TW202313022A - 新降解劑－抗ｃｄ３３抗體綴合物 - Google Patents

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奈森 費雪金
彼德 帕克
辰 白
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南韓商歐倫醫療公司
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Abstract

本揭露提供新降解劑與抗CD33抗體之綴合物。亦提供包含該等綴合物之組成物。化合物及組成物可用於治療有需要的個體之疾病或疾患，例如癌症。

Description

新降解劑－抗ＣＤ３３抗體綴合物
本揭露提供新降解劑(neoDegrader)綴合物，其中新降解劑綴合至抗CD33抗體或其抗原結合部分。亦提供包含綴合物之組成物。綴合物及組成物可用於治療有需要的個體之癌症。 對以電子方式提交的序列表之參考
與本申請案一起提交的以電子方式遞交之ASCII文字檔案形式的序列表(名稱：4547_017PC02_Seqlisting_ST25；大小：42, 724位元組；且創建日期：2022年5月31日)之內容以引用方式整體併入本文。
蛋白質降解已藉由免疫調節醯亞胺藥物之有效性被證實為一種治療策略。此等化合物具有結合cereblon (CRBN)並促進由CRL4 CRBNE3泛素連接酶介導之受質蛋白之募集及泛素化之能力。据認為，免疫調節醯亞胺充當「分子膠」，作為疏水性貼片填充結合界面，重新編程(reprogram)連接酶與新受質之間的蛋白質相互作用。
儘管此等化合物作為癌症之新穎療法令人興奮，但迄今為止，它們僅限於用於血液科惡性腫瘤，諸如多發性骨髓瘤及骨髓化生不良症候群(MDS)。擴展可藉由降解其他致癌蛋白(其中許多被認為係『不可成藥的(undruggable)』)發揮作用的化合物之文庫係藥物開發之活躍領域。因此，持續需要可靶向此等替代性致癌蛋白且治療多種癌症的新化合物。
用小分子GSPT1降解劑治療急性髓性白血病(AML)患者已被證明推動了臨床反應，但與嚴重不良事件(AE)相關聯。AML患者常常在癌細胞上具有高水準之CD33，這得到了臨床批准CD33靶向ADC (Mylotarg)用於治療AML之支持。本發明係基於以下發現：將GSPT1降解有效載荷分子與CD33靶向抗體組合可提高GSPT1降解劑之臨床功效及耐受性。
在第一態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物：
Figure 02_image001
(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：
a係1至10之整數；
A係苯基或C 4-C 10環烷基環；
U選自NH及CF 2；
R 1獨立地選自氫及鹵基；
X選自-NR 2-、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中
Q及Q'各自獨立地係O、S或N(R 2) v；
v係1或2；
各R 2獨立地係氫或C 1-C 6烷基；
n係1至6之整數；且
m係2至6之整數；
其中各群之左側連接至L，且右側連接至A；條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基；
L係可裂解連接子或不可裂解連接子；且
Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分。
在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：重鏈可變區(VH)互補決定區(CDR) 1 (VH-CDR1)，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；輕鏈可變區(VL) CDR1 (VL-CDR1)，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH，其包含SEQ ID NO:4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO:8所列之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含恆定區，其中該恆定區包含至少一種不同於吉妥珠單抗(gemtuzumab)之胺基酸。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分係IgG1抗體或其抗原結合部分。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含對應於恆定區之胺基酸297處之丙胺酸。在一些態樣中，抗CD33抗體包含如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈。
在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 19所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 20所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 21所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 22所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 23所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 24所列之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含VH，其包含SEQ ID NO: 27所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 28所列之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分係IgG1抗體或其抗原結合部分。在一些態樣中，抗CD33抗體包含如SEQ ID NO: 25所列之重鏈及如SEQ ID NO: 26所列之輕鏈。
在一些態樣中，a係2至8之整數。
在一些態樣中，L係不可裂解連接子。在一些態樣中，L係選自由以下組成之群
Figure 02_image003
、
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
及
Figure 02_image009
； 其中：
p係1至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，L係
Figure 02_image015
。
在一些態樣中，p係5。
在一些態樣中，L係可裂解連接子。在一些態樣中，可裂解連接子係可由蛋白酶裂解。在一些態樣中，L係選自由以下組成之群
Figure 02_image017
；
Figure 02_image019
；
Figure 02_image021
；
Figure 02_image023
；
Figure 02_image025
；
Figure 02_image027
；
Figure 02_image029
；及
Figure 02_image031
；
其中：
q係2至10之整數；
Z 1、Z 2、Z 3及Z 4各自獨立地不存在或係呈L-或D-組態之天然胺基酸殘基，條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，Z 1、Z 2、Z 3及Z 4獨立地不存在或選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸及甘胺酸；條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基。
在一些態樣中，Z 1係不存在或係甘胺酸；Z 2係不存在或選自由以下組成之群：L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸及甘胺酸；Z 3係選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸；且Z 4係選自由以下組成之群：L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸。
在一些態樣中，L係
Figure 02_image017
。
在一些態樣中，q係5。
在一些態樣中，L係可生物還原之連接子。在一些態樣中，L係選自由以下組成之群
Figure 02_image035
其中：
q係2至10之整數；
R、R'、R"及R"'各自獨立地選自氫、C 1-C 6烷氧基C 1-C 6烷基、(C 1-C 6) 2NC 1-C 6烷基及C 1-C 6烷基，或兩個孿R基團連同它們所連接之碳原子可形成環丁基或環丙基環；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，L係酸可裂解連接子。在一些態樣中，L係選自由以下組成之群
Figure 02_image038
；
其中：
q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，L係點擊釋放(click-to-release)連接子。在一些態樣中，L選自
Figure 02_image040
； 其中：
q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，L係焦磷酸酶可裂解連接子。在一些態樣中，L係
Figure 02_image043
； 其中：
q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，L係β-葡醣醛酸酶可裂解連接子。在一些態樣中，L選自
Figure 02_image045
；及
Figure 02_image047
； 其中：
q係2至10之整數；
----不存在或係鍵；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係鹵基；且
X係-N(R 2) v(CH 2) mO(CH 2) n-；其中：
v係1；
m及n係2；且
R 2係甲基。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係鹵基；且
X係-N(R 2) v(CH 2) mO(CH 2) n-；其中：
v係2；
m及n係2；且
各R 2係甲基。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係鹵基；且
X係-O(CH 2) n-；其中：
n係2。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係鹵基；且
X係-S(CH 2) n-；其中：
n係2。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係氫；且
X係--NR 2-；其中：
R 2係甲基。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係鹵基；且
X係--NR 2-；其中：
R 2係氫。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係苯基；
U係NH；
R 1係氫；且
X係-C(CH 3)=。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(I)之綴合物，其中：
A係C 4-C 10環烷基環；
U係NH；
R 1係氫；且
X係-N(R 2)(CH 2) mO(CH 2) n-；其中：
n係1；
m係2；且
R 2係甲基。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(V)之綴合物：
Figure 02_image050
(V)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分。抗CD33抗體或其抗原結合部分可包含例如(i) VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列；(ii) VH，其包含如SEQ ID NO:4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO:8所列之胺基酸序列；(iii)如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈；(iv) VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 19所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 20所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 21所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 22所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 23所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 24所列之胺基酸序列；(v) VH，其包含如SEQ ID NO: 27所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 28所列之胺基酸序列；或(vi)如SEQ ID NO: 25所列之重鏈及如SEQ ID NO: 26所列之輕鏈。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(VI)之綴合物：
Figure 02_image052
(VI)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分。抗CD33抗體或其抗原結合部分可包含例如(i) VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列；(ii) VH，其包含如SEQ ID NO: 4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 8所列之胺基酸序列；(iii)如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈；(iv) VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 19所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 20所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 21所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 22所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 23所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 24所列之胺基酸序列；(v) VH，其包含如SEQ ID NO: 27所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 28所列之胺基酸序列；或(vi)如SEQ ID NO: 25所列之重鏈及如SEQ ID NO: 26所列之輕鏈。
在某些態樣中，本揭露提供一種式(VI)之綴合物：
Figure 02_image054
(VII)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分。抗CD33抗體或其抗原結合部分可包含例如(i) VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列；(ii) VH，其包含如SEQ ID NO:4 所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 8所列之胺基酸序列；(iii)如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈；(iv) VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 19所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 20所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 21所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 22所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 23所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 24所列之胺基酸序列；(v) VH，其包含如SEQ ID NO: 27所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 28所列之胺基酸序列；或(vi)如SEQ ID NO: 25所列之重鏈及如SEQ ID NO: 26所列之輕鏈。
在某些態樣中，本揭露提供一種醫藥組成物，其包含此處提供之綴合物或化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑。
在某些態樣中，本揭露提供一種治療有需要的個體之癌症或骨髓化生不良症候群之方法，該方法包含向個體投與醫藥學上可接受之量之上述綴合物或組成物，或其醫藥學上可接受之鹽。在一些態樣中，癌症係血液科癌症/血癌。在一些態樣中，癌症係多發性骨髓瘤、白血病、惡性淋巴瘤、霍奇金病或慢性骨髓增生性疾病。在一些態樣中，癌症係急性髓性白血病或淋巴瘤。在一些態樣中，癌症係急性髓性白血病。在一些態樣中，癌症對Mylotarg具有抗性或難治性。
在一些態樣中，該方法進一步包含在綴合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時向個體投與醫藥學上可接受之量之額外劑。在一些態樣中，額外劑係細胞毒性劑或免疫反應調節劑。在一些態樣中，免疫反應調節劑係檢查點抑制劑。在一些態樣中，檢查點抑制劑包含PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CTLA-4抑制劑、TIM3抑制劑及/或LAG-3抑制劑。
在某些態樣中，本揭露提供一種製備式(I)之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽的方法，該方法包含使抗CD33抗體或其抗原結合部分與式(I-1)之化合物：
Figure 02_image056
(I-1)，
或其醫藥學上可接受之鹽反應，其中：
a係1至10之整數；
A係苯基或C 4-C 10環烷基環；
R 1獨立地選自氫及鹵基；
U選自NH及CF 2；
X選自-N(R 2) v-、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中
v係1或2；
Q及Q'各自獨立地係O、S或NR 2；
各R 2獨立地係氫或C 1-C 6烷基；
n係1至6之整數；且
m係2至6之整數；
其中各群之左側連接至L'，且右側連接至A；
條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基；
L'係與抗CD33抗體或其抗原結合部分綴合之可裂解或不可裂解連接子前驅物。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列之；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：如SEQ ID NO: 4所列之重鏈可變區及如SEQ ID NO: 8所列之輕鏈可變區。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含恆定區，其中該恆定區包含至少一種不同於吉妥珠單抗之胺基酸。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分係IgG1抗體或其抗原結合部分。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含對應於恆定區之胺基酸297處之丙胺酸。在一些態樣中，抗CD33抗體包含如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 19所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 20所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 21所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 22所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 23所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 24所列之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分包含有包含SEQ ID NO: 27所列之VH及如SEQ ID NO: 28所列之VL。在一些態樣中，抗CD33抗體或其抗原結合部分係IgG1抗體或其抗原結合部分。在一些態樣中，抗CD33抗體包含如SEQ ID NO: 25所列之重鏈及如SEQ ID NO: 26所列之輕鏈。
在一些態樣中，該方法進一步包含在與式(I-1)之化合物反應之前還原抗CD33抗體或其抗原結合部分。
在一些態樣中，a係2至8之整數。在一些態樣中，L'係不可裂解之連接子前驅物、可裂解之連接子前驅物、可生物還原之連接子前驅物、酸可裂解之連接子前驅物、點擊釋放連接子前驅物、焦磷酸酶可裂解之連接子前驅物、β-葡醣醛酸酶可裂解之連接子前驅物或其任何組合。
本揭露係關於一種式(I)之綴合物：
Figure 02_image058
(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： a係1至10之整數； A係苯基或C 4-C 10環烷基環； R 1獨立地選自氫及鹵基； U選自NH及CF 2； X選自-N(R 2) v- 、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中 Q及Q'各自獨立地係O、S或N(R 2) v； v係1或2； 各R 2獨立地係氫或C 1-C 6烷基； n係1至6之整數； m係2至6之整數； 其中各群之左側連接至L，且右側連接至A； 條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基； L係可裂解連接子或不可裂解連接子；且 Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分，例如，包含以下之抗CD33抗體或其抗原結合部分：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；輕鏈可變區(VL) CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列；包含以下之抗CD33抗體或其抗原結合部分：VH，其包含如SEQ ID NO: 4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 8所列之胺基酸序列；或包含以下之抗CD33抗體：如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈。
本揭露亦提供融合至抗CD33抗體或其抗原結合部分之上述化合物、包含化合物或綴合物之組成物、或使用或製備化合物或綴合物之方法。 I. 定義
為使本說明書可更容易理解，首先定義某些術語。額外定義在整個實施方式中闡明。
應注意，術語「一(個/種)(a/an)」實體係指一或多個(種)該實體；例如，「一個核苷酸序列」應理解為表示一或多個核苷酸序列。因此，術語「一個/種」、「一或多個/種」及「至少一個/種」可在本文中互換使用。應進一步注意，可起草請求項以排除任何視情況選用之要素。因此，此聲明旨在用作結合請求項要素之描述使用諸如「只」、「僅」之排他性術語或使用負面限制之先行基礎。
此外，「及/或」在本文中使用時應視為對兩個指定特徵或組分中之各者在存在或不存在另一者之情況下的具體揭露。因此，如在本文中諸如「A及/或B」之片語中使用之術語「及/或」旨在包括「A及B」、「A或B」、「A」(單獨)及「B」(單獨)。同樣，如在諸如「A、B及/或C」之片語中使用之術語「及/或」旨在涵蓋以下態樣中之各者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
應當理解，本文中無論何處用語言「包含」描述態樣，亦提供以「由……組成」及/或「基本上由……組成」描述之其他類似態樣。
除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學術語具有與本揭露相關的一般熟習此項技術者通常理解的相同含義。例如，the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 第2版, 2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 第3版, 1999, Academic Press；及the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, 修訂版, 2000, Oxford University Press，為技藝人員提供本揭露中使用之許多術語之通用詞典。
單位、前綴及符號以其國際單位制(Système International de Unites，SI)接受之形式表示。數字範圍包括定義範圍之數字。在列舉值之範圍之情況下，應當理解，亦明確揭示了在該範圍之列舉的上限與下限之間的各中間整數值及其各分數，以及此類值之間的各子範圍。任何範圍之上限及下限皆可獨立地包括在該範圍之內或排除於該範圍之外，且包括任一個、零個或兩個限值之各範圍亦涵蓋在本揭露內。因此，本文所列舉之範圍應被理解為該範圍內所有值(包括所列舉之端點)之簡寫。例如，1至10之範圍應被理解為包括由1、2、3、4、5、6、7、8、9及10組成之群中的任何數字、數字之組合或子範圍。
在明確列舉值之情況下，應理解與所列舉之值大致相同數量或量的值亦在本揭露之範圍內。在揭示組合之情況下，該組合之要素之各子組合亦經明確揭示且在本揭露之範圍內。相反，在單獨揭示不同要素或要素之群之情況下，亦揭示了其組合。在揭露之任何要素經揭示為具有複數個替代方案之情況下，在此亦揭示了其中各替代方案被單獨排除或與其他替代方案之任何組合排除的該揭露之實例；揭露之多於一個要素可具有此類排除，且在此揭示具有此類排除的要素之所有組合。
如本文所用，術語「DAR」係指綴合物之藥物抗體比，它係連接至各抗體之新降解劑-連接子複合物之平均數。在某些態樣中，本文所述之綴合物之DAR係1至10。在一些態樣中，本文所述之綴合物之DAR係1至8。在一些態樣中，本文所述之綴合物之DAR係1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10。
如本文所用，術語「抗體」亦指全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子之免疫活性部分，即含有免疫特異性結合感興趣之靶標之抗原或其部分的抗原結合位點的分子，此類靶標包括但不限於癌細胞或產生與自體免疫疾病相關聯的自體免疫抗體之細胞。本文所揭示之免疫球蛋白可係免疫球蛋白分子之任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)、類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或亞類。免疫球蛋白可來源於任何物種。然而，在一個態樣中，免疫球蛋白係人類、鼠或兔來源的。
術語「單域抗體」，亦稱為奈米抗體，係由單個單體可變抗體域組成的抗體片段，其分子量係約12 kDa至約15 kDa。單體抗體可基於重鏈可變域或輕鏈。單域抗體之實例包括但不限於V HH片段及V NAR片段。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，通常係其抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；雙功能抗體(diabody)；線性抗體；由Fab表現文庫產生之片段、抗獨特型(抗Id)抗體、CDR (互補決定區)及任何上述免疫特異性結合癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原之表位結合片段，單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
「完整抗體」係包含抗原結合可變區以及輕鏈恆定域(CL)及重鏈恆定域CH1、CH2及CH3之抗體。恆定域可係天然序列恆定域(例如，人類天然序列恆定域)或其胺基酸序列變體。
如本文所用，術語「單株抗體」係指獲自實質上均質的抗體群體之抗體，即構成該群體之個體抗體係相同的，除了可能以少量存在之天然發生的突變。單株抗體具有高度特異性，針對單個抗原位點。此外，與包括針對不同決定位(表位)之不同抗體之多株抗體製劑相比，各單株抗體係針對抗原上之單個決定位。除了它們的特異性之外，單株抗體之優勢在於它們可被合成而不受其他抗體之污染。修飾語「單株」表示抗體之特徵為係獲自實質上均質的抗體群體，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。例如，根據本揭露使用之單株抗體可藉由融合瘤方法製備，或者可藉由重組DNA方法製備。「單株抗體」亦可自噬菌體抗體文庫分離。
本文中之單株抗體具體包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中之相應序列相同或同源，而鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或亞類之抗體以及此類抗體之片段中的相應序列相同或同源，只要它們表現出所要的生物活性即可。本文中感興趣之嵌合抗體包括「靈長類化」抗體，其包含來源於非人類靈長類動物(例如，舊大陸猴、猿等)之可變域抗原結合序列及人類恆定區序列。
已採用各種方法來生產單株抗體(MAb)。融合瘤技術係指產生單種類型抗體之選殖細胞株，使用各種物種(包括小鼠(鼠)、倉鼠、大鼠及人類)之細胞。另一種製備MAb之方法使用基因工程，包括重組DNA技術。由此等技術製成之單株抗體包括嵌合抗體及人源化抗體等。嵌合抗體組合了來自多於一類物種之DNA編碼區。例如，嵌合抗體可自小鼠衍生可變區，且自人類衍生恆定區。人源化抗體主要來自人類，儘管它含有非人類部分。像嵌合抗體一樣，人源化抗體可含有完全人類恆定區。但與嵌合抗體不同，可變區可部分來源於人類。人源化抗體之非人類合成部分常常來自鼠抗體中之CDR。無論如何，此等區對於允許抗體識別及結合特定抗原來說至關重要。雖然可用於診斷及短期治療，但不可能長期向人投與鼠抗體而不增加有害免疫原性反應之風險。這種反應稱為人類抗小鼠抗體(HAMA)，當人類免疫系統將鼠抗體識別為外來物且對其進行攻擊時就會發生。HAMA反應可導致中毒性休克或甚至死亡。
嵌合及人源化抗體藉由最小化所投與抗體之非人類部分來降低HAMA反應之可能性。此外，嵌合及人源化抗體可具有活化次級人類免疫反應之額外益處，諸如抗體依賴性細胞毒性。
完整抗體可具有一或多種「效應功能(effector function)」，其係指可歸因於抗體之Fc區(天然序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區)之彼等生物活性。抗體效應功能之實例包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如，B細胞受體；BCR)下調等。
根據其重鏈恆定域之胺基酸序列，完整抗體可分為不同的「類別」。完整抗體有五種主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且其中一些可進一步分為「亞類」(同型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及IgA2。對應於不同類別抗體之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白之次單元結構及三維組態係眾所周知的。
術語「約」在本文中用於表示大約、大致、約或在……左右。當術語「約」與數字範圍結合使用時，它藉由將邊界擴展到所述數值之上及之下來修飾該範圍。一般而言，術語「約」可藉由 例如向上或向下(升高或降低) 10%之變化來修飾高於及低於所述值之數值。
術語「投與(administration)」、「投與(administering)」及其語法變體係指經由醫藥學上可接受之途徑將組成物，諸如本揭露之EV ( 例如，外泌體(exosome))引入個體。藉由任何合適的途徑將組成物，諸如本揭露之EV ( 例如，外泌體)引入個體，途徑包括瘤內、口服、經肺、鼻內、腸胃外(靜脈內、動脈內、肌肉內、腹膜內或皮下)、經直腸、淋巴內、鞘內、眼周或局部。投與包括自我投與及他人投與。合適之投與途徑允許組成物或劑發揮其預期功能。例如，如果合適之途徑係靜脈內，則藉由將組成物或劑引入個體之靜脈來投與組成物。
如本文所用，術語「抗體」涵蓋天然或者部分或全部合成產生之免疫球蛋白及其片段。該術語亦涵蓋具有與免疫球蛋白結合域同源之結合域之任何蛋白質。「抗體」進一步包括包含來自免疫球蛋白基因或其片段之框架區之特異性結合及識別抗原的多肽。術語抗體之使用意在包括完整抗體、多株抗體、單株抗體及重組抗體、其片段，且進一步包含單鏈抗體、人源化抗體、鼠抗體、嵌合、小鼠-人類、小鼠-靈長類、靈長類-人類單株抗體、抗個體遺傳型抗體、抗體片段， 例如像scFv、(scFv) 2、Fab、Fab'及F(ab') 2、F(ab1) 2、Fv、dAb及Fd片段、雙功能抗體及抗體相關之多肽。抗體包括雙特異性抗體及多特異性抗體，只要它們表現出所要的生物活性或功能即可。在本揭露之一些態樣中，生物活性分子係抗體或包含其抗原結合片段之分子。
術語「抗體-藥物綴合物」及「ADC」可互換使用，且係指 例如與一或多種治療劑(有時在本文中稱為劑、藥物或活性醫藥成分)共價連接之抗體。在本揭露之一些態樣中，生物活性分子係抗體-藥物綴合物。
如本文所用，如應用於一或多個感興趣之值之術語「大約」係指與所述參考值相似的值。在某些態樣中，術語「大約」係指在所述參考值之任一方向上(大於或小於)落在10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小範圍內之一系列值，除非另有說明或自上下文中顯而易見(除非此數字超過可能值之100%)。
「保守胺基酸取代」係其中胺基酸殘基經具有相似側鏈之胺基酸殘基置換之取代。此項技術已經定義了具有相似側鏈之胺基酸殘基家族，包括鹼性側鏈( 例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈( 例如，天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電荷之極性側鏈( 例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈( 例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β-支鏈側鏈( 例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈( 例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，如果多肽中之一個胺基酸經來自同一側鏈家族之另一個胺基酸置換，則取代被認為係保守的。在另一個態樣中，一串胺基酸可經在側鏈家族成員之次序及/或組成上不同的結構相似的串保守地置換。
如本文所用，術語「保守的」係指多核苷酸序列或多肽序列之分別核苷酸或胺基酸殘基，其係在被比較的二或更多個序列之相同位置中未改變地出現的殘基。相對保守的核苷酸或胺基酸係在與比序列中其他地方出現之核苷酸或胺基酸相比更相關的序列中保守的核苷酸或胺基酸。
在一些態樣中，如果二或更多個序列彼此100%一致，則稱它們係「完全保守的」或「一致的」。在一些態樣中，如果二或更多個序列彼此至少約70%一致、至少約80%一致、至少約90%一致或至少約95%一致，則稱它們係「高度保守的」。在一些態樣中，如果二或更多個序列彼此至少約30%一致、至少約40%一致、至少約50%一致、至少約60%一致、至少約70%一致、至少約80%一致、至少約90%一致或至少約95%一致，則稱它們係「保守的」。序列保守可應用於多核苷酸或多肽之整個長度，或者可應用於其一部分、區或特徵部。
如本文所用，術語「連接」及「綴合」可互換使用，且各自指包含新降解劑及抗CD33抗體或其抗原結合部分之二或更多個部分之共價或非共價連接。在一些態樣中，連接或綴合可包含連接子。
術語「胺基酸序列變體」係指具有在某種程度上不同於天然序列多肽之胺基酸序列之多肽。通常，胺基酸序列變體與天然抗體之至少一個受體結合域或與天然受體之至少一個配體結合域具有至少約70%序列一致性，且通常，它們與此類受體或配體結合域在序列上將係至少約80%，更通常至少約90%同源。胺基酸序列變體在天然胺基酸序列之胺基酸序列內之某些位置處具有取代、缺失及/或插入。胺基酸以習知名稱、一字母及三字母代碼命名。
「序列一致性」定義為在胺基酸序列變體中在比對序列且在必要時引入空位以達成最大百分比序列一致性之後一致的殘基之百分比。用於比對之方法及計算機程式係此項技術中眾所周知的。一種此類計算機程式係由Genentech , Inc.編寫之「Align 2」，該程式於1991年12月10日與用戶文件一起提交給美國版權局，Washington, D.C. 20559。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指分子在補體存在下裂解靶標之能力。補體活化途徑由補體系統之第一組分(C1q)及與同源抗原複合之分子(例如，抗體)結合而起始。為了評估補體活化，可進行CDC檢定。
術語「可變」係指如下實情，在抗體之間可變域之某些部分之序列有很大差異，且該等部分用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。然而，變異性未遍及抗體之可變域均勻分佈。它集中在輕鏈及重鏈可變域中稱為高變區之三個區段中。可變域之高度保守的部分稱為框架區(FR)。天然重鏈及輕鏈之可變域各自包含四個FR，主要採用β摺疊組態，由三個高變區連接，形成連接β摺疊結構之環，且在一些情況下形成β摺疊結構之一部分。各鏈中之高變區藉由FR緊密地保持在一起，且與來自另一條鏈之高變區一起，有助於形成抗體之抗原結合位點。恆定域不直接參與抗體與抗原之結合，但表現出各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。
當在本文中使用時，術語「高變區」係指抗體中負責抗原結合之胺基酸殘基。高變區通常包含來自「互補決定區」或「CDR」之胺基酸殘基(例如，輕鏈可變域中之殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)及89-97 (L3)及重鏈可變域中之殘基31-35 (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)；Kabat等人同上)及/或來自「高變環」之彼等殘基(例如，輕鏈可變域中之殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)及91-96 (L3)及重鏈可變域中之殘基26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3))。「框架區」或「FR」殘基係除本文定義之高變區殘基之外的彼等可變域殘基。
木瓜蛋白酶消化抗體產生：兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，各片段具有單個抗原結合位點；及殘餘「Fc」片段，其名稱反映了其易於結晶之能力。胃蛋白酶處理產生F(ab')2片段，其具有兩個抗原結合位點且仍然能夠交聯抗原。
「Fv」係含有完整抗原識別及抗原結合位點之最小抗體片段。該區由緊密、非共價締合之一個重鏈可變域及一個輕鏈可變域之二聚體組成。在該組態中，各可變域之三個高變區相互作用以在VH-VL二聚體表面上界定一個抗原結合位點。六個高變區共同賦予抗體之抗原結合特異性。然而，即使單個可變域(或包含僅三個對抗原具有特異性之高變區之Fv之一半)亦具有識別及結合抗原之能力，但其親和力低於整個結合位點。
Fab片段亦含有輕鏈之恆定域及重鏈之第一個恆定域(CH1)。Fab'片段與Fab片段之不同之處在於在重鏈CH1域之羧基末端添加了幾個殘基，包括來自抗體鉸鏈區之一或多個半胱胺酸。Fab'-SH係本文對其中恆定域之半胱胺酸殘基帶有至少一個游離硫醇基的Fab'之名稱。F(ab')2抗體片段最初係作為成對Fab'片段產生的，該等片段之間具有鉸鏈半胱胺酸。抗體片段之其他化學綴合亦係已知的。
來自任何脊椎動物物種之抗體之「輕鏈」可基於其恆定域之胺基酸序列，歸類為兩種明顯不同的類型之一，稱為卡帕(κ)及拉目達(λ)。
「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包含抗體之VH及VL域，其中此等域存在於單個多肽鏈中。Fv多肽可進一步包含在VH與VL域之間的多肽連接子，其使得scFv能夠形成用於抗原結合之所要結構。
術語「雙功能抗體」係指具有兩個抗原結合位點之小抗體片段，該等片段包含在同一多肽鏈(VH-VL)中相連接之可變輕域(VL)及可變重域(VH)。藉由使用太短而不允許在同一鏈上之兩個域之間配對的連接子，該等域被迫與另一條鏈之互補域配對且產生兩個抗原結合位點。
「分離的」抗體係已經自其自然環境之組分中鑑定及分離及/或回收之抗體。其自然環境之污染組分係會干擾抗體之診斷或治療用途之材料，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在某些態樣中，將抗體純化至(1)如藉由Lowry方法確定之大於95重量%之抗體，或大於99重量%，(2)足以藉由使用氣相蛋白定序儀獲得N末端或內部胺基酸序列之至少15個殘基之程度，或(3)藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用考馬斯藍或銀染色之均質性。分離的抗體包括重組細胞內之原位抗體，因為抗體自然環境中之至少一種組分將不存在。然而，通常，分離的抗體將藉由至少一個純化步驟來製備。
「癌症」係指一組廣泛的各種疾病，其特徵在於體內異常細胞之不受控制的生長。不受調控的細胞分裂及生長導致形成惡性腫瘤，其侵襲鄰近組織且亦可透過淋巴系統或血流轉移至身體之遠端部位。如本文所用之「癌症」係指原發性、轉移性及復發性癌症。
如本文所用，術語「免疫反應」係指脊椎動物內針對外來因子之生物反應，該反應保護生物免受此等因子及由它們引起的疾病的影響。免疫反應藉由免疫系統之細胞( 例如，T淋巴球、B淋巴球、自然殺手(NK)細胞、巨噬細胞、嗜伊紅白血球、肥大細胞、樹突狀細胞或嗜中性白血球)及由此等細胞中之任一者或肝臟產生之可溶性大分子(包括抗體、細胞介素及補體)之作用介導，導致選擇性靶向、結合、損傷、破壞及/或消除脊椎動物體內侵襲病原體、感染病原體之細胞或組織、癌細胞或其他異常細胞，或者，在自體免疫或病理性發炎之情況下，正常人類細胞或組織。免疫反應包括 例如活化或抑制T細胞， 例如效應T細胞或Th細胞，諸如CD4 +或CD8 +T細胞，或者抑制Treg細胞。如本文所用，術語「T細胞」及「T淋巴球」係可互換的且係指由胸腺產生或加工之任何淋巴球。在一些態樣中，T細胞係CD4+ T細胞。在一些態樣中，T細胞係CD8+ T細胞。在一些態樣中，T細胞係NKT細胞。
「個體」包括任何人類或非人類動物。術語「非人類動物」包括但不限於脊椎動物諸如非人類靈長類動物、羊、狗及囓齒動物諸如小鼠、大鼠及豚鼠。在一些態樣中，個體係人類。術語「個體」及「患者」在本文中可互換使用。
術語「治療有效量」或「治療有效劑量」係指提供所要生物學、治療及/或預防結果之劑( 例如，本文所揭示之新降解劑或新降解劑綴合物)之量。該結果可係減少、改善、改良、減輕、延遲及/或緩和疾病之一或多種徵象、症狀或病因，或生物系統之任何其他所要改變。關於實性瘤，有效量包含足以引起腫瘤縮小及/或降低腫瘤生長速率(諸如抑制腫瘤生長)或預防或延遲其他不想要的細胞增殖之量。在一些態樣中，有效量係足以延遲腫瘤發展之量。在一些態樣中，有效量係足以預防或延遲腫瘤復發之量。有效量可以一或多次投與之形式投與。有效量之組成物可例如(i)減少癌細胞之數量；(ii)減小腫瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延緩、減緩且可阻止癌細胞向周圍器官中之浸潤；(iv)抑制( 即在一定程度上減緩)且可阻止腫瘤轉移；(v)抑制腫瘤生長；(vi)預防或延遲腫瘤之發生及/或複發；及/或(vii)在一定程度上緩解與癌症相關之一或多種症狀。
在一些態樣中，「治療有效量」係經臨床證明實現癌症諸如晚期實性瘤之顯著減少或減緩該癌症進展(消退)之新降解劑或新降解劑綴合物之量。治療劑促進疾病消退之能力可使用熟練從業人員已知的多種方法，諸如在臨床試驗期間在人類個體中，在預測在人體內之功效之動物模型系統中，或藉由在 體外檢定中檢定劑之活性來評估。
