KR20220002581A - 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 개시내용은 심층 필터 단계 및/또는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 제공한다. 본원에 기재된 정제 플랫폼을 사용하는 방법 및 이로부터 수득된 조성물, 예컨대 약제학적 조성물이 또한 본원에 개시된다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 1월 15일에 출원된 미국 가출원 번호 62/961,609, 및 2019년 5월 3일에 출원된 미국 가출원 번호 62/843,261에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각의 개시내용은 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
기술 분야
본 개시내용은 심층 여과 단계 및/또는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 제공한다. 본원에 기재된 정제 플랫폼을 사용하는 방법 및 이로부터 수득된 조성물이 또한 본원에 개시된다.
배경
숙주 세포 배양물에서 생산된 항체와 같은 생물치료제 제품은 예를 들어 제품 품질 및 치료 효능에 영향을 미칠 수 있는 숙주 세포 단백질 및 기타 불순물을 제거하기 위해 정제를 필요로 한다. 현재의 정제 방법은 숙주 세포 가수분해 효소를 포함한 모든 숙주 세포 단백질 및 불순물을 제거하지 못할 수 있다. 따라서 정제 표적에 남아 있는 숙주 세포 단백질 및 불순물이 정제 표적 자체뿐만 아니라 다른 첨가제, 예를 들어 계면활성제와 같은 제제화 목적을 위해 첨가된 성분에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 약제학적 사용을 위해 숙주 세포 배양물로부터 생산된 생물치료제 제품을 정제하기 위한 개선된 방법이 필요하다.
특허 출원 및 간행물을 포함하여 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전체가 참고로 포함된다.
요약
한 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에 (a) 포획 단계; 및 (b) 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도이다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는 적어도 약 20%이다.
또 다른 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에 (a) 포획 단계; 및 (b) 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는 적어도 약 20%이다.
또 다른 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에 (a) 포획 단계; 및 (b) 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는 적어도 약 5%이다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 샘플로부터 표적의 정제를 위한 것이고, 샘플은 표적 및 하나 이상의 숙주 세포 불순물을 포함한다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 숙주 세포 불순물은 숙주 세포 단백질이다.
일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행되거나, 심층 여과 단계는 포획 단계 후에 수행된다.
일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 규조토 조성물, 실리카 조성물, 셀룰로스 섬유, 중합체 섬유, 응집성 수지, 및 회분 조성물 중 하나 이상을 포함하는 기재를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터의 기재의 적어도 일부는 표면 개질을 포함한다. 일부 구체예에서, 표면 개질은 사차 아민 표면 개질, 양이온성 표면 개질 및 음이온성 표면 개질 중 하나 이상이다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터, X0SP 심층 필터, PDD1 심층 필터, ZETA PLUS™ 120ZA 심층 필터, 및 ZETA PLUS™ 120ZB 심층 필터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 포획 단계는 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 크로마토그래피, 단백질 G 크로마토그래피, 단백질 A/G 크로마토그래피, 단백질 L 크로마토그래피, FcXL 크로마토그래피, 단백질 XL 크로마토그래피, 카파 크로마토그래피, 및 카파XL 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 바이러스 불활성화 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 불활성화 단계는 포획 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 바이러스 불활성화 단계 후에 수행된다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 포획 단계 전에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함하고, 하나 이상의 정제 단계는 포획 단계, 심층 여과 단계, 및 존재하는 경우 바이러스 불활성화 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 정제 단계는 폴리펩타이드 정제 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 전, 사이 또는 후에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 추가로 포함하고, UFDF 단계는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 UFDF 단계 전 또는 후에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 정제 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 정제 단계는, 존재하는 경우 하나 이상의 정제 단계 전, 사이 또는 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 정제 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 존재하는 경우 UFDF 단계 전에 수행된다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 pH 유지 단계를 추가로 포함하고, pH 유지 단계는 존재하는 경우 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 바이러스 여과 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 여과 단계는 pH 유지 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함한다.
일부 구체예에서, HIC 정제 단계는 HIC 필터를 통한 처리를 포함한다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 정제 단계는 각각 독립적으로 이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 전하 유도 크로마토그래피, 세라믹 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 정제 단계는 각각 독립적으로 DEAE, DMAE, TMAE, QAE, SPSFF, SPXL, QSFF, MEP-Hypercel™, Capto MMC, 및 Capto Adhere로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다.
또 다른 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에 다음 순서로 (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (b) 바이러스 불활성화 단계; (c) 제2 폴리펩타이드 정제 단계; (d) 제3 폴리펩타이드 정제 단계; 및 (e) 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 다음 중 하나 이상에서 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함함: (i) 포획 단계 전; (ii) 포획 단계 후 및 바이러스 불활성화 단계 전; (iii) 바이러스 불활성화 단계 후 및 제2 폴리펩타이드 정제 단계 전; (iv) 제2 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 제3 폴리펩타이드 정제 단계 전; 또는 (v) 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 한외여과/정용여과(UFDF) 단계 전); 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 하기 순서로, pH 유지 단계 및 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 바이러스 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 다음 중 하나 이상에서 수행되는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 정제 단계를 추가로 포함한다: (i) 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 pH 유지 단계 전; (ii) pH 유지 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전; 또는 (iii) 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전.
일부 구체예에서, 방법은 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 방법은 샘플 처리 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 샘플은 세포 배양 샘플이거나 세포 배양 샘플로부터 유래된다. 일부 구체예에서, 세포 배양 샘플은 숙주 세포를 포함하고, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 대장균 세포이다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포 또는 이로부터 유래하는 성분을 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함하고, 하나 이상의 숙주 세포 단백질 중 하나는 가수분해 효소이다.
일부 구체예에서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스이다.
일부 구체예에서, 샘플은 표적을 포함하고, 표적은 항체 모이어티이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체이다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본원에 기재된 방법 중 어느 하나로부터 수득된 약제학적 조성물이 제공된다.
또 다른 양태에서, 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물이 제공되고, 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 조성물의 저장 수명은 24 개월 이상이다.
또 다른 양태에서, 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물이 제공되고, 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 조성물의 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련된 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 저장 수명에 비해 연장되고, 저장 수명은 상기 문서에 표시된 저장 수명에 비해 적어도 6 개월 연장된다.
또 다른 양태에서, 항체 모이어티를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물이 제공되고, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 감소된 폴리소르베이트의 분해를 가지고, 분해는 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련된 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 분해에 비해 적어도 약 20% 감소된다.
또 다른 양태에서, 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물이 제공되고, 폴리소르베이트는 액체 조성물의 저장 동안 연간 20% 이하 분해된다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티는 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체이다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물의 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도는 적어도 약 20% 감소된다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에, 순서대로: (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 다음 중 하나 이상에서 수행되고: 포획 단계 전; 포획 단계 후; 또는 포획 단계 후 및 정제 단계 전, 여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하고, 여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함: (i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유; (ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및 (iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트), 하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도이다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는 적어도 약 20%이다.
또 다른 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에, 순서대로: (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피으로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 다음 중 임의의 하나 이상에서 수행되고: 포획 단계 전; 포획 단계 후 및 정제 단계 전; 또는 정제 단계 후, 여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하고, 여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함: (i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유; (ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및 (iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트), 하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는 적어도 약 20%이다.
또 다른 양태에서, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해 속도를 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 샘플에, 순서대로: (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 다음 중 하나 이상에서 수행되고: 포획 단계 전; 포획 단계 후; 또는 포획 단계 후 및 정제 단계 전, 여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하고, 여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함: (i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유; (ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및 (iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트), 하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는 적어도 약 5%이다.
일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 실리카 필터 보조제 및 폴리아크릴 섬유 펄프를 포함한다.
일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 재료 및 9-구역 미세다공성 막을 포함하는 네 층을 포함한다.
일부 구체예에서, 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트를 포함하는 심층 필터는 두 층을 포함하고, 각각의 층은 셀룰로스 필터 매트릭스를 포함하고, 셀룰로스 필터 매트릭스는 규조토 또는 펄라이트 중 하나 이상을 포함하는 필터 보조제로 함침되고, 각 층은 수지 결합제를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 선택된다. 일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 내지 약 8.5일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 방법은 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 심층 필터를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 순서대로, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계, 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계, 및 정제 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 단계는 HIC를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, HIC는 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피이다.
일부 구체예에서, 정제 단계는 양이온 교환 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 양이온 교환 크로마토그래피는 POROS ® 50HS이다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생한다.
일부 구체예에서, 정제 단계는 멀티모달 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 멀티모달 크로마토그래피는 Capto Adhere이다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 샘플로부터 표적의 정제를 위한 것이고, 샘플은 표적 및 하나 이상의 숙주 세포 불순물을 포함한다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 숙주 세포 불순물은 숙주 세포 단백질이다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 바이러스 불활성화 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 불활성화 단계는 포획 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 심층 여과 단계는 바이러스 불활성화 단계 후 수행된다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 추가로 포함하고, UFDF 단계는 정제 단계 후에 수행된다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 샘플 처리 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 샘플은 세포 배양 샘플이거나 세포 배양 샘플로부터 유래된다. 일부 구체예에서, 세포 배양 샘플은 숙주 세포를 포함하고, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 대장균 세포이다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포 또는 이로부터 유래하는 성분을 포함한다.
일부 구체예에서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함하고, 하나 이상의 숙주 세포 단백질 중 하나는 가수분해 효소이다. 일부 구체예에서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스이다. 일부 구체예에서, 샘플은 표적을 포함하고, 표적은 항체 모이어티이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본원에 기재된 임의의 방법으로부터 수득된 약제학적 조성물이 제공된다.
당업자는 여러 구체예가 본 출원의 개시내용의 범위 및 사상 내에서 가능함을 인식할 것이다. 본 개시내용은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 이는 본원에 기재된 특정 절차에 대한 범위 또는 사상의 개시내용을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
도 1A는 정제 플랫폼(100)의 예시적인 단계를 나타낸다. 도 1B는 정제 플랫폼의 단계에 대한 예시적인 선택사항을 나타낸다.
도 2는 FAMS 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 유리 지방산의 양의 막대 그래프를 나타낸다.
도 3은 리페이스 활성 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 4는 FAMS 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 유리 지방산의 양의 막대 그래프를 나타낸다.
도 5는 파리시맙에 대한 정제 선택사항의 개략도를 나타낸다.
도 6A 및 6B는 PDD1 필터상에서 여과 전 (도 6A) 및 여과 후 (도 6B) 파리시맙에 대해 FcXL 용출액에서 측정된 PS20 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 7은 FAMS 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 유리 지방산의 양의 막대 그래프를 나타낸다.
도 8A-8B는 심층 필터를 사용한 여과 후 단백질 A 용출액에서 측정된 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 9는 EMPHAZE™ 심층 필터 정화 후 단백질 A 용출액의 CHOP 및 폴리소르베이트 분해 활성의 상대적 수준을 나타낸다.
도 10은 상이한 처리량에서 X0SP 심층 필터 (pH 5.5.)로부터 수득된 조성물의 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도(specific activity)를 나타낸다.
도 11A-11C는 pH 5.5에서 오크렐리주맙 (도 11A), pH 5.5에서 셀리크렐루맙 (도 11B), 및 pH 6.5에서 토실리주맙 (도 11C)에대한 상이한 처리량에서 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도를 나타낸다.
도 12는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 FAMS 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 13은 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 FAMS 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 14는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 FAMS 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 15는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 LEAP 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 16은 정제 워크플로우의 개략도를 나타낸다.
도 17은 LEAP 분석을 사용하여 측정된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 평균 전환율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 18A 및 18B는 리페이스 활성 분석을 사용하여 측정된, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다. 도 18A는 CF 238로부터 얻은 결과를 나타낸다. 도 18B는 CF 239로부터 얻은 결과를 나타낸다.
도 19A는 LEAP 분석을 사용하여 측정된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 평균 전환율의 막대 그래프를 나타낸다. 도 19B는 리페이스 활성 분석을 사용하여 측정된, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 2는 FAMS 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 유리 지방산의 양의 막대 그래프를 나타낸다.
도 3은 리페이스 활성 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 4는 FAMS 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 유리 지방산의 양의 막대 그래프를 나타낸다.
도 5는 파리시맙에 대한 정제 선택사항의 개략도를 나타낸다.
도 6A 및 6B는 PDD1 필터상에서 여과 전 (도 6A) 및 여과 후 (도 6B) 파리시맙에 대해 FcXL 용출액에서 측정된 PS20 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 7은 FAMS 분석을 사용하여 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에서 측정된 유리 지방산의 양의 막대 그래프를 나타낸다.
도 8A-8B는 심층 필터를 사용한 여과 후 단백질 A 용출액에서 측정된 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
도 9는 EMPHAZE™ 심층 필터 정화 후 단백질 A 용출액의 CHOP 및 폴리소르베이트 분해 활성의 상대적 수준을 나타낸다.
도 10은 상이한 처리량에서 X0SP 심층 필터 (pH 5.5.)로부터 수득된 조성물의 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도(specific activity)를 나타낸다.
도 11A-11C는 pH 5.5에서 오크렐리주맙 (도 11A), pH 5.5에서 셀리크렐루맙 (도 11B), 및 pH 6.5에서 토실리주맙 (도 11C)에대한 상이한 처리량에서 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도를 나타낸다.
도 12는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 FAMS 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 13은 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 FAMS 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 14는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 FAMS 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 15는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 고유 LEAP 비율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 16은 정제 워크플로우의 개략도를 나타낸다.
도 17은 LEAP 분석을 사용하여 측정된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 평균 전환율의 막대 그래프를 나타낸다.
도 18A 및 18B는 리페이스 활성 분석을 사용하여 측정된, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다. 도 18A는 CF 238로부터 얻은 결과를 나타낸다. 도 18B는 CF 239로부터 얻은 결과를 나타낸다.
도 19A는 LEAP 분석을 사용하여 측정된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 평균 전환율의 막대 그래프를 나타낸다. 도 19B는 리페이스 활성 분석을 사용하여 측정된, 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 가수분해 활성의 막대 그래프를 나타낸다.
상세한 설명
본 출원은, 일부 양태에서, 표적을 포함하는 샘플로부터 표적을 정제하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 샘플에 하나 이상의 심층 필터 단계 및/또는 하나 이상의 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 단계를 포함하는 본원에 개시된 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다.
본 개시내용은, 부분적으로 하나 이상의 심층 필터 단계, 예컨대 숙주 세포 배양액 (HCCF) 및/또는 친화성 크로마토그래피 용출액에 대해 수행되는 심층 필터 단계를 포함하는 정제 플랫폼이, 이로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시킨다는 예기치 않은 발견에 기초한다. 추가로, 본 개시내용은, 부분적으로, 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 정제 플랫폼이 이로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키고, 심층 여과 단계 및 HIC 단계를 모두 포함하는 정제 플랫폼이 이로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 추가로 감소시킬 수 있다는 예기치 않은 발견에 기초한다.
또한 본원에 기재된 구현의 형태 및 세부사항의 변경이본 개시내용의 범위에서 벗어나지 않고 이루어질 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다. 또한, 다양한 이점, 양태 및 목적이 다양한 구현을 참조하여 설명되었지만, 본 개시내용의 범위는 그러한 장점, 양태 및 목적을 참조하여 제한되어서는 안된다.
정의
본 명세서를 해석할 목적으로, 다음 정의가 적용될 것이며, 적절할 때마다 단수로 사용된 용어는 복수를 또한 포함하고 그 반대도 마찬가지이다. 아래에 제시된 정의가 본원에 참조로 통합된 문서와 충돌하는 경우 제시된 정의가 우선한다.
용어 "항체 모이어티"는 전장 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 전장 항체는 두 개의 중쇄 및 두 개의 경쇄를 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원 결합을 담당한다. 두 사슬의 가변 영역은 일반적으로 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)으로 지칭되는 세 개의 고도로 가변적인 루프를 포함한다 (LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3를 포함하는 경쇄(light chain, LC) CDR, HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3를 포함하는 중쇄(중쇄, HC) CDR). 본원에 개시된 항체 및 항원-결합 단편에 대한 CDR 경계는 Kabat, Chothia, 또는 Al-Lazikani의 규약에 의해 정의되거나 확인될 수 있다 (Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991). 중쇄 또는 경쇄의 세 개의 CDR은 CDR보다 고도로 보존되고, 초가변 루프를 지지하는 스캐폴드를 형성하는 프레임워크 영역(framework region, FR)으로 알려진 측면 스트레치 사이에 삽입된다. 중쇄 및 경쇄의 불변 영역은 항원 결합에 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 항체는 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로 클래스에 할당된다. 항체의 다섯 가지 주요 클래스 또는 아이소타입은 are IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이고, 이들은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ 중쇄의 존재를 특징으로 한다. 주요 항체 클래스 중 몇 가지는 lgG1 (γ1 중쇄), lgG2 (γ2 중쇄), lgG3 (γ3 중쇄), lgG4 (γ4 중쇄), lgA1 (α1 중쇄), 또는 lgA2 (α2 중쇄)와 같은 서브클래스로 나뉜다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 키메라 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 반합성 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 디아바디(diabody)이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 다중특이적 항체, 예컨대 이중특이적 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 융합 단백질에 연결된다. 일부 구체예에서 항체 모이어티는 인터루킨과 같은 면역자극 단백질에 연결된다. 일부 구체예에서 항체 모이어티는 혈액 뇌 장벽을 통한 진입을 촉진하는 단백질에 연결된다.
본원에서 사용된 용어 "항원 결합 단편"은, 예를 들어 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디설파이드 안정화 Fv 단편 (dsFv), (dsFv)2, 이중특이적 dsFv (dsFv-dsFv'), 디설파이드 안정화 디아바디 (ds 디아바디), 단일 사슬 항체 분자 (scFv), scFv 이량체 (2가 디아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부로부터 형성된 다중특이적 항체, 카멜화(camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 포함하는 항체 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편(예를 들어, 모 scFv)이 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항원 결합 단편은 하나 이상의 상이한 인간 항체로부터의 프레임워크 영역에 그래프트된 특정 인간 항체로부터의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래하거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 반면, 사슬(들)의 나머지가 또 다른 종으로부터 유래하거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 항체, 그뿐만 아니라 본 발명의 생물학적 활성을 나타내는 한 그러한 항체의 단편을 지칭한다 (미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984) 참조).
본원에서 사용된 용어 "다중특이적 항체"는 적어도 둘의 상이한 자리, 즉, 상이한 항원 상의 상이한 에피토프 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론 항체를 지칭한다. 특정 양태에서, 다중특이적 항체는 둘의 결합 특이성을 갖는다 (이중특이적 항체). 특정 양태에서, 다중특이적 항체는 셋 이상의 결합 특이성을 갖는다. 다중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
항체 또는 항체 모이어티와 관련하여 용어 "반합성"은 항체 또는 항체 모이어티가 하나 이상의 자연 발생 서열 및 하나 이상의 비-자연 발생 (즉 합성) 서열을 갖는다는 것을 의미한다.
