JP2022531317A - 精製プラットフォームから得られた組成物中の酵素加水分解活性速度を低下させる方法 - Google Patents

精製プラットフォームから得られた組成物中の酵素加水分解活性速度を低下させる方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、深層フィルタ工程及び／又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）工程を含む精製プラットフォームを提供する。本明細書に記載の精製プラットフォーム及びそれから得られる組成物、例えば医薬組成物を使用する方法も本明細書に開示される。【選択図】なし

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０２０年１月１５日出願の米国仮出願第６２／９６１，６０９号及び２０１９年５月３日出願の米国仮出願第６２／８４３，２６１号の利益を主張するものであり、これらは各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示は、深層濾過工程及び／又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）工程を含む精製プラットフォームを提供する。本明細書に記載の精製プラットフォーム及びそれから得られる組成物を使用する方法も本明細書に開示される。
宿主細胞培養物から産生された抗体などの生物治療製品は、宿主細胞タンパク質、並びに、例えば、製品品質及び治療有効性に影響を及ぼし得る他の不純物を除去するために精製を必要とする。現在の精製方法は、宿主細胞加水分解酵素を含む全ての宿主細胞タンパク質及び不純物を除去するわけではない。したがって、宿主細胞タンパク質及び精製標的と共に残存する不純物は、精製標的自体並びに他の添加剤、例えば界面活性剤などの製剤目的のために添加される成分に影響を及ぼし得る。したがって、薬学的使用のために宿主細胞培養物から産生された生物療法製品を精製するための改善された方法が必要とされている。
特許出願及び刊行物を含む本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
一態様では、精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、（ａ）捕捉工程、及び（ｂ）深層濾過工程を含む前記精製プラットフォームに供することを含み、それにより、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用する試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、酵素ポリソルベート加水分解活性速度である。いくつかの実施形態では、深層濾過工程なしで同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物の酵素加水分解活性速度の相対的減少は、少なくとも約２０％である。
別の態様では、精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を、（ａ）捕捉工程、及び（ｂ）深層濾過工程を含む前記精製プラットフォームに供することを含み、それにより、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中の加水分解酵素のレベルを低下させる、方法が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の加水分解酵素は、ポリソルベートを加水分解することができる。いくつかの実施形態では、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下は、少なくとも約２０％である。
別の態様では、精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減させるための方法であって、試料を、（ａ）捕捉工程、及び（ｂ）深層濾過工程を含む前記精製プラットフォームに供することを含み、それにより、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中のポリソルベートの分解を低減させる、方法が提供される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中のポリソルベートの分解の相対的低減は、少なくとも約５％である。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、試料から標的を精製するためのものであり、試料は標的及び１つ以上の宿主細胞不純物を含む。いくつかの実施形態では、標的は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞不純物は、宿主細胞タンパク質である。
いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施されるか、又は深層濾過工程は、捕捉工程の後に実施される。
いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、深層フィルタによる処理を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、珪藻土組成物、シリカ組成物、セルロース繊維、ポリマー繊維、凝集性樹脂、及び灰組成物のうちの１つ以上を含む基材を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタの基材の少なくとも一部は、表面改質を含む。いくつかの実施形態では、表面改質は、第四級アミン表面改質、カチオン性表面改質、及びアニオン性表面改質の１つ以上である。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタ、Ｘ０ＳＰ深層フィルタ、ＰＤＤ１深層フィルタ、ＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＡ深層フィルタ、及びＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＢ深層フィルタからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、捕捉工程はアフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む。いくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィーは、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィー及びカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ウイルス不活化工程を更に含み、ウイルス不活化工程は、捕捉工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ウイルス不活化工程の後に実施される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される別の深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程を更に含み、１つ以上の精製工程は、捕捉工程、深層濾過工程、及び存在する場合はウイルス不活化工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、１つ以上の精製工程はポリペプチド精製工程を含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の前、間、又は後に実施される別の深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程を更に含み、ＵＦＤＦ工程は、１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＵＦＤＦ工程の前又は後に実施される別の深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）精製工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ精製工程は、存在する場合、１つ以上の精製工程の前、間、又は後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ精製工程は、１つ以上の精製工程の後、存在する場合はＵＦＤＦ工程の前に実施される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームはｐＨ保持工程を更に含み、ｐＨ保持工程は、存在する場合、１つ以上の精製工程の後、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ウイルス濾過工程を更に含み、ウイルス濾過工程は、ｐＨ保持工程の後かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ウイルス濾過工程は、ウイルスフィルタによる処理を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＩＣ精製工程は、ＨＩＣフィルタによる処理を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の精製工程は、それぞれ独立して、イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の精製工程は、それぞれ独立して、以下からなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む：ＤＥＡＥ、ＤＭＡＥ、ＴＭＡＥ、ＱＡＥ、ＳＰＳＦＦ、ＳＰＸＬ、ＱＳＦＦ、ＭＥＰ－Ｈｙｐｅｒｃｅｌ（商標）、Ｃａｐｔｏ ＭＭＣ、及びＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅ。
別の態様では、精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｂ）ウイルス不活化工程、（ｃ）第２のポリペプチド精製工程、（ｄ）第３のポリペプチド精製工程、及び（ｅ）限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが、（ｉ）捕捉工程の前、（ｉｉ）捕捉工程の後で、かつウイルス不活化工程の前、（ｉｉｉ）ウイルス不活化工程の後で、かつ第２のポリペプチド精製工程の前、（ｉｖ）第２のポリペプチド精製工程の後で、かつ第３のポリペプチド精製工程の前、又は（ｖ）第３のポリペプチド精製工程の後で、かつ限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程の前、の１つ以上で実施される深層濾過工程を更に含み、それにより、深層濾過工程なしで同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、以下の順序で、第３のポリペプチド精製工程の後及びＵＦＤＦ工程の前に実施されるｐＨ保持工程及びウイルス濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ウイルス濾過工程は、ウイルスフィルタによる処理を含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、以下の１つ以上で実施される疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）精製工程を更に含む：（ｉ）第３のポリペプチド精製工程の後、ｐＨ保持工程の前、（ｉｉ）ｐＨ保持工程後かつウイルス濾過工程の前、又は（ｉｉｉ）ウイルス濾過工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前。
いくつかの実施形態では、本方法は、組成物の酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む。
いくつかの実施形態では、本方法は、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む。
いくつかの実施形態では、組成物はポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本方法は、試料処理工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、試料は、細胞培養試料であるか、又は細胞培養試料に由来する。いくつかの実施形態では、細胞培養試料は宿主細胞を含み、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は大腸菌細胞である。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞又はそれに由来する成分を含む。いくつかの実施形態では、試料は、１つ以上の宿主細胞タンパク質を含み、１つ以上の宿主細胞タンパク質のうちの１つは加水分解酵素である。
いくつかの実施形態では、加水分解酵素は、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである。
いくつかの実施形態では、試料は標的を含み、標的は抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。
別の態様では、本明細書に記載の方法のいずれか１つから得られる医薬組成物が提供される。
別の態様では、ポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物であって、ポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、組成物の貯蔵寿命が２４ヶ月を超える、製剤化された抗体部分組成物が提供される。
別の態様では、抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物であって、組成物はポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、組成物の貯蔵寿命が、製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示された貯蔵寿命と比較して延長され、貯蔵寿命が、上記文書に示された貯蔵寿命と比較して少なくとも６ヶ月延長される、製剤化された抗体部分組成物が提供される。
別の態様では、抗体部分を含む製剤化された抗体部分組成物であって、製剤化された抗体部分組成物はポリソルベートの分解が低下しており、分解が、製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示された分解と比較して少なくとも約２０％低下している、製剤化された抗体部分組成物が提供される。
別の態様では、抗体部分とポリソルベートとを含む製剤化された抗体部分組成物であって、ポリソルベートが、液体組成物の貯蔵中に年間２０％以下分解される、製剤化された抗体部分組成物が提供される。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分は、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物のポリソルベート加水分解活性速度は、少なくとも約２０％低下する。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
別の態様では、精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに（ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが１つ以上の深層濾過工程を更に含み、１つ以上の深層濾過工程が、捕捉工程の前、捕捉工程の後、又は捕捉工程の後で、かつ精製工程の前のいずれか１つ以上において実施され、各深層濾過工程が深層フィルタによる処理を含み、深層フィルタが、（ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、（ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに（ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトからなる群から選択される材料を含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度が低下する、方法が提供される。いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、酵素ポリソルベート加水分解活性速度である。いくつかの実施形態では、深層濾過工程なしで同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物の酵素加水分解活性速度の相対的減少は、少なくとも約２０％である。
別の態様では、精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに（ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが１つ以上の深層濾過工程を更に含み、１つ以上の深層濾過工程が、捕捉工程の前、捕捉工程の後で精製工程の前、又は精製工程の後のいずれか１つ以上において実施され、各深層濾過工程が深層フィルタによる処理を含み、深層フィルタが、（ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、（ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに（ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトからなる群から選択される材料を含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の１つ以上の加水分解酵素のレベルが低下する、方法が提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の加水分解酵素は、ポリソルベートを加水分解することができる。いくつかの実施形態では、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下は、少なくとも約２０％である。
別の態様では、精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減させるための方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに（ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが１つ以上の深層濾過工程を更に含み、１つ以上の深層濾過工程が、捕捉工程の前、捕捉工程の後、又は捕捉工程の後で、かつ精製工程の前のいずれか１つ以上において実施され、各深層濾過工程が深層フィルタによる処理を含み、深層フィルタが、（ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、（ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに（ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトからなる群から選択される材料を含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中のポリソルベートの分解を低減させる、方法が提供される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中のポリソルベートの分解の相対的低減は、少なくとも約５％である。
いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタは、シリカ濾過助剤及びポリアクリル系繊維パルプを含む。
いくつかの実施形態では、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタは、ヒドロゲルＱ官能化不織布材料及び９ゾーン微多孔膜を含む４つの層を含む。
いくつかの実施形態では、セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトを含む深層フィルタは、２つの層を含み、各層はセルロースフィルタマトリックスを含み、セルロースフィルタマトリックスは、珪藻土又はパーライトの１つ以上を含む濾過助剤で含浸され、各層は樹脂バインダーを更に含む。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて選択される。いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約７～約８．５である場合に選択される。いくつかの実施形態では、本方法は、深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて深層フィルタを選択する工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程を順に含み、捕捉工程はプロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含み、精製工程を含む。
いくつかの実施形態では、精製工程は、ＨＩＣによる処理を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣは、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーである。
いくつかの実施形態では、精製工程は陽イオン交換クロマトグラフィーによる処理を含む。いくつかの実施形態では、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳである。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程を更に含み、第２の深層濾過工程は、捕捉工程の後で精製工程の前に実施される。
いくつかの実施形態では、精製工程は、マルチモーダルクロマトグラフィーによる処理を含む。いくつかの実施形態では、マルチモーダルクロマトグラフィーはＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅである。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程を更に含み、第２の深層濾過工程は、捕捉工程の後で精製工程の前に実施される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、試料から標的を精製するためのものであり、試料は標的及び１つ以上の宿主細胞不純物を含む。いくつかの実施形態では、標的は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞不純物は、宿主細胞タンパク質である。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ウイルス不活化工程を更に含み、ウイルス不活化工程は、捕捉工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、１つ以上の深層濾過工程は、ウイルス不活化工程の後に実施される。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程を更に含み、ＵＦＤＦ工程は精製工程の後に実施される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、組成物の酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む。
いくつかの実施形態では、組成物はポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、試料処理工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、試料は、細胞培養試料であるか、又は細胞培養試料に由来する。いくつかの実施形態では、細胞培養試料は宿主細胞を含み、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は大腸菌細胞である。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞又はそれに由来する成分を含む。
いくつかの実施形態では、試料は、１つ以上の宿主細胞タンパク質を含み、１つ以上の宿主細胞タンパク質のうちの１つは加水分解酵素である。いくつかの実施形態では、加水分解酵素は、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである。いくつかの実施形態では、試料は標的を含み、標的は抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。
別の態様では、本明細書に記載の方法のいずれかから得られる医薬組成物が提供される。
当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲及び趣旨内で可能であることを認識するだろう。本開示は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これらの実施例は、本開示の範囲又は趣旨を、そこに記載されている特定の手順に限定するものと解釈されるべきではない。
精製プラットフォーム１００の例示的な工程を示す図である。 精製プラットフォームの工程の例示的な選択肢を示す図である。
ＦＡＭＳアッセイを使用して精製プラットフォームから得られた組成物中で測定された遊離脂肪酸の量の棒グラフを示す図である。
リパーゼ活性アッセイを使用して精製プラットフォームから得られた組成物で測定された加水分解活性の棒グラフを示す図である。
ＦＡＭＳアッセイを使用して精製プラットフォームから得られた組成物中で測定された遊離脂肪酸の量の棒グラフを示す図である。
ファリシマブの精製の選択肢の概略図を示す。
ＰＤＤ１フィルタでの濾過前（図６Ａ）のファリシマブについてＦｃＸＬ溶出液中で測定したＰＳ２０加水分解活性の棒グラフを示す図である。 ＰＤＤ１フィルタでの濾過後（図６Ｂ）のファリシマブについてＦｃＸＬ溶出液中で測定したＰＳ２０加水分解活性の棒グラフを示す図である。
ＦＡＭＳアッセイを使用して精製プラットフォームから得られた組成物中で測定された遊離脂肪酸の量の棒グラフを示す図である。
深層フィルタを用いた濾過後のプロテインＡ溶出液で測定された加水分解活性の棒グラフを示す図である。 深層フィルタを用いた濾過後のプロテインＡ溶出液で測定された加水分解活性の棒グラフを示す図である。
ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタ清澄化後のプロテインＡ溶出液のＣＨＯＰ及びポリソルベート分解活性の相対レベルを示す図である。
異なる処理量でＸ０ＳＰ深層フィルタ（ｐＨ５．５）から得られた組成物のポリソルベート分解の比活性を示す図である。
ｐＨ５．５のオクレリズマブについて、異なる処理量でのポリソルベート分解の比活性を示す図である。 ｐＨ５．５のセリクレルマブについて、異なる処理量でのポリソルベート分解の比活性を示す図である。 ｐＨ６．５のトシリズマブについて、異なる処理量でのポリソルベート分解の比活性を示す図である。
精製プラットフォームから得られた組成物の特定のＦＡＭＳ率の棒グラフを示す図である。
精製プラットフォームから得られた組成物の特定のＦＡＭＳ率の棒グラフを示す図である。
精製プラットフォームから得られた組成物の特定のＦＡＭＳ率の棒グラフを示す図である。
精製プラットフォームから得られた組成物の特定のＬＥＡＰ率の棒グラフを示す図である。
精製ワークフローの概略図を示す図である。
ＬＥＡＰアッセイを用いて測定した、精製プラットフォームから得られた組成物の平均変換率の棒グラフを示す図である。
リパーゼ活性アッセイを使用して測定した、精製プラットフォームから得られた組成物の加水分解活性の棒グラフを示す図である。 リパーゼ活性アッセイを使用して測定した、精製プラットフォームから得られた組成物の加水分解活性の棒グラフを示す図である。図１８Ａは、ＣＦ２３８から得られた結果を示す。図１８Ｂは、ＣＦ２３９から得られた結果を示す。
ＬＥＡＰアッセイを用いて測定した、精製プラットフォームから得られた組成物の平均変換率の棒グラフを示す図である。 リパーゼ活性アッセイを使用して測定した、精製プラットフォームから得られた組成物の加水分解活性の棒グラフを示す図である。
本出願は、いくつかの態様では、標的を含む試料から標的を精製する方法であって、試料を、１つ以上の深層フィルタ工程及び／又は１つ以上の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）工程を含む本明細書に開示される精製プラットフォームに供する工程を含む方法を提供する。
本開示は、一部には、宿主細胞培養液（ＨＣＣＦ）及び／又はアフィニティクロマトグラフィー溶出液に対して実施される深層フィルタ工程などの１つ以上の深層フィルタ工程を含む精製プラットフォームが、そこから得られる組成物の酵素加水分解活性速度を低下させるという予想外の知見に基づく。さらに、本開示は、１つ以上のＨＩＣ工程を含む精製プラットフォームが、そこから得られる組成物の酵素加水分解活性速度を低下させるという予想外の発見、及び深層濾過工程とＨＩＣ工程の両方を含む精製プラットフォームが、そこから得られる組成物の酵素加水分解活性速度をさらに低下させ得るという予想外の発見に部分的に基づく。
本開示の範囲から逸脱することなく、本明細書に記載の実施態様の形態及び詳細の変更を行うことができることも当業者には理解されよう。さらに、様々な実施態様を参照して様々な利点、態様、及び目的を説明したが、本開示の範囲は、そのような利点、態様、及び目的を参照することによって限定されるべきではない。
定義
本明細書を解釈する目的で、以下の定義が適用され、適切な場合にはいつでも、単数形で使用される用語は、複数形も含み、その逆に、複数形で使用される用語は、単数形も含む。以下に記載されるいずれかの定義が、参照により本明細書に組み込まれているいずれかの文献と矛盾する場合には、以下に記載される定義が優先するものとする。
