ES2942407T3 - Inhibidores de PAPD5 y PAPD7 para tratar una infección por hepatitis B - Google Patents

Inhibidores de PAPD5 y PAPD7 para tratar una infección por hepatitis B Download PDF

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Abstract

La presente invención se refiere a un método para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por el virus de la hepatitis B (VHB), en el que un compuesto que (i) reduce la expresión y/o la actividad del dominio asociado a PAP que contiene 5 (PAPD5) y/o dominio asociado a PAP que contiene 7 (PAPD7); y/o (ii) se une a PAPD5 y/o PAPD7 e inhibe la propagación de 5 HBV; se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB. La invención también proporciona un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 para usar en el tratamiento y/o prevención de una infección por VHB; así como una preparación combinada que comprende un inhibidor de PAPD5 y un inhibidor de PAPD7 para uso simultáneo o secuencial en el tratamiento o prevención de una infección por VHB. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de PAPD5 y PAPD7 para tratar una infección por hepatitis B
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un procedimiento para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por el virus de la hepatitis B (VHB), en el que un compuesto que (i) reduce la expresión y/o actividad del que contiene el dominio asociado a PAP 5 (PAPD5) y/o el que contiene el dominio asociado a PAP 7 (PAPD7); y/o (ii) se une a PAPD5 y/o PAPD7 e inhibe la propagación de VHB; se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB. También está comprendido en la presente invención un procedimiento para controlar el éxito terapéutico durante el tratamiento de una infección por VHB.
Antecedentes
El virus de la hepatitis B (VHB) es un virus de ADN parcialmente bicatenario con envoltura. El genoma del VHB de 3,2 kb compacto consiste en cuatro marcos abiertos de lectura (ORF) superpuestos, que codifican el centro, la polimerasa (Pol), la envoltura y las proteínas X. El ORF de Pol es el más largo y el ORF de envoltura se localiza dentro de él, mientras que los ORF de X y centro se superponen con el ORF de Pol. El ciclo de vida del VHB tiene dos acontecimientos principales: 1) generación de ADN circular cerrado (ADNccc) a partir de circular relajado (ADN CR) y 2) transcripción inversa de ARN pregenómico (ARNpg) para producir ADN CR. Antes de la infección de células huésped, el genoma del VHB existe dentro del virión como ADN CR. Se ha determinado que los viriones del VHB pueden entrar en células huésped por la unión de forma inespecífica a los proteoglicanos cargados negativamente presentes en la superficie de los hepatocitos humanos (Schulze, Hepatology, 46, (2007), 1759-68) y por medio de la unión específica de antígenos de superficie de VHB (HBsAg) al receptor del polipéptido cotransportador de taurocolato de sodio (NTCP) del hepatocito (Yan, J Virol, 87, (2013), 7977-91). El control de la infección vírica necesita una estrecha vigilancia del sistema inmunitario innato del huésped, que podría responder en minutos u horas después de la infección para tener impacto en el crecimiento inicial del virus y limitar el desarrollo de una infección crónica y persistente. A pesar de los tratamientos actuales disponibles basados en IFN y análogos nucleos(t)ídicos, la infección por VHB sigue siendo un importante problema de salud en todo el mundo que afecta a unos 350 millones de portadores crónicos que tienen un mayor riesgo de cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular.
La secreción de citocinas antivíricas en respuesta a una infección por VHB por los hepatocitos y/o las células inmunitarias intrahepáticas desempeña un papel principal en la eliminación vírica del hígado infectado. Sin embargo, los pacientes infectados de forma crónica solo muestran una respuesta inmunitaria débil debido a diversas estrategias de escape adoptadas por el virus para contrarrestar los sistemas de reconocimiento de célula huésped y las posteriores respuestas antivíricas.
Muchas observaciones mostraron que varias proteínas víricas del VHB podrían contrarrestar la respuesta celular del huésped inicial interfiriendo con el sistema de señalización de reconocimiento vírico y posteriormente con la actividad antivírica del interferón (IFN). Entre estas, la excesiva secreción de partículas subvíricas vacías del VHB (SVP, HBsAg) que se cree que participan en el mantenimiento del estado de tolerancia inmunológica observado en pacientes infectados de forma crónica (HBC). La exposición repetida a HBsAg y otros antígenos víricos puede dar lugar a la deleción de linfocitos T específicos de VHB o al deterioro funcional progresivo (Kondo, Journal of Immunology (1993), 150, 4659-4671; Kondo, Journal of Medical Virology (2004), 74, 425-433; Fisicaro, Gastroenterology, (2010), 138, 682-93;). Además, se ha informado de que HBsAg suprime la función de las células inmunitarias tales como monocitos, células dendríticas (CD) y linfocitos citolíticos naturales (NK) por interacción directa (Op den Brouw, Immunology, (2009b), 126, 280-9; Woltman, PLoS One, (2011), 6, e15324; Shi, J Viral Hepat. (2012), 19, e26-33; Kondo, ISRN Gasteroenterology, (2013), ID de artículo 935295).
La cuantificación de HBsAg es un biomarcador significativo para el pronóstico y la respuesta al tratamiento en la hepatitis B crónica. Sin embargo, rara vez se observa el logro de la pérdida y seroconversión de HBsAg en pacientes infectados de forma crónica pero sigue siendo uno de los objetivos finales del tratamiento. El tratamiento actual tal como análogos nucleos(t)ídicos son moléculas que inhiben la síntesis de ADN del VHB pero que no se dirigen a la reducción del nivel de HBsAg. Los análogos nucleos(t)ídicos, incluso con tratamiento prolongado, solo muestran una eliminación de HBsAg débil comparable a la observada naturalmente (entre -1 %-2 %) (Janssen, Lancet, (2005), 365, 123-9; Marcellin, N. Engl. J. Med., (2004), 351, 1206-17; Buster, Hepatology, (2007), 46, 388­ 94).
El antígeno e de hepatitis B (también llamado antígeno de la envoltura de VHB o HBeAg) es una proteína vírica que se secreta por células infectadas por hepatitis B. HBeAg se asocia con infecciones por hepatitis B crónicas y se usa como marcador de enfermedad vírica activa y del grado de infecciosidad de un paciente.
La función del precentro del virus de la hepatitis B o HBeAg no se conoce por completo. Sin embargo, es bien conocido que HBeAg desempeña un papel clave en la persistencia vírica. Se cree que HBeAg promueve la cronicidad del VHB funcionando como una proteína inmunorreguladora. En particular, el HBeAg es una proteína accesoria secretada, que parece atenuar la respuesta inmunitaria del huésped a la proteína de la nucleocápside intracelular (Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141). El HBeAg actúa como un tolerógeno inmunitario que contribuye a la persistencia del VHB y posiblemente funciona en el útero considerando que el HBeAg soluble atraviesa la placenta (Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141). Además, el HBeAg regula por disminución: i) los genes celulares que controlan la señalización intracelular; y ii) el receptor tipo Toll 2 (TLR-2) para amortiguar la respuesta inmunitaria innata a la infección vírica (Walsh, Virology, 2011,411(1):132-141). En ausencia de HBeAg, la replicación del VHB se asocia con la regulación por incremento de la vía TLR2 (Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141). En consecuencia, HBeAg tiene un papel significativo en la modulación de las interacciones virus/huésped para influir en la respuesta inmunitaria del huésped (Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141). Por tanto, la reducción de HBeAg en la población de pacientes con HBeAg puede dar lugar a la reversión de la disfunción inmunitaria específica de v Hb (Milich, 1997, J. Viral. Hep. 4: 48-59; Milich, 1998, J. Immunol. 160: 2013­ 2021). Además, el HBeAg secretado es significativamente más eficaz que el antígeno central de la hepatitis intracelular (HBeAg) para provocar la tolerancia de linfocitos T, y la tolerancia de linfocitos T dividida entre HBeAg y HBeAg y la heterogeneidad clonal de la tolerancia de linfocitos T específicos de HBc/HBeAg pueden tener implicaciones significativas para la infección por VHB natural y especialmente para la hepatitis crónica sin precentro (Chen, 2005, Journal of Virology, 79: 3016-3027).
En consecuencia, la reducción de la secreción de HBeAg además de la secreción de HBsAg daría lugar a una mejora en la inhibición del desarrollo de una infección por VHB crónica en comparación con la inhibición de la secreción de HBsAg solo. Además, se ha informado de las mayores tasas de transmisión de una infección aguda a crónica (>80 %) en casos de transmisión del VHB materno-fetal y neonatal de madres con HBeAg (Liaw, Lancet, 2009, 373:582-592; Liaw, Dig. Dis. Sci., 2010, 55: 2727-2734; y Hadziyannis, 2011, Journal of hepatology, 55: 183­ 191). Por lo tanto, la reducción de HBeAg en una futura madre no solo puede reducir el grado de infecciosidad de la paciente, sino que también puede inhibir el desarrollo de una infección por VHB crónica en su hijo.
Por lo tanto, en el tratamiento de VHB existe una necesidad médica no cubierta de inhibir la expresión vírica, en particular de inhibir la secreción de HBsAg y HBeAg (Wieland, SF y FV Chisari. J Virol, (2005), 79, 9369-80; Kumar et al. J Virol, (2011), 85, 987-95; Woltman et al. PLoS One, (2011), 6, e15324; Op den Brouw et al. Immunology, (2009b), 126, 280-9).
El documento WO 03/022987 divulga, por ejemplo, en la tabla 7A 1298 genes que se regulan por incremento en tejido con hepatitis C. Uno de los genes mencionados es la proteína 4 de función relacionada con la topoisomerasa (TRF4, AF089897). AF089897 también se denomina TRF4-2, que es bastante similar a la posición de 880 a 2340 de SEQ ID NO: 4 en el presente documento. La observación de que un fragmento de PAPD5 se regula por incremento ligeramente en células con hepatitis C no proporciona ninguna indicación de que la inhibición de PAPD5 represente un tratamiento eficaz. El documento WO 03/022987A2 no divulga ningún indicio de que los fragmentos de PAPD5 desempeñen un papel crítico durante la infección por hepatitis C. Además, VHC y VHB son dos virus completamente diferentes que dan lugar a dos enfermedades completamente diferentes con etiologías diferentes, progresión diferente y medicación diferente. Esto está en consonancia con la observación de los autores de la presente invención de que los inhibidores de PAPD5 y PAPD7 DHQ y THP son inactivos contra el virus de la hepatitis C (VHC) u otros virus además del VHB (datos no mostrados).
En el documento WO 2010/040571, se ha sugerido PAPD5 en una larga lista de otros genes por tener un papel potencial en la proliferación celular en enfermedades metabólicas y tumorales sin proporcionar ninguna prueba real.
En el documento WO2013/166264, se ha sugerido PAPD5 en una larga lista de otros genes por tener un papel potencial en el incremento de la replicación vírica sin proporcionar ninguna prueba real.
En el documento WO 2017/066712 se ha descrito la regulación por disminución de PAPD5 en relación con el tratamiento y diagnóstico de enfermedades de los telómeros. Se han descrito cinco estructuras de ARNhp para este propósito.
Hasta donde sabemos, la expresión de PAPD5 o PAPD7 nunca se ha asociado con infección por VHB.
Objetivo de la invención
Por tanto, el problema técnico que subyace a la presente invención es la identificación y provisión de medios y procedimientos mejorados para tratar y/o prevenir una infección por VHB.
El problema técnico se resuelve por la provisión de los modos de realización descritos en el presente documento y caracterizados en las reivindicaciones.
Sumario de la invención
Un aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB, que comprende:
(a) poner en contacto un compuesto de prueba con
(a1) el polipéptido PAPD5 y/o polipéptido PAPD7; o
(a2) una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7;
(b) medir la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en presencia y ausencia de dicho compuesto de prueba; e
(c) identificar un compuesto que reduce la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
Otro aspecto de la invención es un procedimiento para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB, que comprende:
(a) poner en contacto un compuesto de prueba con
(i) el polipéptido PAPD5 y/o PAPD7; o
(ii) una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7;
(b) medir si el compuesto de prueba se une al polipéptido PAPD5 y/o PAPD7;
(c) medir si el compuesto de prueba inhibe la propagación de VHB; e
(d) identificar un compuesto que se une al polipéptido PAPD5 y/o PAPD7 e inhibe la propagación de VHB como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento para controlar el éxito terapéutico durante el tratamiento de una infección por VHB, en el que el procedimiento comprende:
(a) analizar en una muestra obtenida de un sujeto de prueba la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7; (b) comparar dicha cantidad y/o actividad con datos de referencia correspondientes a la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 de al menos un sujeto de referencia; y predecir el éxito terapéutico.
Breve descripción de las figuras
Las figuras muestran:
Figura 1: imágenes del experimento 1 por 1 con sondas químicas HBX129653/HBX129654 y los 3 fragmentos de presa.
Figura 2: imágenes del experimento 1 por 1 con sondas químicas HBX129653/HBX129654 y proteínas de longitud completa PAPD5/7.
Figura 3: imágenes del ensayo de competencia usando HBX129653 (DHQ) y MOL653/654 para competencia Figura 4: imágenes del ensayo de competencia usando HBX129654 (THP) y MOL653/654 para competencia Figura 5: imágenes del ensayo de competencia usando HBX129653 (DHQ) e INACT653/INACT654 para competencia. MOL653 se incluyó como control positivo.
Figura 6: imágenes del ensayo de competencia usando HBX129654 (THP) e INACT653/INACT654 para competencia. MOL653 se incluyó como control positivo.
Figura 7: (A) La atenuación ("knock-down", KD) con ARNip de PAPD5 y PAPD7 en dHepaRG infectada por VHB da lugar a una reducción en la expresión de VHB. Se infectaron células HepaRG diferenciadas por VHB y se trataron con ARNip contra PAPD5, PAPD7 o bien ambos (25 nM cada uno) un día antes de la infección por v Hb y el día 4 después de la infección. El sobrenadante se recogió el día 11, los niveles de HBsAg y HBeAg secretados en el sobrenadante se midieron por ELISA y se normalizaron con respecto al control no tratado. La toxicidad celular y la inhibición de la expresión génica se midieron posteriormente y también se normalizaron con respecto al control no tratado. (B) Se realizó el mismo experimento que se describe en (A), con la excepción de que solo se midió el nivel de HBsAg secretado en el sobrenadante.
Descripción detallada de la invención
PAPD5 y PAPD7 son poli(A)-polimerasas no canónicas que pertenecen a la superfamilia de nucleotidiltransferasas tipo polimerasa p. En el contexto de la presente invención, se ha demostrado sorprendentemente que un compuesto que es útil para la intervención terapéutica de una infección por VHB se puede identificar exitosamente analizando si un compuesto de prueba inhibe PAPD5 y/o PAPD7. O, en otras palabras, la inhibición de PAPD5 y/o PAPD7 se identificó en los ejemplos adjuntos como un indicador de la eficacia de un compuesto para inhibir una infección por VHB. Los ejemplos adjuntos demuestran que un compuesto de dihidroquinolicinona que tiene la fórmula (III) como se muestra en el presente documento a continuación (en el presente documento denominado DHQ) y un compuesto de tetrahidropiridopirimidina que tiene la fórmula (IV) como se muestra en el presente documento a continuación (en el presente documento denominado THP) se unen a los polipéptidos PAPD5 y PAPD7. Estos compuestos tienen la capacidad de inhibir la producción de antígeno de superficie de VHB (HBsAg) y la expresión de ARN de VHB durante la infección por VHB (documento WO 2015/113990 A1 y documento WO2016/177655). Además, los ejemplos adjuntos muestran que la inhibición de PAPD5 y/o PAPD7 usando ARNip da lugar a una inhibición de la expresión vírica, en particular de la secreción de HBsAg y HBeAg así como de la producción de ARNm de VHB intracelular. Estos resultados indican directamente que reduciendo la cantidad y/o actividad (por ejemplo, la cantidad) de PAPD5 y/o PAPD7 una infección por VHB (por ejemplo, una infección por VHB crónica) se puede prevenir o tratar (es decir, mejorar y/o inhibir). Por tanto, la presente invención se refiere a un procedimiento de cribado, en el que un compuesto que reduce la expresión y/o actividad (por ejemplo, la expresión) de PAPD5 y/o PAPD7 (por ejemplo, de PAPD5 y PAPD7) se identifica como un compuesto que previene y/o trata (es decir, mejora y/o inhibe) una infección por VHB.
Se ha descubierto en el contexto de la presente invención que un compuesto antagoniza (es decir, inhibe) PAPD5 y/o PAPD7 da lugar a la inhibición de la expresión y replicación génica de VHB; y por tanto, previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB. Dicho compuesto puede dar lugar a una reducción de la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 de un 10-100 %, preferentemente de un 20-100 %, más preferentemente de un 30-100 %, incluso más preferentemente de un 40-100 %. incluso más preferentemente de un 50-100 %, incluso más preferentemente de un 60-100 %, incluso más preferentemente de un 70-100 %, incluso más preferentemente de un 80-100 %, y lo más preferentemente de un 90-100 %.
En el procedimiento de cribado proporcionado en el presente documento, se prevé que la expresión de PAPD5 y/o PAPD7 se mida (es decir, analice/determine) usando en la etapa (a) una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7, es decir, (ai). La actividad de PAPD5 y/o PAPD7 se puede medir (es decir, analizar/determinar) usando en la etapa (a) (ai) polipéptido PAPD5 y/o PAPD7, por ejemplo, en una preparación sin células; o bien (aii) una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7.
