JP2023523824A - アフィニティークロマトグラフィーの改善されたプロセス - Google Patents
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Abstract
「アフィニティークロマトグラフィーの改善されたプロセス」アフィニティークロマトグラフィーによる抗体又は融合タンパク質の精製のためのプロセスであって、中和工程において、溶出は、タンパク質混合物における濁度を低減させる高い塩濃度で行われる。本発明は、高塩系溶出を使用するアフィニティークロマトグラフィーによって抗体を精製する改善されたプロセスを提供する。【選択図】なし
Description
本発明は、ウイルス不活化及び中和の間に低い濁度を提供することができる、アフィニティークロマトグラフィーから得られる抗体の組成物を提供する。本発明は、高塩系溶出を使用するアフィニティークロマトグラフィーによって抗体を精製する改善されたプロセスを提供する。
ウイルスは、特に生物学的薬剤が哺乳類の細胞培養に由来する場合、薬剤の製造プロセスにおける潜在的な汚染物質である。ウイルス汚染物質源は、細胞培養に使用される培地や、目的の生物学的製剤を生産する細胞株であり得る。
モノクローナル抗体は、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって広く精製される。アフィニティークロマトグラフィーは、標的タンパク質を捕捉するための簡単で迅速且つ選択的な手順であるため、幾つかの利点がある。その選択性により、精製の連鎖における初期においてアフィニティ精製工程が一般的に導入される。これにより、連続するユニット操作の回数を減らすことができる。コスト効率の高い製造プロセスが求められているため、アフィニティ工程を含む下流精製の最適化が必要となっている。宿主細胞のタンパク質及びＤＮＡのようなプロセス関連不純物の効率的な除去以外に、プロテインＡは、ウイルスの除去にも主張されることがある。プロテインＡは、酸性ｐＨで溶出され、エンベロープタンパク質の変性によるエンベロープウイルスの化学的不活性化が典型的に行われる。通常、この不活性化工程は、ｐＨ３．０～４．０で行われる。ｐＨが高く温度が低いほど、不活性化反応速度が遅くなることが報告されている。
しかしながら、抗体組成物をウイルス不活化処理に付す場合、プロテインＡクロマトグラフィーにおける酸性ｐＨによるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の溶出中は、濁った溶出プール及び高いカラム背圧が一般的である。
ろ過は、哺乳類細胞系の生物学的製剤の製造中に一次的及び二次的な清澄化に使用される重要な単位操作である。しかしながら、連続的な製造プロセスでは、長期にわたるろ過の一貫した使用を必要とし、供給流の属性に予測不可能な変動が生じる可能性があり、現在当分野が直面している課題である。更に、濁度の増加は、最終的には複数のフィルターの使用や、ろ過面積の大きなフィルターの使用につながり、プロセスのコスト及び操作時間に直接影響する。更に、低ｐＨのウイルス不活化生成物の中和後、沈殿物及び濁りを除去するために深層ろ過が用いられる。更に、正の電荷を帯びたフィルターを適用し、宿主細胞のタンパク質（ＨＣＰ）及びＤＮＡの更なる除去によって、このプロセス工程を改善することができる。吸着性深層フィルターをウイルス除去ステップとして主張することは、ｍＡｂのバイオプロセスの更なる強化を可能にすることがある。本発明は、必要とされるろ過面積が小さい、中和中又は中和後の低混濁タンパク質混合物を提供することによって、この問題を解決する。また、低ｐＨウイルス不活化生成物の中間体の中和後の沈殿物及び濁度を除去するため、深層フィルターが一般的に使用される。
したがって、ウイルス不活性化中の濁度及び沈殿物を除去又は減少させるプロセスを開発する必要性が当技術分野に残っている。
一実施形態においては、本発明は、低塩濃度で行われる溶出と比較して、ウイルス不活化及び中和の間に溶出した組成物における低い濁度又は沈殿を提供する、高塩濃度で溶出が行われるアフィニティークロマトグラフィーを使用することにより、抗体又はその断片の改善された精製プロセスを提供する。
本実施形態の一態様においては、本発明は、１００ｍＭ超、１１０ｍＭ超、１２５ｍＭ超、１３０ｍＭ超、１４０ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１６０ｍＭ超、１７０ｍＭ超、１８０ｍＭ超、１９０ｍＭ超、１９５ｍＭ超、約２００ｍＭから選択される溶出中の高い塩濃度を提供する。
本実施形態の一態様においては、本発明は、約１０ＮＴＵ、約２０ＮＴＵ、約３０ＮＴＵ、約３５ＮＴＵ、約３６．１ＮＴＵ、約４０ＮＴＵ、約４２．５ＮＴＵ、約５０ＮＴＵ、約６０ＮＴＵ、約７０ＮＴＵ、約８０ＮＴＵ、約９０ＮＴＵ、約１００ＮＴＵから選択される溶出された組成物において、低い濁度又は沈殿を提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨで約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨで約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、溶出ｐＨはｐＨ３～ｐＨ３．５から選択される。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、濁度１０３を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、濁度１０３を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、３６．１の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、３６．１の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．０±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、４２．５の濁度を有する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．