如本文所用，術語「護理標準」係指被醫學專家接受為對某種類型疾病之適當治療且被醫療保健專業人員廣泛使用之治療。該術語可與以下任何術語互換使用：「最佳實踐」、「標準醫療護理」及「標準療法」。
例如，「抗癌劑」促進個體之癌症消退或防止進一步的腫瘤生長。在某些態樣中，治療有效量之藥物促進癌症消退至消除癌症之程度。
關於治療之術語「有效」及「有效性」包括藥理學有效性及生理安全性。藥理學有效性係指藥物促進患者癌症消退之能力。生理安全性係指由投與藥物引起的毒性水準或在細胞、器官及/或生物水準上之其他不利的生理效應(不良效應)。
如本文所用，術語「免疫檢查點抑制劑」係指完全或部分減少、抑制、干擾或調節一或多種檢查點蛋白之分子。檢查點蛋白調節T細胞活化或功能。許多檢查點蛋白係已知的，諸如CTLA-4及其配體CD80及CD86；及PD-1及其配體PD-L1及PD-L2。Pardoll, D.M., Nat Rev Cancer12(4):252-64 (2012)。此等蛋白質負責T細胞反應之共刺激或抑制性相互作用。免疫檢查點蛋白調節並維持自身耐受性以及生理免疫反應之持續時間及幅度。免疫檢查點抑制劑包括抗體或來源於抗體。
術語「治療(treat)」或「治療(treatment)」係指治療性治療及預防(prophylactic)或預防性(preventative)措施，其中目的係預防或減緩(減輕)非所要的生理變化或病症，諸如癌症之發展或蔓延。出於本揭露之目的，有益的或所要的臨床結果包括但不限於症狀之緩和、疾病程度之減小、疾病狀態穩定(即，不惡化)、疾病進展之延遲或減緩、疾病狀態之改善或改良、及緩解(無論是部分還是全部)，無論是可偵測的還是不可偵測的。「治療」亦可意謂與未接受治療之預期存活期相比延長存活期。需要治療者包括已經患有疾患或病症者以及容易患有疾患或病症者或要預防疾患或病症者。 II. 「新降解劑」
本揭露提供式(II)之新降解劑：
Figure 02_image060
(II)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： A係苯基或C 4-C 10環烷基環； U選自NH及CF 2； R 1獨立地選自氫及鹵基； R 2選自-C(O)R 3、-N(R 4) 2、-(CH 2) nOH、-(CH 2) nSH、 -(CH 2) nN(R 4) 2、-(CH 2) nQ'(CH 2) mOH、-(CH 2) nQ'(CH 2) mSH及-(CH 2) nQ'(CH 2) mN(R 4) 2；其中 R 3係氫或C 1-C 6烷基； 各R 4獨立地係氫或C 1-C 6烷基； Q'係O、S或NR 4； n係1-6；且 m係2-5； 條件為當R 2係NH 2、-(CH 2) nNH 2或-(CH 2) nOH，則R 1係鹵基。
在某些態樣中，本揭露提供式(II)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： A係苯環或C 4-C 10環烷基環； U係NH； R 1選自氫及鹵基； R 2選自-(CH 2) nQ'(CH 2) mN(R 4) 2、-(CH 2) nOH、 -(CH 2) nSH、-N(R 4) 2及-C(O)R 3；其中： m係2； n係2； Q'係-O-； R 3係甲基；且 各R 4獨立地選自氫及甲基；條件為當R 2係NH 2或 -(CH 2) nOH，則R 1為鹵基。
如本文所用，術語「C 1-C 6烷氧基」係指經由氧原子連接至母分子部分之C 1-C 6烷基。
如本文所用，術語「C 1-C 6烷氧基C 1-C 6烷基」係指經由C 1-C 6烷基連接至母分子部分之C 1-C 6烷氧基。
如本文所用，術語「C 1-C 6烷基」係指衍生自含有一至六個碳原子之直鏈或支鏈飽和烴之基團。
如本文所用，術語「C 4-C 10環烷基」係指具有四至十個碳原子及零個雜原子之飽和單環烴環系統。環烷基之代表性實例包括但不限於環丁基、環戊基及環己基。含有七與十個之間原子之環烷基可係單環或稠合、螺環或橋接雙環結構。
如本文所用，術語「鹵基」係指F、Cl、Br或I。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係選自由以下組成之群之化合物：
Figure 02_image062
；
Figure 02_image064
；
Figure 02_image066
；
Figure 02_image068
；
Figure 02_image070
；
Figure 02_image072
；
Figure 02_image074
；及
Figure 02_image076
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image062
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image064
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image066
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image068
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image070
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image072
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image074
。
在一些態樣中，式(II)之新降解劑係
Figure 02_image076
。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑或其醫藥學上可接受之鹽，其中A係苯基；U係NH；R 1係鹵基；且R 2係-(CH 2) nQ'(CH 2) mN(R 4) 2，其中m及n係2，Q'係O，一個R 4係氫且另一個係甲基。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係苯基；U係NH；R 1係鹵基；且R 2係 -(CH 2) nQ'(CH 2) mN(R 4) 2，其中m及n係2，Q'係O，且各R 4係甲基。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係苯基；U係NH；R 1係鹵基；且R 2係 -(CH 2) nOH，其中n係2。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係苯基；U係NH；R 1係鹵基；且R 2係 -(CH 2) nSH，其中n係2。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係苯基；U係NH；R 1係氫；且R 2係-N(R 4) 2，其中一個R 4係氫且另一個係甲基。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係苯基；U係NH；R 1係鹵基；且R 2係-N(R 4) 2，其中各R 4係氫。在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係苯基；R 1係氫；且R 2係-C(O)R 3，其中R 3係甲基。
在一些態樣中，本揭露提供式(II)之新降解劑，其中A係C 4-C 10環烷基環；U係NH；R 1係氫；且R 2係 -(CH 2) nQ'(CH 2) mN(R 4) 2，其中m及n係2，Q'係O，一個R 4係氫且另一個係甲基。
在一些態樣中，新降解劑係與E3泛素連接酶形成三元複合物之分子，該三元複合物能夠靶向蛋白質以實現降解。 III. 新降解劑綴合物
本揭露提供本文所揭示之一或多種新降解劑與本文所揭示之抗CD33抗體或其抗原結合部分之綴合物。此等綴合物可藉由结合cereblon (CRBN)，促進由CRL4 CRBNE3泛素連接酶介導之受質蛋白之募集及泛素化來降解蛋白质。此等劑充當「分子膠」，作為疏水性貼片填充結合界面，重新編程連接酶與新受質之間的蛋白質相互作用。
在一些態樣中，本揭露提供一種式(I)之化合物：
Figure 02_image086
(I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： a係1至10之整數； A係苯基或C 4-C 10環烷基環； R 1選自氫及鹵基； U選自NH及CF 2； X選自-NR 2-、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中： Q及Q'各自獨立地係O、S或NR 2； R 2係氫或C 1-C 6烷基； n係1至6之整數； m係2至6之整數； 其中各群之左側連接至L，且右側連接至A； 條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基； L係可裂解連接子或不可裂解連接子；且 Bm係本文所揭示之抗CD33抗體或其抗原結合部分。
在一些態樣中，U係NH。
在一些態樣中，本文所述之新降解劑綴合物具有針對腫瘤細胞株之體外抗增殖活性。在一些態樣中，包含新降解劑及抗CD33抗體或其抗原結合部分之新降解劑綴合物具有比單獨的新降解劑或單獨的抗CD33抗體或其抗原結合部分高 至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約100%之體外抗增殖活性。在一些態樣中，包含新降解劑及抗CD33抗體或其抗原結合部分之新降解劑綴合物具有為單獨的新降解劑或單獨的抗CD33抗體或其抗原結合部分之 至少約2倍、至少約3倍、至少約4倍、至少約5倍、至少約6倍、至少約7倍、至少約8倍、至少約9倍、至少約10倍之體外抗增殖活性。
在一些態樣中，本文所述新降解劑綴合物具有針對Daudi淋巴瘤細胞株之 體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的抗CD33抗體或其抗原結合部分相比，更高的針對Daudi淋巴瘤細胞株之抗增殖活性。在一些態樣中，本文所述新降解劑綴合物具有針對HL-60急性髓性白血病細胞株之 體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的抗CD33抗體或其抗原結合部分相比，更高的針對HL-60急性髓性白血病細胞株之抗增殖活性。在一些態樣中，本文所述新降解劑綴合物具有針對Ramos非霍奇金淋巴瘤細胞株之 體外抗增殖活性，例如與單獨的新降解劑或單獨的抗CD33抗體或其抗原結合部分相比，更高的針對Ramos非霍奇金淋巴瘤細胞株之抗增殖活性。在一些態樣中，本文所述之新降解劑綴合物能夠在人類血清存在下保持其抗增殖活性。本文所述之新降解劑綴合物可用於治療癌症。
在一些態樣中，抗體新降解劑綴合物(AnDC)係本文所揭示之一或多種新降解劑與本文所揭示之抗CD33抗體或其抗原結合部分之綴合物。 III.A. 連接子
本揭露之新降解劑可經由連接子連接至抗CD33抗體或其抗原結合部分。如本文所用，術語「連接子」係指能夠將抗CD33抗體或其抗原結合部分(Bm)連接至式(I)之化合物內的基團X之任何化學部分。
在某些態樣中，連接子可含有異雙官能基。在本揭露中，術語「異雙官能基」係指將連接子連接至抗CD33抗體或其抗原結合部分之化學部分，該化學部分係該連接子之一部分。異雙官能基之特徵為在化學部分之任一端具有不同的反應性基團。與「Bm」之連接可透過化學或酶綴合或兩者之組合來完成。化學綴合涉及抗CD33抗體或其抗原結合部分表面上之可及的胺基酸殘基與異雙官能基上之反應柄之受控反應。化學綴合之實例包括但不限於離胺酸醯胺偶合、半胱胺酸偶合及經由藉由基因工程併入之非天然胺基酸之偶合，其中具有所要反應柄之非天然胺基酸殘基安裝在「Bm」上。在酶綴合中，酶介導連接子與抗CD33抗體或其抗原結合部分上之可及的胺基殘基之耦合。酶綴合之實例包括但不限於使用分選酶(sortase)之轉肽、使用微生物轉麩醯胺酸酶之轉肽及N-聚醣工程。化學綴合及酶綴合亦可順序使用。例如，酶綴合亦可用於在「Bm」上安裝獨特的反應柄，以用於隨後的化學綴合。
在一些態樣中，异雙官能基選自：
Figure 02_image088
、
Figure 02_image090
、
Figure 02_image092
、
Figure 02_image094
、
Figure 02_image096
、
Figure 02_image098
、
Figure 02_image100
、
Figure 02_image102
、
Figure 02_image104
、
Figure 02_image106
Figure 02_image108
、
Figure 02_image110
及
Figure 02_image112
其中
Figure 02_image011
係與連接子剩餘部分之連接點；且
Figure 02_image115
係與Bm之連接點。
在某些態樣中，連接子「L」係不可裂解的。如此處所用，術語「不可裂解連接子」係能夠以穩定的共價方式將抗CD33抗體或其抗原結合部分與新降解劑連接且不屬於本文定義為「可裂解連接子」之類別之任何化學部分。因此，不可裂解連接子實質上對酸誘導之裂解、光誘導之裂解、生物還原性裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解及二硫鍵裂解具有抗性。「實質上對裂解具有抗性」意指至少80%，較佳地至少85%，更佳地至少90%，甚至更佳地至少95%，且最佳地至少99%抗體新降解劑綴合物群體中連接子中或鄰近連接子之化學鍵在用上述任何劑處理之幾小時至幾天內保持不可被酸、光不穩定裂解劑、生物還原劑、肽酶、酯酶或裂解可裂解連接子中之化學鍵(例如，二硫鍵)之化學或生理化合物裂解。在某些態樣中，在新降解劑及/或抗CD33抗體或其抗原結合部分可保持活性之條件下，連接子對酸誘導之裂解、光誘導之裂解、生物還原性裂解、酶促裂解及諸如此類不敏感。由不可裂解連接子產生之ADC分解代謝物含有來自抗體之殘留胺基酸。此等分解代謝物可在它們被遞送到的靶細胞中發揮獨特且意想不到之特性。
一般技藝人員將容易地區分不可裂解連接子與可裂解連接子。
不可裂解連接子之實例包括但不限於SMCC (琥珀醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸酯)連接子、琥珀醯亞胺硫醚連接子及諸如以下之連接子：
Figure 02_image003
、
Figure 02_image005
、
Figure 02_image007
及
Figure 02_image009
；其中： p係1至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在某些態樣中，連接子係：
Figure 02_image005
。
在一些態樣中，p係5。
在某些態樣中，連接子可係可裂解的。在一些態樣中，在新降解劑及/或抗CD33抗體或其抗原結合部分可保持活性之條件下，連接子可對酸誘導之裂解、光誘導之裂解、生物還原性裂解、酶促裂解及諸如此類敏感。
在一些態樣中，可裂解連接子可被酶促裂解。在一些態樣中，可裂解連接子可被蛋白酶、肽酶、酯酶、β-葡醣醛酸酶、糖苷酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、焦磷酸酶或脂肪酶裂解。
在一些態樣中，可裂解連接子可被蛋白酶裂解。蛋白酶之實例包括但不限於細胞自溶酶B、VAGP四肽及諸如此類。
在某些態樣中，可裂解連接子含有肽。在一些態樣中，肽係連接子之裂解位點，從而在暴露於細胞內蛋白酶諸如溶酶體酶時促進藥物之釋放。可設計且最佳化肽以用於由特定酶進行酶促裂解，該特定酶例如腫瘤相關蛋白酶、細胞自溶酶B、C及D、或纖溶酶蛋白酶。具有兩個胺基酸之肽之實例包括但不限於丙胺酸-丙胺酸(ala-ala)、纈胺酸-丙胺酸(val-ala)、纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)、丙胺酸-苯丙胺酸(af或ala-phe)；苯丙胺酸-離胺酸(fk或phe-lys)；苯丙胺酸-高離胺酸(phe-homolys)；及N-甲基-纈胺酸-瓜胺酸(Me-val-cit)。具有三個胺基酸之肽之實例包括但不限於甘胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(gly-val-cit)、天冬胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(asp-val-cit)、丙胺酸-丙胺酸-天冬醯胺酸(ala-ala-asn)、丙胺酸-苯丙胺酸-離胺酸(ala-phe-lys)、甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸(gly-gly-phe)及甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(gly-gly-gly)。具有四個胺基酸之肽之實例包括但不限於甘胺酸-甘胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(gly-gly-val-cit)及甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸(gly-gly-phe-gly)。上述胺基酸組合亦可以相反次序存在(即，cit-val)。
本揭露之肽可包含胺基酸殘基之L-或D-異構物。術語「天然胺基酸」係指Ala、Asp、Asx、Cit、Cys、Glu、Phe、Glx、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp及Tyr。「D-」表示具有「D」(右旋)組態之胺基酸，與天然(「L-」)胺基酸中之組態相反。本文所述之胺基酸可商購(Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech)或使用本領域已知之方法合成。
在某些態樣中，連接子(「L」)係選自以下之蛋白酶可裂解連接子：
Figure 02_image017
；
Figure 02_image019
；
Figure 02_image021
；
Figure 02_image023
；
Figure 02_image025
；
Figure 02_image027
；
Figure 02_image029
；及
Figure 02_image031
； 其中： q係2至10之整數； Z 1、Z 2、Z 3及Z 4各自獨立地不存在或係呈L-或D-組態之天然胺基酸殘基，條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在某些態樣中，Z 1、Z 2、Z 3及Z 4獨立地不存在或選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸及甘胺酸；條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基。
在一些態樣中，Z 1係不存在或係甘胺酸；Z 2係不存在或選自：L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸及甘胺酸；Z 3係選自：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸；且Z 4係選自：L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸。
在一些態樣中，L係
Figure 02_image017
。
在一些態樣中，q係5。
在某些態樣中，L係焦磷酸酶可裂解連接子。
在一些態樣中，L係焦磷酸酶可裂解連接子，其為：
Figure 02_image043
； 其中： q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在某些態樣中，L係β-葡醣醛酸酶可裂解連接子。
在一些態樣中，L係選自以下之β-葡醣醛酸酶可裂解連接子：
Figure 02_image136
及
Figure 02_image138
； 其中： q係2至10之整數； ----不存在或係鍵；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在一些態樣中，連接子係可生物還原的。可生物還原連接子利用細胞內隔室與血漿中還原電位之差異。存在於腫瘤細胞之細胞質中之還原型麩胱甘肽為存在於正常細胞之細胞質中之麩胱甘肽之1000倍，且腫瘤細胞亦含有可有助於細胞隔室中之還原之酶。連接子在體循環過程中保持綴合物之完整性，且被細胞內高濃度的麩胱甘肽選擇性裂解，從而在腫瘤部位自無毒的前藥中釋放出活性藥物。
在一些態樣中，L係選自以下之可生物還原之連接子：
Figure 02_image140
其中： q係2至10之整數； R、R'、R"及R"'各自獨立地選自氫、C 1-C 6烷氧基C 1-C 6烷基、(C 1-C 6) 2NC 1-C 6烷基及C 1-C 6烷基，或兩個孿R基團連同它們所連接之碳原子可形成環丁基或環丙基環；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在某些態樣中，連接子係酸可裂解的。酸可裂解連接子經專門設計用於在血液循環之中性中性pH下保持穩定，但在細胞隔室之酸性環境中發生水解並釋放細胞毒性藥物。
在一些態樣中，L係選自以下之酸可裂解連接子：
Figure 02_image144
； 其中： q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
在某些態樣中，L係點擊釋放連接子，其中新降解劑之釋放由四嗪或相關化合物化學觸發。
在一些態樣中，L係選自以下之點擊釋放連接子：
Figure 02_image147
； 其中： q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點；且
Figure 02_image013
係與抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。 III.B. 抗 CD33 抗體
本揭露提供新降解劑與抗CD33抗體或其抗原結合部分之綴合物。
CD33係一種在骨髓細胞及淋巴樣細胞上均表現之跨膜受體。它與唾液酸結合，且因此係唾液酸結合免疫球蛋白型凝集素(SIGLEC)家族之成員。CD33在介導細胞間相互作用及維持免疫細胞處於靜止狀態中發揮作用。結合後，存在於蛋白質胞質部分上之CD33的基於免疫受體酪胺酸之抑制模體(ITIM)被磷酸化，且充當含有Src同源2 (SH2)域之蛋白質(如SHP磷酸酶)之對接位點。這可能導致抑制細胞中吞噬作用之級聯反應。在結構上，CD33之細胞外部分含有兩個免疫球蛋白域，且細胞內部分含有ITIM。CD33之同義詞包括但不限於唾液酸結合Ig樣凝集素3、SIGLEC3、SIGLEC-3、gp67及p67。
人類CD33及已知同功異型物之標準胺基酸序列顯示於表1中(UniProtKB - P20138；SEQ ID NO: 13-18)。 表1. 人類CD33胺基酸序列
標準CD33 MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ (SEQ ID NO: 13)
CD33人類同功異型物2 MPLLLLLPLLWADLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ (SEQ ID NO: 14)
CD33人類同功異型物3 MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPVR(SEQ ID NO: 15)
CD33人類同功異型物X1 MDLGEAATRARPAVISPGVNSCAQKSTSEWKDFRHGVRMSQMALKEALEAASSDMPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ (SEQ ID NO: 16)
CD33人類同功異型物X2 MDLGEAATRARPAVISPGVNSCAQKSTSEWKDFRHGVRMSQMALKEALEAASSDMPLLLLLPL LWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSP VATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLS VHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLI ITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTWKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCL IFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHY ASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ(SEQ ID NO: 17)
CD33人類同功異型物X4 MDLGEAATRARPAVISPGVNSCAQKSTSEWKDFRHGVRMSQMALKEALEAASSDMPLLLLLPL LWADLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLII TPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAI GGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSC SGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ(SEQ ID NO: 18)
CD33在大約90%之急性髓性白血病(AML)病例中表現，且已證明可用作治療性抗體之靶標。大約三十年前已經報導了AML胚細胞上之高CD33表現。在85-90%之AML患者之胚細胞以及正常骨髓前驅細胞及骨髓細胞上偵測到CD33。CD33僅限於造血細胞，但在正常造血幹細胞上不存在，使其成為AML治療之理想靶標。
本揭露之綴合物之抗CD33抗體能夠特異性結合CD33。在一些態樣中，本文所述之抗CD33抗體以高親和力，例如以10 -6M或更低、10 -7M或更低、10 -8M或更低、10 -9M或更低、10 -10M或更低、10 -11M或更低、10 -12M或更低、10 -12M至10 -7M、10 -11M至10 -7M、10 -10M至10 -7M或10 -9M至10 -7M之K D結合人類CD33。
在一些態樣中，抗CD33抗體包含重鏈及輕鏈，其中重鏈包含重鏈可變區(VH)，且輕鏈包含輕鏈可變區(VL)；其中VH包含VH互補決定區(CDR) 1 (VH-CDR1)、VH-CDR2及VH-CDR3，且VL包含VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3；其中VH-CDR3包含與SEQ ID NO: 3具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含有包含與SEQ ID NO: 2之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列之VH-CDR2。在一些態樣中，抗CD33抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列之VH-CDR1。在一些態樣中，抗CD33抗體包含有包含與SEQ ID NO: 5之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列之VL-CDR1。在一些態樣中，抗CD33抗體包含有包含與SEQ ID NO: 6之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列之VL-CDR2。在一些態樣中，抗CD33抗體包含有包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列之VL-CDR3。在一些態樣中，CDR包含下表2中所示之序列。 表2. CD33AB及吉妥珠單抗CDR序列及可變區序列
VH-CDR1 (SEQ ID NO: 1) DSNIH
VH-CDR2 (SEQ ID NO: 2) YIYPYNGGTDYNQKFKN
VH-CDR3 (SEQ ID NO: 3) GNPWLAY
VH (SEQ ID NO: 4) EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTITDSNIHWVRQAPGQSLEWIGYIYPYNGGTDYNQKFKNRATLTVDNPTNTAYMELSSLRSEDTAFYYCVNGNPWLAYWGQGTLVTVSS
VL-CDR1 (SEQ ID NO: 5) RASESLDNYGIRFLT
VL-CDR2 (SEQ ID NO: 6) AASNQGSG
VL-CDR3 (SEQ ID NO: 7) QQTKEVPWS
VL (SEQ ID NO: 8) DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESLDNYGIRFLTWFQQKPGKAPKLLMYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQTKEVPWSFGQGTKVEVK
在一些態樣中，抗CD33抗體重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗CD33抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 4之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之序列；及輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之序列。
在一些態樣中，抗CD33抗體重鏈包含與SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 11具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 12具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。 表3. 抗CD33抗體胺基酸序列。
CD33AB重鏈 (SEQ ID NO: 9) EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTITDSNIHWVRQAPGQSLEWIGYIYPYNGGTDYNQKFKNRATLTVDNPTNTAYMELSSLRSEDTAFYYCVNGNPWLAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD33AB輕鏈 (SEQ ID NO: 10) DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESLDNYGIRFLTWFQQKPGKAPKLLMYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQTKEVPWSFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
吉妥珠單抗重鏈 (SEQ ID NO: 11) EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTITDSNIHWVRQAPGQSLEWIGYIYPYNGGTDYNQKFKNRATLTVDNPTNTAYMELSSLRSEDTAFYYCVNGNPWLAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
吉妥珠單抗輕鏈 (SEQ ID NO: 12) DIQLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASESLDNYGIRFLTWFQQKPGKAPKLLMYAASNQGSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQTKEVPWSFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
在一些態樣中，抗CD33抗體包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO: 9具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列；及輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 10具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗CD33抗體包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO: 11具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列；及輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 12具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗CD33抗體揭示於美國專利第5,585,089號、US 5,693,762中，其各自明確以引用方式併入本文。
在一些態樣中，抗CD33抗體包含重鏈及輕鏈，其中重鏈包含重鏈可變區(VH)，且輕鏈包含輕鏈可變區(VL)；其中VH包含VH互補決定區(CDR) 1 (VH-CDR1)、VH-CDR2及VH-CDR3，且VL包含VL-CDR1、VL-CDR2及VL-CDR3；其中VH-CDR3包含與SEQ ID NO: 21具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含VH-CDR2，其包含與SEQ ID NO: 20之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含VH-CDR1，其包含與SEQ ID NO: 19之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含VL-CDR1，其包含與SEQ ID NO: 22之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含VL-CDR2，其包含與SEQ ID NO: 23之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含VL-CDR3，其包含與SEQ ID NO: 24之胺基酸序列具有至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，CDR包含下表4中所示之序列。 表4. huMy9-6及AB1 CDR序列及可變區序列
VH-CDR1 (SEQ ID NO: 19) SYYIH
VH-CDR2 (SEQ ID NO: 20) VIYPGNDDISYNQKFQG
VH-CDR3 (SEQ ID NO: 21) EVRLRYFDV
VH (SEQ ID NO: 27) QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFQGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGQGTTVTVSS
VL-CDR1 (SEQ ID NO: 22) KSSQSVFFSSSQKNYLA
VL-CDR2 (SEQ ID NO: 23) WASTRES
VL-CDR3 (SEQ ID NO: 24) HQYLSSRT
VL (SEQ ID NO: 28) EIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPRLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAIYYCHQYLSSRTFGQGTKLEIK
在一些態樣中，抗CD33抗體重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 28之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗CD33抗體包含：重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 27之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之序列；及輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 28之胺基酸序列具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之序列。
在一些態樣中，抗CD33抗體重鏈包含與SEQ ID NO: 25具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。在一些態樣中，抗CD33抗體包含有包含與SEQ ID NO: 26具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列之輕鏈。 表5. huMy9-6-IgG4-S228P (「AB1」)抗CD33抗體胺基酸序列。
重鏈 (SEQ ID NO: 25) QVQLQQPGAEVVKPGASVKMSCKASGYTFTSYYIHWIKQTPGQGLEWVGVIYPGNDDISYNQKFQGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAREVRLRYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
輕鏈 (SEQ ID NO: 26) EIVLTQSPGSLAVSPGERVTMSCKSSQSVFFSSSQKNYLAWYQQIPGQSPRLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQPEDLAIYYCHQYLSSRTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
在一些態樣中，抗CD33抗體包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO: 25具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列；及輕鏈，其包含與SEQ ID NO: 26具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%序列一致性之胺基酸序列。術語「CD33AB」包含如SEQ ID NO: 25所列之重鏈及如SEQ ID NO: 26所列之輕鏈。
抗CD33抗體包括經修飾即藉由任何類型分子之共價連接經修飾之類似物及衍生物，只要此種共價連接允許抗體保留其抗原結合免疫特異性。例如，但不限於，抗體之衍生物及類似物包括經進一步修飾之彼等，例如藉由醣基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護基/阻隔基之衍生化、蛋白水解裂解、與細胞抗體單元或其他蛋白質之連接等。多種化學修飾中之任一者可藉由已知技術進行，包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、在衣黴素(tunicamycin)存在下之代謝合成等。另外，類似物或衍生物可含有一或多種非天然胺基酸。
新降解劑綴合物中之抗CD33抗體可包括在與Fc受體相互作用之胺基酸殘基中具有修飾(例如，取代、缺失或添加)之抗體。特別地，抗體包括在經鑑定為參與抗Fc域與FcRn受體之間的相互作用之胺基酸殘基中具有修飾之抗體。可例如自Genentech (San Francisco, Calif.)商購獲得或藉由熟習此項技術者已知的任何方法例如像化學合成或重組表現技術產生對癌細胞抗原具有免疫特異性之抗體。可例如自GenBank資料庫或與它類似的資料庫、文獻出版物或藉由常規選殖及定序獲得編碼對癌細胞抗原具有免疫特異性之抗體之核苷酸序列。
在某些態樣中，新降解劑綴合物之抗體可係單株抗體，例如鼠單株抗體、嵌合抗體或人源化抗體。在一些態樣中，抗體可係抗體片段，例如Fab片段。 IV. 組成物及使用方法
本文所述之綴合物及/或化合物可係醫藥學上或醫藥學上可接受之鹽之形式。在一些態樣中，此類鹽衍生自無機或有機酸或鹼。
合適之酸加成鹽之實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(lucoheptanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate)、果凍酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽及十一酸鹽。
合適之鹼加成鹽之實例包括銨鹽；鹼金屬鹽，諸如鈉鹽及鉀鹽；鹼土金屬鹽，諸如鈣鹽及鎂鹽；與有機鹼之鹽，諸如二環己胺鹽、 N-甲基-D-葡糖胺；及與胺基酸諸如精胺酸、離胺酸及類似者之鹽。
例如，Berge列出了以下FDA批准的市售鹽：陰離子乙酸鹽、苯磺酸鹽(besylate/benzenesulfonate)、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸鈣(乙二胺四乙酸鹽)、樟腦磺酸鹽(camsylate/camphorsulfonate)、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽(乙二胺四乙酸鹽)、乙二磺酸鹽(1,2-乙二磺酸鹽)、硫酸月桂酯鹽(estolate/lauryl sulfate)、乙磺酸鹽(esylate/ethanesulfonate)、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate/glucoheptonate)、葡萄糖酸鹽、麩醯胺酸、對羥乙醯胺基苯胂酸鹽(glycollylarsanilate/glycollamidophenylarsonate)、己基間苯二酚酸鹽(hexylresorcinate)、海巴胺(hydrabamine) ( N,N'-二(去氫樅基)乙二胺)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽(2-羥基乙磺酸鹽)、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、苯乙醇酸鹽、甲磺酸鹽(mesylate/methanesulfonate)、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸鹽、黏酸鹽、萘磺酸鹽(2-萘磺酸鹽)、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽(pamoate/embonate)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳醣醛酸鹽(polygalacturonate)、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate) (8-氯茶酸鹽(8-chlorotheophyllinate))及三乙碘化物；有機陽離子苄星(benzathine) ( N,N'-二苄基乙二胺)、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺( N-甲基葡糖胺)及普魯卡因；及金屬陽離子鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅。
Berge另外列出了以下非FDA批准的市售(美國以外)鹽：陰離子己二酸鹽、海藻酸鹽、胺基水楊酸鹽、無水亞甲基檸檬酸鹽、檳榔鹼、天冬胺酸鹽、硫酸氫鹽、丁基溴化物、樟腦酸鹽、二葡萄糖酸鹽、二氫溴酸鹽、二琥珀酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、氫氟酸鹽、氫碘酸鹽、亞甲基雙(水楊酸鹽)、萘二磺酸鹽(1,5-萘二磺酸鹽)、草酸鹽、果凍酸鹽、過硫酸鹽、苯乙基巴比妥酸鹽、苦味酸鹽、丙酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽；有機陽離子苯乙苄胺(benethamine) ( N-苄基苯乙胺)、克立咪唑(clemizole) (1-對氯苄基-2-吡咯啶-1'-基甲基苯并咪唑)、二乙胺、哌嗪及三木甲胺(tromethamine) (參(羥甲基)胺基甲烷)；及金屬陽離子鋇及鉍。
包含本文所述之新降解劑綴合物之醫藥組成物亦可包含合適之載劑、賦形劑及助劑，其可根據投與方式而不同。
在一些態樣中，醫藥組成物可調配成合適的腸胃外劑型。該等調配物可藉由此項技術中已知的各種方法製備。醫藥組成物可直接投與至血流中、肌肉中或直接投與至器官中。用於腸胃外投與之合適手段包括靜脈內投與、動脈內投與、腹膜內投與、鞘內投與、心室內投與、尿道內投與、胸骨內投與、顱內投與、肌肉內投與及皮下投與。用於腸胃外投與之合適裝置包括針式注射器、無針注射器及輸注技術。
腸胃外組成物通常係水溶液，其可含有賦形劑諸如鹽、碳水化合物及緩沖劑。然而，組成物亦可調配成無菌非水溶液或成乾燥形式以與合適的媒劑諸如無菌無熱原水一起使用。
在無菌條件下製備腸胃外組成物，例如藉由凍乾，可使用熟習此項技術者熟知的標準技術容易地完成。
用於腸胃外投與之組成物可調配成立即釋放及/或修飾釋放。修飾釋放調配物包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋放、控制釋放、靶向釋放及程式化釋放。因此，可將組成物調配成固體、半固體或觸變液體，以作為提供活性劑之修飾釋放之植入貯庫投與。
