KR20230051120A - 신규분해약물 접합체 - Google Patents

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KR20230051120A
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KR
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conjugate
pharmaceutically acceptable
antibody
acceptable salt
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KR1020227037931A
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네이선 피쉬킨
피터 유 박
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오름테라퓨틱 주식회사
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Abstract

본 개시내용은 신규분해약물 및 결합 모이어티에 접합된 신규분해약물을 제공한다. 또한, 접합체를 포함하는 조성물이 제공된다. 화합물 및 조성물은 치료를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태, 예를 들어 암을 치료하는데 유용하다.

Description

신규분해약물 접합체
본 개시내용은 신규분해약물(neoDegrader)이 결합 모이어티에 접합된 신규분해약물 접합체를 제공한다. 또한, 접합체를 포함하는 조성물이 제공된다. 접합체 및 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는데 유용하다.
단백질 분해는 면역조절 이미드 약물의 효과에 의해 치료 전략으로 검증되었다. 이들 화합물은 세레블론(CRBN)에 결합하고 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가제에 의해 매개되는 기질 단백질의 모집 및 유비퀴틴화를 촉진하는 능력이 있다. 면역조절 이미드는 리가아제 및 신생기질 사이의 단백질 상호작용을 재프로그래밍하는 소수성 패치로서 결합 계면을 채우는 "분자 접착제"로 작용하는 것으로 생각된다.
암에 대한 신규 치료제로서 이들 화합물에 대한 흥분에도 불구하고, 지금까지는 다발성 골수종 및 골수이형성 증후군(MDS)과 같은 혈액 악성 종양에 사용하는 것으로 제한되어 왔다. 다른 종양단백질을 분해하여 기능할 수 있는 화합물 라이브러리를 확장하는 것은 '약제화할 수 없는(undruggable)'로 간주되어 온 약물 개발의 활발한 영역이다. 따라서 이러한 대체 종양단백질을 표적으로 하고 다양한 암을 치료할 수 있는 새로운 화합물이 계속해서 필요하다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00001
여기서:
a는 1 내지 10의 정수이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
X는 -NR2-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-로부터 선택되고; 여기서,
Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 N(R2)v이고;
v는 1 또는 2이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n은 1 내지 6의 정수이고;
m은 2 내지 6의 정수이고;
여기서, 각 기의 왼쪽은 L에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고;
L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고; 그리고
Bm은 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티이다.
일부 측면에서, 결합 모이어티는 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 a가 2 내지 8의 정수인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 절단불가능한 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00002
여기서:
p는 1 내지 10의 정수이고;
Figure pct00003
는 X에 대한 부착점이고; 그리고
Figure pct00004
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, L은
Figure pct00005
이다.
일부 측면에서, p는 5이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 절단가능한 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, 절단가능한 링커는 프로테아제에 의해 절단가능하다. 일부 측면에서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00006
Figure pct00007
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 L- 또는 D-배열에서 자연-발생 아미노산 잔기이며, 단 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이고;
Figure pct00008
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00009
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 존재하지 않거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-라이신, D-라이신, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이다.
일부 측면에서, Z1은 존재하지 않거나 글리신이고; Z2는 존재하지 않거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-라이신, D-라이신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 측면에서, L은
Figure pct00010
이다.
일부 측면에서, q는 5이다
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 생체환원성 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00011
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
R, R', R'', 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 제미날 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있으며;
Figure pct00012
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00013
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 산 절단가능한 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00014
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00015
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00016
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 클릭-투-릴리스(click-to-release) 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00017
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00018
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00019
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 피로포스파타제 절단가능한 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, L은 하기식이다:
Figure pct00020
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00021
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00022
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 L이 베타-글루코로니다제 절단가능한 링커인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, L은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00023
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
----는 부재 또는 결합이고;
Figure pct00024
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00025
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 Bm이 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 측면에서, 결합 모이어티가 결합하는 단백질은 표면 항원이다.
일부 측면에서, 표면 항원은 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자(clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 키데린(Cadherin)-3, 키데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-이세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR, 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, XAGE1, 또는 이들의 조합을 포함한다.
특정 측면에서, 표면 항원은 HER2, CD20, CD38, CD33, BCMA, CD138, EGFR, FGFR4, GD2, PDGFR, TEM1/CD248, TROP-2, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, Bm은 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 온툭시맙, 이사툭시맙, 사시투주맙, U3-1784, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, 발란타맙, 인다툭시맙, 세툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 항체, 알렘투주맙, 이브리투모맙, 토시투모맙, 베바시주맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 오레고보맙 및 벨투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체이다. 일부 측면에서, 항체는 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, OR000213(huMy9-6 IgG4 S228P), 린투주맙 또는 젬투주맙이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
v는 1이고;
m 및 n은 2이고; 그리고
R2는 메틸이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
v는 2이고;
m 및 n은 2이고; 그리고
각각의 R2는 메틸이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -O(CH2)n-이고; 여기서:
n은 2이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -S(CH2)n-이고; 여기서:
n은 2이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고; 그리고
X는 -NR2-이고; 여기서:
R2는 메틸이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -NR2-이고; 여기서:
R2는 메틸이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고; 그리고
X는 -C(CH3)=이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고; 그리고
X는 -N(R2)(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
n은 1이고;
m은 2이고; 그리고
R2는 메틸이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00026
여기서:
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고; 그리고
R2는 -C(O)R3, -N(R4)2, -(CH2)nOH, -(CH2)nSH, -(CH2)nN(R4)2, -(CH2)nQ'(CH2)mOH, -(CH2)nQ'(CH2)mSH, 및 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2로부터 선택되고; 여기서,
R3은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
Q'는 O, S, 또는 NR4이고;
n은 1-6이고; 그리고
m은 2-5이고;
단, R2가 NH2, -(CH2)nNH2, 또는 -(CH2)nOH인 경우, R1은 할로이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00027
.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00028
.
특정 측면에서, 본 개시내용은 하기의 화학식 (V)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00029
여기서, Bm은 단백질에 특이적으로 결합하는 결합 모이어티이다. 일부 측면에서, Bm은 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다. 일부 측면에서, 결합 모이어티가 특이적으로 결합하는 단백질은 표면 항원이다.
일부 측면에서, 표면 항원은 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자(clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 카데린(Cadherin)-3, 카데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-아세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR , 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, XAGE1, 또는 이들의 조합을 포함한다.
특정 측면에서, 표면 항원은 HER2, CD20, CD38, CD33, BCMA, CD138, EGFR, FGFR4, GD2, PDGFR, TEM1/CD248, TROP-2, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, Bm은 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 온툭시맙, 이사툭시맙, 사시투주맙, U3-1784, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, 발란타맙, 인다툭시맙, 세툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 항체, 알렘투주맙, 이브리투모맙, 토시투모맙, 베바시주맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 오레고보맙 및 벨투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체이다. 일부 측면에서, 항체는 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, OR000213, 린투주맙 또는 젬투주맙을 포함하는 항체이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 선행 측면 중 어느 하나의 접합체 또는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 양의 임의의 선행 측면의 접합체, 화합물 또는 조성물, 이의 약제학적으로 허용되는 염을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 암은 유방암, 위암, 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 두경부암, 편평 세포 암종 및/또는 간세포 암종이다.
일부 측면에서, 상기 방법은 선행 측면 중 어느 하나의 접합체 또는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 투여 이전, 이후, 또는 이와 동시에 약제학적으로 허용되는 양의 추가 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 추가 제제는 세포독성제 또는 면역 반응 조절제이다. 일부 측면에서, 면역 반응 조절제는 관문 억제제이다. 일부 측면에서, 관문 억제제는 PD-1 억제제, PD-L1 억제제, CTLA-4 억제제, TIM3 억제제 및/또는 LAG-3 억제제를 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 결합 모이어티를 하기 화학식 (I-1)의 화합물또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 반응시키는 것을 포함하여, 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00030
여기서:
a는 1 내지 10의 정수이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고; 그리고
X는 -N(R2)v-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-로부터 선택되고; 여기서,
v는 1 또는 2이고;
Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 NR2이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n은 1 내지 6의 정수이고; 그리고
m은 2 내지 6의 정수이고;
여기서, 각 기의 왼쪽은 L'에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고; 그리고
L'는 결합 모이어티에 접합되는 절단가능한 또는 절단불가능한 링커 전구체이다.
일부 측면에서, 방법은 화학식 (I-1)의 화합물과 반응하기 전에 결합 모이어티를 환원시키는 것을 추가로 포함한다.
일부 측면에서, a는 2 내지 8의 정수이다.
일부 측면에서, L'는 절단불가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00031
여기서:
p는 1 내지 10의 정수이고; 그리고
Figure pct00032
는 X에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, L'는
Figure pct00033
이다.
일부 측면에서, p는 5이다.
특정 측면에서, L'는 절단가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, 절단가능한 링커 전구체는 프로테아제에 의해 절단가능하다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00034
Figure pct00035
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 L- 또는 D-배열에서 자연-발생 아미노산 잔기이며, 단 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이고;
Figure pct00036
는 X에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 존재하지 않거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-라이신, D-라이신, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이다.
일부 측면에서, Z1은 존재하지 않거나 글리신이고; Z2는 존재하지 않거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-라이신, D-라이신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, L'는
Figure pct00037
이다.
일부 측면에서, q는 5이다.
특정 측면에서, L'는 생체환원성 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00038
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
R, R', R'', 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 또는 두개의 제미날 R기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있고; 그리고
Figure pct00039
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'는 산 절단가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00040
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고; 그리고
Figure pct00041
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'는 클릭-투-릴리스 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00042
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고; 그리고
Figure pct00043
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'는 피로포스파타제 절단가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는
Figure pct00044
이고
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고; 그리고
Figure pct00045
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'는 베타-글루코로니다제 절단 가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00046
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
----는 부재 또는 결합이고; 그리고
Figure pct00047
는 X에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, 화학식 (I-1)의 화합물은 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 결합 모이어티와 반응한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 표면 항원에 결합한다.
일부 측면에서, 표면 항원은 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자(clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 키데린(Cadherin)-3, 키데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-이세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR , 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, XAGE1, 또는 이들의 조합을 포함한다.
특정 측면에서, 표면 항원은 HER2, CD20, CD38, CD33, BCMA, CD138, EGFR, FGFR4, GD2, PDGFR, TEM1/CD248, TROP-2, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, Bm은 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 온툭시맙, 이사툭시맙, 사시투주맙, U3-1784, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, 발란타맙, 인다툭시맙, 세툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 항체, 알렘투주맙, 이브리투모맙, 토시투모맙, 베바시주맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 오레고보맙 및 벨투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체이다. 일부 측면에서, 항체는 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, OR000213, 린투주맙 또는 젬투주맙을 포함하는 항체이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 화학식 (I-1)의 화합물로부터 화학식 (I)의 접합체를 제조하는 방법을 제공하며, 여기서:
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
v는 1이고;
m 및 n은 2이고; 그리고
R2는 메틸이다.
특정 측면에서;
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
v는 2이고;
m 및 n은 2이고; 그리고
각각의 R2는 메틸이다.
특정 측면에서;
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -O(CH2)n-이고; 여기서:
n은 2이다.
특정 측면에서;
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -S(CH2)n-이고; 여기서:
n은 2이다.
특정 측면에서;
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고; 그리고
X는 -NR2-이고; 여기서:
R2는 메틸이다.
특정 측면에서;
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 할로이고; 그리고
X는 -NR2-이고; 여기서:
R2는 수소이다.
특정 측면에서;
A는 페닐이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고; 그리고
X는 -C(CH3)=이다.
특정 측면에서;
A는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH이고;
R1은 수소이고; 그리고
X는 -N(R2)(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
n은 1이고;
m은 2이고; 그리고
R2는 메틸이다.
일부 측면에서, 화학식 (I-1)의 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00048
도 1은 BT-474 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(삼각형, 실선), 트라스투주맙 단독(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P1 단독(십자형), 및 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(원)로 처리했을 때 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다. L은 링커이다.
도 2는 BT-474 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(삼각형, 실선), 페르투주맙 단독(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P1 단독(십자형), 및 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(원)로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 3은 BT-474 암 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 트라스투주맙-L-P4(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ic))(삼각형, 실선), 트라스투주맙(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P4 단독(십자형) 및 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic))(원)로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 4는 BT-474 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 페르투주맙-L-P4(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ic))(삼각형, 실선), 페르투주맙(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P4 단독(십자형) 및 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic))(원)로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 5는 BT-474 세포주에 대한 다양한 약물:항체 비율(DAR)을 갖는 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물 (Ia)) DAR 1.6(상향 삼각형, 실선), 트라스투주맙-L-P3(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ib)) DAR 1.5(하향 삼각형, 실선), 트라스투주맙-L-P4(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ic)) DAR 1.6(원, 실선), 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물 (Id)) DAR 1.6(사각형, 실선), 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia) DAR 8(삼각형, 점선), 트라스투주맙-L-P4(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ic)) DAR 8(검은 원, 점선), ENHERTU®(다이아몬드, 점선) 및 트라스투주맙(원, 점선)로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 6은 BT-474 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia)) DAR 8(상향 삼각형, 실선), 페르투주맙- L-P4(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ic)) DAR 8(하향 삼각형, 실선) 및 ENHERTU®(다이아몬드, 점선)로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 7은 SK-BR-3 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(삼각형, 실선), 트라스투주맙(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P1 단독(원), 및 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(십자형)으로 처리된 경우 SK-BR-3 세포의 생존율(%)을 나타낸다. .
도 8은 SK-BR-3 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 로그 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(삼각형, 실선), 페르투주맙 a(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P1 단독(원) 및 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(십자형)으로 처리된 경우 SK-BR-3 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 9는 HL-60 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia))(삼각형), MYLOTARG®(다이아몬드) 및 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(원)으로 처리된 경우 HL-60 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 10은 HL-60 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타냅니다. Y축은 huMy9-6(IgG1)-L-P1(예를 들어, huMy9-6(IgG1)-화합물(Ia)) DAR 8(상향 검은 삼각형, 실선), huMy9-6(IgG1)-L-P1) (예를 들어, huMy9-6(IgG1)-화합물 (Id)) DAR 8 (하향 검은 삼각형, 실선), 린투주맙 IgG1-L-P1(예를 들어, 린투주맙 IgG1-화합물(la)) DAR 8(상향 열린 삼각형, 점선), 린투주맙 IgG1-L-P1(예를 들어, 린투주맙 IgG1-화합물(Id)) DAR 8(하향 열린 삼각형, 점선), OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia)) DAR 8(사각형), 및 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic))(원, 점선)으로 처리된 경우 HL-60 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 11은 HL60 세포주에 대한 다양한 약물:항체 비(DAR)를 갖는 화합물(Ia)의 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 huMy9-6 IgG1-L-P1(예를 들어, huMy9-6 IgG1-화합물(Ia)) DAR 1.9(상향 삼각형, 실선), huMy9-6 IgG1-L-P1(예를 들어, huMy9-6 IgG1-화합물(Ia)) DAR 3.9(하향 삼각형, 실선), huMy9-6 IgG1-L-P1(예를 들어, huMy9-6 IgG1-화합물(Ia)) DAR 5.5 (다이아몬드, 실선), huMy9-6 IgG1-L-P1(예를 들어, huMy9-6 IgG1-화합물(Ia)) DAR 8(사각형, 실선) 및 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic)) (원, 점선)로 처리된 경우 HL-60 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 12는 HL60 세포주에 대한 다양한 약물:항체 비(DAR)를 갖는 화합물(Ia)의 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia)) DAR 1.2(상향 삼각형, 실선), OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia)) DAR 1.8(하향 삼각형, 실선), OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia)) DAR 2.3(다이아몬드, 실선), OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia)) DAR 8(정사각형, 실선) 및 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic))(삼각형, 점선)로 처리된 경우 HL-60 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 13은 라모스(Ramos) 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타내고 Y축은 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic))(상향 삼각형, 실선), 리툭시맙-L-Pl(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(하향 삼각형, 실선), 리툭시맙(삼각형, 점선), 신규분해약물 P1 단독(십자형, 점선), 신규분해약물 P4 단독(별, 점선), 및 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(원, 점선)처리된 경우 라모스 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 14는 다우디(Daudi) 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타내고, Y축은 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(상향 삼각형, 실선), 리툭시맙(삼각형, 점선), 및 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물 (Ia))(원, 점선)로 처리된 경우 다우디 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 15는 라모스 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타내고 Y축은 리툭시맙-L-P4(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ic))(상향 삼각형, 실선), 리툭시맙-L-Pl(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(하향 삼각형, 실선) 및 신규분해약물 P1 단독으로 처리된 경우 라모스 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 16은 NCI-N87 암 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내를 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(삼각형, 실선), 트라스투주맙(삼각형, 점선), 카드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P4 단독(십자형), 및 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(원)로 처리된 경우 NCI-N87 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 17은 NCI-N87 암 세포주에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(삼각형, 실선), 페르투주맙(삼각형, 점선), 키드실라(다이아몬드), 신규분해약물 P1 단독(십자형), 및 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(원)로 처리된 경우 NCI-N87 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 18은 BT-474 세포주에 대한 인간 혈청과 함께 3일 인큐베이션 후 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y축은 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(인간 혈청)(상향 삼각형, 실선), 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(인간 혈청)(하향 삼각형, 실선), OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia))(인간 혈청)(원, 실선), 인간 혈청만(별), 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙 - 화합물(Ia))(상향 삼각형, 점선), 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(하향 삼각형, 점선), 및 OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia))(원, 점선))으로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 19는 BT-474 세포주에 대한 마우스 혈청과 함께 3일 인큐베이션 후 대표적인 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타낸다. Y 축은 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(마우스 혈청)(상향 삼각형, 실선), 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(마우스 혈청)(하향 삼각형, 실선), OR000213-L-P1(예: OR000213-화합물(Ia))(마우스 혈청)(원, 실선), 마우스 혈청만(별), 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(상향 삼각형, 점선), 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(하향 삼각형, 점선), 및 OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia))(원, 점선))으로 처리된 경우 BT-474 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 20은 마우스에서 BT-474(Her2+) 종양에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 생체내 활성을 도시한다. X축은 투여 후의 일을 나타낸다. Y축은 비히클(검은 원), 5 mg/kg 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(사각형), 5 mg/kg 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(삼각형) 및 5 mg/kg 페르투주맙-L-P1(예를 들어, 페르투주맙-화합물(Ia))(빈 원)를 투여한 후 종양 부피(mm3)를 나타낸다.
도 21은 다우디(CD20+) 종양에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 생체내 활성을 도시한다. X축은 투여 후의 일을 나타낸다. Y축은 비히클(검은 원), 5mg/kg 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(사각형), 1 mg/kg 리툭시맙-L-P1 (예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(삼각형), 및 5 mg/kg 리툭시맙-L-P1(예를 들어, 리툭시맙-화합물(Ia))(빈 원)투여 후 종양 부피(mm3)를 나타낸다.
도 22는 HL-60(CD33+) 종양에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 생체내 활성을 도시한다. X축은 투여 후의 일을 나타낸다. Y축은 비히클(검은 원), 5 mg/kg 트라스투주맙-L-P1(예를 들어, 트라스투주맙-화합물(Ia))(사각형), 1 mg/kg OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia))(삼각형) 및 5 mg/kg OR000213-L-P1(예를 들어, OR000213-화합물(Ia))(빈 원)을 투여한 후 종양 부피(mm3)를 나타낸다.
도 23은 HCC2157 세포주에 대한 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타내고, Y축은 사시투주맙-L-P1(예를 들어, 사시투주맙-화합물(Ia))(라인 1), 사시투주맙 단독(라인 2), 및 신규분해약물 Pl 단독(라인 3)으로 처리할 때 HCC2157 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 24는 LP1 세포주에 대한 신규분해약물 접합체의 시험관내 활성을 도시한다. X축은 log 항체 농도(M)를 나타내고, Y축은 HuAT 13/5-L-P1(예를 들어, HuAT 13/5-화합물(Ia))(라인 1), HuAT 13/5 단독(라인 2) 및 신규분해약물 P1 단독(라인 3)으로 처리할 때 LP1 세포의 생존율(%)을 나타낸다.
도 25는 NCI-H929(CD38+) 종양에 대한 대표적인 신규분해약물 접합체의 생체내 활성을 도시한다. X축은 투여 후의 일을 나타낸다. Y축은 비히클(원), 5 mg/kg HuAT13/5-L-P1(예를 들어, HuAT13/5-화합물(Ia))(사각형) 투여 후 종양 부피(mm3)를 나타낸다.
본 개시내용은 하기 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
Figure pct00049
여기서:
a는 1 내지 10의 정수이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
X는 -N(R2)V-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-로부터 선택되고; 여기서,
Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 N(R2)v이고;
v는 1 또는 2이고;
각각의 R2는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n은 1 내지 6의 정수이고;
m은 2 내지 6의 정수이고;
여기서, 각 기의 왼쪽은 L에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고;
L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고; 그리고
Bm은 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티이다. 일부 측면에서, 결합 모이어티는 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편이다.
본 개시내용은 또한 결합 모이어티에 융합된 상기 화합물, 화합물 또는 접합체를 포함하는 조성물, 또는 화합물 또는 접합체의 사용 또는 제조 방법을 제공한다.
I. 정의.
본 명세서가 보다 쉽게 이해될 수 있도록, 특정 용어를 먼저 정의한다. 추가 정의가 상세한 설명 전반에 걸쳐 제시된다.
용어 "하나(a)" 또는 "한(an)"의 실재는 해당 실재 중 하나 이상을 지칭한다는 점에 유의해야 한다; 예를 들어, "하나의 뉴클레오티드 서열"은 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "하나"(또는 "한"), "하나 이상" 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 또한 청구범위는 임의의 선택적 요소를 제외하도록 작성될 수 있음을 주목한다. 이와 같이, 이 진술은 청구 요소의 인용 또는 부정적인 제한의 사용과 관련하여 "단독", "오직" 등의 배타적 용어 사용에 대한 선행 근거로 사용하기 위한 것이다.
또한, 본원에서 사용된 "및/또는"은 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이 2개의 지정된 특징 또는 성분 각각의 특정 개시로 간주되어야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독) 및 "B"(단독)를 포함하도록 의도된다. 유사하게, "A, B, 및/또는 C"와 같은 구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 다음의 측면들 각각을 포함하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
측면이 본원에서 "포함하는"이라는 언어로 설명되는 곳마다 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"과 관련하여 설명된 유사한 측면이 또한 제공된다는 것이 이해된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 관련된 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press은 본 개시내용에 사용된 많은 용어의 일반 사전을 숙련가에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 국제 단위 시스템(SI) 허용 형식으로 표시된다. 숫자 범위에는 범위를 정의하는 숫자가 포함된다. 값의 범위가 인용되는 경우, 그 범위의 인용된 상한 및 하한 사이의 각각의 중간 정수 값 및 이의 각 분수가 또한 이러한 값 사이의 각 하위 범위와 함께 구체적으로 개시되는 것으로 이해되어야 한다. 임의의 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 범위에 포함되거나 제외될 수 있으며, 어느 하나, 둘 다 포함되거나 둘 모두가 포함되지 않는 각각의 범위는 또한 본 개시내용 내에 포함된다. 따라서, 본원에 인용된 범위는 인용된 종점을 포함하는 범위 내의 모든 값에 대한 약칭으로 이해된다. 예를 들어, 1 내지 10의 범위는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로 구성된 군으로부터 임의의 수, 숫자의 조합 또는 하위 범위를 포함하는 것으로 이해된다.
값이 명시적으로 인용된 경우, 인용된 값과 거의 동일한 수량 또는 양인 값도 본 개시내용의 범위 내에 있음이 이해되어야 한다. 조합이 개시되는 경우 해당 조합 요소의 각 하위 조합도 구체적으로 개시되며 개시 범위 내에 있다. 반대로, 상이한 요소 또는 요소의 군이 개별적으로 개시되는 경우, 이들의 조합도 개시된다. 개시물의 임의의 요소가 복수의 대안을 갖는 것으로 개시되는 경우, 각각의 대안이 단독으로 또는 다른 대안과의 임의의 조합으로 배제되는 그 개시의 예도 여기서 개시된다; 개시의 하나 이상의 요소가 그러한 배제를 가질 수 있고, 그러한 배제를 갖는 요소의 모든 조합이 이에 의해 개시된다.
본원에서 용어 "DAR"은 접합체의 약물 항체 비율을 의미하며, 이는 각 항체에 연결된 신규분해약물-링커 복합체의 평균 수이다. 특정 측면에서, 본원에 기재된 접합체의 DAR은 1 내지 10이다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 접합체의 DAR은 1 내지 8이다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 접합체의 DAR은 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 또는 10이다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 또한 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생산하는 암세포 또는 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는 표적 또는 그의 일부의 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자를 지칭한다. 본원에 개시된 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류일 수 있다. 면역글로불린은 모든 종에서 유래할 수 있다. 그러나, 한 측면에서, 면역글로불린은 인간, 뮤린 또는 토끼 기원이다.
나노바디로도 알려진 용어 "단일 도메인 항체"는 약 12 kDa 내지 약 15 kDa의 분자량을 갖는 단일 단량체 가변 항체 도메인으로 구성된 항체 단편이다. 단일체 항체는 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄를 기반으로 할 수 있다. 단일 도메인 항체의 예는 VHH 단편 및 VNAR 단편을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab').sub.2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오타입(항-Id) 항체, CDR(상보적 결정 영역), 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원, 단일-사슬 항체 분자에 면역특이적으로 결합하는 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
"온전한 항체"는 항원-결합 가변 영역 뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인(CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 집단을 구성하는 개별 항체는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 지시되고 매우 특이적이다. 또한, 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지시된다. 모노클로날 항체는 특이성과 더불어 다른 항체에 오염되지 않은 상태로 합성될 수 있다는 장점이 있다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 파지 항체 라이브러리로부터 분리될 수 있다.
