JP2019518434A - in situ分子検出のためのハイブリダイゼーション連鎖反応法 - Google Patents
in situ分子検出のためのハイブリダイゼーション連鎖反応法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019518434A JP2019518434A JP2018555974A JP2018555974A JP2019518434A JP 2019518434 A JP2019518434 A JP 2019518434A JP 2018555974 A JP2018555974 A JP 2018555974A JP 2018555974 A JP2018555974 A JP 2018555974A JP 2019518434 A JP2019518434 A JP 2019518434A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hcr
- probe
- initiator
- linker
- fluorescent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6841—In situ hybridisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/115—Aptamers, i.e. nucleic acids binding a target molecule specifically and with high affinity without hybridising therewith ; Nucleic acids binding to non-nucleic acids, e.g. aptamers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/682—Signal amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/16—Aptamers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/10—Applications; Uses in screening processes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【選択図】図2
Description
本出願は、2016年4月25日に出願された米国仮特許出願第62/326,959号に基づく優先権を主張するものであり、当該仮特許出願の全内容は全ての目的において参照により本明細書に援用される。
本発明は、米国立科学財団によって授与された助成金第DGE1144152号及び米国立衛生研究所によって授与された助成金第HG005550号を基に、政府援助を受けてなされた。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
本明細書に記載の方法において、試料中の複数の標的分子は、1以上もしくは複数の第一プローブを標的分子に結合する工程を含めて、連続して又は、好ましくは、同時に、各々個々に検出される。第一プローブは「第一プローブ」、「第一工程Aプローブ」、又は「工程Aプローブ」とも称される。後に、検出可能な部分又は検出可能な標識を含む核酸ヘアピン分子のハイブリダイゼーション連鎖反応が、複数の検出可能な部分又は検出可能な標識を前記プローブと、それによって前記標的分子に、会合させる。前記検出可能な部分又は検出可能な標識が、検出される。工程Aのプログラマビリティは、前記標的分析物と前記第一プローブとの間の関連付けを逆進させるための方法及び材料によって可能となる。図4〜5を参照されたい。
所望の複数の標的分子の全て、又はいくつかの所望のその一部が、それに結合したプローブ又はプローブセットを有するように、プローブ又はプローブセットを複数の標的分子の各々に結合する工程を含み、各プローブは、循環的HCR工程B〜D、すなわち、HCRイニシエーターへの機能的連結、HCR重合反応の惹起、及び前記HCRポリマーによる増幅された蛍光シグナルの生成、を介して情報を伝達可能である、本明細書に記載の方法において、試料中の複数の標的分子は検出される。第一プローブとHCRイニシエーターとの間の機能的結合は、第一プローブとHCRイニシエーターとの間の、化学結合及び分子間相互作用から構成される、物理的結合、並びに、ゲーティングされた、又はゲーティングされていない(例えば、適切な条件下、且つ、ヘアピンなどの相補的HCRモノマーの存在下で、HCRを惹起できる)のようなHCRイニシエーターの状態、の両方を説明することが意図される。第一プローブとHCRイニシエーターとの間の機能的結合は、物理的結合が確立及び/若しくは特異的に解除され得るように、第一プローブとHCRイニシエーターとの間の物理的結合を調節することによって;又は、イニシエーターが、適切な条件下、且つ相補的ヘアピンの存在下でHCRを特異的に惹起できるようになるように、及び/若しくは、適切な条件下、且つ相補的ヘアピンの存在下でHCRを特異的に惹起できなくなるように、HCRイニシエーターをゲーティングすることによって;又はその両方によって、プログラムできる。
本明細書に記載の方法では、試料中の複数の標的分子が検出され、循環的HCR法におけるいくつかの所定の時点で、所望の複数個の標的分子のそれぞれがそれに結合した第一プローブ又は第一プローブセットを有するように、1以上もしくは複数の第一プローブを、複数の標的分子のそれぞれに結合させる工程を含み、それぞれの第一プローブはいくつかの所定の時点でHCRイニシエーターに機能的に結合している。イニシエーターに対応して結合する、且つ、イニシエーターに対して固有であり得る、ヘアピン分子などの、準安定性HCRモノマーが添加され、ハイブリダイゼーション連鎖反応が本明細書に記載のように実行され、イニシエーターの部位で繋留されたHCRポリマーが生成される。最初のHCRモノマーがイニシエーターにハイブリダイズ又は結合しており、残りのHNRモノマーが連続的に伸長されて前記HCRポリマーをなしている限りにおいて、HCRポリマーは「繋留」されている。いくつかの所定の時点で、繋留されたHCRポリマーは、1以上もしくは複数の蛍光性又は検出可能な部分によって標識される。このように、前記試料中の各標的分子はHCRイニシエーターを有するプローブに結合しており、標的分子を検出するためにヘアピン分子などのHCRモノマーが添加される。この工程は、経時的に、試料中の各標的分子に対して連続的又は同時に実行され得る。各標的分子はHCRイニシエーターを有するプローブに結合していてもよく、後に、ヘアピン分子などのHCRモノマーが循環的HCR法の間に1回又は複数回、標的分子の検出のために添加される。循環的HCR法の全体を通じて、各分析物、又は、調査中の一次情報のそれぞれ固有の態様(分子種、分子的性質、若しくは分子構成など)は、循環的HCRを介して、固有の型の定序性の増幅された蛍光シグナルを生成する。循環的HCRでは、HCRヘアピン分子及び関連付けられた又は対応するイニシエーター配列は、各標的分子に対する縮重(degenerate)であり得る。定序性の一連のHCR重合反応の中で、重合の解除又はHCRポリマーの分解若しくは分離でのように、HCRポリマーがHCR重合反応間で機能的に解除されて、同じ又は共通の一連のHCRポリマーが繰り返し使用されてもよい。このように、試料中の複数個の標的分子の全てを検出するために、単一のHCRシステム、又は一連の直交性HCRシステムを用いることができる。HCRポリマーを形成し、分解又は分離する能力は、各HCR重合反応間で試料を機能的にリセットし、HCRシステムを循環的HCRのサイクル間で再利用可能にする、本明細書に記載の材料及び方法によって可能となる。
本明細書に記載の方法では、試料中の複数の標的分子が検出され、循環的HCR法におけるいくつかの所定の時点で、所望の複数個の標的分子のそれぞれがそれに結合した第一プローブ又は第一プローブセットを有するように、第一プローブ又は第一プローブセットを、複数の標的分子のそれぞれに結合させる工程を含み、それぞれの第一プローブはいくつかの所定の時点でHCRイニシエーターに機能的に結合している。イニシエーターと関連付けられた又はイニシエーターに対して固有の、ヘアピン分子などの、HCRモノマーが添加され、ハイブリダイゼーション連鎖反応が本明細書に記載のように実行され、イニシエーターの部位で繋留されたHCRポリマーが生成される。いくつかの所定の時点で、繋留HCRポリマーは、1以上もしくは複数の蛍光性又は検出可能な部分によって標識される。このように、試料中の各標的分子はHCRイニシエーターを有するプローブに結合しており、標的分子を検出するためにヘアピン分子などのHCRモノマーが添加される。この工程は、経時的に、試料中の各標的分子に対して連続的又は同時に実行され得る。各標的分子はHCRイニシエーターを有するプローブに結合していてもよく、後に、ヘアピン分子などのHCRモノマーが循環的HCR法の間に1回又は複数回、標的分子の検出のために添加される。循環的HCR法の全体を通じて、各分析物、又は、調査中の一次情報のそれぞれ固有の態様(分子種、分子的性質、若しくは分子構成など)は、循環的HCRを介して、固有の型の定序性の増幅された蛍光シグナルを生成する。循環的HCRでは、蛍光シグナルは、HCRのいずれかのサイクル中に、各標的分子に対する縮重(degenerate)となり得る。工程Dのプログラマビリティは、蛍光性部分を、HCRポリマーに特異的に結合できるように、且つ/又は、HCRポリマーから特異的に除去できるように、HCRポリマーを蛍光シグナルによりプログラムする方法によって可能となる。このように、定序性の一連のHCR重合反応の中で、同じ又は共通の一連の検出可能な部分が繰り返し使用され得る。
本明細書に記載の循環的HCR法の工程A〜Dは、蛍光シグナルの検出及び解析までの第一プローブの結合によって捕捉された標的分析物の一次情報からの標識化及び検出カスケードを通じた情報の伝達に関連しているため、概念的にモジュール式である、すなわち、別々の工程として分離可能であるが、機能的には、モジュール式であるか、又は、特定の循環的HCR法の実際の設計及び実行及び使用において協調され得る。いずれか1つの工程の実行又は解除は、循環的HCR法の1又は複数の他の工程の実行及び/又は解除と協調され得る。
循環的HCR読み取りを含むRNAin situハイブリダイゼーション
1. RNAin situハイブリダイゼーション用に生物試料を調製する
a. 線維芽細胞をガラスボトム(MATTEK)ディッシュ上に30〜80%コンフルエントに播種する
b. 接着のために細胞を少なくとも12時間増殖させる
c. 1×リボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、2mMバナジルリボヌクレオシド複合体(VRC))を含む、PBS中4%PFAを4℃で添加する
d. 37℃で10分間インキュベートする
e. 固定を止めるために、リボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、2mM VRC)を含むPBS中100mMグリシンを添加する
f. 24℃で5分間インキュベートする
g. リボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、2mM VRC)を含む、リボヌクレアーゼ非含有1×PBSで1分間、1回洗浄する
h. リボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、2mM VRC)を含むリボヌクレアーゼ非含有1×PBS中の0.1%トリトンXで、細胞を30分間透過処理する
i. リボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、2mM VRC)を含む、リボヌクレアーゼ非含有1×PBSでそれぞれ1分間、2回洗浄する
j. プレハイブリダイゼーション緩衝液である2×デンハート液+1×リボヌクレアーゼ非含有PBS+リボヌクレアーゼ阻害剤(例えば、2mM VRC)を添加する
k. 5分間インキュベートする
l. 200uLのハイブリダイゼーション緩衝液中の2nmol RNA ISH用プローブプールを添加する(1mL用のレシピ):
i. 100uLの20×SSC
ii. 300uLのホルムアミド
iii. 10uLのリボヌクレアーゼ阻害剤(例えばVRC)
iv. 40uLの50×デンハート液(最終的に2×)
v. 200uLの50%ポリアクリル酸(ナトリウム塩)(分子量1000)
vi. 350uLのH2O
m. 37℃で36時間ハイブリダイズする
a. 2×0.1%Tween−20含有酸ナトリウム・クエン酸ナトリウム緩衝液(Sodium Acetate Sodium Citrate buffer with 0.1% Tween−20)(SASCT)で、試料を5分間5回洗浄する
b. 10uLの5×SASC中のスナップ冷却(snap cooling)(95℃で90秒間加熱し、30分間かけて卓上で室温に冷却)によって、HCRのサイクル毎に、dU塩基取り込みで修飾された、30pmolの各ヘアピンを調製する。
c. 全てのスナップ冷却されたヘアピンをHCRのサイクル毎に200uLの5×SASCTの体積まで添加することで、ヘアピン溶液を調製する。
a. 2×SSC+30%ホルムアミド+2mM VRC中、2.5uM濃度の各リンカー鎖を添加することにより、架橋性ホスホロチオエートで修飾された、リンカー鎖のサイクルサブセットを、37℃で30分間、ハイブリダイズする
b. 2×SSCTでそれぞれ5分間5回洗浄する。
c. ヘアピン溶液を試料に添加し、室温で30分間〜16時間インキュベートする。
d. 2×SSCTでそれぞれ5分間5回洗浄する。
e. 試料をイメージングする
f. NEB規格に従ってUSER反応を加え、37℃で30分間インキュベートして、HCRポリマーを分解する
g. 硝酸銀に、50mMの最終濃度まで加えて、リンカープローブからイニシエーター(initatior)を切断する
h. 2×SSCTでそれぞれ5分間3回洗浄する。
i. リンカー鎖の全てのサブセットが使用されるまで、3を繰り返す。
1. RNAin situハイブリダイゼーション用に生物試料を調製する
a. 線維芽細胞をガラスボトム(MATTEK)ディッシュ上に30〜80%コンフルエントに播種する
b. 接着のために細胞を少なくとも12時間増殖させる
c. 1×デオキシリボヌクレアーゼ非含有PBS中の4%PFAを4℃で添加する
d. 37℃で10分間インキュベートする
e. 固定を止めるために、1×デオキシリボヌクレアーゼ非含有PBS中の100mMグリシンを添加する
f. 24℃で5分間インキュベートする
g. デオキシリボヌクレアーゼ非含有1×PBSで1分間、1回洗浄する
h. デオキシリボヌクレアーゼ非含有1×PBS中の0.1%トリトンXで、細胞を透過処理する
i. デオキシリボヌクレアーゼ非含有1×PBSでそれぞれ1分間、2回洗浄する
j. 2×SSCT+50%ホルムアミドで2回洗浄する
k. Oligopaintsに従って(参照によって本明細書に援用される、Beliveau、Brian J.、Nicholas Apostolopoulos、およびChao−ting Wu. 「Visualizing Genomes with Oligopaint FISH probes.」 Current Protocols in Molecular Biology (2014): 14−23)、Oligopaint設計で、各ゲノム遺伝子座が、それぞれ4つのHCRポリマーセットの5つの循環式読み取り用に設計された、4種のスペクトル的に別個の蛍光性着色剤で検出される、一連の20個の直交性の独立したHCRシステムから5種のHCRシグナルを用いてバーコード化されるように、ハイブリダイゼーション用マスターミックスを調製する。遺伝子座バーコードを構成する5個のHCRイニシエーター配列を、Oligopaintの3’及び5’非ゲノムハイブリダイズ用アーム又はハンドルに付加する。
l. 試料スライドを2×SSCT+50%ホルムアミド中、92℃で2.5分間加熱する。
m. 試料を網羅可能な最少量のハイブリダイゼーション用マスターミックス中のOligopaintプローブ(通常、20〜30pmolのOligopaintプローブが、固定された組織培養細胞において強い染色を生むのに十分である;組織切片及び全体包埋組織には10倍多くのプローブが推奨される)を添加し、加熱・加湿した恒温器内で42℃で14時間超インキュベートする。
a. 試料を2×SSCTで洗浄した後、60℃で15分間インキュベートする。
b. 試料を0.2×SSCで4回、それぞれ5分間洗浄する
c. 10uLの5×SASC中のスナップ冷却(95℃で90秒間加熱し、30分間かけて卓上で室温に冷却)によって、30pmolの各ヘアピンを調製する。各々の独立した直交性のHCRシステムが固有の直交性の25塩基ハイブリダイゼーション部位を有するように、HCRヘアピンを、例えば蛍光プローブをハイブリダイズする、ハイブリダイゼーションによる配列決定による照合のための延長ハンドルで修飾する。ハイブリダイゼーション部位は、計算的DNA設計ツールを用いてのように、相互直交性且つHCRシステムに直交性であり、異種間ハイブリダイゼーションを防ぐように、計算的に設計できる。
d. 全てのスナップ冷却されたヘアピンをHCRのサイクル毎に200uLの5×SASCTの体積まで添加することで、ヘアピン溶液を調製する。
e. 20のHCRセット全てのヘアピン溶液を試料に添加し、室温で30分間〜16時間インキュベートする。
f. 2×SASCTでそれぞれ5分間5回洗浄する。
a. HCR読み取りの各サイクルにおいて、中間体の3’チオール−dI塩基を含む、スペクトル的に別個のフルオロフォアにそれぞれ結合した、4つのプローブをハイブリダイズし、2×SASCT中2.5uM濃度のプローブを室温で10分間添加する
b. 0.2×SASCTでそれぞれ5分間4回洗浄する
c. イメージングする
d. 硝酸銀を50mMの最終濃度まで加えて、HCRポリマーのハンドルにハイブリダイズしたDNA鎖からフルオロフォアを切断する
e. 0.2×SASCTでそれぞれ5分間4回洗浄する
本開示の方法における指数関数的バーコーディングの一例を示す、図17に示されているように、RNA分子又はDNA分子は、各々が3つの3’及び5’ハンドルモチーフのうちの1つを有する、複数の相補的なプローブに標的とされ、それらとハイブリダイズする。各プローブは、HCRのサイクル及びHCRイニシエーターに関する複合情報を各々含む、4つのリンカードメインを含む。リンカーが、この情報保持ドメインにアニールしてイニシエーター配列を導入し、これを用いて、HCR単位複製配列及び対応する蛍光シグナルが生成される。イメージングの後、記載された方法のいずれかを用いてシグナルがリセットされ、次のサイクルが行われる。4N直交性リンカードメインを介して16,000,000超の固有のバーコード(412)を生成するために、4つの直交性の、独立した、スペクトル的に別個のHCRシステムしか使用しない。
