ｈ）， ２．８１ － ２．７３ （ｍ， １Ｈ）， ２．５４－２．４３ （ｍ， １Ｈ）， ２．２７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．２１ － ２．１２ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０ － ２．０２ （ｍ， １Ｈ）， １．９５ － １．８２ （ｍ， １Ｈ）， １．７８－１．６９ （ｍ， １Ｈ）， １．６４－１．５９ （ｍ， ７Ｈ）， １．３２－１．２５ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９８－０．９６ （ｍ， ６Ｈ）．
スキーム９Ａ及び９Ｂは、どのようにｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１３のペプチド含有リンカーとの複合体を調製するのかを示す。
Figure 2023519974000140
Figure 2023519974000141
スキーム１０は、式（Ｉｈ）の化合物の合成を示す。
Figure 2023519974000142
ステップ１．化合物６３の合成
３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン酸（化合物６２、５．００ｇ、１６．０６ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＳＯＣｌ２（２５ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を１６時間８０℃で攪拌した。所望の生成物をＬＣＭＳにより検出することができた（ＭｅＯＨによる誘導体、ＭＳ＝３２６）。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を真空下で濃縮して、Ｎ－（３－クロロ－３－オキソプロピル）カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物６３、７．５ｇ、粗）を黄色油として得た。粗生成物を、さらに精製することなく直接次のステップに使用した。１Ｈ ＮＭＲ分析により、これが所望の生成物であることが示された（ＭｅＯＨによる誘導体）。１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．８１－７．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６３－７．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４６－７．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４０－７．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３３ （ｓ， １Ｈ）， ４．４２ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２４ （ｔ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４－３．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５０ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５９ （ｔ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ２．化合物６６の合成
ＡＣＮ（１００ｍＬ、１９０．２４ｍｍｏｌ、７５．００等量）中の４－ホルミル－２－ニトロフェノール（化合物６５、４．２１ｇ、２５．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＡｇ２Ｏ （７．００ｇ、３０．２０ｍｍｏｌ、１．２０等量）の攪拌溶液に、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－ブロモオキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６４、１０．００ｇ、２５．１７ｍｍｏｌ、１．００等量）Ｎ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下一晩室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（ＰＥ：ＥＡ＝１：２）で溶出させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－（４－ホルミル－２－ニトロフェノキシ）オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６６、１０．５ｇ、８６％）を白色固体として得た。１Ｈ－ＮＭＲ分析により、これが所望の生成物であることが示された。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４８４ ［Ｍ＋１］＋．１Ｈ－ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ１０．００ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ８．１３－８．０９ （ｍ， １Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４７－５．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ４．３７－４．３５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５－３．７３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．１７－２．０６ （ｍ， ９Ｈ）．
ステップ３．化合物６７の合成
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－（４－ホルミル－２－ニトロフェノキシ）オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６６、６．００ｇ、１２．４１ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＮａＢＨ４（０．４７ｇ、１２．４２ｍｍｏｌ、１．００等量）をＮ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を室温の水でクエンチした。得られたものをＮａ２ＳＯ４により乾燥させた。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＤＣＭで洗浄した。得られた混合物を真空下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６７、５．５ｇ、９１％）を固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４８６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ４．化合物６８の合成
ＥＡ（６０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－（ヒドロキシメチル）－２－ニトロフェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６７、５．５０ｇ、１１．３３ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、Ｐｄ／Ｃ（１．１０ｇ、１０％）を室温で分割して加えた。得られた混合物をＨ２雰囲気下室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＤＣＭ及びＭｅＯＨで洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－アミノ－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６８、４．０ｇ、７７％）を固体として得た。粗生成物を、さらに精製することなく直接次のステップに使用した。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４５６［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ５．化合物７０の合成
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－アミノ－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物６８、１．００ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮａＨＣＯ３（０．２０ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、１．１等量）の攪拌溶液に、Ｎ－（３－クロロ－３－オキソプロピル）カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物６９、０．８７ｇ、２．６２ｍｍｏｌ、１．２０等量）をＮ２雰囲気下０℃で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下０℃で６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を室温の水でクエンチした。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（ＥＡ＝１００％）で溶出させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物７０、１．１ｇ、６６％）を薄黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：７４９ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ６．化合物７２の合成
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）－４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物７０、１．５０ｇ、２．００ｍｍｏｌ、１．００等量）及び炭酸ビス（４－ニトロフェニル）（化合物７１、０．６８ｇ、２．２４ｍｍｏｌ、１．１２等量）の攪拌混合物に、ＤＩＥＡ（０．５２ｇ、４．０１ｍｍｏｌ、２．００等量）をＮ２雰囲気下０℃で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下一晩室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、４０分で１０％から９０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を真空で濃縮乾固させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－アミノ］プロパンアミド）－４－［［（４－ニトロフェノキシカルボニル）オキシ］メチル］フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物７２、１．４ｇ、４８％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：９１４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ７．化合物７３の合成
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）－４－［［（４－ニトロフェノキシカルボニル）オキシ］メチル］フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物７２、１．００ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）及び１－（３－クロロ－４－［２－［２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１、０．５８ｇ、１．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＨＯＢＴ（１．１８ｇ、８．７２ｍｍｏｌ、８．００等量）及び２，４－ジメチルピリジン（１．０７ｇ、８．７２ｍｍｏｌ、８．００等量）をＮ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２雰囲気下室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物をさらに精製使用した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、４０分で１０％から８０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を真空下で濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物７３、８００ｍｇ、５６％）を固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１３０２［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ８．化合物７４の合成
ＴＨＦ（８０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－３，４，５－トリス（アセチルオキシ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］オキサン－２－カルボン酸メチル（化合物７３（８００．００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＨＣｌ（６Ｎ、８０ｍＬ）をＮ２雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下３時間５０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、４０分で０％から８０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。収集した画分を凍結乾燥させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物７４、２３０ｍｇ、３２％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１１６２［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ９．化合物７５の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］－２－（３－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド）フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸、７４（２３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ピペリジン（０．４ｍＬ）を窒素雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下１０分間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を次の条件で分取ＨＰＬＣによりさらに精製直接使用して（カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ 分取Ｃ１８ ＯＢＤカラム、１９×２５０ｍｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：７分で２０ Ｂから４０ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：５．７８分）、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［２－（３－アミノプロパンアミド）－４－［（［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル］オキシ）メチル］フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物７５、３５ｍｇ、１８％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：９４０［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ１０．化合物（Ｉｈ）の合成
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－［２－（３－アミノプロパンアミド）－４－［（｛［２－（２－｛２－クロロ－４－［（｛［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル｝カルバモイル）アミノ］フェニル｝エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェノキシ］－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物７５、１１０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．００等量）及びビス（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）ペンタンジオエート（化合物７６、４６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、１．２等量）の攪拌溶液に、ＤＩＥＡ（３０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、２．０等量）を窒素雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下１時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件で分取ＨＰＬＣにより精製した（カラム：ＫｉｎｅｔｅｘＥＶＯ分取Ｃ１８、３０＊１５０、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で２１％ Ｂから４１％ Ｂ、４１％ Ｂ；波長：２５４ｎｍ；ＲＴ１（分）：５．８。収集した画分を凍結乾燥させて、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－｛４－［（｛［２－（２－｛２－クロロ－４－［（｛［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル｝カルバモイル）アミノ］フェニル｝エトキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］－２－（３－｛５－［（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ］－５－オキソペンタンアミド｝プロパンアミド）フェノキシ｝－３，４，５－トリヒドロキシオキサン－２－カルボン酸（化合物（Ｉｈ）、４８ｍｇ、３４％を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１１５１ ［Ｍ＋Ｈ］＋， １１７３ ［Ｍ＋Ｎａ］＋．１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）：１２．８０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， １０．９８ （ｓ， １Ｈ）， ９．０８ （ｓ， １Ｈ）， ８．７９ （ｓ， １Ｈ）， ８．１８ （ｓ， １Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．６８－７．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ＝８．１ Ｈｚ，１Ｈ）， ７．２５－７．００ （ｍ， ４Ｈ）， ６．８２－６．８０ （ｍ， １Ｈ）， ５．８６ （ｓ， ＩＨ）， ５．３９－５．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ５．１４－５．０７ （ｍ， １Ｈ）， ４．９７ （ｓ， ２Ｈ）， ４．８４ （ｄ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ）， ４．４７－４．２７ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９０ （ｄ， Ｊ＝９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５６－３．４８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４５－３．３６ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９５－２．８０ （ｍ， ８Ｈ）， ２．７５－２．６５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．６２－２．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４９－２．３５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２１－２．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０１－１．９５ （ｍ， １Ｈ）， １．８５－１．．８０ （ｍ， ２Ｈ）．
Figure 2023519974000143
ステップ１．化合物７６の合成
ＤＭＦ（８ｍＬ）中の１－（３－クロロ－４－［２－［２－（メチルアミノ）エトキシ］エチル］フェニル）－３－［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］尿素（化合物Ｐ１、１８０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＥＡ（１０４ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、３．０等量）及び４－（クロロスルホニル）－３－ニトロ安息香酸（１８１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ、２．００等量）を窒素雰囲気下０℃で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下０℃で４時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物をさらに精製使用した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、１０分で１０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。混合物を凍結乾燥させて、４－［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）スルファモイル］－３－ニトロ安息香酸（化合物７６、７０ｍｇ、２７％）を薄黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：７５７ ［Ｍ＋１］＋．
ステップ２．化合物（Ｉｉ）の合成
ＤＭＦ（６ｍＬ）中の４－［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）スルファモイル］－３－ニトロ安息香酸（化合物７６、６０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＨＡＴＵ（４５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．５等量）、１－（２－アミノエチル）ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（化合物７７、１７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１．２０等量）及びＤＩＥＡ（３１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、３．０等量）を窒素雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下４時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製した（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ分取フェニルＯＢＤカラム、１９×１５０ｍｍ ５ｕｍ １３ｎｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：１０分で２５ Ｂから４３ Ｂ；２２０ｎｍ；ＲＴ１：１１．９７分）。収集した画分を凍結乾燥させて、４－［［２－（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）エチル］（メチル）スルファモイル］－Ｎ－［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）エチル］－３－ニトロベンズアミド（化合物（ｌｉ）、２７ｍｇ、３６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：８７９，８８１ ［Ｍ＋Ｈ］．１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１１．００ （ｓ， １Ｈ）， ９．０１ （ｔ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８２ （ｓ， １Ｈ）， ８．２０ （ｓ， １Ｈ）， ８．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．７１－７．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５２ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ＝３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１－７．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０２ （ｓ， ２Ｈ）， ６．８４ （ｔ， Ｊ＝６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１４－５．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４８－４．２８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．６２－３．５０（ｍ， ６Ｈ）， ３．４０－３．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９５－２．８５（ｍ， ４Ｈ）， ２．８０－２．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６５－２．６０ （ｓ， １Ｈ）， ２．４１－２．２７ （ｍ， １Ｈ）， ２．０５－１．９５ （ｍ， １Ｈ）．