腸胃外調配物可與用於腸胃外劑型之其他合適的醫藥學上可接受之賦形劑混合，諸如但不限於防腐劑。
在另一態樣中，醫藥組成物可調配成合適的口服劑型，諸如錠劑、膠囊劑、散劑、丸劑、懸液劑、溶液、乳劑及類似者。可存在其他合適的載劑，諸如崩解劑、稀釋劑、螯合劑、黏合劑、助滑劑、潤滑劑、填充劑、增量劑、抗黏附劑及類似者。
口服劑型亦可含有其他合適的醫藥賦形劑，諸如甜味劑、媒劑/潤濕劑、著色劑、調味劑、防腐劑、增黏劑/增稠劑及類似者。
本文所述新降解劑或新降解劑綴合物可用於治療各種癌症。本揭露之某些綴合物就功效表現、藥物動力學(例如，吸收、分佈、代謝、排泄)、溶解性(例如，水溶性)、與其他藥劑之相互作用(例如，藥物代謝酶抑制作用)、安全性(例如，急性毒性、慢性毒性、遺傳毒性、生殖毒性、心臟毒性、致癌性、中樞毒性)及/或穩定性(例如，化學穩定性、對酶之穩定性)而言可係優越的，且可用作藥劑。
本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物可用作藥劑，諸如用於預防或治療疾病之劑，該等疾病例如癌症，例如結腸直腸癌(例如，結腸直腸癌、直腸癌、肛門癌、家族性結腸直腸癌、遺傳性非息肉病性結腸直腸癌、胃腸道間質瘤)、肺癌(例如，非小細胞肺癌、小細胞肺癌、惡性間皮瘤)、間皮瘤、胰腺癌(例如，胰腺導管癌、胰腺內分泌腫瘤)、咽癌、喉癌、食道癌、胃癌(stomach/gastric cancer) (例如，乳頭狀腺癌、黏液性腺癌、腺鱗癌)、十二指腸癌、小腸癌、乳癌(例如，浸潤性導管癌、非浸潤性導管癌、炎性乳癌)、卵巢癌(例如，卵巢上皮癌、性腺外生殖細胞腫瘤、卵巢生殖細胞腫瘤、卵巢低惡性潛能腫瘤)、睪丸腫瘤、前列腺癌(例如，激素依賴性前列腺癌、非激素依賴性前列腺癌、去勢抵抗性前列腺癌)、肝癌(例如，肝細胞癌、原發性肝癌、肝外膽管癌)、甲狀腺癌(例如，甲狀腺髓樣癌)、腎癌(例如，腎細胞癌(例如，透明細胞腎細胞癌)、腎盂及輸尿管移行細胞癌)、子宮癌(例如，宮頸癌、子宮體癌、子宮肉瘤)、妊娠絨毛膜癌、腦腫瘤(例如，髓母細胞瘤、神經膠質瘤、松果體星形細胞瘤、毛細胞星形細胞瘤、瀰漫性星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤、垂體腺瘤)、視網膜母細胞瘤、皮膚癌(例如，基底細胞瘤、惡性黑色素瘤)、肉瘤(例如，橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、軟組織肉瘤、梭形細胞肉瘤)、惡性骨腫瘤、膀胱癌、血液科癌症/血癌(例如，多發性骨髓瘤、白血病(例如，急性骨髓性白血病)、惡性淋巴瘤、霍奇金病、慢性骨髓增生性疾病)、原發性不明的癌症；癌症生長抑制劑；癌症轉移抑制劑；凋亡促進劑；用於治療癌前病變(例如，骨髓化生不良症候群)之劑；及諸如此類。
在某些態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物可用作針對乳癌、胃癌、卵巢癌、子宮癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、淋巴瘤或血液科癌症之藥劑。
此外，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物可與非藥物療法同時使用。準確地說，綴合物可與以下非藥物療法組合，諸如(1)手術，(2)使用血管緊張素II等之高血壓化療，(3)基因療法，(4)熱療法，(5)冷凍療法，(6)激光燒灼及(7)放射療法。
例如，藉由在上述手術及諸如此類之前或之後使用本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物，可提供諸如防止出現耐藥性、延長無進展生存期、延長無疾病生存期、抑制癌症轉移或複發、延長壽命及諸如此類效果。
此外，可將用本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物之治療與以下支持療法組合：(i)投與抗生素(例如，β-內醯胺類諸如泛孢素及諸如此類，大環內酯類諸如克拉黴素及諸如此類)以用於各種感染性疾病之併發症，(ii)投與高熱量輸血、胺基酸製劑或一般維生素製劑以改善營養不良，(iii)投與嗎啡以減輕疼痛，(iv)投與藥劑以用於改善副作用諸如噁心、嘔吐、厭食、腹瀉、白細胞減少症、血小板減少症、血紅蛋白濃度降低、脫髮、肝病、腎病、DIC、發熱及諸如此類及(v)投與藥劑以用於抑制癌症之多重藥物抗性及諸如此類。
在一些態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物可與標準護理療法，例如一或多種治療劑( 例如，抗癌劑及/或免疫調節劑)組合使用。因此，在某些態樣中，治療本文所揭示之腫瘤之方法包含將本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物與一或多種額外的治療劑組合投與。在一些態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物可與一或多種抗癌劑組合使用，使得可靶向免疫途徑之多個元件。在一些態樣中，抗癌劑包含免疫檢查點抑制劑( 即，阻斷透過特定免疫檢查點途徑之傳訊)。可用於本發明方法之免疫檢查點抑制劑之非限制性實例包含CTLA-4拮抗劑( 例如，抗CTLA-4抗體)、PD-1拮抗劑( 例如，抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體)、TIM-3拮抗劑( 例如，抗TIM-3抗體)或其組合。在本申請案之組合治療部分中詳細揭示了綜合且非限制性之組合治療列表。
在一些態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物在投與額外的治療劑之前或之後投與至個體。在其他態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物與額外的治療劑同時投與至個體。在某些態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物及額外的治療劑可作為醫藥學上可接受之載劑中之單一組成物同時投與。在其他態樣中，本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物及額外的治療劑係作為單獨的組成物同時投與。
在一些態樣中，可用本揭露之新降解劑或新降解劑綴合物治療之個體係非人類動物，諸如大鼠或小鼠。在一些態樣中，可治療之個體係人類。 V. 製備新降解劑及組成物之方法
本揭露提供一種製備新降解劑綴合物之方法，該方法包含使抗CD33抗體或其抗原結合部分與式(I-1)之化合物：
Figure 02_image150
(I-1)， 或其醫藥學上可接受之鹽反應，其中： A係苯基或C 4-C 10環烷基環； R 1獨立地選自氫及鹵基； U選自NH及CF 2； X選自-NR 2-、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中 Q及Q'各自獨立地係O、S或NR 2； R 2係氫或C 1-C 6烷基； n係1至6之整數； m係2至6之整數；且 其中各群之左側連接至L'，且右側連接至A； 條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基； L'係與抗CD33抗體或其抗原結合部分綴合之可裂解或不可裂解連接子前驅物。
如本文所述，連接子前驱物含有連接至抗CD33抗體或其抗原結合部分之異雙官能基。
在一些態樣中，L'係不可裂解之連接子前驅物。在一些態樣中，L'係選自由以下組成之群：
Figure 02_image152
、
Figure 02_image154
、
Figure 02_image156
及
Figure 02_image158
； 其中： p係1至10之整數；且
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在一些態樣中，L'係
Figure 02_image154
。
在一些態樣中，p係5。
在某些態樣中，L'係可裂解之連接子前驅物。
在一些態樣中，連接子前驅物係可由蛋白酶裂解。在一些態樣中，連接子前驅物係選自由以下組成之群：
Figure 02_image162
；
Figure 02_image164
；
Figure 02_image166
；
Figure 02_image168
；
Figure 02_image170
；
Figure 02_image172
；及
Figure 02_image174
； 其中： q係2至10之整數； Z 1、Z 2、Z 3及Z 4各自獨立地不存在或係呈L-或D-組態之天然胺基酸殘基，條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基；且
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在一些態樣中，Z 1、Z 2、Z 3及Z 4獨立地不存在或選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸及甘胺酸，條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基。
在一些態樣中，Z 1係不存在或係甘胺酸；Z 2係不存在或選自由以下組成之群：L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸及甘胺酸；Z 3係選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸；且Z 4係選自由以下組成之群：L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸。
在一些態樣中，L'係
Figure 02_image176
。
在一些態樣中，q係5。
在一些態樣中，L'係可生物還原之連接子前驅物。在一些態樣中，可生物還原之連接子前驅物係選自由以下組成之群：
Figure 02_image178
其中： q係2至10之整數； R、R'、R"及R"'各自獨立地選自氫、C 1-C 6烷氧基C 1-C 6烷基、(C 1-C 6) 2NC 1-C 6烷基及C 1-C 6烷基，或兩個孿R基團連同它們所連接之碳原子可形成環丁基或環丙基環；且
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在某些態樣中，L'係酸可裂解之連接子前驅物。在一些態樣中，L'係選自由以下組成之群：
Figure 02_image181
； 其中： q係2至10之整數；且
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在某些態樣中，L'係點擊釋放連接子前驅物。在一些態樣中，L'選自
Figure 02_image184
； 其中： q係2至10之整數；且
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在某些態樣中，L'係焦磷酸酶可裂解之連接子前驅物。在一些態樣中，L'係
Figure 02_image186
； 其中： q係2至10之整數；
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在某些態樣中，L'係β-葡醣醛酸酶可裂解之連接子前驅物。在一些態樣中，L'選自
Figure 02_image188
及
Figure 02_image190
； 其中： q係2至10之整數； ----不存在或係鍵；且
Figure 02_image011
係與X之連接點。
在一些態樣中，式(I-1)之化合物選自
Figure 02_image192
、
Figure 02_image194
、
Figure 02_image196
、
Figure 02_image198
及
Figure 02_image200
。
在一些態樣中，在與式(I-1)之化合物反應之前對抗CD33抗體或其抗原結合部分進行預處理。在某些態樣中，式(I-1)之化合物與抗CD33抗體或其抗原結合部分反應。在多個態樣中，可在與式(I-1)之化合物反應之前對抗CD33抗體或其抗原結合部分進行預處理以減少鏈間二硫鍵。 實例 一般合成方法及中間體
本揭露之化合物可由一般熟習此項技術者根據本揭露及此項技術之知識，及/或藉由參考下文所示之方案及合成實例來製備。示範性合成路線在以下方案及實例中闡述。應當理解，出現在以下方案及實例中之變數(例如「R」基團)應獨立於出現在申請案中其他地方之變數來閱讀。一般熟習此項技術者將容易理解下文所示之方案及實例如何說明本文所述之化合物之製備。
方案中使用之縮寫通常遵循此項技術中使用之慣例。說明書及實例中使用之化學縮寫定義如下：「THF」代表四氫呋喃；「DMF」代表N,N-二甲基甲醯胺；「Me」代表甲基；「Bu」代表丁基；「FA」代表甲酸；「PE」代表石油醚；「MeOH」代表甲醇；「EtOH」代表乙醇；「DCM」代表二氯甲烷；「BOC」或「Boc」「TFA」代表三氟乙酸；「DMSO」代表二甲基亞碸；「EtOAc」代表乙酸乙酯；「OAc」代表乙酸酯；「dppf」代表1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵；「dba」代表二亞苄丙酮；「CDI」代表1,1'-羰基二咪唑；「TBAF」代表四丁基氟化銨；「TBSCl」代表三級丁基二甲基氯矽烷；「Et 2O」代表乙醚；「ACN」代表乙腈；「h」代表小時；「min」代表分鐘；「rt」代表室溫或停留時間(將由上下文決定)；「aq.」代表水性；「sat.」代表飽和；「min」代表分鐘；「HOBt」代表1-羥基苯并三唑水合物；「HATU」代表1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1 H-1,2,3-三唑并[4,5- b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽或 N-[(二甲基胺基)-1 H-1,2,3-三唑并-[4,5- b]吡啶-1-基亞甲基]- N-甲基甲胺六氟磷酸鹽 N-氧化物；「DIEA」及「iPrNEt 2」代表二異丙基乙胺；「Et 3N」及「TEA」代表三乙胺。
Figure 02_image202
方案1 ：混合物 (Ia) 之製備
Figure 02_image204
實例1： 化合物 (Ia) 之合成
Figure 02_image206
步驟 1 ：化合物 2 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物1，5.00 g，23.19 mmol，1.00當量)於THF (75.00 mL)中之溶液中逐滴添加BH 3-Me 2S (於THF中10 M) (5.80 mL，58.0 mmol，2.50當量)。將所得混合物在70℃、氮氣氣氛下攪拌2 h。將混合物冷卻至室溫。將所得混合物在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(PE:EtOAc = 1:1)純化，得到呈黃色固體之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(3 g，64%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.26 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.10-8.05 (m, 1H), 7.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.99-3.91 (m, 2H), 3.16-3.09 (m, 2H)。
Figure 02_image208
步驟 2 ：化合物 3 之合成
向經攪拌之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物2，5.00 g，24.800 mmol，1.00當量)及2-溴乙酸三级丁酯(29.0 mL，148.28 mmol，8.00當量)於甲苯(150.00 mL)中之溶液中添加Bu 4NHSO 4(6.74 g，19.84 mmol，0.80當量)。在0℃下，在40 min內向上述混合物中逐滴添加NaOH (於H 2O中5 M) (500.00 mL)。將所得混合物在25℃下再攪拌2 h。將所得混合物用EtOAc (3 x 500 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(400 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(PE:EtOAc = 4:1)純化，得到呈黃色油狀物之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸三級丁酯(8 g，65%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.23 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.10-8.04 (m, 1H), 7.60 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.83-3.80 (m, 2H), 3.17-3.14(m, 2H), 1.45(s, 9H)。
Figure 02_image210
步驟 3 ：化合物 4 之合成
在室溫下，向經攪拌之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸三級丁酯(化合物3，8.00 g，16.14 mmol，1.00當量，63.7%)於DCM (80.00 mL)中之溶液中逐滴添加TFA (16.00 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將所得混合物用水(500 mL)稀釋。將混合物用EtOAc (3 x 500 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。這產生呈黃色油狀物之[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(6.5 g，粗品)。LCMS (ESI): 517 (2M-H)-
Figure 02_image212
步驟 4 ：化合物 5 之合成
在室溫下，向經攪拌之[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(化合物4，6.30 g，21.84 mmol，1.00當量，90%)及HATU (12.46 g，32.76 mmol，1.50當量)在DMF (65.00 mL)中之溶液中逐滴添加CH 3NH 2.HCl (1.77 g，26.21 mmol，1.20當量)及DIEA (15.20 g，117.8 mmol，4.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。將所得混合物用水稀釋。將所得混合物用EtOAc (2 x 100 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(DCM:MeOH = 10:1)純化，得到呈黃色油狀物之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-N-甲基乙醯胺(10 g，純度：50%，產率：84%)。LCMS (ESI): 273.28 (M+H) +
Figure 02_image214
步驟 5 ：化合物 6 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-N-甲基乙醯胺(化合物5，3.3 g，12.10 mmol，1.00當量)於THF (35.00 mL)中之溶液中逐滴添加BH 3-THF (於THF中1 M) (12.10 mL，12.10 mmol，1.00當量)。將所得混合物在70℃、氮氣氣氛下攪拌2 h。將反應用MeOH淬滅。將殘餘物用1N HCl酸化至pH 6。將所得混合物用EtOAc (20 mL)萃取。將水相用飽和NaHCO 3(飽和水溶液)鹼化至pH 8。將所得混合物用EtOAc (3 x 100 mL)萃取，用鹽水(50 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。這產生呈黃色油狀物之[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(2.5 g，80%)。LCMS (ESI): 259.26 (M+H) +
Figure 02_image216
步驟 6. 化合物 7 之合成
在25℃下，向經攪拌之[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(化合物6，2.50 g，9.69 mmol，1.00當量)及Boc 2O (2.53 g，11.6 mmol，1.20當量)於THF (40 mL)中之溶液中逐滴添加TEA (1.17 g，11.6 mmol，1.20當量)。將混合物在25℃下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(DCM:MeOH = 5:1)純化，得到呈黃色油狀物之N-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(1.70 g，50%)。LCMS (ESI): 359.36 (M+H) +
Figure 02_image218
步驟 7 ：化合物 8 之合成
在25℃下，向經攪拌之N-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物7，1.70 g，4.74 mmol，1.00當量)及NH 4Cl (750 mg，14.2 mmol，3.00當量)於EtOH (85 mL)及H 2O (17 mL)中之溶液中添加Fe (1.3g，23.7 mmol，5.00當量)。將混合物在80℃下攪拌2 h。將混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，且將濾餅用EtOH (3 x 50 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(PE:EtOAc = 4:1)純化，得到呈黃色油狀物之N-[2-[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(900 mg，58%)。LCMS (ESI): 329.33 (M+H) +
Figure 02_image220
步驟 8 ：化合物 9 之合成
在25℃下，向經攪拌之N-[2-[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物8，500 mg，1.52 mmol，1.00當量)於THF (10 mL)中之溶液中逐滴添加雙光氣(601 mg，3.04 mmol，2.00當量)。將混合物在25℃下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮且再溶解於DMF (5 mL)中。在25℃下，向經攪拌之3-[5-(胺甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(INT1，如下所述製備，499 mg，1.82 mmol，1.20當量)及TEA (1.56 g，15.45 mmol，10.00當量)於DMF (20 mL)中之混合物中逐滴添加以上提及之溶液。將混合物在25℃下攪拌1 h。將所得混合物用40 mL冰水稀釋。將所得混合物用EtOAc (3 x 40 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(5x40 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(DCM:MeOH = 10:1)純化，得到呈白色固體之(2-(2-氯-4-(3-((2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基異吲哚啉-5-基)甲基)脲基)苯乙氧基)乙基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(670 mg，70%)。LCMS: (ESI): 628.63 (M+H) +
Figure 02_image222
步驟 9 ：新降解劑 P1 之合成
在0℃下，向經攪拌之N-[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物9，670 mg，1.07 mmol，1當量)於DCM (10 mL)中之溶液中逐滴添加TFA (2.5 mL)。將混合物在25℃下攪拌1 h。將所得混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC在以下條件下純化：管柱，SunFire C18 OBD製備型管柱，100 μm，19x250 mm；流動相，水(0.05% TFA)及ACN (5% B相，30 min內達到60%)；偵測器，UV 220 nm。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之1-(3-氯-4-[2-[2-(甲胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(500 mg，89%)。LCMS (ESI): 528.53 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, 甲醇- d 4) δ 7.77 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 2H), 7.49 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 4.0 Hz, 2H), 5.19-5.1 (m, 1H), 4.55-4.41 (m, 4H), 3.75-3.67 (m, 4H), 3.21-3.15 (m,2H), 3.03-3.96 (m, 2H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.83-2.73 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.55-2.42 (m, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H)。
Figure 02_image224
步驟 10 ：化合物 (Ia) 之合成
在室溫下，向經攪拌之1-(3-氯-4-[2-[2-(甲胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑P1，200 mg，0.38 mmol，1.00當量)及二甲基吡啶(81 mg，0.76 mmol，2.00當量)於DMF (10 mL)中之混合物中分批添加HOBT (26 mg，0.19 mmol，0.50當量)及碳酸[4-[(2S)-5-(胺基甲醯基胺基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲酯4-硝基苯酯(279 mg，0.38 mmol，1.00當量)。將反應混合物在攝氏40℃度、氮氣氣氛下攪拌12小時。將反應冷卻至室溫後，用水(30 mL)淬滅反應。將所得混合物用DCM (3 x 30 mL)萃取。將合併的有機層用水(2 x 30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由逆相管柱(C18，流動相A：含0.1% FA之水，B：ACN)純化。將收集的流份在真空下濃縮至乾。將粗產物(60 mg)藉由製備型HPLC在以下條件下純化(管柱：Xselect CSH OBD 柱30x150 mm 5 um，n；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內33 B至50 B；220 nm；RT1：5.27 min)。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之N-[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基)]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基]-N-甲基胺基甲酸[4-[(2S)-5-(胺基甲醯基胺基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲酯(23.8 mg，5%)。LCMS (ESI): 1126.11 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.99(s, 1H), 10.00(s, 1H), 8.88(s, 1H), 8.12-8.08(m, 1H),7.85-7.81(m, 2H), 7.70-7.67(m, 2H), 7.60-7.58(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.47-7.44(m, 1H), 7.28-7.25(m, 2H), 7.18-7.12(m, 2H), 7.00(s, 2H), 6.90(br s, 1H), 5.97-5.95(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.12-5.05(m, 1H), 4.98(s, 2H), 4.42-4.32(m, 4H), 4.18-4.15(m, 1H), 3.56-3.40(m, 4H), 3.37-3.36(m, 3H),3.05-2.90(m, 3H), 2.89-2.85(m, 5H), 2.72-2.55(m, 2H), 2.40-2.33(m, 2H), 2.25-2.15(m, 2H), 2.00-1.87(m, 2H), 1.74-1.57(m, 2H), 1.50-1.42(m, 5H), 1.22-1.10(m, 3H), 0.85-0.80(m, 6H)。
Figure 02_image226
方案2 ：混合物 (Ib) 之製備
Figure 02_image228
實例2： 化合物 (Ib) 之合成
Figure 02_image230
步驟 1 ：化合物 11 之合成
在25℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之4-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(化合物10，20.0 g，64.8 mmol，1.00當量)及3-胺基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(10.64 g，83.0 mmol，1.28當量)於DMF (80 ml)中之混合物中逐滴添加TEA (22.4 mL，162.2 mmol，2.50當量)。將混合物在25℃下攪拌16 h。隨後在25℃下依次添加H 2O (60 mL)、AcOH (23 mL)及Et 2O (60 mL)。將混合物在25℃下攪拌2 h。藉由過濾收集沉澱的固體且用Et 2O (60 mL)洗滌。這產生呈淡藍色固體之3-(5-溴-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(9.0 g，42%)。LCMS (ESI): 323.32 (M+H) +
Figure 02_image232
步驟 2 ：化合物 12 之合成
在攝氏25度、氮氣氣氛下，向經攪拌之3-(5-溴-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(化合物11，1.00 g，3.09 mmol，1.00當量)及dppf (51 mg，0.093 mmol，0.03當量)於DMF (8 mL)中之混合物中添加Zn(OAc) 2(170 mg，0.928 mmol，0.30當量)、Zn(CN) 2(545 mg，4.64 mmol，1.50當量)及Pd 2(dba) 3(28 mg，0.031 mmol，0.01當量)。將最終反應混合物在120℃下用微波輻射照射2 h。將混合物冷卻至室溫且過濾。將濾餅用MeOH (3x30 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。對殘餘物進行快速層析法(矽膠，80 g，DCM:MeOH=10:1)，得到呈棕色固體之所要產物2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-腈(400 mg，47%)。LCMS (ESI): 270 (M+H) +
Figure 02_image234
步驟 3 ： INT1 之合成
在25℃下，向經攪拌之2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-腈(化合物12，3.0 g，11.14 mmol，1.00當量)及HCl (12M) (3.6 mL)於MeOH (25 mL)中之混合物中添加PtO 2(1.25 g，5.5 mmol，0.49當量)。在室溫下使用氫氣球在氫氣氣氛下將混合物氫化16 h。將所得混合物過濾，且將濾餅用MeOH (2 x 30 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將所得固體用DCM:MeOH (3:1) (3x30 mL)洗滌且乾燥。這產生呈灰色固體之3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(2.5 g，80%)。LCMS (ESI): 274 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.02 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.4 Hz, 1H),5.16-5.11 (m, 1H), 4.52 (d, J=17.2Hz, 1H), 4.40 (d, J=17.2Hz, 1H), 2.96-2.90 (m, 1H), 2.60-2.54 (m, 1H), 2.43-2.34 (m, 1H), 2.06-1.96 (m, 1H)
Figure 02_image236
步驟 4 ：化合物 14 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物13，5.00 g，22.50 mmol，1.00當量)於THF (75 mL)中之溶液中逐滴添加BH 3-Me 2S (於THF中10 M) (5.60 mL，56 mmol，2.50當量)。將混合物在70℃下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用PE / EtOAc (5:1)溶析，得到呈黃色固體之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(4.44 g，88%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.26 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.10-8.05 (m, 1H), 7.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.99-3.91 (m, 2H), 3.16-3.09 (m, 2H)
Figure 02_image238
步驟 5 ：化合物 15 之合成
在25℃下，向經攪拌之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物14，4.44 g，22.02 mmol，1.00當量)及咪唑(4.50g，66.06 mmol，3.00當量)於DMF (50.00 mL)中之混合物中添加TBSCl (6.97 g，46.25 mmol，2.10當量)。將混合物在25℃下攪拌16 h。將所得混合物用水(100 mL)稀釋。將所得混合物用EtOAc (3 x 100mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(3x100 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物施加至矽膠管柱上且用PE/ EtOAc (10:1)溶析，得到呈無色油狀物之三級丁基[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]二甲基矽烷(6.6 g，90%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.24(s, 1H), 8.06-8.04 (m, 1H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.89-3.86 (m, 2H), 3.06-0.04 (m, 2H), 0.85(s, 9H), 0.04(s, 6H)。
Figure 02_image240
步驟 6 ：化合物 16 之合成
向三級丁基[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]二甲基矽烷(化合物15，5.70 g，18.05 mmol，1.00當量)及Fe (10.08 g，180.45 mmol，10.00當量)於EtOH (110 mL)/水(55 mL)中之混合物中添加NH4Cl (9.65 g，180.45 mmol，10當量)。將混合物在80℃下攪拌2 h。將混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，且將濾餅用EtOH (3x50 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物用水(100 mL)稀釋且用EtOAc (50 mLx3)萃取。將合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥且在真空中蒸發至乾，得到呈淺棕色油狀物之4-[2-[(三級丁基二甲基矽基)氧基]乙基]-3-氯苯胺(5.2 g，粗品)。LCMS (ESI): 286.29 (M+H) +
Figure 02_image242
步驟 7 ：化合物 17 之合成
在攝氏0度、氮氣下，向 4-[2-[(三級丁基二甲基矽基)氧基]乙基]-3-氯苯胺(化合物16，200.00 mg，0.70 mmol，1.00當量)及TEA (141 mg，1.40 mmol，2.00當量)於DMF (3 mL)中之溶液中逐滴添加含CDI (113 mg，0.70 mmol，1.00當量)之DMF (1 mL)。將所得混合物在25℃下攪拌1小時。然後將上述溶液及TEA (141 mg，1.40 mmol)逐滴添加至3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(INT1，192 mg，0.70 mmol，1.00當量)於DMF (2 mL)中之溶液中。將相同的反應重複兩次。將所得混合物在25℃下攪拌1小時。將反應用水(20 mL)稀釋，用EtOAc (20 mL x3)萃取。將合併的有機層用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在真空中蒸發至乾。將殘餘物用矽膠管柱(DCM:MeOH=10:1)純化，得到呈白色固體之1-(4-[2-[(三級丁基二甲基矽基)氧基]乙基]-3-氯苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(170 mg，21%)。LCMS (ESI): 585.59 (M+H) +
Figure 02_image244
步驟 8 ：新降解劑 P3 之合成
在0℃下，向1-(4-[2-[(三級丁基二甲基矽基)氧基]乙基]-3-氯苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物17，170.00 mg，0.29 mmol，1.00當量)於THF (2.00 mL) 中之溶液中添加TBAF (於THF中1 N，0.58 mL，0.58 mmol，2.00當量)。將所得混合物在攝氏25度下攪拌8小時。將反應用製備型TLC (DCM:MeOH=10:1)純化，得到147 mg呈白色固體之粗品1-(3-氯-4-(2-羥乙基)苯基)-3-((2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基異吲哚啉-5-基)甲基)脲。LCMS (ESI): 471.47 (M+H) +
Figure 02_image246
步驟 9 ：化合物 19 之合成
將2-甲基-2-硫烷基丙-1-醇(化合物18，1.4 g，13.2 mmol，1.00當量)及5-硝基-2-[(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基]吡啶(化合物120，2.05 g，6.67 mmol，0.50當量)添加至二氯甲烷(3.50 mL)及MeOH (3.50 mL)之溶劑混合物中。將所得混合物在15℃下攪拌。然後分批添加二氧化錳(2.29 g，26.2 mmol，2當量)。將所得混合物在15℃下攪拌15 min。LCMS跡線顯示反應完全。將反應蒸發至乾，且將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.1% NH 4HCO 3)，30 min內10%至100%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份在真空下濃縮至乾，得到呈黃色固體之2-甲基-2-[(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基]丙-1-醇(2.2 g，58%)。LCMS (ESI): 261 (M+H) +。
Figure 02_image248
步驟 10 ：化合物 20 之合成
向2-甲基-2-[(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基]丙-1-醇(化合物20，1.0 g，3.84 mmol，1.00當量)於無水DCM (30 mL)中之溶液中分批添加MeSO 2Na (1.57 g，15.4 mmol，4.00當量)及碘(1.95 g，7.68 mmol，2.00當量)。將反應混合物在45℃下攪拌24 h。將混合物濃縮，且將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(TLC：PE:EA=3:1，Rf = 0.60；含0-35% EtOAc之石油醚)純化，得到呈黃色油狀物之2-(甲磺醯基硫烷基)-2-甲基丙-1-醇(80 mg，10%)。 1H NMR (400 MHz, CD 3Cl): δ 3.50(s, 2H), 3.33(s, 3H), 2.16(br s, 1H), 1.47(s, 6H)。
Figure 02_image250
步驟 11 ：化合物 (Ib) 之合成
向1-[3-氯-4-(2-羥乙基)苯基]-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑P3，200.00 mg，0.42 mmol，1.00當量)及TEA (129 mg，1.26 mmol，3.00當量)於DMF (4 mL)中之溶液中添加CDI (138 mg，0.84 mmol，2.00當量)於DMF (1 mL)中之溶液。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應用水(50 mL)稀釋，且用EtOAc (20 mLx3)萃取。將合併的有機層用水(20 mLx3)、鹽水(20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥且在真空中蒸發至乾，得到呈淺黃色固體之粗產物咪唑-1-羧酸(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙酯，200 mg)。在室溫下，向粗產物(100.00 mg，0.18 mmol，1.00當量)及Cs 2CO 3(115 mg，0.35 mmol，2.00當量)於DMF (8 mL)中之溶液中逐滴添加DMF (2 mL)中之2-(甲磺醯基硫烷基)-2-甲基丙-1-醇(化合物20，59 mg，0.32 mmol，1.80當量)。將反應在15℃下攪拌22小時。將反應用EtOAc (50 ml)及冰冷的水(100 mL)稀釋。將有機層分離出來。將水相用EtOAc (30 mLx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(30 mLx3)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在真空中蒸發至乾，得到呈黃色固體之粗產物(150 mg)。將粗產物用製備型HPLC (管柱： Xselect CSH OBD管柱30x150mm 5um；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內38 B至58 B；220 nm；RT1：5.12 min)純化。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之1-[3-氯-4-[2-([[2-(甲磺醯基硫烷基)-2-甲基丙氧基]羰基]-氧基)乙基]苯基]-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(15.7 mg，11%)。LCMS (ESI): 681.68 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.99 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 7.70 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.24-7.17 (m, 1H), 6.87-6.84 (m, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.13-5.11 (m, 1H), 4.42-4.40 (m, 2H), 4.32-4.28 (m, 4H), 3.54 (s, 3H), 3.00-2.87 (m, 3H), 2.62-2.58 (m, 1H), 2.44-2.34 (m, 1H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.45 (s, 6H)。