"Fv"는 완전 항원 인식 및 결합 자리를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 단단한 비공유 결합으로 하나의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 도메인의 이합체로 구성된다. 이들 두 개의 도메인의 접힘으로부터 항체 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 대한 항원 결합 특이성을 부여하는 여섯 개의 초가변 루프(각각 중쇄 및 경쇄로부터 3 개의 루프)가 생성된다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 세 개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)조차도 비록 전체 결합 자리보다 낮은 친화도이지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일 사슬 Fv"는 단일 폴리펩타이드 사슬에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 구체예에서, scFv 폴리펩타이드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 도메인과 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해, Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)를 참조하라.
용어 "디아바디"는 사슬간(inter-chain)이 아니라 사슬내(intra-chain) V 도메인의 페어링이 달성되어, 2가 단편, 즉, 두 개의 항원-결합 자리를 갖는 단편을 생성하도록 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 일반적으로 짧은 링커(예컨대 약 5 내지 약 10 개의 잔기)를 갖는 scFv 단편(이전 단락 참조)을 구성함으로써 제조된 짧은 항체 단편을 지칭한다. 이중특이적 디아바디는 두 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩타이드 사슬에 존재하는 두 개의 "교차" scFv 단편의 이종이량체이다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 93/11161; 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)에서 보다 충분히 설명된다.
비인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역(hypervariable region, HVR)의 잔기가 원하는 항체 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는 비인간 종 (공여자 항체) 예컨대 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류의 초가변 영역의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개선하기 위해 이루어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 일반적으로 둘의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프가 비인간 면역글로불린의 초가변 루프에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 FR이다. 인간화 항체는 임의로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 상세한 사항에 대해서는, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)를 참조하라.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 하나 이상의 심층 여과 단계를 포함한다. 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 크로마토그래피 기술이다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 세포 성분 및 파편과 같은 샘플의 일부를 보유할 수 있는 다공성 여과 매체를 포함하고, 여기서 여과는 예를 들어 필터 재료의 심층 내에서 발생한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 합성 재료, 비합성 재료, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 규조토 조성물, 실리카 조성물, 셀룰로스 섬유, 중합체 섬유, 응집성 수지, 및 회분 조성물 중 하나 이상을 포함하는 기재를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터의 기재의 적어도 일부는 표면 개질을 포함한다. 일부 구체예에서, 표면 개질은 사차 아민 표면 개질, 양이온성 표면 개질 및 음이온성 표면 개질 중 하나 이상이다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터 (예컨대 EMPHAZE™ AEX 심층 필터), X0SP 심층 필터, PDD1 심층 필터, ZETA PLUS™ 120ZA 심층 필터, 및 ZETA PLUS™ 120ZB 심층 필터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 두 층을 포함하고, 여기서 각각의 층은 셀룰로스 필터 매트릭스를 포함하고, 여기서 셀룰로스 필터 매트릭스는 규조토 또는 펄라이트 중 하나 이상을 포함하는 필터 보조제로 함침된다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 두 층을 포함하고, 여기서 각각의 층은 셀룰로스 필터 매트릭스를 포함하고, 여기서 셀룰로스 필터 매트릭스는 규조토 또는 펄라이트 중 하나 이상을 포함하는 필터 보조제로 함침되고, 여기서 각각의 층은 수지 결합제를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 PDD1 심층 필터이다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 실리카, 예컨대 실리카 필터 보조제, 및 폴리아크릴 섬유를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 필터 매체의 두 층을 포함하고, 여기서 제1 층은 실리카, 예컨대 실리카 필터 보조제를 포함하고, 제2 층은 폴리아크릴 섬유, 예컨대 폴리아크릴 섬유 펄프를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 합성 재료를 포함하는 심층 필터이고 규조토 및/또는 펄라이트를 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다.
일부 구체예에서, 실리카 필터 보조제는 침강 실리카 필터 보조제이다. 일부 구체예에서, 필터 보조제는 필터 기능을 수행하는 것을 보조하는 층과 같은 필터의 양태이다. 일부 구체예에서, 실리카 필터 보조제는 실리카 겔 필터 보조제이다. 일부 구체예에서, 실리카 필터 보조제는 pH 7에서 이온화된 실라놀의 약 50%를 갖는다. 일부 구체예에서, 실리카 필터 보조제는 실리카 겔 필터 보조제이고, 여기서 실리카 필터 보조제의 실라놀의 약 50%가 pH 7에서 이온화된다. 일부 구체예에서, 실리카 필터 보조제는 실리카, 예컨대 SIPERNAT® (Evonik Industries AG), 또는 실리카 겔, 예컨대 Kieseigel 60 (Merck KGaA)로부터 침전된다. 일부 구체예에서, 폴리아크릴 섬유는 부직 폴리아크릴 섬유 펄프이다. 일부 구체예에서, 폴리아크릴 섬유는 전기방사된 폴리아크릴 나노섬유이다. 일부 구체예에서, 폴리아크릴 섬유의 피브릴화 정도는 약 10 mL 내지 약 800 mL의 캐나다 표준 여수도(Canadian Standard Freeness, CSF)와 상관관계가 있다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 약 0.05 μm 내지 약 0.2 μm, 예컨대 약 0.1 μm의 기공 크기를 갖는다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 약 0.1 m2 내지 약 1.5 m2, 예컨대 약 0.11 m2, 약 0.55 m2, 또는 약 1.1 m2의 표면적을 갖는다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 규조토 및/또는 펄라이트를 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 필터 매체의 두 층을 포함하고, 여기서 제1 층은 pH 7에서 이온화된 실라놀의 약 50%를 갖는 실리카 필터 보조제를 포함하고, 제2 층은 약 10 mL 내지 약 800 mL의 캐나다 표준 여수도(CSF)와 상관관계가 있는 폴리아크릴 섬유의 피브릴화정도를 갖는 폴리아크릴 섬유 펄프를 포함하고, 여기서 심층 필터는 규조토를 포함하지 않는다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 재료, 및 다중구역 미세다공성 막을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 재료를 포함하는 네 개의 층, 및 9-구역 미세다공성 막을 포함한다. 일부 구체예에서, 부직 재료는 폴리프로필렌을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 합성 재료를 포함하는 심층 필터이고 규조토 및/또는 펄라이트를 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 EMPHAZE™ AEX 심층 필터이다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 다수의 구성요소 또는 층을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 음이온 교환 (AEX) 작용성 중합체를 포함하는 하나 이상의 층을 포함하는 다수의 층을 포함한다. 일부 구체예에서, AEX 작용성 중합체를 포함하는 층은 Q 기능성 하이드로겔과 같은 사차 암모늄(Q)를 포함한다. 일부 구체예에서, AEX 작용성 중합체를 포함하는 층은 부직 물품과 회합된 사차 암모늄(Q) 작용성 중합체를 포함한다. 일부 구체예에서, AEX 작용성 중합체를 포함하는 층은 미세 섬유 폴리프로필렌 부직 스캐폴드에 공유적으로 그래프트된 사차 암모늄(Q) 작용성 하이드로겔을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 약 0.05 μm 내지 약 0.3 μm, 예컨대 약 0.22 μm의 공극 크기를 갖는 9-구역 막을 포함하는 다중 구역 막을 포함하는 층을 포함하는 다수의 층을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 규조토를 포함하지 않는다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 하나 이상의 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 단계를 포함한다. A HIC 단계는 HIC 매체, 예컨대 HIC 필터 또는 HIC 컬럼을 통한 처리를 포함하는 크로마토그래피 기술이다. 일부 구체예에서, HIC 매체는 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 옥틸, 또는 페닐 기를 포함하는 소수성 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플은 극성 버퍼에서 HIC 매체에 적용된다. 일부 구체예에서, 폴리펩타이드는 염 농도가 감소하고, 세제 농도가 증가하고 및/또는 pH가 조정된 수성 버퍼로써 단계식 용리를 사용하여 HIC 매체로부터 용리된다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시킬 수 있다. 일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 하나 이상의 가수분해 효소, 예컨대 하나 이상의 상이한 가수분해 효소의 활성 속도를 나타낸다. 일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 조성물 중의 하나 이상의 효소의 활성의 대리 측정치이다. 일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 대리 기재를 통해 측정된다. 일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 하나 이상의 가수분해 효소의 가수분해 생성물 측정에 의해 평가된다.
본원에서 사용된 용어 "포함하는(comprising)", "갖는(having)", "포함하는(containing)" 및 "포함하는(including)" 및 기타 유사한 형태 및 이의 문법적 등가물은 의미가 동등한 것으로 의도되고 이러한 단어 중 어느 하나 뒤의 항목 또는 항목들이 그러한 항목 또는 항목들의 전체 목록을 의미하거나, 나열된 항목 또는 항목들로만 제한됨을 의미하지 않는다는 점에서 개방형 종결로 의도된다. 예를 들어, 구성요소 A, B 및 C를 "포함하는" 물품은 (즉, 이들만을 포함함) 구성요소 A, B 및 C로 구성될 수 있거나, 구성요소 A, B 및 C뿐만 아니라 또한 하나 이상의 다른 구성요소를 포함할 수 있다. 그와 같이, "포함하다" 및 이의 유사한 형태, 및 이의 문법적 등가물은 "본질적으로 구성되는" 또는 "구성되는"의 구체예의 개시를 포함하는 것으로 의도되고 이해된다.
값의 범위가 제공되는 경우, 문맥이 달리 명시하지 않는 한 하한 단위의 10분의 1까지, 해당 범위의 상한 및 하한 사이의 각각의 중간 값 및 언급된 범위 안의 임의의 다른 언급된 또는 중간 값이 언급된 범위에서 구체적으로 배제된 제한을 겪는 개시내용 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우에, 포함된 한계 중 하나 또는 둘 모두를 제외하는 범위도 본 개시내용에 포함된다.
본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 지시된 변화를 포함(및 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다.
첨부된 청구범위를 포함하여 본 명세서에서 사용된 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 달리 명확하게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다.
정제 플랫폼
본 개시내용의 일부 양태에서, 심층 여과 단계 및/또는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 단계를 포함하는 정제 플랫폼이 제공된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 표적을 포함하는 샘플로부터 표적을 어느 정도하기 정제하기 위한 워크플로우를 나타낸다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼의 공정 워크플로우는 표적을 포함하는 샘플로부터 표적의 정제에 관련된 단계의 순차적 순서이다.
본원의 개시내용의 예시 및 설명의 목적으로, 예시적인 정제 플랫폼(100)의 일부의 순차 워크플로우가 도 1A에 예시된다. 도 1A에 나타난 바와 같이, 정제 플랫폼(100)은 포획 단계(105), 컨디셔닝 단계(110), 하나 이상의 정제 단계(115), 예컨대 하나 이상의 폴리펩타이드 정제 단계, 바이러스 여과 단계(120), 및 한외여과/정용여과(UFDF) 단계(125)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 순차적인 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 도 1A에 나타난 예시적인 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 도 1A에 나타난 예시적인 정제 플랫폼은 컨디셔닝 단계(110) 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 도 1A에 나타난 예시적인 정제 플랫폼은 포획 단계(105) 전에 수행되는 심층 여과 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 도 1A에 나타난 예시적인 정제 플랫폼은 하나 이상의 HIC 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후, 바이러스 여과 단계의 pH 유지 단계 후, 및/또는 바이러스 여과 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 도 1A에 나타난 예시적인 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계 및 하나 이상의 HIC 단계를 포함한다.
당업자는 본원에 기재된 정제 플랫폼이 표적을 포함하는 샘플로부터 표적을 정제하기 위한 워크플로우, 정제 플랫폼의 워크플로우의 각각의 단계를 수행하기 위해 사용되는 구성요소, 및 그 안에서 사용된 구성요소 및 시약을 안내한다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 본 개시내용의 일부 예에서, 정제 플랫폼 및 그의 사용 방법에 대한 설명이 모듈 방식으로 제공된다. 그러한 개시내용은 본 출원의 범위를 제한하는 것을 의미하지 않는다. 본 개시내용은 개별 구성요소 및/또는 단계의 개시에 의해 포함되는 정제 플랫폼의 임의의 조합 및/또는 배열을 포함한다.
심층 여과 단계
일부 양태에서, 본 개시내용은 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 제공한다. 본원에 기재된 바와 같이, 심층 여과 단계는 정제 플랫폼 내의 임의의 하나 이상의 위치에 배치될 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 정제 플랫폼은 공정 워크플로우의 임의의 단계에 위치한 하나 이상의 심층 여과 단계, 예컨대 2, 3, 4, 또는 5 개의 심층 여과 단계를 포함한다. 정제 플랫폼이 하나 초과의 심층 여과 단계를 포함하는 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 직접 연속 순서로, 즉 심층 여과 단계 사이에 수행되는 정제 플랫폼의 일부 중간 단계 없이 수행되지 않는다. 정제 플랫폼이 하나 초과의 심층 여과 단계를 포함하는 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 동일하다. 정제 플랫폼이 하나 초과의 심층 여과 단계를 포함하는 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 상이하고, 예를 들어, 상이한 심층 필터의 사용을 포함한다.
정제 플랫폼이 하나 초과의 심층 여과 단계를 포함하는 일부 구체예에서, 제1 심층 여과 단계는 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계 전에 발생하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생한다.
일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 합성 재료를 포함하는 심층 필터이다. 심층 필터를 통한 처리와 관련된 것을 포함하는 심층 여과 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 그 전체가 본원에 참조로 포함된 Yigzaw et al., Biotechnol Prog, 22, 2006, 및 Liu et al., mAbs, 2, 2010을 참조하라. 당업자는 예를 들어 심층 여과 단계와 관련된 구성요소, 조건 및 시약을 이해할 것이다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 각각 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 하나 이상의 심층 여과 단계를 포함하고, 여기서 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 선택된다. 일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터, 예컨대 X0SP 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터, 예컨대 X0SP 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 6.5 이하, 예컨대 약 6.4 이하, 6.3 이하, 6.2 이하, 6.1 이하, 6.0 이하, 5.9 이하, 5.8 이하, 5.7 이하, 5.6 이하, 5.5 이하, 5.4 이하, 5.3 이하, 5.2 이하, 5.1 이하, 또는 5.0 이하일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터, 예컨대 X0SP 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 6.5, 6.4, 6.3, 6.2, 6.1, 6.0, 5.9, 5.8, 5.7, 5.6, 5.5, 5.4, 5.3, 5.2, 5.1, 또는 5.0일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터, 예컨대 EMPHAZE™ 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 내지 약 8.5일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터, 예컨대 EMPHAZE™ 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 이상, 예컨대 약 7.1 이상, 7.2 이상, 7.3 이상, 7.4 이상, 7.5 이상, 7.6 이상, 7.7 이상, 7.8 이상, 7.9 이상, 8.0 이상, 8.1 이상, 8.2 이상, 8.3 이상, 8.4 이상, 또는 8.5 이상일 때 선택된다. 일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터, 예컨대 EMPHAZE™ 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 또는 8.5일 때 선택된다. 본원에 기재된 방법의 일부 구체예에서, 상기 방법은 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 심층 필터를 선택하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 당업자는 일부 예에서 심층 필터에 들어가는 용액 및 이의 특징이 본원에 기재된 정제 플랫폼(들)을 사용하여 정제된 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)와 같은 표적에 기초할 수 있음을 쉽게 이해할 것이다. 따라서, 일부 구체예에서, pI과 같은 표적의 특징은 본원에 기재된 정제 플랫폼에서 사용하기 위한 심층 필터 선택을 위한 기초로서 사용된다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 규조토 조성물, 실리카 조성물, 셀룰로스 섬유, 중합체 섬유, 응집성 수지, 합성 미립자, 이온성 하전 수지, 및 회분 조성물 중 하나 이상을 포함하는 기재를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 규조토를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 음이온 교환 매체를 포함한다.
일부 구체예에서, 심층 필터의 기재의 적어도 일부는 표면 개질을 포함한다. 일부 구체예에서, 표면 개질은 사차 아민 표면 개질, 양이온성 표면 개질 및 음이온성 표면 개질 중 하나 이상이다.
일부 구체예에서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터 (예컨대 EMPHAZE™ AEX 심층 필터), X0SP 심층 필터, PDD1 심층 필터, ZETA PLUS™ 120ZA 심층 필터, 및 ZETA PLUS™ 120ZB 심층 필터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
HIC 단계
일부 양태에서, 본 개시내용은 HIC 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 제공한다. 본원에 기재된 바와 같이, HIC 단계는 정제 플랫폼 내에서 임의의 하나 이상의 위치에 배치될 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 정제 플랫폼은 공정 워크플로우의 임의의 단계에 위치한 하나 이상의 HIC 단계, 예컨대 2, 3, 4, 또는 5 개의 HIC 단계를 포함한다. 정제 플랫폼이 하나 초과의 HIC 단계를 포함하는 일부 구체예에서, HIC 단계는 직접 연속 순서로, 즉 HIC 단계 사이에 수행되는 정제 플랫폼의 일부 중간 단계 없이 수행되지 않는다. 정제 플랫폼이 하나 초과의 HIC 단계를 포함하는 일부 구체예에서, HIC 단계는 동일하다. 정제 플랫폼이 하나 초과의 HIC 단계를 포함하는 일부 구체예에서, HIC 단계는 상이하고, 예를 들어, 상이한 HIC 매체의 사용을 포함한다.
일부 구체예에서, HIC 단계는 HIC 매체, 예컨대 HIC 컬럼 또는 HIC 막을 통한 처리를 포함한다. HIC 매체를 통한 처리와 관련된 것을 포함하는 HIC 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 Liu et al. mAbs, 2, 2010을 참고하라. 당업자는 예를 들어 HIC 단계와 관련된 구성요소, 조건 및 시약을 이해할 것이다.
일부 구체예에서, HIC 매체는 소수성 수지를 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 매체의 기재의 적어도 일부는 표면 개질을 포함한다. 일부 구체예에서, 표면 개질은 페닐 또는 부틸 표면 개질이다.
일부 구체예에서, HIC 단계는 관통(flow-through) 모드 HIC 단계이다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 결합 및 용리(bind-and-elute) 모드 HIC 단계이다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 공정 워크플로우의 임의의 단계에 위치한 하나 이상의 심층 여과 단계; 및 공정 워크플로우의 임의의 단계에 위치한 하나 이상의 HIC 단계를 포함한다.
포획 단계
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 포획 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 포획 단계는 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다.
예를 들어, 친화성 크로마토그래피를 통한 처리와 관련된 것을 포함하는 포획 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 Liu et al. mAbs, 2, 2010을 참고하라.
일부 구체예에서, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 크로마토그래피, 단백질 G 크로마토그래피, 단백질 A/G 크로마토그래피, 단백질 L 크로마토그래피, 단백질 XL 크로마토그래피, FcXL 크로마토그래피, 카파 크로마토그래피, 및 카파XL 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 포획 단계는 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 포획 단계는 FcXL 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다.
일부 구체예에서, 단백질 A 크로마토그래피는 실리카-기반 단백질 A 크로마토그래피이다. 일부 구체예에서, 단백질 A 크로마토그래피는 아가로스-기반 단백질 A 크로마토그래피이다. 일부 구체예에서, 단백질 A 크로마토그래피는 유기 고분자-기반 단백질 A 크로마토그래피이다.