Figure 2023519974000144
ステップ１．化合物７９の合成
ＴＨＦ（３００ｍＬ）及びトルエン（１００ｍＬ）中の（２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－アセトアミド）酢酸（化合物７８、１０．００ｇ、２８．２２ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＰｂ（ＯＡｃ）４（１５．０２ｇ、３３．８６ｍｍｏｌ、１．２０等量）の攪拌混合物に、ピリジン（２．５９ｇ、３２．７４ｍｍｏｌ、１．１６等量）を窒素雰囲気下室温で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下一晩８０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。得られた混合物を濾過し、濾過ケークを酢酸エチル（２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解させ、水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：４）で溶出させて、（２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］アセトアミド）酢酸メチル（化合物７９、６．５ｇ、５６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：３９１［Ｍ＋Ｎａ］＋．１ＨＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．８０（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６２（ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４５（ｔ， Ｊ ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３６（ｄ， Ｊ ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１８（ｂｒ ｓ， １Ｈ），５．４８（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．２８（ｄ， Ｊ＝７．２Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４８（ｄ， Ｊ＝６．６Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２６（ｔ， Ｊ＝６．６Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９３（ｄ， ５．４Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０８（ｓ， ３Ｈ）．
ステップ２．化合物８１の合成
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の（２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－アミノ］アセトアミド）酢酸メチル、７９（２．００ｇ、５．４３ｍｍｏｌ、１．００等量）、及び２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物３、３．２０ｇ、１５．８５ｍｍｏｌ、２．９２等量）の攪拌混合物に、ＰＰＴＳ（４００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、０．２９等量）を窒素雰囲気下０℃で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下一晩４５℃で攪拌した。４０％の所望の生成物をＬＣＭＳにより検出することができた。混合物を室温に冷却させた。反応を水／氷でクエンチした。得られた混合物をＥｔＯＥｔ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：９）で溶出させて、Ｎ－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］メチル］カルバモイル）メチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物８１、１．７ｇ、５５％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：５１０，５１２［Ｍ＋Ｈ］＋．１ＨＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ８．５８ （ｔ， Ｊ＝５．１Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２， ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８９ （ｄ， Ｊ＝７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７１－７．５４ （ｍ， ４Ｈ）， ７．４３－７．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ４．５６ （ｄ， Ｊ＝６．９Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．３０－４．１６ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７０－３．６１（ｍ， ４Ｈ）， ３．０４ （ｔ， Ｊ＝６．３Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ３．化合物８２の合成
ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中のＮ－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］メチル］カルバモイル）メチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物８１、１．６０ｇ、３．１４ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ピペリジン（１．０ｍＬ）を窒素雰囲気下０℃で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下１時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）、４０分で０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。これにより、２－アミノ－Ｎ－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］メチル］アセトアミド（化合物８２、７５０ｍｇ、７６％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ） ２８８［Ｍ＋Ｈ］＋，３２９［Ｍ＋Ｈ＋ＡＣＮ］＋
ステップ４．化合物８３の合成
ＤＭＦ（１０．００ｍＬ）中の２－アミノ－Ｎ－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］－メチル］アセトアミド（化合物８２、７５０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＢｏｃ２Ｏ（５８０ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ、１．０２等量）の攪拌混合物に、Ｈ２Ｏ（１０．００ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（４７７ｍｇ、５．６８ｍｍｏｌ、２．１８等量）を０℃で滴加した。得られた混合物を３時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。水（２０ｍＬ）を加えることで反応をクエンチした。得られた混合物ＥｔＯＥｔ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：２）で溶出させて、Ｎ－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］メチル］カルバモイル）メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８３、６５０ｍｇ、５８％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ， ｍｓ）， ３８８［Ｍ＋Ｈ］＋， ３３２［Ｍ＋Ｈ－５６］＋．１ＨＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２１（ｄ， Ｊ＝２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０４（ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４６（ｄ， Ｊ＝８．４Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０５（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．２５（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．７３（ｄ， Ｊ＝７．２Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８１－３．７３（ｍ， ４Ｈ）， ３．３４－３．３２（ｍ， ２Ｈ）， ３．０８（ｔ， Ｊ＝６．８Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４２（ｓ， ９Ｈ）．
ステップ５．化合物８４の合成
ＥｔＯＨ（９．００ｍＬ）中のＮ－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エトキシ］メチル］－カルバモイル）メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８３、６５０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＦｅ（２６０ｍｇ、４．６６ｍｍｏｌ、２．７８等量）の攪拌混合物に、Ｈ２Ｏ（３．００ｍＬ）中のＮＨ４Ｃｌ（９１０ｍｇ、１７．０１ｍｍｏｌ、１０．１等量）を室温で滴加した。得られた混合物を４時間９０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。得られた混合物を真空下で濃縮した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出させて、Ｎ－［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エトキシ］メチル］－カルバモイル）メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８４、５００ｍｇ、８３％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ， ｍｓ）：３５８［Ｍ＋Ｈ］＋， ３８０［Ｍ＋Ｎａ］＋．１ＨＮＭＲ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．０２－６．９６（ｍ， ２Ｈ）， ６．６８（ｄ， Ｊ＝２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５２－６．４９（ｍ， １Ｈ）， ５．２９（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ４．７４（ｄ， Ｊ＝６．９Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８０－３．７８（ｍ， ２Ｈ）， ３．６９－３．６３（ｍ， ２Ｈ）， ２．８８（ｔ， Ｊ＝７．２Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４５（ｓ， ９Ｈ）．
ステップ６．化合物８６の合成
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン塩酸塩（化合物８５、３９８ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、０．９２等量）及びＣＤＩ（４５０ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ、１．９９等量）の攪拌混合物に、ＴＥＡ（３００ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、２．１２等量）を０℃で加えた。得られた混合物を２時間室温で攪拌した。上記の混合物に、Ｎ－［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エトキシ］メチル］カルバモイル）メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８４、５００ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＭＡＰ（５５０ｍｇ、４．５０ｍｍｏｌ、３．２２等量）を分割して加えた。得られた混合物をさらに一晩６０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、３０分で０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍ。これにより、Ｎ－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］カルバモイル］メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８６、５５０ｍｇ、６０％）薄茶色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：６５７［Ｍ＋Ｈ］＋， ６０１［Ｍ＋Ｈ－５６］＋，５５７［Ｍ＋Ｈ－１００］＋．
ステップ７．化合物８７の合成
ＤＣＭ（５．００ｍＬ）中のＮ－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］カルバモイル］メチル）－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物８６、５３０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＴＦＡ（１．００ｍＬ）を０℃で加えた。得られた混合物を３０分間０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、２－アミノ－Ｎ－［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］アセトアミド；トリフルオロ酢酸（化合物８７、（５１０ｍｇ、純度：６４％、収率：６０％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：５５７［Ｍ＋Ｈ－ＴＦＡ］＋
ステップ８．化合物８９の合成
Ｈ２Ｏ（４０．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－［２－（２－アミノアセトアミド）アセトアミド］－３－フェニルプロパン酸（ 化合物８８、２．００ｇ、７．１６ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮａＨＣＯ３（１．８０ｇ、２１．４１ｍｍｏｌ、３．００等量）の攪拌混合物に、ＤＭＦ（４０．００ｍＬ）中のＢｏｃ２Ｏ（１．８６ｇ、８．５２ｍｍｏｌ、１．２０等量）を０℃で滴加した。得られた混合物を一晩室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を室温の水でクエンチした。得られた混合物をＥｔＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を減圧下で濃縮した。残留物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、ＡＣＮ水（０．０５％ ＴＦＡ）、３０分で５％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２２０ｎｍ。これにより、（２Ｓ）－２－（２－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］アセトアミド］アセトアミド）－３－フェニルプロパン酸（化合物８９、１．８ｇ、６０％）を白色半固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ，ｍｓ）：３８０［Ｍ＋Ｈ］＋，３２４［Ｍ＋Ｈ－５６］＋．１ＨＮＭＲ：（３００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ８．１７（ｄ， Ｊ＝８．１Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９３（ｔ， Ｊ＝５．７Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３１－７．２０（ｍ， ５Ｈ）， ７．００（ｔ， Ｊ＝６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４６－４．３９（ｍ， １Ｈ），３．７８－３．６７（ｍ， ２Ｈ）， ３．５６（ｄ， Ｊ ＝５．７Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．０９－３．０２（ｍ， １Ｈ）， ２．９２－２．７３（ｍ， １Ｈ）， １．３９（ｓ， ９Ｈ）．
ステップ９．化合物９０
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－（２－［２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］アセトアミド］－アセトアミド）－３－フェニルプロパン酸（化合物８９、３４０ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＨＡＴＵ（３４０ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＨＯＢＴ（１０２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、０．８４等量）を０℃で分割して加えた。得られた混合物を３０分間０℃で攪拌した。上記の混合物に、２－アミノ－Ｎ－［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］アセトアミド；トリフルオロ酢酸（化合物８７、５１１ｍｇ、純度：６４％、０．４８ｍｍｏｌ、０．５４等量）及びＤＩＥＡ（３４０ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ、２．９４等量）を０℃で加えた。得られた混合物をさらに２時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ ＦＡ）、３０分で０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２２０ｎｍ。収集した画分を真空下で濃縮した。これにより、Ｎ－［［（［［（ｌＳ）－１－［（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］カルバモイル］メチル）カルバモイル］－２－フェニルエチル］カルバモイル］メチル）カルバモイル］メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物９０、２１０ｍｇ、４８％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：９１８［Ｍ＋Ｈ］＋， ８１８［Ｍ＋Ｈ－１００］＋．１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ１０．９７（ｓ， １Ｈ）， ８．７９（ｓ， １Ｈ）， ８．５０（ｔ， Ｊ＝６．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３１（ｔ， Ｊ＝４，４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１５（ｄ， Ｊ ＝９．６Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９１０（ｔ， Ｊ＝８，０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６８－７．６４（ｍ， ２Ｈ）， ７．４９（ｓ， １Ｈ）， ７．４３（ｄ， Ｊ＝９．６Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２４－７．１２（ｍ， ７Ｈ）， ７．００－６．９５（ｍ， １Ｈ）， ６．８４（ｔ， Ｊ＝６．４Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１３－５．０６（ｍ， １Ｈ）， ４．５５－４．２７（ｍ， ７Ｈ）， ３．７２－３．６０（ｍ， ６Ｈ）， ３．７５－３．６７（ｍ， ３Ｈ）， ３．５９－３．４９（ｍ， ５Ｈ）， ３．０７－３．０１（ｍ， １Ｈ）， ２．９４－２．７３（ｍ， ４Ｈ）， ２．６２－２．５４（ｍ， １Ｈ）， ２．４０－２．３ｌ（ｍ， １Ｈ）， ２．０１－１．９４（ｍ， １Ｈ）， ２．００－１．９１（ｍ， １Ｈ）， １．３５（ｓ， ９Ｈ）
ステップ１０．化合物９１の合成
ＤＣＭ（５．００ｍＬ）中のＮ－［［（［［（１Ｓ）－ｌ－［（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）－メチル］カルバモイル］メチル）カルバモイル］－２－フェニルエチル］カルバモイル］メチル）カルバモイル］－メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物９０、１４０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌混合物に、ＴＦＡ（１．００ｍＬ）を０℃で滴加した。得られた混合物を３０分間０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、（２Ｓ）－２－［２－（２－アミノアセトアミド）アセトアミド］－Ｎ－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］－カルバモイル］メチル）－３－フェニルプロパンアミド；トリフルオロ酢酸（化合物９１、１４０ｍｇ、７９％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ， ｍｓ）：８１８［Ｍ＋Ｈ－ＴＦＡ］＋．
ステップ１１．化合物（Ｉｊ）の合成
ＤＭＦ（２．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－［２－（２－アミノアセトアミド）アセトアミド］－Ｎ－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］－エトキシ）メチル］カルバモイル］メチル）－３－フェニルプロパンアミド；トリフルオロ酢酸（化合物９１、１４０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＩＥＡ（７０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、３．６１等量）の攪拌混合物に、６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサン酸２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（化合物９２、７０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、１．５０等量）を０℃で分割して加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件で直接精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ分取Ｃ１８ ＯＢＤカラム、１９×２５０ｍｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：７分で２５ Ｂから５０ Ｂ；２５４ｎｍ；ＲＴ１：６．３５分。収集した画分を凍結乾燥させて、粗生成物を得た。粗生成物を次の条件で再精製した：カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８カラム、３０×１５０、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で２０ Ｂから４０ Ｂ、２２０ｎｍ；ＲＴ１：６．７７分。収集した画分を凍結乾燥させて、Ｎ－［［（［［（１Ｓ）－１－［（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エトキシ）メチル］カルバモイル］メチル）カルバモイル］－２－フェニルエチル］カルバモイル］メチル）カルバモイル］メチル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド（化合物（Ｉｋ）、２２．８ｍｇ、１４％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：１０１１［Ｍ＋Ｈ］＋．１ＨＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ１０．９５（ｓ， １Ｈ）， ８．７９（ｓ， １Ｈ）， ８．５１（ｔ， Ｊ＝８，４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２９（ｔ， Ｊ＝８．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１２－８．０１（ｍ， ３Ｈ）， ７．７０－７．６６（ｍ， ２Ｈ）， ７．４４（ｓ， １Ｈ）， ７．４２（ｄ， Ｊ＝８．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２３－７．１６（ｍ， ７Ｈ）， ６．９９（ｓ， ２Ｈ）， ６．８２（ｔ， Ｊ＝８．０Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１３－５．０９（ｍ， １Ｈ）， ４．５５－４．２８（ｍ， ７Ｈ）， ３．７２－３．６０（ｍ， ６Ｈ）， ３．５５－３．５１（ｍ， ２Ｈ）， ３．３６－３．３４（ｍ， ２Ｈ）， ３．０５－３．００（ｍ， １Ｈ）， ２．９４－２．７２（ｍ， ４Ｈ）， ２．６２－２．５４（ｍ， １Ｈ）， ２．４０－２．３２（ｍ， １Ｈ）， ２．１２－２．０５（ｍ， ２Ｈ）， ２．００－１．９１（ｍ， １Ｈ）， １．５０－１．３８（ｍ， ４Ｈ）， １．１９－１．１０（ｍ， ２Ｈ）