Figure 02_image252
方案3： 化合物 (Ic) 之製備
Figure 02_image254
實例3： 化合物 (Ic) 之合成
Figure 02_image256
步驟 1 ：化合物 23 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2-胺基苯基)(甲基)胺基甲酸三級丁酯(化合物22，300 mg，1.35 mmol，1.00當量)於DMF (20 mL)中之溶液中逐滴添加CDI (218 mg，1.35 mmol，1.00當量)及TEA (68 mg，1.35 mmol，1.00當量)。將混合物在0℃下攪拌2 h。向上述混合物中分批添加3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(INT1，368 mg，1.35 mmol，1.00當量)。將所得混合物在75℃下攪拌隔夜。然後將反應混合物冷卻至室溫。將所得混合物用水(30 mL)淬滅且用DCM (3 x30 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(DCM/MeOH =10:1)純化，得到呈白色固體之N-[2-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(300 mg，42%)。LCMS (ESI): 522 (M+H) +
Figure 02_image258
步驟 2 ：新降解劑 P4 之合成
在0℃下，向經攪拌之N-[2-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物23，300 mg，1.00當量)於DCM (20 mL)中之溶液中添加TFA (5 mL)。將混合物在0℃下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將粗產物藉由逆相在以下條件下純化(C18，流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min)。將收集的流份在真空下濃縮，得到呈白色固體之3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-1-[2-(甲基胺基)苯基]脲(210 mg，87%)。LCMS (ESI): 422 (M+H) +。 1H NMR (300 MHz, DMSO- d 6) δ 10.99(s, 1H), 7.69 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.60(s, 1H), 7.53(s, 1H), 7.45 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.26-7.24(m, 1H), 6.99-6.93(m, 1H), 6.76-6.72(m, 1H), 6.60-6.55(m, 2H), 5.14-5.08(m, 1H), 5.00-4.85(br s, 1H), 4.48-4.28(m, 4H), 2.92-2.82(m, 1H), 2.70(s, 3H), 2.62-2.57(m, 1H), 2.49-2.41(m, 1H), 2.02-1.95(m, 1H)。
Figure 02_image260
步驟 3. 化合物 (Ic) 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-1-[2-(甲基胺基)苯基]脲(P4，150.00 mg，0.36 mmol，1.00當量)、2,6-二甲基吡啶(76 mg，0.71 mmol，2.00當量)及HOBT (96 mg，0.71 mmol，2.00當量)於DMF (3.00 mL)中之混合物中添加碳酸[4-[(2S)-5-(胺基甲醯基胺基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲酯4-硝基苯酯酯 (394 mg，0.53 mmol，1.50當量)。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，流動相A：水(0.1%FA)，流動相B：ACN，得到呈白色固體之粗產物(60 mg)。將粗產物(60 mg)藉由製備型HPLC在以下條件下純化(管柱：Xselect CSH OB D管柱30x150mm 5um，n；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內24 B至44 B；220 nm；RT1：6.33；RT2：)。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之N-[2-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]-N-甲基胺基甲酸[4-[(2S)-5-(胺基甲醯基胺基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲酯(18.1 mg，5%)。LCMS (ESI): 1020 (M+H) +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.99 (s, 1H), 9.96(s, 1H), 8.19-8.06 (m, 3H), 7.79 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.53-7.41 (m, 5H), 7.20-7.05 (m, 4H), 7.00(s, 2H), 6.95-6.90(m, 1H), 5.95(br s, 1H), 5.41(s, 2H), 5.18-4.89(m, 3H), 4.44-4.20(m, 5H), 4.19-4.17(m, 1H), 3.09(s, 3H), 3.07-2.85(m, 3H), 2.22-2.02(m, 2H), 2.00-1.85(m, 2H), 1.71-1.25(m, 10H), 1.20-1.12(m, 3H), 0.84-0.80(m, 6H)
方案4顯示如何由新降解劑P1製備化合物(Id)。
Figure 02_image261
方案4： 化合物 (Id) 之製備 化合物 (Id) 之合成
在室溫下，向經攪拌之1-(3-氯-4-[2-[2-(甲基胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(P1，40.00 mg，0.076 mmol，1.00當量)及6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(25.00 mg，0.081 mmol，1.07當量)於DMF (2.00 mL)中之混合物中逐滴添加DIEA (20.00 mg，0.16 mmol，2.04當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌3 h。將所得混合物用水(30 mL)淬滅且用DCM (3 x 30 mL)萃取。將合併的有機層用水(30 mL)、鹽水(30 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由以下條件純化：管柱：SunFire C18 OBD製備型管柱，100 um, 19 mm x 250 mm；流動相A：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：8.5 min內25 B至55 B；220 nm；RT1：8 min。將收集的流份凍乾，提供呈白色固體之N-[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)-N-甲基己醯胺(化合物(Id)，24 mg，43%)。LCMS: (ES, m/s): 721,723 (M+H) +； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.99 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.41 (d, J= 9.6Hz, 1H), 7.18-7.16 (m, 2H), 7.00(d, J= 5.6Hz, 2H), 6.85-6.80 (m, 1H), 5.12-5.05 (m, 1H), 4.42-4.33 (m, 5H), 3.39-3.36 (m, 3H), 2.91-2.76 (m, 7H), 2.68-2.52 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 1H), 2.33-2.20 (m, 3H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.48-1.44 (m, 5H), 1.28-1.12 (m, 3H)。
方案5A及5B顯示如何製備帶有替代性三肽連接子之新降解劑P1之複合物。
Figure 02_image263
方案5A： 新降解劑 P1- 三肽連接子複合物之合成
Figure 02_image265
方案5B： 新降解劑 P1- 三肽連接子複合物之合成 ( 續 )
方案6A及6B顯示如何製備帶有替代性β-葡糖醛酸苷(β-glucuronide)連接子之新降解劑P1之複合物。
Figure 02_image267
方案6A： 新降解劑 P1-β- 葡糖醛酸苷連接子複合物之合成 步驟 1. 化合物 25 之合成
在室溫下，向經攪拌之3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-丙酸(化合物24，5.00 g，16.06 mmol，1.00當量)於SOCl 2(25 mL) 中之混合物中。將所得混合物在80℃下攪拌16 h。可藉由LCMS (以MeOH之衍生物MS=326)偵測所要產物。LCMS指示反應完成。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈黃色油狀物之N-(3-氯-3-側氧基丙基)胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物25，7.5 g，粗品)。粗產物未經進一步純化直接用於下一步。 1H-NMR分析表明它係所要產物(以MeOH之衍生物)。 1H-NMR (300 MHz, CDCl 3) δ 7.81-7.77 (m, 2H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 2H), 5.33 (s, 1H), 4.42 (d, J=3.0 Hz, 2H), 4.24 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.74-3.67 (m, 3H), 3.50 (d, J=3.0 Hz, 2H), 2.59 (t, J=6.0 Hz, 2H)。 步驟 2. 化合物 28 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之4-甲醯基-2-硝基苯酚(化合物27，4.21 g，25.19 mmol，1.00當量)及Ag 2O (7.00 g，30.20 mmol，1.20當量)於ACN (100 mL，190.24 mmol，75.00當量)中之溶液中分批添加化合物26 (10.00 g，25.17 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫、N 2氣氛下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用DCM (50 mlx3)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EA (PE:EA=1:2)溶析，得到呈白色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-羧酸甲酯(化合物28，10.5 g，86%)。 1H-NMR分析表明它係所要產物。LCMS (ES, m/z):484 [M+1] +。 1H-NMR (300 MHz, CDCl 3) δ 10.00 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13-8.09 (m, 1H), 7.52 (d, J=3.0 Hz, 1H), 5.47-5.29 (m, 4H), 4.37-4.35 (m, 1H), 3.75-3.73 (m, 3H), 2.17-2.06 (m, 9H)。 步驟 3. 化合物 29 之合成
在RT、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-羧酸甲酯(化合物28，6.00 g，12.41 mmol，1.00當量)於MeOH (50 mL)中之溶液中分批添加NaBH 4(0.47 g，12.42 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫、N 2氣氛下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。在室溫下用水淬滅反應。將所得物藉由Na 2SO 4乾燥。將所得混合物過濾，將濾餅用DCM洗滌。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-(羥甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物29，5.5 g，91%)。LCMS (ES, m/z):486 [M+H]+。 步驟 4. 化合物 30 之合成
在室溫下，向經攪拌之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-(羥甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物29，5.50 g，11.33 mmol，1.00 當量)於EA (60 mL)中之混合物中分批添加Pd/C (1.10 g，10%)。將所得混合物在室溫、H 2氣氛下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用DCM及MeOH洗滌。將濾液在真空下濃縮，得到呈固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-胺基-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物30，4.0 g，77%)。粗產物未經進一步純化直接用於下一步。LCMS (ES, m/z):456[M+H] +。 步驟 5. 化合物 31 之合成
在0℃、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-胺基-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物30，1.00 g，2.19 mmol，1.00當量)及NaHCO 3(0.20 g，2.40 mmol，1.1當量)於THF (10 mL)中之溶液中分批添加化合物25 (0.87 g，2.62 mmol，1.20當量)。將所得混合物在0℃、N 2氣氛下攪拌6 h。LCMS指示反應完成。在室溫下用水淬滅反應。將所得混合物用DCM萃取。將合併的有機層在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EA (EA=100 %)溶析，得到呈淡黃色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-丙醯胺基)-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物31，1.1 g，66%)。LCMS (ES, m/z):749 [M+H] +。 步驟 6. 化合物 33 之合成
在0℃、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物31，1.50 g，2.00 mmol，1.00當量)及碳酸雙(4-硝基苯酯) (化合物32，0.68 g，2.24 mmol，1.12當量)於DMF (15 mL)中之混合物中分批添加DIEA (0.52 g，4.01 mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，40 min內10%至90%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物33，1.4 g，48%)。LCMS (ES, m/z):914 [M+H] +。
Figure 02_image269
方案6B： 新降解劑 P1-β- 葡糖醛酸苷連接子複合物之合成 步驟 7. 化合物 34 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物33，1.00 g，1.09 mmol，1.00當量)及1-(3-氯-4-[2-[2-(甲胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑P1，0.58 g，1.09 mmol，1.00當量)於DMF (10 mL)中之混合物中分批添加HOBT (1.18 g，8.72 mmol，8.00當量)及2,4-二甲基吡啶(1.07 g，8.72 mmol，8.00當量)。將所得混合物在室溫、N 2氣氛下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物進一步純化。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，40 min內10%至80%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份在真空下濃縮，得到呈固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物34，800 mg，56%)。LCMS (ES, m/z):1302[M+H] +。 步驟 8. 化合物 35 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物34，800.00 mg，0.61 mmol，1.00當量)於THF (80 mL)中之混合物中分批添加HCl (6N，80 mL)。將所得混合物在50℃、氮氣氣氛下攪拌3 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，40 min內0%至80%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物35，230 mg，32%)。LCMS (ES, m/z):1162[M+H] +。 步驟 9. 化合物 36 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2S,3S, 4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物35，230 mg，0.2 mmol，1.00當量)於DMF (2 mL)中之溶液中分批添加哌啶(0.4 mL)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌10 min。LCMS指示反應完成。將所得混合物直接藉由製備型HPLC在以下條件之情況下進行進一步純化(管柱：XSelect CSH 製備型C18 OBD管柱，19x250 mm，5um；流動相A：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：7 min內20 B至40 B；220 nm；RT 1：5.78min)，得到呈白色固體之(2S,3S, 4S,5R,6S)-6-[2-(3-胺基丙醯胺基)-4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]-乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物36，35 mg，18%)。LCMS (ES, m/z): 940[M+H]+。 步驟 10. 化合物 (Ie) 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2S,3S, 4S,5R,6S)-6-[2-(3-胺基丙醯胺基)-4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物36，30 mg，0.03 mmol，1.00當量)於DMF (3 mL)中之溶液中分批添加DIEA (13 mg，0.10 mmol，3.00當量)及化合物37 (30 mg，0.10 mmol，3.00當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物藉由製備型HPLC在以下條件之情況下純化(管柱：Xselect CSH OBD管柱30 x 150mm 5um，流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：10 min內21 B至36 B；220 nm；RT 1：11.15 min)。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基]-(甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-[3-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]丙醯胺基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物(Ie)，10.5 mg，28%)。LCMS (ES, m/z):1133[M+H] +。 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 10.9 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.92-7.68 (m, 4H), 7.52 (s, 1H), 7.44 (d, J=3.0 Hz, 1H), 7.18-6.99 (m, 7H), 5.76 (s, 1H), 5.20-5.10 (m, 2H), 4.98 (br s, 2H), 4.76-4.74 (m, 1H), 4.42-4.33 (m, 4H), 3.65 (br s, 1H), 3.58-3.54 (m, 5H), 3.35 (d, J=6 Hz, 2H), 2.90-2.83 (m, 7H), 2.57-2.55 (m, 3H), 2.45-2.30 (m, 1H), 2.02-1.98 (m, 4H), 1.48-1.42 (m, 5H), 1.40-1.20 (m, 3H)。
方案7顯示如何製備帶有肼連接子之新降解劑P6之複合物。
Figure 02_image271
方案7： 新降解劑 P6- 腙連接子複合物之合成 步驟 1. 化合物 38 之合成
在室溫下，向經攪拌之4-胺基苯乙酮(化合物37，100 mg，0.73 mmol，1.00當量)於THF (2.00 mL)中之溶液中逐滴添加雙光氣(0.40 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌30 min。將所得混合物在真空下濃縮。將所得固體重新溶解於DMF (1.50 mL)中。在室溫下，向經攪拌之溶液中逐滴添加DMF (3.00 mL)及TEA (0.50 mL)中之3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮 (INT1，200 mg，0.73 mmol，1.00當量)。將所得混合物在0℃下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。向混合物中添加水(5 mL)且用CH 2Cl 2(3x10 mL)萃取。將有機層在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.05% TFA)，35 min內10%至50%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集流份濃縮至乾，得到呈淡黃色固體之1-(4-乙醯基苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物38，80 mg，25%)。LCMS:(ES.m/z):435[M+1] +。 步驟 2. 化合物 (If) 之合成
將1-(4-乙醯基苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物38，80.00 mg，0.18 mmol，1.00當量)及6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯肼；三氟乙酸(75 mg，1.20當量)於甲醇(5.00 mL)中之混合物在攝氏50度下攪拌隔夜。將混合物冷卻至室溫。LCMS指示反應完成。藉由過濾收集沉澱的固體且用MeOH (2x5 mL)洗滌。將粗固體藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：C18管柱；流動相，含ACN之水 (0.1% FA)，30 min內10%至50%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份用DCM (3x5 mL)萃取且在真空下濃縮。這產生呈灰白色固體之3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-1-[4-[(1E)-1-[[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]亞胺基]乙基]苯基]脲(化合物(If)，4.4 mg，3.7%)。LCMS:(ES.m/z): 642[M+1] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.99 (s, 1H), 10.26-10.15 (m, 1H), 8.82 (s, 1H),7.69-7.62(m, 3H), 7.52-7.43 (m, 4H), 7.01-6.99 (m, 2H), 5.13-5.09 (m, 1H), 4.42-4.33 (m, 4H), 2.98-2.82 (m, 1H), 2.62-2.58 (m, 2H), 2.20-2.12 (m, 2H), 1.58-1.51 (m, 6H),1.26-1.09 (m,6H)
方案8顯示如何製備帶有四級胺連接子之新降解劑P2之複合物。
Figure 02_image273
方案8： 新降解劑 P2- 四級胺連接子複合物之合成 步驟 1. 化合物 40 之合成
在0℃、N 2下，向經攪拌之N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(胺基甲醯基胺基)-1-[[4-(羥甲基)苯基]胺基甲醯基]丁基]胺基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺(化合物39，100 mg，0.18 mmol，1.00當量)於DMF (2 mL)中之溶液中逐滴添加DCM (2 mL)中之SOCl 2(20 mg，0.18 mmol，1當量)。將所得混合物在0℃下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物用冰冷的水(20 mL)稀釋，用DCM (10 mL*3)萃取，將合併的有機層用水(10 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈白色固體之產物N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(胺基甲醯基胺基)-1-[[4-(氯甲基)苯基]-胺基甲醯基]丁基]胺基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺(化合物40，80 mg，53%)。LCMS (ES, m/z): 591,593 [M+H] + 步驟 2. 化合物 42 之合成
在0℃下，向經攪拌之(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物41，8.60 g，39.9 mmol，1.00當量)於THF (130 mL)中之混合物中逐滴添加BH 3-Me 2S (10.00 mL，105.4 mmol，2.64當量)。將所得混合物在70℃、氮氣氣氛下攪拌4 h。TLC (PE:EA=1:2)指示反應完全。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (1:1)溶析，得到呈黃色固體之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物42，7.7 g，96%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.27 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.11-8.07 (m, 1H), 7.53 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.99 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.15 (t, J= 8.0 Hz, 2H)。 步驟 3. 化合物 43 之合成
在0℃下，向經攪拌之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物 42，7.70 g，38.2 mmol，1.00當量)及2-溴乙酸三级丁酯(57.74 g，296.0 mmol，7.75當量)於甲苯(70 mL)中之混合物中分批添加Bu 4NHSO 4(10.37 g，30.6 mmol，0.80當量)。在0℃下，在30 h內向上述混合物中逐滴添加NaOH (15.00 g，375.0 mmol，9.82當量)之H 2O (90 mL)溶液。將所得混合物在室溫下再攪拌4 h。TLC (PE:EA=3:1)指示反應完全。將所得混合物用EtOAc (3 x 200 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (5:1)溶析，得到呈黃色油狀物之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸三級丁酯(化合物43，12.2g，91%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl 3) δ 8.20 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.07-8.03 (m, 1H), 7.61 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.83 (t, J= 8.1 Hz, 2H), 3.16(t, J= 8.1 Hz, 2H), 1.45(s, 9H)。 步驟 4. 化合物 44 之合成
在0℃下，向經攪拌之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸三級丁酯(化合物43，12.20 g，38.6 mmol，1.00當量) 於DCM (120 mL)中之混合物中逐滴添加TFA (20 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物在減壓下濃縮。這產生呈黃色固體之[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(化合物44，8.4g，83%)。LCMS: (ES, m/s): 517 (2M-H) - 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.64(s, 1H), 8.20 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.11-8.08 (m, 1H), 7.72 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.74 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.06(t, J= 8.0 Hz, 2H)。 步驟 5. 化合物 45 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙酸(化合物44，8.40 g，32.35 mmol，1.00當量)及HATU (19.19 g，50.47 mmol，1.56當量)於DMF (80 mL)中之混合物中添加CH 3NH 2.HCl (2.69 g，39.79 mmol，1.23當量)及DIEA (17.31 g，133.93 mmol，4.14當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。將反應用水/冰淬滅。將所得混合物用DCM (3 x 50 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM: MeOH = 10:1)溶析，得到呈黃色油狀物之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-N-甲基乙醯胺(化合物45，7.2 g，81%)。LCMS: (ES, m/s): 273,275 (M+H) + 步驟 6. 化合物 46 之合成
在室溫下，向經攪拌之2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-N-甲基乙醯胺(化合物45，7.20 g，26.40 mmol，1.00當量)於THF (70 mL)中之混合物中逐滴添加BH 3-THF (於THF中10 M，52.0 mL，520.0 mmol，20當量)。將所得混合物在70℃下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將反應用MeOH淬滅。將殘餘物用1N HCl酸化至pH 6。將所得混合物用EtOAc (20 mL)萃取。將水相用飽和NaHCO 3(飽和水溶液)鹼化至pH 8。將所得混合物用EtOAc (3 x 100 mL)萃取，用鹽水(50 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM: MeOH = 8:1)溶析，得到呈黃色固體之[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(化合物46，5.4g，79%)。LCMS: (ES, m/s): 259,261 (M+H) +； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.26 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.15-8.12 (m, 1H), 7.73 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.72 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.61(t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.10 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.87 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H)。 步驟 7. 化合物 47 之合成
在室溫下，向經攪拌之[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基](甲基)胺(化合物46，4.00 g，15.46 mmol，1.00當量)及Boc 2O (3.80 g，17.41 mmol，1.13當量)於THF (20.00 mL)中之混合物中逐滴添加NaHCO 3(4.00 g，47.61 mmol，3.08當量)之H 2O (20.00 mL)溶液。將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。將所得混合物用EtOAc (3 x 20 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM: MeOH = 12:1)溶析，得到呈黃色固體之N-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物47，4.8 g，77%)。 LCMS: (ES, m/s): 359,361(M+H) +； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.24 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.13-8.10 (m, 1H), 7.67 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.05-4.00(m, 1H), 3.69 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.50(t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.28 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 3.07(t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.75(s, 3H), 1.36(s, 9H)。 步驟 8. 化合物 48 之合成
在室溫下，向經攪拌之N-[2-[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物47，5.60 g，15.6 mmol，1.00當量)於EtOH (112.00 mL)中之混合物中添加H 2O (12.00 mL)及Fe (4.40 g，78.79 mmol，5.05當量)中之NH 4Cl (2.50 g，46.74 mmol，2.99當量)。將所得混合物在80℃下攪拌3 h。LCMS指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物在減壓下濃縮。將所得混合物用DCM (3 x 30 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM: MeOH = 10:1)溶析，得到呈黃色油狀物之N-[2-[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物48，4.2 g，81%)。LCMS: (ES, m/s): 329,331 (M+H) +； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 6.96 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.59(d, J= 4.0 Hz, 1H), 6.46-6.43 (m, 1H), 5.18(br s, 2H), 3.50-3.45(m, 4H), 3.29-3.26(m, 2H), 2.75-2.71(m, 5H), 1.38(s, 9H)。 步驟 9. 化合物 49 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向N-[2-[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙氧基]乙基]-N-甲基胺基甲酸三級丁酯(化合物48，100 mg，0.30 mmol，1.00當量)於THF (3 mL)中之溶液中添加THF (2 mL)中之LiAlH 4(92 mg，2.43 mmol，8.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。五個反應平行進行。LCMS指示反應完成。然後將反應用1N NaOH (10 mL)淬滅，過濾，在真空下濃縮至幹，且然後將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.1%FA)，30 min內0%至60%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份濃縮至乾，得到呈黃色油狀物之3-氯-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]乙基]苯胺，49 (180 mg，44%)。LCMS (ES, m/z): 243,245 [M+H] + 步驟 10. 化合物 50 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向3-氯-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]乙基]苯胺(化合物49，140 mg，0.58 mmol，1.00當量)於THF (9 mL)中之溶液中添加雙光氣(137 mg，0.69 mmol，1.20當量)。將所得混合物在0℃下攪拌1小時。然後將反應溶液在真空下濃縮至乾。將殘餘物重新溶解於DMF (2 mL)中，且然後在氮氣氣氛下逐滴添加至3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(158 mg，0.58 mmol，1.00當量)及TEA (117 mg，1.15 mmol，2.00當量)於DMF (4 mL)中之溶液中。將所得混合物在室溫下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物用甲醇稀釋，且將所得溶液藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.1% FA)，30 min內0%至50%梯度；偵測器，UV 254 nm，得到100 mg呈無色固體之產物。將粗產物藉由製備型HPLC在以下條件下純化：管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱，19x250 mm，10 um；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：7 min內14%至32%；220 nm；RT1: 5.25 min。將收集的流份凍乾，得到呈無色固體之1-(3-氯-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物50，60 mg，18%)。LCMS (ES, m/z): 542,544 [M+H]+ 步驟 11. 化合物 (Ig) 之合成