En un aspecto de la invención, un compuesto que reduce la expresión de PAPD5 y/o PAPD7 (por ejemplo, de PAPD5, preferentemente de PAPD5 y PAPD7) se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe (es decir, trata) la infección por VHB. En otro aspecto de la invención, un compuesto que reduce la actividad de PAPD5 y/o pA p D7 (por ejemplo, de PAPD5, preferentemente de PAPD5 y PAPD7) se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe (es decir, trata) una infección por VHB. Se prioriza que un compuesto que reduce la expresión y/o actividad de PAPD5 o de ambas moléculas, PAPD5 y PAPD7, se identifique como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB. Lo más preferentemente, un compuesto que reduce la expresión y/o actividad de ambas moléculas, PAPD5 y PAPD7, se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
De acuerdo con la presente invención, un compuesto que previene y/o trata (es decir, mejora y/o inhibe) una infección por VHB se puede identificar (es decir, seleccionar) realizando una primera etapa de preselección para identificar un compuesto que se une a PAPD5 y/o PAPD7. Posteriormente, en una segunda etapa, se puede evaluar si un compuesto que se ha identificado que se une a PAPD5 y/o PAPD7 inhibe la propagación de VHB. Por tanto, la presente invención se refiere a otro procedimiento de cribado, en el que un compuesto que se une a PAPD5 y/o PAPD7 (por ejemplo, a PAPD5 y PAPD7) e inhibe la propagación de VHB se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe (es decir, trata) una infección por VHB.
Por tanto, la invención se refiere a un procedimiento para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB, que comprende:
(a) poner en contacto un compuesto de prueba con
(ai) el polipéptido PAPD5 y/o polipéptido PAPD7; o
(aii) una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7;
(b) medir si el compuesto de prueba se une a PAPD5 y/o a PAPD7;
(c) medir si el compuesto de prueba inhibe la propagación de VHB; e
(d) identificar un compuesto que se une a PAPD5 y/o PAPD7 e inhibe la propagación de VHB como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
Por tanto, de acuerdo con la presente invención, un compuesto que se une a PAPD5 y/o PAPD7 (por ejemplo, a PAPD5, preferentemente a PAPD5 y PAPD7) e inhibe la propagación de VHB se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe (es decir, trata) una infección por VHB. Se prioriza que un compuesto que (i) se une a PAPD5, o que se une a ambas moléculas, PAPD5 y PAPD7; y (ii) inhibe la propagación de VHB, se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB. Lo más preferentemente, un compuesto que se une a ambas moléculas, PAPD5 y PAPD7, e inhibe la propagación de VHB, se identifica como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
Los procedimientos de cribado descritos anteriormente dan lugar a la identificación de un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB. Se prioriza que dichos compuestos mejoran y/o inhiben (es decir, tratan) una infección por VHB. Por tanto, los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento son útiles en la identificación de un compuesto que trata una infección por VHB.
En el contexto de la presente invención, PAPD5 puede ser el polipéptido PAPD5 o el ARNm de PAPD5. Se prioriza en el contexto de los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento que PAPD5 es el polipéptido PAPD5. Un aspecto de la presente invención se refiere a los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, en los que el polipéptido PAPD5 es un polipéptido que comprende o que consiste en
(a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o 2;
(b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (a), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa;
(c) la secuencia de aminoácidos de un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 1 o 2; o
(d) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (d), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa.
Los ejemplos de fragmentos enzimáticamente activos de SEQ ID NO: 1 o 2 (es decir, de PAPD5) son el dominio nucleotidiltransferasa en las posiciones 145-256 de SEQ ID NO: 1 o 2, o la poli A polimerasa Cid1 en las posiciones 308-368 de SEQ ID NO: 1 o 2.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, en los que las células que expresan PAPD5 contienen ARNm de Pa PD5, un polinucleótido que comprende o que consiste en
(i) la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o 2;
(ii) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 %, e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con SEQ ID NO: 1 o 2, en el que el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene función poli-A polimerasa;
(iii) la secuencia de nucleótidos que codifica un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 1 o 2;
(iv) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 1 o 2, en el que el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene función poli-A polimerasa;
(v) una secuencia de nucleótidos que comprende o que consiste en SEQ ID NO: 4 o 5; o
(vi) una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 %, e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con SEQ ID NO: 4 o 5, en el que el polipéptido expresado a partir de la secuencia tiene función poli-A polimerasa; o
(vii) un pre-ARNm que cuando se procesa (es decir, se empalma) da lugar a un polinudeótido de (v) o (vi).
En modos de realización preferentes, el ARNm de PAPD5 puede ser un polinudeótido que comprende o que consiste en la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 4 o 5. Sin embargo, el ARNm de PAPD5 también puede ser un polinudeótido que comprende o que consiste en una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con SEQ ID NO: 4 o 5, en el que el polinudeótido codifica un polipéptido que tiene función poli-A polimerasa.
En el contexto de la presente invención, PAPD7 puede ser el polipéptido de PAPD7 o el ARNm de PAPD7. Se prioriza en el contexto de los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento que PAPD7 es el polipéptido PAPD7. Un aspecto de la presente invención se refiere a los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, en los que el polipéptido PAPD7 es un polipéptido que comprende o que consiste en
(a) la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3;
(b) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (a), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa;
(c) la secuencia de aminoácidos de un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 3; o
(d) una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (c), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa.
Los ejemplos de fragmentos enzimáticamente activos de SEQ ID NO: 3 (es decir, de PAPD7) son el dominio nucleotidiltransferasa en las posiciones 15-125 de SEQ ID NO: 3; o la poli A polimerasa de la familia Cid1 en las posiciones 178-238 de SEQ ID NO: 3.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, en los que las células que expresan PAPD7 contienen ARNm de Pa PD7, un polinudeótido que comprende o que consiste en
(i) la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3;
(ii) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 %, e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con SEQ ID NO: 3, en el que el polinudeótido codifica un polipéptido que tiene función poli-A polimerasa;
(iii) la secuencia de nucleótidos que codifica un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 3; o
(iv) una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 3, en el que el polinudeótido codifica un polipéptido que tiene función poli-A polimerasa; o
(v) una secuencia de nucleótidos que comprende o que consiste en SEQ ID NO: 6; o
(vi) una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con SEQ ID NO: 6, en el que el polipéptido expresado a partir de la secuencia tiene función poli-A polimerasa; o
(vii) un pre-ARNm que cuando se procesa (es decir, se empalma) da lugar a un polinudeótido de (v) o (vi).
En modos de realización preferentes, el ARNm de PAPD7 puede ser un polinudeótido que comprende o que consiste en la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 6. Sin embargo, el ARNm de PAPD7 también puede ser un polinudeótido que comprende o que consiste en una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con SEQ ID NO: 6, en el que el polinucleótido codifica un polipéptido que tiene función poli-A polimerasa.
En el contexto de la presente invención, dicha célula puede ser una célula eucariota. Por ejemplo, dicha célula puede ser una célula de levadura o una célula de vertebrado. Las células de vertebrados incluyen células de peces, aves, reptiles, anfibios, marsupiales y mamíferos. Preferentemente, la célula es una célula de mamífero, lo más preferentemente, una célula humana. Las células de mamífero también incluyen células de felinos, caninos, bovinos, equinos, caprinos, ovinos, porcinos murinos, tales como ratones y ratas, y conejos. En los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, la "célula" puede expresar endógenamente PAPD5 y/o PAPD7 o sobreexpresar PAPD5 y/o PAPD7. Para sobreexpresar PAPD5 y/o PAPD7, la célula puede comprender la secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido PAPD5 y/o el polipéptido PAPD7 dentro de un vector de expresión. En modos de realización preferentes, la célula comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido PAPD5 y una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido PAPD7. La célula de los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento puede estar comprendida en un animal no humano, por ejemplo, un ratón, rata, conejo o hurón.
En el procedimiento de cribado descrito anteriormente en el que se mide la unión a PAPD5 y/o PAPD7, un compuesto se puede identificar como un compuesto que se une al polipéptido PAPD5 y/o polipéptido PAPD7 si tiene una afinidad de unión particular a PAPD5 y/o PAPD7. Por ejemplo, el compuesto que se une a PAPD5 y/o PAPD7 puede tener una constante de disociación (Kd) en el intervalo micromolar; o, preferentemente, en el intervalo de 100 nM a 1 pM.
En el contexto de la presente invención, se puede medir (es decir, analizar) si el compuesto de prueba se une específicamente al polipéptido PAPD5 y/o polipéptido PAPD7, es decir, si el compuesto de prueba se une exclusiva o predominantemente a PAPD5 y/o PAPD7. Por ejemplo, se puede medir si el compuesto de prueba se une específicamente a PAPD7. Preferentemente, se mide si el compuesto de prueba se une específicamente a PAPD5. Más preferentemente, se mide si el compuesto de prueba se une a ambos, PAPD5 y PAPD7. Por ejemplo, se puede medir si el compuesto de prueba se une específicamente a PAPD5 y PAPD7.
Por ejemplo, en los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, la unión del compuesto de prueba a PAPD5 y/o PAPD7 se puede medir realizando un cribado de 3 híbridos de levadura. El sistema Y3H es una versión modificada del sistema de dos híbridos de levadura (Y2H) adaptado para la detección de interacciones fármaco-proteína. Requiere el acoplamiento del fármaco de interés con un ligando que se puede anclar a una proteína de unión a ADN dentro de las células de levadura. A continuación, se detecta la interacción del fármaco anclado con una proteína diana vinculando su asociación a la activación transcripcional de un gen indicador; véanse, por ejemplo Johnsson, Nature Chem Bio, 2011, 7: 375-383; y Licitra, Proc Natl Acad Sci U S A, 1996, 12; 93(23):12817-21. En dicho cribado de 3 híbridos de levadura se puede usar un compuesto libre inactivo para competir contra el compuesto de prueba marcado.
La unión de un compuesto de prueba a PAPD5 y/o PAPD7 también se puede medir usando Biacore, ChemoProteomics o Microscale Thermophoresis.
Un compuesto que inhibe la propagación de VHB puede ser un compuesto que reduce la expresión de ARN vírico, que reduce la producción de a Dn vírico (ADN de VHB) que deriva de ARN vírico (ARN de VHB), que reduce la producción de nuevas partículas víricas (partículas de VHB), y/o que produce producción y/o secreción de HBsAg y/o HBeAg. Por tanto, un aspecto de la presente invención se refiere a los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, en los que el compuesto que inhibe la propagación de VHB inhibe la secreción de HBsAg, inhibe la secreción de HBeAg y/o inhibe la producción de ADN de VHB o ARNm de VHB intracelular. Preferentemente, un compuesto que inhibe la propagación de VHB es un compuesto que inhibe la secreción de HBsAg, la secreción de HBeAg y la producción de ARNm de VHB intracelular.
Por ejemplo, un compuesto que inhibe la propagación de VHB puede reducir la expresión de ARN vírico (ARN de VHB), la producción de ADN vírico (ADN de VHB) derivado de ARN vírico, la producción de nuevas partículas víricas (partículas de VHB), la producción y/o secreción de HBsAg y/o HBeAg en un 10-100 %, preferentemente en un 20-100 %, más preferentemente en un 30-100 %, incluso más preferentemente en un 40-100 %, incluso más preferentemente en un 50-100 %, incluso más preferentemente en un 60-100 %, incluso más preferentemente en un 70-100 %, incluso más preferentemente en un 80-100 %, y lo más preferentemente en un 90-100 %, cuando se comparan las células o animales no tratados o células o animales tratados con un control apropiado.
Los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento pueden comprender adicionalmente la etapa de comparar el compuesto de prueba con un control. Dicho control puede ser un compuesto de prueba inactivo, en el que dicho compuesto de prueba inactivo es un compuesto que:
(i) no reduce la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7; y/o
(ii) no se une a PAPD5 y/o PAPD7 y no inhibe la propagación de VHB.
Este compuesto de prueba inactivo no tiene actividad contra VHB, por ejemplo, no da lugar a la inhibición de la secreción de HBsAg y HBeAg ni a la inhibición de la producción de ARNm de VHB intracelular. Por ejemplo, el compuesto de prueba inactivo puede tener un valor de CI50 en la inhibición de HBsAg de más de 3 |jM. En el procedimiento de cribado proporcionado en el presente documento, el compuesto de prueba inactivo puede ser el compuesto "compuesto d Hq - inactivo" o el compuesto "compuesto THP - inactivo" como se define en los ejemplos adjuntos. En el procedimiento de cribado en el que se mide la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7, se puede usar el compuesto de prueba como se define anteriormente en (i). De forma alternativa, en el procedimiento de cribado en el que se mide la unión a PAPD5 y/o PAPD7, se puede usar el compuesto de prueba como se define anteriormente en (ii). Se puede diseñar un compuesto inactivo a partir de uno activo, por ejemplo, por modificación química y/o separación quiral.
En los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, se puede medir la actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en presencia y ausencia del compuesto de prueba, por ejemplo, controlando la poliadenilación in vitro de ARNm, por ejemplo, como se describe en Rammelt, RNA, 2011, 17:1737-1746. En resumen, un ribooligonucleótido A15 se puede incubar con proteína PAPD5 recombinante expresada en Escherichia coli en presencia de ATP(A), CTP (C), GTP(G), UTP(U) o una mezcla de los cuatro dNTp, respectivamente.
La expresión de PAPD5 y/o PAPD7 en presencia y ausencia del compuesto de prueba se puede medir, por ejemplo, usando (q) PCR, inmunoelectrotransferencia o MassSpec.
La inhibición de la propagación de VHB se puede medir, por ejemplo, midiendo si el compuesto de prueba tiene actividad para inhibir la secreción de HBsAg y/o de HBeAg, y/o para inhibir la producción de ARNm de VHB intracelular. La inhibición de secreción de HBsAg y/o HBeAg se puede medir por ELISA, por ejemplo, usando el kit CLIA ELISA (Autobio Diagnostic) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La inhibición de la producción de ARNm de VHB intracelular se puede medir por PCR ultrarrápida, por ejemplo, como se describe en los ejemplos adjuntos. Otros procedimientos para evaluar si un compuesto de prueba inhibe la propagación de VHB son medir la secreción de ADN de VHB por RT-qPCR, por ejemplo, como se describe en el documento WO 2015/173208; transferencia Northern; hibridación in situ o inmunofluorescencia.
Para llevar a cabo los procedimientos de cribado proporcionados en el presente documento, se pueden usar colecciones de moléculas disponibles pública o comercialmente. Por tanto, en el contexto de la invención el dicho compuesto de prueba puede ser
(i) una molécula pequeña de una colección de cribado; o
(ii) un péptido de una colección de presentación de fagos, de una colección de fragmentos de anticuerpo o derivado de una colección de ADNc.
Por ejemplo, se puede usar la colección cDHA Human Liver (HLV) o la colección cDNA Human Placenta (PLA) de Hybrigenics Services SAS.
En el procedimiento de cribado proporcionado en el presente documento en el que se mide la actividad del polipéptido PAPD5 y/o polipéptido PAPD7, dicha actividad de PAPD5 y PAPD7 es preferentemente la función poli-A polimerasa (es decir, la actividad poli-A polimerasa). La función/actividad de la poli-A polimerasa de un polipéptido (por ejemplo, de PAPD5 o PAPD7) se puede medir, por ejemplo, controlando la poliadenilación in vitro de ARNm, por ejemplo, como se describe en Rammelt, RNA, 2011, 17:1737-1746. Este procedimiento también se puede usar para medir la función poli-A polimerasa de PAPD5 y/o PAPD7 en presencia y ausencia de un compuesto de prueba.
Los ejemplos adjuntos demuestran que inhibiendo el polipéptido PAPD5 y/o PDPD7, se puede inhibir eficazmente la secreción de HBsAg y HBeAg, así como la producción de ARNm de VHB intracelular. Estos datos demuestran que se puede usar un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 para prevenir y/o tratar una infección por VHB.
Varios compuestos que tienen una determinada eficacia en el tratamiento de una infección por VHB se han descrito en la técnica (véanse, por ejemplo, los documentos WO 2015/113990 A1 y WO 2016/177655). Sin embargo, en el contexto de la presente invención, se ha descubierto sorprendentemente que los agentes anti-VHB que tienen una estructura completamente diferente (por ejemplo, DHQ y THP) se unen sorprendente y específicamente a PAPD5 y PAPD7. Además, la técnica anterior también engloba agentes menos activos en la inhibición de la producción de HBsAg. En los ejemplos adjuntos se ha demostrado que dichos agentes tienen menos afinidad de unión a PAPD5 y PAPD7 (véase, por ejemplo, "DHQ - inactivo"). De hecho, los ejemplos adjuntos demuestran una clara correlación entre la actividad del compuesto contra una infección por VHB y la afinidad de unión hacia PAPD5 y PAPD7. Por tanto, el uso selectivo de un agente anti-VHB que se une a PAPD5 y/o PAPD7 da lugar a una eficacia anti-VHB en particular alta. Además, la presente invención muestra por primera vez que un compuesto que inhibe PAPD5, PAPD7, o en particular PAPD5 y PAPD7 tiene una actividad extraordinariamente alta en términos de inhibición de la secreción de HBsAg y HBeAg así como de producción de ARNm de VHB intracelular. La reducción de la secreción de HBsAg y HBeAg inhibe el desarrollo de la infección por VHB crónica más eficazmente en comparación con la reducción de secreción de HBsAg solo. Además, la inhibición de secreción de HBsAg y HBeAg reduce la infecciosidad de una persona infectada por VHB. Además, la reducción de HBeAg en una futura madre también puede inhibir el desarrollo de una infección por VHB crónica en su hijo. Por tanto, la presente invención demuestra inesperadamente que usar selectivamente compuestos que inhiben PAPD5 y/o PAPD7 da lugar a una mejora en el éxito terapéutico en el tratamiento de una infección por VHB en términos de una reducción considerablemente más eficaz de HBsAg y HBeAg.