본원의 모노클로날 항체는 구체적으로 "키메라" 항체를 포함하며, 여기서 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 반면, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 사슬(들)의 나머지는 다른 종에서 유래하거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 뿐만 아니라 그러한 항체의 단편의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이다. 본원의 관심 키메라 항체는 비인간 영장류(예를 들어, 긴꼬리 원숭이(Old World Monkey), 유인원 등) 및 인간 불변 영역 서열로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
모노클로날 항체(MAb)를 생산하기 위해 다양한 방법이 사용되어 왔다. 단일 유형의 항체를 생산하는 복제된 세포주를 지칭하는 하이브리도마 기술은 마우스(뮤린), 햄스터, 랫트, 인간 등 다양한 종의 세포를 사용한다. MAb를 제조하는 또 다른 방법은 재조합 DNA 기술을 포함하는 유전 공학을 사용한다. 이러한 기술로 만들어진 모노클로날 항체에는 키메라 항체 및 인간화 항체가 포함된다. 키메라 항체는 한 종류 이상의 종의 DNA 코딩 영역을 조합한다. 예를 들어, 키메라 항체는 마우스로부터 가변 영역을 유도하고 인간으로부터 불변 영역을 유도할 수 있다. 인간화 항체는 비인간 부분을 포함하더라도 주로 인간에서 유래한다. 키메라 항체와 마찬가지로, 인간화 항체는 완전한 인간 불변 영역을 포함할 수 있다. 그러나 키메라 항체와 달리, 가변 영역은 부분적으로 인간으로부터 유래될 수 있다. 인간화 항체의 비인간 합성 부분은 종종 뮤린 항체의 CDR에서 유래한다. 어쨌든, 이러한 영역은 항체가 특정 항원을 인식하고 결합할 수 있도록 하는 데 중요하다. 진단 및 단기 요법에 유용하지만, 뮤린 항체는 유해한 면역원성 반응의 위험을 증가시키지 않고는 장기간 사람에게 투여할 수 없다. 인간 항-마우스 항체(HAMA, Human Anti-Mouse Antibody)라고 하는 이 반응은 인간 면역계가 뮤린 항체를 이물질로 인식하고 공격할 때 발생한다. HAMA 반응은 독성 쇼크 또는 사망을 유발할 수 있다.
키메라 및 인간화 항체는 투여된 항체의 비인간 부분을 최소화함으로써 HAMA 반응의 가능성을 감소시킨다. 또한, 키메라 및 인간화 항체는 항체 의존적 세포 세포독성과 같은 2차 인간 면역 반응을 활성화하는 추가적인 이점을 가질 수 있다.
온전한 항체는 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 나타내는 하나 이상의 "효과기 기능"을 가질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예에는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체, BCR)의 하향 조절 등을 포함한다.
그들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 온전한 항체는 상이한 "부류"에 할당될 수 있다. 온전한 항체에는 5가지 주요 부류가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 및 이들 중 몇몇은 "하위부류"(아이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 더 나눌 수 있다. 다른 부류의 항체에 해당하는 중쇄 불변 도메인을 각각 .알파., .델타., .엡실론., .감마., 및 .뮤.라고 한다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배열은 잘 알려져 있다.
용어 "약"은 대략적으로, 거의, 어림잠아, 또는 ~의 영역을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. "약"이라는 용어가 수치 범위와 함께 사용되는 경우 명시된 수치 값의 위아래 경계를 확장하여 해당 범위를 수정한다. 일반적으로, 용어 "약"은, 예를 들어 10%의 변이, 위 또는 아래(더 높거나 또는 더 낮거나)에 의해 명시된 값의 위 및 아래로 수치 값을 수정할 수 있다.
용어 "투여", "투여하는" 및 그의 문법적 변이는 조성물, 예컨대 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)를 약제학적으로 허용되는 경로를 통해 대상체로 도입하는 것을 지칭한다. 본 개시내용의 EV(예를 들어, 엑소좀)와 같은 조성물의 대상체 내로의 도입은 종양내, 경구, 폐내, 비강내, 비경구(정맥내, 동맥내, 근육내, 복강내, 또는 피하), 직장, 림프내, 척수강내, 안구주위 또는 국소를 포함하는 적합한 경로에 의해서 이루어진다. 투여에는 자가-투여 및 타인에 의한 투여가 포함된다. 적절한 투여 경로는 조성물 또는 제제가 이의 의도된 기능을 수행하도록 한다. 예를 들어, 적합한 경로가 정맥내인 경우, 조성물 또는 제제를 대상체의 정맥에 도입함으로써 조성물을 투여한다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 천연 또는 부분적으로 또는 전체적으로 합성 생산된 면역글로불린, 및 이의 단편을 포함한다. 상기 용어는 또한 면역글로불린 결합 도메인과 상동인 결합 도메인을 갖는 임의의 단백질을 포함한다. "항체"는 항원에 특이적으로 결합하고 인식하는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 프레임워크 영역을 포함하는 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 항체라는 용어의 사용은 전체 항체, 폴리클로날, 모노클로날 및 재조합 항체, 이의 단편을 포함하는 것을 의미하며, 단일-사슬 항체, 인간화 항체, 뮤린 항체, 키메라, 마우스-인간, 마우스-영장류, 영장류-인간 모노클로날 항체, 항-이디오타입 항체, 항체 단편, 예를 들어 scFv, (scFv)2, Fab, Fab', 및 F(ab')2, F(ab1)2, Fv, dAb 및 Fd 단편, 디아바디, 및 항체-관련 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 항체는 원하는 생물학적 활성 또는 기능을 나타내는 한, 이중특이성 항체 및 다중특이성 항체를 포함한다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 생물학적 활성 분자는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 분자이다.
용어 "항체-약물 접합체" 및 "ADC"는 상호교환적으로 사용되며, 예를 들어, 치료제(때때로 본원에서 제제, 약물 또는 활성 약제학적 성분으로 지칭) 또는 제제에 공유 결합된 항체를 지칭한다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 생물학적 활성 분자는 항체-약물 접합체이다.
본원에 사용된 바와 같이, 하나 이상의 관심 값에 적용되는 "대략"이라는 용어는 명시된 기준 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 측면에서, 용어 "대략"은 달리 명시되지 않거나 문맥에서 명백하지 않은 한, 명시된 기준 값의 어느 방향(크거나 작은)으로든(해당 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우 제외) 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 그 미만에 속하는 값의 범위를 지칭한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 전하를 띠지 않는 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발신, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하여 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당업계에 정의되어 있다. 따라서, 폴리펩티드의 아미노산이 동일한 측쇄 계열의 다른 아미노산으로 대체되는 경우, 치환은 보존적인 것으로 간주된다. 또 다른 측면에서, 아미노산 스트링은 측쇄 계열 구성원의 순서 및/또는 조성이 상이한 구조적으로 유사한 스트링으로 보존적으로 대체될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "보존된"은 비교되는 둘 이상의 서열의 동일한 위치에서 변경되지 않고 발생하는 폴리뉴클레오티드 서열 또는 폴리펩티드 서열의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 각각 지칭한다. 상대적으로 보존된 뉴클레오티드 또는 아미노산은 서열의 다른 곳에서 나타나는 뉴클레오티드 또는 아미노산보다 더 관련된 서열 사이에서 보존되는 것이다.
일부 측면에서, 2개 이상의 서열은 서로 100% 동일한 경우 "완전히 보존된" 또는 "동일한" 것으로 언급된다. 일부 측면에서, 2개 이상의 서열은 이들이 서로 적어도 약 70% 동일, 적어도 약 80% 동일, 적어도 약 90% 동일, 또는 적어도 약 95% 동일한 경우 "매우 보존된"이라고 한다. 일부 측면에서, 2개 이상의 서열이 서로 적어도 약 30% 동일, 적어도 약 40% 동일, 적어도 약 50% 동일, 적어도 약 60% 동일, 적어도 약 70% 동일, 적어도 약 80% 동일, 적어도 약 90% 동일, 또는 적어도 약 95% 동일하다면 "보존적"인 것으로 언급된다. 서열의 보존은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 전체 길이에 적용될 수 있거나 이의 부분, 영역 또는 특징에 적용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "연결하는" 및 "접합하는"은 상호교환적으로 사용되며 각각 신규분해약물 및 결합 모이어티를 포함하는 2개 이상의 모이어티의 공유 또는 비공유 부착을 지칭한다. 일부 측면에서 연결 또는 접합은 링커를 포함할 수 있다.
용어 "아미노산 서열 변이체"는 천연 서열 폴리펩티드와 어느 정도 상이한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 일반적으로, 아미노산 서열 변이체는 천연 항체의 적어도 하나의 수용체 결합 도메인 또는 천연 수용체의 적어도 하나의 리간드 결합 도메인과 적어도 약 70%의 서열 동일성을 가질 것이고, 이러한 수용체 또는 리간드 결합 도메인과 서열에 의해 전형적으로 이들은 적어도 약 80%, 보다 전형적으로 적어도 약 90% 상동성일 것이다. 아미노산 서열 변이체는 천연 아미노산 서열의 아미노산 서열 내의 특정 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다. 아미노산은 일반적인 이름, 한 글자 및 세 글자 코드로 지정된다.
"서열 동일성"은 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입한 후 동일한 아미노산 서열 변이체의 잔기의 백분율로 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 잘 알려져 있다. 그러한 컴퓨터 프로그램 중 하나는 1991년 12월 10일에 미국 저작권청(the United States Copyright Office, Washington, D.C. 20559)에 사용자 문서와 함께 제출된 제넨텍사(Genentech, Inc.)에서 제작한 "Align 2"이다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명하는 데 사용된다. 예시적인 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, FcR은 IgG 항체(감마 수용체)에 결합하는 것일 수 있으며, 이러한 수용체의 대립형질 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함하는 Fc.감마.RI, Fc.감마.RII 및 Fc.감마.RIII 하위부류의 수용체를 포함한다. Fc.감마.RII 수용체는 Fc.감마.RIIA("활성화 수용체") 및 Fc.감마.RIIB("억제 수용체")를 포함하며, 이들은 주로 그의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 Fc.감마.RIIA는 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함한다. 억제 수용체 Fc.감마.RIIB는 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM)를 포함한다. 미래에 확인될 것을 포함하는 다른 FcR은 본원에서 용어 "FcR"에 포함된다. 이 용어는 또한 모체 IgG를 태아로 전달하는 역할을 하는 신생아 수용체인 FcRn을 포함한다.
"보체 의존적 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에 표적을 용해시키는 분자의 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 보체 시스템의 첫 번째 구성요소(C1q)가 동족 항원과 복합된 분자(예를 들어, 항체)에 결합함으로써 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정을 수행할 수 있다.
"천연 항체"는 일반적으로 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 연결되어 있는 반면, 디설파이드 결합의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄 사이에서 다양하다. 각각의 중쇄 및 경쇄에는 규칙적으로 간격을 둔 사슬내 디설파이드 가교가 있다. 각 중쇄의 한쪽 끝에는 가변 도메인(VH)이 있고 그 뒤에 다수의 불변 도메인이 있다. 각 경쇄는 한쪽 끝에 가변 도메인(VL)이 있고 다른 쪽 끝에 불변 도메인이 있다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 첫 번째 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 항체 사이에서 서열이 광범위하게 상이하고 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나 가변성은 항체의 가변 도메인 전체에 고르게 분포되지 않는다. 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 초가변 영역이라고 하는 3개의 세그먼트에 집중되어 있다. 가변 도메인의 더욱 고도로 보존된 부분을 프레임워크 영역(FR)이라고 한다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR을 포함하며, 대체로 .베타.-시트 입체배열을 채택하고, 3개의 초가변 영역에 의해 연결되며, 이는 연결하는 루프, 및 일부 경우에는 .베타.-시트 구조의 일부를 형성한다. 각 사슬의 초가변 영역은 FR에 의해 밀접하게 함께 유지되고 다른 사슬의 초가변 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위 형성에 기여한다. 불변 도메인은 항체를 항원에 결합시키는 데 직접적으로 관여하지 않지만, 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC)에 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(예를 들어, 경쇄 가변 도메인의 잔기 24-34(L1), 50-56(L2) 및 89-97(L3) 및 중쇄 가변 도메인의 31-35(H1), 50-65(H2) 및 95-102(H3); Kabat et al supra) 및/또는 "초가변 루프"의 잔기(예를 들어, 경쇄 가변 도메인의 잔기 26-32(L1), 50-52(L2) 및 91-96(L3) 및 중쇄 가변 도메인의 26-32(H1), 53-55(H2) 및 96-101(H3))로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편이라고 하는 각각이 단일 항원-결합 부위를 갖는 2개의 동일한 항원-결합 단편 및 이의 이름이 용이하게 결정화하는 능력을 반영하는 잔류 "Fc" 단편을 생성한다. 펩신 처리는 두 개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원을 가교할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단한 비공유 회합에서 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. 이러한 입체배열에서 각 가변 도메인의 3개의 초가변 영역이 상호작용하여 VH-VL 이량체 표면 상에 항원-결합 부위를 정의한다. 집합적으로, 6개의 초가변 영역은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 단지 3개의 초가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화도이지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 첫 번째 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 몇 개의 잔기가 추가된다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 적어도 하나의 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그들 사이에 힌지 시스테인이 있는 Fab' 단편 쌍으로 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 알려져 있다.
임의의 척추동물 종으로부터의 항체의 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(.kappa.) 및 람다(.lamda.)라고 하는 2개의 명확하게 구별되는 유형 중 하나로 지정될 수 있다.
"단일-사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함할 수 있다.
용어 "디아바디"는 동일한 폴리펩티드 사슬(VH-VL)에서 가변 경쇄 도메인(VL)에 연결된 가변 중쇄 도메인(VH)을 포함하는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 소형 항체 단편을 지칭한다. 너무 짧아서 동일한 사슬의 두 도메인 사이에 쌍을 이루는 것을 허용할 수 없는 링커를 사용함으로써, 도메인은 강제로 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 두 개의 항원-결합 부위를 만든다.
비인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화는 뮤린 항원 결합 정보를 비-면역성 인간 항체 수용체에 전달하는 방법이며, 많은 치료학적으로 유용한 약물이 만들어졌다. 인간화 방법은 일반적으로 6개의 모든 뮤린 상보성 결정 영역(CDR)을 인간 항체 프레임워크로 옮기는 것으로 시작된다. 이러한 CDR-이식 항체는 일반적으로 항원 결합에 대한 원래의 친화도를 유지하지 않으며, 실제로 친화도가 종종 심하게 손상된다. CDR 외에도, 적절한 CDR 입체형태를 유지하기 위해, 선별된 비-인간 항체 프레임워크 잔기도 포함되어야 한다. 이식된 CDR의 구조적 입체형태를 지원하기 위해 주요 마우스 프레임워크 잔기를 인간 수용체로 전달하면 항원 결합 및 친화도가 회복되는 것으로 나타났다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 인간 면역글로불린(수용자 항체)으로, 수용자의 초가변 영역의 잔기가 마우스, 래트, 토끼 또는 원하는 특이성, 친화성 및 능력을 가진 비인간 영장류와 같은 비인간 종(공여자 항체)의 초가변 영역의 잔기로 대체된다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개선하기 위해 수행된다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 루프에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 또한 임의로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역을 포함할 것이다.
"분리된" 항체는 자연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 항체이다. 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며 효소, 호르몬 및 기타 단백질 또는 비단백질 용질을 포함할 수 있다. 특정 측면에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정된 항체의 95중량% 초과, 또는 99중량% 초과, (2) 기체상 단백질 시퀀서를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는 은 염색(silver stain)을 사용하여 환원 또는 비환원 조건에서 SDS-PAGE에 의한 균질성까지 정제될 것이다. 분리된 항체에는 항체의 자연 환경 중 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에 재조합 세포 내의 제자리 항체를 포함한다. 그러나 일반적으로 분리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계를 거쳐 제조된다.
"암"은 신체에서 비정상 세포의 제어되지 않은 성장을 특징으로 하는 다양한 질병의 광범위한 군을 의미한다. 조절되지 않은 세포 분열과 성장은 주변 조직을 침범하고 림프계나 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수 있는 악성 종양의 형성을 초래한다. 본원에 사용된 "암"은 원발성, 전이성 및 재발성 암을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "면역 반응"은 외부 인자에 대한 척추동물 내의 생물학적 반응을 말하며, 이러한 반응은 이러한 인자 및 이에 의해 유발되는 질병에 대해 유기체를 보호한다. 면역 반응은 면역계의 세포(예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 또는 호중구)의 작용 및 침입하는 병원체, 병원체에 감염된 세포 또는 조직, 암 또는 기타 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우 정상 인간 세포 또는 조직을 척추동물의 몸에서 선택적으로 표적화, 결합, 손상, 파괴 및/또는 제거를 초래하는 이러한 세포 또는 간에 의해 생성되는 가용성 거대분자(항체, 사이토카인 및 보체 포함)의 작용에 의해 매개된다. 면역 반응은, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 CD4+ 또는 CD8+ T 세포와 같은 효과기 T 세포 또는 Th 세포의 활성화 또는 억제, 또는 조절 T 세포(Treg) 세포의 억제를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "T 세포" 및 "T 림프구"는 상호교환가능하고 흉선에 의해 생성되거나 처리되는 임의의 림프구를 지칭한다. 일부 측면에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 측면에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 측면에서, T 세포는 NKT 세포이다.
"대상체"에는 인간 또는 비인간 동물이 포함된다. "비인간 동물"이라는 용어는 인간이 아닌 영장류, 양, 개 및 마우스, 래트 및 기니피그와 같은 설치류와 같은 척추동물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 어떤 측면에서 대상체는 인간이다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "치료학적 유효량" 또는 "치료학적 유효한 용량"은 원하는 생물학적, 치료적 및/또는 예방적 결과를 제공하는 제제(예를 들어, 본원에 개시된 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체)의 양을 지칭한다. 그 결과는 질병의 징후, 증상 또는 원인 중 하나 이상의 감소, 개선, 완화, 경감, 지연 및/또는 감경, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 고형 종양과 관련하여, 유효량은 종양을 수축시키고/시키거나 종양의 성장 속도를 감소시키거나 (예를 들어 종양 성장을 억제하기 위해) 또는 다른 원치 않는 세포 증식을 방지 또는 지연시키기에 충분한 양을 포함한다. 일부 측면에서, 유효량은 종양 발달을 지연시키기에 충분한 양이다. 일부 측면에서, 유효량은 종양 재발을 예방하거나 지연시키기에 충분한 양이다. 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 조성물의 유효량은, 예를 들어 (i) 암세포의 수를 감소시키고/거나; (ii) 종양 크기를 감소시키고/거나; (iii) 말초 기관으로의 암세포 침윤을 억제, 지연, 어느 정도 늦추고 막을 수 있고/거나; (iv) 억제시키고, 즉 종양 전이를 어느 정도 늦추고 중단시킬 수 있고/거나; (v) 종양 성장을 억제시키고/거나; (vi) 종양의 발생 및/또는 재발을 예방하거나 지연시키고/거나; (vii) 암과 관련된 하나 또는 더 많은 증상을 어느 정도까지 완화시킨다.
일부 측면에서, "치료 유효량"은 암의 유의한 감소 또는 암, 예를 들어 진행성 고형 종양의 진행의 둔화(퇴행)에 영향을 미치는 것으로 임상적으로 입증된 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체의 양이다. 질병 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 임상 시험 중 인간 대상체, 인간의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템과 같이 숙련된 의사에게 알려진 다양한 방법을 사용하여, 또는 시험관 내 검정에서 제제의 활성의 검정에 의해 평가할 수 있다.
본원에서 용어 "치료 기준"은 특정 유형의 질병에 대한 적절한 치료로 의료 전문가에 의해 인정되고 의료 전문가에 의해 널리 사용되는 치료를 의미한다. 이 용어는 "모범 사례", "표준 의료" 및 "표준 요법"과 같은 용어와 상호 교환하여 사용할 수 있다.
예를 들어, "항암제"는 대상체에서 암 퇴행을 촉진하거나 추가 종양 성장을 예방한다. 특정 측면에서, 약물의 치료학적 유효량은 암을 제거하는 지점까지 암 퇴행을 촉진한다.
치료에 관한 용어 "유효한" 및 "유효성"은 약리학적 유효성 및 생리학적 안전성 둘 모두를 포함한다. 약리학적 효과는 환자의 암 퇴행을 촉진하는 약물의 능력을 나타낸다. 생리학적 안전성은 약물 투여로 인한 독성 또는 세포, 기관 및/또는 유기체 수준에서의 기타 생리학적 역효과(부작용)의 수준을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "면역 관문 억제제"는 하나 이상의 관문 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 간섭 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 관문 단백질은 T-세포 활성화 또는 기능을 조절한다. CTLA-4 및 이의 리간드 CD80 및 CD86; 및 PD-1과 이의 리간드 PD-L1 및 PD-L2와 같은 수많은 관문 단백질이 알려져 있다(Pardoll, D.M., Nat Rev Cancer 12(4):252-64 (2012)). 이러한 단백질은 T-세포 반응의 공동자극 또는 억제 상호작용을 담당한다. 면역 관문 단백질은 자가-내성 및 생리적 면역 반응의 지속 기간 및 진폭을 조절하고 유지한다. 면역 관문 억제제는 항체를 포함하거나 항체에서 유래된다.
용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치를 모두 지칭하며, 여기서 목적은 암의 발병 또는 확산과 같은 원치 않는 생리학적 변화 또는 장애를 예방하거나 늦추는 것(경감)이다. 본 개시내용의 목적을 위해, 감지할 수 있던지 감지할 수 없던지 간에, 유익하거나 원하는 임상 결과에는 증상의 완화, 질병의 정도의 감소, 질병의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질병 진행의 지연 또는 감속, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 관해(부분적이든 전체적이든)가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우 예상 생존과 비교하여 생존을 연장하는 것을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 사람들은 이미 상태 또는 장애가 있는 사람들 뿐만 아니라 상태 또는 장애를 가지기 쉬운 사람들 또는 상태 또는 장애가 예방되어야 하는 사람들을 포함한다.
Ⅱ. 신규분해약물
본 개시내용은 하기 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00050
(II)
여기서:
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 -C(O)R3, -N(R4)2, -(CH2)nOH, -(CH2)nSH, -(CH2)nN(R4)2, -(CH2)nQ'(CH2)mOH, -(CH2)nQ'(CH2)mSH, 및 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2로부터 선택되고; 여기서
R3은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
Q'는 O, S, 또는 NR4이고;
n은 1-6이고; 그리고
m은 2-5이고;
단, R2가 NH2, -(CH2)nNH2, 또는 -(CH2)nOH인 경우, R1은 할로이다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 허용되는 염을 제공한다: 여기서,
A는 페닐 고리 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
U는 NH이고;
R1은 수소 및 할로로부터 선택되고;
R2는 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2, -(CH2)nOH, -(CH2)nSH, -N(R4)2, 및 -C(O)R3로부터 선택되고; 여기서:
m은 2이고;
n은 2이고;
Q'는 -O-이고;
R3은 메틸이고; 그리고
각각의 R4는 수소 및 메틸로부터 독립적으로 선택되고;
단, R2가 NH2 또는 -(CH2)nOH인 경우, R1은 할로이다.
본원에 사용된 용어 "C1-C6알콕시"는 산소 원자를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C6알킬 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C6알콕시C1-C6알킬"은 C1-C6알킬 기를 통해 모 분자 모이어티에 부착된 C1-C6알콕시 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C1-C6알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소로부터 유도된 기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "C4-C10사이클로알킬"은 4 내지 10개의 탄소 원자 및 0개의 헤테로원자를 갖는 포화 모노사이클릭 탄화수소 고리 시스템을 지칭한다. 사이클로알킬 기의 대표적인 예는 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 7 내지 10개의 원자를 함유하는 사이클로알킬 기는 모노사이클릭 또는 융합된, 스피로사이클릭 또는 가교된 바이사이클릭 구조일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "할로"는 F, Cl, Br, 또는 I를 지칭한다.
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물이다:
Figure pct00051
Figure pct00052
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00053
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00054
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00055
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00056
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00057
일부 측면에서 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00058
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00059
일부 측면에서, 화학식 (II)의 신규분해약물은 다음과 같다:
Figure pct00060
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 페닐이고; U는 NH이고; R1은 할로이고; R2는 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2이고, 여기서 m 및 n은 2이고, Q'는 O이고, R4 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 페닐이고; U는 NH이고; R1은 할로이고; R2는 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2이고, 여기서 m 및 n은 2이고, Q'는 O이고, R4은 각각 메틸인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 페닐이고; U는 NH이고; R1은 할로이고; R2는 -(CH2)nOH이고, 여기서 n은 2인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 페닐이고; U는 NH이고; R1은 할로이고; R2는 -(CH2)nSH이고, 여기서 n은 2인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 페닐이고; U는 NH이고; R1은 수소이고; R2는 -N(R4)2이고, 여기서 R4 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 페닐이고; U는 NH이고; R1은 할로이고; R2는 -N(R4)2이고, 여기서, 각각의 R4는 수소인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 본 개시내용은 A가 페닐이고; R1은 수소이고; R2는 -C(O)R3이고, 여기서, R3은 메틸인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 A가 C4-C10사이클로알킬 고리이고; U는 NH이고; R1은 수소이고; R2는 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2이고, 여기서 m 및 n은 2이고, Q'는 O이고, R4 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸인 화학식 (II)의 신규분해약물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
III. 신규분해약물 접합체
본 개시내용은 본원에 개시된 하나 이상의 신규분해약물 및 결합 모이어티의 접합체를 제공한다. 이러한 접합체는 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가아제에 의해 매개되는 기질 단백질의 모집 및 유비퀴틴화를 촉진하는 세레블론(CRBN)에 결합하여 단백질을 분해할 수 있다. 이러한 제제는 "분자 접착제"로 작용하여, 리가아제 및 신생기질 사이의 단백질 상호작용을 재프로그래밍하는 소수성 패치로 결합 계면을 채운다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00061
여기서:
a는 1 내지 10의 정수이고;
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
X는 -NR2-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-로부터 선택되고; 여기서,
Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 NR2이고;
R2는 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n은 1 내지 6의 정수이고;
m은 2 내지 6의 정수이고;
여기서, 각 기의 왼쪽은 L에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고;
L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고; 그리고
Bm은 결합 모이어티이다.
일부 측면에서, U는 NH이다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 종양 세포주에 대해 시험관내 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 신규분해약물 및 결합 모이어티를 포함하는 신규분해약물 접합체는 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독보다 시험관내 항증식 활성이 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 100% 더 높다. 일부 측면에서, 신규분해약물 및 결합 모이어티를 포함하는 신규분해약물 접합체는 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독보다 시험관내 항증식 활성이 적어도 약 2배, 적어도 약 3배, 적어도 약 4배, 적어도 약 5배, 적어도 약 6배, 적어도 약 7배, 적어도 약 8배, 적어도 약 9배, 적어도 약 10배 더 높다.
일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 BT-474 유방암 세포주에 대한 시험관내 항-증식 활성, 예를 들어 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독과 비교하여 BT-474 유방암 세포주에 대한 더 높은 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 SK-BR-3 유방암 세포주에 대한 시험관내 항-증식 활성, 예를 들어 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독과 비교하여 SK-BR-3 유방암 세포주에 대한 보다 높은 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 NCI-N87 위암 세포주에 대한 시험관내 항-증식 활성, 예를 들어 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독과 비교하여 NCI-N87 위암 세포주에 대한 보다 높은 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 다우디 림프종 세포주에 대한 시험관내 항-증식 활성, 예를 들어, 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독과 비교하여 다우디 림프종 세포주에 대한 더 높은 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 HL-60 급성 골수성 백혈병 세포주에 대한 시험관내 항증식 활성, 예를 들어, 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독과 비교하여 HL-60 급성 골수성 백혈병 세포주에 대한 더 높은 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 본원에 기술된 신규분해약물 접합체는 라모스 비-호지킨 림프종 세포주에 대한 시험관내 항증식 활성, 예를 들어, 신규분해약물 단독 또는 결합 모이어티 단독과 비교하여 라모스 비-호지킨 림프종 세포주에 대한 더 높은 항-증식 활성을 갖는다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 인간 혈청의 존재 하에 이의 항-증식 활성을 유지할 수 있다. 본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 암 치료에 사용될 수 있다.
III.A. 링커
본 개시내용의 신규분해약물은 링커를 통해 결합 모이어티에 연결될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "링커"는 결합 모이어티(Bm)를 화학식 (I)의 화합물 내의 기 X에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티를 지칭한다.
특정 측면에서, 링커는 이종이작용성 기를 함유할 수 있다. 본 개시내용에서 "이종이작용성 기"라는 용어는 링커가 그 일부인 링커를 결합 모이어티에 연결하는 화학적 모이어티를 의미한다. 이종이작용성 기는 화학적 모이어티의 양쪽 끝에 서로 다른 반응성 기를 갖는 것이 특징이다. "Bm"에 대한 부착은 화학적 또는 효소적 접합 또는 이 둘의 조합을 통해 달성될 수 있다. 화학적 접합은 이종이작용성 기의 반응 핸들과 결합 모이어티의 표면 상에 있는 접근가능한 아미노산 잔기의 제어된 반응을 포함한다. 화학적 접합의 예에는 라이신 아미드 커플링, 시스테인 커플링 및 유전 공학에 의해 혼입된 비천연 아미노산을 통한 커플링이 포함되지만 이에 제한되지 않으며, 여기서 원하는 반응 핸들이 있는 비천연 아미노산 잔기는 "Bm"상에 설치된다. 효소적 접합에서, 효소는 링커와 결합 모이어티의 접근가능한 아미노 잔기의 커플링을 매개한다. 효소적 접합의 예는 소르타제를 사용한 트랜스펩티드화, 미생물 트랜스글루타미나제를 사용한 트랜스펩티드화 및 N-글리칸 조작을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 화학적 접합 및 효소적 접합은 또한 순차적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 효소적 결합은 후속 화학적 결합에 사용하기 위해 "Bm"에 고유한 반응 핸들을 설치하는 데 사용할 수도 있다.
일부 측면에서, 이종이작용성 기는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00062
여기서,
Figure pct00063
는 링커의 나머지 부분에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00064
는 Bm에 대한 부착점이다.
특정 측면에서, 링커 "L"은 절단불가능하다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "절단불가능한 링커"는 안정한 공유 방식으로 결합 모이어티를 신규분해약물에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이며, 본원에서 "절단가능한 링커"로 정의된 범주에 속하지 않는다. 따라서, 절단불가능한 링커는 산-유도 절단, 광-유도 절단, 생체환원 절단, 펩티다제-유도 절단, 에스테라제-유도 절단 및 디설파이드 결합 절단에 대해 실질적으로 내성이 있다. "절단에 대한 실질적으로 내성인"은 링커 또는 링커에 인접하는 화학 결합이 항체 신규분해약물 접합체 집단의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 적어도 99%가 산, 광불안정성 절단제, 생물환원제, 펩티다제, 에스테라제 또는 절단가능한 링커에서 화학 결합(예를 들어, 디설파이드 결합)을 절단하는 화학적 또는 생리학적 화합물에 의해 위에서 설명된 임의의 제제로 처리한 후 몇 시간에서 며칠 동안 절단불가능하게 남아있음을 의미한다. 특정 측면에서, 링커는 신규분해약물 및/또는 결합 모이어티가 활성 상태로 남아 있을 수 있는 조건에서 산-유도 절단, 광-유도 절단, 생체환원 절단, 효소 절단 등에 민감하지 않다. 절단불가능한 링커에서 생성된 ADC 이화산물은 항체의 잔류 아미노산을 함유한다. 이러한 이화산물은 전달되는 표적 세포에서 독특하고 예상치 못한 특성을 나타낼 수 있다.
당업자는 절단불가능한 링커와 절단가능한 링커를 쉽게 구별할 것이다.
절단불가능한 링커의 예는 SMCC(석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트) 링커, 석신이미드 티오에테르 링커, 및 하기와 같은 링커를 포함하지만 이에 제한되지 않는다:
Figure pct00065
여기서:
p는 1 내지 10의 정수이고;
Figure pct00066
는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00067
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, 링커는
Figure pct00068
이다. 일부 측면에서, p는 5이다.
특정 측면에서 링커는 절단가능할 수 있다. 일부 측면에서, 링커는 신규분해약물 및/또는 결합 모이어티가 활성을 유지할 수 있는 조건에서 산-유도된 절단, 광-유도된 절단, 생체환원성 절단, 효소적 절단 등에 민감할 수 있다.
일부 측면에서, 절단가능한 링커는 효소적으로 절단될 수 있다. 일부 측면에서, 절단가능한 링커는 프로테아제, 펩티다제, 에스테라제, 베타-글루코로니다제, 글리코시다제, 포스포디에스테라제, 포스파타제, 피로포스파타제 또는 리파제에 의해 절단될 수 있다.
일부 측면에서, 절단가능한 링커는 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 프로테아제의 예는 카텝신 B, VAGP 테트라펩티드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 측면에서, 절단가능한 링커는 펩티드를 함유한다. 일부 측면에서, 펩티드는 링커의 절단 부위이며, 이에 의해 세포내 프로테아제, 예컨대 리소좀 효소에 노출시 약물의 방출을 촉진한다. 펩티드는 특정 효소, 예를 들어 종양-관련 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소적 절단을 위해 설계되고 최적화될 수 있다. 2개의 아미노산을 갖는 펩티드의 예는 알라닌-알라닌(ala-ala), 발린-알라닌(val-ala), 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-라이신(fk 또는 phe-lys); 페닐알라닌-호모라이신(phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 3개의 아미노산을 갖는 펩티드의 예에는 글리신-발린-시트룰린(gly-val-cit), 아스파르트산-발린-시트룰린(asp-val-cit), 알라닌-알라닌-아스파라긴(ala-ala-asn), 알라닌-페닐알라닌-라이신(ala-phe-lys), 글리신-글리신-페닐알라닌(gly-gly-phe) 및 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly)을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 4개의 아미노산을 갖는 펩티드의 예는 글리신-글리신-발린-시트룰린(gly-gly-val-cit) 및 글리신-글리신-페닐알라닌-글리신(gly-gly-phe-gly)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 위의 아미노산 조합은 역순으로 존재할 수도 있다(즉, cit-val).
본 개시내용의 펩티드는 아미노산 잔기의 L- 또는 D-이성질체를 포함할 수 있다. "자연-발생 아미노산"이라는 용어는 Ala, Asp, Asx, Cit, Cys, Glu, Phe, Glx, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr을 지칭한다. 자연 발생("L-") 아미노산의 입체배열과 대조적으로, "D-"는 "D"(우회전의) 입체배열을 갖는 아미노산을 지정한다. 본원에 기재된 아미노산은 상업적으로 구입하거나(Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech) 당업계에 공지된 방법을 사용하여 합성할 수 있다.
특정 측면에서, 링커("L")는 하기로부터 선택되는 프로테아제 절단가능한 링커이다:
Figure pct00069
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 L- 또는 D-입체배열에서 자연-발생 아미노산 잔기이며, 단 Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이고;
Figure pct00070
는 X에 대한 부착 지점이며; 및
Figure pct00071
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 독립적으로 존재하지 않거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-라이신, D-라이신, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이다.
일부 측면에서, Z1은 존재하지 않거나 글리신이고; Z2는 존재하지 않거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌 및 글리신으로부터 선택되고; Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로부터 선택되고; Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-라이신, D-라이신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌 및 글리신으로부터 선택된다.
일부 측면에서, L은
Figure pct00072
이다.
일부 측면에서, q는 5이다.
특정 측면에서, L은 피로포스파타제 절단가능한 링커이다.
일부 측면에서, L은 하기와 같은 피로포스파타제 절단가능한 링커이다:
Figure pct00073
여기서,
q는 2 내지 10이고;
Figure pct00074
는 X에 대한 부착 지점이며; 및
Figure pct00075
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L은 베타-글루코로니다제 절단가능한 링커이다.
일부 측면에서, L은 하기로부터 선택된 베타-글루코로니다제 절단가능한 링커이다:
Figure pct00076
여기서,
q는 2 내지 10이고;
----는 부재 또는 결합이고;
Figure pct00077
는 X에 대한 부착 지점이며; 및
Figure pct00078
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, 링커는 생체환원성이다. 생체환원성 링커는 세포내 구획 대 혈장에서의 환원 전위의 차이를 이용한다. 종양 세포의 세포질에 존재하는 환원된 글루타티온은 정상 세포의 세포질에 존재하는 것보다 최대 1000배 더 높으며 종양 세포에는 세포 구획에서 환원에 기여할 수 있는 효소도 함유한다. 링커는 전신 순환 동안 접합체를 온전하게 유지하고 높은 세포내 농도의 글루타티온에 의해 선택적으로 절단되어 무독성 전구약물로부터 종양 부위에 활성 약물을 방출한다.
일부 측면에서, L은 하기로부터 선택되는 생체환원성 링커이다:
Figure pct00079
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
R, R', R'', 및 R'''은 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 또는 2개의 제미날 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있으며;
Figure pct00080
는 X에 대한 부착 지점이며; 및
Figure pct00081
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, 링커는 산 절단가능하다. 산-절단 가능한 링커는 혈액 순환의 중성 pH에서 안정하게 유지되도록 특별히 설계되었지만 세포 구획의 산성 환경에서 가수분해를 거쳐 세포독성 약물을 방출한다.
일부 측면에서, L은 하기로부터 선택되는 산 절단가능한 링커이다:
Figure pct00082
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00083
는 X에 대한 부착 지점이며; 및
Figure pct00084
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L은 L이 클릭-투-릴리스(click-to-release) 링커이고, 여기서 신규분해약물의 방출은 테트라진 또는 관련 화합물에 의해 화학적으로 촉발된다.
일부 측면에서, L은 하기로부터 선택되는 클릭-투-릴리스 링커이다:
Figure pct00085
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00086