일부 구체예에서, 단백질 A 크로마토그래피는 Prose vA™, Prosep® vA Ultra, Protein A Sepharose® 고속 흐름, MabSelect™, MabSelect™ SuRe, Poros® A, 및 MabCapture™으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
컨디셔닝 단계
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 컨디셔닝 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 컨디셔닝 단계는 포획 단계 후에 수행된다.
컨디셔닝 단계를 위한 처리와 관련된 것을 포함하는 컨디셔닝 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 Liu et al. mAbs, 2, 2010을 참고하라.
일부 구체예에서, 컨디셔닝 단계는 바이러스 불활성화 단계, 예컨대 저 pH 유지 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 저 pH 유지 단계는 약 2.5 내지 약 4의 pH에서 수행된다. 일부 구체예에서, 저 pH 유지 단계는 바이러스 불활성화를 위해 구성된다. 일부 구체예에서, 저 pH 유지 단계는 내인성/외래성 바이러스를 불활성화시킬 수 있다.
하나 이상의 정제 단계
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 정제 단계는 포획 단계 및 컨디셔닝 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 정제 단계는 폴리펩타이드 정제 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 정제 단계는 하나 초과, 예컨대 2, 3, 4, 또는 5 개의 폴리펩타이드 정제 단계를 포함한다.
폴리펩타이드 정제 단계를 위한 처리와 관련된 것을 포함하는 폴리펩타이드 정제 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 Liu et al. mAbs, 2, 2010을 참고하라.
일부 구체예에서, 폴리펩타이드 정제 단계는 이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 전하 유도 크로마토그래피, 세라믹 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택되는 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다.
일부 구체예에서, 폴리펩타이드 정제 단계는 디에틸아미노에틸(DEAE), 디메틸아미노에틸(DMAE), 트리메틸아미노에틸(TMAE), 사차 아민, 사차 아미노에틸(QAE), 설포프로릴(SP), SP-Sepharose® (가교된 비드 형태의 아가로스) 고속 흐름 (FF), SP-Sepharose® XL, 사차 아민(Q) Sepharose® FF, 머캅토에틸피리딘(MEP)-Hypercel™, Capto MMC (멀티모달 크로마토그래피), Capto Adhere, Poros® XS, 및 Poros® 50HS로 이루어진 군으로부터 선택되는 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다.
일부 구체예에서, 폴리펩타이드 정제 단계는 결합 및 용리 폴리펩타이드 정제 단계이다. 일부 구체예에서, 폴리펩타이드 정제 단계는 관통 폴리펩타이드 정제 단계. 일부 구체예에서, 폴리펩타이드 정제 단계는 약한 분배 크로마토그래피 폴리펩타이드 정제 단계이다. 일부 구체예에서, 폴리펩타이드 정제 단계는 과부하 폴리펩타이드 정제 단계이다.
바이러스 여과 단계
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 바이러스 여과 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 바이러스 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다.
바이러스 여과 단계를 위한 처리와 관련된 것을 포함하는 바이러스 여과 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 Liu et al. mAbs, 2, 2010, 및 미국 출원 번호 20140309403을 참조하라.
일부 구체예에서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 바이러스 여과 단계는 pH 유지 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 바이러스 필터를 통한 처리는 pH 유지 단계 후에 수행된다.
UFDF 단계
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 UFDF 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, UFDF 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및/또는 바이러스 여과 단계 후에 수행된다.
UFDF 단계를 위한 처리와 관련된 것을 포함하는 UFDF 단계가 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된 Liu et al. mAbs, 2, 2010을 참고하라.
일부 구체예에서, UFDF 단계는 한외여과를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, UFDF 단계는 접선 유동 여과(tangential flow filtration, TFF) 모드로 수행된다. 일부 구체예에서, UFDF 단계는 접선 유동 여과, 예컨대 고성능 접선 유동 여과를 통한 처리를 포함한다.
위에서 논의된 바와 같이, 본 출원에 개시된 정제 플랫폼은 본원에 기재된 것을 포함하는 정제 단계의 임의의 조합 및 배열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 포획 단계; 및 심층 여과 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 및 컨디셔닝 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 및 하나 이상의 정제 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 바이러스 여과 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 바이러스 여과 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 후 및/또는 바이러스 여과 단계의 pH 유지 단계, 바이러스 여과 단계 후와 같은 후 또는 동안 수행되는 하나 이상의 HIC 단계로부터 선택된 것과 같은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 UFDF 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 후 및/또는 UFDF 단계 후에 수행되는 하나 이상의 HIC 단계로부터 선택된 것과 같은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 바이러스 여과 단계; 및 UFDF 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 후, 및/또는 바이러스 여과 단계의 pH 유지 단계, 바이러스 여과 단계 후와 같은 후 또는 동안, 및/또는 UFDF 단계 후에 수행되는 하나 이상의 HIC 단계로부터 선택된 것과 같은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 포획 단계; 및 HIC 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 및 컨디셔닝 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 및 하나 이상의 정제 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 바이러스 여과 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 바이러스 여과 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 UFDF 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 바이러스 여과 단계; 및 UFDF 단계를 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
정제 플랫폼으로부터 수득된 샘플, 그의 성분, 및 조성물
일부 양태에서, 본원에 기재된 정제 플랫폼은 표적을 포함하는 샘플로부터 표적을 어느 정도까지 정제하기에 유용하다.
일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포 샘플이다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포 배양액(host cell culture fluid, HCCF)이다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포 배양액의 일부를 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포 배양액으로부터 유래한다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포를 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플은 숙주 세포의 성분, 예컨대 숙주 세포 파편을 포함한다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 박테리아 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 곤충 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 포유동물 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다. 일부 구체예에서, 숙주 세포는 대장균 세포이다.
일부 구체예에서, 샘플은 샘플에 본원에 기재된 정제 플랫폼을 적용하기 전에 수행되는 처리 단계가 적용되는 것과 같이 처리되었다. 일부 구체예에서, 샘플은 계면활성제를 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플은 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 샘플은 표적을 포함한다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드이다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드 복합체이다. 일부 구체예에서, 표적은 항체 모이어티이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함한다. 일부 구체예에서, 숙주 세포 단백질은 가수분해 효소이다. 일부 구체예에서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스이다. 일부 구체예에서, 가수분해 효소는 다중 효소 단백질이다. 일부 구체예에서, 다중 효소 단백질은 지방산 합성효소이다. 일부 구체예에서, 지방산 합성효소는 티오에스터레이스 서브유닛을 포함한다.
본원에 기재된 정제 플랫폼은, 일부 예에서, 다수의 정제 단계를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 용어 "조성물"은 정제 플랫폼의 임의의 단계의 임의의 유입물(정제 플랫폼에 대한 초기 샘플 유입물 제외), 중간체, 또는 유출물을 기재하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 용어 "조성물"의 사용은 정제 플랫폼의 최종 유출물을 기재하는 것으로 제한되지 않는다.
일부 구체예에서, 조성물은 계면활성제를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 조성물은 표적을 포함한다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드이다. 일부 구체예에서, 표적은 폴리펩타이드 복합체이다. 일부 구체예에서, 표적은 항체 모이어티이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 단일클론 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 인간화 항체이다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함한다. 일부 구체예에서, 숙주 세포 단백질은 가수분해 효소이다. 일부 구체예에서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스이다.
추가 단계
일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 정제 플랫폼과 관련되거나 연관된 추가 단계를 제공한다. 정제 플랫폼과 관련되거나 연관된 추가 단계, 및 그러한 단계를 수행하는 방법이 공지되어 있다. 예를 들어, 그 전체가 본원에 참조로 포함된 Liu et al., mAbs, 2, 2010을 참조하라.
일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 샘플 처리 단계, 예컨대 샘플 준비 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HCCF를 정화하기 위한 것과 같은 정화 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 정제 플랫폼으로부터 수득된 샘플 및/또는 조성물로부터 숙주 세포 및 숙주 세포 파편을 제거하기 위한 것과 같은 숙주 세포 및 숙주 세포 파편 제거 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 원심분리 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 멸균 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 접선 유동 미세-여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 응집/ 침전 단계를 추가로 포함한다.
정제 플랫폼을 사용하는 방법
일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 정제 플랫폼을 사용하는 방법을 설명한다. 일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에 본원에 기재된 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 샘플에 정제 플랫폼을 적용하여, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여, 적어도 약 5%, 예컨대 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90%이다. 일부 구체예에서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 샘플에 정제 플랫폼을 적용하여, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여, 적어도 약 5%, 예컨대 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90%이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있다.
일부 양태에서, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 샘플에 정제 플랫폼을 적용하여, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여, 적어도 약 5%, 예컨대 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90%이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 저장 수명을 증가시키는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 샘플에 정제 플랫폼을 적용하여, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 저장 수명을 증가시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물의 저장 수명의 상대적 증가는, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여, 적어도 약 1 주, 예컨대 적어도 약 2 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 9 개월, 12 개월, 18 개월, 24 개월, 또는 24 개월 이상이다. 일부 구체예에서, 조성물의 저장 수명은, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여, 적어도 약 1 주, 예컨대 적어도 약 2 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 9 개월, 12 개월, 18 개월, 24 개월, 30 개월, 36 개월, 42 개월, 48 개월, 또는 48 개월 이상이다. 일부 구체예에서, 조성물의 저장 수명은 6 개월 이상, 9 개월 이상, 12 개월 이상, 18 개월 이상, 24 개월 이상, 30 개월 이상, 36 개월 이상, 42 개월 이상, 48 개월 이상, 또는 48 개월 이상이다.
일부 양태에서, 덜 분해된 폴리소르베이트를 포함하는 조성물 제조 방법이 본원에 제공되고, 상기 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득되고, 상기 방법은 샘플에 정제 플랫폼을 적용하여, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 덜 분해된 폴리소르베이트를 포함하는 조성물을 제조하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 표적의 응집을 감소시키는 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 샘플에 정제 플랫폼을 적용하여, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 표적의 응집을 감소시키는 것을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이, 샘플에 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여 수득된 조성물의 하나 이상의 속성은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교된다. 당업자는, 일부 경우에, 그러한 비교가 의미 있는 비교를 허용하는 적절한 조건하에 수행되어야 함을 이해할 것이다. 예를 들어, 효소적 가수분해 활성 속도의 판독에 영향을 미칠 수 있는 시간적 요인이 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계를 포함하는 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물을 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교할 때 고려되어야 한다. 참조와 조성물을 비교하기 위해 고려해야 할 추가 관련 요소는 실험 조건, 사용된 분석, 온도 조건, pH, 타이밍, 샘플, 버퍼(들), 및 샘플 공급원(들)을 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에 포획 단계; 및 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 및 컨디셔닝 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 및 하나 이상의 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 바이러스 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 바이러스 여과 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 후 및/또는 바이러스 여과 단계의 pH 유지 단계, 바이러스 여과 단계 후와 같은 후 또는 동안 수행되는 하나 이상의 HIC 단계로부터 선택된 것과 같은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 UFDF 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 후 및/또는 UFDF 단계 후에 수행되는 하나 이상의 HIC 단계로부터 선택된 것과 같은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 바이러스 여과 단계; 및 UFDF 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, 심층 여과 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 전에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 후, 및/또는 바이러스 여과 단계의 pH 유지 단계, 바이러스 여과 단계 후와 같은 후 또는 동안, 및/또는 UFDF 단계 후에 수행되는 하나 이상의 HIC 단계로부터 선택된 것과 같은 HIC 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에 포획 단계; 및 HIC 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 및 컨디셔닝 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 및 하나 이상의 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 바이러스 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 바이러스 여과 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 및 UFDF 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 차례로: 포획 단계; 컨디셔닝 단계; 하나 이상의 정제 단계; 바이러스 여과 단계; 및 UFDF 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 플랫폼은 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 포획 단계 후 및 컨디셔닝 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 컨디셔닝 단계 후 및 하나 이상의 정제 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 초과의 정제 단계가 존재하는 경우 임의의 하나 이상의 정제 단계 사이에, 또는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행된다. 일부 구체예에서, HIC 단계는 UFDF 단계 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 제2 HIC 단계, 예컨대 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 HIC 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 심층 여과 단계, 예컨대 포획 단계 후에 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함한다.
본원의 개시내용의 예시 및 설명의 목적으로, 예시적인 정제 플랫폼(200) 양태에 대해 이용 가능한 옵션의 순차적 워크플로우가 도 1B에 예시된다. 도 1B에 나타난 바와 같이, 정제 플랫폼은 다음을 포함한다: 단백질 A 크로마토그래피 단계(210); HIC(225), 양이온 교환 크로마토그래피(225), 또는 멀티모달 크로마토그래피(230)로부터 선택된 추가 크로마토그래피 단계; 및 단백질 A 크로마토그래피 단계 전에 HCCF에 대해 수행된 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(205), 단백질 A 풀에 대해 수행된 X0SP 심층 여과 단계(215), 또는 단백질 A 풀에 대해 수행된 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)로부터 선택된 하나 이상의 심층 여과 단계.
도 1B에 따르면, 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 EMPHAZE™ 심층 여과 풀에 단백질 A 크로마토그래피(210)가 적용되기 전에 HCCF에 대해 수행되는 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(205)를 포함한다. 그러한 구체예에서, 단백질 A 풀에 다운스트림 크로마토그래피 단계 전에 X0SP 심층 여과 단계(215) 또는 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)가 적용된다. 정제 플랫폼이 X0SP 심층 여과 단계(215)를 포함하는 일부 구체예에서, 단백질 A 풀은 단백질 A 풀의 pH를 약 5 내지 약 6.5로 조정하여 X0SP 심층 여과 단계(215) 전에 컨디셔닝된다. 정제 플랫폼이 X0SP 심층 여과 단계(215)를 포함하는 일부 구체예에서, X0SP 심층 여과 풀은 HIC(예컨대 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름) 또는 양이온 교환 크로마토그래피(예컨대 POROS ® 50HS)를 추가로 거친다. 정제 플랫폼이 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)를 포함하는 일부 구체예에서, 단백질 A 풀은 단백질 A 풀의 pH를 약 7 내지 약 8.5로 조정하여 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220) 전에 컨디셔닝된다. 정제 플랫폼이 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)를 포함하는 일부 구체예에서, EMPHAZE™ 심층 여과 풀은 멀티모달 크로마토그래피(예컨대 Capto Adhere)를 추가로 거친다.
도 1B에 따르면, 일부 구체예에서, 정제 플랫폼은 HCCF에 대해 수행되는 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(205)를 포함하지 않는다. 그러한 구체예에서, HCCF에 단백질 A 크로마토그래피(210)가 적용되고, 단백질 A 풀에 다운스트림 크로마토그래피 단계 전에 X0SP 심층 여과 단계(215) 또는 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)가 적용된다. 정제 플랫폼이 X0SP 심층 여과 단계(215)를 포함하는 일부 구체예에서, 단백질 A 풀은 단백질 A 풀의 pH를 약 5 내지 약 6.5로 조정하여 X0SP 심층 여과 단계(215) 전에 컨디셔닝된다. 정제 플랫폼이 X0SP 심층 여과 단계(215)를 포함하는 일부 구체예에서, X0SP 심층 여과 풀은 HIC(예컨대 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름) 또는 양이온 교환 크로마토그래피(예컨대 POROS ® 50HS)를 추가로 거친다. 정제 플랫폼이 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)를 포함하는 일부 구체예에서, 단백질 A 풀은 단백질 A 풀의 pH를 약 7 내지 약 8.5로 조정하여 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220) 전에 컨디셔닝된다. 정제 플랫폼이 EMPHAZE™ 심층 여과 단계(220)를 포함하는 일부 구체예에서, EMPHAZE™ 심층 여과 풀은 멀티모달 크로마토그래피(예컨대 Capto Adhere)를 추가로 거친다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계; (b) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (c) 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함하고, 여기서 정제 단계는 HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터이다. 일부 구체예에서, HIC는 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피이다. 일부 구체예에서, 양이온 교환 크로마토그래피는 POROS ® 50HS이다. 일부 구체예에서, 멀티모달 크로마토그래피는 Capto Adhere이다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 제1 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제1 심층 여과 단계; (b) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (c) 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 제2 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계; 및 (d) 멀티모달 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터 및 제2 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 멀티모달 크로마토그래피는 Capto Adhere이다. 일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 제2 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 내지 약 8.5일 때 선택된다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (b) 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계; 및 (c) 멀티모달 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 멀티모달 크로마토그래피는 Capto Adhere이다. 일부 구체예에서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 내지 약 8.5일 때 선택된다.
일부 구체예에서, 방법은, 순서대로: (a) 제1 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제1 심층 여과 단계; (b) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (c) 제2 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼에 표적을 포함하는 샘플을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터는 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터는 무기 필터 보조제, 셀룰로스 및 수지 시스템을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터는 120ZB 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 제2 심층 필터는 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함한다. 일부 구체예에서, 제2 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 방법은 컨디셔닝 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 제1 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제1 심층 여과 단계; (b) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (c) 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 제2 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계; 및 (d) 양이온 교환 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 제2 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 양이온 교환 크로마토그래피는 POROS ® 50HS이다. 일부 구체예에서, 제2 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택된다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 제1 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제1 심층 여과 단계; (b) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (c) 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 제2 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계; 및 (d) HIC를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 제1 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 제2 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다. 일부 구체예에서, HIC는 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피이다. 일부 구체예에서, 제2 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택된다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 방법은 컨디셔닝 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (b) 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계; 및 (c) 양이온 교환 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다. 일부 구체예에서, 양이온 교환 크로마토그래피는 POROS ® 50HS이다. 일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택된다.
일부 구체예에서, 방법은 표적을 포함하는 샘플에, 순서대로: (a) 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (b) 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계; 및 (c) HIC를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 심층 필터는 X0SP 심층 필터이다. 일부 구체예에서, HIC는 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피이다. 일부 구체예에서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택된다.
추가 방법 단계
일부 구체예에서, 본원에 기재된 방법은 추가 방법 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 세포 배양 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 약제학적으로 허용되는 조성물, 또는 이의 전구체를 형성하기 위해 조성물을 처리하는 것과 같은 제제화 단계를 추가로 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물에 대해 리페이스 활성 분석을 수행하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 리페이스 활성 분석은 비형광 기질과 같은 기질의 형광 생성물과 같은 가수분해 효소의 검출 가능한 생성물로의 전환을 모니터링하여 하나 이상의 가수분해 효소의 리페이스 활성을 측정하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 기재는 에스테르 결합을 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 예를 들어 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 WO2018035025에 설명된 바와 같이 하나 이상의 가수분해 효소의 생성물을 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 지방산 질량 분석법(FAMS) 분석을 수행함으로써 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 유리 지방산(FFA)의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 조성물의 저장 수명을 결정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 조성물 중의 표적의 응집체의 수준을 결정하는 것을 추가로 포함한다.