En consecuencia, en el presente documento se describe el uso de un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 en el tratamiento de infección por VHB, en particular una infección por VHB crónica. También se describe en el presente documento el uso de un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 en la reducción de los antígenos víricos HBsAg y HBeAg. Por tanto, en el presente documento se describe un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 para su uso en tratar y/o prevenir una infección por VHB, en el que dicho inhibidor es
(i) una pequeña molécula que se une a PAPD5 y/o PAPD7;
(ii) una molécula de ARN de interferencia (ARNi) contra PAPD5 y/o PAPD7;
(iii) un anticuerpo que se une específicamente a PAPD5 y/o PAPD7; o
(iv) una maquinaria de edición del genoma, que comprende:
(a) una nucleasa de ADN específica de sitio o un polinucleótido que codifica una nucleasa de ADN específica de sitio; y
(b) un ARN guía o un polinucleótido que codifica un ARN guía.
El inhibidor descrito en el presente documento también puede ser una molécula de ácido nucleico bloqueado (ANB) específica de PAPD5 y/o PAPD7.
Se prevé que el inhibidor descrito en el presente documento se use para tratar (por ejemplo, mejorar) una infección por VHB.
El inhibidor puede ser una molécula que inhibe específicamente PAPD7. Preferentemente, el inhibidor es una molécula que inhibe específicamente PAPD5. Más preferentemente, el inhibidor inhibe ambos, PAPD5 y PAPD7. Por tanto, se prioriza que el inhibidor descrito en el presente documento inhibe PAPD5 o ambos, PAPD5 y PAPD7. Lo más preferentemente, el inhibidor descrito en el presente documento inhibe PAPD5 y PAPD7. Descrito en el presente documento, el inhibidor puede inhibir ambos, PAPD5 y PAPD7 y da lugar a una reducción de la secreción de HBsAg y/o HBeAg de al menos un 50 % en comparación con el control sin fármaco (es decir, en comparación con células o sujetos a los que no se les ha administrado ningún fármaco).
El inhibidor descrito en el presente documento puede tener un valor de CI50 en la inhibición de HBsAg y HBeAg por debajo de 3 |j M, preferentemente por debajo de 2 |jM, más preferentemente por debajo de 1 |jM, más preferentemente por debajo de 0,1 jiM y lo más preferentemente por debajo de 0,01 jiM.
La edición del genoma usando una nucleasa de ADN específica de sitio (tal como Cas9 o Cpf1) y un ARN guía es comúnmente conocido en la técnica y se describe, por ejemplo, en "CRISPR-Cas: A Laboratory Manual", 2016, editado por Jennifer Doudna, ISBN 978-1-621821-31-1.
Por ejemplo, si dicha nucleasa de ADN específica de sitio es una nucleasa Cas9, a continuación la maquinaria de edición del genoma preferentemente comprende además:
(i) al menos un ARN guía que consiste en al menos una molécula de ARN CRISPR (ARNcr) específica de secuencia diana y al menos una molécula de ARNcr transactivante (ARNtracr);
(ii) un polinucleótido que codifica las moléculas de ARN de (i);
(iii) al menos un ARN guía, que es una molécula de ARN quimérica que comprende al menos un ARNcr específico de secuencia diana y al menos un ARNtracr; o
(iv) un polinucleótido que codifica el ARN quimérico de (iii).
En un ejemplo alternativo, la nucleasa de ADN específica de sitio es una nucleasa Cpf1, y la maquinaria de edición del genoma preferentemente comprende además:
(i) al menos un ARN guía que comprende una molécula de ARN CRISPR (ARNcr) específica de secuencia diana; o
(ii) un polinucleótido que codifica las moléculas de ARN de (i).
El inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 descrito en el presente documento también puede ser una maquinaria de edición del genoma que comprende al menos un complejo de ribonucleoproteína (RNP) de ARN guía de proteína Cas9 preensamblado.
En el presente documento, el ARN guía está diseñado para dirigirse al ADN de PAPD5 o PAPD7 genómico. De forma alternativa, se usan varios ARN guía, de modo que el ADN genómico de PAPD5 y de PAPD7 se pueda dirigir. La inhibición de PAPD5 y/o PAPD7 se puede lograr introduciendo mutaciones de inactivación con desplazamiento de marco en el ADN de PAPD5 y/o PAPD7 genómico a través de la unión final no homóloga (NHEJ), o modificando el ADN de PAPD5 y/o PAPD7 genómico a través de reparación dirigida por homología (HDR). La forma en que se pueden inducir estos mecanismos es comúnmente conocida en la técnica y se describe, por ejemplo, en Heidenreich, 2016, Nat Rev Neurosci 1736-44.
El inhibidor descrito en el presente documento puede ser una molécula natural, por ejemplo, un anticuerpo natural o una molécula de ARNi natural. Sin embargo, el inhibidor descrito en el presente documento también puede ser una molécula no natural. Por ejemplo, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos que no es idéntica a la de los anticuerpos naturales o puede ser un anticuerpo que comprende al menos un residuo aminoacídico no natural tal como los aminoácidos sintéticos que proporcionan funcionalidad de cadena lateral similar. Por ejemplo, los aminoácidos aromáticos se pueden reemplazar con D- o L-naftilalanina, D- o L-fenilglicina, D- o L-2-tienilalanina, D- o L-1-, 2-, 3- o 4- pirenilalanina, D- o L-3-tienilalanina, D- o L-(2-piridinil)-alanina, D- o L-(3-piridinil)-alanina, D- o L-(2-piracinil)-alanina, D- o L-(4-isopropil)-fenilglicina, D-(trifluorometil)-fenilglicina, D-(trifluorometil)-fenilalanina, D-p-fluorofenilalanina, D- o L-pbifenilalanina D-o Lpmetoxibifenilalanina, D- o L-2-indol(alquil)alaninas y D- o L-alquilalaninas en las que el grupo alquilo se selecciona del grupo que consiste en metilo, etilo, propilo, hexilo, butilo, pentilo, isopropilo, isobutilo e isopentilo sustituidos o no sustituidos. Se puede hacer que los aminoácidos no carboxilatos posean una carga negativa, como se proporciona por aminoácidos fosfono- o sulfatados, que se deben considerar como ejemplos no limitantes. Otros aminoácidos no naturales son los aminoácidos alquilados, hechos combinando un grupo alquilo con cualquier aminoácido natural. Los aminoácidos naturales básicos tales como lisina y arginina se pueden sustituir con grupos alquilo en la funcionalidad (NH2) amina. Aún otras sustituciones de aminoácidos no naturales incluyen derivados de nitrilo (por ejemplo, que contienen un resto CN en lugar de la funcionalidad CONH2) de asparagina o glutamina y derivado de sulfóxido de metionina.
Análogamente, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser una molécula de ARNi que tiene una secuencia de nucleótidos que no es idéntica a las moléculas de ARNi naturales o puede ser una molécula de ARNi que comprende al menos un nucleótido no natural, tal como un oligonucleótido tiofosfato, un ribooligonucleótido sustituido, una molécula de ANB, una molécula de APN, una molécula de ANG (ácido nucleico glucólico), una molécula de ANT (ácido nucleico treósico), un polinucleótido de morfolino o un ácido nucleico con una estructura modificada tal como polisiloxano, fosforotioato de 2'-O-(2-metoxi)etilo, o un ácido nucleico con un sustituyente, tal como metil-, tio-, sulfato, benzoil-, fenil-, amino-, propil-, cloro- y metanocarbanucleósido, o una molécula indicadora para facilitar su detección. El inhibidor descrito en el presente documento también puede ser una molécula pequeña natural o no natural o una maquinaria de edición del genoma.
El inhibidor descrito en el presente documento puede
(i) unirse al polipéptido PAPD5 y/o PAPD7; y/o
(ii) inhibir la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7.
Por ejemplo, el inhibidor descrito en el presente documento se puede unir al polipéptido PAPD5 e inhibir la actividad del polipéptido PAPD5. En otro ejemplo, el inhibidor descrito en el presente documento se une al polipéptido PAPD7 e inhibe la actividad del polipéptido PAPD7. Se prioriza en el presente documento que el inhibidor se une a ambos, el polipéptido PAPD5 y PAPD7, e inhibe la actividad de ambos, el polipéptido PAPD5 y PAPD7. El inhibidor descrito en el presente documento puede inhibir la expresión de PAPD5 o PAPD7; o puede inhibir la expresión de ambos, PAPD5 y PAPD7.
Como se describe anteriormente, se ha demostrado que un compuesto que inhibe PAPD5 y/o PAPD7 tiene una alta actividad en términos de inhibición de la secreción de HBsAg y HBeAg así como de producción de ARNm de VHB intracelular. Por lo tanto, el inhibidor descrito en el presente documento reduce la secreción de HBsAg y HBeAg. Debido a la reducción de la secreción de HBsAg, el inhibidor descrito en el presente documento inhibe el desarrollo de la infección por VHB crónica. En particular, debido a la inhibición de la secreción de HBeAg, el inhibidor descrito en el presente documento inhibe más eficazmente el desarrollo de una infección por VHB crónica en comparación con un compuesto que solo reduce la secreción de HBsAg. Además, la reducción de HBeAg en una futura madre también puede inhibir el desarrollo de una infección por VHB crónica en su hijo. Por tanto, debido a la reducción de la secreción de HBeAg, el inhibidor descrito en el presente documento inhibe el desarrollo de una infección por VHB crónica (tal como el desarrollo de una infección por VHB crónica en la descendencia de una madre infectada por VHB) y reduce la infecciosidad de una persona infectada por VHB. En consecuencia, el inhibidor descrito en el presente documento puede reducir la secreción de HBsAg y HBeAg. En consonancia con esto, el inhibidor descrito en el presente documento puede inhibir el desarrollo de una infección por VHB crónica y reducir la infecciosidad de una persona infectada por VHB. El inhibidor descrito en el presente documento puede inhibir el desarrollo de una infección por VHB crónica en la descendencia de una madre infectada por VHB. Preferentemente, esta madre tiene HBeAg.
El sujeto que se va a tratar con el inhibidor descrito en el presente documento (o que recibe profilácticamente el inhibidor descrito en el presente documento) es preferentemente un ser humano, más preferentemente un paciente humano que tiene HBsAg y/o que tiene HBeAg, incluso más preferentemente un paciente humano que tiene HBsAg y que tiene HBeAg. Dicho paciente humano puede ser una futura madre, por ejemplo, una futura madre que tiene HBeAg y/o que tiene HBsAg, más preferentemente una futura madre que tiene HBeAg y que tiene HBsAg.
Compuestos (solo como referencia)
Como se describe anteriormente, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser una molécula pequeña. Por ejemplo, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser el compuesto de fórmula (I) o (II):
Figure imgf000012_0001
fórmula (I)
en la que
R1 es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-6, alquilamino C1-6 o alcoxi C1-6;
R2 es hidrógeno; halógeno; alquilo C1-6, que está insustituido o sustituido una vez, dos veces o tres veces por fluoro; alcoxi C1-6, que está insustituido o sustituido una vez, dos veces o tres veces por fluoro; ciano; cicloalquilo C3-7; hidroxi o fenil-CxH2x-O-;
R3 es hidrógeno;
halógeno;
alquilo C1-6, que está insustituido o sustituido una vez, dos veces o tres veces por fluoro;
ciano;
pirrolidinilo;
amino;
fenil-CxH2x-N(alquil C1-6)-;
alcoxicarbonilpiperacinilo C1-6;
o R7-O- , en la que R7 es hidrógeno; alquilo C1-6, que está insustituido o sustituido con de uno a tres sustituyentes seleccionados independientemente de fluoro, hidroxi y alquenilo C2-6; alcoxi C1-6alquilo C1-6; alcoxi C1-6alcoxi C1-6alquilo C1-6; aminoalquilo C1-8; alquilcarbonil C1-6aminoalquilo C1-8; alquilsulfonil C1-6aminoalquilo C1-8; alquilsulfanil C1-6alquilo C1-6; alquilsulfonil C1-6alquilo C1-6; cianoalquilo C1-6; cicloalquil C3-7alquilo C1-6; cianocicloalquil C3-7alquilo C1-6; fenilalquilo C1-6; pirrolidinilcarbonilalquilo C1-6; alquinilo C2-6; hidroxialquil C1-6alquinilo C2-6; aminoalcoxi C1-6alquilo C1-6; alquil C1-6aminoalcoxi C1-6alquilo C1-6; dialquil C1-6aminoalcoxi C1-6alquilo C1-6; carboxialquilo C1-6; o alcoxicarbonil C1-6aminoalquilo C1-8; heteroarilalquilo C1-6, en la que heteroarilo es heteroarilo monocíclico que contiene N; o heterocicloalquilalquilo C1-6, en la que heterocicloalquilo es heterocicloalquilo monocíclico; R4 es hidrógeno, halógeno, alquilo Ci-6, ciano o alcoxi Ci-6;
siempre que R1, R2, R3 y R4 no sea hidrógeno simultáneamente;
R5 es hidrógeno o alquilo C1-6;
R6 es hidrógeno; alquilo C1-6, que está insustituido o sustituido una vez, dos veces o tres veces por fluoro; cicloalquilo C3-7, que está insustituido o sustituido una vez, dos veces o tres veces por fluoro o alquilo C1-6; o fenil-CxH2x-;
x es 1-6;
o una sal farmacéuticamente aceptable, o un enantiómero del mismo, o un diastereómero del mismo;
Figure imgf000013_0001
fórmula (II)
en la que
R1 es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, haloalquilo C1-6, hidroxialquilo C1-6, nitroalquilo C1-6, alcoxicarbonil C1-6alquilo C1-6, carboxialquilo C1-6, di(alcoxicarbonil C1-6)metilenilo, cianoalquilo C1-6, cicloalquil C3-7alquilo C1-6, fenilalquilo C1-6, alquilsulfanil C1-6alquilo C1-6, alquilsulfonil C1-6alquilo C1-6, aminoalquilo C1-6, alquilcarbonil C1-6aminoalquilo C1-6, alquilsulfonil C1-6aminoalquilo C1-6, alcoxicarbonil C1-6aminoalquilo C1-6, aminocarbonilalquilo C1-6, dialquilaminocarbonil C1-6alquilo C1-6, heterocicloalquilalquilo C1-6 monocíclico o imidazolilalquilo C1-6;
R2 es arilo o heteroarilo, estando dicho arilo o heteroarilo insustituido o sustituido por uno, dos, tres o cuatro sustituyentes independientemente seleccionados de alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, halógeno, haloalquilo C1-6, ciano, nitro, hidroxi, haloalcoxi C1-6, -O-CxH2x-R3, -O-CyH2y-NHR6, -NR9R10, - SO2-R11, -SO2-NR12R13, carboxi, alcoxicarbonilo C1-6, -C(=O)-NR12R13, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo monocíclico y heterocicloalquilo -O-monocíclico; en la que heterocicloalquilo monocíclico está insustituido o sustituido por alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6 o alcoxicarbonilo C1-6;
R3 es hidrógeno; cicloalquilo C3-7; halocicloalquilo C3-7; hidroxi; hidroxialquil C1-6cicloalquilo C3-7; alcoxi C1-6; heterocicloalquilo monocíclico; heterocicloalquilo monocíclico sustituido por alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilo C3-7 o alcoxicarbonilo C1-6; -C(=O)-R4; alquilsulfinilo C1-6; -SO2-R5; -C(NHR7)-C(=O)-R8; carboxialcoxi C1-6 o aminocarbonilalcoxi C1-6; en la que R4 es hidroxi, alcoxi C1-6, amino, alquilamino C1-6, dialquilamino C1-6, tetrahidrofuranilamino, pirrolidinilo o morfolinilo;
R5 es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, hidroxi, amino, alquilamino C1-6 o dialquilamino C1-6;
R7 es hidrógeno o alcoxicarbonilo C1-6;
R8 es hidrógeno o alcoxi C1-6;
R6 es hidrógeno, alquilcarbonilo C1-6, haloalquilcarbonilo C1-6, alcoxicarbinilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilsulfonilo C3-7 o alcoxi C1-6alquilsulfonilo C1-6;
R9 y R10 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, alquilcarbonilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, cicloalquilcarbonilo C3-7 y cicloalquilsulfonilo C3-7; o R9 y R10 conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos forman un heterocicloalquilo monocíclico;
R11 es alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, halocicloalquilo C3-7, hidroxialquilo C1-6, alcoxi C1-6alquilo C1-6, haloalcoxi C1-6alquilo C1-6, cicloalquil C3-7alquilo C1-6, aminoalquilo C1-6, alquilamino C1-6alquilo C1-6, dialquilamino C1-6alquilo C1-6, alquilcarbonil C1-6aminoalquilo C1-6, alquilsulfonil C1-6aminoalquilo C1-6, alcoxicarbonil C1-6aminoalquilo C1-6, alquilsulfenil C1-6alquilo C1-6, alquilsulfanil C1-6alquilo C1-6 o alquilsulfonil C1-6alquilo C1-6; R12 y R13 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, cicloalquilo C3-7 y halocicloalquilo C3-7; o
R12 y R13 conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos forman un heterocidoalquilo monocíclico;
x es 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8;
y es 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8;
U, W y Z se seleccionan independientemente de CH y N;
uno de X e Y es N, y el otro es CH o N;
o una sal farmacéuticamente aceptable, o un enantiómero, o un diastereómero del mismo.
Descrito en el presente documento, ácido 6-metil-2-oxo-9-pirrolidin-1-il-6,7-dihidrobenzo[a]quinolicina-3-carboxílico, ácido 9-fluoro-6-metil-2-oxo-6,7-dihidrobenzo[a]quinolicina-3-carboxílico y ácido 9,10-difluoro-6-metil-2-oxo-6,7-dihidrobenzo[a]quinolicina-3-carboxílico se pueden excluir del compuesto de fórmula (I).