는 X에 대한 부착점이며; 및
Figure pct00087
는 결합 모이어티에 대한 부착 지점이다.
III.B. 결합 모이어티
본 개시내용은 결합 모이어티에 접합된 신규분해약물을 제공한다. 본원에 사용된 용어 "결합 모이어티"는 세포 표면 마커 또는 수용체를 인식하고 이에 결합하는 임의의 분자를 지칭한다. 특정 측면에서, 결합 모이어티는 폴리펩티드 모이어티로 제한되지 않는 단백질에 결합한다. 결합 모이어티는 신규분해약물을 특정 세포, 조직 또는 위치로 표적화하는 것 외에도, 표적 세포 또는 경로에 대한 항증식성(세포증식억제 및/또는 세포독성) 활성과 같은 특정 치료 효과를 가질 수 있다. 특정 측면에서, 결합 모이어티는 카복실산, 아민, 티올, 또는 화학적 반응성 아미노산 모이어티 또는 측쇄와 같은 적어도 하나의 화학적 반응성 기를 포함할 수 있거나 이를 포함하도록 조작될 수 있다. 일부 측면에서, 결합 모이어티는 주어진 표적 세포 집단에 대해 세포 표면 수용체 또는 항원과 같은 세포 표면 분자에 결합하거나 복합체를 형성하는 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 수용체와의 특이적 결합 또는 복합체화 후, 세포는 표적화 모이어티 또는 신규분해약물 접합체의 흡수를 허용하며, 이는 그 다음 세포 내로 내재화된다.
일부 측면에서, 기 "Bm"은 세포 표면 분자에 특이적으로 결합할 수 있는 모이어티일 수 있다. 일부 측면에서, 기 "Bm"은 세포 표면 수용체 또는 항원에 결합하는 펩티드 또는 단백질일 수 있다.
특정 측면에서, 기 "Bm"은 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편일 수 있다. 항체는 특정 항원을 인식하고 결합할 수 있는 면역 체계에 의해 생성되는 단백질이다. 표적 항원은 일반적으로 다중 항체 상의 CDR에 의해 인식되는 에피토프라고도 하는 수많은 결합 부위를 가지고 있다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 하나 이상의 상응하는 항체를 가질 수 있다. 본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체, 단일 도메인 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체) 및 항체 단편을 구체적으로 포함한다. 항체는 뮤린, 인간, 인간화, 키메라 또는 다른 종에서 유래한 것일 수 있다.
신규분해약물에 접합될 수 있는 모노클로날 항체는 특정 항원 결정기(예를 들어, 암세포 항원, 바이러스 항원, 미생물 항원, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 화학물질, 핵산, 또는 이의 단편)에 대한 항체의 동종 집단이다. 관심 항원에 대한 모노클로날 항체(mAb)는 배양물에서 연속 세포주에 의한 항체 분자의 생산을 제공하는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 여기에는 하이브리도마 기술, 인간 B 세포 하이브리도마 기술 및 EBV-하이브리도마 기술이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 면역글로불린 부류 및 이들의 임의의 하위 부류일 수 있다. 본 개시내용에서 사용되는 mAb를 생산하는 하이브리도마는 시험관내 또는 생체내에서 배양될 수 있다.
유용한 모노클로날 항체는 인간 모노클로날 항체, 인간화 모노클로날 항체, 항체 단편, 또는 키메라 인간-마우스(또는 다른 종) 모노클로날 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 인간 모노클로날 항체는 당업계에 공지된 임의의 수많은 기술에 의해 제조될 수 있다.
항체는 또한 이중특이적 항체일 수 있다. 이중특이성 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중특이성 항체의 전통적인 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 동시발현을 기반으로 하며, 여기서 2개의 사슬은 상이한 특이성을 갖는다. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이러한 하이브리도마(쿼드로마)는 10개의 다른 항체 분자의 잠재적인 혼합물을 생성하며, 그 중 하나만 올바른 이중특이성 구조를 갖는다. 일반적으로 친화성 크로마토그래피 단계를 사용하여 수행되는 올바른 분자의 정제는 다소 번거롭고 생성물 수율이 낮다.
다른 접근법에 따르면, 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 결합 부위)이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 힌지, C.sub.H2, 및 C.sub.H3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과의 융합일 수 있다. 제 1 중쇄 불변 영역(C.sub.H1)은 융합체 중 적어도 하나에 존재하는 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함할 수 있다. 면역글로불린 중쇄 융합체 및 원하는 경우 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 서열을 갖는 핵산은 별도의 발현 벡터에 삽입되고 적합한 숙주 유기체 내로 공동-형질주입된다. 이것은 구성에 사용된 3개의 폴리펩티드 사슬의 비균등한 비율이 최적의 수율을 제공하는 측면에서 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는 데 큰 유연성을 제공한다. 그러나 동일한 비율의 적어도 2개상의 폴리펩티드 사슬의 발현이 높은 수율을 초래하거나 비율이 특별한 의미가 없을 때, 하나의 발현 벡터에 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 사슬에 대한 코딩 서열을 삽입하는 것이 가능하다.
이중특이성 항체는 한쪽 팔에 제 1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄 및 다른 쪽 팔에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제 2 결합 특이성을 제공)을 가질 수 있다. 이 비대칭 구조는 이중특이성 분자의 절반에만 면역글로불린 경쇄의 존재가 손쉬운 분리 방법을 제공하기 때문에, 원하지 않는 면역글로불린 사슬 조합으로부터 원하는 이중특이성 화합물의 분리를 용이하게 한다. 이러한 기술을 사용하여, 본원에 정의된 바와 같은 질병의 치료 또는 예방에서 신규분해약물에 대한 접합을 위해 이중특이성 항체를 제조할 수 있다.
하이브리드 또는 이작용성 항체는 생물학적으로, 즉, 세포 융합 기술에 의해, 또는 화학적으로, 특히 가교제 또는 디설파이드-가교 형성 시약을 사용하여 유래될 수 있고, 전체 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
항체는 암세포 항원, 바이러스 항원, 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체의 기능적 활성 단편, 유도체 또는 유사체 또는 종양 세포 또는 매트릭스에 결합된 다른 항체일 수 있다. 이와 관련하여, "기능적으로 활성인"은 단편, 유도체 또는 유사체가 인식되는 단편, 유도체 또는 유사체가 유래된 항체와 동일한 항원을 인식하는 항-항-이디오타입 항체를 유도할 수 있음을 의미한다. 구체적으로, 예시적인 측면에서 면역글로불린 분자의 이디오타입의 항원성은 프레임워크 및 항원을 특이적으로 인식하는 CDR 서열에 대해 C-말단인 CDR 서열의 결실에 의해 향상될 수 있다. 어떤 CDR 서열이 항원에 결합하는지 결정하기 위해, CDR 서열을 함유하는 합성 펩티드를 당업계에 공지된 임의의 결합 검정 방법에 의한 항원과의 결합 검정에 사용할 수 있다.
다른 유용한 항체는 항체 분자의 펩신 소화에 의해 생성될 수 있는 가변 영역, 경쇄 불변 영역 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유하는 F(ab')2 단편, 및 F(ab')2 단편의 디설파이드 가교를 환원시켜 생성될 수 있는 Fab 단편과 같은 항체 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다른 유용한 항체는 항체의 중쇄 및 경쇄 이량체, 또는 Fv 또는 단일 사슬 항체(SCA)와 같은 이의 최소 단편, 또는 항체와 동일한 특이성을 갖는 임의의 다른 분자이다.
추가로, 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있는, 인간 및 비-인간 부분 모두를 포함하는 키메라 및 인간화 모노클로날 항체와 같은 재조합 항체는 유용한 항체이다. 키메라 항체는 뮤린 모노클로날으로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 것과 같은 상이한 동물 종으로부터 상이한 부분이 유래된 분자이다. 인간화 항체는 비인간 종으로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역을 갖는 비인간 종으로부터의 항체 분자이다. 이러한 키메라 및 인간화 모노클로날 항체는 당업계에 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있다.
완전한 인간 항체는 내인성 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현할 수 없지만 인간 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현할 수 있는 트랜스제닉 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 트랜스제닉 마우스는 선택된 항원, 예를 들어 본 개시내용의 폴리펩티드의 전부 또는 일부로 정상적인 방식으로 면역화된다. 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체는 기존의 하이브리도마 기술을 사용하여 수득할 수 있다. 트랜스제닉 마우스에 의해 숨겨져 있는 인간 면역글로불린 전이유전자는 B 세포 분화 동안 재배열되고, 이어서 클래스 스위칭 및 체세포 돌연변이를 겪는다. 따라서, 이러한 기술을 사용하여 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생산하는 것이 가능하다. 인간 항체를 생산하기 위한 이 기술의 개요는 문헌(Lonberg and Huszar, 1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93)에 있다. 다른 인간 항체는, 예를 들어 앱제닉스사(Abgenix, Inc., Freemont, CA) 및 젠팜(Genpharm, San Jose, CA)에서 상업적으로 입수할 수 있다.
선택된 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체는 "가이드 선택"으로 지칭되는 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 이 접근법에서 선택된 비인간 모노클로날 항체, 예를 들어 마우스 항체는 동일한 에피토프를 인식하는 완전한 인간 항체의 선택을 안내하는 데 사용된다. 인간 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하여 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다.
항체는 항체의 융합 단백질, 또는 이의 기능적으로 활성인 단편일 수 있으며, 예를 들어 항체는 N-말단 또는 C-말단에서 공유 결합(예를 들어, 펩티드 결합)을 통해 항체가 아닌 다른 단백질(또는 단백질의 적어도 10, 20 또는 50개 아미노산 부분과 같은 이의 부분)의 아미노산 서열에 융합된다. 항체 또는 이의 단편은 불변 도메인의 N-말단에서 다른 단백질에 공유적으로 연결될 수 있다.
항체는 즉, 이러한 공유 부착이 항체가 이의 항원 결합 면역특이성을 유지하도록 허용하는 한, 임의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형된 유사체 및 유도체를 포함한다. 예를 들어, 비제한적으로, 항체의 유도체 및 유사체는, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 세포 항체 단위 또는 기타 단백질 등에 대한 연결에 의해 추가로 변형된 것을 포함한다. 다양한 화학적 변형 중 임의의 것이 특정 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 투니카마이신의 존재하에서의 대사 합성 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 공지된 기술에 의해 수행될 수 있다. 또한, 유사체 또는 유도체는 하나 이상의 비천연 아미노산을 함유할 수 있다.
신규분해약물 접합체 내의 항체는 Fc 수용체와 상호작용하는 아미노산 잔기에 변형(예를 들어, 치환, 결실 또는 부가)을 갖는 항체를 포함할 수 있다. 구체적으로, 항체는 항-Fc 도메인 및 FcRn 수용체 사이의 상호작용에 관여하는 것으로 확인된 아미노산 잔기에 변형을 갖는 항체를 포함한다. 암세포 항원에 대해 면역특이적인 항체는, 예를 들어 제넨텍(Genentech, San Francisco, CA)로부터 상업적으로 입수할 수 있거나, 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 생산될 수 있다. 암 세포 항원에 대해 면역특이적인 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 예를 들어 젠뱅크(GenBank) 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물, 또는 일상적인 클로닝 및 시퀀싱에 의해 얻을 수 있다.
특정 측면에서, 신규분해약물 접합체의 항체는 모노클로날 항체, 예를 들어 뮤린 모노클로날 항체, 키메라 항체, 또는 인간화 항체일 수 있다. 일부 측면에서, 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fab 단편일 수 있다.
암의 치료 또는 예방을 위한 공지된 항체는 본원에 기재된 신규분해약물에 접합될 수 있다. 암세포 항원에 대해 면역특이적인 항체는 상업적으로 입수할 수 있거나, 예를 들어 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 생산될 수 있다. 암 세포 항원에 대해 면역특이적인 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 예를 들어 젠뱅크(GenBank) 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물, 또는 일상적인 클로닝 및 시퀀싱에 의해 얻을 수 있다. 암 치료에 이용가능한 항체의 예는 전이성 유방암 환자의 치료를 위한 인간화 항-HER2 모노클로날 항체; 비-호지킨 림프종 환자의 치료를 위한 키메라 항-CD20 모노클로날 항체인 RITUXAN.RTM.(리툭시맙; Genentech); 난소암 치료를 위한 뮤린 항체인 오바렉스(OvaRex)(오레고보맙; AltaRex Corporation, MA); 결장직장암 치료를 위한 뮤린 IgG.sub.2a 항체인 파노렉스(Panorex)(에드레콜로맙, Glaxo Wellcome, NC); 두경부암과 같은 표피 성장 인자 양성 암의 치료를 위한 항-EGFR IgG 키메라 항체인 세툭시맙 에르비툭스(Cetuximab Erbitux)(세툭시맙, Imclone Systems Inc., NY); 육종의 치료를 위한 인간화 항체인 비탁신(Vitaxin)(에타라시주맙, MedImmune, Inc., MD); 만성 림프구성 백혈병(CLL)의 치료를 위한 인간화 IgG.sub.l 항체인 캠패스(Campath) I/H(알렘투주맙, Leukosite, MA); 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료를 위한 인간화 항-CD33 IgG 항체인 스마트 MI95(Protein Design Labs, Inc., CA); 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 인간화 항-CD22 IgG 항체인 림포시드(LymphoCide)(에프라투주맙, Immunomedics, Inc., NJ); 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 인간화 항-HLA-DR 항체인 스마트 ID 10(Protein Design Labs, Inc., CA); 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 방사성표지된 뮤린 항-HLA-Dr10 항체인 온콜림(Oncolym)(Techniclone, Inc., CA); 호지킨병 또는 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 인간화 항-CD2 mAb인 알로뮨(Allomune)(BioTransplant, CA); 폐암 및 결장직장암의 치료를 위한 항-VEGF 인간화 항체인 아바스틴(Avastin)(베바시주맙, Genentech, Inc., CA); 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 항-CD22 항체인 에프라투자맙(Epratuzamab)(Immunomedics, Inc., NJ 및 Amgen, CA); 및 결장직장암 치료를 위한 인간화 항-CEA 항체인 CEAcide(Immunomedics, NJ)를 포함한다.
신규분해약물 접합체에 유용한 기타 항체에는 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, 발란타맙, 인다툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 H3 항체, 이브리투모맙, 토시투모맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 및 벨투주맙을 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 일부 측면에서, 항체는 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, OR000213, 린투주맙 또는 젬투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
신규분해약물 접합체에 유용한 기타 항체는 다음 항원에 대한 항체을 포함하나, 이로 제한되지 않는다: CA125(난소), CA15-3(암종), CA19-9(암종), L6(암종), 루이스(Lewis) Y(암종) , 루이스 X(암종), 알파 태아단백(암종), CA 242(대장직장), 태반 알칼리성 포스파타제(암종), 전립선 특이항원(전립선), 전립선산 포스파타제(전립선), 표피성장인자(암종), MAGE-1(암종), MAGE-2(암종), MAGE-3(암종), MAGE-4(암종), 항-트랜스페린 수용체(암종), p97(흑색종), MUC1-KLH(유방암), CEA(대장직장) , gp100(흑색종), MART1(흑색종), PSA(전립선), IL-2 수용체(T-세포 백혈병 및 림프종), CD20(비-호지킨 림프종), CD52(백혈병), CD33(백혈병), CD22(림프종), 인간 융모막 성선자극호르몬(암종), CD38(다발성 골수종), CD40(림프종), 뮤신(암종), P21(암종), MPG(흑색종) 및 Neu 종양유전자 생성물(암종). 일부 특이적이고 유용한 항체에는 BR96 mAb(Trail, P.A., et al Science(1993) 261, 212-215), BR64(Trail, PA, et al Cancer Research(1997) 57, 100-105), S2C6 mAb(Francisco, J. A., et al Cancer Res. (2000) 60:3225-3231)와 같은 CD40 항원에 대한 mAb, 1F6 mAb와 같은 CD70 항원에 대한 mAb, 및 AC10과 같은 CD30 항원에 대한 mAb를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 종양 관련 항원에 결합하는 많은 다른 내재화 항체가 사용될 수 있으며 검토되었다.
본 접합체가 결합할 수 있는 다른 항원에는 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자(clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 카데린(Cadherin)-3, 카데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-아세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR , 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, 및/또는 XAGE1을 포함하나 이로 제한되지 않는다.
CD40, OX40L, 엔도글린(Endoglin), DEC-205, 4-1BBL, CD36, CD36, CD204, MARCO, DC-SIGN, CLEC9A, CLEC5A, 덱틴(Dectin) 2, CLEC10A, CD206, CD64, CD32A, CD1A, HVEM, CD32B, PD-Ll, BDCA-2, XCR-1, 및 CCR2와 같은 항원 제시 세포와 관련된 항원에 결합하는 항체도 신규분해약물에 접합될 수 있다.
신규분해약물 접합체의 항체는 수용체 또는 활성화된 림프구 상에서 발현되는 수용체 복합체 둘 모두에 결합할 수 있다. 수용체 또는 수용체 복합체는 면역글로불린 유전자 슈퍼패밀리 구성원, TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원, 인테그린, 사이토카인 수용체, 케모카인 수용체, 주요 조직적합성 단백질, 렉틴, 또는 보체 제어 단백질을 포함할 수 있다. 적합한 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원의 비제한적 예는 CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD152/CTLA-4, PD-1, 및 ICOS이다. 적합한 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원의 비제한적 예는 CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, TNF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, 오스테오프로테게린, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4 및 APO-3이다. 적합한 인테그린의 비제한적 예는 CD11a, CD11b, CD11c, CD18, CD29, CD41, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD103 및 CD104이다. 적합한 렉틴의 비제한적 예는 C형, S형 및 I형 렉틴이다.
일부 측면에서, 본 개시내용에 유용할 수 있는 항체는 3F8, 8H9, 아바고보맙, 아브식시맙(REOPRO®), 아비투주맙, 아브레제키맙, 아브릴루맙, 악톡수맙, 아달리무맙(HUMIRA®), 아데카투무맙, 아두카누맙, 아파세비쿠맙, 아펠리모맙, 아푸투주맙, 알라시주맙, ALD518, 알렘투주맙(CAMPATH®), 알리로쿠맙(PRALUENT®), 알투모맙, 아마툭시맙, 아나투모맙, 안데칼릭시맙, 아네투맙, 아니프롤루맙, 안루킨주맙,아폴리주맙, 아프루투맙, 아르시투모맙(CEA-SCAN®), 아스크린바쿠맙, 아셀리주맙, 아티도르톡수맙, 아틀리주맙(토실리주맙, ACTEMRA®, ROACTEMRA®), 아테졸리주맙(TECENTRIQ®), 아티누맙, 아토롤리무맙, 아벨루맙(Bavencio), 아진툭시주맙, 발란타맙, 바피네우주맙, 바실릭시맙(SIMULECT®), 바비툭시맙, BCD-100, 벡투모맙(LYMPHOSCAN®), 베겔로맙, 벨란타맙, 벨리무맙(BENLYSTA®), 베마리투주맙, 벤랄리주맙(FASENRA®), 베르메키맙, 베르산리맙, 베르틸리무맙, 베실레소맙(SCINITIMUN®), 베바시주맙(AVASTIN®), 베즐로톡수맙(ZINPLAVA®), 비시로맙(FIBRISCINT®), 비마그루맙, 비메키주맙, 비르타미맙, 비바투주맙, 블레셀루맙, 블리나투모맙, 블론투벳맙, 블로소주맙, 보코시주맙, 브라지쿠맙, 브렌툭시맙, 브리아키누맙, 브로달루맙(SILIQ™), 브롤루시주맙(BEOVU®), 브론틱투주맙, 부로수맙(CRYSVITA®), 카비랄리주맙, 카플라시주맙(CABLIVI®), 카미단루맙, 캄렐리주맙, 카나키누맙(ILARIS®), 칸투주맙, 카프로맙, 카루맙, 카로툭시맙, 카투막소맙(REMOVAB®), cBR96, CC49, 세델리주맙, 세미플리맙(LIBTAYO®), 세르구투주맙, 세르트렐리맙, 세르톨리주맙, 세툭시맙(ERBITUX®), 시비사타맙, 시름투주맙, 시타투주맙, 시숙투무맙, 클라자키주맙, 클레놀릭시맙, 클리바투주맙, 코드리투주맙, 코페투주맙, 콜툭시맙, 코나투무맙, 콘시주맙, 코스프로빅시맙, CR6261, 크레네주맙, 크리잔리주맙(ADAKVEO®), 크로테두맙, 쿠사투주맙, 다세투주맙, 다클리주맙(ZINBRYTA®), 달로투주맙, 다피롤리주맙, 다라투무맙(DARZALEX®), 덱트레쿠맙, 뎀시주맙, 데닌투주맙, 데노수맙(PROLIA®), 데파툭시주맙, 데를로툭시맙, 데투모맙, 데자미주맙, 디누툭시맙(UNITUXIN®), 디리다부맙, 도마그로주맙, 도스타리맙, 돌리모맙, 돌릭시주맙, 드로지투맙, DS-8201, 둘리고투주맙, 두필루맙(DUPIXENT®), 더발루맙(IMFINZI®), 두시기투맙, 에크로멕시맙, 에쿨리주맙(SOLIRIS®), 에도바코맙, 에드레콜로맙(PANOREX®), 에팔리주맙(RAPTIVA®), 에푼구맙(MYCOGRAB®), 엘델루맙, 엘레자누맙, 엘젬투맙, 엘로투주맙(EMPLICITI®), 엘실리모맙, 에막투주맙, 에마팔루맙(GAMIFANT®), 에미베투주맙, 에미시주맙(HEMLIBRA®), 에나포타맙, 에나바투주맙, 엔포르투맙(PADCEV®), 엔리모맙, 에노블리투주맙, 에노키주맙, 에노티쿠맙, 엔시툭시맙, 에피투모맙, 엡티네주맙(VYEPTI®), 에프라투주맙, 에레누맙(AIMOVIG®), 에를리주맙, 에르투막소맙(REXOMUN®), 에타라시주맙(ABEGRIN®), 에티길리맙, 에트롤리주맙, 에비나쿠맙, 에볼로쿠맙(REPATHA®), 엑스비비루맙, 파놀레소맙(NEUTROSPEC®),파라리모맙, 파리시맙, 팔레투주맙, 파시누맙, FBTA05, 펠비주맙, 페자키누맙, 피바투주맙, 피클라투주맙, 피기투무맙, 피리부맙, 플란보투맙, 플레티쿠맙, 플로테투주맙, 폰톨리주맙(HUZAF®), 포랄루맙, 포라비루맙, 프레마네주맙(AJOVY®), 프레솔리무맙, 프로보시맙, 프루네벳맙, 풀라누맙, 푸툭시맙, 갈카네주맙(EMGALITY®), 갈릭시맙, 간코타맙, 가니투맙, 간테네루맙, 가빌리모맙, 게디부맙, 젬투주맙, 게보키주맙, 길베트맙, 김실루맙, 지렌툭시맙, 글렘바투무맙, 골리무맙(SIMPONI®), 고밀릭시맙, 구셀쿠맙(TREMFYA®), huMy9-6, OR000213, 이아나루맙, 이발리주맙(TROGARZO®),IBI308, 이브리투모맙, 이크루쿠맙, 이다루시주맙(PRAXBIND®), 이파보투주맙, 이고보맙(INDIMACIS-125), 일라다투주맙, IMAB362, 이말루맙, 이마프릴리맙, 임시로맙(MYOSCINT®), 임가투주맙, 인클라쿠맙, 인다툭시맙, 인두사투맙, 이네빌리주맙, 인플릭시맙(REMICADE®), 인테투무맙, 이놀리모맙, 이노투주맙, 아이오맙-B, 이필리무맙, 이마투무맙, 이필리무맙, 이라투무맙, 이사툭시맙(SARCLISA®), 이스칼리맙, 이스티라투맙, 이톨리주맙, 익세키주맙(TALTZ®), 켈릭시맙, 라베투주맙(CEA-CIDE™), 락노투주맙, 라디라투주맙, 람팔리주맙, 라나델루맙(TAKHZYRO®), 란도그로주맙, 라프리툭시맙, 라르카빅시맙, 레브리키주맙, 레말레소맙, 렌달리주맙, 렌버비맙, 렌질루맙, 레르델리무맙, 레론리맙, 레소파부맙, 레톨리주맙, 렉사투무맙, 리비비루맙, 리파스투주맙, 리겔리주맙, 릴로토맙, 린투주맙, 리릴루맙, 로델시주맙, 로키베트맙, 론카스툭시맙, 로르보투주맙, 로사툭시주맙, 루카투무맙, 룰리주맙, 루밀릭시맙, 룸레투주맙, 루파투맙, 루티키주맙, 마파투무맙, 마르게툭시맙, 마르스타시맙, 마스리모맙, 마투주맙, 마브릴리무맙, 메폴리주맙(NUCALA®), 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미리키주맙, 미르베툭시맙, 미투모맙, 모도툭시맙, 몰랄리주맙, 모가물리주맙(POTELIGEO®), 모로리무맙, 모수네투주맙, 모타비주맙(NUMAX®), 목세투모맙(LUMOXITI®), 무로모나브-CD3(ORTHOCLONE OKT3®), 나콜로맙, 나밀루맙, 납투모맙, 나라툭시맙, 나르나투맙, 나탈리주맙(TYSABRI®), 나비식시주맙, 나비부맙, 낙시타맙, 네바쿠맙, 네시투무맙(PORTRAZZA®), 네몰리주맙, NEOD001, 네렐리모맙, 네스바쿠맙, 네타키맙, 니모투주맙(THERACIM®), 니르세비맙, 니볼루맙, 노페투모맙, 오빌톡사시맙(ANTHIM®), 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오크렐리주맙(OCREVUS®), 오둘리모맙, 오파투무맙(ARZERRA®), 올라라투맙(LARTRUVO®), 올레클루맙, 올렌달리주맙, 올로키주맙, 오말리주맙(XOLAIR®), 옴부르타맙, OMS721, 오나르투주맙, 온테시주맙, 온툭시주맙, 온바틸리맙, 오피시누맙, 오포르투주맙, 오레고보맙(OVAREX), 오르티쿠맙, 오텔릭시주맙, 오틸리맙, 오틀레투주맙, 옥셀루맙, 오자네주맙, 오조가미신, 오조랄리주맙, 파기박시맙, 팔리비주맙(SYNAGIS®), 팜레브루맙, 파니투무맙(VECTIBIX®), 판코맙, 파노바쿠맙, 파사투주맙, 파스콜리주맙, 파소툭시주맙, 파테클리주맙, 파트리투맙, PDR001, 펨브롤리주맙, 펨투모맙(THERAGYN®), 페라키주맙, 페르투주맙(OMNITARG®), 펙셀리주맙, 피딜리주맙, 피나투주맙, 핀투모맙, 플라쿨루맙, 폴라투주맙(Polivy), 프레잘루맙, 플로잘리주맙, 포갈리주맙, 포네주맙, 포르가빅시맙, 프라시네주맙, 프레잘리주맙, 프릴릭시맙, 프리톡삭시맙, 프리투무맙, PRO 140, 퀼리주맙, 라코투모맙, 라드레투맙, 라피비루맙, 랄판시주맙, 라무시루맙, 라네벳맙, 라니비주맙(LUCENTIS®), 라바갈리맙, 라불리주맙(ULTOMIRIS®), 락시바쿠맙, 레파네주맙, 레가비루맙, REGN-EB3, 레나틀리맙, 렘톨루맙, 레슬리주맙(CINQAIR®), 리로투무맙, 리누쿠맙, 리산키주맙(SKYRIZI®), 리툭시맙(RITUXAN®), 리바바주맙, rmab, 로바투무맙, 롤레두맙, 로밀키맙, 로모소주맙(EVENITY®), 론탈리주맙, 로즈만투주맙, 로발피투주맙, 로벨리주맙(LEUKARREST®), 로자놀릭시주맙, 루플리주맙(ANTOVA), SA237, 사시투주맙, 사말리주맙, 삼로타맙, 사릴루맙(KEVZARA®), 사트랄리주맙, 사투모맙 펜데티드, 세쿠키누맙(COSENTYX®), 셀리크렐루맙, 세리반투맙, 세톡삭시맙, 세트루수맙, 세비루맙, SGN-CD19A, SHP647, 시브로투주맙, 시팔리무맙, 실툭시맙, 심투주맙, 시플리주맙, 시르트라투맙, 시루쿠맙, 소피투주맙, 솔라네주맙, 솔리토맙, 소네프시주맙, 손투주맙, 스파르탈리주맙, 스타물루맙, STI-6129, 술레소맙(LEUKOSCAN®), 수프타부맙, 수팀리맙, 수비주맙, 수브라톡수맙, 타발루맙, 타카투주맙(AFP-CIDE®), 타도시주맙, 탈라코투주맙, 탈리주맙, 탐투베트맙, 타네주맙, 타플리투모맙 팝톡스, 타렉스투맙, 타볼리맙, 테피바주맙(AUREXIS®), 텔리모맙, 텔리소투주맙, 테시돌루맙, 테트라세탄, 테툴로맙, 테나투모맙, 테네릭시맙, 테프로투무맙(TEPEZZA®), 테플리주맙, 테제펠루맙, TGN1412, 티불리주맙, 티실리무맙(TREMELIMUMAB®), 티가투주맙, 티미구투주맙, 티몰루맙, 티라골루맙, 티라고투맙, 티슬레리주맙, 티소투맙, 티욱세탄, 틸드라키주맙(ILUMYA®), TNX-650, 토실리주맙(아틀리주맙, ACTEMRA®), 토무조툭시맙, 토랄리주맙, 토사톡수맙, 토시투모맙(BEXXAR®), 토베투맙, 트랄로키누맙, 트라스투주맙(HERCEPTIN®), TRBS07, 트레갈리주맙, 트레멜리무맙, 트레보그루맙, 투코투주맙, 투비루맙, 우르톡사주맙, 우스테키누맙(STELERA®), 유블리툭시맙, 울로쿠플루맙, 우레루맙, 우토밀루맙, 바다스툭시맙, 베다스툭시맙, 바나리맙, 반도르투주맙, 반틱투맙, 바누시주맙, 바팔릭시맙, 바리사쿠맙, 바릴루맙, 바텔리주맙, 베돌리주맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 베센쿠맙, 비실리주맙(NUVION®), 보바리리주맙, 볼로식시맙(HUMASPECT®), 폰레로리주맙, 보프라텔리맙, 보세투주맙, 보투무맙, 부나키주맙, 크센투주맙, XMAB-5574, 잘루투무맙(HuMEX-EGFr), 자놀리무맙(HuMAX-CD4), 자툭시맙, 제노쿠투주맙, 지랄리무맙, 졸베툭시맙 또는 졸리모맙을 포함하나 이로 제한되지 않는다.
분자 표적 또는 관심 항원에 "결합하는" 항체는 항체가 항원을 발현하는 세포를 표적화하는데 유용하도록 충분한 친화도로 그 항원에 결합할 수 있는 것이다.
본 개시내용에서, 기 "Bm"은 하나 이상의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 측면에서, "Bm"은 1 내지 10개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 측면에서, "Bm"은 1 내지 9개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 측면에서, "Bm"은 1 내지 8개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 측면에서, "Bm"은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 측면에서, "Bm"은 7 또는 8개의 신규분해약물에 접합될 수 있다. 일부 측면에서, "Bm"은 5개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 측면에서, "Bm"은 6개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 측면에서, "Bm"은 7개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 측면에서, "Bm"은 8개의 신규분해약물에 접합된다. 일부 측면에서, "Bm"은 9개의 신규분해약물에 접합된다.
IV. 조성물 및 사용 방법
본원에 기재된 접합체 및/또는 화합물은 약제학적으로 또는 약제학적으로 허용되는 염의 형태일 수 있다. 일부 측면에서, 이러한 염은 무기 또는 유기 산 또는 염기로부터 유도된다.
적합한 산 부가 염의 예는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠 설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포 설포네이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐-프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 티오시아네이트, 토실레이트 및 운데카노에이트를 포함한다.
적합한 염기 부가 염의 예는 암모늄 염; 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토금속염; 디사이클로헥실아민 염, N-메틸-D-글루카민과 같은 유기 염기와의 염; 아르기닌, 라이신 등의 아미노산과의 염을 포함한다.
예를 들어, 베르게(Berge)는 다음과 같은 FDA-승인된 상업적으로 시판되는 염을 나열한다: 음이온 아세테이트, 베실레이트(벤젠설포네이트), 벤조에이트, 바이카보네이트, 바이타르트레이트, 브로마이드, 칼슘 에데테이트(에틸렌디아민테트라아세테이트), 캄실레이트(캠퍼설포네이트), 카보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 디하이드로클로라이드, 에데테이트(에틸렌디아민테트라아세테이트), 에디실레이트(1,2-에탄디설포네이트), 에스톨레이트(라우릴 설페이트), 에실레이트(에탄설포네이트), 푸마레이트, 글루셉테이트(글루코헵토네이트), 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜릴아르사닐레이트(글리콜라미도페닐아르소네이트), 헥실레조르시네이트, 하이드라바민(N,N'-디(데히드로아비에틸)에틸렌디아민), 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드록시나프토에이트, 요오다이드, 이세티오네이트(2-하이드록시에탄설포네이트), 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트(메탄설포네이트), 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 납실레이트(2-나프탈렌설포네이트), 니트레이트, 파모에이트(엠보네이트), 판토테네이트, 포스페이트/디포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 서브아세테이트, 석시네이트, 설페이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테오클레이트(8-클로로테오필리네이트) 및 트리에티오다이드; 유기 양이온 벤자틴(N,N'-디벤질에틸렌디아민), 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(N-메틸글루카민) 및 프로카인; 및 금속 양이온 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연.
베르게는 추가로 다음과 같은 비-FDA-승인된 상업적으로 시판되는(미국 이외의) 염을 나열한다: 음이온 아디페이트, 알기네이트, 아미노살리실레이트, 안하이드로메틸렌시트레이트, 아레콜린, 아스파르테이트, 바이설페이트, 부틸브로마이드, 캄포레이트, 디글루코네이트, 디하이드로브로마이드, 디석시네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 하이드로플루오라이드, 하이드로요오다이드, 메틸렌비스(살리실레이트), 나파디실레이트(1,5-나프탈렌디설포네이트), 옥살레이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 페닐에틸바르비투레이트, 피크레이트, 프로피오네이트, 티오시아네이트, 토실레이트 및 운데카노에이트; 유기 양이온 베네타민(N-벤질페네틸아민), 클레미졸(1-p-클로로벤질-2-피롤릴딘-1'-일메틸벤즈이미다졸), 디에틸아민, 피페라진 및 트로메타민(트리스(하이드록시메틸)아미노메탄); 및 금속 양이온 바륨 및 비스무트.
본원에 기재된 신규분해약물 접합체를 포함하는 약제학적 조성물은 또한 투여 방식에 따라 상이할 수 있는 적합한 담체, 부형제 및 보조제를 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 약제학적 조성물은 적합한 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다. 상기 제형은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 혈류 내로, 근육 내로, 또는 기관 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 정맥내, 동맥내, 복강내, 척추강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내 및 피하를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 장치에는 니들 인젝터, 니들-프리 인젝터 및 주입 기술이 포함된다.
비경구 조성물은 일반적으로 염, 탄수화물 및 완충제와 같은 부형제를 함유할 수 있는 수용액이다. 그러나, 조성물은 또한 살균된 비-수성 용액 또는 살균된 발열원-없는 물과 같은 적합한 비히클과 함께 사용되는 건조된 형태로 제형화될 수 있다.
멸균 조건 하에, 예를 들어 동결건조에 의한 비경구 조성물의 제조는 당업자에게 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 용이하게 달성될 수 있다.
비경구 투여용 조성물은 즉시 및/또는 변형 방출로 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형에는 지연-방출, 지속-방출, 펄스-방출, 제어-방출, 표적 방출 및 예정 방출이 포함된다. 따라서, 조성물은 활성제의 변형된 방출을 제공하는 이식된 저장소로 투여하기 위한 고체, 반고체 또는 요변성 액체로 제형화될 수 있다.
비경구 제형은 이에 제한되지 않는 보존제와 같은 비경구 투여 형태에 사용되는 다른 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합될 수 있다.
또 다른 측면에서, 약제학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 펠렛, 현탁액, 용액, 에멀젼 등과 같은 적합한 경구 투여 형태로서 제형화될 수 있다. 붕해제, 희석제, 킬레이트제, 결합제, 활택제, 윤활제, 충전제, 증량제, 부착 방지제 등과 같은 다른 적합한 담체가 존재할 수 있다.
경구 투여 제형은 또한 감미제, 비히클/습윤제, 착색제, 향미제, 보존제, 점도 향상제/증점제 등과 같은 다른 적합한 약제학적 부형제를 함유할 수 있다.
본원에 기재된 신규분해약물 접합체는 다양한 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 개시내용의 특정 접합체는 효능 발현, 약동학(예를 들어, 흡수, 분포, 대사, 배설), 용해도(예를 들어, 수용성), 다른 약물과의 상호작용(예를 들어, 약물 대사 효소 억제 작용), 안전성(예를 들어, 급성 독성, 만성 독성, 유전 독성, 생식 독성, 심장 독성, 발암성, 중추 독성) 및/또는 안정성(예를 들어, 화학적 안정성, 효소에 대한 안정성) 면에서 우수할 수 있으며 의약으로 유용할 수 있다.
본 개시내용의 신규분해약물 접합체는 암과 같은 질병, 예를 들어 결장직장암(예를 들어, 결장직장암, 직장암, 항문암, 가족성 결장직장암, 유전성 비용종증 대장암, 위장관 기질 종양), 폐암(예를 들어, 비소세포폐암, 소세포폐암, 악성 중피종), 중피종, 췌장암(예를 들어, 췌관암, 췌장 내분비종양), 인두암, 후두암, 식도암, 위/위암(예를 들어, 유두선암, 점액성 선암, 선편평암), 십이지장암, 소장암, 유방암(예를 들어, 침습성 유관암, 비침습성 유관암, 염증성 유방암), 난소암(예를 들어, 난소 상피암, 생식선외 생식 세포 종양, 난소 생식 세포 종양, 난소 저-악성 잠재 종양), 고환 종양, 전립선암(예를 들어, 호르몬-의존성 전립선암, 비-호르몬 의존성 전립선암, 거세-저항성 전립선암), 간암(예를 들어, 간세포암, 원발성 간암, 간외 담관암), 갑상선암(예를 들어, 갑상선 수질 암종), 신장암(예를 들어, 신세포암, (예를 들어, 투명 세포 신세포암), 신우 및 요관의 이행 세포암), 자궁암(예를 들어, 자궁경부암, 자궁체암, 자궁 육종), 임신성 융모막암종, 뇌종양(예를 들어, 수모세포종, 신경아교종, 송과체 성상세포 종양, 모모세포 성상세포종, 미만성 성상세포종, 역형성 성상세포종, 뇌하수체 선종), 망막모세포종, 피부암(예를 들어, 유색종, 악성 흑색종), 육종(예를 들어, 횡문근육종, 평활근육종, 연조직육종, 방추세포육종), 악성 골종양, 방광암, 혈액학적/혈액암(예를 들어, 다발성 골수종, 백혈병(예를 들어, 급성 골수성 백혈병), 악성 림프종, 호지킨병, 만성 골수증식성 질환), 미지의 원발성 암; 암 성장 억제제; 암 전이 억제제; 아폽토시스 촉진제; 전암성 병변(예를 들어, 골수이형성 증후군) 치료제; 등의 예방 또는 치료를 위한 제제와 같은 약제로서 사용될 수 있다.
특정 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 접합체는 유방암, 위암, 난소암, 자궁암, 폐암, 췌장암, 간암, 림프종, 또는 혈액암에 대한 의약으로서 사용될 수 있다.
또한, 본 개시내용의 신규분해약물 접합체는 비-약물 요법과 동시에 사용될 수 있다. 엄밀히 말하면 (1) 수술, (2) 안지오텐신 II 등을 이용한 고혈압 화학요법, (3) 유전자 요법, (4) 온열요법, (5) 냉동요법, (6) 레이저 소작술 및 (7) 방사선 요법과 같은 비-약물 요법과 조합될 수 있다.
예를 들어, 전술한 수술 전후 등에 본 발명의 신규분해약물 접합체를 사용함으로써, 내성 발현 방지, 무질환 생존기간 연장, 암 전이 또는 재발 억제, 수명 연장 등의 효과 등이 제공될 수 있다.
또한, 지지 요법과 함께 본 개시내용의 신규분해약물 접합체와의 치료를 조합하는 것이 가능하다: (i) 각종 감염성 질병의 합병증을 위한 항생제(예를 들어, 판스포린 등과 같은 β-락탐 유형, 클라리스로마이신과 같은 마크로라이드 유형 등)의 투여, (ii) 영양실조 개선을 위한 고칼로리 수혈, 아미노산 제제 또는 일반 비타민 제제 투여, (iii) 통증 완화를 위한 모르핀 투여, (iv) 구역질, 구토, 식욕 부진, 설사, 백혈구 감소증, 혈소판 감소증, 헤모글로빈 농도 감소, 탈모, 간병증, 신장병증, DIC, 발열 등과 같은 부작용 개선용 약제 투여 및 (v) 암 등의 다수 약제 내성을 억제하기 위한 약제학적 저제의 투여.
일부 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체는 표준 치료 요법, 예를 들어, 하나 이상의 치료제(예를 들어, 항암제 및/또는 면역조절제)와 조합하여 사용될 수 있다. 따라서, 특정 측면에서, 본원에 개시된 종양을 치료하는 방법은 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약 접합체는 면역 경로의 다중 요소가 표적화될 수 있도록 하나 이상의 항암제와 조합하여 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 항암제는 면역 관문 억제제(즉, 특정 면역 관문 경로를 통한 신호전달을 차단)를 포함한다. 본 방법에 사용될 수 있는 면역 관문 억제제의 비제한적 예는 CTLA-4 길항제(예를 들어, 항-CTLA-4 항체), PD-1 길항제(예를 들어, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체), TIM-3 길항제(예를 들어, 항-TIM-3 항체), 또는 이들의 조합을 포함한다. 조합 치료의 포괄적이고 비제한적인 목록은 본 출원의 조합 치료 섹션에 자세히 개시되어 있다.
일부 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체는 추가 치료제의 투여 전 또는 후에 대상체에게 투여된다. 다른 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체는 추가 치료제와 동시에 대상체에게 투여된다. 특정 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체 및 추가 치료제는 약제학적으로 허용되는 담체 중 단일 조성물로서 동시에 투여될 수 있다. 다른 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체 및 추가 치료제는 별개의 조성물로서 동시에 투여된다.
일부 측면에서, 본 개시내용의 신규분해약물 또는 신규분해약물 접합체로 치료될 수 있는 대상체는 래트 또는 마우스와 같은 비인간 동물이다. 일부 측면에서, 치료될 수 있는 대상은 인간이다.
V. 신규분해약물 및 조성물의 제조 방법
본 개시내용은 결합 모이어티를 화학식 (I-1)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염과 반응시키는 것을 포함하여, 신규분해약물 접합체의 제조 방법을 제공한다:
Figure pct00088
(I-1)
여기서:
A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
X는 -NR2-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-로부터 선택되고; 여기서,
Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 NR2이고;
R2는 수소 또는 C1-C6알킬이고;
n은 1 내지 6의 정수이고;
m은 2 내지 6의 정수이고;
여기서, 각 기의 왼쪽은 L'에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고;
L'은 결합 모이어티에 접합되는 절단가능한 또는 절단불가능한 링커 전구체이다.
본원에 기재된 바와 같이, 링커 전구체는 결합 모이어티에 연결되는 이종이작용성 기를 함유한다.
일부 측면에서, L'는 절단불가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00089
여기서:
p는 1 내지 10의 정수이고; 그리고
Figure pct00090
는 X에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, L'는
Figure pct00091
이다.
일부 측면에서, p는 5이다.
특정 측면에서, L'는 절단가능한 링커 전구체이다.
일부 측면에서, 링커 전구체는 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 일부 측면에서, 링커 전구체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00092
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 L- 또는 D-입체배열에서 자연-발생 아미노산 잔기이며, 단 Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이고;
Figure pct00093
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, Z1, Z2, Z3, 및 Z4는 독립적으로 존재하지 않거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-라이신, D-라이신, 및 글리신으로 구성된 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3, 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이다.
일부 측면에서, Z1은 존재하지 않거나 글리신이고; Z2는 존재하지 않거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌 및 글리신으로부터 선택되고; Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로부터 선택되고; Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-라이신, D-라이신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌 및 글리신으로부터 선택된다.
일부 측면에서, L'는
Figure pct00094
이다.
일부 측면에서, q는 5이다.
일부 측면에서, L'는 생체환원성 링커 전구체이다. 일부 측면에서, 생체환원성 링커 전구체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00095
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
R, R', R'', 및 R'''은 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 또는 2개의 제미날 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있으며;
Figure pct00096
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'은 산 절단가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00097
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00098
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'은 클릭-투-릴리스 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00099
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00100
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'은 피로포스파타제 절단가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는
Figure pct00101
이고;
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
Figure pct00102
는 X에 대한 부착 지점이다.
특정 측면에서, L'은 베타-글루코로니다제 절단가능한 링커 전구체이다. 일부 측면에서, L'는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00103
여기서:
q는 2 내지 10의 정수이고;
----는 부재 또는 결합이고; 그리고
Figure pct00104
는 X에 대한 부착 지점이다.
일부 측면에서, 화학식 (I-1)의 화합물은 하기로부터 선택된다:
Figure pct00105
