JP2019521986A5

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Publication number: JP2019521986A5
Application number: JP2018565786A
Authority: JP
Filing date: 2017-06-16
Publication date: 2020-08-06

Claims

多重特異性抗体を、多重特異性抗体及び不純物を含む組成物から精製するための方法であって、多重特異性抗体が複数のアームを含み、各アームがＶＨ／ＶＬ単位を含み、方法が、逐次的な、
ａ）組成物を捕獲クロマトグラフィーにかけて、捕獲クロマトグラフィー溶出物を生成するステップと、
ｂ）捕獲クロマトグラフィー溶出物を第１の混合モードクロマトグラフィーにかけて、第１の混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）第１の混合モード溶出物を第２の混合モードクロマトグラフィーにかけて、第２の混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
方法が、組成物の生成物特異的不純物の量を低減し、
生成物特異的不純物が、非対抗体のアーム、抗体ホモ二量体、凝集体、高分子量種（ＨＭＷＳ）、低分子量種（ＬＭＷＳ）、酸性バリアント、または塩基性バリアントのうちの１つ以上である、
方法。
捕獲クロマトグラフィー溶出物が、第１の混合モードクロマトグラフィーの前にイオン交換クロマトグラフィーにかけられ、ここで任意選択的にイオン交換クロマトグラフィーが第四級アミンを含む、またはＨＩＣクロマトグラフィーにかけられる、請求項１に記載の方法。
多重特異性抗体を、多重特異性抗体及び不純物を含む組成物から精製するための方法であって、多重特異性抗体が複数のアームを含み、各アームがＶＨ／ＶＬ単位を含み、多重特異性抗体の各アームが別々に生成され、方法が、逐次的な、
ａ）多重特異性抗体の各アームを捕獲クロマトグラフィーにかけて、多重特異性抗体の各アームに対する捕獲溶出物を生成するステップと、
ｂ）多重特異性抗体を含む組成物を生成するのに十分な条件下で、多重特異性抗体の各アームの捕獲溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）多重特異性抗体を含む組成物を第１の混合モードクロマトグラフィーにかけて、第１の混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）第１の混合モード溶出物を第２の混合モードクロマトグラフィーにかけて、第２の混合モード溶出物を生成するステップと、
ｅ）多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
方法が、組成物の生成物特異的不純物の量を低減し、
生成物特異的不純物が、非対抗体のアーム、抗体ホモ二量体、凝集体、高分子量種（ＨＭＷＳ）、低分子量種（ＬＭＷＳ）、酸性バリアント、または塩基性バリアントのうちの１つ以上である、
方法。
多重特異性抗体を含む組成物が、第１の混合モードクロマトグラフィーの前にイオン交換クロマトグラフィーにかけられ、ここで任意選択的にイオン交換クロマトグラフィーが第四級アミンを含む、またはＨＩＣクロマトグラフィーにかけられる、請求項３に記載の方法。
捕獲クロマトグラフィーが、プロテインＬクロマトグラフィー、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、またはプロテインＡ及びプロテインＧクロマトグラフィーである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
第１の混合モードクロマトグラフィー及び第２の混合モードクロマトグラフィーが、連続的である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
（ａ）第１の混合モードクロマトグラフィーが、混合モードアニオン交換クロマトグラフィーである、
（ｂ）第２の混合モードクロマトグラフィーが、混合モードカチオン交換クロマトグラフィーである、
（ｃ）第１の混合モードクロマトグラフィーが、混合モードカチオン交換クロマトグラフィーである、または
（ｄ）第２の混合モードクロマトグラフィーが、混合モードアニオン交換クロマトグラフィーである、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（ａ）第１の混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで、またはフロースルーモードで実施される、かつ
（ｂ）第２の混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで、またはフロースルーモードで実施される、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
第１の混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで実施され、溶出が勾配溶出である、請求項８に記載の方法。
第２の混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで実施され、溶出が勾配溶出である、請求項９に記載の方法。
第２の混合モード溶出物を限外瀘過するステップをさらに含み、任意選択的に、限外濾過が、逐次的に、第１の限外濾過、透析濾過、及び第２の限外濾過を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
