JP2019523649A - Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤 - Google Patents

Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤 Download PDF

Info

Publication number
JP2019523649A
JP2019523649A JP2018565394A JP2018565394A JP2019523649A JP 2019523649 A JP2019523649 A JP 2019523649A JP 2018565394 A JP2018565394 A JP 2018565394A JP 2018565394 A JP2018565394 A JP 2018565394A JP 2019523649 A JP2019523649 A JP 2019523649A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
alkyl
papd5
papd7
compound
hbv
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2018565394A
Other languages
English (en)
Other versions
JP7258558B2 (ja
Inventor
シンチュン ハン
シンチュン ハン
ジャバンベイクト ハッサン
ジャバンベイクト ハッサン
ミュラー ヘンリック
ミュラー ヘンリック
ヨンコアン ワン
ヨンコアン ワン
ソン ヤン
ソン ヤン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of JP2019523649A publication Critical patent/JP2019523649A/ja
Priority to JP2021179533A priority Critical patent/JP2022019747A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7258558B2 publication Critical patent/JP7258558B2/ja
Priority to JP2023204150A priority patent/JP2024026252A/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/706—Specific hybridization probes for hepatitis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/91—Transferases (2.)
    • G01N2333/912—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • G01N2333/91205—Phosphotransferases in general
    • G01N2333/91245—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • G01N2333/9125—Nucleotidyltransferases (2.7.7) with a definite EC number (2.7.7.-)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)

Abstract

本発明はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物として（ｉ）ＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質５（ＰＡＰＤ５）及び／又はＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質７（ＰＡＰＤ７）の発現及び／又は活性を低下させ、且つ／又は（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合し、そしてＨＢＶの増殖を阻害する化合物が特定される前記方法に関する。本発明はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤、並びにＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に同時又は順次使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤も提供する。ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するための医薬組成物、並びにＨＢＶ感染症の治療中に治療成果を監視するための方法も本発明に含まれる。