在室溫、空氣下，向N-[(1S)-1-[[(1S)-4-(胺基甲醯基胺基)-1-[[4-(氯甲基)苯基]-胺基甲醯基]丁基]胺基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺(化合物40，66 mg，0.11 mmol，1.00當量)、1-(3-氯-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物50，60 mg，0.11 mmol，1.00當量)及DIEA (29 mg，0.22 mmol，2.00當量)於DMF (1 mL)中之溶液中添加TBAI (4 mg，0.01 mmol，0.10當量)。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。LCMS跡線顯示反應完全。將所得混合物藉由逆相管柱層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.05% TFA)，40 min內5%至45%梯度；偵測器，UV 254 nm，得到90 mg呈黃色油狀物之粗產物。然後將粗產物藉由以下條件再純化：管柱：Xselect CSH OB D管柱 30*150 mm 5 um，n；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內15 B至35 B；220 nm；RT1：6.00 min，得到呈白色固體之([4-[(2S)-5-(胺基甲醯基胺基)-2-[(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁醯胺基]戊醯胺基]苯基]甲基)[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基]二甲基銨，化合物(Ig) (19 mg，14.8%)。LCMS (ES, m/z): 1096 [M-FA] +, 549 [1/2(M-FA)] +； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.48 (s, 1H), 7.77-7.72 (m, 3H), 7.55 - 7.47 (m, 3H), 7.37-7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.18 - 7.14 (m, 2H), 6.77 (s, 2H), 5.17-5.13 (q, J = 8, 4Hz, 1H), 4.51 - 4.46 (m, 5H), 4.35 (s, 2H), 4.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 3.22-3.15 (m, 1H), 3.11-3.05 (m, 1H), 3.00 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.92 (s, 6H), 2.89 - 2.84 (m, 1H), 2.81 - 2.73 (m, 1H), 2.54-2.43 (m, 1H), 2.27 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.21 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.78-1.69 (m, 1H), 1.64-1.59 (m, 7H), 1.32-1.25 (m, 2H), 0.98-0.96 (m, 6H)。
方案9A及9B顯示如何製備帶有含肽連接子之新降解劑P13之複合物。
Figure 02_image275
方案9A： 新降解劑 P13- 肽連接子複合物之合成
Figure 02_image277
方案9B： 新降解劑 P13- 肽連接子複合物之合成
方案10顯示式(Ih)之化合物之合成。
Figure 02_image279
方案10 ：新降解劑 P1-β- 葡糖醛酸苷連接子複合物 ( 化合物 (Ih)) 之合成 步驟 1. 化合物 63 之合成
在室溫下，向經攪拌之3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸(化合物62，5.00 g，16.06 mmol，1.00當量)之混合物中添加SOCl 2(25 mL)。將所得混合物在80℃下攪拌16 h。可藉由LCMS (以MeOH之衍生物MS=326)偵測所要產物。LCMS指示反應完成。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈黃色油狀物之N-(3-氯-3-側氧基丙基)胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物63，7.5 g，粗品)。粗產物未經進一步純化直接用於下一步。 1H NMR分析表明它係所要產物(以MeOH之衍生物)。 1H-NMR (300 MHz, CDCl 3) δ 7.81-7.77 (m, 2H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 2H), 5.33 (s, 1H), 4.42 (d, J=3.0 Hz, 2H), 4.24 (t, J=6.0 Hz, 1H), 3.74-3.67 (m, 3H), 3.50 (d, J=3.0 Hz, 2H), 2.59 (t, J=6.0 Hz, 2H)。 步驟 2. 化合物 66 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之4-甲醯基-2-硝基苯酚(化合物65，4.21 g，25.19 mmol，1.00當量)及Ag 2O (7.00 g，30.20 mmol，1.20當量)於ACN (100 mL，190.24 mmol，75.00當量)中之溶液中分批添加(2S,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-溴噁烷-2-羧酸甲酯(化合物64，10.00 g，25.17 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫、N 2氣氛下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用DCM (50 mL x 3)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EA (PE:EA=1:2)溶析，得到呈白色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-羧酸甲酯(化合物66，10.5 g，86%)。 1H-NMR分析表明它係所要產物。LCMS (ES, m/z):484 [M+1] +。 1H-NMR (300 MHz, CDCl 3) δ 10.00 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13-8.09 (m, 1H), 7.52 (d, J=3.0 Hz, 1H), 5.47-5.29 (m, 4H), 4.37-4.35 (m, 1H), 3.75-3.73 (m, 3H), 2.17-2.06 (m, 9H). 步驟 3. 化合物 67 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-(4-甲醯基-2-硝基苯氧基)噁烷-2-羧酸甲酯(化合物66，6.00 g，12.41 mmol，1.00當量)於MeOH (50 mL)中之溶液中分批添加NaBH 4(0.47 g，12.42 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫、N 2氣氛下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。在室溫下用水淬滅反應。將所得物藉由Na 2SO 4乾燥。將所得混合物過濾，將濾餅用DCM洗滌。將所得混合物在真空下濃縮，得到呈固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-(羥甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物67，5.5 g，91%)。LCMS (ES, m/z):486 [M+H] +。 步驟 4. 化合物 68 之合成
在室溫下，向經攪拌之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-(羥甲基)-2-硝基苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物67，5.50 g，11.33 mmol，1.00 當量)於EA (60 mL)中之混合物中分批添加Pd/C (1.10 g，10%)。將所得混合物在室溫、H 2氣氛下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物過濾，將濾餅用DCM及MeOH洗滌。將濾液在真空下濃縮，得到呈固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-胺基-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物68，4.0 g，77%)。粗產物未經進一步純化直接用於下一步。LCMS (ES, m/z):456[M+H] +。 步驟 5. 化合物 70 之合成
在0℃、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-胺基-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物68，1.00 g，2.19 mmol，1.00當量)及NaHCO 3(0.20 g，2.40 mmol，1.1當量)於THF (10 mL)中之溶液中分批添加N-(3-氯-3-側氧基丙基)胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物69，0.87 g，2.62 mmol，1.20當量)。將所得混合物在0℃、N 2氣氛下攪拌6 h。LCMS指示反應完成。在室溫下用水淬滅反應。將所得混合物用DCM萃取。將合併的有機層在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EA (EA=100 %)溶析，得到呈淡黃色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-丙醯胺基)-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物70，1.1 g，66%)。LCMS (ES, m/z):749 [M+H] +。 步驟 6. 化合物 72 之合成
在0℃、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)-4-(羥甲基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物70，1.50 g，2.00 mmol，1.00當量)及碳酸雙(4-硝基苯酯) (化合物71，0.68 g，2.24 mmol，1.12當量)於DMF (15 mL)中之混合物中分批添加DIEA (0.52 g，4.01 mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，40 min內10%至90%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-胺基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物72，1.4 g，48%)。LCMS (ES, m/z):914 [M+H] +。 步驟 7. 化合物 73 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)-4-[[(4-硝基苯氧基羰基)氧基]甲基]苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物72，1.00 g，1.09 mmol，1.00當量)及1-(3-氯-4-[2-[2-(甲胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(新降解劑P1，0.58 g，1.09 mmol，1.00當量)於DMF (10 mL)中之混合物中分批添加HOBT (1.18 g，8.72 mmol，8.00當量)及2,4-二甲基吡啶(1.07 g，8.72 mmol，8.00當量)。將所得混合物在室溫、N 2氣氛下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物進一步純化。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，40 min內10%至80%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份在真空下濃縮，得到呈固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物73，800 mg，56%)。LCMS (ES, m/z):1302[M+H] +。 步驟 8. 化合物 74 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之(2S,3S,4S, 5R,6S)-3,4,5-參(乙醯氧基)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]噁烷-2-羧酸甲酯(化合物73，800.00 mg，0.61 mmol，1.00當量)於THF (80 mL)中之混合物中分批添加HCl (6N，80 mL)。將所得混合物在50℃、氮氣氣氛下攪拌3 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，40 min內0%至80%梯度；偵測器，UV 254 nm。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物74，230 mg，32%)。LCMS (ES, m/z):1162[M+H] +。 步驟 9. 化合物 75 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2S,3S, 4S,5R,6S)-6-[4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]-2-(3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基)苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸，74 (230 mg，0.2 mmol，1.00當量)於DMF (2 mL)中之溶液中分批添加哌啶(0.4 mL)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌10 min。LCMS指示反應完成。將所得混合物直接藉由製備型HPLC在以下條件之情況下進行進一步純化(管柱：XSelect CSH 製備型C18 OBD管柱，19x250 mm，5 um；流動相A：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：7 min內20 B至40 B；220 nm；RT1：5.78min)，得到呈白色固體之(2S,3S,4S, 5R,6S)-6-[2-(3-胺基丙醯胺基)-4-[([[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基]氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物75，35 mg，18%)。LCMS (ES, m/z): 940[M+H] +。 步驟 10. 化合物 (Ih) 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2S,3S, 4S,5R,6S)-6-[2-(3-胺基丙醯胺基)-4-[({[2-(2-{2-氯-4-[({[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基}胺基甲醯基)胺基]苯基}乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基}氧基)甲基]苯氧基]-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物75，110 mg，0.12 mmol，1.00當量)及戊二酸雙(2,5-二側氧基吡咯啶-1-酯) (化合物76，46 mg，0.14 mmol，1.2當量)於DMF (2.0 mL)中之溶液中分批添加DIEA (30 mg，0.23 mmol，2.0當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由製備型HPLC在以下條件之情況下純化(管柱：Kinetex EVO 製備型C18，30*150，5 um；流動相A：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內21% B至41% B，41% B；波長：254 nm；RT1 (min)：5.8。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之(2S,3S,4S,5R,6S)-6-{4-[({[2-(2-{2-氯-4-[({[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基}胺基甲醯基)胺基]苯基}乙氧基)乙基](甲基)胺基甲醯基}氧基)甲基]-2-(3-{5-[(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基]-5-側氧基戊醯胺基}丙醯胺基)苯氧基}-3,4,5-三羥基噁烷-2-羧酸(化合物(Ih)，48 mg，34%)。LCMS (ES, m/z): 1151 [M+H] +, 1173 [M+Na] +。 1H-NMR(300MHz, DMSO-d 6): 12.80 (br s, 1H), 10.98 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.68-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J=8.1 Hz,1H), 7.25-7.00 (m, 4H), 6.82-6.80 (m, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.39-5.30 (m, 2H), 5.14-5.07 (m, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.84 (d, J=7.2 Hz,1H), 4.47-4.27 (m, 4H), 3.90 (d, J=9.6 Hz, 1H), 3.56-3.48 (m, 4H), 3.45-3.36 (m, 6H), 2.95-2.80 (m, 8H), 2.75-2.65 (m, 3H), 2.62-2.55 (m, 2H), 2.49-2.35 (m, 1H), 2.21-2.16 (m, 2H), 2.01-1.95 (m, 1H), 1.85-1..80 (m, 2H)。
Figure 02_image281
方案11： 新降解劑 P1- 連接子複合物 ( 化合物 (Ii)) 之合成 步驟 1. 化合物 76 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之1-(3-氯-4-[2-[2-(甲基胺基)乙氧基]乙基]苯基)-3-[[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]脲(化合物P1，180 mg，0.34 mmol，1.00當量)於DMF (8 mL)中之溶液中分批添加TEA (104 mg，1.02 mmol，3.0當量)及4-(氯磺醯基)-3-硝基苯甲酸(181 mg，0.68 mmol，2.00當量)。將所得混合物在0℃、氮氣氣氛下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物進一步純化。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，10 min內10%至60%梯度；偵測器，UV 254 nm。將混合物凍乾，得到呈淡黃色固體之4-[[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺磺醯基]-3-硝基苯甲酸(化合物76，70 mg，27%)。LCMS (ES, m/z): 757 [M+1] +。 步驟 2 化合物 (Ii) 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之4-[[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺磺醯基]-3-硝基苯甲酸(化合物76，60 mg，0.08 mmol，1.00當量)於DMF (6 mL)中之混合物中分批添加HATU (45 mg，0.12 mmol，1.5當量)、1-(2-胺基乙基)吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(化合物77，17 mg，0.10 mmol，1.20當量)及DIEA (31 mg，0.24 mmol，3.0當量)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。將殘餘物藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep Phenyl OBD管柱，19×150 mm 5 um 13 nm；流動相A：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：10 min內25 B至43 B；220 nm；RT1：11.97 min)純化。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之4-[[2-(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)乙基](甲基)胺磺醯基]-N-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙基]-3-硝基苯甲醯胺(化合物(Ii)，27 mg，36%)。LCMS (ES, m/z): 879,881 [M+H]。 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 11.00 (s, 1H), 9.01 (t, J=6.0 Hz, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.71-7.67 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.44 (d, J=3.0 Hz, 1H), 7.21-7.12 (m, 2H), 7.02 (s, 2H), 6.84 (t, J=6.0 Hz, 1H), 5.14-5.08 (m, 1H), 4.48-4.28 (m, 4H), 3.62-3.50(m, 6H), 3.40-3.28 (m, 2H), 2.95-2.85(m, 4H), 2.80-2.73 (m, 2H), 2.65-2.60 (s, 1H), 2.41-2.27 (m, 1H), 2.05-1.95 (m, 1H)。
Figure 02_image283
方案12： 新降解劑 P1-GGFG 連接子複合物 ( 化合物 (Ij)) 之合成 步驟 1. 化合物 79 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-乙醯胺基)乙酸(化合物78，10.00 g，28.22 mmol，1.00當量)及Pb(OAc) 4(15.02 g，33.86 mmol，1.20當量)於THF(300 mL)及甲苯(100 mL)中之混合物中逐滴添加吡啶(2.59 g，32.74 mmol，1.16當量)。將所得混合物在80℃、氮氣氣氛下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，且將濾餅用乙酸乙酯(20 mL)洗滌。將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(20 mL)中，用水、鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (1:4)溶析，得到呈白色固體之乙酸(2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]乙醯胺基)甲酯(化合物79，6.5g，56%)。LCMS (ESI, ms): 391[M+Na] +。 1HNMR (300MHz, CDCl 3) δ 7.80(d, J=7.5Hz, 2H), 7.62(d, J=7.5Hz, 2H), 7.45(t, J=7.5Hz, 2H), 7.36(d, J=7.5Hz, 2H), 7.18(br s, 1H),5.48(br s, 1H), 5.28(d, J=7.2Hz, 2H), 4.48(d, J=6.6Hz, 2H), 4.26(t, J=6.6Hz, 1H), 3.93(d, 5.4Hz, 2H), 2.08(s, 3H)。 步驟 2. 化合物 81 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之乙酸(2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-胺基]乙醯胺基)甲酯，79 (2.00 g，5.43 mmol，1.00當量)及2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物3，3.20 g，15.85 mmol，2.92當量)於DCM (40 mL)中之混合物中逐滴添加PPTS (400 mg，1.59 mmol，0.29當量)。將所得混合物在45℃、氮氣氣氛下攪拌隔夜。可藉由LCMS偵測到40%所要產物。使混合物冷卻至室溫。將反應用水/冰淬滅。將所得混合物用EtOEt (3 x 20 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (1:9)溶析，得到呈白色固體之N-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物81，1.7 g，55%) LCMS (ESI, ms):  510,512[M+H] +。 1HNMR (300MHz, DMSO-d 6): δ 8.58 (t, J=5.1Hz, 1H), 8.22 (dd, J=12, 2.4Hz, 1H), 7.89 (d, J=7.5Hz, 1H), 7.71-7.54 (m, 4H), 7.43-7.29 (m, 4H), 4.56 (d, J=6.9Hz, 2H), 4.30-4.16 (m, 3H), 3.70-3.61(m, 4H), 3.04 (t, J=6.3Hz, 2H)。 步驟 3. 化合物 82 之合成
在0℃、氮氣氣氛下，向經攪拌之N-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物81，1.60 g，3.14 mmol，1.00當量)於DMF(5.0 mL)中之混合物中分批添加哌啶(1.0 mL)。將所得混合物在室溫、氮氣氣氛下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.05% TFA)，40 min內0%至50%梯度；偵測器，UV 254 nm。這產生呈黃色油狀物之2-胺基-N-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]乙醯胺(化合物82，750 mg，76%)。LCMS (ESI, ms) 288[M+H] +,329[M+H+ACN] + 步驟 4. 化合物 83 之合成
在0℃下，向經攪拌之2-胺基-N-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]-甲基]乙醯胺(化合物82，750 mg，2.61 mmol，1.00當量)及Boc 2O (580 mg，2.66 mmol，1.02當量)於DMF(10.00 mL)中之混合物中逐滴添加NaHCO 3(477 mg，5.68 mmol，2.18當量)之H 2O (10.00 mL)溶液。將所得混合物在室溫下攪拌3 h。LCMS指示反應完成。藉由添加水(20 mL)淬滅反應。將所得混合物用EtOEt (3 x 20mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (1:2)溶析，得到呈黃色油狀物之N-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物83，650 mg，58%)。LCMS(ESI, ms), 388[M+H] +, 332[M+H-56] +。 1HNMR (400MHz, CDCl 3) δ 8.21(d, J=2.4Hz, 1H), 8.04(d, J=8.4Hz, 2H), 7.46(d, J=8.4Hz, 1H), 7.05(br s, 1H), 5.25(br s, 1H), 4.73(d, J=7.2Hz, 2H), 3.81-3.73(m, 4H), 3.34-3.32(m, 2H), 3.08(t, J=6.8Hz, 2H), 1.42(s, 9H)。 步驟 5. 化合物 84 之合成
在室溫下，向經攪拌之N-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙氧基]甲基]-胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物83，650 mg，1.68 mmol，1.00當量)及Fe (260 mg，4.66 mmol，2.78當量)於EtOH (9.00 mL)中之混合物中逐滴添加NH 4Cl (910 mg，17.01 mmol，10.1當量)之H 2O (3.00 mL)溶液將所得混合物在90℃下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物在真空下濃縮。將所得混合物用EtOAc (3 x 20mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (1:1)溶析，得到呈黃色固體之N-[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙氧基]甲基]-胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物84，500 mg，83%)。LCMS(ESI, ms): 358[M+H] +, 380[M+Na] +。 1HNMR (300MHz, CDCl 3) δ 7.02-6.96(m, 2H), 6.68(d, J=2.4Hz, 1H), 6.52-6.49(m, 1H), 5.29(br s, 1H), 4.74(d, J=6.9Hz, 2H), 3.80-3.78(m, 2H), 3.69-3.63(m, 2H), 2.88(t, J=7.2Hz, 2H), 1.45(s, 9H)。 步驟 6. 化合物 86 之合成
在0℃下，向經攪拌之3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽(化合物85，398 mg，1.28 mmol，0.92當量)及CDI(450 mg，2.78 mmol，1.99當量)於DMF(5.00 mL)中之混合物中添加TEA(300 mg，2.96 mmol，2.12當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。向上述混合物中分批添加N-[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙氧基]甲基]胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物84，500 mg，1.40 mmol，1.00當量)及DMAP (550 mg，4.50 mmol，3.22當量)。將所得混合物在60℃下再攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，30 min內0%至50%梯度；偵測器，UV 254 nm。這產生呈淡棕色固體之N-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲酸三級丁酯(化合物86，550 mg，60%)。LCMS (ESI, ms): 657[M+H] +, 601[M+H-56] +,557[M+H-100] +。 步驟 7. 化合物 87 之合成
在0℃下，向經攪拌之N-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲酸三級丁酯(化合物86，530 mg，0.80 mmol，1.00當量)於DCM (5.00 mL)中之溶液中添加TFA (1.00 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌30 min。LCMS指示反應完成。將所得混合物在減壓下濃縮。這產生呈灰白色固體之2-胺基-N-[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]乙醯胺；三氟乙酸(化合物87，(510 mg，純度：64%，產率：60%)。LCMS (ESI, ms):557[M+H-TFA] + 步驟 8. 化合物 89 之合成
在0℃下，向經攪拌之(2S)-2-[2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基]-3-苯基丙酸(化合物88，2.00 g，7.16 mmol，1.00當量)及NaHCO 3(1.80 g， 21.41 mmol，3.00當量)於H 2O (40.00 mL)中之混合物中逐滴添加DMF (40.00 mL)中之Boc 2O (1.86 g，8.52 mmol，1.20當量)。將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。在室溫下用水淬滅反應。將所得混合物用EtOEt (3 x 50 mL)萃取。將合併的有機層用鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在減壓下濃縮。將殘餘物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.05% TFA)，30 min內5%至60%梯度；偵測器，UV 220 nm。這產生呈白色半固體之(2S)-2-(2-[2-[(三級丁氧羰基)胺基]乙醯胺基]乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物89，1.8 g，60%)。LCMS (ESI,ms):380[M+H] +,324[M+H-56] +。 1HNMR:(300MHz, DMSO-d 6) δ 8.17(d, J=8.1Hz, 1H), 7.93(t, J=5.7Hz, 1H), 7.31-7.20(m, 5H), 7.00(t, J=6.0Hz, 1H), 4.46-4.39(m, 1H),3.78-3.67(m, 2H), 3.56(d, J=5.7Hz, 2H), 3.09-3.02(m, 1H), 2.92-2.73(m, 1H), 1.39(s, 9H)。 步驟 9. 化合物 90
在0℃下，向經攪拌之(2S)-2-(2-[2-[(三級丁氧羰基)胺基]乙醯胺基]-乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物89，340 mg，0.90 mmol，1.00當量)及HATU (340 mg，0.90 mmol，1.00當量)於DMF (5.00 mL)中之混合物中分批添加HOBT (102 mg，0.75 mmol，0.84當量)。將所得混合物在0℃下攪拌30 min。在0℃下，向上述混合物中添加2-胺基-N-[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]乙醯胺；三氟乙酸(化合物87，511 mg，純度：64%，0.48 mmol，0.54當量)及DIEA (340 mg，2.63 mmol，2.94當量)。將所得混合物在室溫下再攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，30 min內0%至50%梯度；偵測器，UV 220 nm。將收集的流份在真空下濃縮。這產生呈灰白色固體之N-[[([[(1S)-1-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲醯基]-2-苯基乙基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲醯基]甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物90，210 mg，48%)。LCMS (ESI, ms):918[M+H] +, 818[M+H-100] +。 1HNMR:(400MHz, DMSO-d 6): δ 10.97(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.50(t, J=6.4Hz, 1H), 8.31(t, J=4.4Hz, 1H), 8.15(d, J=9.6Hz, 1H), 7.910(t, J=8.0Hz, 1H), 7.68-7.64(m, 2H), 7.49(s, 1H), 7.43(d, J=9.6Hz, 1H), 7.24-7.12(m, 7H), 7.00-6.95(m, 1H), 6.84(t, J=6.4Hz, 1H), 5.13-5.06(m, 1H), 4.55-4.27(m, 7H), 3.72-3.60(m, 6H), 3.75-3.67(m, 3H), 3.59-3.49(m, 5H), 3.07-3.01(m, 1H), 2.94-2.73(m, 4H), 2.62-2.54(m, 1H), 2.40-2.31(m, 1H), 2.01-1.94(m, 1H), 2.00-1.91(m, 1H), 1.35(s, 9H) 步驟 10. 化合物 91 之合成
在0℃下，向經攪拌之N-[[([[(1S)-1-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)-甲基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲醯基]-2-苯基乙基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲醯基]-甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物90，140 mg，0.15 mmol，1.00當量) 於DCM (5.00 mL)中之混合物中逐滴添加TFA (1.00 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌30 min。LCMS指示反應完成。將所得混合物在減壓下濃縮。這產生呈灰白色固體之(2S)-2-[2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基]-N-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]-胺基甲醯基]甲基)-3-苯基丙醯胺；三氟乙酸(化合物91，140 mg，79%)。LCMS(ESI, ms):818[M+H-TFA] +。 步驟 11. 化合物 (Ij) 之合成
在0℃下，向經攪拌之(2S)-2-[2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基]-N-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]-乙氧基)甲基]胺基甲醯基]甲基)-3-苯基丙醯胺；三氟乙酸(化合物91，140 mg，0.15 mmol，1.00當量)及DIEA(70 mg，0.54 mmol，3.61當量)於DMF(2.00 mL)中之混合物中分批添加6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(化合物92，70 mg，0.23 mmol，1.50當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由以下條件直接純化：管柱：XSelect CSH Prep C18 OBD管柱，19x250 mm，5 um；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：7 min內25 B至50 B；254 nm；RT1：6.35 min；將收集的流份凍乾，得到粗產物。將粗產物藉由以下條件再純化：管柱：Kinetex EVO C18管柱，30x150，5 um；流動相A：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內20 B至40 B，220 nm；RT1：6.77 min；將收集的流份凍乾，得到呈灰白色固體之 N-[[([[(1S)-1-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙氧基)甲基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲醯基]-2-苯基乙基]胺基甲醯基]甲基)胺基甲醯基]甲基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺(化合物(Ik)，22.8 mg，14%)。LCMS (ESI, ms):1011[M+H] +。 1HNMR:(400MHz, DMSO-d 6): δ 10.95(s, 1H), 8.79(s, 1H), 8.51(t, J=8.4Hz, 1H), 8.29(t, J=8.0Hz, 1H), 8.12-8.01(m, 3H), 7.70-7.66(m, 2H), 7.44(s, 1H), 7.42(d, J=8.0Hz, 1H), 7.23-7.16(m, 7H), 6.99(s, 2H), 6.82(t, J=8.0Hz, 1H), 5.13-5.09(m, 1H), 4.55-4.28(m, 7H), 3.72-3.60(m, 6H), 3.55-3.51(m, 2H), 3.36-3.34(m, 2H), 3.05-3.00(m, 1H), 2.94-2.72(m, 4H), 2.62-2.54(m, 1H), 2.40-2.32(m, 1H), 2.12-2.05(m, 2H), 2.00-1.91(m, 1H), 1.50-1.38(m, 4H), 1.19-1.10(m, 2H)
Figure 02_image285
Figure 02_image287
方案13： 新降解劑 P14-AAA 連接子複合物 ( 化合物 (Ik)) 之合成 步驟 1. 化合物 94 之合成
在氮氣氣氛下，向經攪拌之(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物93，24.00 g，111.32 mmol，1.00當量)於THF (240.00 mL)中之溶液中逐滴添加BH 3-Me 2S (28.00 mL，295.23 mmol，2.65當量)。將所得混合物在70℃、氮氣氣氛下攪拌2小時。TLC (PE: EtOAc = 3:1)指示反應完全。冷卻至室溫後，將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/ EtOAc (3:1)溶析，得到呈淡黃色固體之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物94，18.00 g，80%)。 1H NMR (300 MHz, CDCl 3) δ 8.27 (s, 1H), 8.10-8.07 (m, 1 H), 7.52 (d, J= 3 Hz, 1H), 3.96 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.13 (t, J= 6 Hz, 2H)。 步驟 2. 化合物 95 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物94，5.00 g，24.80 mmol，1.00當量)於DCM (100.00 mL)中之溶液中分批添加NBS (6.62 g，1.50當量)及PPh 3(9.76 g，37.21 mmol，1.50當量)。將所得混合物在室溫、N 2下攪拌隔夜。TLC (PE: EtOAc = 10:1)指示反應完全。將反應在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/ EtOAc (4:1)溶析，得到呈紅色油狀物之1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物95，5.10 g，72%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.28 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.18 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.79 4(t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 6.8 Hz, 2H)。 步驟 3. 化合物 96 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物95，5.00 g，18.90 mmol，1.00當量)於DMF (50.00 mL)中之溶液中添加硫代乙酸鉀(2.16 g，18.90 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。TLC (PE: EtOAc= 10:1)指示反應完全。將反應用水(600.00 mL)稀釋，且用EtOAc (2000 mLx3)萃取。將合併的有機層用水(200.00 mL)、鹽水(200.00 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物96，4.50 g，85%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.24 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.05 (m, 4H), 2.34 (s, 3H)。 步驟 4. 化合物 97 之合成