약제학적 조성물
일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 방법으로부터 수득된다. 일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 정제된 조성물이다. 일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 멸균 약제학적 조성물이다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 항체 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 항체 모이어티, 폴리소르베이트, 및 숙주 세포 불순물, 예컨대 숙주 세포 단백질, 예를 들어, 가수분해 효소를 포함한다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 동일한 샘플의 정제로부터 수득된 조성물과 비교하여 감소된 효소적 가수분해 활성 속도를 갖는다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 동일한 샘플의 정제로부터 수득된 조성물과 비교하여 감소된 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 갖는다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 동일한 샘플의 정제로부터 수득된 조성물과 비교하여 감소된 폴리소르베이트의 분해를 갖는다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 동일한 샘플의 정제로부터 수득된 조성물과 비교하여 증가된 저장 수명을 갖는다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 동일한 샘플의 정제로부터 수득된 조성물과 비교하여 덜 분해된 폴리소르베이트를 갖는다.
일부 구체예에서, 약제학적 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 동일한 샘플의 정제로부터 수득된 조성물과 비교하여 감소된 표적의 응집을 갖는다.
제제화된 항체 모이어티 조성물
일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물을 제공한다. 일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 본원에 기재된 방법으로부터 수득된다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 항체 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함한다. 일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 항체 모이어티, 폴리소르베이트, 및 숙주 세포 불순물, 예컨대 숙주 세포 단백질, 예를 들어, 가수분해 효소를 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 제제화된 항체 모이어티 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물과 같은 참조와 비교하여 증가된 저장 수명을 갖는다. 일부 구체예에서, 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티의 응집을 통해 측정되는 것과 같이 평가된다. 일부 구체예에서, 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티의 하나 이상의 기능성의 보존을 통해 측정되는 것과 같이 평가된다. 일부 구체예에서, 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물의 항체 모이어티의 결합 활성과 같은 활성을 통해 측정되는 것과 같이 평가된다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 여기서 조성물의 저장 수명은 약 12 개월 이상, 예컨대 약 13 개월, 14 개월, 15 개월, 16 개월, 17 개월, 18 개월, 19 개월, 20 개월, 21 개월, 22 개월, 23 개월, 24 개월, 25 개월, 26 개월, 27 개월, 28 개월, 29 개월, 30 개월, 31 개월, 32 개월, 33 개월, 34 개월, 35 개월, 또는 36 개월 이상이다. 일부 구체예에서, 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 갖는 제제화된 항체 모이어티 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물과 같은 참조와 비교된다. 일부 구체예에서, 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도는 감소된 상대 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도이다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 여기서 조성물의 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련하여 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 저장 수명과 비교하여 연장되고, 여기서 저장 수명은 상기 문서에 표시된 저장 수명과 비교하여 적어도 약 2 개월, 예컨대 적어도 약 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월, 또는 12 개월 연장된다. 일부 구체예에서, 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 갖는 제제화된 항체 모이어티 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물과 같은 참조와 비교된다. 일부 구체예에서, 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도는 감소된 상대 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도이다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물은 감소된 폴리소르베이트의 분해를 가지고, 여기서 분해는 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련하여 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 분해와 비교하여 적어도 약 5%, 예컨대 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 감소된다. 일부 구체예에서, 감소된 폴리소르베이트의 분해를 갖는 제제화된 항체 모이어티 조성물은 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물과 같은 참조와 비교된다. 일부 구체예에서, 감소된 폴리소르베이트의 분해는 감소된 폴리소르베이트의 상대적 분해이다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물의 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도는 참조와 비교하여 적어도 약 5%, 예컨대 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 감소된다.
일부 구체예에서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하고, 여기서 폴리소르베이트는 액체 조성물의 저장 동안 연간 약 50% 이하, 예컨대 대략 연간 45% 이하, 연간 40% 이하, 연간 35% 이하, 연간 30% 이하, 연간 25% 이하, 연간 20% 이하, 연간 15% 이하, 연간 10% 이하, 또는 연간 5% 이하 분해된다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 제제화된 항체 모이어티 조성물은 적어도 약 6 개월, 예컨대 적어도 약 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월, 12 개월, 13 개월, 14 개월, 15 개월, 16 개월, 17 개월, 18 개월, 19 개월, 20 개월, 21 개월, 22 개월, 23 개월, 또는 24 개월 동안, 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물과 같은 참조와 비교하여 감소된 응집체 형성을 갖는다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 제제화된 항체 모이어티 조성물은 적어도 약 6 개월, 예컨대 적어도 약 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월, 12 개월, 13 개월, 14 개월, 15 개월, 16 개월, 17 개월, 18 개월, 19 개월, 20 개월, 21 개월, 22 개월, 23 개월, 또는 24 개월 동안 참조와 비교하여 적어도 약 20% 미만, 예컨대 적어도 약 25% 미만, 30% 미만, 35% 미만, 40% 미만, 45% 미만, 50% 미만, 55% 미만, 65% 미만, 70% 미만, 75% 미만, 80% 미만, 85% 미만, 90% 미만, 95% 미만, 또는 100% 미만의 응집체 형성을 갖고, 여기서 참조는 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물이다. 측정, 응집체 형성과 같은 평가 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 육안 검사, 동적 광산란, 정적 광산란 및 광학 밀도 측정을 포함한다.
일부 구체예에서, 본원에 기재된 제제화된 항체 모이어티 조성물은, 예컨대 적어도 약 6 개월, 예컨대 적어도 약 7 개월, 8 개월, 9 개월, 10 개월, 11 개월, 12 개월, 13 개월, 14 개월, 15 개월, 16 개월, 17 개월, 18 개월, 19 개월, 20 개월, 21 개월, 22 개월, 23 개월, 또는 24 개월 동안 참조와 비교하여 적어도 약 50%, 예컨대 적어도 약 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 항체 모이어티 활성을 유지하고, 여기서 참조는 하나 이상의 심층 여과 단계 및/또는 하나 이상의 HIC 단계 없이 동일한 정제 플랫폼으로부터 수득된 제제화된 항체 모이어티 조성물이다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티는 단일클론 항체이다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체이다.
일부 구체예에서, 항체는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 보고된 추가 양태는 저장 동안 낮은 폴리소르베이트 분해를 갖는 제제화된 항체 조성물이다. 발명의 한 양태는 항체/단백질 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 조성물이고, 여기서 폴리소르베이트는 제제화된 항체 조성물의 보관/저장 수명 동안 연간 20% 이하 (한 구체예에서 15% 이하, 한 구체예에서 12% 이하, 한 구체예에서 10% 이하, 한 구체예에서 9% 이하, 한 구체예에서 8% 이하, 한 구체예에서 7% 이하, 한 구체예에서 6% 이하, 한 구체예에서 5% 이하, 한 구체예에서 4% 이하, 한 구체예에서 3% 이하, 한 구체예에서 2% 이하, 한 구체예에서 1% 이하) 분해된다. 한 구체예에서 폴리소르베이트는 액체 조성물의 저장 동안 연간 10% 이하 분해된다.
또 다른 양태는 항체 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 조성물이고, 여기서 1년 후 폴리소르베이트는 초기 농도의 적어도 80% (한 구체예에서 적어도 85%, 한 구체예에서 적어도 88%, 한 구체예에서 적어도 90%, 한 구체예에서 적어도 91%, 한 구체예에서 적어도 92%, 한 구체예에서 적어도 93%, 한 구체예에서 적어도 94%, 한 구체예에서 적어도 95%, 한 구체예에서 적어도 96%, 한 구체예에서 적어도 97%, 한 구체예에서 적어도 98%, 한 구체예에서 적어도 99%의 농도로 조성물에 존재하고, 여기서 초기 농도는 액체 조성물 중의 항체의 제제화 또는 저장 시작시 농도이다.
예시적인 구체예
구체예 1. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에 (a) 포획 단계; 및 (b) 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함함.
구체예 2. 구체예 1에 있어서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도인 방법.
구체예 3. 구체예 1 또는 2에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
구체예 4. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에 (a) 포획 단계; 및 (b) 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함함.
구체예 5. 구체예 4에 있어서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있는 방법.
구체예 6. 구체예 4 또는 5에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
구체예 7. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에 (a) 포획 단계; 및 (b) 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함함.
구체예 8. 구체예 7에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는 적어도 약 5%인 방법.
구체예 9. 구체예 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 샘플로부터 표적의 정제를 위한 것이고, 샘플은 표적 및 하나 이상의 숙주 세포 불순물을 포함하는 방법.
구체예 10. 구체예 9에 있어서, 표적은 폴리펩타이드를 포함하는 방법.
구체예 11. 구체예 9 또는 10에 있어서, 숙주 세포 불순물은 숙주 세포 단백질인 방법.
구체예 12. 구체예 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행되거나, 심층 여과 단계는 포획 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 13. 구체예 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 14. 구체예 13에 있어서, 심층 필터는 규조토 조성물, 실리카 조성물, 셀룰로스 섬유, 중합체 섬유, 응집성 수지, 및 회분 조성물 중 하나 이상을 포함하는 기재를 포함하는 방법.
구체예 15. 구체예 14에 있어서, 심층 필터의 기재의 적어도 일부는 표면 개질을 포함하는 방법.
구체예 16. 구체예 15에 있어서, 표면 개질은 사차 아민 표면 개질, 양이온성 표면 개질, 및 음이온성 표면 개질 중 하나 이상인 방법.
구체예 17. 구체예 14 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터, PDD1 심층 필터, ZETA PLUS™ 120ZA 심층 필터, 및 ZETA PLUS™ 120ZB 심층 필터로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 18. 구체예 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 포획 단계는 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 19. 구체예 18에 있어서, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 크로마토그래피, 단백질 G 크로마토그래피, 단백질 A/G 크로마토그래피, 단백질 L 크로마토그래피, FcXL 크로마토그래피, 단백질 XL 크로마토그래피, 카파 크로마토그래피, 및 카파XL 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 20. 구체예 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 바이러스 불활성화 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 불활성화 단계는 포획 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 21. 구체예 20에 있어서, 심층 여과 단계는 바이러스 불활성화 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 22. 구체예 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 포획 단계 전에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 23. 구체예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함하고, 하나 이상의 정제 단계는 포획 단계, 심층 여과 단계, 및 존재하는 경우 바이러스 불활성화 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 24. 구체예 23에 있어서, 하나 이상의 정제 단계는 폴리펩타이드 정제 단계를 포함하는 방법.
구체예 25. 구체예 23 또는 24에 있어서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 전, 사이 또는 후에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 26. 구체예 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 추가로 포함하고, UFDF 단계는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 27. 구체예 26에 있어서, 정제 플랫폼은 UFDF 단계 전 또는 후에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 28. 구체예 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 정제 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 29. 구체예 28에 있어서, HIC 정제 단계는, 존재하는 경우 하나 이상의 정제 단계 전, 사이 또는 후에 수행되는 방법.
구체예 30. 구체예 28에 있어서, HIC 정제 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 존재하는 경우 UFDF 단계 전에 수행되는 방법.
구체예 31. 구체예 26 또는 27에 있어서, 정제 플랫폼은 pH 유지 단계를 추가로 포함하고, pH 유지 단계는 존재하는 경우 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 방법.
구체예 32. 구체예 31에 있어서, 정제 플랫폼은 바이러스 여과 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 여과 단계는 pH 유지 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 방법.
구체예 33. 구체예 32에 있어서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 34. 구체예 28에 있어서, HIC 정제 단계는 HIC 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 35. 구체예 23 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 정제 단계는 각각 독립적으로 이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 전하 유도 크로마토그래피, 세라믹 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 36. 구체예 23 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 정제 단계는 각각 독립적으로 DEAE, DMAE, TMAE, QAE, SPSFF, SPXL, QSFF, MEP-Hypercel™, Capto MMC, 및 Capto Adhere로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 37. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에 다음 순서로 (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; (b) 바이러스 불활성화 단계; (c) 제2 폴리펩타이드 정제 단계; (d) 제3 폴리펩타이드 정제 단계; 및 (e) 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 다음 중 하나 이상에서 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함함: (i) 포획 단계 전; (ii) 포획 단계 후 및 바이러스 불활성화 단계 전; (iii) 바이러스 불활성화 단계 후 및 제2 폴리펩타이드 정제 단계 전; (iv) 제2 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 제3 폴리펩타이드 정제 단계 전; 또는 (v) 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 한외여과/정용여과(UFDF) 단계 전); 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함함.
구체예 38. 구체예 37에 있어서, 정제 플랫폼은, 하기 순서로, pH 유지 단계 및 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 바이러스 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 39. 구체예 38에 있어서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 40. 구체예 37 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 다음 중 하나 이상에서 수행되는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 정제 단계를 추가로 포함하는 방법: (i) 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 pH 유지 단계 전; (ii) pH 유지 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전; 또는 (iii) 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전.
구체예 41. 구체예 1 내지 40 중 어느 하나에 있어서, 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 42. 구체예 1 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 43. 구체예 1 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함하는 방법.
구체예 44. 구체예 43에 있어서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 45. 구체예 1 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 샘플 처리 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 46. 구체예 1 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 세포 배양 샘플이거나 세포 배양 샘플로부터 유래되는 방법.
구체예 47. 구체예 46에 있어서, 세포 배양 샘플은 숙주 세포를 포함하고, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 대장균 세포인 방법.
구체예 48. 구체예 1 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 숙주 세포 또는 이로부터 유래하는 성분을 포함하는 방법.
구체예 49. 구체예 1 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함하고, 하나 이상의 숙주 세포 단백질 중 하나는 가수분해 효소인 방법.
구체예 50. 구체예 49에 있어서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스인 방법.
구체예 51. 구체예 1 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 표적을 포함하고, 표적은 항체 모이어티인 방법.
구체예 52. 구체예 51에 있어서, 항체 모이어티는 단일클론 항체인 방법.
구체예 53. 구체예 51 또는 52에 있어서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 방법.
구체예 54. 구체예 51 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 55. 구체예 51 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 56. 구체예 1 내지 55 중 어느 하나의 방법으로부터 수득된 약제학적 조성물.
구체예 57. 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 조성물의 저장 수명은 24 개월 이상인 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 58. 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 조성물의 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련된 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 저장 수명에 비해 연장되고, 저장 수명은 상기 문서에 표시된 저장 수명에 비해 적어도 6 개월 연장되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 59. 항체 모이어티를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 감소된 폴리소르베이트의 분해를 가지고, 분해는 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련된 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 분해에 비해 적어도 약 20% 감소되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 60. 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 폴리소르베이트는 액체 조성물의 저장 동안 연간 20% 이하 분해되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 61. 구체예 57 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 단일클론 항체인 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 62. 구체예 57 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 63. 구체예 57 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 항체는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 64. 구체예 57 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 65. 구체예 57 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도는 적어도 약 20% 감소되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 66. 구체예 57 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
구체예 67. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에, 순서대로: (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 다음 중 하나 이상에서 수행되고: 포획 단계 전; 포획 단계 후; 또는 포획 단계 후 및 정제 단계 전, 여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하고, 여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함: (i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유; (ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및 (iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트), 하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함함.
구체예 68. 구체예 67에 있어서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도인 방법.
구체예 69. 구체예 67 또는 68에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
구체예 70. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에, 순서대로: (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피으로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 다음 중 임의의 하나 이상에서 수행되고: 포획 단계 전; 포획 단계 후 및 정제 단계 전; 또는 정제 단계 후, 여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하고, 여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함: (i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유; (ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및 (iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트), 하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함함.
구체예 71. 구체예 70에 있어서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있는 방법.
구체예 72. 구체예 70 또는 71에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
구체예 73. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해 속도를 감소시키는 방법, 상기 방법은 샘플에, 순서대로: (a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및 (b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여, (여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 다음 중 하나 이상에서 수행되고: 포획 단계 전; 포획 단계 후; 또는 포획 단계 후 및 정제 단계 전, 여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하고, 여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함: (i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유; (ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및 (iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트), 하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함함.
구체예 74. 구체예 73에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는 적어도 약 5%인 방법.
구체예 75. 구체예 67 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 실리카 필터 보조제 및 폴리아크릴 섬유 펄프를 포함하는 방법.
구체예 76. 구체예 67 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 재료 및 9-구역 미세다공성 막을 포함하는 네 층을 포함하는 방법.
구체예 77. 구체예 67 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트를 포함하는 심층 필터는 두 층을 포함하고, 각각의 층은 셀룰로스 필터 매트릭스를 포함하고, 셀룰로스 필터 매트릭스는 규조토 또는 펄라이트 중 하나 이상을 포함하는 필터 보조제로 함침되고, 각 층은 수지 결합제를 추가로 포함하는 방법.
구체예 78. 구체예 67 내지 77 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 선택되는 방법.
구체예 79. 구체예 78에 있어서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택되는 방법.
구체예 80. 구체예 78에 있어서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 내지 약 8.5일 때 선택되는 방법.
구체예 81. 구체예 67 내지 80 중 어느 하나에 있어서, 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 심층 필터를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 82. 구체예 67 내지 81 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은, 순서대로, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계, 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계, 및 정제 단계를 포함하는 방법.
구체예 83. 구체예 82에 있어서, 정제 단계는 HIC를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 84. 구체예 83에 있어서, HIC는 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피인 방법.
구체예 85. 구체예 82에 있어서, 정제 단계는 양이온 교환 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 86. 구체예 85에 있어서, 양이온 교환 크로마토그래피는 POROS ® 50HS인 방법.
구체예 87. 구체예 67 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생하는 방법.
구체예 88. 구체예 82에 있어서, 정제 단계는 멀티모달 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
구체예 89. 구체예 88에 있어서, 멀티모달 크로마토그래피는 Capto Adhere인 방법.
구체예 90. 구체예 88 또는 89에 있어서, 정제 플랫폼은 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생하는 방법.
구체예 91. 구체예 67 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 샘플로부터 표적의 정제를 위한 것이고, 샘플은 표적 및 하나 이상의 숙주 세포 불순물을 포함하는 방법.
구체예 92. 구체예 91에 있어서, 표적은 폴리펩타이드를 포함하는 방법.
구체예 93. 구체예 91 또는 92에 있어서, 숙주 세포 불순물은 숙주 세포 단백질인 방법.
구체예 94. 구체예 67 내지 93 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 바이러스 불활성화 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 불활성화 단계는 포획 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 95. 구체예 94에 있어서, 하나 이상의 심층 여과 단계는 바이러스 불활성화 단계 후 수행되는 방법.
구체예 96. 구체예 67 내지 95 중 어느 하나에 있어서, 정제 플랫폼은 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 추가로 포함하고, UFDF 단계는 정제 단계 후에 수행되는 방법.
구체예 97. 구체예 67 내지 96 중 어느 하나에 있어서, 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 98. 구체예 67 내지 97 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 99. 구체예 67 내지 98 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함하는 방법.
구체예 100. 구체예 99에 있어서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 101. 구체예 67 내지 100 중 어느 하나에 있어서, 샘플 처리 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 102. 구체예 67 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 세포 배양 샘플이거나 세포 배양 샘플로부터 유래되는 방법.
구체예 103. 구체예 102에 있어서, 세포 배양 샘플은 숙주 세포를 포함하고, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 대장균 세포인 방법.