Description

本発明はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物として（ｉ）ＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質５（ＰＡＰＤ５）及び／又はＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質７（ＰＡＰＤ７）の発現及び／又は活性を低下させ、且つ／又は（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合し、そしてＨＢＶの増殖を阻害する化合物が特定される前記方法に関する。本発明はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤、並びにＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に同時又は順次使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤も提供する。ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するための医薬組成物、並びにＨＢＶ感染症の治療中に治療成果を監視するための方法も本発明に含まれる。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）はエンベロープ型部分二本鎖ＤＮＡウイルスである。小さな３．２ｋｂのＨＢＶゲノムは４つの重複性オープン・リーディング・フレーム（ＯＲＦ）から構成され、それらのオープン・リーディング・フレームはコア、ポリメラーゼ（Ｐｏｌ）、エンベロープ、及びＸタンパク質をコードする。Ｐｏｌ ＯＲＦが最長であり、エンベロープＯＲＦがその内側に位置する一方でＸ ＯＲＦとコアＯＲＦはＰｏｌ ＯＲＦと重複する。ＨＢＶのライフサイクルには２つの主要な現象、すなわち（１）弛緩環型ＤＮＡ（ＲＣ ＤＮＡ）からの閉環型ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）の生成と（２）ＲＣ ＤＮＡを生産するためのプレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）の逆転写がある。宿主細胞の感染の前ではＨＢＶゲノムはＲＣ ＤＮＡとしてビリオン内に存在する。ヒト肝細胞の表面上に存在する負に帯電したプロテオグリカンへの非特異的結合（Ｓｃｈｕｌｚｅ， Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ， ４６， （２００７）， １７５９−６８）と肝細胞 ナトリウム／タウロコール酸 共輸送 ポリペプチド （ＮＴＣＰ） 受容体へのＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の特異的結合（Ｙａｎ， Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ８７， （２０１３）， ７９７７−９１）によってＨＢＶビリオンは宿主細胞に侵入することができるとされている。ウイルス感染症の抑制は、感染後数分以内から数時間までに応答してそのウイルスの初期増殖に打撃を与え、そして慢性、且つ、持続性の感染症の発症を限定することが可能である宿主自然免疫系による厳重な監視を必要とする。ＩＦＮとヌクレオシド／ヌクレオチド類似体に基づく現行の治療法が利用可能であるにもかかわらず、ＨＢＶ感染症は肝硬変及び肝細胞癌のリスクが比較的に高い推計３億５０００万人の慢性保因者に関わる世界的な健康上の大問題のままである。
ＨＢＶ感染に応じた肝細胞及び／又は肝内免疫細胞による抗ウイルス性サイトカインの分泌は感染した肝臓によるウイルス除去において中心的な役割を果たす。しかしながら慢性感染患者は宿主細胞の認識系と後続の抗ウイルス応答に対抗するためにウイルスが採用した様々な回避戦略のせいで弱い免疫応答しか示せない。
幾つかのＨＢＶウイルスタンパク質がウイルス認識シグナル伝達系に干渉し、後にインターフェロン（ＩＦＮ）抗ウイルス活性を妨害することにより初期の宿主細胞応答に対抗可能であることが多数の観察により示された。これらの中でもＨＢＶ空サブウイルス粒子（ＳＶＰ、ＨＢｓＡｇ）の過剰分泌が慢性感染患者（ＣＨＢ）に観察される免疫寛容状態の維持に関与すると考えられている。ＨＢｓＡｇ及び他のウイルス抗原への持続的曝露はＨＢＶ特異的なＴ細胞の欠損又は漸進的機能障害を引き起こし得る（Ｋｏｎｄｏ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （１９９３）， １５０， ４６５９−４６７１； Ｋｏｎｄｏ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ （２００４）， ７４， ４２５−４３３； Ｆｉｓｉｃａｒｏ， Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ， （２０１０）， １３８， ６８２−９３）。また、ＨＢｓＡｇは直接的な相互作用によって単球、樹状細胞（ＤＣ）、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの免疫細胞の機能を抑制することが報告されている（Ｏｐ ｄｅｎ Ｂｒｏｕｗ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， （２００９ｂ）， １２６， ２８０−９； Ｗｏｌｔｍａｎ， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， （２０１１）， ６， ｅ１５３２４； Ｓｈｉ， Ｊ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔ． （２０１２）， １９， ｅ２６−３３； Ｋｏｎｄｏ， ＩＳＲＮ Ｇａｓｔｅｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ， （２０１３）， Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ９３５２９５）。
ＨＢｓＡｇの定量は慢性Ｂ型肝炎における予後と治療応答についての重要なバイオマーカーである。しかしながらＨＢｓＡｇの消失とセロコンバージョンの達成が慢性感染患者において観察されることは稀であり、最終的な治療目標のうちの１つであり続ける。ヌクレオシド／ヌクレオチド類似体などの現行の治療法はＨＢＶのＤＮＡ合成を阻害する分子であり、ＨＢｓＡｇレベルを低下させることを目的としていない。長期の治療であってもヌクレオシド／ヌクレオチド類似体では自然に観察されるクリアランス（約１％〜２％の間）と同等の弱いＨＢｓＡｇクリアランスしか示されない（Ｊａｎｓｓｅｎ， Ｌａｎｃｅｔ， （２００５）， ３６５， １２３−９； Ｍａｒｃｅｌｌｉｎ， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， （２００４）， ３５１， １２０６−１７； Ｂｕｓｔｅｒ， Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ， （２００７）， ４６， ３８８−９４）。
Ｂ型肝炎ウイルスｅ抗原（ＨＢＶエンベロープ抗原又はＨＢｅＡｇとも呼ばれる）はＢ型肝炎ウイルス感染細胞が分泌するウイルスタンパク質である。ＨＢｅＡｇは慢性Ｂ型肝炎感染症に関連し、活性型ウイルス疾患と患者の感染性の程度のマーカーとして使用される。
Ｂ型肝炎ウイルスのプレコア又はＨＢｅＡｇの機能は完全には分かっていない。しかしながらＨＢｅＡｇはウイルスの持続に重要な役割を果たすことがよく知られている。ＨＢｅＡｇは免疫調節性タンパク質として機能することによりＨＢＶの慢性化を促進すると考えられている。具体的にはＨＢｅＡｇは分泌型補助タンパク質であり、細胞内ヌクレオカプシドタンパク質に対する宿主免疫応答を減弱するようである（Ｗａｌｓｈ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１１， ４１１（１）：１３２−１４１）。ＨＢｅＡｇはＨＢＶの存続に寄与する免疫寛容原として作用し、可溶性ＨＢｅＡｇが胎盤を通過することを考慮するとおそらく子宮内で機能する（Ｗａｌｓｈ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１１， ４１１（１）：１３２−１４１）。さらに、ＨＢｅＡｇはウイルス感染に対する自然免疫応答を弱めるために（ｉ）細胞内シグナル伝達を制御する細胞遺伝子、及び（ｉｉ）Ｔｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ−２）を下方制御する（Ｗａｌｓｈ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１１， ４１１（１）：１３２−１４１）。ＨＢｅＡｇが存在しない状態ではＨＢＶの複製にはＴＬＲ２経路の上方制御が伴う（Ｗａｌｓｈ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１１， ４１１（１）：１３２−１４１）。よって、ＨＢｅＡｇは宿主免疫応答に影響を与えるためにウイルス宿主間相互作用の調節に重要な役割を有する（Ｗａｌｓｈ， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１１， ４１１（１）：１３２−１４１）。したがって、ＨＢｅＡｇ陽性患者集団においてＨＢｅＡｇを減少させることがＨＢＶ特異的免疫機能不全の反転につながる場合がある（Ｍｉｌｉｃｈ， １９９７， Ｊ． Ｖｉｒａｌ． Ｈｅｐ． ４： ４８−５９； Ｍｉｌｉｃｈ， １９９８， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６０： ２０１３−２０２１）。加えて、分泌されたＨＢｅＡｇはＴ細胞寛容の誘発、及びＨＢｅＡｇと細胞内肝炎コア抗原（ＨＢｃＡｇ）との間での解離Ｔ細胞寛容の誘発の点でＨＢｃＡｇよりも著しく有能であり、ＨＢｃ／ＨＢｅＡｇ特異的Ｔ細胞寛容のクローン間での不均一性が自然的ＨＢＶ感染に対して、特にプレコア陰性慢性肝炎に対して重大な意味を持つ可能性がある（Ｃｈｅｎ， ２００５， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ７９： ３０１６−３０２７）。
したがって、ＨＢｓＡｇの分泌に加えてＨＢｅＡｇの分泌を減少させることでＨＢｓＡｇの分泌の阻害だけと比べて慢性ＨＢＶ感染症の発症の抑制が改善されることになる。加えて、ＨＢｅＡｇ陽性の母親に由来する母胎間ＨＢＶ伝播及び新生児ＨＢＶ伝播の場合に最も高い率の急性から慢性の感染症の伝播（８０％超）が報告されている（Ｌｉａｗ， Ｌａｎｃｅｔ， ２００９， ３７３： ５８２−５９２； Ｌｉａｗ， Ｄｉｇ． Ｄｉｓ． Ｓｃｉ．， ２０１０， ５５： ２７２７−２７３４；及びＨａｄｚｉｙａｎｎｉｓ， ２０１１， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ， ５５： １８３−１９１）。したがって、母親になる女性においてＨＢｅＡｇを減少させることがその患者の感染性を低下させるだけではなく、その女性の子供での慢性ＨＢＶ感染症の発症も抑制する可能性がある。
したがって、ＨＢＶの治療にはウイルスの発現、特にＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌を阻害するという実現されていない医学上の要求が存在する（Ｗｉｅｌａｎｄ， Ｓ． Ｆ． ＆ Ｆ． Ｖ． Ｃｈｉｓａｒｉ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ， （２００５）， ７９， ９３６９−８０； Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｖｉｒｏｌ， （２０１１）， ８５， ９８７−９５； Ｗｏｌｔｍａｎ ｅｔ ａｌ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， （２０１１）， ６， ｅ１５３２４； Ｏｐ ｄｅｎ Ｂｒｏｕｗ ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， （２００９ｂ）， １２６， ２８０−９）。
国際公開第０３／０２２９８７号パンフレットはＣ型肝炎陽性組織において上方制御される１２９８種類の遺伝子を例えば表７Ａにおいて開示している。前述の遺伝子のうちの１つはトポイソメラーゼ関連機能タンパク質４（ＴＲＦ４、ＡＦ０８９８９７）である。ＡＦ０８９８９７はＴＲＦ４−２とも呼ばれ、本明細書中の配列番号４の位置８８０〜２３４０に極めてよく似ている。Ｃ型肝炎陽性細胞ではＰＡＰＤ５の断片はわずかにしか上方制御されないという観察結果はＰＡＰＤ５の阻害が有効な治療法であるということをいくらかでも示すものではない。国際公開第０３／０２２９８７（Ａ２）号パンフレットはＣ型肝炎の感染にＰＡＰＤ５の断片が何らかの重要な役割を果たすというどんな示唆も全く開示していない。加えて、ＨＣＶ及びＨＢＶは、異なる病因、異なる進行、及び異なる薬物治療を伴う２つの完全に異なる疾患を引き起こす２種類の完全に異なるウイルスである。このことは、ＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の阻害剤であるＤＨＱとＴＨＰがＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、又はＨＢＶ以外の他のウイルスに対しては不活性である（データを示さず）という本発明者らの観察結果と一致する。
国際公開第２０１０／０４０５７１号パンフレットでは何らかの実際の証拠が提供されているわけではないが代謝性疾患及び腫瘍状疾患において潜在的な役割を細胞増殖に有する他の遺伝子の長いリストの中にＰＡＰＤ５が示唆されている。
国際公開第２０１３／１６６２６４号パンフレットでは何らかの実際の証拠が提供されているわけではないが代謝性疾患及び腫瘍状疾患において潜在的な役割をウイルス複製の増加に有する他の遺伝子の長いリストの中にＰＡＰＤ５が示唆されている。
国際公開第２０１７／０６６７１２号パンフレットにはテロメア疾患の治療と診断に関してＰＡＰＤ５の下方制御のことが記載されている。この目的のために５種類のｓｈＲＮＡ構造体が説明されている。
我々の知る限り、ＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７の発現はこれまでにＨＢＶの感染と関連付けられていない。
したがって、本発明の根底にある技術的課題はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防のために改善された手段と方法を特定し、且つ、提供することである。
その技術的課題は本明細書に記載され、且つ、特許請求の範囲において特徴が述べられる実施形態の提示によって解決される。
本発明の１つの態様はスクリーニング方法、具体的にはＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
（ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
（ａ１）ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド、又は
（ａ２）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
（ｂ）前記被験化合物が存在する状態と存在しない状態でＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を測定すること、及び
（ｃ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させる化合物を特定すること
を含む前記方法に関する。
本発明の追加の態様はＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
（ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
（ｉ）ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド、又は
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
（ｂ）前記被験化合物がＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合するか測定すること、
（ｃ）前記被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか測定すること、及び
（ｄ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物を特定すること
を含む前記方法である。
本発明の追加の態様はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤であって、前記阻害剤は
（ａ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合する小分子、又は
（ｂ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的に結合する抗体
である。
ＨＢＶの治療又は予防に使用するための前記阻害剤は式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物から選択され得る。具体的には式（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の阻害剤が本発明において使用される。
ＨＢＸ１２９６５３／ＨＢＸ１２９６５４化学プローブと３種類のプレイ断片を使用する１対１実験の図である。 ＨＢＸ１２９６５３／ＨＢＸ１２９６５４化学プローブとＰＡＰＤ５／７全長タンパク質を使用する１対１実験の図である。 競合のためにＨＢＸ１２９６５３（ＤＨＱ）とＭＯＬ６５３／６５４を使用する競合アッセイの図である。 競合のためにＨＢＸ１２９６５４（ＴＨＰ）とＭＯＬ６５３／６５４を使用する競合アッセイの図である。 競合のためにＨＢＸ１２９６５３（ＤＨＱ）とＩＮＡＣＴ６５３／ＩＮＡＣＴ６５４を使用する競合アッセイの図である。ＭＯＬ６５３を陽性対照として含めた。 競合のためにＨＢＸ１２９６５４（ＴＨＰ）とＩＮＡＣＴ６５３／ＩＮＡＣＴ６５４を使用する競合アッセイの図である。ＭＯＬ６５３を陽性対照として含めた。 （Ａ）ＨＢＶ感染ｄＨｅｐａＲＧにおけるＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７のｓｉＲＮＡノックダウン（ＫＤ）によってＨＢＶ発現が低下することを示す図である。ＨｅｐａＲＧ分化細胞にＨＢＶを感染させ、ＨＢＶの感染１日前と感染４日後にＰＡＰＤ５、ＰＡＰＤ７、又はそれらの両方のいずれかに対するｓｉＲＮＡ（２５ｎＭずつ）で処理した。上清を１１日目に採取し、上清中に分泌されたＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇのレベルをＥＬＩＳＡによって測定し、そして非処理対照に対して正規化した。その後、細胞毒性及び遺伝子発現の阻害を測定し、これらも非処理対照に対して正規化した。（Ｂ）上清中に分泌されたＨＢｓＡｇのレベルだけを測定したことを除いて（Ａ）において説明された実験と同じ実験を実施したことを示す図である。
ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７はポリメラーゼβ様ヌクレオチジルトランスフェラーゼスーパーファミリーに属する非標準型ポリ（Ａ）ポリメラーゼである。本発明の背景において、被験化合物がＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を阻害するかどうか分析することによりＨＢＶ感染症の治療介入に有用な化合物の特定に成功し得ることが驚くべきことに示されている。また、換言するとＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害がＨＢＶ感染症を抑制する化合物の効力についての指標であると添付実施例において確認された。それらの添付実施例は（本明細書においてＤＨＱと呼ばれる）本明細書において以下に示される式（ＩＩＩ）を有するジヒドロキノリジノン化合物と（本明細書においてＴＨＰと呼ばれる）本明細書において以下に示される式（ＩＶ）を有するテトラヒドロピリドピリミジン化合物がＰＡＰＤ５ポリペプチドとＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合することを実証している。これらの化合物はＨＢＶ感染中にＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の生産とＨＢＶ ＲＮＡの発現を阻害する能力を有する（国際公開第２０１５／１１３９９０（Ａ１）号パンフレット及び国際公開第２０１６／１７７６５５号パンフレット）。加えて、それらの添付実施例はｓｉＲＮＡの使用によるＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害によってウイルス発現の阻害、特にＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌の阻害、並びに細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡ生産の阻害が引き起こされることを示している。これらの結果はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性（例えば量）を減少させることによってＨＢＶ感染症（例えば慢性ＨＢＶ感染症）が予防又は治療（すなわち、改善及び／又は抑制）され得ることを直接的に示している。したがって、本発明はＨＢＶ感染症を予防及び／又は治療（すなわち、改善及び／又は抑制）する化合物としてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７（例えばＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７）の発現及び／又は活性（例えば発現）を低下させる化合物が特定されるスクリーニング方法に関する。
ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対抗する（すなわち阻害する）化合物によってＨＢＶの遺伝子発現と複製が阻害され、そうしてＨＢＶ感染症が予防、改善、及び／又は抑制されることが本発明の背景において分かっている。そのような化合物はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７発現及び／又は活性の１０〜１００％、好ましくは２０〜１００％、より好ましくは３０〜１００％、さらにより好ましくは４０〜１００％、さらにより好ましくは５０〜１００％、さらにより好ましくは６０〜１００％、さらにより好ましくは７０〜１００％、さらにより好ましくは８０〜１００％、及び最も好ましくは９０〜１００％の低下を引き起こし得る。
本明細書において提供されるスクリーニング方法では工程（ａ）においてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、すなわち（ａｉ）を使用することによりＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現を測定（すなわち分析／決定）することを企図している。工程（ａ）において（ａｉ）例えば無細胞調製物中のＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド、又は（ａｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞のどちらかを使用することでＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の活性が測定（すなわち分析／決定）され得る。
本発明の１つの態様ではＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現（例えばＰＡＰＤ５の発現、好ましくはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の発現）を低下させる化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制（すなわち治療）する化合物として特定される。本発明の別の態様ではＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の活性（例えばＰＡＰＤ５の活性、好ましくはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の活性）を低下させる化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制（すなわち治療）する化合物として特定される。ＰＡＰＤ５の発現及び／又は活性、又は両方の分子、すなわちＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させる化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物として特定されることを優先する。両方の分子、すなわちＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させる化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物として特定されることが最も好ましい。
本発明に従うとＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合する化合物を特定するために第１の予備選択工程を実施することによってＨＢＶ感染症を予防及び／又は治療（すなわち、改善及び／又は抑制）する化合物を特定（すなわち選択）することができる。後に第２工程においてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するとして特定された化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか評価され得る。したがって、本発明はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７（例えばＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７）に結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制（すなわち治療）する化合物として特定される追加のスクリーニング方法に関する。
したがって、本発明はＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
（ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
（ａｉ）ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド、又は
（ａｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
（ｂ）前記被験化合物がＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するか測定すること、
（ｃ）前記被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか測定すること、及び
（ｄ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物を特定すること
を含む前記方法に関する。
したがって、本発明に従うとＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７（例えばＰＡＰＤ５、好ましくはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７）に結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制（すなわち治療）する化合物として特定される。（ｉ）ＰＡＰＤ５に結合するか、又は両方の分子、すなわちＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に結合し、且つ、（ｉｉ）ＨＢＶの増殖を阻害する化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物として特定されることを優先する。両方の分子、すなわちＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物がＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物として特定されることが最も好ましい。
上記のスクリーニング方法によってＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物が特定される。前記化合物によってＨＢＶ感染症が改善及び／又は抑制（すなわち治療）されることを優先する。したがって、本明細書において提供されるスクリーニング方法はＨＢＶ感染症を治療する化合物の特定に有用である。
本発明の背景ではＰＡＰＤ５はＰＡＰＤ５ポリペプチド又はＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡであり得る。ＰＡＰＤ５がＰＡＰＤ５ポリペプチドであることが本明細書において提供されるスクリーニング方法の背景では優先される。本発明の１つの態様は本明細書において提供されるスクリーニング方法であって、前記ＰＡＰＤ５ポリペプチドが
（ａ）配列番号１又は２のアミノ酸配列、
（ｂ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を（ａ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列、
（ｃ）配列番号１又は２の酵素活性断片のアミノ酸配列、又は
（ｄ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を（ｄ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列
を含む、又は前記アミノ酸配列から成るポリペプチドである前記スクリーニング方法に関する。
配列番号１又は２（すなわちＰＡＰＤ５）の酵素活性断片の例は配列番号１又は２の位置１４５〜２５６にあるヌクレオチジルトランスフェラーゼドメイン、又は配列番号１又は２の位置３０８〜３６８にあるＣｉｄ１ポリＡポリメラーゼである。
本発明の別の態様は本明細書において提供されるスクリーニング方法であって、ＰＡＰＤ５を発現する前記細胞がＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡ、
（ｉ）配列番号１又は２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
（ｉｉ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号１又は２に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）配列番号１又は２の酵素活性断片をコードするヌクレオチド配列、
（ｉｖ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号１又は２の酵素活性断片のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列、
（ｖ）配列番号４又は５を含む、又は前記配列番号から成るヌクレオチド配列、又は
（ｖｉ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号４又は５に対して有するヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドを発現する前記配列、又は
（ｖｉｉ）プロセッシング（すなわちスプライシング）を受けると（ｖ）又は（ｖｉ）のポリヌクレオチドになるプレｍＲＮＡ
を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドを含有する前記スクリーニング方法に関する。
好ましい実施形態では前記ＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡは配列番号４又は５のヌクレオチド配列を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドであり得る。しかしながら前記ＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号４又は５に対して有するヌクレオチド配列を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドであって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドであってもよい。
本発明の背景ではＰＡＰＤ７はＰＡＰＤ７ポリペプチド又はＰＡＰＤ７ ｍＲＮＡであり得る。ＰＡＰＤ７がＰＡＰＤ７ポリペプチドであることが本明細書において提供されるスクリーニング方法の背景では優先される。本発明の１つの態様は本明細書において提供されるスクリーニング方法であって、前記ＰＡＰＤ７ポリペプチドが
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列、
（ｂ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を（ａ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列、
（ｃ）配列番号３の酵素活性断片のアミノ酸配列、又は
（ｄ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を（ｃ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列
を含む、又は前記アミノ酸配列から成るポリペプチドである前記スクリーニング方法に関する。
配列番号３（すなわちＰＡＰＤ７）の酵素活性断片の例は配列番号３の位置１５〜１２５にあるヌクレオチジルトランスフェラーゼドメイン、又は配列番号３の位置１７８〜２３８にあるＣｉｄ１ファミリーポリＡポリメラーゼである。
本発明の別の態様は本明細書において提供されるスクリーニング方法であって、ＰＡＰＤ７を発現する前記細胞がＰＡＰＤ７ ｍＲＮＡ、
（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
（ｉｉ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号３に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）配列番号３の酵素活性断片をコードするヌクレオチド配列、又は
（ｉｖ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号３の酵素活性断片のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列、又は
（ｖ）配列番号６を含む、又は前記配列番号から成るヌクレオチド配列、又は
（ｖｉ）少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号６に対して有するヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドを発現する前記配列、又は
（ｖｉｉ）プロセッシング（すなわちスプライシング）を受けると（ｖ）又は（ｖｉ）のポリヌクレオチドになるプレｍＲＮＡ
を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドを含有する前記スクリーニング方法に関する。
好ましい実施形態では前記ＰＡＰＤ７ ｍＲＮＡは配列番号６のヌクレオチド配列を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドであり得る。しかしながら前記ＰＡＰＤ７ ｍＲＮＡは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号６に対して有するヌクレオチド配列を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドであって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドであってもよい。
本発明の背景では前記細胞は真核細胞であり得る。例えば、前記細胞は酵母細胞又は脊椎動物細胞であり得る。脊椎動物細胞には魚類、鳥類、爬虫類、両生類、有袋類、及び哺乳類の細胞が含まれ得る。前記細胞は哺乳類細胞であることが好ましく、ヒト細胞であることが最も好ましい。哺乳類細胞にはネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、マウス及びラットなどのネズミ、及びウサギの細胞も含まれる。本明細書において提供されるスクリーニング方法では前記「細胞」はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を内因的に発現するか、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を過剰に発現する場合がある。ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の過剰発現のために前記細胞は発現ベクター内にＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでよい。好ましい実施形態では前記細胞はＰＡＰＤ５ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とＰＡＰＤ７ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。本明細書において提供されるスクリーニング方法の細胞は非ヒト動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、又はフェレットに含まれる場合がある。
ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７への結合が測定される上記のスクリーニング方法では化合物は特定の結合親和性をＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対して有する場合にＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合する化合物として特定され得る。例えば、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するその化合物はマイクロモル濃度範囲、又は好ましくは１００ｎＭ〜１ｐＭの範囲の解離定数（Ｋｄ）を有する場合がある。
本発明の背景では前記被験化合物がＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに特異的に結合するか、すなわち前記被験化合物が専ら、又は主にＰＡＰＡＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するか測定（すなわち分析）される場合がある。例えば、前記被験化合物がＰＡＰＤ７に特異的に結合するか測定される場合がある。前記被験化合物がＰＡＰＤ５に特異的に結合するか測定されることが好ましい。前記被験化合物がＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の両方に結合するか測定することがより好ましい。例えば、前記被験化合物がＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に特異的に結合するか測定される場合がある。
例えば、本明細書において提供されるスクリーニング方法では前記被験化合物のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７への結合はイースト３ハイブリッドスクリーンを実施することで測定され得る。Ｙ３Ｈシステムは薬物タンパク質間相互作用の検出に適合させた改変版のイースト２ハイブリッド（Ｙ２Ｈ）システムである。そのシステムは酵母細胞内部のＤＮＡ結合タンパク質に固定可能であるリガンドと目的の薬品の結合を必要とする。その後、それらの結合をレポーター遺伝子の転写活性化に関連付けることにより標的タンパク質との固定化薬品の相互作用が検出される。例えばＪｏｈｎｓｓｏｎ， Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏ， ２０１１， ７： ３７５−３８３；及びＬｉｃｉｔｒａ， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ， １９９６， １２； ９３（２３）：１２８１７−２１を参照されたい。そのようなイースト３ハイブリッドスクリーンでは標識された被験化合物に対する競合のために不活性型遊離化合物を使用する場合がある。
Ｂｉａｃｏｒｅ、ケモプロテオミクス、又はマイクロスケール熱泳動を用いて被験化合物のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７への結合が測定される場合もある。
ＨＢＶの増殖を阻害する化合物はウイルスＲＮＡの発現を低下させ、ウイルスＲＮＡ（ＨＢＶ ＲＮＡ）に由来するウイルスＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）の生産を減少させ、新しいウイルス粒子（ＨＢＶ粒子）の生産を減少させ、且つ／又はＨＢｓＡｇ及び／若しくはＨＢｅＡｇの生産及び／若しくは分泌をもたらす化合物であり得る。したがって、本発明の１つの態様は本明細書において提供されるスクリーニング方法であって、ＨＢＶの増殖を阻害する前記化合物によってＨＢｓＡｇの分泌が阻害され、ＨＢｅＡｇの分泌が阻害され、且つ／又は細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡ若しくはＨＢＶ ＤＮＡの生産が阻害される前記スクリーニング方法に関する。ＨＢＶの増殖を阻害する化合物はＨＢｓＡｇの分泌、ＨＢｅＡｇの分泌、及び細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産を阻害する化合物であることが好ましい。
例えば、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物は未処理の細胞若しくは動物、又は適切な対照で処理された細胞若しくは動物を比較したときにウイルスＲＮＡ（ＨＢＶ ＲＮＡ）の発現、ウイルスＲＮＡに由来するウイルスＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）の生産、新しいウイルス粒子（ＨＢＶ粒子）の生産、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの生産、及び／又はＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの分泌を１０〜１００％、好ましくは２０〜１００％、より好ましくは３０〜１００％、さらにより好ましくは４０〜１００％、さらにより好ましくは５０〜１００％、さらにより好ましくは６０〜１００％、さらにより好ましくは７０〜１００％、さらにより好ましくは８０〜１００％、及び最も好ましくは９０〜１００％減少させ得る。
本明細書において提供されるスクリーニング方法は前記被験化合物を対照と比較する工程をさらに含んでよい。前記対照は不活性被験化合物であって、
（ｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させず、且つ／又は
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合せず、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害しない
化合物である前記不活性被験化合物であり得る。
この不活性被験化合物はＨＢＶに対して何の活性も持たず、例えばＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇの分泌を阻害しなければ、細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産も阻害しない。例えば、その不活性被験化合物はＨＢｓＡｇの阻害について３μＭを超えるＩＣ50値を有する場合がある。本明細書において提供されるスクリーニング方法では前記不活性被験化合物は添付実施例において規定される「不活性ＤＨＱ化合物」という化合物又は「不活性ＴＨＰ化合物」という化合物であってよい。ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性が測定される前記スクリーニング方法では上の（ｉ）において規定される被験化合物を使用してよい。あるいは、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７への結合が測定される前記スクリーニング方法では上の（ｉｉ）において規定される被験化合物を使用してよい。不活性型化合物は例えば化学的修飾及び／又はキラル分離によって活性型の化合物から設計可能である。
本明細書において提供されるスクリーニング方法では前記被験化合物が存在する状態と存在しない状態でのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の活性が例えばＲａｍｍｅｌｔ， ＲＮＡ， ２０１１， １７：１７３７−１７４６等に記載されるようにｍＲＮＡのインビトロポリアデニル化をモニターすることにより測定され得る。簡単に説明すると、ＡＴＰ（Ａ）、ＣＴＰ（Ｃ）、ＧＴＰ（Ｇ）、ＵＴＰ（Ｕ）、又は４種類全てのｄＮＴＰの混合物が存在する状態でリボオリゴヌクレオチドＡ15を大腸菌内で発現した組換えＰＡＰＤ５タンパク質とインキュベートしてよい。
前記被験化合物が存在する状態と存在しない状態でのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現は例えば（ｑ）ＰＣＲ、ウエスタンブロット、又は質量分析を用いて測定可能である。
ＨＢＶの増殖の阻害は、例えば、ＨＢｓＡｇの分泌及び／又はＨＢｅＡｇの分泌を阻害し、且つ／又は細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産を阻害する活性を前記被験化合物が持つか測定することにより測定可能である。ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの分泌の阻害はＥＬＩＳＡにより、例えばＣＬＩＡ ＥＬＩＳＡキット（Ａｕｔｏｂｉｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ社）を製造業者の指示に従って使用することにより測定可能である。細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産の阻害は例えば添付実施例に記載されるようにリアルタイムＰＣＲによって測定可能である。被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか評価するためのその他の方法は、例えば国際公開第２０１５／１７３２０８号パンフレットに記載されるようなＲＴ−ｑＰＣＲによるＨＢＶ ＤＮＡの分泌の測定、ノーザンブロットによる測定、インサイチュハイブリダイゼーションによる測定、又は免疫蛍光による測定である。