在0℃、N 2下，向經攪拌之1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物96，2.00 g，7.70 mmol，1.00當量)於MeOH (300.00 mL)中之溶液中添加MeONa (6.93 mL，37.33 mmol，5.00當量，於MeOH中30%)。將所得混合物在0℃、N 2下攪拌1 h。TLC (PE: EtOAc =10:1)指示反應完全。將反應用AcOH淬滅至pH值3-4。將所得混合物在真空下濃縮至幹。將殘餘物用DCM (50.00 mL)稀釋且過濾。將濾液用製備型TLC (PE: EtOAc = 10:1)純化，得到呈淡黃色油狀物之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物97，1.35 g，72%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.26 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.09 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.14 (t, J= 8.0Hz, 2H), 2.85 (dt, J = 8.0, 7.2 Hz, 2H), 1.43 (t, J= 7.2 Hz, 1H)。 步驟 5. 化合物 99 之合成
在室溫、空氣氣氛下，向經攪拌之(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸(化合物98，20.00 g，64.24 mmol，1.00當量)於DMF (200.00 mL)中之溶液中添加TSTU (25.18 g，83.52 mmol，1.30當量)及DIEA (16.60 g，128.48 mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(200.00 mL)稀釋，用EtOAc (100.00 mLx3)萃取。將合併的有機層用水(100.00 mL)、鹽水(100.00 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空中濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc =1:2)溶析，得到呈白色固體之(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(化合物99，25.00 g，83%)。LCMS (ES, m/z):431[M+Na] +。 步驟 6. 化合物 100 之合成
向D-丙胺酸(1.09 g，0.012 mmol，1.00當量)及NaHCO 3(3.09 g，0.04 mmol，3.00當量)於水(50.00 mL)中之溶液中添加(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(化合物99，5.00 g，12.24 mmol，1.00當量)於DMF (50.00 mL)中之溶液。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應用2 N HCl调整至pH值2-3。將所得混合物用EtOAc (100.00 mLx3)萃取，且將合併的有機層用鹽水(100.00 mLx3)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈白色固體之(2R)-2-[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-胺基]丙醯胺基]丙酸(化合物100，4.00 g，71%)。LCMS (ES, m/z): 383 [M+H] + 步驟 7. 化合物 101 之合成
向甘胺酸(3.68 g，48.97 mmol，1.00當量)及NaHCO 3(12.34 g，146.89 mmol，3.00當量)於水(200.00 mL)中之溶液中添加(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(化合物99，20.00 g，48.97 mmol，1.00當量)於DMF (200.00 mL)中之溶液。將反應在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應用2 N HCl调整至pH值2-3。將所得混合物用EtOAc (500.00 mLx3)萃取， 且將合併的有機層用鹽水(500.00 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體之[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基]丙酸(化合物101，15.00 g，71%)。LCMS (ES, m/z): 369 [M+H] + 步驟 8. 化合物 102 之合成
將[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基]-乙酸(化合物101，5.00 g，13.57 mmol，1.00當量)、Pb(OAc) 4(7.22 g，16.28 mmol，1.20當量)及吡啶(1.29 g，16.31 mmol，1.20當量)於THF (300.00 mL)/甲苯(100.00 mL)中之溶液在80℃、N 2下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應過濾。將濾餅用THF (100.00 mL)洗滌。將合併的有機層在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc=1:2)溶析，得到呈白色固體之乙酸[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基]甲酯(化合物102，2.50 g，45%)。LCMS (ES, m/z): 405 [M+Na] +。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.77 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.58 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 5.24 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 4.51 - 4.35 (m, 2H), 4.23-4.09 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.39 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。 步驟9.化合物103之合成
在室溫、N 2下，向經攪拌之乙酸[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-丙醯胺基]甲酯(化合物102，2.25 g，5.88 mmol，1.00當量)及2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物97，1.28 g，5.88 mmol，1.00當量)於DCM (120 mL)中之溶液中添加TFA (0.27 mL，2.37 mmol，0.62當量)。將所得混合物在室溫下攪拌16小時。LCMS指示反應完成。將反應在真空中濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc=1:4)溶析，得到呈黃色固體之N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物103，3.10 g，90%)。LCMS (ES, m/z): 540 [M+H] + 步驟 10. 化合物 104 之合成
在0℃、N 2下，向 N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物103，3.10 g，5.74 mmol，1.00當量)於DMF(155.00 mL)中之溶液中添加吡啶(31.00 mL)。將所得混合物在0℃、N 2下攪拌0.5 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(600.00 ml)稀釋。將所得混合物用EtOAc (200.00 mLx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00 ml)洗滌，經無水Na2SO4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到3.00 g粗產物。將粗產物藉由矽膠管柱層析法再純化，用(DCM:MeOH =3:1)溶析，得到呈黃色油狀物之(2S)-2-胺基-N-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)丙烯醯胺，104 (1.50 g，78%)。LCMS (ES, m/z): 318 [M+H]+。 步驟 11. 化合物 105 之合成
在室溫下，向(2S)-2-胺基-N-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)-丙烯醯胺(化合物104，1.50 g，4.72 mmol，1.00當量)於DMF (75.00 mL)中之溶液中添加NaHCO 3(0.59 g，7.08 mmol，1.50當量)之H 2O (10.00 mL)溶液及Boc 2O (1.03 g，4.72 mmol，1.00當量)。將反應在室溫下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(500.00 mL)稀釋，用EtOAc (200.00 mLx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00 mLx3)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物105，(1.82 g，83%)。LCMS (ES, m/z): 418 [M+H] +, 318 [M+H-100] + 步驟 12. 化合物 106 之合成
將N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物105，1.82 g，4.36 mmol，1.00當量)、鐵粉(2.43 g，0.04 mmol，10.00當量)及NH 4Cl (2.33 g，0.04 mmol，10.00當量)於EtOH (100.00 mL)/H 2O (50.00 mL)中之漿液在70℃下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應過濾。將濾液在真空下濃縮至乾。將殘餘物用DCM (50.00 mL)溶解且過濾。將濾液濃縮至乾，且將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM:MeOH = 13:1)溶析，得到呈黃色油狀物之N-[(1S)-1-[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]-胺基甲酸三級丁酯(化合物106，1.20 g，68%)。LCMS (ES, m/z): 388 [M+H] + 步驟 13. 化合物 107
在0℃下，向經攪拌之3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(INT 1，352 mg，1.29 mmol，1.00當量)於DMF (5.00 mL)中之溶液中添加CDI (209.00 mg，1.29 mmol，1當量)及TEA (260 mg，2.58 mmol，2當量)。將所得混合物在0℃下攪拌2 h。然後添加N-[(1S)-1-[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]-甲基)-胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物106，500.00 mg，1.29 mmol，1.00當量)及DMAP (472 mg，3.87 mmol，3.00當量)。將所得混合物在60℃下攪拌24 h。LCMS指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.1% FA)，30 min內0%至60%；偵測器，UV 254 nm，得到呈黃色固體之N-[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物107，450.00 mg，48%)。LCMS (ES, m/z): 687 [M+H] + 步驟 14. 化合物 108
在室溫下，向經攪拌之N-[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]-甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物107，440.00 mg，0.64 mmol，1.00當量)於DCM (22.00 mL)中之溶液中添加TFA (2.20 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌0.5 h。LCMS指示反應完成。將反應在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之(2S)-2-胺基-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]-甲基]丙醯胺；三氟乙酸(化合物108，400.00 mg，粗品)。將殘餘物不經進一步純化用於下一步。LCMS (ES, m/z): 587 [M+H-TFA] + 步驟 15. 化合物 109 之合成
將(2R)-2-[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-胺基]丙醯胺基]丙酸(218 mg，0.57 mmol，1.00當量)、HOBT (77 mg，0.57 mmol，1.00當量)及HATU (216 mg，0.01 mmol，1.00當量)之溶液在室溫、空氣下攪拌1小時，然後在室溫下添加(2S)-2-胺基-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙醯胺；三氟乙酸(化合物108，400 mg，0.57 mmol，1.00當量)及DIEA (663 mg，5.14 mmol，9.00當量)。將反應在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.05%TFA)，30 min內0%至50%；偵測器，UV 254 nm，得到呈綠色固體之N-[(1S)-1-[[(1R)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲醯基]乙基]胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物109，480.00 mg，75%)。LCMS (ES, m/z): 951 [M+H] + 步驟 16. 化合物 110
在0℃下，向N-[(1S)-1-[[(1R)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]-乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲醯基]乙基]胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物109，110.00 mg)於DMF(5.00 mL)中之溶液中添加哌啶(1.00 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌0.5 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.05%TFA)，40 min內0%至60%；偵測器，UV 254 nm，得到呈紅色固體之(2S)-2-[(2R)-2-[(2S)-2-胺基丙醯胺基]丙醯胺基]-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]-苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙烯醯胺(化合物110，80.00 mg，60%)。LCMS (ES, m/z): 729 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.00 (br s, 1H), 8.53 br (s, 1H), 8.24 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.10 (br s, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26-7.13 (m, 3H), 7.00 (br s, 1H), 5.11-5.06 (m, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 3H), 4.35 - 4.13 (m, 6H), 2.90-2.83 (m, 3H), 2.73-2.71 (m, 2H), 2.05-1.90 (m, 1H), 1.70-1.53 (m, 4H), 1.22-1.17(m, 6H), 1.14 - 1.05 (m, 3H)。 步驟 17. 化合物 (Ik) 之合成
在室溫、空氣下，向(2S)-2-[(2R)-2-[(2S)-2-胺基丙醯胺基]丙醯胺基]-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙烯醯胺(化合物110，63.00 mg，0.09 mmol，1.00當量)及6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(26 mg，0.09 mmol，1.00當量)於DMF (1.50 mL，19.38 mmol，224.36當量)中之溶液中添加DIEA (22.33 mg，0.17 mmol，2.00當量)。將反應在室溫下攪拌1 h。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱：Kinetex EVO C18管柱，30x150，5 um；流動相：水(0.05% TFA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：7 min內23 B至43 B，254 nm；RT1：6.58。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之N-[(1S)-1-[[(1R)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲醯基]乙基]胺基甲醯基]乙基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺(化合物(Ik)，16.10 mg，20%)。LCMS (ES, m/z): 922,924 [M+H] +。 1HNMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.00 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.44-8.41 (m, 1H), 8.15 (d, J=7.2Hz, 1H), 8.03-8.00 (m, 2H), 7.7-7.65 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J=8.0Hz,1H), 7.22-7.14(m, 2H), 6.98 (s, 2H), 6.83-6.81 (m, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.48-4.40 (m, 3H), 4.29-4.17 (m, 6H), 2.96-2.85 (m, 3H), 2.75-2.70 (m, 2H), 2.67-2.57 (m, 1H), 2.40-2.33 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 3H), 1.52-1.45 (m, 5H), 1.26-1.16 (m, 12H)。
Figure 02_image289
Figure 02_image291
方案14： 新降解劑 P14-GGFG 連接子複合物 ( 化合物 (Il)) 之合成 步驟 1. 化合物 112 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物111，5.00 g，23.19 mmol，1.00當量)於THF (50 mL)中之溶液中分批添加BH 3-Me 2S (5.50 mL，57.99 mmol，2.50當量)。將所得混合物在70℃、氮氣氣氛下攪拌2 h。TLC (PE: EtOAc = 3:1)指示反應完全。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (2:1)溶析，得到呈淡黃色固體之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物112，4.8 g，92%)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.20 -3.09 (m, 4H)。 步驟 2. 化合物 113 之合成
在室溫、空氣氣氛下，向經攪拌之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物112，4.80 g，23.81 mmol，1.00當量)於DCM (100 mL)中之溶液中分批添加NBS (6.36 g，35.71 mmol，1.50當量)及PPh 3(9.37 g，35.72 mmol，1.50當量)。將所得混合物在室溫、空氣氣氛下攪拌隔夜。TLC (PE: EtOAc = 10:1)指示反應完全。將反應在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (4:1)溶析，得到呈紅色油狀物之1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物113，3.9g，57%)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ8.29 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.67 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.42 (t, J = 7.2 Hz, 2H)。 步驟 3. 化合物 114 之合成
在室溫下，向1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物113，3.90 g，14.75 mmol，1.00當量)於DMF (39 mL)中之溶液中添加硫代乙酸鉀(1.68 g，14.75 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。TLC (PE: EtOAc = 10:1)指示反應完全。將反應用水(600 mL)稀釋。將所得混合物用EA (200 mL*3)萃取。將合併的有機層用水(200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，經無水磷酸鈉乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物114，3.7 g，85%)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.21 -3.02 (m, 4H), 2.37 (s, 3H)。 步驟 4. 化合物 115 之合成
在0℃、N 2下，向經攪拌之1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物114，4.00 g，15.40 mmol，1.00當量)於MeOH (600 mL)中之溶液中添加MeONa (14.31 mL，77.00 mmol，5.00當量，30%)持續1h。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。TLC (PE:EA=10:1)指示反應完全。將反應用AcOH淬滅。將所得混合物在真空下濃縮至幹。將殘餘物用DCM (100 mL)稀釋且過濾。將濾液藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc =10:1)溶析，得到呈黃色油狀物之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物115，3 g，80%)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.17 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.87 (dt, J = 8.0, 7.2 Hz, 2H), 1.46 (t, J = 8.0Hz, 1H)。 步驟 5. 化合物 117 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向經攪拌之2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-乙醯胺基)乙酸(化合物116，10 g,，28.22 mmol，1.00當量)及Pb(OAc) 4(15 g，33.86 mmol，1.20當量)於THF(300 mL)及甲苯(100 mL)中之混合物中逐滴添加吡啶(2.59 g，32.74 mmol，1.16當量)。將所得混合物在攝氏80度、氮氣氣氛下攪拌隔夜。LCMS指示反應完成。使混合物冷卻至室溫。將所得混合物過濾，將濾餅用EA (20 mL)洗滌。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物溶解於EA (20 mL)中。將所得混合物用水、鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，將濾液在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/EtOAc (1:4)溶析，得到呈白色固體之乙酸(2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]乙醯胺基)甲酯(化合物117，6.5 g，56%)。 1HNMR (300MHz, CDCl 3) δ7.80(d, J=7.5Hz, 2H), 7.62(d, J=7.5Hz, 2H), 7.45(t, d=7.5Hz, 2H), 7.36(d, d=7.5Hz, 2H), 7.18(br s, 1H), 5.48(br s, 1H), 5.28(d, J=7.2Hz, 2H), 4.48(d, J=6.6Hz, 2H), 4.26(t, J=6.6Hz, 1H), 3.93(d, 5.4Hz, 2H), 2.08(s, 3H)。LCMS (ESI, ms): 391[M+Na] + 步驟 6. 化合物 118 之合成
在室溫下，向乙酸(2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]乙醯胺基)甲酯(化合物117，3.00 g，8.14 mmol，1.00當量)及2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物115，1.77 g，8.13 mmol，1.00當量)於DCM (300 mL)中之溶液中添加TFA (0.56 g，4.91 mmol，0.60當量)。將所得混合物在60℃下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將反應在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc =2:3)溶析，得到呈灰白色固體之N-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]-甲基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物118，3.7 g，67%)。LCMS (ES, m/z): 526,528 [M+H] + 步驟 7. 化合物 119 之合成
在0℃下，向N-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]甲基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物118，3.70 g，7.03 mmol，1.00當量)於DMF (40 mL)中之溶液中添加哌啶(8 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌0.5 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物用水(400 mL)稀釋，用EA (200 mLx 3)萃取。將合併的有機層用水(200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM: MeOH =10:1)溶析，得到呈黃色油狀物之2-胺基-N-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)乙醯胺(化合物119，1.01 g，40%)。LCMS (ES, m/z): 304,306 [M+H] + 步驟 8. 化合物 120 之合成
在室溫下，向2-胺基-N-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)-乙醯胺(化合物119，1.00 g，3.29 mmol，1.00當量)於DMF (50 mL)中之溶液中添加NaHCO 3(0.33 g，3.92 mmol，1.20當量)之水(10 mL)溶液、Boc 2O (0.72 g，3.30 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(500 mL)稀釋，用EtOAc (200 mL x3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc =1:3)溶析，得到呈白色固體之N-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物120，810 mg，54%)。LCMS (ES, m/z): 404,406 [M+H] +, 304,306 [M+H-100] + 步驟 9. 化合物 121 之合成
在室溫下，向N-[[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)胺基甲醯基]甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物120，800.00 mg，1.98 mmol，1.00當量)於EtOH(40 mL)中之溶液中添加鐵粉(1106 mg，19.81 mmol，10.00當量)及NH 4Cl (1059 mg，19.81 mmol，10.00當量)之水(10 mL)溶液。將所得混合物在70℃下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應過濾。將濾液在真空下濃縮至乾。將殘餘物用DCM (50.00 mL)溶解且過濾。將濾液藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM:MeOH = 13:1)溶析，得到呈黃色油狀物之N-[[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]甲基)-胺基甲醯基]甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物121，610 mg，74%)。LCMS (ES, m/z): 374,376 [M+H] +, 374,376 [M+H-100] + 步驟 10. 化合物 122 之合成
在0℃、空氣下，向3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(INT 1，219 mg，0.80 mmol，1.00當量)於DMF(10 mL)中之溶液中添加CDI (130 mg，0.80 mmol，1.00當量)及TEA (81 mg，0.80 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2 h。然後在室溫、空氣下，添加N-[[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]-甲基)胺基甲醯基]甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物121，300 mg，0.80 mmol，1.00當量)及DMAP (294 mg，2.41 mmol，3.00當量)。將所得混合物在60℃下攪拌48 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.05% TFA)，30 min內0%至60%；偵測器，UV 254 nm，得到呈黃色固體之N-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)甲基]胺基甲酸三級丁酯(化合物122，270 mg，49%)。LCMS (ES, m/z): 673,675 [M+H] +, 573,575 [M+H-100] + 步驟 11. 化合物 -123 之合成
在0℃、N 2下，向N-[([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)甲基]-胺基甲酸三級丁酯(化合物122，250 mg，0.37 mmol)於1,4-二噁烷(12 mL)中之溶液中添加HCl (於1,4-二噁烷中4 N，6 mL)。將反應在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應化合物在真空下濃縮至乾，得到呈棕色油狀物之2-胺基-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]乙醯胺(化合物123，260 mg，粗品)。LCMS (ES, m/z): 573,575 [M+H-HCl] + 步驟 12. 化合物 -125 之合成
將(2S)-2-[2-(2-胺基乙醯胺基)乙醯胺基]-3-苯基丙酸(化合物124，500 mg，1.79 mmol，1.00當量)及6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(552 mg，1.79 mmol，1.00當量)於DMSO (5.00 mL)中之溶液在室溫、空氣下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水(0.1% FA)，30 min內0%至60%梯度；偵測器，UV 220 nm，得到呈白色固體之(2S)-2-(2-[2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]乙醯胺基]乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物125，760 mg，83%)。LCMS (ES, m/z): 473 [M+H] + 步驟 13. 化合物 (Il) 之合成
在室溫、空氣下，向(2S)-2-(2-[2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]乙醯胺基]-乙醯胺基)-3-苯基丙酸(化合物125，175 mg，0.37 mmol，1.00當量)於DMF(5.00 mL)中之溶液中添加HATU (141 mg，0.37 mmol，1.00當量)及HOBT (50 mg，0.37 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。然後添加2-胺基-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]-胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]乙醯胺(化合物123，250 mg，0.37 mmol，1.00當量，85%)及DIEA (240 mg，1.85 mmol，5.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由以下條件純化：管柱：XSelect CSH Prep C18 OBD管柱，19*250 mm，5 um；流動相A：水(0.05% FA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：7 min內30 B至60 B，254 nm；RT1：6.67 min，得到75 mg粗產物。將粗產物藉由逆相快速層析法在以下條件下再純化：管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱，19*250 mm，10 um；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：25 mL/min；梯度：10 min內25 B至44 B；254 nm；RT1：10.52 min。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之化合物(Il) (41.6 mg，10%)。 1HNMR(400MHz, DMSO- d 6 ) δ10.99 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.38 (t, J=6.0Hz, 1H), 8.31 (t, J=6.0Hz, 1H), 8.12 (d, J=8.4Hz, 1H), 8.06 (t, J=5.6Hz, 1H), 8.01 (t, J=6.0Hz, 1H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.25-7.21 (m, 5H), 7.19-7.14 (m, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.82 (t, J=6.0Hz,1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.47-4.40 (m, 4H), 4.33-4.29 (m, 3H), 3.76-3.70 (m, 3H), 3.67-3.55 (m, 3H), 3.38-3.36 (m, 2H), 3.06-3.02 (m, 1H), 2.91-2.86 (m,3H), 2.82-2.70 (m, 3H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.50-2.45 (m, 1H), 2.10 (m, 2H), 2.05-1.95 (m ,1H), 1.50-1.44 (m,4H), 1.20-1.16 (m, 2H)。LCMS (ES, m/z):1027,1029 [M+H] +
Figure 02_image293
Figure 02_image295
方案15： 新降解劑 P14-AAA 連接子複合物 ( 化合物 (Im)) 之合成 步驟 1. 化合物 127 之合成
在氮氣氣氛下，向經攪拌之(2-氯-4-硝基苯基)乙酸(化合物126，24.00 g，111.32 mmol，1.00當量)於THF (240.00 mL)中之溶液中逐滴添加BH 3-Me 2S (28.00 mL，295.23 mmol，2.65當量)。將所得混合物在70℃、氮氣氣氛下攪拌2小時。TLC (PE: EtOAc = 3:1)指示反應完全。冷卻至室溫後，將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/ EtOAc (3:1)溶析，得到呈淡黃色固體之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物127，18.00 g，80%)。 1H NMR (300 MHz, CD 3Cl) δ8.27 (s, 1H), 8.10-8.07 (m, 1 H), 7.52 (d, J = 3 Hz, 1H), 3.96 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.13 (t, J = 6 Hz, 2H)。 步驟 2. 化合物 128 之合成
在室溫、N 2氣氛下，向經攪拌之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙醇(化合物127，5.00 g，24.80 mmol，1.00當量)於DCM (100.00 mL)中之溶液中分批添加NBS (6.62 g，1.50當量)及PPh 3(9.76 g，37.21 mmol，1.50當量)。將所得混合物在室溫、N 2下攪拌隔夜。TLC (PE: EtOAc = 10:1)指示反應完全。將反應在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用PE/ EtOAc (4:1)溶析，得到呈紅色油狀物之1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物128，5.10 g，72.31%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.28 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.18 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 7.2 Hz, 2H)。 步驟 3. 化合物 129 之合成
在室溫、氮氣氣氛下，向1-(2-溴乙基)-2-氯-4-硝基苯(化合物128，5.00 g，18.90 mmol，1.00當量)於DMF (50.00 mL)中之溶液中添加硫代乙酸鉀(2.16 g，18.91 mmol，1.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。TLC (PE: EtOAc= 10:1)指示反應完全。將反應用水(600.00 mL)稀釋。將所得混合物用EtOAc (200.00mL*3)萃取。將合併的有機層用水(200.00 mL)、鹽水(200.00 mL*3)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物129，4.50 g，85%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.24 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.05 (m, 4H), 2.34 (s, 3H)。 步驟 4. 化合物 130 之合成
在0℃、N 2下，向經攪拌之1-[[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]乙烯酮(化合物129，2.00 g，7.70 mmol，1.00當量)於MeOH (300.00 mL)中之溶液中添加MeONa (6.93 mL，37.33 mmol，5.00當量，30%)。將所得混合物在0℃、N 2下攪拌1 h。TLC (PE: EtOAc =10:1)指示反應完全。將反應用AcOH淬滅至pH值3-4。將所得混合物在真空下濃縮至幹。將殘餘物用DCM (50.00 mL)稀釋且過濾。將濾液用製備型TLC (PE: EtOAc = 10:1)純化，得到呈淡黃色油狀物之2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物130，1.35 g，72%)。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.14 (dd, J = 8.0, 6.8 Hz, 2H), 2.85 (dt, J = 8.0, 7.2 Hz, 2H), 1.43 (t, J= 8.0 Hz, 1H)。 步驟 5. 化合物 132 之合成
在室溫、空氣氣氛下，向經攪拌之(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸(化合物131，20.00 g，64.24 mmol，1.00當量)於DMF (200.00 mL)中之溶液中添加TSTU (25.18 g，83.52 mmol，1.30當量)及DIEA (16.60 g，128.48 mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(200.00 mL)稀釋，將所得混合物用ETOAC (100.00 mL*3)萃取。將合併的有機層用水(100.00 mL)、鹽水(100.00 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空中濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: EtOAc =1:2)溶析，得到呈白色固體之(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(化合物132，25.00 g，83%)。LCMS (ES, m/z):431[M+Na] + 步驟 6. 化合物 133 之合成
向甘胺酸(3.68 g，48.97 mmol，1.00當量)及NaHCO 3(12.34 g，146.89 mmol，3.00當量)於水(200.00 mL)中之溶液中添加(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(化合物132，20.00 g，48.97 mmol，1.00當量)於DMF (200.00 mL)中之溶液。將反應在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完全。將反應用2 N HCl调整至pH值2-3。將所得混合物用EtOAc (500.00 mL*3)萃取，將合併的有機層用鹽水(500.00 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空中濃縮至乾，得到呈白色固體之[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基]丙酸(化合物133，15.00 g，71%)。LCMS (ES, m/z): 369 [M+H] + 步驟 7. 化合物 134 之合成
將[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-丙醯胺基]乙酸(化合物133，5.00 g，13.57 mmol，1.00當量)、Pb(OAc) 4(7.22 g，16.28 mmol，1.20當量)及吡啶(1.29 g，16.31 mmol，1.20當量)於THF (300.00 mL)/甲苯(100.00 mL)中之溶液在80℃、N 2下攪拌16 h。LCMS指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應過濾。將濾餅用THF (100.00 mL)洗滌。將合併的有機層在真空下濃縮至乾。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法純化，用(PE: ETOAC=1:2)溶析，得到呈白色固體之乙酸[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]丙醯胺基]甲酯(化合物134，2.50 g，45%)。LCMS (ES, m/z): 405 [M+Na] +。 1H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 7.77-7.73 (m, 2H), 7.58 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 5.24 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.51 - 4.35 (m, 2H), 4.22 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.39 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。 步驟 8. 化合物 135 之合成
在室溫、N 2下，向經攪拌之乙酸[(2S)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]胺基]-丙醯胺基]甲酯(化合物134，2.25 g，5.88 mmol，1.00當量)及2-(2-氯-4-硝基苯基)乙硫醇(化合物500，1.28 g，5.88 mmol，1.00當量)於DCM (120 mL)中之溶液中添加TFA (0.27 mL，2.376 mmol，0.62當量)。將所得混合物在40℃下攪拌16小時。LCMS指示反應完成。將反應在真空中濃縮至乾，得到呈黃色固體之N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物135，3.10 g，90%)。LCMS (ES, m/z): 540,542 [M+H] + 。 步驟 9. 化合物 136 之合成
在0℃、N 2下，向N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸9H-芴-9-基甲酯(化合物135，3.10 g，5.74 mmol，1.00當量)於DMF(155.00 mL)中之溶液中添加哌啶(31.00 mL)。將所得混合物在0℃、N 2下攪拌0.5 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(600.00 ml)稀釋。將所得混合物用EA (200.00 mLx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00 ml)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到3.00 g粗產物。將粗產物藉由矽膠管柱層析法再純化，用(DCM:MeOH =3:1)溶析，得到呈黃色油狀物之(2S)-2-胺基-N-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)丙烯醯胺(化合物136，1.50 g，78%)。LCMS (ES, m/z): 318,320 [M+H] + 。 步驟 10. 化合物 137 之合成
在室溫、空氣下，向(2S)-2-胺基-N-([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]-甲基)丙烯醯胺(化合物136，1.50 g，4.72 mmol，1.00當量)於DMF (75.00 mL)中之溶液中添加NaHCO 3(0.59 g，7.08 mmol，1.50當量)之H 2O (10.00 mL)溶液及Boc 2O (1.03 g，4.72 mmol，1.00當量)。將反應在室溫下攪拌1 h。LCMS指示反應完成。將反應用水(500.00 mL)稀釋，用EtOAc (200.00 mLx3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200.00 mL*3)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]硫烷基]甲基)-胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物137，1.82 g，83%)。LCMS (ES, m/z): 418,420 [M+H] +, 318,320 [M+H-100] + 步驟 11. 化合物 138 之合成
將N-[(1S)-1-[([[2-(2-氯-4-硝基苯基)乙基]-硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物137，1.82 g，4.36 mmol，1.00當量)、鐵粉(2.43 g，0.04 mmol，10.00當量)及NH 4Cl (2.33 g，0.04 mmol，10.00當量)於EtOH (100.00 mL)/H 2O (50.00 mL)中之漿液在70℃下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將反應過濾。將濾液在真空下濃縮至乾。將殘餘物用DCM (50.00 mL)溶解且過濾。將濾液藉由矽膠管柱層析法純化，用(DCM:MeOH = 13:1)溶析，得到呈黃色油狀物之N-[(1S)-1-[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]甲基)胺基甲醯基]乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物138，1.20 g，68%)。LCMS (ES, m/z): 388,390 [M+H] +, 288,290 [M+H-100] + 步驟 12. 化合物 139 之合成
在0℃下，向經攪拌之3-[5-(胺基甲基)-1-側氧基-3H-異吲哚-2-基]哌啶-2,6-二酮(INT 1，352 mg，1.29 mmol，1.00當量)於DMF (5.00 mL)中之溶液中添加CDI (209.00 mg，1.29 mmol，1當量)及TEA (260 mg，2.58 mmol，2當量)。將所得混合物在0℃下攪拌2 h。然後添加N-[(1S)-1-[([[2-(4-胺基-2-氯苯基)乙基]硫烷基]-甲基)胺基甲醯基]-乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物138，500.00 mg，1.29 mmol，1.00當量)及DMAP (472 mg，3.87 mmol，3.00當量)。將所得混合物在60℃下攪拌24 h。LCMS指示反應完成。冷卻至室溫後，將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.1% FA)，30 min內0%至60%；偵測器，UV 254 nm，得到呈黃色固體之N-[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物139，450.00 mg，48%)。LCMS (ES, m/z): 687,689 [M+H] +, 587,589 [M+H-100] + 步驟 13. 化合物 140 之合成
在室溫下，向經攪拌之N-[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]-甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲酸三級丁酯(化合物139，440.00 mg，0.64 mmol，1.00當量)於DCM (22.00 mL)中之溶液中添加TFA (2.20 mL)。將所得混合物在室溫下攪拌0.5 h。LCMS指示反應完成。將反應在真空下濃縮至乾，得到呈紅色油狀物之(2S)-2-胺基-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙醯胺；三氟乙酸(化合物140，400.00 mg)。LCMS (ES, m/z): 578,589 [M+H-TFA] + 步驟 14. 化合物 142 之合成
向L-纈胺酸(化合物141，0.50 g，4.27 mmol，1.00當量)於DMSO (10 mL)中之漿液中添加6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(1.32 g，4.28 mmol，1.00當量)及DIEA (1103 mg，8.54 mmol，2.00當量)。將所得混合物在室溫下攪拌4 h。LCMS指示反應完成。將反應混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；流動相，含ACN之水 (0.1% FA)，30 min內0%至60%梯度；偵測器，UV 220 nm，得到呈棕色固體之(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁酸(化合物142，1.2 g，72%)。LCMS (ES, m/z): 311 [M+H] + 步驟 15. 化合物 (Im) 之合成
將(2S)-2-[6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺基]-3-甲基丁酸(化合物142，59 mg，0.19 mmol，1.00當量)、HOBT (26 mg，0.19 mmol，1.00當量)及HATU (72 mg，0.19 mmol，1.00當量)於DMF (2 mL)中之溶液在室溫、空氣下攪拌1小時。然後在室溫下，添加(2S)-2-胺基-N-[[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]苯基]乙基)硫烷基]甲基]丙醯胺；三氟乙酸(化合物140，200 mg，0.19 mmol，1.00當量，66.70%)及DIEA (197 mg，1.52 mmol，8.00當量)。將反應混合物在室溫下攪拌2 h。LCMS指示反應完成。將所得混合物藉由逆相快速層析法在以下條件下純化：管柱：YMC-Actus Triart C18，30 mm X 150 mm，5 um；流動相A：水(0.1% FA)，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：10 min內28 B至45 B，254 nm；RT1：9.67 min。將收集的流份凍乾，得到呈白色固體之N-[(1S)-1-[[(1S)-1-([[(2-[2-氯-4-[([[2-(2,6-二側氧基哌啶-3-基)-1-側氧基-3H-異吲哚-5-基]甲基]胺基甲醯基)胺基]-苯基]乙基)硫烷基]甲基]胺基甲醯基)乙基]胺基甲醯基]-2-甲基丙基]-6-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)己醯胺(化合物(Im)，27.8 mg，16%)。LCMS (ES, m/z): 879,881 [M+H] +。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ10.99 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.47 (t, J=6.0Hz, 1H), 8.03 (d, J=7.2Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8Hz,1H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.21-7.14 (m, 2 H), 6.99 (s, 2H), 6.82 (t, J=6.0Hz, 1H), 5.13-5.10 (m,1 H), 4.47-4.40 (m, 3H), 4.33-4.29 (m, 3H), 4.24 (t, J=7.2 Hz, 1H), 4.14 (t, J=6.8Hz, 1H), 3.38-3.36 (m, 1H), 2.97-2.90 (m, 1H), 2.86 (t, J=7.6Hz, 2H), 2.73-2.67 (m, 2H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.20-2.05 (m, 2H), 2.02-1.96 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.48-1.46 (m, 4H), 1.23-1.16 (m, 6H), 0.83-0.78 (m, 6H)。 實例4： 新降解劑綴合物之製備及表徵
用30當量之參-(2-羧乙基)膦(TCEP)處理抗體溶液，且在37℃下孵育1小時以還原鏈間二硫鍵。使用illustra NAP管柱(GE Healthcare)將還原的抗體純化至50 mM EPPS，5 mM EDTA pH 7.0緩衝液中。
藉由以下操作實現綴合：處理2-5 mg/mL還原的包含具有SEQ ID NO: 9之重鏈及具有SEQ ID NO: 10之輕鏈之抗CD33抗體(“CD33AB”)於50 mM EPPS，5 mM EDTA pH 7.0中之溶液，其中添加12當量之連接子-新降解劑作為 N,N-二甲基乙醯胺(DMA)中之儲備溶液，使得DMA之最終濃度係15% (v/v)。將所得反應混合物在4℃下靜置隔夜。使用illustra NAP管柱(GE Healthcare)將所得新降解劑綴合物純化至20 mM琥珀酸鹽，8%蔗糖，0.01% Tween-20 pH 5.5中，且使用Amicon Ultra離心濃縮器濃縮，其中分子量截止值係50 kD(Millipore)。
濃度及單體藉由粒徑篩析層析法，使用7.8 x 300 mM TSKGel 3000SWXL管柱及5 µm顆粒(Tosoh Bioscience)，用400 mM高氯酸鈉、50 mM磷酸鈉、5% (v/v)異丙醇流動相等度溶析，以0.5 mg/mL運行30 min來確定。根據抗體標準曲線定量新降解劑綴合物，在214 nm處偵測。
藉由疏水相互作用層析法，使用4.6 x 35 mm TSKgel丁基-NPR管柱及2.5 µm顆粒確定藥物與抗體比(DAR)。流動相A係1.5 M硫酸銨、25 mM磷酸鈉 pH 7.0。流動相B係25 mM磷酸鈉pH 7.0、25% (v/v)異丙醇。將分析物在12 min內以0-100% B之線性梯度溶析，流速係0.6 mL/min。偵測係在214 nm處。
藉由混合模式層析法，使用4.6 x 250 mm HISEP管柱及2.5 µm顆粒(Supelco)確定游離連接子有效載荷。流動相A係100 mM乙酸銨。流動相B係100%乙腈。將分析物在25 min內以25-40% B之梯度溶析，然後在2 min內以40-100% B之梯度溶析，流速係0.7 mL/min。管柱溫度係35℃。使用外標準曲線，在254 nm處偵測，定量游離連接子有效載荷。
Figure 02_image297
方案16： 抗 CD33 抗體 - 化合物 (Ie) 綴合物之製備
Figure 02_image299
方案17： 抗 CD33 抗體 - 化合物 (Ih) 綴合物之製備
可使用適當之抗體以類似之方式製備其他綴合物。 實例5： 用抗 CD33 抗體 - 新降解劑綴合物治療急性髓性白血病 (AML)
在無胸腺裸小鼠(Crl:NU(NCr)-Foxn1 nu，Charles River)中測試了抗CD33抗體(CD33AB)-新降解劑化合物。將50% Matrigel中之1ⅹ10 7MV411個人類急性單核球白血病細胞(ATCC ®CRL-5991™)皮下注射至小鼠側腹中(0.1 mL/只小鼠)。一旦腫瘤達到100 - 150 mm 3之平均大小，便向小鼠給藥抗CD33抗體-新降解劑綴合物、非靶向新降解劑綴合物及媒劑對照。
CD33AB-化合物(Ia)、CD33AB-化合物(Ie)及CD33AB-化合物(Ih)之儲備溶液用媒劑稀釋，以獲得0.3 mg/mL、0.283 mg/mL及0.299 mg/mL給藥溶液，其在根據各動物之體重進行調整之10 mL/kg (每20克小鼠0.2 mL)給藥體積中提供3 mg/kg、2.83 mg/kg及2.99 mg/kg。該給藥策略確保向各測試群遞送相同量之有效載荷。Mylotarg在0.9%氯化鈉溶液中稀釋至0.01 mg/mL，其在10 mL/kg (每20克小鼠0.2 mL)之給藥體積中提供3 mg/kg。Venetoclax於由60% PG、30% PEG400、10%乙醇構成之溶劑中經由超音波處理經調配，以獲得5 mg/mL給藥懸浮液，其在以10 mL/kg之體積投與時遞送50 mg/kg。對CC-90009進行離心以收集底部粉末；然後添加N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)、PEG400及鹽水，且逐一充分混合，以獲得於5% NMP、45% PEG400及50%鹽水中之0.5 mg/mL給藥溶液，其在以10 mL/kg之體積投與時遞送5 mg/kg。
將小鼠分為7個處理群(N=9只/群)，如下：1)媒劑；2) CD33AB-化合物(Ia) (3 mg/kg，iv，qd x 1)；3) CD33AB-化合物(Ie) (2.83 mg/kg，iv，qd x 1)；4) CD33AB-化合物(Ih) (2.99 mg/kg，iv，qd x 1)；5) Mylotarg (0.1 mg/kg，iv，qd x 1)；6) Venetoclax (50 mg/kg，po，qd x 21)；7) CC-90009 (5 mg/kg，ip，bid x 10)。第1-5組之測試物品呈單個劑量(qd x 1)靜脈內(iv)以根據體重調整之體積(0.200 mL/20 g小鼠)投與。Venetoclax係口服(po)投與，而CC-90009係腹膜內(ip)投與，按各動物之BW調整，給藥體積係10 mL/kg (每20 g小鼠0.2 mL)。
每週兩次使用卡尺量測腫瘤，且當各動物之腫瘤達到終點體積(2,000 mm 3)或在研究之最後一天(第45天) (以先到者為準)時，對各動物實施安樂死。MTV(n)定義為研究最後一天，腫瘤未達到終點體積的剩餘動物數量(n)之中位腫瘤體積。
如圖1所示，與媒劑相比，所有新降解劑綴合物隨時間推移提供較慢的腫瘤生長。 實例6： AB1- 化合物 (Ia) 綴合物對人類白血病模型之活性
使用一組CD33陽性急性髓性白血病細胞株及一組非AML CD33陰性細胞量測 體外細胞毒性。將預定濃度之細胞接種至96孔板中，且在37℃/5 CO 2下孵育隔夜後，將各測試製品(TA)之系列稀釋液添加至細胞中。將細胞與測試物品一起孵育72小時，且用CellTiter-Glo®試劑(Promega)偵測活力。將各細胞株之發光值標準化，且使用Prizm軟體計算IC50。
結果表明，與化合物Ia綴合之huMy9-6衍生抗體AB1 (「AB--化合物(Ia)」)在CD33陽性AML細胞上表現出與CC-885(已知的GSPT1降解劑)或Mylotarg相當的總體 體外功效 - 在一些情況下功效更佳。(參見圖2。) 此外，與靶向CD33介導之GSPT1降解劑有效載荷遞送之假設一致，AB1-化合物(Ia)在CD33陰性細胞模型中係無活性的。 實例7： 用抗體 - 新降解劑綴合物治療急性髓性白血病 (AML)
將皮下腫瘤模型MV4-11人類急性髓細胞白血病細胞(0.1 mL中之1x10 6個細胞)皮下接種至雌性無胸腺裸鼠之右側腹中。當腫瘤達到150 mm 3大小時開始，藉由向側尾靜脈靜脈內注射、腹膜內注射、口服管飼法或其組合來用測試製品處理小鼠。每週兩次量測腫瘤大小及小鼠體重。
與 體外觀察結果一致，用若干基於AB1之綴合物 在體內治療CD33陽性AML模型腫瘤(MV4-11)，釋放新降解劑P1導致腫瘤消退，其中觀察到含有β-葡糖醛酸苷釋放觸發器及天然半胱胺酸綴合之綴合物具有最穩健的效果。(參見圖3。) 實例8： CD33AB- 化合物 (Ia) 及吉妥珠單抗 - 化合物 (Ia) 綴合物之穩定性
抗CD33-化合物(Ia)綴合物(約8DAR)之穩定性檢定在40天內使用2.5 mg/mL吉妥珠單抗、IgG1、CD33AB及IgG1 L234A/L235A「LALA」 Ab格式在20 mM琥珀酸鹽，8%蔗糖，0.01% Tween-20 pH 5.5中进行，且藉由尺寸排阻層析法(SEC)進行檢定。在4℃下，沒有觀察到任何綴合物之濃度或單體之顯著變化。(圖4.) 相比之下，在37℃下，天然吉妥珠單抗-化合物(Ia)以及使用IgG1及IgG1 LALA骨架之化合物(Ia)綴合物在39天內顯示出顯著的聚集(自20-39天增加15-28%)。然而，CD33AB-化合物(Ia) (使用IgG1 N297A骨架)在37℃下在39天內保持單體狀態高於88%。(圖4.)在幾天內保持CD33AB-化合物(Ia)中之高單體通常係ADC之期望特性，因為血液循環中之聚集可導致快速清除及毒性增加，從而縮小治療指數。此外，藉由天然SEC-MS分析，天然吉妥珠單抗-化合物(Ia)顯示出比使用相同莫耳當量之有效載荷-連接子製成的CD33AB衍生之綴合物高得多的未綴合抗體。通常，在ADC中，如在CD33AB-化合物(Ia)中具有低水準之未綴合抗體係期望品質屬性。此外，與CD33AB相比，減少吉妥珠單抗需要更多的TCEP (4.5對2.5莫耳當量)。使用較少的還原劑(如在CD33AB-化合物(Ia)中)製造ADC係降低商品成本並簡化純化程序所期望的。 實例9： 抗 CD33 新降解劑綴合物對人類白血病模型之活性
將皮下腫瘤模型MV4-11人類急性髓細胞白血病細胞(0.1 mL中之1x10 6個細胞)皮下接種至雌性無胸腺裸鼠之右側腹中。當腫瘤達到150 mm 3大小時開始，藉由向側尾靜脈靜脈內注射、腹膜內注射、口服管飼法或其組合來用測試製品處理小鼠。每週兩次量測腫瘤大小及小鼠體重。
與 體外觀察結果一致，用各種釋放新降解劑P1之基於CD33之綴合物在 體內治療CD33陽性AML模型腫瘤(MV4-11)導致腫瘤消退，其中最穩定的綴合物(CD33AB-化合物(Ia))表現出穩健的抗腫瘤功效。(圖5.) 實例10： 抗 CD33 新降解劑綴合物對 Mylotarg 不敏感細胞株之活性
使用一組已知對Mylotarg不敏感的CD33陽性急性髓性白血病細胞株(AML-193及Kasumi-6)量測測試製品(TA)之細胞毒性。將預定濃度之細胞接種至96孔板中，且在37℃/5 CO 2下孵育隔夜後，將各測試製品(TA)之系列稀釋液添加至細胞中。將細胞與測試物品一起孵育72小時，且用CellTiter-Glo®試劑(Promega)偵測活力。將各細胞株之發光值標準化，且使用Prizm軟體計算IC50。
如圖6A及圖6B所示，抗CD33新降解劑綴合物對兩種細胞株均具有良好的活性。
應當理解，[實施方式]部分，而不是[發明內容]及[發明摘要]部分，旨在用於解釋申請專利範圍。[發明內容]及[發明摘要]部分可闡述如發明人所設想的本揭露之一或多個但不是所有示範性態樣，且因此不旨在以任何方式限制本揭露及所附申請專利範圍。
上文已藉助於說明特定功能之實施方案及其關係之功能建構區塊描述了本揭露。為了便於描述，本文已經任意定義了此等功能建構區塊之邊界。可定義替代邊界，只要適當地執行特定功能及其關係即可。
具體態樣之前文描述將如此充分地揭示本揭露之一般性質，以使得其他人可在不偏離本揭露之一般概念的情況下，藉由應用熟習此項技術者之知識，無需過度實驗，容易地修改及/或改寫此等具體態樣之各種應用。因此，基於本文所呈現之教導及指導，此類改寫及修改旨在處於所揭示態樣之等同物之含義及範圍內。應當理解，本文中之措辭或術語係出於描述而非限制之目的，使得本說明書之術語或措辭將由熟習此項技術者根據教導及指導來解釋。
本揭露之廣度及範圍不應受任何上述示範性態樣之限制，而應僅根據以下申請專利範圍及其等同物來定義。
[圖1]描繪了代表性新降解劑綴合物對MV411 (CD33+)腫瘤之 體內活性。X軸顯示給藥後之天數。Y軸顯示以媒劑、3 mg/kg CD33AB-化合物(Ia)、2.83 mg/kg CD33AB-化合物(Ie)、2.99 mg/kg CD33AB-化合物(1h)、0.1 mg/kg Mylotarg、50 mg/kg Venetoclax及5 mg/kg CC-90009給藥後之腫瘤體積(mm 3)。
[圖2]描繪了huMy9-6 (AB1) -化合物(Ia)在CD-33陽性及CD33陰性惡性腫瘤中之 體外活性。
[圖3]描繪了基於AB1之綴合物對MV4-11 (CD33+)腫瘤之 體內活性。X軸顯示給藥後之天數。Y軸顯示以媒劑、AB1-化合物(Ia)、AB1-化合物(Ii)、AB1-化合物(Id)、AB1-化合物(Ij)、AB1-化合物(Ie)、AB1-化合物(Ik)、Mylotarg、吉妥珠單抗-化合物I(a)及CC-90009給藥後之腫瘤體積(mm 3)。
[圖4]描繪了吉妥珠單抗及CD33AB綴合物之穩定性。
[圖5]描繪了基於吉妥珠單抗之綴合物對MV4-11 (CD33+)腫瘤之 體內活性。X軸顯示給藥後之天數。Y軸顯示以媒劑、3 mg/kg吉妥珠單抗-化合物(Ia)、5 mg/kg吉妥珠單抗-化合物(Ia)、3 mg/kg CD33AB-化合物(Ia)、5 mg/kg CD33AB-化合物(Ia)、3 mg/kg吉妥珠單抗IgG1 LALA-化合物(Ia)、5 mg/kg吉妥珠單抗IgG1 LALA-化合物(Ia)、5 mg/kg吉妥珠單抗-化合物(Ie)、25 mg/kg Venetoclax及50 mg/kg Ventoclax給藥後之腫瘤體積(mm 3)。
[圖6A]及[圖6B]描繪了AB1-化合物(Ia)綴合物對Mylotarg不敏感AML細胞(AML-193(圖6A)及Kasumi-6(圖6B))之 體外活性。X軸顯示濃度，且Y軸顯示處理後細胞株之活力百分比。 

          <![CDATA[<110>  南韓商歐倫醫療公司(ORUM THERAPEU]]>TICS, INC.）
          <![CDATA[<120>  新降解劑-抗CD33抗體綴合物]]>
          <![CDATA[<130>  4547.017PC02]]>
          <![CDATA[<140>  TW111120735]]>
          <![CDATA[<141>  2022-06-02]]>
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          <![CDATA[<150>  US 63/202,272]]>
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          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
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          Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr Gly Ile Arg Phe Leu Thr 
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          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys 
                          85                  90                  95      
          Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys 
                      100                 105                 110     
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          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
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          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys 
                          85                  90                  95      
          Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
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          <![CDATA[<223>  吉妥珠單抗重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 
                          245                 250                 255     
          Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 
                      260                 265                 270         
          Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 
                  275                 280                 285             
          Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 
              290                 295                 300                 
          Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
                          325                 330                 335     
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 
                      340                 345                 350         
          Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                  355                 360                 365             
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
              370                 375                 380                 
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 
                          405                 410                 415     
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
                      420                 425                 430         
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  435                 440             
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          <![CDATA[<223>  吉妥珠單抗輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys 
                          85                  90                  95      
          Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
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          <![CDATA[<400>  13]]>
          Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln 
                      20                  25                  30          
          Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly 
              50                  55                  60                  
          Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp 
                      100                 105                 110         
          Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser 
                  115                 120                 125             
          Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile 
                          165                 170                 175     
          Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr 
                      180                 185                 190         
          His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr 
                  195                 200                 205             
          Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu 
              210                 215                 220                 
          Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly 
                          245                 250                 255     
          Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala 
                      260                 265                 270         
          Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly 
              290                 295                 300                 
          Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Pro Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro Thr Val Glu Met Asp Glu 
                          325                 330                 335     
          Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser Lys 
                      340                 345                 350         
          Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln 
                  355                 360                 
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          <![CDATA[<400>  14]]>
          Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Asp Leu Thr His 
          1               5                   10                  15      
          Arg Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys 
                      20                  25                  30          
          Asn Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Ile Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr 
              50                  55                  60                  
          Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr 
                          85                  90                  95      
          Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala 
                  115                 120                 125             
          Gly Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu 
              130                 135                 140                 
          Ala Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Pro 
                      180                 185                 190         
          Thr Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro Thr Val Glu Met Asp 
                  195                 200                 205             
          Glu Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser 
              210                 215                 220                 
          Lys Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln 
          225                 230                 235         
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  310]]>
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          <![CDATA[<223>  CD33人類同功異型物3]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln 
                      20                  25                  30          
          Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro 
                  35                  40                  45              
          Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly 
              50                  55                  60                  
          Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp 
                      100                 105                 110         
          Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser 
                  115                 120                 125             
          Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile 
                          165                 170                 175     
          Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr 
                      180                 185                 190         
          His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr 
                  195                 200                 205             
          Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu 
              210                 215                 220                 
          Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly 
                          245                 250                 255     
          Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala 
                      260                 265                 270         
          Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys 
                  275                 280                 285             
          Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly 
              290                 295                 300                 
          Ser Ala Ser Pro Val Arg 
          305                 310 
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  418]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD33人類同功異型物X1]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Met Asp Leu Gly Glu Ala Ala Thr Arg Ala Arg Pro Ala Val Ile Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Gly Val Asn Ser Cys Ala Gln Lys Ser Thr Ser Glu Trp Lys Asp 
                      20                  25                  30          
          Phe Arg His Gly Val Arg Met Ser Gln Met Ala Leu Lys Glu Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Glu Ala Ala Ser Ser Asp Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu 
              50                  55                  60                  
          Trp Ala Gly Ala Leu Ala Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Ser Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly 
                      100                 105                 110         
          Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala 
                  115                 120                 125             
          Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe 
              130                 135                 140                 
          Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg 
                          165                 170                 175     
          Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Asp Leu Thr His Arg Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu 
              210                 215                 220                 
          Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg 
                          245                 250                 255     
          Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly 
                      260                 265                 270         
          Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val 
                  275                 280                 285             
          Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys 
              290                 295                 300                 
          Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Val Thr Ala Leu Leu Ala Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr His Arg Arg Lys Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp 
                      340                 345                 350         
          Thr His Pro Thr Thr Gly Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser 
                  355                 360                 365             
          Lys Leu His Gly Pro Thr Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro 
              370                 375                 380                 
          Thr Val Glu Met Asp Glu Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Met Asn Pro Ser Lys Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg 
                          405                 410                 415     
          Thr Gln 
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  402]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD33人類同功異型物X2]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Met Asp Leu Gly Glu Ala Ala Thr Arg Ala Arg Pro Ala Val Ile Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Gly Val Asn Ser Cys Ala Gln Lys Ser Thr Ser Glu Trp Lys Asp 
                      20                  25                  30          
          Phe Arg His Gly Val Arg Met Ser Gln Met Ala Leu Lys Glu Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Glu Ala Ala Ser Ser Asp Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu 
              50                  55                  60                  
          Trp Ala Gly Ala Leu Ala Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Ser Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Phe His Pro Ile Pro Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly 
                      100                 105                 110         
          Tyr Trp Phe Arg Glu Gly Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala 
                  115                 120                 125             
          Thr Asn Lys Leu Asp Gln Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe 
              130                 135                 140                 
          Arg Leu Leu Gly Asp Pro Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Ala Arg Arg Arg Asp Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg 
                          165                 170                 175     
          Gly Ser Thr Lys Tyr Ser Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Asp Leu Thr His Arg Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu 
              210                 215                 220                 
          Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg 
                          245                 250                 255     
          Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly 
                      260                 265                 270         
          Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Trp Lys 
                  275                 280                 285             
          Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly 
              290                 295                 300                 
          Val Thr Ala Leu Leu Ala Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Thr His Arg Arg Lys Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp 
                          325                 330                 335     
          Thr His Pro Thr Thr Gly Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser 
                      340                 345                 350         
          Lys Leu His Gly Pro Thr Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro 
                  355                 360                 365             
          Thr Val Glu Met Asp Glu Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His 
              370                 375                 380                 
          Gly Met Asn Pro Ser Lys Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg 
          385                 390                 395                 400 
          Thr Gln 
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  291]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD33人類同功異型物X4]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Met Asp Leu Gly Glu Ala Ala Thr Arg Ala Arg Pro Ala Val Ile Ser 
          1               5                   10                  15      
          Pro Gly Val Asn Ser Cys Ala Gln Lys Ser Thr Ser Glu Trp Lys Asp 
                      20                  25                  30          
          Phe Arg His Gly Val Arg Met Ser Gln Met Ala Leu Lys Glu Ala Leu 
                  35                  40                  45              
          Glu Ala Ala Ser Ser Asp Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu 
              50                  55                  60                  
          Trp Ala Asp Leu Thr His Arg Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Pro Gly His Ser Lys Asn Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys 
                          85                  90                  95      
          Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr 
                      100                 105                 110         
          Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro 
                  115                 120                 125             
          Arg Pro Gln Asp His Gly Thr Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala 
              130                 135                 140                 
          Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala 
                      180                 185                 190         
          Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile 
                  195                 200                 205             
          Val Lys Thr His Arg Arg Lys Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn 
              210                 215                 220                 
          Asp Thr His Pro Thr Thr Gly Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Lys Leu His Gly Pro Thr Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala 
                          245                 250                 255     
          Pro Thr Val Glu Met Asp Glu Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe 
                      260                 265                 270         
          His Gly Met Asn Pro Ser Lys Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val 
                  275                 280                 285             
          Arg Thr Gln 
              290     
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Ser Tyr Tyr Ile His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Gln 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ala 
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Ar]]>tificial Sequence)
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          His Gln Tyr Leu Ser Ser Arg Thr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6-IgG4-S228P抗CD33重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 
              130                 135                 140                 
          Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  219]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequenc]]>e)
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6-IgG4-S228P抗CD33輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln 
                          85                  90                  95      
          Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6重鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huMy9-6輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser 
                      20                  25                  30          
          Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln 
                          85                  90                  95      
          Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 111120735-A0101-11-0002-1

Claims (61)

  1. 一種式(I)之綴合物：
    Figure 03_image001
    (I)， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： a係1至10之整數； A係苯基或C 4-C 10環烷基環； U選自NH及CF 2； R 1獨立地選自氫及鹵基； X選自-NR 2-、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中 Q及Q'各自獨立地係O、S或N(R 2) v； v係1或2； 各R 2獨立地係氫或C 1-C 6烷基； n係1至6之整數；且 m係2至6之整數； 其中各群之左側連接至L，且右側連接至A； 條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基； L係可裂解連接子或不可裂解連接子；且 Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分，其包含：重鏈可變區(VH)互補決定區(CDR) 1 (VH-CDR1)，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；輕鏈可變區(VL) CDR1 (VL-CDR1)，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。
  2. 如請求項1之綴合物，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH，其包含如SEQ ID NO: 4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 8所列之胺基酸序列。
  3. 如請求項1或2之綴合物，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含恆定區，其中該恆定區包含至少一種不同於吉妥珠單抗之胺基酸。
  4. 如請求項1至3中任一項之綴合物，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分係IgG1抗體或其抗原結合部分。
  5. 如請求項1至4中任一項之綴合物，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含對應於該恆定區之胺基酸297處之丙胺酸。
  6. 如請求項1至5中任一項之綴合物，其中該抗CD33抗體包含如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈。
  7. 如請求項1至6中任一項之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中a係2至8之整數。
  8. 如請求項1至7中任一項之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係不可裂解連接子。
  9. 如請求項8之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image003
    、
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    及
    Figure 03_image009
    ； 其中： p係1至10之整數；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  10. 如請求項9之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係
    Figure 03_image015
    。
  11. 如請求項9或10之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中p係5。
  12. 如請求項1至7中任一項之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係可裂解連接子。
  13. 如請求項12之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該可裂解連接子係可由蛋白酶裂解。
  14. 如請求項12或13之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image017
    ；
    Figure 03_image019
    ；
    Figure 03_image021
    ；
    Figure 03_image023
    ；
    Figure 03_image025
    ；
    Figure 03_image027
    ；
    Figure 03_image029
    ；及
    Figure 03_image031
    ； 其中： q係2至10之整數； Z 1、Z 2、Z 3及Z 4各自獨立地不存在或係呈L-或D-組態之天然胺基酸殘基，條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  15. 如請求項14之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Z 1、Z 2、Z 3及Z 4獨立地不存在或選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸及甘胺酸；條件為Z 1、Z 2、Z 3及Z 4中之至少兩者係胺基酸殘基。
  16. 如請求項15之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： Z 1係不存在或係甘胺酸； Z 2係不存在或選自由以下組成之群：L-麩醯胺酸、D-麩醯胺酸、L-麩胺酸、D-麩胺酸、L-天冬胺酸、D-天冬胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸及甘胺酸； Z 3係選自由以下組成之群：L-纈胺酸、D-纈胺酸、L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸；且 Z 4係選自由以下組成之群：L-丙胺酸、D-丙胺酸、L-瓜胺酸、D-瓜胺酸、L-天冬醯胺酸、D-天冬醯胺酸、L-離胺酸、D-離胺酸、L-苯丙胺酸、D-苯丙胺酸及甘胺酸。
  17. 如請求項14之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係
    Figure 03_image017
    。
  18. 如請求項17之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中q係5。
  19. 如請求項12之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係可生物還原之連接子。
  20. 如請求項12或19之綴合物，其中L係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image034
    其中： q係2至10之整數； R、R'、R"及R"'各自獨立地選自氫、C 1-C 6烷氧基C 1-C 6烷基、(C 1-C 6) 2NC 1-C 6烷基及C 1-C 6烷基，或兩個孿R基團連同它們所連接之碳原子可形成環丁基或環丙基環；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  21. 如請求項12之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係酸可裂解連接子。
  22. 如請求項12或21之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係選自由以下組成之群：
    Figure 03_image037
    ； 其中： q係2至10之整數；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  23. 如請求項12之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係點擊釋放連接子。
  24. 如請求項12或23之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L選自：
    Figure 03_image039
    ； 其中： q係2至10之整數；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  25. 如請求項12之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係焦磷酸酶可裂解連接子。
  26. 如請求項25之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係
    Figure 03_image042
    ； 其中： q係2至10之整數；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  27. 如請求項12之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係β-葡醣醛酸酶可裂解連接子。
  28. 如請求項12或27之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L選自：
    Figure 03_image044
    及
    Figure 03_image046
    ； 其中： q係2至10之整數； ----不存在或係鍵；
    Figure 03_image011
    係與X之連接點；且
    Figure 03_image013
    係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分之連接點。
  29. 如請求項1至28中任一項之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： A係苯基； U係NH； R 1係鹵基；且 X係-N(R 2) v(CH 2) mO(CH 2) n-；其中： v係1； m及n係2；且 R 2係甲基。
  30. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係苯基； U係NH； R 1係鹵基；且 X係-N(R 2) v(CH 2) mO(CH 2) n-；其中： v係2； m及n係2；且 各R 2係甲基。
  31. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係苯基； U係NH； R 1係鹵基；且 X係-O(CH 2) n-；其中： n係2。
  32. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係苯基； U係NH； R 1係鹵基；且 X係-S(CH 2) n-；其中： n係2。
  33. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係苯基； U係NH； R 1係氫；且 X係--NR 2-；其中： R 2係甲基。
  34. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係苯基； U係NH； R 1係鹵基；且 X係--NR 2-；其中： R 2係氫。
  35. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係苯基； U係NH； R 1係氫；且 X係-C(CH 3)=。
  36. 如請求項1至28中任一項之綴合物，其中： A係C 4-C 10環烷基環； U係NH； R 1係氫；且 X係-N(R 2)(CH 2) mO(CH 2) n-；其中： n係1； m係2；且 R 2係甲基。
  37. 一種式(V)之綴合物：
    Figure 03_image049
    (V)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分，其包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。
  38. 一種式(VI)之綴合物：
    Figure 03_image051
    (VI)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分，其包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。
  39. 一種式(VII)之綴合物：
    Figure 03_image053
    (VII)； 或其醫藥學上可接受之鹽，其中Bm係抗CD33抗體或其抗原結合部分，其包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；VL-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。
  40. 如請求項37至39中任一項之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：(i) VH，其包含如SEQ ID NO: 4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 8所列之胺基酸序列；或(ii)重鏈，其包含如SEQ ID NO: 9所列之胺基酸序列；及輕鏈，其包含如SEQ ID NO: 10所列之胺基酸序列。
  41. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至40中任一項之綴合物或化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑。
  42. 一種治療有需要的個體之癌症之方法，該方法包含向該個體投與醫藥學上可接受之量之如請求項1至41中任一項之綴合物或組成物或其醫藥學上可接受之鹽。
  43. 如請求項42之方法，其中該癌症係血液科癌症/血癌。
  44. 如請求項42之方法，其中該癌症係多發性骨髓瘤、白血病、惡性淋巴瘤、霍奇金病或慢性骨髓增生性疾病。
  45. 如請求項42之方法，其中該癌症係急性髓性白血病或淋巴瘤。
  46. 如請求項42之方法，其中該癌症係急性髓性白血病。
  47. 如請求項42至46中任一項之方法，其中該癌症對Mylotarg具有抗性或難治性。
  48. 一種治療有需要的個體之骨髓化生不良症候群之方法，該方法包含向該個體投與醫藥學上可接受之量之如請求項1至41中任一項之綴合物或組成物或其醫藥學上可接受之鹽。
  49. 如請求項42至48中任一項之方法，其進一步包含在如請求項1至40中任一項之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時向該個體投與醫藥學上可接受之量之額外劑。
  50. 如請求項49之方法，其中該額外劑係細胞毒性劑或免疫反應調節劑。
  51. 如請求項50之方法，其中該免疫反應調節劑係檢查點抑制劑。
  52. 如請求項51之方法，其中該檢查點抑制劑包含PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CTLA-4抑制劑、TIM3抑制劑及/或LAG-3抑制劑。
  53. 一種製備如請求項1之綴合物或其醫藥學上可接受之鹽的方法，該方法包含使抗CD33抗體或其抗原結合部分與式(I-1)之化合物：
    Figure 03_image055
    (I-1)， 或其醫藥學上可接受之鹽反應，其中： a係1至10之整數； A係苯基或C 4-C 10環烷基環； R 1獨立地選自氫及鹵基； U選自NH及CF 2； X選自-N(R 2) v-、=C(CH 3)-、-Q-(CH 2) n-及 -Q(CH 2) mQ'(CH 2) n-；其中 v係1或2； Q及Q'各自獨立地係O、S或NR 2； 各R 2獨立地係氫或C 1-C 6烷基； n係1至6之整數；且 m係2至6之整數； 其中各群之左側連接至L'，且右側連接至A； 條件為當X係NH或-Q-(CH 2) n-時，R 1係鹵基； L'係與該抗CD33抗體或其抗原結合部分綴合之可裂解或不可裂解之連接子前驅物，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH-CDR1，其包含如SEQ ID NO: 1所列之胺基酸序列；VH-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 2所列之胺基酸序列；VH-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 3所列之胺基酸序列；輕鏈可變區(VL) CDR1，其包含如SEQ ID NO: 5所列之胺基酸序列；VL-CDR2，其包含如SEQ ID NO: 6所列之胺基酸序列；及VL-CDR3，其包含如SEQ ID NO: 7所列之胺基酸序列。
  54. 如請求項53之方法，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含：VH，其包含如SEQ ID NO: 4所列之胺基酸序列；及VL，其包含如SEQ ID NO: 8所列之胺基酸序列。
  55. 如請求項53或54之方法，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含恆定區，其中該恆定區包含至少一種不同於吉妥珠單抗之胺基酸。
  56. 如請求項53至55中任一項之方法，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分係IgG1抗體或其抗原結合部分。
  57. 如請求項53至56中任一項之方法，其中該抗CD33抗體或其抗原結合部分包含對應於該恆定區之胺基酸297處之丙胺酸。
  58. 如請求項53或57中任一項之方法，其中該抗CD33抗體包含如SEQ ID NO: 9所列之重鏈及如SEQ ID NO: 10所列之輕鏈。
  59. 如請求項53至58中任一項之方法，其進一步包含在與該式(I-1)之化合物反應之前還原該抗CD33抗體或其抗原結合部分。
  60. 如請求項53至59中任一項之方法，其中a係2至8之整數。
  61. 如請求項53至60中任一項之方法，其中L'係不可裂解之連接子前驅物、可裂解之連接子前驅物、可生物還原之連接子前驅物、酸可裂解之連接子前驅物、點擊釋放連接子前驅物、焦磷酸酶可裂解之連接子前驅物、β-葡醣醛酸酶可裂解之連接子前驅物或其任何組合。
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