構成に応じて、いくつかのHCRプローブセット設計が可能である。これらのプローブは、概して、HCR可能なヘアピンなどの直交性の一連の1又は複数の準安定HCRモノマーであるという特徴を有する。HCRヘアピンそれ自体が、酵素的合成だけでなく、化学的DNA合成によって生成され得る。蛍光シグナルをプログラムによって生成及びリセットするための蛍光標識及び化学的性質などのさらなる特徴が導入される。
図21は、本開示の方法におけるHCR標識戦略Iを対象としている。二本鎖鋳型DNAが、化学合成を通じて、又は化学合成とその後のDNAポリメラーゼによる鎖伸長を通じて、生成される。二本鎖鋳型DNAは、HCRモノマー又はHCRヘアピンのための配列、及び、蛍光プローブハイブリダイゼーション又はトーホールド鎖置換のためのハンドルなどのあらゆる付加配列、を含む。二本鎖鋳型DNAは、T7 RNAポリメラーゼプロモーター配列などの、RNAポリメラーゼプロモーターを含む。二本鎖鋳型DNAは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)でのように、精製されてもよい。二本鎖鋳型DNAを用いて、インビトロ転写(IVT)によりRNA分子が生成される。前記RNAは前記二本鎖鋳型DNAから精製されてもよい。前記RNA分子を逆転写(RT)用の鋳型として用いて、相補的な一本鎖DNA分子が生成される。前記RNAが分解され、且つ/又は、前記一本鎖DNAが精製され、準安定ヘアピンに折り畳まれる。HCRヘアピンが、末端デオキシトランスフェラーゼ反応などによる、いくつかの方法で蛍光標識されて、1又は複数の末端蛍光修飾DNA塩基が追加される。前記RTプライマーは、得られる一本鎖DNA分子に組み込まれる、1又は複数のフルオロフォアを含む。蛍光性DNA塩基は逆転写中に一本鎖DNA分子に組み込まれる。あるいは、当業者に公知の方法を用いて、逆転写などの間に、ハイブリダイゼーションによる配列決定(SBH)、合成による配列決定(SBS)、又はライゲーションによる配列決定(SBL)による蛍光標識のための部位として機能する付加配列が、HCR分子に追加される。
(キイロショウジョウバエ(drosophila melanogaster)遺伝子RNAP IIに対する循環的HCRのためのプローブセット)
表1は、工程Bを用いるCHCRのためのmRNAキイロショウジョウバエ(drosophila melanogaster)遺伝子RNAP IIを標的とするDNA ISH用プローブセットを含む。標識ID(工程Bプローブモチーフ)とは、HCRイニシエーターも含む工程Bプローブに相補的なハンドル配列を指す。各配列中の下線部の「TAT」配列は、標的mRNAに相補的な領域(小文字で表示)と工程Bプローブに相補的な領域(大文字で表示)との間のスペーサーとして働く。この遺伝子のためのバーコードは、一連の標識[0、4、8、12、16]によって定められ、これらはCHCRを介して一連の定序性の蛍光シグナルに変換され、ここで、標識とHCRシグナルとの間の関係は第一プローブをHCRイニシエーターに機能的に連結する工程Bプローブによって定められる。
(RNAPIIプローブとHCRイニシエーターとの間の切断可能なリンカーセット)
表2は、RNAP IIを標的とする、表1に列挙されたものを含む複数の第一プローブに対応する工程Bプローブ配列を含む。列「標識ID」は、第一プローブに相補的な工程Bプローブ配列モチーフを指し、CHCRのサイクル及びHCRシグナルの両方に関する情報をコードする。「HCRシステム」とは、4つの直交性HCRシステムのうちのどれが各標識IDと関連付けられているかを指す。「工程Bプローブ配列」は、各標識の第一プローブに含まれる配列の逆相補体である、第一プローブと結合する工程Bプローブの配列を指す。「スペーサー」は、第一プローブとHCRイニシエーターを含む領域との結合に関与するプローブB配列の領域を空間的に分離するように設計された、短い配列である。HCRイニシエーター配列は表3に示される。列「リンカーオリゴ配列」は、大文字で示された工程Bプローブ配列と結合した、下線部で示されたスペーサー配列と結合した、小文字で示された、オリゴのための、HCRシステムに対応するHCRイニシエーター配列を含む。Xは、硝酸銀溶液を用いて切断可能な架橋性ホスホロチオエート結合を含む5’チオール−dI修飾塩基を示す。
(酵素的及び化学的切断を用いる切断可能なHCRヘアピンの配列)
酵素的又は化学的切断のために設計されたいくつかの修飾HCRヘアピン配列。Keyはオリゴ配列内に含まれる修飾された配列の参照を含む。
蛍光シグナルの前記HCRポリマーとのプログラム可能な関連付けのための、前記HCRポリマーに対する蛍光プローブのSBHのためのハンドル配列は、大文字で示される。HCR重合に関与する配列は小文字で示される。切断可能な工程Dプローブも示されており、工程Dプローブを前記HCRポリマーにハイブリダイズすることで、蛍光をポリマーと会合させることができ、検出後、硝酸銀を加えることで、蛍光色素を工程Dプローブから切断し、HCRポリマーを非蛍光性状態に戻すことができる。
他の実施形態が当業者には明らかである。上記の説明は、明確さのみを目的として提供された単なる例示であると理解されたい。本発明の精神及び範囲は上記の例に限定されず、特許請求の範囲によって包含される。上記で引用された全ての刊行物、特許及び特許出願は、あたかも個々の刊行物又は特許出願が参照によって援用されると明確に示されるのと同程度に、全ての目的においてそれらの全体が参照によって本明細書に援用される。
Claims (70)
- (a)試料を1又は複数のプローブと接触させること、ここで、前記1又は複数のプローブのうちの特定のプローブはリンカーに結合しており、前記特定のプローブは標的分析物の配列に相補的な配列を有し、前記試料を前記1又は複数のプローブと接触させると前記特定のプローブが前記標的分析物に結合する;
(b)前記試料を、1又は複数のハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)イニシエーターと、前記1又は複数のHCRイニシエーターのうちの特定のHCRイニシエーターが前記リンカーに結合することを可能とするのに十分な条件下で接触させること、ここで、前記特定のHCRイニシエーターは前記特定のプローブからは独立しており、前記試料を前記1又は複数のHCRイニシエーターと接触させると、前記リンカーが前記プローブと前記特定のHCRイニシエーターとを結合させる;
(c)前記試料を1又は複数のHCR増幅因子と接触させて、ハイブリダイゼーション連鎖反応を開始させること、ここで、前記1又は複数のHCR増幅因子のうちの特定のHCR増幅因子が検出可能な標識を含むHCRモノマーを少なくとも1つ含むことで、前記特定のプローブに結合した、前記HCRモノマーを含む増幅産物が生成される;及び
(d)前記増幅産物を検出することで、前記標的分析物を同定すること、
を含む、試料中の標的分析物を同定する方法。 - プログラム可能であり、かつ時間的に順序付けられたハイブリダイゼーション連鎖反応を可能にするように構成された、各々特定の標的分析物に特異的な複数のプローブセットに、前記試料を接触させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記検出可能な標識が蛍光標識であり、前記検出が蛍光シグナルの検出を含み、経時的に生成された蛍光シグナルは全体として、各標的分析物の分子の実体、分子の性質、又は分子構成を含む固有の一群の情報を与える、請求項2に記載の方法。
- 前記1又は複数のHCR増幅因子が2つの準安定なDNAヘアピンを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1又は複数のHCR増幅因子の検出可能な標識が、マルチプレックス検出のためのスペクトル的に別個の蛍光シグナルを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記HCRモノマーの検出可能な標識が、ハイブリダイゼーションによる蛍光シークエンシング、ライゲーションによる蛍光シークエンシング、又は合成による蛍光シークエンシングのための、シークエンシング用鋳型を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記標的分析物がRNA、DNA、RNA類似体、及びDNA類似体を包含する核酸高分子、タンパク質、並びにその化学修飾体を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記標的分析物が脂質、代謝産物、生体分子、及び他の小分子を含む、請求項1に記載の方法。
- 複数の標的分析物を逐次標識することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記逐次標識が各分析物を複数のHCRイニシエーターと会合させることを含む、請求項9に記載の方法。
- 前記特定のHCR増幅因子が2つ以上の準安定HCRモノマーを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記特定のプローブの標的分析物への前記結合が2回以上繰り返される、請求項1に記載の方法。
- 前記リンカーが、結合(bond)であってもよく、又は、前記リンカーが、イニシエーター配列を含むオリゴヌクレオチドの配列部分に相補的であり、かつ前記イニシエーター配列を含む前記オリゴヌクレオチドにハイブリダイズする配列部分を含んでいてもよい、請求項1に記載の方法。
- 前記特定のプローブと前記リンカーとの間の結合、前記リンカーと前記HCRイニシエーターとの間の結合、又は前記特定のプローブと前記HCRイニシエーターとの間の結合を、破壊する又は解除させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記HCRイニシエーターがHCRを開始させることを防ぐ、保護基に対応するイニシエーター配列を、前記リンカーが含む、請求項1に記載の方法。
- 前記保護基が保護オリゴヌクレオチドである、請求項15に記載の方法。
- 前記リンカーの前記保護基を破壊することによって、前記HCRイニシエーターにHCRを惹起させることをさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 前記破壊が、前記試料に脱保護オリゴヌクレオチドを導入して、トーホールド鎖置換により前記保護基を除去することを含む、請求項17に記載の方法。
- 前記検出後に増幅産物を分解又は解体することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記検出後に増幅産物と検出用標識との間の結合を破壊する又は解除させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記特定のプローブの前記標的分析物への結合を破壊する又は解除させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 複数の検出サイクルを含む複数回のハイブリダイゼーション連鎖反応を実施することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記複数回のハイブリダイゼーション連鎖反応が、1若しくは複数のHCRイニシエーター又は1若しくは複数のHCR増幅因子を再利用することを含む、請求項22に記載の方法。
- 前記特定のHCRイニシエーターと前記特定のプローブとの間の機能的結合をプログラミングすることをさらに含み、前記プログラミングが、
a)ハイブリダイゼーションによる配列決定を用いて相補的核酸分子を有するリンカープローブに前記HCRイニシエーターを加えるために核酸ハイブリダイゼーションを使用すること、
b)前記HCRイニシエーターをリンカープローブに加えるために酵素を使用すること、
c)リンカープローブにハイブリダイズされたHCRイニシエーターを除去するために核酸ハイブリダイゼーションを破壊するために熱若しくは変性剤を使用すること、
d)リンカープローブを介して標的分子に局在しているHCRイニシエーターから保護鎖を除去するためにトーホールド鎖置換を使用すること、又は
e)イニシエーターとリンカープローブとの間の化学結合を破壊する化学的処理、酵素的処理、又は光処理でHCRイニシエーターが除去できるようにするために、HCRイニシエーターとリンカープローブとの間に化学基、酵素基、又は光に対して不安定な基を取り込むこと
を含む、請求項1に記載の方法。 - 前記HCRイニシエーターを前記リンカープローブに加える酵素が、スプリントライゲーション反応を触媒するDNAリガーゼである、請求項24に記載の方法。
- 前記ハイブリダイゼーション連鎖反応を逆行又は停止させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- ハイブリダイゼーション連鎖反応の逆行又は停止が、
a)1又は複数の相補DNA鎖の追加により増幅産物の分解が起こるように、トーホールド鎖置換のための1又は複数の付加配列を含む修飾HCRモノマーを使用すること、又は
b)増幅産物が化学的処理、酵素的処理、又は光処理によって断片化又は破壊されるように、HCRモノマーのDNA骨格内に1又は複数の酵素的若しくは化学的に感受性の基又は光に対して不安定な基を含む、修飾HCRモノマーを使用すること、
を含む、請求項26に記載の方法。 - a)合成による配列決定(SBS)、ライゲーションによる配列決定(SBL)、又はハイブリダイゼーションによる配列決定(SBH)を用いてプローブすることが可能な付加配列を含む修飾HCRモノマーを用いることで、蛍光性部分を前記増幅産物に導入すること、
b)前記HCRモノマーのDNA骨格と蛍光性部分を含む前記検出可能な標識との間に酵素、化学物質、又は光に対して不安定な基を含む修飾HCRモノマーを用いて、前記蛍光性部分を化学的処理、酵素的処理、又は光処理で除去できるようにすること、
c)合成による配列決定(SBS)、ライゲーションによる配列決定(SBL)、又はハイブリダイゼーションによる配列決定(SBH)により増幅産物を標識可能な修飾蛍光プローブであって、トーホールド鎖置換のための付加配列を含む修飾蛍光プローブを用いることで、前記蛍光プローブと前記増幅産物との間のハイブリダイゼーションの破壊により前記蛍光プローブを前記増幅産物から除去できるようにすること、又は、
d)SBS、SBL、又はSBHなどにより増幅産物を標識可能な修飾蛍光プローブであって、前記増幅産物の骨格と蛍光性部分を含む検出可能な標識との間に酵素、化学物質、又は光に対して不安定な基を含む修飾蛍光プローブを用いて、化学的処理、酵素的処理、又は光処理によって前記蛍光性部分を除去できるようにすること
によって、前記増幅産物からの蛍光シグナルの生成をプログラムすることをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記特定のプローブが前記標的分析物から除去可能であるか、前記HCRイニシエーターが前記リンカーから除去可能であるか、前記増幅産物が前記HCRイニシエーターから除去可能であるか、又は、前記検出可能な標識が前記増幅産物から除去可能である、請求項1に記載の方法。
- 1又は複数のプローブ、ここで該1又は複数のプローブのうちの特定のプローブは、リンカーと結合しており、かつ標的分析物の配列に相補的な配列を有する;
1又は複数のHCRイニシエーター、ここで該1又は複数のHCRイニシエーターのうちの特定のHCRイニシエーターは、前記特定のプローブからは独立しており、かつ前記リンカーに結合して前記プローブを前記特定のHCRイニシエーターに連結するように構成される、特定のHCRイニシエーターを含む;及び
1又は複数のHCR増幅因子、ここで該1又は複数のHCR増幅因子のうちの特定のHCR増幅因子は、検出可能な標識を含む少なくとも1つのHCRモノマーを含む
を含み、
前記特定のHCRイニシエーターは、前記HCRモノマーに結合し、ハイブリダイゼーション連鎖反応を惹起して、前記HCRモノマーを含み前記特定のプローブに結合している増幅産物を生成するように構成される、
循環的ハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)システム。 - 各々特定の標的分析物に特異的であり、かつプログラム可能で時間的に順序付けられたハイブリダイゼーション連鎖反応用に設計されている、複数のプローブセットをさらに含む、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記複数のプローブセットが、経時的に生成される蛍光シグナルを与えるように構成され、前記経時的に生成される蛍光シグナルは全体として、分子の実体、分子の性質、又は分子構成を含む各標的分析物についての固有の一群の情報を与える、請求項31に記載のHCRシステム。
- 前記HCR増幅因子の各々が、そのそれぞれがDNAヘアピンである2つ以上の準安定HCRモノマーを含む、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記1又は複数のHCR増幅因子が、マルチプレックス検出のためのスペクトル的に別個の蛍光シグナルを含む検出可能な標識を含む2つ以上の準安定HCRモノマーを含む、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記HCRモノマーが非蛍光性HCRモノマーである、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記非蛍光性HCRモノマーが、増幅産物の生成の際又はその後に蛍光標識されるように構成される、請求項35に記載のHCRシステム。
- 前記非蛍光性モノマーから形成された増幅産物が、ハイブリダイゼーションによる蛍光シークエンシング、ライゲーションによる蛍光シークエンシング、合成による蛍光シークエンシング、酵素反応、又は化学反応によって、前記増幅産物の生成後に蛍光標識される、請求項36に記載のHCRシステム。
- 前記1若しくは複数のプローブ、前記リンカー、1若しくは複数のHCRイニシエーター、又は1若しくは複数のHCR増幅因子が、再利用されるように構成される、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記リンカーが、前記HCRイニシエーターを含むオリゴヌクレオチドに相補的な核酸配列である、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記リンカーが、前記イニシエーターからのプログラム可能な分離のための官能基を含む、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記検出可能な標識の検出をプログラムによって生成及びリセットできる、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記HCRモノマーが、前記増幅産物のプログラム可能な解体又は分解のための官能基を含有する、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記官能基がトーホールド鎖置換配列を含む、請求項42に記載のHCRシステム。
- 前記官能基が、化学的に不安定な化学基、酵素に対して不安定な化学基、又は光に対して不安定な化学基を含む、請求項42に記載のHCRシステム。