일부 측면에서, 결합 모이어티는 화학식 (I-1)의 화합물과 반응하기 전에 전처리된다. 특정 측면에서, 화학식 (I-1)의 화합물은 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 결합 모이어티와 반응한다. 결합 모이어티가 항체인 측면에서, 항체는 화학식 (I-1)의 화합물과 반응하기 전에 사슬간 디설파이드를 환원시키기 위해 전처리될 수 있다.
실시예
일반 합성 방법 및 중간체
본 개시내용의 화합물은 본 개시내용 및 당해 분야의 지식에 비추어, 및/또는 하기 나타낸 반응식 및 합성 실시예를 참조하여 당업자에 의해 제조될 수 있다. 예시적인 합성 경로는 하기 반응식 및 실시예에 제시되어 있다. 다음 반응식 및 실시예에 나타나는 변수(예를 들어, "R" 기)는 본원의 다른 곳에 나타나는 변수와 독립적으로 읽어야 함을 이해해야 한다. 당업자는 하기 나타낸 반응식 및 실시예가 본원에 기재된 화합물의 제조를 설명하는 방법을 쉽게 이해할 것이다.
반응식에 사용된 약어는 일반적으로 당업계에서 사용되는 관례를 따른다. 명세서 및 실시예에 사용된 화학 약어는 다음과 같이 정의된다: 테트라하이드로푸란의 경우 "THF"; N,N-디메틸포름아미드의 경우 "DMF"; 메틸의 경우 "Me"; 부틸의 경우 "Bu"; 포름산의 경우 "FA"; 석유 에테르의 경우 "PE"; 메탄올의 경우 "MeOH"; 에탄올의 경우 "EtOH"; 디클로로메탄의 경우 "DCM"; 트리플루오로아세트산의 경우 "BOC" 또는 "Boc", "TFA"; 디메틸설폭사이드의 경우 "DMSO"; 에틸 아세테이트의 경우 "EtOAc"; 아세테이트의 경우 "OAc"; 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센의 경우 "dppf'; 디벤질리덴아세톤의 경우 "dba"; 1,1'-카보닐디이미다졸의 경우 "CDI"; 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 경우 "TBAF"; tert-부틸디메틸실릴 클로라이드의 경우 "TBSC1"; 디에틸 에테르의 경우 "Et2O"; 아세토니트릴의 경우 "ACN"; 시간의 경우 "h"; 분의 경우 "min"; 실온 또는 체류 시간의 경우 "rt"(상황에 따라 다르다); 수성의 경우 "aq.", 포화된 경우 "sat."; 분에 대한 "min"; 1-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트의 경우 "HOBt"; 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트 또는 N-[(디메틸아미노)-1H-1,2,3-트리아졸로-[4,5-b]피리딘-1-일메틸렌]-N-메틸메탄아미늄 헥사플루오로포스페이트 N-옥사이드의 경우 "HATU"; 디이소프로필에틸아민의 경우 "DIEA" 및 "iPrNEt2"; 트리에틸 아민의 경우 "Et3N" 및 "TEA".
Figure pct00106
반응식 1: 화합물(Ia)의 제조
Figure pct00107
실시예 1: 화합물(Ia)의 합성
Figure pct00108
단계 1: 화합물 2의 합성
THF(75.00 mL) 중 2-클로로-4-니트로페닐)아세트산(화합물 1, 5.00 g, 23.19 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 BH3-Me2S(THF 중 10 M)(5.80 mL, 58.0 mmol, 2.50 당량)를 질소 대기 하에 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EtOAc = 1:1)로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(3 g, 64%)을 황색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.10-8.05 (m, 1H), 7.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.99-3.91 (m, 2H), 3.16-3.09 (m, 2H).
Figure pct00109
단계 2: 화합물 3의 합성
톨루엔(150.00 mL) 중 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 2, 5.00 g, 24.800 mmol, 1.00당량) 및 tert-부틸 2-브로모아세테이트(29.0 mL, 148.28 mmol, 8.00 당량)의 교반된 용액에 Bu4NHSO4(6.74 g, 19.84 mmol, 0.80 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물에 NaOH(H2O 중 5 M)(500.00 mL)를 0℃에서 40분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(400 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EtOAc = 4:1)로 정제하여 tert-부틸 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세테이트(8 g, 65%)를 황색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.10-8.04 (m, 1H), 7.60 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.83-3.80 (m, 2H), 3.17-3.14(m, 2H), 1.45(s, 9H).
Figure pct00110
단계 3: 화합물 4의 합성
DCM(80.00 mL) 중 tert-부틸 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세테이트(화합물 3, 8.00 g, 16.14 mmol, 1.00 당량, 63.7%)의 교반된 용액에 TFA(16.00 mL)를 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공하에 농축하였다. 생성된 혼합물을 물(500 mL)로 희석하였다. 혼합물을 EtOAc(3 x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 이로써 [2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세트산(6.5 g, 조 물질)이 황색 오일로서 생성되었다. LCMS(ESI): 517(2M-H)-
Figure pct00111
단계 4: 화합물 5의 합성
DMF(65.00 mL) 중에 [2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세트산(화합물 4, 6.30 g, 21.84 mmol, 1.00 당량, 90%) 및 HATU(12.46 g, 32.76 mmol, 1.50 당량)의 교반된 용액에 CH3NH2·HCl(1.77 g, 26.21 mmol, 1.20 당량) 및 DIEA(15.20 g, 117.8 mmol, 4.00 당량)를 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 10:1)로 정제하여 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]-N-메틸아세트아미드(10 g, 순도: 50%, 수율: 84%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ESI): 273.28(M+H)+
Figure pct00112
단계 5: 화합물 6의 합성
THF(35.00 mL) 중 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]-N-메틸아세트아미드(화합물 5, 3.3 g, 12.10 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 BH3-THF(THF 중 1 M) (12.10 mL, 12.10 mmol, 1.00 당량) 질소 대기 하에 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 MeOH로 켄칭하였다. 잔류물을 1 N HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 수성 상을 포화 NaHCO3(포화, 수성)를 사용하여 pH 8로 염기성화하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하고, 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 이로써 [2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸](메틸)아민(2.5 g, 80%)이 황색 오일로서 생성되었다. LCMS(ESI): 259.26(M+H)+
Figure pct00113
단계 6: 화합물 7의 합성
THF(40 mL) 중 [2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸](메틸)아민(화합물 6, 2.50 g, 9.69 mmol, 1.00 당량) 및 Boc2O(2.53 g, 11.6 mmol, 1.20 당량)의 교반된 용액에 TEA(1.17 g, 11.6 mmol, 1.20 당량)를 25℃에서 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 5:1)로 정제하여 tert-부틸 N-[2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(1.70 g, 50%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ESI): 359.36(M+H)+
Figure pct00114
단계 7: 화합물 8의 합성
EtOH(85 mL) 및 H2O(17 mL) 중 tert-부틸 N-[2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 7, 1.70 g, 4.74 mmol, 1.00 당량) 및 NH4Cl(750 mg, 14.2 mmol, 3.00 당량)의 교반된 용액에 Fe(1.3 g, 23.7 mmol, 5.00 당량)를 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 EtOH(3 x 50 mL)로 세척하였다. 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(PE:EtOAc = 4:1)로 정제하여 tert-부틸 N-[2-[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(900 mg, 58%) 황색 오일로 수득하였다. LCMS(ESI): 329.33(M+H)+
Figure pct00115
단계 8: 화합물 9의 합성
THF(10 mL) 중 tert-부틸 N-[2-[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 8, 500 mg, 1.52 mmol, 1.00 당량)의 교반 용액에 25℃에서 디포스겐(601 mg, 3.04 mmol, 2.00 당량)을 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시키고 DMF(5 mL)에 재용해시켰다. DMF(20 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT1, 하기 기재된 바와 같이 제조됨, 499 mg, 1.82 mmol, 1.20 당량) 및 TEA(1.56 g, 15.45 mmol, 10.00 당량)의 교반된 혼합물에 상기 언급된 용액을 25℃에서 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 40 mL의 얼음물로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(5 x 40 mL)로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 10:1)로 정제하여 tert-부틸(2-(2-클로로-4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)메틸)우레이도)펜에톡시)에틸)(메틸)카바메이트(670 mg, 70%)를 백색 고체로서 얻었다. LCMS:(ESI): 628.63 (M+H)+
Figure pct00116
단계 9: 신규분해약물 P1의 합성
DCM(10 mL) 중 tert-부틸 N-[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 9, 670 mg, 1.07 mmol, 1 당량)의 교반된 용액에 TFA(2.5 mL)를 0℃에서 적가 하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 조 생성물을 다음 조건의 Prep-HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼, SunFire C18 OBD Prep 칼럼, 100 μm, 19x250 mm; 이동상, 물(0.05% TFA) 및 ACN(30분 내에 5% 상 B에서 60% 까지); 검출기, UV 220 nm. 수집된 분획을 동결건조하여 1-(3-클로로-4-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(500 mg, 89%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 528.53(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.77 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 2H), 7.49 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 5.19-5.1 (m, 1H), 4.55-4.41 (m, 4H), 3.75-3.67 (m, 4H), 3.21-3.15 (m,2H), 3.03-3.96 (m, 2H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.83-2.73 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.55-2.42 (m, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H).
Figure pct00117
단계 10: 화합물(Ia)의 합성
DMF(10 mL) 중 1-(3-클로로-4-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(신규분해약물 P1, 200 mg, 0.38 mmol, 1.00 당량) 및 루티딘(81 mg, 0.76 mmol, 2.00 당량)의 교반된 혼합물에 HOBT(26 mg, 0.19 mmol, 0.50 당량) 및 [4-[(2S)-5-(카바모일아미노)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐]메틸 4-니트로페닐 카보네이트(279 mg, 0.38 mmol, 1.00 당량)를 실온에서 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 대기 하에 40℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물(30 mL)로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM(3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(2 x 30 mL), 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 역상 컬럼(C18, 이동상 A: 물 중 0.1% FA, B: ACN)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 진공 하에 농축 건조시켰다. 조 생성물(60 mg)을 다음 조건의 Prep-HPLC에 의해 정제하였다(컬럼: Xselect CSH OBD 컬럼 30x150 mm 5 um, n; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 60 mL/분, 구배: 7분에 33 B에서 50 B, 220 nm, RT1:5.27분). 수집된 분획을 동결건조하여 [4-[(2S)-5-(카바모일아미노)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐]메틸 N-[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸]-N-메틸카바메이트(23.8 mg, 5%)를 백색 고체로서 얻었다. LCMS(ESI): 1126.11(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.99(s, 1H), 10.00(s, 1H), 8.88(s, 1H), 8.12-8.08(m, 1H),7.85-7.81(m, 2H), 7.70-7.67(m, 2H), 7.60-7.58(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.47-7.44(m, 1H), 7.28-7.25(m, 2H), 7.18-7.12(m, 2H), 7.00(s, 2H), 6.90(br s, 1H), 5.97-5.95(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.12-5.05(m, 1H), 4.98(s, 2H), 4.42-4.32(m, 4H), 4.18-4.15(m, 1H), 3.56-3.40(m, 4H), 3.37-3.36(m, 3H),3.05-2.90(m, 3H), 2.89-2.85(m, 5H), 2.72-2.55(m, 2H), 2.40-2.33(m, 2H), 2.25-2.15(m, 2H), 2.00-1.87(m, 2H), 1.74-1.57(m, 2H), 1.50-1.42(m, 5H), 1.22-1.10(m, 3H), 0.85-0.80(m, 6H).
Figure pct00118
반응식 2: 화합물(Ib)의 제조
Figure pct00119
실시예 2: 화합물(Ib)의 합성
Figure pct00120
단계 1: 화합물 11의 합성
DMF(80 ml) 중 메틸 4-브로모-2-(브로모메틸)벤조에이트(화합물 10, 20.0 g, 64.8 mmol, 1.00 당량) 및 3-아미노피페리딘-2,6-디온 하이드로클로라이드(10.64 g, 83.0 mmol, 1.28 당량)의 교반된 혼합물에 질소 대기 하에 25℃에서 TEA(22.4 mL, 162.2 mmol, 2.50 당량)로 적가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 25℃에서 H2O(60 mL), AcOH(23 mL) 및 Et2O(60 mL)를 순서대로 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고 Et2O(60 mL)로 세척하였다. 이로써 3-(5-브로모-1-옥소-3H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온(9.0 g, 42%)이 연한 청색 고체로서 생성되었다. LCMS(ESI): 323.32(M+H)+
Figure pct00121
단계 2: 화합물 12의 합성
DMF(8 mL) 중 3-(5-브로모-1-옥소-3H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온(화합물 11, 1.00 g, 3.09 mmol, 1.00 당량) 및 dppf(51 mg, 0.093 mmol, 0.03 당량)의 교반된 혼합물에 Zn(OAc)2(170 mg, 0.928 mmol, 0.30 당량), Zn(CN)2(545 mg, 4.64 mmol, 1.50 당량) 및 Pd2(dba)3(28 mg, 0.031 mmol, 0.01 당량)을 질소 대기 하에 25℃에서 첨가했다. 최종 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 마이크로파 방사선으로 조사하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과하였다. 여과 케이크를 MeOH(3 x 30 mL)로 세척했다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 플래시 크로마토그래피(실리카 겔, 80 g, DCM: MeOH=10:1)로 처리하여 목적 생성물 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-카보니트릴(400 mg, 47%)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 270(M+H)+
Figure pct00122
단계 3: INT1의 합성
MeOH(25 mL) 중 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-카보니트릴(화합물 12, 3.0 g, 11.14 mmol, 1.00 당량) 및 HCl(12M)(3.6 mL)의 교반된 혼합물에 PtO2(1.25 g, 5.5 mmol, 0.49 당량)를 25℃에서 첨가하였다. 혼합물을 수소 풍선을 사용하여 수소 대기 하에 실온에서 16시간 동안 수소화시켰다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 MeOH(2 x 30 mL)로 세척하였다. 여액을 감압하에 농축하였다. 생성된 고체를 DCM:MeOH(3:1)(3 x 30 mL)로 세척하고 건조시켰다. 그 결과 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(2.5 g, 80%)이 회색 고체로서 생성되었다. LCMS(ESI): 274(M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.02 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.4Hz, 1H),5.16-5.11 (m, 1H), 4.52 (d, J=17.2Hz, 1H), 4.40 (d, J=17.2Hz, 1H), 2.96-2.90 (m, 1H), 2.60-2.54 (m, 1H), 2.43-2.34 (m, 1H), 2.06-1.96 (m, 1H)
Figure pct00123
단계 4: 화합물 14의 합성
THF(75 mL) 중 (2-클로로-4-니트로페닐)아세트산(화합물 13, 5.00 g, 22.50 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 BH3-Me2S(THF 중 10 M)(5.60 mL, 56 mmol, 2.50 당량)를 질소 대기 하에 0°C에서 적가하였다. 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼에 적용하고 PE/EtOAc(5:1)로 용리하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(4.44 g, 88%)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.10-8.05 (m, 1H), 7.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.99-3.91 (m, 2H), 3.16-3.09 (m, 2H)
Figure pct00124
단계 5: 화합물 15의 합성
DMF(50.00 mL) 중 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 14, 4.44 g, 22.02 mmol, 1.00 당량) 및 이미다졸(4.50 g, 66.06 mmol, 3.00 당량)의 교반된 혼합물에 25℃에서 TBSC1(6.97 g, 46.25 mmol, 2.10 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(100 mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(3 x 100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼에 적용하고 PE/EtOAc(10:1)로 용리하여 tert-부틸[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]디메틸실란(6.6 g, 90%)을 무색 오일로 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.24(s, 1H), 8.06-8.04 (m, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.89-3.86 (m, 2H), 3.06-0.04 (m, 2H), 0.85(s, 9H), 0.04(s, 6H).
Figure pct00125
단계 6: 화합물 16의 합성
EtOH(110 mL)/물(55 mL) 중 tert-부틸[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]디메틸실란(화합물 15, 5.70 g, 18.05 mmol, 1.00 당량) 및 Fe(10.08 g, 180.45 mmol, 10.00 당량)의 혼합물에 NH4Cl(9.65 g, 180.45 mmol, 10 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 EtOH(3 x 50 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 물(100 mL)로 희석하고 EtOAc(50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 증발 건조시켜 4-[2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]-3-클로로아닐린(5.2 g, 조 물질)을 연갈색 오일로서 수득하였다. LCMS(ESI): 286.29(M+H)+
Figure pct00126
단계 7: 화합물 17의 합성
DMF(3 mL)중 4-[2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]-3-클로로아닐린(화합물 16, 200.00 mg, 0.70 mmol, 1.00 당량) 및 TEA(141 mg, 1.40 mmol, 2.00 당량)의 용액에 DMF(1 mL) 중 CDI(113 mg, 0.70 mmol, 1.00 당량)를 질소 하에 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 상기 용액 및 TEA(141 mg, 1.40 mmol)를 DMF(2 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT1, 192 mg, 0.70 mmol, 1.00 당량)의 용액에 적가하였다. 동일한 반응을 2회 반복하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(20 mL)로 희석하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼(DCM:MeOH=10:1)으로 정제하여 1-(4-[2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]-3-클로로페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(170 mg, 21%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 585.59(M+H)+
Figure pct00127
단계 8: 신규분해약물 P3의 합성
THF(2.00 mL) 중 1-(4-[2-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]에틸]-3-클로로페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(화합물 17, 170.00 mg, 0.29 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 TBAF(THF 중 1 N, 0.58 mL, 0.58 mmol, 2.00 당량)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응물을 Prep-TLC(DCM:MeOH=10:1)로 정제하여 조 1-(3-클로로-4-(2-하이드록시에틸)페닐)-3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)메틸)우레아 147 mg을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 471.47(M+H)+
Figure pct00128
단계 9: 화합물 19의 합성
2-메틸-2-설파닐프로판-1-올(화합물 18, 1.4 g, 13.2 mmol, 1.00 당량) 및 5-니트로-2-[(5-니트로피리딘-2-일)디설파닐]피리딘(화합물 120, 2.05 g, 6.67 mmol, 0.50 당량)을 디클로로메탄(3.50 mL) 및 MeOH(3.50 mL)의 용매 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15℃에서 교반하였다. 이어서, 이산화망간(2.29 g, 26.2 mmol, 2 당량)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15℃에서 15분 동안 교반하였다. LCMS 추적은 반응이 완료되었음을 보여주었다. 반응물을 증발 건조시키고 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% NH4HCO3), 30분 내에 10%에서 100%까지의 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 진공 하에 농축 건조하여 2-메틸-2-[(5-니트로피리딘-2-일)디설파닐]프로판-1-올(2.2 g, 58%)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 261(M+H)+.
Figure pct00129
단계 10: 화합물 20의 합성
무수 DCM(30 mL) 중 2-메틸-2-[(5-니트로피리딘-2-일)디설파닐]프로판-1-올(화합물 20, 1.0 g, 3.84 mmol, 1.00 당량)의 용액에 MeSO2Na(1.57 g, 15.4 mmol, 4.00 당량) 및 요오드(1.95 g, 7.68 mmol, 2.00 당량)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔류물을 실리카겔 상에서 컬럼 크로마토그래피(TLC: PE:EA=3:1, Rf = 0.60; 석유 에테르 중 0-35% EtOAc)로 정제하여 2-(메탄설포닐설파닐)-2-메틸프로판-1-올(80 mg, 10%)을 노란색 오일를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3C1): δ 3.50(s, 2H), 3.33(s, 3H), 2.16(br s, 1H), 1.47(s, 6H).
Figure pct00130
단계 11: 화합물 (Ib)의 합성
DMF(4 mL) 중 1-[3-클로로-4-(2-하이드록시에틸)페닐]-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(신규분해약물 P3, 200.00 mg, 0.42 mmol, 1.00 당량) 및 TEA(129 mg, 1.26 mmol, 3.00 당량)의 용액에 DMF(1 mL) 중 CDI(138 mg, 0.84 mmol, 2.00 당량)의 용액을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물(50 mL)로 희석하고 EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(20 mL x 3), 염수(20 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 증발 건조시켜 조 생성물 (2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸 이미다졸-1-카복실레이트, 200 mg을 담황색 고체로서 얻었다. DMF(8 mL) 중 조 생성물(100.00 mg, 0.18 mmol, 1.00 당량) 및 CS2CO3(115 mg, 0.35 mmol, 2.00 당량)의 용액에 DMF(2 mL) 중 2-(메탄설포닐설파닐)-2-메틸프로판-1-올(화합물 20, 59 mg, 0.32 mmol, 1.80 당량)을 실온에서 적가하였다. 반응물을 15℃에서 22시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(50 ml) 및 빙냉수(100 ml)로 희석하였다. 유기층을 분리하였다. 수상을 EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(30 mL x 3)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 증발 건조시켜 조 생성물(150 mg)을 황색 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC(컬럼: Xselect CSH OBD 컬럼 30x150 mm 5 um; 이동상 A: 물(0.1% FA), 이동상 B: ACN; 유속: 60 mL/분; 구배: 38 B에서 58 B 7분, 220 nm, RT1:5.12분)로 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조하여 1-[3-클로로-4-[2-([[2-(메탄설포닐설파닐)-2-메틸프로폭시]카보닐]-옥시)에틸]페닐]-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(15.7 mg, 11%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 681.68 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.99 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 7.70 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.24-7.17 (m, 1H), 6.87-6.84 (m, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.13-5.11 (m, 1H), 4.42-4.40 (m, 2H), 4.32-4.28 (m, 4H), 3.54 (s, 3H), 3.00-2.87 (m, 3H), 2.62-2.58 (m, 1H), 2.44-2.34 (m, 1H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.45 (s, 6H).
Figure pct00131
반응식 3: 화합물(Ic)의 제조
Figure pct00132
실시예 3: 화합물(Ic)의 합성
Figure pct00133
단계 1: 화합물 23의 합성
DMF(20 mL) 중 tert-부틸(2-아미노페닐)(메틸)카바메이트(화합물 22, 300 mg, 1.35 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 CDI(218 mg, 1.35 mmol, 1.00 당량) 및 TEA(68 mg, 1.35 mmol, 1.00 당량)를 질소 대기 하에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT1, 368 mg, 1.35 mmol, 1.00 당량)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 75℃에서 밤새 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 생성된 혼합물을 물(30 mL)로 켄칭하고 DCM(3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 tert-부틸 N-[2-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]-N-메틸카바메이트(300 mg, 42%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI): 522(M+H)+
Figure pct00134
단계 2. 신규분해약물 P4 합성
DCM(20 mL) 중 tert-부틸 N-[2-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]-N-메틸카바메이트(화합물 23, 300 mg, 1.00 당량)의 교반된 용액에 TFA(5 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 조 생성물을 하기 조건(C18, 이동상 A: 물(0.1% FA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분)으로 역상으로 정제하였다. 수집된 분획을 진공 하에 농축시켜 3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-1-[2-(메틸아미노)페닐]우레아(210 mg, 87%)를 백색 고체로 수득하였다. LCMS(ESI): 422 (M+H)+. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.99(s, 1H), 7.69 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.60(s, 1H), 7.53(s, 1H), 7.45 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.26-7.24(m, 1H), 6.99-6.93(m, 1H), 6.76-6.72(m, 1H), 6.60-6.55(m, 2H), 5.14-5.08(m, 1H), 5.00-4.85(br s, 1H), 4.48-4.28(m, 4H), 2.92-2.82(m, 1H), 2.70(s, 3H), 2.62-2.57(m, 1H), 2.49-2.41(m, 1H), 2.02-1.95(m, 1H).
Figure pct00135
단계 3. 화합물(Ic)의 합성
DMF(3.00 mL) 중 3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-1-[2-(메틸아미노)페닐]우레아(P4, 150.00 mg, 0.36 mmol, 1.00 당량), 2,6-루티딘(76 mg, 0.71 mmol, 2.00 당량) 및 HOBT(96 mg, 0.71 mmol, 2.00 당량)의 교반된 혼합물에 [4-[(2S)-5-(카바모일아미노)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐]메틸 4-니트로페닐 카보네이트(394 mg, 0.53 mmol, 1.50 당량)을 질소 대기 하에 실온에서 첨가했다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 이동상 A: 물(0.1% FA), 이동상 B: ACN. 이로써 조 생성물(60 mg)을 백색 고체로 제공하였다. 조 생성물(60 mg)을 다음 조건의 Prep-HPLC로 정제했다(컬럼: Xselect CSH OBD 컬럼 30x150 mm 5 um, n; 이동상 A: 물(0.1% FA), 이동상 B: ACN; 유량: 60 mL/분, 구배: 7분에 24 B에서 44 B로, 220 nm, RT1:6.33, RT2:) 수집된 분획을 동결건조하여 [4-[(2S)-5-(카바모일아미노)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐]메틸 N-[2-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]-N-메틸 카바메이트(18.1 mg, 5%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI): 1020 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.99 (s, 1H), 9.96(s, 1H), 8.19-8.06 (m, 3H), 7.79 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53-7.41 (m, 5H), 7.20-7.05 (m, 4H), 7.00(s, 2H), 6.95-6.90(m, 1H), 5.95(br s, 1H), 5.41(s, 2H), 5.18-4.89(m, 3H), 4.44-4.20(m, 5H), 4.19-4.17(m, 1H), 3.09(s, 3H), 3.07-2.85(m, 3H), 2.22-2.02(m, 2H), 2.00-1.85(m, 2H), 1.71-1.25(m, 10H), 1.20-1.12(m, 3H), 0.84-0.80(m, 6H)
반응식 4는 화합물(Id)이 신규분해약물 P1로부터 어떻게 제조되었는지를 보여준다.
Figure pct00136
반응식 4: 화합물(Id)의 제조
화합물(Id)의 합성
DMF(2.00 mL) 중 1-(3-클로로-4-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(P1, 40.00 mg, 0.076 mmol, 1.00 당량) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥사노에이트(25.00 mg, 0.081 mmol, 1.07 당량)의 교반된 혼합물에 실온에서 DIEA(20.00 mg, 0.16 mmol, 2.04 당량)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물(30 mL)로 켄칭하고, DCM(3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(30 mL), 염수(30 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 하기 조건에 의해 정제하였다: 칼럼: SunFire C18 OBD Prep 칼럼, 100 um, 19 mm x 250 mm; 이동상 A: 물(0.05% TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분; 구배: 8.5분에 25 B에서 55 B로; 220 nm; RT1: 8분. 수집된 분획을 동결건조하여 N-[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)-N-메틸헥산아미드(화합물 (Id), 24 mg, 43%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS:(ES, m/s): 721,723 (M+H)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) d 10.99 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.41 (d, J=9.6Hz, 1H), 7.18-7.16 (m, 2H), 7.00(d, J= 5.6Hz, 2H), 6.85-6.80 (m, 1H), 5.12-5.05 (m, 1H), 4.42-4.33 (m, 5H), 3.39-3.36 (m, 3H), 2.91-2.76 (m, 7H), 2.68-2.52 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 1H), 2.33-2.20 (m, 3H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.48-1.44 (m, 5H), 1.28-1.12 (m, 3H).
반응식 5A 및 5B는 대체 트리펩티드 링커로 신규분해약물 P1의 복합체를 제조하는 방법을 보여준다.
Figure pct00137
반응식 5A: 신규분해약물 P1-트리펩티드 링커 복합체의 합성
Figure pct00138
반응식 5B: 신규분해약물 P1-트리펩티드 링커 복합체의 합성(계속)
반응식 6A 및 6B는 β-글루쿠로나이드 링커로 신규분해약물 P1의 복합체를 제조하는 방법을 보여준다.
Figure pct00139
반응식 6A: 신규분해약물 P1-β-글루쿠로나이드 링커 복합체의 합성
단계 1. 화합물 25의 합성
실온에서 SOCl2(25 mL) 중 3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-프로파노산(화합물 24, 5.00 g, 16.06 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에. 생성된 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 원하는 생성물을 LCMS(MeOH를 갖는 유도체 MS=326)로 검출할 수 있다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켜 9H-플루오렌-9-일메틸 N-(3-클로로-3-옥소프로필)카바메이트(화합물 25, 7.5g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에 사용하였다. 1H-NMR 분석은 이것이 원하는 생성물(MeOH를 갖는 유도체)임을 나타내었다. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.81-7.77 (m, 2H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 2H), 5.33 (s, 1H), 4.42 (d, J=3.0 Hz, 2H), 4.24 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.74-3.67 (m, 3H), 3.50 (d, J=3.0 Hz, 2H), 2.59 (t, J=6.0 Hz, 2H).
단계 2. 화합물 28의 합성
ACN(100 mL, 190.24 mmol, 75.00 당량) 중 4-포르밀-2-니트로페놀(화합물 27, 4.21 g, 25.19 mmol, 1.00 당량) 및 Ag2O(7.00 g, 30.20 mmol, 1.20 당량)의 교반된 용액에 화합물 26(10.00 g, 25.17 mmol, 1.00 당량)을 N2 대기 하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 DCM(50 ml x 3)으로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EA(PE:EA=1:2)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-(4-포르밀-2-니트로페녹시)옥산-2-카복실레이트(화합물 28, 10.5 g, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR 분석은 그것이 원하는 생성물임을 나타내었다. LCMS(ES, m/z):484 [M+1]+. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3 ) δ 10.00 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13-8.09 (m, 1H), 7.52 (d, J=3.0 Hz, 1H), 5.47-5.29 (m, 4H), 4.37-4.35 (m, 1H), 3.75-3.73 (m, 3H), 2.17-2.06 (m, 9H).
단계 3. 화합물 29의 합성
MeOH(50 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-(4-포르밀-2-니트로페녹시)옥산-2-카복실레이트(화합물 28, 6.00 g, 12.41 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 NaBH4(0.47 g, 12.42 mmol, 1.00 당량)를 N2 대기 하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 실온에서 물로 켄칭하였다. 생성된 것을 Na2SO4로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 DCM으로 세척하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켜 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-(하이드록시메틸)-2-니트로페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 29, 5.5 g, 91%)를 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):486 [M+H]+.
단계 4. 화합물 30의 합성
EA(60 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-(하이드록시메틸)-2-니트로페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 29, 5.50 g, 11.33 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 실온에서 Pd/C(1.10 g, 10%)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 대기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 DCM 및 MeOH로 세척하고, 여액을 진공 하에 농축시켜 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-아미노-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 30, 4.0 g, 77%)를 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에 사용하였다. LCMS(ES, m/z):456[M+H]+.
단계 5. 화합물 31의 합성
THF(10 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-아미노-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 30, 1.00 g, 2.19 mmol, 1.00 당량) 및 NaHCO3(0.20 g, 2.40 mmol, 1.1 당량)의 교반된 용액에 0℃에서 N2 대기 하에 화합물 25(0.87 g, 2.62 mmol, 1.20 당량)를 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 0℃에서 6시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 실온에서 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기층을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EA(EA=100%)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-프로판아미도)-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 31, 1.1 g, 66%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):749 [M+H]+.
단계 6. 화합물 33 합성
DMF(15 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 31, 1.50 g, 2.00 mmol, 1.00 당량) 및 비스(4-니트로페닐)카보네이트(화합물 32, 0.68 g, 2.24 mmol, 1.12 당량)의 교반된 혼합물에 DIEA(0.52 g, 4.01 mmol, 2.00 당량)를 N2 대기 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 40분 내 10%에서 90% 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 진공에서 농축 건조시켜 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)-4-[[(4-니트로페녹시카보닐)옥시]메틸]페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 33, 1.4 g, 48%)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 914 [M+H]+.
Figure pct00140
반응식 6B: 신규분해약물 P1-β-글루쿠로나이드 링커 복합체의 합성
단계 7. 화합물 34의 합성
DMF(10 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)-4-[[(4-니트로페녹시카보닐)옥시]메틸]페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 33, 1.00 g, 1.09 mmol, 1.00 당량) 및 1-(3-클로로-4)-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(신규분해약물 P1, 0.58 g, 1.09 mmol, 1.00 당량)]의 교반된 혼합물에 HOBT(1.18 g, 8.72 mmol, 8.00 당량) 및 2,4-디메틸피리딘(1.07 g, 8.72 mmol, 8.00 당량)을 N2 대기의 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 추가 정제에 사용하였다. 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 40분 동안 10%에서 80% 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 진공 하에 농축하여 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 34, 800 mg, 56%)을 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 1302[M+H]+.
단계 8. 화합물 35의 합성