本明細書において提供されるスクリーニング方法を実施するために公開又は市販されている分子ライブラリーが使用可能である。したがって、本発明の背景では前記被験化合物は
（ｉ）スクリーニングライブラリーの小分子、又は
（ｉｉ）ファージディスプレイライブラリーのペプチド、抗体断片ライブラリーのペプチド、又はｃＤＮＡライブラリーに由来するペプチド
であり得る。
例えば、Ｈｙｂｒｉｇｅｎｉｃｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ ＳＡＳのｃＤＨＡヒト肝臓（ＨＬＶ）ライブラリー又はｃＤＮＡヒト胎盤（ＰＬＡ）ライブラリーが使用可能である。
ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドの活性が測定される本明細書において提供されるスクリーニング方法ではＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の前記活性はポリＡポリメラーゼ機能（すなわちポリＡポリメラーゼ活性）であることが好ましい。ポリペプチド（例えばＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７）のポリＡポリメラーゼ機能／活性は、例えばＲａｍｍｅｌｔ， ＲＮＡ， ２０１１， １７：１７３７−１７４６等に記載されるようにｍＲＮＡのインビトロポリアデニル化をモニターすることにより測定され得る。この方法は、被験化合物が存在する状態と存在しない状態でＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７のポリＡポリメラーゼ機能を測定するためにも使用可能である。
ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＤＰＤ７ポリペプチドを阻害することによりＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌、並びに細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産が効果的に阻害され得ることが添付実施例によって実証されている。これらのデータはＨＢＶ感染症を予防及び／又は治療するためにＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤が使用可能であることを実証している。
ＨＢＶ感染症の治療にある一定の効力を有する幾つかの化合物が当技術分野において説明されている（例えば国際公開第２０１５／１１３９９０（Ａ１）号パンフレット及び国際公開第２０１６／１７７６５５号パンフレットを参照されたい）。しかしながら本発明の背景において、構造の点で完全に異なる抗ＨＢＶ剤（例えばＤＨＱとＴＨＰ）が驚くべきことに、且つ、特異的にＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７に結合することが驚くべきことに分かっている。加えて、ＨＢｓＡｇ生産の阻害について活性が比較的に低い薬剤も先行技術に含まれている。そのような薬剤はＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に対して比較的に低い結合親和性を有することが添付実施例において示されている（例えば｛不活性ＤＨＱ」を参照されたい）。実際、前記化合物のＨＢＶ感染症に対する活性とＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に対する結合親和性との間の明確な相関が添付実施例によって示されている。したがって、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合する抗ＨＢＶ剤を選択的に使用することによって特に高い抗ＨＢＶ効力が生じる。さらに、ＰＡＰＤ５、ＰＡＰＤ７、又は特にＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７を阻害する化合物がＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌の阻害、並びに細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産の阻害に関して非常に高い活性を有することが本発明によって初めて示されている。ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌を減少させることでＨＢｓＡｇの分泌の減少だけと比べて慢性ＨＢＶ感染症の発症がより効果的に抑制される。加えて、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌を阻害することによってＨＢＶ感染者の感染性が低下する。さらに、母親になる女性においてＨＢｅＡｇを減少させることによってその女性の子供での慢性ＨＢＶ感染症の発症も抑制可能である。したがって、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を阻害する化合物を選択的に使用することによってＨＢＶ感染症の治療においてＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇのかなり効果的な減少に関して改善された治療成果が生じることが本発明によって予期せず実証されている。
したがって、本発明の一態様はＨＢＶ感染症、特に慢性ＨＢＶ感染症の治療におけるＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤の使用である。追加の実施形態では本発明はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤をウイルス抗原であるＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの減少に使用することに関する。
したがって、本発明はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤であって、
（ｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合する小分子、
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、
（ｉｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的に結合する抗体、又は
（ｉｖ）次のものを含むゲノム編集装置
（ａ）部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼ、又は部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド、及び
（ｂ）ガイドＲＮＡ、又はガイドＲＮＡをコードするポリヌクレオチド
である前記阻害剤に関する。
本発明の阻害剤はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的なロックド核酸（ＬＮＡ）分子であってもよい。
ＨＢＶ感染症を治療（例えば改善）するために本発明の阻害剤を使用することを企図している。
前記阻害剤はＰＡＰＤ７を特異的に阻害する分子であり得る。前記阻害剤はＰＡＰＤ５を特異的に阻害する分子であることが好ましい。前記阻害剤がＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の両方を阻害することがより好ましい。したがって、本発明の阻害剤がＰＡＰＤ５を阻害するか、又はＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の両方を阻害するかのどちらかであることが優先される。本発明の阻害剤がＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７を阻害することが最も好ましい。本発明の１つの態様では本発明の阻害剤によってＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の両方が阻害され、且つ、無薬品対照と比較して（すなわち薬品が投与されなかった細胞又は対象と比較して）少なくとも５０％のＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの分泌の減少が生じる。
本発明の阻害剤はＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの阻害に関して３μＭ未満、好ましくは２μＭ未満、より好ましくは１μＭ、より好ましくは０．１μＭ未満、及び最も好ましくは０．０１μＭ未満のＩＣ50値を有してよい。
部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼ（Ｃａｓ９又はＣｐｆ１等）及びガイドＲＮＡを使用することによるゲノム編集は当技術分野において一般的に知られており、且つ、例えば「ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、２０１６年、Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｄｏｕｄｎａ編、ＩＳＢＮ ９７８−１−６２１８２１−３１−１に記載されている。
例えば、前記部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼがＣａｓ９ヌクレアーゼである場合、前記ゲノム編集装置は
（ｉ）少なくとも１種類の標的配列特異的ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）分子と少なくとも１種類のトランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）分子から成る少なくとも１種類のガイドＲＮＡ、
（ｉｉ）前記（ｉ）のＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）少なくとも１種類の標的配列特異的ｃｒＲＮＡと少なくとも１種類のｔｒａｃｒＲＮＡを含むキメラＲＮＡ分子である少なくとも１種類のガイドＲＮＡ、又は
（ｉｖ）前記（ｉｉｉ）のキメラＲＮＡをコードするポリヌクレオチド
をさらに含むことが好ましい。
代わりの例では前記部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼはＣｐｆ１ヌクレアーゼであり、前記ゲノム編集装置は
（ｉ）標的配列特異的ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）分子を含む少なくとも１種類のガイドＲＮＡ、又は
（ｉｉ）前記（ｉ）のＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド
をさらに含むことが好ましい。
ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の本明細書において提供される阻害剤は少なくとも１種類の組立て済みのＣａｓ９タンパク質−ガイドＲＮＡリボヌクレオタンパク質複合体（ＲＮＰ）を含むゲノム編集装置であってもよい。
本明細書では前記ガイドＲＮＡはＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のゲノムＤＮＡを標的とするように設計される。あるいは、ＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７のゲノムＤＮＡを標的とすることができるように幾つかのガイドＲＮＡが使用される。ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）を介してＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７のゲノムＤＮＡにフレームシフトノックアウト突然変異を導入することにより、又は相同組換え修復（ＨＤＲ）を介してＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７のゲノムＤＮＡを改変することにより達成可能である。どのようにこれらの機構を誘導することができるかは当技術分野において一般的に知られており、且つ、例えばＨｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ， ２０１６， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １７ ３６−４４に記載されている。
本発明の阻害剤は天然分子、例えば天然抗体又は天然ＲＮＡｉ分子であり得る。しかしながら本発明の阻害剤は非天然分子であってもよい。例えば、本発明の阻害剤は天然抗体と同じではないアミノ酸配列を有する抗体であってよく、又は類似の側鎖官能基を提供する合成アミノ酸などの少なくとも１つの非天然アミノ酸残基を含む抗体であってよい。例えば、芳香族アミノ酸はＤ−又はＬ−ナフチルアラニン、Ｄ−又はＬ−フェニルグリシン、Ｄ−又はＬ−２−チエニルアラニン、Ｄ−又はＬ−１−、２−、３−、又は４−ピレニルアラニン、Ｄ−又はＬ−３−チエニルアラニン、Ｄ−又はＬ−（２−ピリジニル）−アラニン、Ｄ−又はＬ−（３−ピリジニル）−アラニン、Ｄ−又はＬ−（２−ピラジニル）−アラニン、Ｄ−又はＬ−（４−イソプロピル）−フェニルグリシン、Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルグリシン、Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルアラニン、Ｄ−ｐ−フルオロフェニルアラニン、Ｄ−又はＬ−ｐ−ビフェニルアラニン、Ｄ−又はＬ−ｐ−メトキシビフェニルアラニン、Ｄ−又はＬ−２−インドール（アルキル）アラニン、及びＤ−又はＬ−アルキルアラニンによって置き換えられてよく、その場合に前記アルキル基は置換型又は非置換型のメチル、エチル、プロピル、ヘキシル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソブチル、及びイソペンチルからなる群より選択される。非限定的な例として考えるべきであるが、ホスホノアミノ酸又は硫酸化アミノ酸によって提供されるように、負の電荷を有するように非カルボン酸系アミノ酸を作製することができる。その他の非天然アミノ酸はいずれかの天然アミノ酸とアルキル基を組み合わせることにより作製されるアルキル化アミノ酸である。リシン及びアルギニンなどの塩基性天然アミノ酸をアミン（ＮＨ2）官能基においてアルキル基で置換してもよい。非天然アミノ酸上のさらに他の置換にはアスパラギン又はグルタミンのニトリル誘導体（例えば、ＣＯＮＨ2官能基の位置にＣＮ部分を含む誘導体）、及びメチオニンのスルフオキシド誘導体が含まれる。
同様に本発明の阻害剤は天然ＲＮＡｉ分子と同じではないヌクレオチド配列を有するＲＮＡｉ分子であってよく、又は少なくとも１つの非天然ヌクレオチド、例えばオリゴヌクレオチドチオホスフェート、置換リボオリゴヌクレオチド、ＬＮＡ分子、ＰＮＡ分子、ＧＮＡ（グリコール核酸）分子、ＴＮＡ（トレオース核酸）分子、モルホリノポリヌクレオチドを含む、若しくはポリシロキサン、２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチルホスホロチオエートなどの修飾型骨格を有する核酸を含む、若しくはメチルヌクレオシド、チオヌクレオシド、サルフェートヌクレオシド、ベンゾイルヌクレオシド、フェニルヌクレオシド、アミノヌクレオシド、プロピルヌクレオシド、クロロヌクレオシド、及びメタノカルバヌクレオシドなどの置換基を有する核酸を含む、若しくは検出を容易にするためのレポーター分子を含むＲＮＡｉ分子であってよい。本発明の阻害剤は天然又は非天然の小分子又はゲノム編集装置であってもよい。
本発明の背景では本明細書において提供される阻害剤は
（ｉ）ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合し、且つ／又は
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を阻害する
ことが可能である。
例えば、本発明の阻害剤はＰＡＰＤ５ポリペプチドに結合し、ＰＡＰＤ５ポリペプチドの活性を阻害してよい。別の例では本発明の阻害剤はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合し、ＰＡＰＤ７ポリペプチドの活性を阻害する。前記阻害剤がＰＡＰＤ５ポリペプチドとＰＡＰＤ７ポリペプチドの両方に結合し、ＰＡＰＤ５ポリペプチドとＰＡＰＤ７ポリペプチドの両方の活性を阻害することが本明細書においては優先される。本発明の阻害剤はＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７の発現を阻害してもＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の両方の発現を阻害してもよい。
上で説明したようにＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を阻害する化合物がＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌の阻害、並びに細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産の阻害に関して高い活性を有することが本発明の背景において示されている。したがって、本発明の阻害剤はＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌を減少させる。本発明の阻害剤はＨＢｓＡｇ分泌の減少によって慢性ＨＢＶ感染症の発症を抑制する。特に、本発明の阻害剤はＨＢｅＡｇ分泌の阻害により、ＨＢｓＡｇ分泌だけを減少させる化合物と比較してより効率的に慢性ＨＢＶ感染症の発症を抑制する。加えて、母親になる女性においてＨＢｅＡｇを減少させることによってその女性の子供での慢性ＨＢＶ感染症の発症も抑制可能である。したがって、本発明の阻害剤はＨＢｅＡｇ分泌の減少によって慢性ＨＢＶ感染症の発症（例えば、ＨＢＶに感染した母親の子供における慢性ＨＢＶ感染症の発症）を抑制し、且つ、ＨＢＶ感染者の感染性を低下させる。したがって、本発明の１つの態様はＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌を減少させる本明細書において提供される阻害剤に関した。これと一致して本発明の追加の態様は慢性ＨＢＶ感染症の発症を抑制し、且つ、ＨＢＶ感染者の感染性を低下させる本明細書において提供される阻害剤に関する。本発明の特定の態様では本明細書において提供される阻害剤はＨＢＶに感染した母親の子供における慢性ＨＢＶ感染症の発症を抑制する。この母親はＨＢｅＡｇ陽性であることが好ましい。
本発明の阻害剤で治療される対象（又は本発明の阻害剤を予防目的で受容する対象）はヒトであることが好ましく、ＨＢｓＡｇ陽性及び／又はＨＢｅＡｇ陽性のヒト患者であることがより好ましく、ＨＢｓＡｇ陽性及びＨＢｅＡｇ陽性のヒト患者であることがさらにより好ましい。前記ヒト患者は母親になる女性、例えばＨＢｅＡｇ陽性及び／又はＨＢｓＡｇ陽性である母親になる女性であってよく、より好ましくはＨＢｅＡｇ陽性及びＨＢｓＡｇ陽性である母親になる女性であってよい。
本発明の化合物
上で説明したように本発明の阻害剤は小分子であり得る。例えば、本発明の阻害剤は式（Ｉ）の化合物、
式中、
Ｒ1が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルアミノ、又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ2が水素；ハロゲン；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルコキシ；シアノ；Ｃ3~7シクロアルキル；ヒドロキシ又はフェニル−ＣxＨ2x−Ｏ−であり、
Ｒ3が水素；
ハロゲン；
非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；
シアノ；
ピロリジニル；
アミノ；
フェニル−ＣxＨ2x−Ｎ（Ｃ1~6アルキル）−；
Ｃ1~6アルコキシカルボニルピペラジニル；
又はＲ7が水素；非置換型であるか、若しくはフルオロ、ヒドロキシ、及びＣ2~6アルケニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；アミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル；シアノＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；シアノＣ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；フェニルＣ1~6アルキル；ピロリジニルカルボニルＣ1~6アルキル；Ｃ2~6アルキニル；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ2~6アルキニル；アミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；ジＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；カルボキシＣ1~6アルキル；若しくはＣ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~8アルキル；ヘテロアリールがＮ含有単環式ヘテロアリールであるヘテロアリールＣ1~6アルキル；若しくはヘテロシクロアルキルが単環式ヘテロシクロアルキルであるヘテロシクロアルキルＣ1~6アルキルであるＲ7−Ｏ−であり、
Ｒ4が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、シアノ、又はＣ1~6アルコキシであり、
ただしＲ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4が同時に水素ではないことを条件とし、
Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6が水素；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；非置換型であるか、又はフルオロ若しくはＣ1~6アルキルによって１回、２回、又は３回置換されているＣ3~7シクロアルキル；又はフェニル−ＣxＨ2x−であり、
ｘが１〜６である前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー、又は前記化合物のジアステレオマーであってよく、又は式（ＩＩ）の化合物、
式中
Ｒ1がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ1~6アルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、ニトロＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルＣ1~6アルキル、カルボキシＣ1~6アルキル、ジ（Ｃ1~6アルコキシカルボニル）メチレニル、シアノＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル、フェニルＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル、アミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~6アルキル、アミノカルボニルＣ1~6アルキル、ジＣ1~6アルキルアミノカルボニルＣ1~6アルキル、単環式ヘテロシクロアルキルＣ1~6アルキル、又はイミダゾリルＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がアリール又はヘテロアリールであり、前記アリール又はヘテロアリールが非置換型であるか、又はＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロゲン、ハロＣ1~6アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6、−ＮＲ9Ｒ10、−ＳＯ2−Ｒ11、−ＳＯ2−ＮＲ12Ｒ13、カルボキシ、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ12Ｒ13、アリール、ヘテロアリール、単環式ヘテロシクロアルキル、及び−Ｏ−単環式ヘテロシクロアルキルから独立して選択される１個、２個、３個、又は４個、の置換基で置換されており、その場合に単環式ヘテロシクロアルキルは非置換型であるか、又はＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、若しくはＣ1~6アルコキシカルボニルによって置換されており、
Ｒ3が水素；Ｃ3~7シクロアルキル；ハロＣ3~7シクロアルキル；ヒドロキシ；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル；Ｃ1~6アルコキシ；単環式ヘテロシクロアルキル；Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキル、又はＣ1~6アルコキシカルボニルによって置換されている単環式ヘテロシクロアルキル；−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4；Ｃ1~6アルキルスルフィニル；−ＳＯ2−Ｒ5；−Ｃ（ＮＨＲ7）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ8；カルボキシＣ1~6アルコキシ、又はアミノカルボニルＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、ジＣ1~6アルキルアミノ、テトラヒドロフラニルアミノ、ピロリジニル、又はモルホリニルであり、
Ｒ5がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、又はジＣ1~6アルキルアミノであり、
Ｒ7が水素又はＣ1~6アルコキシカルボニルであり、
Ｒ8がヒドロキシ又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ6が水素、Ｃ1~6アルキルカルボニル、ハロＣ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、
Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキルスルホニル、又はＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルスルホニルであり、
Ｒ9及びＲ10が水素、Ｃ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキルカルボニル、及びＣ3~7シクロアルキルスルホニルから独立して選択され、又は
Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらが単環式ヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｒ11がＣ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ3~7シクロアルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル、アミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル、ジＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルフェニルＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル、又はＣ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキルであり、
Ｒ12及びＲ13が水素、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、及びハロＣ3~7シクロアルキルから独立して選択され、又は
Ｒ12及びＲ13が結合している窒素と一緒にそれらが単環式ヘテロシクロアルキルを形成し、
ｘが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ｙが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
Ｕ、Ｗ、及びＺがＣＨ及びＮから独立して選択され、
Ｘ及びＹのうちの一方がＮであり、他方がＣＨ又はＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー、又は前記化合物のジアステレオマーであってよい。
本発明の１つの態様では６−メチル−２−オキソ−９−ピロリジン−１−イル−６，７−ジヒドロベンゾ［ａ］キノリジン−３−カルボン酸、９−フルオロ−６−メチル−２−オキソ−６，７−ジヒドロベンゾ［ａ］キノリジン−３−カルボン酸、及び９，１０−ジフルオロ−６−メチル−２−オキソ−６，７−ジヒドロベンゾ［ａ］キノリジン−３−カルボン酸が式（Ｉ）の化合物から除外される。
本発明の１つの特定の実施形態では式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物が本発明の阻害剤から除外される。したがって、本発明の１つの実施形態は式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物ではない本発明の阻害剤に関する。
上で説明したように抗ＨＢＶ剤であるＤＨＱ（すなわち式（ＩＩＩ）の化合物）及びＴＨＰ（すなわち式（ＩＶ）の化合物）がＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に効率的に結合することが添付実施例によって実証されている。したがって、本発明の阻害剤が式（ＩＩＩ）又は式（ＩＶ）の化合物であることが本発明の背景では優先される。
リンカーリガンド及びアンカーリガンドを有する式（ＩＩＩ）及び式（ＩＶ）の化合物の派生物がＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に対する結合親和性を有することも添付実施例に示されている。これらの派生物はそれぞれ式（Ｖ）及び式（ＶＩ）として下に示されている。したがって、本発明の１つの態様では本発明の阻害剤は式（Ｖ）又は式（ＶＩ）の化合物である。
本発明の背景では本発明の阻害剤は式（Ｉ）の化合物であってよく、その場合に前記阻害剤は以下の項目（１）〜（１９）において規定される化合物のうちのいずれか１つである。
１．式（Ｉ）の化合物であって、式中
Ｒ1が水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、メチルアミノ、メトキシ、又はエトキシであり、
Ｒ2が水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、トリフルオロメトキシ、シアノ、シクロプロピル、ヒドロキシ又はフェニルメチル−Ｏ−であり、
Ｒ3が水素、ブロモ、メチル、プロピル、トリフルオロメチル、シアノ、フェニルメチル−Ｎ（メチル）−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジニル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ジフルオロメチルメチル−Ｏ−、ジフルオロメチルエチル−Ｏ−、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルメチル−Ｏ−、トリフルオロメチルエチル−Ｏ−、エチルジフルオロメチル−Ｏ−、ビニルジフルオロメチル−Ｏ−、プロパルギル−Ｏ−、ヒドロキシメチルプロパルギル−Ｏ−、メトキシエチル−Ｏ−、メトキシプロピル−Ｏ−、メトキシブチル−Ｏ−、エトキシエチル−Ｏ−、メトキシエチル−Ｏ−エチル−Ｏ−、アミノエチル−Ｏ−、アミノペンチル−Ｏ−、アミノヘキシル−Ｏ−、アミノオクチル−Ｏ−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンチル−Ｏ−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノヘキシル−Ｏ−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノオクチル−Ｏ−、メチルカルボニルアミノエチル−Ｏ−、メチルカルボニルアミノペンチル−Ｏ−、メチルスルホニルアミノエチル−Ｏ−、メチルスルホニルアミノペンチル−Ｏ−、メチルスルホニルエチル−Ｏ−、メチルスルホニルプロピル−Ｏ−、メチルスルファニルプロピル−Ｏ−、シアノプロピル−Ｏ−、シアノシクロプロピルメチル−Ｏ−、シクロプロピルメチル−Ｏ−、シクロヘキシルエチル−Ｏ−、ヒドロキシエチル−Ｏ−、ヒドロキシプロピル−Ｏ−、ヒドロキシ−ジメチルプロピル−Ｏ−、ヒドロキシ−ジフルオロプロピル−Ｏ−、ヒドロキシブチル−Ｏ−、ヒドロキシペンチル−Ｏ−、ヒドロキシヘキシル−Ｏ−、アミノエチル−Ｏ−プロピル−Ｏ−、エチルアミノ−エチル−Ｏ−プロピル−Ｏ−、イミダゾリルエチル−Ｏ−、ピラゾリルプロピル−Ｏ−、トリアゾリルプロピル−Ｏ−、モルホリニルエチル−Ｏ−、モルホリニルプロピル−Ｏ−、（２−オキソ−ピロリジニル）エチル−Ｏ−、（２−オキソ−ピロリジニル）プロピル−Ｏ−、フェニルメチル−Ｏ−、フェニルエチル−Ｏ−、ピロリジニルエチル−Ｏ−、ピロリジニルプロピル−Ｏ−、ピロリジニルカルボニルメチル−Ｏ−、テトラヒドロピラニルメチル−Ｏ−、又はカルボキシプロピル−Ｏ−であり、
Ｒ4が水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、又はシアノであり、
ただしＲ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4が同時に水素ではないことを条件とし、
Ｒ5が水素又はメチルであり、
Ｒ6が水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメチルメチル、シクロプロピル、シクロブチル、メチルシクロプロピル、又はフェニルメチルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
２．式（Ｉ）の化合物であって、式中
Ｒ1が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキルアミノ、又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ2が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシ、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシ、又はフェニル−ＣxＨ2x−Ｏ−であり、
Ｒ3が水素；
ハロゲン；
Ｃ1~6アルキル；
シアノ；
フェニル−ＣxＨ2x−Ｎ（Ｃ1~6アルキル）−；
Ｃ1~6アルコキシカルボニルピペラジニル；
又はＲ7が水素；非置換型であるか、若しくはフルオロ、ヒドロキシ、及びＣ2~6アルケニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；アミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル；シアノＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；シアノＣ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；フェニルＣ1~6アルキル；ピロリジニルカルボニルＣ1~6アルキル；Ｃ2~6アルキニル；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ2~6アルキニル；アミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；カルボキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~8アルキル；ヘテロアリールがＮ含有単環式ヘテロアリールであるヘテロアリールＣ1~6アルキル；若しくはヘテロシクロアルキルが単環式ヘテロシクロアルキルであるヘテロシクロアルキルＣ1~6アルキルであるＲ7−Ｏ−であり、
Ｒ4が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、又はシアノであり、
ただしＲ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4が同時に水素ではないことを条件とし、
Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6が水素；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキル；Ｃ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル；又はフェニル−ＣxＨ2x−であり、
ｘが１〜６である前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
３．式（Ｉ）又は項目１又は２に記載の化合物であって、
式中、
Ｒ1が水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチルアミノ、メトキシ、又はエトキシであり、
Ｒ2が水素、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、シクロプロピル、ヒドロキシ、又はフェニルメチル−Ｏ−であり、
Ｒ3が水素、ブロモ、メチル、プロピル、シアノ、フェニルメチル−Ｎ（メチル）−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジニル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ジフルオロメチルメチル−Ｏ−、ジフルオロメチルエチル−Ｏ−、トリフルオロメチルメチル−Ｏ−、エチルジフルオロメチル−Ｏ−、ビニルジフルオロメチル−Ｏ−、プロパルギル−Ｏ−、ヒドロキシメチルプロパルギル−Ｏ−、メトキシエチル−Ｏ−、メトキシプロピル−Ｏ−、メトキシブチル−Ｏ−、エトキシエチル−Ｏ−、メトキシエチル−Ｏ−エチル−Ｏ−、アミノエチル−Ｏ−、アミノペンチル−Ｏ−、アミノヘキシル−Ｏ−、アミノオクチル−Ｏ−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンチル−Ｏ−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノヘキシル−Ｏ−、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノオクチル−Ｏ−、メチルカルボニルアミノエチル−Ｏ−、メチルカルボニルアミノペンチル−Ｏ−、メチルスルホニルアミノエチル−Ｏ−、メチルスルホニルアミノペンチル−Ｏ−、メチルスルホニルエチル−Ｏ−、メチルスルホニルプロピル−Ｏ−、メチルスルファニルプロピル−Ｏ−、シアノプロピル−Ｏ−、シアノシクロプロピルメチル−Ｏ−、シクロプロピルメチル−Ｏ−、シクロヘキシルエチル−Ｏ−、ヒドロキシエチル−Ｏ−、ヒドロキシプロピル−Ｏ−、ヒドロキシ−ジメチルプロピル−Ｏ−、ヒドロキシ−ジフルオロプロピル−Ｏ−、ヒドロキシブチル−Ｏ−、ヒドロキシペンチル−Ｏ−、ヒドロキシヘキシル−Ｏ−、アミノエチル−Ｏ−プロピル−Ｏ−、エチルアミノ−エチル−Ｏ−プロピル−Ｏ−、イミダゾリルエチル−Ｏ−、ピラゾリルプロピル−Ｏ−、トリアゾリルプロピル−Ｏ−、モルホリニルエチル−Ｏ−、モルホリニルプロピル−Ｏ−、（２−オキソ−ピロリジニル）エチル−Ｏ−、（２−オキソ−ピロリジニル）プロピル−Ｏ−、フェニルメチル−Ｏ−、フェニルエチル−Ｏ−、ピロリジニルエチル−Ｏ−、ピロリジニルプロピル−Ｏ−、ピロリジニルカルボニルメチル−Ｏ−、テトラヒドロピラニルメチル−Ｏ−、又はカルボキシプロピル−Ｏ−であり、
Ｒ4が水素、クロロ、ブロモ、メチル、又はシアノであり、
ただしＲ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4が同時に水素ではないことを条件とし、
Ｒ5が水素又はメチルであり、
Ｒ6が水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメチルメチル、シクロプロピル、シクロブチル、メチルシクロプロピル、又はフェニルメチルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
４．式（Ｉ）又は項目２に記載の化合物であって、式（ＩＡ）の化合物である前記化合物であり、
式中、
Ｒ1が水素、ハロゲン、又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ2が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシ、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシ、又はフェニル−ＣxＨ2x−Ｏ−であり、
Ｒ4が水素又はハロゲンであり、
Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6が水素；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキル；Ｃ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル；又はフェニル−ＣxＨ2x−であり、
Ｒ7が水素；非置換型であるか、又はフルオロ、ヒドロキシ、及びエテニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；アミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル；シアノＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；シアノＣ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；フェニルＣ1~6アルキル；ピロリジニルカルボニルＣ1~6アルキル；Ｃ2~6アルキニル；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ2~6アルキニル；アミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；カルボキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~8アルキル；ヘテロアリールがＮ含有単環式ヘテロアリールであるヘテロアリールＣ1~6アルキル；又はヘテロシクロアルキルが単環式ヘテロシクロアルキルであるヘテロシクロアルキルＣ1~6アルキルであり、
ｘが１〜６である前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
５．項目４に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素、フルオロ、クロロ、又はメトキシであり、
Ｒ2が水素、フルオロ、クロロ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、シクロプロピル、ヒドロキシ、又はフェニルメチル−Ｏ−であり、
Ｒ4が水素又はクロロであり、
Ｒ5が水素又はメチルであり、
Ｒ6が水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメチルメチル、シクロプロピル、シクロブチル、メチルシクロプロピル、又はフェニルメチルであり、
Ｒ7が水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ジフルオロメチルメチル、ジフルオロメチルエチル、トリフルオロメチルメチル、エチルジフルオロメチル、ビニルジフルオロメチル、プロパルギル、ヒドロキシメチルプロパルギル、メトキシエチル、メトキシプロピル、メトキシブチル、エトキシエチル、メトキシエチル−Ｏ−エチル、アミノエチル、アミノペンチル、アミノヘキシル、アミノオクチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノヘキシル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノオクチル、メチルカルボニルアミノエチル、メチルカルボニルアミノペンチル、メチルスルホニルアミノエチル、メチルスルホニルアミノペンチル、メチルスルホニルエチル、メチルスルホニルプロピル、メチルスルファニルプロピル、シアノプロピル、シアノシクロプロピルメチル、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルエチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシ−ジメチルプロピル、ヒドロキシ−ジフルオロプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル、ヒドロキシヘキシル、アミノエチル−Ｏ−プロピル、エチルアミノ−エチル−Ｏ−プロピル−、イミダゾリルエチル、ピラゾリルプロピル、トリアゾリルプロピル、モルホリニルエチル、モルホリニルプロピル、（２−オキソ−ピロリジニル）エチル、（２−オキソ−ピロリジニル）プロピル、フェニルメチル、フェニルエチル、ピロリジニルエチル、ピロリジニルプロピル、ピロリジニルカルボニルメチル、テトラヒドロピラニルメチル、又はカルボキシプロピルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
６．項目４に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素又はハロゲンであり、
Ｒ2がＣ1~6アルキル、ハロゲン、又はＣ3~7シクロアルキルであり、
Ｒ4が水素であり、
Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6がＣ1~6アルキル又はＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキルであり、
Ｒ7がＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；又はフェニルＣ1~6アルキルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
７．項目６に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素、フルオロ、又はクロロであり、
Ｒ2がメチル、エチル、フルオロ、クロロ、又はシクロプロピルであり、
Ｒ4が水素であり、
Ｒ5が水素又はメチルであり、
Ｒ6がメチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、又はメチルシクロプロピルであり、
Ｒ7がメチル、エチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、又はフェニルメチルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
８．項目４に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素であり、