- 前記特定のプローブの前記標的分析物への結合が、ハイブリダイゼーション連鎖反応の間に破壊又は解除されるように構成される、請求項30に記載のHCRシステム。
- 前記標的分析物への前記特定のプローブの結合が、化学的処理、酵素処理、RNA in situハイブリダイゼーション(ISH)用プローブのデオキシリボヌクレアーゼ処理、5’phosISH用プローブのエキソヌクレアーゼ処理、核酸プローブのヌクレアーゼ処理、ペプチドプローブのプロテアーゼ処理、熱若しくは変性剤の使用による核酸ハイブリダイゼーションの破壊、熱若しくは変性剤の使用によるアプタマー結合の破壊、又は、熱若しくは変性剤の使用による抗体とタンパク質との間の結合の破壊、によって破壊又は解除される、請求項45に記載のHCRシステム。
- (e)試料を、標的分析物の配列に相補的な配列を含む第一プローブと接触させること;
(f)前記試料を、前記第一プローブに結合するように構成された第二プローブと接触させること、ここで、前記第一プローブと前記第二プローブとの結合が、検出可能な標識を含む少なくとも1つのハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)増幅因子の存在下でHCRを促進して、前記検出可能な標識を含む増幅産物を生成し、前記第二プローブは前記HCR増幅因子及び前記第一プローブからは独立している;並びに、
(g)前記検出可能な標識を検出することにより、前記標的分析物を同定すること、
を含む、試料中の標的分析物を同定する方法。 - 前記HCRがポリメラーゼ連鎖反応ではない、請求項47に記載の方法。
- 前記増幅産物が前記第一プローブに結合している、請求項47に記載の方法。
- 前記HCR増幅因子が前記第二プローブの配列に相補的な配列を有する、請求項47に記載の方法。
- 前記第一プローブが、前記第一プローブが前記第二プローブに結合することを可能にするリンカーに結合している、請求項47に記載の方法。
- 前記第一プローブが、前記HCRを開始させるHCRイニシエーターを含む、請求項47に記載の方法。
- 前記第一プローブが、前記試料を前記第二プローブ接触させる前に前記HCRイニシエーターが前記HCRを開始させることを防ぐ保護基を含む、請求項52に記載の方法。
- 前記保護基が保護オリゴヌクレオチドを含む、請求項53に記載の方法。
- 前記第二プローブが、前記HCRを開始させるHCRイニシエーターを含む、請求項47に記載の方法。
- 前記第二プローブが検出可能な標識を含まない、請求項47に記載の方法。
- 前記HCR増幅因子が2つ以上の準安定HCRモノマーを含む、請求項47に記載の方法。
- 前記2つ以上の準安定HCRモノマーの各々が準安定なDNAヘアピンを含む、請求項57に記載の方法。
- 検出可能な標識を検出するためのディテクター;及び
前記ディテクターに作動的に接続されたコントローラー、を含み、
前記コントローラーは、
(i)前記試料を前記標的分析物の配列に相補的な配列を含む第一プローブと接触させること;
(ii)前記試料を前記第一プローブに結合するように構成された第二プローブと接触させること、ここで、前記第一プローブと前記第二プローブとの結合が、検出可能な標識を含む少なくとも1つのハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)増幅因子の存在下でHCRを促進して、前記検出可能な標識を含む増幅産物を生成し、前記第二プローブは前記HCR増幅因子及び前記第一プローブからは独立している;及び
(iii)前記検出可能な標識を検出するために前記ディテクターを使用することによって前記標的分析物を同定すること
を指示するように、個別又は集合的にプログラムされた、1又は複数のコンピュータプロセッサを含む、試料中の標的分析物を同定するためのシステム。 - 検出可能な標識を含み、かつハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)を促進するように構成された、HCR増幅因子;
標的分析物の配列に相補的な配列を含む第一プローブ;及び
前記第一プローブに結合するように構成され、検出可能な標識を含まず、かつ前記HCR増幅因子及び前記第一プローブとは独立した、第二プローブ
を含む、試料中の標的分析物を同定するためのキット。 - 前記HCRを行うために前記HCR増幅因子、第一プローブ及び前記第二プローブを使用するための説明書をさらに含む、請求項60に記載のキット。
- 前記第一プローブと前記第二プローブとの間のリンカーを切断することで、1又は複数のHCRイニシエーターが1又は複数のHCR増幅因子と共に連鎖反応を開始させることを防ぐように構成された、切断剤をさらに含む、請求項60に記載のキット。
- 前記HCR増幅因子が前記第二プローブの配列に相補的な配列を有する、請求項60に記載のキット。
- 前記第一プローブが、前記第一プローブが前記第二プローブに結合することを可能にするリンカーに結合している、請求項60に記載のキット。
- 前記第一プローブが、前記HCRを開始させるHCRイニシエーターを含む、請求項60に記載のキット。
- 前記第一プローブが前記第二プローブに結合される前に前記HCRイニシエーターが前記HCRを開始させることを防ぐ保護基を前記第一プローブが含む、請求項65に記載のキット。
- 前記保護基が保護オリゴヌクレオチドを含む、請求項66に記載のキット。
- 前記第二プローブが前記HCRを開始させるHCRイニシエーターを含む、請求項60に記載の方法。
- 前記HCR増幅因子が2つ以上の準安定HCRモノマーを含む、請求項60に記載のキット。
- (a)第二プローブに結合した第一プローブを含む試料を提供すること、ここで前記第一プローブは、標的分析物の配列に相補的な配列を含み、かつハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)を促進するのに十分な条件下で前記標的分析物にハイブリダイズして増幅産物を生成する;及び
(b)前記試料を、前記第一プローブを前記標的分析物から切り離すことなく前記第一プローブを前記第二プローブから切り離すための切断剤と接触させることで、前記HCRを妨げ、前記増幅産物の生成を中断すること
を含む、ハイブリダイゼーション連鎖反応(HCR)増幅産物の生産を中断する方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662326959P | 2016-04-25 | 2016-04-25 | |
US62/326,959 | 2016-04-25 | ||
PCT/US2017/029333 WO2017189525A1 (en) | 2016-04-25 | 2017-04-25 | Hybridization chain reaction methods for in situ molecular detection |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019518434A true JP2019518434A (ja) | 2019-07-04 |
JP2019518434A5 JP2019518434A5 (ja) | 2020-06-18 |
JP7259182B2 JP7259182B2 (ja) | 2023-04-18 |
Family
ID=60160064
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018555974A Active JP7259182B2 (ja) | 2016-04-25 | 2017-04-25 | in situ分子検出のためのハイブリダイゼーション連鎖反応法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US11718874B2 (ja) |
EP (1) | EP3449016A4 (ja) |
JP (1) | JP7259182B2 (ja) |
CN (2) | CN109415761B (ja) |
AU (2) | AU2017257624B2 (ja) |
CA (2) | CA3210120C (ja) |
WO (1) | WO2017189525A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021505152A (ja) * | 2017-12-08 | 2021-02-18 | カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー | プローブの迅速なスイッチング及び再ハイブリダイゼーションを伴う逐次ハイブリダイゼーションバーコーディングによる分子の多重ラベリング |
JP7482506B2 (ja) | 2020-06-12 | 2024-05-14 | 学校法人東邦大学 | 短鎖ヘアピンDNAを用いた改良型in situ ハイブリダイゼーション反応 |
Families Citing this family (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11021737B2 (en) | 2011-12-22 | 2021-06-01 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions and methods for analyte detection |
EP4119677B1 (en) | 2015-04-10 | 2023-06-28 | Spatial Transcriptomics AB | Spatially distinguished, multiplex nucleic acid analysis of biological specimens |
CN108474022A (zh) | 2015-11-03 | 2018-08-31 | 哈佛学院董事及会员团体 | 用于包含三维核酸的基质容积成像的设备和方法 |
CA3210120C (en) | 2016-04-25 | 2024-04-09 | President And Fellows Of Harvard College | Hybridization chain reaction methods for in situ molecular detection |
EP4050112A1 (en) | 2016-06-21 | 2022-08-31 | 10X Genomics, Inc. | Nucleic acid sequencing |
CN109923216A (zh) | 2016-08-31 | 2019-06-21 | 哈佛学院董事及会员团体 | 将生物分子的检测组合到使用荧光原位测序的单个试验的方法 |
WO2019068880A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Cartana Ab | RNA MATRIX LIGATION |
US20200377926A1 (en) * | 2018-01-26 | 2020-12-03 | National Institute Of Biological Sciences, Beijing | Hybridization chain reaction-based method for amplifying immunosignals |
CN110441525A (zh) * | 2018-05-02 | 2019-11-12 | 南京大学 | 基于dna微阵列的蛋白质化学发光成像分析方法 |
SG11202101934SA (en) | 2018-07-30 | 2021-03-30 | Readcoor Llc | Methods and systems for sample processing or analysis |
WO2020123309A1 (en) | 2018-12-10 | 2020-06-18 | 10X Genomics, Inc. | Resolving spatial arrays by proximity-based deconvolution |
US11926867B2 (en) | 2019-01-06 | 2024-03-12 | 10X Genomics, Inc. | Generating capture probes for spatial analysis |
US11649485B2 (en) | 2019-01-06 | 2023-05-16 | 10X Genomics, Inc. | Generating capture probes for spatial analysis |
CN114144528A (zh) * | 2019-05-24 | 2022-03-04 | 新加坡国立大学 | 用于检测生物分子的探针测定 |
KR102221191B1 (ko) * | 2019-05-30 | 2021-03-03 | 한국과학기술연구원 | 표적 핵산 검출 구조체 및 신호 증폭 제제를 포함하는 표적 핵산 검출 키트 |
EP3976820A1 (en) | 2019-05-30 | 2022-04-06 | 10X Genomics, Inc. | Methods of detecting spatial heterogeneity of a biological sample |
WO2020240025A1 (en) | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Cartana Ab | Method of detecting target nucleic acid molecules |
EP3754028A1 (en) * | 2019-06-18 | 2020-12-23 | Apollo Life Sciences GmbH | Method of signal encoding of analytes in a sample |
CN110484440A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-11-22 | 希格诺(南京)生物科技有限公司 | 一种核酸荧光原位检测装置及方法 |
CN111593095B (zh) * | 2019-09-30 | 2023-04-18 | 天津大学 | 基于SiO2核酸探针和杂交链信号放大的Ag+检测方法 |
US20210095333A1 (en) * | 2019-09-30 | 2021-04-01 | X Development Llc | Quantification of molecules using nucleic acid strand displacement detection |
EP4025711A2 (en) | 2019-11-08 | 2022-07-13 | 10X Genomics, Inc. | Enhancing specificity of analyte binding |
CN112877402A (zh) * | 2019-11-30 | 2021-06-01 | 闽江学院 | 一种目标物催化诱导自组装dna网状纳米材料的制备与应用 |
WO2021133849A1 (en) | 2019-12-23 | 2021-07-01 | 10X Genomics, Inc. | Methods for spatial analysis using rna-templated ligation |
US11732299B2 (en) | 2020-01-21 | 2023-08-22 | 10X Genomics, Inc. | Spatial assays with perturbed cells |
US11702693B2 (en) | 2020-01-21 | 2023-07-18 | 10X Genomics, Inc. | Methods for printing cells and generating arrays of barcoded cells |
CN115362264A (zh) | 2020-01-29 | 2022-11-18 | 10X基因组学有限公司 | 用于分析物检测的组合物和方法 |
US11898205B2 (en) | 2020-02-03 | 2024-02-13 | 10X Genomics, Inc. | Increasing capture efficiency of spatial assays |
US11732300B2 (en) | 2020-02-05 | 2023-08-22 | 10X Genomics, Inc. | Increasing efficiency of spatial analysis in a biological sample |
CN111172243B (zh) * | 2020-02-05 | 2022-09-09 | 山西大同大学 | 基于杂交链式反应的荧光dna传感器及e542k基因检测方法 |
DE102020103966B4 (de) * | 2020-02-14 | 2022-03-03 | Testo bioAnalytics GmbH | Sondenkomplex zum spezifischen Nachweis von wenigstens einer Substanz, korrespondierendes Verfahren und Verwendung |
US11891654B2 (en) | 2020-02-24 | 2024-02-06 | 10X Genomics, Inc. | Methods of making gene expression libraries |
CN111411146B (zh) * | 2020-03-31 | 2024-01-16 | 宜昌美光硅谷生命科技股份有限公司 | 一种检测和定量单拷贝染色体外dna或rna的方法 |
WO2021211873A1 (en) * | 2020-04-15 | 2021-10-21 | The Penn State Research Foundation | Biodegradable dna-alginate conjugate for reversible protein and cell labeling and imaging |
EP4242325A3 (en) | 2020-04-22 | 2023-10-04 | 10X Genomics, Inc. | Methods for spatial analysis using targeted rna depletion |
WO2021236929A1 (en) | 2020-05-22 | 2021-11-25 | 10X Genomics, Inc. | Simultaneous spatio-temporal measurement of gene expression and cellular activity |
AU2021275906A1 (en) | 2020-05-22 | 2022-12-22 | 10X Genomics, Inc. | Spatial analysis to detect sequence variants |
EP4162074B1 (en) | 2020-06-08 | 2024-04-24 | 10X Genomics, Inc. | Methods of determining a surgical margin and methods of use thereof |