THF(80 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로)-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 34, 800.00 mg, 0.61 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 N2 대기 하에 실온에서 HCl(6 N, 80 mL)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 진공하에 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 40분 내에 0%에서 80%까지의 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 동결건조하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6)-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 35, 230 mg, 32%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 1162[M+H]+.
단계 9. 화합물 36의 합성
DMF (2 mL) 중 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 35, 230 mg, 0.2 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 질소 대기 하에 실온에서 피페리딘(0.4 mL)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 10분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 하기 조건(컬럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 컬럼, 19x250 mm, 5um; 이동상 A: 물(0.05% TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분, 구배: 7분 내 20 B에서 40 B로, 220nm, RT 1:5.78분)으로 Prep HPLC에 의해 직접 추가 정제하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[2-(3-아미노프로판아미도)-4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]-에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 36, 35 mg, 18%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 940[M+H]+.
단계 10. 화합물(Ie)의 합성
DMF(3 mL) 중 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[2-(3-아미노프로판아미도)-4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 36, 30 mg, 0.03 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 DIEA(13 mg, 0.10 mmol, 3.00 당량) 및 화합물 37(30 mg, 0.10 mmol, 3.00 당량)을 질소 대기 하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 하기 조건(컬럼: Xselect CSH OBD 컬럼 30 x 150 mm 5 um, 이동상 A: 물(0.1% FA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분; 구배: 10분에 21 B에서 36 B, 220 nm, RT1:11.15분)으로 Prep-HPLC에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6)-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸]-(메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-[3-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]프로판아미도]페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 (Ie), 10.5 mg, 28%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 1133[M+H]+. 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10.9 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.92-7.68 (m, 4H), 7.52 (s, 1H), 7.44 (d, J=3,0 Hz, 1H), 7.18-6.99 (m, 7H), 5.76 (s, 1H), 5.20-5.10 (m, 2H), 4.98 (br s, 2H), 4.76-4.74 (m, 1H), 4.42-4.33 (m, 4H), 3.65 (br s, 1H), 3.58-3.54 (m, 5H), 3.35 (d, J=6 Hz, 2H), 2.90-2.83 (m, 7H), 2.57-2.55 (m, 3H), 2.45-2.30 (m, 1H), 2.02-1.98 (m, 4H), 1.48-1.42 (m, 5H), 1.40-1.20 (m, 3H).
반응식 7은 하이드라진 링커로 신규분해약물 P6의 복합체를 제조하는 방법을 보여준다.
Figure pct00141
반응식 7: 신규분해약물 P6-하이드라존 링커 복합체의 합성
단계 1. 화합물 38의 합성
THF(2.00 mL) 중 4-아미노아세토페논(화합물 37, 100 mg, 0.73 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 디포스겐(0.40 mL)을 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 생성된 고체를 DMF(1.50 mL)에 재용해시켰다. 교반된 용액에 DMF(3.00 mL) 및 TEA(0.50 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT1, 200 mg, 0.73 mmol, 1.00 당량)을 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물에 물(5 mL)을 첨가하고 CH2Cl2(3 x 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.05% TFA), 35분 내 10%에서 50% 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집 분획을 농축 건조하여 1-(4-아세틸페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(화합물 38, 80 mg, 25%)를 밝은 황색 고체로서 수득하였다. LCMS:(ES.m/z):435[M+1]+.
단계 2. 화합물(If)의 합성
메탄올(5.00 mL) 중 1-(4-아세틸페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(화합물 38 , 80.00 mg, 0.18 mmol, 1.00 당량) 및 6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산하이드라지드; 트리플루오로아세트산(75mg, 1.20 당량)의 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 침전된 고체를 여과에 의해 수집하고 MeOH(2 x 5 mL)로 세척하였다. 조 고체를 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: C18 컬럼; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분에 10%에서 50%로 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 DCM(3 x 5 mL)으로 추출하고 진공 하에 농축하였다. 이로써 3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-1-[4-[(1E)-1-[[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]이미노]에틸]페닐]우레아(화합물 (If), 4.4 mg, 3.7%)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS:(ES.m/z): 642[M+1]+.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.99 (s, 1H), 10.26-10.15 (m, 1H), 8.82 (s, 1H),7.69-7.62(m, 3H), 7.52-7.43 (m, 4H), 7.01-6.99 (m, 2H), 5.13-5.09 (m, 1H), 4.42-4.33 (m, 4H), 2.98-2.82 (m, 1H), 2.62-2.58 (m, 2H), 2.20-2.12 (m, 2H), 1.58-1.51 (m, 6H),1.26-1.09 (m,6H)
반응식 8은 4차 아민 링커로 신규분해약물 P2의 복합체를 제조하는 방법을 보여준다.
Figure pct00142
반응식 8: 신규분해약물 P2-4차 아민 링커 복합체의 합성
단계 1. 화합물 40의 합성
DMF(2 mL) 중 N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[[4-(하이드록시메틸)페닐]카바모일]부틸]카바모일]-2-메틸프로필]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미드(화합물 39, 100 mg, 0.18 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 DCM(2 mL) 중 SOCl2(20 mg, 0.18 mmol, 1 당량)를 0℃에서 N2하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 빙냉수(20 mL)로 희석하고, DCM(10 mL*3)으로 추출하고, 합한 유기층을 물(10 mL), 염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축 건조하여 N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[[4-(클로로메틸)페닐]-카바모일]부틸]카바모일]-2-메틸프로필]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미드(화합물 40, 80 mg, 53%)의 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 591,593 [M+H]+
단계 2. 화합물 42의 합성
THF(130 mL) 중 (2-클로로-4-니트로페닐)아세트산(화합물 41, 8.60 g, 39.9 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 BH3-Me2S(10.00 mL, 105.4 mmol, 2.64 당량)을0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EA=1:2)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(1:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 42, 7.7 g, 96%)을 황색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.27 (d, J=4.0Hz, 1H), 8.11-8.07 (m, 1H), 7.53 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.99 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.15 (t, J = 8.0 Hz, 2H).
단계 3. 화합물 43의 합성
톨루엔(70 mL) 중 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 42, 7.70 g, 38.2 mmol, 1.00 당량) 및 tert-부틸 2-브로모아세테이트(57.74 g, 296.0 mmol, 7.75 당량)의 교반된 혼합물에 Bu4NHSO4(10.37 g, 30.6 mmol, 0.80 당량)를 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 상기 혼합물에 H2O(90 mL) 중 NaOH(15.00 g, 375.0 mmol, 9.82 당량)를 0℃에서 30시간에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 4시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EA=3:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(5:1)로 용리하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세테이트(화합물 43, 12.2 g, 91 %)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 4.0Hz, 1H), 8.07-8.03 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.83 (t, J= 8.1 Hz, 2H), 3.16(t, J= 8.1 Hz, 2H), 1.45(s, 9H).
단계 4. 화합물 44의 합성
DCM(120 mL) 중 tert-부틸 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세테이트(화합물 43, 12.20 g, 38.6 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 TFA(20 mL)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 이로써 [2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세트산(화합물 44, 8.4 g, 83%)이 황색 고체로서 수득하였다. LCMS:(ES, m/s): 517 (2M-H)- 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.64(s, 1H), 8.20 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.11-8.08 (m, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.74 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.06(t, J= 8.0 Hz, 2H).
단계 5. 화합물 45의 합성
DMF(80 mL) 중 [2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]아세트산(화합물 44, 8.40 g, 32.35 mmol, 1.00 당량) 및 HATU(19.19 g, 50.47 mmol, 1.56 당량)의 교반된 혼합물에 질소 대기 하에 0℃에서 CH3NH2·HCl(2.69 g, 39.79 mmol, 1.23 당량) 및 DIEA(17.31 g, 133.93 mmol, 4.14 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 물/얼음으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM(3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 (DCM: MeOH = 10:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]-N-메틸아세트아미드(화합물 45, 7.2 g, 81%)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS:(ES, m/s): 273,275 (M+H)+
단계 6. 화합물 46의 합성
THF(70 mL) 중 2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]-N-메틸아세트아미드(화합물 45, 7.20 g, 26.40 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 BH3-THF(THF 중 10 M, 52.0 mL, 520.0 mmol, 20 당량)를 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응을 MeOH로 켄칭하였다. 잔류물을 1N HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 추출하였다. 수성상을 포화 NaHCO3(포화, 수성)를 사용하여 pH 8로 염기성화하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하고, 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 (DCM: MeOH = 8:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 [2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸](메틸)아민(화합물 46, 5.4 g, 79%)을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS:(ES, m/s): 259,261 (M+H)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.26 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.15-8.12 (m, 1H), 7.73 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.72 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.61(t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.10 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.87 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H).
단계 7. 화합물 47의 합성
THF(20.00 mL) 중 [2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸](메틸)아민(화합물 46, 4.00 g, 15.46 mmol, 1.00 당량) 및 Boc2O(3.80 g, 17.41 mmol, 1.13 당량)의 교반된 혼합물에 H2O(20.00 mL) 중 NaHCO3(4.00 g, 47.61 mmol, 3.08 당량)를 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 (DCM:MeOH = 12:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 47, 4.8 g, 77%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: (ES, m/s): 359,361(M+H)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.13-8.10 (m, 1H), 7.67 (d, J=8.0Hz, 1H), 4.05-4.00(m, 1H), 3.69 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.50(t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.28 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.07(t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.75(s, 3H), 1.36(s, 9H).
단계 8. 화합물 48의 합성
EtOH(112.00 mL) 중 tert-부틸 N-[2-[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 47, 5.60 g, 15.6 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 실온에서 H2O(12.00 mL) 중 NH4Cl(2.50 g, 46.74 mmol, 2.99 당량) 및 Fe(4.40 g, 78.79 mmol, 5.05 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 생성된 혼합물을 DCM(3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 (DCM:MeOH = 10:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[2-[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 48, 4.2 g, 81%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS:(ES, m/s): 329,331 (M+H)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.96 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.59(d, J= 4.0 Hz, 1H), 6.46-6.43 (m, 1H), 5.18(br s, 2H), 3.50-3.45(m, 4H), 3.29-3.26(m, 2H), 2.75-2.71(m, 5H), 1.38(s, 9H).
단계 9. 화합물 49의 합성
THF(3 mL) 중 tert-부틸 N-[2-[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에톡시]에틸]-N-메틸카바메이트(화합물 48, 100 mg, 0.30 mmol, 1.00 당량)의 용액에 THF(2 mL) 중 LiAlH4(92 mg, 2.43 mmol, 8.00 당량)를 질소 대기 하에 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 5개 반응이 병렬로 실행되었다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 이어서, 반응물을 1N NaOH(10 mL)로 켄칭하고, 여과하고, 진공 하에 건조될 때까지 농축시킨 다음, 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분 내 0%에서 60% 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 농축 건조하여 3-클로로-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]에틸]아닐린, 49(180 mg, 44%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 243,245 [M+H]+
단계 10. 화합물 50의 합성
THF(9 mL) 중 3-클로로-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]에틸]아닐린(화합물 49, 140 mg, 0.58 mmol, 1.00 당량)의 용액에 디포스겐(137 mg, 0.69 mmol, 1.20 당량)을 질소 대기 하에 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응 용액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DMF(2 mL)에 재용해시킨 다음, DMF(4 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(158 mg, 0.58 mmol, 1.00 당량) 및 TEA(117 mg, 1.15 mmol, 2.00 당량)의 용액을 질소 대기 하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 생성된 용액을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분 내 0%에서 50% 구배; 검출기, UV 254 nm. 생성물 100 mg을 무색 고체로 수득하였다. 조 생성물을 하기 조건으로 Prep-HPLC에 의해 정제하였다: 칼럼: XBridge Shield RP18 OBD 칼럼, 19x250 mm, 10 um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분; 구배: 7분에 14%에서 32%로; 220 nm; RT1: 5.25분. 수집된 분획을 동결건조하여 1-(3-클로로-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)- 1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(화합물 50, 60 mg, 18%)을 무색 고체로서 수득하였다 . LCMS(ES, m/z): 542,544 [M+H]+
단계 11. 화합물(Ig)의 합성
DMF(1 mL) 중 N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(카바모일아미노)-1-[[4-(클로로메틸)페닐]-카바모일]부틸]카바모일]-2-메틸프로필]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미드(화합물 40, 66 mg, 0.11 mmol, 1.00 당량), 1-(3-클로로-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(화합물 50, 60 mg, 0.11 mmol, 1.00 당량) 및 DIEA(29 mg, 0.22 mmol, 2.00 당량)의 용액에 공기 중에서 실온에서 TBAI(4 mg, 0.01 mmol, 0.10 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 추적은 반응이 완료되었음을 보여주었다. 생성된 혼합물을 하기 조건으로 역상 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.05%TFA), 40분에 5%에서 45% 구배; 검출기, UV 254 nm. 조 생성물 90 mg을 황색 오일로서 수득하였다. 그런 다음 조 생성물을 하기 조건에 의해 재정제하였다: 칼럼: Xselect CSH OBD 칼럼 30* 150 mm 5 um, n; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분; 구배: 7분에 15 B에서 35 B; 220 nm; RT1:6.00분. 이로써 ([4-[(2S)-5-(카바모일아미노)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부탄아미도]펜탄아미도]페닐]메틸)[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸]디메틸아자늄, 화합물(Ig)(19 mg, 14.8%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 1096 [M-FA]+, 549 [1/2(M-FA)]+; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.48 (s, 1H), 7.77-7.72 (m, 3H), 7.55 - 7.47 (m, 3H), 7.37-7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.18 - 7.14 (m, 2H), 6.77 (s, 2H), 5.17-5.13 (q, J = 8, 4Hz, 1H), 4.51 -4.46 (m, 5H), 4.35 (s, 2H), 4.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 3.22-3.15 (m, 1H), 3.11-3.05 (m, 1H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.92 (s, 6H), 2.89 - 2.84 (m, 1H), 2.81 - 2.73 (m, 1H), 2.54-2.43 (m, 1H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.21 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.78-1.69 (m, 1H), 1.64-1.59 (m, 7H), 1.32-1.25 (m, 2H), 0.98-0.96 (m, 6H).
반응식 9A 및 9B는 펩티드-함유 링커로 신규분해약물 P13의 복합체를 제조하는 방법을 보여준다.
Figure pct00143
반응식 9A: 신규분해약물 P13-펩티드 링커 복합체의 합성
Figure pct00144
반응식 9B: 신규분해약물 P13-펩티드 링커 복합체의 합성
반응식 10은 화학식 (Ih)의 화합물의 합성을 보여준다.
Figure pct00145
반응식 10: 신규분해약물 P1-β-글루쿠로나이드 링커 복합체(화합물 (Ih))의 합성
단계 1. 화합물 63의 합성
3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노산(화합물 62, 5.00 g, 16.06 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 SOCl2(25 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 원하는 생성물을 LCMS(MeOH를 갖는 유도체 MS=326)로 검출할 수 있었다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 진공하에 농축하여 9H-플루오렌-9-일메틸 N-(3-클로로-3-옥소프로필)카바메이트(화합물 63, 7.5 g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. 1H NMR 분석은 이것이 원하는 생성물(MeOH를 갖는 유도체)임을 나타내었다. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.81-7.77 (m, 2H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 2H), 5.33 (s, 1H), 4.42 (d, J=3.0 Hz, 2H), 4.24 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.74-3.67 (m, 3H), 3.50 (d, J=3.0 Hz, 2H), 2.59 (t, J=6.0 Hz, 2H).
단계 2. 화합물 66의 합성
ACN(100 mL, 190.24 mmol, 75.00 당량) 중 4-포르밀-2-니트로페놀(화합물 65, 4.21 g, 25.19 mmol, 1.00 당량) 및 Ag2O(7.00 g, 30.20 mmol, 1.20 당량)의 교반된 용액에 메틸 (2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-브로모옥산-2-카복실레이트(화합물 64, 10.00 g, 25.17 mmol, 1.00 당량)를 N2 대기의 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 DCM(50 mL x 3)으로 세척하였다. 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EA(PE:EA=1:2)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-(4-포르밀-2-니트로페녹시)옥산-2-카복실레이트(화합물 66, 10.5 g, 86%)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR 분석은 그것이 원하는 생성물임을 나타내었다. LCMS(ES, m/z):484 [M+1]+. 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.00 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13-8.09 (m, 1H), 7.52 (d, J=3.0 Hz, 1H), 5.47-5.29 (m, 4H), 4.37-4.35 (m, 1H), 3.75-3.73 (m, 3H), 2.17-2.06 (m, 9H).
단계 3. 화합물 67의 합성
MeOH(50 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-(4-포르밀-2-니트로페녹시)옥산-2-카복실레이트(화합물 66, 6.00 g, 12.41 mmol, 1.00 당량)에 NaBH4(0.47 g, 12.42 mmol, 1.00 당량)를 N2 대기 하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 실온에서 물로 켄칭하였다. 생성된 것을 Na2SO4로 건조시켰다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 DCM으로 세척하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켜 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-(하이드록시메틸)-2-니트로페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 67, 5.5 g, 91%)을 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):486 [M+H]+.
단계 4. 화합물 68의 합성
EA(60 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-(하이드록시메틸)-2-니트로페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 67, 5.50 g, 11.33 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 실온에서 Pd/C(1.10 g, 10%)를 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 대기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 DCM 및 MeOH로 세척하고, 여액을 진공 하에 농축시켜 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-아미노-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 68, 4.0 g, 77%)를 고체로서 수득하였다. 조 생성물을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에 사용하였다. LCMS(ES, m/z):456[M+H]+.
단계 5. 화합물 70의 합성
THF(10 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-아미노-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 68, 1.00 g, 2.19 mmol, 1.00 당량) 및 NaHCO3(0.20 g, 2.40 mmol, 1.1 당량)의 교반된 용액에 9H-플루오렌-9-일메틸 N-(3-클로로-3-옥소프로필)카바메이트(화합물 69, 0.87g, 2.62mmol, 1.20당량)를 N2 대기 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 0℃에서 6시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 실온에서 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기층을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EA(EA=100%)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 70, 1.1 g, 66%)를 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):749 [M+H]+.
단계 6. 화합물 72의 합성
DMF(15 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)-4-(하이드록시메틸)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 70, 1.50 g, 2.00 mmol, 1.00 당량) 및 비스(4-니트로페닐)카보네이트(화합물 71, 0.68 g, 2.24 mmol, 1.12 당량)의 교반된 혼합물에 DIEA(0.52 g, 4.01 mmol, 2.00 당량)를 N2 대기 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 40분에 10%에서 90% 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 진공에서 농축 건조시켜 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-아미노]프로판아미도)-4-[[(4-니트로페녹시카보닐)옥시]메틸]페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 72, 1.4 g, 48%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 914 [M+H]+.
단계 7. 화합물 73의 합성
DMF(10 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)-4-[[(4-니트로페녹시카보닐)옥시]메틸]페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 72, 1.00 g, 1.09 mmol, 1.00 당량) 및 1-(3-클로로-4-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(신규분해약물 P1, 0.58 g, 1.09 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 HOBT(1.18 g, 8.72 mmol, 8.00 당량) 및 2,4-디메틸피리딘(1.07 g, 8.72 mmol, 8.00 분량)을 N2 대기의 실온에서 조금씩 첨가했다. 생성된 혼합물을 N2 대기 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 추가 정제에 사용하였다. 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 40분 동안 10%에서 80% 구배; 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 진공하에 농축하여 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 73, 800 mg, 56%)을 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):1302[M+H]+.
단계 8. 화합물 74의 합성
THF(80 mL) 중 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트리스(아세틸옥시)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]옥산-2-카복실레이트(화합물 73, 800.00 mg, 0.61 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 실온에서 N2 대기 하에 HCl(6N, 80 mL)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료된 것으로 나타났다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 하기 조건으로 잔류물을 역 플래시 크로마토그래피로 정제했다: 칼럼 C18 실리카 겔, 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 40분 내 0%에서 80% 구배, 검출기, UV 254 nm. 수집된 분획을 동결건조하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 74, 230 mg, 32%)을 백색 고체로 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 1162[M+H]+.
단계 9. 화합물 75의 합성
DMF (2 mL) 중 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]-2-(3-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도)페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카르복실산, 74(230 mg, 0.2 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 질소 대기 하에 실온에서 피페리딘(0.4 mL)를 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 10분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 다음 조건(컬럼: XSelect CSH Prep Cl8 OBD 컬럼, 19x250 mm, 5 um; 이동상 A:물(0.05%TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분, 구배: 7분에 20 B에서 40B 로, 220nm, RT1:5.78분)으로 Prep-HPLC에 의해 추가로 정제하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[2-(3-아미노프로판아미도)-4-[([[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)카바모일]옥시)메틸]페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산 (화합물 75, 35 mg, 18%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 940[M+H]+.
단계 10. 화합물(Ih)의 합성
DMF(2.0 mL) 중 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-[2-(3-아미노프로판아미도)-4-[({[2-(2-{2-클로로-4-[({[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸}카바모일)아미노]페닐}에톡시)에틸](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시]-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 75, 110 mg, 0.12 mmol, 1.00 당량) 및 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)펜탄디오에이트(화합물 76, 46 mg, 0.14 mmol, 1.2 당량)의 교반된 용액에 질소 대기 하에 실온에서 DIEA(30 mg, 0.23 mmol, 2.0 당량)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 다음 조건으로 Prep-HPLC로 정제했다: (컬럼: KinetexEVO prep C18, 30*150, 5 um; 이동상 A: 물(0.05%TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분 ; 구배: 7분 내 21% B에서 41% B, 41% B, 파장: 254 nm, RT1(분): 5.8. 수집된 분획을 동결건조하여 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{4-[({[2-(2-{2-클로로-4-[({[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸}카바모일)아미노]페닐}에톡시)에틸](메틸)카바모일}옥시)메틸]-2-(3-{5-[(2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시]-5-옥소펜탄아미도}프로판아미도)페녹시}-3,4,5-트리하이드록시옥산-2-카복실산(화합물 (Ih), 48 mg, 34%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 1151 [M+H]+, 1173 [M+Na]+.1H-NMR(300MHz, DMSO-d6): 12.80 (br s, 1H), 10.98 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.68-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J=8.1 Hz,1H), 7.25-7.00 (m, 4H), 6.82-6.80 (m, 1H), 5.86 (s, IH), 5.39-5.30 (m, 2H), 5.14-5.07 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.84 (d, J=7.2 Hz,1H), 4.47-4.27 (m, 4H), 3.90 (d, J=9.6 Hz, 1H), 3.56-3.48 (m, 4H), 3.45-3.36 (m, 6H), 2.95-2.80 (m, 8H), 2.75-2.65 (m, 3H), 2.62-2.55 (m, 2H), 2.49-2.35 (m, 1H), 2.21-2.16 (m, 2H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.85-1..80 (m, 2H).
Figure pct00146
반응식 11: 신규분해약물 P1- 링커 복합체(화합물 (Ii))의 합성
단계 1. 화합물 76의 합성
DMF(8 mL) 중 1-(3-클로로-4-[2-[2-(메틸아미노)에톡시]에틸]페닐)-3-[[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]우레아(화합물 P1, 180 mg, 0.34 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 TEA(104 mg, 1.02 mmol, 3.0 당량) 및 4-(클로로설포닐)-3-니트로벤조산(181 mg, 0.68 mmol, 2.00 당량)을 질소 대기 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 추가 정제에 사용하였다. 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 10분에 10%에서 60% 구배; 검출기, UV 254 nm. 혼합물을 동결건조하여 4-[[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)설파모일]-3-니트로벤조산(화합물 76, 70 mg, 27%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 757 [M+1]+.
단계 2 화합물(Ii)의 합성
DMF(6 mL) 중 4-[[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)설파모일]-3-니트로벤조산(화합물 76, 60 mg, 0.08 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 HATU( 45 mg, 0.12 mmol, 1.5 당량), 1-(2-아미노에틸)피롤-2,5-디온 하이드로클로라이드(화합물 77, 17 mg, 0.10 mmol, 1.20 당량) 및 DIEA(31 mg, 0.24 mmol, 3.0 당량)을 질소 대기 하에서 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 잔류물을 Prep-HPLC(컬럼: XBridge Prep 페닐 OBD 컬럼, 19x 150mm 5um 13nm; 이동상 A: 물(0.05%TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 25 mL/분; 구배: 25 B에서 43 B로 10분, 220nm, RT1:11.97분)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조하여 4-[[2-(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)에틸](메틸)설파모일]-N-[2-(2,5-디옥소피롤-1-일)에틸]-3-니트로벤즈아미드(화합물 (Ii), 27 mg, 36%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ES, m/z): 879,881 [M+H]. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ11.00 (s, 1H), 9.01 (t, J=6.0 Hz, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.71-7.67 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.44 (d, J=3.0 Hz, 1H), 7.21-7.12 (m, 2H), 7.02 (s, 2H), 6.84 (t, J=6.0 Hz, 1H), 5.14-5.08 (m, 1H), 4.48-4.28 (m, 4H), 3.62-3.50(m, 6H), 3.40-3.28 (m, 2H), 2.95-2.85(m, 4H), 2.80-2.73 (m, 2H), 2.65-2.60 (s, 1H), 2.41-2.27 (m, 1H), 2.05-1.95 (m, 1H).
Figure pct00147
반응식 12: 신규분해약물 P1- GGFG 링커 복합체(화합물 (Ij))의 합성
단계 1. 화합물 79의 합성
THF(300 mL) 및 톨루엔(100 mL) 중 (2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-아세트아미도)아세트산(화합물 78, 10.00 g, 28.22 mmol, 1.00 당량) 및 Pb(OAc)4(15.02 g, 33.86 mmol, 1.20 당량)의 교반된 혼합물에 질소 대기 하에 실온에서 피리딘(2.59 g, 32.74 mmol, 1.16 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 에틸 아세테이트(20 mL)로 세척하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL)에 용해시키고, 물, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(1:4)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]아세트아미도)메틸 아세테이트(화합물 79, 6.5 g , 56%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI, ms): 391[M+Na]+. 1HNMR (300MHz, CDCl3) δ 7.80(d, J=7.5Hz, 2H), 7.62(d, J=7.5Hz, 2H), 7.45(t, J =7.5Hz, 2H), 7.36(d, J =7.5Hz, 2H), 7.18(br s, 1H),5.48(br s, 1H), 5.28(d, J=7.2Hz, 2H), 4.48(d, J=6.6Hz, 2H), 4.26(t, J=6.6Hz, 1H), 3.93(d, 5.4Hz, 2H), 2.08(s, 3H).
단계 2. 화합물 81의 합성
DCM(40 mL) 중 (2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-아미노]아세트아미도)메틸 아세테이트, 79(2.00 g, 5.43 mmol, 1.00 당량) 및 2-(2-클로로)-4-니트로페닐)에탄올(화합물 3, 3.20 g, 15.85 mmol, 2.92 당량)의 교반된 혼합물에 PPTS(400 mg, 1.59 mmol, 0.29 당량)를 질소 대기 하에 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 45℃에서 밤새 교반하였다. 40% 원하는 생성물이 LCMS에 의해 검출될 수 있었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응을 물/얼음으로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOEt(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(1:9)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]메틸]카바모일)메틸]카바메이트(화합물 81, 1.7g, 55%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI, ms): 510,512[M+H]+. 1HNMR (300MHz, DMSO-d6): δ 8.58 (t, J=5.1Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 12, 2.4Hz, 1H), 7.89 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.71-7.54 (m, 4H), 7.43-7.29 (m, 4H), 4.56 (d, J=6.9Hz, 2H), 4.30-4.16 (m, 3H), 3.70-3.61(m, 4H), 3.04 (t, J=6.3Hz, 2H).
단계 3. 화합물 82의 합성
DMF(5.0 mL) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]메틸]카바모일)메틸]카바메이트(화합물 81, 1.60 g, 3.14 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 피페리딘(1.0 mL)을 질소 대기 하에 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.05%TFA), 40분에 0%에서 50%까지의 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 2-아미노-N-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]메틸]아세트아미드(화합물 82, 750 mg, 76%)가 황색 오일로서 생성되었다. LCMS(ESI, ms) 288[M+H]+, 329[M+H+ACN]+
단계 4. 화합물 83의 합성