Ｒ2がＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ4が水素又はハロゲンであり、
Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6が水素；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキル；Ｃ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル；又はフェニル−ＣxＨ2x−であり、
Ｒ7が水素；非置換型であるか、又はフルオロ、ヒドロキシ、及びＣ2~6アルケニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；アミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル；シアノＣ1~6アルキル；シアノＣ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；フェニルＣ1~6アルキル；ピロリジニルカルボニルＣ1~6アルキル；Ｃ2~6アルキニル；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ2~6アルキニル；アミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；カルボキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~8アルキル；イミダゾリルＣ1~6アルキル；ピラゾリルＣ1~6アルキル；トリアゾリルＣ1~6アルキル；モルホリニルＣ1~6アルキル；（２−オキソ−ピロリジニル）Ｃ1~6アルキル；ピロリジニルＣ1~6アルキル；又はテトラヒドロピラニルＣ1~6アルキルであり、
ｘが１〜６である前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
９．項目８に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素であり、
Ｒ2がメトキシ、エトキシ、又はプロポキシであり、
Ｒ4が水素又はクロロであり、
Ｒ5が水素又はメチルであり、
Ｒ6が水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、トリフルオロメチル、トリフルオロメチルメチル、シクロプロピル、シクロブチル、メチルシクロプロピル、又はフェニルメチルであり、
Ｒ7が水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ジフルオロメチルメチル、ジフルオロメチルエチル、トリフルオロメチルメチル、エチルジフルオロメチル、ビニルジフルオロメチル、プロパルギル、ヒドロキシメチルプロパルギル、メトキシエチル、メトキシプロピル、メトキシブチル、エトキシエチル、メトキシエチル−Ｏ−エチル、アミノエチル、アミノペンチル、アミノヘキシル、アミノオクチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノヘキシル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノオクチル、メチルカルボニルアミノエチル、メチルカルボニルアミノペンチル、メチルスルホニルアミノエチル、メチルスルホニルアミノペンチル、メチルスルホニルエチル、メチルスルホニルプロピル、メチルスルファニルプロピル、シアノプロピル、シアノシクロプロピルメチル、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルエチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシ−ジメチルプロピル、ヒドロキシ−ジフルオロプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル、ヒドロキシヘキシル、アミノエチル−Ｏ−プロピル、エチルアミノ−エチル−Ｏ−プロピル−、イミダゾリルエチル、ピラゾリルプロピル、トリアゾリルプロピル、モルホリニルエチル、モルホリニルプロピル、（２−オキソ−ピロリジニル）エチル、（２−オキソ−ピロリジニル）プロピル、フェニルメチル、フェニルエチル、ピロリジニルエチル、ピロリジニルプロピル、ピロリジニルカルボニルメチル、テトラヒドロピラニルメチル、又はカルボキシプロピルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１０．項目４に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素又はハロゲンであり、
Ｒ2がハロゲン、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシ、又はＣ3~7シクロアルキルであり、
Ｒ4が水素であり、
Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6が非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキル、又はＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキルであり、
Ｒ7が非置換型であるか、又はフルオロ及びヒドロキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；アミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；フェニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~8アルキル；モルホリニルＣ1~6アルキル又はテトラヒドロピラニルＣ1~6アルキルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１１．項目１０に記載の化合物であって、
Ｒ1が水素、フルオロ、又はクロロであり、
Ｒ2がフルオロ、クロロ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、又はシクロプロピルであり、
Ｒ4が水素であり、
Ｒ5が水素又はメチルであり、
Ｒ6がメチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、トリフルオロメチルメチル、シクロブチル、又はメチルシクロプロピルであり、
Ｒ7がメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、シクロプロピルメチル、ジフルオロメチルメチル、ジフルオロエチルメチル、ジフルオロメチルエチル、トリフルオロメチルメチル、エチルジフルオロメチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、エトキシエチル、アミノヘキシル、アミノオクチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノペンチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノオクチル、メチルカルボニルアミノペンチル、メチルスルホニルアミノペンチル、メチルスルホニルプロピル、メチルスルファニルプロピル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシ−ジメチルプロピル、ヒドロキシ−ジフルオロプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル、ヒドロキシヘキシル、エチルアミノ−エチル−Ｏ−プロピル−、モルホリニルエチル、モルホリニルプロピル、フェニルメチル、又はテトラヒドロピラニルメチルである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１２．Ｒ1が水素である、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１３．Ｒ2がハロゲン又はＣ1~6アルコキシである、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１４．Ｒ2がクロロ又はメトキシである、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１５．Ｒ5が水素である、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１６．Ｒ6がＣ1~6アルキル又はＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキルである、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１７．Ｒ6がエチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、又はメチルシクロプロピルである、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１８．Ｒ7がＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、又はアミノＣ1~6アルキルである、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
１９．Ｒ7がメトキシエチル、メトキシプロピル、ヒドロキシジメチルプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル、ヒドロキシヘキシル、アミノブチル、アミノペンチル、又はアミノヘキシルである、式（Ｉ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
本発明の背景では本発明の阻害剤は式（ＩＩ）の化合物であってもよく、その場合に前記阻害剤は以下の項目（１）〜（２０）において規定される化合物のうちのいずれか１つである。
１．式（ＩＩ）の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルＣ1~6アルキル、又はカルボキシＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロゲン、ハロＣ1~6アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、テトラヒドロフラニルオキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6、−ＳＯ2−Ｒ11 、−ＳＯ2−ＮＲ12Ｒ13、カルボキシ、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、及び−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ12Ｒ13から独立して選択される１個、２個、３個、又は４個の基によって置換されているフェニル；ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルコキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及びＮＲ9Ｒ10から独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているピリジニル；又はＣ1~6アルキル及びジＣ1~6アルキルアミノによって置換されているピリミジニルであり、その場合に
Ｒ3が水素、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ3~7シクロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル、Ｃ1~6アルコキシ、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、チエタニル、１，１−ジオキソチエタニル、１，１−ジオキソチオラニル、モルホリニル、オキソピロリジニル、オキソモルホリニル、オキソピペラジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルオキソピペラジニル、オキソイミダゾリジニル、Ｃ1~6アルキルピペラジニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルピペラジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルピペラジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルピペラジニル、アゼチジニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアゼチジニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、Ｃ1~6アルキルスルフィニル、−ＳＯ2−Ｒ5、−Ｃ（ＮＨＲ7）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ8、カルボキシＣ1~6アルコキシ又はアミノカルボニルＣ1~6アルコキシであり、その場合に
Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、ジＣ1~6アルキルアミノ、テトラヒドロフラニルアミノ、ピロリジニル、又はモルホリニルであり、
Ｒ5がＣ1~6アルキル、ヒドロキシ、又はアミノであり、
Ｒ7が水素又はＣ1~6アルコキシカルボニルであり、
Ｒ8がヒドロキシ又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ6が水素、Ｃ1~6アルキルカルボニル、ハロＣ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキルスルホニル、又はＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルスルホニルであり、
Ｒ9及びＲ10が水素、Ｃ1~6アルキル、及びＣ1~6アルキルスルホニルから独立して選択され、又は
Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらがピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、及びオキソピペラジニルを形成し、
Ｒ11がＣ1~6アルキル又はＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルであり、
Ｒ12及びＲ13が水素、Ｃ1~6アルキル、及びＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルから独立して選択され、
ｘが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ｙが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＣＨ又はＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
２．式（ＩＩ）又は項目１に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロゲン、ハロＣ1~6アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、テトラヒドロフラニルオキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6、−ＳＯ2−Ｒ11、−ＳＯ2−ＮＲ12Ｒ13、カルボキシ、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、及び−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ12Ｒ13から独立して選択される１個、２個、３個、又は４個の基によって置換されているフェニル；ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルコキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及びＮＲ9Ｒ10から独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているピリジニル；又はＣ1~6アルキル及びジＣ1~6アルキルアミノによって置換されているピリミジニルであり、その場合に
Ｒ3が水素、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ3~7シクロアルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、チエタニル、１，１−ジオキソチエタニル、１，１−ジオキソチオラニル、オキソピロリジニル、オキソモルホリニル、オキソピペラジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルオキソピペラジニル、オキソイミダゾリジニル、Ｃ1~6アルキルピペラジニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルピペラジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルピペラジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルピペラジニル、アゼチジニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアゼチジニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、Ｃ1~6アルキルスルフィニル、−ＳＯ2−Ｒ5、−Ｃ（ＮＨＲ7）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ8、カルボキシＣ1~6アルコキシ又はアミノカルボニルＣ1~6アルコキシであり、その場合に
Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、テトラヒドロフラニルアミノ、又はモルホリニルであり、
Ｒ5がＣ1~6アルキル、ヒドロキシ、又はアミノであり、
Ｒ7が水素又はＣ1~6アルコキシカルボニルであり、
Ｒ8がヒドロキシ又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ6が水素、Ｃ1~6アルキルカルボニル、ハロＣ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、Ｃ3~7シクロアルキルスルホニル、又はＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルスルホニルであり、
Ｒ9及びＲ10が水素、Ｃ1~6アルキル、及びＣ1~6アルキルスルホニルから独立して選択され、又は
Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらがピロリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、及びオキソピペラジニルを形成し、
Ｒ11がＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルであり、
Ｒ12及びＲ13が水素、Ｃ1~6アルキル、及びＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルから独立して選択され、
ｘが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ｙが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
３．Ｒ1がメチルである、式（ＩＩ）、項目１、又は項目２に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
４．式（ＩＩ）、項目１、又は項目２に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロゲン、ハロＣ1~6アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、テトラヒドロフラニルオキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6、−ＳＯ2−Ｒ11、−ＳＯ2−ＮＲ12Ｒ13、カルボキシ、Ｃ1~6アルコキシカルボニル及び−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ12Ｒ13から独立して選択される１個、２個、３個、又は４個の基によって置換されているフェニルであり、
Ｒ3が水素、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ3~7シクロアルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、チエタニル、１，１−ジオキソチエタニル、１，１−ジオキソチオラニル、オキソピロリジニル、オキソモルホリニル、オキソピペラジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルオキソピペラジニル、オキソイミダゾリジニル、Ｃ1~6アルキルピペラジニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルピペラジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルピペラジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルピペラジニル、アゼチジニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアゼチジニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、Ｃ1~6アルキルスルフィニル、−ＳＯ2−Ｒ5、又は−Ｃ（ＮＨＲ7）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ8であり、その場合に
Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、テトラヒドロフラニルアミノ、又はモルホリニルであり、
Ｒ5がＣ1~6アルキル、ヒドロキシ、又はアミノであり、
Ｒ7が水素又はＣ1~6アルコキシカルボニルであり、
Ｒ8がヒドロキシ又はＣ1~6アルコキシであり、
Ｒ6が水素、Ｃ1~6アルキルカルボニル、ハロＣ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、Ｃ3~7シクロアルキルスルホニル、又はＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルスルホニルであり、
Ｒ11がＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルであり、
Ｒ12及びＲ13が水素、Ｃ1~6アルキル、及びＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルから独立して選択され、
ｘが１、２、３、４、５、又は６であり、
ｙが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
５．式（ＩＩ）又は項目１〜４のいずれか１項に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がメチルであり、
Ｒ2がメチル、シクロプロピル、フルオロ、クロロ、ヨード、トリフルオロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メトキシ、ジフルオロエトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、トリフルオロメトキシ、シクロプロピルメトキシ、ジフルオロシクロプロピルメトキシ、ヒドロキシメチルシクロプロピルメトキシ、オキセタニルエトキシ、オキセタニルメトキシ、テトラヒドロフラニルエトキシ、テトラヒドロフラニルメトキシ、テトラヒドロピラニルメトキシ、チエタニルメトキシ、（１，１−ジオキソチエタニル）メトキシ、（１，１−ジオキソチオラニル）メトキシ、オキソピロリジニルプロポキシ、オキソモルホリニルプロポキシ、オキソピペラジニルプロポキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキソピペラジニル）プロポキシ、オキソイミダゾリジニルプロポキシ、メチルピペラジニルプロポキシ、アセチルピペラジニルプロポキシ、メチルスルホニルピペラジニルプロポキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジニル）プロポキシ、アゼチジニルエトキシ、アセチルアゼチジニルエトキシ、メチルスルホニルアゼチジニルエトキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアゼチジニル）エトキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアゼチジニル）メトキシ、カルボキシブトキシ、カルボキシエトキシ、カルボキシヘキシルオキシ、カルボキシメトキシ、カルボキシプロポキシ、メトキシカルボニルブトキシ、エトキシカルボニルヘキシルオキシ、アミノカルボニルブトキシ、アミノカルボニルヘキシルオキシ、アミノカルボニルメトキシ、アミノカルボニルプロポキシ、メチルアミノカルボニルプロポキシ、テトラヒドロフラニルアミノカルボニルメトキシ、モルホリニルカルボニルメトキシ、メチルスルフィニルプロポキシ、メチルスルホニルプロポキシ、スルホプロポキシ、アミノスルホニルプロポキシ、アミノ−カルボキシ−プロポキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−カルボキシ−プロポキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−（メトキシカルボニル）−プロポキシ、アミノプロポキシ、アミノペントキシ、アミノヘキシルオキシ、アミノオクチルオキシ、メチルカルボニルアミノプロポキシ、クロロプロピルカルボニルアミノプロポキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキシルオキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）オクチルオキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペントキシ、（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシ、シクロプロピルスルホニルアミノプロポキシ、メトキシエチルスルホニルアミノプロポキシ、メトキシプロピルスルホニル、メトキシプロピルアミノスルホニル、Ｎ−メトキシプロピル−Ｎ−メチル−アミノスルホニル、カルボキシ、メトキシカルボニル、メトキシプロピルアミノカルボニル、Ｎ−メトキシプロピル−Ｎ−メチル−アミノカルボニル、及びテトラヒドロフラニルオキシから独立して選択される１個、２個、３個、又は４個の基によって置換されているフェニルであり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
６．Ｒ2がハロゲン、Ｃ1~6アルコキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルコキシ、及びハロＣ3~7シクロアルキルＣ1~6アルコキシから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているフェニルである、式（ＩＩ）又は項目１〜４のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
７．Ｒ2がフルオロ、クロロ、メトキシ、ジフルオロエトキシ、トリフルオロエトキシ、シクロプロピルメトキシ、及びジフルオロシクロプロピルメトキシから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているフェニルである、式（ＩＩ）又は項目１〜６のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
８．式（ＩＩ）又は項目１、２、及び４のいずれか１項に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がハロゲン、シアノ、ハロＣ1~6アルコキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及び−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6から独立して選択される２個又は３個の基によって置換されているフェニルであり、
Ｒ3が水素、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ3~7シクロアルキル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアゼチジニル、アミノカルボニル、又はＣ1~6アルキルスルホニルであり、
Ｒ6が水素又はＣ1~6アルコキシカルボニルであり、
ｘが１、２、３、４、５、又は６であり、
ｙが１、２、３、４、５、又は６であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
９．式（ＩＩ）又は項目１〜５及び８のいずれか１項に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がメチルであり、
Ｒ2がフルオロ、クロロ、シアノ、メトキシ、ジフルオロエトキシ、トリフルオロエトキシ、シクロプロピルメトキシ、ジフルオロシクロプロピルメトキシ、メチルスルホニルプロポキシ、アミノカルボニルメトキシ、オキセタニルメトキシ、オキセタニルエトキシ、テトラヒドロフラニルメトキシ、テトラヒドロピラニルメトキシ、メチルスルホニルアゼチジニルエトキシ、アミノヘキシルオキシ、及び（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロポキシから独立して選択される２個又は３個の基によって置換されているフェニルであり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１０．式（ＩＩ）又は項目１又は項目２に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がハロゲン、Ｃ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルコキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及びＮＲ9Ｒ10から独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているピリジニルであり、
Ｒ3が水素、Ｃ3~7シクロアルキル、チエタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、オキソモルホリニル、１，１−ジオキソチエタニル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアゼチジニル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアゼチジニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、カルボキシＣ1~6アルコキシ、又はアミノカルボニルＣ1~6アルコキシであり、その場合に
Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、又はアミノであり、
Ｒ9及びＲ10が水素、Ｃ1~6アルキル、及びＣ1~6アルキルスルホニルから独立して選択され、又は
Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらがピロリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、及びオキソピペラジニルを形成し、
ｘが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１１．式（ＩＩ）又は項目１〜３及び１０のいずれか１項に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がメチルであり、
Ｒ2がフルオロ、クロロ、ヨード、メトキシ、メチル、ジフルオロエトキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、シクロプロピルメトキシ、チエタニルメトキシ、テトラヒドロフラニルメトキシ、テトラヒドロピラニルメトキシ、オキソモルホリニルプロポキシ、（１，１−ジオキソチエタニル）メトキシ、アセチルアゼチジニルメトキシ、メチルスルホニルアゼチジニルメトキシ、カルボキシブトキシ、カルボキシヘプチルオキシ、カルボキシヘキシルオキシ、カルボキシペンチルオキシ、カルボキシプロポキシ、メトキシカルボニルヘプチルオキシ、アミノカルボニルブトキシ、アミノカルボニルヘプチルオキシ、アミノカルボニルヘキシルオキシ、アミノカルボニルメトキシ、アミノカルボニルペンチルオキシ、アミノカルボニルプロポキシ、カルボキシメトキシプロポキシ、アミノカルボニルメトキシプロポキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルスルホニルアミノ、ピロリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、及びオキソピペラジニルから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているピリジニルであり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１２．Ｒ2がハロゲン、Ｃ1~6アルコキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、Ｃ1~6アルキルアミノ、ジＣ1~6アルキルアミノ、ピロリジニル、及びオキソピペラジニルから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているピリジニルである、式（ＩＩ）又は項目１〜３及び１０のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１３．Ｒ2がフルオロ、クロロ、メトキシ、ジフルオロエトキシ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ピロリジニル、及びオキソピペラジニルから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているピリジニルである、式（ＩＩ）又は項目１〜３及び１０及び１１のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１４．式（ＩＩ）又は項目１、２、及び１０のいずれか１項に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がハロゲン、ハロＣ1~6アルコキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及びＮＲ9Ｒ10から独立して選択される２個又は３個の基によって置換されているピリジニルであり、
Ｒ3が水素、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、オキソモルホリニル、又はアミノカルボニルであり、
Ｒ9及びＲ10が水素及びＣ1~6アルキルから独立して選択され、又は
Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらがピロリジニル及びオキソピペラジニルを形成し、
ｘが１、２、３、４、５、又は６であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１５．式（ＩＩ）又は項目１又は項目６に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がメチルであり、
Ｒ2がフルオロ、クロロ、メトキシ、ジフルオロエトキシ、テトラヒドロフラニルメトキシ、テトラヒドロピラニルメトキシ、オキソモルホリニルプロポキシ、アミノカルボニルヘキシルオキシ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、ピロリジニル、及びオキソピペラジニルから独立して選択される２個又は３個の基によって置換されているピリジニルであり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＮであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１６．式（ＩＩ）又は項目１に記載の化合物であって、式中
Ｒ1がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルＣ1~6アルキル、又はカルボキシＣ1~6アルキルであり、
Ｒ2がハロゲン、ニトロ、Ｃ1~6アルキルスルホニル、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及び−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6から独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているフェニル；又はハロゲン、ハロＣ1~6アルコキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、及びＮＲ9Ｒ10から独立して選択される２個の基によって置換されているピリジニルであり、その場合に
Ｒ3が水素、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4、−ＳＯ2−Ｒ5、又はアミノカルボニルＣ1~6アルコキシであり、その場合に
Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、アミノ、ジＣ1~6アルキルアミノ、又はピロリジニルであり、
Ｒ5がＣ1~6アルキルであり、
Ｒ6が水素又はＣ1~6アルキルスルホニルであり、
Ｒ9及びＲ10がＣ1~6アルキルであり、又は
Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらがピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、及びオキソピペラジニルを形成し、
ｘが１、２、３、４、５、又は６であり、
ｙが１、２、３、４、５、又は６であり、
ＵがＣＨであり、
ＷがＣＨであり、
ＺがＣＨであり、
ＸがＮであり、
ＹがＮである前記化合物、
又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１７．Ｒ1がＣ1~6アルキルである、式（ＩＩ）又は項目１又は項目１６に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１８．Ｒ1がメチルである、式（ＩＩ）又は項目１、１６、及び１７のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
１９．Ｒ2がハロゲン及びＣ1~6アルコキシから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているフェニル；又はハロゲン、ジＣ1~6アルキルアミノ、ピロリジニル、及びオキソピペラジニルから独立して選択される２個の基によって置換されているピリジニルである、式（ＩＩ）又は項目１及び１６〜１８のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
２０．Ｒ2がフルオロ及びメトキシから独立して選択される１個、２個、又は３個の基によって置換されているフェニル；又はフルオロ、ジメチルアミノ、ピロリジニル、及びオキソピペラジニルから独立して選択される２個の基によって置換されているピリジニルである、式（ＩＩ）又は項目１及び１６〜１９のいずれか１項に記載の化合物、又は前記化合物の薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー若しくはジアステレオマー。
上で説明したように本発明の阻害剤はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対するＲＮＡｉ分子であってもよい。前記ＲＮＡｉ分子はｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡであり得る。
例えば、本発明の阻害剤はＰＡＰＤ５向けのｓｉＲＮＡであってよく、その場合に前記ｓｉＲＮＡは以下のｓｉＲＮＡのうちのいずれか１つである。
ＰＡＰＤ５ ｓｉＲＮＡプール（Ｌ−０１００１１−００−００１０；ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓヒトＰＡＰＤ５）：
ｓｉＲＮＡ−１‐Ｊ−０１００１１−０５−標的配列：ＣＡＵＣＡＡＵＧＣＵＵＵＡＵＡＵＣＧＡ（配列番号１０）
ｓｉＲＮＡ−２‐Ｊ−０１００１１−０６−標的配列：ＧＧＡＣＧＡＣＡＣＵＵＣＡＡＵＵＡＵＵ（配列番号１１）
ｓｉＲＮＡ−３‐Ｊ−０１００１１−０７−標的配列：ＧＡＵＡＡＡＧＧＡＵＧＧＵＧＧＵＵＣＡ（配列番号１２）
ｓｉＲＮＡ−４‐Ｊ−０１００１１−０８−標的配列：ＧＡＡＵＡＧＡＣＣＵＧＡＧＣＣＵＵＣＡ（配列番号１３）
本発明の阻害剤はＰＡＰＤ７向けのｓｉＲＮＡであってもよく、その場合に前記ｓｉＲＮＡは以下のｓｉＲＮＡのうちのいずれか１つである。
ＰＡＰＤ７ ｓｉＲＮＡプール（Ｌ−００９８０７−００−０００５；ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓヒトＰＡＰＤ７）：
ｓｉＲＮＡ−１‐Ｊ−００９８０７−０５−標的配列：ＧＧＡＧＵＧＡＣＧＵＵＧＡＵＵＣＡＧＡ（配列番号１４）
ｓｉＲＮＡ−２‐Ｊ−００９８０７−０６−標的配列：ＣＧＧＡＧＵＵＣＡＵＣＡＡＧＡＡＵＵＡ（配列番号１５）
ｓｉＲＮＡ−３‐Ｊ−００９８０７−０７−標的配列：ＣＧＧＡＧＵＵＣＡＵＣＡＡＧＡＡＵＵＡ（配列番号１６）
ｓｉＲＮＡ−４‐Ｊ−００９８０７−０８−標的配列：ＧＣＧＡＡＵＡＧＣＣＡＣＡＵＧＣＡＡＵ（配列番号１７）
適切なｓｉＲＮＡの標的配列が上に示されている。対応するｓｉＲＮＡの配列はこれらの標的配列に対して全く相補的である。
本発明の背景ではＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７の両方の発現を阻害するためにＰＡＰＤ５向けのｓｉＲＮＡをＰＡＰＤ７向けのｓｉＲＮＡと混合することを企図している。
構造の点で完全に異なる２種類の抗ＨＢＶ剤（すなわちＤＨＱとＴＨＰ）がＰＡＰＤ５とＰＡＰＤ７に対して共通の結合部位を有する、又は少なくとも相互に近接して結合していることが添付実施例によって驚くべきことに示されている。具体的にはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７内の選択的相互作用ドメイン（ＳＩＤ）が特定されている。ＳＩＤとは同じ基準タンパク質に合致する全てのプレイ断片によって共有されるアミノ酸配列のことである。したがって、それらのＳＩＤは抗ＨＢＶ剤であるＤＨＱとＴＨＰがＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に結合するアミノ酸領域に相当する。したがって、これらの領域に結合することによってＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の活性が阻害され、結果としてＨＢＶの増殖が阻害される。したがって、本発明の阻害剤はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の少なくとも１つのＳＩＤにと好意的に結合する抗体であってよい。よって、本発明の阻害剤は配列番号７〜９のうちのいずれか１つのアミノ酸伸長物に特異的に結合する抗体であってよい。本発明の阻害剤は配列番号７〜９のアミノ酸伸長物のうちの１つより多くに特異的に結合する抗体であってもよい。
用途
ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の同時阻害によって相乗的効果がＨＢＶ増殖の阻害について生じることが本発明の背景において驚くべきことに示されている。ＰＡＰＤ５の発現だけを低下させると約５０％のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌が減少することが添付実施例によって示されている。ＰＡＰＤ７の発現だけを低下させると１５％以下のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌が減少する。ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の同時ノックダウンによって単一ノックダウンの合計よりも上の相乗的効果がＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌の減少について生じる。理論に捉われるものではないが、理論に捉われるものではないが、ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の両タンパク質は高い配列相同性と同じ酵素的機能を有しているのでこの相乗効果は両タンパク質の補正効果に起因する可能性がある。
したがって、本発明の１つの実施形態はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤に関する。したがって、本発明はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に同時又は順次使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤に関する。本発明の背景ではＨＢＶ感染症を治療（例えば改善）するために前記混合製剤を使用することを企図している。本発明の阻害剤に関連して本明細書において開示される定義は必要な変更が加えられて本発明の混合製剤に適用される。前記混合製剤はＰＡＰＤ５阻害剤である分子とＰＡＰＤ７阻害剤である別の分子（例えば、２種類の別個のｓｉＲＮＡ分子又は２種類の別個の小分子）を含んでよい。これらの２種類の別個の阻害剤は１つの単位内に、例えば１つの丸剤又はバイアル瓶内に製剤されてよい。あるいは、これらの２種類の別個の阻害剤は別々の単位内に、例えば別々の丸剤又はバイアル瓶内に個別に製剤されてよい。それらの２種類の阻害剤の相乗効果が達成されることを条件としてそれらの２種類の別個の阻害剤は一緒に（すなわち同時に）投与されても別々に（すなわち順次に）投与されてもよい。本発明の１つの態様では無薬品対照と比較して（すなわち薬品が投与されていない細胞又は対象と比較して）前記混合製剤によって少なくとも５０％のＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌の減少が生じる。
本発明はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するための医薬組成物にも関し、その場合に前記医薬組成物は
（ｉ）本発明の阻害剤又は本発明の混合製剤、及び
（ｉｉ）所望により薬学的に許容可能な担体
を含む。