JP2023530889A (ja) * | 2020-06-18 | 2023-07-20 | リゾルブ バイオサイエンシズ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 試料中の異なる分析物及び分析物の異なるサブグループ/変形物を検出するための多重的方法 |
CN116034166A (zh) | 2020-06-25 | 2023-04-28 | 10X基因组学有限公司 | Dna甲基化的空间分析 |
US11761038B1 (en) | 2020-07-06 | 2023-09-19 | 10X Genomics, Inc. | Methods for identifying a location of an RNA in a biological sample |
US11981960B1 (en) | 2020-07-06 | 2024-05-14 | 10X Genomics, Inc. | Spatial analysis utilizing degradable hydrogels |
US11981958B1 (en) | 2020-08-20 | 2024-05-14 | 10X Genomics, Inc. | Methods for spatial analysis using DNA capture |
US11926822B1 (en) | 2020-09-23 | 2024-03-12 | 10X Genomics, Inc. | Three-dimensional spatial analysis |
CN114480592A (zh) * | 2020-10-27 | 2022-05-13 | 重庆医科大学 | 基于UDG介导PCR、磁性纳米富集和链置换反应的SNPs检测技术 |
US11827935B1 (en) | 2020-11-19 | 2023-11-28 | 10X Genomics, Inc. | Methods for spatial analysis using rolling circle amplification and detection probes |
EP4121555A1 (en) | 2020-12-21 | 2023-01-25 | 10X Genomics, Inc. | Methods, compositions, and systems for capturing probes and/or barcodes |
US11873485B2 (en) | 2021-01-26 | 2024-01-16 | California Institute Of Technology | Allosteric conditional guide RNAs for cell-selective regulation of CRISPR/Cas |
WO2023010085A2 (en) * | 2021-07-28 | 2023-02-02 | University Of Washington | Multiplexed in situ signal amplification with splint ligation extension (slx) probes |
EP4196605A1 (en) | 2021-09-01 | 2023-06-21 | 10X Genomics, Inc. | Methods, compositions, and kits for blocking a capture probe on a spatial array |
CN114252602B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-09-12 | 清华大学深圳国际研究生院 | 微流控芯片、基于微流控芯片的检测系统及细菌的检测方法 |
WO2023137421A1 (en) * | 2022-01-17 | 2023-07-20 | University Of Washington | Oligo-mediated deposition of functional molecules for spatially resolved genomics, transcriptomics, and proteomics |
US20230265504A1 (en) * | 2022-02-21 | 2023-08-24 | Kanvas Biosciences, Inc. | Highly multiplexed detection of gene expression with hybridization chain reaction |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014182528A2 (en) * | 2013-04-30 | 2014-11-13 | California Institute Of Technology | Multiplex labeling of molecules by sequential hybridization barcoding |
WO2015118029A1 (en) * | 2014-02-04 | 2015-08-13 | Olink Ab | Proximity assay with detection based on hybridisation chain reaction (hcr) |
Family Cites Families (263)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4123610A (en) | 1977-03-09 | 1978-10-31 | The United States Government | Nucleic acid crosslinking agent and affinity inactivation of nucleic acids therewith |
US5525464A (en) | 1987-04-01 | 1996-06-11 | Hyseq, Inc. | Method of sequencing by hybridization of oligonucleotide probes |
US4981985A (en) | 1987-10-20 | 1991-01-01 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Synthesis of photolabile chelators for multivalent cations |
US4886741A (en) | 1987-12-09 | 1989-12-12 | Microprobe Corporation | Use of volume exclusion agents for the enhancement of in situ hybridization |
US4844617A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-04 | Tencor Instruments | Confocal measuring microscope with automatic focusing |
US5151189A (en) * | 1990-09-17 | 1992-09-29 | Gelman Sciences, Inc. | Cationic charge modified microporous membrane |
JPH04268359A (ja) | 1991-02-22 | 1992-09-24 | Taiho Yakuhin Kogyo Kk | 刺激応答性ヒドロゲル及びその製造方法 |
US5424413A (en) | 1992-01-22 | 1995-06-13 | Gen-Probe Incorporated | Branched nucleic acid probes |
WO1993016176A1 (en) | 1992-02-13 | 1993-08-19 | Bio-Metric Systems, Inc. | Immobilization of chemical species in crosslinked matrices |
US5594235A (en) | 1993-06-17 | 1997-01-14 | Ultrapointe Corporation | Automated surface acquisition for a confocal microscope |
US5681697A (en) * | 1993-12-08 | 1997-10-28 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assays having reduced background noise and kits therefor |
US5578832A (en) | 1994-09-02 | 1996-11-26 | Affymetrix, Inc. | Method and apparatus for imaging a sample on a device |
SE9400522D0 (sv) * | 1994-02-16 | 1994-02-16 | Ulf Landegren | Method and reagent for detecting specific nucleotide sequences |
US5750341A (en) | 1995-04-17 | 1998-05-12 | Lynx Therapeutics, Inc. | DNA sequencing by parallel oligonucleotide extensions |
US5830708A (en) | 1995-06-06 | 1998-11-03 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Methods for production of a naturally secreted extracellular matrix |
US6284284B1 (en) | 1995-06-06 | 2001-09-04 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Compositions and methods for production and use of an injectable naturally secreted extracellular matrix |
CZ397998A3 (cs) | 1996-06-06 | 1999-07-14 | Lynx Therapeutics, Inc. | Způsob sekvenční analýzy ligací kódovaného adaptoru |
JP4532608B2 (ja) | 1997-02-07 | 2010-08-25 | オリンパス株式会社 | 走査型プローブ顕微鏡を用いた核酸検出方法 |
US5948617A (en) | 1997-06-13 | 1999-09-07 | Biospeparations, Inc. | Methods of in situ hybridization |
US6083726A (en) * | 1998-02-03 | 2000-07-04 | Lucent Technologies, Inc. | Methods for polynucleotide synthesis and articles for polynucleotide hybridization |
US6068979A (en) | 1998-04-22 | 2000-05-30 | Lumigen, Inc. | Simplified sequential chemiluminescent detection |
JP3662850B2 (ja) | 1998-06-24 | 2005-06-22 | イルミナ インコーポレイテッド | 微小球を有するアレイセンサーのデコード |
ATE327345T1 (de) | 1998-08-07 | 2006-06-15 | Cellay Llc | Gel mikrotropfen für die genetische analyse |
US6232067B1 (en) | 1998-08-17 | 2001-05-15 | The Perkin-Elmer Corporation | Adapter directed expression analysis |
AU3498900A (en) * | 1999-02-23 | 2000-09-14 | Caliper Technologies Corporation | Sequencing by incorporation |
US6534266B1 (en) | 1999-04-22 | 2003-03-18 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Assay of transcription sites by multi-fluor fish |
US20020015952A1 (en) | 1999-07-30 | 2002-02-07 | Anderson Norman G. | Microarrays and their manufacture by slicing |
CA2386151A1 (en) | 1999-10-12 | 2001-04-19 | Marc Madou | Reactive polymeric valve, dispensing devices and methods using same |
WO2001037266A1 (en) | 1999-11-17 | 2001-05-25 | The Research Foundation Of State University Of New York | Three dimensional data storage device and method for reading |
WO2001068673A1 (en) | 2000-03-14 | 2001-09-20 | Active Motif | Oligonucleotide analogues, methods of synthesis and methods of use |
JP2003535600A (ja) * | 2000-06-02 | 2003-12-02 | バイエル コーポレイション | インサイチュ分枝dnaハイブリダイゼーションを用いた高感度遺伝子検出および位置決定 |
US8548745B2 (en) | 2000-06-08 | 2013-10-01 | The Regents Of The University Of California | Visual-servoing optical microscopy |
US7613571B2 (en) | 2000-07-28 | 2009-11-03 | Doyle Michael D | Method and system for the multidimensional morphological reconstruction of genome expression activity |
US6797152B2 (en) | 2000-07-31 | 2004-09-28 | California Institute Of Technology | Sensors and sensing methods for detecting analytes based on changes in pKa of a sensing polymer |
WO2002055985A2 (en) | 2000-11-15 | 2002-07-18 | Roche Diagnostics Corp | Methods and reagents for identifying rare fetal cells in the material circulation |
EP1377679B1 (en) | 2000-12-14 | 2009-10-28 | Gen-Probe Incorporated | Method and kit for enhancing the association rates of polynucleotides |
ATE549415T1 (de) | 2001-03-16 | 2012-03-15 | Kalim Mir | Arrays und verfahren zur deren verwendung |
US7473767B2 (en) | 2001-07-03 | 2009-01-06 | The Institute For Systems Biology | Methods for detection and quantification of analytes in complex mixtures |
US20060248349A1 (en) | 2001-09-24 | 2006-11-02 | Rathjen Alicemarie G | Method for preparing and using personal and genetic profiles |
AU2002360272A1 (en) | 2001-10-10 | 2003-04-22 | Superarray Bioscience Corporation | Detecting targets by unique identifier nucleotide tags |
GB2382137A (en) | 2001-11-20 | 2003-05-21 | Mats Gullberg | Nucleic acid enrichment |
WO2003044231A1 (en) | 2001-11-23 | 2003-05-30 | Simon Fredriksson | Method and kit for proximity probing with multivalent proximity probes |
US20090246879A1 (en) | 2002-12-20 | 2009-10-01 | Callida Genomics | Materials and Methods Relating to Nano-Tags and Nano-Brands |
DE602004026033D1 (de) | 2003-01-29 | 2010-04-29 | 454 Corp | Zweiendige sequenzierung |
CN103289893B (zh) | 2003-02-26 | 2015-11-18 | 凯利达基因组股份有限公司 | 通过杂交进行的随机阵列dna分析 |
US7385043B1 (en) | 2003-04-30 | 2008-06-10 | The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. | Homogeneous multiplex screening assays and kits |