「抗体部分」という用語は、全長抗体及びその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、完全長抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。両方の鎖の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変なループを含む（ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体及び抗原結合断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９；Ｋａｂａｔ １９８７；Ｋａｂａｔ １９９１）の慣例によって定義又は同定され得る。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存されており、超可変ループを支持するための足場を形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として公知の隣接するストレッチの間に介在する。重鎖及び軽鎖の定常領域は抗原結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭであり、それぞれα、δ、ε、γ及びμ重鎖の存在を特徴とする。主要な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）、又はＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分けられる。いくつかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、半合成抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分はダイアボディである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、融合タンパク質に連結される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、インターロイキンなどの免疫刺激タンパク質に結合している。いくつかの実施形態では、抗体部分は、血液脳関門を通過する侵入を促進するタンパク質に連結される。
本明細書で使用される「抗原結合断片」という用語は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成された多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、１つ以上の異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体由来の１つ以上のＣＤＲを含み得る。
「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である抗体を指し、並びにそれらが所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片を含む（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１～６８５５（１９８４）を参照されたい）。
「多重特異性抗体」という用語は、本明細書で使用するとき、少なくとも２つの異なる部位、すなわち、異なる抗原上の異なるエピトープ又は同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有するモノクローナル抗体を指す。特定の態様では、多重特異性抗体は２つの結合特異性を有する（二重特異性抗体）。ある特定の態様において、多重特異性抗体は３つ以上の結合特異性を有する。多重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
抗体又は抗体部分に関して「半合成」という用語は、抗体又は抗体部分が１つ以上の天然に存在する配列及び１つ以上の非天然に存在する（すなわち、合成）配列を有することを意味する。
「Ｆｖ」とは、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、かつ抗原結合特異性を抗体に与える６つの超可変ループ（重鎖及び軽鎖から各３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的なＣＤＲを３つのみ含むＦｖの半分）でさえも、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識してそれに結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖに関する概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
「ダイアボディ」という用語は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間の対合が達成され、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片をもたらすように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にｓｃＦｖ断片（前段落を参照のこと）を短いリンカー（約５～１０個の残基）で構築することによって調製された小さい抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「交差」ｓｃＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第９３／１１１６１号、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）に更に詳述されている。
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態とは、非ヒト抗体に由来する配列を最小限含むキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の抗体特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾を行い、抗体の性能をさらに改良する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのうちの実質的に全てを含み、超可変ループのうちの全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲのうちの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体はまた、場合によっては、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことになる。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２～５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３～３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３～５９６（１９９２）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上の深層濾過工程を含む。深層濾過工程は、深層フィルタによる処理を含むクロマトグラフィー技術である。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、細胞成分及び残屑などの試料の一部を保持することができる多孔質濾過媒体を含み、濾過は、例えば、フィルタ材料の深度内で実施される。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、合成材料、非合成材料、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、珪藻土組成物、シリカ組成物、セルロース繊維、ポリマー繊維、凝集性樹脂、及び灰組成物のうちの１つ以上を含む基材を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタの基材の少なくとも一部は、表面改質を含む。いくつかの実施形態では、表面改質は、第四級アミン表面改質、カチオン性表面改質、及びアニオン性表面改質の１つ以上である。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタ（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ深層フィルタなど）、Ｘ０ＳＰ深層フィルタ、ＰＤＤ１深層フィルタ、ＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＡ深層フィルタ、及びＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＢ深層フィルタからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは２つの層を含み、各層はセルロースフィルタマトリックスを含み、セルロースフィルタマトリックスは、珪藻土又はパーライトの１つ以上を含む濾過助剤で含浸されている。いくつかの実施形態では、深層フィルタは２つの層を含み、各層はセルロースフィルタマトリックスを含み、セルロースフィルタマトリックスは珪藻土又はパーライトの１つ以上を含む濾過助剤で含浸され、各層は樹脂バインダーを更に含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ＰＤＤ１深層フィルタである。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、シリカ濾過助剤などのシリカと、ポリアクリル系繊維とを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは２層の濾材を含み、第１の層はシリカ濾過助剤などのシリカを含み、第２の層はポリアクリル系繊維パルプなどのポリアクリル系繊維を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、合成材料を含む深層フィルタであり、珪藻土及び／又はパーライトを含まない。いくつかの実施形態では、深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。
いくつかの実施形態では、シリカ濾過助剤は沈降シリカ濾過助剤である。いくつかの実施形態では、濾過助剤は、フィルタ機能の実行を助ける層などのフィルタの一態様である。いくつかの実施形態では、シリカ濾過助剤はシリカゲル濾過助剤である。いくつかの実施形態では、シリカ濾過助剤は、ｐＨ ７でイオン化された約５０％のシラノールを有する。いくつかの実施形態では、シリカ濾過助剤はシリカゲル濾過助剤であり、シリカ濾過助剤のシラノールの約５０％がｐＨ ７でイオン化される。いくつかの実施形態では、シリカ濾過助剤は、ＳＩＰＥＲＮＡＴ（登録商標）（Ｅｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ＡＧ）などのシリカ、又はＫｉｅｓｅｉｇｅｌ ６０（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）などのシリカゲルから沈殿する。いくつかの実施形態では、ポリアクリル系繊維は、不織ポリアクリル系繊維パルプである。いくつかの実施形態では、ポリアクリル系繊維は電界紡糸ポリアクリルナノファイバーである。いくつかの実施形態では、ポリアクリル系繊維のフィブリル化度は、約１０ ｍＬ～約８００ ｍＬのカナダ標準ろ水度（ＣＳＦ）と相関する。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、約０．０５μｍ～約０．２μｍ、例えば約０．１μｍの孔径を有する。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、約０．１ｍ２～約１．５ｍ２、例えば約０．１１ｍ２、約０．５５ｍ２、又は約１．１ ｍ２の表面積を有する。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、珪藻土及び／又はパーライトを含まない。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、濾材の２つの層を含み、第１の層は、ｐＨ７でイオン化された約５０％のシラノールを有するシリカ濾過助剤を含み、第２の層は、約１０ｍＬ～約８００ｍＬのカナダ標準ろ水度（ＣＳＦ）と相関するポリアクリル系繊維のフィブリル化度を有するポリアクリル系繊維パルプを含み、深層フィルタは珪藻土を含まない。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布材料と、マルチゾーン微多孔膜とを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ヒドロゲルＱ官能化不織布材料及び９ゾーン微多孔膜を含む４つの層を含む。いくつかの実施形態では、不織布材料はポリプロピレンを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、合成材料を含む深層フィルタであり、珪藻土及び／又はパーライトを含まない。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ深層フィルタである。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、複数の構成要素又は層を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、陰イオン交換（ＡＥＸ）官能性ポリマーを含む１つ以上の層を含む複数の層を含む。いくつかの実施形態では、ＡＥＸ官能性ポリマーを含む層は、Ｑ官能性ヒドロゲルなどの第四級アンモニウム（Ｑ）を含む。いくつかの実施形態では、ＡＥＸ官能性ポリマーを含む層は、不織布物品と会合した第四級アンモニウム（Ｑ）官能性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、ＡＥＸ官能性ポリマーを含む層は、微細繊維ポリプロピレン不織布足場に共有結合的にグラフト化された第四級アンモニウム（Ｑ）官能性ヒドロゲルを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、約０．０５μｍ～約０．３μｍ、例えば約０．２２μｍの孔径を有する９ゾーン膜を含むマルチゾーン膜を含む層を含む複数の層を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは珪藻土を含まない。
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法は、１つ又はそれを超える疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）工程を含む。ＨＩＣ工程は、ＨＩＣフィルタ又はＨＩＣカラムなどのＨＩＣ媒体による処理を含むクロマトグラフィー技術である。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ媒体は、例えば、メチル、エチル、プロピル、オクチル又はフェニル基を含む疎水性部分を含む。いくつかの実施形態では、試料を極性緩衝液中のＨＩＣ媒体に適用する。いくつかの実施形態では、塩濃度を減少させ、界面活性剤の濃度を増加させ、及び／又はｐＨを調整した水性緩衝液による段階的溶出を使用して、ポリペプチドをＨＩＣ培地から溶出する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、精製プラットフォームから得られる組成物の酵素加水分解活性速度を低下させることができる。いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、１つ以上の加水分解酵素、例えば１つ以上の異なる加水分解酵素の活性速度を表す。いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、組成物中の１つ以上の酵素の活性の代用測定値である。いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、代用基質により測定される。いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、１つ以上の加水分解酵素の加水分解生成物を測定することによって評価される。
本明細書で使用される「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、並びにそれらの文法的同等物は、これらの単語のいずれか１つに続く１つ以上の項目が、そのような１つ以上の項目の網羅的な列挙であることを意味しないか、列挙された１つ以上の項目のみに限定されることを意味しないという点で、意味において同等であり、オープンエンドであることを意図している。例えば、構成要素Ａ、Ｂ、及びＣを「含む」物品は、構成要素Ａ、Ｂ、及びＣからなる（すなわち、のみを含有する）ことができるか、又は構成要素Ａ、Ｂ、及びＣだけでなく１つ以上の他の構成要素も含むこともできる。したがって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及びその類似の形態、並びにその文法上の等価物は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」の実施形態の開示を含むことが意図され、理解される。
値の範囲が提供される場合、文脈上明確に指示されない限り、その範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１までの各介在値、及びその記載された範囲内の任意の他の記載された値又は介在値は、記載された範囲内の任意の具体的に除外された制限を条件として、本開示内に包含されることが理解される。記載された範囲が限界の一方又は両方を含む場合、それら包含される限界のいずれか又は両方を除いた範囲もまた、本開示に含まれる。
本明細書における「約」値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体を対象とする変形を含む（かつ説明する）。例えば、「約Ｘ」について言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ（１つの）」、「ｏｒ（又は）」、及び「ｔｈｅ（その）」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
精製プラットフォーム
本開示のいくつかの態様では、深層濾過工程及び／又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）工程を含む精製プラットフォームが提供される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、標的を含む試料から標的を任意の程度まで精製するためのワークフローを表す。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームのプロセスワークフローは、標的を含む試料からの標的の精製に関与する工程の順序である。
本明細書の開示の例及び説明のため、例示的な精製プラットフォーム１００の一部のシーケンスワークフローを図１Ａに示す。図１Ａに示すように、精製プラットフォーム１００は、捕捉工程１０５、コンディショニング工程１１０、１つ以上のポリペプチド精製工程等の１つ以上の精製工程１１５、ウイルス濾過工程１２０、及び限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程１２５を含むがこれらに限定されない連続工程を含む。いくつかの実施形態では、図１Ａに示す例示的な精製プラットフォームは、１つ以上の深層濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、図１Ａに示す例示的な精製プラットフォームは、コンディショニング工程１１０の後で、かつ１つ以上の精製工程の前に実施される深層濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、図１Ａに示す例示的な精製プラットフォームは、捕捉工程１０５の前に実施される深層濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、図１Ａに示す例示的な精製プラットフォームは、１つ以上のＨＩＣ工程を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後、ウイルス濾過工程のｐＨ保持工程の後、及び／又はウイルス濾過工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、図１Ａに示す例示的な精製プラットフォームは、１つ以上の深層濾過工程及び１つ以上のＨＩＣ工程を含む。
当業者は、本明細書に記載の精製プラットフォームが、標的を含む試料から標的を精製するためのワークフロー、精製プラットフォームのワークフローの各工程を実施するために使用される成分、並びにその中で使用される成分及び試薬を導くことを容易に理解するであろう。本開示のいくつかの例では、精製プラットフォーム及びその使用方法の説明は、モジュール方式で提供される。そのような開示は、本出願の範囲を限定することを意味しない。本開示は、個々の成分及び／又はその工程の開示に包含される精製プラットフォームの任意の組み合わせ及び／又は配置を包含する。
深層濾過工程
いくつかの態様では、本開示は、深層濾過工程を含む精製プラットフォームを提供する。本明細書に記載されるように、深層濾過工程は、精製プラットフォーム内の１つ以上の位置のいずれかに配置することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の精製プラットフォームは、プロセスワークフローの任意の段階に配置された１つ以上の深層濾過工程、例えば２、３、４、又は５の深層濾過工程のいずれかを含む。精製プラットフォームが２つ以上の深層濾過工程を含むいくつかの実施形態では、深層濾過工程は直接連続して実施されない、すなわち、深層濾過工程の間に精製プラットフォームの何らかの介在工程が実施されない。精製プラットフォームが２つ以上の深層濾過工程を含むいくつかの実施形態では、深層濾過工程は同じである。精製プラットフォームが２つ以上の深層濾過工程を含むいくつかの実施形態では、深層濾過工程は異なり、例えば、異なる深層フィルタの使用を含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームが２つ以上の深層濾過工程を含み、プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程の前に第１の深層濾過工程が実施され、捕捉工程の後で精製工程の前に第２の深層濾過工程が実施される。
いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、深層フィルタによる処理を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、合成材料を含む深層フィルタである。深層フィルタによる処理に関連するものを含む深層濾過工程は、当技術分野で知られている。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＹｉｇｚａｗ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｐｒｏｇ，２２，２００６、及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。当業者は、例えば、深層濾過工程に関与する構成要素、条件及び試薬を理解するであろう。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、それぞれが深層フィルタによる処理を含む１つ以上の深層濾過工程を含み、深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて選択される。いくつかの実施形態では、シリカと、Ｘ０ＳＰ深層フィルタなどのポリアクリル系繊維とを含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に選択される。いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタ、例えばＸ０ＳＰ深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約６．５以下、例えば約６．４以下、６．３以下、６．２以下、６．１以下、６．０以下、５．９以下、５．８以下、５．７以下、５．６以下、５．５以下、５．４以下、５．３以下、５．２以下、５．１以下、又は５．０以下のいずれかである場合に選択される。いくつかの実施形態では、シリカ及びＸ０ＳＰ深層フィルタなどのポリアクリル系繊維を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約６．５、６．４、６．３、６．２、６．１、６．０、５．９、５．８、５．７、５．６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、又は５．０のいずれかである場合に選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタなどのマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約７～約８．５である場合に選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタなどのマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約７以上、例えば約７．１以上、７．２以上、７．３以上、７．４以上、７．５以上、７．６以上、７．７以上、７．８以上、７．９以上、８．０以上、８．１以上、８．２以上、８．３以上、８．４以上、又は８．５以上のいずれかである場合に選択される。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタなどのマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、又は８．５のいずれかである場合に選択される。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、本方法は、深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて深層フィルタを選択する工程を更に含み得る。いくつかの例では、深層フィルタに入る溶液及びその特性は、本明細書に記載の精製プラットフォームを使用して精製されたポリペプチド（例えば、抗体）等の標的に基づくことができることを当業者は容易に理解するであろう。したがって、いくつかの実施形態では、ｐＩなどの標的の特性が、本明細書に記載の精製プラットフォームで使用するための深層フィルタを選択するための基礎として使用される。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、珪藻土組成物、シリカ組成物、セルロース繊維、ポリマー繊維、凝集性樹脂、合成粒子、イオン帯電性樹脂、及び灰組成物の１つ以上を含む基材を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは珪藻土を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは陰イオン交換媒体を含む。
いくつかの実施形態では、深層フィルタの基材の少なくとも一部は、表面改質を含む。いくつかの実施形態では、表面改質は、第四級アミン表面改質、カチオン性表面改質、及びアニオン性表面改質の１つ以上である。
いくつかの実施形態では、深層フィルタは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタ（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ深層フィルタなど）、Ｘ０ＳＰ深層フィルタ、ＰＤＤ１深層フィルタ、ＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＡ深層フィルタ、及びＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＢ深層フィルタからなる群から選択される。
ＨＩＣ工程
いくつかの態様では、本開示は、ＨＩＣ工程を含む精製プラットフォームを提供する。本明細書に記載されるように、ＨＩＣ工程は、精製プラットフォーム内の任意の１つ以上の位置に配置することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の精製プラットフォームは、プロセスワークフローの任意の段階に配置された１つ以上のＨＩＣ工程、例えば２、３、４、又は５つのＨＩＣ工程のいずれかを含む。精製プラットフォームが２つ以上のＨＩＣ工程を含むいくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は直接連続して実施されない、すなわち、ＨＩＣ工程の間に実施される精製プラットフォームの何らかの介在工程を伴わずに実施されない。精製プラットフォームが２つ以上のＨＩＣ工程を含むいくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は同じである。精製プラットフォームが２つ以上のＨＩＣ工程を含むいくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は異なり、例えば、異なるＨＩＣ媒体の使用を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ＨＩＣカラム又はＨＩＣ膜などのＨＩＣ媒体による処理を含む。ＨＩＣ媒体による処理に関与するものを含むＨＩＣ工程は、当技術分野で知られている。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。当業者は、例えば、ＨＩＣ工程に関与する成分、条件及び試薬を理解するであろう。
いくつかの実施形態では、ＨＩＣ媒体は疎水性樹脂を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ媒体の基材の少なくとも一部は、表面改質を含む。いくつかの実施形態では、表面改質は、フェニル又はブチル表面改質である。
いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程はフロースルーモードＨＩＣ工程である。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は結合溶出モードＨＩＣ工程である。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、プロセスワークフローの任意の段階に配置された１つ以上の深層濾過工程、及びプロセスワークフローの任意の段階に配置された１つ以上のＨＩＣ工程を含む。
捕捉工程
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは捕捉工程を含む。いくつかの実施形態では、捕捉工程はアフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む。
例えば、アフィニティクロマトグラフィーによる処理に関与するものを含む捕捉工程は、当技術分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。
いくつかの実施形態では、アフィニティクロマトグラフィーは、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィー及びカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、捕捉工程はプロテインＡクロマトグラフィーによるプロセシングを含む。いくつかの実施形態では、捕捉工程はＦｃＸＬクロマトグラフィーによる処理を含む。
いくつかの実施形態では、プロテインＡクロマトグラフィーはシリカ系プロテインＡクロマトグラフィーである。いくつかの実施形態では、プロテインＡクロマトグラフィーはアガロースベースのプロテインＡクロマトグラフィーである。いくつかの実施形態では、プロテインＡクロマトグラフィーは有機ポリマーベースのプロテインＡクロマトグラフィーである。
いくつかの実施形態では、プロテインＡクロマトグラフィーは、Ｐｒｏｓｅ ｖＡ（商標）、Ｐｒｏｓｅｐ（登録商標）ｖＡ Ｕｌｔｒａ、プロテインＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）ＳｕＲｅ、Ｐｏｒｏｓ（登録商標）Ａ及びＭａｂＣａｐｔｕｒｅ（商標）からなる群から選択される。
コンディショニング工程
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームはコンディショニング工程を含む。いくつかの実施形態では、コンディショニング工程は、捕捉工程の後に実施される。
コンディショニング工程は、コンディショニング工程のための処理に関与するものを含めて、当該技術分野において公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。
いくつかの実施形態では、コンディショニング工程は、ウイルス不活化工程、例えば低ｐＨ保持工程を含む。いくつかの実施形態では、低ｐＨ保持工程は、約２．５～約４のｐＨで実施される。いくつかの実施形態では、低ｐＨ保持工程は、ウイルス不活化のために構成される。いくつかの実施形態では、低ｐＨ保持工程は、内因性／外来性ウイルスを不活性化することができる。
１つ以上の精製工程
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の精製工程は、捕捉工程及びコンディショニング工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、１つ以上の精製工程はポリペプチド精製工程を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の精製工程は、２つ、３つ、４つ又は５つのポリペプチド精製工程のいずれかなど、２つ以上のポリペプチド精製工程を含む。
ポリペプチド精製工程のための処理に関与するものを含むポリペプチド精製工程は、当技術分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド精製工程は、イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド精製工程は、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）、ジメチルアミノエチル（ＤＭＡＥ）、トリメチルアミノエチル（ＴＭＡＥ）、四級アミン、四級アミノエチル（ＱＡＥ）、スルホプロピル（ＳＰ）、ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）（架橋ビーズ状アガロース）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（ＦＦ）、ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＸＬ、四級アミン（Ｑ）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦ、メルカプトエチルピリジン（ＭＥＰ）－Ｈｙｐｅｒｃｅｌ（商標）、Ｃａｐｔｏ ＭＭＣ（マルチモーダルクロマトグラフィー）、Ｃａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅ、Ｐｏｒｏｓ（登録商標）ＸＳ、及びＰｏｒｏｓ（登録商標）５０ＨＳからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド精製工程は結合溶出ポリペプチド精製工程である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド精製工程はフロースルーポリペプチド精製工程である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド精製工程は、弱分配クロマトグラフィーポリペプチド精製工程である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド精製工程は過負荷ポリペプチド精製工程である。
ウイルス濾過工程
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームはウイルス濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、ウイルス濾過工程は、１つ以上の精製工程の後に実施される。
ウイルス濾過工程の処理に関与するものを含むウイルス濾過工程は、当技術分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０、及び米国特許出願公開第２０１４０３０９４０３号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ウイルス濾過工程は、ウイルスフィルタによる処理を含む。いくつかの実施形態では、ウイルス濾過工程はｐＨ保持工程を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスフィルタによる処理は、ｐＨ保持工程の後に実施される。
ＵＦＤＦ工程
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＵＦＤＦ工程を含む。いくつかの実施形態では、ＵＦＤＦ工程は、１つ以上の精製工程の後及び／又はウイルス濾過工程の後に実施される。
ＵＦＤＦ工程の処理に関与するものを含むＵＦＤＦ工程は、当技術分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。
いくつかの実施形態では、ＵＦＤＦ工程は、限外濾過による処理を含む。いくつかの実施形態では、ＵＦＤＦ工程は、接線流濾過（ＴＦＦ）モードで実行される。いくつかの実施形態では、ＵＦＤＦ工程は、高性能接線流濾過などの接線流濾過による処理を含む。
上述のように、本出願に開示される精製プラットフォームは、本明細書に記載されるものを含む、精製工程の任意の組み合わせ及び配置を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、及び深層濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程と、精製プラットフォームが深層濾過工程を更に含むコンディショニング工程とを順に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後に実行される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、及び１つ以上の精製工程を順に含み、精製プラットフォームは、深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などのＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びウイルス濾過工程を順に含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、１つ以上の精製工程の後、ウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ウイルス濾過工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後及び／又はウイルス濾過工程、ウイルス濾過工程のｐＨ保持工程の後などの後若しくは間に実施される１つ以上のＨＩＣ工程から選択されるようなＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びＵＦＤＦ工程を順に含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、１つ以上の精製工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実行される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後及び／又はＵＦＤＦ工程の後に実施される１つ以上のＨＩＣ工程から選択されるようなＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、ウイルス濾過工程、及びＵＦＤＦ工程を含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、１つ以上の精製工程の後、ウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ウイルス濾過工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実行される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後、及び／又はウイルス濾過工程のｐＨ保持工程の後等のウイルス濾過工程の後若しくはその間、及び／又はＵＦＤＦ工程の後に実施される１つ以上のＨＩＣ工程から選択されるようなＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程及びＨＩＣ工程を含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程と、精製プラットフォームがＨＩＣ工程を更に含むコンディショニング工程とを順に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、及び１つ以上の精製工程を順に含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びウイルス濾過工程を順に含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後及びウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ウイルス濾過工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びＵＦＤＦ工程を含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、ウイルス濾過工程、及びＵＦＤＦ工程を含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後及びウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ウイルス濾過工程の後及びＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
試料、その成分、及び精製プラットフォームから得られた組成物
いくつかの態様では、本明細書に記載の精製プラットフォームは、標的を含む試料から標的を任意の程度まで精製するのに有用である。
いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞試料である。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞培養液（ＨＣＣＦ）である。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞培養液の一部を含む。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞培養液に由来する。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞を含む。いくつかの実施形態では、試料は、宿主細胞残屑などの宿主細胞の成分を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、細菌細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、昆虫細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である。
いくつかの実施形態では、試料は、試料を本明細書に記載の精製プラットフォームに供する前に実行される処理工程に供されるなど、処理されている。いくつかの実施形態では、試料は界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、試料はポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、試料は標的を含む。いくつかの実施形態では、標的は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、標的は、ポリペプチド複合体である。いくつかの実施形態では、標的は、抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、試料は１つ以上の宿主細胞タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞タンパク質は加水分解酵素である。いくつかの実施形態では、加水分解酵素は、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである。いくつかの実施形態では、加水分解酵素は多酵素タンパク質である。いくつかの実施形態では、多酵素タンパク質は脂肪酸シンターゼである。いくつかの実施形態では、脂肪酸シンターゼはチオエステラーゼサブユニットを含む。
本明細書に記載の精製プラットフォームは、場合によっては、多数の精製工程を含み得る。いくつかの実施形態では、「組成物」という用語は、本明細書では、精製プラットフォームの任意の段階の任意の入力（精製プラットフォームへの最初の試料入力を除く）、中間、又は出力を説明するために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、「組成物」という用語の使用は、精製プラットフォームの最終出力を記述することに限定されない。
いくつかの実施形態では、組成物は界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物はポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、組成物は標的を含む。いくつかの実施形態では、標的は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、標的はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、標的はポリペプチド複合体である。いくつかの実施形態では、標的は抗体部分である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分はヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗体部分は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の宿主細胞タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞タンパク質は加水分解酵素である。いくつかの実施形態では、加水分解酵素は、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである。
追加の工程
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の精製プラットフォームに関与する又は関連する追加の工程を提供する。精製プラットフォームに関与するか又は関連する追加の工程、及びそのような工程を行うための方法が知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ，２，２０１０を参照されたい。
いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、試料調製工程などの試料処理工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、例えばＨＣＣＦを清澄化するための清澄化工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、例えば精製プラットフォームから得られた試料及び／又は組成物から宿主細胞及び宿主細胞残屑を除去するための宿主細胞及び宿主細胞残屑除去工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、遠心分離工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、滅菌濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、接線流精密濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、凝集／沈殿工程を更に含む。
精製プラットフォームを使用する方法
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の精製プラットフォームを使用する方法を記載する。いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を本明細書に記載の精製プラットフォームに供することを含む。
いくつかの態様では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む本明細書に記載の精製プラットフォームから得られる組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を精製プラットフォームに供することを含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程なしの同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物の酵素加水分解活性速度の相対的な低下は、少なくとも約５％、例えば少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のいずれかである。いくつかの実施形態では、酵素加水分解活性速度は、酵素ポリソルベート加水分解活性速度である。
いくつかの態様では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む本明細書に記載の精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を精製プラットフォームに供することを含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中の加水分解酵素のレベルを低下させる方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下は、少なくとも約５％、例えば少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のいずれかである。いくつかの実施形態では、１つ以上の加水分解酵素は、ポリソルベートを加水分解することができる。
いくつかの態様では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む本明細書に記載の精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減する方法であって、試料を精製プラットフォームに供することを含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中のポリソルベートの分解を低減する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中のポリソルベートの分解の相対的低減は、少なくとも約５％、例えば少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のいずれかである。
いくつかの態様では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む本明細書に記載の精製プラットフォームから得られる組成物の貯蔵寿命を延長する方法であって、試料を精製プラットフォームに供することを含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用する試料の精製と比較して、組成物の貯蔵寿命を延長する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用する試料の精製と比較した組成物の貯蔵寿命の相対的増加は、少なくとも約１週間、例えば少なくとも約２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、又は２４ヶ月超のいずれかである。いくつかの実施形態では、組成物の貯蔵寿命は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使った試料の精製と比較して、少なくとも約１週間、例えば少なくとも約２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４２ヶ月、４８ヶ月、又は４８ヶ月超のいずれかである。いくつかの実施形態では、組成物の貯蔵寿命は、６ヶ月超、９ヶ月超、１２ヶ月超、１８ヶ月超、２４ヶ月超、３０ヶ月超、３６ヶ月超、４２ヶ月超、４８ヶ月超又は４８ヶ月超である。
いくつかの態様では、ポリソルベートの分解がより少ない組成物を製造する方法であって、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む本明細書に記載の精製プラットフォームから得られた組成物であって、試料を精製プラットフォームに供することを含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、ポリソルベートの分解がより少ない組成物を製造する方法が本明細書で提供される。
いくつかの態様では、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む本明細書に記載の精製プラットフォームから得られた組成物中の標的の凝集を減少させる方法であって、試料を精製プラットフォームに供することを含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中の標的の凝集を減少させる方法が本明細書で提供される。
本明細書に記載されるように、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む精製プラットフォームに試料を供することから得られる組成物の１つ以上の属性は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較される。当業者であれば、場合によっては、そのような比較は、意味のある比較を可能にする適切な条件下で実施されなければならないことを理解するであろう。例えば、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含む精製プラットフォームから得られた組成物を、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較する場合、酵素加水分解活性速度の読み取りに影響を及ぼし得る時間的要因を考慮に入れなければならない。組成物と参照との比較のために考慮すべきさらなる関連因子としては、実験条件、使用されるアッセイ、温度条件、ｐＨ、タイミング、試料、緩衝液及び試料源が挙げられる。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程及び深層濾過工程を含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程及びコンディショニング工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後に実行される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、及び１つ以上の精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などのＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びウイルス濾過工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、１つ以上の精製工程の後、ウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ウイルス濾過工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後及び／又はウイルス濾過工程、ウイルス濾過工程のｐＨ保持工程の後などの後若しくは間に実施される１つ以上のＨＩＣ工程から選択されるようなＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びＵＦＤＦ工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、１つ以上の精製工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実行される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後及び／又はＵＦＤＦ工程の後に実施される１つ以上のＨＩＣ工程から選択されるようなＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、方法は、標的を含む試料を、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、ウイルス濾過工程、及びＵＦＤＦ工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームは深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実行される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、コンディショニング工程の後で、１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、１つ以上の精製工程の後、ウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ウイルス濾過工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、深層濾過工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実行される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の前に実施される深層濾過工程などの第２の深層濾過工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後、及び／又はウイルス濾過工程のｐＨ保持工程の後、ウイルス濾過工程、及び／又はＵＦＤＦ工程の後などの後若しくは間に実施される１つ以上のＨＩＣ工程から選択されるようなＨＩＣ工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、方法は、標的を含む試料を、捕捉工程及びＨＩＣ工程を含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、方法は、標的を含む試料を、捕捉工程及びコンディショニング工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、及び１つ以上の精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びウイルス濾過工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後及びウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ウイルス濾過工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、及びＵＦＤＦ工程を順に含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、上記方法は、標的を含む試料を、捕捉工程、コンディショニング工程、１つ以上の精製工程、ウイルス濾過工程、及びＵＦＤＦ工程を含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームはＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は捕捉工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、捕捉工程の後でコンディショニング工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、コンディショニング工程の後及び１つ以上の精製工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、２つ以上の精製工程が存在する場合、１つ以上の精製工程のいずれかの間に、又は１つ以上の精製工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、１つ以上の精製工程の後及びウイルス濾過工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ウイルス濾過工程の後及びＵＦＤＦ工程の前に実施される。いくつかの実施形態では、ＨＩＣ工程は、ＵＦＤＦ工程の後に実施される。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、１つ以上の精製工程の後に実施されるＨＩＣ工程などの第２のＨＩＣ工程を更に含む。いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、捕捉工程の後に実施される深層濾過工程などの深層濾過工程を更に含む。
本明細書の開示の例及び説明の目的のため、例示的な精製プラットフォーム２００の態様に利用可能な選択肢のシーケンスワークフローを図１Ｂに示す。図１Ｂに示すように、精製プラットフォームは、以下：プロテインＡクロマトグラフィー工程 ２１０；ＨＩＣ ２２５、陽イオン交換クロマトグラフィー２２５、又はマルチモーダルクロマトグラフィー２３０から選択される更なるクロマトグラフィー工程、並びにプロテインＡクロマトグラフィー工程の前にＨＣＣＦ上で実施されるＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２０５、プロテインＡプール上で実施されるＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５、又はプロテインＡプール上で実施されるＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０のいずれかから選択される１つ以上の深層濾過工程を含む。
図１Ｂによれば、いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過プールをプロテインＡクロマトグラフィー２１０に供する前にＨＣＣＦ上で実施されるＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２０５を含む。そのような実施形態では、プロテインＡプールは、下流クロマトグラフィー工程の前に、Ｘ０ＳＰ深層濾過工程２１５又はＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０のいずれかに供される。精製プラットフォームがＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５を含むいくつかの実施形態では、プロテインＡプールは、プロテインＡプールのｐＨを約５～約６．５に調整することによってＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５の前にコンディショニングされる。精製プラットフォームがＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５を含むいくつかの実施形態では、Ｘ０ＳＰ深層濾過プールをＨＩＣ（フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロー等）又は陽イオン交換クロマトグラフィー（ＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳ等）に更に供する。精製プラットフォームがＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０を含むいくつかの実施形態では、プロテインＡプールは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０の前に、プロテインＡプールのｐＨを約７～約８．５に調整することによりコンディショニングされる。精製プラットフォームがＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０を含むいくつかの実施形態では、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過プールをマルチモーダルクロマトグラフィー（Ｃａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅ等）に更に供する。
図１Ｂによれば、いくつかの実施形態では、精製プラットフォームは、ＨＣＣＦに対して実施されるＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２０５を含まない。そのような実施形態では、ＨＣＣＦは、プロテインＡクロマトグラフィー２１０に供され、プロテインＡプールは、下流のクロマトグラフィー工程の前に、Ｘ０ＳＰ深層濾過工程２１５又はＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０のいずれかに供される。精製プラットフォームがＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５を含むいくつかの実施形態では、プロテインＡプールは、プロテインＡプールのｐＨを約５～約６．５に調整することによってＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５の前にコンディショニングされる。精製プラットフォームがＸ０ＳＰ深層濾過工程２１５を含むいくつかの実施形態では、Ｘ０ＳＰ深層濾過プールをＨＩＣ（フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロー等）又は陽イオン交換クロマトグラフィー（ＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳ等）に更に供する。精製プラットフォームがＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０を含むいくつかの実施形態では、プロテインＡプールは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０の前に、プロテインＡプールのｐＨを約７～約８．５に調整することによりコンディショニングされる。精製プラットフォームがＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程２２０を含むいくつかの実施形態では、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過プールをマルチモーダルクロマトグラフィー（Ｃａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅ等）に更に供する。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程、（ｂ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、及び（ｃ）精製工程をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製工程は、ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタはＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタである。いくつかの実施形態では、ＨＩＣは、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーである。いくつかの実施形態では、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳである。いくつかの実施形態では、マルチモーダルクロマトグラフィーはＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅである。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む第１の深層フィルタによる処理を含む第１の深層濾過工程、（ｂ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｃ）ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む第２の深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程、並びに（ｄ）マルチモーダルクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタ及び第２の深層フィルタはＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタである。いくつかの実施形態では、マルチモーダルクロマトグラフィーはＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅである。いくつかの実施形態では、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む第２の深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約７～約８．５である場合に選択される。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｂ）ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程、並びに（ｃ）マルチモーダルクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタはＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタである。いくつかの実施形態では、マルチモーダルクロマトグラフィーはＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅである。いくつかの実施形態では、深層フィルタに入る溶液が約７～約８．５である場合に、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタが選択される。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）第１の深層フィルタによる処理を含む第１の深層濾過工程、（ｂ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、及び（ｃ）第２の深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタは、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタはＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタである。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタは、無機濾過助剤、セルロース、及び樹脂系を含む。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタは、１２０ＺＢの深層フィルタである。いくつかの実施形態では、第２の深層フィルタは、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む。いくつかの実施形態では、第２の深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。いくつかの実施形態では、上記方法は、コンディショニング工程を更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１つ以上の精製工程をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む第１の深層フィルタによる処理を含む第１の深層濾過工程、（ｂ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｃ）シリカ及びポリアクリル系繊維を含む第２の深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程、並びに（ｄ）陽イオン交換クロマトグラフィーによる処理を含む精製工程をこの順で含む、精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタはＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタである。いくつかの実施形態では、第２の深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。いくつかの実施形態では、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳである。いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む第２の深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に選択される。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む第１の深層フィルタによる処理を含む第１の深層濾過工程、（ｂ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｃ）シリカ及びポリアクリル系繊維を含む第２の深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程、並びに（ｄ）ＨＩＣによる処理を含む精製工程をこの順で含む、精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、第１の深層フィルタはＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタである。いくつかの実施形態では、第２の深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。いくつかの実施形態では、ＨＩＣは、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーである。いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む第２の深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に選択される。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、及び（ｂ）深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程をこの順に含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタは、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。いくつかの実施形態では、上記方法は、コンディショニング工程を更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１つ以上の精製工程をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｂ）シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程、並びに（ｃ）陽イオン交換クロマトグラフィーによる処理を含む精製工程をこの順に含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。いくつかの実施形態では、陽イオン交換クロマトグラフィーは、ＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳである。いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に選択される。
いくつかの実施形態では、本方法は、標的を含む試料を、（ａ）プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｂ）シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程、並びに（ｃ）ＨＩＣによる処理を含む精製工程をこの順に含む精製プラットフォームに供することを含む。いくつかの実施形態では、深層フィルタはＸ０ＳＰ深層フィルタである。いくつかの実施形態では、ＨＩＣは、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーである。いくつかの実施形態では、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタは、深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に選択される。
追加の方法工程
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、追加の方法工程を更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、細胞培養工程を更に含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、薬学的に許容可能な組成物又はその前駆物質を形成するために組成物を処理する等の製剤化工程を更に含む。
いくつかの実施形態では、本方法は、組成物の酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載の精製プラットフォームから得られた組成物に対してリパーゼ活性アッセイを実施することを更に含む。いくつかの実施形態では、リパーゼ活性アッセイは、基質（例えば、非蛍光基質）の、加水分解酵素の検出可能な生成物（例えば、蛍光生成物）への変換をモニターすることによって、１つ以上の加水分解酵素のリパーゼ活性を測定する工程を含む。いくつかの実施形態では、基材はエステル結合を含む。いくつかの実施形態では、上記方法は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８０３５０２５号に記載されているように、１つ以上の加水分解酵素の生成物を決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、脂肪酸質量分析（ＦＡＭＳ）アッセイを実施することによって、本明細書に記載の精製プラットフォームから得られた組成物中の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルを決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、組成物の貯蔵寿命を決定することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、組成物中の標的の凝集体のレベルを決定することを更に含む。
医薬組成物
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の精製プラットフォームから得られる医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の方法から得られる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は精製組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は滅菌医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体部分及びポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗体部分、ポリソルベート、及び宿主細胞タンパク質、例えば加水分解酵素等の宿主細胞不純物を含む。
いくつかの実施形態では、医薬組成物はポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用した同じ試料の精製から得られる組成物と比較して、酵素加水分解活性速度が低下している。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用した同じ試料の精製から得られる組成物と比較して、１つ以上の加水分解酵素のレベルが低下している。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用した同じ試料の精製から得られる組成物と比較して、ポリソルベートの分解が減少している。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用した同じ試料の精製から得られる組成物と比較して、貯蔵寿命が増加している。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用した同じ試料の精製から得られる組成物と比較して、分解されたポリソルベートが少ない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を伴わない同じ精製プラットフォームを使用した同じ試料の精製から得られる組成物と比較して、標的の凝集が減少している。
製剤化された抗体部分組成物
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の精製プラットフォームから得られる製剤化された抗体部分組成物を提供する。いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物は、本明細書に記載の方法から得られる。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物は抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物は、抗体部分及びポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物は、抗体部分、ポリソルベート、及び宿主細胞不純物（宿主細胞タンパク質等、例えば加水分解酵素）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤化された抗体部分組成物は、参照、例えば１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を有さない同じ精製プラットフォームから得られた製剤化された抗体部分組成物と比較して、貯蔵寿命が増加している。いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分の凝集により、貯蔵寿命が評価される（例えば、測定される）。いくつかの実施形態では、貯蔵寿命は、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分の１つ以上の官能性の保存によって、測定などによって評価される。いくつかの実施形態では、貯蔵寿命は、製剤化された抗体部分組成物の抗体部分の活性、例えば結合活性により測定されるなどして評価される。
いくつかの実施形態では、抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物は、ポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、組成物の貯蔵寿命は、約１２ヶ月超、例えば約１３ヶ月超、約１４ヶ月超、約１５ヶ月超、約１６ヶ月超、約１７ヶ月超、約１８ヶ月超、約１９ヶ月超、約２０ヶ月超、約２１ヶ月超、約２２ヶ月超、約２３ヶ月超、約２４ヶ月超、約２５ヶ月超、約２６ヶ月超、約２７ヶ月超、約２８ヶ月超、約２９ヶ月超、約３０ヶ月超、約３１ヶ月超、約３２ヶ月超、約３３ヶ月超、約３４ヶ月超、約３５ヶ月超、又は約３６ヶ月超のいずれかである。いくつかの実施形態では、ポリソルベート加水分解活性速度が低下した製剤化された抗体部分組成物は、参照、例えば１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を有さない同じ精製プラットフォームから得られる製剤化された抗体部分組成物と比較したものである。いくつかの実施形態では、低下したポリソルベート加水分解活性速度は、低下した相対ポリソルベート加水分解活性速度である。
いくつかの実施形態では、抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物は、ポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、組成物の貯蔵寿命は、製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示された貯蔵寿命と比較して延長され、貯蔵寿命は、当該文書に示された貯蔵寿命と比較して、少なくとも約２ヶ月、例えば少なくとも約３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、又は１２ヶ月のいずれかで延長される。いくつかの実施形態では、ポリソルベート加水分解活性速度が低下した製剤化された抗体部分組成物は、参照、例えば１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を有さない同じ精製プラットフォームから得られる製剤化された抗体部分組成物と比較したものである。いくつかの実施形態では、低下したポリソルベート加水分解活性速度は、低下した相対ポリソルベート加水分解活性速度である。
いくつかの実施形態では、抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物は、ポリソルベートの分解が低減しており、分解は、製剤化された抗体部分組成物に関する保健当局に提出された文書に示された分解と比較して、少なくとも約５％、例えば少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％のいずれかまで低減される。いくつかの実施形態では、ポリソルベートの分解が低減した製剤化された抗体部分組成物は、参照、例えば１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を有さない同じ精製プラットフォームから得られた製剤化された抗体部分組成物と比較したものである。いくつかの実施形態では、ポリソルベートの分解の低減は、ポリソルベートの相対分解の低減である。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物のポリソルベート加水分解活性速度は、参照と比較して、少なくとも約５％、例えば少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％のいずれかまで低下する。
いくつかの実施形態では、製剤化された抗体部分組成物は、抗体部分及びポリソルベートを含み、ポリソルベートは、液体組成物の貯蔵中に年間約５０％以下、例えば年間約４５％以下、年間４０％以下、年間３５％以下、年間３０％以下、年間２５％以下、年間２０％以下、年間１５％以下、年間１０％以下又は年間５％以下のいずれかで分解される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤化された抗体部分組成物は、参照、例えば１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を有さない同じ精製プラットフォームから得られた製剤化された抗体部分組成物と比較して、少なくとも約６ヶ月間、例えば少なくとも約７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、又は２４ヶ月の間、凝集体形成が減少している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤化された抗体部分組成物は、少なくとも約６ヶ月間、例えば少なくとも約７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、又は２４ヶ月間の、参照と比較して、少なくとも約２０％少ない、例えば少なくとも約２５％少ない、３０％少ない、３５％少ない、４０％少ない、４５％少ない、５０％少ない、５５％少ない、６５％少ない、７０％少ない、７５％少ない、８０％少ない、８５％少ない、９０％少ない、９５％少ない、又は１００％少ない凝集体形成を有し、参照は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程を含まない同じ精製プラットフォームから得られた製剤化された抗体部分組成物である。凝集体形成を評価する、例えば測定する方法は、当該技術分野で知られており、例えば、目視検査、動的光散乱、静的光散乱、及び光学密度測定を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される製剤化された抗体部分組成物は、少なくとも約６ヶ月間、例えば少なくとも約７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、又は２４ヶ月の間、参照と比較して、抗体部分活性の少なくとも約５０％、例えば少なくとも約５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のいずれかを維持し、参照は、１つ以上の深層濾過工程及び／又は１つ以上のＨＩＣ工程なしに同じ精製プラットフォームから得られた製剤化された抗体部分組成物である。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、モノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。
いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される。
本明細書で報告されるさらなる態様は、保存中のポリソルベート分解が低い製剤化抗体組成物である。本発明の一態様は、抗体／タンパク質とポリソルベートとを含む製剤化された抗体組成物であって、ポリソルベートが、製剤化された抗体組成物の貯蔵期間／貯蔵期間中に、年間２０％以下（一実施形態において、１５％以下、一実施形態において、１２％以下、一実施形態において、１０％以下、一実施形態において、９％以下、一実施形態において、８％以下、一実施形態において、７％以下、一実施形態において、６％以下、一実施形態において、５％以下、一実施形態において、４％以下、一実施形態において、３％以下、一実施形態において、２％以下、一実施形態において、１％以下）分解される、製剤化された抗体組成物である。一実施形態では、ポリソルベートは、液体組成物の貯蔵中に年間１０％以下分解される。
別の態様は、抗体とポリソルベートとを含む製剤化された抗体組成物であって、１年後にポリソルベートが組成物中に初期濃度の少なくとも８０％（一実施形態では少なくとも８５％、一実施形態では少なくとも８８％、一実施形態では少なくとも９０％、一実施形態では少なくとも９１％、一実施形態では少なくとも９２％、一実施形態では少なくとも９３％、一実施形態では少なくとも９４％、一実施形態では少なくとも９５％、一実施形態では少なくとも９６％、一実施形態では少なくとも９７％、一実施形態では少なくとも９８％、一実施形態では少なくとも９９％の濃度で存在し、初期濃度は、液体組成物中の抗体の製剤化時又は貯蔵開始時の濃度である、製剤化された抗体組成物である。
例示的な実施形態
実施形態１．精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、（ａ）捕捉工程、及び（ｂ）深層濾過工程を含む精製プラットフォームに供することを含み、それにより、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる、方法。
実施形態２．酵素加水分解活性速度が酵素ポリソルベート加水分解活性速度である、実施形態１に記載の方法。
実施形態３．深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物の酵素加水分解活性速度の相対的低下が少なくとも約２０％である、実施形態１又は２に記載の方法。
実施形態４．精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を、（ａ）捕捉工程、及び（ｂ）深層濾過工程を含む精製プラットフォームに供することを含み、それにより、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中の加水分解酵素のレベルを低下させる、方法。
実施形態５．１つ以上の加水分解酵素がポリソルベートを加水分解することができる、実施形態４に記載の方法。
実施形態６．深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下が少なくとも約２０％である、実施形態４又は５に記載の方法。
実施形態７．精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減させるための方法であって、試料を、（ａ）捕捉工程、及び（ｂ）深層濾過工程を含む精製プラットフォームに供することを含み、それにより、深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中のポリソルベートの分解を低減させる、方法。
実施形態８．深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中のポリソルベートの分解の相対的低減が、少なくとも約５％である、実施形態７に記載の方法。
実施形態９．精製プラットフォームが、試料からの標的の精製のためのものであり、試料が標的及び１つ以上の宿主細胞不純物を含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０．標的がポリペプチドを含む、実施形態９に記載の方法。
実施形態１１．宿主細胞不純物が宿主細胞タンパク質である、実施形態９又は１０に記載の方法。
実施形態１２．深層濾過工程が捕捉工程の前に実施されるか、又は深層濾過工程が捕捉工程の後に実施される、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３．深層濾過工程が、深層フィルタによる処理を含む、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４．深層フィルタが、１つ以上の珪藻土組成物、シリカ組成物、セルロース繊維、ポリマー繊維、凝集樹脂、及び灰組成物を含む基材を含む、実施形態１３に記載の方法。
実施形態１５．深層フィルタの基材の少なくとも一部が表面改質を含む、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１６．表面改質が、第四級アミン表面改質、カチオン表面改質、及びアニオン表面改質の１つ以上である、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７．深層フィルタが、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタ、ＰＤＤ１深層フィルタ、ＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＡ深層フィルタ、及びＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＢ深層フィルタからなる群から選択される、実施形態１４～１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８．捕捉工程が、アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９．アフィニティクロマトグラフィーが、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィー、及びカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群から選択される、実施形態１８に記載の方法。
実施形態２０．精製プラットフォームがウイルス不活化工程を更に含み、ウイルス不活化工程が捕捉工程の後に実施される、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１．深層濾過工程がウイルス不活化工程の後に実施される、実施形態２０に記載の方法。
実施形態２２．精製プラットフォームが、捕捉工程の前に実施される別の深層濾過工程を更に含む、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２３．精製プラットフォームが１つ以上の精製工程を更に含み、１つ以上の精製工程が、捕捉工程、深層濾過工程、及び存在する場合にはウイルス不活化工程の後に実施される、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２４．１つ以上の精製工程がポリペプチド精製工程を含む、実施形態２３に記載の方法。
実施形態２５．精製プラットフォームが、１つ以上の精製工程の前、間、又は後に実施される別の深層濾過工程を更に含む、実施形態２３又は２４に記載の方法。
実施形態２６．精製プラットフォームが限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程を更に含み、ＵＦＤＦ工程が１つ以上の精製工程の後に実施される、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２７．精製プラットフォームが、ＵＦＤＦ工程の前又は後に実施される別の深層濾過工程を更に含む、実施形態２６に記載の方法。
実施形態２８．精製プラットフォームが、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）精製工程を更に含む、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２９．ＨＩＣ精製工程が、存在する場合には、１つ以上の精製工程の前、間、又は後に実施される、実施形態２８に記載の方法。
実施形態３０．ＨＩＣ精製工程が、１つ以上の精製工程の後で、かつ存在する場合にはＵＦＤＦ工程の前に実施される、実施形態２８に記載の方法。
実施形態３１．精製プラットフォームがｐＨ保持工程を更に含み、ｐＨ保持工程が、存在する場合には１つ以上の精製工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される、実施形態２６又は２７に記載の方法。
実施形態３２．精製プラットフォームがウイルス濾過工程を更に含み、ウイルス濾過工程がｐＨ保持工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３３．ウイルス濾過工程が、ウイルスフィルタによる処理を含む、実施形態３２に記載の方法。
実施形態３４．ＨＩＣ精製工程が、ＨＩＣフィルタによる処理を含む、実施形態２８に記載の方法。
実施形態３５．１つ以上の精製工程が、それぞれ独立して、イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む、実施形態２３～３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３６．１つ以上の精製工程が、それぞれ独立して、ＤＥＡＥ、ＤＭＡＥ、ＴＭＡＥ、ＱＡＥ、ＳＰＳＦＦ、ＳＰＸＬ、ＱＳＦＦ、ＭＥＰ－Ｈｙｐｅｒｃｅｌ（商標）、Ｃａｐｔｏ ＭＭＣ、及びＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む実施形態２３～３５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７．精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、（ｂ）ウイルス不活化工程、（ｃ）第２のポリペプチド精製工程、（ｄ）第３のポリペプチド精製工程、並びに（ｅ）限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが、（ｉ）捕捉工程の前、（ｉｉ）捕捉工程の後で、かつウイルス不活化工程の前、（ｉｉｉ）ウイルス不活化工程の後で、かつ第２のポリペプチド精製工程の前、（ｉｖ）第２のポリペプチド精製工程の後で、かつ第３のポリペプチド精製工程の前、又は（ｖ）第３のポリペプチド精製工程の後で、かつ限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程の前、の１つ以上で実施される深層濾過工程を更に含み、それにより、深層濾過工程なしで同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる、方法。
実施形態３８．精製プラットフォームが、第３のポリペプチド精製工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前に実施される、ｐＨ保持工程及びウイルス濾過工程をこの順で更に含む、実施形態３７に記載の方法。
実施形態３９．ウイルス濾過工程が、ウイルスフィルタによる処理を含む、実施形態３８に記載の方法。
実施形態４０．精製プラットフォームが、以下：（ｉ）第３のポリペプチド精製工程の後で、かつｐＨ保持工程の前、（ｉｉ）ｐＨ保持工程後で、かつウイルス濾過工程の前、又は（ｉｉｉ）ウイルス濾過工程の後で、かつＵＦＤＦ工程の前の１つ以上において実施される疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）精製工程を更に含む、実施形態３７～３９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４１．組成物の酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４２．組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４３．組成物がポリソルベートを含む、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４４．ポリソルベートが、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、実施形態４３に記載の方法。
実施形態４５．試料処理工程を更に含む、実施形態１～４４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４６．試料が、細胞培養試料であるか、又は細胞培養試料に由来する、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４７．細胞培養試料が宿主細胞を含み、宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である、実施形態４６に記載の方法。
実施形態４８．試料が、宿主細胞又はそれに由来する成分を含む、実施形態１～４７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４９．試料が１つ以上の宿主細胞タンパク質を含み、１つ以上の宿主細胞タンパク質の１つが加水分解酵素である、実施形態１～４８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５０．加水分解酵素が、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである、実施形態４９に記載の方法。
実施形態５１．試料が標的を含み、標的が抗体部分である、実施形態１～５０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５２．抗体部分がモノクローナル抗体である、実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３．抗体部分がヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、実施形態５１又は５２に記載の方法。
実施形態５４．抗体部分が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される、実施形態５１～５３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５５．抗体部分が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、実施形態５１～５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５６．実施形態１～５５のいずれか１つに記載の方法から得られる医薬組成物。
実施形態５７．抗体部分及びポリソルベートを含む、製剤化された抗体部分組成物であって、組成物はポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、組成物の貯蔵寿命が２４ヶ月を超える、製剤化された抗体部分組成物。
実施形態５８．抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物であって、組成物はポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、組成物の貯蔵寿命が、製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示される貯蔵寿命と比較して延長されており、貯蔵寿命が、文書に示される貯蔵寿命と比較して少なくとも６ヶ月延長されている、製剤化された抗体部分組成物。
実施形態５９．抗体部分を含む製剤化された抗体部分組成物であって、製剤化された抗体部分組成物はポリソルベートの分解が低下しており、分解が、製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示された分解と比較して少なくとも約２０％低下している、製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６０．抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物であって、ポリソルベートが、液体組成物の貯蔵中に年間２０％以下分解される、製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６１．抗体部分がモノクローナル抗体である、実施形態５７～６０のいずれか１つに記載の製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６２．抗体部分がヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、実施形態５７～６１のいずれか１つに記載の製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６３．抗体が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗ＩＸ因子抗体、抗Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される、実施形態５７～６２のいずれか１つに記載の製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６４．抗体部分が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、実施形態５７～６３のいずれか１つに記載の製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６５．ポリソルベート加水分解活性速度が、少なくとも約２０％低下される、実施形態５７～６４のいずれか１つに記載の製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６６．ポリソルベートが、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、実施形態５７～６５のいずれか１つに記載の製剤化された抗体部分組成物。
実施形態６７．精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに（ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが１つ以上の深層濾過工程を更に含み、１つ以上の深層濾過工程が、捕捉工程の前に、捕捉工程の後に、又は捕捉工程の後で精製工程の前のいずれか１つ以上において実施され、各深層濾過工程が深層フィルタによる処理を含み、深層フィルタが、（ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、（ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに（ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトからなる群から選択される材料を含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の酵素加水分解活性速度が低下する、方法。
実施形態６８．酵素加水分解活性速度が酵素ポリソルベート加水分解活性速度である、実施形態６７に記載の方法。
実施形態６９．深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物の酵素加水分解活性速度の相対的低下が少なくとも約２０％である、実施形態６７又は６８に記載の方法。
実施形態７０．精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに（ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが１つ以上の深層濾過工程を更に含み、１つ以上の深層濾過工程が、捕捉工程の前、捕捉工程の後で精製工程の前、又は精製工程の後のいずれか１つ以上において実施され、各深層濾過工程が深層フィルタによる処理を含み、深層フィルタが、（ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、（ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに（ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトからなる群から選択される材料含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物の１つ以上の加水分解酵素のレベルが低下する、方法。
実施形態７１．１つ以上の加水分解酵素がポリソルベートを加水分解することができる、実施形態７０に記載の方法。
実施形態７２．深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下が少なくとも約２０％である、実施形態７０又は７１に記載の方法。
実施形態７３．精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減させるための方法であって、試料を、（ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに（ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む精製工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、精製プラットフォームが１つ以上の深層濾過工程を更に含み、１つ以上の深層濾過工程が、捕捉工程の前に、捕捉工程の後に、又は捕捉工程の後で精製工程の前のいずれか１つ以上において実施され、各深層濾過工程が深層フィルタによる処理を含み、深層フィルタが、（ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、（ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに（ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトからなる群から選択される材料を含み、それにより、１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較して、組成物中のポリソルベートの分解を低減させる、方法。
実施形態７４．深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した試料の精製と比較した、組成物中のポリソルベートの分解の相対的低減が、少なくとも約５％である、実施形態７３に記載の方法。
実施形態７５．シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタが、シリカ濾過助剤及びポリアクリル系繊維パルプを含む、実施形態６７～７４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７６．ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタが、ヒドロゲルＱ官能化不織布材料及び９ゾーン微多孔膜を含む４つの層を備える、実施形態６７～７４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７７．セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトを含む深層フィルタが２つの層を含み、各層がセルロースフィルタマトリックスを含み、セルロースフィルタマトリックスが１つ以上の珪藻土又はパーライトを含む濾過助剤で含浸され、各層が樹脂バインダーを更に含む、実施形態６７～７４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７８．深層フィルタが、深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて選択される、実施形態６７～７７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７９．深層フィルタに入る溶液が約５～約６．５である場合に、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタが選択される、実施形態７８に記載の方法。
実施形態８０．深層フィルタに入る溶液が約７～約８．５である場合に、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタが選択される、実施形態７８に記載の方法。
実施形態８１．深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて深層フィルタを選択する工程を更に含む、実施形態６７～８０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８２．精製プラットフォームが、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程、プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、並びに精製工程をこの順で含む、実施形態６７～８１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８３．精製工程が、ＨＩＣによる処理を含む、実施形態８２に記載の方法。
実施形態８４．ＨＩＣがフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーである、実施形態８３に記載の方法。
実施形態８５．精製工程が、陽イオン交換クロマトグラフィーによる処理を含む、実施形態８２に記載の方法。
実施形態８６．陽イオン交換クロマトグラフィーがＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳである、実施形態８５に記載の方法。
実施形態８７．精製プラットフォームが、シリカ及びポリアクリル系繊維を含む深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程を更に含み、第２の深層濾過工程が、捕捉工程の後で、かつ精製工程の前に実施される、実施形態６７～８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８８．精製工程が、マルチモーダルクロマトグラフィーによる処理を含む、実施形態８２に記載の方法。
実施形態８９．マルチモーダルクロマトグラフィーがＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅである、実施形態８８に記載の方法。
実施形態９０．精製プラットフォームが、ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程を更に含み、第２の深層濾過工程が、捕捉工程の後で、かつ精製工程の前に実施される、実施形態８８又は８９に記載の方法。
実施形態９１．精製プラットフォームが、試料からの標的の精製のためのものであり、試料が標的及び１つ以上の宿主細胞不純物を含む、実施形態６７～９０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９２．標的がポリペプチドを含む、実施形態９１に記載の方法。
実施形態９３．宿主細胞不純物が宿主細胞タンパク質である、実施形態９１又は９２に記載の方法。
実施形態９４．精製プラットフォームがウイルス不活化工程を更に含み、ウイルス不活化工程が捕捉工程の後に実施される、実施形態６７～９３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９５．１つ以上の深層濾過工程がウイルス不活化工程の後に実施される、実施形態９４に記載の方法。
実施形態９６．精製プラットフォームが限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程を更に含み、ＵＦＤＦ工程が精製工程の後に実施される、実施形態６７～９５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９７．組成物の酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む、実施形態６７～９６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９８．組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む、実施形態６７～９７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９９．組成物がポリソルベートを含む、実施形態６７～９８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１００．ポリソルベートが、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、実施形態９９に記載の方法。
実施形態１０１．試料処理工程を更に含む、実施形態６７～１００のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０２．試料が、細胞培養試料であるか、又は細胞培養試料に由来する、実施形態６７～１０１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０３．細胞培養試料が宿主細胞を含み、宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である、実施形態１０２に記載の方法。
実施形態１０４．試料が、宿主細胞又はそれに由来する成分を含む、実施形態６７～１０３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０５．試料が１つ以上の宿主細胞タンパク質を含み、１つ以上の宿主細胞タンパク質の１つが加水分解酵素である、実施形態６７～１０４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０６．加水分解酵素が、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである、実施形態１０５に記載の方法。
実施形態１０７．試料が標的を含み、標的が抗体部分である、実施形態６７～１０６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０８．抗体部分がモノクローナル抗体である、実施形態１０７に記載の方法。
実施形態１０９．抗体部分がヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、実施形態１０７又は１０８に記載の方法。
実施形態１１０．抗体部分が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗第Ｄ因子抗体、抗第ＩＸ因子抗体、抗第Ｘ因子抗体、抗ａｂｅｔａ抗体、抗タウ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質、及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される、実施形態１０７～１０９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１１．抗体部分が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、実施形態１０７～１１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１２．実施形態６７～１１１のいずれか１つに記載の方法から得られる医薬組成物。
当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲及び趣旨内で可能であることを認識するだろう。本開示は、以下の実施例によって更に説明されるが、これらの実施例は、本開示の範囲又は趣旨を、そこに記載されている特定の手順に限定するものと解釈されるべきではない。
実施例１
この実施例は、抗体、トラスツズマブを未調整バルクから精製するための２つの精製プラットフォーム間の比較を、以下を使用して実証する。（１）一般的な精製プラットフォーム、（２）アフィニティクロマトグラフィーからの溶出液を調整した後、陽イオン交換（ＣＥＸ）クロマトグラフィーの前に実施した追加のＰＤＤ１深層濾過工程を含む同一の精製プラットフォーム。
一般的な精製プラットフォーム（１）を２連で実施し、以下の連続工程からなった：アフィニティクロマトグラフィー、溶出液コンディショニング、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、並びに陰イオン交換クロマトグラフィーから得られたプールの接線流濾過及びコンディショニング。精製プロセスのプール名及びプールの説明は、表１において以下の通りであった。
Figure 2022531317000001
ＰＤＤ１深層濾過工程（２）を追加した精製プラットフォームを２連で実施した。未調整バルクレベルでのポリソルベート加水分解活性を、遊離脂肪酸質量分析法（ＦＡＭＳ）によって比較し、その方法論を、材料及び方法の節でより詳細に開示する。
深層濾過工程を含む精製プラットフォームについては、アフィニティクロマトグラフィーの後で、ＰＤＤ１深層フィルタ（Ｐａｌｌ ＰＤＤ１；ＳＵＰＲＡｃａｐ（商標）－５０ ＳＣ０５０ＰＤＤ１（ロット：１０２９９２５８３）；面積：２２ｃｍ２）でフィルタにかける前に溶出液をコンディショニングした。ＰＤＤ１深層フィルタをＣＥＸ平衡化緩衝液を用いて平衡化した。コンディショニングされたアフィニティプールの濾過を圧力制御した。濾過工程を周囲温度（１５℃～３０℃）で行った。トラスツズマブをＰＤＤ１フィルタに流した。使用前及び濾過後に、ＰＤＤ１深層フィルタをＣＥＸ平衡化緩衝液で洗い流した。ＰＤＤ１深層フィルタは各使用後に廃棄した。ＣＥＸ平衡化緩衝液の許容範囲は以下の通りであった：０．０２０～０．０４０Ｍ ＭＥＳ（２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸）、０．０４２～０．０４８Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ５．５０～５．７０、及び導電率５．１０～５．７０ｍＳ／ｃｍ。ＰＤＤ１深層フィルタの操作条件は表２の通りとした。
Figure 2022531317000002
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦクロマトグラフィー）を結合溶出モードで行った。陽イオン交換工程は、抗体凝集体、抗体変異体、ＣＨＯ ＨＣＰ不純物、ＤＮＡ、浸出プロテインＡ、及び他のプロセス関連不純物のレベルを低下させる。抗体電荷変異体を漸増塩化ナトリウム濃度の勾配でカラムから洗浄し、段階溶出を用いてトラスツズマブを溶出する。全てのクロマトグラフィー工程を、周囲温度（１５℃～３０℃）で行う。
陽イオン交換カラムにロードする前に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）塩基でｐＨを５．５±０．３に調整することによってアフィニティプールをコンディショニングした。プールを過剰に滴定した場合、プールをクエン酸で特定のｐＨに調整し、続いて高度に精製された水（必要な場合）の添加によって導電率を３．５±１．０ ｍＳ／ｃｍに調整した。陽イオン交換カラムを平衡化緩衝液で平衡化し、コンディショニングされたアフィニティプールでロードした。ローディング後、カラムを平衡化緩衝液で洗浄し、次いで、伝導率を増加させる勾配洗浄を行い、続いて再び平衡化緩衝液で洗浄した。トラスツズマブを溶出緩衝液による段階溶出によってカラムから溶出した。溶出液の回収を開始し、吸光度及び体積に基づいて終了した。
ＣＥＸ平衡化緩衝液の許容範囲は以下の通りであった：０．０２０～０．０４０Ｍ ＭＥＳ、０．０４２～０．０４８Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ５．５０～５．７０、及び導電率５．１０～５．７０ｍＳ／ｃｍ。溶出緩衝液の許容範囲は以下の通りであった：０．０２０～０．０４０Ｍ ＭＥＳ、０．０９２～０．０９８Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ５．５０～５．７０、及び導電率１０．１０～１０．８０ｍＳ／ｃｍ。陽イオン交換クロマトグラフィーの操作条件は表３の通りであった。
Figure 2022531317000003
ａＧｒａｍｓトラスツズマブ／リットルのＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）陽イオン交換樹脂。
陰イオン交換クロマトグラフィー（Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィー）をフロースルーモードで行い、ＣＨＯ ＨＣＰ、ＤＮＡ、プロテインＡ及び潜在的ウイルスを減少させた。使用されるロード及び洗浄条件下では、トラスツズマブはカラムを通って流れる。全てのクロマトグラフィー工程を、周囲温度（１５℃～３０℃）で行う。
陽イオン交換プールのｐＨは、Ｔｒｉｓ塩基、必要に応じてＭＥＳでｐＨ８．０±０．５に調整し、導電率は高純度水で５．５～７．８ｍＳ／ｃｍに調整した。陰イオン交換カラムを平衡化緩衝液で平衡化し、次いで、ｐＨ調整陽イオン交換プールでロードした。ロードが完了した後、カラムを平衡化緩衝液で洗浄した。プール（Ｐｏｏｌｉｎｇ）は、吸光度及び体積に基づいた。陰イオン交換プールのｐＨを酢酸で６．０±０．１に調整した。
平衡化緩衝液の許容範囲は以下の通りであった：０．０１５～０．０３５Ｍ Ｔｒｉｓ、０．０２５～０．０７５Ｍ ＮａＣｌ及びｐＨ７．５～８．５。陽イオン交換クロマトグラフィーの操作条件は表４の通りであった。
Figure 2022531317000004
コンディショニングされた陰イオン交換プールの接線流濾過（ＴＦＦ）を、濃縮及びダイアフィルトレーションのために行った。コンディショニングされていないバルクについて３０±５ ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度を達成するために、コンディショニングされた陰イオン交換プールを、３０ ｋＤａのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜を装備したＴＦＦデバイスによって濃縮した。続いて、ヒスチジンを含む溶液を添加することによって、緩衝液組成を条件を満たすように調整した。
使用前に、限外濾過膜をダイアフィルトレーション緩衝液で平衡化した。コンディショニングされた陰イオン交換プールを１０～５０ｇ／Ｌの中間濃度に濃縮し、ＴＦＦユニットにおいて最低８プール体積のダイアフィルトレーション緩衝液を用いてダイアフィルトレーションを行った。続いて、対応する量のコンディショニング緩衝液を添加することによって、緩衝液組成を０．０２ｍｏｌ／Ｌヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、ｐＨ５．３±０．２に調整した。必要に応じてダイアフィルトレーション緩衝液の添加によりタンパク質濃度を３０±５ ｍｇ／ｍＬに調整した。
ダイアフィルトレーション緩衝液は、０．０２ ｍｏｌ／Ｌヒスチジン／ヒスチジン－ＨＣｌ、ｐＨ ５．３±０．２であった。陽イオン交換クロマトグラフィーの操作条件は表５の通りであった。
Figure 2022531317000005
陽イオン交換クロマトグラフィーロード組成物中の宿主細胞タンパク質の量を測定し、結果を表６に提供する。一般的な精製プラットフォームと比較して、宿主細胞タンパク質のレベルの低下が、ＰＤＤ１深層フィルタを有する精製プラットフォームの両方の複製物について観察された。
Figure 2022531317000006
ダイアフィルトレーションによるコンディショニング後のＴＦＦプール中の宿主細胞タンパク質の量を測定し、結果を表７に示す。一般的な精製プラットフォームと比較して、宿主細胞タンパク質のレベルの低下が、ＰＤＤ１深層フィルタを有する精製プラットフォームの両方の複製物について観察された。
Figure 2022531317000007
ダイアフィルトレーションによるコンディショニング後のＴＦＦプール中の加水分解活性を測定し、結果を図２に提供する。加水分解活性を、最終トラスツズマブ濃度６ｇ／Ｌで、４０℃、０．０４％（ｗ／ｖ）ＳＲ－ＰＳ２０、１０ｍＭメチオニン、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０のＦＡＭＳを使用して測定した。一般的な精製プラットフォームの複製物と比較して、遊離脂肪酸の量によって間接的に測定される酵素加水分解活性速度の減少が、ＰＤＤ１深層フィルタを有する精製プラットフォームの両方の複製について観察された（図２）。
材料及び方法
タンパク質濃度の決定．タンパク質濃度を、Ｃａｒｙ（登録商標）５０ ＵＶ－Ｖｉｓ分光光度計（Ｖａｒｉａｎ）又はＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）ＯｎｅＣ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のいずれかを使用するＵＶ分光法によって決定した。タンパク質試料をそれぞれの緩衝液で希釈し、二連として測定した。ランベルト・ベールの法則から導き出される以下の式に従って濃度を決定した：ｃ＝（Ａ２８０ｎｍ～Ａ３２０ｎｍ）／ε・ｄ・Ｆ、タンパク質濃度［ｍｇ／ｍｌ］、吸光度、ε吸光係数［ｍｌ／（ｍｇ・ｃｍ）］、ｄ細胞長［ｃｍ］及びＦ希釈係数。トラスツズマブ、ファリシマブ及びＦＡＰ－ＩＬ２ｖの具体的な吸光係数は、１．４８、１．７及び１．３５ｍｌ／（ｍｇ・ｃｍ）である。
リパーゼ活性アッセイ（ＬＥＡＰアッセイ）．リパーゼ活性アッセイは、基質エステル結合の切断による非蛍光基質（４－ＭＵ、Ｃｈｅｍ Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔ’ｌ Ｉｎｃ）の蛍光生成物（ＭＵ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）への変換をモニターすることによってリパーゼ活性を測定した。分析対象のタンパク質プール試料を、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍｌ遠心フィルタユニット（１０，０００Ｄａカットオフ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用することによって１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ ｐＨ８．０に再緩衝化した。アッセイ反応混合物は、８０μＬの反応緩衝液（１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ ｐＨ８．０、０．２５％（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００及び０．１２５％（ｗ／ｖ）アラビアガム）、１０μＬの４－ＭＵ基質（ＤＭＳＯ中１ｍＭ）、及び１０μＬのタンパク質プール試料を含んでいた。タンパク質プール試料濃度を１０～３０ｇ／Ｌに調整し、３つの異なる濃度で試験した。各反応を９６ウェル半面積ポリスチレンプレート（蓋付き黒色透明平底、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）に３回の技術的反復でセットアップし、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ ２００Ｐｒｏプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）において反応プレートを３７℃で２時間インキュベートすることによって蛍光シグナル（３５５ｎｍで励起、４６０ｎｍで発光）の増加を１０分ごとにモニターした。ＭＵ生成速度を、蛍光時間経過（０．５時間～２時間）の傾きから求め、反応の生の速度（ｋｒａｗ［ＲＦＵ／ｈ］）を表す。
酵素ブランク反応をさらに設定して、緩衝マトリックスによって引き起こされる基質の非酵素的切断を測定した。１０μＬのタンパク質プール試料を、反応混合物中の１０μＬの１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ ｐＨ８．０に置き換えた。自己開裂速度（ｋｓｅｌｆ開裂［ＲＦＵ／ｈ］）を、蛍光の時間経過（０．５時間～２時間）の傾きから求めた。蛍光シグナル（ＲＦＵ）をμＭのＭＵに変換するために、標準的なＭＵ ３連をプレートごとに添加した。１０μＬのＭＵ（ＤＭＳＯ中１００μＭ）に、１０μＬの１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌ ｐＨ８．０及び８０μＬの反応緩衝液を補充した。変換係数ａ［ＲＦＵ／μＭ］は、蛍光シグナル（０．５時間～２時間）を平均し、ウェル中に存在するＭＵの最終濃度で割ることによって計算した。
試料の反応速度（ｋｒａｗ［ＲＦＵ／ｈ］）から酵素ブランクの反応速度（ｋｓｅｌｆ－切断［ＲＦＵ／ｈ］）を差し引き、項を変換係数ａ［ＲＦＵ／μＭ］で割ることによって蛍光シグナルをμＭ ＭＵ／ｈに変換することにより、［μＭ ＭＵ／ｈ］で示される試料のリパーゼ活性を決定した。活性を、ウェルあたりに適用されたタンパク質濃度に対して正規化した。加水分解活性をパーセントで報告するために、参照試料のリパーゼ活性を１００％に設定した。
遊離脂肪酸及び質量分析（ＦＡＭＳ）アッセイ．それぞれの溶出画分中のＰＳ２０分解後の遊離脂肪酸の含有量をモニターするため、最初にＰＳ２０安定性研究用に試料を調製し、続いて質量分析によって分析した。特に明記しない限り、タンパク質プール試料を、０．０４％（ｗ／ｖ）ＳＲ－ＰＳ２０、１０ｍＭ Ｌ－メチオニン及び１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８を含有する同じタンパク質濃度（それぞれの実験の説明に示される通り）に調整した。実験の時間経過中にＰＳ２０の酸化分解を制御するための効率的な酸化防止剤としてＬ－メチオニンを添加した。緩衝液対照試料として、適用したタンパク質体積を同じ体積の対応する溶出緩衝液系で置き換えた。
全ての反応混合物を、Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）中、３７℃又は４０℃のいずれかで、６００ｒｐｍで振盪しながらインキュベートした。試料を規定の時点（それぞれの図に示す）の後に取り出し、その後の分析まで－８０℃で保存した。
５０μＬの試料を新しいエッペンドルフカップに移した。２００μＬのＦＦＡ溶解溶液（アセトニトリル中５００ ｎｇ／ｍＬのＤ２３ラウリン酸及び５００ ｎｇ／ｍＬの１３Ｃ１４－ミリスチン酸）を添加し、短時間ボルテックスした。試料を１４．０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＭＳ分析のためＨＰＬＣバイアルに移した。５μＬの注入試料からの脂肪酸の分離を、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）Ｐｅｐｔｉｄｅ ＢＥＨ Ｃ１８カラム（１．７μｍ ２．１×１５０ｍｍ及び３００Ａ）を使用してＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）Ｖａｎｑｕｉｓｈ（商標）ＵＨＰＬＣシステムで行った。溶離液Ａ（０．１％水酸化アンモニウム水溶液）及び溶離液Ｂ（１００％アセトニトリル）を０．３ｍＬ／分の流速及び６０℃のカラム温度で以下の勾配に使用した。初期条件は７０％溶離液Ｂであった。勾配を０．２分から５．５分まで直線的に変化させ、溶離液Ａを１００％まで増加させ、６．０まで保持した。溶離液Ｂを６．１分で７０％に設定し、平衡化のために１０．０分まで保持した。質量分析計（Ｔｒｉｐｌｅ ＴＯＦ（登録商標）６６００，ＡＢ Ｓｃｉｅｘ）を－４５００Ｖのイオンスプレー電圧で負イオン化モードで操作した。ソース温度を４５０℃に設定し、ＴＯＦ質量範囲を１００～１０００ｍ／Ｚとした。減衰電位は－１２０Ｖ、衝突エネルギーは－１０Ｖであった。
ラウリン酸、ミリスチン酸、及び同位体標識された（Ｄ２３）－ラウリン酸及び（１３Ｃ１４）ミリスチン酸の質量に対するＸＩＣを生成した。それぞれのピークを積分し、ラウリン酸とＤ２３－ラウリン酸との間のピーク面積比、並びにミリスチン酸と１３Ｃ１４－ミリスチン酸との間の比を決定した。ピーク面積比を使用して、試料中のラウリン酸及びミリスチン酸の濃度を計算した。測定を２連で行った。ＦＦＡ（ラウリン酸（ＬＡ）及びミリスチン酸（ＭＡ））の量をパーセントで報告するため、参照試料の量を１００％に設定した。
実施例２
この実施例は、以下を使用する、抗体であるトラスツズマブを精製するための３つのプラットフォーム間の比較を実証する：（１）一般的な精製プラットフォーム、（２）アフィニティクロマトグラフィーからの溶出液を調整した後、陽イオン交換（ＣＥＸ）クロマトグラフィーの前に実行されるＰＤＤ１深層濾過工程を追加した一般的な精製プラットフォーム、（３）アフィニティクロマトグラフィーからの溶出液を調整した後、陽イオン交換（ＣＥＸ）クロマトグラフィーの前に実施したＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程を追加した一般的な精製プラットフォーム。
一般的な精製プラットフォーム（１）は、以下：アフィニティクロマトグラフィー、溶出液コンディショニング、陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、及び接線流濾過、並びに陰イオン交換クロマトグラフィーから得られたプールのコンディショニングからなっていた。
深層濾過工程を含む精製プラットフォームについては、アフィニティクロマトグラフィーの後で、深層フィルタを通してフィルタにかける前に溶出液をコンディショニングした。使用したＰＤＤ１深層フィルタは、Ｐａｌｌ ＰＤＤ１、ＳＵＰＲＡｃａｐ（商標）－５０ ＳＣ０５０ＰＤＤ１（ロット１０２９９２５８３）、面積：２２ｃｍ２であった。使用したＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタは、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ Ｈｙｂｒｉｄ（ロット：Ｓ２１０６５０３０２）、面積：２５ｃｍ２であった。トラスツズマブは、深層フィルタを通って流れる。濾過工程を周囲温度（１５℃～３０℃）で行う。
使用前に、陽イオン交換平衡緩衝液を用いて深層フィルタを平衡化した。コンディショニングされたアフィニティプールの濾過はフロー制御されている。濾過後にすすぎは行わなかった。これにより、宿主細胞タンパク質（酵素）の実際の減少を調べることができる。各使用後にフィルタを廃棄した。ＣＥＸ平衡化緩衝液の許容範囲は以下の通りであった：０．０２０～０．０４０Ｍ ＭＥＳ、０．０４２～０．０４８Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ５．５０～５．７０、及び導電率５．１０～５．７０ ｍＳ／ｃｍ。深層フィルタの操作条件は表８の通りとした。
Figure 2022531317000008
陽イオン交換クロマトグラフィーロード組成物中の宿主細胞タンパク質の量を測定し、結果を表９に提供する。実施例１に従ってタンパク質濃度の測定を行った。一般的な精製プラットフォームと比較して、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタを備えた精製プラットフォームとＰＤＤ１深層フィルタを備えた精製プラットフォームの両方で、宿主細胞タンパク質のレベルの低下が観察された。
Figure 2022531317000009
一般的なプラットフォーム（アフィニティクロマトグラフィー後、深層濾過なし、参照）の陽イオン交換クロマトグラフィーロードのリパーゼ活性を、アフィニティクロマトグラフィー後の追加の深層濾過工程を含む対応する陽イオン交換クロマトグラフィーロード（図３）と比較した。リパーゼ活性アッセイは実施例１に従って実施した。
一般的なプラットフォーム（アフィニティクロマトグラフィー後、深層濾過なし、参照）の陽イオン交換クロマトグラフィーロードの加水分解活性を、アフィニティクロマトグラフィー後の追加の深層濾過工程を含む対応する陽イオン交換クロマトグラフィーロード（図４）と比較した。ＦＡＭＳ分析を実施例１に従って行った。加水分解活性を、４０℃、０．０４％（ｗ／ｖ）ＳＲ－ＰＳ２０、１０ｍＭメチオニン、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０及び４．８ｇ／Ｌの最終トラスツズマブ濃度でＦＡＭＳを使用して測定した。リパーゼ活性アッセイによって測定される酵素加水分解活性速度の減少（図３）及びＦＡＭＳアッセイにおけるＦＡＡの量の減少（図４）が、一般的な精製プラットフォームと比較して、深層フィルタを含む両方の精製プラットフォームについて観察された。
実施例３
この実施例は、滅菌前にＨＣＣＦ（回収細胞流体）に対して実施される深層濾過工程、及びアフィニティクロマトグラフィー（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＦｃＸＬ）の後に実施される第２の深層フィルタ工程を用いる、抗ＶＥＧＦ／Ａｎｇ２抗体を精製するための精製プラットフォームの使用を実証する。使用した精製プラットフォームを図５に詳述する。参照対照は、ＨＣＣＦの追加の深層濾過工程なしで図示される精製プロセスを使用して実施された（図５）。
図５に示すように、潜在的な宿主細胞タンパク質を除去するように設計された３つの異なる深層フィルタを通してＨＣＣＦをフィルタにかけた。抗体はフィルタを通って流れる。濾過工程を周囲温度（１５℃～３０℃）で行う。
使用前に、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ Ｈｙｂｒｉｄ（ロット：Ｓ２２８５８５７０２）、面積：２５ｃｍ２）、ＶＲ０２（ＢｉｏＣａｐ＿ＶＲ０２（ロット：３９２３４５２）、面積：２５ｃｍ２）及び１２０ＺＢ（ＢｉｏＣａｐ＿１２０ＺＢ（ロット：３９２３４５２）、面積：２５ｃｍ２）にはアフィニティ平衡緩衝液を使用し、ＰＤＤ１（ＳＵＰＲＡｃａｐ（商標）－５０ ＳＣ０５０ＰＤＤ１（ロット：１０３１１９４２９）、面積：２２ｃｍ２）には陽イオン交換平衡緩衝液を使用して、３つの深層フィルタを平衡化した。ＨＣＣＦの濾過を圧力制御した（フィード圧力＝０．２ＭＰａ；最大供給フロー：２５ｍＬ／分）。コンディショニングされたアフィニティプールの濾過はフロー制御されている（供給フロー＝５．２ｍｌ／分；圧力制御：０．２ＭＰａ）。濾過後、フィルタを生成物回収のために同じ緩衝液で洗い流した。各使用後にフィルタを廃棄した。平衡化緩衝液を表１０に提供する。
Figure 2022531317000010
ＰＤＤ１フィルタフラッシュを、２００ｍＬ（約９０Ｌ／ｍ２）の注射用水を用いて行った。ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）フィルタフラッシュを、２００ｍＬ（約９０Ｌ／ｍ２）のＣ１平衡化緩衝液を使用して行った。フィルタにかけたＨＣＣＦの容量は１７５０ｍＬ（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）については約７００Ｌ／ｍ２）であった。
ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＦｃＸＬの操作条件は、表１１の通りとした。
Figure 2022531317000011
宿主細胞タンパク質ロード量を精製プラットフォームの様々な時点（図５を参照されたい）で測定し、結果を表１２に示す。
Figure 2022531317000012
加水分解活性を、実施例１に記載のリパーゼ活性アッセイによって測定した。種々の精製プラットフォームのＦｃＸＬ溶出液の酵素加水分解活性速度の低下が、追加の深層フィルタなしの一般的な精製プラットフォーム（図６Ａ）と比較して、試験した深層フィルタのいずれか（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）、ＶＲ０２、１２０ＺＢ）で観察された。種々の精製プラットフォームのＰＤＤ１濾液の酵素加水分解活性速度の低下が、追加の深層フィルタなしの一般的な精製プラットフォーム（図６Ｂ）と比較して、試験した深層フィルタのいずれか（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）、ＶＲ０２、１２０ＺＢ）で観察された。
抗体を精製するための２つの精製プラットフォームを強陽イオン交換クロマトグラフィープールと比較するために、ＦＡＭＳアッセイを行った：（１）一般的な精製プラットフォーム、（２）アフィニティクロマトグラフィーの前に実施された追加の１２０ＺＢ深層濾過工程を含む同一の精製プラットフォーム。一般的な精製プラットフォームは、以下の連続工程からなった：アフィニティクロマトグラフィー、溶出液コンディショニング、深層濾過、マルチモーダル陰イオン交換クロマトグラフィー、強陽イオン交換クロマトグラフィー及び接線流濾過。ＦＡＭＳアッセイを実施例１及び以下の条件に従って実施した：３７℃、０．０４％（ｗ／ｖ）ＳＲ－ＰＳ２０、１０ｍＭメチオニン、１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０、最終抗体濃度５０ｇ／Ｌ。遊離脂肪酸の量によって測定される酵素加水分解活性速度の減少が、一般的な精製プラットフォームと比較して、１２０ＺＢ深層フィルタを備えた精製プラットフォームで観察された（図７）。
実施例４
この実施例は、コンディショニングされたアフィニティクロマトグラフィー（プロテインＡクロマトグラフィー）溶出液をフィルタにかけるための、２つの異なる深層フィルタ（Ｘ０ＳＰ又はＰＤＤ１）を組み込んだ抗ＦＡＰ－ＩＬ２ｖを精製するための精製プラットフォームの比較を実証する。
実施例１に記載されるように、ＨＣＣＦ試料を調製し、フィルタにかけた。
一般的なプラットフォーム（深層濾過なし）のプロテインＡクロマトグラフィー溶出液のリパーゼ活性を、プロテインＡクロマトグラフィー溶出液に対して実施したＸ０ＳＰ又はＰＤＤ１深層濾過工程のいずれかを有する精製プラットフォームを含む深層濾過のアフィニティクロマトグラフィー溶出液と比較した。リパーゼ活性アッセイを実施例１に従って実施した。Ｘ０ＳＰ深層フィルタから得られた画分のリパーゼ活性の結果を図８Ａに示す。ＰＤＤ１深層フィルタから得られたリパーゼ活性の結果を図８Ｂに示す。
実施例５
この実施例は、精製プラットフォームから得られた抗体部分組成物中のポリソルベートの加水分解を最小限に抑える選択肢を見出すために実施された様々な抗体部分の精製のための精製最適化実験を実証する。本明細書に開示される実験は、タンパク質Ａ及び第２のクロマトグラフィーカラムのロードフィルタとしてのＥＭＰＨＡＺＥ（商標）等の深層フィルタ、並びに後続のウイルス濾過工程に対する研磨カラム溶出プールフィルタ又はロードフィルタとしてのＨＩＣ媒体（ＳＡＲＴＯＢＩＮＤ（登録商標）フェニルメンブレン）の包含を評価する。
ポリソルベート分解に関与する加水分解酵素を除去又は低減する可能性を、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）及びＸ０ＳＰを含むいくつかの深層フィルタについて評価した。ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）フィルタの組み込みを、一般的なｍＡｂ精製プロセスフローにおいて２つの処理レベルで評価した。第１の選択肢は、プロテインＡクロマトグラフィーの前のプロテインＡロードフィルタであり、プロテインＡカラムにロードする前にＨＣＣＦをフィルタにかける。表１３に要約されるように、相対加水分解活性は、プロテインＡクロマトグラフィーの前にＨＣＣＦをフィルタにかけると、一般的な精製プロセスと比較して４０％を超えて低下する。
Figure 2022531317000013
ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）で達成されたポリソルベート（ｐｏｌｙｌｏｂａｔｅ）分解の減少が宿主細胞タンパク質単独の減少と関連していなかったことを実証するために、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）処理量の増加時のＨＣＣＦ試料をプロテインＡで精製し、プールをＣＨＯＰ及びポリソルベート分解活性の両方について分析した。図９に示すように、ＣＨＯＰ値の減少はＥＭＰＨＡＺＥ（商標）濾過処理量に依存したが、ポリソルベート分解速度の有意な減少は比較的一定であった。対照と比較して達成されたポリソルベート分解比活性の有意な減少は、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）清澄化処理量の増加を伴う対照とほぼ同じ高さのＣＨＯＰ値の連続的な増加にもかかわらず、８００Ｌ／ｍ２処理量まで比較的一定のままである。