Figure 2023519974000145
Figure 2023519974000146
ステップ１．化合物９４の合成
ＴＨＦ（２４０．００ｍＬ）中の（２－クロロ－４－ニトロフェニル）酢酸（化合物９３、２４．００ｇ、１１１．３２ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＢＨ３－Ｍｅ２Ｓ（２８．００ｍＬ、２９５．２３ｍｍｏｌ、２．６５等量）を窒素雰囲気下で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下７０℃で２時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）により、反応の完了が示された。室温に冷却した後、得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ ＥｔＯＡｃ（３：１）で溶出させて、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物９４、１８．００ｇ、８０％）を薄黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ８．２７ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０－８．０７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９６ （ｔ， Ｊ＝ ６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１３ （ｔ， Ｊ＝６Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ２．化合物９５の合成
ＤＣＭ（１００．００ｍＬ）中の２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物９４、５．００ｇ、２４．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＮＢＳ（６．６２ｇ、１．５０等量）及びＰＰｈ３（９．７６ｇ、３７．２１ｍｍｏｌ、１．５０等量）をＮ２下下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２下一晩室温で攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ ＥｔＯＡｃ（４：１）で溶出させて、１－（２－ブロモエチル）－２－クロロ－４－ニトロベンゼン（化合物９５、５．１０ｇ、７２％）を赤色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７９ ４（ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ３．化合物９６の合成
ＤＭＦ（５０．００ｍＬ）中の１－（２－ブロモエチル）－２－クロロ－４－ニトロベンゼン（化合物９５、５．００ｇ、１８．９０ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、チオ酢酸カリウム（２．１６ｇ、１８．９０ｍｍｏｌ、１．００等量）を窒素雰囲気下室温で加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応物を水（６００．００ ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、水（２００．００ｍＬ）、ブライン（２００．００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、１－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］エタノン（化合物９６、４．５０ｇ、８５％）を赤色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２０ －３．０５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３４ （ｓ， ３Ｈ）．
ステップ４．化合物９７の合成
ＭｅＯＨ（３００．００ｍＬ）中の１－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］エタノン（化合物９６、２．００ｇ、７．７０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＭｅＯＮａ（６．９３ｍＬ、３７．３３ｍｍｏｌ、５．００等量、ＭｅＯＨ中３０％）をＮ２下０℃で加えた。得られた混合物をＮ２下０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応を、ｐＨ値３～４に、ＡｃＯＨでクエンチした。得られた混合物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（５０．００ｍＬ）で希釈し、濾過した。濾液を分取ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製して、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタンチオール（化合物９７、１．３５ｇ、７２％）を薄黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８５ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．０， ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）．
ステップ５．化合物９９の合成
ＤＭＦ（２００．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン酸（化合物９８、２０．００ｇ、６４．２４ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＳＴＵ（２５．１８ｇ、８３．５２ｍｍｏｌ、１．３０等量）及びＤＩＥＡ（１６．６０ｇ、１２８．４８ｍｍｏｌ、２．００等量）を空気雰囲気下室温で加えた。得られた混合物を１時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を水（２００．００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００．００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、水（１００．００ｍＬ）、ブライン（１００．００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：２）で溶出させて、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパノエート（化合物９９、２５．００ｇ、８３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４３１［Ｍ＋Ｎａ］＋．
ステップ６．化合物１００の合成
水（５０．００ｍＬ）中のＤ－アラニン（１．０９ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮａＨＣＯ３（３．０９ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、３．００等量）の溶液に、ＤＭＦ（５０．００ｍＬ）中の２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパノエート（化合物９９、５．００ｇ、１２．２４ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を、２Ｎ ＨＣｌでｐＨ値２～３に調整した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（１００．００ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００．００ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、（２Ｒ）－２－［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－アミノ］プロパンアミド］プロパン酸（化合物１００、４．００ｇ、７１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ：３８３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ７．化合物１０１の合成
水（２００．００ｍＬ）中のグリシン（３．６８ｇ、４８．９７ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮａＨＣＯ３（１２．３４ｇ、１４６．８９ｍｍｏｌ、３．００等量）の溶液に、ＤＭＦ（２００．００ｍＬ）中の２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパノエート（化合物９９、２０．００ｇ、４８．９７ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を、２Ｎ ＨＣｌでｐＨ値２～３に調整した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（５００．００ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機層をブライン（５００．００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮乾固させて、［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド］酢酸（化合物１０１、１５．００ｇ、７１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３６９ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ８．化合物１０２の合成
Ｎ２下のＴＨＦ（３００．００ｍＬ）／トルエン（１００．００ｍＬ）中の［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド］－酢酸（化合物１０１、５．００ｇ、１３．５７ｍｍｏｌ、１．００等量）、Ｐｂ（ＯＡｃ）４（７．２２ｇ、１６．２８ｍｍｏｌ、１．２０等量）、及びピリジン（１．２９ｇ、１６．３１ｍｍｏｌ、１．２０等量）の溶液を、８０℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。室温に冷却した後、反応物を濾過した。濾過ケークをＴＨＦ（１００．００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：２）で溶出させて、［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド］酢酸メチル（化合物１０２、２．５０ｇ、４５％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４０５ ［Ｍ＋Ｎａ］＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ７．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４３ － ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３６ － ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１０ （ｓ， １Ｈ）， ５．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５１ － ４．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２３－４．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０４ （ｓ， ３Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）．
ステップ９．化合物１０３の合成
ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中の［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－プロパンアミド］酢酸メチル（化合物１０２、２．２５ｇ、５．８８ｍｍｏｌ、１．００等量）及び２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタンチオール（化合物９７、１．２８ｇ、５．８８ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＦＡ（０．２７ｍＬ、２．３７ｍｍｏｌ、０．６２等量）をＮ２下室温で加えた。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を真空で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：４）で溶出させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１０３、３．１０ｇ、９０％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５４０ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１０．化合物１０４の合成
ＤＭＦ（１５５．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１０３、３．１０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ピペリジン（３１．００ｍＬ）をＮ２下０℃で加えた。得られた混合物をＮ２下０℃で０．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を水（６００．００ｍｌ）で希釈した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２００．００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００．００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、３．００ｇの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより再精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３：１）で溶出させて、（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）プロペンアミド、１０４（１．５０ｇ、７８％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３１８ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ１１．化合物１０５の合成
ＤＭＦ（７５．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）－プロペンアミド （化合物１０４、１．５０ｇ、４．７２ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（１０．００ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（０．５９ｇ、７．０８ｍｍｏｌ、１．５０等量）及びＢＯＣ２Ｏ（１．０３ｇ、４．７２ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を室温で加えた。反応物を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を水（５００．００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００．００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００．００ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固して、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１０５、（１．８２ｇ、８３）を赤色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４１８ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ３１８ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ１２．化合物１０６の合成
ＥｔＯＨ（１００．００ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（５０．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１０５、１．８２ｇ、４．３６ｍｍｏｌ、１．００等量）、鉄粉（２．４３ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１０．００等量）、及びＮＨ４Ｃｌ（２．３３ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１０．００等量）のスラリーを、７０℃で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を濾過した。濾液を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（５０．００ｍＬ）で溶解させ、濾過した。濾液を濃縮乾固させて、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１３：１）で溶出させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１０６、１．２０ｇ、６８％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３８８ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１３．化合物１０７
０℃のＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ １、３５２ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＣＤＩ（２０９．００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１等量）及びＴＥＡ（２６０ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ、２等量）を加えた。得られた混合物を０℃で２時間攪拌した。次に、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）－カルバモイル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１０６、５００．００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＭＡＰ（４７２ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、３．００等量）を加えた。得られた混合物を６０℃で２４時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。室温に冷却した後、反応混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ－［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１０７、４５０．００ｍｇ、４８％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：６８７ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１４．化合物１０８
ＤＣＭ（２２．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］－メチル］カルバモイル）エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１０７、４４０．００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＦＡ（２．２０ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を室温で０．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を真空下で濃縮乾固させて、（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］－メチル］プロパンアミド；トリフルオロ酢酸（化合物１０８、４００．００ｍｇ、粗）を赤色油として得た。残留物を、さらに精製することなく次のステップに使用した。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５８７ ［Ｍ＋Ｈ－ＴＦＡ］＋
ステップ１５．化合物１０９の合成
（２Ｒ）－２－［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］－アミノ］プロパンアミド］プロパン酸（２１８ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、１．００等量）、ＨＯＢＴ（７７ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、１．００等量）、及びＨＡＴＵ（２１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を、空気中室温で１時間攪拌した後、（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］プロパンアミド；トリフルオロ酢酸（化合物１０８、４００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＩＥＡ（６６３ｍｇ、５．１４ｍｍｏｌ、９．００等量）を室温で加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）、３０分で０％から５０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［（ｌＲ）－１－［［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）エチル］カルバモイル］エチル］カルバモイル］エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１０９、４８０．００ｍｇ、７５％）を緑色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：９５１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１６．化合物１１０
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｒ）－１－［［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］－エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）エチル］カルバモイル］エチル］カルバモイル］エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１０９、１１０．００ｍｇ）の溶液に、ピペリジン（１．００ｍＬ）を０℃で加えた。得られた混合物を０℃で０．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）、４０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（２Ｓ）－２－［（２Ｒ）－２－［（２Ｓ）－２－アミノプロパンアミド］プロパンアミド］－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］－フェニル］エチル）スルファニル］メチル］プロペンアミド（化合物１１０、８０．００ｍｇ、６０％）を赤色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：７２９ ［Ｍ＋Ｈ］＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．００ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ８．５３ ｂｒ （ｓ， １Ｈ）， ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ７．６９ － ７．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４９ （ｓ， １Ｈ）， ７．４２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２６－７．１３ （ｍ， ３Ｈ）， ７．００ （ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．１１－５．０６ （ｍ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３６ （ｍ， ３Ｈ）， ４．３５ － ４．１３ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９０－２．８３ （ｍ， ３Ｈ）， ２．７３－２．７１ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５－１．９０ （ｍ， １Ｈ）， １．７０－１．５３ （ｍ， ４Ｈ）， １．２２－１．１７（ｍ， ６Ｈ）， １．１４ － １．０５ （ｍ， ３Ｈ）．
ステップ１７．化合物（Ｉｋ）の合成