０±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、４２．５の濁度を有する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、５０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、５０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、５０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、５０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、２０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、２０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
定義
用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、即ち、２個の重鎖（Ｈ）及び２個の軽鎖（Ｌ）がジスルフィド結合によって相互に結合されて構成される免疫グロブリン分子を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中、ＨＣＶＲ又はＶＨと略す）と重鎖定常領域（ＣＨ）とから構成される。重鎖定常領域は、３個のドメイン、即ち、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中、ＬＣＶＲ又はＶＬと略す）と軽鎖定常領域とから構成される。軽鎖定数領域は、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域に更に細分化することができ、前記超可変性領域には、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域が点在している。ＶＨとＶＬは、それぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順に配列された３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される。
用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、即ち、２個の重鎖（Ｈ）及び２個の軽鎖（Ｌ）がジスルフィド結合によって相互に結合されて構成される免疫グロブリン分子を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中、ＨＣＶＲ又はＶＨと略す）と重鎖定常領域（ＣＨ）とから構成される。重鎖定常領域は、３個のドメイン、即ち、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中、ＬＣＶＲ又はＶＬと略す）と軽鎖定常領域とから構成される。軽鎖定数領域は、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域に更に細分化することができ、前記超可変性領域には、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域が点在している。ＶＨとＶＬは、それぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順に配列された３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される。
本明細書においては、「ウイルスの低減／不活化」という表現は、特定サンプル中のウイルス粒子の数の低下（「低減」）、及び特定サンプル中のウイルス粒子の活性の低下、例えば、限定されるものではないが、感染能力又は複製能力の低下（「不活化」）を意味することが意図される。かかるウイルス粒子の数及び／又は活性の低下は、約１％～約９９％、好ましくは約２０％～約９９％、より好ましくは約３０％～約９９％、より好ましくは約４０％～約９９％、更により好ましくは約５０％～約９９％、更により好ましくは約６０％～約９９％、更により好ましくは約７０％～約９９％、更により好ましくは約８０％～９９％、更により好ましくは約９０％～約９９％のオーダーであり得る。
本明細書で使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、他の要素又は工程を排除しない。本発明の目的において、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｏｆ）」の任意の実施形態であると考えられる。以下、群が、少なくとも一定の数の実施形態を含むように定義される場合、これはまた、これらの実施形態のみからなっていてもよい群を開示すると理解される。
明細書及び添付の請求項全体を通して、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は複数への言及を含むが、文脈上、明確に複数ではないことが示されている場合は、この限りでない。
本明細書においては、用語「約」は、参照値よりも約１０～２０％大きい又は小さい範囲を意味することが意図される。特定の状況においては、当業者は、参照値の性質により、用語「約」は、その値から１０～２０％の偏差より大きい又は小さい値を意味し得ることを認識する。
オマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））は、ヒト免疫グロブリン（ＩｇＥ）に選択的に結合する組換えＤＮＡ由来ヒト化ＩｇＧｌＫモノクローナル抗体である。前記抗体の分子量は、約１４９ｋＤである。Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）は、抗生物質であるゲンタマイシンを含む栄養培地で、チャイニーズハムスター卵巣細胞の懸濁培養によって製造される。ゲンタマイシンは、最終生成物中に検出されない。Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）は、単回使用のバイアルに含まれる、滅菌された白色の、保存料を含まない凍結乾燥粉末で、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）ＵＳＰで再構成され、皮下（ＳＣ）注射剤として投与される。