구체예 104. 구체예 67 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 숙주 세포 또는 이로부터 유래하는 성분을 포함하는 방법.
구체예 105. 구체예 67 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함하고, 하나 이상의 숙주 세포 단백질 중 하나는 가수분해 효소인 방법.
구체예 106. 구체예 105에 있어서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스인 방법.
구체예 107. 구체예 67 내지106 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 표적을 포함하고, 표적은 항체 모이어티인 방법.
구체예 108. 구체예 107에 있어서, 항체 모이어티는 단일클론 항체인 방법.
구체예 109. 구체예 107 또는 108에 있어서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 방법.
구체예 110. 구체예 107 내지 109 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 111. 구체예 107 내지 110 중 어느 하나에 있어서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
구체예 112. 구체예 67 내지 111 중 어느 하나의 방법으로부터 수득된 약제학적 조성물.
당업자는 여러 구체예가 본 출원의 개시내용의 범위 및 사상 내에서 가능함을 인식할 것이다. 본 개시내용은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 이는 본원에 기재된 특정 절차에 대한 범위 또는 사상의 개시내용을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예
실시예 1
이 실시예는 (1) 공통 정제 플랫폼; 및 (2) 친화성 크로마토그래피로부터 용출액을 컨디셔닝한 후 및 양이온 교환 (CEX) 크로마토그래피 전에 수행된 추가 PDD1 심층 여과 단계를 포함하는 동일한 정제 플랫폼을 사용하여 컨디셔닝되지 않은 벌크로부터 항체, 트라스투주맙을 정제하기 위한 두 가지 정제 플랫폼 사이의 비교를 보여준다.
공통 정제 플랫폼(1)은 이중으로 수행되고 다음의 순차적 단계로 구성되었다: 친화성 크로마토그래피, 용출액 컨디셔닝, 양이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 및 음이온 교환 크로마토그래피로부터 생성된 풀의 접선 유동 여과 및 컨디셔닝. 정제 과정의 풀 명칭 및 풀 설명은 표 1과 같았다.
표 1. 정제 풀 명칭 및 풀 설명.
| 풀 명칭 | 풀 설명 |
| 컨디션 친화성 풀 | pH 조정된 친화성 풀 |
| 심층 여과 풀 | 여과 풀 (관통) |
| 음이온 교환 풀 | 음이온 교환 크로마토그래피 용리 풀 |
| 컨디션 음이온 교환 풀 | pH가 조정된 음이온 교환 풀 |
| 컨디셔닝되지 않은 벌크 | 정용여과 버퍼를 사용한 컨디셔닝 후의 접선 유동 여과 풀 |
PDD1 심층 여과 단계(2)가 추가된 정제 플랫폼은 이중으로 수행되었다. 컨디셔닝되지 않은 벌크 수준에서 폴리소르베이트 가수분해 활성은 유리 지방산 질량 분석법(free fatty acid mass spectrometry, FAMS)에 의해 비교되었고, 이의 방법은 재료 및 방법 섹션에서 더욱 상세하게 개시된다.
심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼의 경우, 용출액은 친화성 크로마토그래피 후 및 PDD1 심층 필터(Pall PDD1; SUPRAcap™-50 SC050PDD1 (lot: 102992583); 면적: 22 cm2)를 통해 여과되기 전에 컨디셔닝되었다. PDD1 심층 필터는 CEX 평형화 버퍼를 사용하여 평형화되었다. 컨디셔닝된 친화성 풀의 여과는 압력 제어되었다. 여과 단계는 실온(15℃ - 30℃)에서 수행되었다. 트라스투주맙은 PDD1 필터를 통해 흘렀다. 사용 전 및 여과 후에, PDD1 심층 필터는 CEX 평형화 버퍼로 플러싱되었다. PDD1 심층 필터는 각 사용 후 폐기되었다. CEX 평형화 버퍼의 허용 범위는: 0.020 - 0.040 M MES (2-(N-모르폴리노) 에탄 설폰산), 0.042 - 0.048 M NaCl, pH 5.50 - 5.70, 및 5.10 - 5.70 mS/cm의 전도도였다. PDD1 심층 필터의 조작 조건은 표 2와 같았다.
표 2. PDD1 심층 필터 조작 조건.
| 조작 | 용액 | 부피 (L/m 2 ) |
| 평형화 | CEX 평형화 버퍼 | 90 |
| 여과 (압력 ≤ 5.0 bar) |
컨디션 친화성 풀 | 290 |
| 헹굼 | CEX 평형화 버퍼 | 필요한 대로 |
양이온 교환 크로마토그래피(SP Sepharose® FF 크로마토그래피)는 결합 및 용리 모드로 수행되었다. 양이온 교환 단계는 항체 응집체, 항체 변이체, CHO HCP 불순물, DNA, 용출된 단백질 A, 및 기타 공정 관련 불순물의 수준을 감소시킨다. 항체 전하 변이체는 증가하는 소듐 클로라이드 농도의 구배가 있는 컬럼으로부터 세척되고 트라스투주맙이 단계적 용리를 사용하여 용리된다. 모든 크로마토그래피 단계는 주위 온도(15℃ - 30℃)에서 수행된다.
양이온 교환 컬럼에 로딩하기 전에, 친화성 풀은 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (Tris) 염기로 pH를 5.5 ± 0.3까지 조정하여 컨디셔닝되었다. 풀이 과적정된 경우, 풀은 시트르산을 사용하여 지정된 pH로 조정된 다음, 고도로 정제된 물의 첨가에 의해 (필요한 경우) 3.5 ± 1.0 mS/cm로 전도도를 조정했다. 양이온 교환 컬럼은 평형화 버퍼로 평형화되고 컨디셔닝된 친화성 풀로 로딩되었다. 로딩 후, 컬럼은 평형화 버퍼로 세척된 다음, 증가하는 전도도의 구배 세척 후, 평형화 버퍼로 다시 세척되었다. 트라스투주맙은 용리 버퍼를 사용한 단계적 용리에 의해 컬럼으로부터 용리되었다. 용출액의 수집은 흡광도 및 부피를 기준으로 개시 및 종료되었다.
CEX 평형화 버퍼의 허용 범위는: 0.020 - 0.040 M MES, 0.042 - 0.048 M NaCl, pH 5.50 - 5.70, 및 5.10 - 5.70 mS/cm의 전도도였다. 용리 버퍼의 허용 범위는: 0.020-0.040 M MES, 0.092-0.098 M NaCl, pH 5.50-5.70, 및 10.10-10.80 mS/cm의 전도도였다. 양이온 교환 크로마토그래피의 조작 조건은 표 3과 같았다.
표 3. 양이온 교환 크로마토그래피 조작 조건.
| 허용 범위 | |||
| 조작 | 용액 | 범위 | 유량 (cm/h) |
| 층 높이 | -- | 32 - 38 cm | -- |
| 평형화 | 평형화 버퍼 | ≥ 3 CV | ≥ 150 |
| 로딩 조건 | 1.5 M Tris 염기 또는 1 M 시트르산 | pH 5.2 - 5.8 | NA |
| HPW (필요한 경우) | 전도도 2.5 - 4.5 mS/cm | NA | |
| 로드 | 친화성 풀 | 10 - 45 g/L 수지a | ≤ 150 |
| 세척 1 | 평형화 버퍼 | ≥ 3 CV | ≤ 150 |
| 구배 세척 | 평형화 버퍼/ 용리 버퍼 구배(21 - 72 % 용리 버퍼) | 필요한 대로 | ≤ 150 |
| 세척 2 | 평형화 버퍼 | ≥ 1.2 CV | ≤ 150 |
| 용리 | 용리 버퍼 | 필요한 대로 | ≤ 150 |
aSP Sepharose® 양이온 교환 수지의 리터당 트라스투주맙 그램.
음이온 교환 크로마토그래피(Q Sepharose® 크로마토그래피)는 관통 모드에서 수행되었고 CHO HCP, DNA, 단백질 A, 및 잠재적인 바이러스를 감소시킨다. 사용된 로드 및 세척 조건에서, 트라스투주맙은 컬럼을 통해 흐른다. 모든 크로마토그래피 단계는 주위 온도(15℃ - 30℃)에서 수행된다.
양이온 교환 풀의 pH는 Tris 염기, 및 필요한 경우 MES를 사용하여 pH 8.0 ± 0.5로 조정되었고, 전도도는 고순도 물로 5.5-7.8 mS/cm로 조정되었다. 음이온 교환 컬럼은 평형화 버퍼로 평형화된 다음, pH-컨디셔닝된 양이온 교환 풀로 로딩되었다. 로드가 완료된 후, 컬럼은 평형화 버퍼로 세척되었다. 풀링은 흡광도 및 부피를 기반으로 했다. 음이온 교환 풀의 pH는 아세트산을 사용하여 6.0 ± 0.1로 조정되었다.
평형화 버퍼의 허용 범위는: 0.015 - 0.035 M Tris, 0.025 - 0.075 M NaCl, 및 pH 7.5 - 8.5였다. 양이온 교환 크로마토그래피의 조작 조건은 표 4와 같았다.
표 4. 음이온 교환 크로마토그래피 조작 조건.
| 조작 | 용액 |
| 층 높이 | -- |
| 평형화 | 평형화 버퍼 |
| 로딩 조건 | 1.5 M Tris 염기 또는 1 M MES |
| 고순도 물 | |
| 로드 | 컨디션 정상 흐름 바이러스 여과 풀 |
| 세척/용리 | 평형화 버퍼 |
| 풀 pH 조정 | 0.5 M 아세트산 |
컨디셔닝된 음이온 교환 풀의 접선 유동 여과(TFF)는 농축 및 정용여과를 위해 수행되었다. 컨디셔닝되지 않은 벌크에 대해 30 ± 5 mg/mL의 단백질 농도를 달성하기 위해, 컨디셔닝된 음이온 교환 풀은 30 kDa 폴리에테르설폰 (PES) 막이 구비된 TFF 장치에 의해 농축되었다. 후속적으로, 버퍼 조성물은 히스티딘을 포함하는 용액의 첨가에 의해 조건을 충족하도록 조정되었다.
사용 전에, 한외여과 막은 정용여과 버퍼로 평형화되었다. 컨디셔닝된 음이온 교환 풀은 10 - 50 g/L의 중간체 농도로 농축되었고, TFF 유닛에서 최소 8 풀 부피의 정용여과 버퍼로 정용여과되었다. 후속적으로, 버퍼 조성물은 상응하는 양의 컨디셔닝 버퍼를 첨가하여 0.02 mol/L 히스티딘/ 히스티딘 HCl, pH 5.3 ± 0.2로 조정되었다. 필요한 경우, 단백질 농도는 정용여과 버퍼의 첨가에 의해 30 ± 5 mg/mL로 조정되었다.
정용여과 버퍼는 0.02 mol/L 히스티딘/ 히스티딘-HCl, pH 5.3 ± 0.2였다. 양이온 교환 크로마토그래피의 조작 조건은 표 5와 같았다.
표 5. TFF 조작 조건.
| 조작 | 용액 | 범위 |
| 평형화 | 정용여과 버퍼 | 필요한 대로 |
| TFF | 컨디션 음이온 교환 풀 | 생성물 양에 의존 |
| 10-50 g/L | ||
| 정용여과 | 정용여과 버퍼 | ≥ 8 DV |
양이온 교환 크로마토그래피 로드 조성물 중의 숙주 세포 단백질의 양이 측정되었고 결과는 표 6에 제공된다. 숙주 세포 단백질의 수준 감소는 공통 정제 플랫폼과 비교하여 PDD1 심층 필터가 있는 정제 플랫폼의 복제물 모두에 대해 관찰되었다.
표 6. 양이온 교환 크로마토그래피 로드 조성물의 측정된 숙주 세포 단백질.
| 과정 | 농축 OD280 | 밀도 (L/m 2 ) | HCP [ng/mg] | HCP ml [ng/ml] |
| 공통 (w/o PDD1여과) | 8.56 | -/- | 1558.3 | 13339.09 |
| w/ PDD1 여과된 복제물 1 |
6.83 | 280 | 21.98 | 150.13 |
| w/ PDD1 여과된 복제물 2 |
6.71 | 280 | 22.37 | 150.13 |
정용여과로 컨디셔닝한 후 TFF 풀 중의 숙주 세포 단백질의 양이 측정되고 결과가 표 7에 제공된다. 숙주 세포 단백질의 수준 감소는 공통 정제 플랫폼과 비교하여 PDD1 심층 필터가 있는 정제 플랫폼의 복제물 모두에 대해 관찰되었다.
표 7. 정용여과 조성물로 컨디셔닝한 후 TFF 풀의 측정된 숙주 세포 단백질.
| 과정 | 농축 OD280 (mg/ml) | HCP [ng/mg] | HCP [ng/ml] |
| 공통 (w/o PDD1여과) 복제물 1 |
29.1467 | < 1 | 9.0 |
| 공통 (w/o PDD1여과) 복제물 2 |
29.3805 | < 1 | 12.36 |
| w/ PDD1 여과된 복제물 1 |
32.0042 | < 1 | < 1.2 |
| w/ PDD1 여과된 복제물 2 |
28.7973 | < 1 | < 1.2 |
정용여과로 컨디셔닝한 후 TFF 풀의 가수분해 활성이 측정되었고 결과가 도 2에 제공된다. 가수분해 활성은 40 ℃, 0.04% (w/v) SR-PS20, 10 mM 메티오닌, 100 mM Tris pH 8.0, 및 6 g/l의 최종 트라스투주맙 농도에서 FAMS를 사용하여 측정되었다. 유리 지방산의 양에 의해 간접적으로 측정된 효소적 가수분해 활성 속도의 감소는 공통 정제 플랫폼의 복제물과 비교하여 PDD1 심층 필터가 있는 정제 플랫폼의 복제물 모두에 대해 관찰되었다 (도 2).
재료 및 방법
단백질 농도의 결정. 단백질 농도는 Cary® 50 UV-Vis Spectrophotometer (Varian) 또는 NanoDrop™ OneC (Thermo Scientific)를 사용하여 UV 분광법에 의해 결정되었다. 단백질 샘플은 각각의 버퍼에 희석되고 중복으로 측정되었다. 농도는 람베르트-비어 법칙으로부터 파생된 다음 식에 따라 결정되었다: c = (A 280 nm - A 320 nm)/ εㆍdㆍF 여기서 c 단백질 농도 [mg/ml], A 흡광도, ε 흡광 계수 [ml/(mgㆍcm)], d 세포 길이 [cm] 및 F 희석 인자. 트라스투주맙, 파리시맙 및 FAP-IL2v에 대한 비흡광 계수는 1.48, 1.7 및 1.35 ml/(mgㆍcm)이다.
리페이스 활성 분석 (LEAP 분석). 리페이스 활성 분석은 기질 에스테르 결합의 절단을 통해 비형광성 기질(4-MU, Chem Impex Int'l Inc)의 형광성 생성물(MU, Sigma-Aldrich)로의 전환을 모니터링하여 리페이스 활성을 측정했다. 분석될 단백질 풀 샘플은 Amicon Ultra-0.5 ml 원심분리 필터 유닛(10,000 Da 컷오프, Merck Millipore)을 사용하여 150 mM Tris-Cl pH 8.0로 재완충되었다. 분석 반응 혼합물은 80 μL의 반응 버퍼(150 mM Tris-Cl pH 8.0, 0.25% (w/v) Triton X-100 및 0.125% (w/v) Gum Arabic), 10 μL 4-MU 기질(DMSO 중의 1 mM), 및 10 μL 단백질 풀 샘플을 포함했다. 단백질 풀 샘플 농도는 10-30 g/L로 조정되고 세 가지 상이한 농도에서 테스트되었다. 각각의 반응은 96-웰 해프-에리어 폴리스타이렌 플레이트(뚜껑이 있는 검은색 및 투명한 평평한 바닥, Corning Incorporated)에서 세 가지 기술적 복제물로 설정되었고, 형광 신호의 증가(355 nm에서 여기, 460 nm에서 방출)는 Infinite 200Pro 플레이트 판독기(Tecan Life Sciences)에서 37 ℃에서 두 시간 동안 반응 플레이트를 인큐베이션하여 10 분마다 모니터링되었다. MU 생성 속도는 형광 시간 경과(0.5 시간 - 2 시간)의 기울기로부터 유도되었고, 반응의 원 속도(kraw [RFU/h])를 나타낸다.
버퍼 매트릭스에 의해 야기되는 기질의 임의의 비효소적 절단을 측정하기 위해 효소 블랭크 반응이 추가로 설정되었다. 10 μL 단백질 풀 샘플은 반응 혼합물 중의 10 μL의 150 mM Tris-Cl pH 8.0로 대체되었다. 자가 절단 속도(kself-절단 [RFU/h])는 형광 시간 경과(0.5 시간 - 2 시간)의 기울기로부터 유도되었다. 형광 신호(RFU)를 MU의 μM으로 전환하기 위해, 플레이트당 표준 MU 삼중복이 추가되었다. 10 μL MU (DMSO 중의 100 μM)는 10 μL의 150 mM Tris-Cl pH 8.0 및 80 μL의 반응 버퍼로 보충되었다. 전환 인자 [RFU/μM]는 형광 신호(0.5 시간 - 2 시간)를 평균화하고 이를 웰에 존재하는 MU의 최종 농도로 나누어 계산되었다.
[μM MU/h]으로 주어진 샘플에 대한 리페이스 활성은 샘플의 반응 속도(kraw [RFU/h])로부터 효소 블랭크의 반응 속도 (kself-절단 [RFU/h])를 차감하고, 항을 전환 인자 [RFU/μM]로 나누어 형광 신호를 μM MU/h로 전환하여 결정되었다. 활성은 웰당 적용된 단백질 농도로 정규화되었다. 가수분해 활성을 퍼센트로 기록하기 위해 참조 샘플의 리페이스 활성이 100 %로 설정되었다.
유리 지방산 및 질량 분석법 (FAMS) 분석. 각각의 용리 분획에서 PS20 분해 후 유리 지방산의 함량을 모니터링하기 위해, 샘플이 먼저 PS20 안정성 연구를 위해 제조되고 추후 질량 분석법에 의해 분석되었다. 달리 명시되지 않는 한, 단백질 풀 샘플은 (각각의 실험 설명에 표시된 바와 같이) 동일한 단백질 농도로 조정되었고, 0.04% (w/v) SR-PS20, 10 mM L-메티오닌 및 100 mM Tris pH 8을 포함했다. L-메티오닌은 실험의 시간 경과 동안 PS20의 산화적 분해를 제어하기 위해 효율적인 항산화제로서 첨가되었다. 버퍼 대조군 샘플로서 적용된 단백질 부피는 상응하는 용리 버퍼 시스템의 동일한 부피로 대체되었다.
모든 반응 혼합물은 600 rpm에서 진탕하면서 37 ℃, 또는 40 ℃에서 Thermomixer (Eppendorf)에서 인큐베이션되었다. 샘플은 (각 도면에 표시된 대로) 정의된 시점 후에 회수되었고, 후속 분석까지 -80 ℃에서 보관되었다.