ＤＭＦ（１．５０ｍＬ、１９．３８ｍｍｏｌ、２２４．３６等量）中の（２Ｓ）－２－［（２Ｒ）－２－［（２Ｓ）－２－アミノプロパンアミド］プロパンアミド］－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］プロペンアミド（化合物１１０、６３．００ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）及び６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサン酸２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ＤＩＥＡ（２２．３３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、２．００等量）を空気中室温で加えた。反応物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８カラム、３０×１５０、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：７分で２３ Ｂから４３ Ｂ、２５４ｎｍ；ＲＴ１：６．５８）。収集した画分を凍結乾燥させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｒ）－１－［［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）エチル］カルバモイル］エチル］カルバモイル］エチル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド（化合物（Ｉｋ）、１６．１０ｍｇ、２０％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：９２２，９２４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ ｄ６） δ １１．００ （ｓ， １Ｈ）， ８．８０ （ｓ， １Ｈ）， ８．４４－８．４１ （ｍ， １Ｈ）， ８．１５ （ｄ， Ｊ ＝７．２Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０３－８．００ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７－７．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）， ７．２２－７．１４（ｍ， ２Ｈ）， ６．９８ （ｓ， ２Ｈ）， ６．８３－６．８１ （ｍ， １Ｈ）， ５．１３－５．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４８－４．４０ （ｍ， ３Ｈ）， ４．２９－４．１７ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９６－２．８５ （ｍ， ３Ｈ）， ２．７５－２．７０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６７－２．５７ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０－２．３３ （ｍ， １Ｈ）， ２．０９－１．９８ （ｍ， ３Ｈ）， １．５２－１．４５ （ｍ， ５Ｈ）， １．２６－１．１６ （ｍ， １２Ｈ）．
Figure 2023519974000147
Figure 2023519974000148
ステップ１．化合物１１２の合成
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の（２－クロロ－４－ニトロフェニル）酢酸（化合物１１１、５．００ｇ、２３．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＢＨ３－Ｍｅ２Ｓ（５．５０ｍＬ、５７．９９ｍｍｏｌ、２．５０等量）を窒素雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下７０℃で２時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）により、反応の完了が示された。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（２：１）で溶出させて、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物１１２、４．８ｇ、９２％）を薄黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ８．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４６ （ｓ， １Ｈ）， ３．２０ －３．０９ （ｍ， ４Ｈ）．
ステップ２．化合物１１３の合成
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール （化合物１１２、４．８０ｇ、２３．８１ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＮＢＳ（６．３６ｇ、３５．７１ｍｍｏｌ、１．５０等量）及びＰＰｈ３（９．３７ｇ、３５．７２ｍｍｏｌ、１．５０等量）を空気雰囲気下室温で分割して加えた。得られた混合物を空気雰囲気下一晩室温で攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（４：１）で溶出させて、１－（２－ブロモエチル）－２－クロロ－４－ニトロベンゼン（化合物１１３、３．９ｇ、５７％）を赤色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ８．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ３．化合物１１４の合成
ＤＭＦ（３９ｍＬ）中の１－（２－ブロモエチル）－２－クロロ－４－ニトロベンゼン（化合物１１３、３．９０ｇ、１４．７５ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、チオ酢酸カリウム（１．６８ｇ、１４．７５ｍｍｏｌ、１．００等量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。ＴＬＣ（（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応物を水（６００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物をＥＡ（２００ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機層を、水（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮乾固して、１－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］エタノン（化合物１１４， ３．７ｇ、８５％）を赤色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ８．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４６ （ｓ， １Ｈ）， ３．２１ －３．０２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３７ （ｓ， ３Ｈ）．
ステップ４．化合物１１５の合成
ＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中の１－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］エタノン（化合物１１４、４．００ｇ、１５．４０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＭｅＯＮａ（１４．３１ｍＬ、７７．００ｍｍｏｌ、５．００等量、３０％）を０℃ Ｎ２で１時間加えた。反応混合物を０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣにより、（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）反応の完了が示された。反応をＡｃＯＨでクエンチした。得られた混合物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、濾過した。濾液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で溶出させて、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタンチオール（化合物１１５、３ｇ、８０％）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ８．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８７ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．０， ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ， １Ｈ）．
ステップ５．化合物１１７の合成
ＴＨＦ（３００ｍＬ）及びトルエン（１００ｍＬ）中の（２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－アセトアミド）酢酸（化合物１１６、１０ｇ、２８．２２ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＰｂ（ＯＡｃ）４（１５ｇ、３３．８６ｍｍｏｌ、１．２０等量）の攪拌混合物に、ピリジン（２．５９ｇ、３２．７４ｍｍｏｌ、１．１６等量）を窒素雰囲気下室温で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下一晩８０℃で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。混合物を室温に冷却させた。得られた混合物を濾過し、濾過ケークをＥＡ（２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮した。残留物をＥＡ（２０ｍＬ）に溶解させた。得られた混合物を、水、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過した後、濾液を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：４）で溶出させて、（２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］アセトアミド）酢酸メチル（化合物１１７、６．５ｇ、５６％）を白色固体として得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ７．８０（ｄ， Ｊ ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．６２（ｄ， Ｊ ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４５（ｔ， ｄ ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３６（ｄ， ｄ ＝７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１８（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．４８（ｂｒ ｓ， １Ｈ）， ５．２８（ｄ， Ｊ ＝７．２Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４８（ｄ， Ｊ ＝６．６Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２６（ｔ， Ｊ ＝６．６Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９３（ｄ， ５．４Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０８（ｓ， ３Ｈ）．ＬＣＭＳ （ＥＳＩ， ｍｓ）：３９１［Ｍ＋Ｎａ］＋
ステップ６．化合物１１８の合成
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の（２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］アセトアミド）酢酸メチル（化合物１１７、３．００ｇ、８．１４ｍｍｏｌ、１．００等量）及び２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタンチオール（化合物１１５、１．７７ｇ、８．１３ｍｍｏｌ、１．００等量））の溶液に、ＴＦＡ（０．５６ｇ、４．９１ｍｍｏｌ、０．６０等量）を室温で加えた。得られた混合物を６０℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：３）で溶出させて、Ｎ－［［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］－メチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１１８， ３．７ｇ、６７％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５２６，５２８ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ７．化合物１１９の合成
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中のＮ－［［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］メチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１１８、３．７０ｇ、７．０３ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ピペリジン（８ｍＬ）を０℃で加えた。得られた混合物を０℃で０．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を水（４００ｍＬ）で希釈し、ＥＡ（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、水（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で溶出させて、２－アミノ－Ｎ－（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）アセトアミド（化合物１１９、１．０１ｇ、４０％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３０４，３０６ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ８．化合物１２０の合成
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の２－アミノ－Ｎ－（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）－アセトアミド（化合物１１９、１．００ｇ、３．２９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、水（１０ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（０．３３ｇ、３．９２ｍｍｏｌ、１．２０等量）及びＢＯＣ２Ｏ（０．７２ｇ、３．３０ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を水（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：３）で溶出させて、Ｎ－［［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１２０、８１０ｍｇ、５４％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４０４，４０６ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ３０４，３０６ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ９．化合物１２１の合成
ＥｔＯＨ（４０）中のＮ－［［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）カルバモイル］メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１２０、８００．００ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、鉄粉（１１０６ｍｇ、１９．８１ｍｍｏｌ、１０．００等量）、及び水（１０ｍＬ）中のＮＨ４Ｃｌ １０５９ｍｇ、１９．８１ｍｍｏｌ、１０．００等量）の溶液を室温で加えた。得られた混合物を７０℃で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を濾過した。濾液を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（５０．００ｍＬ）で溶解させ、濾過した。濾液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１３：１）で溶出させて、Ｎ－［［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）－カルバモイル］メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１２１、６１０ｍｇ、７４％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３７４，３７６ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ３７４，３７６ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ１０．化合物１２２の合成
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ １、２１９ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ＣＤＩ（１３０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＴＥＡ（８１ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）を空気中０℃で加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。次に、Ｎ－［［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）カルバモイル］メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１２１、３００ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＭＡＰ（２９４ｍｇ、２．４１ｍｍｏｌ、３．００等量）を空気中室温で加えた。得られた混合物を６０℃で４８時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）、３０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ－［（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）メチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１２２、２７０ｍｇ、４９％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：６７３，６７５ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ５７３，５７５ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ１１．化合物－１２３の合成
１，４－ジオキサン（１２ｍＬ）中のＮ－［（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）メチル］－カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１２２、２５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ（１，４－ジオキサン中４Ｎ、６ｍＬ）をＮ２下０℃で加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を真空下で濃縮乾固させて、２－アミノ－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］アセトアミド（化合物１２３、２６０ｍｇ、粗）を茶色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５７３，５７５ ［Ｍ＋Ｈ－ＨＣ１］＋
ステップ１２．化合物－１２５の合成
ＤＭＳＯ（５．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－［２－（２－アミノアセトアミド）アセトアミド］－３－フェニルプロパン酸（化合物１２４、５００ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ、１．００等量）及び６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサン酸２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（５５２ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を空気中室温で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２２０ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（２Ｓ）－２－（２－［２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］アセトアミド］アセトアミド）－３－フェニルプロパン酸（化合物１２５、７６０ｍｇ、８３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４７３ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１３．化合物（ＩＩ）の合成
ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－（２－［２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］アセトアミド］－アセトアミド）－３－フェニルプロパン酸（化合物１２５、１７５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ＨＡＴＵ（１４１ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＨＯＢＴ（５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１．００等量）を空気中室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。次に、２－アミノ－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］－カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］アセトアミド（化合物１２３、２５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ、１．００等量、８５％）及びＤＩＥＡ（２４０ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、５．００等量）を加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ分取Ｃ１８ ＯＢＤカラム、１９＊２５０ｍｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：７分で３０ Ｂから６０ Ｂ、２５４ｎｍ；ＲＴ１：６．６７分により精製して、７５ｍｇの粗生成物を得た。粗生成物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより再精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８ ＯＢＤカラム、１９＊２５０ｍｍ、１０ｕｍ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：２５ｍＬ／分；勾配：１０分で２５ Ｂから４４ Ｂ；２５４ｎｍ；ＲＴ１：１０．５２分。収集した画分を凍結乾燥させて、化合物（ＩＩ）（４１．６ｍｇ、１０％）を白色固体として得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９ （ｓ， １Ｈ）， ８．７９ （ｓ， １Ｈ）， ８．３８ （ｔ， Ｊ ＝６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３１ （ｔ， Ｊ ＝６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１２ （ｄ， Ｊ ＝８．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０６ （ｔ， Ｊ ＝５．６Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０１ （ｔ， Ｊ ＝６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７０－７．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝８．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５－７．２１ （ｍ， ５Ｈ）， ７．１９－７．１４ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９９ （ｓ， ２Ｈ）， ６．８２ （ｔ， Ｊ ＝６．０Ｈｚ，ｌＨ）， ５．１３－５．０８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４７－４．４０ （ｍ， ４Ｈ）， ４．３３－４．２９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７６－３．７０ （ｍ， ３Ｈ）， ３．６７－３．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．３８－３．３６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０６－３．０２ （ｍ， １Ｈ）， ２．９１－２．８６ （ｍ，３Ｈ）， ２．８２－２．７０ （ｍ， ３Ｈ）， ２．６２－２．５７ （ｍ， １Ｈ）， ２．５０－２．４５ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５－１．９５ （ｍ ，１Ｈ）， １．５０－１．４４ （ｍ，４Ｈ）， １．２０－１．１６ （ｍ， ２Ｈ）．ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：１０２７，１０２９ ［Ｍ＋Ｈ］＋