DMF(10.00 mL) 중 2-아미노-N-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]메틸]아세트아미드(화합물 82, 750 mg, 2.61 mmol, 1.00 당량) 및 Boc2O(580 mg, 2.66 mmol, 1.02 당량)의 교반된 혼합물에 0℃에서 H2O(10.00 mL) 중 NaHCO3(477 mg, 5.68 mmol, 2.18 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 물(20 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 생성된 혼합물을 EtOEt(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(1:2)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]메틸]카바모일)메틸]카바메이트(화합물 83, 650 mg, 58%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS(ESI, ms), 388[M+H]+, 332[M+H-56]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.21(d, J=2.4Hz, 1H), 8.04(d, J=8.4Hz, 2H), 7.46(d, J=8.4Hz, 1H), 7.05(br s, 1H), 5.25(br s, 1H), 4.73(d, J=7.2Hz, 2H), 3.81-3.73(m, 4H), 3.34-3.32(m, 2H), 3.08(t, J=6.8Hz, 2H), 1.42(s, 9H).
단계 5. 화합물 84의 합성
EtOH(9.00 mL) 중 tert-부틸 N-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에톡시]메틸]-카바모일)메틸]카바메이트(화합물 83, 650 mg, 1.68 mmol, 1.00 당량) 및 Fe(260 mg, 4.66 mmol, 2.78 당량)의 교반된 혼합물에 H2O(3.00 mL) 중 NH4Cl(910 mg, 17.01 mmol, 10.1 당량)을 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(1:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에톡시]메틸]-카바모일)메틸]카바메이트(화합물 84, 500 mg, 83%)를 황색 고체로 수득하였다. LCMS(ESI, ms): 358[M+H]+, 380[M+Na]+. 1HNMR (300MHz, CDCl3) δ 7.02-6.96(m, 2H), 6.68(d, J=2.4Hz, 1H), 6.52-6.49(m, 1H), 5.29(br s, 1H), 4.74(d, J=6.9Hz, 2H), 3.80-3.78(m, 2H), 3.69-3.63(m, 2H), 2.88(t, J=7.2Hz, 2H), 1.45(s, 9H).
단계 6. 화합물 86의 합성
DMF(5.00mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온 하이드로클로라이드(화합물 85, 398 mg, 1.28 mmol, 0.92 당량) 및 CDI(450 mg, 2.78 mmol, 1.99 량)의 교반된 혼합물에 0℃에서 TEA(300 mg, 2.96 mmol, 2.12 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 tert-부틸 N-[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에톡시]메틸]카바모일)메틸]카바메이트(화합물 84, 500 mg, 1.40 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP(550 mg, 4.50 mmol, 3.22 당량)을 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 밤새 추가로 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 30분 내 0%에서 50% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 tert-부틸 N-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]카바모일]메틸)카바메이트(화합물 86, 550 mg, 60%)을 밝은 갈색 고체로 수득하였다. LCMS(ESI, ms): 657[M+H]+, 601[M+H-56]+, 557[M+H-100]+.
단계 7. 화합물 87의 합성
DCM(5.00 mL) 중 tert-부틸 N-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]카바모일]메틸)-카바메이트(화합물 86, 530 mg, 0.80 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 TFA(1.00 mL)를 0℃에서 첨가했다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 이로써 2-아미노-N-[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]아세트아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 87, (510 mg, 순도:64%, 수율: 60%)을 회백색 고체로서 수득하였다 . LCMS(ESI, ms): 557[M+H-TFA]+
단계 8. 화합물 89의 합성
H2O(40.00 mL) 중 (2S)-2-[2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도]-3-페닐프로파노산(화합물 88, 2.00 g, 7.16 mmol, 1.00 당량) 및 NaHCO3(1.80 g, 21.41 mmol, 3.00 당량)의 교반된 혼합물에 DMF(40.00 mL) 중 Boc2O(1.86 g, 8.52 mmol, 1.20 당량)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 실온에서 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOEt(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, Cl8 실리카 겔; 이동상, ACN 물(0.05% TFA), 30분 내 5%에서 60% 구배; 검출기, UV 220 nm. 이는 (2S)-2-(2-[2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]아세트아미도]아세트아미도)-3-페닐프로파노산(화합물 89, 1.8 g, 60%)을 백색 반고체로서 생성하였다. LCMS (ESI,ms): 380[M+H]+, 324[M+H-56]+. 1HNMR:(300MHz, DMSO-d6) δ 8.17(d, J=8.1Hz, 1H), 7.93(t, J=5.7Hz, 1H), 7.31-7.20(m, 5H), 7.00(t, J=6.0Hz, 1H), 4.46-4.39(m, 1H),3.78-3.67(m, 2H), 3.56(d, J =5.7Hz, 2H), 3.09-3.02(m, 1H), 2.92-2.73(m, 1H), 1.39(s, 9H).
단계 9. 화합물 90
DMF(5.00 mL) 중 (2S)-2-(2-[2-[(tert-부톡시카보닐)아미노]아세트아미도]-아세트아미도)-3-페닐프로파노산(화합물 89, 340 mg, 0.90 mmol, 1.00 당량) 및 HATU(340 mg, 0.90 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 0℃에서 HOBT(102 mg, 0.75 mmol, 0.84당량)로 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 2-아미노-N-[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]아세트아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 87, 511 mg, 순도: 64%, 0.48 mmol, 0.54 당량) 및 DIEA(340 mg, 2.63 mmol, 2.94 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1% FA), 30분 내 0%에서 50% 구배; 검출기, UV 220 nm. 수집된 분획을 진공하에 농축하였다. 이는 tert-부틸 N-[[([[(lS)-1-[([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]카바모일]메틸)카바모일]-2-페닐에틸]카바모일]메틸)카바모일]메틸]카바메이트(화합물 90, 210 mg, 48%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI, ms): 918[M+H]+, 818[M+H-100]+. 1HNMR:(400MHz, DMSO-d6): δ 10.97(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.50(t, J=6.4Hz, 1H), 8.31(t, J=4,4Hz, 1H), 8.15(d, J =9.6Hz, 1H), 7.910(t, J=8,0Hz, 1H), 7.68-7.64(m, 2H), 7.49(s, 1H), 7.43(d, J=9.6Hz, 1H), 7.24-7.12(m, 7H), 7.00-6.95(m, 1H), 6.84(t, J=6.4Hz, 1H), 5.13-5.06(m, 1H), 4.55-4.27(m, 7H), 3.72-3.60(m, 6H), 3.75-3.67(m, 3H), 3.59-3.49(m, 5H), 3.07-3.01(m, 1H), 2.94-2.73(m, 4H), 2.62-2.54(m, 1H), 2.40-2.3l(m, 1H), 2.01-1.94(m, 1H), 2.00-1.91(m, 1H), 1.35(s, 9H)
단계 10. 화합물 91의 합성
DCM(5.00mL) 중 tert-부틸 N-[[([[(1S)-1-[([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘))-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]카바모일]메틸)카바모일]-2-페닐에틸]카바모일]메틸)카바모일]메틸]카바메이트(화합물 90, 140 mg, 0.15 mmol, 1.00 당량)의 교반된 혼합물에 TFA(1.00 mL)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 이로써 (2S)-2-[2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도]-N-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]-카바모일]메틸)-3-페닐프로판아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 91, 140 mg, 79%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ESI, ms): 818[M+H-TFA]+.
단계 11. 화합물(Ij)의 합성
DMF(2.00 mL) 중 (2S)-2-[2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도]-N-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]-에톡시)메틸]카바모일]메틸)-3-페닐프로판아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 91, 140 mg, 0.15 mmol, 1.00 당량) 및 DIEA(70 mg, 0.54 mmol, 3.61 당량)의 교반된 혼합물에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥사노에이트(화합물 92, 70 mg, 0.23 mmol, 1.50 당량)를 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건에 의해 직접 정제하였다: 칼럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 칼럼, 19x250 mm, 5 um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분; 구배: 7분에 25 B에서 50 B; 254 nm; RT1: 6.35분; 수집된 분획을 동결건조하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 하기 조건에 의해 재정제하였다: 칼럼: Kinetex EVO C18 칼럼, 30x150.5 um; 이동상 A: 물(0.05%TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분; 구배: 7분에 20 B에서 40 B, 220 nm; RT1:6.77분; 수집된 분획을 동결건조하여 N-[[([[(1S)-1-[([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에톡시)메틸]카바모일]메틸)카바모일]-2-페닐에틸]카바모일]메틸)카바모일]메틸]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미드(화합물 (Ik), 22.8 mg, 14%)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS (ESI, ms): 1011[M+H]+. 1HNMR:(400MHz,DMSO-d6): δ 10.95(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.51(t, J=8,4Hz, 1H), 8.29(t, J=8.0Hz, 1H), 8.12-8.01(m, 3H), 7.70-7.66(m, 2H), 7.44(s, 1H), 7.42(d, J=8.0Hz, 1H), 7.23-7.16(m, 7H), 6.99(s, 2H), 6.82(t, J=8.0Hz, 1H), 5.13-5.09(m, 1H), 4.55-4.28(m, 7H), 3.72-3.60(m, 6H), 3.55-3.51(m, 2H), 3.36-3.34(m, 2H), 3.05-3.00(m, 1H), 2.94-2.72(m, 4H), 2.62-2.54(m, 1H), 2.40-2.32(m, 1H), 2.12-2.05(m, 2H), 2.00-1.91(m, 1H), 1.50-1.38(m, 4H), 1.19-1.10(m, 2H)
Figure pct00148
Figure pct00149
반응식 13: 신규분해약물 P14-AAA 링커 복합체(화합물(Ik))의 합성
단계 1. 화합물 94의 합성
THF(240.00 mL) 중 (2-클로로-4-니트로페닐)아세트산(화합물 93, 24.00 g, 111.32 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 BH3-Me2S(28.00 mL, 295.23 mmol, 2.65 당량)을 질소 대기하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(PE: EtOAc = 3:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각한 후, 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(3:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 94, 18.00 g, 80%)을 밝은 황색 고체로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) d 8.27 (s, 1H), 8.10-8.07 (m, 1 H), 7.52 (d, J = 3 Hz, 1H), 3.96 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.13 (t, J=6Hz, 2H).
단계 2. 화합물 95의 합성
DCM(100.00 mL) 중 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 94, 5.00 g, 24.80 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 NBS(6.62 g, 1.50 당량) 및 PPh3(9.76 g, 37.21 mmol, 1.50 당량)를 N2 하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2하에 실온에서 밤새 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(4:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-(2-브로모에틸)-2-클로로-4-니트로벤젠(화합물 95, 5.10 g, 72%)을 적색 오일으로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.79 4(t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
단계 3. 화합물 96의 합성
DMF(50.00 mL) 중 1-(2-브로모에틸)-2-클로로-4-니트로벤젠(화합물 95, 5.00 g, 18.90 mmol, 1.00 당량)의 용액에 칼륨 티오아세테이트(2.16 g, 18.90 mmol, 1.00 당량)를 질소 대기 하에 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(600.00 mL)로 희석하고, EtOAc(2000 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(200.00 mL), 염수(200.00 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 진공 하에 농축 건조하여 1-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]에테논(화합물 96, 4.50 g, 85%)을 적색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.20 -3.05 (m, 4H), 2.34 (s, 3H).
단계 4. 화합물 97의 합성
MeOH(300.00 mL) 중 1-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]에테논(화합물 96, 2.00 g, 7.70 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 MeONa(6.93 mL, 37.33 mmol, 5.00 당량, MeOH 중 30%)를 N2 하에 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 AcOH로 pH 값이 3-4가 되도록 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM(50.00 mL)으로 희석하고 여과하였다. 여액을 Prep-TLC(PE:EtOAc = 10:1)로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄티올(화합물 97, 1.35 g, 72%)을 밝은 황색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.14 (t, J = 8.0Hz, 2H), 2.85 (dt, J = 8.0, 7.2 Hz, 2H), 1.43 (t, J = 7.2 Hz, 1H).
단계 5. 화합물 99 합성
DMF(200.00 mL) 중 (2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노산(화합물 98, 20.00 g, 64.24 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 공기 대기 하에 실온에서 TSTU(25.18 g, 83.52 mmol, 1.30 당량) 및 DIEA(16.60 g, 128.48 mmol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(200.00 mL)로 희석하고, EtOAc(100.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(100.00 mL), 염수(100.00 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 진공에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE: EtOAc = 1:2) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 (2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노에이트(화합물 99, 25.00 g, 83%)를 흰색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):431[M+Na]+.
단계 6. 화합물 100의 합성
물(50.00 mL) 중 D-알라닌(1.09 g, 0.012 mmol, 1.00 당량) 및 NaHCO3(3.09 g, 0.04 mmol, 3.00 당량)의 용액에 DMF(50.00 mL) 중 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 (2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노에이트(화합물 99, 5.00 g, 12.24 mmol, 1.00 당량)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 2 N HCl을 사용하여 pH 값을 2-3으로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(100.00 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수(100.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 진공 하에 농축 건조하여 (2R)-2-[(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-아미노]프로판아미도]프로파노산(화합물 100, 4.00 g, 71%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 383 [M+H]+
단계 7. 화합물 101의 합성
물(200.00 mL) 중 글리신(3.68 g, 48.97 mmol, 1.00 당량) 및 NaHCO3(12.34 g, 146.89 mmol, 3.00 당량)의 용액에 DMF(200.00 mL) 중 2,5-디옥소-피롤리딘-1-일-(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노에이트(화합물 99, 20.00 g, 48.97 mmol, 1.00 당량)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 2 N HCl을 사용하여 pH 값을 2-3으로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(500.00 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기층을 염수(500.00 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 진공에서 농축 건조하여 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도]아세트산(화합물 101, 15.00 g, 71%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 369 [M+H]+
단계 8. 화합물 102의 합성
THF(300.00 mL)/톨루엔(100.00 mL) 중 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도]-아세트산(화합물 101, 5.00 g, 13.57 mmol, 1.00 당량), Pb(OAc)4(7.22 g, 16.28 mmol, 1.20 당량) 및 피리딘(1.29 g, 16.31 mmol, 1.20 당량)의 용액을 N2하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하였다. 여과 케이크를 THF(100.00 mL)로 세척하였다. 합한 유기층을 진공하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE:EtOAc = 1:2) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도]메틸 아세테이트(화합물 102, 2.50 g, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 405 [M+Na]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.77 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 5.24 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 - 4.35 (m, 2H), 4.23-4.09 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 9. 화합물 103의 합성
DCM(120 mL) 중 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-프로판아미도]메틸 아세테이트 (화합물 102, 2.25 g, 5.88 mmol, 1.00 당량) 및 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄티올(화합물 97, 1.28 g, 5.88 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 실온에서 N2 하에 TFA(0.27 mL, 2.37 mmol, 0.62 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE:EtOAc = 1:4) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 103, 3.10 g, 90%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 540 [M+H]+
단계 10. 화합물 104의 합성
DMF(155.00 mL) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 103, 3.10 g, 5.74 mmol, 1.00 당량)의 용액에 N2 하에 0℃에서 피페리딘(31.00 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 0.5시간 동안 0℃에서 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(600.00 ml)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(200.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200.00 ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 진공 하에 농축 건조하여 3.00g의 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 (DCM:MeOH = 3:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 재정제하여 (2S)-2-아미노-N-([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)프로펜아미드, 104(1.50 g, 78%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 318 [M+H]+.
단계 11. 화합물 105의 합성
DMF(75.00 mL) 중 (2S)-2-아미노-N-([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)-프로펜아미드(화합물 104, 1.50 g, 4.72 mmol, 1.00 당량)의 용액에H2O(10.00 mL) 중 NaHCO3(0.59 g, 7.08 mmol, 1.50 당량) 및 Boc2O(1.03 g, 4.72 mmol, 1.00 당량)의 용액을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(500.00 mL)로 희석하고, EtOAc(200.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(200.00 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 진공 하에 농축 건조하여 tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 105, 1.82 g, 83) 적색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 418 [M+H]+, 318 [M+H-100]+
단계 12. 화합물 106의 합성
EtOH(100.00 mL)/H2O(50.00 mL) 중 tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]-메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 105, 1.82 g, 4.36 mmol, 1.00당량), 철 분말(2.43 g, 0.04 mmol, 10.00 당량) 및 NH4Cl(2.33 g, 0.04 mmol, 10.00 당량)의 슬러리를 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM(50.00 mL)으로 용해시키고 여과하였다. 여액을 농축 건조시키고 잔류물을 (DCM:MeOH = 13:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 106, 1.20 g, 68%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 388 [M+H]+
단계 13. 화합물 107
DMF(5.00 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT 1, 352 mg, 1.29 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 0℃에서 CDI(209.00 mg, 1.29 mmol, 1 당량) 및 TEA(260 mg, 2.58 mmol, 2 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에틸]설파닐]-메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 106, 500.00 mg, 1.29 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP(472 mg, 3.87 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분 내 0%에서 60% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 tert-부틸 N-[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)에틸]카바메이트(화합물 107, 450.00 mg, 48%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 687 [M+H]+
단계 14. 화합물 108
DCM(22.00 mL) 중 tert-부틸 N-[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)]-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]-메틸]카바모일)에틸]카바메이트(화합물 107, 440.00 mg, 0.64 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 TFA(2.20 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축 건조시켜 (2S)-2-아미노-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]-메틸]프로판아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 108, 400.00 mg, 조 물질)을 적색 오일로서 수득하였다. 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS(ES, m/z): 587 [M+H-TFA]+
단계 15. 화합물 109의 합성
(2R)-2-[(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도]프로파노산(218 mg, 0.57 mmol, 1.00 당량), HOBT(77 mg, 0.57 mmol, 1.00 당량) 및 HATU(216 mg, 0.01 mmol, 1.00 당량)의 용액을 실온에서 공기 중에서 1시간 동안 교반한 다음, (2S)-2-아미노-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]프로판아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 108, 400 mg, 0.57 mmol, 1.00 당량) 및 DIEA(663 mg, 5.14 mmol, 9.00 당량)를 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.05%TFA), 30분 내 0%에서 50% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1R)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)에틸]카바모일]에틸]카바모일]에틸]카바메이트(화합물 109, 480.00 mg, 75%)를 녹색 고체로 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 951 [M+H]+
단계 16. 화합물 110
DMF(5.00 mL) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[[(1R)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)에틸]카바모일]에틸]카바모일]에틸]카바메이트(화합물 109, 110.00 mg)의 용액에 피페리딘(1.00 mL)을 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.05%TFA), 40분 내에 0%에서 60%까지의 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 (2S)-2-[(2R)-2-[(2S)-2-아미노프로판아미도]프로판아미도]-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]프로펜아미드(화합물 110, 80.00 mg, 60%)를 적색 고체로 수득하였다. LCMS (ES, m/z): 729 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.00 (br s, 1H), 8.53 br (s, 1H), 8.24 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.10 (br s, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26-7.13 (m, 3H), 7.00 (br s, 1H), 5.11-5.06 (m, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 3H), 4.35 - 4.13 (m, 6H), 2.90-2.83 (m, 3H), 2.73-2.71 (m, 2H), 2.05-1.90 (m, 1H), 1.70-1.53 (m, 4H), 1.22-1.17(m, 6H), 1.14 - 1.05 (m, 3H).
단계 17. 화합물(Ik)의 합성
DMF(1.50 mL, 19.38 mmol, 224.36 당량) 중 (2S)-2-[(2R)-2-[(2S)-2-아미노프로판아미도]프로판아미도]-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]프로펜아미드(화합물 110, 63.00 mg, 0.09 mmol, 1.00 당량) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥사노에이트(26 mg, 0.09 mmol, 1.00 당량)의 용액에 공기 중 실온에서 DIEA(22.33 mg, 0.17 mmol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 칼럼: Kinetex EVO C18 칼럼, 30x150. 5 um; 이동상 A:xater(0.05%TFA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분; 구배: 7분에 23 B에서 43 B, 254 nm; RT1:6.58). 수집된 분획을 동결건조하여 N-[(1S)-1-[[(1R)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)에틸]카바모일]에틸]카바모일]에틸]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미드(화합물 (Ik), 16.10 mg, 20%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 922,924 [M+H]+. 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.00 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.44-8.41 (m, 1H), 8.15 (d, J =7.2Hz, 1H), 8.03-8.00 (m, 2H), 7.7-7.65 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J =8.0Hz,1H), 7.22-7.14(m, 2H), 6.98 (s, 2H), 6.83-6.81 (m, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.48-4.40 (m, 3H), 4.29-4.17 (m, 6H), 2.96-2.85 (m, 3H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.67-2.57 (m, 1H), 2.40-2.33 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 3H), 1.52-1.45 (m, 5H), 1.26-1.16 (m, 12H).
Figure pct00150
Figure pct00151
반응식 14: 신규분해약물 P14 - GGFG 링커 복합체(화합물 (Il))의 합성
단계 1. 화합물 112의 합성
THF(50 mL) 중 (2-클로로-4-니트로페닐)아세트산(화합물 111, 5.00 g, 23.19 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 BH3-Me2S(5.50 mL, 57.99 mmol, 2.50 당량)를 질소 대기 하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 3:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 잔류물을 PE/EtOAc(2:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 112, 4.8 g, 92%)을 밝은 황색색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.20 -3.09 (m, 4H).
단계 2. 화합물 113의 합성
DCM(100 mL) 중 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 112, 4.80 g, 23.81 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 NBS(6.36 g, 35.71 mmol, 1.50 당량) 및 PPh3(9.37 g, 35.72 mmol, 1.50 당량)를 실온에서 공기 대기 하에 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 공기 대기 하에 실온에서 밤새 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(4:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-(2-브로모에틸)-2-클로로-4-니트로벤젠(화합물 113, 3.9 g, 57%)을 적색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ8.29 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.67 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.42 (t, J = 7.2 Hz, 2H).
단계 3. 화합물 114의 합성
DMF(39 mL) 중 1-(2-브로모에틸)-2-클로로-4-니트로벤젠(화합물 113, 3.90 g, 14.75 mmol, 1.00 당량)의 용액에 칼륨 티오아세테이트(1.68 g, 14.75 mmol, 1.00 당량)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC((PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(600 mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EA(200 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(200 mL), 염수(200 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하고 진공 하에 농축 건조하여 1-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]에테논(화합물 114, 3.7 g , 85%)을 적색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.21 -3.02 (m, 4H), 2.37 (s, 3H).
단계 4. 화합물 115의 합성
MeOH(600 mL) 중 1-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]에테논(화합물 114, 4.00 g, 15.40 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 MeONa(14.31 mL, 77.00 mmol, 5.00 당량, 30%)를 0℃ N2 에서 1시간 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 (PE:EA = 10:1) 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응을 AcOH로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM(100 mL)으로 희석하고 여과하였다. 여액을 (PE:EtOAc = 10:1) 용리하는 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄티올(화합물 115, 3 g, 80%)을 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.17 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.87 (dt, J = 8.0, 7.2 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 8.0Hz, 1H).
단계 5. 화합물 117의 합성
THF(300 mL) 및 톨루엔(100 mL) 중 (2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-아세트아미도)아세트산(화합물 116, 10 g, 28.22 mmol, 1.00 당량) 및 Pb(OAc)4(15 g, 33.86 mmol, 1.20 당량)의 교반된 혼합물에 질소 대기 하에 실온에서 피리딘(2.59 g, 32.74 mmol, 1.16 당량)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 EA(20 mL)로 세척하였다. 여액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EA(20 mL)에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 물, 염수로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 진공하에 농축하였다. 잔류물을 PE/EtOAc(1:4)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 (2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]아세트아미도)메틸 아세테이트(화합물 117, 6.5 g, 56 %)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR(300MHz, CDCl3) δ7.80(d, J =7.5Hz, 2H), 7.62(d, J =7.5Hz, 2H), 7.45(t, d =7.5Hz, 2H), 7.36(d, d =7.5Hz, 2H), 7.18(br s, 1H), 5.48(br s, 1H), 5.28(d, J =7.2Hz, 2H), 4.48(d, J =6.6Hz, 2H), 4.26(t, J =6.6Hz, 1H), 3.93(d, 5.4Hz, 2H), 2.08(s, 3H). LCMS(ESI, ms): 391[M+Na]+
단계 6. 화합물 118의 합성
DCM (300 mL) 중 (2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]아세트아미도)메틸 아세테이트(화합물 117, 3.00 g, 8.14 mmol, 1.00 당량) 및 2-(2-클로로- 4-니트로페닐)에탄티올(화합물 115, 1.77 g, 8.13 mmol, 1.00 당량)의 용액에 실온에서 TFA(0.56 g, 4.91 mmol, 0.60 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE:EtOAc = 2:3) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]-메틸]카바메이트(화합물 118, 3.7 g, 67%)를 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 526,528 [M+H]+
단계 7. 화합물 119의 합성
DMF(40 mL) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]메틸]카바메이트(화합물 118, 3.70 g, 7.03 mmol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 피페리딘(8 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 물(400 mL)로 희석하고, EA(200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(200 mL), 염수(200 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 (DCM:MeOH = 10:1) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-아미노-N-([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]-메틸)아세트아미드(화합물 119, 1.01g, 40%)을 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 304,306 [M+H]+
단계 8. 화합물 120의 합성
DMF(50 mL) 중 2-아미노-N-([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)-아세트아미드(화합물 119, 1.00 g, 3.29 mmol, 1.00 당량)의 용액에 실온에서 물(10 mL) 중 NaHCO3(0.33 g, 3.92 mmol, 1.20 당량), Boc2O(0.72 g, 3.30 mmol, 1.00 당량)의 용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(500 mL)로 희석하고, EtOAc(200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE:EtOAc = 1:3) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]메틸]카바메이트(화합물 120, 810 mg, 54%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 404,406 [M+H]+, 304,306 [M+H-100]+
단계 9. 화합물 121의 합성
EtOH(40) 중 tert-부틸 N-[[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]-메틸)카바모일]메틸]카바메이트(화합물 120, 800.00 mg, 1.98 mmol, 1.00 당량)의 용액에 철 분말(1106 mg, 19.81 mmol, 10.00 당량) 및 물(10 mL) 중 NH4Cl(1059 mg, 19.81 mmol, 10.00 당량) 용액을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM(50.00 mL)으로 용해시키고 여과하였다. 여액을 (DCM:MeOH = 13:1) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에틸]설파닐]메틸)-카바모일]메틸]카바메이트(화합물 121, 610 mg, 74%)를 황색 오일로 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 374,376 [M+H]+, 374,376 [M+H-100]+
단계 10. 화합물 122의 합성
DMF(10 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT 1, 219 mg, 0.80 mmol, 1.00 당량)의 용액에 CDI(130 mg, 0.80 mmol, 1.00 당량) 및 TEA(81 mg, 0.80 mmol, 1.00 당량)를 공기 중 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, tert-부틸 N-[[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에틸]설파닐]-메틸)카바모일]메틸]카바메이트(화합물 121, 300 mg, 0.80 mmol, 1.00 당량) 및 DMAP(294 mg, 2.41 mmol, 3.00 당량)을 실온에서 공기 중에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 48시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.05%TFA), 30분에 0%에서 60%까지의 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 tert-부틸 N-[([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)메틸]카바메이트(화합물 122, 270 mg, 49%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 673,675 [M+H]+, 573,575 [M+H-100]+
단계 11. 화합물-123의 합성
1,4-디옥산(12 mL) 중 tert-부틸 N-[([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)메틸]-카바메이트(화합물 122, 250 mg, 0.37 mmol)의 용액에 HCl(1,4-디옥산 중 4N, 6 mL)을 N2에서 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켜 2-아미노-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소]-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]아세트아미드 (화합물 123, 260 mg, 조 생성물)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 573,575 [M+H-HCl]+
단계 12. 화합물-125의 합성
DMSO(5.00mL) 중 (2S)-2-[2-(2-아미노아세트아미도)아세트아미도]-3-페닐프로파노산(화합물 124, 500 mg, 1.79 mmol, 1.00 당량) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥사노에이트(552mg, 1.79mmol, 1.00 당량)의 용액을 공기 중에서 실온에서 16시간 동안 교반했다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분 내 0%에서 60% 구배; 검출기, UV 220 nm. 이로써 (2S)-2-(2-[2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]아세트아미도]아세트아미도)-3-페닐프로파노산(화합물 125, 760 mg , 83%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 473 [M+H]+
단계 13. 화합물(Il)의 합성