Descritos en el presente documento, los compuestos de fórmulas (I) y (II) se pueden excluir del inhibidor. Por tanto, el inhibidor descrito en el presente documento puede no ser un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o (II). Como se describe anteriormente, los ejemplos adjuntos demuestran que los agentes anti-VHB DHQ (es decir, un compuesto de fórmula (III)) y THP (es decir, un compuesto de fórmula (IV)) se unen eficazmente a PAPD5 y PAPD7. Por tanto, se prioriza que el inhibidor descrito en el presente documento puede ser el compuesto de fórmula (III) o (IV):
Figure imgf000014_0002
f rmula (IV)
En los ejemplos adjuntos, también se ha demostrado que los derivados de los compuestos de fórmulas (III) y (IV) que tienen un conector y un ligando de anclaje tienen afinidad de unión a PAPD5 y PAPD7. Estos derivados se muestran a continuación como fórmulas (V) y (VI), respectivamente. Por tanto, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser el compuesto de fórmula (V) o (VI):
Figure imgf000014_0001
fórmula (V)
Figure imgf000015_0001
fórmula (VI) Como se describe anteriormente, el inhibidor descrito en el presente documento también puede ser una molécula de ARNi contra PAPD5 y/o PAPD7. Dicha molécula de ARNi puede ser un ARNip o un ARNhp.
Por ejemplo, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser un ARNip que se dirige contra PAPD5, en el que dicho ARNip es uno cualquiera de los siguientes ARNip:
Grupo de ARNip para PAPD5 (L-010011-00-0010; ON-TARGETpIus, PAPD5 humano):
A R N ip -1 - J-010011-05-Secuencia diana: CAUCAAUGCUUUAUAUCGA (SEQ ID NO: 10)
ARNip - 2 - J-010011-06 - Secuencia diana: . GGACGACACUUCAAUUAUU (SEQ ID NO: 11)
ARNip - 3 - J-010011-07 - Secuencia diana: GAUAAAGGAUGGUGGUUCA (SEQ ID NO: 12)
ARNip - 4 - J-010011-08 - Secuencia diana: G AAU AG ACCUG AGCCUUCA [SEQ ID NO: 13)
El inhibidor descrito en el presente documento también puede ser un ARNip que se dirige contra PAPD7, en el que dicho ARNip es uno cualquiera de los siguientes ARNip:
Grupo de ARNip para PAPD7 (L-009807-00-0005; ON-TARGETpIus, PAPD7 humano):
ARNip -1 - J-009807-05 - Secuencia diana: GGAGUGACGUUGAUUCAGA [SEQ ID NO: 14)
ARNip - 2 - J-009807-06 - Secuencia diana: CGGAGUUCAUCAAGAAUUA (SEQ ID NO: 15)
ARNip - 3 - J-009807-07 - Secuencia diana: CGGAGUUCAUCAAGAAUUA (SEQ ID NO: 16)
ARNip - 4 - J-009807-08 - Secuencia diana: GCGAAUAGCCACAUGCAAU (SEQ ID NO: 17) Anteriormente, se muestran las secuencias diana de ARNip adecuados. Las secuencias de los correspondientes ARNip son directamente complementarias a estas secuencias diana.
Se prevé que (un) ARNip descrito(s) en el presente documento dirigido(s) contra PAPD5 se combine(n) con (un) ARNip descrito(s) en el presente documento dirigido(s) contra PAPD7, para inhibir la expresión ambos, PAPD5 y PAPD7.
Los ejemplos adjuntos demuestran sorprendentemente que dos agentes anti-VHB que tienen una estructura completamente diferente (es decir, DHQ y THP) tienen un sitio de unión compartido para PAPD5 y PAPD7 o al menos se unen en estrecha proximidad entre sí. En particular, se han identificado dominios de interacción seleccionados (SID) dentro de PAPD5 y PAPD7. SID son las secuencias de aminoácidos que comparten todos los fragmentos de presa que coinciden con la misma proteína de referencia. Por lo tanto, los SID corresponden a las regiones de aminoácidos donde los agentes anti-VHB DHQ y THP se unen a PAPD5 y PAPD7. En consecuencia, la unión a estas regiones da lugar a una inhibición de la actividad de PAPD5 y PAPD7, lo que da como resultado la inhibición de la propagación de VHB. Por tanto, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser un anticuerpo que se une específicamente a al menos un SID de PAPD5 y/o de PAPD7. En consecuencia, el inhibidor descrito en el presente documento puede ser un anticuerpo que se une específicamente al tramo de aminoácidos de una cualquiera de SEQ ID NO: 7-9. El inhibidor descrito en el presente documento también puede ser un anticuerpo que se une específicamente a más de uno de los tramos de aminoácidos de SEQ ID NO: 7-9.
Aplicaciones
Descrito en el presente documento, se ha demostrado sorprendentemente que la inhibición combinada de PAPD5 y PAPD7 da lugar a un efecto sinérgico en la inhibición de la propagación de VHB. Los ejemplos adjuntos muestran que la reducción de la expresión de PAPD5 solo da lugar a una reducción de la secreción de HBsAg y HBeAg de alrededor de un 50 %. La reducción de la expresión de PAPD7 solo da lugar a una reducción de la secreción de HBsAg y HBeAg de no más de un 15 %. La atenuación simultánea de PAPD5 y PAPD7 da lugar a un efecto sinérgico en la reducción de la secreción de HBsAg y HBeAg que se encuentra por encima de la suma de las atenuaciones individuales. Sin quedar vinculado a ninguna teoría, este efecto sinérgico se puede deber a un efecto compensatorio de PAPD5 y PAPD7, puesto que ambas proteínas tienen una homología de secuencia alta y las mismas funciones enzimáticas.
Por lo tanto, en el presente documento se describe una preparación combinada que comprende un inhibidor de PAPD5 y un inhibidor de PAPD7 para su uso en el tratamiento y/o prevención de una infección por VHB. Por tanto, en el presente documento se describe una preparación combinada que comprende un inhibidor de PAPD5 y un inhibidor de PAPD7 para su uso simultáneo o secuencial en el tratamiento y/o prevención de una infección por VHB. Se prevé que dicha preparación combinada se use para tratar (por ejemplo, mejorar) una infección por v Hb . Las definiciones divulgadas en el presente documento en relación con el inhibidor descrito en el presente documento se aplican, mutatis mutandis, a la preparación combinada descrita en el presente documento. La preparación combinada puede comprender una molécula que es un inhibidor de PAPD5 y una molécula separada que es un inhibidor de PAPD7 (por ejemplo, dos moléculas de ARNip separadas o dos moléculas pequeñas separadas). Estos dos inhibidores separados se pueden formular dentro de una unidad, por ejemplo, dentro de una pastilla o vial. De forma alternativa, estos dos inhibidores separados se pueden formular por separado, en unidades separadas, por ejemplo, pastillas o viales separados. Los dos inhibidores separados se pueden administrar juntos (es decir, simultáneamente) o por separado (es decir, secuencialmente) siempre que se logre el efecto sinérgico de los dos inhibidores. Descrita en el presente documento, la preparación combinada puede dar lugar a una reducción de la secreción de HBsAg y HBeAg de al menos un 50 % en comparación con el control sin fármaco (es decir, en comparación con células o sujetos a los que no se les administra fármaco).
En el presente documento se describe una composición farmacéutica para para su uso el tratamiento y/o prevención de una infección por VHB, en la que la composición farmacéutica comprende
(i) el inhibidor descrito en el presente documento; o la preparación combinada descrita en el presente documento; y
(ii) opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En consecuencia, en el presente documento se describe un procedimiento para tratar y/o prevenir una infección por VHB, en el que el procedimiento comprende administrar una cantidad eficaz del inhibidor descrito en el presente documento, la composición farmacéutica descrita en el presente documento o la preparación combinada descrita en el presente documento a un sujeto que necesita dicho tratamiento.
El inhibidor descrito en el presente documento, la preparación combinada descrita en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento se pueden usar en una politerapia. Por ejemplo, el inhibidor descrito en el presente documento, la preparación combinada descrita en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento se pueden combinar con otros agentes anti-VHB tales como interferón alfa-2b, interferón alfa-2a e interferón alfacon-1 (pegilado y no pegilado), ribavirina, lamivudina (3TC), entecavir, tenofovir, telbivudina (LdT), adefovir u otros agentes anti-VHB emergentes tales como un inhibidor de la replicación del ARN del VHB, un inhibidor de la secreción de HBsAg, un inhibidor de la cápside del VHB, un oligómero antisentido (por ejemplo, como se describe en los documentos WO2012/145697 y WO 2014/179629), un ARNip (por ejemplo como se describe en los documentos WO 2005/014806, WO 2012/024170, WO 2012/2055362, WO 2013/003520, WO 2013/159109, WO 2017/027350 y WO2017/015175), una vacuna terapéutica contra el VHB, una vacuna profiláctica contra el VHB, un tratamiento con anticuerpos contra el VHB (monoclonal o policlonal) o agonistas de TLR 2, 3, 7, 8 o 9 para el tratamiento y/o profilaxis de VHB.
Los ejemplos adjuntos demuestran que la regulación por disminución de PAPD5 y/o PAPD7 va junto con una reducción en la producción de HBsAg y HBeAg así como de ARNm de VHB intracelular en células infectadas por VHB. Estos resultados indican que la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 se pueden usar para controlar el éxito terapéutico durante el tratamiento de una infección por VHB, por ejemplo, si el tratamiento con un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 está en curso o se ha realizado. Por tanto, la presente invención se refiere a un procedimiento para controlar el éxito terapéutico durante el tratamiento de una infección por VHB, en el que el procedimiento comprende:
(a) analizar en una muestra obtenida de un sujeto de prueba la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7;
(b) comparar dicha cantidad y/o actividad con datos de referencia correspondientes a la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 de al menos un sujeto de referencia; y
(c) predecir el éxito terapéutico en base a la etapa de comparación (b).
En el procedimiento de control de la invención, el sujeto de prueba puede ser un ser humano que recibe medicación para una infección por VHB o ha recibido medicación para una infección por VHB. El medicamento puede comprender agentes anti-VHB como se describe anteriormente. El medicamento también puede comprender un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD.
En el procedimiento de control de la invención, los datos de referencia pueden corresponder a la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en una muestra de al menos un sujeto de referencia. Dicha muestra puede ser sangre o una biopsia hepática.
Un aspecto de la invención se refiere al procedimiento de control de la invención, en el que al menos un sujeto de referencia tiene una infección por VHB pero no recibió medicación para una infección por VHB; y en el que en la etapa (c) una disminución en la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 del sujeto de prueba en comparación con los datos de referencia indica éxito terapéutico en el tratamiento de una infección por VHB. Por ejemplo, dicha disminución en la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 puede querer decir que la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en la muestra del sujeto de prueba es de un 0 a un 90 % de la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en la muestra del al menos un sujeto de referencia. Por ejemplo, dicha disminución en la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 puede ser de un 0 a un 80 %, preferentemente de un 0 a un 70 %, más preferentemente de un 0 a un 60 %, incluso más preferentemente de un 0 a un 50 %, incluso más preferentemente de un 0 a un 40 %, incluso más preferentemente de un 0 a un 30, incluso más preferentemente de un 0 a un 20 %, y lo más preferentemente de un 0 a un 10 % de la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en la muestra del al menos un sujeto de referencia.
Otro aspecto de la invención se refiere al procedimiento de control de la invención, en el que al menos un sujeto de referencia tiene una infección por VHB y ha recibido medicación para una infección por VHB; y en el que en la etapa (c) una cantidad y/o actividad idéntica o similar de PAPD5 y/o PAPD7 del sujeto de prueba en comparación con los datos de referencia indica éxito terapéutico en el tratamiento de una infección por VHB. Otro aspecto de la invención se refiere al procedimiento de control de la invención, en el que al menos un sujeto de referencia no tiene una infección por VHB; y en el que en la etapa (c) una cantidad y/o actividad idéntica o similar de PAPD5 y/o PAPD7 del sujeto de prueba en comparación con los datos de referencia indica éxito terapéutico en el tratamiento de una infección por VHB. Una cantidad y/o actividad idéntica o similar de PAPD5 y/o PAPD7 puede querer decir que la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en la muestra del sujeto de prueba es de un 90-110 % de la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en la muestra del al menos un sujeto de referencia. Por ejemplo, dicha cantidad y/o actividad idéntica o similar de PAPD5 y/o PAPD7 puede ser de un 95-105 % de la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en la muestra del al menos un sujeto de referencia.
También se describe en el presente documento una célula o un animal no humano (por ejemplo, un ratón, rata, hurón o conejo) con expresión de PAPD5 y/o PAPD7 incrementada, reducida o ausente que se puede usar para identificar y/o caracterizar un compuesto que previene y/o trata (por ejemplo, mejora) una infección por VHB. Por ejemplo, dicha célula o animal no humano puede comprender una secuencia de nucleótidos exógena que codifica PAPD5 y/o PAPD7, por ejemplo, clonada en un vector de expresión y unida de forma funcional a un promotor exógeno. Dicha célula o animal no humano puede sobreexpresar PAPD5 y/o PAPD7, preferentemente PAPD5 y PAPD7. De forma alternativa, dicha célula o animal no humano puede tener una atenuación de PAPD5 y/o PAPD7, preferentemente de PAPD5 y PAPD7.
Fabricación
Un compuesto de fórmula (I) (es decir, un compuesto de dihidroquinolicinona de acuerdo con la fórmula (I)) se puede sintetizar como se describe en el documento WO 2015/113990 A1. En resumen, un compuesto de fórmula (I) se puede preparar por un procedimiento que comprende las siguientes etapas:
(a) hidrólisis de un compuesto de fórmula (A)
Figure imgf000017_0001
(A); o
(b) hidrólisis de un compuesto de fórmula (B)
Figure imgf000018_0001
en la que R1 a R7 y R9 se definen anteriormente con respecto a la fórmula (I) a menos que se indique de otro modo. En la etapa (a) y la etapa (b) se puede usar, por ejemplo, una base tal como hidróxido de litio o hidróxido de sodio. Un compuesto de fórmula (II) (es decir, un compuesto de tetrahidropiridopirimidina de acuerdo con la fórmula (II)) se puede sintetizar como se describe en el documento WO2016/177655. En resumen, un compuesto de fórmula (II) se puede preparar por un procedimiento que comprende una de las siguientes etapas:
(a) acoplamiento de un compuesto de fórmula (A)
Figure imgf000018_0002
con un compuesto de fórmula (B)
R1M (B)
en presencia de un ácido de Lewis;
(b) acoplamiento de un compuesto de fórmula (C)
Figure imgf000018_0003
con un compuesto de fórmula (D)
NHR9R10 (D)
en presencia de una base;
(c) acoplamiento de un compuesto de fórmula (E)
Figure imgf000018_0004
con un compuesto de fórmula (F)
R2-L2 (F);
en la que R1, R2, U, W, X, Y y Z se definen como anteriormente con respecto a la fórmula (II); M es H, Mg, Zn o Na; L1 es F, Cl o Br; y L2 es F, Cl o Br.
En la etapa (a), el ácido de Lewis puede ser, por ejemplo, BF3Et2O o Sc(OTf)3;
En la etapa (b), la base puede ser por ejemplo K2CO3 o DIEA;
En la etapa (c), la reacción se puede llevar a cabo en presencia de una base, y la base puede ser, por ejemplo, K2CO3 o DIEA. La reacción también se puede llevar a cabo en ausencia de una base.
Composiciones
Como se describe anteriormente, en el presente documento se describe un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 para su uso para tratar y/o prevenir una infección por VHB; una preparación combinada que comprende un inhibidor de PAPD5 y un inhibidor de PAPD7 para su uso en el tratamiento y/o prevención de una infección por VHB; y una composición farmacéutica que comprende dicho inhibidor o dicha preparación combinada. Dicha composición farmacéutica (es decir, el medicamento) comprende opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable. Dicha composición farmacéutica puede comprender además un diluyente o excipiente terapéuticamente aceptable.
Una composición farmacéutica típica se prepara mezclando un inhibidor de PAPD5 y/o un inhibidor de PAPD7 y un vehículo o excipiente. Los vehículos y excipientes adecuados son bien conocidos para los expertos en la técnica y se describen en detalle, por ejemplo, en Ansel, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; y Rowe, Handbook of Pharmaceutical Excipients, Chicago, Pharmaceutical Press, 2005. Las formulaciones también pueden incluir uno o más tampones, agentes estabilizantes, tensioactivos, agentes humectantes, agentes lubricantes, emulsionantes, agentes de suspensión, conservantes, antioxidantes, agentes opacificantes, deslizantes, coadyuvantes de procesamiento, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes saborizantes, diluyentes y otros aditivos conocidos para mejorar la apariencia del fármaco o ayudar en la fabricación del producto farmacéutico (es decir, medicamento). Por ejemplo, la composición farmacéutica descrita en el presente documento se puede formular mezclando un inhibidor de PAPD5 y/o un inhibidor de PAPD7 a temperatura ambiente a un pH apropiado, y con el grado de pureza deseado, con vehículos fisiológicamente aceptables, es decir, vehículos que no son tóxicos para los receptores en las dosificaciones y concentraciones empleadas en una forma de administración adecuada. La composición farmacéutica descrita en el presente documento puede ser estéril.
Los compuestos descritos en el presente documento pueden existir en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición de ácido o sales de adición de base convencionales que mantienen la eficacia biológica y propiedades de los compuestos descritos en el presente documento y se forman a partir de ácidos orgánicos o inorgánicos o bases orgánicas o inorgánicas no tóxicos adecuados. Las sales de adición de ácido incluyen, por ejemplo, las derivadas de ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido fosfórico y ácido nítrico, y las derivadas de ácidos orgánicos tales como ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido metanosulfónico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico o ácido fumárico y similares. Las sales de adición de base incluyen las derivadas de hidróxidos de amonio, potasio, sodio y amonio cuaternario, tales como, por ejemplo, hidróxido de tetrametilamonio. La modificación química de un compuesto farmacéutico en una sal es una técnica bien conocida para los químicos farmacéuticos para obtener una mejora en la estabilidad física y química, higroscopicidad, fluidez y solubilidad de los compuestos. Se describe, por ejemplo, en Bastin, Organic Process Research & Development 2000, 4, 427-435 o en Ansel, en: Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 6th ed. (1995), pp. 196 y 1456-1457. Por ejemplo, la sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos proporcionados en el presente documento puede ser una sal de sodio.