したがって、本発明はＨＢＶ感染症を治療及び／又は予防する方法であって、そのような処置を必要とする対象に本発明の阻害剤、本発明の医薬組成物、又は本発明の混合製剤の有効量を投与することを含む前記方法に関する。
本発明の阻害剤、本発明の混合製剤、又は本発明の医薬組成物は混合療法に使用可能である。例えば、本発明の阻害剤、本発明の混合製剤、又は本発明の医薬組成物はインターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−２ａ、及びインターフェロンアルファコン−１（ＰＥＧ化型及び非ＰＥＧ化型）、リバビリン、ラミブジン（３ＴＣ）、エンテカビル、テノホビル、テルビブジン（ＬｄＴ）、アデホビルなどの他のＨＢＶ剤、又はＨＢＶ ＲＮＡ複製阻害剤、ＨＢｓＡｇ分泌阻害剤、ＨＢＶカプシド阻害剤、アンチセンスオリゴマー（例えば国際公開第２０１２／１４５６９７号パンフレット及び国際公開第２０１４／１７９６２９号パンフレットに記載されている）、ｓｉＲＮＡ（例えば国際公開第２００５／０１４８０６号パンフレット、国際公開第２０１２／０２４１７０号パンフレット、国際公開第２０１２／２０５５３６２号パンフレット、国際公開第２０１３／００３５２０号パンフレット、国際公開第２０１３／１５９１０９号パンフレット、国際公開第２０１７／０２７３５０号パンフレット、及び国際公開第２０１７／０１５１７５号パンフレットに記載される）、ＨＢＶ治療ワクチン、ＨＢＶ予防ワクチン、ＨＢＶ抗体療法（モノクローナル又はポリクローナル）、若しくはＨＢＶの治療及び／若しくは予防用のＴＬＲ２、３、７、８、若しくは９のアゴニストなどの他の新興抗ＨＢＶ剤と混合可能である。
ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の下方制御にはＨＢＶ感染細胞におけるＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇ並びに細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡの生産の減少が付随することが添付実施例によって実証されている。これらの結果は、例えばＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤を用いる治療が進行中であるか、又は実施された場合にＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性がＨＢＶ感染症の治療中の治療成果の監視に使用可能であることを示している。したがって、本発明はＨＢＶ感染症の治療中に治療成果を監視するための方法であって、
（ａ）検査対象から得られた試料においてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性を分析すること、
（ｂ）少なくとも１人の基準対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性に対応する基準データと前記量及び／又は活性を比較すること、及び
（ｃ）工程（ｂ）の比較に基づいて治療成果を予測すること
を含む前記方法に関する。
本発明の監視方法では検査対象はＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けている人間、又はＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けた人間であり得る。その薬物治療は上記の抗ＨＢＶ剤を含んでよい。その薬物治療はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤの阻害剤を含んでもよい。
本発明の監視方法では基準データは少なくとも１人の基準対象の試料におけるＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性に相当してよい。前記試料は血液又は肝臓生検試料であってよい。
本発明の１つの態様は、前記少なくとも１人の基準対象がＨＢＶ感染症であるがＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けたことが無く、且つ、前記基準データと比較して減少した前記検査対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が工程（ｃ）においてＨＢＶ感染症の治療における治療成果を表す本発明の監視方法に関する。例えば、前記減少したＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性は、前記検査対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が前記少なくとも１人の基準対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性の０〜９０％であることを意味し得る。例えば、前記減少したＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性は前記少なくとも１人の基準対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性の０〜８０％、好ましくは０〜７０％、より好ましくは０〜６０％、さらにより好ましくは０〜５０％、さらにより好ましくは０〜４０％、さらにより好ましくは０〜３０、さらにより好ましくは０〜２０％、及び最も好ましくは０〜１０％であり得る。
本発明の別の態様は、前記少なくとも１人の基準対象がＨＢＶ感染症であってＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けたことがあり、且つ、前記基準データと比較して同一又は類似の前記検査対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が工程（ｃ）においてＨＢＶ感染症の治療における治療成果を表す本発明の監視方法に関する。本発明の追加の態様は、前記少なくとも１人の基準対象がＨＢＶ感染症ではなく、且つ、前記基準データと比較して同一又は類似の前記検査対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が工程（ｃ）においてＨＢＶ感染症の治療における治療成果を表す本発明の監視方法に関する。同一又は類似のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性は、前記検査対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が前記少なくとも１人の基準対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性の９０〜１１０％であることを意味し得る。例えば、前記同一又は類似のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性は前記少なくとも１人の基準対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性の９５〜１０５％であり得る。
本発明は、ＨＢＶ感染症を予防及び／又は治療（例えば改善）する化合物の特定及び／又は特徴解析のために使用可能である、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現が上昇した、低下した、又は存在しない細胞又は非ヒト動物（例えばマウス、ラット、フェレット、又はウサギ）も包含する。例えば、前記細胞又は非ヒト動物は、例えば発現ベクター内にクローン化されており、且つ、外来性プロモーターに機能可能であるように結合された、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７をコードする外来性ヌクレオチド配列を含んでよい。前記細胞又は非ヒト動物はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７、好ましくはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７を過剰発現してよい。あるいは、前記細胞又は非ヒト動物はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７のノックダウン、好ましくはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７のノックダウンを有してよい。
本発明の実施形態
したがって、本発明は以下の項目に関する。
１．Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
（ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
（ａ１）ＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質５（ＰＡＰＤ５）及び／又はＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質７（ＰＡＰＤ７）、又は
（ａ２）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
（ｂ）前記被験化合物が存在する状態と存在しない状態でＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を測定すること、及び
（ｃ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させる化合物を特定すること
を含む前記方法。
２．ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
（ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
（ａ１）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７、又は
（ａ２）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
（ｂ）前記被験化合物がＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するか測定すること、
（ｃ）前記被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか測定すること、及び
（ｄ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物を特定すること
を含む前記方法。
３．ＰＡＰＤ５がＰＡＰＤ５ポリペプチド又はＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡである、項目１又は２に記載の方法。
４．前記ＰＡＰＤ５ポリペプチドが
（ｉ）配列番号１又は２のアミノ酸配列、
（ｉｉ）少なくとも８０％の同一性を（ｉ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号１又は２の酵素活性断片のアミノ酸配列、又は
（ｉｖ）少なくとも８０％の同一性を（ｉｉｉ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列
を含む、又は前記アミノ酸配列から成るポリペプチドである、項目３に記載の方法。
５．前記ＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡが
（ｉ）配列番号１又は２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
（ｉｉ）少なくとも８０％の同一性を配列番号１又は２に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）配列番号１又は２の酵素活性断片をコードするヌクレオチド配列、又は
（ｉｖ）少なくとも８０％の同一性を配列番号１又は２の酵素活性断片のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列
を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドである、項目３に記載の方法。
６．ＰＡＰＤ７がＰＡＰＤ７ポリペプチド又はＰＡＰＤ７ ｍＲＮＡである、項目１又は２に記載の方法。
７．前記ＰＡＰＤ７ポリペプチドが
（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列、
（ｉｉ）少なくとも８０％の同一性を（ｉ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号３の酵素活性断片のアミノ酸配列、又は
（ｉｖ）少なくとも８０％の同一性を（ｉｉｉ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列
を含む、又は前記アミノ酸配列から成るポリペプチドである、項目６に記載の方法。
８．前記ＰＡＰＤ７ ｍＲＮＡが
（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、
（ｉｉ）少なくとも８０％の同一性を配列番号３に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列、
（ｉｉｉ）配列番号３の酵素活性断片をコードするヌクレオチド配列、又は
（ｉｖ）少なくとも８０％の同一性を配列番号３の酵素活性断片のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、ポリＡポリメラーゼ機能を有するポリペプチドがそのポリヌクレオチドによってコードされる前記ヌクレオチド配列
を含む、又は前記ヌクレオチド配列から成るポリヌクレオチドである、項目６に記載の方法。
９．前記細胞が真核細胞である、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
１０．ＨＢＶの増殖を阻害する前記化合物がＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の分泌を阻害し、ＨＢＶエンベロープ抗原（ＨＢｅＡｇ）の分泌を阻害し、且つ／又は細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡ若しくはＨＢＶ ＤＮＡの生産を阻害する、項目２〜９のいずれか１項に記載の方法。
１１．前記被験化合物を対照に対して比較する工程がさらに含まれる、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
１２．前記対照において不活性被験化合物が使用され、前記不活性被験化合物が
（ｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させず、且つ／又は
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合せず、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害しない
化合物である、項目１１に記載の方法。
１３．前記被験化合物が
（ｉ）スクリーニングライブラリーの小分子、又は
（ｉｉ）ファージディスプレイライブラリーのペプチド、抗体断片ライブラリーのペプチド、又はｃＤＮＡライブラリーに由来するペプチド
である、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
１４．ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の活性がポリＡポリメラーゼ機能である、項目１及び３〜１３のいずれか１項に記載の方法。
１５．ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤であって、
（ｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合する小分子、
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、
（ｉｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的に結合する抗体、又は
（ｉｖ）次のものを含むゲノム編集装置
（ａ）部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼ、又は部位特異的ＤＮＡヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド、及び
（ｂ）ガイドＲＮＡ、又はガイドＲＮＡをコードするポリヌクレオチド
である前記阻害剤。
１６．（ｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合し、且つ／又は
（ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を阻害する
項目１５に記載の使用のための阻害剤。
１７．前記阻害剤によってＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌が減少する、項目１５又は１６に記載の使用のための阻害剤。
１８．前記阻害剤によって慢性ＨＢＶ感染症の発症が抑制され、且つ／又はＨＢＶ感染者の感染性が低下する、項目１５〜１７のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
１９．前記阻害剤が式（ＩＩＩ）又は式（ＩＶ）の化合物である、項目１５〜１８のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
２０．前記阻害剤がｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡなどのＲＮＡｉ分子である、項目１５〜１８のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
２１．前記阻害剤が配列番号７〜９のうちのいずれか１つのアミノ酸伸長物に特異的に結合する抗体である、項目１５〜１８のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
２２．ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に同時又は順次使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤。
２３．ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するための医薬組成物であって、
（ｉ）項目１５〜２１のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤、又は項目２２に記載の混合製剤、及び
（ｉｉ）所望により薬学的に許容可能な担体
を含む前記医薬組成物。
２４．ＨＢＶ感染症の治療中に治療成果を監視するための方法であって、
（ａ）検査対象から得られた試料においてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性を分析すること、
（ｂ）少なくとも１人の基準対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性に対応する基準データと前記量及び／又は活性を比較すること、及び
（ｃ）工程（ｂ）の比較に基づいて治療成果を予測すること
を含む前記方法。
２５．前記検査対象がＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けている、又はＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けたことがある人間である、項目２４に記載の監視方法。
２６．前記基準データが少なくとも１人の基準対象の試料におけるＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性に相当する、項目２４又は２５に記載の監視方法。
２７．前記少なくとも１人の基準対象がＨＢＶ感染症であるがＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けたことが無く、且つ、前記基準データと比較して減少した前記検査対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が工程（ｃ）においてＨＢＶ感染症の治療における治療成果を表す、項目２４〜２６のいずれか１項に記載の監視方法。
２８．前記減少したＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性とは、前記検査対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が前記少なくとも１人の基準対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性の０〜９０％であるという意味である、項目２７に記載の監視方法。
２９．前記少なくとも１人の基準対象がＨＢＶ感染症であってＨＢＶ感染症向けの薬物治療を受けたことがあり、且つ、前記基準データと比較して同一又は類似の前記検査対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が工程（ｃ）においてＨＢＶ感染症の治療における治療成果を表す、項目２４〜２６のいずれか１項に記載の監視方法。
３０．前記少なくとも１人の基準対象がＨＢＶ感染症ではなく、且つ、前記基準データと比較して同一又は類似の前記検査対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が工程（ｃ）においてＨＢＶ感染症の治療における治療成果を表す、項目２４〜２６のいずれか１項に記載の監視方法。
３１．前記同一又は類似のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性とは、前記検査対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性が前記少なくとも１人の基準対象の試料中のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性の９０〜１１０％であるという意味である、項目２９又は３０に記載の監視方法。
製造
式（Ｉ）の化合物（すなわち式（Ｉ）によるジヒドロキノリジノン化合物）は国際公開第２０１５／１１３９９０（Ａ１）号パンフレットに記載されるように合成可能である。簡単に説明すると、式（Ｉ）の化合物は以下の工程を含む方法によって調製可能であり、
（ａ）式（Ａ）の化合物の加水分解
式中、Ｒ1〜Ｒ7及びＲ9は別段の指定が無い限り式（Ｉ）に関連して上で定義されている。
工程（ａ）及び工程（ｂ）では例えば水酸化リチウム又は水酸化ナトリウムなどの塩基が使用可能である。
式（ＩＩ）の化合物（すなわち式（ＩＩ）によるテトラヒドロピリドピリミジン化合物）は国際公開第２０１６／１７７６５５号パンフレットに記載されるように合成可能である。簡単に説明すると、式（ＩＩ）の化合物は以下の工程のうちの１つを含む方法によって調製可能であり、
（ａ）ルイス酸の存在下での式（Ａ）の化合物の式（Ｂ）の化合物との結合
Ｒ1Ｍ（Ｂ）、
（ｂ）塩基の存在下での式（Ｃ）の化合物の式（Ｄ）の化合物との結合
ＮＨＲ9Ｒ10（Ｄ）、
（ｃ）式（Ｅ）の化合物の式（Ｆ）の化合物との結合
Ｒ2−Ｌ2（Ｆ）、
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｕ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは式（ＩＩ）に関連して上で定義されており、ＭはＨ、Ｍｇ、Ｚｎ、又はＮａであり、Ｌ1がＦ、Ｃｌ、又はＢｒであり、且つ、Ｌ2がＦ、Ｃｌ、又はＢｒである。
工程（ａ）では前記ルイス酸は例えばＢＦ3・Ｅｔ2Ｏ又はＳｃ（ＯＴｆ）3であり得、
工程（ｂ）では前記塩基は例えばＫ2ＣＯ3又はＤＩＥＡであり得、
工程（ｃ）では前記反応は塩基の存在下で実施可能であり、その塩基は例えばＫ2ＣＯ3又はＤＩＥＡであり得る。前記反応は塩基が存在しない状態でも実施可能である。
組成物
上で説明したように本発明はＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤、ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤、及び前記阻害剤又は前記混合製剤を含む医薬組成物に関する。前記医薬組成物（すなわち医薬）は所望により薬学的に許容可能な担体を含む。前記医薬組成物は治療上許容可能な希釈剤又は賦形剤をさらに含んでよい。
典型的な医薬組成物はＰＡＰＤ５阻害剤及び／又はＰＡＰＤ７阻害剤と担体又は賦形剤を混合して調製される。適切な担体及び賦形剤は当業者によく知られており、例えばＡｎｓｅｌ， Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ： Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２００４、Ｇｅｎｎａｒｏ， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ： Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２０００、及びＲｏｗｅ， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， Ｃｈｉｃａｇｏ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ， ２００５において詳細に記載されている。それらの製剤は１種類以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、滑材、加工助剤、着色料、甘味料、芳香剤、香味剤、希釈剤、及び薬品の外観の改善又は医薬品（すなわち医薬）の製造の補助のための他の公知の添加物を含んでもよい。例えば、本発明の医薬組成物は、生理学的に許容可能な担体、すなわち適切な投与形態に用いられる投薬量と濃度では受容者にとって無毒である担体とＰＡＰＤ５の阻害剤及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤を外界温度、適切なｐＨ、及び所望の純度で混合することで製剤可能である。本発明の医薬組成物は無菌であってよい。
本発明による化合物は薬学的に許容可能なそれらの塩の形態で存在し得る。「薬学的に許容可能な塩」という言葉は、本発明の化合物の生物学的有効性と特性を保持し、且つ、適切な無毒の有機酸又は無機酸又は有機塩基又は無機塩基から形成される従来の酸付加塩又は塩基付加塩を指す。酸付加塩には例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、及び硝酸などの無機酸に由来する酸付加塩、及びｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸等のような有機酸に由来する酸付加塩が含まれる。塩基付加塩には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、及び例えば水酸化テトラメチルアンモニウムなどの第四級アンモニウムヒドロキシドに由来する塩基付加塩が含まれる。医薬化合物の塩への化学修飾は化合物の改善された物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性、及び溶解性を得るために製薬化学者によく知られている技術である。その技術は例えばＢａｓｔｉｎ著、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０００年、第４巻、４２７〜４３５頁、又はＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、第６版（１９９５年）内のＡｎｓｅｌ著、１９６頁及び１４５６〜１４５７頁に記載されている。例えば、本明細書において提供される化合物の薬学的に許容可能な塩はナトリウム塩であり得る。
１つのキラル中心、又は幾つかのキラル中心を含有する化合物はラセミ体、ジアステレオ異性体混合物、又は光学活性単一異性体のいずれかとして存在し得る。それらのラセミ体は公知の方法に従ってエナンチオマーに分離可能である。特に、結晶化によって分離可能であるジアステレオ異性体塩は例えばＤ型又はＬ型の酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、又はカンファースルホン酸などの光学活性酸との反応によってラセミ混合物から形成される。
本発明の医薬組成物は適正医療実施規範に合致するように製剤化され、調剤され、投与される。この状況で考慮される因子には治療を受ける特定の哺乳類動物、個々の患者の臨床状態、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、患者の年齢と性別、及び医療従事者に公知の他の因子が含まれる。本明細書において、「有効量」（「（治療）有効用量」としても知られる）は医師又は他の臨床家によって求められている対象の生物学的又は医学的応答を誘発することになる化合物の量を意味する。本発明の阻害剤、本発明の混合製剤、又は本発明の医薬組成物の「有効量」はそのような考慮事項によって左右されることになり、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇを阻害するために必要な最小量である。例えば、そのような量は受容者の細胞にとって有毒であるか、又はその哺乳類動物全体にとって有毒である量よりも少ない量であってよい。
例えば、ＰＡＰＤ５阻害剤及び／又はＰＡＰＤ７阻害剤が式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物である場合、一回の投薬で非経口的に投与される薬学的有効量は患者の体重に対して約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内であってよく、あるいは一日当たり患者の体重に対して約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内であってよく、使用される典型的な初期化合物範囲は０．３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日である。別の例ではＰＡＰＤ５阻害剤及び／又はＰＡＰＤ７阻害剤が式（Ｉ）又は式（ＩＩ）の化合物である場合、錠剤及びカプセル剤などの経口単位剤形が約０．１〜約１０００ｍｇを含有していることが好ましい。
本発明の阻害剤、本発明の混合製剤、又は本発明の医薬組成物は、経口投与、局所（頬側及び舌下を含む）投与、直腸投与、膣投与、経皮投与、非経口投与、皮下投与、腹腔内投与、肺内投与、皮内投与、髄腔内投与、及び硬膜外投与、及び鼻腔内投与、及び所望により局所的治療向けに傷害内投与を含むあらゆる適切な手段で投与可能である。非経口注入には筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は皮下投与が含まれる。
本発明の阻害剤、本発明の混合製剤、又は本発明の医薬組成物はあらゆる従来の投与形態で、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、水剤、分散剤、懸濁剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳剤、パッチ剤等として投与可能である。そのような組成物は医薬調製物に通常の成分、例えば、希釈剤、担体、ｐＨ調整剤、甘味料、充填剤、及びその他の活性薬剤を含んでもよい。
本発明の阻害剤、本発明の混合製剤、又は本発明の医薬組成物はＨＢＶ発明の予防及び／又は治療に有用である。それらはＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの分泌を阻害することが好ましく、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌を阻害することが最も好ましい。
定義
「治療」、「治療すること」、「治療する」、又はそのような用語は所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを全般的に意味するために本明細書において使用される。この効果は疾患及び／又はその疾患が原因の有害作用の部分的治癒又は完全治癒に関して治療的である。本明細書において使用される「治療」という用語は対象における疾患のあらゆる治療に当てはまり、その用語は（ａ）その疾患を抑制すること、すなわちＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの増加の阻害のようにその疾患の発症を止めること、又は（ｂ）その疾患を改善（すなわち軽減）すること、すなわちＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの生産の抑制のようにその疾患の退行を引き起こすことを含む。したがって、ＨＢＶ感染症を改善及び／又は抑制する化合物はＨＢＶ発明を治療する化合物である。本明細書において使用される「治療」という用語は、既に明確になり、且つ、顕在化したＨＢＶ感染症の治療のように既に顕在化した障害の医療介入に関することが好ましい。本明細書において、「予防すること」、「予防」、又は「予防する」という用語は予防的処置、すなわち疾患を治療することよりもむしろ予防することが目的である手段又は手法に関する。予防は疾患又はその症状の完全予防又は部分的予防に関して予防的である所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを意味する。したがって、本明細書において「ＨＢＶ感染症の予防」には対象においてＨＢＶ感染症が生じることを予防すること、及びＨＢＶ感染症の症状が生じることを予防することが含まれる。
本発明の目的では「対象」（又は「患者」）は脊椎動物であり得る。本発明の背景では「対象」という用語にはヒトも他の動物も含まれ、特に哺乳類動物が含まれ、他の生物も含まれる。したがって、本明細書において提供される手段と方法はヒトの治療と獣医用途の両方に適用可能である。よって、本明細書では対象はマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、モルモット、フェレット、ネコ、イヌ、ニワトリ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、又は霊長類動物などの動物であり得る。対象は哺乳類動物であることが好ましい。対象はヒトであることがより好ましい。
「Ｂ型肝炎ウイルス感染症」又は「ＨＢＶ感染症」という用語は当技術分野において一般的に知られおり、その用語はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）によって引き起こされ、且つ、肝臓を侵す感染症を指す。ＨＢＶ感染症は急性感染症又は慢性感染症であり得る。感染者の中には初期感染時に何の症状も無い者がおり、中には急に嘔吐、皮膚黄変、疲労感、暗色尿、及び腹部痛を伴う病状が始まる者もいる（「Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｆａｃｔ ｓｈｅｅｔ Ｎ°２０４」、ｗｈｏ．ｉｎｔ．、２０１４年７月；２０１４年１１月４日に検索）。これらの症状は数週間続くことが多く、これらの症状の結果死亡する場合があり得る。症状が始まるまで３０日〜１８０日かかることがある。出生前後に感染した者では９０％の者が慢性Ｂ型肝炎感染症を発症するが、５歳より後に感染した者では１０％未満しか発症しない（「Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ＦＡＱｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｕｂｌｉｃ − Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ」、アメリカ疾病予防管理センター（ＣＤＣ）、２０１１年１１月２９日に検索）。慢性患者の大半が症状を持たないが、しかしながらやがて肝硬変や肝臓癌が発症する（Ｃｈａｎｇ， ２００７， Ｓｅｍｉｎ Ｆｅｔａｌ Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｍｅｄ， １２： １６０−１６７）。これらの合併症の結果、慢性患者の１５〜２５％が死亡する（「Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｆａｃｔ ｓｈｅｅｔ Ｎ°２０４」、ｗｈｏ．ｉｎｔ．、２０１４年７月；２０１４年１１月４日に検索）。本明細書では「ＨＢＶ感染症」という用語には急性Ｂ型肝炎感染症と慢性Ｂ型肝炎感染症が含まれる。「ＨＢＶ感染症」という用語には初期感染症の無症状期、有症状期、並びにＨＢＶ感染症の無症状慢性期も含まれる。
本明細書では配列番号１又は２（すなわちＰＡＰＤ５）の酵素活性断片は、配列番号１又は２（すなわちＰＡＰＤ５）の連続アミノ酸残基伸長物を含み、且つ、ＰＡＰＤ５の生物活性（すなわち機能性）、特にポリＡポリメラーゼ機能を保持するポリペプチドに関する。これと合致して、本明細書では配列番号３（すなわちＰＡＰＤ７）の酵素活性断片は、配列番号３（すなわちＰＡＰＤ７）の連続アミノ酸残基伸長物を含み、且つ、ＰＡＰＤ７の生物活性（すなわち機能性）、特にポリＡポリメラーゼ機能を保持するポリペプチドに関する。ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の酵素活性断片の例はヌクレオチジルトランスフェラーゼドメイン及びＣｉｄ１ポリＡポリメラーゼである。
本明細書では「ポリペプチド」という用語にはペプチド（アミド）結合によって連結されたアミノ酸単量体を含む、又はそのようなアミノ酸単量体から成る全ての分子が含まれる。したがって、「ポリペプチド」という用語はペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質などの全てのアミノ酸配列を含む。本明細書に記載される「ポリペプチド」は天然ポリペプチドであっても非天然ポリペプチドであってもよい。非天然ポリペプチドはその天然の相対物と比較して少なくとも１つの突然変異（例えば、アミノ酸置換、アミノ酸欠失、又はアミノ酸付加）を含む場合がある。非天然ポリペプチドはベクターにクローン化され、且つ／又は前記ポリペプチドの天然プロモーターではないプロモーターに機能可能であるように結合される場合もある。前記プロモーターは構成的活性プロモーターであり得る。本明細書において使用される「アミノ酸」又は「残基」という用語には天然アミノ酸並びに他のアミノ酸（例えば、非天然アミノ酸、核酸配列によってコードされないアミノ酸、合成アミノ酸等）のＬ異性体とＤ異性体が含まれる。天然アミノ酸の例はアラニン（Ａｌａ；Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リシン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、バリン（Ｖａｌ；Ｖ）である。翻訳後修飾天然アミノ酸はデヒドロブチリン（Ｄｈｂ）及びラビオニン（Ｌａｂ）である。非天然アミノ酸の例が上に記載されている。非天然ポリペプチドは天然型のポリペプチドのアミノ酸配列と比較してそのアミノ酸配列に共有結合又は非共有結合した１つ以上の非アミノ酸置換基又は異種性アミノ酸置換基、例えばレポーター分子又は他のリガンドを含む場合がある。
「ヌクレオチド配列」又は「ポリヌクレオチド」という用語は当技術分野において一般的に知られており、その用語はＤＮＡ及びＲＮＡなどの天然分子を含む、又はそれらから成る分子、並びに例えばオリゴヌクレオチドチオホスフェート、置換リボオリゴヌクレオチド、ＬＮＡ分子、ＰＮＡ分子、ＧＮＡ（グリコール核酸）分子、ＴＮＡ（トレオース核酸）分子、モルホリノポリヌクレオチドなどの核酸類似体、又はポリシロキサン及び２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチル−ホスホロチオエートなどの修飾型骨格を有する核酸、又はメチルヌクレオシド、チオヌクレオシド、サルフェートヌクレオシド、ベンゾイルヌクレオシド、フェニルヌクレオシド、アミノヌクレオシド、プロピルヌクレオシド、クロロヌクレオシド、及びメタノカルバヌクレオシドなどの置換基を有する核酸、又は検出を容易にするためのレポーター分子を含む、又はそれらから成る分子を含む。さらに、「ヌクレオチド配列」という用語は本発明の背景では「核酸分子」という用語と同等に解釈されるものとされ、その用語は具体的にＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ、又はＬＮＡ、又はそれらのハイブリッド、又は当技術分野において知られているそれらのあらゆる修飾物を指すことができる（例えば修飾物について例えば米国特許第５５２５７１１号明細書、米国特許第４７１１９５５号明細書、米国特許第５７９２６０８号明細書、欧州特許第３０２１７５号明細書を参照されたい）。本明細書において記載され、提供される核酸配列に含まれる核酸残基は天然核酸残基でも人工核酸残基でもよい。核酸残基の例はアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）、キサンチン（Ｘ）、及びヒポキサンチン（ＨＸ）である。当業者が理解するように、チミン（Ｔ）とウラシル（Ｕ）は各種のポリヌクレオチドに応じて互換的に使用され得る。例えば、当業者が理解するようにＤＮＡの部分としてのチミン（Ｔ）は転写された対応するｍＲＮＡの部分としてのウラシル（Ｕ）に対応する。本明細書において記載され、提供されるポリヌクレオチドは一本鎖でも二本鎖でもよく、直鎖状でも環状でもよく、天然でも人工でもよい。
本明細書において提供されるヌクレオチド配列はベクター内にクローン化され得る。本明細書において使用される「ベクター」という用語にはプラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージ、及び遺伝子操作に一般的に使用される他のベクターが含まれる。好ましい実施形態ではこれらのベクターは哺乳類細胞又は酵母細胞のような細胞の形質転換に適切である。本明細書では前記ベクターは発現ベクターであってよい。一般的に発現ベクターは文献中に広範に記載されている。発現ベクターは選択マーカー遺伝子と宿主内での複製を確実にする複製起点、プロモーター、及び転写終結シグナルを含んでよい。発現することが望まれる核酸配列の挿入を可能にする少なくとも１つの制限部位又はポリリンカーがそのプロモーターと終結シグナルとの間に存在してよい。本明細書において提供されるヌクレオチド配列をクローン化することが可能なベクターの非限定的な例はアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レンチウイルスベクター、ＨＩＶベースレンチウイルスベクター、非ウイルス性ミニサークルベクター、又は細菌発現系及び真核生物発現系用の他のベクターである。
本明細書では「化合物」という用語は小分子などの有機分子、ＲＮＡｉ分子などのポリヌクレオチド、抗体などのポリペプチド、及び無機化合物を含むあらゆる分子を意味する。「化合物」という用語には脂質、ホルモン類似体、ポリペプチドリガンド、酵素、受容体、チャネル、及び抗体複合体も含まれる。例えば、本明細書では化合物とはＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対するＲＮＡｉ分子、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的に結合する抗体、又はＰＡＰＤ５及び／若しくはＰＡＰＤ７に結合する小分子であり得る。
「阻害剤」という用語は当技術分野において知られており、その用語は特定のタンパク質（例えばＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７）の生理学的機能（すなわち活性）を完全又は部分的に抑制する、又は低下させることが可能な化合物／物質に関する。阻害剤は「アンタゴニスト」としても知られる。本発明の背景において、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤は、例えば、前記化合物／物質がそれぞれＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するとそれぞれＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の生理学的活性の抑制又は低下又は阻害又は不活性化を引き起こし得る。ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７への阻害剤／アンタゴニストの結合によってＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の酵素機能（すなわちポリＡポリメラーゼ機能）が低下することもあれば、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７への内在性活性化分子の結合が抑制されることによってこれらのタンパク質の活性（すなわち機能）が阻害されることもある。本発明の背景において、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の「阻害剤」はＰＡＰＤ５遺伝子及び／又はＰＡＰＤ７遺伝子の発現の抑制又は低下によりそれぞれＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の活性／機能を抑制することが可能であってよい。したがって、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の機能性（すなわち活性）であって、ポリＡポリメラーゼ機能を含む前記機能の低下に反映されるＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現レベルの低下（例えばＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡレベルの低下、又はＰＡＰＤ５及び／若しくはＰＡＰＤ７のタンパク質レベルの低下）がＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤によって引き起こされ得る。よって、本発明の背景ではＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７のレベルを低下させることが可能であるＰＡＰＤ５発現及び／又はＰＡＰＤ７発現の転写抑制因子も包含し得る。したがって、ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の活性の低下（比較的に低い発現の結果であり得る）を引き起こす全ての手段と方法が本発明に準拠するＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤として使用されるものとする。
本明細書では「ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子」という用語はＲＮＡの発現又は翻訳を阻害するあらゆる分子を指す。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は転写後の相補性ｍＲＮＡに結合することによりそれらの分解と翻訳機会の喪失を引き起こす二本鎖ＲＮＡである。短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は発現するとＤＩＣＥＲとＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を介してｍＲＮＡを減少させることが可能なヘアピン構造を有する人工ＲＮＡ分子である。ＲＮＡｉ分子は目的の遺伝子のＲＮＡ配列に基づいて設計可能である。その後で対応するＲＮＡｉ分子を化学的に、又はインビトロ転写によって合成することができ、又はベクター若しくはＰＣＲ産物から発現することができる。