CN104280866B (zh) | 2003-05-20 | 2018-04-03 | 卢西德有限公司 | 用于对患者身体所选位置进行成像的共焦显微镜 |
US7255994B2 (en) | 2003-06-10 | 2007-08-14 | Applera Corporation | Ligation assay |
CN1580283A (zh) | 2003-08-13 | 2005-02-16 | 清华大学 | 一种检测核酸分子的方法 |
US7193054B2 (en) | 2003-08-26 | 2007-03-20 | University Of Rochester | Nanofabrication using actin filaments |
US20050064435A1 (en) | 2003-09-24 | 2005-03-24 | Xing Su | Programmable molecular barcodes |
WO2005049851A2 (en) | 2003-11-14 | 2005-06-02 | University Of Utah Research Foundation | Methods, articles, and compositions for identifying oligonucleotides |
US7381529B2 (en) | 2003-12-31 | 2008-06-03 | Intel Corporation | Methods and compositions for detecting nucleic acids using scanning probe microscopy and nanocodes |
JP2007526772A (ja) | 2004-02-27 | 2007-09-20 | プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ | インサイチュー配列決定用ポロニー蛍光ビーズ |
US20050191687A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-01 | Tianxin Wang | Method for multiplexed analyte detection |
WO2005098049A2 (en) | 2004-03-25 | 2005-10-20 | California Institute Of Technology | Hybridization chain reaction |
US7427479B2 (en) | 2004-04-30 | 2008-09-23 | Applera Corporation | Methods and kits for identifying target nucleotides in mixed populations |
US20060024711A1 (en) | 2004-07-02 | 2006-02-02 | Helicos Biosciences Corporation | Methods for nucleic acid amplification and sequence determination |
US7253947B2 (en) | 2004-10-07 | 2007-08-07 | New York University | Portable automated confocal microscope |
CN101916359B (zh) | 2005-01-27 | 2012-06-20 | 剑桥研究和仪器设备股份有限公司 | 把样本的不同区域分类到相应类别的方法和设备 |
EP2003214B1 (en) | 2005-02-01 | 2013-04-10 | AB Advanced Genetic Analysis Corporation | Reagents, methods, and libraries for bead-based sequencing |
US7393665B2 (en) | 2005-02-10 | 2008-07-01 | Population Genetics Technologies Ltd | Methods and compositions for tagging and identifying polynucleotides |
ITRM20050068A1 (it) * | 2005-02-17 | 2006-08-18 | Istituto Naz Per Le Malattie I | Metodo per la rivelazione di acidi nucleici di agenti patogeni batterici o di parassiti nelle urine. |
US20060234261A1 (en) * | 2005-03-08 | 2006-10-19 | Pierce Niles A | Colorimetric readout of hybridization chain reaction |
US7727721B2 (en) * | 2005-03-08 | 2010-06-01 | California Institute Of Technology | Hybridization chain reaction amplification for in situ imaging |
JP2008537739A (ja) * | 2005-03-21 | 2008-09-25 | ザ トラスティース オブ コロンビア ユニバーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク | 新規神経疼痛経路 |
US20070020650A1 (en) | 2005-04-01 | 2007-01-25 | Avak Kahvejian | Methods for detecting proteins |
KR20080003402A (ko) | 2005-04-08 | 2008-01-07 | 마이코솔 인코포레이티드 | 스틸바쥼 연구 분석법 |
EP1871896B1 (en) | 2005-04-12 | 2015-06-03 | Olink AB | Circle probes and their use in the identification of biomolecules |
US11561951B2 (en) | 2005-05-16 | 2023-01-24 | Panvia Future Technologies, Inc. | Multidimensional associative memory and data searching |
WO2007145612A1 (en) | 2005-06-06 | 2007-12-21 | 454 Life Sciences Corporation | Paired end sequencing |
US7842793B2 (en) | 2005-06-14 | 2010-11-30 | The California Institute Of Technology | Methods of making nucleic acid nanostructures |
CA2611743C (en) | 2005-06-15 | 2019-12-31 | Callida Genomics, Inc. | Nucleic acid analysis by forming and tracking aliquoted fragments of a target polynucleotide |
ES2434915T3 (es) | 2005-06-20 | 2013-12-18 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Detección múltiplex de ácidos nucleicos |
WO2007023390A2 (en) | 2005-07-01 | 2007-03-01 | Dako Denmark A/S | Immunohistochemistry detection method |
US8486621B2 (en) | 2005-08-11 | 2013-07-16 | Cornell Research Foundation, Inc. | Nucleic acid-based matrixes |
CN1959384A (zh) | 2005-11-01 | 2007-05-09 | 河南省生物工程技术研究中心 | 一种三维网格检测技术 |
US20070190543A1 (en) | 2005-11-14 | 2007-08-16 | Applera Corporation | Coded Molecules for Detecting Target Analytes |
AU2006330834B2 (en) | 2005-12-23 | 2013-09-12 | Nanostring Technologies, Inc. | Compositions comprising oriented, immobilized macromolecules and methods for their preparation |
ES2374788T3 (es) | 2005-12-23 | 2012-02-22 | Nanostring Technologies, Inc. | Nanoinformadores y métodos para su producción y uso. |
US7864996B2 (en) | 2006-02-17 | 2011-01-04 | Lucid, Inc. | System for macroscopic and confocal imaging of tissue |
EP1996320A2 (en) * | 2006-03-10 | 2008-12-03 | The President and Fellows of Harvard College | Methods and apparatus for near field irradiation |
GB0605584D0 (en) | 2006-03-20 | 2006-04-26 | Olink Ab | Method for analyte detection using proximity probes |
US20070231823A1 (en) * | 2006-03-23 | 2007-10-04 | Mckernan Kevin J | Directed enrichment of genomic DNA for high-throughput sequencing |
RU2394915C2 (ru) | 2006-03-24 | 2010-07-20 | Александр Борисович Четверин | Бесконтактные способы обнаружения молекулярных колоний, наборы реагентов и устройство для их осуществления |
US8975216B2 (en) | 2006-03-30 | 2015-03-10 | Pacific Biosciences Of California | Articles having localized molecules disposed thereon and methods of producing same |
CN101460953B (zh) | 2006-03-31 | 2012-05-30 | 索雷克萨公司 | 用于合成分析的序列的系统和装置 |
AU2007237909A1 (en) | 2006-04-19 | 2007-10-25 | Applied Biosystems, Llc. | Reagents, methods, and libraries for gel-free bead-based sequencing |
US7941279B2 (en) | 2006-05-22 | 2011-05-10 | Nanostring Technologies, Inc. | Systems and methods for analyzing nanoreporters |
US7964347B2 (en) | 2006-06-15 | 2011-06-21 | Krassen Dimitrov | Labels for electronic detection of individual molecules and methods for their detection |
EP2057435A4 (en) | 2006-06-23 | 2011-04-20 | Life Technologies Corp | SYSTEMS AND METHOD FOR COOLING IN DEVICES FOR BIOLOGICAL ANALYSIS |
US7745129B1 (en) | 2006-07-12 | 2010-06-29 | Kenneth David Schatz | Methods for sequencing of a necleic acid |
WO2008033848A2 (en) | 2006-09-11 | 2008-03-20 | The Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona Acting For And On Behalf Of Arizona State University | Self-assembled combinatorial encoding nanoarrays for multiplexed biosensing |
US20090208965A1 (en) | 2006-10-25 | 2009-08-20 | Ikonisys, Inc. | Automated method for detecting cancers and high grade hyperplasias |
CN109055495A (zh) | 2006-11-06 | 2018-12-21 | 美艾利尔技术公司 | 使用结合元件用于分析的装置和方法 |
US9201063B2 (en) | 2006-11-16 | 2015-12-01 | General Electric Company | Sequential analysis of biological samples |
US7655898B2 (en) | 2006-11-30 | 2010-02-02 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Optical filter assembly with selectable bandwidth and rejection |
WO2008069973A2 (en) | 2006-12-01 | 2008-06-12 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Four-color dna sequencing by synthesis using cleavable fluorescent nucleotide reversible terminators |
US20080269068A1 (en) * | 2007-02-06 | 2008-10-30 | President And Fellows Of Harvard College | Multiplex decoding of sequence tags in barcodes |
WO2008108989A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Danisco A/S | Cultures with improved phage resistance |
US8145677B2 (en) | 2007-03-27 | 2012-03-27 | Faleh Jassem Al-Shameri | Automated generation of metadata for mining image and text data |
JP5555157B2 (ja) | 2007-04-10 | 2014-07-23 | ナノストリング テクノロジーズ, インコーポレイテッド | ナノレポーターにおける使用のための標的特異的配列を同定するための方法およびコンピュータシステム |
EP2155770B1 (en) * | 2007-05-16 | 2013-10-16 | California Institute of Technology | A versatile nucleic acid hairpin motif for programming biomolecular self-assembly pathways |
EP2952587B1 (en) | 2007-06-19 | 2023-07-05 | Stratos Genomics Inc. | High throughput nucleic acid sequencing by expansion |
US7534991B2 (en) | 2007-07-10 | 2009-05-19 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Athermalized birefringent filter apparatus and method |
WO2009018576A1 (en) | 2007-08-02 | 2009-02-05 | Biodesic | Compositions and methods for analyte detection and quantitation |
US20090191553A1 (en) | 2007-10-01 | 2009-07-30 | Applied Biosystems Inc. | Chase Ligation Sequencing |
US20100331195A1 (en) | 2007-10-04 | 2010-12-30 | William Andregg | Sequencing Nucleic Acid Polymers with Electron Microscopy |
US20090139311A1 (en) | 2007-10-05 | 2009-06-04 | Applied Biosystems Inc. | Biological Analysis Systems, Devices, and Methods |
EP2051051B1 (en) | 2007-10-16 | 2020-06-03 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Spectral imaging system with dynamic optical correction |
US20110020291A1 (en) | 2007-11-17 | 2011-01-27 | Debrabrata Banerjee | Use of stem cells for wound healing |
CN101586150B (zh) | 2008-05-23 | 2016-09-28 | 陕西佰美基因股份有限公司 | 检测探针、通用寡核苷酸芯片及核酸检测方法及其用途 |