Los compuestos contienen uno o varios centros quirales pueden estar presentes como racematos, mezclas diastereoméricas o bien isómeros individuales ópticamente activos. Los racematos se pueden separar de acuerdo con procedimientos conocidos en los enantiómeros. En particular, las sales diastereoméricas que se pueden separar por cristalización se forman a partir de mezclas racémicas por reacción con un ácido ópticamente activo tal como ácido D- o L-tartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido láctico o ácido alcanforsulfónico.
La composición farmacéutica descrita en el presente documento se formula, dosifica y administra de forma consecuente con la buena práctica médica. Los factores para su consideración en este contexto incluyen el mamífero particular que se está tratando, el estado clínico del paciente individual, el sitio de administración del agente, el procedimiento de administración, la programación de administración, la edad y el sexo de los pacientes y otros factores conocidos por los médicos. En el presente documento, una "cantidad eficaz" (también conocida como "dosis (terapéuticamente) eficaz") quiere decir la cantidad de un compuesto que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto que se busca por un médico u otro facultativo. La "cantidad eficaz" del inhibidor descrito en el presente documento, la preparación combinada descrita en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento se regirán por dichas consideraciones, y es la cantidad mínima necesaria para inhibir HBsAg y/o HBeAg. Por ejemplo, dicha cantidad puede estar por debajo de la cantidad que es tóxica para las células o el receptor, o para el mamífero en su conjunto.
Por ejemplo, si el inhibidor de PAPD5 y/o el inhibidor de PAPD7 es/son (un) compuesto(s) de acuerdo con la fórmula (I) o (II), a continuación la cantidad farmacéuticamente eficaz administrada por vía parenteral por dosis puede estar en el intervalo de aproximadamente 0,01 a 100 mg/kg, de forma alternativa aproximadamente de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal del paciente por día, siendo el intervalo inicial típico de compuesto usado de 0,3 a 15 mg/kg/día. En otro ejemplo, si el inhibidor de PAPD5 y/o el inhibidor de PAPD7 es/son (un) compuesto(s) de acuerdo con la fórmula (I) o (II), las formas farmacéuticas unitarias orales, tales como comprimidos y cápsulas, contienen preferentemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1000 mg.
El inhibidor descrito en el presente documento, la preparación combinada descrita en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento se pueden administrar por cualquier medio adecuado, incluyendo administración oral, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal, transdérmica, parenteral, subcutánea, intraperitoneal, intrapulmonar, intradérmica, intratecal y epidural e intranasal y, si se desea para tratamiento local, intralesional. Las infusiones parenterales incluyen administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea.
El inhibidor descrito en el presente documento, la preparación combinada descrita en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento se pueden administrar en cualquier forma administrativa conveniente, por ejemplo, comprimidos, polvos, cápsulas, soluciones, dispersiones, suspensiones, jarabes, pulverizadores, supositorios, geles, emulsiones, parches, etc. Dichas composiciones pueden contener componentes convencionales en preparaciones farmacéuticas, por ejemplo, diluyentes, vehículos, modificadores de pH, edulcorantes, agentes espesantes y otros agentes activos.
El inhibidor descrito en el presente documento, la preparación combinada descrita en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento son útiles en la prevención y/o el tratamiento de una infección por VHB. Preferentemente inhiben la secreción de HBsAg y/o HBeAg, lo más preferentemente de HBsAg y HBeAg.
Definiciones
Los términos "tratamiento", "tratar", "tratamientos" o similares se usan en el presente documento para querer decir en general obtener un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado. Este efecto es terapéutico en términos de curación parcial o total de una enfermedad y/o efecto adverso atribuido a la enfermedad. El término "tratamiento" como se usa en el presente documento cubre cualquier tratamiento de una enfermedad en un sujeto e incluye: (a) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo como la inhibición del incremento de HBsAg y/o HBeAg; o (b) mejorar (es decir, aliviar) la enfermedad, es decir, provocar la regresión de la enfermedad, como la represión de la producción de HBsAg y/o HBeAg. Por tanto, un compuesto que mejora y/o inhibe una infección por VHB es un compuesto que trata una infección por VHB. Preferentemente, el término "tratamiento" como se usa en el presente documento se refiere a la intervención médica de un trastorno ya manifestado, como el tratamiento de una infección por VHB ya definida y manifestada. En el presente documento, el término "prevenir", "prevención" o "previene" se refiere a un tratamiento profiláctico, es decir, a una medida o procedimiento con el propósito de prevenir, en lugar de curar una enfermedad. Prevención quiere decir que se obtiene un efecto farmacológico y/o fisiológico deseado que es profiláctico en términos de prevenir completa o parcialmente una enfermedad o síntoma de la misma. En consecuencia, en el presente documento "prevenir una infección por VHB" incluye prevenir que se produzca una infección por VHB en un sujeto y prevenir la aparición de síntomas de una infección por VHB.
Para los propósitos de la presente invención, el "sujeto" (o "paciente") puede ser un vertebrado. En el contexto de la presente invención, el término "sujeto" incluye tanto seres humanos como otros animales, en particular mamíferos y otros organismos. Por tanto, los medios y procedimientos proporcionados en el presente documento son aplicables tanto a tratamiento humano como a aplicaciones veterinarias. En consecuencia, en el presente documento el sujeto puede ser un animal tal como un ratón, rata, hámster, conejo, conejillo de indias, hurón, gato, perro, pollo, oveja, especie bovina, caballo, camello o primate. Preferentemente, el sujeto es un mamífero. Más preferentemente el sujeto es un ser humano.
El término "infección por el virus de la hepatitis B" o "infección por el VHB" es comúnmente conocido en la técnica y se refiere a una enfermedad infecciosa provocada por el virus de la hepatitis B (VHB) y afecta al hígado. Una infección por VHB puede ser una infección aguda o crónica. Algunas personas infectadas no tienen síntomas durante la infección inicial y algunas desarrollan una rápida aparición de la dolencia con vómitos, piel amarillenta, cansancio, orina turbia y dolor abdominal ("Hepatitis B Fact sheet N°204"). who.int. Julio 2014. Consultado el 4 de noviembre de 2014). A menudo, estos síntomas duran algunas semanas y pueden dar como resultado la muerte. El comienzo de los síntomas puede tardar de 30 a 180 días. En quienes se infectan en el momento del nacimiento, un 90 % desarrolla una infección por hepatitis B crónica, mientras que menos de un 10 % de los infectados después de los cinco años lo hacen ("Hepatitis B FAQs for the Public - Transmission", U.S. Centers for Disease Control and Prevention (CDC), consultado 29-11-2011). La mayoría de las personas con enfermedad crónica no presenta síntomas; sin embargo, finalmente pueden desarrollar cirrosis y cáncer de hígado (Chang, 2007, Semin Fetal Neonatal Med, 12:160-167). Estas complicaciones dan como resultado la muerte de un 15 a un 25 % de las personas con enfermedad crónica (Hepatitis B Fact sheet N°204". who.int. Julio de 2014, consultado el 4 de noviembre de 2014). En el presente documento, el término "infección por VHB" incluye la infección por hepatitis B aguda y crónica. El término "infección por VHB" también incluye la fase asintótica de la infección inicial, las fases sintomáticas, así como la fase crónica asintótica de la infección por VHB.
En el presente documento, un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 1 o 2 (es decir, de PAPD5) se refiere a los polipéptidos que comprenden un tramo de residuos aminoacídicos contiguos de SEQ ID NO: 1 o 2 (es decir, de PAPD5) y que mantienen una actividad biológica (es decir, funcionalidad) de PAPD5, en particular la función poli-A polimerasa. En consonancia con esto, en el presente documento, un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 3 (es decir, de PAPD7) se refiere a los polipéptidos que comprenden un tramo de residuos aminoacídicos contiguos de SEQ ID NO: 3 (es decir, de PAPD7) y que mantienen una actividad biológica (es decir, funcionalidad) de PAPD7, en particular la función poli-A polimerasa. Los ejemplos de fragmentos enzimáticamente activos de PAPD5 y PAPD7 son el dominio nucleotidiltransferasa y la poli A polimerasa Cid1.
En el presente documento, el término "polipéptido" incluye todas las moléculas que comprenden o que consisten en monómeros de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos (amida). Por tanto, el término "polipéptido" comprende todas las secuencias de aminoácidos, tales como péptidos, oligopéptidos, polipéptidos y proteínas. El "polipéptido" descrito en el presente documento puede ser un polipéptido natural o un polipéptido no natural. El polipéptido no natural puede comprender al menos una mutación (por ejemplo, sustitución aminoacídica, deleción aminoacídica o adición aminoacídica) en comparación con el homólogo natural. El polipéptido no natural también se puede clonar en un vector y/o se puede unir de forma funcional a un promotor que no es el promotor natural de dicho polipéptido. Dicho promotor puede ser un promotor constitutivamente activo. El término "aminoácido" o "residuo" como se usa en el presente documento incluye ambos isómeros L y D de los aminoácidos naturales así como de otros aminoácidos (por ejemplo, aminoácidos no naturales, aminoácidos que no se codifican por secuencias de ácido nucleico, aminoácidos sintéticos, etc.). Los ejemplos de aminoácidos naturales son alanina (Ala; A), arginina (Arg; R), asparagina (Asn; N), ácido aspártico (Asp; D), cisteína (Cys; C), glutamina (Gln; Q), ácido glutámico (Glu; E), glicina (Gly; G), histidina (His; H), isoleucina (Ile; I), leucina (Leu; L), lisina (Lys; K), metionina (Met; M), fenilalanina (Phe; F), prolina (Pro; P), serina (Ser; S), treonina (Thr; T), triptófano (Trp; W), tirosina (Tyr; Y), valina (Val; V). Los aminoácidos naturales modificados postraduccionalmente son dehidrobutirina (Dhb) y labionina (Lab). Los ejemplos para aminoácidos no naturales se describen anteriormente. El polipéptido no natural puede comprender uno o más sustituyentes no aminoacídicos, o sustituyentes aminoacídicos heterólogos, en comparación con la secuencia de aminoácidos de una forma natural del polipéptido, por ejemplo, una molécula indicadora u otro ligando, unido covalentemente o no covalentemente a la secuencia de aminoácidos.
El término "secuencia de nucleótidos" o "polinucleótido" es comúnmente conocido en la técnica y comprende moléculas que comprenden o que consisten en moléculas naturales tales como ADN y ARN, así como análogos de ácidos nucleicos tales como, por ejemplo, oligonucleótidos tiofosfatos, ribooligonucleótidos sustituidos, moléculas de ANB, moléculas de APN, moléculas de ANG (ácido nucleico glucólico), moléculas de ANT (ácido nucleico treósico), polinucleótidos de morfolino o ácidos nucleicos con estructuras modificadas tales como polisiloxano y fosforotioato de 2'-O-(2-metoxi)etilo, o un ácido nucleico con sustituyentes, tales como metil-, tio-, sulfato, benzoil-, fenil-, amino-, propil-, cloro- y metanocarbanucleósidos, o una molécula indicadora para facilitar su detección. Además, el término "secuencia de nucleótidos" se debe interpretar de forma equivalente al término "molécula de ácido nucleico" en el contexto de la presente invención y se puede referir, entre otros, a ADN, ARN, APN o ANB o híbridos de los mismos o cualquier modificación de los mismos que sea conocida en la técnica (véanse, por ejemplo, los documentos US 5.525.711, US 4.711.955, US 5.792.608 o EP 302175 para ejemplos de modificaciones). Los residuos de ácido nucleico comprendidos por la secuencia de ácido nucleico descrita y proporcionada en el presente documento pueden ser residuos de ácido nucleico naturales o residuos de ácido nucleico producidos artificialmente. Los ejemplos para residuos de ácido nucleico son adenina (A), guanina (G), citosina (C), timina (T), uracilo (U), xantina (X) e hipoxantina (HX). Como se entenderá por el experto en la técnica, timina (T) y uracilo (U) se pueden usar de manera intercambiable dependiendo del tipo respectivo de polinucleótido. Por ejemplo, como sabe el experto en la técnica, una timina (T) como parte de un ADN corresponde a un uracilo (U) como parte del correspondiente ARNm transcrito. Los polinucleótidos descritos y proporcionados en el presente documento pueden ser mono o bicatenarios, lineales o circulares, naturales o sintéticos.
Las secuencias de nucleótidos proporcionadas en el presente documento se pueden clonar en un vector. El término "vector" como se usa en el presente documento incluye plásmidos, cósmidos, virus, bacteriófagos y otros vectores usados comúnmente en genomanipulación. En un modo de realización preferente, estos vectores son adecuados para la transformación de células, como células de mamíferos o células de levadura. En el presente documento, el vector puede ser un vector de expresión. En general, los vectores de expresión se han descrito ampliamente en la literatura. Pueden comprender un gen marcador de selección y un origen de replicación garantizando la replicación en el huésped, un promotor y una señal de terminación para la transcripción. Entre el promotor y la señal de terminación puede existir al menos un sitio de restricción o un policonector que permite la inserción de una secuencia de ácido nucleico que se desee expresar. Los ejemplos no limitantes para el vector en el que se puede clonar una secuencia de nucleótidos proporcionada en el presente documento son vectores adenovíricos, víricos adenoasociados (AAV), lentivíricos, lentivíricos basados en VIH, minicírculos no víricos u otros vectores para sistemas de expresión bacterianos y eucariotas.
En el presente documento, el término "compuesto" quiere decir cualquier molécula, incluyendo moléculas orgánicas tales como moléculas pequeñas, polinucleótidos tales como moléculas de ARNi, polipéptidos tales como anticuerpos y compuestos inorgánicos. El término "compuesto" también incluye lípidos, análogos de hormonas, ligandos polipeptídicos, enzimas, receptores, canales y conjugados de anticuerpo. Por ejemplo, en el presente documento el compuesto puede ser una molécula de ARNi contra PAPD5 y/o PAPD7, un anticuerpo que se une específicamente a PAPD5 y/o PAPD7, o una molécula pequeña que se une a PAPD5 y/o PAPD7.
El término "inhibidor" es conocido en la técnica y se refiere a un compuesto/sustancia que puede prevenir o reducir total o parcialmente la función fisiológica (es decir, la actividad) de (una) proteína(s) específica(s) (por ejemplo, de PAPD5 y/o PAPD7). Los inhibidores también son conocidos como "antagonistas". Descrito en el presente documento, el inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 puede prevenir o reducir o inhibir o inactivar la actividad fisiológica de PAPD5 y/o PAPD7, respectivamente, por ejemplo, tras la unión de dicho compuesto/sustancia a PAPD5 y/o PAPD7, respectivamente. La unión de un inhibidor/antagonista a PAPD5 y/o PAPD7 puede reducir la función enzimática de PAPD5 y/o PAPD7 (es decir, la función poli-A polimerasa) o puede prevenir la unión de una molécula activadora endógena a PAPD5 y/o PAPD7, e inhibiendo de este modo la actividad (es decir, la función) de estas proteínas. Descrito en el presente documento, un "inhibidor" de PAPD5 y/o PAPD7 puede prevenir la actividad/función de PAPD5 y/o PAPD7, respectivamente, previniendo o reduciendo la expresión del gen PAPD5 y/o PAPD7. Por tanto, un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7 puede dar lugar a una disminución en el nivel de expresión de PAPD5 y/o PAPD7 (por ejemplo, disminución en el nivel de ARNm de PAPD5 y/o PAPD7, o de la proteína PAPD5 y/o PAPD7) que se refleja en una disminución en la funcionalidad (es decir, actividad) de PAPD5 y/o PAPD7, en la que dicha función comprende la función poli-A polimerasa. Un inhibidor de PAPD5 y/o PAPD7, descrito en el presente documento, en consecuencia, también puede englobar represores transcripcionales de la expresión de PAPD5 y/o PAPD7 que pueden reducir el nivel de PAPD5 y/o PAPD7. En consecuencia, todos los medios y procedimientos que den como resultado una disminución en la actividad (que puede ser el resultado de una menor expresión) o PAPD5 y/o PAPD7, se deben usar como inhibidores de PAPD5 y/o PAPD7 como se describe en el presente documento.
En el presente documento, el término "molécula de interferencia de ARN (ARNi)" se refiere a cualquier molécula que inhibe la expresión o la traducción del ARN. Un ARN interferente pequeño (ARNip) es una molécula de ARN bicatenaria que, al unirse al ARNm complementario después de la transcripción, da lugar a su degradación y pérdida en la traducción. Un ARN de horquilla pequeño (ARNhp) es una molécula de ARN artificial con una estructura de horquilla que tras la expresión puede reducir el ARNm por medio de DICER y el complejo de silenciamiento reductor de ARN (RISC). Las moléculas de ARNi se pueden diseñar en base a la secuencia de ARN del gen de interés. El correspondiente ARNi se puede sintetizar químicamente o por transcripción in vitro, o expresarse a partir de un vector o producto de PCR.
El término "molécula pequeña" se refiere a un compuesto orgánico con un peso molecular bajo (<900 daltons). Las moléculas pequeñas pueden ayudar a regular un proceso biológico y tienen en general un tamaño del orden de 10-9 m. Muchos fármacos son moléculas pequeñas.
En el presente documento, el término "anticuerpo" se usa en el sentido más amplio y engloba específicamente anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) formados a partir de al menos dos anticuerpos intactos y fragmentos de anticuerpo, siempre que presenten la actividad biológica deseada (es decir, se unan específicamente a PAPD5 y/o PAPD7). También están comprendidos anticuerpos humanos, humanizados, camelizados o injertados con CDR. Los "fragmentos de anticuerpo" comprenden una porción de un anticuerpo intacto. El término "fragmentos de anticuerpo" incluye porciones de unión a antígeno, es decir, "sitios de unión a antígeno" (por ejemplo, fragmentos, subsecuencias, regiones determinantes de la complementariedad (CDR)) que mantienen la capacidad de unirse a un antígeno (tal como PAPD5 y/o PAPD7), que comprenden o que consisten de forma alternativa en, por ejemplo, (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un único brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward; 1989; Nature 341; 544-546), que consiste en un dominio VH; y (vi) una región determinante de la complementariedad (CDR) aislada. Los fragmentos o derivados de anticuerpo comprenden además fragmentos F(ab')2, Fv o scFv o anticuerpos monocatenarios.