「小分子」という用語は低分子量（９００ダルトン未満）を有する有機化合物を指す。小分子は生物学的過程の制御に役立つ場合があり、一般的に１０-9ｍの程度のサイズを有する。多くの薬品が小分子である。
本明細書では「抗体」という用語は広い意味で使用され、具体的には完全モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２種類の完全抗体から形成される多重特異性抗体（例えば二特異性抗体）、及び抗体断片が、所望の生物活性を示す（すなわちＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的に結合する）限り、その用語に包含される。ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、又はＣＤＲ移植抗体も含まれる。「抗体断片」は完全抗体の部分を含む。「抗体断片」という用語には、例えば（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、及びＣＨ１ドメインから成る一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨドメインとＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単腕のＶＬドメインとＶＨドメインから成るＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインから成るｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ； １９８９； Ｎａｔｕｒｅ ３４１； ５４４−５４６）、及び（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、又はこれらから成る抗原結合部分、すなわち抗原（ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７等）に結合する能力を保持する「抗原結合部位」（例えば、断片、サブ配列、相補性決定領域（ＣＤＲ））が含まれる。抗体断片又は抗体派生物はＦ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、又はｓｃＦｖ断片、又は単鎖抗体をさらに含む。
「特異的に結合する」又は「特異的結合を行う」という語句が結合分子を指すとき、その語句は専ら、又は主に標的分子、好ましくはＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に対して中間の、又は他かい結合親和性を有する結合分子（例えば抗体）を指す。「特異的に結合する」という語句はタンパク質及び他の生物由来物質からなる異種性集団が存在する状態で標的（好ましくはＰＡＰＤ５タンパク質及び／又はＰＡＰＤ７タンパク質）の存在について決定する結合反応を指す。したがって、指定された測定条件下では明示された結合分子は特定の標的（好ましくはＰＡＰＤ５タンパク質及び／又はＰＡＰＤ７タンパク質）に優先的に結合し、被験試料中に存在する他の成分には大量に結合しない。そのような条件下での標的タンパク質への特異的な結合には特定の標的タンパク質に対する特異性に関して選択される結合分子が必要とされ得る。特定の標的タンパク質と特異的に反応する結合分子を選択するために様々な測定形式が使用可能である。例えば、ＰＡＰＤ５タンパク質及び／又はＰＡＰＤ７タンパク質と特異的に反応する結合分子を特定するために固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイ、免疫沈降、Ｂｉａｃｏｒｅ、及びウエスタンブロットが使用可能である。ＰＡＰＤ５タンパク質は配列番号１又は２に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであることが最も好ましい。しかしながら前記ＰＡＰＤ５タンパク質は、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号１又は２のアミノ酸配列に対して有し、且つ、機能的であり、その機能がポリＡポリメラーゼ機能であるポリペプチドであってもよい。前記ＰＡＰＤ７タンパク質は配列番号３に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドであることが最も好ましい。しかしながら前記ＰＡＰＤ７タンパク質は、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を配列番号３のアミノ酸配列に対して有し、且つ、機能的であり、その機能がポリＡポリメラーゼ機能であるポリペプチドであってもよい。特異的又は選択的反応はバックグラウンドのシグナル又はノイズの少なくとも２倍であることが典型的であり、バックグラウンドの１０倍を超えることがさらに典型的である。換言すると、「特異的に結合する」という語句はタンパク質及び他の生物由来物質からなる異種性集団の中で標的タンパク質（好ましくはＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７）の存在について決定する結合反応を指す。ある特定の標的（好ましくはＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７）に特異的に結合する抗体は少なくとも約１×１０6Ｍ-1又は１０7Ｍ-1、又は好ましくは約１０8Ｍ-1〜１０9Ｍ-1、又はより好ましくは約１０10Ｍ-1〜１０11Ｍ-1、又はそれよりも高い結合定数（Ｋa）で前記標的に結合することが典型的である。また、特定の標的（好ましくはＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７）に特異的に結合する抗体は所定の標的又は近縁の標的以外の非特異的標的（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についての親和性よりも少なくも２倍高い親和性でこの標的に結合することが好ましい。
本発明の背景では「同一性」又は「パーセント同一性」という用語はアミノ酸配列又はヌクレオチド配列が本明細書において示される配列、例えば配列番号１、２、又は３の配列に対して少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、及びさらにより好ましくは少なくとも９９％の同一性を有していることを意味しており、同一性の値が高い方が低い値よりも好ましい。本発明に従うと核酸配列又はアミノ酸配列が２つ以上存在する状況での「同一性」又は「パーセント同一性」は、当技術分野において知られている配列比較アルゴリズムを使用して、又は手作業の整列と目視検査によって測定する場合のように比較ウインドウ又は指定領域にわたって最大の一致度になるように比較及び整列したときに同一である２つ以上の配列、又は同一であるアミノ酸残基又はヌクレオチドを指定パーセンテージ（例えば、配列番号１、２、若しくは３のアミノ酸配列、又は配列番号４、５、若しくは６のヌクレオチド配列との少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性）で有する２つ以上の配列を指す。
記載される同一性が好ましくは少なくとも約５０アミノ酸長の領域、好ましくは少なくとも１００アミノ酸長の領域、より好ましくは少なくとも４００アミノ酸長の領域、より好ましくは少なくとも５００アミノ酸長の領域、より好ましくは少なくとも６００アミノ酸長の領域、最も好ましくはアミノ酸全長の領域にわたって存在する。ヌクレオチド配列の場合では、記載される同一性が少なくとも１００ヌクレオチド長の領域、好ましくは少なくとも１，０００ヌクレオチド長の領域、より好ましくは少なくとも２，０００ヌクレオチド長の領域、最も好ましくはヌクレオチド全長の領域にわたって存在することが最も好ましい。
当業者は、例えばＣＬＵＳＴＡＬＷコンピュータープログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ， １９９４， Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， ２： ４６７３−４６８０）に基づくアルゴリズム又はＦＡＳＴＤＢ（Ｂｒｕｔｌａｇ， １９９０， Ｃｏｍｐ Ａｐｐ Ｂｉｏｓｃｉ， ６： ２３７−２４５）などのアルゴリズムを当技術分野において知られているように使用して配列間のパーセント同一性を決定する方法を知ることになる。当業者にはＢＬＡＳＴアルゴリズムとＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９７， Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２５： ３３８９−３４０２、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９３， Ｊ Ｍｏｌ Ｅｖｏｌ， ３６： ２９０−３００、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９０， Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５： ４０３−４１０）も利用可能である。例えば、ＢＬＡＳＴ２．０はベーシック・ローカルアラインメント・サーチツール（ＢＬＡＳＴ）の代わりになり（Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９７、上記引用と同じ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９３、上記引用と同じ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９０、上記引用と同じ）、局所的な配列アラインメントの検索に使用可能である。ＢＬＡＳＴは上で考察したようにヌクレオチド配列とアミノ酸配列の両方のアラインメントを作成して配列の類似性を決定する。それらのアラインメントの局所的性質のため、ＢＬＡＳＴは完全一致の決定又は類似配列の特定に特に有用である。ＢＬＡＳＴを使用する類位のコンピューター手法（Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９７、上記引用と同じ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９３、上記引用と同じ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， １９９０、上記引用と同じ）がＧｅｎＢａｎｋ又はＥＭＢＬなどのヌクレオチドデータベース中の同一分子又は関連分子の検索に使用される。
本明細書では「測定すること」という用語は「分析すること」又は「決定すること」（すなわち検出及び／又は定量すること）も意味する。例えば、「ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を測定すること」という用語はＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性の量を決定すること、例えばＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド（すなわちタンパク質）の量を決定することを意味する。ＰＡＰＤ５タンパク質及び／又はＰＡＰＤ７タンパク質の量及び／又は活性を測定するための方法が当技術分野において知られており、本明細書において上に記載されている。同様に「被験化合物がＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合するか測定すること」という用語は被験化合物がＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に、例えばＰＡＰＤ５ポリペプチド（すなわちタンパク質）及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド（すなわちタンパク質）に結合するか分析又は決定（すなわち検出）することを意味する。これと合致して、「被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか測定すること」という用語は被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか分析又は決定（すなわち検出及び／又は定量）することを意味する。
本明細書において使用される場合、「Ｃ1~6アルキル」という用語は１〜６個、特に１〜４個の炭素原子を含有する飽和型の直鎖又は分岐鎖アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、１−ブチル、２−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等を単独で、又は組み合わせて表す。具体的な「Ｃ1~6アルキル」基はメチル、エチル、イソプロピル、及びｔｅｒｔ−ブチルである。
「Ｃ3~7シクロアルキル」という用語は３〜７個までの炭素原子、特に３〜６個までの炭素原子を含有する飽和型炭素環、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等を単独で、又は組み合わせて指す。具体的な「Ｃ3~7シクロアルキル」基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルである。
「Ｃ2~6アルケニル」という用語は２〜６個、特に２〜４個の炭素原子を含有する不飽和型の直鎖又は分岐鎖アルケニル基、例えばビニル、プロペニル、アリル、ブテニル等を意味する。具体的な「Ｃ2~6アルケニル」基はアリル及びビニルである。
「Ｃ2~6アルキニル」という用語は２〜６個、特に２〜４個の炭素原子を含有する不飽和型の直鎖又は分岐鎖アルキニル基、例えばエチニル、１−プロピニル、プロパルギル、ブチニル等を意味する。具体的な「Ｃ2~6アルキニル」基はエチニル及び１−プロピニルである。
「ＣxＨ2x」という用語は１〜６個、特に１〜４個の炭素原子を含有する飽和型の直鎖又は分岐鎖アルキル基を単独で、又は組み合わせて表す。「Ｃ1~6アルコキシ」という用語は「Ｃ1~6アルキル」が上で定義された通りであるＣ1~6アルキル−Ｏ−基、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、２−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキシルオキシ等を単独で、又は組み合わせて表す。具体的な「Ｃ1~6アルコキシ」基はメトキシ、エトキシ、及びプロポキシである。
「ハロゲン」という用語はフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。
「ハロＣ1~6アルキル」という用語はＣ1~6アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つが同じハロゲン原子又は異なるハロゲン原子、特にフッ素原子によって置き換えられているＣ1~6アルキル基を意味する。ハロＣ1~6アルキルの例にはモノフルオロ置換型、ジフルオロ置換型、又はトリフルオロ置換型のメチル、エチル、又は−プロピル、例えば３，３，３−トリフルオロプロピル、３，３−ジフルオロプロピル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、又はトリフルオロメチルが挙げられる。具体的な「ハロＣ1~6アルキル」基はジフルオロメチル又はトリフルオロメチルである。
「ハロＣ1~6アルコキシ」という用語はＣ1~6アルコキシ基の水素原子のうちの少なくとも１つが同じハロゲン原子又は異なるハロゲン原子、特にフッ素原子によって置き換えられているＣ1~6アルコキシ基を意味する。ハロＣ1~6アルコキシルの例にはモノフルオロ置換型、ジフルオロ置換型、又はトリフルオロ置換型のメトキシ、エトキシ、又はプロポキシ、例えばフルオロプロポキシ、ジフルオロプロポキシ、トリフルオロプロポキシ、フルオロエトキシ、ジフルオロエトキシ、トリフルオロエトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、又はトリフルオロメトキシが挙げられる。具体的な「ハロＣ1~6アルコキシ」基は３−フルオロプロポキシ、３，３−ジフルオロプロポキシ、３，３，３−トリフルオロプロポキシ、２−フルオロエトキシ、２，２−ジフルオロエトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、又はトリフルオロメトキシである。
「Ｃ3~7シクロアルキル」という用語は３〜７個までの炭素原子、特に３〜６個までの炭素原子を含有する飽和型炭素環、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル等を単独で、又は組み合わせて指す。具体的な「Ｃ3~7シクロアルキル」基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルである。
「Ｃ1~6アルコキシ」という用語は「Ｃ1~6アルキル」が上で定義された通りであるＣ1~6アルキル−Ｏ−基、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、２−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等を単独で、又は組み合わせて表す。具体的な「Ｃ1~6アルコキシ」基はメトキシ及びエトキシであり、より具体的にはメトキシである。
「ハロＣ3~7シクロアルキル」という用語はＣ3~7シクロアルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つが同じハロゲン原子又は異なるハロゲン原子、特にフッ素原子によって置き換えられているＣ3~7シクロアルキル基を意味する。ハロＣ3~7シクロアルキルの例にはモノフルオロ置換型又はジフルオロ置換型のシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、又はシクロヘキシル、例えばフルオロシクロプロピル、ジフルオロシクロプロピル、フルオシクロブチル、ジフルオシクロブチル、フルオシクロペンチル、ジフルオシクロペンチル、フルオシクロヘキシル、又はジフルオシクロヘキシルが挙げられる。具体的な「ハロＣ1~6アルキル」基はジフルオロシクロプロピルである。
式（Ｉ）に関して「アミノ」という用語は一級アミノ（−ＮＨ2）、二級アミノ（ＮＨ−）、又は三級アミノ
を単独で、又は組み合わせて指す。
式（ＩＩ）に関して「アミノ」という用語は式−ＮＲ’Ｒ”の基であって、式中、Ｒ’及びＲ”が独立して水素、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシ、Ｃ3~7シクロアルキル、ヘテロＣ3~7シクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである前記基を意味する。あるいは、Ｒ’及びＲ”が結合している窒素と一緒にそれらはヘテロＣ3~7シクロアルキルを形成し得る。
「カルボニル」という用語は−Ｃ（Ｏ）−基を単独で、又は組み合わせて指す。
「シアノ」という用語は−ＣＮ基を単独で、又は組み合わせて指す。
「Ｃ1~6アルキルスルフィニル」という用語はＣ1~6アルキル基が上で定義されている−ＳＯ−Ｃ1~6アルキル基を意味する。Ｃ1~6アルキルスルフィニルの例にはメチルスルフィニル及びエチルスルフィニルが挙げられる。
「Ｃ1~6アルキルスルホニル」という用語はＣ1~6アルキル基が上で定義されている−ＳＯ2−Ｃ1~6アルキル基を意味する。Ｃ1~6アルキルスルホニルの例にはメチルスルホニル及びエチルスルホニルが挙げられる。
「単環式ヘテロアリール」という用語はＮ、Ｏ、及びＳから選択される１個、２個、３個、又は４個のヘテロ原子を含み、残りの環原子が炭素である５〜８個の環原子からなる一価芳香族複素単環系を意味する。単環式ヘテロアリール部分の例にはピロリル、フラニル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、トリアジニル、アゼピニル、ジアゼピニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル等が挙げられる。
式（Ｉ）に関して「単環式ヘテロシクロアルキル」という用語はＮ、Ｏ、及びＳから選択される１個、２個、又は３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子が炭素である一価飽和型又は部分不飽和型の３〜７個の環原子からなる単環系を指す。単環式ヘテロシクロアルキルの例はアジリジニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、２−オキソ−ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロ−チエニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イル、アゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、又はオキサゼパニルである。具体的な「単環式ヘテロシクロアルキル」基はモルホリニル、２−オキソ−ピロリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニルであり、より具体的にはピロリジン−１−イル、２−オキソ−ピロリジン−１−イル、テトラヒドロピラン−４−イル、及びモルホリン−１−イルである。
式（ＩＩ）に関して「単環式ヘテロシクロアルキル」という用語はＮ、Ｏ、及びＳから選択される１個、２個、又は３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子が炭素である一価飽和型又は部分不飽和型の４〜７個の環原子からなる単環系である。単環式ヘテロシクロアルキルの例はアジリジニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、２−オキソ−ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、チエタニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペラジニル、モルホリニル、２−オキソ−モルホリニル、２−オキソ−ピペラジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イル、１，１−ジオキソチオラニル、１，１−ジオキソチエタニル、オキソイミダゾリジニル、アゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、又はオキサゼパニルである。具体的な「単環式ヘテロシクロアルキル」基はアゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、１，１−ジオキソチエタニル、１，１−ジオキソチオラニル、モルホリニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキソイミダゾリジニル、２−オキソ−ピロリジニル、２−オキソ−モルホリニル、及び２−オキソ−ピペラジニルである。より具体的には「単環式ヘテロシクロアルキル」基はアゼチジニル、ピロリジニル、モルホリニル、オキソモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、及びオキソピペラジニルである。
「アリール」という用語は６〜１０個の炭素環原子を含む一価芳香族炭素環式単環系又は二環系を意味する。アリール部分の例にはフェニル及びナフチルが含まれ、具体的な「アリール」はフェニルである。
「ヘテロアリール」という用語はＮ、Ｏ、及びＳから選択される１個、２個、３個、又は４個のヘテロ原子を含み、残りの環原子が炭素である５〜１２個の環原子からなる一価芳香族複素環式単環系又は二環系を意味する。ヘテロアリール部分の例にはピロリル、フラニル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、トリアジニル、アゼピニル、ジアゼピニル、イソオキサゾリル、ベンゾフラニル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、イソベンゾフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、プリニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、又はキノキサリニルが挙げられる。具体的な「ヘテロアリール」はピリジニル及びピリミジニルである。
「Ｎ含有単環式ヘテロアリール」という用語はヘテロ原子のうちの少なくとも１つがＮである単環式ヘテロアリールを指す。Ｎ含有単環式ヘテロアリールの例はピロリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、トリアジニル、アゼピニル、ジアゼピニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル等である。具体的な「Ｎ含有単環式ヘテロアリール」基はイミダゾリル、ピラゾリル、及びトリアゾリルであり、より具体的にはイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、及び１，２，４−トリアゾール−１−イルである。
「ハロゲン」という用語はフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を意味する。ハロゲンは特にフッ素、塩素、又は臭素である。
「ヒドロキシ」という用語は−ＯＨ基を単独で、又は組み合わせて指す。
「２−オキソ−ピロリジニル」という用語は
を単独で、又は組み合わせて指す。
「スルホニル」という用語は−Ｓ（Ｏ）2−基を単独で、又は組み合わせて指す。
「Ｃ1~6アルキルアミノ」という用語はアミノ基の水素原子のうちの少なくとも１つがＣ1~6アルキル基によって置き換えられている上で定義されたようなアミノ基を指す。
「Ｃ1~6アルキルスルホニル」という用語は「Ｃ1~6アルキル」が上で定義された通りであるＣ1~6アルキル−Ｓ（Ｏ）2−基を指す。
「アミノカルボニル」という用語は「アミノ」が上で定義された通りであるアミノ−Ｃ（Ｏ）−基を指す。
「シアノＣ3~7シクロアルキル」という用語はＣ3~7シクロアルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つがシアノ基によって置き換えられている上で定義されたようなＣ3~7シクロアルキル基を指す。
「ピロリジニルカルボニル」という用語はピロリジニル−Ｃ（Ｏ）−基を指す。
「エナンチオマー」という用語は化合物の重ね合わせることができない互いの鏡像である２種類の立体異性体を意味する。
「ジアステレオマー」という用語は２つ以上のキラル中心を有する立体異性体であって、その分子が互いの鏡像ではない立体異性体を意味する。ジアステレオマーは異なる物理的特性、例えば融点、沸点、分光特性、及び反応性を有する。
非限定的な図と実施例を参照することで本発明をさらに説明する。
実施例によって本発明を例示する。
材料と方法
化合物の化学
ハイブリジェニクス・サービス・ＳＡＳによって実施されるＹ３Ｈスクリーニングに適切であるようにＤＨＱとＴＨＰの２種類の化学シリーズの各１種類の化合物を合成した。両化合物はＰＥＧ５リンカーを含み、且つ、トリメトプリム（ＴＭＰ）アンカーリガンドでタグされた（表１）。
Ｙ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨ（商標）スクリーン
前記２種類の化合物はロッシュによってハイブリジェニクス・サービス・ＳＡＳに提供され、透過性と毒性について検査された。その後、化合物をハイブリジェニクスのｃＤＮＡヒト胎盤ライブラリー（ＰＬＡ）に対してスクリーニングした。それらのスクリーニングはハイブリジェニクスＵＬＴＩｍａｔｅ Ｙ２Ｈ（商標）向けに開発された最適化済み細胞間接合プロトコルに従って、異なる化合物濃度を用いて実施された（表２）。
Ｙ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨ（商標）依存性アッセイ
前記スクリーンより得られたクローンを９６ウェルフォーマットで選び取り、スポットアッセイを用いる依存性アッセイにおいて選択条件（ＨＩＳ＋）下での増殖について陽性のクローンを評価した。前記タグ付き化合物が存在するときに選択培地上で増殖可能なクローンだけを選別し、処理（細胞溶解、ＰＣＲ、遺伝子シーケンシング）し、ＢＬＡＳＴ分析を用いてタンパク質アラインメントについてマップした。
Ｙ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨ（商標）１対１検証実験−プレイ断片
この検証工程ではそれぞれ１種類の特定された断片プレイと１種類の化学プローブ（ＨＢＸ１２９６５３、ＨＢＸ１２９６５４）を１対１実験において検査する。前記スクリーニングライブラリーから選択された３種類のプレイのプラスミドを酵母細胞から抽出し、大腸菌中で増幅し、そして再度ＹＨＧＸ１３酵母細胞に形質転換処理した。それぞれの相互作用について、トリプトファン、ロイシン、及びヒスチジンを含まず、且つ、前記化学プローブとＦＫ５０６を添加された選択培地上にフックコンストラクトとプレイコンストラクトの両方を発現する二倍体酵母培養物の１倍希釈物、１／１０希釈物、１／１００希釈物、及び１／１０００希釈物をスポットした。二回の複製実験で相互作用を検査した。各化合物及び各濃度（ＤＭＳＯ；５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭのＨＢＸ１２９６５３；５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭのＨＢＸ１２９６５４；５μＭのＨＢＸ２４７８６トリメトプリム（ＴＭＰ）；及び５μＭのＨＢＸ１２９６３４（ＴＭＰ−ＰＥＧ５−ＯＨ））に付き１枚のプレートを使用した。プレートを３０℃で３日間にわたってインキュベートした。
Ｙ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨ（商標）１対１検証実験−全長タンパク質
全長ＰＡＰＤ５ｖａｒ１のコード配列（ＮＭ＿００１０４０２８４．２）及び全長ＰＡＰＤ７ｖａｒＸ１のコード配列（ＸＭ＿００５２４８２３４．２）をそれらのタンパク質の（高ＧＣ含量を除くための）Ｎ末端側コドン最適化遺伝子断片と市販のＣ末端側領域のクローンから再構成し、元のｐＧＡＤＧＨからの派生物であるプラスミドｐＰ７（Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ： Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｈａｒｔｌｅｙ， Ｄ．Ａ．編、１９９３年、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、オックスフォード内のＢａｒｔｅｌら著、１５３〜１７９頁）内にＧａｌ４活性化ドメイン（ＡＤ）とイン・フレームになるようにクローン化した（ＡＤ−プレイ）。挿入断片全体をシーケンシングすることでそれらのコンストラクトを確認した。それぞれのプレイについて、二倍体酵母培養物を作製するために前記プレイプラスミドで形質転換されたＹＨＧＸ１３酵母細胞（Ｙ１８７ ａｄｅ２−１０１：：ｌｏｘＰ−ｋａｎＭＸ−ｌｏｘＰ， ｍａｔα）とＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）フックで形質転換されたＹＰＴ６ＡＴ酵母細胞（ｍａｔａ）との間でミニ交雑を実施した。それぞれの相互作用について、トリプトファン、ロイシン、及びヒスチジンを含まず、且つ、前記化学プローブとＦＫ５０６を添加された選択培地上にフックコンストラクトとプレイコンストラクトの両方を発現する二倍体酵母培養物の１倍希釈物、１／１０希釈物、１／１００希釈物、及び１／１０００希釈物をスポットした。二回の複製実験で相互作用を検査した。各化合物及び各濃度（ＤＭＳＯ；５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭのＨＢＸ１２９６５３；５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭのＨＢＸ１２９６５４；５μＭのＨＢＸ２４７８６トリメトプリム（ＴＭＰ）；及び５μＭのＨＢＸ１２９６３４（ＴＭＰ−ＰＥＧ５−ＯＨ））に付き１枚のプレートを使用した。プレートを３０℃で３日間にわたってインキュベートした。
Ｙ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨ（商標）−遊離化合物との競合
本競合アッセイは一定濃度の化学プローブ（ＨＢＸ１２９６５３、ＨＢＸ１２９６５４）と濃度上昇するその化学プローブの親化合物（ＭＯＬ６５３、ＭＯＬ６５４）又はその不活性型エナンチオマー（ＩＮＡＣＴ６５３、ＩＮＡＣＴ６５４）を使用する前記１対１検証に基づいている（表３）。前記遊離化合物について８種類の濃度（０μＭ、０．２５μＭ、０．５μＭ、１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭ）、及び前記タグ付きＹ３Ｈ化合物について一定濃度（１μＭ）の選択培地上で本競合アッセイを実施した。
ＨｅｐａＲＧ細胞培養
ＨｅｐａＲＧ細胞（Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、レンヌ、フランス；カタログ番号ＨＰＲ１０１）をウィリアムのＥ培地（ＧＩＢＣＯ）、培養培地サプリメント（Ｂｉｏｐｒｅｄｉｃｓ、カタログ番号ＡＤＤ７１０）、及び１％（体積／体積）ＧｌｕｔａＭＡＸ−Ｉ（Ｇｉｂｃｏ番号第３２５５１番）及び１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ番号第１５１４０番）からなる完全ＨｅｐａＲＧ培養培地の中で５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下、３７℃において２週間にわたって培養した。分化を開始させるために集密細胞上の前記培養培地に０．９％（体積／体積）ＤＭＳＯ（シグマ・アルドリッチ、Ｄ２６５０）を添加した。１週間後に培地を完全分化培地（１．８％（体積／体積）ＤＭＳＯを添加したＨｅｐａＲＧ培養培地）に置き換え、７日毎に分化培地を交換しながらその中で細胞を約４週間にわたって維持した。分化したＨｅｐａＲＧ細胞（ｄＨｅｐａＲＧ）は胆管細胞様細胞に囲まれた肝細胞様細胞島を示した。ＨＢＶ感染及び化合物処理の前にｄＨｅｐａＲＧ細胞を１００μＬの完全分化培地中にウェル当たり６０，０００細胞の割合でコラーゲンＩ被覆９６ウェルプレート（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ａ１１４２８−０３）に播種した。ＨＢＶ感染の前に播種後約１週間にわたって９６ウェルプレート中で細胞に分化表現型を回復させた。
ｄＨｅｐａＲＧのＨＢＶ感染
３０のＭＯＩでＨＢＶ粒子をｄＨｅｐａＲＧ細胞に感染させた。それらのＨＢＶ粒子はＨＢＶ産生ＨｅｐＧ２．２．１５細胞（Ｓｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ １９８７ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８４， １００５−１００９）から生産された。ｄＨｅｐａＲＧの培養条件、分化、及びＨＢＶ感染はこれまでに記載されている（Ｈａｎｔｚ， ２００９， Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ．， ２００９， ９０： １２７−１３５）。簡単に説明すると、４％ＰＥＧ−８０００とウイルスストック（２０〜３０ＧＥ／細胞）を含む完全分化培地（１２０μＬ／ウェル）を添加した。感染から１日後にリン酸緩衝生理食塩水でそれらの細胞を３回洗浄し、その実験中に培地（完全分化培地）を２日毎に交換した。
ＨＢＶ感染ＨｅｐａＲＧのｓｉＲＮＡ処理
４種類の異なるｓｉＲＮＡのプール（ＯＮ ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ）をＧＥ Ｄｈａｒｍａｃｏｎより取得した（表４）。
ＨＢＶ細胞を使用する感染の１日前と感染の４日後にＰＡＰＤ５かＰＡＰＤ７のどちらか、又は両方に対するｓｉＲＮＡプール、又は対照としての非ターゲティングｓｉＲＮＡで細胞を処理した。製造業者のプロトコルに従ってＤｈａｒｍａＦｅｃｔ ４（ＧＥ Ｄｈａｒｍａｃｏｎ；カタログ番号Ｔ−２００４−０１）及びＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログ番号５１９８５０３４）を使用してそれらのｓｉＲＮＡを形質移入した。それらの細胞を１１日間にわたって処理した。
ＨＢＶ抗原の測定
ＨＢＶ抗原の発現と分泌に対する影響を評価するために１１日目に上清を収集した。製造業者のプロトコルに従ってＣＬＩＡ ＥＬＩＳＡキット（Ａｕｔｏｂｉｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ；番号ＣＬ０３１０−２、番号ＣＬ０３１２−２）を使用してＨＢＶのＨＢｓＡｇレベルとＨＢｅＡｇレベルを測定した。簡単に説明すると、ウェル当たり２５μＬの上清を各抗体で被覆されたマイクロタイタープレートに移し、２５μＬの酵素複合体試薬を添加した。そのプレートを振盪器上で６０分間にわたって室温でインキュベートした後に自動洗浄機を使用してウェルを洗浄緩衝液で５回洗浄した。２５μＬの基質Ａと基質Ｂを各ウェルに添加した。それらのプレートを振盪器上で１０分間にわたって室温でインキュベートした後にＥｎｖｉｓｉｏｎ発光リーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して発光を測定した。
細胞生存度
ＨＢＶ感染ｄＨｅｐａＲＧ細胞から上清培地を取り除いた後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ Ｏｎｅ溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ）と共に細胞をインキュベートして細胞生存度を測定した。
細胞内ｍＲＮＡのリアルタイムＰＣＲ
細胞内ｍＲＮＡを単離するためにｄＨｅｐａＲＧをＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、そしてマグナピュア「９６細胞内ＲＮＡラージボリュームキット」（ロッシュ；番号０５４６７５３５００１）を使用して溶解した。それらの溶解物は−８０℃で貯蔵可能である。リアルタイムｑＰＣＲ反応のためにＡＢ７９００ ＨＴ配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）とＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現マスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用した。ＨＢＶ ｍＲＮＡの検出のためにＨＢＶコア特異的プライマー（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（表５）を使用し、ｓｉＲＮＡの存在下でのＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の減少の測定のために遺伝子特異的ＴａｑＭａｎ（登録商標）発現アッセイプローブ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＰＡＰＤ５：カタログ番号４３３１１８２；ＰＡＰＤ７：カタログ番号４３３１１８２）を使用した。β−アクチンに対するＴａｑＭａｎ（登録商標）発現アッセイプローブ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；ＰＡＰＤ５：カタログ番号４３３１１８２）を使用して試料を正規化した。
実施例１：ＤＨＱとＴＨＰはＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に結合する
ＰＡＰＤ５／７はＤＨＱ及びＴＨＰの共通の相互作用パートナーとしてＹ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨスクリーニングにおいて特定された
材料と方法の節において記載されたような両化合物（ＤＨＱ及びＴＨＰ）についてのＹ３Ｈスクリーニングにおいて多数の断片によってＰＡＰＤ５（変異体１：ＮＰ＿００１０３５３７４；変異体２：ＮＰ＿００１０３５３７５）とＰＡＰＤ７（ＸＰ＿００５２４８２９１）の両方のタンパク質が特定された。それらの特定されたタンパク質はハイブリジェニクスによって（スケールＡ〜Ｄのうちの）Ａという信頼スコアを与えられた（表６）。
特定されたプレイ断片のＹ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｍＨ１対１検証とさらに全長タンパク質での検証を用いてＤＨＱ及びＴＨＰとのＰＡＰＤ５／７の相互作用が確認できた
第１の検証工程では（材料と方法の節において記載されたような）１対１検証アッセイのために第１のスクリーニングで特定された３種類の断片を選択し、それらの断片を３つの異なる濃度（５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭ）で試験した（表７）。
３種類の断片全てが既に最低の試験濃度でＤＨＱとＴＨＰの特異的結合体として検証できた（図１）。
第２の検証工程ではＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の全長タンパク質を合成し、ＤＨＱ及びＴＨＰとの（材料と方法の節において記載されたような）１対１検証に使用した（表８）。
これらの全長タンパク質とＤＨＱ及びＴＨＰとの間の相互作用が最低の試験濃度で確認され、それらの化学プローブに対して特異的であることが示された（図２）。
Ｙ３ＨにおけるＤＨＱ及びＴＨＰとのＰＡＰＤ５／７の相互作用について両方の遊離活性型化合物は競合可能であるが、不活性型エナンチオマーは競合しない
タンパク質断片並びに全長ＰＡＰＤ５及び全長ＰＡＰＤ７へのＤＨＱとＴＨＰの結合の検証後に不活性型又は活性型の遊離化合物のどちらかを使用する（材料と方法の節において記載されたような）Ｙ３Ｈ ＵＬＴＩｍａｔｅ ＹＣｈｅｎＨ競合実験においてその結合を確認した（表９）。前記不活性型エナンチオマーが存在するときではなく前記親活性型化合物が存在するときに酵母の増殖低下が減少したことは、前記親化合物が前記化学プローブと競合し、前記タンパク質標的と相互作用することを意味する。
全ての試験化合物について、製造業者のプロトコルに従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ細胞生存度発光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて最高の濃度（２０μＭ）での非選択培地上の毒性を検査した。酵母の増殖は影響を受けなかったのでこの濃度ではどの化合物についても毒性が認められなかった（データを示さず）。両方の活性型親化合物（ＤＨＱ及びＴＨＰについてそれぞれＭＯＬ６５３及びＭＯＬ６５４）について競合が観察可能であり、断片との相互作用についての競合に必要な濃度よりも全長タンパク質への結合についての競合に必要な濃度が低かった（図３及び図４）。交差競合の成功はＤＨＱ及びＴＨＰがＰＡＰＤ５／７に対して共通の結合側面を有する、又は少なくとも相互に近接して結合していることを示唆する。
実施例２：ｓｉＲＮＡを使用するＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害による効果的なＨＢＶ感染症の治療
ＤＨＱ及びＴＨＰのＰＡＰＤ５／７への結合とこれらの２種類のタンパク質のＨＢＶ遺伝子発現に対する影響を相関づけるため、我々は自然にＨＢＶに感染したｄＨｅｐａＲＧにおいてこれらのタンパク質を減少させ、この減少のウイルスパラメーターに対する影響をモニターするためにＲＮＡｉ技術を使用した。そのために我々は材料と方法の節に記載されているようにＨＢＶ感染ｄＨｅｐａＲＧ細胞においてＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７に対するｓｉＲＮＡプール（表４参照）を使用した。
ＰＡＰＤ５の減少により、（材料と方法の節に記載されているようなＣＬＩＡ ＥＬＩＳＡ及びリアルタイムＰＣＲを用いて測定される）分泌されたＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ、並びに細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡによって評価されるウイルス発現の阻害が生じた。ＰＡＰＤ５ ｍＲＮＡの減少がＨＢＶ遺伝子の発現を劇的に低下させた一方でＰＡＰＤ７の阻害が有するＨＢＶ発現に対する効果は控えめであった（図７）。しかしながらＰＡＰＤ７とＰＡＰＤ５に対するｓｉＲＮＡが混合されると相乗的抗ＨＢＶ活性の増強が観察され（図７）、ＰＡＰＤ５が存在しないときの補正的役割がＰＡＰＤ７について示唆された。
実施例３：ＤＨＱ及びＴＨＰによってＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇが効率的に減少する
ＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇを読みだされた情報として使用してＤＨＱ及びＴＨＰ及びそれらの変異体のＨＢＶ感染症に対する有効性をＨｅｐＧ２．２．１５細胞において測定した。
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞（Ｓｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ １９８７ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８４， １００５−１００９）を９６ウェルプレート（１００ｕＬ中に１５．０００細胞／ウェル）内でＤＭＥＭ＋ＧｌｕＴａＭａｘ−１（ＧｉＢＣＯ；カタログ番号１０５６９）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＧｉＢＣＯ；カタログ番号１５１４０）、１０％ＦＢＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ；カタログ番号６３１１０６）、０．２５ｕｇ／ｍｌジェネテシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１０１３１０３５）中に培養した。ＤＭＳＯ中に１００μＭが最高濃度の３倍段階希釈物である９段階希釈物を使用して前記化合物を試験した。四回の複製実験で各化合物を試験した。それらの細胞を３日間にわたってインキュベートし、上清を収集し、そして材料と方法の節に記載されているようにＨＢｓＡｇとＨＢｅＡｇを測定した。ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌の減少における試験された化合物のＩＣ50値が下に示されている。
ＨＢＸ１２９６５３（ＤＨＱ−ＴＭＰ）：ＩＣ50 ＨＢｓＡｇ １．１８１ｕＭ
ＨＢＸ１２９６５４（ＴＨＰ−ＴＭＰ）：ＩＣ50 ＨＢｓＡｇ ０．２９９ｕＭ
ＭＯＬ６５３（ＤＨＱ−遊離活性型）：ＩＣ50 ＨＢｓＡｇ ０．００３ｕＭ；ＩＣ50 ＨＢｅＡｇ ０．００７ｕＭ
ＭＯＬ６５４（ＴＨＰ−遊離活性型）：ＩＣ50 ＨＢｓＡｇ ０．００３ｕＭ
ＩＮＡＣＴ６５３（ＤＨＱ−遊離不活性型）：ＩＣ50 ＨＢｓＡｇ ３．１５ｕＭ
ＩＮＡＣＴ６５４（ＴＨＰ−遊離不活性型）：ＩＣ50 ＨＢｓＡｇ ＞２５ｕＭ