評価した第２の選択肢は、ウイルス不活化工程の下流のＥＭＰＨＡＺＥ（商標）及びＸ０ＳＰ深層フィルタの配置、又は第２のカラムクロマトグラフィーに対するロードフィルタとしての配置であった。この評価のため、いくつかの分子からのプロテインＡプールをｐＨ５．５又はｐＨ８．０のいずれかに中和し、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）又はＸ０ＳＰで３００Ｌ／ｍ２の処理量でフィルタにかけた。フィルタにかけたプールのポリソルベート加水分解活性を、対照の濾過していない試料と比較した。表１４に要約されるように、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）及びＸ０ＳＰフィルタの両方が、濾過していない対照プールと比較してポリソルベート分解の有意な減少を示した。図１０に示すように、ポリソルベート加水分解活性（プロテインＡプールの抗タウｍＡｂの精製においてリパーゼ活性アッセイを使用して測定される）は、ｐＨ５．５でのＸ０ＳＰ深層フィルタのフィルタ処理量に依存する。
Figure 2022531317000014
ポリソルベート分解を低減するためのアプローチとして、ＨＩＣ膜の使用を評価した。ＨＩＣ膜は、最後のポリペプチドクロマトグラフィーカラム工程（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィー）の後、ウイルス濾過の前に実施されるｐＨ保持工程（例えば、ｐＨ５～６）の後、及び／又はＵＦＤＦ工程の前に実施されるウイルス濾過工程の後に配置することができる。
この試験で評価した一次ＨＩＣ膜は、ＳＡＲＴＯＢＩＮＤ（登録商標）フェニル膜であった。種々のｐＨ値に調整した後の最後のポリペプチドクロマトグラフィープールを、ＳＡＲＴＯＢＩＮＤ（登録商標）メンブレンフィルタでフィルタにかけた。濾過したプールを相対的なポリソルベート分解について分析した。図１１Ａ～１１Ｃに示すように、相対ポリソルベート活性は、対照と比較して有意に減少した。同じデータはまた、活性の低下が膜体積スループットに依存することを示す（図１１Ａ～図１１Ｃ））。具体的には、図１１Ａは、ｐＨ５．５でのオクレリズマブについての異なる処理量でのポリソルベート分解の比活性を示す。図１１Ｂは、ｐＨ５．５でのセリクレルマブの異なる処理量でのポリソルベート分解の比活性を示す。図１１Ｂは、ｐＨ６．５（図１１Ｃ）でのトシリズマブについての異なるスループットでのポリソルベート分解の比活性を示す。
材料及び方法
Ｒｅｓｉｎｓ Ｐｒｏ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＦＦ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（登録商標）ＴＭＡＥ及びセラミックヒドロキシアパタイト樹脂は、それぞれＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ（スウェーデン国ウプサラ）、ＴＯＳＯＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ペンシルバニア州キング・オブ・プロシア）及びＢｉｏ－Ｒａｄ（カリフォルニア州ハーキュリーズ）から購入した。Ａｍｉｃｏｎ遠心フィルタ及びＸ０ＳＰ深層フィルタをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（マサチューセッツ州ベッドフォード）から入手した。ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ深層フィルタを３Ｍ（コネチカット州メリデン）について入手し、ＳＡＲＴＯＢＩＮＤ（登録商標）フェニル膜はＳａｒｔｏｒｉｕｓ（ニューヨーク州ボヘミア）から入手した。４－メチルウンベリフェリルカプリラート、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００及びアラビアガムは、それぞれＲｅｓｅａｒｃｈ Ｏｒｇａｎｃｉｓ（オハイオ州クリーブランド）及びＡｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ（ニュージャージー州ブリッジウォーター）から入手した。リパーゼ活性アッセイで使用した超精製（ＳＲ）グレードのＰＳ２０は、Ｃｒｏｄａ（ニューアーク、ニュージャージー州）製であった。ここで報告された全てのモノクローナル抗体は、ＣＨＯ細胞で発現されたヒト化又はヒトＩｇＧ１であり、Ｒｏｃｈｅ（カリフォルニア州サウスサンフランシスコ又はオーシャンサイド）で産生された。
小規模ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）及び他の深層フィルタのため、２５ｃｍ２サイズのカプセルを使用した。フィルタを最初に２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、２５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．５で１００Ｌ／ｍ２、８ｍｌ／分の流速で洗い流した。平衡化後、ＨＣＣＦ（Ｐｒｏ Ａロード）又は中和プロテインＡ溶出プールのいずれかを８００Ｌ／ｍ２までフィルタにかけた。画分を１００Ｌ／ｍ２ごとに収集し、その後のカラム工程にわたって精製し、ポリソルベート分解活性を測定した。
ＳＡＲＴＯＢＩＮＤ（登録商標）フェニル膜評価のために、３ｍｌサイズのデバイスを使用した。膜を最初に、３０ｍｌの平衡化緩衝液により１５Ｌ／分の流速で洗い流した。平衡化後、最後のクロマトグラフィープールをＳＡＲＴＯＢＩＮＤ（登録商標）フェニル膜でフィルタにかけ、画分を回収し、相対的なポリソルベート（ｐｏｌｙｌｏｂａｔｅ）分解活性についてアッセイした。
全ての小規模クロマトグラフィーの実行を、０．６６ｃｍ×２０ｃｍのカラムで行った。プロテインＡ精製のため、カラムを最初に平衡化緩衝液中で予備平衡化し、ＨＣＣＦを１０～２０ｇ／Ｌ樹脂にロードした。ロード後、カラムを３カラム体積超の平衡緩衝液及び４カラム体積超の洗浄緩衝液で洗浄した。結合したタンパク質を２．５ｍＭ ＨＣｌ ｐＨ２．７又は１５０ｍＭ酢酸で溶出した。０．５ＯＤ～０．５ＯＤの溶出画分を回収し、ｐＨ５に中和し、ポリソルベート分解活性についてアッセイした。
ポリソルベートに類似した構造を有するウンベリフェリル基質におけるエステル結合の切断を追跡することによって、リパーゼ酵素活性を調べた。この研究では、ＤＭＳＯ中の１０μＬの１０ｍＭ ４－メチルウンベリフェリルカプリレートを８０μＬの反応緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、０．４％ Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００及び０．１％アラビアガム）と混合することによって反応混合物を調製した。蛍光励起及び発光波長を、それぞれ３５５ｎｍ及び４６０ｎｍに設定した。蛍光動態を３７℃で２～４時間連続的にモニターした。線形フィッティングを使用して速度論的硬化の初期反応速度を計算することによって各試料のリパーゼ活性を決定し、バックグラウンド加水分解を説明するために緩衝液のみの反応速度について補正した。比活性は、反応速度を試料タンパク質濃度で割ることによって決定される。
タンパク質試料を０．２μｍのフルオロジンシリンジフィルタで滅菌濾過し、２５倍コンディショニング緩衝液（１０ｍＭ酢酸ヒスチジンｐＨ５中２０ｍｇ／ｍＬメチオニン、１％ ｗ／ｖ ＳＲ ＰＳ２０）でスパイクした。添加した試料を無菌条件下でエッペンドルフチューブに分注し、２５℃で最大２０日間インキュベートした。各時点でアリコートを採取し、遊離脂肪酸の抽出が実施されるまで－７０℃で凍結した。
各試料中の遊離脂肪酸を、同位体標識ＦＦＡ内部標準を含有するアセトニトリル溶液によって抽出した。１４０００ｒｐｍで５分間遠心分離した後、上清をガラスインサート付きＨＰＬＣバイアルに移し、測定まで凍結した。Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ３００ Ｃ１８（１．７ｕｍ、２．１×１５０ｍｍ）カラムを備えたＷａｔｅｒｓ ＨクラスＢｉｏ ＵＰＬＣシステムを、ＦＦＡ検出用のＡＢ Ｓｃｉｅｘ ６６００質量分析計と組み合わせて使用した。注入した試料５μＬからの遊離脂肪酸の分離を、水中の５ｍＭ酢酸アンモニウム及び０．１％水酸化アンモニウムを緩衝液Ａとして、１００％アセトニトリルを緩衝液Ｂとして用いて、流速０．３ｍＬ／分、カラム温度６０℃で行った。この方法を７０％緩衝液Ｂで０．２分間開始し、続いて５．３分間かけて１００％Ｂまで勾配をかけ、次いで０．１分で７０％Ｂに戻し、７０％Ｂで３．９分間平衡化した。質量分析計を、－４５００Ｖのイオンスプレー電圧で負イオン化モードで操作した。ソース温度を４５０℃に設定し、ＴＯＰ質量範囲を１００～１０００ｍ／ｚとした。デクラスタリング電位は－１２０Ｖ、衝突エネルギーは－１０Ｖであった。線形範囲のＦＦＡの蓄積を線形回帰に適合させて、初期加水分解速度を計算した。
全てのインプロセス試料中の宿主細胞タンパク質を社内のＣＨＯタンパク質（ＣＨＯＰ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定し、ＤＮＡを社内のｑＰＣＲ法によって定量した。
実施例６
この実施例は、抗体精製のための以下の２つの精製プラットフォーム間の比較を実証し、精製プラットフォームは以下を含む：（１）１２０ＺＢ１０Ａ深層フィルタを用いた ＨＣＣＦの深層濾過、続くプロテインＡクロマトグラフィー、又は（２）ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ深層フィルタを用いたＨＣＣＦの深層濾過、続くプロテインＡクロマトグラフィー。
３つの異なる抗体部分（ＡＭ１、ＡＭ２、及びＡＭ３）の発現のための３つの異なる細胞培養物から採取した細胞培養液（ＨＣＣＦ）を個々に収集した。１２０ＺＢ１０Ａ深層濾過工程を有する精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（１））については、各ＨＣＣＦプールを１２０ＺＢ１０Ａ層濾過（３００Ｌ／ｍ２）に別々に供し、次いでプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィー後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＦＡＭＳを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。プロテインＡクロマトグラフィー後のアリコートの測定された特定のＦＡＭＳ率を図１２に示す。ＨＣＣＦプールのアリコート（深層濾過の前）を使用して、対照測定値を得た。
ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ深層濾過工程を有する精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（２））については、各ＨＣＣＦプールをＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ層濾過（３００Ｌ／ｍ２）に別々に供し、次いでプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィー後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＦＡＭＳを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。プロテインＡクロマトグラフィー後のアリコートの測定された特定のＦＡＭＳ率を図１２に示す。ＨＣＣＦプールのアリコート（深層濾過の前）を使用して、対照測定値を得た。
実施例７
この実施例は、抗体精製のための以下の２つの精製プラットフォーム間の比較を実証し、精製プラットフォームは以下を含む：（１）ＨＣＣＦのプロテインＡクロマトグラフィー、続いて活性炭（４０ＣＲ）濾過、続いてＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳを使用する陽イオン交換クロマトグラフィー、又は（２）ＨＣＣＦのプロテインＡクロマトグラフィー、続いてＸ０ＳＰ深層フィルタを用いた深層濾過、続いてフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フローを用いたＨＩＣ。
３つの異なる抗体部分（ＡＭ１、ＡＭ２、及びＡＭ４）の発現のための３つの異なる細胞培養物から採取した細胞培養液（ＨＣＣＦ）を個々に収集した。深層濾過工程を有さない精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（１））については、３つのＨＣＣＦ試料をそれぞれ別々にプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィープールを、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）塩基を用いてｐＨを５．５±０．３に調整することによってコンディショニングし、次いで、コンディショニングしたプールを別々に４０ＣＲ濾過（３００Ｌ／ｍ２）に供し、続いてＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ ＨＳクロマトグラフィーに供した。４０ＣＲ濾過後のプールのアリコート及びＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳ濾過後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＦＡＭＳを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。４０ＣＲ濾過後のプールのアリコート及びＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳクロマトグラフィー後のプールのアリコートについて測定された特定のＦＡＭＳ率を、それぞれ図１３及び図１４に示す。プロテインＡクロマトグラフィープールのアリコート（４０ＣＲ濾過なし）を使用して、対照測定値を得た。
Ｘ０ＳＰ深層濾過工程を有する精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（２））について、３つのＨＣＣＦ試料をそれぞれ別々にプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィープールを、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）塩基を用いてｐＨを５．５±０．３に調整することによってコンディショニングし、次いで、コンディショニングしたプールを別々にＸ０ＳＰ濾過（３００Ｌ／ｍ２）に供し、続いてフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーに供した。Ｘ０ＳＰ濾過後のプールのアリコート及びフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィー後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＦＡＭＳを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。Ｘ０ＳＰ濾過後のプールのアリコート及びフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィー後のプールのアリコートについて測定された特定のＦＡＭＳ率を、それぞれ図１３及び図１４に示す。プロテインＡクロマトグラフィープールのアリコート（Ｘ０ＳＰ深層濾過なし）を使用して、対照測定値を得た。
実施例８
この実施例は、抗体精製のための以下の３つの精製プラットフォーム間の比較を実証し、精製プラットフォームは以下を含む：（１）ＨＣＣＦのプロテインＡクロマトグラフィー、続いて活性炭（４０ＣＲ）濾過、続いてＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅを用いたマルチモーダルクロマトグラフィー、（２）ＨＣＣＦのプロテインＡクロマトグラフィー、続いてＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタを用いた深層濾過、続いてＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅを用いたマルチモーダルクロマトグラフィー、又は（３）ＨＣＣＦのプロテインＡクロマトグラフィー、続いてＰＤＤ１深層フィルタを用いた深層濾過、続いてＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅを使用したマルチモーダルクロマトグラフィー。
３つの異なる抗体部分（ＡＭ１、ＡＭ２、及びＡＭ４）の発現のための３つの異なる細胞培養物から採取した細胞培養液（ＨＣＣＦ）を個々に収集した。深層濾過工程を有さない精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（１））については、３つのＨＣＣＦ試料をそれぞれ別々にプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィープールを、Ｔｒｉｓ塩基を用いてｐＨを８．０±０．５に調整することによってコンディショニングし、次いで、コンディショニングしたプールを４０ＣＲ深層濾過（３００Ｌ／ｍ２）、続いてＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィーに別々に供した。４０ＣＲ濾過後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＬＥＡＰアッセイを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。４０ＣＲ濾過後のプールのアリコートについて測定された特定のＬＥＡＰ率を図１５に示す。プロテインＡクロマトグラフィープールのアリコート（４０ＣＲ濾過なし）を使用して、対照測定値を得た。
ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過工程を有する精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（２））について、３つのＨＣＣＦ試料をそれぞれ別々にプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィープールを、Ｔｒｉｓ塩基を用いてｐＨを８．０±０．５に調整することによってコンディショニングし、次いで、コンディショニングしたプールをＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過（３００ Ｌ／ｍ２）、続いてＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィーに別々に供した。ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＬＥＡＰアッセイを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過後のプールのアリコートについて測定された特定のＬＥＡＰ率を図１５に示す。プロテインＡクロマトグラフィープールのアリコート（ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層濾過なし）を使用して、対照測定値を得た。
ＰＤＤ１深層濾過工程を有する精製プラットフォーム（精製プラットフォーム（３））について、３つのＨＣＣＦ試料をそれぞれ別々にプロテインＡクロマトグラフィーに供した。プロテインＡクロマトグラフィープールを、Ｔｒｉｓ塩基を用いてｐＨを８．０±０．５に調整することによってコンディショニングし、次いで、コンディショニングしたプールをＰＤＤ１深層濾過（３００Ｌ／ｍ２）、続いてＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィーに別々に供した。ＰＤＤ１深層濾過後のプールのアリコートを収集した。アリコートのポリソルベート加水分解活性を、ＬＥＡＰアッセイを使用して測定した（その方法論は、実施例１の材料及び方法の節においてより詳細に開示されている）。ＰＤＤ１深層濾過後のプールのアリコートについて測定された特定のＬＥＡＰ率を図１５に示す。プロテインＡクロマトグラフィープールのアリコート（ＰＤＤ１深層濾過なし）を使用して、対照測定値を得た。
実施例９
この実施例は、ＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＥＰ２０１９／０８６１４に開示されている）を精製するためのワークフローの評価及び比較を実証し、ワークフローは異なるＣ１深層フィルタを使用し、続いてＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉｓｔａｋ＋（登録商標）ＨＣ Ｐｒｏ Ｘ０ＳＰフィルタを使用するＣ２濾過工程を使用する。比較されるｐｒｅ－Ｃ１深層フィルタは、化学的に定義された合成材料（３Ｍ（商標）ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ＡＥＸ Ｈｙｂｒｉｄ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ）を含む深層フィルタ及び回収浄化深層フィルタ（ＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）ＥＸＴ ＺＢシリーズ、１２０ＺＢ）である。１２０ＺＢ及びＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタは両方とも正に帯電しており、Ｘ０ＳＰ深層フィルタはｐＨ＞４．５で負に帯電している。
実験ワークフロー及び試料名の割り当てを図１６に示す。簡潔には、約８０ ＮＴＵの濁度を有し、ＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体を含有する無細胞採取液を、記載の実験のための負荷物質として使用するためにバイオリアクターから回収した。プロテインＡクロマトグラフィーの前に、無細胞採取液の一部を１２０ＺＢ深層フィルタを用いてフィルタにかけ、第２の部分をＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタを用いてフィルタにかけた。次いで、両方の濾液を滅菌濾過し、ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＭＡＢＳＥＬＥＣＴ ＳＵＲＥ（商標）媒体を使用してプロテインＡクロマトグラフィーに供した。１２０ＺＢ深層フィルタワークフロー及びＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタワークフローからの溶出液をそれぞれ、１Ｍ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ、ｐＨ５．５でｐＨ９．０に滴定した。各ワークフローについて、滴定した溶出液をアリコートに分け、一方のアリコートを０．２μｍ滅菌フィルタを用いて滅菌濾過して参照として保持し、第２のアリコート（約１００ｍＬ～約１２０ｍＬ）を小規模ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｉｌｌｉｓｔａｋ＋（登録商標）ＨＣ Ｐｒｏ Ｘ０ＳＰフィルタ（５ｃｍ２フィルタ面積）を用いてフィルタにかけた。１２０ＺＢワークフローから、Ｘ０ＳＰ濾過からの溶出液の３画分を収集した。ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ワークフローから、Ｘ０ＳＰ濾過からの溶出液の４画分を収集した。その後、各Ｘ０ＳＰ溶出液画分を０．２μｍ滅菌フィルタを用いて濾過した。
次いで、得られた各アリコートを、実施例１で提供される方法に従ってＬＥＡＰアッセイによって分析した。ＬＥＡＰアッセイ結果の比較は、ｐｒｅ－Ｃ１深層フィルタワークフローの両方が加水分解活性を低下させるのによく機能したこと、及びＸ０ＳＰフィルタが捕捉カラムの出力の加水分解活性を有意に低下させることを示す（図１７）。１２０ＺＢ及びＥＭＰＨＡＺＥ（商標）ワークフローの比較は、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）濾過材料のプロテインＡ溶出液が１２０ＺＢ濾過プロテインＡ溶出液と比較して加水分解活性が３３％低いことを示す（図１７）。
実施例１０
この実施例は、プロテインＡクロマトグラフィー溶出液に対して実施されるＸ０ＳＰ深層濾過工程を含む精製プラットフォームを使用した、ＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＥＰ２０１９／０８６１４に開示されている）を含有する種々のＨＣＣＦ試料の精製の評価及び比較を実証する。
ＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体を産生する細胞の別個の培養から、２つの異なるＨＣＣＦ試料を調製した（ＣＦ ２３８及びＣＦ ２３９）。プロテインＡクロマトグラフィーを、ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ ＳＵＲＥ（商標）媒体を使用して行った。溶出液を収集し（ＣＦ ２３８ ＭＳＳ溶出液及びＣＦ ２３９ ＭＳＳ溶出液）、それぞれ１Ｍ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ、ｐＨ５．５でｐＨ９．０に滴定し、次いでＸ０ＳＰ深層濾過に供した。具体的には、それぞれ３５ＬのＣＦ ２３８ ＭＳＳ溶出液又は２０ＬのＣＦ２３９ ＭＳＳ溶出液を、１６０ Ｌ／ｍ２／ｈの流速でＸ０ＳＰフィルタ（それぞれ１ ｍ２又は０．５５ ｍ２）でフィルタにかけた。並行して、ＣＦ ２３８及びＣＦ ２３９ ＨＣＣＦ試料のアリコートを、プロテインＡクロマトグラフィー後のＸ０ＳＰ深層濾過工程を含まない参照精製プラットフォームを使用してそれぞれ精製した。
得られた各溶出液のリパーゼ活性を実施例１に記載のように行った。ＣＦ ２３８及びＣＦ ２３９の両方の精製プラットフォームを含む参照及びＸ０ＳＰ深層フィルタから得られたリパーゼ活性の結果を図１８Ａ（ＣＦ ２３８）及び図１８Ｂ（ＣＦ ２３９）に示す。図１８Ａ及び１８Ｂに示すように、Ｘ０ＳＰ含有精製プラットフォームからの溶出液では、加水分解活性が有意に低下している。
実施例１１
この実施例は、コンディショニングされたアフィニティクロマトグラフィー（プロテインＡクロマトグラフィー）溶出液をフィルタにかけるための種々の深層濾過工程を組み込んだ４つの精製プラットフォームを使用するプラシネズマブ（ｐｒａｓｉｎｅｚｕｍａｂ）の精製の比較を実証する。具体的には、４つの異なる深層濾過工程は以下に基づいていた：（ｉ）ＰＤＤ１；（ｉｉ）Ｘ０ＳＰ；（ｉｉｉ）ＰＤＤ１とそれに続くＸ０ＳＰ；及び（ｉｖ）Ｘ０ＳＰとそれに続くＰＤＤ１。
アフィニティクロマトグラフィー溶出液を、２Ｍ Ｔｒｉｓを用いてｐＨ６．０＋／－０．２に調整した。ＰＤＤ１及びＸＳ０Ｐフィルタを、少なくとも２２０ｍｌの対応する緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ／酢酸塩）で平衡化した。両方のフィルタに２００Ｌ／ｍ２未満でロードした。ＰＤＤ１及びＸＳ０Ｐフィルタの流量は１１ｍｌ／分であった。実験期間中、圧力を制御した。深層フィルタからの溶出液を１００Ｌ／ｍ２及び２００Ｌ／ｍ２後に分画した。
参照アプローチ（深層濾過なし；ロード）のプロテインＡクロマトグラフィー溶出液中のリパーゼ活性及びＨＣＰ量を、４つの精製プラットフォームの各深層濾過工程後に収集した溶出液と比較した。リパーゼ活性アッセイを実施例１に従って実施した。深層フィルタから得られた画分のリパーゼ活性の結果を図１９Ａに示す。ＨＣＰ測定の結果を図１９Ｂに示す。

Claims (112)

  1. 精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、
    （ａ）捕捉工程、及び
    （ｂ）深層濾過工程、を含む前記精製プラットフォームに供することを含み、
    それにより、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物の前記酵素加水分解活性速度を低下させる、方法。
  2. 前記酵素加水分解活性速度が酵素ポリソルベート加水分解活性速度である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記組成物の前記酵素加水分解活性速度の相対的な低下が、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、少なくとも約２０％である、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を、
    （ａ）捕捉工程、及び
    （ｂ）深層濾過工程、を含む前記精製プラットフォームに供することを含み、
    それにより、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物中の前記加水分解酵素のレベルを低下させる、方法。
  5. 前記１つ以上の加水分解酵素がポリソルベートを加水分解することができる、請求項４に記載の方法。
  6. 前記組成物中の前記１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下が、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、少なくとも約２０％である、請求項４又は５に記載の方法。
  7. 精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減させるための方法であって、試料を、
    （ａ）捕捉工程、及び
    （ｂ）深層濾過工程、を含む前記精製プラットフォームに供することを含み、
    それにより、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物中の前記ポリソルベートの分解を低減させる、方法。