Figure 2023519974000149
Figure 2023519974000150
ステップ１．化合物１２７の合成
ＴＨＦ（２４０．００ｍＬ）中の（２－クロロ－４－ニトロフェニル）酢酸（化合物１２６、２４．００ｇ、１１１．３２ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＢＨ３－Ｍｅ２Ｓ（２８．００ｍＬ、２９５．２３ｍｍｏｌ、２．６５等量）を窒素雰囲気下で滴加した。得られた混合物を窒素雰囲気下７０℃で２時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）により、反応の完了が示された。室温まで冷却した後、得られた混合物を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ ＥｔＯＡｃ（３：１）で溶出させて、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物１２７、１８．００ｇ、８０％）を薄黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３Ｃ１） δ８．２７ （ｓ， １Ｈ）， ８．１０－８．０７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９６ （ｔ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１３ （ｔ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ２．化合物１２８の合成
ＤＣＭ（１００．００ｍＬ）中の２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタノール（化合物１２７、５．００ｇ、２４．８０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＮＢＳ（６．６２ｇ、１．５０等量）及びＰＰｈ３（９．７６ｇ、３７．２１ｍｍｏｌ、１．５０等量）をＮ２下室温で分割して加えた。得られた混合物をＮ２下一晩室温で攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ ＥｔＯＡｃ（４：１）で溶出させて、１－（２－ブロモエチル）－２－クロロ－４－ニトロベンゼン（化合物１２８、５．１０ｇ、７２．３１％）を赤色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．
ステップ３．化合物１２９の合成
ＤＭＦ（５０．００ｍＬ）中の１－（２－ブロモエチル）－２－クロロ－４－ニトロベンゼン（化合物１２８、５．００ｇ、１８．９０ｍｍｏｌ、１．００等量）溶液に、チオ酢酸カリウム（２．１６ｇ、１８．９１ｍｍｏｌ、１．００等量）を 窒素雰囲気下室温で加えた。結果として生じた混合物を室温で２時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応物を水（６００．００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２００．００ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機層を、水（２００．００ｍＬ）、ブライン（２００．００ｍＬ＊３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、１－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］エタノン（化合物１２９、４．５０ｇ、８５％）を赤色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２０ － ３．０５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３４ （ｓ， ３Ｈ）．
ステップ４．化合物１３０の合成
ＭｅＯＨ（３００．００ｍＬ）中の１－［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］エタノン（化合物１２９、２．００ｇ、７．７０ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＭｅＯＮａ（６．９３ｍＬ、３７．３３ｍｍｏｌ、５．００等量、３０％）をＮ２下０℃で加えた。得られた混合物をＮ２下０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により、反応の完了が示された。反応を、ｐＨ値３～４に、ＡｃＯＨでクエンチした。得られた混合物を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（５０．００ｍＬ）で希釈し、濾過した。濾液を分取ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製して、２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタンチオール（化合物１３０、１．３５ｇ、７２％）を薄黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．８５ （ｄｔ， Ｊ ＝ ８．０， ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．４３ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）．
ステップ５．化合物１３２の合成
ＤＭＦ（２００．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン酸（化合物１３１、２０．００ｇ、６４．２４ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＳＴＵ（２５．１８ｇ、８３．５２ｍｍｏｌ、１．３０等量）及びＤＩＥＡ（１６．６０ｇ、１２８．４８ｍｍｏｌ、２．００等量）を空気雰囲気下室温で加えた。得られた混合物を１時間室温で攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を水（２００．００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をＥＴＯＡＣ（１００．００ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機層を、水（１００．００ｍＬ）、ブライン（１００．００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：２）で溶出させて、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパノエート（化合物１３２、２５．００ｇ、８３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４３１ ［Ｍ＋Ｎａ］＋
ステップ６．化合物１３３の合成
水（２００．００ｍＬ）中のグリシン（３．６８ｇ、４８．９７ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＮａＨＣＯ３（１２．３４ｇ、１４６．８９ｍｍｏｌ、３．００等量）の溶液に、ＤＭＦ（２００．００ｍＬ）中の２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパノエート（化合物１３２、２０．００ｇ、４８．９７ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を加えた。反応物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応を２Ｎ ＨＣｌでｐＨ値を２～３に調整した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（５００．００ｍＬ＊３）で抽出し、合わせた有機層をブライン（５００．００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮乾固させて、［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド］酢酸（化合物１３３、１５．００ｇ、７１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３６９ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ７．化合物１３４の合成
Ｎ２下のＴＨＦ（３００．００ｍＬ）／トルエン（１００．００ｍＬ）中の［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－プロパンアミド］酢酸 （化合物１３３、５．００ｇ、１３．５７ｍｍｏｌ、１．００等量）、Ｐｂ（ＯＡｃ）４（７．２２ｇ、１６．２８ｍｍｏｌ、１．２０等量）、及びピリジン（１．２９ｇ、１６．３１ｍｍｏｌ、１．２０等量）の溶液を、８０℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。室温に冷却した後、反応物を濾過した。濾過ケーキをＴＨＦ（１００．００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を真空下で濃縮乾固させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＰＥ：ＥＴＯＡＣ＝１：２）で溶出させて、［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパンアミド］酢酸メチル （化合物１３４、２．５０ｇ、４５％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４０５ ［Ｍ＋Ｎａ］＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム－ｄ） δ ７．７７－７．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４３ － ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３６ － ７．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１０ （ｓ， １Ｈ）， ５．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５１ － ４．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．０４ （ｓ， ３Ｈ）， １．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３Ｈ）．
ステップ８．化合物１３５の合成
ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中の［（２Ｓ）－２－［［（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシ）カルボニル］アミノ］－プロパンアミド］酢酸メチル（化合物１３４、２．２５ｇ、５．８８ｍｍｏｌ、１．００等量）及び２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタンチオール（化合物５００、１．２８ｇ、５．８８ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＦＡ（０．２７ｍＬ、２．３７６ｍｍｏｌ、０．６２等量）をＮ２下室温で加えた。得られた混合物を４０℃で１６時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を真空で濃縮乾固させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１３５、３．１０ｇ、９０％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５４０，５４２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ９．化合物１３６の合成
ＤＭＦ（１５５．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（化合物１３５、３．１０ｇ、５．７４ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、ピペリジン（３１．００ｍＬ）をＮ２下０℃で加えた。得られた混合物をＮ２下０℃で０．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を水（６００．００ｍｌ）で希釈した。得られた混合物をＥＡ（２００．００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００．００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、３．００ｇの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより再精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３：１）で溶出させて、（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）プロペンアミド（化合物１３６、１．５０ｇ、７８％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３１８，３２０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
ステップ１０．化合物１３７の合成
ＤＭＦ（７５．００ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）プロペンアミド（化合物１３６、１．５０ｇ、４．７２ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（１０．００ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（０．５９ｇ、７．０８ｍｍｏｌ、１．５０等量）、及びＢｏｃ２Ｏ（１．０３ｇ、４．７２ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を空気中室温で加えた。反応物を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を水（５００．００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００．００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００．００ ｍＬ＊３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮乾固させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）－カルバモイル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１３７、１．８２ｇ、８３％）を赤色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：４１８，４２０ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ３１８，３２０ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ１１．化合物１３８の合成
ＥｔＯＨ（１００．００ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（５０．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エチル］－スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１３７、１．８２ｇ、４．３６ｍｍｏｌ、１．００等量）、鉄粉（２．４３ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１０．００等量）、及びＮＨ４Ｃｌ（２．３３ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１０．００等量）のスラリーを、７０℃で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を濾過した。濾液を真空下で濃縮乾固させた。残留物をＤＣＭ（５０．００ｍＬ）で溶解させ、濾過した。濾液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１３：１）で溶出させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エチル］スルファニル］メチル）カルバモイル］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１３８、１．２０ｇ、６８％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３８８，３９０ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ２８８，２９０ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ１２．化合物１３９の合成
０℃のＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の３－［５－（アミノメチル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－２－イル］ピペリジン－２，６－ジオン（ＩＮＴ １、３５２ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＣＤＩ（２０９．００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１等量）及びＴＥＡ（２６０ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ、２等量）を加えた。得られた混合物を０℃で２時間攪拌した。次に、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［（［［２－（４－アミノ－２－クロロフェニル）エチル］スルファニル］－メチル）カルバモイル］－エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１３８、５００．００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＭＡＰ（４７２ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、３．００等量）を加えた。得られた混合物を６０℃で２４時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。室温に冷却した後、反応混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２５４ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、Ｎ－［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１３９、４５０．００ｍｇ、４８％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：６８７，６８９ ［Ｍ＋Ｈ］＋， ５８７，５８９ ［Ｍ＋Ｈ－１００］＋
ステップ１３．化合物１４０の合成
ＤＣＭ（２２．００ｍＬ）中のＮ－［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］－メチル］カルバモイル）エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１３９、４４０．００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ、１．００等量）の攪拌溶液に、ＴＦＡ（２．２０ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を室温で０．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応物を真空下で濃縮乾固させて、（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］プロパンアミド；トリフルオロ酢酸（化合物１４０、４００．００ｍｇ ）を赤色油として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：５７８，５８９ ［Ｍ＋Ｈ－ＴＦＡ］＋
ステップ１４．化合物１４２の合成
ＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中のＬ－バリン（化合物１４１、０．５０ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、１．００等量）のスラリーに、６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサン酸２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（１．３２ｇ、４．２８ｍｍｏｌ、１．００等量）及びＤＩＥＡ（１１０３ｍｇ、８．５４ｍｍｏｌ、２．００等量）を加えた。得られた混合物を室温で４時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。反応混合物を次の条件：カラム、Ｃ１８シリカゲル；移動相、水中ＡＣＮ（０．１％ＦＡ）、３０分で０％から６０％の勾配；検出器、ＵＶ ２２０ｎｍで逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタン酸（化合物１４２、１．２ｇ、７２％）を茶色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：３１１ ［Ｍ＋Ｈ］＋
ステップ１５．化合物（Ｉｍ）の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｓ）－２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド］－３－メチルブタン酸（化合物１４２、５９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）、ＨＯＢＴ（２６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）、及びＨＡＴＵ（７２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液を、室温の空気中で１時間攪拌した。次に、（２Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］フェニル］エチル）スルファニル］メチル］プロパンアミドトリフルオロ酢酸（化合物１４０、２００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、１．００等量、６６．７０％）及びＤＩＥＡ（１９７ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、８．００等量）を室温で加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、反応の完了が示された。得られた混合物を次の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：カラム：ＹＭＣ－Ａｃｔｕｓ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８、３０ｍｍ×１５０ｍｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：水（０．１％ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流量：６０ｍＬ／分；勾配：１０分で２８ Ｂから４５ Ｂ、２５４ｎｍ；ＲＴ１：９．６７分。収集した画分を凍結乾燥させて、Ｎ－［（１Ｓ）－１－［［（１Ｓ）－１－（［［（２－［２－クロロ－４－［（［［２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１－オキソ－３Ｈ－イソインドール－５－イル］メチル］カルバモイル）アミノ］－フェニル］エチル）スルファニル］メチル］カルバモイル）エチル］カルバモイル］－２－メチルプロピル］－６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサンアミド（化合物（Ｉｍ）、２７．８ｍｇ、１６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ＥＳ， ｍ／ｚ）：８７９，８８１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ１０．９９ （ｓ， １Ｈ）， ８．８０ （ｓ， １Ｈ）， ８．４７ （ｔ， Ｊ＝６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０３ （ｄ， Ｊ ＝７．２Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）， ７．７０－７．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝８．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１－７．１４ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．９９ （ｓ， ２Ｈ）， ６．８２ （ｔ， Ｊ＝６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１３－５．１０ （ｍ，１ Ｈ）， ４．４７－４．４０ （ｍ， ３Ｈ）， ４．３３－４．２９ （ｍ， ３Ｈ）， ４．２４ （ｔ， Ｊ＝７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１４ （ｔ， Ｊ ＝６．８Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３８－３．３６ （ｍ， １Ｈ）， ２．９７－２．９０ （ｍ， １Ｈ）， ２．８６ （ｔ， Ｊ＝７．６Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．７３－２．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６２－２．５７ （ｍ， １Ｈ）， ２．４０－２．３５ （ｍ， １Ｈ）， ２．２０－２．０５ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０２－１．９６ （ｍ， １Ｈ）， １．９５－１．８８ （ｍ， １Ｈ）， １．４８－１．４６ （ｍ， ４Ｈ）， １．２３－１．１６ （ｍ， ６Ｈ）， ０．８３－０．７８ （ｍ， ６Ｈ）．
実施例４．ＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの調製及び特徴付けのための一般手順
抗体の溶液を３０当量のトリス－（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）で処理し、３７℃で１時間インキュベートして、鎖間ジスルフィドを還元した。還元された抗体を、ｉｌｌｕｓｔｒａ ＮＡＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、５０ｍＭ ＥＰＰＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ７．０の緩衝液に精製した。
５０ｍＭ ＥＰＰＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ７．０中２～５ｍｇ／ｍＬの還元抗体の溶液を、ＤＭＡの最終濃度が１５％（ｖ／ｖ）であるようにＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中のストック溶液として加えた１２等量のリンカー－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒで処理することにより、コンジュゲーションを生じさせた。得られた反応混合物を、一晩４℃で放置した。得られたｎｅｗＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを、ｉｌｌｕｓｔｒａ ＮＡＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、２０ｍＭスクシネート、８％スクロース、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０ ｐＨ５．５に精製し、分子量カットオフ５０ｋＤのＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濃縮した。
濃度及びモノマーを、５μｍ粒子の７．８×３００ｍＭ ＴＳＫＧｅｌ ３０００ＳＷＸＬカラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用し、３０分間０．５ｍｇ／ｍＬで泳動させる、４００ｍＭの過塩素酸ナトリウム、５０ｍＭのリン酸ナトリウム、５％（ｖ／ｖ）のイソプロパノール移動相で定組成溶離させる、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定した。ＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートを、抗体標準曲線から定量化し、２１４ｎｍで検出した。
薬物対抗体比（ＤＡＲ）を、２．５μｍ粒子の４．６×３５ｍｍ ＴＳＫｇｅｌ Ｂｕｔｙｌ－ＮＰＲカラムを使用する疎水性相互作用クロマトグラフィーにより決定した。移動相Ａは、１．５Ｍの硫酸アンモニウム、２５ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ７．０であった。移動相Ｂは、２５ｍＭのリン酸ナトリウムｐＨ７．０、２５％（ｖ／ｖ）のイソプロパノールであった。分析物を、０．６ｍＬ／分の流量で、１２分で０から１００％ Ｂの線形勾配で溶出させた。検出は２１４ｎｍで行った。
遊離リンカー－ペイロードを、２．５μｍ粒子の４．６×２５０ｍｍ ＨＩＳＥＰカラム（Ｓｕｐｅｌｃｏ）を使用して、ミックスモードクロマトグラフィーにより決定した。移動相Ａは１００ｍＭの酢酸アンモニウムであった。移動相Ｂは１００％アセトニトリルであった。分析物を、２５分で２５から４０％ Ｂ、その後、０．７ｍＬ／分の流量で、２分で４０から１００％ Ｂの勾配で溶出させた。カラム温度は３５℃であった。遊離リンカー－ペイロードを、外部標準曲線を使用して定量化し、２５４ｎｍで検出した。
実施例５．ＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ及びＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ増殖防止アッセイのための一般手順１
細胞成長を阻害するＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの能力を、インビトロ増殖防止アッセイを使用して測定した。標的細胞を、１００μＬの完全細胞成長培地（大部分の細胞株に、ＲＰＭＩ １６４０、１０％ウシ胎仔血清、及び１％ペニシリンストレプトマイシン；ＢＴ－４７４には、Ｈｙｂｒｉ－ｃａｒｅ培地、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、１０％ウシ胎仔血清、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン；ＨＬ－６０には、ＲＰＭＩ １６４０、２０％ウシ胎仔血清、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン）中、ウェル当たり１，５００～５，０００細胞でプレーティングした。コンジュゲートを、完全細胞成長培地中、４倍の連続希釈を使用して希釈し、ウェル当たり１００μＬを加えた。最終濃度は、典型的には、１×１０－８Ｍ～１．５３×１０－１３Ｍ、または１×１０－７Ｍ～１．５３×１０－１２Ｍの範囲であった。細胞を、加湿した５％ ＣＯ２インキュベーター中３７℃で５日間インキュベートした。残りの細胞の生存を比色ＷＳＴ－８アッセイ（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳ）により決定した。ＷＳＴ－８を最終体積の１０％まで加え、プレートを、加湿した５％ ＣＯ２インキュベーター中３７℃で２～４時間インキュベートした。プレートを、マルチウェルプレートリーダーにおいて４５０ｎｍ（Ａ４５０）で吸光度を測定することにより、分析した。培地及びＷＳＴ－８のみを有するウェルのバックグラウンドＡ４５０吸光度をすべての値から差し引いた。生存パーセントを、処置した試料の値の各々を、処置していない細胞を有するウェルの平均値で割ることにより計算した。生存パーセント値を、各処理についての半対数プロットにおいて、試験試料濃度に対してプロットした。ＩＣ５０値を自動的に計算した。
ＢＴ－４７４乳癌細胞株に対する、化合物（Ｉａ）及び（Ｉｃ）のトラスツズマブ及びペルツズマブコンジュゲートの増殖防止活性を図１～４に示す（各ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートにおいて、薬物：抗体比＝８）。抗体薬物コンジュゲートのカドサイラならびにコンジュゲートされていない抗体のトラスツズマブ及びペルツズマブは、抗体ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅコンジュゲートよりも活性が１００倍超低いことが見出され、一方で細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅコンジュゲートのリツキシマブ－化合物（Ｉａ）ならびに放出ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１及びＰ４ ａは、ＢＴ－４７４細胞に対して活性が１０００倍超低いことが見出された。
ＢＴ－４７４乳癌細胞株に対する、化合物（Ｉａ）及び化合物（Ｉｃ）のトラスツズマブ及びペルツズマブコンジュゲートの増殖防止活性を図５～６に示す（薬物：抗体比は指定されている）。抗体薬物コンジュゲートのエンハーツ（登録商標）及びコンジュゲートされていない抗体のトラスツズマブは、ＢＴ－４７４細胞に対する抗体ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートよりも活性が低いことが見出された。
ＳＫ－ＢＲ－３乳癌細胞株に対する、化合物（Ｉａ）のトラスツズマブ及びペルツズマブコンジュゲートの増殖防止活性を図７及び８に示す（各ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートにおいて、薬物：抗体比＝８）。コンジュゲートされたｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒｓは、抗体薬物コンジュゲートのカドサイラと類似した活性を有し、一方でコンジュゲートされていない抗体のトラスツズマブ及びペルツズマブは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートよりも活性が有意に活性が低いことが見出された。細胞結合していない対照ＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのリツキシマブ－化合物（Ｉａ）ならびに放出ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１及びＰ４ ａは、ＳＫ－ＢＲ－３細胞に対して活性が有意に低いことが見出された。
ＨＬ－６０（急性骨髄性白血病）細胞株に対する、化合物（Ｉａ）、（Ｉｄ）のＯＲ０００２１３、ｈｕＭｙ９－６、及びリンツツズマブＩｇＧ１コンジュゲートの増殖防止活性を、図９～１２に示す（指定がない場合、薬物：抗体比＝８）。ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、細胞株に対する承認されている薬剤マイロターグ（登録商標）と類似した活性を有することが示され、一方で、細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのトラスツズマブ－化合物（Ｉａ）及びリツキシマブ－化合物（Ｉｄ）は、活性が有意に低かった。
Ｒａｍｏｓ（非ホジキンリンパ腫）細胞株に対する化合物（Ｉａ）及び（Ｉｃ）のリツキシマブコンジュゲートの増殖防止活性を図１３に示す（指定がない場合、薬物：抗体比＝８）。コンジュゲートされていないリツキシマブ、細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのトラスツズマブ－化合物（Ｉａ）、及び放出ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１及びＰ４は、この細胞株に対して、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートよりも活性が低いことが示された。
Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株に対する化合物（Ｉａ）及び（Ｉｃ）のリツキシマブコンジュゲートの増殖防止活性を図１４及び１５に示す（指定がない場合、薬物：抗体比＝８）。コンジュゲートされていないリツキシマブ、細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのトラスツズマブ－化合物（Ｉａ）、及び放出ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１は、この細胞株に対して、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートよりも活性が低いことが示された。
ＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞株に対する、化合物（Ｉａ）のトラスツズマブ及びペルツズマブコンジュゲートの増殖防止活性を図１６及び１７に示す（各ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートにおいて、薬物：抗体比＝８）。コンジュゲートされたｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒｓは、抗体薬物コンジュゲートのカドサイラと類似した活性を有し、一方でコンジュゲートされていない抗体のトラスツズマブ及びペルツズマブは、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートよりも活性が有意に活性が低いことが見出された。細胞結合していない対照ＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのリツキシマブ－化合物（Ｉａ）ならびに放出ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞に対して活性が有意に低いことが見出された。
図１８は、ＢＴ－４６４乳癌細胞における、ヒト血清との３日間のインキュベーション後の化合物（Ｉａ）のトラスツズマブ及びペルツズマブコンジュゲートの増殖防止活性と、血清の非存在下でのコンジュゲートの活性とを比べたものを示す。グラフに示すように、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性は、血清の存在下と非存在下とで類似しており、ヒト血清が活性に影響を及ぼさないことを示した。細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）は、この細胞株に対して、活性が１０００倍超低い。
図１９は、ＢＴ－４６４乳癌細胞における、マウス血清との３日間のインキュベーション後の化合物（Ｉａ）のトラスツズマブ及びペルツズマブコンジュゲートの増殖防止活性と、血清の非存在下でのコンジュゲートの活性とを比べたものを示す。グラフに示すように、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性は、血清の存在下と非存在下とで類似しており、マウス血清が活性に影響を及ぼさないことを示した。細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）は、この細胞株に対して、活性が１０００倍超低い。
表１及び２は、化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、及び（Ｉｄ）のトラスツズマブコンジュゲート、ならびに化合物（Ｉａ）及び（Ｉｃ）のペルツズマブコンジュゲートの、種々のＨｅｒ２細胞株に対するＩＣ５０値を示す。表１に示すように、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、コンジュゲートされていない抗体と比較して、ＢＴ－４７４細胞株内で改善された活性を示し、また、放出ペイロードならびに抗体薬物コンジュゲートのカドサイラ及びエンハーツ（登録商標）に対して改善された活性を示した。ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートはまた、コンジュゲートされていない抗体と比較して、ＳＫ－ＢＲ－３乳癌細胞株及びＮＣＩ－Ｎ８７胃細胞株に対してより良好な活性を示した。表２に示されるように、抗体ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートはまた、コンジュゲートされていない抗体またはカドサイラと比較して、ＳＮＵ－１８２肝細胞株に対して改善された活性を有した。
Figure 2023519974000151
Figure 2023519974000152
表３は、抗ＣＤ２０細胞株における抗体ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。抗体ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、コンジュゲートされていない抗体、非細胞結合対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅコンジュゲートのトラスツズマブ－化合物Ｉ（ａ）、及び放出ペイロードと比較して、Ｄａｕｄｉ及びＲａｍｏｓリンパ球細胞株に対して優れた活性を有した。
Figure 2023519974000153
表４は、ＡＭＬ ＨＬ－６０株に対する、化合物（Ｉａ）及び（Ｉｄ）のｈｕＭｙ９－６及びＯＲ０００２１３コンジュゲート、ならびに化合物（Ｉａ）及び（Ｉｄ）のリンツズマブＩｇＧ１コンジュゲートのＩＣ５０値を示す。表４に示すように、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートは、ＨＬ－６０細胞株において、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）と比較して同等の活性を示し、非結合コンジュゲートのリツキシマブ－化合物（Ｉｃ）よりも改善した活性を示した。
Figure 2023519974000154
表５は、細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）と比較した、ヒト血清またはマウス血清とのインキュベーション後のＢＴ－４７４乳癌細胞株に対するトラスツズマブ及びペルツズマブ化合物（Ｉａ）コンジュゲートの増殖防止活性を示す。表に示すように、ヒトまたはマウス血清中でインキュベートしたｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒの活性は、血清を導入しなかった場合の活性と一致していた。
Figure 2023519974000155
実施例６．ＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ及びＮｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのインビトロ増殖防止アッセイのための一般手順２
細胞培養：細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）またはＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ（ＤＳＭＺ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手し、ＡＴＣＣまたはＤＳＭＺにより指定される培養条件に従って維持した。細胞を解凍し切り、培養中で少なくとも２代継代維持した後、実験条件を進めた。
細胞傷害性アッセイ：接着細胞株については、細胞を無酵素ＰＢＳベースの細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）で解離させ、細胞の倍加時間に応じて適切な細胞密度で、組織培養処理した９６ウェル平底ポリスチレンプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＳＡ）にプレーティングした。プレーティングの１８時間後、細胞を、１００ｎＭから始めた適切な濃度の試験物品で処理し、４倍連続希釈で希釈した。浮遊細胞株については、細胞を、処理の当日に播種し、細胞を上記のように処理した。接着細胞は５日間処理し、懸濁細胞は３日間処理した。細胞増殖を、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（ＣＣＫ－８、Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｊａｐａｎ）を使用して評価し、測定値を、Ｐｒｏｍｅｇａ ＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒプレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）を使用して取得した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して分析した。すべてのデータ点は、３つの技術的複製から取得し、実験は、３つの生物学的複製を使用して検証した。
表６は、種々のがん細胞株に対するｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ Ｐ１、Ｐ３、及びＰ４の活性を示す。表に示すように、ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒは、細胞株の各々に対して活性を有する。
Figure 2023519974000156
表７は、種々の乳癌細胞株に対するペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート及び既知の抗体薬物コンジュゲートのエンハーツ（登録商標）の活性を示す。表に示すように、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲートは、報告された細胞株すべてにおいてより活性であった。
Figure 2023519974000157
表８は、３つの胃癌細胞株に対するペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート及び既知の抗体薬物コンジュゲートのエンハーツの活性を示す。表に示すように、ペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲートは、報告された細胞株すべてにおいてより活性であった。
Figure 2023519974000158
表９は、種々の急性骨髄性白血病細胞株に対するＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）コンジュゲート及び既知の抗体薬物コンジュゲートのマイロターグの活性を示す。表に示すように、ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）コンジュゲートは、細胞株のうちのいくつかにおいてより良好な活性を有した。
Figure 2023519974000159
表１０は、種々の多発性骨髄腫細胞株に対する３つの抗ＣＤ３８ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは細胞株のすべてにおいて良好な活性を有した。
Figure 2023519974000160
表１１は、種々の多発性骨髄腫細胞株に対する抗ＣＤ１３８ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは細胞株のすべてにおいて良好な活性を有した。
Figure 2023519974000161
表１２は、種々の多発性骨髄腫細胞株に対する抗ＢＣＭＡ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは細胞株のすべてにおいて良好な活性を有した。
Figure 2023519974000162
表１３は、種々のがん細胞株に対する抗Ｔｒｏｐ－２ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは細胞株のすべてにおいて良好な活性を有した。
Figure 2023519974000163
表１４は、２つのがん細胞株に対する抗ＦＧＦＲ４ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは、両方の細胞株において良好な活性を有し、ＵＳ－１７８４抗体及びコンジュゲートされていないｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独よりも良好な活性を有した。
Figure 2023519974000164
表１５は、２つの滑膜肉腫細胞株に対する抗ＥＧＦＲ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは、両方の細胞株において良好な活性を有し、セツキシマブ及びコンジュゲートされていないｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒ単独よりも良好な活性を有した。
Figure 2023519974000165
表１６は、２つのがん細胞株に対する抗ＰＤＧＦ－Ｒ α ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは両方の細胞株において良好な活性を有した。
Figure 2023519974000166
表１７は、横紋筋肉腫細胞株に対する抗ＴＥＭ１／ＣＤ２４８ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートの活性を示す。表に示すように、コンジュゲートは細胞株に対して良好な活性を有した。
Figure 2023519974000167
実施例７：抗Ｈｅｒ２抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートによる乳癌の治療
トラツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート及びペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲートを、免疫不全マウス（Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）、ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において試験した。１ｍｍ３のＢＴ４７４ヒト乳癌断片を、マウスの右脇腹に皮下移植した。腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の平均サイズに達したら、マウスに、抗Ｈｅｒ２抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート、非標的化ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート、及びビヒクル対照を投薬した。
トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート、リツキシマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート、及びペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲートのストック溶液をビヒクルで希釈して、各動物の体重に調整した１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積で５ｍｇ／ｋｇを提供する（マウス２０ｇ当たり０．２ｍＬ）、０．５ｍｇ／ｍＬの投薬溶液を得た。
マウスを、次のように４つの治療群（Ｎ＝８／群）に分けた：１）ビヒクル、２）トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、３）リツキシマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、４）ペルツズマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲート（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）。すべての試験物品を、体重（０．２００ｍＬ／マウス２０ｇ）に調整した体積で、単回投与（ｑｄ×１）として静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。
腫瘍を、週２回キャリパーを使用して測定し、各動物を、その腫瘍がエンドポイント体積（１０００ｍｍ３）に達したとき、または試験の最終日（６０日目）のいずれか早い日に、安楽死させた。ＭＴＶ（ｎ）は、腫瘍がエンドポイント体積を達成していない残りの動物の数（ｎ）における試験の最終日の腫瘍体積の中央値として定義した。
図２０に示すように、ペルツズマブ及びリツキシマブコンジュゲートにより、ビヒクル及び細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのリツキシマブ－化合物（Ｉａ）と比較して経時的な腫瘍成長の遅延が得られた。
実施例８：抗ＣＤ２０抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートによる非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療
リツキシマブ－化合物（Ｉａ）コンジュゲートを、免疫不全マウス（Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤ（登録商標）、ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において試験した。１×１０７のＤａｕｄｉ ＢｕｒｋｉｔｔのＢ細胞リンパ腫細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－２１３（商標））をマウスの右脇腹（０．１ｍＬの細胞懸濁液）に皮下注射した。腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の平均サイズに達したとき、マウスに、抗ＣＤ２０抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート、非標的化ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート、及びビヒクル対照を投薬し開始した。
トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）及びリツキシマブ－化合物（Ｉａ）のストック溶液をビヒクルで希釈して、各動物の体重に調整した１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積で５及び１ｍｇ／ｋｇを提供する（マウス２０ｇ当たり０．２ｍＬ）、０．５ｍｇ／ｍＬ及び０．１ｍｇ／ｍＬの投薬溶液を得た。
マウスを、次のように４つの治療群（Ｎ＝８／群）に分けた：１）ビヒクル、２）トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、３）リツキシマブ－化合物（Ｉａ）（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、４）ペルツズマブ－化合物（Ｉａ）（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）。すべての試験物品を、体重（０．２００ｍＬ／マウス２０ｇ）に調整した体積で、単回投与（ｑｄ×１）として静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。
腫瘍を、週２回キャリパーを使用して測定し、各動物を、その腫瘍がエンドポイント体積（１５００ｍｍ３）に達したとき、または試験の最終日（４５日目）のいずれか早い日に、安楽死させた。ＭＴＶ（ｎ）は、腫瘍がエンドポイント体積を達成していない残りの動物の数（ｎ）における試験の最終日の腫瘍体積の中央値として定義した。
図２１に示すように、５ｍｇ／ｋｇ用量のリツキシマブコンジュゲートにより、１ｍｇ／ｋｇ用量、ビヒクル、及び細胞結合していない対照ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートのトラスツズマブ－化合物（Ｉａ）と比較して経時的な腫瘍成長の遅延が得られた。
実施例９．抗ＣＤ３３抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートによる急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療
ＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）を無胸腺ヌードマウス（Ｃｒｌ：ＮＵ（ＮＣｒ）－Ｆｏｘｎｌｎｕ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において試験した。１×１０７のＨＬ－６０急性前骨髄球性白血病細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－２４０（商標））をマウスの右脇腹に皮下注射した（０．１ｍＬの細胞懸濁液）。腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の平均サイズに達したら、マウスに、抗ＣＤ３３抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート、非標的化ｎｅｏｄｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート、及びビヒクル対照を投薬した。
トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）及びＯＲ０００２１３－化合物（Ｉａ）のストック溶液をビヒクルで希釈して、各動物の体重に調整した１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積で５及び１ｍｇ／ｋｇを提供する（マウス２０ｇ当たり０．２ｍＬ）、０．５ｍｇ／ｍＬ及び０．１ｍｇ／ｍＬの投薬溶液を得た。
マウスを、次のように４つの治療群（Ｎ＝８／群）に分けた：１）ビヒクル、２）トラスツズマブ－化合物（Ｉａ）（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、３）リツキシマブ－化合物（Ｉａ）（１ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）、４）ペルツズマブ－化合物（Ｉａ）（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）。すべての試験物品を、体重（０．２００ｍＬ／マウス２０ｇ）に調整した体積で、単回投与（ｑｄ×１）として静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。
腫瘍を、週２回キャリパーを使用して測定し、各動物を、その腫瘍がエンドポイント体積（２，０００ｍｍ３）に達したとき、または試験の最終日（４５日目）のいずれか早い日に、安楽死させた。ＭＴＶ（ｎ）は、腫瘍がエンドポイント体積を達成していない残りの動物の数（ｎ）における試験の最終日の腫瘍体積の中央値として定義した。
図２２に示すように、すべてのｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートにより、ビヒクルと比較して経時的な腫瘍成長の遅延が得られた。
実施例１０．抗ＣＤ３８抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートによる多発性骨髄腫の治療
ＨｕＡＴ １３／５－化合物（Ｉａ）を、ＣＢ．１７ ＳＣＩＤマウス（ＣＢ１７／Ｉｃｒ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＩｃｒｌｃｏＣｒｌ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）において試験した。５０％マトリゲル中の１×１０７個のＮＣＩ－Ｈ９２９骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－９０６８（商標））を、マウスの腋窩部位に皮下注射した（０．１ｍＬの細胞懸濁液）。腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の平均サイズに達したら、マウスに、抗ＣＤ３８抗体－ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲート及びビヒクル対照を投薬した。
ＨｕＡＴ１３／５－化合物（Ｉａ）のストック溶液をビヒクルで希釈して、各動物の体重に調整した１０ｍＬ／ｋｇの投薬体積で５ｍｇ／ｋｇを提供する（マウス２０ｇ当たり０．２ｍＬ）、０．５ｍｇ／ｍＬの投薬溶液を得た。
マウスを、次のように２つの治療群（Ｎ＝１０／群）に分けた：１）ビヒクル、２）ＨｕＡＴ１３／５－化合物（Ｉａ）（５ｍｇ／ｋｇ、ｉｖ、ｑｄ×１）。すべての試験物品を、体重（０．２００ｍＬ／マウス２０ｇ）に調整した体積で、単回投与（ｑｄ×１）として静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。
腫瘍を、週２回キャリパーを使用して測定し、各動物を、その腫瘍がエンドポイント体積（２，０００ｍｍ３）に達したとき、または試験の最終日（４５日目）のいずれか早い日に、安楽死させた。ＭＴＶ（ｎ）は、腫瘍がエンドポイント体積を達成していない残りの動物の数（ｎ）における試験の最終日の腫瘍体積の中央値として定義した。
図２５に示すように、５ｍｇ／ｋｇ用量のＨｕＡＴ１３／５ ｎｅｏＤｅｇｒａｄｅｒコンジュゲートにより、ビヒクルと比較して経時的な腫瘍成長の遅延が得られた。
概要の節及び要約の節ではなく発明の詳細な説明の節が、特許請求の範囲を解釈するために使用されることが意図されることを理解されたい。概要及び要約の節は、発明者（複数可）によって企図される本発明の１つ以上の例示的な態様を示し得るが、すべてを示すものではなく、よって、決して本開示及び添付の特許請求の範囲を限定することは意図しない。
本開示は、指定された機能及びその関係性の実装を例解する機能的ビルディングブロックを用いて、上記で説明されている。これらの機能ビルディングブロックの境界線は、記述上の便宜のためにここに恣意的に定義されたものである。その特定の機能の実現及び関係が適切に遂行される限りにおいて、別の境界線が定義され得る。
特定の態様の前述の説明は、本開示の一般的性質を完全に明らかにしたものであるので、当業者の技能範囲内の知識を適用することにより、過度の実験を必要とせず、本開示の一般的概念から逸脱することなく、かかる特定の態様を種々の用途に容易に修正及び／または適合することができる。したがって、かかる適合及び修正は、本明細書に提示されている教示及び指導に基づき、開示される態様の等価物の範囲及び意味の内にあるように意図される。本明細書の語法または用語法は、教示及び指導に鑑み、当業者により理解されるべきものであるように、ここでの語法または用語法は、説明目的であり、かつ制限する目的ではないことを理解されたい。
本開示の幅及び範囲は、上記の例示的な態様のいずれによっても限定されるべきではないが、以下の特許請求の範囲及びそれらの等価物に従ってのみ定義されるべきである。

Claims (94)

  1. 式（Ｉ）のコンジュゲート
    Figure 2023519974000168
     またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
    ａが、１～１０の整数であり、
    Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
    Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
    Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
    Ｘが、－ＮＲ２－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
    Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｒ２）Ｖであり、
    ｖが、１または２であり、
    各Ｒ２が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
    ｎが、１～６の整数であり、
    ｍが、２～６の整数であり、
    ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、
    但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
    Ｌが、切断可能なリンカーまたは切断可能でないリンカーであり、
    Ｂｍが、タンパク質に特異的に結合することができる結合部分である、前記コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  2. 前記結合部分が、抗体、抗体断片、または抗体結合断片である、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. ａが、２～８の整数である、請求項１に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  4. Ｌが、切断可能でないリンカーである、請求項１～３のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  5. Ｌが、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000169
     式中、
    ｐが、１～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000170
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000171
     が、前記結合部分への結合点である、請求項４に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  6. Ｌが、
    Figure 2023519974000172
     である、請求項５に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  7. ｐが５である、請求項６に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  8. Ｌが、切断可能なリンカーである、請求項１～３のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  9. 前記切断可能なリンカーが、プロテアーゼにより切断可能である、請求項８に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  10. Ｌが、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000173
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、各々独立して、存在しないか、またはＬ－もしくはＤ－配位にある天然のアミノ酸残基であり、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とし、
    Figure 2023519974000174
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000175
     が、前記結合部分への結合点である、請求項８もしくは９のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  11. Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、独立して、存在しないか、またはＬ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、及びグリシンからなる群から選択され、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とする、請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  12. Ｚ１が、存在しないか、またはグリシンであり、
    Ｚ２が、存在しないか、またはＬ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アラニンＤ－アラニン、及びグリシンからなる群から選択され、
    Ｚ３が、Ｌ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－アラニンＤ－アラニンＬ－フェニルアラニンＤ－フェニルアラニン、及びグリシンからなる群から選択され、
    Ｚ４が、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択される、請求項１１に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  13. Ｌが、
    Figure 2023519974000176
     である、請求項１０に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  14. ｑが５である、請求項１３に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  15. Ｌが生体還元性リンカーである、請求項８に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  16. Ｌが、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000177
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ’”が、各々独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６）２ＮＣ１－Ｃ６アルキル、及びＣ１－Ｃ６アルキルから選択されるか、または２つのジェミナルＲ基が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロブチルもしくはシクロプロピル環を形成することができ、
    Figure 2023519974000178
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000179
     が、前記結合部分への結合点である、請求項８または１５に記載のコンジュゲート。
  17. Ｌが、酸切断可能なリンカーである、請求項８に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  18. Ｌが、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000180
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000181
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000182
     が、前記結合部分への結合点である、請求項８もしくは１７に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  19. Ｌが、クリック－トゥ－リリースリンカーである、請求項８に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  20. Ｌが、以下から選択され、
    Figure 2023519974000183
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000184
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000185
     が、前記結合部分への結合点である、請求項８もしくは１９に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  21. Ｌが、ピロホスファターゼ切断可能なリンカーである、請求項８に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  22. Ｌが、以下であり、
    Figure 2023519974000186
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000187
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000188
     が、前記結合部分への結合点である、請求項２１に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  23. Ｌが、ベータグルクロニダーゼ切断可能なリンカーである、請求項８に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  24. Ｌが、以下から選択され、
    Figure 2023519974000189
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    －－－が、存在しないか、または結合であり、
    Figure 2023519974000190
     が、Ｘへの結合点であり、
    Figure 2023519974000191
     が、前記結合部分への結合点である、請求項８もしくは２３に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  25. Ｂｍが、抗体またはその抗原結合部分である、請求項１～２４のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  26. 前記結合部分が結合するタンパク質が、表面抗原である、請求項２５に記載のコンジュゲート。
  27. 前記表面抗原が、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１成長因子、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐｌＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、ＸＡＧＥ１、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２６に記載のコンジュゲート。
  28. 前記表面抗原が、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ４、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＲＯＰ－２、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２５に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  29. 前記抗体が、リツキシマブ、トラツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オンツキシマブ、イサツキシマブ、サシツズマブ、Ｕ３－１７８４、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、バランタマブ、インダツキシマブ、セツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ１３／５抗体、アレムツズマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、オレゴボマブ、及びベルツズマブからなる群から選択される、請求項２５に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  30. 前記抗体が、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、リンツズマブ、またはゲムツズマブである、請求項２９に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  31. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｖが、１であり、
    ｍ及びｎが、２であり、
    Ｒ２が、メチルである、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  32. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｖが、２であり、
    ｍ及びｎが、２であり、
    各Ｒ２が、メチルである、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  33. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｏ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｎが、２である、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  34. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｓ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｎが、２である、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  35. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、水素であり、
    Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
    Ｒ２が、メチルである、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  36. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
    Ｒ２が、水素である、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  37. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、水素であり、
    Ｘが、－Ｃ（ＣＨ３）＝である、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  38. Ａが、Ｃ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、水素であり、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｎが、１であり、
    ｍが、２であり、
    Ｒ２が、メチルである、請求項１～３０のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  39. 式（ＩＩ）の化合物
    Figure 2023519974000192
     またはその薬学的に許容される塩であって、
    Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
    Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
    Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