Claims (16)

  1. Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
    （ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
    （ｉ）ＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質５（ＰＡＰＤ５）ポリペプチド及び／若しくはＰＡＰ関連ドメイン含有タンパク質７（ＰＡＰＤ７）ポリペプチド、又は
    （ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
    （ｂ）前記被験化合物が存在する状態と存在しない状態でＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を測定すること、及び
    （ｃ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を低下させる化合物を特定すること
    を含む前記方法。
  2. ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物を特定するための方法であって、
    （ａ）被験化合物を次のものと接触させること、
    （ｉ）ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチド、又は
    （ｉｉ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７を発現する細胞、
    （ｂ）前記被験化合物がＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合するか測定すること、
    （ｃ）前記被験化合物がＨＢＶの増殖を阻害するか測定すること、及び
    （ｄ）ＨＢＶ感染症を予防、改善、及び／又は抑制する化合物としてＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合し、且つ、ＨＢＶの増殖を阻害する化合物を特定すること
    を含む前記方法。
  3. 前記ＰＡＰＤ５ポリペプチドが
    （ａ）配列番号１又は２のアミノ酸配列、
    （ｂ）少なくとも８０％の同一性を（ａ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列、
    （ｃ）配列番号１又は２の酵素活性断片のアミノ酸配列、又は
    （ｄ）少なくとも８０％の同一性を（ｃ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列
    を含む、又は前記アミノ酸配列から成る、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記ＰＡＰＤ７ポリペプチドが
    （ａ）配列番号３のアミノ酸配列、
    （ｂ）少なくとも８０％の同一性を（ａ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列、
    （ｃ）配列番号３の酵素活性断片のアミノ酸配列、又は
    （ｄ）少なくとも８０％の同一性を（ｃ）のアミノ酸配列に対して有するアミノ酸配列であって、そのポリペプチドがポリＡポリメラーゼ機能を有する前記アミノ酸配列
    を含む、又は前記アミノ酸配列から成る、請求項１又は２に記載の方法。
  5. ＨＢＶの増殖を阻害する前記化合物がＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の分泌を阻害し、且つ／又はＨＢＶエンベロープ抗原（ＨＢｅＡｇ）の分泌を阻害し、且つ／又は細胞内ＨＢＶ ｍＲＮＡ若しくはＨＢＶ ＤＮＡの生産を阻害する、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
  6. ＰＡＰＤ５及びＰＡＰＤ７の活性がポリＡポリメラーゼ機能である、請求項１及び３〜５のいずれか１項に記載の方法。
  7. ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するためのＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の阻害剤であって、
    （ａ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に結合する小分子、又は
    （ｂ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７に特異的に結合する抗体
    である前記阻害剤。
  8. （ａ）ＰＡＰＤ５ポリペプチド及び／又はＰＡＰＤ７ポリペプチドに結合し、且つ／又は
    （ｂ）ＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の発現及び／又は活性を阻害する
    請求項７に記載の使用のための阻害剤。
  9. 前記阻害剤によってＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの分泌が減少する、請求項７又は８に記載の使用のための阻害剤。
  10. 前記阻害剤によって慢性ＨＢＶ感染症の発症が抑制され、且つ／又はＨＢＶ感染者の感染性が低下する、請求項７〜９のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
  11. 前記阻害剤が式（Ｉ）の化合物
    であって、式中
    Ｒ1が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルアミノ、又はＣ1~6アルコキシであり、
    Ｒ2が水素；ハロゲン；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルコキシ；シアノ；Ｃ3~7シクロアルキル；ヒドロキシ又はフェニル−ＣxＨ2x−Ｏ−であり、
    Ｒ3が水素；ハロゲン；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；シアノ；ピロリジニル；アミノ；フェニル−ＣxＨ2x−Ｎ（Ｃ1~6アルキル）−；Ｃ1~6アルコキシカルボニル−ピペラジニル；又はＲ7が水素；非置換型であるか、若しくはフルオロ、ヒドロキシ、及びＣ2~6アルケニルから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されているＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；アミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~8アルキル；Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル；シアノＣ1~6アルキル；Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；シアノＣ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル；フェニルＣ1~6アルキル；ピロリジニルカルボニルＣ1~6アルキル；Ｃ2~6アルキニル；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ2~6アルキニル；アミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；ジＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル；カルボキシＣ1~6アルキル；若しくはＣ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~8アルキル；ヘテロアリールがＮ含有単環式ヘテロアリールであるヘテロアリールＣ1~6アルキル；若しくはヘテロシクロアルキルが単環式ヘテロシクロアルキルであるヘテロシクロアルキルＣ1~6アルキルであるＲ7−Ｏ−であり、
    Ｒ4が水素、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル、シアノ、又はＣ1~6アルコキシであり、
    ただしＲ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4が同時に水素ではないことを条件とし、
    Ｒ5が水素又はＣ1~6アルキルであり、
    Ｒ6が水素；非置換型であるか、又はフルオロによって１回、２回、又は３回置換されているＣ1~6アルキル；非置換型であるか、又はフルオロ若しくはＣ1~6アルキルによって１回、２回、又は３回置換されているＣ3~7シクロアルキル；又はフェニル−ＣxＨ2x−であり、ｘが１〜６である、
    請求項７〜１０のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
  12. 前記阻害剤が式（ＩＩ）の化合物
    であって、式中
    Ｒ1がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ1~6アルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、ニトロＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルＣ1~6アルキル、カルボキシＣ1~6アルキル、ジ（Ｃ1~6アルコキシカルボニル）メチレニル、シアノＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル、フェニルＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキル、アミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~6アルキル、アミノカルボニルＣ1~6アルキル、ジＣ1~6アルキルアミノカルボニルＣ1~6アルキル、単環式ヘテロシクロアルキルＣ1~6アルキル、又はイミダゾリルＣ1~6アルキルであり、
    Ｒ2がアリール又はヘテロアリールであり、前記アリール又はヘテロアリールが非置換型であるか、又はＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロゲン、ハロＣ1~6アルキル、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、ハロＣ1~6アルコキシ、−Ｏ−ＣxＨ2x−Ｒ3、−Ｏ−ＣyＨ2y−ＮＨＲ6、−ＮＲ9Ｒ10、−ＳＯ2−Ｒ11、−ＳＯ2−ＮＲ12Ｒ13、カルボキシ、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ12Ｒ13、アリール、ヘテロアリール、単環式ヘテロシクロアルキル、及び−Ｏ−単環式ヘテロシクロアルキルから独立して選択される１個、２個、３個、又は４個、の置換基で置換されており、その場合に単環式ヘテロシクロアルキルは非置換型であるか、又はＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、若しくはＣ1~6アルコキシカルボニルによって置換されており、
    Ｒ3が水素；Ｃ3~7シクロアルキル；ハロＣ3~7シクロアルキル；ヒドロキシ；ヒドロキシＣ1~6アルキルＣ3~7シクロアルキル；Ｃ1~6アルコキシ；単環式ヘテロシクロアルキル；Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキル、又はＣ1~6アルコキシカルボニルによって置換されている単環式ヘテロシクロアルキル；−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ4；Ｃ1~6アルキルスルフィニル；−ＳＯ2−Ｒ5；−Ｃ（ＮＨＲ7）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ8；カルボキシＣ1~6アルコキシ、又はアミノカルボニルＣ1~6アルコキシであり、
    Ｒ4がヒドロキシ、Ｃ1~6アルコキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、ジＣ1~6アルキルアミノ、テトラヒドロフラニルアミノ、ピロリジニル、又はモルホリニルであり、
    Ｒ5がＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1~6アルキルアミノ、又はジＣ1~6アルキルアミノであり、
    Ｒ7が水素又はＣ1~6アルコキシカルボニルであり、
    Ｒ8がヒドロキシ又はＣ1~6アルコキシであり、
    Ｒ6が水素、Ｃ1~6アルキルカルボニル、ハロＣ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルコキシカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキルスルホニル、又はＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキルスルホニルであり、
    Ｒ9及びＲ10が水素、Ｃ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニル、Ｃ1~6アルキルスルホニル、Ｃ3~7シクロアルキルカルボニル、及びＣ3~7シクロアルキルスルホニルから独立して選択され、又は
    Ｒ9及びＲ10が結合している窒素と一緒にそれらが単環式ヘテロシクロアルキルを形成し、
    Ｒ11がＣ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、ハロＣ3~7シクロアルキル、ヒドロキシＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキルＣ1~6アルキル、アミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル、ジＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルカルボニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルホニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルフェニルＣ1~6アルキル、Ｃ1~6アルキルスルファニルＣ1~6アルキル、又はＣ1~6アルキルスルホニルＣ1~6アルキルであり、
    Ｒ12及びＲ13が水素、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシＣ1~6アルキル、ハロＣ1~6アルキル、Ｃ3~7シクロアルキル、及びハロＣ3~7シクロアルキルから独立して選択され、又は
    Ｒ12及びＲ13が結合している窒素と一緒にそれらが単環式ヘテロシクロアルキルを形成し、
    ｘが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
    ｙが１、２、３、４、５、６、７、又は８であり、
    Ｕ、Ｗ、及びＺがＣＨ及びＮから独立して選択され、
    Ｘ及びＹのうちの一方がＮであり、他方がＣＨ又はＮである、
    請求項７〜１０のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
  13. 前記阻害剤が配列番号７、８、又は９のうちのいずれか１つのアミノ酸伸長物に特異的に結合する抗体である、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤。
  14. ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に同時又は順次使用するためのＰＡＰＤ５の阻害剤とＰＡＰＤ７の阻害剤を含む混合製剤。
  15. ＨＢＶ感染症の治療及び／又は予防に使用するための医薬組成物であって、
    （ａ）請求項７〜１３のいずれか１項に記載の使用のための阻害剤、又は請求項１４に記載の混合製剤、及び
    （ｂ）薬学的に許容可能な担体
    を含む前記医薬組成物。
  16. ＨＢＶ感染症の治療中に治療成果を監視するための方法であって、
    （ａ）検査対象から得られた試料においてＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性を分析すること、
    （ｂ）少なくとも１人の基準対象のＰＡＰＤ５及び／又はＰＡＰＤ７の量及び／又は活性に対応する基準データと前記量及び／又は活性を比較すること、及び
    （ｃ）工程（ｂ）の比較に基づいて治療成果を予測すること
    を含む前記方法。
JP2018565394A 2016-06-17 2017-06-19 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤 Active JP7258558B2 (ja)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021179533A JP2022019747A (ja) 2016-06-17 2021-11-02 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤
JP2023204150A JP2024026252A (ja) 2016-06-17 2023-12-01 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16175045 2016-06-17
EP16175045.0 2016-06-17
PCT/EP2017/064981 WO2017216391A1 (en) 2016-06-17 2017-06-19 Papd5 and papd7 inhibitors for treating a hepatitis b infection