捕獲クロマトグラフィーが、プロテインＡクロマトグラフィーであり、かつプロテインＡクロマトグラフィーが、プロテインＡ平衡化緩衝液、プロテインＡ装填緩衝液、またはプロテインＡ洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、平衡化緩衝液、装填緩衝液、及び／または洗浄緩衝液が、約ｐＨ７〜約ｐＨ８である、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の方法。
プロテインＡ平衡化緩衝液が、約２５ｍＭのトリス及び約２５ｍＭのＮａＣｌを含む、請求項１２に記載の方法。
プロテインＡクロマトグラフィーが、装填後に平衡化緩衝液で洗浄される、請求項１２または１３に記載の方法。
捕獲クロマトグラフィーが、プロテインＡクロマトグラフィーであり、かつ多重特異性抗体が、ｐＨ段階溶出によって、または低いｐＨを有するプロテインＡ溶出緩衝液をプロテインＡクロマトグラフィーに適用することによって、プロテインＡクロマトグラフィーから溶出される、請求項５〜１４のいずれか一項に記載の方法。
ｐＨ段階溶出が、低いｐＨを有するプロテインＡ溶出緩衝液をプロテインＡクロマトグラフィーに適用することを含み、プロテインＡ溶出緩衝液が、約１５０ｍＭの酢酸を約ｐＨ２．９で含む、請求項１５に記載の方法。
捕獲クロマトグラフィーが、プロテインＡクロマトグラフィーであり、かつプロテインＡ溶出物がプールされ、溶出物のＯＤ_２８０が約０．５を超える、請求項５〜１４のいずれか一項に記載の方法。
アニオン交換混合モードクロマトグラフィーが、第四級アミン及び疎水性部分を含む、請求項７〜１７のいずれか一項に記載の方法。
カチオン交換混合モードクロマトグラフィーが、Ｎ−ベンジル−ｎ−メチルエタノールアミンを含む、請求項７〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（ａ）第１の混合モードクロマトグラフィーが、混合モード事前平衡化緩衝液、混合モード平衡化緩衝液、混合モード装填緩衝液、または混合モード洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、混合モード事前平衡化緩衝液、混合モード平衡化緩衝液、混合モード装填緩衝液、及び／または混合モード洗浄緩衝液は、約ｐＨ６〜約ｐＨ７である、
（ｂ）第２の混合モードクロマトグラフィーが、混合モード事前平衡化緩衝液、混合モード平衡化緩衝液、混合モード装填緩衝液、または混合モード洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、混合モード事前平衡化緩衝液、混合モード平衡化緩衝液、及び／または混合モード洗浄緩衝液が、約ｐＨ５〜約ｐＨ８、任意選択的に約ｐＨ６．５である、または
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方である、
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
混合モード事前平衡化緩衝液が、約５００ｍＭの酢酸塩または約５０ｍＭの酢酸塩を含む、請求項２０に記載の方法。
第１の混合モードクロマトグラフィー、第２の混合モードクロマトグラフィー、または第１及び第２の混合モードクロマトグラフィーが、装填後に洗浄緩衝液で洗浄される、請求項２０または２１に記載の方法。
多重特異性抗体が、ｐＨ勾配によって、または低いｐＨを有する混合モード溶出緩衝液を混合モードイオン交換クロマトグラフィーに適用することによって、第１の混合モードクロマトグラフィー、第２混合モードクロマトグラフィー、または第１及び第２の両方の混合モードクロマトグラフィーから溶出される、請求項９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
イオン交換クロマトグラフィーが、アニオン交換クロマトグラフィーであり、アニオン交換クロマトグラフィーが、アニオン交換事前平衡化緩衝液、アニオン交換平衡化緩衝液、またはアニオン交換装填緩衝液のうちの１つ以上を使用し、アニオン交換事前平衡化緩衝液、アニオン交換平衡化緩衝液、及び／またはアニオン交換装填緩衝液が、約ｐＨ６〜約ｐＨ８、任意選択的に約６．５である、請求項２、及び４〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（ａ）アニオン交換事前平衡化緩衝液が、約５０ｍＭのトリス、５００ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、
（ｂ）アニオン交換平衡化緩衝液が、約５０ｍＭのトリスを含む、
（ｃ）アニオン交換クロマトグラフィーが、装填後にアニオン交換平衡化緩衝液で洗浄される、
（ｄ）多重特異性抗体が、塩勾配によって、または増加した塩濃度を有するアニオン交換溶出緩衝液をアニオン交換クロマトグラフィーに適用させることによって、アニオン交換クロマトグラフィーから溶出される、
のうちの１つ以上である、請求項２４に記載の方法。
多重特異性抗体が約５０ｍＭのトリス、１００ｍＭの酢酸ナトリウムを約ｐＨ８．５で含むアニオン交換溶出緩衝液を適用することによって、アニオン交換クロマトグラフィーから溶出される、請求項２５の（ｄ）に記載の方法。
アニオン交換溶出物がプールされ、溶出物のＯＤ_２８０が約０．５〜約２．０を超える、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
多重特異性抗体のアームが、原核細胞、任意選択的にＥ．ｃｏｌｉ細胞中で産生される、方法であって、ここで、任意選択的に、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、任意選択的にＦｋｐＡ、ＤｓｂＡ、またはＤｓｂＣである１つ以上のシャペロンを発現するように操作されており、または多重特異性抗体のアームが、真核細胞中で産生される、ここで、任意選択的に、真核細胞が酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳動物細胞であり、任意選択的に哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、