    Ｒ２が、－Ｃ（Ｏ）Ｒ３、－Ｎ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＳＨ、－（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ４）２、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＯＨ、－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＳＨ、及び－（ＣＨ２）ｎＱ’（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ４）２から選択され、式中、
    Ｒ３が、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
    各Ｒ４が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
    Ｑ’が、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ４であり、
    ｎが、１～６であり、
    ｍが、２～５であり、
    但し、Ｒ２が、ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎＮＨ２、または－（ＣＨ２）ｎＯＨである場合には、Ｒ１がハロであることを条件とする、前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
  40. 式（ＩＩＩ）の化合物
    Figure 2023519974000193
     またはその薬学的に許容される塩。
  41. 式（ＩＶ）の化合物
    Figure 2023519974000194
     またはその薬学的に許容される塩。
  42. 式（Ｖ）のコンジュゲート
    Figure 2023519974000195
     またはその薬学的に許容される塩であって、Ｂｍが、タンパク質に特異的に結合する結合部分である、前記コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  43. Ｂｍが、抗体またはその抗原結合部分である、請求項４２に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  44. 前記結合部分が特異的に結合するタンパク質が、表面抗原である、請求項４３に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  45. 前記表面抗原が、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１成長因子、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐｌＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、ＸＡＧＥ１、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４４に記載のコンジュゲート。
  46. 前記表面抗原が、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＲＯＰ－２、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４５に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  47. 前記抗体が、リツキシマブ、トラツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オンツキシマブ、イサツキシマブ、サシツズマブ、Ｕ３－１７８４、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、バランタマブ、インダツキシマブ、セツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ１３／５抗体、アレムツズマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、オレゴボマブ、またはベルツズマブを含む、請求項４３に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  48. 前記抗体が、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、リンツズマブ、またはゲムツズマブである、請求項４７に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
  49. 請求項１～４６のいずれか１項に記載のコンジュゲートもしくは化合物またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
  50. がんの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に、薬学的に許容される量の請求項１～４８のいずれか１項に記載のコンジュゲート、化合物、もしくは組成物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法。
  51. 前記がんが、乳癌、胃癌、リンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、頭頸部癌、扁平上皮癌、及び／または肝細胞癌である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記対象に、薬学的に許容される量の追加の薬剤を、請求項１～４６のいずれか１項に記載のコンジュゲートもしくは化合物またはその薬学的に許容される塩の前に、後に、またはそれと同時に、投与することをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
  53. 前記追加の薬剤が細胞毒性剤または免疫応答調節剤である、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記免疫応答調節剤がチェックポイント阻害剤である、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、及び／またはＬＡＧ－３阻害剤を含む、請求項５４に記載の方法。
  56. 請求項１に記載のコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、前記プロセスが、結合部分を、式（Ｉ－１）の化合物
    Figure 2023519974000196
     またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
    ａが、１～１０の整数であり、
    Ａが、フェニルまたはＣ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
    Ｒ１が、独立して、水素及びハロから選択され、
    Ｕが、ＮＨ及びＣＦ２から選択され、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）Ｖ－、＝Ｃ（ＣＨ３）－、－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－、及び－Ｑ（ＣＨ２）ｍＱ’（ＣＨ２）ｎ－から選択され、式中、
    ｖが、１または２であり、
    Ｑ及びＱ’が、各々独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ２であり、
    各Ｒ２が、独立して、水素またはＣ１－Ｃ６アルキルであり、
    ｎが、１～６の整数であり、
    ｍが、２～６の整数であり、
    ここで、各基の左側がＬに結合し、右側がＡに結合し、
    但し、ＸがＮＨまたは－Ｑ－（ＣＨ２）ｎ－であるときに、Ｒ１がハロであることを条件とし、
    Ｌ’が、前記結合部分にコンジュゲートする切断可能なまたは切断可能でないリンカーの前駆体である、前記方法。
  57. 前記結合部分を、前記式（Ｉ－１）の化合物と反応させる前に、還元することをさらに含む、請求項５６に記載の方法。
  58. ａが、２～８の整数である、請求項５６または５７に記載の方法。
  59. Ｌ’が、切断可能でないリンカーの前駆体である、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. Ｌ’が、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000197
     式中、
    ｐが、１～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000198
     が、Ｘへの結合点である、請求項５９に記載の方法。
  61. Ｌ’が、
    Figure 2023519974000199
     である、請求項６０に記載の方法。
  62. ｐが、５である、請求項６１に記載の方法。
  63. Ｌ’が、切断可能なリンカーの前駆体である、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記切断可能なリンカーの前駆体が、プロテアーゼにより切断可能である、請求項６３に記載の方法。
  65. Ｌ’が、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000200
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、各々独立して、存在しないか、またはＬ－もしくはＤ－配位にある天然のアミノ酸残基であり、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とし、
    Figure 2023519974000201
     が、Ｘへの結合点である、請求項６３または６４に記載の方法。
  66. Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４が、独立して、存在しないか、またはＬ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、及びグリシンからなる群から選択され、但し、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、及びＺ４のうちの少なくとも２つが、アミノ酸残基であることを条件とする、請求項６５に記載の方法。
  67. Ｚ１が、存在しないか、またはグリシンであり、
    Ｚ２が、存在しないか、またはＬ－グルタミン、Ｄ－グルタミン、Ｌ－グルタミン酸、Ｄ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、Ｄ－アスパラギン酸、Ｌ－アラニンＤ－アラニン、及びグリシンからなる群から選択され、
    Ｚ３が、Ｌ－バリン、Ｄ－バリン、Ｌ－アラニンＤ－アラニンＬ－フェニルアラニンＤ－フェニルアラニン、及びグリシンからなる群から選択され、
    Ｚ４が、Ｌ－アラニン、Ｄ－アラニン、Ｌ－シトルリン、Ｄ－シトルリン、Ｌ－アスパラギン、Ｄ－アスパラギン、Ｌ－リシン、Ｄ－リシン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｄ－フェニルアラニン、及びグリシンから選択される、請求項６６に記載の方法。
  68. Ｌ’が、
    Figure 2023519974000202
     である、請求項６５に記載の方法。
  69. ｑが、５である、請求項６８に記載の方法。
  70. Ｌ’が、生体還元性リンカーの前駆体である、請求項６３に記載の方法。
  71. Ｌ’が、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000203
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ’”が、各々独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６）２ＮＣ１－Ｃ６アルキル、及びＣ１－Ｃ６アルキルから選択されるか、または２つのジェミナルＲ基が、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロブチルもしくはシクロプロピル環を形成することができ、
    Figure 2023519974000204
     が、Ｘへの結合点である、請求項６３または７０に記載の方法。
  72. Ｌ’が、酸切断可能なリンカーの前駆体である、請求項６３に記載の方法。
  73. Ｌ’が、以下からなる群から選択され、
    Figure 2023519974000205
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000206
     が、Ｘへの結合点である、請求項６３または７２に記載の方法。
  74. Ｌ’が、クリック－トゥ－リリースリンカーの前駆体である、請求項６３に記載の方法。
  75. Ｌ’が、以下から選択され、
    Figure 2023519974000207
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000208
     が、Ｘへの結合点である、請求項６３または７４に記載の方法。
  76. Ｌ’が、ピロホスファターゼ切断可能なリンカーの前駆体である、請求項６３に記載の方法。
  77. Ｌ’が、以下であり、
    Figure 2023519974000209
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    Figure 2023519974000210
     が、Ｘへの結合点である、請求項７６に記載の方法。
  78. Ｌ’が、ベータ－グルコロニダーゼ切断可能なリンカーの前駆体である、請求項６３に記載の方法。
  79. Ｌ’が、以下から選択され、
    Figure 2023519974000211
     式中、
    ｑが、２～１０の整数であり、
    －－－が、存在しないか、または結合であり、
    Figure 2023519974000212
     が、Ｘへの結合点である、請求項６３または７８に記載の方法。
  80. 前記式（Ｉ－１）の化合物を、抗体またはその抗原結合部分を含む結合部分と反応させる、請求項５６～７９のいずれか１項に記載の方法。
  81. 前記抗体またはその抗原結合部分が、表面抗原に結合する、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記表面抗原が、５Ｔ４、ＡＣＥ、ＡＤＲＢ３、ＡＫＡＰ－４、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、ＡＯＣ３、ＡＰＰ、Ａｘｉｎ１、ＡＸＬ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＣＬ２、ＢＣＭＡ、ｂｃｒ－ａｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＢＳＴ２、Ｃ２４２、Ｃ４．４ａ、ＣＡ １２５、ＣＡ６、ＣＡ９、ＣＡＩＸ、ＣＣＬ１１、ＣＣＲ５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１５、ＣＤ１５－３、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９－９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、Ｄ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９０、ＣＤ９７、ＣＤ１２５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ３２６、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、クランピング因子、ｃＫｉｔ、クローディン３、クローディン１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＣＬＬ－１、ｃｌｌ３、ｃ－ＭＥＴ、クリプト１成長因子、ＣＳ１、ＣＴＬＡ－４、ＣＸＣＲ２、ＣＸＯＲＦ６１、サイクリンＢ１、ＣＹＰ１Ｂ１、カドヘリン－３、カドヘリン－６、ＤＬＬ３、Ｅ７、ＥＤＮＲＢ、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＬＦ２Ｍ、ＥＭＲ２、ＥＮＰＰ３、ＥＰＣ ＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、エフリンＢ２、ＥＰＨＢ４、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ３、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＢＲ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、ＦＡＰ、ＦＣＡＲ、ＦＣＲＬ５、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＴ３、葉酸受容体アルファ、葉酸受容体ベータ、ＦＯＬＲ１、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＤ３、グロボＨ、ＧＭ３、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ｇｐｌＯＯ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２０、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＡＶＣＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＭＩ．２４、ＨＭＷＭＡＡ、ＨＰＶ Ｅ６、ｈＴＥＲＴ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＣＡＭ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＩＧＬＬ１、ＩＬ－２受容体、ＩＬ－４受容体、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－１ ＩＲａ、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＩＬ－２２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ｉインターフェロン受容体、インテグリン（α４、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、α１β４、α４β１、α４β７、α５β１、α６β４、αＩＩｂβ３インテグリンを含む）、インテグリンアルファＶ、腸カルボキシルエステラーゼ、ＫＩＴ、ＬＡＧＥ－１ａ、ＬＡＩＲ１、ＬＡＭＰ－１、ＬＣＫ、レグマイン、ルイスＹ、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＶ－１、ＬＭＰ２、ＬＲＲＣ１５、ＬＹ６Ｅ、ＬＹ６Ｋ、ＬＹ７５、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ＭＡＧＥ Ａ１、メランＡ／ＭＡＲＴ１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、ＭＳＬＮ、ムチン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＭＹＣＮ、ミオスタチン、ＮＡ１７、ＮａＰｉ２ｂ、ＮＣＡ－９０、ＮＣＡＭ、ネクチン－４、ＮＧＦ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｏ－アセチル－ＧＤ２、ＯＲ５１Ｅ２、ＯＹ－ＴＥＳ１、ｐ５３、ｐ５３変異体、ＰＡＮＸ３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ｐ－ＣＡＤ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ホスファチジルセリン、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＬＡＣ１、ポリシアル酸、プロスターゼ、前立腺癌細胞、プロステイン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、狂犬病、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＲＳＳ２１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＡＧＥ－１、ＲＡＮＫＬ、Ｒａｓ変異体、呼吸器合胞体ウイルス、Ｒｈ因子、ＲｈｏＣ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＵ１、ＲＵ２、肉腫転座切断点、ＳＡＲＴ３、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ４４Ａ４、ｓＬｅ、ＳＬＩＴＲＫ６、精子タンパク質１７、スフィンゴシン－１－リン酸、ＳＳＥＡ－４、ＳＳＸ２、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ７２、ＴＡＲＰ、ＴＣＲβ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、テネイシンＣ、ＴＦ、ＴＧＦ－１、ＴＧＦ－β２、ＴＮＦ－α、ＴＧＳ５、Ｔｉｅ ２、ＴＩＭ－１、Ｔｎ Ａｇ、ＴＲＡＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＯＰ－２、ＴＲＰ－２、ＴＲＰＶ１、ＴＳＨＲ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、チロシナーゼ、ＵＰＫ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、ＷＴ１、ＸＡＧＥ１、またはそれらの組み合わせを含む、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記表面抗原が、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ４、ＧＤ２、ＰＤＧＦＲ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、Ｔｒｏｐ－２、またはそれらの組み合わせを含む、請求項８１に記載の方法。
  84. 前記抗体が、リツキシマブ、トラツズマブ、ゲムツズマブ、ペルツズマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オンツキシマブ、イサツキシマブ、サシツズマブ、Ｕ３－１７８４、ダラツムマブ、ＳＴＩ－６１２９、リンツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、バランタマブ、インダツキシマブ、セツキシマブ、ジヌツキシマブ、抗ＣＤ３８ Ａ２抗体、ＨｕＡＴ１３／５抗体、アレムツズマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、ベバシズマブ、パニツムマブ、トレメリムマブ、チシリムマブ、カツマキソマブ、オレゴボマブ、またはベルツズマブを含む、請求項８０に記載のコンジュゲート。
  85. 前記抗体が、リツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ｈｕＭｙ９－６、ＯＲ０００２１３、リンツズマブ、またはゲムツズマブである、請求項８４に記載の方法。
  86. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｖが、１であり、
    ｍ及びｎが、２であり、
    Ｒ２が、メチルである、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  87. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）ｖ（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｖが、２であり、
    ｍ及びｎが、２であり、
    各Ｒ２が、メチルである、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  88. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｏ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｎが、２である、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  89. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－Ｓ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｎが、２である、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  90. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、水素であり、
    Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
    Ｒ２が、メチルである、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  91. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、ハロであり、
    Ｘが、－－ＮＲ２－であり、式中、
    Ｒ２が、水素である、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  92. Ａが、フェニルであり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、水素であり、
    Ｘが、－Ｃ（ＣＨ３）＝である、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  93. Ａが、Ｃ４－Ｃ１０シクロアルキル環であり、
    Ｕが、ＮＨであり、
    Ｒ１が、水素であり、
    Ｘが、－Ｎ（Ｒ２）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｎ－であり、式中、
    ｎが、１であり、
    ｍが、２であり、
    Ｒ２が、メチルである、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
  94. 前記式（Ｉ－１）の化合物が、
    Figure 2023519974000213
     である、請求項５６～８５のいずれか１項に記載の方法。
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