DMF(5.00 mL) 중 (2S)-2-(2-[2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]아세트아미도]-아세트아미도)-3-페닐프로파노산(화합물 125, 175 mg, 0.37 mmol, 1.00 당량)의 용액에 실온에서 공기 중 HATU(141 mg, 0.37 mmol, 1.00 당량) 및 HOBT(50 mg, 0.37 mmol, 1.00 당량)을 첨가했다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 2-아미노-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]-카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]아세트아미드(화합물 123, 250 mg, 0.37 mmol, 1.00 당량, 85%) 및 DIEA(240 mg, 1.85 mmol, 5.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 정제하였다: 칼럼: XSelect CSH Prep C18 OBD 칼럼, 19*250mm, 5um; 이동상 A: 물(0.05%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분; 구배: 7분에 30 B에서 60 B, 254 nm; RT1: 6.67분. 이로써 조 생성물 75 mg을 수득하였다. 조 생성물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 재정제하였다: 칼럼: XBridge Shield RP18 OBD 칼럼, 19*250 mm, 10 um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 25mL/분; 구배: 10분에 25 B에서 44 B; 254 nm; RT1:10.52분. 수집된 분획을 동결건조하여 화합물(Il)(41.6 mg, 10%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d 6 ) δ10.99 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.38 (t, J =6.0Hz, 1H), 8.31 (t, J =6.0Hz, 1H), 8.12 (d, J =8.4Hz, 1H), 8.06 (t, J =5.6Hz, 1H), 8.01 (t, J =6.0Hz, 1H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J =8.0Hz, 1H), 7.25-7.21 (m, 5H), 7.19-7.14 (m, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.82 (t, J =6.0Hz,lH), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.47-4.40 (m, 4H), 4.33-4.29 (m, 3H), 3.76-3.70 (m, 3H), 3.67-3.55 (m, 3H), 3.38-3.36 (m, 2H), 3.06-3.02 (m, 1H), 2.91-2.86 (m,3H), 2.82-2.70 (m, 3H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.50-2.45 (m, 1H), 2.10 (m, 2H), 2.05-1.95 (m ,1H), 1.50-1.44 (m,4H), 1.20-1.16 (m, 2H). LCMS (ES, m/z): 1027,1029 [M+H]+
Figure pct00152
Figure pct00153
반응식 15: 신규분해약물 P14 - AAA 링커 복합체(화합물(Im))의 합성
단계 1. 화합물 127의 합성
THF(240.00 mL) 중 (2-클로로-4-니트로페닐)아세트산(화합물 126, 24.00 g, 111.32 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 BH3-Me2S(28.00 mL, 295.23 mmol, 2.65 당량)을 질소 대기하에 적가하였다. 생성된 혼합물을 질소 대기 하에 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 3:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각한 후, 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(3:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 127, 18.00 g, 80%)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3C1) δ8.27 (s, 1H), 8.10-8.07 (m, 1 H), 7.52 (d, J = 3 Hz, 1H), 3.96 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.13 (t, J = 6 Hz, 2H).
단계 2. 화합물 128의 합성
DCM(100.00 mL) 중 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄올(화합물 127, 5.00 g, 24.80 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 NBS(6.62 g, 1.50당량) 및 PPh3(9.76 g, 37.21 mmol, 1.50 당량)를 N2하에 실온에서 조금씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2하에 실온에서 밤새 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 PE/EtOAc(4:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-(2-브로모에틸)-2-클로로-4-니트로벤젠(화합물 128, 5.10 g, 72.31%)을 적색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 7.2 Hz, 2H).
단계 3. 화합물 129의 합성
DMF(50.00 mL) 중 1-(2-브로모에틸)-2-클로로-4-니트로벤젠(화합물 128, 5.00 g, 18.90 mmol, 1.00 당량)의 용액에 칼륨 티오아세테이트(2.16 g, 18.91 mmol, 1.00 당량)를 질소 대기 하에 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(600.00 mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(200.00 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물(200.00 mL), 염수(200.00 mL*3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 진공 하에 농축 건조하여 1-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]에테논(화합물 129, 4.50g, 85%)을 적색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.05 (m, 4H), 2.34 (s, 3H).
단계 4. 화합물 130의 합성
MeOH(300.00 mL) 중 1-[[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]에테논(화합물 129, 2.00 g, 7.70 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 MeONa(6.93 mL, 37.33 mmol, 5.00 당량, 30%)를 N2 하에 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC(PE:EtOAc = 10:1)는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 AcOH로 pH 값이 3-4가 되도록 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM(50.00 mL)으로 희석하고 여과하였다. 여액을 Prep-TLC(PE:EtOAc = 10:1)로 정제하여 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄티올(화합물 130, 1.35 g, 72%)을 밝은 황색 오일로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.14 (dd, J = 8.0, 6.8 Hz, 2H), 2.85 (dt, J = 8.0, 7.2 Hz, 2H), 1.43 (t, J = 8.0 Hz, 1H).
단계 5. 화합물 132의 합성
DMF(200.00 mL) 중 (2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노산(화합물 131, 20.00 g, 64.24 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 공기 대기 하에 실온에서 TSTU(25.18 g, 83.52 mmol, 1.30 당량) 및 DIEA(16.60 g, 128.48 mmol, 2.00 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(200.00 mL)로 희석하고, 생성된 혼합물을 ETOAC(100.00 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물(100.00 mL), 염수(100.00 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 진공에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE:EtOAc = 1:2) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노에이트(화합물 132, 25.00 g, 83%)을 흰색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z):431 [M+Na]+
단계 6. 화합물 133의 합성
물(200.00 mL) 중 글리신(3.68 g, 48.97 mmol, 1.00 당량) 및 NaHCO3(12.34 g, 146.89 mmol, 3.00 당량)의 용액에 DMF(200.00 mL) 중 2,5-디옥소피롤리딘-1-일(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로파노에이트(화합물 132, 20.00 g, 48.97 mmol, 1.00 당량)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타냅니다. 반응물을 2 N HCl을 사용하여 pH 값을 2-3으로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc(500.00 mL*3)로 추출하고, 합한 유기층을 염수(500.00 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 진공에서 농축 건조하여 [(2S)-2-[[(9H)-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도]아세트산(화합물 133, 15.00 g, 71%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 369 [M+H]+
단계 7. 화합물 134의 합성
THF(300.00 mL)/톨루엔(100.00 mL) 중 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-프로판아미도]아세트산(화합물 133, 5.00 g, 13.57 mmol, 1.00 당량), Pb(OAc)4(7.22 g, 16.28 mmol, 1.20 당량) 및 피리딘(1.29 g, 16.31 mmol, 1.20 당량)의 용액을 N2하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 여과하였다. 여과 케이크를 THF(100.00 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 (PE:ETOAC=1:2)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]프로판아미도]메틸 아세테이트(화합물 134, 2.50 g, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 405 [M+Na]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.77-7.73 (m, 2H), 7.58 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 5.24 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 - 4.35 (m, 2H), 4.22 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 8. 화합물 135의 합성
DCM(120 mL) 중 [(2S)-2-[[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노]-프로판아미도]메틸 아세테이트(화합물 134, 2.25 g, 5.88 mmol, 1.00 당량) 및 2-(2-클로로-4-니트로페닐)에탄티올(화합물 500, 1.28 g, 5.88 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 실온에서 N2 하에 TFA(0.27 mL, 2.376 mmol, 0.62 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공에서 농축 건조시켜 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 135, 3.10 g, 90%)를 노란색 고체로 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 540,542 [M+H]+.
단계 9. 화합물 136의 합성
DMF(155.00 mL) 중 9H-플루오렌-9-일메틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 135, 3.10 g, 5.74 mmol, 1.00 당량)의 용액에 N2 하에 0℃에서 피페리딘(31.00 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 0.5시간 동안 0℃에서 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(600.00 ml)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 EA(200.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(200.00 ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 진공 하에 농축 건조하여 3.00g의 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 (DCM:MeOH = 3:1)로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 재정제하여 (2S)-2-아미노-N-([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)프로펜아미드(화합물 136, 1.50 g, 78%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 318,320 [M+H]+.
단계 10. 화합물 137의 합성
DMF(75.00 mL) 중 (2S)-2-아미노-N-([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]-메틸)프로펜아미드(화합물 136, 1.50 g, 4.72 mmol, 1.00 당량)의 용액에 H2O(10.00 mL) 중 NaHCO3(0.59 g, 7.08 mmol, 1.50 당량) 및 Boc2O(1.03 g, 4.72 mmol, 1.00 당량)의 용액을 공기 중 실온에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 물(500.00 mL)로 희석하고, EtOAc(200.00 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(200.00 mL*3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에 농축 건조시켜 tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]설파닐]메틸)-카바모일]에틸]카바메이트(화합물 137, 1.82 g, 83 %)를 적색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 418,420 [M+H]+, 318,320 [M+H-100]+
단계 11. 화합물 138의 합성
EtOH(100.00 mL)/H2O(50.00 mL) 중 tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(2-클로로-4-니트로페닐)에틸]-설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 137, 1.82 g, 4.36 mmol, 1.00 당량), 철 분말(2.43 g, 0.04 mmol, 10.00 당량) 및 NH4Cl(2.33 g, 0.04 mmol, 10.00 당량)의 슬러리를 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM(50.00 mL)으로 용해시키고 여과하였다. 여액을 (DCM:MeOH = 13:1) 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에틸]설파닐]메틸)카바모일]에틸]카바메이트(화합물 138, 1.20 g, 68%)를 황색 오일로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 388,390 [M+H]+, 288,290 [M+H-100]+
단계 12. 화합물 139의 합성
DMF(5.00 mL) 중 3-[5-(아미노메틸)-1-옥소-3H-이소인돌-2-일]피페리딘-2,6-디온(INT 1, 352 mg, 1.29 mmol, 1.00 당량)의 교반된 용액에 0℃에서 CDI(209.00 mg, 1.29 mmol, 1 당량) 및 TEA(260 mg, 2.58 mmol, 2 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, tert-부틸 N-[(1S)-1-[([[2-(4-아미노-2-클로로페닐)에틸]설파닐]-메틸)카바모일]-에틸]카바메이트(화합물 138, 500.00 mg, 1.29 mmol , 1.00 당량) 및 DMAP(472 mg, 3.87 mmol, 3.00 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피로 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분 내 0%에서 60% 구배; 검출기, UV 254 nm. 이로써 tert-부틸 N-[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)에틸]카바메이트(화합물 139, 450.00 mg, 48%)를 황색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 687,689 [M+H]+, 587,589 [M+H-100]+
단계 13. 화합물 140의 합성
DCM(22.00 mL) 중 tert-부틸 N-[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)]-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]-메틸]카바모일)에틸]카바메이트(화합물 139, 440.00 mg, 0.64 mmol, 1.00 당량) mL)의 교반된 용액에 TFA(2.20 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축 건조시켜 (2S)-2-아미노-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]프로판아미드; 트리플루오로아세트산(화합물 140, 400.00 mg)을 적색 오일로 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 578,589 [M+H-TFA]+
단계 14. 화합물 142의 합성
DMSO(10 mL) 중 L-발린(화합물 141, 0.50 g, 4.27 mmol, 1.00 당량)의 슬러리에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥사노에이트(1.32g, 4.28 mmol, 1.00 당량) 및 DIEA(1103 mg, 8.54 mmol, 2.00 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 컬럼, C18 실리카 겔; 이동상, 물 중 ACN(0.1%FA), 30분 내 0%에서 60% 구배; 검출기, UV 220 nm. 이로써 (2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부타노산(화합물 142, 1.2 g, 72%)을 갈색 고체로 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 311 [M+H]+
단계 15. 화합물(Im)의 합성
DMF(2 mL) 중 (2S)-2-[6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미도]-3-메틸부타노산, (화합물 142, 59 mg, 0.19 mmol, 1.00 당량), HOBT(26 mg, 0.19 mmol, 1.00 당량) 및 HATU(72 mg, 0.19 mmol, 1.00 당량)의 용액을 공기 중에서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 (2S)-2-아미노-N-[[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]페닐]에틸)설파닐]메틸]프로판아미드 트리플루오로아세트산(화합물 140, 200 mg, 0.19 mmol, 1.00 당량, 66.70%) 및 DIEA(197 mg, 1.52 mmol, 8.00 당량)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 하기 조건으로 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다: 칼럼: YMC-Actus Triart C18, 30 mm X 150 mm, 5 um; 이동상 A: 물(0.1%FA), 이동상 B: ACN; 유량: 60mL/분; 구배: 10분에 28 B에서 45 B, 254 nm; RT1:9.67분. 수집된 분획을 동결건조하여 N-[(1S)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-클로로-4-[([[2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소-3H-이소인돌-5-일]메틸]카바모일)아미노]-페닐]에틸)설파닐]메틸]카바모일)에틸]카바모일]-2-메틸프로필]-6-(2,5-디옥소피롤-1-일)헥산아미드(화합물 (Im), 27.8 mg, 16%)를 백색 고체로서 수득하였다. LCMS(ES, m/z): 879,881 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ10.99 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.47 (t, J=6.0Hz, 1H), 8.03 (d, J =7.2Hz, 1H), 7.78 (d, J =8.8Hz,1H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J =8.0Hz, 1H), 7.21-7.14 (m, 2 H), 6.99 (s, 2H), 6.82 (t, J=6.0Hz, 1H), 5.13-5.10 (m,1 H), 4.47-4.40 (m, 3H), 4.33-4.29 (m, 3H), 4.24 (t, J=7.2 Hz, 1H), 4.14 (t, J =6.8Hz, 1H), 3.38-3.36 (m, 1H), 2.97-2.90 (m, 1H), 2.86 (t, J=7.6Hz, 2H), 2.73-2.67 (m, 2H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.20-2.05 (m, 2H), 2.02-1.96 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.48-1.46 (m, 4H), 1.23-1.16 (m, 6H), 0.83-0.78 (m, 6H).
실시예 4: 신규분해약물 접합체의 제조 및 특성화를 위한 일반적인 절차
항체 용액을 30 당량의 트리스-(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)으로 처리하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하여 사슬간 디설파이드를 환원시켰다. 환원된 항체를 일루스트라(illustra) NAP 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 완충액으로 정제하였다.
접합은 N,N-디메틸아세트아미드(DMA)의 최종 농도가 15%(v/v)가 되도록 DMA에 스톡 용액으로 첨가된 링커-신규분해약물 12 당량을 갖는 50 mM EPPS, 5 mM EDTA pH 7.0 중 2-5 mg/mL에서 환원된 항체 용액의 처리에 의해 수행되었다. 생성된 반응 혼합물을 4℃에서 밤새 방치하였다. 생성된 신규분해약물 접합체를 일루스트라(illustra) NAP 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 20 mM 석시네이트, 8% 수크로스, 0.01% 트윈-20 pH 5.5로 정제하고 50 kD 분자량 컷오프(Millipore)가 있는 아미콘 울트라(Amicon Ultra) 원심 농축기를 사용하여 농축했다.
0.5 mg/mL에서 30분 동안 실행되는 이동상으로 400 mM 과염소산나트륨, 50 mM 인산나트륨, 5%(v/v)로 이소프로판올로 등극적으로 용리되는 5 μm 입자(Tosoh Bioscience)가 있는 7.8 x 300 mM TSKGel 3000SWXL 컬럼을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 농도 및 단량체가 결정되었다. 신규분해약물 접합체는 214 nm에서 검출하는 항체 표준 곡선으로부터 정량화되었다.
약물 대 항체 비(DAR)는 2.5 μm 입자를 갖는 4.6 x 35 mm TSKgel 부틸-NPR 컬럼을 사용하여 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 결정하였다. 이동상 A는 1.5 M 황산암모늄, 25 mM 인산나트륨 pH 7.0이었다. 이동상 B는 25 mM 인산나트륨 pH 7.0, 25%(v/v) 이소프로판올이었다. 분석물은 12분 내에 0-100% B의 선형 구배로 0.6mL/분의 유량으로 용리되었다. 검출은 214 nm에서 이루어졌다.
유리 링커-페이로드는 2.5 μm 입자(Supelco)가 있는 4.6 x 250 mm HISEP 컬럼을 사용하는 혼합-모드 크로마토그래피에 의해 결정되었다. 이동상 A는 100 mM 암모늄 아세테이트였다. 이동상 B는 100% 아세토니트릴이었다. 분석물을 25분 내에 25-40% B의 구배로 용리한 다음, 0.7mL/분의 유량으로 2분 내에 40-100% B의 구배로 용리했다. 컬럼 온도는 35℃였다. 유리-링커 페이로드는 254 nm에서 검출되는 외부 표준 곡선을 사용하여 정량화되었다.
실시예 5: 신규분해약물 및 신규분해약물 접합체에 대한 시험관내 항증식 검정을 위한 일반 절차 1
세포 성장을 억제하는 신규분해약물 접합체의 능력은 시험관내 항-증식 검정을 사용하여 측정하였다. 표적 세포는 100 μL 완전 세포 성장 배지(RPMI 1640, 대부분의 세포주에 대해 10% 소 태아 혈청 및 1% 페니실린-스트렙토마이신; 하이브리-캐어(Hybri-care) 배지, BT-474에 대해 1.5g/L 중탄산나트륨, 10% 소 태아 혈청 및 1% 페니실린-스트렙토마이신; RPMI 1640, HL-60에 대해 20% 태아 소 혈청 및 1% 페니실린-스트렙토마이신)에서 웰당 1,500 - 5,000개의 세포로 플레이팅되었다. 접합체를 4배 연속 희석을 사용하여 완전 세포 성장 배지에서 희석하고 웰당 100 μL를 첨가하였다. 최종 농도는 일반적으로 1 x 10-8 M 내지 1.53 x 10-13 M 또는 1 x 10-7 M 내지 1.53 x 10-12 M 범위였다. 세포를 5일 동안 가습된 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 인큐베이션했다. 남아있는 세포의 생존력은 비색 WST-8 검정(Dojindo Molecular Technologies, Inc., Rockville, MD, US)에 의해 결정되었다. WST-8을 최종 부피의 10%에 첨가하고 플레이트를 2-4시간 동안 가습된 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 다중-웰 플레이트 판독기에서 450 nm(A450)에서의 흡광도를 측정하여 플레이트를 분석했다. 배지 및 WST-8만 있는 웰의 배경 A450 흡광도는 모든 값에서 차감되었다. 각 처리된 샘플 값을 처리되지 않은 세포가 있는 웰의 평균 값으로 나누어 생존율(%)을 계산했다. 생존율 값은 각 처리에 대한 세미-log 플롯의 테스트 샘플 농도에 대해 플롯되었다. IC50 값은 자동으로 계산되었다.
BT-474 유방암 세포주에 대한 화합물 (Ia) 및 (Ic)의 트라스투주맙 및 페르투주맙 접합체의 항증식 활성은 도 1-4에 도시되어 있다(각각의 신규분해약물 접합체에서 약물:항체 비율 = 8). 항체 약물 접합체 카드실라(Kadcyla) 및 비접합 항체 트라스투주맙 및 페르투주맙은 항체 신규분해약물 접합체보다 100배 초과 덜 활성인 것으로 밝혀진 반면, 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 리툭시맙-화합물(Ia) 및 방출된 신규분해약물 P1 및 P4 a는 BT-474 세포에 대해 1000배 초과 덜 활성인 것으로 밝혀졌다.
BT-474 유방암 세포주에 대한 화합물(Ia) 및 화합물(Ic)의 트라스투주맙 및 페르투주맙 접합체의 항증식 활성은 도 5-6에 도시되어 있다(약물:항체 비율이 명시됨). BT-474 세포에 대해 항체 약물 접합체 ENHERTU® 및 비접합 항체 트라스투주맙은 항체 신규분해약물 접합체보다 덜 활성인 것으로 밝혀졌다.
SK-BR-3 유방암 세포주에 대한 화합물 (Ia)의 트라스투주맙 및 페르투주맙 접합체의 항증식 활성은 도 7 및 8에 도시되어 있다(각각의 신규분해약물 접합체에서 약물:항체 비율 = 8). 접합된 신규분해약물는 항체 약물 접합체 카드실라와 유사한 활성을 갖는 반면, 접합되지 않은 항체 트라스투주맙 및 페르투주맙은 신규분해약물 접합체보다 훨씬 덜 활성인 것으로 밝혀졌다. 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 리툭시맙-화합물(Ia) 및 방출된 신규분해약물 P1 및 P4 a는 SK-BR-3 세포에 대해 상당히 덜 활성인 것으로 밝혀졌다.
HL-60(급성 골수성 백혈병) 세포주에 대한 화합물 (Ia), (Id)의 OR000213, huMy9-6, 및 린츠투주맙 IgG1 접합체의 항증식 활성은 도 9-12에 도시되어 있다(지정되지 않은 경우 약물:항체비 = 8). 신규분해약물 접합체는 세포주에 대해 승인된 제제 MYLOTARG®와 유사한 활성을 갖는 반면, 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 트라스투주맙-화합물(Ia) 및 리툭시맙-화합물(Id)은 상당히 덜 활성인 것으로 나타났다.
라모스(비-호지킨 림프종) 세포주에 대한 화합물(Ia) 및 (Ic)의 리툭시맙 접합체의 항증식 활성은 도 13에 도시되어 있다(명시되지 않은 경우 약물:항체 비율= 8). 비접합 리툭시맙, 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 트라스투주맙-화합물(Ia) 및 방출된 신규분해약물 P1 및 P4는 이 세포주에 대해 신규분해약물 접합체보다 덜 활성인 것으로 나타났다.
다우디 림프종 세포주에 대한 화합물 (Ia) 및 (Ic)의 리툭시맙 접합체의 항증식 활성은 도 14 및 15에 도시되어 있다(지정되지 않은 경우 약물:항체 비율 = 8). 비접합 리툭시맙, 비-세포 결합 대조군 신규분해약물 접합체 트라스투주맙-화합물(Ia) 및 방출된 신규분해약물 P1은 이 세포주에 대해 신규분해약물 접합체보다 덜 활성인 것으로 나타났다.
NCI-N87 위암 세포주에 대한 화합물 (Ia)의 트라스투주맙 및 페투주맙 접합체의 항증식 활성은 도 16 및 17에 도시되어 있다(각각의 신규분해약물 접합체에서 약물:항체 비율 = 8). 접합된 신규분해약물은 항체 약물 접합체 카드실라와 유사한 활성을 갖는 반면, 접합되지 않은 항체 트라스투주맙 및 페투주맙은 신규분해약물 접합체보다 훨씬 덜 활성인 것으로 밝혀졌다. 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 리툭시맙-화합물(Ia) 및 방출된 신규분해약물 P1은 NCI-N87 세포에 대해 상당히 덜 활성인 것으로 밝혀졌다.
도 18은 BT-464 유방암 세포에서 인간 혈청과 함께 3일 인큐베이션한 후 화합물(Ia)의 트라스투주맙 및 페르투주맙 접합체의 항증식 활성 대 혈청 부재 하에 접합체의 활성을 도시한다. 그래프에 나타난 바와 같이, 신규분해약물 접합체의 활성은 혈청의 존재 및 부재에서 유사하여 인간 혈청이 활성에 영향을 미치지 않음을 나타낸다. 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 OR000213-화합물(Ia)은 이 세포주에 대해 1000배 초과 덜 활성이다.
도 19는 BT-464 유방암 세포에서 마우스 혈청과 함께 3일 인큐베이션한 후 화합물(Ia)의 트라스투주맙 및 페르투주맙 접합체의 항증식 활성 대 혈청 부재 하에 접합체의 활성을 도시한다. 그래프에 나타난 바와 같이, 신규분해약물 접합체의 활성은 혈청의 존재 및 부재하에서 유사하여 마우스 혈청이 활성에 영향을 미치지 않음을 나타낸다. 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 OR000213-화합물(Ia)은 이 세포주에 대해 1000배 초과 덜 활성이다.
표 1 및 2는 다양한 Her2 세포주에 대한 화합물 (Ia), (Ib), (Ic), 및 (Id)의 트라스투주맙 접합체 및 화합물 (Ia) 및 (Ic)의 페르투주맙 접합체의 IC50 값을 나타낸다. 표 1에 나타난 바와 같이, 신규분해약물 접합체는 접합되지 않은 항체에 비해 BT-474 세포주에서 개선된 활성을 보였고, 방출된 페이로드 및 항체 약물 접합체 카드실라 및 ENHERTU®에 대해서도 개선된 활성을 나타냈다. 신규분해약물 접합체는 또한 비접합 항체에 비해 SK-BR-3 유방암 세포주 및 NCI-N87 위 세포주에 대해 더 나은 활성을 보였다. 표 2에 나타난 바와 같이, 항체 신규분해약물 접합체는 또한 비접합 항체 또는 카드실라에 비해 SNU-182 간 세포주에 대한 활성이 개선되었다.
표 1: 항-Her2 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00154
표 2: 항-Her2 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00155
표 3은 항-CD20 세포주에서 항체 신규분해약물 접합체의 활성을 보여준다. 항체 신규분해약물 접합체는 비접합 항체, 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 트라스투주맙-화합물 I(a) 및 방출 페이로드에 비해 다우디 및 라모스 림프구 세포주에 대해 우수한 활성을 가졌다.
표 3: 항-CD20 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00156
표 4는 AML HL-60 세포주에 대한 화합물 (Ia) 및 (Id)의 huMy9-6 및 OR000213 접합체 및 화합물 (Ia) 및 (Id)의 린투주맙 IgG1 접합체의 IC50 값을 나타낸다. 표 4에 나타낸 바와 같이, 신규분해약물 접합체는 MYLOTARG®와 비교하여 HL-60 세포주에서 유사한 활성을 보였고 비-결합 접합체인 리툭시맙-화합물(Ic)에 비해 개선된 활성을 나타냈다.
표 4: 항-HL-60 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00157
표 5는 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 OR000213-화합물 (Ia)과 비교하여 인간 혈청 또는 마우스 혈청과 함께 인큐베이션한 후 BT-474 유방암 세포주에 대한 트라스투주맙 및 페르투주맙 화합물 (Ia) 접합체의 항증식 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이, 인간 또는 마우스 혈청에서 인큐베이션된 신규분해약물의 활성은 혈청이 도입되지 않은 활성과 일치하였다.
표 5: 혈청 안정성 테스트의 IC50
Figure pct00158
실시예 6: 신규분해약물 및 신규분해약물 접합체에 대한 시험관내 항증식 검정을 위한 일반 절차 2
세포 배양: 세포주는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection, ATCC, Manassas, VA, USA) 또는 독일의 미생물 및 세포 배양 컬렉션(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, DSMZ, Braunschweig, Germany)에서 입수하고 ATCC 또는 DSMZ에서 지정한 배양 조건에 따라 유지되었다. 세포를 해동하고 실험 조건을 진행하기 전에 적어도 2개의 계대 동안 배양물에서 유지하였다.
세포독성 검정: 부착성 세포주의 경우, 세포를 효소가 없는 PBS-기반 세포 해리 완충액(Gibco, USA)으로 해리하고 조직 배양 처리된 96-웰 편평 바닥 폴리스티렌 플레이트(Costar, Corning, USA)에 세포의 배가 시간에 따라 적절한 세포 밀도에서 플레이팅하였다. 플레이팅 18시간 후, 세포를 100 nM에서 시작하는 적절한 농도의 테스트 제품으로 처리하고 4배 연속 희석액으로 희석했다. 현탁 세포주의 경우, 세포를 처리 당일에 시딩하고 세포를 상기 기재된 바와 같이 처리하였다. 부착 세포는 5일 동안 처리하고 현탁 세포는 3일 동안 처리하였다. 세포 계수 키트-8(Cell Counting Kit-8, CCK-8, Dojindo Laboratories, Japan)을 사용하여 세포 증식을 평가하고 프로메가 글로맥스 디스커버(Promega GloMax Discover) 플레이트 판독기(Promega, USA)를 사용하여 측정값을 얻었다. 데이터는 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어(GraphPad Software, San Diego, CA)를 사용하여 분석되었다. 모든 데이터 포인트는 기술적 3회 반복에서 얻었고 실험은 3회 생물학적 복제를 사용하여 검증되었다.
표 6은 다양한 암 세포주에 대한 신규분해약물 P1, P3 및 P4의 활성을 나타낸다. 표에서 보는 바와 같이 신규분해약물는 각각의 세포주에 대해 활성을 가지고 있다.
표 6: 다양한 암세포주에서 대표적인 신규분해약물의 IC50
Figure pct00159
표 7은 다양한 유방암 세포주에 대한 페르투주맙 화합물(Ia) 접합체 및 공지된 항체 약물 접합체 ENHERTU®의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이 페르투주맙-화합물(Ia) 접합체는 보고된 모든 세포주에서 더 활성이 있었다.
표 7: 다양한 유방암 세포주에서 페르투주맙-화합물(Ia) 접합체의 IC50
Figure pct00160
표 8은 3개의 위암 세포주에 대한 페르투주맙-화합물 (Ia) 접합체 및 공지된 항체 약물 접합체 ENHERTU의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이, 페르투주맙-화합물(Ia) 접합체는 보고된 모든 세포주에서 더 활성이었다.
표 8: 다양한 위암 세포주에서 페르투주맙-화합물 I(a) 접합체의 IC50
Figure pct00161
표 9는 다양한 급성 골수성 백혈병 세포주에 대한 OR000213-화합물 (Ia) 접합체 및 공지된 항체 약물 접합체 MYLOTARG의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이, OR000213-화합물(Ia) 접합체는 몇몇 세포주에서 더 나은 활성을 보였다.
표 9: 다양한 급성 골수성 백혈병 세포주에서 OR000213-화합물 I(a) 접합체의 IC50
Figure pct00162
표 10은 다양한 다발성 골수종 세포주에 대한 3개의 항-CD38 신규분해약물 접합체의 활성을 보여준다. 표에 나타난 바와 같이 접합체는 모든 세포주에서 우수한 활성을 보였다.
표 10: 다발성 골수종 세포주에서 항-CD38 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00163
표 11은 다양한 다발성 골수종 세포주에 대한 항-CD 138 신규분해약물 접합체의 활성을 보여준다. 표에 나타난 바와 같이 접합체는 모든 세포주에서 우수한 활성을 보였다.
표 11: 다발성 골수종 세포주에서 항-CD38 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00164
표 12는 다양한 다발성 골수종 세포주에 대한 항-BCMA 신규분해약물 접합체의 활성을 보여준다. 표에 나타난 바와 같이 접합체는 모든 세포주에서 우수한 활성을 보였다.
표 12: 다발성 골수종 세포주에서 항-BCMA 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00165
표 13은 다양한 암 세포주에 대한 항-Trop-2 신규분해약물 접합체의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이 접합체는 모든 세포주에서 우수한 활성을 보였다.
표 13: 다양한 암 세포주에서 항-Trop-2 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00166
표 14는 2개의 암 세포주에 대한 항-FGFR4 신규분해약물 접합체의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이, 접합체는 US-1784 항체 및 접합되지 않은 신규분해약물 단독보다 두 세포주 모두에서 우수한 활성을 보였고 더 나은 활성을 나타냈다.
표 14: 다양한 암 세포주에서 항-FGFR4 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00167
표 15는 2개의 활액 육종 세포주에 대한 항-EGFR 신규분해약물 접합체의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이, 접합체는 두 세포주 모두에서 우수한 활성을 보였고, 세툭시맙 및 비접합된 신규분해약물 단독의 활성보다 더 우수하였다.
표 15: 활액 육종 세포주에서 항-EGFR 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00168
표 16은 2개의 암 세포주에 대한 항-PDGF-R α 신규분해약물 접합체의 활성을 나타낸다. 표에 나타난 바와 같이, 접합체는 두 세포주 모두에서 우수한 활성을 나타냈다.
표 16: 암 세포주에서 항-PDGF-R α 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00169
표 17은 횡문근육종 세포주에 대한 항-TEM1/CD248 신규분해약물 접합체의 활성을 보여준다. 표에 나타난 바와 같이, 접합체는 세포주에 대한 활성이 우수하였다.
표 17: 횡문근육종 세포주에서 항-TEM1/CD248 신규분해약물 접합체의 IC50
Figure pct00170
실시예 7: 항-Her2 항체-신규분해약물 접합체를 사용한 유방암의 치료
트라스투주맙 화합물(Ia) 접합체 및 페르투주맙 화합물(Ia) 접합체를 면역결핍 마우스(Fox Chase SCID®, CB17/Icr-Prkdc scid /IcrIcoCrl, Charles River)에서 테스트했다. 1 mm3 BT474 인간 유방 암종 단편을 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 이식했다. 종양의 평균 크기가 100-150 mm3에 도달하면, 마우스에 항-Her2 항체-신규분해약물 접합체, 비-표적화 신규분해약물 접합체 및 비히클 대조군을 투여했다.
트라스투주맙-화합물(Ia) 접합체, 리툭시맙-화합물(Ia) 접합체 및 페르투주맙-화합물(Ia) 접합체의 스톡 용액을 비히클로 희석하여 0.5 mg/mL 투여 용액을 얻었고, 이는 각 동물의 체중에 맞게 조정되는 10 mL/kg의 투여 부피(20g 마우스당 0.2 mL)에서 5 mg/kg을 제공했다.
마우스를 다음과 같이 4개의 처리 군(N=8/군)으로 나누었다: 1) 비히클; 2) 트라스투주맙-화합물(Ia) 접합체(5 mg/kg, iv, qd x 1); 3) 리툭시맙-화합물(Ia) 접합체(5 mg/kg, iv, qd x 1); 4) 페르투주맙-화합물(Ia) 접합체(5 mg/kg, iv, qd x 1). 모든 시험 물품은 체중(0.200 mL/20g 마우스)에 대해 조정된 부피로 단일 용량(qd x 1)으로 정맥내(i.v.) 투여되었다.
캘리퍼스를 사용하여 일주일에 2회 종양을 측정하고, 종양이 종점 부피(1,000 mm3)에 도달하거나 연구의 마지막 날(60일) 중 먼저 도래하는 날짜에 각 동물을 안락사시켰다. MTV(n)는 종양이 종점 부피에 도달하지 못한 남아 있는 동물의 수(n)에서 연구 마지막 날 종양 부피 중앙값으로 정의되었다.
도 20에 나타낸 바와 같이, 페르투주맙 및 리툭시맙 접합체는 비히클 및 비세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 리툭시맙-화합물(Ia)과 비교하여 시간 경과에 따라 더 느린 종양 성장을 제공하였다.
실시예 8: 항-CD20 항체-신규분해약물 접합체를 사용한 비-호지킨 림프종(NHL)의 치료
리툭시맙-화합물(Ia) 접합체를 면역결핍 마우스(Fox Chase SCID®, CB17/Icr-Prkdc scid /IcrIcoCrl, Charles River)에서 테스트했다. 1x107 다우디 버킷의(Daudi Burkitt's) B 세포 림프종 세포(ATCC® CCL-213™)를 마우스의 오른쪽 옆구리(0.1 mL 세포 현탁액)에 피하 주사했다. 종양이 100-150 mm3의 평균 크기에 도달했을 때, 마우스에 항-CD20 항체-신규분해약물 접합체, 비-표적화 신규분해약물 접합체 및 비히클 대조군을 투여를 개시하였다.
트라스투주맙-화합물(Ia) 및 리툭시맙-화합물(Ia)의 스톡 용액을 비히클로 희석하여 0.5 mg/mL 및 0.1 mg/mL 투여 용액을 얻었고, 이는 각 동물의 체중에 맞게 조정되는 10 mL/kg(20g 마우스당 0.2 mL)의 투여 부피에서 5 및 1 mg/kg을 제공했다.
마우스를 다음과 같이 4개의 처리 군(N=8/군)으로 나누었다: 1) 비히클; 2) 트라스투주맙-화합물(Ia)(5 mg/kg, iv, qd x 1); 3) 리툭시맙-화합물(Ia)(1 mg/kg, iv, qd x 1); 4) 리툭시맙-화합물(Ia)(5 mg/kg, iv, qd x 1). 모든 시험 물품은 체중에 대해 조정된(0.200 mL/20g 마우스) 부피에서 단일 용량(qd x 1)으로 정맥내(i.v.) 투여되었다.
캘리퍼스를 사용하여 일주일에 2회 종양을 측정하고, 종양이 종점 부피(1,500 mm3)에 도달하거나 연구의 마지막 날(45일) 중 먼저 도래하는 날짜에 각 동물을 안락사시켰다. MTV(n)는 종양이 종말점 부피에 도달하지 못한 남아 있는 동물의 수(n)에서 연구 마지막 날 종양 부피 중앙값으로 정의되었다.
도 21에 나타낸 바와 같이, 리툭시맙 접합체의 5 mg/kg 용량은 1 mg/kg 용량, 비히클 및 비 세포-결합 대조군 신규분해약물 접합체 트라스투주맙-화합물(Ia)과 비교하여 시간 경과에 따라 더 느린 종양 성장을 제공하였다.
실시예 9. 항-CD33 항체-신규분해약물 접합체를 사용한 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료
OR000213-화합물(Ia)은 흉선이 없는 누드 마우스(Crl:NU(NCr)-Foxnlnu, Charles River)에서 테스트되었다. 1 x 107 HL-60 급성 전골수세포 백혈병 세포(ATCC® CCL-240™)를 마우스의 오른쪽 옆구리(0.1 mL 세포 현탁액)에 피하 주사했다. 종양이 100-150 mm3의 평균 크기에 도달했을 때, 마우스에 항-CD33 항체-신규분해약물 접합체, 비-표적화 신규분해약물 접합체 및 비히클 대조군을 투여하였다.
트라스투주맙-화합물(Ia) 및 OR000213-화합물(Ia)의 스톡 용액을 비히클로 희석하여 0.5 mg/mL 및 0.1 mg/mL 투여 용액을 얻었고, 이는 각 동물의 체중에 맞게 조정되는 10 mL/kg(20g 마우스당 0.2mL)의 투여 부피에서 5 및 1 mg/kg을 제공했다.
마우스를 다음과 같이 4개의 처리 군(N=8/군)으로 나누었다: 1) 비히클; 2) 트라스투주맙-화합물(Ia)(5 mg/kg, iv, qd x 1); 3) 리툭시맙-화합물(Ia)(1 mg/kg, iv, qd x 1); 4) 리툭시맙-화합물(Ia)(5 mg/kg, iv, qd x 1). 모든 시험 물품은 체중에 대해 조정된(0.200 mL/20g 마우스) 부피에서 단일 용량(qd x 1)으로 정맥내(i.v.) 투여되었다.
캘리퍼스를 사용하여 일주일에 2회 종양을 측정하고, 종양이 종점 부피(2,000 mm3)에 도달하거나 연구의 마지막 날(45일) 중 먼저 도래하는 날짜에 각 동물을 안락사시켰다. MTV(n)는 종양이 종말점 부피에 도달하지 못한 남아 있는 동물의 수(n)에서 연구 마지막 날 종양 부피 중앙값으로 정의되었다.
도 22에 나타낸 바와 같이, 모든 신규분해약물 접합체는 비히클에 비해 시간경과에 따라 더 느린 종양 성장을 제공했다.
실시예 10. 항-CD38 항체-신규분해약물 접합체를 사용한 다발성 골수종의 치료
HuAT13/5-화합물(Ia)은 CB.17 SCID 마우스(CB17/Icr-Prkdcscid/IcrlcoCrl, Charles River)에서 테스트했다. 50% 마트리겔(Matrigel) 중 1 x 107 NCI-H929 골수종 세포(ATCC® CRL-9068™)를 마우스의 겨드랑이 부위에 피하 주사했다(0.1 mL 세포 현탁액). 종양이 100-150 mm3의 평균 크기에 도달했을 때, 마우스에 항-CD38 항체-신규분해약물 접합체 및 비히클 대조군을 투여하였다.
HuAT13/5-화합물(Ia)의 스톡 용액을 비히클로 희석하여 0.5 mg/mL 투여 용액을 얻었고, 이는 각 동물의 체중에 맞게 조정되는 10 mL/kg(20g 마우스당 0.2mL)의 투여 부피에서 5 mg/kg을 제공했다.
마우스를 다음과 같이 2개의 처리 군(N=8/군)으로 나누었다: 1) 비히클; 2) HuAT13/5-화합물(Ia)(5 mg/kg, iv, qd x 1). 모든 시험 물품은 체중에 대해 조정된(0.200 mL/20g 마우스) 부피에서 단일 용량(qd x 1)으로 정맥내(i.v.) 투여되었다.
캘리퍼스를 사용하여 일주일에 2회 종양을 측정하고, 종양이 종점 부피(2,000 mm3)에 도달하거나 연구의 마지막 날(45일) 중 먼저 도래하는 날짜에 각 동물을 안락사시켰다. MTV(n)는 종양이 종말점 부피에 도달하지 못한 남아 있는 동물의 수(n)에서 연구 마지막 날 종양 부피 중앙값으로 정의되었다.
도 25에 나타낸 바와 같이, HuAT13/5-신규분해약물 접합체의 5 mg/kg 용량은 비히클과 비교하여 시간 경과에 따라 더 느린 종양 성장을 제공하였다.
요약 및 초록 섹션이 아닌 상세한 설명 섹션이 청구범위를 해석하는 데 사용되도록 의도되었음을 이해해야 한다. 요약 및 초록 섹션은 본 발명자(들)에 의해 고려된 바와 같이 본 개시내용의 모든 예시적인 측면이 아닌 하나 이상을 설명할 수 있으며, 따라서 본 개시내용 및 첨부된 청구범위를 어떤 식으로든 제한하도록 의도되지 않는다.
본 개시는 특정 기능의 구현 및 이들의 관계를 예시하는 기능적 빌딩 블록의 도움으로 위에서 설명되었다. 이러한 기능적 빌딩 블록의 경계는 설명의 편의를 위해 임의로 정의되었다. 지정된 기능과 그 관계가 적절하게 수행되는 한 대체 경계를 정의할 수 있다.
특정 측면에 대한 전술한 설명은 본 개시내용의 일반적인 특성을 충분히 드러낼 수 있으므로, 다른 사람들이 과도한 실험 없이 본 개시의 일반적인 개념을 벗어나지 않으면서 이러한 특정 측면과 같은 다양한 적용을 용이하게 수정 및/또는 조정할 수 있다. 따라서, 그러한 적응 및 수정은 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 측면의 등가물의 의미 및 범위 내에 있도록 의도된다. 본원의 어구 또는 용어는 설명의 목적을 위한 것이며 본 명세서의 용어 또는 어구가 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 함을 이해해야 한다.
본 개시내용의 폭 및 범위는 위에서 설명된 예시적인 측면들 중 임의의 것에 의해 제한되어서는 안 되며, 다음 청구범위 및 그 균등물에 따라서만 정의되어야 한다.