請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
細胞が、捕獲クロマトグラフィーの前に、任意選択的に微小流動化剤を使用して、溶解され、多重特異性抗体または多重特異性抗体のアームを含む細胞溶解液が生成する、方法であって、ここで、任意選択的に、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）が、クロマトグラフィーの前に細胞溶解液に添加される、請求項２８に記載の方法。
方法が、組成物中の宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、浸出されたプロテインＡ、核酸、細胞培養培地構成成分、またはウイルス性不純物のうちのいずれか１つの量を低減する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、任意選択的に、二重特異性抗体が、ノブインホール（ＫｉＨ）二重特異性抗体、またはＣｒｏｓｓＭａｂ二重特異性抗体である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
画分が、少なくとも約９５％の多重特異性抗体を含む、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
画分が、
（ａ）５％の非対抗体のアーム、
（ｂ）５％の抗体ホモ二量体
（ｃ）２％の凝集体または高低分子量種（ＨＭＷＳ）、
（ｄ）２％の低分子量種（ＬＭＷＳ）、
（ｅ）５０％の酸性バリアント、
（ｆ）３５％の塩基性バリアント、または
（ｇ）５％の３／４抗体、
のうちの１つ以上を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
画分が、
ａ）少なくとも約９５％〜約１００％の多重特異性抗体、
ｂ）約１％〜約５％以下の非対抗体のアーム、
ｃ）約１％〜約５％以下の抗体ホモ二量体、
ｄ）約１％または約２％以下のＨＭＷＳ、
ｅ）約１％または約２％以下のＬＭＷＳ、及び
ｆ）約５％以下の３／４抗体を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法によって精製された多重特異性抗体を含む組成物。
がんまたは眼疾患の治療のための、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法によって精製された多重特異性抗体を含む組成物。
マルチステップクロマトグラフィー方法でＦｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドを精製するための方法であって、方法が、親和性クロマトグラフィーのステップを含み、ここで、任意選択的に親和性クロマトグラフィーのステップがプロテインＡクロマトグラフィーであり、２つの異なるマルチモーダルイオン交換クロマトグラフィーのステップが後に続き、
それによって、Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドを精製する、方法。
マルチステップクロマトグラフィー方法が、
ｉ．親和性クロマトグラフィーのステップ、その後に続くマルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップ、その後に続くマルチモーダルカチオン交換クロマトグラフィーのステップ、
または
ｉｉ．親和性クロマトグラフィーのステップ、その後に続くマルチモーダルカチオン交換クロマトグラフィーのステップ、その後に続くマルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップを含む、請求項３７に記載の方法。
マルチステップクロマトグラフィー方法が、正確に３つのクロマトグラフィーのステップを含む、請求項３７または３８に記載の方法。
マルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップが、フロースルーモードで行われる、請求項３８または３９に記載の方法。
（ａ）マルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップが、約７のｐＨで行われる、
（ｂ）マルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップが、結合及び溶出モードで行われる、または
（ｄ）（ａ）及び（ｂ）の両方である、
請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
マルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップにおいて、Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドが、
（ａ）約７ｍＳ／ｃｍ未満の伝導性、
（ｂ）約６ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導性、
（ｃ）約４．５ｍＳ／ｃｍの伝導性、及び
（ｄ）約４．５ｍＳ／ｃｍの伝導性及び約７のｐＨ、
を有する溶液中に適用される、請求項３８〜４１のいずれか一項に記載の方法。
マルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップにおいて、Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドが、クロマトグラフィー材料の、１リットル当たり約１００ｇ〜約３００ｇの範囲で適用される、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の方法。
マルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィー材料が、
（ａ）マルチモーダル強アニオン交換クロマトグラフィー材料である、または
（ｂ）高流量アガロースのマトリックス、リガンドとしてのマルチモーダル強アニオン交換体、３６〜４４μｍの平均粒子サイズ、及び０．０８〜０．１１ｍｍｏｌＣｌ−／ｍＬメディウムのイオン容量を有する、
請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の方法。
マルチモーダルカチオン交換クロマトグラフィーメディウムが、
（ａ）マルチモーダル弱カチオン交換クロマトグラフィーメディウムである、または
（ｂ）高流量アガロースのマトリックス、リガンドとしてのマルチモーダル弱アニオン交換体、３６〜４４μｍの平均粒子サイズ、及び２５〜３９μｍｏｌ／ｍＬのイオン容量を有する、
請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の方法。
Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドが、
（ａ）抗体、
（ｂ）二重特異性抗体、ここで、任意選択的に、二重特異性抗体が、
（ｉ）第１の抗原に特異的に結合する全長抗体の重鎖及び軽鎖を含む、かつ
（ｉｉ）定常ドメインＣＬ及びＣＨ１が互いによって置き換えられた、第２の抗原に特異的に結合する全長抗体の修飾された重鎖及び修飾された軽鎖を含む、
（ｃ）Ｆｃ−融合タンパク質、または
（ｄ）ＣｒｏｓｓＭａｂ、
である、請求項３７〜４５のいずれか一項に記載の方法。
Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドが、
（ａ）ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体、
（ｂ）ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合するＣｒｏｓｓＭａｂ、または
（ｃ）二重特異性抗体のｖａｎｕｃｉｚｕｍａｂ、
である、請求項４５に記載の方法。
Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドが、
（ａ）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号１、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号２を含む第１の抗原結合部位、ならびに重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号３、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号４を含む第２の抗原結合部位、
（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を有する第１の重鎖、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する第２の重鎖、ならびに配列番号１１のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖、
（ｃ）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号５、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号６を含む第１の抗原結合部位、ならびに重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号７、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号８を含む第２の抗原結合部位、または
（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖、及び配列番号１４のアミノ酸配列を有する第２の重鎖、ならびに配列番号１５のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖、
を含む二重特異性抗体である、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
精製されたＦｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドが、約５％以下の３／４抗体を含む、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の方法。
マルチステップクロマトグラフィー方法でＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体を精製するための方法であって、方法が、親和性クロマトグラフィーのステップ、その後に続くマルチモーダルアニオン交換クロマトグラフィーのステップ、その後に続くマルチモーダルカチオン交換クロマトグラフィーのステップを含み、
それによって、ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体を精製し、
二重特異性抗体が、
（ｉ）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号１、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号２を含む第１の抗原結合部位、ならびに重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号３、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号４を含む第２の抗原結合部位を含む、または