  8. 前記組成物中の前記ポリソルベートの分解の相対的低減が、前記深層濾過工程を有さない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、少なくとも約５％である、請求項７に記載の方法。
  9. 前記精製プラットフォームが、前記試料から標的を精製するためのものであり、前記試料が、前記標的及び１つ以上の宿主細胞不純物を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記標的がポリペプチドを含む、請求項９に記載の方法。
  11. 前記宿主細胞不純物が宿主細胞タンパク質である、請求項９又は１０に記載の方法。
  12. 前記深層濾過工程が前記捕捉工程の前に実施されるか、又は前記深層濾過工程が前記捕捉工程の後に実施される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記深層濾過工程が、深層フィルタによる処理を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記深層フィルタが、１つ以上の珪藻土組成物、シリカ組成物、セルロース繊維、ポリマー繊維、凝集樹脂、及び灰組成物を含む基材を含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記深層フィルタの前記基材の少なくとも一部が表面改質を含む、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記表面改質が、第四級アミン表面改質、カチオン表面改質、及びアニオン表面改質の１つ以上である、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記深層フィルタが、ＥＭＰＨＡＺＥ（商標）深層フィルタ、ＰＤＤ１深層フィルタ、ＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＡ深層フィルタ、及びＺＥＴＡ ＰＬＵＳ（商標）１２０ＺＢ深層フィルタからなる群から選択される、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記捕捉工程が、アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記アフィニティクロマトグラフィーが、プロテインＡクロマトグラフィー、プロテインＧクロマトグラフィー、プロテインＡ／Ｇクロマトグラフィー、プロテインＬクロマトグラフィー、ＦｃＸＬクロマトグラフィー、プロテインＸＬクロマトグラフィー、カッパクロマトグラフィー、及びカッパＸＬクロマトグラフィーからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記精製プラットフォームがウイルス不活化工程を更に含み、前記ウイルス不活化工程が前記捕捉工程の後に実施される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記深層濾過工程が前記ウイルス不活化工程の後に実施される、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記精製プラットフォームが、前記捕捉工程の前に実施される別の深層濾過工程を更に含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記精製プラットフォームが１つ以上の精製工程を更に含み、前記１つ以上の精製工程が、前記捕捉工程、前記深層濾過工程、及び存在する場合には前記ウイルス不活化工程の後に実施される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記１つ以上の精製工程がポリペプチド精製工程を含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記精製プラットフォームが、前記１つ以上の精製工程の前、間、又は後に実施される別の深層濾過工程を更に含む、請求項２３又は２４に記載の方法。
  26. 前記精製プラットフォームが限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程を更に含み、前記ＵＦＤＦ工程が前記１つ以上の精製工程の後に実施される、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記精製プラットフォームが、前記ＵＦＤＦ工程の前又は後に実施される別の深層濾過工程を更に含む、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記精製プラットフォームが、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）精製工程を更に含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記ＨＩＣ精製工程が、存在する場合には、前記１つ以上の精製工程の前、間、又は後に実施される、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記ＨＩＣ精製工程が、前記１つ以上の精製工程の後で、かつ存在する場合には前記ＵＦＤＦ工程の前に実施される、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記精製プラットフォームがｐＨ保持工程を更に含み、前記ｐＨ保持工程が、存在する場合には前記１つ以上の精製工程の後で、かつ前記ＵＦＤＦ工程の前に実施される、請求項２６又は２７に記載の方法。
  32. 前記精製プラットフォームがウイルス濾過工程を更に含み、前記ウイルス濾過工程が前記ｐＨ保持工程の後で、かつ前記ＵＦＤＦ工程の前に実施される、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記ウイルス濾過工程が、ウイルスフィルタによる処理を含む、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記ＨＩＣ精製工程が、ＨＩＣフィルタによる処理を含む、請求項２８に記載の方法。
  35. 前記１つ以上の精製工程が、それぞれ独立して、イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む、請求項２３～３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記１つ以上の精製工程が、それぞれ独立して、ＤＥＡＥ、ＤＭＡＥ、ＴＭＡＥ、ＱＡＥ、ＳＰＳＦＦ、ＳＰＸＬ、ＱＳＦＦ、ＭＥＰ－Ｈｙｐｅｒｃｅｌ（商標）、Ｃａｐｔｏ ＭＭＣ、及びＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅからなる群から選択されるクロマトグラフィーによる処理を含む、請求項２３～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、
    （ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、
    （ｂ）ウイルス不活化工程、
    （ｃ）第２のポリペプチド精製工程、
    （ｄ）第３のポリペプチド精製工程、及び
    （ｅ）限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程、をこの順で含む精製プラットフォームに供することを含み、
    前記精製プラットフォームが、以下、
    （ｉ）前記捕捉工程の前、
    （ｉｉ）前記捕捉工程の後で、かつ前記ウイルス不活化工程の前、
    （ｉｉｉ）前記ウイルス不活化工程の後で、かつ前記第２のポリペプチド精製工程の前、
    （ｉｖ）前記第２のポリペプチド精製工程の後で、かつ前記第３のポリペプチド精製工程の前、又は
    （ｖ）前記第３のポリペプチド精製工程の後で、かつ前記限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程の前、の１つ以上で実施される深層濾過工程を更に含み、
    それにより、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物の前記酵素加水分解活性速度を低下させる、方法。
  38. 前記精製プラットフォームが、前記第３のポリペプチド精製工程の後で、かつ前記ＵＦＤＦ工程の前に実施される、ｐＨ保持工程及びウイルス濾過工程をこの順で更に含む、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記ウイルス濾過工程が、ウイルスフィルタによる処理を含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記精製プラットフォームが、以下の１つ以上、
    （ｉ）前記第３のポリペプチド精製工程の後で、かつ前記ｐＨ保持工程の前、
    （ｉｉ）前記ｐＨ保持工程の後で、かつ前記ウイルス濾過工程の前、又は
    （ｉｉｉ）前記ウイルス濾過工程の後で、かつ前記ＵＦＤＦ工程の前、
    に実施される疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）精製工程を更に含む、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記組成物の前記酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記組成物がポリソルベートを含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記ポリソルベートが、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
  45. 試料処理工程を更に含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記試料が、細胞培養試料であるか、又は細胞培養試料に由来する、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記細胞培養試料が宿主細胞を含み、前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記試料が、宿主細胞又はそれに由来する成分を含む、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記試料が１つ以上の宿主細胞タンパク質を含み、前記１つ以上の宿主細胞タンパク質の１つが加水分解酵素である、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記加水分解酵素が、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記試料が標的を含み、前記標的が抗体部分である、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記抗体部分が、モノクローナル抗体である、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記抗体部分が、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項５１又は５２に記載の方法。
  54. 前記抗体部分が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗ＩＸ因子抗体、抗Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗ｔａｕ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される、請求項５１～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記抗体部分が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１、及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、請求項５１～５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 請求項１～５５のいずれか一項に記載の方法から得られる医薬組成物。
  57. 抗体部分及びポリソルベートを含む、製剤化された抗体部分組成物であって、前記組成物はポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、前記組成物の貯蔵寿命が２４ヶ月を超える、製剤化された抗体部分組成物。
  58. 抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物であって、前記組成物はポリソルベート加水分解活性速度が低下しており、前記組成物の貯蔵寿命が、前記製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示される貯蔵寿命と比較して延長されており、前記貯蔵寿命が、前記文書に示される貯蔵寿命と比較して少なくとも６ヶ月延長されている、製剤化された抗体部分組成物。
  59. 抗体部分を含む製剤化された抗体部分組成物であって、前記製剤化された抗体部分組成物はポリソルベートの分解が低下しており、前記分解が、前記製剤化された抗体部分組成物に関連する保健当局に提出された文書に示された分解と比較して少なくとも約２０％低下している、製剤化された抗体部分組成物。
  60. 抗体部分及びポリソルベートを含む製剤化された抗体部分組成物であって、前記ポリソルベートが、液体組成物の貯蔵中に年間２０％以下分解される、製剤化された抗体部分組成物。
  61. 前記抗体部分がモノクローナル抗体である、請求項５７～６０のいずれか一項に記載の製剤化された抗体部分組成物。
  62. 前記抗体部分がヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項５７～６１のいずれか一項に記載の製剤化された抗体部分組成物。
  63. 前記抗体が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗ＩＸ因子抗体、抗Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗ｔａｕ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される、請求項５７～６２のいずれか一項に記載の製剤化された抗体部分組成物。
  64. 前記抗体部分が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、請求項５７～６３のいずれか一項に記載の製剤化された抗体部分組成物。
  65. 前記ポリソルベート加水分解活性速度が、少なくとも約２０％低下される、請求項５７～６４のいずれか一項に記載の製剤化された抗体部分組成物。
  66. 前記ポリソルベートが、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、請求項５７～６５のいずれか一項に記載の製剤化された抗体部分組成物。
  67. 精製プラットフォームから得られた組成物の酵素加水分解活性速度を低下させる方法であって、試料を、
    （ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、及び
    （ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーにより処理することを含む精製工程、
    をこの順で含む前記精製プラットフォームに供することを含み、
    前記精製プラットフォームが、１つ以上の深層濾過工程を更に含み、
    前記１つ以上の深層濾過工程が、前記捕捉工程の前、前記捕捉工程の後、又は前記捕捉工程の後で、かつ前記精製工程の前のいずれか１つ以上で実施され、
    各深層濾過工程は、深層フィルタによる処理を含み、
    前記深層フィルタが、
    （ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、
    （ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに
    （ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライト、
    からなる群から選択される材料を含み、それにより、前記１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物の前記酵素加水分解活性速度を低下させる、方法。
  68. 前記酵素加水分解活性速度が酵素ポリソルベート加水分解活性速度である、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記組成物の前記酵素加水分解活性速度の相対的な低下が、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、少なくとも約２０％である、請求項６７又は６８に記載の方法。
  70. 精製プラットフォームから得られた組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる方法であって、試料を、
    （ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、及び
    （ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーにより処理することを含む精製工程、
    をこの順で含む前記精製プラットフォームに供することを含み、
    前記精製プラットフォームが、１つ以上の深層濾過工程を更に含み、
    前記１つ以上の深層濾過工程が、前記捕捉工程の前、前記捕捉工程の後で、かつ前記精製工程の前、又は前記精製工程の後のいずれか１つ以上で実施され、
    各深層濾過工程は、深層フィルタによる処理を含み、
    前記深層フィルタが、
    （ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、
    （ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに
    （ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライト、
    からなる群から選択される材料を含み、
    それにより、前記１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを低下させる、方法。
  71. 前記１つ以上の加水分解酵素がポリソルベートを加水分解することができる、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記組成物中の前記１つ以上の加水分解酵素のレベルの相対的な低下が、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、少なくとも約２０％である、請求項７０又は７１に記載の方法。
  73. 精製プラットフォームから得られた組成物中のポリソルベートの分解を低減させるための方法であって、試料を前記精製プラットフォームに供する工程を含み、前記精製プラットフォームが、試料を、
    （ａ）アフィニティクロマトグラフィーによる処理を含む捕捉工程、及び
    （ｂ）ＨＩＣ、陽イオン交換クロマトグラフィー及びマルチモーダルクロマトグラフィーからなる群から選択されるクロマトグラフィーにより処理することを含む精製工程、
    をこの順で含む前記精製プラットフォームに供することを含み、
    前記精製プラットフォームが、１つ以上の深層濾過工程を更に含み、
    前記１つ以上の深層濾過工程が、前記捕捉工程の前、前記捕捉工程の後、又は前記捕捉工程の後で、かつ前記精製工程の前のいずれか１つ以上で実施され、
    各深層濾過工程は、深層フィルタによる処理を含み、
    前記深層フィルタが、
    （ｉ）シリカ及びポリアクリル系繊維、
    （ｉｉ）ヒドロゲルＱ（第四級アミン）官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜、並びに
    （ｉｉｉ）セルロース繊維、珪藻土、及びパーライト、
    からなる群から選択される材料を含み、
    それにより、前記１つ以上の深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、前記組成物中の前記ポリソルベートの分解を低減させる、方法。
  74. 前記組成物中の前記ポリソルベートの分解の相対的低減が、前記深層濾過工程を含まない同じ精製プラットフォームを使用した前記試料の精製と比較して、少なくとも約５％である、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記シリカ及び前記ポリアクリル系繊維を含む前記深層フィルタが、シリカ濾過助剤及びポリアクリル系繊維パルプを含む、請求項６７～７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 前記ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及び前記マルチゾーン微多孔膜を含む前記深層フィルタが、ヒドロゲルＱ官能化不織布材料及び９ゾーン微多孔膜を含む４つの層を備える、請求項６７～７４のいずれか一項に記載の方法。
  77. セルロース繊維、珪藻土、及びパーライトを含む前記深層フィルタが２つの層を含み、各層がセルロースフィルタマトリックスを含み、前記セルロースフィルタマトリックスが珪藻土又はパーライトの１つ以上を含む濾過助剤で含浸され、各層が樹脂バインダーを更に含む、請求項６７～７４のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記深層フィルタが、前記深層フィルタに入る溶液のｐＨに基づいて選択される、請求項６７～７７のいずれか一項に記載の方法。
  79. 前記深層フィルタに入る前記溶液が約５～約６．５である場合に、前記シリカ及び前記ポリアクリル系繊維を含む前記深層フィルタが選択される、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記深層フィルタに入る前記溶液が約７～約８．５である場合に、前記ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及び前記マルチゾーン微多孔膜を含む前記深層フィルタが選択される、請求項７８に記載の方法。
  81. 前記深層フィルタに入る前記溶液の前記ｐＨに基づいて前記深層フィルタを選択する工程を更に含む、請求項６７～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記精製プラットフォームが、前記ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む前記深層フィルタによる処理を含む深層濾過工程、プロテインＡクロマトグラフィーによる処理を含む前記捕捉工程、及び前記精製工程、をこの順で含む、請求項６７～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 前記精製工程が、前記ＨＩＣによる処理を含む、請求項８２に記載の方法。
  84. 前記ＨＩＣがフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）高速フロークロマトグラフィーである、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記精製工程が、前記陽イオン交換クロマトグラフィーによる処理を含む、請求項８２に記載の方法。
  86. 前記陽イオン交換クロマトグラフィーがＰＯＲＯＳ（登録商標）５０ＨＳである、請求項８５に記載の方法。
  87. 前記精製プラットフォームが、前記シリカ及び前記ポリアクリル系繊維を含む前記深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程を更に含み、前記第２の深層濾過工程が、前記捕捉工程の後で、かつ前記精製工程の前に実施される、請求項６７～８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記精製工程が、前記マルチモーダルクロマトグラフィーによる処理を含む、請求項８２に記載の方法。
  89. 前記マルチモーダルクロマトグラフィーがＣａｐｔｏ Ａｄｈｅｒｅである、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記精製プラットフォームが、前記ヒドロゲルＱ官能化不織布媒体及びマルチゾーン微多孔膜を含む前記深層フィルタによる処理を含む第２の深層濾過工程を更に含み、前記第２の深層濾過工程が、前記捕捉工程の後で、かつ前記精製工程の前に実施される、請求項８８又は８９に記載の方法。
  91. 前記精製プラットフォームが、前記試料から標的を精製するためのものであり、前記試料が、前記標的及び１つ以上の宿主細胞不純物を含む、請求項６７～９０のいずれか一項に記載の方法。
  92. 前記標的がポリペプチドを含む、請求項９１に記載の方法。
  93. 前記宿主細胞不純物が宿主細胞タンパク質である、請求項９１又は９２に記載の方法。
  94. 前記精製プラットフォームがウイルス不活化工程を更に含み、前記ウイルス不活化工程が前記捕捉工程の後に実施される、請求項６７～９３のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記１つ以上の深層濾過工程が前記ウイルス不活化工程の後に実施される、請求項９４に記載の方法。
  96. 前記精製プラットフォームが限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）工程を更に含み、前記ＵＦＤＦ工程が前記精製工程の後に実施される、請求項６７～９５のいずれか一項に記載の方法。
  97. 前記組成物の前記酵素加水分解活性速度を決定することを更に含む、請求項６７～９６のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記組成物中の１つ以上の加水分解酵素のレベルを決定することを更に含む、請求項６７～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 前記組成物がポリソルベートを含む、請求項６７～９８のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記ポリソルベートが、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０及びポリソルベート８０からなる群から選択される、請求項９９に記載の方法。
  101. 試料処理工程を更に含む、請求項６７～１００のいずれか一項に記載の方法。
  102. 前記試料が、細胞培養試料であるか、又は細胞培養試料に由来する、請求項６７～１０１のいずれか一項に記載の方法。
  103. 前記細胞培養試料が宿主細胞を含み、前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞である、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記試料が、宿主細胞又はそれに由来する成分を含む、請求項６７～１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 前記試料が１つ以上の宿主細胞タンパク質を含み、前記１つ以上の宿主細胞タンパク質の１つが加水分解酵素である、請求項６７～１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. 前記加水分解酵素が、リパーゼ、エステラーゼ、チオエステラーゼ、ホスホリパーゼ、又はセラミダーゼである、請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記試料が標的を含み、前記標的が抗体部分である、請求項６７～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 前記抗体部分がモノクローナル抗体である、請求項１０７に記載の方法。
  109. 前記抗体部分がヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項１０７又は１０８に記載の方法。
  110. 前記抗体部分が、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＩＬ６抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ抗体、抗ＶＥＧＦ－Ａ／ＡＮＧ２抗体、抗ＣＤ７９ｂ抗体、抗ＳＴ２抗体、抗Ｄ因子抗体、抗ＩＸ因子抗体、抗Ｘ因子抗体、抗ａベータ抗体、抗ｔａｕ抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡ／ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０／ＣＤ３抗体、抗ＦｃＲＨ５／ＣＤ３抗体、抗Ｈｅｒ２／ＣＤ３抗体、抗ＦＧＦＲ１／ＫＬＢ抗体、ＦＡＰ－４－１ ＢＢＬ融合タンパク質、ＦＡＰ－ＩＬ２ｖ融合タンパク質及びＴＹＲＰ１ ＴＣＢ抗体からなる群から選択される、請求項１０７～１０９のいずれか一項に記載の方法。
  111. 前記抗体部分が、オクレリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、トシリズマブ、ファリシマブ、ポラツズマブ、ガンテネルマブ、シビサタマブ、クレネズマブ、モスネツズマブ、チラゴルマブ、ベバシズマブ、リツキシマブ、アテゾリズマブ、オビヌツズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、オマリズマブ、ラニビズマブ、エミシズマブ、セリクレルマブ、プラシネズマブ、ＲＯ６８７４２８１、及びＲＯ７１２２２９０からなる群から選択される、請求項１０７～１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 請求項６７～１１１のいずれか一項に記載の方法から得られる医薬組成物。
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