La frase "específicamente se une(n)" o "se une(n) específicamente" cuando se refiere a una molécula de unión se refiere a una molécula de unión (por ejemplo, un anticuerpo) que tiene afinidad de unión intermedia o alta, exclusiva o predominantemente, a una molécula diana, preferentemente PAPD5 y/o PAPD7. La frase "se une específicamente a" se refiere a una reacción de unión que es determinante de la presencia de una diana (preferentemente la proteína PAPD5 y/o PAPD7) en presencia de una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos. Por tanto, en las condiciones de ensayo designadas, las moléculas de unión especificadas se unen preferentemente a una diana particular (preferentemente la proteína PAPD5 y/o PAPD7) y no se unen en una cantidad significativa a otros componentes presentes en una muestra de prueba. La unión específica a una proteína diana en dichas condiciones puede requerir una molécula de unión que se selecciona por su especificidad para una proteína diana particular. Se puede usar una variedad de formatos de ensayo para seleccionar moléculas de unión que sean específicamente reactivas con una proteína diana particular. Por ejemplo, se pueden usar inmunoensayos ELISA en fase sólida, inmunoprecipitación, Biacore e inmunoelectrotransferencia para identificar moléculas de unión que reaccionan específicamente con la proteína PAPD5 y/o PAPD7. La proteína PAPD5 es lo más preferentemente un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 1 o 2. Sin embargo, la proteína PAPD5 también puede ser un polipéptido que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o 2 y siendo funcional, en el que la función es función poli-A polimerasa. La proteína PAPD7 es lo más preferentemente un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 3. Sin embargo, la proteína pA p D7 también puede ser un polipéptido que tiene al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 % e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y siendo funcional, en el que la función es función poli-A polimerasa. Típicamente, una reacción específica o selectiva será al menos el doble de la señal o ruido de fondo y más típicamente más de 10 veces el fondo. O, en otras palabras, la frase "se une específicamente a" se refiere a una reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína diana (preferentemente PAPD5 y/o PAPD7) en una población heterogénea de proteínas y otros productos biológicos. Típicamente, un anticuerpo que se une específicamente a una determinada diana (preferentemente PAPD5 y/o PAPD7) se une a dicha diana con una constante de asociación (Ka) de al menos aproximadamente 1 x 106 M-1 o 107 M-1, o preferentemente de aproximadamente 108 M-1 a 109 M-1, o más preferentemente de aproximadamente 1010 M-1 a 1011 M-1 o mayor. Además, un anticuerpo que se une específicamente a una diana particular (preferentemente PAPD5 y/o PAPD7) se une preferentemente a esta diana con una afinidad que es al menos dos veces mayor que su afinidad por unirse a una diana inespecífica (por ejemplo, BSA, caseína) distinta de la diana predeterminada o una diana estrechamente relacionada.
En el contexto de la presente invención, el término "identidad" o "porcentaje de identidad" quiere decir que las secuencias de aminoácidos o nucleótidos tienen identidades de al menos un 80 %, preferentemente al menos un 90 %, más preferentemente al menos un 95 %, incluso más preferentemente al menos un 98 %, e incluso más preferentemente al menos un 99 % de identidad con las secuencias mostradas en el presente documento, por ejemplo, las de SEQ ID NO: 1, 2 o 3, en las que los mayores valores de identidad son preferentes frente a los menores. De acuerdo con la presente invención, el término "identidad/identidades" o "porcentaje de identidad/identidades" en el contexto de dos o más secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos, se refiere a dos o más secuencias que son iguales o que tienen un porcentaje especificado de residuos aminoacídicos o nucleótidos que son iguales (por ejemplo, al menos un 80 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % de identidad con las secuencias de aminoácidos de, por ejemplo, SEQ ID NO: 1, 2 o 3, o con las secuencias de nucleótidos de, por ejemplo, SEQ ID NO: 4, 5 o 6), cuando se comparan y alinean para una máxima correspondencia sobre una ventana de comparación, o sobre una región designada como se mide usando un algoritmo de comparación de secuencias como es conocido en la técnica, o por alineación manual e inspección visual.
Preferentemente, la identidad descrita existe en una región que tiene al menos aproximadamente 50 aminoácidos, preferentemente al menos 100 aminoácidos, más preferentemente al menos 400 aminoácidos, más preferentemente al menos 500 aminoácidos, más preferentemente al menos 600 aminoácidos y lo más preferentemente todos los aminoácidos de longitud. En el caso de secuencias de nucleótidos, la identidad descrita existe lo más preferentemente sobre una región que tiene al menos 100 nucleótidos, preferentemente al menos 1.000 nucleótidos, más preferentemente al menos 2.000 nucleótidos y lo más preferentemente todos los nucleótidos de longitud.
Los expertos en la técnica sabrán cómo determinar el porcentaje de identidad entre secuencias usando, por ejemplo, algoritmos tales como los basados en el programa informático CLUSTALW (Thompson, 1994, Nucl Acids Res, 2: 4673-4680) o FASTDB (Brutlag, 1990, Comp App Biosci, 6: 237-245), como es conocido en la técnica. También están disponibles para los expertos en la técnica los algoritmos BLAST y BLAST 2.0 (Altschul, 1997, Nucl Acids Res 25: 3389-3402; Altschul, 1993, J Mol Evol, 36: 290-300; Altschul, 1990, J Mol Biol 215: 403-410). Por ejemplo, se puede usar BLAST 2.0, que significa herramienta de búsqueda de alineación local básica BLAST (Altschul, 1997, loc. cit.; Altschul, 1993, loc. cit.; Altschul, 1990, loc. cit.), para buscar alineaciones de secuencias locales. BLAST, como se analiza anteriormente, produce alineaciones de ambas secuencias de nucleótidos y de aminoácidos para determinar la similitud de secuencia. Debido a la naturaleza local de las alineaciones, BLAST es especialmente útil para determinar coincidencias exactas o identificar secuencias similares. Se usan técnicas informáticas análogas que usan BLAST (Altschul, 1997, loc. cit.; Altschul, 1993, loc. cit.; Altschul, 1990, loc. cit.) para buscar moléculas idénticas o relacionadas en bases de datos de nucleótidos tales como GenBank o EMBL.
En el presente documento, el término "medir" también quiere decir "analizar" o "determinar" (es decir, detectar y/o cuantificar). Por ejemplo, el término "medir la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7" quiere decir determinar la cantidad de expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7, por ejemplo, determinar la cantidad del polipéptido PAPD5 y/o PAPD7 (es decir, proteína). Los procedimientos para medir (es decir, determinar) la cantidad y/o actividad de la proteína PAPD5 y/o PAPD7 son conocidos en la técnica y se describen en el presente documento anteriormente. Análogamente, el término "medir si un compuesto de prueba se une a PAPD5 y/o PAPD7" quiere decir analizar o determinar (es decir, detectar) si un compuesto de prueba se une a PAPD5 y/o PAPD7, por ejemplo, al polipéptido PAPD5 (es decir, proteína) y/o al polipéptido PAPD7 (es decir, proteína). En consonancia con esto, el término "medir si un compuesto de prueba inhibe la propagación de VHB" quiere decir analizar o determinar (es decir, detectar y/o cuantificar) si un compuesto de prueba inhibe la propagación de VHB.
Como se usa en el presente documento, el término "alquilo C W solo o en combinación significa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada saturado que contiene de 1 a 6, en particular de 1 a 4 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, 1 -butilo, 2-butilo, ferc-butilo y similares. Los grupos "alquilo C1-6" particulares son metilo, etilo, isopropilo y ferc-butilo.
El término "cicloalquilo C3-7", solo o en combinación, se refiere a un anillo de carbono saturado que contiene de 3 a 7 átomos de carbono, en particular de 3 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. Los grupos "cicloalquilo C3-7" particulares son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
El término "alquenilo C2-6" indica un grupo alquenilo de cadena lineal o ramificada insaturado que contiene de 2 a 6, en particular de 2 a 4 átomos de carbono, por ejemplo vinilo, propenilo, alilo, butenilo y similares. El grupo "alquenilo C2-6" particular es alilo y vinilo.
El término "alquinilo C2-6" indica un grupo alquinilo de cadena lineal o ramificada insaturado que contiene de 2 a 6, en particular de 2 a 4 átomos de carbono, por ejemplo etinilo, 1 -propinilo, propargilo, butinilo y similares. Los grupos "alquinilo C2-6" particulares son etinilo y 1-propinilo.
El término "CxH2x" solo o en combinación significa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada saturado que contiene de 1 a 6, en particular de 1 a 4 átomos de carbono. El término "alcoxi C1-6" solo o en combinación significa un grupo alquil C1-6-O-, en el que el "alquilo C1-6" es como se define anteriormente; por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, /so-propoxi, n-butoxi, /so-butoxi, 2-butoxi, ferc-butoxi, pentoxi, hexiloxi y similares. Los grupos "alcoxi C1-6" particulares son metoxi, etoxi y propoxi.
El término "halógeno" quiere decir flúor, cloro, bromo o yodo.
El término "haloalquilo C1-6" indica un grupo alquilo C1-6 en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo alquilo C1-6 se ha reemplazado por átomos de halógeno iguales o diferentes, en particular átomos de fluoro. Los ejemplos de haloalquilo C1-6 incluyen monofluoro-, difluoro- o trifluorometilo, -etilo o -propilo, por ejemplo, 3,3,3-trifluoropropilo, 3,3-difluoropropilo, 2-fluoroetilo, 2,2-difluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo, fluorometilo, difluorometilo o trifluorometilo. Un grupo "haloalquilo C1-6" particular es difluorometilo o trifluorometilo.
El término "haloalcoxi C1-6" indica un grupo alcoxi C1-6 en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo alcoxi C1-6 se ha reemplazado por átomos de halógeno iguales o diferentes, en particular átomos de fluoro. Los ejemplos de haloalcoxi C1-6 incluyen monofluoro-, difluoro- o trifluorometoxi, -etoxi o -propoxi, por ejemplo fluoropropoxi, difluoropropoxi, trifluoropropoxi, fluoroetoxi, difluoroetoxi, trifluoroetoxi, fluorometoxi, difluorometoxi o trifluorometoxi. Un grupo "haloalcoxi C1-6" particular es 3-fluoropropoxi, 3,3-difluoropropoxi, 3,3,3-trifluoropropoxi, 2-fluoroetoxi, 2,2-difluoroetoxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, fluorometoxi, difluorometoxi o trifluorometoxi.
El término "cicloalquilo C3-7", solo o en combinación, se refiere a un anillo de carbono saturado que contiene de 3 a 7 átomos de carbono, en particular de 3 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. Los grupos "cicloalquilo C3-7" particulares son ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
El término "alcoxi C1-6" solo o en combinación significa un grupo alquil C1-6-O-, en el que el "alquilo C1-6" es como se define anteriormente; por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, /so-propoxi, n-butoxi, /so-butoxi, 2-butoxi, ferc-butoxi y similares. Los grupos "alcoxi C1-6" particulares son metoxi y etoxi y más en particular metoxi.
El término "halocicloalquilo C3-7" indica un grupo cicloalquilo C3-7 en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo cicloalquilo C3-7 se ha reemplazado por átomos de halógeno iguales o diferentes, en particular átomos de fluoro. Los ejemplos de halocicloalquilo C3-7 incluyen monofluoro- o difluorociclopropilo, -ciclobutilo, -ciclopentilo o -ciclohexilo, por ejemplo, fluorociclopropilo, difluorociclopropilo, fluociclobutilo, difluociclobutilo, fluociclopentilo, difluociclopentilo, fluociclohexilo o difluociclohexilo. Un grupo "haloalquilo C1-6" particular es difluorociclopropilo.
Con respecto a la fórmula (I) el término "amino", solo o en combinación, se refiere a amino primario (-NH2), secundario (-NH-) o terciario
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Con respecto a la fórmula (II) el término "amino" indica un grupo de la fórmula -NR'R" en la que R' y R" son independientemente hidrógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, cicloalquilo C3-7, heterocicloalquilo C3-7, arilo o heteroarilo. De forma alternativa, R' y R", conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos, pueden formar un heterocicloalquilo C3-7.
El término "carbonilo" solo o en combinación se refiere al grupo -C(O)-.
El término "ciano" solo o en combinación se refiere al grupo -CN.
El término "alquilsulfinilo C1-6" indica un grupo -So-alquilo C1-6, en el que el grupo alquilo C1-6 se define anteriormente. Los ejemplos de alquilsulfinilo C1-6 incluyen metilsulfinilo y etilsulfinilo.
El término "alquilsulfonilo C1-6" indica un grupo -SO2alquilo C1-6, en el que el grupo alquilo C1-6 se define anteriormente. Los ejemplos de alquilsulfonilo C1-6 incluyen metilsulfonilo y etilsulfonilo.
El término "heteroarilo monocíclico" indica un sistema de anillo monocíclico heterocíclico aromático monovalente de 5 a 8 átomos de anillo, que comprende 1,2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados de N, O y S, siendo los restantes átomos de anillo carbono. Los ejemplos de restos heteroarilo monocíclicos incluyen pirrolilo, furanilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, piridinilo, piracinilo, pirazolilo, piridacinilo, pirimidinilo, triacinilo, acepinilo, diacepinilo, isoxazolilo, isotiazolilo y similares.
Con respecto a la fórmula (I) el término "heterocicloalquilo monocíclico" se refiere a un sistema de anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado monovalente de 3 a 7 átomos de anillo, que comprende 1,2, o 3 heteroátomos de anillo seleccionados de N, O y S, siendo los restantes átomos de anillo carbono. Los ejemplos para heterocicloalquilo monocíclico son aciridinilo, oxiranilo, acetidinilo, oxetanilo, pirrolidinilo, 2-oxo-pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, pirazolidinilo, imidazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperacinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, 1,1-dioxo-tiomorfolin-4-ilo, acepanilo, diacepanilo, homopiperacinilo o oxacepanilo. Los grupos "heterocicloalquilo monocíclicos" particulares son morfolinilo, 2-oxo-pirrolidinilo, pirrolidinilo, tetrahidropiranilo y, más en particular, pirrolidin-1-ilo, 2-oxo-pirrolidin-1-ilo, tetrahidropiran-4-ilo y morfolin-1-ilo.
Con respecto a la fórmula (II) el término "heterocicloalquilo monocíclico" es un sistema de anillo monocíclico saturado o parcialmente insaturado monovalente de 3 a 7 átomos de anillo, que comprende 1,2, o 4 heteroátomos de anillo seleccionados de N, O y S, siendo los restantes átomos de anillo carbono. Los ejemplos de heterocicloalquilo monocíclico son aciridinilo, oxiranilo, acetidinilo, oxetanilo, pirrolidinilo, 2-oxo-pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tietanilo, pirazolidinilo, imidazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperacinilo, 2-morfolinilo-, 2-oxo-piperacinilo, tiomorfolinilo, 1,1-dioxotiomorfolin-4-ilo, 1, 1 -dioxotiolanilo, 1, 1 -dioxotietanilo, oxoimidazolidinilo, acepanilo, diacepanilo, homopiperacinilo u oxacepanilo. Los grupos "heterocicloalquilo monocíclicos" particulares son acetidinilo, oxetanilo, tietanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, 1, 1 -dioxotietanilo, 1,1-dioxotiolanilo, morfolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperacinilo, oxoimidazolidinilo, 2-oxo-pirrolidinilo, 2-oxo-morfolinilo y 2-oxo-piperacinilo. Más en particular, los grupos "heterocicloalquilo monocíclico" son acetidinilo, pirrolidinilo, morfolinilo, oxomorfolinilo, piperidinilo, piperacinilo y oxopiperacinilo.
El término "arilo" indica un sistema de anillo mono o bicíclico carbocíclico aromático monovalente que comprende de 6 a 10 átomos de anillo de carbono. Los ejemplos de restos arilo incluyen fenilo y naftilo. "Arilo" particular es fenilo.
El término "heteroarilo" indica un sistema de anillo mono o bicíclico heterocíclico aromático monovalente de 5 a 12 átomos de anillo, que comprende 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados de N, O y S, siendo carbono los átomos de anillo restantes. Los ejemplos de restos heteroarilo incluyen pirrolilo, furanilo, tienilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, piridinilo, piracinilo, pirazolilo, piridacinilo, pirimidinilo, triacinilo, acepinilo, diacepinilo, isoxazolilo, benzofuranilo, isotiazolilo, benzotienilo, indolilo, isoindolilo, isobenzofuranilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, benzooxadiazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinazolinilo o quinoxalinilo. Los "heteroarilo" particulares son piridinilo y pirimidinilo.
El término "heteroarilo monocíclico que contiene N" se refiere a un heteroarilo monocíclico en el que al menos uno de los heteroátomos es N. Los ejemplos de heteroarilo monocíclico que contiene N son pirrolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, triazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, piridinilo, piracinilo, pirazolilo, piridacinilo, pirimidinilo, triacinilo, acepinilo, diacepinilo, isoxazolilo, isotiazolilo y similares. Los grupos "heteroarilo monocíclicos que contienen N' particulares son imidazolilo, pirazolilo y triazolilo, y más en particular imidazol-1-ilo, pirazol-1-ilo y 1,2,4-triazoM-Mo.
El término "halógeno" quiere decir flúor, cloro, bromo o yodo. Halógeno es en particular flúor, cloro o bromo. El término "hidroxi" solo o en combinación se refiere al grupo -OH.