濁りとは、一般に肉眼では見えない多数の個々の粒子によって引き起こされる液体の曇り又はかすみのことであり、空気中の煙に似ている。粒子に焦点を当てた光線を散乱させる粒子の性質は、現在では、水中の濁度のより意味のある尺度と考えられている。
この方法で測定される濁度は、光線の側に検出器をセットした比濁計と呼ばれる器具を使用する。ソースビームを散乱する小さな粒子が多い場合、少ない場合よりも多くの光が検出器に到達する。較正された比濁計による濁度の単位は、比濁法濁度単位（ＮＴＵ）と呼ばれる。
タンパク質精製において、濁度が重要な役割を果たし、高い濁度のタンパク質溶液は、より高い不溶性粒子を有し、これは凝集体やその他の不純物であることができ、タンパク質混合物の純度や収量に悪影響を及ぼす。また、濁度が高いと、カセットやカラムが目詰まりすることにより破損する。したがって、高い濁度は、純度が低く不純物濃度が高いことを示し、その逆も同様である。
このプロセスでは、プロテインＡのインプットに対するプロテインＡ溶出液の濁度を大幅に低下させている。
一実施形態においては、本発明は、低塩濃度で行われる溶出と比較して、溶出された組成物における低い濁度又は沈殿を提供する、高塩濃度で溶出が行われるアフィニティークロマトグラフィーを使用することにより、抗体又はその断片の改善された精製プロセスを提供する。
本実施形態の一態様においては、本発明は、１００ｍＭ超、１１０ｍＭ超、１２５ｍＭ超、１３０ｍＭ超、１４０ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１６０ｍＭ超、１７０ｍＭ超、１８０ｍＭ超、１９０ｍＭ超、１９５ｍＭ超、約２００ｍＭから選択される溶出中の高い塩濃度を提供する。
本実施形態の一態様においては、本発明は、約１０ＮＴＵ、約２０ＮＴＵ、約３０ＮＴＵ、約３５ＮＴＵ、約３６．１ＮＴＵ、約４０ＮＴＵ、約４２．５ＮＴＵ、約５０ＮＴＵ、約６０ＮＴＵ、約７０ＮＴＵ、約８０ＮＴＵ、約９０ＮＴＵ、約１００ＮＴＵから選択される溶出された組成物において、低い濁度又は沈殿を提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、濁度１０３を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、濁度１０３を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、３６．１の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、３６．１の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．０±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、４２．５の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．０±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い、４２．５の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ＮＴＵ未満の濁度を有する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、５０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、５０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
別の実施形態においては、プロテインＡの溶出中に高い塩濃度を使用することでろ過能力が向上し、中和された前記タンパク質混合物を小さなフィルター面積でろ過することができる。
別の実施形態においては、プロテインＡの溶出中に高い塩濃度を使用することでろ過能力が１倍、又は１．５倍、又は２倍改善する。
特定の実施形態においては、前記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４抗体又はその断片、及び融合タンパク質から選択される。一実施形態においては、前記ＩｇＧ１抗体又は融合タンパク質は、６～９の等電点を有する。
前記ＩｇＧ１抗体又は融合タンパク質は、エタネルセプト、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、アダリムマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、エクリズマブ、セルトリズマブペゴル、ウステキヌマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、オファツムマブ、トシリズマブ、デノスマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、ブレンツキシマブベドチン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ラキシバクマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ダルシズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、エボロクマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、イキセキズマブ、レスリズマブ、オララツマブ、ベズロトクスマブ、アテゾリズマブ、オビルトキサキシマブ、サリルマブ、オクレリズマブ、チルドラキズマブ、ロモソズマブ、ブロルシズマブ、クリザンリズマブから選択される。
好ましい実施形態においては、前記抗体は、抗ＩｇＥ抗体である。特定の実施形態においては、前記抗ＩｇＥ抗体は、オマリズマブである。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、２０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、２０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、本発明は、タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１０ＮＴＵ未満の濁度を有するプロセスを提供する。
一実施形態においては、１００ｍＭ～２５０ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物は、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度を有する。
一実施形態においては、２００ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物は、３０ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度を有する。
一実施形態においては、１００ｍＭ～１２５ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物は、３０ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度を有する。
一実施形態においては、アフィニティークロマトグラフィーは、プロテインＡ又はプロテインＧから選択される。一実施形態においては、アフィニティークロマトグラフィー樹脂は、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ Ｌｘ、Ｐｒｏｓｅｐ Ｕｌｔｒａ Ｐｌｕｓ、Ｅｓｈｍｕｎｏ Ａから選択される。好ましい実施形態においては、前記アフィニティークロマトグラフィー樹脂は、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｌｘである。
一実施形態においては、平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーは、リン酸ナトリウム、トリス－ＨＣｌ、トリス－アセテート、ＨＥＰＥＳ、及びグリシン－ＮａＯＨから選択される。好ましい実施形態においては、前記ロードバッファーは、トリス－アセテートである。
特定の実施形態においては、前記平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーは、塩と組み合わせて使用される。特定の実施形態においては、前記塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化アルギニン、塩化カルシウム、及び尿素から選択される。好ましい実施形態においては、前記塩は、塩化ナトリウムである。
一実施形態においては、前記平衡化バッファーは、約５ｍＭ～約４０ｍＭの濃度範囲を有する。特定の実施形態においては、前記平衡化バッファーは、約１０ｍＭ～約２５ｍＭの濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、前記平衡化バッファーの濃度は、約２０ｍＭである。
特定の実施形態においては、前記平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーは、任意に、約５０ｍＭ～約４００ｍＭから選択される塩を含む。一実施形態においては、前記平衡化バッファーは、約１００ｍＭ～約２００ｍＭから選択される塩バッファー濃度を含む。一実施形態においては、前記平衡化バッファーの濃度は、約１５０ｍＭである。別の実施形態においては、前記平衡化バッファーの濃度は、約１００ｍＭである。
一実施形態においては、前記平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーは、約１０ｍＳ／ｃｍ～約２０ｍＳ／ｃｍの導電率範囲を有する。一実施形態においては、前記平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーの導電率は、約１５．０ｍＳ／ｃｍ～２０．０ｍＳ／ｃｍである。別の実施形態においては、前記平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーの導電率は、約１０．０ｍＳ／ｃｍ～１３．０ｍＳ／ｃｍである。
一実施形態においては、前記平衡化バッファー、又はロードバッファー、又は洗浄バッファーのｐＨは、約６．５～約７．５から選択される。好ましい実施形態においては、前記平衡化バッファーのｐＨは、約７．０である。
一実施形態においては、前記ロードバッファーは、約５ｍＭ～約４０ｍＭの濃度範囲を有する。一実施形態においては、前記ロードバッファーは、約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、前記ロードバッファーの濃度は、約２０ｍＭである。
特定の実施形態においては、前記アフィニティークロマトグラフィーは、少なくとも１種の洗浄バッファーを有する。別の実施形態においては、前記アフィニティークロマトグラフィーは、３種の洗浄バッファーを有する。
一実施形態においては、第１の洗浄バッファーは、約５ｍＭ～約４０ｍＭの濃度範囲を有する。特定の実施形態においては、第１の洗浄バッファーは、約１０ｍＭ～約２５ｍＭの濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、第１の洗浄バッファーの濃度は、約２０ｍＭである。
一実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、リン酸ナトリウム、トリス－ＨＣｌ、トリス－アセテート、ＨＥＰＥＳ、及びグリシン－ＮａＯＨから選択される。
特定の実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、塩と組み合わせて使用される。
特定の実施形態においては、前記塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化アルギニン、塩化カルシウム、及び尿素から選択される。好ましい実施形態においては、前記塩は、塩化ナトリウムである。
一実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、約５ｍＭ～約４０ｍＭの濃度範囲を有する。特定の実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、約１０ｍＭ～約２５ｍＭの濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、第２の洗浄バッファーの濃度は、約２０ｍＭである。
一実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、約０．５Ｍ～約１．５Ｍの塩バッファー濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、第２の洗浄バッファーの濃度は、約１．０Ｍである。
一実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、約７０ｍＳ／ｃｍ～約１２０ｍＳ／ｃｍの導電率範囲を有する。一実施形態においては、第２の洗浄バッファーは、約８０ｍＳ／ｃｍ～約１００ｍＳ／ｃｍの導電率範囲を有する。好ましい実施形態においては、第２の洗浄バッファーの導電率は、約９０ｍＳ／ｃｍである。
一実施形態においては、第２の洗浄バッファーのｐＨは、約６．５～約７．５から選択される。好ましい実施形態においては、前記第２の洗浄バッファーのｐＨは、約７．０である。
一実施形態においては、前記第２の洗浄バッファーは、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトンＸ－１００から選択される界面活性剤を更に含む。一実施形態においては、好ましい界面活性剤は、ポリソルベート２０である。
一実施形態においては、前記第２の洗浄バッファー中の界面活性剤の割合は、約０．１％～約１％である
一実施形態においては、第３の洗浄バッファーは、約５ｍＭ～約４０ｍＭの濃度範囲を有する。特定の実施形態においては、前記第３の洗浄バッファーは、約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、前記第３の洗浄バッファーの濃度は、約２０ｍＭである。
一実施形態においては、前記第３の洗浄バッファーは、約０．５ｍＳ／ｃｍ～約２．５ｍＳ／ｃｍの導電率範囲を有する。好ましい実施形態においては、前記第３の洗浄バッファーの導電率は、約１ｍＳ／ｃｍである。
一実施形態においては、第３の洗浄バッファーのｐＨは、約５～約６から選択される。好ましい実施形態においては、前記第３の洗浄バッファーのｐＨは、約５．５である。
一実施形態においては、前記溶出バッファーは、酢酸、リン酸、ＨＣｌから選択される。好ましい実施形態においては、前記溶出バッファーは、酢酸である。
一実施形態においては、前記溶出バッファーは、約１００ｍＭ～約２５０ｍＭから選択される濃度範囲を有する。好ましい実施形態においては、前記溶出バッファーは、約２００ｍＭの濃度範囲を有する。
一実施形態においては、前記溶出バッファーは、約０．２ｍＳ／ｃｍ～約０．７ｍＳ／ｃｍから選択される導電率範囲を有する。一実施形態においては、前記溶出バッファーは、約０．５ｍＳ／ｃｍ～約０．６ｍＳ／ｃｍから選択される導電率範囲を有する。一実施形態においては、前記溶出バッファーは、約０．２ｍＳ／ｃｍ～約０．３ｍＳ／ｃｍから選択される導電率範囲を有する。
一実施形態においては、前記溶出バッファーのｐＨは、２．５～約３．５から選択される。好ましい実施形態においては、前記溶出バッファーのｐＨは、約３．０である。
特定の実施形態においては、溶出は線形勾配で行われる。特定の実施形態においては、溶出は段差勾配で行われる。
一実施形態においては、溶出ピークの回収は、約２．５ＡＵ／ｃｍ上方値で開始し、約２．５ＡＵ／ｃｍ下方値で終了する。
一実施形態においては、溶出ピークの回収は、約０．２５ＡＵ／ｃｍ上方値で開始し、約０．２５ＡＵ／ｃｍ下方値で終了する。
一実施形態においては、本発明は、前記溶出バッファーが約２００ｍＭの濃度を有するアフィニティークロマトグラフィーから得られる、約１００ＮＴＵ未満、約５０ＮＴＵ未満、約３０ＮＴＵ未満、約１０ＮＴＵ未満から選択される濁度を有する抗体組成物を提供する。
別の実施形態においては、本発明は、低塩濃度で溶出を行うアフィニティークロマトグラフィーを用いることによる、抗体又はその断片の精製プロセスを提供する。
別の実施形態においては、本発明は、低塩濃度で溶出を行うアフィニティークロマトグラフィーを用いることによる、抗体又はその断片の精製プロセスであって、ウイルス不活化中に、溶出したタンパク質混合物の高塩濃度で行われる溶出と比較して濁度が低下しない精製プロセスを提供する。
一実施形態においては、前記平衡化は、約３ＣＶ～約１０ＣＶで行われる。好ましい実施形態においては、前記平衡化は、約５ＣＶで行われる。一実施形態においては、前記平衡化は、前記平衡化バッファーの導電率のエンドポイントが達成されるまで行われる。
一実施形態においては、ロード時にカラムにロードされるタンパク質量は、約１０ｇ／ｌ～約４０ｇ／ｌの範囲である。一実施形態においては、ロード時にカラムにロードされるタンパク質量は、約１０ｇ／ｌ～約５０ｇ／ｌの範囲である。
一実施形態においては、第１の洗浄は、少なくとも１ＣＶ～約５ＣＶで行われる。好ましい実施形態においては、第１の洗浄は、３ＣＶで行われる。一実施形態においては、第１の洗浄は、バッファー導電率のエンドポイントが達成されるまで行われる。
一実施形態においては、第２の洗浄は、少なくとも１ＣＶ～約５ＣＶで行われる。好ましい実施形態においては、第２の洗浄は、５ＣＶで行われる。一実施形態においては、第２の洗浄は、バッファー導電率のエンドポイントが達成されるまで行われる。
一実施形態においては、第３の洗浄は、少なくとも４ＣＶ～約８ＣＶで行われる。好ましい実施形態においては、第３の洗浄は、７ＣＶで行われる。一実施形態においては、第３の洗浄は、バッファー導電率のエンドポイントが達成されるまで行われる。
一実施形態においては、プロテインＡ精製時のカラム内のタンパク質の滞留時間は、約２分間～約６分間の範囲を有する。好ましい実施形態においては、カラム内のタンパク質の滞留時間は、約４分間である。
実施例１－２５ｍＭアセテートバッファー、ｐＨ３．５を用いたプロテインＡクロマトグラフィー（アフィニティ）によって行われるモノクローナル抗体の精製
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。Ｖａｎｔａｇｅカラムは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。Ｖａｎｔａｇｅカラムは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
ＶａｎｔａｇｅカラムＶＬ１１×３０ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカラムに充填したプロテインＡ（Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ、Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株に発現されるＩｇＥ分子に結合できるモノクローナル抗体分子を捕捉する。滞留時間は、全てのフェーズで４分である。トリス-アセテート＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８～７．２による平衡化後、清澄化された生成物を≦４０ｍｇ／ｍＬの樹脂でロードする。表１に記載されるように、ロード後、平衡化バッファーによるカラム洗浄の後、洗浄２バッファー及び洗浄３バッファーによるカラム洗浄を行い、２５ｍＭアセテート、ｐＨ３．５±０．１バッファーによる溶出を行う。結合及び溶出モードでアフィニティークロマトグラフィー工程を操作し、ピークの５００ｍＡＵ（２．５ＡＵ／ｃｍ）上方から５００ｍＡＵ（２．５ＡＵ／ｃｍ）下方まで回収を行う。溶出液を更にウイルス不活化及び中和に付す。プロテインＡ溶出段階で濁度を測定した。
ウイルス不活化は、プロテインＡの溶出のｐＨを１Ｎ ＨＣｌでｐＨ３．５に調整し、室温で５０分間インキュベートする。５０分間のインキュベーション後、１Ｍトリス塩基で２０分間、試料をｐＨ６．２に中和する。中和されたプロテインＡ溶出液のＮＴＵを濁度計で測定する。中和されたプロテインＡ溶出液を０．２μｍフィルターでろ過する。プロテインＡ工程の実験デザイン及びＮＴＵデータは、それぞれ表１及び表５にまとめられる。
表１：プロテインＡクロマトグラフィーの実験デザイン
表１：プロテインＡクロマトグラフィーの実験デザイン
実施例２－１２５ｍＭアセテートバッファー、ｐＨ３．５を用いたプロテインＡクロマトグラフィー（アフィニティ）によって行われるモノクローナル抗体の精製
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。ＸＫ５０／４０カラムをＣｙｔｉｖａから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。ＸＫ５０／４０カラムをＣｙｔｉｖａから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
ＸＫ５０／４０カラムに充填したプロテインＡ（Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ、Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株に発現されるＩｇＥ分子に結合できるモノクローナル抗体分子を捕捉する。滞留時間は、全てのフェーズで４分である。トリス－アセテート＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８～７．２による平衡化後、清澄化された生成物を≦４０ｍｇ／ｍＬの樹脂でロードする。表２に記載されるように、ロード後、平衡化バッファーによるカラム洗浄の後、洗浄２バッファー及び洗浄３バッファーによるカラム洗浄を行い、１２５ｍＭアセテート、ｐＨ３．５±０．１バッファーによる溶出を行う。結合及び溶出モードでアフィニティークロマトグラフィー工程を操作し、ピークの５００ｍＡＵ（２．５ＡＵ／ｃｍ）上方から５００ｍＡＵ（２．５ＡＵ／ｃｍ）下方まで回収を行う。溶出液を更にウイルス不活化及び中和に付す。プロテインＡ溶出段階で濁度を測定した。
ウイルス不活化は、プロテインＡの溶出のｐＨを１Ｎ ＨＣｌでｐＨ３．５に調整し、室温で５０分間インキュベートする。５０分間のインキュベーション後、１Ｍトリス塩基で２０分間、試料をｐＨ６．２に中和する。中和されたプロテインＡ溶出液のＮＴＵを濁度計で測定する。中和されたプロテインＡ溶出液を０．２μｍフィルターでろ過する。プロテインＡ工程の実験デザイン及びＮＴＵデータは、それぞれ表２及び表５にまとめられる。
表２：プロテインＡクロマトグラフィーの実験デザイン
表２：プロテインＡクロマトグラフィーの実験デザイン
実施例３－２００ｍＭアセテートバッファー、ｐＨ３．５を用いたプロテインＡクロマトグラフィー（アフィニティ）によって行われるモノクローナル抗体の精製
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。Ｖａｎｔａｇｅ ｃｏｌｕｍｎｓをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。Ｖａｎｔａｇｅ ｃｏｌｕｍｎｓをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
ＶａｎｔａｇｅカラムＶＬ１１×３０ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカラムに充填したプロテインＡ（Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ、Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株に発現されるＩｇＥ分子に結合できるモノクローナル抗体分子を捕捉する。滞留時間は、全てのフェーズで４分である。トリス－アセテート＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８～７．２による平衡化後、清澄化された生成物を≦４０ｍｇ／ｍＬの樹脂でロードする。表１に記載されるように、ロード後、平衡化バッファーによるカラム洗浄の後、洗浄２バッファー及び洗浄３バッファーによるカラム洗浄を行い、２００ｍＭアセテート、ｐＨ３．５±０．１バッファーによる溶出を行う。結合及び溶出モードでアフィニティークロマトグラフィー工程を操作し、ピークの５００ｍＡＵ（２．５ＡＵ／ｃｍ）上方から５００ｍＡＵ（２．５ＡＵ／ｃｍ）下方まで回収を行う。溶出液を更にウイルス不活化及び中和に付す。プロテインＡ溶出段階で濁度を測定した。
ウイルス不活化は、プロテインＡの溶出のｐＨを１Ｎ ＨＣｌでｐＨ３．５に調整し、室温で５０分間インキュベートする。５０分間のインキュベーション後、１Ｍトリス塩基で２０分間、試料をｐＨ６．２に中和する。中和されたプロテインＡ溶出液のＮＴＵを濁度計で測定する。中和されたプロテインＡ溶出液を０．２μｍフィルターでろ過する。プロテインＡ工程の実験デザイン及びＮＴＵデータは、それぞれ表３及び表５にまとめられる。
表３：プロテインＡクロマトグラフィーの実験デザイン
表３：プロテインＡクロマトグラフィーの実験デザイン
実施例４－２００ｍＭアセテートバッファー、ｐＨ３．０を用いたプロテインＡクロマトグラフィー（アフィニティ）によって行われるモノクローナル抗体の精製
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。Ｖａｎｔａｇｅ カラムをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
クロマトグラフィープロセスはいずれも、ＣｙｔｉｖａのＡＫＴＡ Ｐｕｒｅ １５０システムを用いて行った。タンパク質試料の濃度は、島津分光光度計を用いて、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ樹脂メディアをＣｙｔｉｖａから入手した。Ｖａｎｔａｇｅ カラムをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した。濁度測定は、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手したＴＮ１００ポータブル濁度計を用いて測定した。化学薬品はいずれも、ＪＴＢ又はＭｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手し、ＧＭＰグレードであった。
ＶａｎｔａｇｅカラムＶＬ１１×３０カラムに充填したプロテインＡ（Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＬＸ、Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株に発現されるＩｇＥ分子に結合できるモノクローナル抗体分子を捕捉する。滞留時間は、全てのフェーズで４分である。トリス－アセテート＋１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８～７．２による平衡化後、清澄化された生成物を≦４０ｍｇ／ｍＬの樹脂でロードする。表３に記載されるように、ロード後、平衡化バッファーによるカラム洗浄の後、洗浄２バッファー及び洗浄３バッファーによるカラム洗浄を行い、２００ｍＭアセテート、ｐＨ３．０±０．１バッファーによる溶出を行う。結合及び溶出モードでアフィニティークロマトグラフィー工程を操作し、ピークの５０ｍＡＵ（０．２５ＡＵ／ｃｍ）上方から５０ｍＡＵ（０．２５ＡＵ／ｃｍ）下方まで回収を行う。溶出液を更にウイルス不活化及び中和に付す。プロテインＡ溶出段階で濁度を測定した。
ウイルス不活化は、プロテインＡの溶出のｐＨを１Ｎ酢酸でｐＨ３．５に調整し、室温で５０分間インキュベートする。５０分間のインキュベーション後、１Ｍトリス塩基で試料をｐＨ６．２に中和する。中和されたプロテインＡ溶出液のＮＴＵを濁度計で測定する。中和されたプロテインＡ溶出液を０．２μｍフィルターでろ過する。プロテインＡ工程の実験デザイン及びＮＴＵデータは、それぞれ表４及び表５にまとめられる。
表４：プロテインＡの実験デザイン
表５：プロテインＡクロマトグラフィー工程の濁度データ
表４：プロテインＡの実験デザイン
結論として、プロテインＡクロマトグラフィー溶出中の溶出バッファーの塩濃度とｐＨは、中和された試料又はタンパク質混合物の濁度に大きく影響する。
実施例１に示されるように、２５ｍＭのアセテートバッファー、ｐＨ３．５でタンパク質を溶出させた場合、１２５ｍＭ及び２００ｍＭアセテートバッファー、ｐＨ３．５で溶出されたタンパク質よりも有意に高い濁度２２７ＮＴＵを示し、中和されたプロテインＡ溶出液において、２２７．０ＮＴＵ、１０３．０ＮＴＵがそれぞれ観察された。２００ｍＭアセテート、ｐＨ３．５±０．１と２００ｍＭアセテート、ｐＨ３．５±０．１バッファーとを比較すると、中和されたプロテインＡ溶出液において、３６．１ＮＴＵ及び４２．５ＮＴＵがそれぞれ観察された。低いＮＴＵ値は、ユニット操作に必要な面積を減少させるだけでなく、その後の深層ろ過性能を直接向上させる。
Claims (26)
- タンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスは、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨで約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度を有することを特徴とするプロセス。 - 溶出中の高い塩濃度が、１００ｍＭ超、１１０ｍＭ超、１２５ｍＭ超、１３０ｍＭ超、１４０ｍＭ超、１５０ｍＭ超、１６０ｍＭ超、１７０ｍＭ超、１８０ｍＭ超、１９０ｍＭ超、１９５ｍＭ超、約２００ｍＭから選択される請求項１に記載のプロセス。
- 溶出工程（ｄ）における前記適切なバッファーの濃度が、約１００ｍＭ～約２００ｍＭから選択される請求項１に記載のプロセス。
- 溶出工程（ｄ）における前記適切なバッファーの濃度が、約１２５ｍＭである請求項１に記載のプロセス。
- 溶出バッファーが、中和されたタンパク質混合物において約１０３ＮＴＵ未満の濁度を提供する請求項４に記載のプロセス。
- 溶出工程（ｄ）における前記適切なバッファーの濃度が、約２００ｍＭである請求項１に記載のプロセス。