US8199999B2 (en) | 2008-06-17 | 2012-06-12 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Image classifier training |
WO2010011961A2 (en) | 2008-07-25 | 2010-01-28 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Prokaryotic rnai-like system and methods of use |
EP2324045A4 (en) | 2008-08-05 | 2013-04-03 | Univ Cornell | PHOTORECTICULATED NUCLEIC ACID HYDROGELS |
CA2733609C (en) | 2008-08-14 | 2018-03-06 | Nanostring Technologies, Inc. | Stable nanoreporters |
ES2624562T3 (es) | 2008-09-10 | 2017-07-14 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Obtención de imágenes de moléculas de ARNm individuales, usando múltiples sondas marcadas con un solo marcador |
US9156010B2 (en) | 2008-09-23 | 2015-10-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Droplet-based assay system |
US20100076057A1 (en) | 2008-09-23 | 2010-03-25 | Northwestern University | TARGET DNA INTERFERENCE WITH crRNA |
US20100087325A1 (en) | 2008-10-07 | 2010-04-08 | Illumina, Inc. | Biological sample temperature control system and method |
WO2010046796A1 (en) * | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Koninklijke Philips Electronics, N.V. | Molecular imaging |
WO2010054108A2 (en) | 2008-11-06 | 2010-05-14 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Cas6 polypeptides and methods of use |
US8309306B2 (en) * | 2008-11-12 | 2012-11-13 | Nodality, Inc. | Detection composition |
EP3587594B1 (en) | 2008-12-19 | 2022-04-13 | President and Fellows of Harvard College | Particle-assisted nucleic acid sequencing |
JP4528345B2 (ja) | 2009-01-28 | 2010-08-18 | シャープ株式会社 | 動画再生装置、動画再生方法、動画再生方法をコンピュータで実現するためのプログラム及びそのプログラムを記録した記録媒体 |
JP5277082B2 (ja) | 2009-06-15 | 2013-08-28 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 蛍光分析方法 |
FR2948475A1 (fr) | 2009-07-24 | 2011-01-28 | Bionext | Procede de caracterisation d'objets tridimensionnels |
US8431151B2 (en) * | 2009-08-06 | 2013-04-30 | Syracuse University | Antimicrobial nanostructured hydrogel web containing silver |
JP5954876B2 (ja) | 2009-10-13 | 2016-07-20 | ナノストリング テクノロジーズ, インコーポレイテッド | ナノレポーターによるタンパク質の検出 |
JP2013509863A (ja) | 2009-11-03 | 2013-03-21 | エイチティージー モレキュラー ダイアグノスティクス, インコーポレイテッド | 定量的ヌクレアーゼ保護シークエンシング(qNPS) |
EP2531220B1 (en) | 2009-12-18 | 2018-05-02 | President and Fellows of Harvard College | Active scaffolds for on-demand drug and cell delivery |
US8632976B2 (en) | 2010-01-19 | 2014-01-21 | Agdia | Amplification of TRP1 for specific detection of Phytophthora ramorum |
EP2516681B1 (en) | 2010-02-11 | 2017-10-18 | Nanostring Technologies, Inc | Compositions and methods for the detection of preferably small rnas by bridge hybridisation and ligation |
US20110257031A1 (en) | 2010-02-12 | 2011-10-20 | Life Technologies Corporation | Nucleic acid, biomolecule and polymer identifier codes |
WO2011112634A2 (en) | 2010-03-08 | 2011-09-15 | California Institute Of Technology | Molecular indicia of cellular constituents and resolving the same by super-resolution technologies in single cells |
US10087431B2 (en) | 2010-03-10 | 2018-10-02 | The Regents Of The University Of California | Methods of generating nucleic acid fragments |
GB201004292D0 (en) | 2010-03-15 | 2010-04-28 | Olink Ab | Assay for localised detection of analytes |
CN102834526B (zh) | 2010-04-05 | 2015-12-02 | 普罗格诺西斯生物科学公司 | 空间编码的生物学测定 |
US8462981B2 (en) | 2010-04-07 | 2013-06-11 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Spectral unmixing for visualization of samples |
BR112012028805A2 (pt) | 2010-05-10 | 2019-09-24 | The Regents Of The Univ Of California E Nereus Pharmaceuticals Inc | composições de endorribonuclease e métodos de uso das mesmas. |
US20130059741A1 (en) | 2010-05-13 | 2013-03-07 | Illumina, Inc. | Binding assays for markers |
BR112013000552B8 (pt) | 2010-07-09 | 2023-01-17 | Cergentis B V | Estratégias de sequenciamento de região de interesse genômica em 3d |
US9541504B2 (en) | 2010-08-05 | 2017-01-10 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Enhancing visual assessment of samples |
WO2012049316A1 (en) | 2010-10-15 | 2012-04-19 | Olink Ab | Dynamic range methods |
ES2562821T3 (es) | 2010-10-21 | 2016-03-08 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Método ultrasensible para la detección in situ de ácidos nucleicos |
WO2012056440A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Nanodoc Ltd. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR ACTIVATING EXPRESSION BY A SPECIFIC ENDOGENOUS miRNA |
WO2012057689A1 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Proximity ligation technology for western blot applications |
WO2012058638A2 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | Nucleic acid nanostructure barcode probes |
JP5998148B2 (ja) | 2010-11-16 | 2016-09-28 | ナブシス 2.0 エルエルシー | ハイブリダイズされたプローブの相対位置を検出することによる生体分子のシークエンシングのための方法 |
US8551708B2 (en) | 2011-02-15 | 2013-10-08 | Leica Biosystems Newcastle Ltd. | Methods for localized in situ detection of mRNA |
JP5687514B2 (ja) | 2011-02-17 | 2015-03-18 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | 核酸配列解析装置 |
DK2500436T3 (en) | 2011-03-17 | 2016-08-29 | Pasteur Institut | A method, probe and kit for in situ hybridization of DNA and use thereof |
US20120252686A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | Good Start Genetics | Methods for maintaining the integrity and identification of a nucleic acid template in a multiplex sequencing reaction |
GB201106254D0 (en) | 2011-04-13 | 2011-05-25 | Frisen Jonas | Method and product |
US8946389B2 (en) | 2011-04-25 | 2015-02-03 | University Of Washington | Compositions and methods for multiplex biomarker profiling |
DE102012008759A1 (de) | 2011-05-04 | 2012-11-08 | Genovoxx Gmbh | Nukleosid-Triphosphat-Konjugate und Methoden zu deren Anwendung |
GB201107863D0 (en) | 2011-05-11 | 2011-06-22 | Olink Ab | Method and product |
GB201108678D0 (en) | 2011-05-24 | 2011-07-06 | Olink Ab | Multiplexed proximity ligation assay |
US9617598B2 (en) | 2011-05-27 | 2017-04-11 | President And Fellows Of Harvard College | Methods of amplifying whole genome of a single cell |
US20140113376A1 (en) | 2011-06-01 | 2014-04-24 | Rotem Sorek | Compositions and methods for downregulating prokaryotic genes |
PL222511B1 (pl) | 2011-06-08 | 2016-08-31 | Międzynarodowy Inst Biologii Molekularnej I Komórkowej W Warszawie | Endorybonukleazy dsRNA |
CA2850509C (en) | 2011-10-14 | 2023-08-01 | President And Fellows Of Harvard College | Sequencing by structure assembly |
US11021737B2 (en) | 2011-12-22 | 2021-06-01 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions and methods for analyte detection |
WO2014163886A1 (en) | 2013-03-12 | 2014-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | Method of generating a three-dimensional nucleic acid containing matrix |
ES2952728T3 (es) | 2011-12-22 | 2023-11-03 | Harvard College | Métodos para la detección de analitos |
GB201122458D0 (en) | 2011-12-30 | 2012-02-08 | Univ Wageningen | Modified cascade ribonucleoproteins and uses thereof |
SG11201405103SA (en) | 2012-02-24 | 2014-09-26 | Hutchinson Fred Cancer Res | Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies |
SG11201405274WA (en) * | 2012-02-27 | 2014-10-30 | Cellular Res Inc | Compositions and kits for molecular counting |
CN108285491B (zh) | 2012-02-29 | 2021-08-10 | 桑格摩生物科学股份有限公司 | 治疗亨廷顿氏病的方法和组合物 |
US9637739B2 (en) | 2012-03-20 | 2017-05-02 | Vilnius University | RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex |
WO2013141680A1 (en) | 2012-03-20 | 2013-09-26 | Vilnius University | RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX |
GB2537000C (en) | 2012-05-25 | 2019-10-09 | Univ California | Methods and compositions for RNA-directed target DNA modification and for RNA-directed modulation of transcription |
US9082418B2 (en) | 2012-07-16 | 2015-07-14 | Marvell International Ltd. | Methods for reading data from a storage medium using a reader and storage devices |
JP6019120B2 (ja) | 2012-07-20 | 2016-11-02 | 株式会社Lsiメディエンス | 光応答性核酸類を含むプローブを用いた光連結方法 |
EP2880171B1 (en) | 2012-08-03 | 2018-10-03 | The Regents of The University of California | Methods and compositions for controlling gene expression by rna processing |
KR102148747B1 (ko) | 2012-08-09 | 2020-08-27 | 더 보드 오브 트러스티스 오브 더 리랜드 스탠포드 쥬니어 유니버시티 | 현미경적 분석을 위한 생물학적 표본을 준비하기 위한 방법과 조성물 |
WO2014028538A2 (en) | 2012-08-13 | 2014-02-20 | William Marsh Rice University | Multiplexed in situ molecular analyses and programmable molecular probes for regulated signal amplification |
CN104704416B (zh) | 2012-08-15 | 2018-07-31 | 卢西德股份有限公司 | 用于对组织进行成像的系统和方法 |