El término "2-oxo-pirrolidinilo" solo o en combinación se refiere al grupo.
Figure imgf000026_0001
El término "sulfonilo" solo o en combinación se refiere al grupo -S(O)2-.
El término "alquilamino C1-6" se refiere a un grupo amino como se define anteriormente en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo amino está reemplazado por un grupo alquilo C1-6.
El término "alquilsulfonilo C1-6" se refiere a un grupo alquilo C1-6-S(O)2-, en el que el "alquilo C1-6" es como se define anteriormente.
El término "aminocarbonilo" se refiere a un grupo amino-C(O)-, en el que el "amino" es como se define anteriormente.
El término "ciano-cicloalquilo C3-7" se refiere a un grupo cicloalquilo C3-7 como se define anteriormente en el que al menos uno de los átomos de hidrógeno del grupo cicloalquilo C3-7 se reemplaza por un grupo ciano.
El término "pirrolidinilcarbonilo" se refiere a un grupo pirrolidinil-C(O)-.
El término "enantiómero" indica dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí.
El término "diastereómero" indica un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y con moléculas que no son imágenes especulares entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por ejemplo, puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades.
La presente invención se describe además por referencia a las figuras y ejemplos no limitantes.
Los ejemplos ilustran la invención.
Material y procedimientos
Química de compuesto
Cada compuesto de las dos series químicas DHQ y THP se sintetizó para ser adecuado para el cribado Y3H realizado por HYBRIGENICS SERVICES SAS. Ambos compuestos incluyeron el conector PEG5 y se marcaron con un ligando de anclaje de trimetoprima (TMP) (tabla 1).
Oo
(o/)
"O
0o3
03
E
(o/)
(0/)
=3
Q .
E
O o
~ 0 o
O
-Q
Figure imgf000027_0002
Cribado Y3H ULTImate YChemH™
Los dos compuestos se proporcionaron por Roche a HYBRIGENICS SERVICES SAS y se sometieron a prueba para determinar su permeabilidad y toxicidad. A continuación, los compuestos se cribaron frente a la colección de placenta humana (PLA) de ADNc de HYBRIGENICS. Los cribados se llevaron a cabo de acuerdo con el protocolo optimizado de emparejamiento célula a célula desarrollado para Hybrigenics ULTImate Y2H™ usando diferentes concentraciones de compuesto (tabla 2).
Tabla 2: ID de cribados YChemH
Figure imgf000027_0001
Ensayo de dependencia Y3H ULTImate YChemH™
Los clones obtenidos del cribado se recogieron en formato de 96 pocilios y los clones con crecimiento en condiciones selectivas (HIS+) se evaluaron en un ensayo de dependencia usando ensayos puntuales. Solo los clones que pudieron crecer en un medio selectivo en presencia del compuesto marcado se recogieron, procesaron (lisis celular, PCR, secuenciación génica) y mapearon para la alineación de proteínas usando análisis Blast. Experimento de validación 1 por 1 de Y3H ULTImate YChemH™ - Fragmentos de presa
En esta etapa de validación, se somete a prueba cada presa de fragmento identificado y cada sonda química (HBX129653, HBX129654) en un experimento 1 por 1. Los plásmidos de 3 presas seleccionadas de la colección de cribado se extrajeron de las células de levadura, se amplificaron en E. coli y se retransformaron en células de levadura YHGX13. Para cada interacción, DO1, 1/10, 1/100 y 1/1000 del cultivo de levadura diploide que expresa ambas construcciones de gancho y presa ("hook and prey") se depositaron en un medio selectivo sin triptófano, leucina e histidina y se complementaron con la sonda química y FK506. Las interacciones se sometieron a prueba por duplicado. Se usó una placa por compuesto químico y concentración (DMSO, 5, 10 y 20 pM de HBX129653, 5, 10 y 20 |jM de HBX129654, 5 pM de HBX24786 trimetoprima (TMP) y 5 pM de HBX129634 (TMP-PEG5-OH)). Las placas se incubaron a 30 °C durante 3 días.
Experimento de validación 1 por 1 Y3H ULTImate YChemH™ - Proteínas de longitud completa
La secuencia de codificación de PAPD5var1 de longitud completa (NM_001040284.2) y PAPD7varX1 (XM_005248234.2) se reconstituyeron a partir de un fragmento de gen optimizado con codón N terminal (para retirar el alto contenido de GC) y clones disponibles comercialmente de las regiones C terminales de las proteínas y se clonaron en marco con el dominio de activación Gal4 (AD) en el plásmido pP7 (AD-Presa), derivado del pGADGH original (Bartel et al., 1993 en Cellular interactions in development: A practical approach. ed. Hartley, D.A., Oxford University Press, Oxford, pp. 153-179). Las construcciones se comprobaron secuenciando los insertos completos. Para cada presa se llevó a cabo un mini-emparejamiento entre YHGX13 (Y187 ade2-101 ::IoxP-kanMX-loxP, mata) transformado con los plásmidos presa y células de levadura YPT6AT (mata) transformadas con el gancho DHFR (dihidrofolato reductasa) para producir un cultivo de levadura diploide. Para cada interacción, DO1, 1/10, 1/100 y 1/1000 del cultivo de levadura diploide que expresa ambas construcciones de gancho y presa ("hook and prey") se depositaron en un medio selectivo sin triptófano, leucina e histidina y se complementaron con la sonda química y FK506. Las interacciones se sometieron a prueba por duplicado. Se usó una placa por compuesto químico y concentración (DMSO, 5, 10 y 20 pM de HBX129653, 5, 10 y 20 pM de HBX129654, 5 pM de HBX24786 trimetoprima (TMP) y 5 pM de HBX129634 (TMP-PEG5-OH)). Las placas se incubaron a 30 °C durante 3 días. Y3H ULTImate YChemH™ - Competencia con compuesto libre
El ensayo de competencia se basa en la validación 1 por 1 descrita anteriormente con una concentración constante para la sonda química (HBX129653, HBX129654) y concentraciones crecientes del compuesto original de la sonda química (MOL653, m Ol654) o su enantiómero inactivo (INACT653, INACT654) (tabla 3). Los ensayos de competencia se realizaron en medio selectivo a 8 concentraciones del compuesto libre (0, 0,25, 0,5, 1,2, 5, 10 y 20 pM) y una concentración constante para el compuesto Y3H marcado (1 pM).
Tabla 3: ID de competencia YChemH
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Cultivo celular de HepaRG
Se cultivaron células HepaRG (Biopredics International, Rennes, Francia, n.° cat. HPR101) a 37 °C en una atmósfera humidificada con CO2 al 5 % en medio de crecimiento de HepaRG completo que consiste en medio E de William (GIBCO), suplemento de medio de crecimiento (Biopredics, n.° cat. ADD710) y GlutaMAX-I al 1 % (v/v) (Gibco n.° 32551) y 1x Pen/Strep (Gibco, n.° 15140) durante 2 semanas. Para iniciar la diferenciación, se añadió DMSO al 0,9 % (v/v) (Sigma-Aldrich, D2650) al medio de crecimiento en células confluentes. Después de una semana, el medio se reemplazó por medio de diferenciación completa (medio de crecimiento de HepaRG complementado con DMSO al 1,8 % (v/v)) en el que las células se mantuvieron durante aproximadamente 4 semanas con renovación del medio de diferenciación cada 7 días. Las células HepaRG diferenciadas (dHepaRG) presentaron islas de células similares a hepatocitos rodeadas por una monocapa de células similares a las biliares. Antes de la infección por VHB y el tratamiento con el compuesto, se sembraron células dHepaRG en placas de 96 pocillos recubiertas con colágeno I (Gibco, n.° cat. A11428-03) a 60.000 células por pocillo en 100 ^l de medio de diferenciación completa. Se dejó que las células recuperaran su fenotipo diferenciado en placas de 96 pocillos durante aproximadamente 1 semana después de la siembra antes de la infección por VHB.
Infección por VHB de dHepaRG
Las células dHepaRG se infectaron por partículas de VHB a una MOI de 30. Las partículas de VHB se produjeron a partir de células HepG2.2.15 productoras de VHB (Sells et al 1987 Proc Natl Acad Sci USA 84, 1005-1009). Las condiciones de cultivo de dHepaRG, diferenciación e infección por VHB se han descrito previamente (Hantz, 2009, J. Gen. Vi rol., 2009, 90:127-135). En resumen, se añadió medio de diferenciación completa (120 ^l/pocillo) que contenía PEG-8000 al 4 % y reserva de virus (20 a 30 GE/célula). Un día después de la infección, las células se lavaron tres veces con solución salina tamponada con fosfato y el medio (medio de diferenciación completa) se reemplazó cada dos días durante el experimento.
Tratamiento con ARNip de HepaRG infectada por VHB
Se adquirió un grupo de cuatro ARNip diferentes de GE Dharmacon (ON TARGETplus) (tabla 4).
Tabla 4: visión general de ARNip
Figure imgf000030_0001
Las células un día antes de la infección por VHB y las células 4 días después de la infección se trataron con un grupo de ARNip contra PAPD5, PAPD7, ambos o bien ARNip no dirigido como control. Los ARNip se transfectaron usando DharmaFect 4 (GE Dharmacon; n.° cat. T-2004-01) y OPTI-MEM (Thermo Scientific; n.° cat. 51985034) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las células se trataron durante 11 días.
Mediciones de antígeno de VHB
Para evaluar el impacto en la expresión y secreción del antígeno de VHB, se recogieron los sobrenadantes el día 11. Los niveles de HBsAg y HBeAg de VHB se midieron usando kits CLIA ELISA (Autobio Diagnostic n.° CL0310-2, n.° CL0312-2), de acuerdo con el protocolo del fabricante. En resumen, se transfirieron 25 |jl de sobrenadante por pocillo a la respectiva placa de microvaloración recubierta de anticuerpo y se añadieron 25 j l de reactivo de conjugado enzimático. La placa se incubó durante 60 min en un agitador a temperatura ambiente antes de lavar los pocillos cinco veces con tampón de lavado usando un lavador automático. Se añadieron 25 j l de sustrato A y B a cada pocillo. Las placas se incubaron en un agitador durante 10 min a temperatura ambiente antes de medir la luminiscencia usando un lector de luminiscencia Envision (Perkin Elmer).
Viabilidad celular
Después de la retirada del medio sobrenadante de las células dHepaRG infectadas por VHB, las células se incubaron con solución CellTiterGlo One Solution (Promega) para medir la viabilidad celular.
PCR ultrarrápida para ARNm intracelular
Para el aislamiento de ARNm intracelular, las dHepaRG se lavaron una vez con PBS (Gibco) y se lisaron usando el kit MagNA Pure "96 Cellular RNA Large Volume Kit" (Roche n.° 05467535001). Los lisados se pueden almacenar a -80 °C. Para la reacción de qPCR ultrarrápida se usó un sistema de detección de secuencias AB7900 HT (Applied Biosystems), la mezcla TaqMan ® Gene Expression Master (ThermoFisher Scientific). Para la detección del cebador específico del centro de VHB de ARNm de VHB (Integrated DNA Technologies) (tabla 5) y para medir la reducción de PAPD5 y PAPD7, en presencia de ARNip, se usaron sondas TaqMan® Expression Assay Probes específicas de genes (ThermoFisher Scientific; PAPD5 n.° cat. 4331182; PAPD7, n.° cat. 4331182). Las muestras se normalizaron usando la sonda TaqMan ® Expression Assay Probe contra b-actina (ThermoFisher Scientific; PAPD5 n.° cat. 4331182).
Tabla 5: sondas TaqMan específicas del centro de VHB
Figure imgf000030_0002
Ejemplo 1: DHQ y THP se unen a PAPD5 y PAPD7
PAPD5/7 se identificaron en el cribado Y3H Ultimate YChemH como compañero de interacción común de DHQ y THP
Ambas proteínas PAPD5 (variante 1: NP_001035374; variante 2: NP_001035375) y PAPD7 (XP_005248291) se identificaron por un numeroso número de fragmentos en el cribado Y3H para ambos compuestos (DHQ y THP) como se describe en la sección de Materiales y procedimientos. Las proteínas identificadas se clasificaron con una puntuación de confianza de A (escala A-D) por HYBRIGENICS (tabla 6).
Tabla 6: resultados de cribado YChemH para PAPD5/7
Figure imgf000031_0001
La interacción de PAPD5/7 con DHQ y THP se podría confirmar usando la validación 1 por 1 de Y3H ULTImate YChemH de fragmentos de presa identificados y además con proteínas de longitud completa
En una primera etapa de validación se seleccionaron tres fragmentos identificados en el primer cribado para el ensayo de validación 1 por 1 (como se describe en la sección Materiales y procedimientos) y se sometieron a prueba a tres concentraciones diferentes (5, 10 y 20 pM) (tabla 7).
Tabla 7: fragmento de interacción seleccionado para el ensayo de validación
Figure imgf000031_0002
Los tres fragmentos se pudieron validar como aglutinantes específicos para DHQ y THP ya en la menor concentración sometida a prueba (figura 1).
En una segunda etapa de validación, se sintetizaron proteínas de longitud completa para PAPD5 y PAPD7 y se usaron para la validación 1 por 1 (como se describe en la sección Materiales y procedimientos) con DHQ y THP (tabla 8).
Tabla 8: ID de referencia para proteína presa de longitud completa usada en el ensayo de validación 1 por 1
Figure imgf000031_0003
La interacción entre estas proteínas de longitud completa y los compuestos DHQ y THP se confirmó en la menor concentración sometida a prueba y demostró ser específica para las sondas químicas (figura 2).
La interacción de PAPD5/7 con DHQ y THP en Y3H puede competir con el compuesto activo libre, pero no con el enantiómero inactivo
Después de la validación de la unión de DHQ y THP a fragmentos de proteína y PAPD5 y PAPD7 de longitud completa, la unión se confirmó en un experimento de competencia Y3H ULTIMATE YChemH (como se describe en la sección Materiales y procedimientos) usando un compuesto libre inactivo o bien activo (tabla 9). Una disminución de la pérdida de crecimiento de levadura en presencia del compuesto activo original, pero no en presencia del enantiómero inactivo, quiere decir que el compuesto original compite con la sonda química e interactúa con la proteína diana.
Para todos los compuestos sometidos a prueba, la toxicidad en medio no selectivo a la mayor concentración (20 pM) se sometió a prueba usando el ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo (Promega) de acuerdo con el protocolo del fabricante. No se observó toxicidad a esta concentración para ningún compuesto ya que el crecimiento de levadura no se vio afectado (datos no mostrados). Para ambos compuestos originales libres activos (DHQ y THP, MOL653 y MOL654, respectivamente) se pudo observar competencia, con una menor concentración necesaria para competir en la unión a la proteína de longitud completa que para las interacciones de fragmentos (figura 3+4). La competencia cruzada exitosa sugiere un lado de unión compartido para DHQ y THP a PAPD5/7 o al menos unión en estrecha proximidad entre sí.
Tabla 9: ID de referencia para proteína presa usada en el ensayo de competencia
Figure imgf000032_0001
Ejemplo 2: la inhibición de PAPD5 y/o PAPD7 con ARNip da como resultado un tratamiento eficaz de la infección por VHB
Para correlacionar la unión de DHQ y THP a PAPD5/7 y el impacto de estas dos proteínas en la expresión génica de VHB, se usó tecnología ARNi para reducir estas proteínas en dHepaRG infectada por VHB naturalmente y para controlar el impacto de esta reducción en los parámetros víricos. Para eso, se usaron grupos de ARNip contra PAPD5 y PAPD7 (véase la tabla 4) en células dHepaRG infectadas por VHB, como se describe en la sección Materiales y procedimientos.
La reducción de PAPD5 dio lugar a la inhibición de la expresión vírica medida por HBsAg y HBeAg secretados, así como ARNm de VHB intracelular (medido usando CLIA ELISA y PCR ultrarrápida como se describe en la sección Materiales y procedimientos). Aunque la reducción de ARNm de PAPD5 redujo drásticamente la expresión génica de VHB, la inhibición de PAPD7 tuvo un efecto modesto sobre la expresión de VHB (figura 7). Sin embargo, se observó una actividad anti-VHB sinérgica potenciada cuando se combinaron ARNip contra PAPD7 y PAPD5 (figura 7), lo que sugiere un papel compensatorio para PAPD7 en ausencia de PAPD5.
Ejemplo 3: DHQ y THP reducen eficazmente HBsAg y HBeAg
La potencia de DHQ y THP y sus variantes contra la infección por VHB se midió en células HepG2.2.15 usando HBsAg y HBeAg como lectura.
Se cultivaron células HepG2.2.15 (Sells et al 1987 Proc Natl Acad Sci USA 84, 1005-1009) en placas de 96 pocillos (15.000 células/pocillo en 100 ul) en DMEM+GluTaMax-1 (GiBCO n.° cat. 10569), Pen Strep al 1 % (Gibco n.° cat.