50 μL의 샘플이 새로운 에펜도르프 컵으로 옮겨졌다. 200 μL FFA 용해 용액(아세토니트릴 중의 500 ng/mL D23-라우르산 및 500 ng/mL 13C14-미리스트산)이 첨가되고 잠시 볼텍싱되었다. 샘플은 14.000 rpm에서 5 분 동안 원심분리되고 HPLC-바이알로 옮겨졌다. 5 μL의 주입된 샘플로부터의 지방산 분리가 ACQUITY UPLC® Peptide BEH C18 컬럼(1.7 μm 2.1x150 mm 및 300Å)을 사용하여 Thermo Scientific™ Vanquish™ UHPLC-시스템에서 수행되었다. 용리액 A (물 중의 0.1% 암모늄 하이드록사이드) 및 용리액 B (100% 아세토니트릴)는 0.3 mL/분의 유량 및 60℃의 컬럼 온도에서 다음 구배에 대해 사용되었다. 초기 조건은 70% 용리액 B였다. 구배는 용리액 A를 100%로 증가시키면서 0.2 분에서 5.5 분까지 선형으로 변화되고 6.0까지 유지되었다. 용리액 B는 6.1 분에 70%로 설정되고 평형화를 위해 10.0 분까지 유지되었다. 질량 분석계(Triple TOF® 6600, AB Sciex)는 - 4500 V에서 이온 분무 전압으로 음이온화 모드에서 작동되었다. 소스 온도는 450℃로 설정되었고 TOF 질량 범위는 100-1000 m/Z였다. 디클러스터링 전위는 -120 V이었고 충돌 에너지는 -10 V이었다.
라우르산, 미리스트산 및 동위원소 표지된 (D23)-라우르산 및 (13C14) 미리스트산의 질량에 대한 XIC가 생성되었다. 각각의 피크는 적분되고 라우르산과 D23-라우르산 사이의 피크 면적 비율 및 미리스트산과 13C14-미리스트산 사이의 비율이 결정되었다. 피크 면적 비율은 샘플 중의 라우르산 및 미리스트산의 농도 계산에 사용되었다. 측정은 이중으로 수행되었다. FFA(라우르산(LA) 및 미리스트산(MA)) 양을 퍼센트로 기록하기 위해 기준 샘플의 양을 100 %로 설정했다.
실시예 2
이 실시예는 (1) 공통 정제 플랫폼; (2) 친화성 크로마토그래피로부터의 용출액을 컨디셔닝한 후 및 양이온 교환 (CEX) 크로마토그래피 전에 수행되는 PDD1 심층 여과 단계가 추가된 공통 정제 플랫폼; 및 (3) 친화성 크로마토그래피로부터의 용출액을 컨디셔닝한 후 및 양이온 교환 (CEX) 크로마토그래피 전에 수행되는 EMPHAZE™ 심층 여과 단계가 추가된 공통 정제 플랫폼을 사용하여 항체, 트라스투주맙을 정제하기 위한 세 가지 플랫폼 사이의 비교를 보여준다.
공통 정제 플랫폼(1)은 다음으로 구성되었다: 친화성 크로마토그래피, 용출액 컨디셔닝, 양이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 및 음이온 교환 크로마토그래피로부터 생성된 풀의 접선 유동 여과 및 컨디셔닝.
심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼의 경우, 용출액은 친화성 크로마토그래피 후 및 심층 필터를 통해 여과되기 전에 컨디셔닝되었다. 사용된 PDD1 심층 필터는 Pall PDD1, SUPRAcap™-50 SC050PDD1 (lot.: 102992583), 면적: 22 cm2이었다. 사용된 EMPHAZE™ 심층 필터는 EMPHAZE™ AEX Hybrid (lot.:S210650302), 면적: 25 cm2이었다. 트라스투주맙은 심층 필터를 통해 흐른다. 여과 단계는 주위 온도(15℃-30℃)에서 수행된다.
사용 전에, 심층 필터는 양이온 교환 평형화 버퍼를 사용하여 평형화되었다. 컨디셔닝된 친화성 풀의 여과는 흐름 제어된다. 헹굼이 여과 후에 수행되지 않았다. 이는 검사될 숙주 세포 단백질(효소)의 실제 감소를 허용한다. 필터는 각 사용 후 폐기되었다. CEX 평형화 버퍼의 허용 범위는: 0.020 - 0.040 M MES, 0.042 - 0.048 M NaCl, pH 5.50 - 5.70, 및 5.10 - 5.70 mS/cm의 전도도였다. 심층 필터의 조작 조건은 표 8과 같았다.
표 8. 심층 필터 조작 조건.
| 조작 | 용액 | 부피 (L/m 2 ) | 유량 (mL/분) |
| PDD1 필터 플러시 | 주입용수 | 90 | NA |
| EMPHAZE™ 필터 플러시 | CEX 평형화 버퍼 | 90 | NA |
| 평형화 | CEX 평형화 버퍼 | 90 | NA |
| PDD1 여과 (압력 ≤ 2.4 bar) |
컨디션 친화성 풀 | 227 | 10 |
| EMPHAZE™ 여과 (압력 ≤ 2.4 bar) |
컨디션 친화성 풀 | 200 | 10 |
| 헹굼 | 없음 | 없음 | NA |
양이온 교환 크로마토그래피 로드 조성물 중의 숙주 세포 단백질의 양이 측정되었고 결과는 표 9에 제공된다. 단백질 농도 측정이 실시예 1에 따라 수행되었다. 숙주 세포 단백질의 수준 감소는 공통 정제 플랫폼과 비교하여 EMPHAZE™ 심층 필터가 있는 정제 플랫폼 및 PDD1 심층 필터가 있는 정제 플랫폼 모두에 대해 관찰되었다.
표 9. 양이온 교환 크로마토그래피 로드 조성물의 측정된 숙주 세포 단백질.
| 샘플 | 농축 OD280 | 밀도 (L/m 2 ) | HCP [ng/mg] | HCP ml [ng/ml] |
| 공통 (w/o 심층 여과) | 7,06 | -/- | 3653 | 25791,68 |
| w/ EMPHAZE™ 여과 | 6,55 | 200 | 2160 | 14144,97 |
| w/ PDD1 여과 | 6,45 | 227 | 4 | 27 |
공통 플랫폼(친화성 크로마토그래피 후, w/o 심층 여과, 참조)의 양이온 교환 크로마토그래피 로드의 리페이스 활성은 친화성 크로마토그래피 후 추가 심층 여과 단계를 포함하는 상응하는 양이온 교환 크로마토그래피 로드와 비교되었다 (도 3). 리페이스 활성 분석은 실시예 1에 따라 수행되었다.
공통 플랫폼(친화성 크로마토그래피 후, w/o 심층 여과, 참조)의 양이온 교환 크로마토그래피 로드의 가수분해 활성은 친화성 크로마토그래피 후 추가 심층 여과 단계를 포함하는 상응하는 양이온 교환 크로마토그래피 로드와 비교되었다 (도 4). FAMS 분석이 실시예 1에 따라 수행되었다. 가수분해 활성은 40 ℃, 0.04% (w/v) SR-PS20, 10 mM 메티오닌, 100 mM Tris pH 8.0, 및 4.8 g/l의 최종 트라스투주맙 농도에서 FAMS를 사용하여 측정되었다. 리페이스 활성 분석에 의해 측정된 효소적 가수분해 활성 속도의 감소(도 3) 및 FAMS 분석에서 FAA의 양 감소(도 4)가 공통 정제 플랫폼과 비교하여 심층 필터를 포함하는 두 정제 플랫폼 모두에 대해 관찰되었다.
실시예 3
이 실시예는 멸균 전에 HCCF(수확 세포액)에 대해 수행되는 심층 여과 단계 및 친화성 크로마토그래피(CaptureSelect™ FcXL) 후에 수행되는 제2 심층 필터 단계를 사용하여 항-VEGF/Ang2 항체를 정제하기 위한 정제 플랫폼의 사용을 보여준다. 사용된 정제 플랫폼은 도 5에 상세히 설명된다. 참조 제어는 HCCF의 추가 심층 여과 단계 없이 예시된 정제 공정을 사용하여 수행되었다 (도 5).
도 5에 나타난 바와 같이, HCCF는 잠재적인 숙주 세포 단백질을 제거하도록 설계된 세 가지 상이한 심층 필터를 통해 여과되었다. 항체는 필터를 통해 흐른다. 여과 단계는 주위 온도(15℃-30℃)에서 수행된다.
사용 전에, 세 가지 심층 필터가 EMPHAZE™ (EMPHAZE™ AEX Hybrid (lot.:S228585702), 면적: 25 cm2), VR02 (BioCap_VR02 (lot.:3923452), 면적: 25 cm2), 및 120ZB (BioCap_120ZB (lot.: 3923452), 면적: 25 cm2)에 대해 친화성 평형화 버퍼를 사용하고, PDD1 (SUPRAcap™-50 SC050PDD1 (lot.:103119429), 면적: 22 cm2)에 대해 양이온 교환 평형화 버퍼를 사용하여 평형화되었다. HCCF의 여과는 압력 제어되었다 (공급물 압력 = 0.2 MPa; 최대 공급물 유량: 25 mL/분). 컨디셔닝된 친화성 풀의 여과는 흐름 제어되었다 (공급유량 = 5.2 ml/분; 제어된 압력: 0.2 MPa). 여과 후 필터는 생성물 회수를 위해 동일한 버퍼로 플러싱되었다. 필터는 각각의 사용 후 폐기되었다. 평형화 버퍼는 표 10에 제공된다.
표 10. 심층 필터 평형화 버퍼.
| 필터 | 평형화 버퍼 |
| 필터 1 (EMPHAZE™) | 25 mM Tris, 25 mM NaCl, pH 7.20 |
| 필터 2 (VR02) | 25 mM Tris, 25 mM NaCl, pH 7.20 |
| 필터 3 (120ZB) | 25 mM Tris, 25 mM NaCl, pH 7.20 |
| 필터 4 (PDD1) | 50 mM Tris/아세테이트, pH 7.20 |
PDD1 필터 플러시가 200 mL(~90 L/m2)의 주입용수를 사용하여 수행되었다. EMPHAZE™ 필터 플러시가 200 mL(~90 L/m2)의 C1 평형화 버퍼를 사용하여 수행되었다. 여과된 HCCF 부피는 1750 mL였다 (EMPHAZE™에 대해 ~700 L/m2).
CaptureSelect FcXL에 대한 조작 조건은 표 11과 같았다.
표 11. CaptureSelect FcXL에 대한 조작 조건.
| 단계 | 버퍼 | 지속시간 | 유량 |
| 로드 단계 | HCCF | 로드 밀도 29 g/L | ≤ 200 cm/h |
| 세척 1 | 25 mM Tris, 25 mM NaCl, pH 7.20 | ≥ 2 CV | ≤ 200 cm/h |
| 세척 2 | H2O | ≥ 5 CV | ≤ 200 cm/h |
| 용리 | 30 mM 산성 산, pH 3.2 | OD *12,5 / 2,5 AU 그러나 최대 1,6 CV (흐름 세포 1 cm) |
≤ 150 cm/h |
| 용리 후 | 30 mM 산성 산, pH 3.2 | ≥ 1 CV | ≤ 200 cm/h |
숙주 세포 단백질 로드의 양이 정제 플랫폼의 다양한 지점에서 측정되었고 (도 5 참조) 결과가 표 12에 제공된다.
표 12. 정제 플랫폼에 대해 수득된 조성물 중의 측정된 숙주 세포 단백질. 별표는 도 5에 표시된 바와 같이 샘플링 지점을 반영한다.
| 샘플 | 밀도 (L/m 2 ) | HCP [ng/mg] | HCP ml [ng/ml] |
| w/o 친화성 풀 | -- | 30094 | 516710,93 |
| w/o 로드 MM | -- | 1051 | 18988,43 |
| EMPHAZE™ 친화성 풀* | 700 | 17596 | 108568,63 |
| VR02 친화성 풀* | 700 | 12814 | 63696,26 |
| 120ZB 친화성 풀* | 700 | 16109 | 122527,27 |
| EMPHAZE™ PDD1 여과됨** | 700 | 135 | 512,39 |
| VR02 PDD1 여과됨** | 700 | 80 | 310,12 |
| 120ZB PDD1 여과됨** | 700 | 335 | 2224,19 |
가수분해 활성은 실시예 1에 기재된 바와 같이 리페이스 활성 분석에 의해 측정되었다. 여러 상이한 정제 플랫폼의 FcXL 용출액의 효소적 가수분해 활성 속도 감소가 추가 심층 필터가 없는 공통 정제 플랫폼과 비교하여 테스트된 심층 필터(EMPHAZETM, VR02, 및 120ZB) 중 하나에서 관찰되었다 (도 6A). 여러 상이한 정제 플랫폼의 PDD1 여과액의 효소적 가수분해 활성 속도 감소가 추가 심층 필터가 없는 공통 정제 플랫폼과 비교하여 테스트된 심층 필터(EMPHAZETM, VR02, 및 120ZB) 중 하나에서 관찰되었다 (도 6B).
FAMS 분석이 항체를 정제하기 위한 두 가지 정제 플랫폼을 강한 양이온 교환 크로마토그래피 풀과 비교하기 위해 수행되었다: (1) 공통 정제 플랫폼; 및 (2) 친화성 크로마토그래피 전에 수행되는 추가의 120 ZB 심층 여과 단계를 포함한 동일한 정제 플랫폼. 공통 정제 플랫폼은 다음의 순차적 단계로 구성되었다: 친화성 크로마토그래피, 용출액 컨디셔닝, 심층 여과, 멀티 모달 음이온 교환 크로마토그래피, 강한 양이온 교환 크로마토그래피 및 접선 유동 여과. FAMS 분석은 실시예 1 및 다음 조건에 따라 수행되었다: 37 ℃, 0.04% (w/v) SR-PS20, 10 mM 메티오닌, 150 mM Tris pH 8.0, 50 g/l의 최종 항체 농도. 유리 지방산의 양에 의해 측정된 효소적 가수분해 활성 속도의 감소는 공통 정제 플랫폼과 비교하여 120ZB 심층 필터가 있는 정제 플랫폼에 대해 관찰되었다 (도 7).
실시예 4
이 실시예는 컨디셔닝된 친화성 크로마토그래피 (단백질 A 크로마토그래피) 용출액의 여과를 위한, 두 가지 상이한 심층 필터, X0SP 또는 PDD1를 포함하는 항-FAP-IL2v를 정제하기 위한 정제 플랫폼의 비교를 보여준다.
실시예 1에 언급된 바와 같이 HCCF 샘플이 제조되고 여과되었다.
공통 플랫폼(심층 여과 없음)의 단백질 A 크로마토그래피 용출액의 리페이스 활성이 단백질 A 크로마토그래피 용출액에 대해 수행된 X0SP 또는 PDD1 심층 여과 단계가 있는 정제 플랫폼을 포함하는 심층 여과의 친화성 크로마토그래피 용출액과 비교되었다. 리페이스 활성 분석은 실시예 1에 따라 수행되었다. X0SP 심층 필터로부터 수득된 분획 중의 리페이스 활성의 결과가 도 8A에 나타난다. PDD1 심층 필터로부터 수득된 리페이스 활성의 결과가 도 8B에 나타난다.
실시예 5
이 실시예는 정제 플랫폼으로부터 수득된 항체 모이어티 조성물 중의 폴리소르베이트의 가수분해적 분해를 최소화하는 옵션을 찾기 위해 수행된 다양한 항체 모이어티의 정제를 위한 정제 최적화 실험을 보여준다. 본원에 개시된 실험은 심층 필터, 예컨대 단백질 A 및 제2 크로마토그래피 컬럼 로드 필터로서 EMPHAZE™, 및 후속 바이러스 여과 단계에 대한 폴리싱 컬럼 용리 풀 필터 또는 로드 필터로서 HIC 매체(SARTOBIND® 페닐 막)의 포함을 평가한다.
폴리소르베이트 분해를 담당하는 가수분해 효소를 제거하거나 감소시킨 가능성이 EMPHAZE™ 및 X0SP를 포함하는 여러 심층 필터에 대해 평가되었다. EMPHAZE™ 필터의 통합은 공통 mAb 정제 공정 흐름에서 두 가지 처리 수준에서 평가되었다. 제1 옵션은 단백질 A 크로마토그래피 전에 단백질 A 로드 필터로서이고, 여기서 HCCF는 단백질 A 컬럼에 로딩하기 전에 여과된다. 표 13에 요약된 바와 같이, 상대적 가수분해 활성은 공통 정제 과정과 비교하여 단백질 A 크로마토그래피 전에 HCCF를 여과할 때 40% 이상 감소된다.
표 13. 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 상대적 가수분해 활성.
| 분자 | 로드 재료 | 처리량 (L/m2) | ProA 풀에서 폴리소르베이트 분해 감소 % |
| 토실리주맙 | HCCF | 300 | 47% |
| 오크렐리주맙 | HCCF | 800 | 39% |
| 항-인플루엔자 A mAb | HCCF | 280 | 93% |
| 셀리크렐루맙 | HCCF | 500 | 50% |
EMPHAZE™로써 달성된 폴리소르베이트 분해의 감소가 숙주 세포 단백질 단독의 감소와 관련되지 않음을 입증하기 위해, 증가하는 EMPHAZE™ 처리량에서 HCCF 샘플이 단백질 A에 대해 정제되었고 풀이 CHOP 및 폴리소르베이트 분해 활성 모두에 대해 분석되었다. 도 9에 나타난 바와 같이, CHOP 값의 감소는 EMPHAZE™ 여과 처리량에 의존하는 반면 폴리소르베이트 분해 속도의 현저한 감소는 상대적으로 일정했다. 대조군과 비교하여 달성된 폴리소르베이트 분해 고유 활성도의 현저한 감소는 EMPHAZE™ 정화 처리량이 증가함에 따라 거의 대조군만큼 높은 CHOP 값의 지속적인 증가에도 불구하고 최대 800L/m2 처리량까지 비교적 일정하게 유지된다.
평가된 두 번째 옵션은 바이러스 불활성화 단계의 다운스트림에 또는 제2 컬럼 크로마토그래피에 대한 로드 필터로서 EMPHAZE™ 및 X0SP 심층 필터의 배치였다. 이 평가를 위해, 여러 분자의 단백질 A 풀이 pH 5.5 또는 pH 8.0까지 중화되었고 EMPHAZE™ 또는 X0SP에서 300 L/m2 처리량까지 여과되었다. 여과된 풀의 폴리소르베이트 가수분해 활성이 대조군 미여과 샘플과 비교되었다. 표 14에 요약된 바와 같이, EMPHAZE™ 및 X0SP 필터는 모두 여과되지 않은 제어된 풀과 비교하여 폴리소르베이트 분해에 대해 현저한 감소를 나타냈다. 도 10에 나타난 바와 같이, (단백질 A 풀의 항-타우 mAb의 정제에서 리페이스 활성 분석을 사용하여 측정된) 폴리소르베이트 가수분해 활성은 pH 5.5에서 X0SP 심층 필터에 대한 필터 처리량에 의존한다.