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021179533A Division JP2022019747A (ja) 2016-06-17 2021-11-02 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2019523649A true JP2019523649A (ja) 2019-08-29
JP7258558B2 JP7258558B2 (ja) 2023-04-17

Family

ID=56321739

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2018565300A Active JP7007304B2 (ja) 2016-06-17 2017-06-19 Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子
JP2018565394A Active JP7258558B2 (ja) 2016-06-17 2017-06-19 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤
JP2021179533A Pending JP2022019747A (ja) 2016-06-17 2021-11-02 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤
JP2022000376A Pending JP2022036182A (ja) 2016-06-17 2022-01-05 Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子
JP2023204150A Pending JP2024026252A (ja) 2016-06-17 2023-12-01 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2018565300A Active JP7007304B2 (ja) 2016-06-17 2017-06-19 Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021179533A Pending JP2022019747A (ja) 2016-06-17 2021-11-02 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤
JP2022000376A Pending JP2022036182A (ja) 2016-06-17 2022-01-05 Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子
JP2023204150A Pending JP2024026252A (ja) 2016-06-17 2023-12-01 Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤

Country Status (19)

Country Link
US (4) US11191775B2 (ja)
EP (3) EP3472362B1 (ja)
JP (5) JP7007304B2 (ja)
KR (3) KR20220056252A (ja)
CN (3) CN109328237B (ja)
AU (3) AU2017285351B2 (ja)
BR (2) BR112018075682A2 (ja)
CA (2) CA3027305A1 (ja)
CL (3) CL2018003561A1 (ja)
CR (1) CR20180590A (ja)
ES (1) ES2942407T3 (ja)
IL (2) IL263552A (ja)
MA (1) MA45496A (ja)
MX (2) MX367541B (ja)
PE (1) PE20190443A1 (ja)
PL (1) PL3472346T3 (ja)
RU (1) RU2768699C2 (ja)
SG (1) SG11201810594RA (ja)
WO (2) WO2017216390A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019518037A (ja) * 2016-06-17 2019-06-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子
US11484546B2 (en) 2017-10-16 2022-11-01 Hoffman-La Roche Inc. Nucleic acid molecule for reduction of PAPD5 and PAPD7 mRNA for treating hepatitis B infection

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10738035B2 (en) 2015-05-13 2020-08-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
KR102398439B1 (ko) 2016-03-07 2022-05-16 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 B형 간염 항바이러스제
CN110066278B (zh) * 2017-06-01 2021-06-08 广东东阳光药业有限公司 稠合三环类化合物及其在药物中的应用
KR102556744B1 (ko) 2017-08-28 2023-07-18 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 B형 간염 항바이러스제
WO2019143902A2 (en) 2018-01-22 2019-07-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
US10729688B2 (en) 2018-03-29 2020-08-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
BR112020020220A8 (pt) 2018-04-05 2021-02-17 Centre Leon Berard uso de inibidores da fubp1 para o tratamento de infecção pelo vírus da hepatite b
KR102585973B1 (ko) 2018-07-03 2023-10-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 타우 발현을 조절하기 위한 올리고뉴클레오티드
KR20210033004A (ko) 2018-07-13 2021-03-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Rtel1의 발현을 조절하기 위한 올리고뉴클레오티드
WO2020051375A2 (en) 2018-09-05 2020-03-12 Children's Medical Center Corporation Papd5 inhibitors and methods of use thereof
AR116474A1 (es) 2018-09-21 2021-05-12 Enanta Pharm Inc DERIVADOS DEL ÁCIDO 6,7-DIHIDRO-2H-BENZOFURO[2,3-a]QUINOLIZIN-3-CARBOXÍLICO COMO AGENTES ANTIVIRALES PARA EL TRATAMIENTO O PREVENCIÓN DE UNA INFECCIÓN POR HBV
AU2019385477A1 (en) 2018-11-21 2021-06-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocycles as antiviral agents
US20220220483A1 (en) * 2019-05-30 2022-07-14 Seoul National University R&Db Foundation Method for inhibiting infection and activation of virus
WO2020247444A1 (en) 2019-06-03 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc, Hepatitis b antiviral agents
WO2020247561A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc, Hepatitis b antiviral agents
US11472808B2 (en) 2019-06-04 2022-10-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolo[1,2-c]pyrimidines as hepatitis B antiviral agents
WO2021007488A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
US11236108B2 (en) 2019-09-17 2022-02-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocycles as antiviral agents
WO2021092159A1 (en) * 2019-11-07 2021-05-14 The Regents Of The University Of Colorado A Body Corporate Papd5 inhibition as a treatment for dyskeratosis congenita, aplastic anemia and myelodysplastic syndrome caused by reduced telomerase rna levels
CN114867856A (zh) 2019-12-19 2022-08-05 豪夫迈·罗氏有限公司 Saraf抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
EP4077668A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of scamp3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
CN114901821A (zh) 2019-12-19 2022-08-12 豪夫迈·罗氏有限公司 Sept9抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
CN115516091A (zh) 2019-12-19 2022-12-23 豪夫迈·罗氏有限公司 Cops3抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
CN114829601A (zh) 2019-12-19 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 Sbds抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
WO2021188414A1 (en) 2020-03-16 2021-09-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocyclic compounds as antiviral agents
EP3955067A1 (en) 2020-08-11 2022-02-16 GF Machining Solutions SA A system for predicting anomalies of machining with a neuromorphic circuit
WO2022038211A2 (en) 2020-08-21 2022-02-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of a1cf inhibitors for treating hepatitis b virus infection
KR20230119130A (ko) 2020-12-14 2023-08-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인히빈 서브유닛 베타 e(inhbe) 억제제로 대사 장애 및 심혈관 질환을 치료하는 방법
TW202246500A (zh) 2021-02-02 2022-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於抑制 ｒｔｅｌ１ 表現之增強型寡核苷酸
CA3223192A1 (en) 2021-06-18 2022-12-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing ifnar1 expression
CA3231180A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Redona Therapeutics, Inc. Papd5 and/or papd7 inhibiting 4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid derivatives
WO2023111210A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1
WO2023144750A1 (en) * 2022-01-28 2023-08-03 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination therapy for treating hepatitis b virus infections

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014036429A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Aptamir Therapeutics, Inc. Mirna modulators of chronic visceral inflammation
WO2015113990A1 (en) * 2014-01-30 2015-08-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2015173164A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
JP6462155B2 (ja) * 2015-05-04 2019-01-30 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療用のＨＢｓＡｇ（ＨＢＶ表面抗原）及びＨＢＶ ＤＮＡ産生の阻害剤としてのテトラヒドロピリドピリミジン類及びテトラヒドロピリドピリジン類

Family Cites Families (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4711955A (en) 1981-04-17 1987-12-08 Yale University Modified nucleotides and methods of preparing and using same
CA1223831A (en) 1982-06-23 1987-07-07 Dean Engelhardt Modified nucleotides, methods of preparing and utilizing and compositions containing the same
DE3538677A1 (de) 1985-10-31 1987-05-07 Schloemann Siemag Ag Wendehaspel
DE69233046T2 (de) 1991-10-24 2004-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc., Carlsfeld Derivatisierte oligonukleotide mit verbessertem aufnahmevermögen
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
NL9201440A (nl) 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
ATE207119T1 (de) 1992-11-06 2001-11-15 Sandoz Ltd Die herstellung von menschlichen, monoklonalen antikörpern, die gegen das oberflächenantigen von hepatitis b aktiv sind
US20040157780A1 (en) 1993-11-29 2004-08-12 Epimmune Inc. CTL inducing peptides from c-erb2 (HER-2/neu)
CA2185918A1 (en) 1994-04-05 1995-10-12 Genzyme Corporation Determination and identification of active compounds in a compound library
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
JP4236812B2 (ja) 1997-09-12 2009-03-11 エクシコン エ／エス オリゴヌクレオチド類似体
CZ296576B6 (cs) 1999-02-12 2006-04-12 Sankyo Company Limited Nukleosidový analog a oligonukleotidový analog a farmaceutický prostredek, sonda a primer s jeho obsahem
KR100782896B1 (ko) 1999-05-04 2007-12-06 엑시콘 에이/에스 Ｌ-리보-ｌｎａ 유사체
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
WO2003022987A2 (en) 2001-07-26 2003-03-20 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of hepatitis c infection, compositions and methods of screening for modulators of hepatitis c infection
EP2305812A3 (en) 2002-11-14 2012-06-06 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
DK3222722T3 (da) 2002-11-18 2019-06-17 Roche Innovation Ct Copenhagen As Antisense-design
US20060257851A1 (en) 2002-11-26 2006-11-16 Itzhak Bentwich Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof
EP2270162B1 (en) 2003-06-12 2018-10-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Conserved hbv and hcv sequences useful for gene silencing
JP2005116204A (ja) 2003-10-03 2005-04-28 Daikin Ind Ltd 放電装置および空気浄化装置
US7374927B2 (en) 2004-05-03 2008-05-20 Affymetrix, Inc. Methods of analysis of degraded nucleic acid samples
EP1752536A4 (en) 2004-05-11 2008-04-16 Alphagen Co Ltd POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME
US20060263798A1 (en) * 2005-02-11 2006-11-23 International Business Machines Corporation System and method for identification of MicroRNA precursor sequences and corresponding mature MicroRNA sequences from genomic sequences
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
JP5342881B2 (ja) 2006-01-27 2013-11-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド ６−修飾された二環式核酸類似体
AU2007225238A1 (en) * 2006-03-10 2007-09-20 Wyeth Microarray for monitoring gene expression in multiple strains of Streptococcus pneumoniae
JP2009536222A (ja) 2006-05-05 2009-10-08 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｐｃｓｋ９の発現を調節するための化合物および方法
WO2007134181A2 (en) 2006-05-11 2007-11-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
MX2009002936A (es) 2006-09-19 2009-04-01 Novartis Ag Biomarcadores de la modulacion de objetivo, eficacia, diagnostico, y/o pronostico para los inhibidores de raf.
AU2007310989B2 (en) 2006-10-18 2014-05-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
WO2008113832A2 (en) 2007-03-22 2008-09-25 Santaris Pharma A/S SHORT RNA ANTAGONIST COMPOUNDS FOR THE MODULATION OF TARGET mRNA
CA2688321A1 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
ES2386492T3 (es) 2007-06-08 2012-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos carbocíclicos
CN101796062B (zh) 2007-07-05 2014-07-30 Isis制药公司 6-双取代双环核酸类似物
CA2701895A1 (en) 2007-10-04 2009-04-09 Santaris Pharma A/S Short rna antagonist compounds for the modulation of hif1alpha
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
JP5611834B2 (ja) 2007-12-27 2014-10-22 アボット・ラボラトリーズＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 抗Ｔ．ｃｒｕｚｉ抗体及び使用方法
WO2009090182A1 (en) 2008-01-14 2009-07-23 Santaris Pharma A/S C4'-substituted - dna nucleotide gapmer oligonucleotides
DK2285819T3 (da) 2008-04-04 2013-12-02 Isis Pharmaceuticals Inc Oligomere forbindelser omfattende neutralt bundne, terminale bicykliske nukleosider
US20110118337A1 (en) * 2008-07-10 2011-05-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Method of Using Compositions Comprising MIR-192 and/or MIR-215 for the Treatment of Cancer
DK2356129T3 (da) 2008-09-24 2013-05-13 Isis Pharmaceuticals Inc Substituerede alpha-L-bicykliske nukleosider
EP2177615A1 (en) 2008-10-10 2010-04-21 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Method for a genome wide identification of expression regulatory sequences and use of genes and molecules derived thereof for the diagnosis and therapy of metabolic and/or tumorous diseases
EP2379083B1 (en) 2008-12-18 2017-08-16 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression
WO2010093788A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences
WO2011017521A2 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
JP2013126374A (ja) 2010-03-04 2013-06-27 Kyushu Univ イソフラボン類の作用に関連する遺伝子
WO2011156202A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted 2 '-amino and 2 '-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CA2807307C (en) 2010-08-17 2021-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Rna interference mediated inhibition of hepatitis b virus (hbv) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
LT3124610T (lt) 2010-10-28 2019-08-12 Benitec Biopharma Limited Hbv gydymas
EP2673361B1 (en) * 2011-02-08 2016-04-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
EP2699583A4 (en) 2011-04-21 2015-04-15 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF EXPRESSION OF HEPATITIS B VIRUS (HBV)
TWI786401B (zh) 2011-06-30 2022-12-11 美商艾羅海德製藥公司 用於抑制ｂ型肝炎病毒基因表現之組合物及方法
WO2013022984A1 (en) 2011-08-11 2013-02-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
EP2751270B1 (en) 2011-08-29 2018-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
KR20140067092A (ko) 2011-09-07 2014-06-03 마리나 바이오테크, 인크. 형태적으로 제한된 단량체를 갖는 핵산 화합물의 합성 및 용도
WO2013113326A1 (en) * 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
WO2013154798A1 (en) 2012-04-09 2013-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic nucleic acid analogs
WO2013159109A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2013166264A2 (en) 2012-05-02 2013-11-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods for altering virus replication
KR102213609B1 (ko) 2012-07-13 2021-02-08 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 제어
KR102112892B1 (ko) 2012-11-15 2020-05-19 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 올리고뉴클레오티드 콘쥬게이트
RU2019110030A (ru) 2013-05-01 2019-05-06 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы
EP3591054A1 (en) 2013-06-27 2020-01-08 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9
US20160319361A1 (en) 2013-08-28 2016-11-03 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Oligonucleotide probes and uses thereof
JP2017505623A (ja) 2014-01-30 2017-02-23 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 生物切断性コンジュゲートを有するポリオリゴマー化合物
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
FR3026868B1 (fr) 2014-10-02 2019-08-16 Dav Dispositif et procede de commande pour vehicule automobile
SG11201702877TA (en) 2014-10-10 2017-05-30 Hoffmann La Roche Galnac phosphoramidites, nucleic acid conjugates thereof and their use
US9637485B2 (en) 2014-11-03 2017-05-02 Hoffmann-La Roche Inc. 6,7-dihydrobenzo[a]quinolizin-2-one derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis B virus infection
JP2017536119A (ja) 2014-11-19 2017-12-07 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス キラルホスホロチオエート連結を含むｌｎａギャップマーオリゴヌクレオチド
US10815481B2 (en) 2014-12-16 2020-10-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Chiral library screen
WO2016107832A1 (en) 2014-12-30 2016-07-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel tetrahydropyridopyrimidines and tetrahydropyridopyridines for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2016127002A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Lna oligonucleotides with alternating flanks
EP3256471B1 (en) 2015-02-11 2018-12-12 F. Hoffmann-La Roche AG Novel 2-oxo-6,7-dihydrobenzo[a]quinolizine-3-carboxylic acid derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2017015175A1 (en) 2015-07-17 2017-01-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and agents against hepatitis b virus and uses thereof
JP7336191B2 (ja) 2015-08-07 2023-08-31 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｂ型肝炎ウイルス感染に対するＲＮＡｉ療法
WO2017066712A2 (en) * 2015-10-16 2017-04-20 The Children's Medical Center Corporation Modulators of telomere disease
JP6985288B2 (ja) 2016-04-14 2021-12-22 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft トリチル−モノ−ＧａｌＮＡｃ化合物とその利用
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
WO2018059718A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Rijk Zwaan Zaadteelt En Zaadhandel B.V. Peronospora resistance in spinacia oleracea
CL2020001638A1 (es) 2017-10-16 2020-10-16 Hoffmann La Roche Molécula de ácidos nucleicos para la reducción del arnm de papd5 y papd7 en el tratamiento de la infección de la hepatitis b. (divisional solicitud 202000945)
SG11202003461TA (en) 2017-10-16 2020-05-28 Hoffmann La Roche NUCLEIC ACID MOLECULE FOR REDUCTION OF PAPD5 AND PAPD7 mRNA FOR TREATING HEPATITIS B INFECTION
MX2020007915A (es) 2018-01-29 2020-09-03 Hoffmann La Roche Proceso para la preparacion de conjugados de oligonucleotidos de n-acetilgalactosamina (galnac).
CL2019000945A1 (es) 2019-04-09 2019-07-12 Energy Harvest As Dispositivo de válvula rotatoria y sus métodos.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014036429A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Aptamir Therapeutics, Inc. Mirna modulators of chronic visceral inflammation
WO2015113990A1 (en) * 2014-01-30 2015-08-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2015173164A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel dihydroquinolizinones for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
JP6462155B2 (ja) * 2015-05-04 2019-01-30 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療用のＨＢｓＡｇ（ＨＢＶ表面抗原）及びＨＢＶ ＤＮＡ産生の阻害剤としてのテトラヒドロピリドピリミジン類及びテトラヒドロピリドピリジン類

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019518037A (ja) * 2016-06-17 2019-06-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子
US11191775B2 (en) 2016-06-17 2021-12-07 Hoffmann-La Roche Inc. PAPD5 and PAPD7 inhibitors for treating a hepatitis B infection
JP7007304B2 (ja) 2016-06-17 2022-02-10 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｂ型肝炎感染症治療用のＰＡＰＤ５又はＰＡＰＤ７のｍＲＮＡ減少用核酸分子
US11534452B2 (en) 2016-06-17 2022-12-27 Hoffmann-La Roche Inc. Nucleic acid molecules for reduction of PAPD5 or PAPD7 mRNA for treating hepatitis B infection
US11484546B2 (en) 2017-10-16 2022-11-01 Hoffman-La Roche Inc. Nucleic acid molecule for reduction of PAPD5 and PAPD7 mRNA for treating hepatitis B infection

Also Published As

Publication number Publication date
KR102381682B1 (ko) 2022-03-31
BR112018075682A2 (pt) 2019-04-02
JP2022036182A (ja) 2022-03-04
US11191775B2 (en) 2021-12-07
EP3472362C0 (en) 2023-09-06
MA45496A (fr) 2019-04-24
SG11201810594RA (en) 2018-12-28
IL263552A (en) 2019-01-31
JP2024026252A (ja) 2024-02-28
JP2019518037A (ja) 2019-06-27
KR20190019164A (ko) 2019-02-26
AU2017285351A1 (en) 2018-12-13
KR20220056252A (ko) 2022-05-04
RU2019100094A3 (ja) 2021-04-06
CR20180590A (es) 2019-03-05
PL3472346T3 (pl) 2023-05-22
EP4219767A1 (en) 2023-08-02
KR20190018515A (ko) 2019-02-22
PE20190443A1 (es) 2019-03-29
JP7007304B2 (ja) 2022-02-10
MX2018015516A (es) 2019-03-18
US11534452B2 (en) 2022-12-27
EP3472346B1 (en) 2023-01-18
JP7258558B2 (ja) 2023-04-17
US20230210887A1 (en) 2023-07-06
IL263558A (en) 2019-01-31
EP3472362A1 (en) 2019-04-24
US20190216846A1 (en) 2019-07-18
EP3472362B1 (en) 2023-09-06
CA3027811A1 (en) 2017-12-21
AU2017285350A1 (en) 2018-12-20
CL2020003330A1 (es) 2021-06-04
RU2768699C2 (ru) 2022-03-24
US20190194768A1 (en) 2019-06-27
EP3472346A1 (en) 2019-04-24
AU2023202562A1 (en) 2023-05-18
AU2017285351B2 (en) 2023-04-20
MX367543B (es) 2019-08-22
MX367541B (es) 2019-08-22
CL2020003329A1 (es) 2021-06-04
CN109328237B (zh) 2022-12-06
US20220096527A1 (en) 2022-03-31
KR102391812B1 (ko) 2022-04-27
CN116196411A (zh) 2023-06-02
MX2018015521A (es) 2019-03-18
RU2019100094A (ru) 2020-07-17
WO2017216390A1 (en) 2017-12-21
WO2017216391A1 (en) 2017-12-21
CA3027305A1 (en) 2017-12-21
ES2942407T3 (es) 2023-06-01
CN109328237A (zh) 2019-02-12
JP2022019747A (ja) 2022-01-27
CN109414448A (zh) 2019-03-01
CN109414448B (zh) 2021-10-26
BR112018075960A2 (pt) 2019-10-01
CL2018003561A1 (es) 2019-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7258558B2 (ja) Ｂ型肝炎感染症の治療用のｐａｐｄ５阻害剤及びｐａｐｄ７阻害剤
EP3391907B1 (en) Intracellular kinase sik3 associated with resistance against anti-tumour immune responses, and uses thereof
JP6108660B2 (ja) 細胞透過性ペプチドを用いたキナーゼ阻害剤
US8007790B2 (en) Methods for treating polycystic kidney disease (PKD) or other cyst forming diseases
CN112972492A (zh) Nk细胞中对细胞因子诱导的sh2蛋白的抑制
JP2013519869A (ja) 筋肉成長のための方法および化合物
TW200530588A (en) Compositions and methods for modulating c-Rel-dependent cytokine production
JP6986263B2 (ja) 抗ウイルス薬
CA2738605A1 (en) Composition and method for treatment of preterm labor
WO2015050957A2 (en) Treatments for systemic lupus erythematosus
JPWO2005046724A1 (ja) 血管障害や高血圧症の治療・予防剤、及びそのスクリーニング方法
RU2812903C2 (ru) Композиции и способы лечения, предотвращения и обращения связанного с возрастом воспаления и расстройств
JP2023108978A (ja) ＨＢＶ由来ｃｃｃＤＮＡの抑制剤、抑制方法、ＨＢＶ感染症用医療組成物、およびＨＢＶ感染症の治療方法

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20200604

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20210803

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20211102

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220315

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220615

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20221004

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230104

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230314

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230405

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7258558

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150