（ｉｉ）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号５、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号６を含む第１の抗原結合部位、ならびに重鎖可変ドメイン（ＶＨ）として配列番号７、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）として配列番号８を含む第２の抗原結合部位を含む、
方法。
二重特異性抗体またはＣｒｏｓｓＭａｂ抗体を含む組成物であって、組成物が、少なくとも約９５％、二重特異性抗体またはＣｒｏｓｓＭａｂ抗体を含む、組成物。
組成物が、二重特異性抗体を含み、かつ
（ａ）５％の非対抗体のアーム、
（ｂ）５％の抗体ホモ二量体、
（ｃ）２％の凝集体または高低分子量種（ＨＭＷＳ）、
（ｄ）２％の低分子量種（ＬＭＷＳ）、
（ｅ）５０％の酸性バリアント、
（ｆ）３５％の塩基性バリアント、または
（ｇ）５％の３／４抗体、
のうちの１つ以上を含む、請求項５１に記載の組成物。
組成物が、二重特異性抗体またはＣｒｏｓｓＭａｂ抗体を含み、かつ
（ａ）２％の凝集体または高分子量種（ＨＭＷＳ）、
（ｂ）２％の低分子量種（ＬＭＷＳ）、
（ｃ）５０％の酸性バリアント、
（ｄ）３５％の塩基性バリアント、または
（ｅ）５％の３／４抗体、
のうちの１つ以上を含む、請求項５１に記載の組成物。
組成物が、二重特異性抗体を含み、かつ
ａ）少なくとも約９５％〜約１００％の二重特異性抗体、
ｂ）約１％〜約５％以下の非対抗体のアーム、
ｃ）約１％〜約５％以下の抗体ホモ二量体、
ｄ）約１％または約２％以下のＨＭＷＳ、
ｅ）約１％または約２％以下のＬＭＷＳ、及び
ｆ）約５％以下の３／４抗体を含む、請求項５１に記載の組成物。
二重特異性抗体が、ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合し、任意選択的に、二重特異性抗体が、
ａ）第１の抗原結合部位を含む第１の全長抗体の重鎖及び軽鎖、及び
ｂ）定常ドメインＣＬ及びＣＨ１が互いによって置き換えられた、第２の抗原結合部位を含む全長抗体の修飾された重鎖及び修飾された軽鎖、
を含む、請求項５１〜５４のいずれか一項に記載の組成物。
ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体を含む組成物であって、組成物が、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％以下の３／４抗体を含み、
任意選択的に、組成物が請求項５０に記載の方法を使用して得られ、
任意選択的に、ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異的抗体が、
ａ）第１の抗原結合部位を含む第１の全長抗体の重鎖及び軽鎖、及び
ｂ）定常ドメインＣＬ及びＣＨ１が互いによって置き換えられた、第２の抗原結合部位を含む全長抗体の修飾された重鎖及び修飾された軽鎖、を含む、
組成物。
Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドを生成する方法であって、
ｉ．Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドをコードする核酸を含む細胞を培養するステップと、
ｉｉ．Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体タンパク質を細胞または培養培地から回収するステップと、
ｉｉｉ．請求項３７〜５０のいずれか一項に記載の方法でＦｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドを精製するステップと、を含み、
それによって、Ｆｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドを生成する、方法。
ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体を産生する方法であって、
ｉ．二重特異性抗体をコードする核酸を含む細胞を培養するステップと、
ｉｉ．二重特異性抗体を細胞または培養培地から回収するステップと、
ｉｉｉ．請求項４０に記載の方法で二重特異性抗体を精製するステップと、を含み、
それによって、ＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体を産生する、方法。
請求項１〜３４、３７〜５０、５７及び５８のいずれか一項に記載の方法を含む、がんまたは眼疾患の治療のための医薬を製造するための方法。
請求項３７〜４９のいずれか一項に記載のＦｃ領域含有ヘテロ二量体ポリペプチドを精製するための方法、または請求項５０に記載のＡＮＧ−２及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体を精製するための方法を含む、がんまたは眼疾患の治療のための医薬を製造するための方法。
請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法を含む、多重特異性抗体を含む組成物を製造するための方法。
請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法を含む、多重特異性抗体を含むがんまたは眼疾患の治療のための組成物を製造するための方法。
請求項５０に記載の方法を含む、請求項５６に記載の組成物を製造するための方法。