15140), FBS al 10 % (Clontech n.° cat. 631106), geneticina 0,25 ug/ml (Invitrogen 10131035). Los compuestos se sometieron a prueba usando diluciones en serie triples en DMSO con una concentración máxima de 100 |jM y 9 diluciones en serie. Cada compuesto se sometió a prueba por cuadruplicado. Las células se incubaron durante 3 días, se recogieron los sobrenadantes y se midieron HBsAg y HBeAg como se describe en la sección de Materiales y procedimientos. Los valores de CI50 de los compuestos sometidos a prueba en la reducción de la secreción de HBsAg y HBeAg se muestran a continuación:
HBX129653 (DHQ - TMP): CI50 HBsAg 1,181 uM
HBX129654 (THP - TMP): CI50 HBsAg 0,299 uM
MOL653 (DHQ - libre - activo): CI50 HBsAg 0,003 uM; CI50 HBeAg 0,007 uM
MOL654 (THP - libre - activo): CI50 HBsAg 0,003 uM
INACT653 (DHQ - libre - inactivo): CI50 HBsAg 3,15 uM
INACT654 (THP - libre - inactivo): CI50 HBsAg >25 u

Claims (7)

REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por el virus de la hepatitis B (VHB), que comprende:
a. poner en contacto un compuesto de prueba con
i. el polipéptido que contiene el dominio asociado a PAP 5 (PAPD5) y/o polipéptido que contiene el dominio asociado a PAP 7 (PAPD7); o
ii. una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7;
b. medir la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 en presencia y ausencia de dicho compuesto de prueba; e
c. identificar un compuesto que reduce la expresión y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
2. Un procedimiento para identificar un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB, que comprende:
a. poner en contacto un compuesto de prueba con
i. el polipéptido PAPD5 y/o PAPD7; o
ii. una célula que expresa PAPD5 y/o PAPD7;
b. medir si el compuesto de prueba se une al polipéptido PAPD5 y/o PAPD7;
c. medir si el compuesto de prueba inhibe la propagación de VHB; e
d. identificar un compuesto que se une al polipéptido PAPD5 y/o PAPD7 e inhibe la propagación de VHB como un compuesto que previene, mejora y/o inhibe una infección por VHB.
3. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que el polipéptido PAPD5 comprende o consiste en a. la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 o 2;
b. una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (a), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa;
c. la secuencia de aminoácidos de un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 1 o 2; o d. una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (c), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa.
4. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que el polipéptido PAPD7 comprende o consiste en a. la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3;
b. una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (a), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa;
c. la secuencia de aminoácidos de un fragmento enzimáticamente activo de SEQ ID NO: 3; o d. una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80 % de identidad con una secuencia de aminoácidos de (c), en el que el polipéptido tiene función poli-A polimerasa.
5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que el compuesto que inhibe la propagación de VHB inhibe la secreción del antígeno de superficie de VHB (HBsAg) y/o inhibe la secreción del antígeno de envoltura de VHB (HBeAg) y/o inhibe la producción de ADN de VHB o ARNm de VHB intracelular.
6 . El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 5, en el que la actividad de PAPD5 y PAPD7 es una función poli-A polimerasa.
7. Un procedimiento para controlar el éxito terapéutico durante el tratamiento de una infección por VHB, en el que el procedimiento comprende:
a. analizar en una muestra obtenida de un sujeto de prueba la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7;
b. comparar dicha cantidad y/o actividad con datos de referencia correspondientes a la cantidad y/o actividad de PAPD5 y/o PAPD7 de al menos un sujeto de referencia; y predecir el éxito terapéutico.
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AU (3) AU2017285350A1 (es)
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CA (2) CA3027811A1 (es)
CL (3) CL2018003561A1 (es)
CR (1) CR20180590A (es)
ES (1) ES2942407T3 (es)
IL (2) IL263558A (es)
MA (1) MA45496A (es)
MX (2) MX367541B (es)
PE (1) PE20190443A1 (es)
PL (1) PL3472346T3 (es)
RU (1) RU2768699C2 (es)
SG (1) SG11201810594RA (es)
WO (2) WO2017216390A1 (es)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10738035B2 (en) 2015-05-13 2020-08-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
EP3426245B1 (en) 2016-03-07 2022-12-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
MA45496A (fr) * 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
CN110066278B (zh) * 2017-06-01 2021-06-08 广东东阳光药业有限公司 稠合三环类化合物及其在药物中的应用
UY37861A (es) 2017-08-28 2019-03-29 Enanta Pharm Inc Agentes antivirales contra la hepatitis b
KR102585898B1 (ko) 2017-10-16 2023-10-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 B형 간염 감염을 치료하기 위한 PAPD5 및 PAPD7 mRNA의 감소용 핵산 분자
US11058678B2 (en) 2018-01-22 2021-07-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
US10729688B2 (en) 2018-03-29 2020-08-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
MA52661A (fr) * 2018-04-05 2021-02-17 Centre Leon Berard Utilisation d'inhibiteurs de fubp1 dans le traitement d'une infection par le virus de l'hépatite b
CN112567033A (zh) 2018-07-03 2021-03-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于调节Tau表达之寡核苷酸
CN112534055A (zh) 2018-07-13 2021-03-19 豪夫迈·罗氏有限公司 用于调节rtel1表达的寡核苷酸
WO2020051375A2 (en) 2018-09-05 2020-03-12 Children's Medical Center Corporation Papd5 inhibitors and methods of use thereof
CN112955142A (zh) 2018-09-21 2021-06-11 英安塔制药有限公司 官能化杂环化合物作为抗病毒剂
BR112021009854A2 (pt) 2018-11-21 2021-08-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. heterociclos funcionalizados como agentes antivirais
JP7403777B2 (ja) * 2019-05-30 2023-12-25 ソウル大学校産学協力団 ウイルス感染及び活性抑制方法
WO2020247444A1 (en) 2019-06-03 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc, Hepatitis b antiviral agents
US11760755B2 (en) 2019-06-04 2023-09-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis B antiviral agents
WO2020247575A1 (en) 2019-06-04 2020-12-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b antiviral agents
WO2021007488A1 (en) 2019-07-11 2021-01-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted heterocycles as antiviral agents
WO2021055425A2 (en) 2019-09-17 2021-03-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocycles as antiviral agents
US20220378761A1 (en) * 2019-11-07 2022-12-01 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate PAPD5 Inhibition As A Treatment For Dyskeratosis Congenita, Aplastic Anemia And Myelodysplastic Syndrome Caused By Reduced Telomerase RNA Levels
WO2021122869A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of scamp3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
CN114829601A (zh) 2019-12-19 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 Sbds抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
EP4077671A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of saraf inhibitors for treating hepatitis b virus infection
EP4077670A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of cops3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
CN114901821A (zh) 2019-12-19 2022-08-12 豪夫迈·罗氏有限公司 Sept9抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
WO2021188414A1 (en) 2020-03-16 2021-09-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized heterocyclic compounds as antiviral agents
EP3955067A1 (en) 2020-08-11 2022-02-16 GF Machining Solutions SA A system for predicting anomalies of machining with a neuromorphic circuit
JP2023538630A (ja) 2020-08-21 2023-09-08 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するためのａ１ｃｆ阻害剤の使用
WO2022132666A1 (en) 2020-12-14 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating metabolic disorders and cardiovascular disease with inhibin subunit beta e (inhbe) inhibitors
TW202246500A (zh) 2021-02-02 2022-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於抑制 ｒｔｅｌ１ 表現之增強型寡核苷酸
BR112023026050A2 (pt) * 2021-06-18 2024-03-05 Ionis Pharmaceuticals Inc Compostos e métodos para reduzir expressão de ifnar1
AU2022341239A1 (en) 2021-09-08 2024-03-21 Redona Therapeutics, Inc. Papd5 and/or papd7 inhibiting 4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid derivatives
WO2023111210A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1
WO2023144750A1 (en) * 2022-01-28 2023-08-03 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination therapy for treating hepatitis b virus infections

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4711955A (en) 1981-04-17 1987-12-08 Yale University Modified nucleotides and methods of preparing and using same
CA1223831A (en) 1982-06-23 1987-07-07 Dean Engelhardt Modified nucleotides, methods of preparing and utilizing and compositions containing the same
DE3538677A1 (de) 1985-10-31 1987-05-07 Schloemann Siemag Ag Wendehaspel
WO1993007883A1 (en) 1991-10-24 1993-04-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
NL9201440A (nl) 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
RU2146706C1 (ru) 1992-11-06 2000-03-20 Новартис Аг Моноклональное антитело, связывающееся с поверхностным антигеном вируса гепатита b, fab-фрагмент и способ снижения уровня циркулирующего поверхностного антигена вируса гепатита b у пациента
US20040157780A1 (en) * 1993-11-29 2004-08-12 Epimmune Inc. CTL inducing peptides from c-erb2 (HER-2/neu)
JPH09511828A (ja) 1994-04-05 1997-11-25 ファーマジェニクス，インコーポレイテッド 化合物ライブラリー内の活性化合物の確認と識別
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
JP4236812B2 (ja) 1997-09-12 2009-03-11 エクシコン エ／エス オリゴヌクレオチド類似体
CZ296576B6 (cs) 1999-02-12 2006-04-12 Sankyo Company Limited Nukleosidový analog a oligonukleotidový analog a farmaceutický prostredek, sonda a primer s jeho obsahem
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
WO2003022987A2 (en) 2001-07-26 2003-03-20 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of hepatitis c infection, compositions and methods of screening for modulators of hepatitis c infection
EP1560931B1 (en) 2002-11-14 2011-07-27 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
EP2141233B1 (en) 2002-11-18 2016-10-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense design
US20060257851A1 (en) 2002-11-26 2006-11-16 Itzhak Bentwich Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof
JP4980716B2 (ja) 2003-06-12 2012-07-18 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 遺伝子サイレンシングに有用な保存されたｈｂｖ及びｈｃｖ配列
JP2005116204A (ja) 2003-10-03 2005-04-28 Daikin Ind Ltd 放電装置および空気浄化装置
US7374927B2 (en) 2004-05-03 2008-05-20 Affymetrix, Inc. Methods of analysis of degraded nucleic acid samples
WO2005116204A1 (ja) 2004-05-11 2005-12-08 Rnai Co., Ltd. Ｒｎａ干渉を生じさせるポリヌクレオチド、および、これを用いた遺伝子発現抑制方法
US20070154896A1 (en) 2005-02-11 2007-07-05 International Business Machines Corporation System and method for identification of MicroRNA target sites and corresponding targeting MicroRNA sequences
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
US20110177960A1 (en) 2006-03-10 2011-07-21 Ellen Murphy Microarray for monitoring gene expression in multiple strains of Streptococcus pneumoniae
AU2007258117B2 (en) 2006-05-05 2013-05-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gene expression
DK2066684T3 (da) 2006-05-11 2012-10-22 Isis Pharmaceuticals Inc 5´-Modificerede bicycliske nukleinsyreanaloge
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
EP2074226A2 (en) 2006-09-19 2009-07-01 Novartis AG Biomarkers of target modulation, efficacy, diagnosis and/or prognosis for raf inhibitors
ATE540118T1 (de) 2006-10-18 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc Antisense-verbindungen
WO2008113832A2 (en) 2007-03-22 2008-09-25 Santaris Pharma A/S SHORT RNA ANTAGONIST COMPOUNDS FOR THE MODULATION OF TARGET mRNA
EP2170917B1 (en) 2007-05-30 2012-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
CA2692579C (en) 2007-07-05 2016-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
WO2009043759A2 (en) 2007-10-04 2009-04-09 Santaris Pharma A/S Short rna antagonist compounds for the modulation of hif1alpha
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
EP2238167B1 (en) 2007-12-27 2015-04-22 Abbott Laboratories Anti-t. cruzi antibodies and methods of use
WO2009090182A1 (en) 2008-01-14 2009-07-23 Santaris Pharma A/S C4'-substituted - dna nucleotide gapmer oligonucleotides
WO2009124238A1 (en) 2008-04-04 2009-10-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising neutrally linked terminal bicyclic nucleosides
US20110118337A1 (en) * 2008-07-10 2011-05-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Method of Using Compositions Comprising MIR-192 and/or MIR-215 for the Treatment of Cancer
US8501805B2 (en) 2008-09-24 2013-08-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-L-bicyclic nucleosides
EP2177615A1 (en) 2008-10-10 2010-04-21 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Method for a genome wide identification of expression regulatory sequences and use of genes and molecules derived thereof for the diagnosis and therapy of metabolic and/or tumorous diseases
CN102325534B (zh) 2008-12-18 2016-02-17 戴瑟纳制药公司 延长的dicer酶底物和特异性抑制基因表达的方法
WO2010093788A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences
WO2011017521A2 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
JP2013126374A (ja) * 2010-03-04 2013-06-27 Kyushu Univ イソフラボン類の作用に関連する遺伝子
WO2011156202A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted 2 '-amino and 2 '-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
EP4079856A1 (en) 2010-08-17 2022-10-26 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of hepatitis b virus (hbv) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
SI3124610T1 (sl) 2010-10-28 2019-08-30 Benitec Biopharma Limited Zdravljenje HBV
EP3467109A1 (en) 2011-02-08 2019-04-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
SI3505528T1 (sl) 2011-04-21 2021-04-30 Glaxo Group Limited Modulacija izražanja virusa hepatitisa B (HBV)
PT2726613T (pt) 2011-06-30 2018-10-26 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para inibição da expressão de genes do vírus da hepatite b
US20140303235A1 (en) 2011-08-11 2014-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified gapped oligomeric compounds and uses thereof
DK2751270T3 (en) 2011-08-29 2018-10-29 Ionis Pharmaceuticals Inc OLIGOMER-CONJUGATE COMPLEXES AND THEIR USE
CA2863253A1 (en) 2011-09-07 2013-03-14 Marina Biotech, Inc. Synthesis and uses of nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers
WO2013113326A1 (en) * 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
US9221864B2 (en) 2012-04-09 2015-12-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tricyclic nucleic acid analogs
WO2013159109A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2013166264A2 (en) 2012-05-02 2013-11-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods for altering virus replication
SG11201500232UA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Wave Life Sciences Pte Ltd Chiral control
WO2014036429A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 Aptamir Therapeutics, Inc. Mirna modulators of chronic visceral inflammation
CN104884618A (zh) 2012-11-15 2015-09-02 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 寡核苷酸缀合物
PT2992098T (pt) 2013-05-01 2019-07-05 Ionis Pharmaceuticals Inc Composições e métodos para modular a expressão de hbv e ttr
LT3013959T (lt) 2013-06-27 2020-03-10 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Priešprasmiai oligomerai ir konjugatai, nukreirti į pcsk9
CN105980615A (zh) 2013-08-28 2016-09-28 卡里斯生命科学瑞士控股有限公司 寡核苷酸探针及其用途
WO2015113922A1 (en) 2014-01-30 2015-08-06 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Poly oligomer compound with biocleavable conjugates
CN105899508B (zh) * 2014-01-30 2017-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗和预防乙型肝炎病毒感染的新型二氢喹嗪酮类化合物
KR20160148715A (ko) 2014-05-13 2016-12-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 B형 간염 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 신규한 다이하이드로퀴놀리진온
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
FR3026868B1 (fr) 2014-10-02 2019-08-16 Dav Dispositif et procede de commande pour vehicule automobile
AU2015329974B2 (en) 2014-10-10 2019-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag GaINAc phosphoramidites, nucleic acid conjugates thereof and their use
US9637485B2 (en) 2014-11-03 2017-05-02 Hoffmann-La Roche Inc. 6,7-dihydrobenzo[a]quinolizin-2-one derivatives for the treatment and prophylaxis of hepatitis B virus infection
EP3220921A1 (en) 2014-11-19 2017-09-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Lna chiral phosphorothioates
DK3234131T3 (da) 2014-12-16 2020-06-29 Roche Innovation Ct Copenhagen As Fremgangsmåde til screening af kiral toksicitet
WO2016107832A1 (en) 2014-12-30 2016-07-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel tetrahydropyridopyrimidines and tetrahydropyridopyridines for the treatment and prophylaxis of hepatitis b virus infection
WO2016127002A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Lna oligonucleotides with alternating flanks
CN107207505B (zh) * 2015-02-11 2018-12-14 豪夫迈·罗氏有限公司 治疗和预防乙型肝炎病毒感染的 2-氧代-6,7-二氢苯并[a]喹嗪-3-甲酸衍生物
WO2016177655A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Tetrahydropyridopyrimidines and tetrahydropyridopyridines as inhibitors of hbsag (hbv surface antigen) and hbv dna production for the treatment of hepatitis b virus infections
AU2016296592B2 (en) 2015-07-17 2021-08-19 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions and agents against Hepatitis B virus and uses thereof
CA2991639A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Rnai therapy for hepatitis b virus infection
WO2017066712A2 (en) 2015-10-16 2017-04-20 The Children's Medical Center Corporation Modulators of telomere disease
KR102468177B1 (ko) 2016-04-14 2022-11-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 트리틸-모노-GalNAc 화합물 및 이의 용도
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
WO2018059718A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Rijk Zwaan Zaadteelt En Zaadhandel B.V. Peronospora resistance in spinacia oleracea
KR102585898B1 (ko) 2017-10-16 2023-10-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 B형 간염 감염을 치료하기 위한 PAPD5 및 PAPD7 mRNA의 감소용 핵산 분자
CL2020001638A1 (es) 2017-10-16 2020-10-16 Hoffmann La Roche Molécula de ácidos nucleicos para la reducción del arnm de papd5 y papd7 en el tratamiento de la infección de la hepatitis b. (divisional solicitud 202000945)
EP3746131A1 (en) 2018-01-29 2020-12-09 F. Hoffmann-La Roche AG Process for the preparation of galnac oligonucleotide conjugates
CL2019000945A1 (es) 2019-04-09 2019-07-12 Energy Harvest As Dispositivo de válvula rotatoria y sus métodos.

Also Published As

Publication number Publication date
CA3027811A1 (en) 2017-12-21
MX2018015521A (es) 2019-03-18
KR20190019164A (ko) 2019-02-26
JP2022019747A (ja) 2022-01-27
US20190194768A1 (en) 2019-06-27
EP3472362B1 (en) 2023-09-06
SG11201810594RA (en) 2018-12-28
JP7007304B2 (ja) 2022-02-10
US20190216846A1 (en) 2019-07-18
KR102391812B1 (ko) 2022-04-27
MX367543B (es) 2019-08-22
EP4219767A1 (en) 2023-08-02
IL263552A (en) 2019-01-31
CL2020003330A1 (es) 2021-06-04
CN109414448B (zh) 2021-10-26
US20220096527A1 (en) 2022-03-31
CL2020003329A1 (es) 2021-06-04
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