- 前記溶出バッファーが、中和されたタンパク質混合物において６０ＮＴＵ、５０ＮＴＵ、４２．５ＮＴＵ、４０ＮＴＵ、３６．１ＮＴＵ、３５ＮＴＵ、及び３０ＮＴＵから選択される濁度を提供する請求項６に記載のプロセス。
- 中和されたタンパク質混合物における濁度が、３６ＮＴＵである請求項７に記載のプロセス。
- 中和されたタンパク質混合物における濁度が、４２．５ＮＴＵである請求項７に記載のプロセス。
- 前記適切な酸性ｐＨが、約ｐＨ３～約ｐＨ３．５から選択される請求項１に記載のプロセス。
- 請求項１に記載のタンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスが、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約１２５ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い濁度１０３を有することを特徴とするプロセス。 - 請求項１に記載のタンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスが、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．５±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い３６．１の濁度を有することを特徴とするプロセス。 - 請求項１に記載のタンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスが、
ａ．抗体又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．適切な酸性ｐＨ３．０±０．１で約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、目的の抗体で濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、１００ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物より低い４２．５の濁度を有することを特徴とするプロセス。 - 抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４抗体又はその断片、及び融合タンパク質から選択される請求項１に記載のプロセス。
- 前記ＩｇＧ１抗体又は融合タンパク質が、６～９の等電点を有する請求項１４に記載のプロセス。
- 前記ＩｇＧ１抗体又は融合タンパク質が、エタネルセプト、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、アダリムマブ、イブリツモマブ、オマリズマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、エクリズマブ、セルトリズマブペゴル、ウステキヌマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、オファツムマブ、トシリズマブ、デノスマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、ブレンツキシマブベドチン、ペルツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ラキシバクマブ、オビヌツズマブ、シルツキシマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ダルシズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、メポリズマブ、アリロクマブ、エボロクマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、イキセキズマブ、レスリズマブ、オララツマブ、ベズロトクスマブ、アテゾリズマブ、オビルトキサキシマブ、サリルマブ、オクレリズマブ、チルドラキズマブ、ロモソズマブ、ブロルシズマブ、クリザンリズマブから選択される請求項１４に記載のプロセス。
- 抗体が、抗ＩｇＥ抗体である請求項１に記載のプロセス。
- 抗ＩｇＥ抗体が、オマリズマブである請求項１７に記載のプロセス。
- 請求項１に記載のタンパク質混合物を精製するプロセスであって、前記プロセスが、
ａ．オマリズマブ又はその断片と不純物とのタンパク質混合物を適切なバッファーを用いてアフィニティーカラムにロードすることと；
ｂ．前記アフィニティーカラムを適切なバッファーで洗浄することと；
ｃ．任意に、適切なバッファーでもう１回洗浄を行うことと；
ｄ．約２００ｍＭの濃度を有する適切なバッファーで、オマリズマブで濃縮した前記タンパク質混合物を溶出することと；
ｅ．溶出されたタンパク質混合物のウイルス不活化及び中和を行うことと、
を含み、中和された前記タンパク質混合物は、標準濁度計で測定されたときに、２０ＮＴＵ未満の濁度を有することを特徴とするプロセス。 - ２００ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物が、３０ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物よりも低い濁度を有する請求項１に記載のプロセス。
- １００ｍＭ～１２５ｍＭの濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物が、３０ｍＭ未満の濃度を有するバッファーで溶出された前記タンパク質混合物よりも低い濁度を有する請求項１に記載のプロセス。
- アフィニティークロマトグラフィーが、プロテインＡ又はプロテインＧから選択される請求項１に記載のプロセス。
- 前記溶出バッファーが、酢酸、リン酸、及びＨＣｌから選択される請求項１に記載のプロセス。
- 前記溶出バッファーが、酢酸である請求項１に記載のプロセス。
- 前記溶出バッファーのｐＨが、２．５～約３．５から選択される請求項１に記載のプロセス。
- 前記溶出バッファーのｐＨが、約３．０である請求項１に記載のプロセス。
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