EP2888576B1 (en) | 2012-08-21 | 2023-10-04 | Akoya Biosciences, Inc. | Visualization and measurement of cell compartments |
CN102908119A (zh) | 2012-09-26 | 2013-02-06 | 温州医学院眼视光研究院 | 一种共焦扫描成像系统及其像差控制方法 |
US9783841B2 (en) | 2012-10-04 | 2017-10-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Detection of target nucleic acids in a cellular sample |
EP3346003B1 (en) | 2012-10-23 | 2021-06-09 | Toolgen Incorporated | Composition for cleaving a target dna comprising a guide rna specific for the target dna and cas protein-encoding nucleic acid or cas protein, and use thereof |
US10174366B2 (en) | 2012-11-14 | 2019-01-08 | Olink Bioscience Ab | Localised RCA-based amplification method |
IL300199A (en) | 2012-12-06 | 2023-03-01 | Sigma Aldrich Co Llc | CRISPR-based genome modification and regulation |
CN105164264B (zh) | 2012-12-12 | 2021-05-07 | 布罗德研究所有限公司 | 用于序列操纵和治疗应用的系统、方法和组合物的递送、工程化和优化 |
PL2931898T3 (pl) | 2012-12-12 | 2016-09-30 | Le Cong | Projektowanie i optymalizacja systemów, sposoby i kompozycje do manipulacji sekwencją z domenami funkcjonalnymi |
US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
US20140310830A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-10-16 | Feng Zhang | CRISPR-Cas Nickase Systems, Methods And Compositions For Sequence Manipulation in Eukaryotes |
CN105121648B (zh) | 2012-12-12 | 2021-05-07 | 布罗德研究所有限公司 | 用于序列操纵的系统、方法和优化的指导组合物的工程化 |
EP4234696A3 (en) | 2012-12-12 | 2023-09-06 | The Broad Institute Inc. | Crispr-cas component systems, methods and compositions for sequence manipulation |
CA3081054A1 (en) | 2012-12-17 | 2014-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Rna-guided human genome engineering |
WO2014110025A1 (en) | 2013-01-10 | 2014-07-17 | Caliper Life Sciences, Inc. | Whole slide multispectral imaging systems and methods |
US10964001B2 (en) | 2013-01-10 | 2021-03-30 | Akoya Biosciences, Inc. | Multispectral imaging systems and methods |
CA2898184A1 (en) | 2013-01-16 | 2014-07-24 | Emory University | Cas9-nucleic acid complexes and uses related thereto |
US9411930B2 (en) | 2013-02-01 | 2016-08-09 | The Regents Of The University Of California | Methods for genome assembly and haplotype phasing |
ES2901396T3 (es) | 2013-03-14 | 2022-03-22 | Caribou Biosciences Inc | Composiciones y métodos de ácidos nucleicos dirigidos a ácido nucleico |
US9273349B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-03-01 | Affymetrix, Inc. | Detection of nucleic acids |
US9330295B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-03 | Brown University | Spatial sequencing/gene expression camera |
US20140273230A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Sigma-Aldrich Co., Llc | Crispr-based genome modification and regulation |
KR102602047B1 (ko) | 2013-03-15 | 2023-11-15 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | Rna-안내 게놈 편집을 위해 특이성을 증가시키기 위한 절단된 안내 rna(tru-grnas)의 이용 |
US9234213B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-12 | System Biosciences, Llc | Compositions and methods directed to CRISPR/Cas genomic engineering systems |
US10510435B2 (en) * | 2013-04-30 | 2019-12-17 | California Institute Of Technology | Error correction of multiplex imaging analysis by sequential hybridization |
EP3004349B1 (en) | 2013-05-29 | 2018-03-28 | Cellectis S.A. | A method for producing precise dna cleavage using cas9 nickase activity |
CA3176690A1 (en) | 2013-06-04 | 2014-12-11 | President And Fellows Of Harvard College | Rna-guided transcriptional regulation |
US9267135B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | RNA-guided transcriptional regulation |
AU2014281027A1 (en) | 2013-06-17 | 2016-01-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Optimized CRISPR-Cas double nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation |
CN105849275B (zh) | 2013-06-25 | 2020-03-17 | 普罗格诺西斯生物科学公司 | 检测样品中生物靶标的空间分布的方法和系统 |
US10794802B2 (en) | 2013-09-20 | 2020-10-06 | California Institute Of Technology | Whole-body tissue stabilization and selective extractions via tissue-hydrogel hybrids for high resolution intact circuit mapping and phenotyping |
US9778154B2 (en) | 2013-09-20 | 2017-10-03 | California Institute Of Technology | Methods for phenotyping of intact whole tissues |
US10539772B2 (en) | 2013-10-09 | 2020-01-21 | Howard Hughes Medical Institute | Multiview light-sheet microscopy |
WO2015058052A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-23 | The Broad Institute Inc. | Spatial and cellular mapping of biomolecules in situ by high-throughput sequencing |
EP3080259B1 (en) | 2013-12-12 | 2023-02-01 | The Broad Institute, Inc. | Engineering of systems, methods and optimized guide compositions with new architectures for sequence manipulation |
US10309879B2 (en) | 2014-02-21 | 2019-06-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Expansion microscopy |
EP3092631A4 (en) | 2014-02-24 | 2017-09-27 | Sony Corporation | Smart wearable devices and methods for optimizing output |
US10746981B2 (en) | 2014-05-30 | 2020-08-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and devices for imaging large intact tissue samples |
US9909167B2 (en) | 2014-06-23 | 2018-03-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | On-slide staining by primer extension |
EP3167278B1 (en) | 2014-07-09 | 2019-06-26 | Caliper Life Sciences, Inc. | Pure spectrum extraction from biological samples |
WO2016007839A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for high-throughput labelling and detection of biological features in situ using microscopy |
WO2016011429A1 (en) | 2014-07-17 | 2016-01-21 | California Institute Of Technology | Multiplex analysis of molecules in single cells by image correlation |
EP3174993B1 (en) | 2014-07-30 | 2023-12-06 | President and Fellows of Harvard College | Probe library construction |
US11091810B2 (en) | 2015-01-27 | 2021-08-17 | BioSpyder Technologies, Inc. | Focal gene expression profiling of stained FFPE tissues with spatial correlation to morphology |
US20160108458A1 (en) | 2014-10-06 | 2016-04-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Multiplexed detection and quantification of nucleic acids in single-cells |
SG11201704098VA (en) | 2014-11-21 | 2017-06-29 | Nanostring Technologies Inc | Enzyme- and amplification-free sequencing |
WO2016085841A1 (en) | 2014-11-24 | 2016-06-02 | Nanostring Technologies, Inc. | Methods and apparatuses for gene purification and imaging |
AU2015357088A1 (en) | 2014-12-03 | 2017-05-18 | Oregon Health & Science University | Methods, systems, and apparatuses for quantitative analysis of heterogeneous biomarker distribution |
ES2836802T3 (es) | 2015-02-27 | 2021-06-28 | Becton Dickinson Co | Códigos de barras moleculares espacialmente direccionables |
ES2934982T3 (es) | 2015-03-30 | 2023-02-28 | Becton Dickinson Co | Métodos para la codificación con códigos de barras combinatorios |
EP4119677B1 (en) | 2015-04-10 | 2023-06-28 | Spatial Transcriptomics AB | Spatially distinguished, multiplex nucleic acid analysis of biological specimens |
US10526649B2 (en) | 2015-04-14 | 2020-01-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Augmenting in situ nucleic acid sequencing of expanded biological samples with in vitro sequence information |
US11408890B2 (en) | 2015-04-14 | 2022-08-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Iterative expansion microscopy |
US9607375B2 (en) | 2015-06-03 | 2017-03-28 | Eileen B. Gallagher | Biological data annotation and visualization |
SG10202107055SA (en) | 2015-07-17 | 2021-08-30 | Nanostring Technologies Inc | Simultaneous quantification of a plurality of proteins in a user-defined region of a cross-sectioned tissue |
EP3325650B1 (en) | 2015-07-17 | 2024-01-03 | Nanostring Technologies, Inc. | Simultaneous quantification of gene expression in a user-defined region of a cross-sectioned tissue |
ES2959190T3 (es) | 2015-07-24 | 2024-02-21 | Univ Johns Hopkins | Composiciones y métodos de análisis de ARN |
JP6946292B2 (ja) | 2015-08-06 | 2021-10-06 | エイアールシー バイオ リミテッド ライアビリティ カンパニー | ゲノム分析のためのシステムおよび方法 |
WO2017027368A1 (en) | 2015-08-07 | 2017-02-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Protein retention expansion microscopy |
CN108474029B (zh) | 2015-08-07 | 2021-07-23 | 麻省理工学院 | 通过扩展显微法的蛋白质和核酸的纳米级成像 |
US11214661B2 (en) | 2015-09-17 | 2022-01-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Three-dimensional nanofabrication by patterning of hydrogels |
WO2017075275A1 (en) | 2015-10-29 | 2017-05-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and systems for imaging a biological sample |