Claims (94)

  1. 화학식 (I)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00171
    (I)
    여기서:
    a는 1 내지 10의 정수이고;
    A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
    R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    X는 -NR2-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-으로부터 선택되고; 여기서,
    Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 N(R2)v이고;
    v는 1 또는 2이고;
    각각의 R2는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    n은 1 내지 6의 정수이고; 그리고
    m은 2 내지 6의 정수이고;
    여기서, 각 기의 왼쪽은 L에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
    단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고;
    L은 절단가능한 링커 또는 절단불가능한 링커이고; 그리고
    Bm은 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 모이어티임.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편인, 접합체.
  3. 제 1항에 있어서, a가 2 내지 8의 정수인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, L이 절단불가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  5. 제 4항에 있어서, L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00172

    여기서:
    p는 1 내지 10의 정수이고;
    Figure pct00173
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00174
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  6. 제 5항에 있어서, L이 하기와 같은, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00175
  7. 제 6항에 있어서, p가 5인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  8. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, L이 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 절단가능한 링커가 프로테아제에 의해 절단가능한, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 제 8항 또는 제 9항에 있어서, L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00176

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 L- 또는 D-배열에서 자연-발생 아미노산 잔기이며, 단 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이고;
    Figure pct00177
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00178
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  11. 제 10항에 있어서, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 존재하지 않거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-라이신, D-라이신, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 제 11항에 있어서,
    Z1은 존재하지 않거나 글리신이고;
    Z2는 존재하지 않거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-라이신, D-라이신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제 10항에 있어서, L이 하기와 같은, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00179
  14. 제 13항에 있어서, q가 5인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  15. 제 8항에 있어서, L이 생체환원성 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  16. 제 8항 또는 제 15항에 있어서, L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체:
    Figure pct00180

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    R, R', R'', 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 제미날 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있으며;
    Figure pct00181
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00182
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  17. 제 8항에 있어서, L이 산 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  18. 제 8항 또는 제 17항에 있어서, L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00183

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Figure pct00184
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00185
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  19. 제 8항에 있어서, L이 클릭-투-릴리스(click-to-release) 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  20. 제 8항 또는 제 19항에 있어서, L이 하기로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00186

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Figure pct00187
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00188
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  21. 제 8항에 있어서, L이 피로포스파타제 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  22. 제 21항에 있어서, L이 하기와 같은, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00189

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Figure pct00190
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00191
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  23. 제 8항에 있어서, L이 베타-글루쿠로니다제 절단가능한 링커인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  24. 제 8항 또는 제 23항에 있어서, L이 하기로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00192

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    --- 부재 또는 결합이고;
    Figure pct00193
    는 X에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00194
    는 결합 모이어티에 대한 부착 지점임.
  25. 제 1항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서, Bm이 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  26. 제 25항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 결합하는 단백질이 표면 항원인, 접합체.
  27. 제 26항에 있어서, 상기 표면 항원이 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자( clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 카데린(Cadherin)-3, 카데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-아세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR , 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, XAGE1, 또는 이들의 조합을 포함하는, 접합체.
  28. 제 25항에 있어서, 상기 표면 항원이 HER2, CD20, CD38, CD33, BCMA, CD138, EGFR, FGFR4, GD2, PDGFR, TEM1/CD248, TROP-2, 또는 이들의 조합을 포함하는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  29. 제 25항에 있어서, 상기 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 온툭시맙, 이사툭시맙, 사시투주맙, U3-1784, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, OR000213, 발란타맙, 인다툭시맙, 세툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 항체, 알렘투주맙, 이브리투모맙, 토시투모맙, 베바시주맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 오레고보맙, 및 벨투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  30. 제 29항에 있어서, 상기 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, huMy9-6, OR000213, 린투주맙 또는 젬투주맙인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  31. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
    v는 1이고;
    m 및 n은 2이고; 그리고
    R2는 메틸인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  32. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
    v는 2이고;
    m 및 n은 2이고; 그리고
    각각의 R2는 메틸인, 접합체.
  33. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -O(CH2)n-이고; 여기서:
    n은 2인, 접합체.
  34. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -S(CH2)n-이고; 여기서:
    n은 2인, 접합체.
  35. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고; 그리고
    X는 -NR2-이고; 여기서:
    R2는 메틸인, 접합체.
  36. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -NR2-이고; 여기서:
    R2는 수소인, 접합체.
  37. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고; 그리고
    X는 -C(CH3)=인, 접합체.
  38. 제 1항 내지 제 30항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고; 그리고
    X는 -N(R2)(CH2)mO(CH2)n-이고;여기서:
    n는 1이고;
    m은 2이고; 그리고
    R2는 메틸인, 접합체.
  39. 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00195

    여기서:
    A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    U는 NH 및 CF2로부터 선택되고; 그리고
    R2는 -C(O)R3, -N(R4)2, -(CH2)nOH, -(CH2)nSH, -(CH2)nN(R4)2, -(CH2)nQ'(CH2)mOH, -(CH2)nQ'(CH2)mSH, 및 -(CH2)nQ'(CH2)mN(R4)2로부터 선택되고; 여기서,
    R3은 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    각각의 R4는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    Q'는 O, S, 또는 NR4이고;
    n은 1-6이고; 그리고
    m은 2-5이고;
    단, R2가 NH2, -(CH2)nNH2, 또는 -(CH2)nOH인 경우, R1은 할로임.
  40. 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00196
    .
  41. 화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00197
  42. 화학식 (V)의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00198

    여기서, Bm은 단백질에 특이적으로 결합하는 결합 모이어티임.
  43. 제 42항에 있어서, Bm이 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  44. 제 43항에 있어서, 상기 결합 모이어티가 특이적으로 결합하는 단백질이 표면 항원인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  45. 제 44항에 있어서, 상기 표면 항원이 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자( clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 카데린(Cadherin)-3, 카데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-아세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR , 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, XAGE1, 또는 이들의 조합을 포함하는, 접합체.
  46. 제 45항에 있어서, 상기 표면 항원이 HER2, CD20, CD38, CD33, BCMA, CD138, EGFR, FGFR4, GD2, PDGFR, TEM1/CD248, TROP-2, 또는 이의 조합을 포함하는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  47. 제 43항에 있어서, 상기 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 온툭시맙, 이사툭시맙, 사시투주맙, U3-1784, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, OR000213, 발란타맙, 인다툭시맙, 세툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 항체, 알렘투주맙, 이브리투모맙, 토시투모맙, 베바시주맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 오레고보맙, 및 벨투주맙을 포함하는, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  48. 제 47항에 있어서, 상기 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, huMy9-6, OR000213, 린투주맙 또는 젬투주맙인, 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  49. 제 1항 내지 제 46항 중 어느 한 항의 접합체 또는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  50. 약제학적으로 허용되는 양의 제 1항 내지 제 48항 중 어느 한 항의 접합체, 화합물 또는 조성물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  51. 제 50항에 있어서, 상기 암이 유방암, 위암, 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 두경부암, 편평 세포 암종 및/또는 간세포 암종인, 방법.
  52. 제 50항에 있어서, 제 1항 내지 제 46항 중 어느 한 항의 접합체 또는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 투여 이전, 이후, 또는 이와 동시에 약제학적으로 허용되는 양의 추가 제제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  53. 제 52항에 있어서, 상기 추가 제제가 세포독성제 또는 면역 반응 조절제인, 방법.
  54. 제 53항에 있어서, 상기 면역 반응 조절제가 관문 억제제인, 방법.
  55. 제 54항에 있어서, 상기 관문 억제제가 PD-1 억제제, PD-L1 억제제, CTLA-4 억제제, TIM3 억제제, 및/또는 LAG-3 억제제를 포함하는, 방법.
  56. 제 1항의 접합체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는 방법으로서, 상기 프로세스가 결합 모이어티를 화학식 (I-1)의 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는 방법:
    Figure pct00199

    여기서:
    a는 1 내지 10의 정수이고;
    A는 페닐 또는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    R1은 수소 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    U는 NH 및 CF2로부터 선택되고;
    X는 -N(R2)v-, =C(CH3)-, -Q-(CH2)n-, 및 -Q(CH2)mQ'(CH2)n-로부터 선택되고; 여기서,
    v는 1 또는 2이고;
    Q 및 Q'는 각각 독립적으로 O, S 또는 NR2이고;
    각각의 R2는 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이고;
    n은 1 내지 6의 정수이고; 그리고
    m은 2 내지 6의 정수이고;
    여기서 각 기의 왼쪽은 L'에 부착되고 오른쪽은 A에 부착되며;
    단, X가 NH 또는 -Q-(CH2)n-인 경우, R1은 할로이고;
    L'는 결합 모이어티에 접합되는 절단가능한 또는 절단불가능한 링커 전구체임.
  57. 제 56항에 있어서, 화학식 (I-1)의 화합물과 반응시키기 전에 결합 모이어티를 환원시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  58. 제 56항 또는 제 57항에 있어서, a가 2 내지 8의 정수인, 방법.
  59. 제 56항 내지 제 58항 중 어느 한 항에 있어서, L'가 절단불가능한 링커 전구체인, 방법.
  60. 제 59항에 있어서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00200

    여기서:
    p는 1 내지 10의 정수이고; 그리고
    Figure pct00201
    는 X에 대한 부착 지점임.
  61. 제 60항에 있어서, L'는 하기식인, 방법:
    Figure pct00202
    .
  62. 제 61항에 있어서, p가 5인 방법.
  63. 제 56항 내지 제 58항 중 어느 한 항에 있어서, L'가 절단가능한 링커 전구체인, 방법.
  64. 제 63항에 있어서, 상기 절단가능한 링커 전구체가 프로테아제에 의해 절단가능한, 방법.
  65. 제 63항 또는 제 64항에 있어서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00203

    Figure pct00204

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 존재하지 않거나 L- 또는 D-배열에서 자연-발생 아미노산 잔기이며, 단 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기이고; 그리고
    Figure pct00205
    는 X에 대한 부착 지점임.
  66. 제 65항에 있어서, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 존재하지 않거나 L-발린, D-발린, L-시트룰린, D-시트룰린, L-알라닌, D-알라닌, L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌, L-라이신, D-라이신, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 단, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 적어도 2개는 아미노산 잔기인, 방법.
  67. 제 66항에 있어서,
    Z1은 존재하지 않거나 글리신이고;
    Z2는 존재하지 않거나 L-글루타민, D-글루타민, L-글루탐산, D-글루탐산, L-아스파르트산, D-아스파르트산, L-알라닌, D-알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Z3은 L-발린, D-발린, L-알라닌, D-알라닌, L-페닐알라닌, D-페닐알라닌 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    Z4는 L-알라닌, D-알라닌, L-시트룰린, D-시트룰린, L-아스파라긴, D-아스파라긴, L-라이신, D-라이신, L-페닐알라민, D-페닐알라닌, 및 글리신으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  68. 제 65항에 있어서, L'는 하기식인, 방법:
    Figure pct00206
    .
  69. 제 68항에 있어서, q가 5인, 방법.
  70. 제 63항에 있어서, L'가 생체환원성 링커 전구체인, 방법.
  71. 제 63항 또는 제 70항에 있어서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00207

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    R, R', R'', 및 R'''는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알콕시C1-C6알킬, (C1-C6)2NC1-C6알킬, 및 C1-C6알킬로부터 선택되거나, 2개의 제미날 R 기는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸 또는 사이클로프로필 고리를 형성할 수 있고; 그리고
    Figure pct00208
    는 X에 대한 부착 지점임.
  72. 제 63항에 있어서, L'가 산 절단가능한 링커 전구체인, 방법.
  73. 제 63항 또는 제 72항에 있어서, L'는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00209

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고; 그리고
    Figure pct00210
    는 X에 대한 부착 지점임.
  74. 제 63항에 있어서, L'가 클릭-투-릴리스 링커 전구체인, 방법.
  75. 제 63항 또는 제 74항에 있어서, L'는 하기로부터 선택되는, 방법 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00211

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고; 그리고
    Figure pct00212
    는 X에 대한 부착 지점임.
  76. 제 63항에 있어서, L'가 피로포스파타제 절단가능한 링커 전구체인, 방법.
  77. 제 76항에 있어서, L'가 하기식인, 방법:
    Figure pct00213

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    Figure pct00214
    는 X에 대한 부착 지점임.
  78. 제 63항에 있어서, L'가 베타-글루코로니다제 절단가능한 링커 전구체인, 방법.
  79. 제 63항 또는 제 78항에 있어서, L'는 하기로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00215

    여기서:
    q는 2 내지 10의 정수이고;
    --- 부재 또는 결합이고; 그리고
    Figure pct00216
    는 X에 대한 부착 지점임.
  80. 제 56항 내지 제 79항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I-1)의 화합물이 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 결합 모이어티와 반응하는, 방법.
  81. 제 80항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 표면 항원에 결합하는, 방법.
  82. 제 81항에 있어서, 상기 표면 항원이 5T4, ACE, ADRB3, AKAP-4, ALK, 안드로겐 수용체, AOC3, APP, Axin1, AXL, B7H3, B7-H4, BCL2, BCMA, bcr-ab1, BORIS, BST2, C242, C4.4a, CA 125, CA6, CA9, CAIX, CCL11, CCR5, CD123, CD133, CD138, CD142, CD15, CD15-3, CD171, CD179a, CD18, CD19, CD19-9, CD2, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD27L, CD28, CD3, CD30, CD31, CD300LF, CD33, CD352, CD37, CD38, CD4, CD40, CD41, CD44, CD44v6, CD5, CD51, CD52, CD54, CD56, CD62E, CD62P, CD62L, CD70, CD71, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD80, CD90, CD97, CD125, CD138, CD141, CD147, CD152, CD154, CD326, CEA, CEACAM5, CFTR, 응집 인자(clumping factor), cKit, 클로딘(Claudin) 3, 클로딘 18.2, CLDN6, CLEC12A, CLL-1, cll3, c-MET, 크립토(Crypto) 1 성장 인자, CS1, CTLA-4, CXCR2, CXORF61, 시클린(Cyclin) Bl, CYP1B1, 카데린(Cadherin)-3, 카데린-6, DLL3, E7, EDNRB, EFNA4, EGFR, EGFRvIII, ELF2M, EMR2, ENPP3, EPCAM, EphA2, Ephrin A4, Ephrin B2, EPHB4, ERBB2 (Her2/neu), ErbB3, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), ETBR, ETV6-AML, FAP, FCAR, FCRL5, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FLT3, 엽산 수용체 알파, 엽산 수용체 베타, FOLR1, Fos-연관 항원 1, 푸코실(Fucosyl) GM1, GCC, GD2, GD3, GloboH, GM3, GPC1, GPC2, GPC3, gp1OO, GPNMB, GPR20, GPRC5D, GUCY2C, HAVCR1, HER2, HER3, HGF, HMI.24, HMWMAA, HPV E6, hTERT, 인간 텔로머라제 역전사효, ICAM, ICOS-L, IFN-α, IFN-γ, IGF-I 수용체, IGLL1, IL-2 수용체, IL-4 수용체, IL-13Ra2, IL-1 1Ra, IL-1, IL-12, IL-23, IL-13, IL-22, IL-4, IL-5, IL-6, 인터페론 수용체, 인테그린(α4, αvβ3, αvβ5, αvβ6, α1β4, α4β1, α4β7, α5β1, α6β4, αIIbβ3 인테그린 포함), 인테그린 알파 V, 장내 카복실 에스테라제, KIT, LAGE-1a, LAIR1, LAMP-1, LCK, 레구메인(Legumain), 루이스Y, LFA-1(CD11a), L-셀렉틴(CD62L), LILRA2, LIV-1, LMP2, LRRC15, LY6E, LY6K, LY75, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE Al, 멜란A/MARTl, 메조텔린, ML-IAP, MSLN, 뮤신, MUC1, MUC16, mut hsp70-2, MYCN, 미오스타틴, NA17, NaPi2b, NCA-90, NCAM, 넥틴(Nectin)-4, NGF, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, NY-BR-1, NY-ESO-1, o-아세틸-GD2, OR51E2, OY-TES1, p53, p53 돌연변이, PANX3, PAP, PAX3, PAX5, p-CAD, PCTA-1/갈렉틴(Galectin) 8, PD-L1, PD-L2, PDGFR, PDGFR-베타, 포스파티딜세린, PIK3CA, PLAC1, 폴리시알산, 프로스타제, 전립선암 세포, 프로스테인, 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 광견병, 서바이빈 및 텔로머라제, PRSS21, PSCA, PSMA, PTK7, RAGE-1, RANKL, Ras 돌연변이, 호흡기 세포융합 바이러스, 레수스 인자, RhoC, RON, ROR1, ROR2, RU1, RU2, 육종 전위 중단점, SART3, SLAMF7, SLC44A4, sLe, SLITRK6, 정자 단백질 17, 스핑고신-1-포스페이트, SSEA-4, SSX2, STEAP1, TAG72, TARP, TCRβ, TEM1/CD248, TEM7R, 테나신 C, TF, TGF-1, TGF-β2, TNF-α, TGS5, Tie 2, TIM-1, Tn Ag, TRAC, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TROP-2, TRP-2, TRPV1, TSHR , 종양 항원 CTAA16.88, 티로시나제, UPK2, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, 비멘틴, WT1, XAGE1, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  83. 제 81항에 있어서, 상기 표면 항원이 HER2, CD20, CD38, CD33, BCMA, CD138, EGFR, FGFR4, GD2, PDGFR, TEM1/CD248, TROP-2, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  84. 제 80항에 있어서, 상기 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 젬투주맙, 페르투주맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 온툭시맙, 이사툭시맙, 사시투주맙, U3-1784, 다라투무맙, STI-6129, 린투주맙, huMy9-6, OR000213, 발란타맙, 인다툭시맙, 세툭시맙, 디누툭시맙, 항-CD38 A2 항체, HuAT13/5 항체, 알렘투주맙, 이브리투모맙, 토시투모맙, 베바시주맙, 파니투무맙, 트레멜리무맙, 티실리무맙, 카투막소맙, 오레고보맙, 및 벨투주맙을 포함하는, 방법.
  85. 제 84항에 있어서, 상기 항체가 리툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, huMy9-6, OR000213, 린투주맙 또는 젬투주맙인, 방법.
  86. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
    v는 1이고;
    m 및 n은 2이고; 그리고
    R2는 메틸인, 방법.
  87. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -N(R2)v(CH2)mO(CH2)n-이고; 여기서:
    v는 2이고;
    m 및 n은 2이고; 그리고
    각각의 R2는 메틸인, 방법.
  88. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -O(CH2)n-이고; 여기서:
    n은 2인, 방법.
  89. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -S(CH2)n-이고; 여기서:
    n은 2인, 방법.
  90. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고; 그리고
    X는 -NR2-이고; 여기서:
    R2는 메틸인, 방법.
  91. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 할로이고; 그리고
    X는 -NR2-이고; 여기서:
    R2는 수소인, 방법.
  92. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 페닐이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고; 그리고
    X는 -C(CH3)=인, 방법.
  93. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서,
    A는 C4-C10사이클로알킬 고리이고;
    U는 NH이고;
    R1은 수소이고; 그리고
    X는 -N(R2)(CH2)mO(CH2)n-이고;여기서:
    n는 1이고;
    m은 2이고; 그리고
    R2는 메틸인, 방법.
  94. 제 56항 내지 제 85항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I-1)의 화합물이 하기식인, 방법:
    Figure pct00217
    .
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