표 14. 정제 플랫폼으로부터 수득한 조성물의 가수분해 활성.
| 분자 | 단백질 A 풀 pH | 필터 유형 | 고유 분해 속도 | 참조와 비교하여 PS20 분해 속도 감소 % |
| 항-타우 mAb | 5.5 | X0SP | 14.3 | 33 |
| EMPHAZE™ | - | 11 | ||
| 퍼투주맙 | 5.5 | X0SP | 0 | 100 |
| 8 | EMPHAZE™ | 39.4 | 36 |
HIC 막의 사용은 폴리소르베이트 분해를 감소시키기 위한 접근법으로서 평가되었다. HIC 막은 최종 폴리펩타이드 크로마토그래피 컬럼 단계(예를 들어, 음이온 교환 크로마토그래피) 후, 바이러스 여과 전에 수행되는 pH 유지 단계 (예를 들어, pH 5-6) 후, 및/또는 UFDF 단계 전에 수행되는 바이러스 여과 단계 후에 배치될 수 있다.
이 연구에서 평가된 주된 HIC 막은 SARTOBIND® 페닐 막이었다. 최종 폴리펩타이드 크로마토그래피 풀은 상이한 pH 값으로 조정한 후 SARTOBIND® 막 필터에서 여과되었다. 여과된 풀은 상대적인 폴리소르베이트 분해에 대해 분석되었다. 도 11A-11C에 나타난 바와 같이, 상대적 폴리소르베이트 활성은 대조군과 비교하여 현저하게 감소했다. 동일한 데이터는 또한 활성 감소가 막 부피 처리량 의존성임을 나타낸다 (도 11A-11C). 구체적으로, 도 11A는 pH 5.5에서 오크렐리주맙에 대한 상이한 처리량에서 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도를 나타낸다. 도 11B는 pH 5.5에서 셀리크렐루맙에 대한 상이한 처리량에서 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도를 나타낸다. 도 11B는 pH 6.5에서 토실리주맙에 대한 상이한 처리량에서 폴리소르베이트 분해의 고유 활성도를 나타낸다 (도 11C).
재료 및 방법
수지 Pro A Sepharose® FF, Fractogel® TMAE 및 세라믹 하이드록시아파타이트 수지는 각각 GE Healthcare (Uppsala, Sweden), TOSOH Biosciences (King of Prussia, PA) 및 Bio-Rad (Hercules, California)로부터 구입되었다. Amicon 원심 필터 및 X0SP 심층 필터는 Millipore (Bedford, MA)로부터 구입되었다. EMPHAZE™ AEX 심층 필터는 3M (Meriden, CT)로부터 구입되고 SARTOBIND® 페닐 막은 Sartorius (Bohemia, NY)로부터 구입되었다. 4-메틸 움벨리페릴 카프릴레이트, Triton™ X-100 및 아라비아 검은 각각 Research Organcis (Cleveland, OH), 및 Acros Organics (Bridgewater, NJ)로부터 구입되었다. 리페이스 활성 분석에서 사용된 초정제(Super refined, SR) 등급 PS20은 Croda (Newark, NJ)로부터 구입되었다. 여기에 보고된 모든 단일클론 항체는 CHO 세포에서 발현된 인간화 또는 인간 IgG1이었고 Roche (South San Francisco or Oceanside, CA)에서 생산되었다.
소규모 EMPHAZE™ 및 기타 심층 필터의 경우, 25 cm2 크기의 캡슐이 사용되었다. 필터는 먼저 8ml/분 유량에서 100L/m2 동안 25mM Tris, 250mM NaCl pH 7.5로 플러싱되었다. 평형화 후, HCCF (Pro A 로드) 또는 중화된 단백질 A 용리 풀이 800L/m2까지 여과되었다. 분획은 100 L/m2마다 수집되고 후속 컬럼 단계에서 정제되고 폴리소르베이트 분해 활성이 측정되었다.
SARTOBIND® 페닐 막 평가를 위해, 3ml 크기의 장치가 사용되었다. 막은 먼저 15L/분 유량에서 30ml의 평형화 버퍼로 플러싱되었다. 평형화 후, 최종 크로마토그래피 풀은 SARTOBIND® 페닐 막에서 여과되었고 분획은 수집되고 상대적 폴리소르베이트 분해 활성에 대해 분석되었다.
모든 소규모 크로마토그래피 실행은 0.66cmx20 cm 컬럼에서 수행되었다. 단백질 A 정제의 경우, 컬럼은 먼저 평형화 버퍼에서 사전 평형화되었고 HCCF가 10-20 g/L 수지에 로딩되었다. 로딩 후, 컬럼은 >3 컬럼 부피에 대해 평형화 버퍼 및 >4 컬럼 부피에 대해 세척 버퍼로 세척되었다. 결합된 단백질은 2.5mM HCl pH 2.7 또는 150mM 아세트산으로 용리되었다. 0.5 OD 내지 0.5OD의 용리 분획이 수집되고 pH 5로 중화되고 폴리소르베이트 분해 활성에 대해 분석되었다.
리페이스 효소적 활성은 폴리소르베이트와 유사한 구조를 갖는 움벨리페릴 기질에서 에스테르 결합의 절단에 따라 조사되었다. 이 연구에서, 반응 혼합물은 10 μL의 DMSO 중의 10 mM 4-메틸 움벨리페릴 카프릴레이트를 80 μL의 반응 버퍼(50 mM Tris, pH 8.0, 0.4% Triton™ X-100 및 0.1% 아라비아 검)와 혼합하여 제조되었다. 형광 여기 및 방출 파장은 각각 355 nm 및 460 nm로 설정되었다. 형광 속도론은 37 ℃에서 2-4 시간 동안 지속적으로 모니터링되었다. 각 샘플의 리페이스 활성은 선형 피팅을 사용하여 경화 속도론의 초기 반응 속도를 계산하여 결정되었고 배경 가수분해를 설명하기 위해 버퍼 단독 반응 속도에 대해 보정되었다. 고유 활성도는 반응 속도를 샘플 단백질 농도로 나누어 결정된다.
단백질 샘플은 0.2 μm 플루오로다인 주사기 필터로 멸균 여과되었고 25x 컨디셔닝 버퍼(10mM 히스티딘 아세테이트 pH 5 중의 20 mg/mL 메티오닌, 1%w/v SR PS20)로 스파이킹되었다. 스파이킹된(spiked) 샘플은 무균 조건에서 에펜도르프 튜브에 분취되고 25 ℃에서 최대 20 일 동안 인큐베이션되었다. 각 시점에서 분취물이 채취되고 유리 지방산 추출이 수행될 때까지 -70 ℃에서 동결되었다.
각 샘플의 유리 지방산은 동위원소 표지된 FFA 내부 표준을 포함하는 아세토니트릴 용액에 의해 추출되었다. 14000 rpm에서 5 분 동안 원심분리 후, 상청액이 유리 삽입물이 있는 HPLC 바이알로 옮겨지고 측정할 때까지 동결되었다. Waters ACQUITY UPLC® BEH300 C18 (1.7 um, 2.1x150 mm) 컬럼이 있는 Waters H-class Bio UPLC 시스템이 FFA 검출을 위해 AB Sciex 6600 질량 분석계와 조합으로 사용되었다. 5 μL의 주입된 샘플로부터 유리 지방산의 분리는 60℃의 컬럼 온도에서 0.3 mL/분의 유량에서 버퍼 A로서 물 중의 5 mM 암모늄 아세테이트 및 0.1% 암모늄 하이드록사이드 및 버퍼 B로서 100% 아세토니트릴을 사용하여 수행되었다. 방법은 0.2 분 동안 70% 버퍼 B로 시작하고, 5.3 분에 걸쳐 100% B까지의 구배가 이어지고 이후 0.1 분 내에 70% B로 되돌아가고 70 % B에서 3.9 분 동안 평형화되었다. 질량 분석계는 -4500 V에서 이온 분무 전압으로 음이온화 모드에서 작동되었다. 소스 온도는 450℃로 설정되었고 TOP 질량 범위는 100-1000 m/z였다. 디클러스터링 전위는 -120 V이었고 충돌 에너지는 -10 V이었다. 선형 범위에서 FFA의 누적이 선형 회귀에 피팅되어 초기 가수분해 속도가 계산되었다.
모든 공정 중 샘플 중의 숙주 세포 단백질은 사내 CHO 단백질 (CHOP) ELISA 분석에 의해 측정되었고 DNA는 사내 qPCR 방법에 의해 정량되었다.
실시예 6
이 실시예는 항체 정제를 위한 다음 두 가지 정제 사이의 비교를 보여주고, 정제 플랫폼은 다음을 포함한다: (1) 120ZB10A 심층 필터를 사용하는 HCCF의 심층 여과에 이어서 단백질 A 크로마토그래피; 또는 (2) EMPHAZE™ AEX 심층 필터를 사용하는 HCCF의 심층 여과에 이어서 단백질 A 크로마토그래피.
세 가지 상이한 항체 모이어티(AM1, AM2, 및 AM3)의 발현을 위해 세 가지 상이한 세포 배양으로부터 수확 세포 배양액(HCCF)이 개별적으로 수집되었다. 120ZB10A 심층 여과 단계가 있는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (1))의 경우, 각각의 HCCF 풀에 별도로 (300 L/m2에서) 120ZB10A 심층 여과가 적용된 다음, 단백질 A 크로마토그래피가 적용되었다. 단백질 A 크로마토그래피 후의 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 FAMS를 사용하여 측정되었고, 그 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. 단백질 A 크로마토그래피 후 분취물에 대해 측정된 고유 FAMS 속도가 도 12에 나타난다. HCCF 풀의 분취물(심층 여과 전)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
EMPHAZE™ AEX 심층 여과 단계가 있는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (2))의 경우, 각각의 HCCF 풀에 별도로 (300 L/m2에서) EMPHAZE™ AEX 심층 여과가 적용된 다음, 단백질 A 크로마토그래피가 적용되었다. 단백질 A 크로마토그래피 후의 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 FAMS를 사용하여 측정되었고, 그 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. 단백질 A 크로마토그래피 후 분취물에 대해 측정된 고유 FAMS 속도가 도 12에 나타난다. HCCF 풀의 분취물(심층 여과 전)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
실시예 7
이 실시예는 항체 정제를 위한 다음 두 가지 정제 플랫폼 사이의 비교를 보여주고, 정제 플랫폼은 다음을 포함한다: (1) HCCF의 단백질 A 크로마토그래피에 이어서 활성탄 (40CR) 여과에 이어서 POROS® 50HS를 사용한 양이온 이온 교환 크로마토그래피; 또는 (2) HCCF의 단백질 A 크로마토그래피에 이어서 X0SP 심층 필터를 사용하는 심층 여과에 이어서 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름을 사용하는 HIC.
세 가지 상이한 항체 모이어티(AM1, AM2, 및 AM4)의 발현을 위해 세 가지 상이한 세포 배양으로부터 수확 세포 배양액(HCCF)이 개별적으로 수집되었다. 심층 여과 단계가 없는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (1))의 경우, 세 가지의 HCCF 샘플에 각각 개별적으로 단백질 A 크로마토그래피를 적용했다. 단백질 A 크로마토그래피 풀은 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 염기를 사용하여 pH를 5.5 ± 0.3으로 조정하여 컨디셔닝된 다음, 컨디셔닝된 풀은 별도로 (300 L/m2에서) 40CR 여과에 이어서 POROS® 50 HS 크로마토그래피를 거쳤다. 40CR 여과 후의 풀의 분취물 및 POROS® 50HS 여과 후의 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 FAMS를 사용하여 측정되었고, 그 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. 40CR 여과 후 풀의 분취물 및 POROS® 50HS 크로마토그래피 후 풀의 분취물에 대해 측정된 고유 FAMS 비율이 도 13 및 도 14에 각각 나타난다. 단백질 A 크로마토그래피 풀의 분취물(40CR 여과 없음)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
X0SP 심층 여과 단계가 있는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (2))의 경우, 세 가지의 HCCF 샘플에 각각 개별적으로 단백질 A 크로마토그래피를 적용했다. 단백질 A 크로마토그래피 풀은 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(Tris) 염기를 사용하여 pH를 5.5 ± 0.3으로 조정하여 컨디셔닝된 다음, 컨디셔닝된 풀은 별도로 (300 L/m2에서) X0SP 여과에 이어서 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피를 사용하는 처리를 거쳤다. X0SP 여과 후의 풀의 분취물 및 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피 후의 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 FAMS를 사용하여 측정되었고, 그 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. X0SP 여과 후 풀의 분취물 및 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피 후 풀의 분취물에 대해 측정된 고유 FAMS 비율이 도 13 및 도 14에 각각 나타난다. 단백질 A 크로마토그래피 풀의 분취물(X0SP 심층 여과 없음)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
실시예 8
이 실시예는 항체 정제를 위한 다음 세 가지 정제 플랫폼 사이의 비교를 보여주고, 정제 플랫폼은 다음을 포함한다: (1) HCCF의 단백질 A 크로마토그래피에 이어서 활성탄 (40CR) 여과에 이어서 Capto Adhere를 사용한 멀티모달 크로마토그래피; (2) HCCF의 단백질 A 크로마토그래피에 이어서 EMPHAZE™ 심층 필터를 사용한 심층 여과에 이어서 Capto Adhere를 사용한 멀티모달 크로마토그래피; 또는 (3) HCCF의 단백질 A 크로마토그래피에 이어서 PDD1 심층 필터를 사용한 심층 여과에 이어서 Capto Adhere를 사용한 멀티모달 크로마토그래피.
세 가지 상이한 항체 모이어티(AM1, AM2, 및 AM4)의 발현을 위해 세 가지 상이한 세포 배양으로부터 수확 세포 배양액(HCCF)이 개별적으로 수집되었다. 심층 여과 단계가 없는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (1))의 경우, 세 가지의 HCCF 샘플에 각각 개별적으로 단백질 A 크로마토그래피를 적용했다. 단백질 A 크로마토그래피 풀은 Tris 염기를 사용하여 pH를 8.0 ± 0.5로 조정하여 컨디셔닝된 다음, 컨디셔닝된 풀은 별도로 (300 L/m2에서) 40CR 여과에 이어서 Capto Adhere 크로마토그래피를 거쳤다. 40CR 여과 후 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 LEAP 분석을 사용하여 측정되었고, 이의 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. 40CR 여과 이후의 풀의 분취물에 대해 측정된 특정 LEAP 속도가 도 15에 나타난다. 단백질 A 크로마토그래피 풀의 분취물(40CR 여과 없음)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
EMPHAZE™ 심층 여과 단계가 있는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (2))의 경우, 세 가지의 HCCF 샘플에 각각 개별적으로 단백질 A 크로마토그래피를 적용했다. 단백질 A 크로마토그래피 풀은 Tris 염기를 사용하여 pH를 8.0 ± 0.5로 조정하여 컨디셔닝된 다음, 컨디셔닝된 풀은 별도로 (300 L/m2에서) EMPHAZE™ 심층 여과에 이어서 Capto Adhere 크로마토그래피를 거쳤다. EMPHAZE™ 심층 여과 후의 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 LEAP 분석을 사용하여 측정되었고, 이의 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. EMPHAZE™ 심층 여과 이후의 풀의 분취물에 대해 측정된 특정 LEAP 속도가 도 15에 나타난다. 단백질 A 크로마토그래피 풀의 분취물(EMPHAZE™ 심층 여과 없음)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
PDD1 심층 여과 단계가 있는 정제 플랫폼(정제 플랫폼 (3))의 경우, 세 가지의 HCCF 샘플에 각각 개별적으로 단백질 A 크로마토그래피를 적용했다. 단백질 A 크로마토그래피 풀은 Tris 염기를 사용하여 pH를 8.0 ± 0.5로 조정하여 컨디셔닝된 다음, 컨디셔닝된 풀은 별도로 (300 L/m2에서) PDD1 심층 여과에 이어서 Capto Adhere 크로마토그래피를 거쳤다. PDD1 심층 여과 후의 풀의 분취물이 수집되었다. 분취물의 폴리소르베이트 가수분해 활성은 LEAP 분석을 사용하여 측정되었고, 이의 방법은 실시예 1의 재료 및 방법 섹션에 더 상세히 개시된다. PDD1 심층 여과 이후의 풀의 분취물에 대해 측정된 특정 LEAP 속도가 도 15에 나타난다. 단백질 A 크로마토그래피 풀의 분취물(PDD1 심층 여과 없음)을 사용하여 대조군 측정값을 얻었다.
실시예 9
이 실시예는 (그 전체가 참조에 의해 본원에 포함된 PCT/EP2019/08614에 개시된 것과 같은) TYRP1 TCB 항체 정제를 위한 워크플로우의 평가 및 비교를 보여주고, 여기서 워크플로우는 여러 상이한 프리-C1 심층 필터를 사용하고 MerckMillipore Millistak+® HC Pro X0SP 필터를 사용하는 프리-C2 여과 단계가 이어진다. 비교된 프리-C1 심층 필터는 화학적으로 정의된 합성 재료를 포함하는 심층 필터(3M™ EMPHAZE™ AEX Hybrid Purifier) 및 수확 정화 심층 필터(ZETA PLUS™ EXT ZB Series, 120ZB)이다. 120ZB 및 EMPHAZE™ 심층 필터는 모두 양으로 하전되고, X0SP 심층 필터는 pH >4.5에서 음으로 하전된다.
실험 워크플로우 및 샘플 명칭의 할당이 도 16에 예시된다. 간략하게, 약 80 NTU의 탁도를 갖고 TYRP1 TCB 항체를 포함하는 무세포 수확 유체가 설명된 실험을 위한 로드 재료로서 사용하기 위해 생물반응기로부터 수집되었다. 단백질 A 크로마토그래피 전에, 무세포 수확 유체의 한 부분이 120ZB 심층 필터를 사용하여 여과되었고 두 번째 부분이 EMPHAZE™ 심층 필터를 사용하여 여과되었다. 이후 두 여과액이 멸균 여과되고 GE Healthcare의MabSelect SuRe™ 매체를 사용하는 단백질 A 크로마토그래피가 적용되었다. 120ZB 심층 필터 워크플로우 및 EMPHAZE™ 심층 필터 워크플로우로부터의 용출액은 각각 1 M TRIS/HCl, pH 9.0를 사용하여 pH 5.5까지 적정되었다. 각각의 워크플로우에 대해, 적정된 용출액이 분취물로 나뉘었고; 한 분취물이 0.2 μm 멸균 필터를 사용하여 멸균 여과되고 참조로서 보관되었고 제2 분취물(약 100 mL 내지 약 120 mL)이 소규모 MerckMillipore Millistak+® HC Pro X0SP 필터(5 cm2 필터 영역)를 사용하여 여과되었다. 120ZB 워크플로우로부터, X0SP 여과로부터의 용출액의 세 개의 분획이 수집되었다. EMPHAZE™ 워크플로우로부터, X0SP 여과로부터의 용출액의 네 개의 분획이 수집되었다. 각각의 X0SP 용출액 분획은 이후에 0.2 μm 멸균 필터를 사용하여 여과되었다.
이후 각각의 생성된 분취물은 실시예 1에 제공된 방법에 따라 LEAP 분석에 의해 분석되었다. LEAP 분석의 비교 결과는 프리-C1 심층 필터 워크플로우가 잘 작동하여 가수분해 활성을 감소시키고, X0SP 필터가 포획 컬럼의 유출물의 가수분해 활성을 현저하게 감소시킴을 나타낸다 (도 17). 120ZB 및 EMPHAZE™ 워크플로우의 비교는 EMPHAZE™ 여과된 재료의 단백질 A 용출액이 120ZB 여과된 단백질 A 용출액과 비교하여 33% 더 적은 가수분해 활성을 가짐을 보여준다 (도 17).
실시예 10
이 실시예는 단백질 A 크로마토그래피 용출액에 대해 수행된 X0SP 심층 여과 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 사용하여 (그 전체가 참조에 의해 본원에 포함된 PCT/EP2019/08614에 개시된 것과 같은) TYRP1 TCB 항체를 포함하는 여러 상이한 HCCF 샘플 정제의 평가 및 비교를 보여준다.
두 가지 상이한 HCCF 샘플이 TYRP1 TCB 항체를 생성하는 세포의 별도 배양으로부터 제조되었다 (CF 238 및 CF 239). 단백질 A 크로마토그래피는 MabSelect SuRe™ 매체를 사용하여 수행되었다. 용출액이 수집되었고 (CF 238 MSS 용출액 및 CF 239 MSS 용출액), 각각 1 M TRIS/HCl, pH 9.0를 사용하여 pH 5.5까지 적정되었고, 이후 X0SP 심층 여과를 적용했다. 구체적으로, 각각 35 L의 CF 238 MSS 용출액 또는 20 L의 CF239 MSS 용출액이, 160 L/m2/h의 유량으로 X0SP 필터(각각 1 m2 또는 0.55 m2)에서 여과되었다. 동시에, CF 238 및 CF 239 HCCF 샘플의 분취물이 각각 단백질 A 크로마토그래피 후에 X0SP 심층 여과 단계를 포함하지 않는 참조 정제 플랫폼을 사용하여 정제되었다.
각각의 생성된 용출액의 리페이스 활성이 실시예 1에서 논의된 바와 같이 수행되었다. CF 238 및 CF 239 모두에 대해 참조 및 정제 플랫폼을 포함하는 X0SP 심층 필터로부터 수득된 리페이스 활성의 결과가 도 18A (CF 238) 및 18B (CF 239)에 나타난다. 도 18A 및 18B에 도시된 바와 같이, 가수분해 활성은 정제 플랫폼을 포함하는 X0SP로부터의 용출액에서 현저하게 감소된다.
실시예 11
이 실시예는 컨디셔닝된 친화성 크로마토그래피 (단백질 A 크로마토그래피) 용출액의 여과를 위한 여러 상이한 심층 여과 단계를 포함하는 넷의 정제 플랫폼을 사용하는 프라시네주맙 정제의 비교를 나타낸다. 구체적으로, 네 가지 상이한 심층 여과 단계는 다음을 기반으로 했다: (i) PDD1; (ii) X0SP; (iii) PDD1에 이어서 X0SP; 및 (iv) X0SP에 이어서 PDD1.
친화성 크로마토그래피 용출액이 2 M Tris를 사용하여 pH 6.0 +/- 0.2로 컨디셔닝되었다. PDD1 및 XS0P 필터는 적어도 220 ml의 상응하는 버퍼(25 mM Tris/아세테이트)로 평형화되었다. 두 필터 모두 < 200 L/m2로 로딩되었다. PDD1 및 XS0P 필터의 유량은 11 ml/분이었다. 압력은 실험 기간 동안 제어되었다. 심층 필터로부터의 용출액은 100 L/m2 및 200 L/m2 후에 분획화되었다.
참조 접근법(심층 여과 없음; 로드)의 단백질 A 크로마토그래피 용출액 중의 리페이스 활성 및 HCP 양은 네 가지 정제 플랫폼의 각 심층 여과 단계 후에 수집된 용출액과 비교되었다. 리페이스 활성 분석은 실시예 1에 따라 수행되었다. 심층 필터로부터 수득된 분획 중의 리페이스 활성의 결과가 도 19A에 나타난다. HCP 측정의 결과는 도 19B에 나타난다.
Claims (112)
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 포획 단계; 및
(b) 심층 여과 단계,
심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용하는 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제1항에 있어서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도인 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 포획 단계; 및
(b) 심층 여과 단계,
심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제4항에 있어서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있는 방법.
- 제4항 또는 제5항에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 포획 단계; 및
(b) 심층 여과 단계,
심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제7항에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는 적어도 약 5%인 방법.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 샘플로부터 표적의 정제를 위한 것이고, 샘플은 표적 및 하나 이상의 숙주 세포 불순물을 포함하는 방법.
- 제9항에 있어서, 표적은 폴리펩타이드를 포함하는 방법.
- 제9항 또는 제10항에 있어서, 숙주 세포 불순물은 숙주 세포 단백질인 방법.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 심층 여과 단계는 포획 단계 전에 수행되거나, 심층 여과 단계는 포획 단계 후에 수행되는 방법.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제13항에 있어서, 심층 필터는 규조토 조성물, 실리카 조성물, 셀룰로스 섬유, 중합체 섬유, 응집성 수지, 및 회분 조성물 중 하나 이상을 포함하는 기재를 포함하는 방법.
- 제14항에 있어서, 심층 필터의 기재의 적어도 일부는 표면 개질을 포함하는 방법.
- 제15항에 있어서, 표면 개질은 사차 아민 표면 개질, 양이온성 표면 개질, 및 음이온성 표면 개질 중 하나 이상인 방법.
- 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 심층 필터는 EMPHAZE™ 심층 필터, PDD1 심층 필터, ZETA PLUS™ 120ZA 심층 필터, 및 ZETA PLUS™ 120ZB 심층 필터로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 포획 단계는 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제18항에 있어서, 친화성 크로마토그래피는 단백질 A 크로마토그래피, 단백질 G 크로마토그래피, 단백질 A/G 크로마토그래피, 단백질 L 크로마토그래피, FcXL 크로마토그래피, 단백질 XL 크로마토그래피, 카파 크로마토그래피, 및 카파XL 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 바이러스 불활성화 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 불활성화 단계는 포획 단계 후에 수행되는 방법.
- 제20항에 있어서, 심층 여과 단계는 바이러스 불활성화 단계 후에 수행되는 방법.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 포획 단계 전에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함하고, 하나 이상의 정제 단계는 포획 단계, 심층 여과 단계, 및 존재하는 경우 바이러스 불활성화 단계 후에 수행되는 방법.
- 제23항에 있어서, 하나 이상의 정제 단계는 폴리펩타이드 정제 단계를 포함하는 방법.
- 제23항 또는 제24항에 있어서, 정제 플랫폼은 하나 이상의 정제 단계 전, 사이 또는 후에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 추가로 포함하고, UFDF 단계는 하나 이상의 정제 단계 후에 수행되는 방법.
- 제26항에 있어서, 정제 플랫폼은 UFDF 단계 전 또는 후에 수행되는 또 다른 심층 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 정제 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제28항에 있어서, HIC 정제 단계는, 존재하는 경우 하나 이상의 정제 단계 전, 사이 또는 후에 수행되는 방법.
- 제28항에 있어서, HIC 정제 단계는 하나 이상의 정제 단계 후 및 존재하는 경우 UFDF 단계 전에 수행되는 방법.
- 제26항 또는 제27항에 있어서, 정제 플랫폼은 pH 유지 단계를 추가로 포함하고, pH 유지 단계는 존재하는 경우 하나 이상의 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 방법.
- 제31항에 있어서, 정제 플랫폼은 바이러스 여과 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 여과 단계는 pH 유지 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 방법.
- 제32항에 있어서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제28항에 있어서, HIC 정제 단계는 HIC 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제23항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 정제 단계는 각각 독립적으로 이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피, 양이온 교환 크로마토그래피, 소수성 전하 유도 크로마토그래피, 세라믹 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제23항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 정제 단계는 각각 독립적으로 DEAE, DMAE, TMAE, QAE, SPSFF, SPXL, QSFF, MEP-Hypercel™, Capto MMC, 및 Capto Adhere로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 하기 순서대로 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계;
(b) 바이러스 불활성화 단계;
(c) 제2 폴리펩타이드 정제 단계;
(d) 제3 폴리펩타이드 정제 단계; 및
(e) 한외여과/정용여과(UFDF) 단계,
여기서 정제 플랫폼은 다음 중 하나 이상에서 수행되는 심층 여과 단계를 추가로 포함함:
(i) 포획 단계 전;
(ii) 포획 단계 후 및 바이러스 불활성화 단계 전;
(iii) 바이러스 불활성화 단계 후 및 제2 폴리펩타이드 정제 단계 전;
(iv) 제2 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 제3 폴리펩타이드 정제 단계 전; 또는
(v) 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 한외여과/ 정용여과(UFDF) 단계 전;
심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용하는 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제37항에 있어서, 정제 플랫폼은, 하기 순서로, pH 유지 단계 및 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 UFDF 단계 전에 수행되는 바이러스 여과 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제38항에 있어서, 바이러스 여과 단계는 바이러스 필터를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 다음 중 하나 이상에서 수행되는 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC) 정제 단계를 추가로 포함하는 방법:
(i) 제3 폴리펩타이드 정제 단계 후 및 pH 유지 단계 전;
(ii) pH 유지 단계 후 및 바이러스 여과 단계 전; 또는
(iii) 바이러스 여과 단계 후 및 UFDF 단계 전. - 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함하는 방법.
- 제43항에 있어서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플 처리 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 세포 배양 샘플이거나 세포 배양 샘플로부터 유래되는 방법.
- 제46항에 있어서, 세포 배양 샘플은 숙주 세포를 포함하고, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 대장균 세포인 방법.
- 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 숙주 세포 또는 이로부터 유래하는 성분을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함하고, 하나 이상의 숙주 세포 단백질 중 하나는 가수분해 효소인 방법.
- 제49항에 있어서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스인 방법.
- 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 표적을 포함하고, 표적은 항체 모이어티인 방법.
- 제51항에 있어서, 항체 모이어티는 단일클론 항체인 방법.
- 제51항 또는 제52항에 있어서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 방법.
- 제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항의 방법으로부터 수득된 약제학적 조성물.
- 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 조성물의 저장 수명은 24 개월 이상인 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 조성물은 감소된 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도를 가지고, 조성물의 저장 수명은 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련된 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 저장 수명에 비해 연장되고, 저장 수명은 상기 문서에 표시된 저장 수명에 비해 적어도 6 개월 연장되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 항체 모이어티를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 제제화된 항체 모이어티 조성물은 감소된 폴리소르베이트의 분해를 가지고, 분해는 제제화된 항체 모이어티 조성물과 관련된 보건 당국에 제출된 문서에 표시된 분해에 비해 적어도 약 20% 감소되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 항체 모이어티 및 폴리소르베이트를 포함하는 제제화된 항체 모이어티 조성물로서, 폴리소르베이트는 액체 조성물의 저장 동안 연간 20% 이하 분해되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 제57항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 단일클론 항체인 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 제57항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 제57항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 제57항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 제57항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도는 적어도 약 20% 감소되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 제57항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제화된 항체 모이어티 조성물.
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 순서대로 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및
(b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계,
여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함함,
여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 포획 단계 전; 포획 단계 후; 또는 포획 단계 후 및 정제 단계 전 중 임의의 하나 이상에서 수행됨,
여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함함, 및
여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함:
(i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유;
(ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및
(iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트,
하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용하는 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제67항에 있어서, 효소적 가수분해 활성 속도는 효소적 폴리소르베이트 가수분해 활성 속도인 방법.
- 제67항 또는 제68항에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 순서대로 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및
(b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계,
여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함함,
여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 포획 단계 전; 포획 단계 후 및 정제 단계 전; 또는 정제 단계 후 중 임의의 하나 이상에서 수행됨,
여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함함, 및
여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함:
(i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유;
(ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및
(iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트,
하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제70항에 있어서, 하나 이상의 가수분해 효소는 폴리소르베이트를 가수분해할 수 있는 방법.
- 제70항 또는 제71항에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준의 상대적 감소는 적어도 약 20%인 방법.
- 정제 플랫폼으로부터 수득된 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 샘플에 순서대로 다음 단계를 포함하는 정제 플랫폼을 적용하여:
(a) 친화성 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계; 및
(b) HIC, 양이온 교환 크로마토그래피, 및 멀티모달 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택된 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 정제 단계,
여기서 정제 플랫폼은 하나 이상의 심층 여과 단계를 추가로 포함함,
여기서 하나 이상의 심층 여과 단계는 포획 단계 전; 포획 단계 후; 또는 포획 단계 후 및 정제 단계 전 중 임의의 하나 이상에서 수행됨,
여기서 각각의 심층 여과 단계는 심층 필터를 통한 처리를 포함함, 및
여기서 심층 필터는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 재료를 포함함:
(i) 실리카 및 폴리아크릴 섬유;
(ii) 하이드로겔 Q (사차 아민)-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막; 및
(iii) 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트,
하나 이상의 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해를 감소시키는 것을 포함하는 방법. - 제73항에 있어서, 심층 여과 단계 없이 동일한 정제 플랫폼을 사용한 샘플의 정제와 비교하여 조성물 중의 폴리소르베이트의 분해의 상대적 감소는 적어도 약 5%인 방법.
- 제67항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 실리카 필터 보조제 및 폴리아크릴 섬유 펄프를 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 재료 및 9-구역 미세다공성 막을 포함하는 네 층을 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 셀룰로스 섬유, 규조토, 및 펄라이트를 포함하는 심층 필터는 두 층을 포함하고, 각각의 층은 셀룰로스 필터 매트릭스를 포함하고, 셀룰로스 필터 매트릭스는 규조토 또는 펄라이트 중 하나 이상을 포함하는 필터 보조제로 함침되고, 각 층은 수지 결합제를 추가로 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 선택되는 방법.
- 제78항에 있어서, 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 5 내지 약 6.5일 때 선택되는 방법.
- 제78항에 있어서, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터는 심층 필터에 들어가는 용액이 약 7 내지 약 8.5일 때 선택되는 방법.
- 제67항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 심층 필터에 들어가는 용액의 pH에 기초하여 심층 필터를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은, 순서대로, 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 심층 여과 단계, 단백질 A 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 포획 단계, 및 정제 단계를 포함하는 방법.
- 제82항에 있어서, 정제 단계는 HIC를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제83항에 있어서, HIC는 페닐 SEPHAROSE® 고속 흐름 크로마토그래피인 방법.
- 제82항에 있어서, 정제 단계는 양이온 교환 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제85항에 있어서, 양이온 교환 크로마토그래피는 POROS® 50HS인 방법.
- 제67항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 실리카 및 폴리아크릴 섬유를 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생하는 방법.
- 제82항에 있어서, 정제 단계는 멀티모달 크로마토그래피를 통한 처리를 포함하는 방법.
- 제88항에 있어서, 멀티모달 크로마토그래피는 Capto Adhere인 방법.
- 제88항 또는 제89항에 있어서, 정제 플랫폼은 하이드로겔 Q-작용기화된 부직 매체 및 다중 구역 미세다공성 막을 포함하는 심층 필터를 통한 처리를 포함하는 제2 심층 여과 단계를 추가로 포함하고, 제2 심층 여과 단계는 포획 단계 후 및 정제 단계 전에 발생하는 방법.
- 제67항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 샘플로부터 표적의 정제를 위한 것이고, 샘플은 표적 및 하나 이상의 숙주 세포 불순물을 포함하는 방법.
- 제91항에 있어서, 표적은 폴리펩타이드를 포함하는 방법.
- 제91항 또는 제92항에 있어서, 숙주 세포 불순물은 숙주 세포 단백질인 방법.
- 제67항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 바이러스 불활성화 단계를 추가로 포함하고, 바이러스 불활성화 단계는 포획 단계 후에 수행되는 방법.
- 제94항에 있어서, 하나 이상의 심층 여과 단계는 바이러스 불활성화 단계 후 수행되는 방법.
- 제67항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 플랫폼은 한외여과/정용여과(UFDF) 단계를 추가로 포함하고, UFDF 단계는 정제 단계 후에 수행되는 방법.
- 제67항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 효소적 가수분해 활성 속도를 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중의 하나 이상의 가수분해 효소의 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 폴리소르베이트를 포함하는 방법.
- 제99항에 있어서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제67항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플 처리 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 세포 배양 샘플이거나 세포 배양 샘플로부터 유래되는 방법.
- 제102항에 있어서, 세포 배양 샘플은 숙주 세포를 포함하고, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 대장균 세포인 방법.
- 제67항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 숙주 세포 또는 이로부터 유래하는 성분을 포함하는 방법.
- 제67항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 하나 이상의 숙주 세포 단백질을 포함하고, 하나 이상의 숙주 세포 단백질 중 하나는 가수분해 효소인 방법.
- 제105항에 있어서, 가수분해 효소는 리페이스, 에스터레이스, 티오에스터레이스, 포스포리페이스, 또는 세라미데이스인 방법.
- 제67항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 표적을 포함하고, 표적은 항체 모이어티인 방법.
- 제107항에 있어서, 항체 모이어티는 단일클론 항체인 방법.
- 제107항 또는 제108항에 있어서, 항체 모이어티는 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 방법.
- 제107항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 항-CD20 항체, 항-CD40 항체, 항-HER2 항체, 항-IL6 항체, 항-IgE 항체, 항-IL13 항체, 항-TIGIT 항체, 항-PD-L1 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-VEGF-A/ANG2 항체, 항-CD79b 항체, 항-ST2 항체, 항-인자 D 항체, 항-인자 IX 항체, 항-인자 X 항체, 항-아베타 항체, 항-타우 항체, 항-CEA 항체, 항-CEA/CD3 항체, 항-CD20/CD3 항체, 항-FcRH5/CD3 항체, 항-Her2/CD3 항체, 항-FGFR1/KLB 항체, FAP-4-1 BBL 융합 단백질, FAP-IL2v 융합 단백질, 및 TYRP1 TCB 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제107항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티는 오크렐리주맙, 퍼투주맙, 트라스투주맙, 토실리주맙, 파리시맙, 폴라투주맙, 간테네루맙, 시비사타맙, 크레네주맙, 모수네투주맙, 티라골루맙, 베바시주맙, 리툭시맙, 아테졸리주맙, 오비누투주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 오말리주맙 라니비주맙, 에미시주맙, 셀리크렐루맙, 프라시네주맙, RO6874281, 및 RO7122290로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
- 제67항 내지 제111항 중 어느 한 항의 방법으로부터 수득된 약제학적 조성물.
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