WO2017079382A1 (en) | 2015-11-03 | 2017-05-11 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for processing spatially related sequence data received from a sequencing device |
CN108474022A (zh) | 2015-11-03 | 2018-08-31 | 哈佛学院董事及会员团体 | 用于包含三维核酸的基质容积成像的设备和方法 |
EP3394579B1 (en) | 2015-12-21 | 2023-09-20 | Verily Life Sciences LLC | Systems and methods for determining an identity of a probe in a target based on colors and locations of two or more fluorophores in the probe and in the target |
US11254974B2 (en) | 2016-02-10 | 2022-02-22 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | RNA fixation and detection in clarity-based hydrogel tissue |
WO2017143155A2 (en) | 2016-02-18 | 2017-08-24 | President And Fellows Of Harvard College | Multiplex alteration of cells using a pooled nucleic acid library and analysis thereof |
US11360025B2 (en) | 2016-02-22 | 2022-06-14 | Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG | Automated analysis tool for biological specimens |
US20170253918A1 (en) | 2016-03-01 | 2017-09-07 | Expansion Technologies | Combining protein barcoding with expansion microscopy for in-situ, spatially-resolved proteomics |
WO2017161251A1 (en) | 2016-03-17 | 2017-09-21 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for detecting and identifying genomic nucleic acids |
CA3210120C (en) | 2016-04-25 | 2024-04-09 | President And Fellows Of Harvard College | Hybridization chain reaction methods for in situ molecular detection |
US20180052081A1 (en) | 2016-05-11 | 2018-02-22 | Expansion Technologies | Combining modified antibodies with expansion microscopy for in-situ, spatially-resolved proteomics |
ES2956732T3 (es) | 2016-05-16 | 2023-12-27 | Nanostring Technologies Inc | Métodos de detección de ácidos nucleicos diana en una muestra |
EP3252452A1 (en) | 2016-05-25 | 2017-12-06 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Method for imaging and analysis of a biological specimen |
US10450599B2 (en) | 2016-07-05 | 2019-10-22 | California Institute Of Technology | Fractional initiator hybridization chain reaction |
US10370698B2 (en) | 2016-07-27 | 2019-08-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Highly-multiplexed fluorescent imaging |
US20210017587A1 (en) | 2016-08-01 | 2021-01-21 | California Institute Of Technology | Sequential probing of molecular targets based on pseudo-color barcodes with embedded error correction mechanism |
EP3507296B1 (en) | 2016-08-30 | 2022-10-12 | California Institute of Technology | Immunohistochemistry via hybridization chain reaction |
EP3539036A4 (en) | 2016-11-08 | 2020-06-17 | President and Fellows of Harvard College | MATRIX AND DELETE |
US20190276881A1 (en) | 2016-11-08 | 2019-09-12 | President And Fellows Of Harvard College | Multiplexed imaging using merfish, expansion microscopy, and related technologies |
CN116334202A (zh) | 2016-11-21 | 2023-06-27 | 纳米线科技公司 | 化学组合物及其使用方法 |
CN117187346A (zh) * | 2017-03-31 | 2023-12-08 | 乌尔蒂维尤股份有限公司 | Dna-抗原交换和扩增 |
US11180804B2 (en) | 2017-07-25 | 2021-11-23 | Massachusetts Institute Of Technology | In situ ATAC sequencing |
US11753676B2 (en) | 2017-10-11 | 2023-09-12 | Expansion Technologies | Multiplexed in situ hybridization of tissue sections for spatially resolved transcriptomics with expansion microscopy |
US11479811B2 (en) | 2017-11-21 | 2022-10-25 | Expansion Technologies | Expansion microscopy compatible and multiplexed in situ hybridization of formalin fixed paraffin embedded tissue sections for spatially resolved transcriptomics |
JP2021505152A (ja) | 2017-12-08 | 2021-02-18 | カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー | プローブの迅速なスイッチング及び再ハイブリダイゼーションを伴う逐次ハイブリダイゼーションバーコーディングによる分子の多重ラベリング |
-
2017
- 2017-04-25 CA CA3210120A patent/CA3210120C/en active Active
- 2017-04-25 CN CN201780039335.6A patent/CN109415761B/zh active Active
- 2017-04-25 JP JP2018555974A patent/JP7259182B2/ja active Active
- 2017-04-25 EP EP17790240.0A patent/EP3449016A4/en active Pending
- 2017-04-25 AU AU2017257624A patent/AU2017257624B2/en active Active
- 2017-04-25 CN CN202211146810.9A patent/CN116200465A/zh active Pending
- 2017-04-25 CA CA3022290A patent/CA3022290A1/en active Pending
- 2017-04-25 WO PCT/US2017/029333 patent/WO2017189525A1/en active Application Filing
-
2018
- 2018-10-25 US US16/170,751 patent/US11718874B2/en active Active
-
2021
- 2021-08-03 US US17/392,325 patent/US11713485B2/en active Active
-
2023
- 2023-06-12 US US18/332,933 patent/US20240124932A1/en active Pending
- 2023-08-02 AU AU2023210577A patent/AU2023210577A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014182528A2 (en) * | 2013-04-30 | 2014-11-13 | California Institute Of Technology | Multiplex labeling of molecules by sequential hybridization barcoding |
WO2015118029A1 (en) * | 2014-02-04 | 2015-08-13 | Olink Ab | Proximity assay with detection based on hybridisation chain reaction (hcr) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021505152A (ja) * | 2017-12-08 | 2021-02-18 | カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー | プローブの迅速なスイッチング及び再ハイブリダイゼーションを伴う逐次ハイブリダイゼーションバーコーディングによる分子の多重ラベリング |
JP7482506B2 (ja) | 2020-06-12 | 2024-05-14 | 学校法人東邦大学 | 短鎖ヘアピンDNAを用いた改良型in situ ハイブリダイゼーション反応 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109415761B (zh) | 2022-09-20 |
EP3449016A4 (en) | 2019-10-02 |
AU2017257624B2 (en) | 2023-05-25 |
US11713485B2 (en) | 2023-08-01 |
US11718874B2 (en) | 2023-08-08 |
AU2023210577A1 (en) | 2023-08-24 |
CN109415761A (zh) | 2019-03-01 |
EP3449016A1 (en) | 2019-03-06 |
US20210381049A1 (en) | 2021-12-09 |
CN116200465A (zh) | 2023-06-02 |
US20190218608A1 (en) | 2019-07-18 |
US20240124932A1 (en) | 2024-04-18 |
CA3210120A1 (en) | 2017-11-02 |
WO2017189525A1 (en) | 2017-11-02 |
AU2017257624A1 (en) | 2018-11-22 |
JP7259182B2 (ja) | 2023-04-18 |
CA3210120C (en) | 2024-04-09 |
CA3022290A1 (en) | 2017-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7259182B2 (ja) | in situ分子検出のためのハイブリダイゼーション連鎖反応法 | |
Waminal et al. | Rapid and efficient FISH using pre-labeled oligomer probes | |
EP1759019B1 (en) | Rapid production of oligonucleotides | |
WO2015058052A1 (en) | Spatial and cellular mapping of biomolecules in situ by high-throughput sequencing | |
CN106574286A (zh) | 选择性扩增核酸序列 | |
AU2020274774B2 (en) | Array and method for detecting spatial information of nucleic acids | |
Raabe et al. | The rocks and shallows of deep RNA sequencing: Examples in the Vibrio cholerae RNome | |
AU2013325107B2 (en) | Method of producing a normalised nucleic acid library using solid state capture material | |
Sahebi et al. | Suppression subtractive hybridization versus next-generation sequencing in plant genetic engineering: challenges and perspectives | |
WO2014036525A1 (en) | High-definition dna in situ hybridization (hd-fish) compositions and methods | |
US20230175078A1 (en) | Rna detection and transcription-dependent editing with reprogrammed tracrrnas | |
Berger et al. | Chemistry on nucleic acid templates | |
JP2023004952A (ja) | Micタグによる空間配列決定 | |
EP2456892A2 (en) | Method for sequencing a polynucleotide template | |
US20240158784A1 (en) | Molecular barcodes and related methods and systems | |
WO2023010085A2 (en) | Multiplexed in situ signal amplification with splint ligation extension (slx) probes | |
CN116970689A (zh) | 原位生成的rca产物的非原位测序 | |
Komatsu | RNA structure-wide discovery of functional interactions with |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200427 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200427 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210312 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210316 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210615 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211012 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220412 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220809 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221209 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20221209 |
|
C11 | Written invitation by the commissioner to file amendments |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11 Effective date: 20221220 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221227 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230123 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20230124 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230307 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230315 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7259182 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |